JP4103727B2 - UV protection agent - Google Patents
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Description
本発明はモクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分を有効成分として含む紫外線防御剤、及びそのスキンクリームとしての使用に関するものである。 The present invention relates to a UV protection agent containing as an active ingredient an ingredient extracted from a plant belonging to the genus Magnolia, and its use as a skin cream.
地表に届く太陽光線に含まれる紫外線は、波長別に紫外線Ｂ波（２９０〜３２０ｎｍ）と紫外線Ａ波（３２０〜４００ｎｍ）に分けられる。この２種の紫外線のうち、皮膚の老化（光老化）に最も影響力のある紫外線が、紫外線Ｂ波（以降、ＵＶＢと略する。）である。また、紫外線Ａ波（以降、ＵＶＡと略する。）はＵＶＢに比較して作用が弱いと考えられるが、長期間に渡って慢性的に浴び続けることで、シワの発生や、皮膚弾性低下等の、皮膚老化の進行を助長する。 Ultraviolet rays contained in solar rays reaching the earth's surface are divided into ultraviolet B waves (290 to 320 nm) and ultraviolet A waves (320 to 400 nm) according to wavelength. Of these two types of ultraviolet rays, the ultraviolet ray having the most influence on skin aging (photoaging) is an ultraviolet B wave (hereinafter abbreviated as UVB). In addition, ultraviolet A wave (hereinafter abbreviated as UVA) is considered to have a weaker action than UVB. However, when it is exposed to chronic exposure over a long period of time, generation of wrinkles, reduction in skin elasticity, etc. To promote the progress of skin aging.
近年、オゾン層の破壊が世界的規模で進行し、地表に届く紫外線量が増大する傾向にあるなか、紫外線の皮膚に及ぼす悪影響を低下させる目的で、各種の紫外線防御剤が開発されている。紫外線防御剤は、紫外線を吸収して防御する紫外線吸収剤タイプ、あるいは紫外線を反射や遮蔽する散乱剤タイプに分類することができ、例えば、皮膚外用剤として用いられる場合には、紫外線を吸収して防御する紫外線吸収剤タイプと紫外線を反射や遮蔽する散乱剤タイプの、二つのタイプの紫外線防御剤を組み合わせて用いられる場合が多いことになる。 In recent years, as the destruction of the ozone layer has progressed on a global scale and the amount of ultraviolet rays reaching the surface of the earth tends to increase, various ultraviolet protective agents have been developed for the purpose of reducing the adverse effects of ultraviolet rays on the skin. Ultraviolet protective agents can be classified into ultraviolet absorber types that absorb and protect ultraviolet rays, or scattering agent types that reflect and shield ultraviolet rays. For example, when used as an external preparation for skin, it absorbs ultraviolet rays. In many cases, two types of UV protective agents are used in combination, an ultraviolet absorber type that protects against UV light and a scattering agent type that reflects or shields UV light.
現在多用されている紫外線吸収剤タイプの紫外線防御剤としては、例えば、安息香酸誘導体、桂皮酸誘導体、サリチル酸誘導体、ベンゾフェノン誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体、カンファー誘導体などが挙げられる。また、紫外線散乱剤タイプの紫外線防御剤としては酸化チタン、酸化亜鉛、ベンガラ、タルク、マイカなどが使用される。しかしながら、従来の紫外線防御剤のほとんどは、多量に使用すると細胞障害の可能性があるとの知見があり、皮膚外用剤による接触皮膚炎等の原因となるケースが報告されている。また、酸化チタンなどの紫外線防御剤は、粉体であるため、製剤化した時のざらつき感や、分散させるための処方が制限されるなど、使用には難点があった。 Examples of ultraviolet absorbers of the ultraviolet absorber type that are currently widely used include benzoic acid derivatives, cinnamic acid derivatives, salicylic acid derivatives, benzophenone derivatives, dibenzoylmethane derivatives, camphor derivatives, and the like. Moreover, titanium oxide, zinc oxide, bengara, talc, mica, etc. are used as the ultraviolet light scattering agent type ultraviolet light protective agent. However, most of the conventional UV protection agents are known to cause cell damage when used in large amounts, and cases of contact dermatitis due to external preparations for skin have been reported. In addition, since UV protection agents such as titanium oxide are powders, they have difficulty in use, such as a rough feeling when formulated and a prescription for dispersion.
これに対して、植物などの天然物に由来する抽出物成分は、一般に作用が緩和で安全性が高いことが知られている。しかし、ＵＶＡおよびＵＶＢを吸収するものはあまり知られておらず、しかも十分な紫外線防御能を発揮するものは知られていなかった。
このため、植物などの天然物に由来する抽出物成分は、美白剤や活性酸素消去剤として使用されているにすぎない。美白剤は、日光暴露後の肌の黒化防止、あるいはシミの脱色の目的で使用され、また、活性酸素消去剤は、光老化を促進する活性酸素などの促進因子を消去する目的で使用される添加物である。
On the other hand, extract components derived from natural products such as plants are generally known to have a relaxed action and high safety. However, those that absorb UVA and UVB are not well known, and those that exhibit sufficient UV protection ability have not been known.
For this reason, the extract component derived from natural products, such as a plant, is only used as a whitening agent or an active oxygen scavenger. Whitening agents are used to prevent skin darkening after exposure to sunlight, or to remove stains from stains. Active oxygen scavengers are used to remove stimulating factors such as active oxygen that promote photoaging. Additive.
一方、紫外線防御剤は、美白剤や活性酸素消去剤と区別され、市場に流通する製品分類でも区別されている。美白剤や活性酸素消去剤に使用できる成分と、紫外線防御剤に使用できる成分とは本質的に特徴が異なり、本発明で特定された植物などの天然物に由来する抽出物成分に、紫外線防御効果を期待した予防目的での使用ができるとは予想されていなかった。 On the other hand, UV protection agents are distinguished from whitening agents and active oxygen scavengers, and are also distinguished by product categories distributed in the market. The components that can be used for whitening agents and active oxygen scavengers are essentially different from the components that can be used for UV protection agents, and extract components derived from natural products such as plants specified in the present invention are protected against UV rays. It was not expected that it could be used for preventive purposes that would have been effective.
紫外線防御剤は、紫外線により誘発される様々な皮膚生理傷害（紅斑や日ぶくれなどの炎症や免疫力の低下あるいは皮膚ガンの発生）を回避することを目的として用いられ、強い紫外線にさらされる危険性がある時に事前に処置する予防剤として使用されるものである。 UV protection agents are used for the purpose of avoiding various skin physiological injuries induced by UV rays (inflammation such as erythema and sunburn, decreased immunity or skin cancer), and are exposed to strong UV rays. It is used as a prophylactic agent to be treated in advance when there is a risk.
他方で、モクレン科オガタマノキ属の植物である、チャンパカ（Ｍｉｃｈｅｌｉａ ｃｈａｍｐａｃａ Ｌ．）から得た抽出物は、美白剤、活性酸素消去剤あるいは抗菌剤として利用できることが、従来知られていた（例えば、特許文献１参照）。しかしながらチャンパカ抽出成分が、２５０ｎｍ〜３７０ｎｍの範囲の紫外線を吸収できるという紫外線吸収能に関する知見はなく、モクレン科オガタマノキ属植物からの抽出成分が紫外線防御剤として、利用された例はなかった。
本発明の第１の目的は、ＵＶＢ及びＵＶＡを幅広く吸収でき、紫外線による細胞障害、紫外線による紅斑の発症を効果的に抑制できる紫外線防御剤を提供することにある。さらに本発明の第二の目的は、紫外線による細胞障害、紫外線による紅斑の発症を効果的に抑制できるスキンクリームを提供することにある。 A first object of the present invention is to provide an ultraviolet protective agent that can absorb UVB and UVA widely and can effectively suppress cell damage caused by ultraviolet rays and erythema caused by ultraviolet rays. Furthermore, the second object of the present invention is to provide a skin cream capable of effectively suppressing cell damage caused by ultraviolet rays and the development of erythema caused by ultraviolet rays.
本発明者らは、前記目的を達成するために鋭意検討した結果、モクレン科植物、特にオガタマノキ属植物の茎、果実または花からの抽出画分に紫外線防御能を有する成分があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は、次の（１）〜（４）である。 As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have found that there is a component having an ultraviolet protective ability in an extract fraction from a stem, a fruit or a flower of a magnoliaceae plant, in particular, Ogata plant, The present invention has been completed. That is, the present invention includes the following (1) to (4).
（１）モクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分を有効成分として含む紫外線防御剤。
（２）モクレン科オガタマノキ属の植物の花よりエタノール水で抽出される成分を有効成分として含む紫外線防御剤。
（３）モクレン科オガタマノキ属の植物がチャンパカまたは／およびオガタマノキであり、抽出される成分が波長２５０〜３７０ｎｍの紫外線を吸収する成分である前記（１）または（２）の紫外線防御剤。
（４）前記（１）〜（３）のいずれか１つの紫外線防御剤を配合したスキンクリーム。
(1) An ultraviolet protective agent containing, as an active ingredient, a component extracted from a plant belonging to the genus Magnolia.
(2) An ultraviolet protective agent containing, as an active ingredient, an ingredient extracted with ethanol water from a flower of a magnoliaceae plant.
(3) The ultraviolet protective agent according to (1) or (2) above, wherein the plant belonging to the genus Occoliaceae is Champaca or / and Ogatamanoki, and the extracted component is a component that absorbs ultraviolet rays having a wavelength of 250 to 370 nm.
(4) A skin cream containing any one of the ultraviolet protective agents (1) to (3).
本発明のモクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分を有効成分として含む紫外線防御剤は、ＵＶＢ及びＵＶＡを幅広く吸収でき、紫外線による細胞障害、紫外線による紅斑の発症を効果的に抑制できる。さらに本発明の紫外線防御剤が配合されたスキンクリームは紫外線による細胞障害、紫外線による紅斑の発症を効果的に抑制できる。 The ultraviolet protective agent containing as an active ingredient the component extracted from the plant of the genus Octaceae of the present invention as an active ingredient can absorb UVB and UVA widely, and can effectively suppress the onset of cell damage due to ultraviolet rays and erythema due to ultraviolet rays. Furthermore, the skin cream containing the ultraviolet protective agent of the present invention can effectively suppress cell damage due to ultraviolet rays and the development of erythema due to ultraviolet rays.
本発明の紫外線防御剤は、モクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分を有効成分として含む紫外線防御剤である。
モクレン科オガタマノキ属に属する植物は、熱帯アジア、中国、ヒマラヤなどに４５種が分布し、例えば、チャンパカ、キンコウボク、オガタマノキ、トキワコブシ、ギンコウボク、ドルツォパ、トウオガタマ等が知られているが、これら、モクレン科オガタマノキ属に属する植物であるならば、いずれであっても、本発明においてモクレン科オガタマノキ属の植物として好適に利用することができる。
The ultraviolet protective agent of the present invention is an ultraviolet protective agent containing, as an active ingredient, a component extracted from a plant belonging to the genus Magnolia.
There are 45 types of plants belonging to the genus Asteraceae in tropical Asia, China, Himalaya, etc., for example, champaca, kinkoboku, ogatamanoki, tokiwabushi, ginkoboku, dortsuopa, toogatama etc. are known. In the present invention, any plant belonging to the genus Ogata can be suitably used as a plant belonging to the genus Magnolia.
前記モクレン科オガタマノキ属の植物の中でも、ヒマラヤ、タイ、ビルマから広く熱帯アジアに分布する、和名ではキンコウボク（金厚木）とも呼ばれるチャンパカ（Ｍ．ｃｈａｍｐａｃａ Ｌ．）は、観賞用に栽培されている熱帯花木であり、香りが良くレイや髪飾りなどの装飾用に用いられ、工業原料として入手が容易であるので、本発明においてモクレン科オガタマノキ属に属する植物として好ましく利用することができる。また、日本本土には、暖地にトキワコブシとも呼ばれるオガタマノキ（Ｍ．ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）が繁殖し、入手性が容易である点から、本発明においてモクレン科オガタマノキ属に属する植物が好ましく利用できる。 Among the plants belonging to the genus Octaceae, the champaca (M. champaca L.), which is widely distributed in tropical Asia from the Himalayas, Thailand, and Burma, is also cultivated for ornamental use. Since it is a tropical flowering tree, it has a good fragrance, is used for decoration such as lei and hair ornaments, and is easily available as an industrial raw material, it can be preferably used as a plant belonging to the genus Occoliaceae in the present invention. Further, in the mainland of Japan, plants belonging to the genus Octaliaceae can be preferably used in the present invention because M.compressa, also called Tokiwabushi, is bred in the warm land and is easily available.
前記モクレン科オガタマノキ属の植物から、抽出物を得るにあたっては、植物体のどの部分を抽出原料として用いてもよく、特に抽出物の製造には、花、果実、葉、茎、根、種子などが抽出原料として利用できる。中でもチャンパカの花は原産地バリ島の特産品として採取量が多く工業的原料としての確保が容易であることから、花の部分を抽出原料とするのが好ましい。 In obtaining an extract from a plant belonging to the genus Occoliaceae, any part of the plant body may be used as an extraction raw material. In particular, for the production of the extract, flowers, fruits, leaves, stems, roots, seeds, etc. Can be used as a raw material for extraction. Among them, it is preferable to use the flower part as the extraction raw material because champaca flower is a special product of the origin Bali and has a large amount of collection and is easy to secure as an industrial raw material.
前記モクレン科オガタマノキ属の植物から抽出される紫外線防御剤として有効な成分は、前記モクレン科オガタマノキ属の植物に由来する抽出原料を、既知の溶媒抽出方法で、任意の時間、冷浸または温浸抽出し、その後、抽出液から濾過等で抽出残渣を取り除き、さらにこれを濃縮することにより製造することができる。例えば、乾燥後粉砕した５００〜１５００ｇ、好ましくは８００〜１０００ｇ程度の抽出原料に、５〜１５リットル、好ましくは８〜１０リットル程度の溶媒を加える。次に、３０〜８０℃、好ましくは４５〜５０℃程度に加温して、１〜５時間程度、好ましくは２〜３時間程度温浸し、これを圧搾分離等して抽出液を得る。濾過により不溶物を除去して得られた抽出液から溶媒を留去し、これを濃縮乾固するなどして、紫外線防御剤として有効な成分を製造することができる。 Ingredients effective as an ultraviolet protective agent extracted from the plant of the genus Octaceae are as follows: The raw material derived from the plant of the genus Octaceae can be subjected to cold or digestion at any time by a known solvent extraction method. It can be manufactured by extracting, then removing the extraction residue from the extract by filtration or the like, and further concentrating it. For example, about 5 to 15 liters, preferably about 8 to 10 liters of solvent is added to about 500 to 1500 g, preferably about 800 to 1000 g of extracted raw material pulverized after drying. Next, it is heated to 30 to 80 ° C., preferably about 45 to 50 ° C., and digested for about 1 to 5 hours, preferably about 2 to 3 hours, and this is squeezed and separated to obtain an extract. A component effective as an ultraviolet protective agent can be produced by evaporating the solvent from the extract obtained by removing insolubles by filtration, concentrating and drying the extract.
本発明において、紫外線防御剤として有効な成分を抽出するのに適した溶媒は、例えば水；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール；あるいは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール；あるいは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチルエステル、ヘキサン等の各種有機溶媒の１種または２種以上を混合した溶媒であり、好ましくは１０〜９５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）エタノール水、１０〜８０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）１，３−ブチレングリコール水、より好ましくは５０〜８０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）エタノール水または２０〜７０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）１，３−ブチレングリコール水である。 In the present invention, a solvent suitable for extracting an effective component as an ultraviolet protection agent is, for example, water; lower alcohols such as methanol, ethanol, propyl alcohol, isopropyl alcohol, butanol, isobutanol; or hydrous lower alcohols, propylene glycol. , 1,3-butylene glycol and other polyhydric alcohols; or water-containing polyhydric alcohols, acetone, acetic acid ethyl ester, hexane and other organic solvents such as a mixture of two or more, preferably 10-95 % (Vol / vol) ethanol water, 10-80% (vol / vol) 1,3-butylene glycol water, more preferably 50-80% (vol / vol) ethanol water or 20-70% (vol / vol) 1,3-butylene glycol water.
本発明において、抽出液から溶媒を留去する際は、減圧下でも留去でき、あるいは限外ろ過してもよい。必要に応じて濃縮物から溶媒を完全に除去してもよく、乾固させるか、または凍結乾燥して粉末化させて紫外線防御剤として使用しても良い。
溶媒抽出の好ましい溶媒の１例として７０％エタノール水が挙げられる。７０％エタノール水を用いたときは、例えば、乾燥粉砕した抽出原料１００ｇに対し、０．９リットル〜１．２リットルの７０％エタノール水を加えて、室温で５日間浸漬するか、もしくは４５〜５０℃に加温し、２〜３時間温浸した後の抽出液を濃縮乾固することによって得られる成分を、紫外線防御剤として使用することが好ましい。
In the present invention, when the solvent is distilled off from the extract, it can be distilled off under reduced pressure or may be ultrafiltered. If necessary, the solvent may be completely removed from the concentrate, or it may be dried or freeze-dried and powdered for use as a UV protection agent.
An example of a preferable solvent for solvent extraction is 70% ethanol water. When 70% ethanol water is used, for example, 0.9 liter to 1.2 liter of 70% ethanol water is added to 100 g of the dried and pulverized extraction raw material, and immersed for 5 days at room temperature, or 45 to 45%. It is preferable to use a component obtained by concentrating and drying the extract after warming to 50 ° C. and digesting for 2 to 3 hours as an ultraviolet protective agent.
本発明の紫外線防御剤に有効成分として含まれるモクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分は、波長２５０〜３７０ｎｍに吸収があり、ＵＶＢ及びＵＶＡを幅広く吸収できる。
このようにして得られたモクレン科オガタマノキ属の植物からの抽出成分は、そのまま、肌に塗布して紫外線防御剤として使用することができる。本発明の紫外線防御剤は、安全性が高く、かつ紫外線防御能に優れたものであり、例えば、化粧品原料、食品原料、医薬品原料として用いることができる。また、本発明の紫外線防御剤は必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、化粧料、医薬部外品、医薬品等に配合して、公知の方法で軟膏剤、クリーム、乳液、パック剤、化粧水、等の剤形に調製して提供することができる。
A component extracted from a plant belonging to the genus Asteraceae included as an active ingredient in the ultraviolet protective agent of the present invention has absorption at a wavelength of 250 to 370 nm, and can absorb UVB and UVA widely.
The component extracted from the plant of the genus Asteraceae obtained in this way can be applied to the skin as it is and used as a UV protection agent. The ultraviolet protective agent of the present invention has high safety and excellent ultraviolet protective ability, and can be used as, for example, a cosmetic raw material, a food raw material, or a pharmaceutical raw material. Further, the ultraviolet protective agent of the present invention is blended in cosmetics, quasi drugs, pharmaceuticals, etc., as long as necessary without compromising the effects of the present invention, and ointments, creams, emulsions, It can be prepared and provided in a dosage form such as a pack agent or lotion.
本発明の紫外線防御剤は、特にスキンクリームに配合されるのが好適である。一般に知られたスキンクリームの配合組成中に、本発明の紫外線防御剤を配合してスキンクリームとして使用することができる。その場合、本発明の紫外線防御剤の配合量は、スキンクリーム中、乾燥状態にある紫外線防御剤として０．０１〜１０（ｗ／ｗ）％程度を配合することが好ましい。紫外線防御剤のスキンクリームへの配合量が０．０１（ｗ／ｗ）％未満であると紫外線防御効果が十分に発揮されず、また１０％を超える場合、各種剤形に調製する際に、溶解性、分散性等の点でその調製が困難になり現実的でない。尚、スキンクリームには、本発明の紫外線防御剤以外に、周知の紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、保湿剤等が適宜、配合されても構わない。 The UV protection agent of the present invention is particularly preferably formulated into a skin cream. The UV protection agent of the present invention can be blended in a generally known skin cream formulation and used as a skin cream. In that case, the blending amount of the UV protection agent of the present invention is preferably about 0.01 to 10 (w / w)% as a UV protection agent in a dry state in the skin cream. When the blending amount of the UV protection agent into the skin cream is less than 0.01 (w / w)%, the UV protection effect is not sufficiently exhibited, and when it exceeds 10%, when preparing into various dosage forms, The preparation becomes difficult in terms of solubility, dispersibility, etc., and is not realistic. In addition to the ultraviolet protective agent of the present invention, a well-known ultraviolet absorber, ultraviolet scattering agent, antioxidant, anti-inflammatory agent, whitening agent, moisturizing agent and the like may be appropriately added to the skin cream.
紫外線防御剤の調製
乾燥後粉砕した１０００ｇのチャンパカの花に、１０リットルの７０％エタノール水を加え５０℃に加熱し、３時間温浸した後、圧搾分離し抽出液を得た。濾過により不溶物を除去して得られた抽出液からエバポレーターを用いて溶媒を留去し、さらに、真空ポンプで濃縮乾固して、濃縮乾固物５０ｇを得た。これをそのまま紫外線防御剤（以下チャンパカ抽出物と表記）として供試した。
Preparation of UV protection agent 10 g of 70% ethanol water was added to 1000 g of champaca flower crushed after drying, heated to 50 ° C., digested for 3 hours, and then pressed and separated to obtain an extract. The solvent was distilled off from the extract obtained by removing insolubles by filtration using an evaporator, and further concentrated to dryness with a vacuum pump to obtain 50 g of a concentrated dry product. This was directly used as a UV protection agent (hereinafter referred to as champaca extract).
前述のチャンパカ抽出物を０．０２％（Ｗ／Ｖ）となるよう蒸留水に溶解し、２５０〜４５０ｎｍの吸収波長特性を測定した。結果を図１に示す。
図１に示されるように、本発明のモクレン科オガタマノキ属の植物より抽出された成分はＵＶＢ（２９０〜３２０ｎｍ）及びＵＶＡ（３２０〜４００ｎｍ）を広い範囲で吸収できることがわかった。
The above-mentioned Champaka extract was dissolved in distilled water so as to be 0.02% (W / V), and the absorption wavelength characteristics at 250 to 450 nm were measured. The results are shown in FIG.
As shown in FIG. 1, it was found that the components extracted from the magnoliaceae plant of the present invention can absorb UVB (290 to 320 nm) and UVA (320 to 400 nm) in a wide range.
紫外線防御剤の評価例１
（紫外線による細胞障害防御作用）
マウス表皮角化細胞株ＰＡＭ２１２を直径３５ｍｍの培養ディッシュに細胞数１０×１０４となるように播種し、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）にて２４時間予備培養を行った。予備培養後ＤＭＥＭを吸引除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後、これに予めチャンパカ抽出物を、５０、１００、２００μｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳに溶解し作製した溶液２ｍｌを加え、細胞を覆った。比較対照として紫外線による細胞障害防御作用が知られているビタミンＣリン酸エステルのＭｇ塩（４００μｇ／ｍｌ ＰＢＳ溶液）及び化学合成紫外線吸収剤オキシベンゾン（１００μｇ／ｍｌ ＰＢＳ溶液）、いずれの紫外線防御剤も添加していない無添加溶液２ｍｌでそれぞれ細胞を覆ったディッシュを用意し同様に実験した。ＵＶＢの照射源として３灯の東芝製医療用ＵＶランプ（ＦＬ２０Ｓ ２０Ｗ）を用い、照射エネルギー８ｍＪ／ｃｍ２および１５ｍＪ／ｃｍ２にて細胞にＵＶＢを照射した。ＵＶＢ照射後、先に加えた紫外線防御剤等を含んだＰＢＳを吸引除去し、代わりに通常のＤＭＥＭに入れ培養を継続した。
紫外線照射２日後に、生き残った細胞をＭＴＴ法により定量し細胞致死率を算出した。細胞の致死率（％）は、紫外線照射を行わなかった無処理コントロールの生存率を１００％とした時の相対値として算出した。結果を図２に示した。
図２から明らかなように、本発明の紫外線防御剤はマウス表皮角化細胞に対して優れた紫外線誘導性細胞致死防御能があることがわかった。
Evaluation example 1 of UV protection agent
(Protection against cell damage by UV rays)
The mouse epidermal keratinocyte cell line PAM212 was seeded in a culture dish having a diameter of 35 mm so as to have a cell number of 10 × 10 4, and precultured in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) for 24 hours. After pre-culture, DMEM is removed by aspiration, washed with phosphate buffered saline (PBS), and 2 ml of a solution prepared by dissolving the Champaka extract in PBS at a concentration of 50, 100, or 200 μg / ml in advance is added thereto. In addition, the cells were covered. As comparative controls, Mg salt of vitamin C phosphate ester (400 μg / ml PBS solution) and chemically synthesized UV absorber oxybenzone (100 μg / ml PBS solution), which are known to protect cells against ultraviolet rays, are both UV protective agents. A dish in which the cells were respectively covered with 2 ml of an additive-free solution not added was prepared and subjected to the same experiment. Using three Toshiba medical UV lamps (FL20S 20W) as UVB irradiation sources, the cells were irradiated with UVB at an irradiation energy of 8 mJ / cm 2 and 15 mJ / cm 2 . After UVB irradiation, the PBS containing the UV protection agent and the like added previously was removed by aspiration, and the culture was continued in normal DMEM instead.
Two days after the ultraviolet irradiation, the surviving cells were quantified by the MTT method and the cell mortality was calculated. The cell death rate (%) was calculated as a relative value when the survival rate of an untreated control that was not irradiated with ultraviolet rays was defined as 100%. The results are shown in FIG.
As is apparent from FIG. 2, it was found that the ultraviolet protective agent of the present invention has an excellent ultraviolet-induced cell killing protective ability against mouse epidermal keratinocytes.
紫外線防御剤の評価例２
（モルモットを用いた評価）
８週齢のハートレー系モルモットの背部を剃毛し、紫外線に対する感受性を高める目的で、１０ｍｇの８−メトキシソラーレンを経口投与した。薬剤投与３０分後、背部皮膚に２×２ｃｍ四方の区画を４箇所設け、そのうちの２区画に４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液を１００μｌ塗布し、残りの２区画には対照として同量の蒸留水を塗布した。評価区画以外の皮膚は露出することが無いように紙とアルミホイルを使って遮蔽した後、東芝製ＵＶランプ（Ｆｌ２０Ｓ・ＢＬ／ＤＭＲ）を使用してＵＶＡを３．５ｍＷ／ｃｍ２の強度で５〜１０分間照射した。照射光に含まれるＵＶＢは３ｍｍ厚のガラス板をランプと被検動物との間に挿入しカットした。本処置によりモルモット背部にはひぶくれ状の紅斑が惹起されるが、紫外線防御剤が効果を発揮すれば紅斑が抑制されることになる。
Evaluation example 2 of UV protection agent
(Evaluation using guinea pigs)
The back of an 8-week-old Hartley guinea pig was shaved, and 10 mg of 8-methoxypsoralen was orally administered for the purpose of increasing sensitivity to ultraviolet rays. 30 minutes after administration of the drug, four 2 × 2 cm square sections were provided on the back skin, 100 μl of 4% (W / V) champaca extract aqueous solution was applied to two of these sections, and the remaining two sections were used as controls. The same amount of distilled water was applied. After the skin other than the evaluation section is shielded by using a paper and aluminum foil so as not to be exposed, at an intensity of 3.5mW / cm 2 of UVA using a Toshiba UV lamp (Fl20S · BL / DMR) Irradiated for 5-10 minutes. UVB contained in the irradiation light was cut by inserting a 3 mm thick glass plate between the lamp and the test animal. This treatment causes blister-like erythema on the back of the guinea pig, but erythema can be suppressed if the UV protection agent is effective.
モルモットを用いた評価試験後、モルモットの背部を目視で観察したところ、４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液を１００μｌ塗布した部分のモルモット背部では、紅斑が抑制されたのに対して、同量の蒸留水を塗布したモルモット背部にはひぶくれ状の紅斑が惹起された。即ち、本発明のモクレン科オガタマノキ属の植物より抽出される成分は紫外線が誘導する紅斑の発症を効果的に抑制できることがわかった。 After an evaluation test using a guinea pig, the back of the guinea pig was visually observed. On the back of the guinea pig where 100 μl of an aqueous solution of 4% (W / V) champaca extract was applied, erythema was suppressed, A blister-like erythema was induced on the back of the guinea pig to which the same amount of distilled water was applied. That is, it was found that the component extracted from the magnoliaceae plant of the present invention can effectively suppress the onset of erythema induced by ultraviolet rays.
［チャンパカ抽出物を配合したクリームの配合例１］
下記の成分からなる油相Ａと水相Ｂを製造する。そして、油相Ａと水相Ｂをそれぞれ７０℃に加熱し、完全に溶解する。Ａ相をＢ相に加えて、乳化機で乳化する。乳化物を冷却してクリームを得た。なお、本実施例において％は（ｗ／ｗ）％を示す。
（油相Ａ）
ステアリン酸 １０．０％
ステアリルアルコール ４．０％
グリセリンモノステアリン酸エステル ８．０％
ビタミンＥアセテート ０．５％
香料 ０．４％
エチルパラベン ０．１％
ブチルパラベン ０．１％
プロピルパラベン ０．１％
[Cream Formulation Example 1 with Champaca Extract]
An oil phase A and an aqueous phase B comprising the following components are produced. And the oil phase A and the water phase B are each heated to 70 degreeC, and melt | dissolve completely. Add Phase A to Phase B and emulsify with an emulsifier. The emulsion was cooled to obtain a cream. In the present example,% indicates (w / w)%.
(Oil phase A)
Stearic acid 10.0%
Stearyl alcohol 4.0%
Glycerol monostearate 8.0%
Vitamin E acetate 0.5%
Fragrance 0.4%
Ethylparaben 0.1%
Butylparaben 0.1%
Propylparaben 0.1%
（水相Ｂ）
チャンパカ抽出物 １．０％
１，３−ブチレングリコール １０．０％
プロピレングリコール ８．０％
グリセリン ２．０％
水溶性ビタミンＥ（シーシーアイ社製ＴＭＧｎ） １．０％
水酸化カリウム ０．４％
精製水 残余
(Water phase B)
Champaca extract 1.0%
1,3-butylene glycol 10.0%
Propylene glycol 8.0%
Glycerin 2.0%
Water soluble vitamin E (TMGn manufactured by CCI) 1.0%
Potassium hydroxide 0.4%
Purified water residue
このようにして得られた［クリームの配合例１］を、実施例１の評価例２における［４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液］にかえて用い、その塗布する量を［４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液を１００μｌ塗布する］ことから、［クリームを背部皮膚２×２ｃｍ四方の区画に過不足なく塗布できる適量用いて塗布する］ことにかえた以外は、全て実施例１の評価例２と同様の方法で評価した結果、紫外線による紅斑誘導を効果的に抑えることが確認できた。 [Cream Formulation Example 1] thus obtained was used instead of [4% (W / V) champaca extract aqueous solution] in Evaluation Example 2 of Example 1, and the amount to be applied was [4 % (W / V) champaca extract aqueous solution is applied 100%, all except that [apply cream with appropriate amount that can be applied to 2x2 cm square area of back skin with sufficient amount] As a result of evaluation by the same method as in Evaluation Example 2 of Example 1, it was confirmed that erythema induction by ultraviolet rays was effectively suppressed.
［チャンパカ抽出物を配合したクリームの配合例２］
油相Ａと水相Ｂとして下記の成分を用いた以外は、実施例２と同様に行い、クリームを得た。なお、本実施例において％は（ｗ／ｗ）％を示す。を示す。
（油相Ａ）
セタノール ４．０％
ワセリン ７．０％
イソプロピルミリステート ８．０％
スクワラン １２．０％
ジメチルポリシロキサン ３．０％
グリセリンモノステアリル酸エステル ２．２％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート ２．８％
グリチルレチン酸ステアレート ０．０２％
エチルパラベン ０．１％
ブチルパラベン ０．１％
[Formulation example 2 of cream containing champaca extract]
A cream was obtained in the same manner as in Example 2 except that the following components were used as the oil phase A and the water phase B. In the present example,% indicates (w / w)%. Indicates.
(Oil phase A)
Cetanol 4.0%
Vaseline 7.0%
Isopropyl myristate 8.0%
Squalane 12.0%
Dimethylpolysiloxane 3.0%
Glycerin monostearyl ester 2.2%
POE (20) sorbitan monostearate 2.8%
Glycyrrhetinic acid stearate 0.02%
Ethylparaben 0.1%
Butylparaben 0.1%
（水相Ｂ）
チャンパカ抽出物 ０．１％
１，３−ブチレングリコール ７．０％
フェノキシエタノール ０．２％
Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 ３．０％
水溶性ビタミンＥ（シーシーアイ社製ＴＭＧｎ） １．０％
精製水 残余
(Water phase B)
Champaca extract 0.1%
1,3-butylene glycol 7.0%
Phenoxyethanol 0.2%
L-ascorbic acid phosphate magnesium salt 3.0%
Water soluble vitamin E (TMGn manufactured by CCI) 1.0%
Purified water residue
このようにして得られた［クリームの配合例２］を、実施例１の評価例２における［４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液］にかえて用い、その塗布する量を［４％（Ｗ／Ｖ）チャンパカ抽出物の水溶液を１００μｌ塗布する］ことから、［クリームを背部皮膚２×２ｃｍ四方の区画に過不足なく塗布できる適量用いて塗布する］ことにかえた以外は、全て実施例１の評価例２と同様の方法で評価した結果、紫外線による紅斑誘導を効果的に抑えることが確認できた。 [Cream Formulation Example 2] thus obtained was used in place of [4% (W / V) champaca extract aqueous solution] in Evaluation Example 2 of Example 1, and the amount to be applied was [4 % (W / V) champaca extract aqueous solution is applied 100%, all except that [apply cream with appropriate amount that can be applied to 2x2 cm square area of back skin with sufficient amount] As a result of evaluation by the same method as in Evaluation Example 2 of Example 1, it was confirmed that erythema induction by ultraviolet rays was effectively suppressed.
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