JP4081376B2 - Dna分子の単離 - Google Patents
Dna分子の単離 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4081376B2 JP4081376B2 JP2002582231A JP2002582231A JP4081376B2 JP 4081376 B2 JP4081376 B2 JP 4081376B2 JP 2002582231 A JP2002582231 A JP 2002582231A JP 2002582231 A JP2002582231 A JP 2002582231A JP 4081376 B2 JP4081376 B2 JP 4081376B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- nucleic acid
- plasmid dna
- acid molecules
- column
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/101—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by chromatography, e.g. electrophoresis, ion-exchange, reverse phase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、溶液中のプラスミドDNAのような核酸分子を分離するための方法に関する。より特に、本方法は、oc(開環)DNAおよびスーパーコイル化ccc(共有結合的閉環状)DNAおよびリボ核酸および他のデオキシリボ核酸の、お互いからの分離および溶液中に存在する他の成分からの分離に基づく。
遺伝子治療およびDNAワクチンの開発により、プラスミドDNAのような高純度遺伝子ベクターの必要性が高まってきた。スーパーコイル化プラスミドDNAの精製に伴う問題には、宿主タンパク質、エンドトキシン、染色体DNA、RNA、プラスミドDNAの開環状およびニック型のような他の細胞成分の完全除去がある。異なるクロマトグラフ法は、粒径排除(size exclusion)クロマトグラフィー、またはゲル濾過、ヒドロキシアパタイト、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィーのようなプラスミドDNA精製に使用されている。殆どの方法は、スーパーコイル化プラスミドDNAを他のプラスミド型から分離する可能性を欠く。多くの利用可能な方法もまた、サンプルをクロマトグラフカラムに適用する前に、透明なライゼート中のRNAを加水分解するRNaseを使用する。RNaseの使用は、ヒトでの使用を目的とするプラスミドDNAの分離には推奨されない。
本発明の目的は、1つまたはそれよりも多い上記の欠点を避ける、スーパーコイル化プラスミドDNAの単離のための方法を提供することである。そのため、本発明の1つの目的は、効率的な、マトリクスにおける核酸分子の単離のための方法を提供することである。本発明の目的は、本願添付の請求の範囲で定義のような方法により、および添付の請求の範囲のマトリクスにより、より特に得られる。
用語「核酸分子」は、本願明細書では、開環プラスミドDNA、スーパーコイル化プラスミドDNAおよび他のDNA(例えば、ゲノムDNA)およびmRNA、tRNAおよびsRNAのようなRNAのような巨大分子および分子集合体(aggregate)を含む。
第一の態様では、本発明は、溶液から核酸分子を単離する方法であって、
(a)核酸分子の混合物を、S−アリールリガンドが提供される担体表面のマトリクスに適用する(subject)こと、
(b)当該核酸分子を溶出ステップに適用すること、
(c)異なる核酸分子を含む異なる画分を単離すること、および
所望により、適当な溶液で当該担体を洗浄すること、
のステップを含む当該方法に関する。
図1は、Sepharose 6 Fast Flowと反応する多様なアリール−S化合物の例を示す。この図面からの様相のように、アリール−S化合物は、異なる置換基が提供され、それらそれぞれは、異なる目的に利点となることが証明され得る結合および溶出特性を生じ得る。
以下、本発明を、説明としてのみ提供され、如何なる態様においても添付の請求の範囲により定義されるような本発明の範囲を制限するように解釈されてはならない実施例により記載する。以下または本願明細書中の他の場所で含まれる引用文献はすべて、引用により本願明細書に含める。
Sepharose 6 Fast Flow (Amersham Pharmacial Biotech)は、Hermanson et al[Immobilized Affinity Ligand Techniques, Academic Press (1992), p. 118]によるエポキシ基で活性化された。当該リガンド密度は、おおよそ50μmolエポキシ/mLキャリアであった。アリール−S試薬(図1参照)、50μmol/mLキャリアは、pH10.5のエポキシ活性化セファロースと反応させた。当該反応は、一夜かけて窒素気流下、45℃で行なった。反応後、当該ゲルを冷却し、アセトンおよび最終的には水で洗浄した。得られた当該リガンド濃度は、30−50μmol/mLキャリアの範囲であった。
JV4−挿入物を有するpUC19プラスミドを含むE. coli TG1細胞の接種物は、2YT培地中でOD4まで増殖し、その後、40mlをBiostat EDリアクター中の10リッター培地に移す。OD13.6で、当該細胞を回収し、Sorvall RC12BPローター中で4200rpmで40分間遠心分離し、細胞ペレットを−70℃で保存する。
細菌25gを、氷冷S緩衝液(61mM グルコース、10mM Tris、50mM EDTA pH8.0)50ml中に再懸濁する。緩衝液S130mlを更に加える。一定の緩やかな攪拌の後、緩衝液P2(0.2M NaOH、1%SDS)390mlを加える。室温でゆっくりと攪拌し確実に完全に混合して10分後、氷冷緩衝液P3(3M 酢酸カリウム、pH5.5)293mlを加える。20分間ゆっくりと攪拌し、当該溶液は、一夜4℃に保存する前に氷上でインキュベーションする。次の日、当該混合物を、GSAローター中で4℃で10,000rpmで30分間遠心分離し、当該上清を濾過ペーパーで濾過し、透明なライゼートを得る。
透明なライゼートを以下の通り処理する:
a)等量(体積)の4M硫酸アンモニウムを加えることにより2M硫酸アンモニウムに調節するか、または好ましくは、
b)Sephacryl(商標) S-500 HR (Amersham Pharmacial Biotech)の粒径排除(基分離および緩衝液交換)、事前平衡化および2M硫酸アンモニウム中での作動によるサンプル精製。Sephacryl S-500 HR (XK50/30カラム、ベッドの高さ20cm)は、25mM Tris、pH7.9中の2M (NH4)2SO4で平衡化する。0.4CVまでの透明なライゼートを、30cm/hrでカラムにロードする。一旦、全てのサンプルをカラムにロードすると、当該溶出速度は、60cm/hrに調節し、プラスミドDNAを含むフロースルーは更なる実験のために回収する(図2参照)。
幾つかのアリール-S Sepharose 6 Fast Flow 媒体は、140cm/hrで4.6/15PEEK−またはXK16/15ガラスカラム(ベッド高さ15cm)中に充填し、すべてのカラムを、215mS/cm(温度25℃に換算)を超える伝導率を生ずる25mM Tris、pH7.9中の2M (NH4)2SO4で45cm/hrで平衡化する。次いで、透明なライゼート調製物(a)またはb)により、上記参照)20−150mlを、同じ流速でカラムにロードする。2カラム体積の洗浄後、結合物質は、10カラム体積にわたるH2O勾配で媒体から溶出する。作動の間、260nmの吸収を記録する。異なる画分を回収し、それら多くを1%アガロースゲル電気泳動で分析し、エチジウムブロミドで染色し、UVで視覚化する(図3A−C、図4、図5および図6参照)。
Claims (16)
- 溶液中の核酸分子をカラムクロマトグラフィーによって単離する方法であって、
(a)開環状(oc)プラスミドDNA、閉環状(ccc)プラスミドDNA、ゲノムDNA及びRNAを含む核酸分子の混合物を、2−ピリジンチオール、2−ピリジルメチルメルカプタン、2−ピリジルエチルメルカプタン、ベンゼンチオール、ベンジルメルカプタン、4−メチルチオ−ベンゼンチオール、ペンタフルオロベンゼンチオール、ヒドロキシ(4−メルカプトフェニル)オキソアンモニウム、4−メトキシベンゼンチオール及び2,4−ジフルオロベンゼンチオールからなる群から選択されるS−アリールリガンドを結合しておいた担体表面のマトリクスに付すステップと、
(b)上記核酸分子を溶出ステップに付すステップと、
(c)開環状(oc)プラスミドDNA及び/又はRNAから閉環状(ccc)プラスミドDNAを単離するステップと、
(d)所望により、適当な溶液で上記担体を洗浄するステップと
を含む方法。 - 前記核酸分子を発現する細胞を溶解によって分解し、前記核酸分子を含む溶液を得る最初のステップをさらに含む、請求項1記載の方法。
- 適当な溶出液を接触させることによって、前記核酸分子を溶出するステップをさらに含む、請求項1又は請求項2記載の方法。
- 前記担体が無機マトリクスである、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体がガラスである、請求項4記載の方法。
- 前記担体がゼオライトである、請求項4記載の方法。
- 前記担体がシリカである、請求項4記載の方法。
- 前記担体が有機マトリクスである、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体が樹脂又はポリマーである、請求項8記載の方法。
- 前記担体がアガロース又は架橋アガロース、デキストラン、ポリスチレン/ジビニルベンゼン、被覆ポリスチレン、アクリル系ポリマー、デキストランアクリル系ポリマー、ビニル系グラフト化ポリマー、又はビニル系ポリマーである、請求項9記載の方法。
- 前記担体がシリカ−デキストラン、シリカ−アクリル系ポリマー又はシリカ−ポリエチレンイミンの形態のシリカ系樹脂である、請求項9記載の方法。
- 前記担体が、前記核酸分子の混合物が付される活性表面として存在する、請求項1乃至請求項11のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体が、前記核酸分子の混合物と接触する膜として存在する、請求項1乃至請求項12のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体が、前記核酸分子の混合物と接触するフィルターとして存在する、請求項1乃至請求項13のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体が、前記核酸分子の混合物が通過するカラム中のクロマトグラフィーマトリクスとして存在する、請求項1乃至請求項14のいずれか1項記載の方法。
- 前記担体が、前記核酸分子の混合物が付されるスポンジ状物質として存在する、請求項1乃至請求項15のいずれか1項記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE0101380A SE0101380D0 (sv) | 2001-04-18 | 2001-04-18 | Isolation of plasmid DNA molecules |
SE0103436A SE0103436D0 (sv) | 2001-10-12 | 2001-10-12 | Isolation of plasmid DNA molecules |
PCT/EP2002/004152 WO2002083893A2 (en) | 2001-04-18 | 2002-04-15 | Isolation of dna molecules using mercapto-aryl ligands |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004533237A JP2004533237A (ja) | 2004-11-04 |
JP4081376B2 true JP4081376B2 (ja) | 2008-04-23 |
Family
ID=26655447
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002582231A Expired - Lifetime JP4081376B2 (ja) | 2001-04-18 | 2002-04-15 | Dna分子の単離 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6916919B2 (ja) |
EP (1) | EP1379645B1 (ja) |
JP (1) | JP4081376B2 (ja) |
AT (1) | ATE471980T1 (ja) |
AU (1) | AU2002302534B2 (ja) |
CA (1) | CA2444259C (ja) |
DE (2) | DE60236789D1 (ja) |
ES (1) | ES2347533T3 (ja) |
GB (1) | GB2377447B (ja) |
WO (1) | WO2002083893A2 (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0323814D0 (en) * | 2003-10-10 | 2003-11-12 | Cobra Biolog Ltd | Purification of biological macromolecules |
KR100668338B1 (ko) | 2005-05-21 | 2007-01-12 | 삼성전자주식회사 | 신규한 pH 의존성 이온 교환물질, 그가 고정화되어 있는고체 기판, 및 상기 물질 및 고체 기판을 이용하여 핵산을분리하는 방법 |
WO2008150826A1 (en) * | 2007-05-31 | 2008-12-11 | Ge Healthcare Uk Limited | Modified spin column for simple and rapid plasmid dna extraction |
JP5463492B2 (ja) * | 2008-10-08 | 2014-04-09 | 島根県 | 微生物細胞からのプラスミドdna抽出法 |
WO2010046918A1 (en) * | 2008-10-08 | 2010-04-29 | V. B. Medicare Pvt. Ltd. | Purification of supercoiled plasmid dna |
KR101871683B1 (ko) | 2010-07-30 | 2018-06-27 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 크로마토그래피 매질 및 방법 |
EP3636696A1 (en) | 2011-05-04 | 2020-04-15 | Cornell University | Multiblock copolymer films, methods of making same and uses thereof |
KR102072529B1 (ko) | 2014-09-02 | 2020-02-25 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 나노-피브릴화된 표면 특징을 갖는 고표면적 섬유 매질 |
KR102162753B1 (ko) | 2014-12-08 | 2020-10-07 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 혼합층 이온 교환 흡착제 |
KR102308085B1 (ko) | 2016-04-28 | 2021-10-06 | 테라포어 테크놀로지스, 인코포레이티드 | 정전기적 분리를 위한 대전된 이소포러스 재료 |
EP3541500B1 (en) | 2016-11-17 | 2021-12-08 | Shethji, Jayraj K. | Isoporous self-assembled block copolymer films containing high molecular weight hydrophilic additives and methods of making the same |
EP3585506A4 (en) | 2017-02-22 | 2021-01-13 | Terapore Technologies, Inc. | MULTI-BLOCK COPOLYMER MEMBRANES RELATED TO A LIGAND, USES AND MANUFACTURING PROCESS |
EP3621722A1 (en) | 2017-05-12 | 2020-03-18 | Terapore Technologies, Inc. | Chemically resistant fluorinated multiblock polymer structures, methods of manufacturing and use |
JP2021517861A (ja) | 2018-03-12 | 2021-07-29 | テラポア テクノロジーズ,インコーポレイテッド | マクロボイドを備える等多孔質メソ多孔性等非対称材料及びその製造方法 |
CN109092263B (zh) * | 2018-08-28 | 2021-04-27 | 武汉瑞法医疗器械有限公司 | 一种低密度脂蛋白吸附剂及其制备方法 |
CN109370963A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-02-22 | 安徽欣伯玉生物科技有限公司 | 一种大肠杆菌工程菌高效表达超螺旋质粒dna的培养方法 |
CN113969276A (zh) * | 2020-07-23 | 2022-01-25 | 西安桑尼赛尔生物医药有限公司 | 一种高效纯化大量pcr产物的凝胶层析方法及其应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE470099B (sv) * | 1984-05-17 | 1993-11-08 | Jerker Porath | Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein |
US5217593A (en) * | 1991-03-13 | 1993-06-08 | Macconnell William P | Nucleic acid purification system and method |
US5502022A (en) * | 1994-05-16 | 1996-03-26 | Biosepra, Inc. | Chromatography adsorbents utilizing mercapto heterocyclic ligands |
US5652348A (en) * | 1994-09-23 | 1997-07-29 | Massey University | Chromatographic resins and methods for using same |
US5660984A (en) * | 1994-12-09 | 1997-08-26 | Davis; Thomas E. | DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof |
US5789578A (en) * | 1996-01-11 | 1998-08-04 | Massey University | Methods for the preparation of resins with ligands attached thereto through a linking group comprising sulfide, sulfoxide or sulfone functionality |
GB9927904D0 (en) | 1999-11-25 | 2000-01-26 | Amersham Pharm Biotech Ab | A method fro obtaining a nucleic acid variant |
EP1683631A1 (en) * | 2005-01-25 | 2006-07-26 | Borealis Technology OY | Multilayer structures |
-
2002
- 2002-04-12 GB GB0208591A patent/GB2377447B/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-15 AT AT02730158T patent/ATE471980T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-04-15 EP EP02730158A patent/EP1379645B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-15 DE DE60236789T patent/DE60236789D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-15 JP JP2002582231A patent/JP4081376B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-15 CA CA2444259A patent/CA2444259C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-15 AU AU2002302534A patent/AU2002302534B2/en not_active Ceased
- 2002-04-15 US US10/473,239 patent/US6916919B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-15 WO PCT/EP2002/004152 patent/WO2002083893A2/en active Application Filing
- 2002-04-15 ES ES02730158T patent/ES2347533T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 DE DE10217084A patent/DE10217084A1/de not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE471980T1 (de) | 2010-07-15 |
EP1379645A2 (en) | 2004-01-14 |
US6916919B2 (en) | 2005-07-12 |
GB0208591D0 (en) | 2002-05-22 |
AU2002302534B2 (en) | 2007-09-20 |
EP1379645B1 (en) | 2010-06-23 |
WO2002083893A3 (en) | 2003-07-31 |
CA2444259C (en) | 2012-10-02 |
GB2377447B (en) | 2003-06-25 |
WO2002083893A2 (en) | 2002-10-24 |
JP2004533237A (ja) | 2004-11-04 |
ES2347533T3 (es) | 2010-11-02 |
DE60236789D1 (de) | 2010-08-05 |
GB2377447A (en) | 2003-01-15 |
DE10217084A1 (de) | 2002-11-21 |
CA2444259A1 (en) | 2002-10-24 |
US20040126778A1 (en) | 2004-07-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4081376B2 (ja) | Dna分子の単離 | |
AU2002302534A1 (en) | Isolation of DNA molecules using mercapto-aryl ligands | |
US8093373B2 (en) | Plasmid purification | |
JP2012050463A (ja) | Dna精製方法および精製されたdna | |
Diogo et al. | Studies on the retention of plasmid DNA and Escherichia coli nucleic acids by hydrophobic interaction chromatography | |
Gustavsson et al. | Purification of plasmid DNA with a new type of anion-exchange beads having a non-charged surface | |
Levison et al. | New approaches to the isolation of DNA by ion-exchange chromatography | |
WO2001038516A1 (en) | Method for purifying plasmid dna by anion-exchange chromatography | |
EP1476550B1 (en) | Method of separation using aromatic thioether ligands | |
JP2003514655A (ja) | 核酸構造を有する化合物を含むサンプル由来の物質の選択的除去方法 | |
WO1995029187A1 (en) | Chromatographic process for the copurification of chondroitinase i and ii proteins | |
Hammond et al. | Use of triazine dyes as ligands for the large-scale affinity chromatography of a thermostable glycerokinase | |
CN108048456A (zh) | 一种质粒提取方法 | |
Singh et al. | pDNA capture using grafted adsorbents | |
Li et al. | Biporous polymeric microspheres coupled with mercaptopyridine for rapid chromatographic purification of plasmid DNA | |
WO1998023630A1 (en) | Matrix for rapid purification of nucleic acids | |
JPS61187793A (ja) | プラスミドdnaの分離精製方法 | |
Karp et al. | Isolation of nucleic acids using anion-exchange chromatography: Qiagen-tip based methods | |
Robinson | OLD DIVERSIONS AND NEH DIRECTIONS IN ENZYME PURIFICATION |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20041124 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20041214 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20041214 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050413 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060912 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20061212 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20061219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070312 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070911 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071211 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080129 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080208 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110215 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4081376 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120215 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130215 Year of fee payment: 5 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140215 Year of fee payment: 6 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |