JP4037823B2 - 血清サンプル及びサンプルサイズの立証のため、並びに希釈度の検出のための第xiii因子の検出 - Google Patents
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Description
本発明は、臨床検査室における試験手順及び器具使用のための品質管理並びにヒト第XIII因子タンパク及びその使用の分野に属する。
開業医、研究者、及びすべてのタイプの臨床家を含む、医学社会は、類似の機能及びサービスと同様に、日常の理学的検査の一部分としての生物学的サンプルの分析試験について、そして病気の診断、並びに患者の進行及び病気の状態のモニターにおいて、臨床検査室に依存する。尿及び脳脊髄液のような他の体液がしばしば同様に使用されるにもかかわらず、これらの検査室で分析される最も共通する生物学的サンプルの中には、血清及び血漿がある。多くの分析が自動化された器具使用によって実施され、そしていくつかの場合には、多数のサンプルが同時に分析される。試験がこの方法によって実施されるか、又は臨床検査技師によって個別の基準で実施されるかによらず、偽の結果を作り出すことのできる多くのエラーの根源がある。
ヒト第XIII因子タンパクに関する生物学的サンプルの分析が上記の多様なタイプのエラーを検出する有効な方法であることがここに発見された。その分野で上記タンパクの活性化された形態として認識されている”サブユニットa”又は”FXIIIa”、及びその機能が、担体タンパクであろうと推測されているが、一般的には不明である”サブユニットb”又は”FXIIIb”と称される上記タンパクの2のサブユニットは、以下において本発明の異なる側面において別々に分析され、エラーの検出において有用な異なるタイプの情報を提供する。FXIII全体は、各サブユニットを2個含む4量体であり、各サブユニットの解離した形態同様にヒト血漿中に存在する。しかしながら、ヒト血清のイムノアッセイはテトラマーも解離したサブユニットaも検出せず、替わりにサブユニットbのみを検出する。少量の4量体がヒト血清中に存在するかも知れないが、仮にそうだとしても、その量は典型的なイムノアッセイの検出限界よりも低い。本明細書中で使用される”血清”及び”血漿”という用語は、特記されない限り、ヒト血清又は血漿を意味する。
ヒト血液凝固第XIII因子(FXIII)は、トランスグルタミナーゼであり、且つ、血液凝固カスケードの最後の酵素である。フィブリン安定化因子、Laki-Lorand因子、フィブリナーゼ、架橋酵素、としても知られ、FXIIIはグルタミン及びリジン側鎖間のイソペプチド結合の形成を触媒することにより、血餅の架橋を引き起こす。この架橋は主に柔らかい血餅中のフィブリン分子間で起こるが、フィブリンとアンチプラスミン間でも起こる。因子自体は、上記の4量体として正常に存在し、トロンビンとCa++によって活性化された上でのみ、その酵素機能を果たす酵素前駆体である。活性化は、aサブユニットのアミノ末端の近くのArg37-Gly38ペプチド結合のトロンビンによる開裂を通じて起こる。Ca++の存在下、bサブユニットはその後4量体から解離し、aサブユニットを露出する。したがって、活性型は、遊離されたaサブユニット、FXIIIaである。bサブユニット、FXIIIbは、4量体中のaサブユニットを安定化し、又は血漿中で4量体の活性化を制御すると考えられる。いったん活性化されると、aサブユニットは、フィブリンに結合されたままで、bサブユニットが血清中に放出される。4量体、個々のサブユニットのいずれもが、診断又はモニタリングのための分析サンプルとして使用されることができる尿、又は脳脊髄液或いは非ヒト体液中には存在しない。
血漿:FXIIIa、FXIIIb、及び4量体
血清:FXIIIbのみ
Claims (23)
- 生物学的状態の存否について分析される分析テストサンプルがヒト血清で、且つ、ヒト血漿を含まないサンプルであることを確認するための方法であって、その中のヒト第XIII因子タンパクのaサブユニットの存在について前記サンプルを分析することを含み、こうして検出されたaサブユニットが前記サンプル中のヒト血漿の存在の指標である、前記方法。
- 前記aサブユニットの上記存在がイムノアッセイによって決定される、請求項1に記載の方法。
- 請求項2に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
前記サンプルを、前記aサブユニットに対する特異的な結合親和性を有し、且つヒト第XIII因子タンパクのbサブユニットに対する結合親和性を実質的に有さない捕捉抗体と接触させること;及び
こうして捕捉された前記aサブユニットを検出すること、
を含む、前記方法。 - 請求項2に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
(i)前記サンプルを、固相であって、前記aサブユニットに対する特異的な結合親和性を有し、且つ前記ヒト第XIII因子タンパクの上記bサブユニットに対する結合親和性を実質的に有さない捕捉抗体がそこへ結合された、前記固相と接触させること;
(ii)前記aサブユニットの、前記捕捉抗体を介した前記固相への結合が起こったか否かを決定すること、
を含む、前記方法。 - 前記固相が粒子の集団であり、且つステップ(ii)がフローサイトメトリーによって前記粒子を検出することを含む、請求項4に記載の方法。
- 請求項2に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
前記サンプルを、前記aサブユニットに対する結合親和性を有する捕捉抗体と接触させること;及び
こうして捕捉された前記aサブユニットを、前記aサブユニットに対する特異的な結合親和性を有し、且つ前記ヒト第XIII因子タンパクのbサブユニットに対する結合親和性を実質的に有さない検出抗体で検出すること、
を含む、前記方法。 - 請求項6に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
(i)前記サンプルを、前記aサブユニットに対する結合親和性を有する捕捉抗体がそこへ結合された固相と接触させること;及び
(ii)前記aサブユニットに対する特異的な結合親和性を有し、且つ前記ヒト第XIII因子タンパクの上記bサブユニットに対する結合親和性を実質的に有さない検出抗体とこうして結合したaサブユニットを検出することによって、前記aサブユニットの前記捕捉抗体を介した前記固相への結合が起こったか否かを決定すること、
を含む、前記方法。 - 前記固相が粒子の集団であり、且つ、ステップ(ii)がフローサイトメトリーによって前記粒子を検出することを含む、請求項6に記載の方法。
- 生物学的状態の存否について分析される分析テストサンプルが血清又は血漿サンプルで、且つ、脳脊髄液、尿、又は非ヒト血清のいずれでもないことを確認するための方法であって、前記サンプル中のヒト第XIII因子タンパクの上記bサブユニットの存在について前記サンプルを分析することを含み、前記bサブユニットの上記存在が、前記サンプルがヒト血清又は血漿サンプルであることを確認する、前記方法。
- 前記bサブユニットの上記存在がイムノアッセイによって決定される、請求項9に記載の方法。
- 請求項10に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが、以下のステップ:
前記サンプルを、前記bサブユニットに対する特異的な結合親和性を有する捕捉抗体と接触させること;及び
こうして捕捉された前記bサブユニットを検出すること、
を含む、前記方法。 - 請求項10に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
(i)前記サンプルを、前記bサブユニットに特異的な結合親和性を有する捕捉抗体がそこへ結合された固相と接触させること;及び
(ii)前記bサブユニットの前記捕捉抗体を介した前記固相への結合が起こったか否かを決定すること、
を含む、前記方法。 - 前記固相が粒子の集団であって、且つステップ(ii)がフローサイトメトリーによって前記粒子を検出することを含む、請求項12に記載の方法。
- 血清又は血漿のいずれかのサンプルの希釈度を決定するための方法であって、以下のステップ:
前記サンプルを、前記サンプル中のヒト第XIII因子タンパクの上記bサブユニットの量について分析すること;及び
前記量を、既知の希釈度のヒト血清又は血漿サンプル中のbサブユニットの上記量と比較すること
を含む、前記方法。 - 前記サンプル中の前記bサブユニットの上記量が、イムノアッセイによって決定される、請求項14に記載の方法。
- 請求項15に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
前記サンプルを、前記bサブユニットに対して特異的な結合親和性を有する捕捉抗体と接触させること;及び
こうして捕捉されたbサブユニットを検出すること、
を含む、前記方法。 - 請求項15に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
(a)前記サンプルを、前記bサブユニットに特異的な結合親和性を有する捕捉抗体が結合された固相と接触させること;及び
(b)前記bサブユニットの前記捕捉抗体を介した前記固相への結合が起こったか否かを決定すること、
を含む、前記方法。 - 前記固相が粒子の集団であって、且つ、ステップ(b)がフローサイトメトリーによって前記粒子を検出することを含む、請求項17に記載の方法。
- 血清又は血漿のいずれかのサンプルが、意図した容量であることを確認するための方法であって、以下のステップ:
前記サンプルを、前記サンプル中のヒト第XIII因子タンパクの上記bサブユニットの上記量について分析すること;及び
こうして検出された前記量を、前記意図した容量であることが知られたヒト血清又は血漿サンプル中のbサブユニットの上記量と比較すること
を含む、前記方法。 - 前記bサブユニットの上記量がイムノアッセイによって決定される、請求項19に記載の方法。
- 請求項20に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
前記サンプルを、前記bサブユニットに対する特異的な結合親和性を有する捕捉抗体と接触させること;及び
こうして捕捉された前記bサブユニットを検出すること、
を含む、前記方法。 - 請求項20に記載の方法であって、ここで、前記イムノアッセイが以下のステップ:
(a)前記サンプルを、前記bサブユニットに対する特異的な結合親和性を有する捕捉抗体が結合された固相と接触させること;及び
(b)前記bサブユニットの前記捕捉抗体を介した前記固相への結合が起こったか否かを決定すること、
を含む、前記方法。 - 前記固相が、粒子の集団であって、且つ、ステップ(b)がフローサイトメトリーによって前記粒子を検出することを含む、請求項22に記載の方法。
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