JP4020917B2 - 真空アシスト方式のアフィニティクロマトグラフィー装置及び方法 - Google Patents

Description

実験室サンプルを濃縮、分離及びあるいは精製するための、ろ過、クロマトグラフィー、遠心分離を実施するための数多くの実験室装置が開発されてきている。

サンプルに関する何らかの調査研究を行うに当たり、先ずサンプルを濃縮することが研究者の慣例となっている。サンプルを濃縮する主な方法には、特異的捕獲（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃａｐｔｕｒｅ）法（クロマトグラフィーレジン及びアフィニティーケミストリー）あるいはサイズ排除フィルター法の２つがある。

サイズ排除フィルター法には研究者が受け入れるべき使用上の制約がある。サイズ排除フィルターのフォーマットは、微量サンプルを用いる遠心分離フィルターか、あるいはプレパラティブスケールを用いるタンジェンシャルフロー分離システム、の何れかである。プレパラティブスケール用のシステムは代表的にはポンプとゲージとを含み、ユーザーには熟練と分離プロセスの監視とが要求される。プレパラティブスケール用のシステムには、最終濃縮物量が大きく（５０ｍｌｓ若しくはそれ以上）なるという別の制約もある。研究者の出発サンプル量が２５０〜１０００ｍｌｓであることを考えると濃縮物量が５０ｍｌｓでは濃縮係数は小さい。遠心分離フィルターは、小型故の遠心ローラーの寸法制限上、好都合にプロセス処理することのできるサンプル量が少ない（１００ｍｌ以下）。遠心分離装置での濃縮係数は非常に大きく１００倍は普通であるが、処理量が小さいため、出発サンプル量の全てを濃縮させるには分離を監視し、フィルターユニットにたびたび補充を行う必要がある。

ある場合には遠心分離装置は、媒体充填カラム、クロマトグラフィーあるいはアフィニティー分離装置と共に準備される。こうした装置でも、出発サンプル量の制限があることや、サンプルを１００ｍｌｓ以上濃縮させるためには充填作業を何度も行う必要がある点は同じである。
限外ろ過膜（ＵＦ）のプロセス処理上の制約、即ち、ポンプ及びゲージコストが高く、熟練したオペレーターが要求され、最終的な濃縮物容量が所望よりも大きいという制約は、プレパラティブスケール用のカラムクロマトグラフィー装置にも当てはまる。

特異的捕獲システムを低コスト化するための他の方策は重力分離カラムを使用することである。特異的捕獲システムを用いる場合、研究者は、サンプルをプロセス処理するための充分なヘッド圧がカラムを通して生じるようにシステムをセットアップする必要がある。このセットアップではシステムを、タンク内で被処理サンプルを重力分離カラムの上方に配置する状態で組み立て、重力分離カラムは管とコネクタとから構成される。このセットアップは安価で済むが、プロセス処理時間が長くなる結果、熱によるサンプル劣化を防止するために低温の室内でプロセスを実施する必要性が生じてしまうと言う大きな制約がある。

米国特許第４，７５５，３０１号には、ろ過した高分子を乾固させることなく濃縮させるための遠心分離法及び装置が記載される。半透性の限外ろ過膜がサンプルリザーバをろ過液カップから分離し、この限外ろ過膜の下方のろ過液ダクトが限外ろ過膜の縁部から十分内側にオフセットされる。装置は遠心機のローター角を固定して使用され、最も外側のろ過液ダクトの最外縁である遠心機半径方向高さに保持液のメニスカスが達したところでろ過を停止する。
従来のサンプル調製装置ではサンプル量は比較的少量に制限され、一般には約０．５〜８０ミリリットルである。

これらの装置では、代表的には、膜が取り外され、代わりにもっと開口度の高い多孔質フィルターあるいはフリットが取付けられ、この多孔質フィルターの上流側にはクロマトグラフィー媒体が追加され、ある場合ではフリットの最上部の層が、保存及び取り扱い時に管内部のクロマトグラフィー媒体を保持するために使用され得る。所望の成分（一般にはペプチドあるいはタンパク質）を含有する成分混合物を含む微量サンプルがサンプルリザーバに追加され、次いで装置が遠心分離作動される。前記所望の成分は典型的には選択された媒体その他の全ての材料に結合（捕獲）され、また流体は装置を通過してろ過液リザーバに入る。次いで装置が取り外され、ろ過液が投棄されあるいは更に他の試験で使用され、洗浄液が装置に加えられ、流体高さが低下するに従いクロマトグラフィー媒体中に捕捉された、あるいは管の表面上に残留する未捕獲の材料が除去される。次いで装置が取り外され、ろ過液が投棄され（一般的には新しいろ過液キャップが取り付けられる）、抽出流体（代表的には、前記捕獲した所望の成分をクロマトグラフィー媒体から釈放せしめるためにｐＨあるいはイオン強度が異なる）が追加され、遠心機内で装置を介して旋回される。ろ過液キャップ内の、釈放された所望の成分を含む抽出物が収集される。

この形式の装置には、装置自体が遠心分離機内に嵌合され得る寸法形状を有し、それ故にろ過量が制限されるという問題がある。血清あるいは組織培養サンプルを１リットルといった大きな量でろ過／捕獲するためには、前記手順（少なくとも結合段階及びしばしば洗浄段階）を何度も行う必要がある。

そうした大きな量を取り扱うための別法には、ベンチスケールカラムあるいはプレパラティブカラムの如きクロマトグラフィーカラムを使用するものがあるが、これらの装置は高価であり、複数のカラム、ホルダー、ポンプと、サンプル、ろ過液、洗浄液、そして溶離物のための各タンクとが必要となる。また、これらのカラムの多くは選択された媒体と共に予めパッケージ化されているため、選択入手することのできる媒体は限られる。しかも、そうしたカラムで使用する媒体の容積は被捕獲材料のために必要なそれよりも代表的にはずっと大きい。これは、カラムに固有の余分な容積分がしばしば無駄になる、つまり不経済であることを意味する。あるいは、カラムを洗浄して保管し、もう一度使うこともできるが、そのためには、次回使用時の結果に悪影響を及ぼす恐れのある材料（所望の材料あるいは汚染物）が前回使用後に残らないよう、媒体を確実に完全浄化するための努力が必要となる。また、大抵の媒体は冷蔵する必要があり、保管中に汚染されないようにする必要もある。

従来の遠心分離機で取り扱うよりもずっと大量のサンプルを取り扱い可能であり、また適正量の媒体を効果的に使用し、かくして次回使用時までに洗浄したり保管する必要性を無くした、好都合且つ信頼下にサンプルを素早く高品位分離あるいは高品位純化するための装置及び方法が提供されることが望ましい。

米国特許第４，７５５，３０１号

解決しようとする課題は、比較的大量のサンプルを、特に、捕獲性に優れたシングルパス態様下に好都合に且つ素早くプロセス処理することのできるサンプル調製装置を提供することである。
解決しようとする他の課題は、比較的大量のサンプルを好都合に且つ素早くプロセス処理することができ、また、関心成分を５０倍以上の高い濃縮係数で抽出し得るサンプル調製装置を提供することである。
解決しようとする他の課題は、高価な設備無しで比較的大量のサンプルを好都合に且つ素早くプロセス処理することのできるサンプル調製装置を提供すること、及び、無人で信頼下にサンプルをプロセス処理することのできるシステムを提供することである。
解決しようとする他の課題は、冷蔵を必要としない程の充分な早さで比較的大量のサンプルをプロセス処理することのできるサンプル調製装置を提供することである。

本発明によれば、上述の従来の問題を解決する、大量捕獲及び少量抽出のために特に有益なサンプル調製装置及び方法が提供される。本発明の装置は、代表的にはハイブリドーマモノクロナル抗体産生細胞株からの大量の（例えば約１００ｍｌｓ〜１リットル）組織培養上清の如きサンプルから、少量（例えば約１０ｍｌｓあるいはそれ未満）の高純化サンプルを提供するために真空ろ過及び遠心機の各好ましい様相を組み合わせたものである。

本発明の１実施例によれば、サンプルリザーバと、内側の容積部分を有する真空マニホルドと、該真空マニホルドの容積部分に位置決めしたフィルターユニットにして、クロマトグラフィー媒体と、このクロマトグラフィー媒体の流体流れ方向に関してクロマトグラフィー媒体よりも上流側に位置付けたサンプルチャンバとを収納するフィルターユニットとを含み、前記サンプルチャンバがサンプルリザーバよりも容積が小さく、サンプルリザーバと真空マニホルドとが、サンプルリザーバと、フィルターユニットと、真空マニホルドとを通るろ過パスが確立されるようにシール状態で係合するサンプル調製装置が提供される。サンプルホルダー内のサンプルに真空の如き駆動力を受けさせるとサンプルは大容量のリザーバからフィルターユニット内のクロマトグラフィー媒体を通して流動する。関心分子が媒体に結合し真空モード下に洗浄され得る。次いで、フィルターユニットを取り外し、媒体に真空あるいは遠心力のような駆動力を受けさせる抽出操作を行い、抽出したサンプルを収集する。別の実施例では関心分子がマニホルド自体の内部の低容量の遠心機のスピンナ内に抽出され得る。

本発明の１実施例に従う図１を参照するに、好適なホースその他を介して真空源に連結するための標準型のコネクタ１３を有する真空マニホルド１２が示される。真空マニホルド１２は通気口１４をも含み得る。通気口１４は、ろ過装置３０を通るサンプル流量を絞り、サンプル捕獲を最適化するために使用することができる。図４に最も良く示されるように、本実施例のマニホルド１２は、上部１５Ａの位置で開放する内側穿孔１５を有し、全体に中実の胴部を構成している。内側穿孔１５は、通路１６を介して真空源のような駆動力と連通され、また通路１７を介して通気口１４とも連通される。内側穿孔１５の肩部１５Ｂ及び１５Ｃの位置には、ろ過装置３０（以下に詳細を説明する如き）を図示の如く支持するための段部が設けられる。マニホルド１２は、装置に付加される真空に耐えるに十分丈夫で且つ強い材料から作製することが好ましい。更にはマニホルドは被プロセス処理材料と相容性のある材料製ともすべきである。マニホルドはプラスチックから作製することが好ましく、ポリプロピレンあるいはポリエチレンのようなポリオレフィンから作製することがより好ましい。

図１〜３を参照するに、サンプルホルダー２０が、図示するような開放された上端２１を有するハウジングを構成している。図示される実施例ではサンプルホルダー２０はワンピース形の全体に円筒状のハウジングであり、好ましくは、少なくとも約５０ミリリットル、より好ましくは少なくとも約１００ミリリットル、最も好ましくは少なくとも約５００ミリリットルといった比較的大容量のサンプルを保持することが可能である。サンプルホルダー２０はポリオレフィン、特にはポリプロピレンのようなプラスチックから作製することが好ましく、通常はポリエチレンから作製する。上端２１は、サンプルホルダー２０へのサンプル移行を容易化する大直径の開口を有することが好ましい。サンプルホルダー２０は、このサンプルホルダー２０よりも下流側のろ過装置内にクロマトグラフィー媒体が堆積しないように前ろ過する、膜及びあるいはグラスファイバーなどで構成したフィルター３１を含み得ることが好ましい。フィルター３１は、ろ過装置３０を再使用したい場合は特に有益である。

サンプルホルダー２０の底部はカラー２５と合致する。代表的には、カラー２５とサンプルホルダー２０とは一体ユニットとして相互に結合される。この結合はヒートボンド、音響溶接、接着その他により実施され得る。カラー２５は好ましくは円筒状を有し、環状の肩部１２Ａ（図４）の位置で真空マニホルド１２と合致する形態とされる。カラー２５は、好ましくはこのカラーの中央に位置付けた内側環状リング２６を含む。内側環状リングはマニホルド１２の突出部材２７に取り付けられる。しかし内側環状リングは、マニホルド１２を他のサンプルホルダー及びカラーと共に再使用することが出来るようにするために、マニホルド１２の突出部材２７に恒久的には取り付けられない。カラーは、図２及び図３に最も良く示されるアダプタ３３をも含む。アダプタは好ましくは円筒状を有し、カラー２５の中心に、好ましくは内側環状リング２６で囲むようにして位置付けることが好ましい。アダプタ３３は、ろ過装置３０の周囲をシールするためのＯ−リングのようなシール要素３４を含む。あるいは、フィルターユニットの開放端を備えたフェースシールを提供するガスケット３６（図６）を使用して前記シールを提供させ得る。サンプルホルダー２０とカラー２５とを組合せたものはミリポア社から商標名Ｓｔｅｒｉｃｕｐ及び商標名Ｓｔｅｒｉｔｏｐとして市販入手することが可能である。

ろ過装置３０は、ポリオレフィン、特にはポリプロピレンのようなプラスチック材料から作製したワンピースのハウジング形態のものであることが好ましい。ハウジングは全体的に円筒状であり、上方部分がサンプルチャンバ３８を画定する。サンプルチャンバ３８は、要求量の抽出物を収納するに充分大きい、全体に円筒状で且つクロマトグラフィー媒体を収納する下方部分に向けて収斂する形態を有する。ハウジングの下方部分３９の終端部は、ろ過装置の流体出口を画定するスパウト４０となっている。
ろ過装置３０は、そのフォーマットを特に限定しないクロマトグラフィー媒体４５（図４及び図５）を含んでいることが好ましい。媒体は、基本的には、ペプチド及びあるいはプロテインの回収に使用される任意のものを本装置で用いることができる。

例えば、好適な媒体には、ペプチド、プロテイン、核酸その他の有機化合物のための様々な用途を収受するための、スチレンビニルベンゼンベースの媒体（無改質の、あるいは、例えばスルホン酸、四級アミンを誘導体化したもの）、シリカベースの媒体（無改質の、あるいはＣ₂、Ｃ₄、Ｃ₆、Ｃ₈、あるいはＣ₁₈を、もしくはイオン交換剤を誘導体化したもの）、を含む、官能基を誘導体化してなるレジン粒状物を含む機能性複合構造（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）が含まれる。

更には、アガロース、架橋型アガロースあるいは架橋型デキストラン、架橋型のトリスアクリルポリマーのような多糖類から形成した媒体を単独で、もしくは、これに限定するものではないが、プロテインＡ、プロテインＧその他を含むリガンドのような色々な捕獲用のケミストリーと共に用いることができる。その他の例には、捕獲用のケミストリーを含有する常磁性粒状物がある。また、多孔性ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）のみを、あるいはプロテインＡ（マサチューセッツ州Ｂｉｌｌｅｒｉｃａのミリポア社から入手可能な、ＰｒｏＳｅｐ（商標名）Ａ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ媒体を含む）のようなリガンドと共に用いることができる。
特にペプチド以外のクラスの分子のためには、代替的な選択性（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）を持つ広汎な種類のマトリクス（例えば、疎水性の相互作用媒体、イオン交換媒体、逆相媒体、アフィニティー媒体（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、ホウ素アフィニティーレジン）などをも用いることができる。

積層型の膜はクロマトグラフィー媒体としても好適である。好適な装置には、帯電（ｃｈａｒｇｅ）、サイズ、アフィニティー及びあるいは疎水性の異なる被検体を分別するための、材料の官能基が異なる複数の多孔質複合基質が組み込まれ得、また、グラスファイバーディスク、表面帯電膜あるいは、アフィニティー分子を膜面にカップリングさせた膜、のような積層フィルターが含まれ得る。

ここで“粒状物”とは、定形（例えば球状）、不定形のもののみならず、破片状、ファイバー状及びパウダー状のもの、そして随意的には上述した捕獲用のケミストリーの如きを含むものとする。これらの粒状物は、クロマトグラフィーパッキングではよく知られるように、ガラス、金属あるいはプラスチックの各フリット、若しくはガラスマットあるいはプラスチックの不織布に含まれ得る。あるいはそうした粒状物をクロマトグラフィーパケット内に充填したものを装置内に挿通させることができる。ろ過装置３０は、マニホルド１２の内側穿孔１５内に摺動自在に受けられる形態を有し、その上部リム３７には、図４及び図５に示す如く、マニホルド１２の上部肩部に座着する環状フランジが含まれ得る。ろ過装置３０の上方部分、即ちサンプルチャンバ３８の基底部は、マニホルド１２の肩部１５Ｂ上に位置決めしたシール手段４６上に座着する。好適なシール手段には、ろ過装置３０とマニホルド１２とを連結してサンプルのための流路を創出する、Ｏ−リング、平坦なエラストマーガスケットその他が含まれ得る。ろ過装置３０をマニホルドの内側穿孔１５の内部に位置決めすると、流体を排流させるに充分な（図３及び図４に示す実施例における如く）空間あるいは遠心ろ過ユニットのような第２装置を位置決めして（図２及び図５に示す実施例における如く）抽出サンプルを更に濃縮及び脱塩させるに充分な空間が、ろ過装置の出口の下方に生じる。

後者の実施例の場合、ミリポア社から市販入手することのできるＵｌｔｒａｃｅｌ（商標名）膜を含むＡｍｉｃｏｎ（商標名）Ｕｌｔｒａユニットのような好適な遠心フィルターユニット５０を使用することができる。遠心装置は、結合及び洗浄の各段階を完了した後、フィルターユニットの下方に配置され、分析あるいは使用に先立って更に濃縮され得る抽出物を収集するべく位置決めされる。

ろ過装置に通すサンプルの流量は多くの方法によって制御され得る。例えば、通気口１４の如きを介してエアリークを導入してろ過装置３０に付加される真空圧を減少させ、かくしてろ過装置を通る流速を低下させ得、あるいは、ろ過装置３０のクロマトグラフィー媒体のパッキング及びあるいはサンプルホルダー２０のフィルターを改変することにより流れを制御することもできる。

作業に際し、ろ過装置３０をマニホルド内に位置決めし、サンプルホルダー２０とカラー２５とをマニホルドを覆ってシール状態で位置決めし、装置を組み立てる。サンプルホルダーにサンプルを入れ、装置に真空を付加する。サンプルがろ過装置３０（好ましくはサンプルホルダー２０内のプレフィルターを通過した後）に流入し、関心分子がろ過装置内の媒体に結合し、非関心分子はろ過装置を通り、廃棄され或いは収集容器に送られる。次いで、結合した関心分子が、真空付加下にサンプルホルダー２０内に好適な洗浄溶液を導入することにより随意的に洗浄され得る。ろ過装置がマニホルドから取り外され、遠心分離の如きそれ以降のプロセス処理を受け、かくして関心分子が抽出される。

別の実施例では、限外ろ過遠心装置のような遠心機６０（図５）が、例えば結合及び洗浄の各段階の完了後且つ抽出段階前の如きにおいて、ろ過装置のマニホルドの下流側に位置決めされる。ろ過装置を出る流体は爾後のプロセス処理及び分析のために遠心分離装置に受けられる。

図８〜図１３には、マニホルド１２’が、真空源と連通する状態下に使用されるようにしたボトルあるいは類似のハウジングである別の実施例が例示される。サンプルホルダー２０（真空源に接続自在のフィッティング４４を含む）と、ろ過装置３０のみならず、随意的な遠心機６０とは先に説明したようなものであり、図１２では組み立て状態で示される。マニホルド１２’は、図９に最も良く示されるように、ろ過装置３０と、随意的な遠心機６０と、を格納するに充分な容積を有している。図示の実施例では、マニホルド１２’は、カラー２５の内側環状リング２６の相当する内側ネジ溝とシール状態で係合する外側ネジ溝を有する上方リップ６２を含む。サンプルホルダー２０にマニホルド１２’をシール状態で取り付けるためのその他の手段は本発明の範囲内に含まれる。上方リップ６２の外径はろ過装置３０の環状フランジ３１の外径よりも小さいので、環状フランジ３１は図９に示すように上方リップ６２の上面に座着することができる。アダプタ３３’がろ過装置３０を図示の如くサンプルホルダー２０にシールする。

図１０に示す特定の実施例では遠心機６０は用いられず、ろ過液はろ過装置３０を出た後マニホルド１２’に単に収集される。収集したろ過液は用途に応じて使用あるいは廃棄される。
マニホルド１２’のための好適な材料には、ステンレス鋼、ガラス、好ましくはポリエチレンやポリプロピレンのようなポリオレフィンが好ましく最も代表的にはポリスチレンであるプラスチックが含まれる。
図１１及び図１３には、ろ過装置３０を出た抽出物は収集管７０内に収集される。収集された抽出物サンプルは保存され若しくはそれ以降のプロセス処理を受ける。

本発明に従うサンプル調製装置の斜視図である。 分離装置よりも下流側に限外ろ過装置を位置決めした、図１のアセンブリの分解斜視図である。 図１の装置の部分分解斜視図である。 本発明の１実施例に従うサンプル調製アセンブリの一部の断面図である。 本発明の１実施例に従うサンプル調製アセンブリの一部の断面図である。 本発明に従う、組み立て状態のサンプルホルダーの裏側から見た斜視図である。 本発明に従う、組み立て状態のサンプルホルダーの裏側から見た斜視図である。 ろ過装置よりも下流側に限外ろ過濃縮器を設けた、本発明の他の実施例に従うサンプル調製アセンブリの分解斜視図である。 組み立て状態における図８のアセンブリの断面図である。 限外ろ過濃縮器を取り外した状態での、図８のアセンブリの断面図である。 ろ過装置よりも下流側に収集管を位置決めした、本発明の別態様の実施例に従うサンプル調製アセンブリの分解斜視図である。 図１１のアセンブリの組み立て状態での斜視図である。 図１１のアセンブリの断面図である。

符号の説明

１２ 真空マニホルド
１３ コネクタ
１４ 通気口
１５ 内側穿孔
１５Ｂ、１５Ｃ 肩部
１６ 通路
２０ サンプルホルダー
２１ 上端
２５ カラー
２６ 内側環状リング
２７ 突出部材
３０ ろ過装置
３１ フィルター
３３、３３’ アダプタ
３６ ガスケット
３８ サンプルチャンバ
３９ 下方部分
４０ スパウト
４５ クロマトグラフィー媒体
４６ シール手段
５０ 遠心フィルターユニット
６２ 上方リップ
１２’ マニホルド
７０ 収集管

Claims (14)

1. サンプルリザーバと、内側の容積部分を有する真空マニホルドと、該真空マニホルドの容積部分に位置決めしたフィルターユニットにして、クロマトグラフィー媒体と、該クロマトグラフィー媒体の流体流れ方向に関して該クロマトグラフィー媒体よりも上流側に位置付けたサンプルチャンバーとを収納するフィルターユニットとを含み、前記サンプルチャンバがサンプルリザーバよりも容積が小さく、サンプルリザーバと真空マニホルドとが、サンプルリザーバと、フィルターユニットと、真空マニホルドとを通るろ過パスが確立される状態でシール状態で係合するサンプル調製装置。
2. フィルターユニットがマニホルド及びサンプルリザーバから取り外し自在である請求項１のサンプル調製装置。
3. サンプルリザーバの容積が５０ミリリットルである請求項１のサンプル調製装置。
4. マニホルドが穿孔を含み、フィルターユニットが該穿孔内でサンプルリザーバよりも下流側に位置決めされる請求項１のサンプル調製装置。
5. 穿孔内でフィルターユニットよりも下流側に位置決めした遠心ろ過ユニットを更に含んでいる請求項４のサンプル調製装置。
6. 真空マニホルドの穿孔が真空源と連通するようになっている請求項４のサンプル調製装置。
7. クロマトグラフィー媒体が、官能基を誘導体化してなるレジン粒状物及びシリカベースの媒体を含む機能性複合構造からなる群から選択される請求項１のサンプル調製装置。
8. クロマトグラフィー媒体が、官能基で誘導体化してなる誘導体膜からなる層の１層以上を含む機能性複合構造から成る群又はシリカベースの媒体を含む複合膜構造から成る群から選択される請求項１のサンプル調製装置。
9. サンプルリザーバがフィルターを含んでいる請求項１のサンプル調製装置。
10. 真空源を更に含み、真空マニホルドが、該真空源及びフィルターユニットと連通するろ過液収集容器である請求項１のサンプル調製装置。
11. フィルターユニットがサンプルリザーバから取り外し自在である請求項１のサンプル調製装置。
12. サンプルを純化するための方法であって、
    クロマトグラフィー媒体と、該クロマトグラフィーと流体連通し且つ該クロマトグラフィー媒体の流体流れ方向に関して該クロマトグラフィー媒体よりも上流側に位置付けたサンプルチャンバと、を含むフィルターユニットと流体連通するサンプルリザーバにして、前記サンプルチャンバが該サンプルリザーバよりも容積が小さく、前記フィルターユニットが、真空源と連通するマニホルドの内側容積部分に位置決めされるサンプルリザーバを提供すること、
    サンプルをサンプルリザーバに導入すること、
    サンプルリザーバからサンプルを取り出し、フィルターユニットに前記真空源からの真空を付加することにより前記サンプルをフィルターユニットに流入させて関心分子をクロマトグラフィー媒体に結合させること、
    マニホルドからフィルターユニットを取り外すこと、
    クロマトグラフィー媒体から関心分子を抽出すること、
    を含む方法。
13. 関心分子が遠心分離により抽出される請求項１２の方法。
14. サンプルを純化するための方法であって、
    真空源と連通するマニホルド内に位置決めされ、クロマトグラフィー媒体を含む第１フィルターユニットにして、該第１フィルターユニットよりも下流側の遠心分離フィルターユニットと流体連通する第１フィルターユニットと流体連通するサンプルリザーバを提供すること、
    サンプルをサンプルリザーバに導入すること、
    サンプルリザーバからサンプルを取り出し、フィルターユニットに前記真空源からの真空を付加することにより、取り出したサンプルを第１フィルターユニットに流入させて関心分子をクロマトグラフィー媒体に結合させること、
    遠心分離フィルターユニットを第１フィルターユニットよりも下流側に導入すること、
    クロマトグラフィー媒体から遠心分離フィルターユニットに関心分子を抽出させること、
    マニホルドから遠心分離フィルターユニットを取り外し、遠心分離フィルターユニットに遠心力を作用させること、
    を含む方法。

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