JP3883815B2 - ハイブリダイゼーション反応法及びハイブリダイゼーション器具 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、サンプル生体高分子とプローブ生体高分子とのハイブリダイゼーション反応を利用してサンプル生体高分子に目的とする配列が存在するか否かを分析するためのハイブリダイゼーション反応法及びハイブリダイゼーション器具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来から、生体内の分子を同定・分画するために、特に目的ＤＮＡの検出、あるいは遺伝子ＤＮＡの有無検出などのために、既知の配列をもつ核酸や蛋白質をプローブとしてハイブリダイズする方法が多く用いられている。具体的には、まずプローブＤＮＡを固定したスライドグラスの上に、蛍光物質を標識したサンプルＤＮＡを含む溶液を滴下し、つぎにその上にカバーグラスをかぶせてハイブリダイズさせて、サンプルＤＮＡがプローブＤＮＡに結合すると、サンプルＤＮＡはプローブＤＮＡと一緒に固定されるので、スライドグラスを洗浄した後に、固定されたサンプルＤＮＡに標識されている蛍光物質を光源からの励起光で励起し、発光する蛍光を検出することでハイブリダイズしたサンプルＤＮＡを検出することができる。
このハイブリダイゼーション反応を行うのに好適なハイブリダイゼーション器具として、ハイブリダイゼーション反応恒温槽ＣＨＢＩＯに用いられる専用カセットが知られている（日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社製）。
【０００３】
図３は、従来のハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。本器具は、ケース部１とトレー一体型キャップ部２とを主な構成とする（挿入体と被挿入体）。トレー一体型キャップ部２は、スライドグラスを載せるためのトレー部４と、密閉度を高めるためのシリコーンゴム等からなるパッキン５を有する。ケース部１とトレー一体型キャップ部２は、とめ具３により一体化でき、ケース部１とトレー一体型キャップ部２とで密閉空間を形成するように構成されている。
【０００４】
図４は、一体化した状態のハイブリダイゼーション器具の概観を示す図である。図３と同じ部分には同じ符号を付けてある。一体化した状態で実際の全体の大きさは、９４×４１×１３ｍｍ³である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
カバーグラスを載せるのは少ないサンプル溶液で効率的なハイブリダイゼーション反応をさせるためであるが、カバーグラスは極めて薄くて軽く、スライドグラス上に滴下したサンプル溶液の上にカバーグラスをかぶせて定位置に固設する作業は経験と技術を要するものである。最悪の場合にはカバーグラスを破損して貴重なサンプルを台無しにしてしまうこともある。
【０００６】
また、上述のようにサンプル溶液は少量であり、ハイブリダイゼーション反応は比較的高温で行うので、サンプル溶液が蒸発してしまい、サンプル溶液が蒸発して残ったサンプルＤＮＡは、洗浄しても容易に流されずに残ってしまうため、蛍光物質で解析する際に、ノイズとなって現れてしまう。
本発明は、上記問題点に鑑み、誰にでも容易に確実にセットすることができて、かつ、サンプル溶液の蒸発を少なくすることができるハイブリダイゼーション反応法及びハイブリダイゼーション器具を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明のハイブリダイゼーション反応法は、サンプル生体高分子を含むサンプル溶液をカバーグラスに滴下するステップと、プローブ生体高分子が固定されているスライドグラスを該プローブ生体高分子が固定されている面を下にして上記カバーグラスに載置するステップとを備える。
また、サンプル溶液を滴下する前に、シリコーン製のシートの上に前記カバーグラスを載置するステップをさらに備えることで、シリコーンのガラスとの密着性により、簡単、かつ確実にカバーグラスを所定の位置に固設することができる。
【０００８】
本発明のハイブリダイゼーション器具は、生体高分子を固定したスライドグラスを載置する溝を上面に有するトレー部と、前記溝にカバーグラスを固設するためのシートと、前記トレー部を収容するケース部と前記ケース部とで前記トレー部を密閉するキャップ部とを備える。
また、前記シートは、シリコーン製であることで、シリコーンのガラスとの密着性により、簡単、かつ確実にカバーグラスを所定の位置に固設することができる。
【０００９】
また、前記シートは、前記溝と長手方向の長さがほぼ同じであることで、シートを簡単に溝の所定位置に固設することができる。
また、前記シートは、前記カバーグラスを載置する位置を示すガイドラインを有することで、カバーグラスを載置する位置の目安とすることができる。
【００１０】
また、本発明のハイブリダイゼーション器具は、生体高分子を固定したスライドグラスを載置する凸部を上面の溝の中に有するトレー部と、前記トレー部を収容するケース部と、前記ケース部とで前記トレー部を密閉するキャップ部とを備える。
また、前記凸部は、カバーグラスを載置する位置を決めるカバーグラス固定溝を有することで、簡単、かつ確実にカバーグラスを所定の位置、すなわち、カバーグラス固定溝１４に固設することができる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、添付図面を参照しながら本発明の好適な実施の形態について詳細に説明する。
図１は、本発明の実施の形態１によるハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。従来例と同様に、トレー一体型キャップ部２は、トレー部４及びパッキン５を有する。本実施の形態におけるハイブリダイゼーション反応法は、図１（ｂ）（図１（ａ）の断面図）に示すとおり、トレー部４の溝１１にシリコーン製のシート６を敷き、シート６の上にマークされているガイドライン７に合わせてシート６の上にカバーグラス８を敷き、そのカバーグラス８の上にサンプル溶液９を滴下し、さらにその上にプローブＤＮＡを固定したスライドグラス１０を、プローブＤＮＡを固定した側を下にして載せる。溝１１にはサンプル溶液の蒸発を防ぐために水を入れる。この状態のトレー一体型キャップ部２をケース部１（図３参照）に挿入し、とめ具３を用いて密閉する。密閉されたケース部１は、そのまま恒温環境下におき、ハイブリダイゼーション反応させる。反応後は、洗浄作業、染色作業等の過程を経て解析を行う。
【００１２】
ここで、実際のトレー一体型キャップ部２は基本的にアクリル製であり、パッキン５がシリコーン製である。シート６はシリコーン製である。また、溝１１の深さは約３ｍｍ、シート６の厚みは約１ｍｍ、カバーグラス８の厚みは約０.１７ｍｍである。スライドグラスは日本規格が７６×２６ｍｍ²、米国規格が３×１inch²（２５.４ｍｍ²）、ヨーロッパ規格が２５×７５ｍｍ²である。シート６の幅はカバーグラス８の幅よりも短くしてカバーグラス８を載せる作業を容易にすると共に、蒸発を防ぐための水を多く入れることができるようにしている。
【００１３】
実施の形態１の効果
(1).サンプル溶液９を間にしてカバーグラス８とスライドグラス１０とを合わせる作業において、小さなカバーグラス８をまず固設しておいて、より大きなスライドグラス１０を載せるようにしているので、作業としては大きなスライドグラス１０を扱うものとなり、小さなカバーグラス８を扱うことに比べて格段に取扱いが容易になる。
(2).シート６の長手方向の長さは溝１１の長手方向の長さとほぼ同じにしているので、シート６を簡単に溝１１の所定位置に固設することができる。
(3).シート６はシリコーン製であるのでガラスとの密着性がよく、その上にカバーグラス８を載せる際に、簡単、かつ確実に所定の位置、すなわち、ガイドライン７に示される位置に固設することができる。
【００１４】
(4).シート６にカバーグラス８を載せる作業において極めて薄いカバーグラス８を万一破損したとしても、まだ、サンプル溶液９を滴下していないので、貴重なサンプルを無駄にすることがない。
(5).シート６がシリコーン製で疎水性であるため、溝１１に入れられている水でスライドグラス１０を濡らすのを防ぐことができる。
(6).スライドグラス１０を載せる際は、その長手方向の一端部を溝１１の端部に固設してからスライドグラス１０の傾斜を減らすようにして載置することになるので、サンプル溶液９の中に気泡が入りにくい。
(7).シート６を溝１１の中に入れているため、蒸発を防ぐための水を十分に入れることができると共に、空気の容積が少なくなり、サンプル溶液９の蒸発を少なくすることができる。
【００１５】
図２は、本発明の実施の形態２によるハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。本実施の形態のトレー一体型キャップ部１２は、実施の形態１と同様にパッキン１５を有すると共に、シート一体型トレー１３を有する。このシート一体型トレー１３は、実施の形態１のシート６の役割を持つ凸部１３ａを溝１１に有する。したがって、この凸部１３ａは、溝１１の長手方向には端から端まであり、短手方向には中央にだけ存在する。そして、本実施の形態においてはシート６に相当する凸部１３ａがアクリル製であるので、ガイドライン７の代わりにカバーグラス８を置く位置決めのための溝であるカバーグラス固定溝１４を設けている。本実施の形態におけるハイブリダイゼーション反応法は基本的に実施の形態１と同様であるが、シート６を敷く手順が必要なくなり、ガイドライン７に合わせてカバーグラス８を敷くのではなく、カバーグラス固定溝１４に合わせてカバーグラス８を敷く点が異なる。
【００１６】
実施の形態２の効果
(1).サンプル溶液９を間にしてカバーグラス８とスライドグラス１０とを合わせる作業において、小さなカバーグラス８をまず固設しておいて、より大きなスライドグラス１０を載せるようにしているので、作業としては大きなスライドグラス１０を扱うものとなり、小さなカバーグラス８を扱うことに比べて格段に取扱いが容易になる。
(2).シート一体型トレー１３の凸部１３ａにはカバーグラス固定溝１４を設けているので、凸部１３ａの上にカバーグラス８を載せる際に、簡単、かつ確実に所定の位置、すなわち、カバーグラス固定溝１４に固設することができる。
(3).シート一体型トレー１３にカバーグラス８を載せる作業において極めて薄いカバーグラス８を万一破損したとしても、まだ、サンプル溶液９を滴下していないので、貴重なサンプルを無駄にすることがない。
【００１７】
(4).スライドグラス１０を載せる際は、その長手方向の一端部を溝１１の端部に固設してからスライドグラス１０の傾斜を減らすようにして載置することになるので、サンプル溶液９の中に気泡が入りにくい。
(5).シート一体型トレー１３から凸部１３ａが溝１１の中に突き出ているため、蒸発を防ぐための水を十分に入れることができると共に、空気の容積が少なくなり、サンプル溶液９の蒸発を少なくすることができる。
(6).実施の形態１と比べてシート６がないだけ、少ない部品点数で実現することができる。
【００１８】
なお、本発明は上記実施の形態に限定されるものではない。
例えば、シートは、シリコーン製に限られない。しかし、シートはガラスとの密着性があって、弾力性があって、疎水性で、生化学活性のないものが望ましい。
カバーグラスは、ガラス製に限られず、プラスチック製などでもよい。カバーグラスは、生化学活性のないものが望ましい。
【００１９】
【発明の効果】
以上のように、本発明によれば、スライドグラスとカバーグラスとを合わせる作業を特別な技術を要さずに行うことができ、また、サンプル溶液の蒸発を少なくすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施の形態１によるハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。
【図２】本発明の実施の形態２によるハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。
【図３】従来のハイブリダイゼーション器具の構成を示す図である。
【図４】一体化した状態のハイブリダイゼーション器具の概観を示す図である。
【符号の説明】
１ ケース部
２ トレー一体型キャップ部
３ とめ具
４ トレー部
５ パッキン
６ シート
７ ガイドライン
８ カバーグラス
９ サンプル溶液
１０ スライドグラス
１１ 溝
１２ トレー一体型キャップ部
１３ シート一体型トレー
１３ａ 凸部
１４ カバーグラス固定溝
１５ パッキン

Claims (14)

1. 上面に溝を有するトレー部を用意するステップと、前記トレー部の溝に前記トレー部の溝の幅より小さい幅のシートを配置するステップと、前記溝の幅より小さく且つ前記シートの幅より大きい幅を有するカバーグラスを前記シートの上に配置するステップと、生体高分子を含むサンプル溶液を前記カバーグラスの上に滴下するステップと、前記溝の幅より小さく且つ前記カバーグラスの幅より大きい幅を有し生体高分子が固定されているスライドグラスを該生体高分子が固定されている面を下にして前記カバーグラスの上に配置するステップと、を有するハイブリダイゼーション反応法。
2. 更に、前記トレー部の溝に水を注入し、前記シートを囲むように水を配置するステップを有することを特徴とする請求項１記載のハイブリダイゼーション反応法。
3. 更に、前記シート、前記カバーグラス、及び、前記スライドグラスと共に前記トレー部を密閉されたケース部に収容するステップを有することを特徴とする請求項１記載のハイブリダイゼーション反応法。
4. 上面に溝を有するトレー部と、前記トレー部の溝の幅より小さい幅のシートと、前記溝の幅より小さく且つ前記シートの幅より大きい幅を有するカバーグラスと、前記溝の幅より小さく且つ前記カバーグラスの幅より大きい幅を有し生体高分子が固定されているスライドグラスと、を有し、
   前記トレー部の溝に前記シートを配置し、前記シートの上に前記カバーグラスを配置し、生体高分子を含むサンプル溶液を前記カバーグラスの上に滴下し、前記サンプル溶液が滴下されたカバーグラスの上に、前記スライドグラスを前記生体高分子が固定されている面を下にして配置することができるように構成されているハイブリダイゼーション器具。
5. 前記トレー部の溝に水を注入することによって、前記シートを囲むように水を配置することができるように構成されていることを特徴とする請求項４記載のハイブリダイゼーション器具。
6. 更に、前記シート、前記カバーグラス、及び、前記スライドグラスと共に前記トレー部を収容する密閉されたケース部を備えることを特徴とする請求項４記載のハイブリダイゼーション器具。
7. 前記シートには、前記カバーグラスを配置する位置を示すガイドラインが設けられていることを特徴とする請求項４に記載のハイブリダイゼーション器具。
8. 前記シートの長手方向の寸法は、前記トレー部の溝の長手方向の寸法と略同じであることを特徴とする請求項４に記載のハイブリダイゼーション器具。
9. 前記シートは、シリコーン製であることを特徴とする請求項４に記載のハイブリダイゼーション器具。
10. 上面に溝を有するトレー部と、前記トレー部の溝内に形成され該溝の幅より小さい幅の凸部と、前記溝の幅より小さく且つ前記凸部の幅より大きい幅を有するカバーグラスと、前記溝の幅より小さく且つ前記カバーグラスの幅より大きい幅を有し生体高分子が固定されているスライドグラスと、を有し、
    前記凸部の上に前記カバーグラスを配置し、生体高分子を含むサンプル溶液を前記カバーグラスの上に滴下し、前記サンプル溶液が滴下されたカバーグラスの上に、前記スライドグラスを前記生体高分子が固定されている面を下にして配置するように構成されているハイブリダイゼーション器具。
11. 前記トレー部の溝に水を注入することによって、前記凸部を囲むように水を配置することができるように構成されていることを特徴とする請求項１０記載のハイブリダイゼーション器具。
12. 更に、前記シート、前記カバーグラス、及び、前記スライドグラスと共に前記トレー部を収容する密閉されたケース部を備えることを特徴とする請求項１０記載のハイブリダイゼーション器具。
13. 前記凸部は、カバーグラスを配置する位置を決めるカバーグラス固定溝を有することを特徴とする請求項１０記載のハイブリダイゼーション器具。
14. 前記凸部の長手方向の寸法は、前記トレー部の溝の長手方向の寸法と略同じであることを特徴とする請求項１０に記載のハイブリダイゼーション器具。

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