JP3557528B2 - 微生物の電気化学的濃化培養方法、並びに有機物質およびbod分析用バイオセンサー - Google Patents
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Description
(技術分野)
本発明は、有機物濃度およびBOD測定用バイオセンサーに関し、さらに詳細には、測定が簡単且つ迅速であり、応用および製作並びにメンテナンスにかかるコストの低い有機物濃度およびBOD測定用バイオセンサーに関する。
【0002】
(背景技術)
一般に、バイオセンサーとは、測定部の一部または全部として生物体または生物体から由来した物質が使用され、この測定部が電気的装置と結合された測定装置を意味する。バイオセンサーは、生物反応における高度の特異性のため、測定物質の濃度および性状が精度良く測定できるという点で、1960年代からそれに対する研究が持続的に行われてきた。その結果、様々なバイオセンサーが開発され、その測定物質の範囲も多様化された。例えば、グルコースオキシダーゼと酸素電極を結合して製作したグルコース濃度測定用バイオセンサーおよび抗体を使用した医学用バイオセンサーが現在実用化されて広く使用されている[参照;Tuner等,1987:Biosensors, Fundamentals and applications, Oxford Science Publications]。
【0003】
一方、工場稼動時に発生する廃水や家庭から発生する下水などの汚濁度は、通常、化学的酸素要求量(Chemical Oxygen Demand:COD)または生化学的酸素要求量(Biochemical Oxygen Demand:BOD)に換算して表示され、これらの迅速な測定は、環境および公害防止関連産業において極めて重要な意味を有する。しかし、廃水中に存在する微生物資化性有機物質の量を意味するBODを測定する従来の方法では長時間かかり、種々の複雑な過程と装置が必要とされる問題点がある。また、作業者の熟練度によってその値に偏差が生じるだけでなく、水質の汚染状態を緊急確認したい場合や、または廃水処理工程の自動化施設の設置において適用し難いという問題点があった。
【0004】
かかる問題点を解決するために、数種のBOD測定用バイオセンサーが開発された[参照;Hikuma等,1979:European Journal of Microbiology and Biotechnology,8,289:Riedel等,1990:Water Research,24,883:Hyun等,1993:Biotechnology and Bioengineering,41,1107]。前記言及されたBODセンサーは、通常、溶解酸素測定用電極に特定微生物を固定化させた膜を付着した形態であって、この時、BODセンサーを測定しようとする試料と反応させると、膜に固定化された微生物が試料内の有機物を資化しながら酸素を消費するようになり、したがって、この時の溶解酸素値を対照試料の溶解酸素値と比較し、これをBODに換算する。しかし、このようなBOD測定用バイオセンサーは下記のような問題点を抱えている。
【0005】
第一に、1種の微生物を使用し、使用した微生物の基質特性によって廃水中の複合栄養成分に対する資化性が足りないため、BODの全体値が表せない。
【0006】
第二に、多孔性膜に微生物を固定させたため、再現性の高いBOD測定値を得るためには随時に膜を交換、修理しなくてはならないが、使用される微生物固定膜が高価なので非経済的であり、整備もしにくい。
【0007】
第三に、対照試料用溶解酸素電極を使用しなくてはならず、装置が複雑となり、装備コストおよび故障率も高くなる。
【0008】
第四に、従来BOD測定用バイオセンサーに使用される微生物は、微生物の外部から電気化学的活性を直接測定できないため、電子伝達媒介体(electrochemical mediator)や別途の変換機(transducer)を取り付けなくてはならない。
【0009】
一方、一般的に嫌気的環境で生長する微生物は、酸素以外に他の電子受容体を使用することができ、こうした電子受容体を使用して代謝する過程を微生物の嫌気的呼吸と呼ぶ。嫌気的に呼吸する微生物が有機物を酸化する際に利用し得る電子受容体には、酸化第二鉄、硝酸塩、六価マンガン、硫酸塩、炭酸塩などがある。電子供与体が同じの場合、微生物電子伝達系内の酸化還元反応から発生するエネルギーは、酸化第二鉄が酸化第一鉄に還元される時が最も大きく、硝酸塩、硫酸塩、炭酸塩の順に低くなるが、これは、各々の電子受容体の固有特性である酸化還元電位と関係がある[参照;キムビョンホム、1995:微生物生理学、アカデミー書籍]。
【0010】
こうした嫌気的呼吸を行う微生物の金属塩還元細菌が利用する電子受容体のうち酸化第二鉄などは、水に対する溶解度が極めて低いため、好気性微生物の一般の電子受容体である酸素とは違って、不溶性電子受容体を細胞内に吸収して還元することができない。したがって、金属塩還元細菌の場合、外部に存在する電子受容体を還元するために特殊な形態の電子伝達システムが存在する。例えば、酸化第二鉄を電子受容体として利用する金属塩還元細菌の一種であるジオバクターサルファーリデュセンス(Geobacter sulfurreducens)とシーワネラピュートリファシエンス(Shewanella putrefaciens)の場合、電子伝達タンパク質のシトクロムが存在し、このシトクロムを通して微生物内部で酸化された有機物から発生した電子が外部の電子受容体に伝達され、こうした一連の電子伝達過程を通じて発生したエネルギーを利用して生長するようになる[参照:Myers and Myers,1992,Journal of Bacteriology,174,3429−3438;Seeliger等,1998,Journal of Bacteriology,180,3686−3691]。したがって、類似した性質をもつこれらの金属塩還元細菌は、有機物の代謝時に発生する電子を外部の不溶性電子受容体に伝達して電子受容体を還元させるため、有機物の量は外部の電子受容体の還元量と比例するようになり、この電子受容体に代替できる適当な電極を利用すると、微生物内部から発生する電子が電極を還元させ、電極に直接伝達された電子は回路を通じて外部へ流れるようになる。こうした微生物の生理学的特性を利用する生物燃料電池などが大韓民国特許公開公報第1998−16777号(1998年6月5日)に開示されており、本願に参考として導入される。
【0011】
ところで、前記金属塩還元細菌を利用した生物燃料電池において電子の量は微生物の濃度、有機物の量などに比例するため、発生された電子の量を測定することによって試料中に存在する有機物の量を測定することが可能になる。
【0012】
したがって、本発明者らは、このような生物燃料電池および使用された微生物と有機物に対する研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【0013】
(発明の開示)
本発明の目的は、前述した従来のBOD測定用バイオセンサーの問題点を解消し、改善されたBOD測定用バイオセンサーおよびそれを使用したBOD測定方法を提供することにある。
【0014】
【発明の構成および作用】
前記目的を達成するために、本発明の一観点によれば、測定部、電流検出部および検出された電流変化を記録する記録部を含み、前記測定部は、陽極および陰極、これら陽極および陰極の伝導媒体、並びにこれら両極間のイオン交換膜を含む無媒介体生物燃料電池からなり、前記陰極部には電気化学的活性細菌を含有する試料が添加されることを特徴とするBOD測定用バイオセンサーが提供される。
【0015】
また、前記BOD測定用バイオセンサーにおいて、陰極と陽極を抵抗を介して連結した後、陰極部には窒素を供給して嫌気性条件にし、陽極部には空気を供給して好気性条件を作って試料中に存在する電気化学的活性細菌を前記陰極部に濃化培養し、前記濃化培養された電気化学的活性細菌を微生物触媒として利用することから発生した電流を測定することを特徴とする試料中のBOD測定方法が提供される。
【0016】
本発明の他の観点によれば、測定部、電流検出部および検出された電流変化を記録する記録部を含み、前記測定部は、陽極および陰極、これら陽極および陰極の伝導媒体、並びにこれら両極間のイオン交換膜を含む無媒介体生物燃料電池からなり、前記陰極部に所定の有機物を代謝する単一種の電気化学的活性細菌が含まれていることを特徴とする無媒介体生物燃料電池型有機物濃度測定用バイオセンサーが提供される。
【0017】
また、前記有機物濃度測定用バイオセンサーにおいて、陽極部には空気を継続的に供給して陰極部との電圧差を保持させながら、測定したい試料を陰極部に添加して陰極部に含まれた細菌が有機物を消費する上で生産される電子の流れを測定することによって該当有機物の濃度を測定することを特徴とする有機物濃度測定方法が提供される。
【0018】
本発明のさらに他の観点によれば、陽極および陰極、これら陽極および陰極の伝導媒体、並びにこれら両極間のイオン交換膜からなる無媒介体生物燃料電池において、陰極部には活性スラッジと廃水を添加し、陰極と陽極を抵抗を介して連結した後、陰極部には窒素を供給して嫌気性条件にし、陽極部には空気を供給して好気性条件に作って別途の電子受容体無しに活性スラッジと廃水中に存在する電気化学的活性細菌を濃化培養する方法が提供される。
【0019】
本発明は、電気化学的に活性をもつ微生物を使用し、電子伝達媒介体や変換機(transducer)無しに微生物自体の有機物資化力および電子伝達能力を利用して廃水中の微生物資化性成分(BOD)や乳酸などの有機物濃度を測定し得るバイオセンサーに関するものである。
【0020】
本発明の一観点において、BOD測定用バイオセンサーは、測定部、電流検出部および検出された電流変化を記録する記録部を含み、前記測定部は、陽極および陰極、これら陽極および陰極の伝導媒体、並びにこれら両極間のイオン交換膜を含む無媒介体生物燃料電池からなり、前記陰極部には電気化学的活性細菌を含有する試料が添加される。
【0021】
即ち、特定試料内の有機物と活性スラッジを種菌試料とし、電気化学的に活性のある電気化学的活性細菌を電気化学的な方法で電極および電極を含む電極部に濃化培養し、前記濃化培養された電気化学的活性細菌を微生物触媒として利用することによって電力を生産させると、生産された電力は測定部として使用された生物燃料電池に添加された微生物資化性成分である各種有機物濃度に比例するようになり、これを検出、記録することによって試料中のBODを測定することが可能になる。
【0022】
また、好ましくは、前記測定部の陰極部に電気化学的活性細菌の濃化培養を促すために、静電位電解装置を使用することができる。
【0023】
本発明の目的上、電気化学的活性細菌とは、廃水中の有機物を酸化する過程で発生する電子を細胞外部へ放出し電極に直接伝達することから電流を発生させ得る細菌のことをいい、代表的なものには金属塩還元細菌がある。
【0024】
本発明の他の観点において、有機物濃度測定用バイオセンサーは、前記生物燃料電池の電極自体または電極部に特定有機物質を基質とする電気化学的に活性である特定な細菌を含ませ、これをそのままバイオセンサーの測定部として利用する。即ち、特定な有機物を代謝する電気化学的活性細菌を陰極部に含ませるため、生物燃料電池によって発生した電力は試料中に存在する特定有機物の代謝によるものとなり、これを測定することによって試料中の有機物濃度を測定することが可能になる。
【0025】
以下、前述のようなBODおよび有機物濃度を測定する方法について具体的に説明する。
(1)電気化学的活性細菌の濃化培養およびこれを利用したBOD測定用バイオセンサー
廃水から発生する活性スラッジおよび嫌気性スラッジには多量の鉄還元細菌を含んだ種々の金属塩還元細菌が高い濃度で存在するものと最近の研究から確認された[参照:Nielsenなど、1997,Systematic and Applied Microbiology,20,645−651;Nielsenなど、1996,Water Science and Technology,34,129−136;Rasmussensなど、1994,Water Research,28,417−425]。
【0026】
したがって、活性スラッジや廃水などの種々の微生物が混合されている試料を種菌とし、電極の含まれた培養槽で適当な培地とともに嫌気的に培養すると、電極を電子受容体として使用し得る微生物だけが最終的に生存することになり、これら微生物種はシトクロムのような電子伝達体をもっているため、電気化学的活性をもつ。したがって、このような方法で廃水や活性スラッジなどに存在する種々の微生物のうち電気化学的活性をもつ菌を選択的に濃化培養することができる。
【0027】
一方、廃水や汚染された下水には多様な類型の有機物が含まれており、これら廃水や下水のBODを一律的な方法、即ち1種類の微生物だけで測定するというのは極めて難しいことであり、測定誤差もまた大きい。したがって、相異なる有機廃水および活性スラッジ中の多様な電気化学的活性細菌を前述のように濃化培養し、濃化培養されたこれらの活性細菌を測定部の生物燃料電池の微生物触媒として利用する過程で生産された電力量を測定することによって、試料中のBODを測定することができる。
【0028】
(2)生物燃料電池型バイオセンサーを使用した有機物濃度測定
前記BOD測定用バイオセンサーで説明したような生物燃料電池において、陰極部には測定したい基質に適する電気化学的に活性である単一種の微生物を含ませる。陽極部には空気を供給し続けて陰極部との電圧差を保持させ、測定したい試料を陰極部に添加すると、陰極部に含まれた微生物が該当基質を消費する上で生産される電子が直接陰極を通じて外部の回路に流れ出るようになり、これを測定することによって該当基質の濃度を測定することができる。したがって、このような原理に基づき多様な基質を消費する電気化学的に活性をもつ細菌を使用すると、多様な基質、即ち相応する該当有機物の濃度を測定することができる。
【0029】
以下、添付した図面を参照しつつ本発明をさらに詳細に説明する。
図1は、生物燃料電池形態の濃化培養装置を利用したBODセンサーの模式図である。陽極部5に酸素を供給して陽極2と陰極1に電位差を付与し、陰極部4に試料(例えば、廃水およびスラッジ)を添加し、陽極部にリン酸緩衝溶液または水道水を添加する。陰極部には嫌気的状態を保持させるために窒素を供給し、陽極部には空気を供給して単位電池の電圧差を保持させることができる。一定期間経過した後(通常、3週)、陰極には特定廃水を基質として濃化された電気化学的活性をもつ微生物が付着されるが、ここで、付着された微生物が基質を酸化して発生する電気を適宜測定すると、廃水中のBOD増減を測定することができる。本発明では前記陽極と陰極は両方とも炭素不織布から構成したが、状況に応じてこれ以外の各種材料の電極を使用してもよい。
【0030】
図4は、本発明の好ましい具現例であって、電気化学的濃化培養法を利用したBODセンサーの構成図である。この場合、電極の電圧を一定に保持するために静電位電解装置(potentiostat)を使用する。ここで、作業電極101は電子受容体として作用し、電極に対する適用電圧を変化させることによって微生物に対する電気化学的作用が異なることもある。作業電極の材質は炭素不織布であり、基準電極113としては銀/塩化銀(Ag/AgCl)が、補助電極102としては白金が使用される。基準電極は作業電極の作用電圧を保持、補正し、補助電極は作業電極と電気回路を構成する。この装置は、作業電極に一定な電位を加え(塩化銀基準電極に対して通常+0.98V)、試料(廃水およびスラッジ)を供給して特定廃水中の電気化学的活性細菌を一定期間(通常、2週)濃化培養し、これにより、電極に付着(濃化)された微生物および装置をそのままBOD測定用バイオセンサーとして使用することができる。
【0031】
本発明の利点および目的は、下記に説明される実施例によってより容易に理解されるものの、これに限定されるのではない。
【0032】
[実施例1]
生物燃料電池を利用した電気化学活性をもつ微生物濃化とCOD濃度による生物燃料電池の電流変化
特定廃水中の有機物を電子供与体として利用する、電気化学的に活性をもつ微生物を濃化培養するために図1のような装置を製作した。
【0033】
本実験では、澱粉加工廃水(出所:三養ゼネックス、大韓民国仁川市所在)を利用し、同工場の廃水処理から発生した活性スラッジを接種源として使用した。生物燃料電池の基本形態はベネットなどの文献[参照:Bennettoなど、1985,Biotechnology Letters,7,699−704]を参照した。電極は、陽極2および陰極1とも炭素不織布(寸法:5×7.5×0.6cm)とし、電極の配線は白金線を使用した[本発明では、微生物(または、微生物の電子伝達物質)が電極によって酸化される場所を陰極部4とし、外部回路を通じて移動された電子が再び電極で酸化剤を還元させる部分を陽極部5とする]。陰極部と陽極部はイオン交換膜3を介在して分離され、陰極1と陽極2は外部の回路を通じて連結される。この時、外部の回路に適当な抵抗を連結すると、陰極と陽極間の電流を制御することができる。陽極部(作業容量:30ml)には空気を供給し、陰極部(作業容量:30ml)には廃水とスラッジなどの試料を添加した。陰極部に廃水およびスラッジを添加し、陰極と陽極を抵抗を介して連結した後、陰極部には窒素を供給して嫌気的条件にし、陽極部に空気を供給して好気的条件を作って濃化培養を開始した。約3週間の濃化培養の後、背景電流が一定に保持されたとき一定な濃度のBODをもつ廃水を添加して発生される電流の総量を積算した。
【0034】
電流が基本値を表すとき、異なる濃度のCODをもつ廃水(出所:三養ゼネックス、大韓民国仁川市所在)を添加した。図2に示すように、発生される電流量は添加された廃水のCODに比例して増加した。また、図3に示すように、積算電流値は添加された試料のCODが増加するにつれて比例的に増加した。
【0035】
一方、前記製作されたBODセンサーを6ヶ月間作動させながら、1ヶ月毎にCOD50ppmと100ppmを各々添加して発生される電流量を測定した。図10に示すように、発生される電流量は殆ど変化することなく一定に保持された。したがって、発生される電流量は、BODセンサーの作動期間にかかわらず、添加されたCODの量に従って一定な値を保持しながら作動されることがわかった。
【0036】
[実施例2]
静電位電解装置が装着された生物燃料電池を利用した電気化学的活性微生物の濃化とCOD濃度による電流変化
電気化学的に活性をもつ微生物を有効に濃化培養するために図4のような装置を製作した。電気化学セル(Electrochemical cell)の材質はパイレックスガラスを使用し、容量を500mlとした。微生物が濃化される部分には、作業電極(炭素不織布)101が静電位電解装置と連結されて付着されており、電気回路を構成するために補助電極(白金線)102を取り付け、これを静電位電解装置と連結した。微生物が濃化される作業電極部と補助電極部は透析膜で分離されている。作業電極部104および補助電極部105には同じ濃度の廃水を添加した。作業電極を一定の静電位に保持するために基準電極113を付着し、作業電極の電位は静電位電解装置によって調節される。試料の投入および採取口109を形成し、必要に応じて嫌気的条件を保持するために窒素ガスを供給した。これら窒素注入口および排出口110,111は連続的な試料の供給が必要な場合、窒素に代わって試料の供給および排出口としても使用することができる。作業電極と補助電極間の電圧および電流の変化は、静電位電解装置を通じて増幅され、これをコンピュータを利用した記録装置や記録紙を利用するレコーダーで記録した。濃化培養は、作業電極部に菌源試料として活性スラッジを添加した後、静電位電解装置を作動させて作業電極が固定された電位を保持された状態で開始した。本実験で廃水および活性スラッジは澱粉加工廃水(出所:三養ゼネックス、大韓民国仁川市所在)を利用した。
【0037】
濃化培養は、廃水および活性スラッジを作業電極部に添加した後、作業電極を+0.98Vに固定した状態で開始した。実験開始から14日間稼動したとき、作業電極と補助電極間の電流は約50μAから最大322μAまで増加し、作業開始18日経過の後、約153μAで電流が安定化した。電流が安定化したとき濃度の異なる廃水を試料投入口を通じて投入した結果、電流の値が図2に似た形に増加した。試料投入口109と窒素排出口110を通じて廃水を連続的に投入・放出し、作業電極と補助電極間の電流を確認した結果、投入された廃水の濃度による電流の変化が確認できた(図5参照)。したがって、この装置を使用してBODを連続的に測定することが可能ということが分かり、装置を分解して電極を走査電子顕微鏡(SEM)で観察した結果、多量の微生物が電極に付着されていることが確認できた(図6参照)。電極から分離した微生物を培養し、循環電流法で調査した結果、電気化学的に活性であると確認された。
【0038】
[実施例3]
生物燃料電池型BODセンサーの陰極および陰極部内の金属塩還元細菌数の変化
実施例2で使用された生物燃料電池形態のBODセンサーの濃化培養過程および作動中、陰極部から陰極を試料として採取し鉄還元細菌の菌体数を調査した。培地は、リン酸塩緩衝液基本培地(PBBM)を使用し、培地成分は、酵母抽出物1g/L、塩化アンモニウム1g/L、Macro−mineral(II)25ml/L(リットル当り6g KH2PO4、12g NaCl、2.4g MgSO4・7H2Oおよび1.6g CaCl2・2H2O包含)、微量元素2ml/L(リットル当り12.8gニトロ酢酸、0.1g FeSO4・7H2O、0.1g MnCl2・4H2O、0.17g CoCl2・6H2O、0.1g CaCl2・2H2O、0.1g ZnCl2、0.02g CuCl2・H2O、0.1g H3BO3、0.01gモリブデン塩、1.0g NaCl、0.017g Na2SeO3、0.026g NiSO4・6H2O包含)、ビタミン液0.1ml/L(0.002gビオチン、0.002g 葉酸、0.010g B6(ピリドクシン)HCl、0.005g B1(チアミン)HCl、 0.005g B2(リボフラビン)、0.005g ニコチン酸(ニアシン)、0.005g パントテン酸、0.0001g B12(シアノコバラミン)結晶、0.005g PABA、0.005gリボ酸(チオクト酸)、レザズリン(Resazurin)(0.2%)1ml/L と寒天(agar)1.8%を添加して平板培地を製造した。この時、電子供与体として酢酸20mM、乳酸30mM、ブドウ糖20mMを各々使用し、電子受容体として水溶性鉄のピロリン酸第二鉄(Ferric pyrophosphate)20mMを使用した。1次段階は、反応初期燃料電池の好気性スラッジと嫌気性スラッジの試料を生理食塩水(0.85%塩水)で希釈しCFU(Colony Forming Unit /ml)に測定し、2次と3次段階は、反応後各々1ヶ月経過したのち同一培地と方法で測定した。その結果を下記表1に表す。
【0039】
【表1】
生物燃料電池陰極部内の特定微生物の菌体数変化
【0040】
前記表1において、好気性スラッジ試料は燃料電池の陰極部位を嫌気状態に作るため、通性嫌気性菌株以外には選別されながら減少し続け、電気化学的活性をもつ微生物だけが濃化培養されるものと判断され、嫌気性スラッジ試料は、2次段階で嫌気性細菌が増加してから3次段階には減少して電気化学的活性をもつ特定生物だけが濃化培養された。
【0041】
[実施例4]
シーワネラピュートリファシエンスを利用する燃料電池型バイオセンサーによる乳酸濃度の測定
乳酸の濃度を測定するために鉄還元細菌の一種のシーワネラピュートリファシエンス(Shewanella putrefaciens)IR−1(受託番号 KCTC 8753P、韓国科学技術研究院敷設生命工学研究所遺伝子銀行)を使用してバイオセンサーを製作した(図7参照)。
【0042】
この細菌は、乳酸を酢酸に酸化して発生する還元力で酸化第二鉄を還元する性質をもつ。陽極部205の容量は約20mlであり、0.1Mの塩化ナトリウムを含む0.05Mのリン酸塩緩衝溶液を添加し、陰極部204にはシーワネラピュートリファシエンス IR−1(乾燥重量:5mg)と0.1Mの塩化ナトリウムを含む19mlの0.05Mリン酸塩緩衝溶液を添加した。陰極201は0.8×4×0.3cm寸法の炭素不織布を使用し、陽極202は多孔性光沢炭素(Reticulated Vitreous Carbon; 寸法:3×3×0.3cm)を使用した。陽極と陰極は抵抗(500Ω)を介して連結され、この時の電圧の変化を測定して電極間の電流を計算した。電流は電圧計を経て記録計を作動させ得るように増幅され、電流(電圧)の変化を記録計を用いて記録した。作業温度を25℃に保ち、測定は、背景電流が安定化した後、各々異なる濃度の乳酸が含まれた1mlの試料を投入口209を通じて添加し、時間の経過による電流変化を記録し初期勾配を求めた。
【0043】
一定濃度の乳酸をバイオセンサー内に投入した時に発生する電流の初期勾配は、乳酸の濃度に比例したが、これは微生物によって乳酸が酸化されて発生した電子が電極を通じて移動するのを意味し、乳酸の濃度は微生物の濃度が一定の時に発生される電子の量に比例することを表している。代表的な電流の増加例を図8に示し、乳酸の濃度変化による電流発生時の初期勾配を図9に示した。乳酸濃度による電流初期勾配の相関係数は0.84であり、これは微生物の種類、濃度、電極の材質および寸法を変化させたり、抵抗を変化させるなどバイオセンサーの構成を変化させることによって改善された。
【0044】
本発明のバイオセンサーに使用される燃料電池である微生物触媒の電気化学的活性細菌として、BOD測定のための生物燃料電池の運転過程で濃化培養された廃水およびスラッジ中に含まれた活性細菌が使用される。したがって、本BODバイオセンサーは、人為的な微生物の添加無しに運転され、廃水によって適切な細菌の活性が保持されることができ、廃水のBOD値を連続的に測定することができる。また、本発明のBOD測定用バイオセンサーに使用される生物燃料電池は6ヶ月以上安定的に作動することができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は、生物燃料電池形態の特定微生物濃化装置を利用したBOD測定用バイオセンサーの模式図である。
【図2】図2は、本発明による生物燃料電池型バイオセンサーに添加された試料のCODと電流の関係を表すグラフである。
【図3】図3は、生物燃料電池のバイオセンサーに添加された試料のCODおよび発生した積算電流量との相関関係を表すグラフである。
【図4】図4は、静電位電解装置(potentiostat)を利用した特定微生物の濃化培養用装置と、これを利用したBOD測定用バイオセンサーの模式図である。
【図5】図5は、実施例2による静電位電解装置を使用して電気化学的活性細菌が濃化培養された生物燃料電池型バイオセンサーに添加された試料のCODと電流との関係を表すグラフである。
【図6】図6aは、本発明による生物燃料電池型バイオセンサーの作業電極の使用前の電極表面の走査電子顕微鏡(SEM)写真であり、図6bは、作業電極表面に濃化された微生物の走査電子顕微鏡(SEM)写真である。
【図7】図7は、本発明による燃料電池型乳酸濃度測定バイオセンサーの模式図である。
【図8】図8は、乳酸濃度測定の時に発生する電流記録の一般的な形態である。
【図9】図9は、乳酸濃度および電流発生時の初期勾配間の相関関係を表すグラフである。
【図10】図10は、本発明によるBOD測定用バイオセンサーを使用した場合、6ヶ月間添加されたCOD濃度による電流量を表すグラフである。
Claims (6)
- 測定部、電流検出部および検出された電流変化を記録する記録部を含み、前記測定部は、陽極および陰極、前記陽極および陰極の伝導媒体、並びに前記両極間のイオン交換膜を含む無媒介体生物燃料電池からなり、前記陰極部には電気化学的活性細菌を含有する試料が添加されることを特徴とするBOD測定用バイオセンサー。
- 前記測定部に陰極部の電位を調節する静電位電解装置をさらに含むことを特徴とする請求項1記載のBOD測定用バイオセンサー。
- 陰極と陽極を抵抗を介して連結した後、陰極部には窒素を供給して嫌気性条件にし、陽極部には空気を供給して好気性条件に作って、試料中に存在する電気化学的活性細菌を前記陰極部に濃化培養し、前記濃化培養された電気化学的活性細菌を微生物触媒として利用することによって発生された電流を測定することを特徴とする、請求項1または2に記載のBOD測定用バイオセンサーを用いて試料中のBODを測定する方法。
- 測定部、電流検出部、および検出された電流変化を記録する記録部を含み、前記測定部は、陽極および陰極、これら陽極および陰極の伝導媒体、並びにこれら両極間のイオン交換膜を含む無媒介体生物燃料電池からなり、前記陰極部に所定の有機物を代謝する単一種の電気化学的活性細菌が含まれていることを特徴とする無媒介体生物燃料電池型有機物濃度測定用バイオセンサー。
- 陽極部には空気を継続して供給して陰極部との電圧差を保持させながら、測定したい試料を陰極部に添加し、陰極部に含まれた細菌が試料に含まれた有機物を消費する上で生産される電子の流れを測定することによって該当有機物の濃度を測定することを特徴とする、請求項4記載のバイオセンサーによる有機物濃度測定方法。
- 陽極および陰極、前記陽極および陰極の伝導媒体、並びに前記両極間のイオン交換膜からなる無媒介体生物燃料電池において、陰極部には活性スラッジと廃水を添加し、陰極と陽極を抵抗を介して連結した後、陰極部には窒素を供給して嫌気性条件にし、陽極部には空気を供給して好気性条件に作って、別途の電子受容体無しに活性スラッジと廃水中に存在する電気化学的活性細菌を濃化培養する方法。
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