JP3488133B2 - 抗菌性ペプチド - Google Patents
抗菌性ペプチドInfo
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- JP3488133B2 JP3488133B2 JP13455299A JP13455299A JP3488133B2 JP 3488133 B2 JP3488133 B2 JP 3488133B2 JP 13455299 A JP13455299 A JP 13455299A JP 13455299 A JP13455299 A JP 13455299A JP 3488133 B2 JP3488133 B2 JP 3488133B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- antibacterial
- present
- lactoferrin
- amino acid
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な抗菌性ペプ
チドに関する。より詳しくはウシラクトフェリンの加水
分解物から分画されアミノ酸配列を決定されたペプチド
中、抗菌活性を有することが確認された新規なアミノ酸
配列を持つペプチドとそのペプチドを含有する抗菌剤に
関するものである。
チドに関する。より詳しくはウシラクトフェリンの加水
分解物から分画されアミノ酸配列を決定されたペプチド
中、抗菌活性を有することが確認された新規なアミノ酸
配列を持つペプチドとそのペプチドを含有する抗菌剤に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ラクトフェリンは１本のポリペプチド鎖
に、ガラクトースやマンノースなどから成る糖鎖が結合
した分子量約８万の糖蛋白質である。ラクトフェリン１
分子は２箇所の金属イオン結合部位を持っており、通常
は鉄イオンを可逆的に結合している。ラクトフェリンは
乳、涙、唾液などの外分泌液や、白血球の一種である好
中球などに広く分布している。その含量は初乳中に多
く、特にヒト初乳で最も濃度が高く、１ｍｌ当たり５か
ら１０ｍｇ存在している。初乳中に多いという事実か
ら、ラクトフェリンの生体防御機能への関与が類推され
既に感染防御作用、炎症抑制作用、免疫系調節作用、細
胞増殖作用、抗酸化作用の他に鉄吸収促進作用などの生
物学的機能が報告されている。
に、ガラクトースやマンノースなどから成る糖鎖が結合
した分子量約８万の糖蛋白質である。ラクトフェリン１
分子は２箇所の金属イオン結合部位を持っており、通常
は鉄イオンを可逆的に結合している。ラクトフェリンは
乳、涙、唾液などの外分泌液や、白血球の一種である好
中球などに広く分布している。その含量は初乳中に多
く、特にヒト初乳で最も濃度が高く、１ｍｌ当たり５か
ら１０ｍｇ存在している。初乳中に多いという事実か
ら、ラクトフェリンの生体防御機能への関与が類推され
既に感染防御作用、炎症抑制作用、免疫系調節作用、細
胞増殖作用、抗酸化作用の他に鉄吸収促進作用などの生
物学的機能が報告されている。
【０００３】一方、ラクトフェリン分子そのものの機能
以外にラクトフェリンの加水分解物から分画された種々
のペプチドの示す作用についても検討が加えられてお
り、特許Ｎｏ．２７７１０６８にはラクトフェリンの加
水分解物から単離された１１残基のアミノ酸からなる５
種類の抗菌性を示すペプチドが記載されている。さらに
特開平０５−９２９９４には同様にラクトフェリン分解
物から得られた２０残基のアミノ酸からなる抗菌性ペプ
チドが、特開平０５−２３８９４８には２５残基のアミ
ノ酸からなる抗菌性ペプチドが示されている。これらは
全て生体外でその抗菌作用が確認されたものであるが、
特開平０８−２９１１９８には生体外では抗菌作用を示
さず、生体内に於いてのみ抗菌作用を示すラクトフェリ
ン加水分解物から得られるペプチド混合物について記載
されている。このようにラクトフェリン分解物の示す抗
菌性については不明な点も多く、積極的に菌を殺す作用
以外に菌の感染部位への付着を阻害することによって感
染の成立を阻止するというメカニズムの存在も特開平０
７−３００４２５に示唆されている。
以外にラクトフェリンの加水分解物から分画された種々
のペプチドの示す作用についても検討が加えられてお
り、特許Ｎｏ．２７７１０６８にはラクトフェリンの加
水分解物から単離された１１残基のアミノ酸からなる５
種類の抗菌性を示すペプチドが記載されている。さらに
特開平０５−９２９９４には同様にラクトフェリン分解
物から得られた２０残基のアミノ酸からなる抗菌性ペプ
チドが、特開平０５−２３８９４８には２５残基のアミ
ノ酸からなる抗菌性ペプチドが示されている。これらは
全て生体外でその抗菌作用が確認されたものであるが、
特開平０８−２９１１９８には生体外では抗菌作用を示
さず、生体内に於いてのみ抗菌作用を示すラクトフェリ
ン加水分解物から得られるペプチド混合物について記載
されている。このようにラクトフェリン分解物の示す抗
菌性については不明な点も多く、積極的に菌を殺す作用
以外に菌の感染部位への付着を阻害することによって感
染の成立を阻止するというメカニズムの存在も特開平０
７−３００４２５に示唆されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】当業界や消費者におけ
る安全性指向の高まりとともに、抗菌剤においても、合
成抗菌剤にかわる新しいタイプの安全性の高い抗菌剤が
要望されている。また更に、医薬品、飲食品、工業薬品
等各種の用途に広範に使用することができ、また、外用
のみでなく経口投与も可能な新しいタイプの抗菌剤の開
発も要望されている。
る安全性指向の高まりとともに、抗菌剤においても、合
成抗菌剤にかわる新しいタイプの安全性の高い抗菌剤が
要望されている。また更に、医薬品、飲食品、工業薬品
等各種の用途に広範に使用することができ、また、外用
のみでなく経口投与も可能な新しいタイプの抗菌剤の開
発も要望されている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記した要望
に応える目的でなされたものであって、抗菌力にすぐれ
ているだけでなく、安全性が高く、しかも各種用途に広
範に使用することのできる新しいタイプの天然物由来の
抗菌剤を開発する目的でなされたものである。
に応える目的でなされたものであって、抗菌力にすぐれ
ているだけでなく、安全性が高く、しかも各種用途に広
範に使用することのできる新しいタイプの天然物由来の
抗菌剤を開発する目的でなされたものである。
【０００６】本発明者らは、上記目的を達成するために
各方面から検討の結果、ラクトフェリンに着目した。そ
して本発明者らは、ラクトフェリンが乳中に含まれる安
全な物質であり、そのような物質の加水分解物中から得
られるペプチドも通常の消化作用において生成している
分解物中に存在するものと考えられるので既に安全性が
保証されており、さらに化学的な安定性が優れると予想
されることやアミノ酸配列を明確にすることで多量のペ
プチドを確保し、より明確な抗菌性も期待できるとの観
点にたった。
各方面から検討の結果、ラクトフェリンに着目した。そ
して本発明者らは、ラクトフェリンが乳中に含まれる安
全な物質であり、そのような物質の加水分解物中から得
られるペプチドも通常の消化作用において生成している
分解物中に存在するものと考えられるので既に安全性が
保証されており、さらに化学的な安定性が優れると予想
されることやアミノ酸配列を明確にすることで多量のペ
プチドを確保し、より明確な抗菌性も期待できるとの観
点にたった。
【０００７】そこで本発明者らは、付着阻害による感染
阻止の観点から、ラクトフェリンの各種プロテアーゼに
よる分解物中から抗菌性を持つペプチドの探索を行って
いた過程で、得られたペプチドの精製度が上がるにつれ
て粗精製時には明確でなかった抗菌性を確認できるよう
になり、最終的に配列番号１に示すアミノ酸組成を持つ
新規なペプチドが強い抗菌活性を持つことを確認し、本
発明の新規な抗菌性ペプチドを見出すに至り、この新知
見に基づき更に検討の結果、本発明の完成に成功したも
のである。
阻止の観点から、ラクトフェリンの各種プロテアーゼに
よる分解物中から抗菌性を持つペプチドの探索を行って
いた過程で、得られたペプチドの精製度が上がるにつれ
て粗精製時には明確でなかった抗菌性を確認できるよう
になり、最終的に配列番号１に示すアミノ酸組成を持つ
新規なペプチドが強い抗菌活性を持つことを確認し、本
発明の新規な抗菌性ペプチドを見出すに至り、この新知
見に基づき更に検討の結果、本発明の完成に成功したも
のである。
【０００８】すなわち本発明は、配列表の配列番号１に
示すアミノ酸配列を有するペプチド及び該ペプチドを有
効成分として含有してなる抗菌剤に関するものであり、
該ペプチドには常用される各種塩も広く包含されるもの
である。以下、本発明を具体的に説明する。
示すアミノ酸配列を有するペプチド及び該ペプチドを有
効成分として含有してなる抗菌剤に関するものであり、
該ペプチドには常用される各種塩も広く包含されるもの
である。以下、本発明を具体的に説明する。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の抗菌性ペプチドは、ウシ
ラクトフェリンのペプシン分解物から得られた３〜１０
ｋＤａ画分を陽イオン交換カラムで分画し、その後さら
に陰イオン交換カラムで分画後、最終的に逆相クロマト
グラフィによる精製操作で得ることができる。また、本
発明の抗菌性ペプチドは、ペプチド自動合成装置を用い
て化学的に合成することによって得ることもできる。ま
た本発明のペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子
を利用することによってその遺伝子を組み込んだ微生物
細胞、植物細胞、動物細胞を用いて大量に生産すること
も可能である。
ラクトフェリンのペプシン分解物から得られた３〜１０
ｋＤａ画分を陽イオン交換カラムで分画し、その後さら
に陰イオン交換カラムで分画後、最終的に逆相クロマト
グラフィによる精製操作で得ることができる。また、本
発明の抗菌性ペプチドは、ペプチド自動合成装置を用い
て化学的に合成することによって得ることもできる。ま
た本発明のペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子
を利用することによってその遺伝子を組み込んだ微生物
細胞、植物細胞、動物細胞を用いて大量に生産すること
も可能である。
【００１０】以上のようにして得た本発明の抗菌性ペプ
チドは、各種大腸菌（毒素原性大腸菌ATCC31705、腸管
出血性大腸菌O157;H7 RIMD0509939及びRIMD0509861）、
サルモネラ菌（Salmonella Enteritidis 1891）、リス
テリア菌（Listeria monocytogenes）、エルシニア菌
（Yersinia enterocollitica）に対してｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにおいて強い抗菌活性があることが確認された。また
本ペプチドは毒素原性大腸菌ＡＴＣＣ３１７０５の固定
化ラミニンへの付着を阻害しなかったことからその抗菌
性の本体は付着阻害ではなく殺菌的に各種病原菌に作用
しているものと考えられた。
チドは、各種大腸菌（毒素原性大腸菌ATCC31705、腸管
出血性大腸菌O157;H7 RIMD0509939及びRIMD0509861）、
サルモネラ菌（Salmonella Enteritidis 1891）、リス
テリア菌（Listeria monocytogenes）、エルシニア菌
（Yersinia enterocollitica）に対してｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにおいて強い抗菌活性があることが確認された。また
本ペプチドは毒素原性大腸菌ＡＴＣＣ３１７０５の固定
化ラミニンへの付着を阻害しなかったことからその抗菌
性の本体は付着阻害ではなく殺菌的に各種病原菌に作用
しているものと考えられた。
【００１１】本発明の抗菌性ペプチドとその塩は、ラク
トフェリン分子そのものより加水分解によって既に分解
変成処理を受けている形となっており、耐熱性の向上を
はじめ、より取り扱い易い状態となっている為、目的に
応じ各種の形態で抗菌剤として用いることができる。例
えば、目薬、口中洗浄剤、乳液等の液状、クリーム、軟
膏、歯磨き等のペースト状、固形、粉末、顆粒状の石鹸
等の固体状、あるいは除菌ペーパーやオムツ等への塗り
込み等の形式でも用いることができる。また安全性が高
いことから飲食品、特定保健用飲食品、健康飲料、健康
食品、栄養食品その他各種タイプの飲食品（なお、本発
明において、食品には飲料も包含される）にも用いるこ
とができ、さらに動物用の飼料として給餌の際に飼料中
に本ペプチドを添加混合したり予め飼料中に添加混合し
ておき、これを直接給餌するほか、飲料水に混合したり
して用いることもできる。
トフェリン分子そのものより加水分解によって既に分解
変成処理を受けている形となっており、耐熱性の向上を
はじめ、より取り扱い易い状態となっている為、目的に
応じ各種の形態で抗菌剤として用いることができる。例
えば、目薬、口中洗浄剤、乳液等の液状、クリーム、軟
膏、歯磨き等のペースト状、固形、粉末、顆粒状の石鹸
等の固体状、あるいは除菌ペーパーやオムツ等への塗り
込み等の形式でも用いることができる。また安全性が高
いことから飲食品、特定保健用飲食品、健康飲料、健康
食品、栄養食品その他各種タイプの飲食品（なお、本発
明において、食品には飲料も包含される）にも用いるこ
とができ、さらに動物用の飼料として給餌の際に飼料中
に本ペプチドを添加混合したり予め飼料中に添加混合し
ておき、これを直接給餌するほか、飲料水に混合したり
して用いることもできる。
【００１２】本発明のペプチドは、一般的な微生物の増
殖防止に用いられると共に細菌性疾患に対する治療や予
防用の医薬品として用いることも可能である。本発明の
ペプチドは、毒性は全くないか又は極めて低く、ラット
に対する急性毒性試験では、１日当たり５００ｍｇを経
口投与した場合でも急性毒性はまったく認められず卓越
した安全性を示す。従って、疾患の種類、症状に応じて
本発明の抗菌性ペプチドを任意の投与量、投与方法を用
いることが可能である。
殖防止に用いられると共に細菌性疾患に対する治療や予
防用の医薬品として用いることも可能である。本発明の
ペプチドは、毒性は全くないか又は極めて低く、ラット
に対する急性毒性試験では、１日当たり５００ｍｇを経
口投与した場合でも急性毒性はまったく認められず卓越
した安全性を示す。従って、疾患の種類、症状に応じて
本発明の抗菌性ペプチドを任意の投与量、投与方法を用
いることが可能である。
【００１３】例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
シロップ剤等による経口投与のほか、経腸、経管投与も
選択する事ができる。これらの各種製剤は常法に従って
主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、
溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて
製剤化することができる。その使用量は症状、年齢、体
重、投与方法、剤形等によって異なってくるが成人に対
して１回約０．１ｍｇ乃至１５００ｍｇを投与すること
ができる。また本発明ペプチドは少なくとも経口で投与
した場合には多量に服用しても格別の急性毒性を示さな
いので必要に応じて先の範囲を越えて使用しても差し支
えない。
シロップ剤等による経口投与のほか、経腸、経管投与も
選択する事ができる。これらの各種製剤は常法に従って
主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、
溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて
製剤化することができる。その使用量は症状、年齢、体
重、投与方法、剤形等によって異なってくるが成人に対
して１回約０．１ｍｇ乃至１５００ｍｇを投与すること
ができる。また本発明ペプチドは少なくとも経口で投与
した場合には多量に服用しても格別の急性毒性を示さな
いので必要に応じて先の範囲を越えて使用しても差し支
えない。
【００１４】以下、実施例によって本発明をさらに詳細
に説明する。
に説明する。
【００１５】
【実施例１】ウシラクトフェリンのペプシン分解物から
抗菌性ペプチドを以下のようにして精製した。
抗菌性ペプチドを以下のようにして精製した。
【００１６】ウシラクトフェリン（Ｗａｋｏ）を０．１
Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．２）に対して透析し、脱鉄
してからペプシン（Ｗａｋｏ、１６９−０５７４２、ｐ
Ｈ２．０、３７℃、４時間）で加水分解処理を行った
後、８０℃、３０分間の加熱を行い、酵素を失活させ
た。このペプシン分解物を限外ろ過膜（セントリプラ
ス、Ａｍｉｃｏｎ）を用い、分画分子量１０，０００以
下から３，０００以上を集めた。
Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．２）に対して透析し、脱鉄
してからペプシン（Ｗａｋｏ、１６９−０５７４２、ｐ
Ｈ２．０、３７℃、４時間）で加水分解処理を行った
後、８０℃、３０分間の加熱を行い、酵素を失活させ
た。このペプシン分解物を限外ろ過膜（セントリプラ
ス、Ａｍｉｃｏｎ）を用い、分画分子量１０，０００以
下から３，０００以上を集めた。
【００１７】この画分を、陽イオン交換カラム（Waters
Protein-Pak SP）で２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
ｐＨ７．０を溶離液として用い、０Ｍ（１０分）→１．
０Ｍ塩化ナトリウム（３０分）の直線濃度勾配法（流速
０．５ｍｌ／ｍｉｎ）で分画した（図１）。図１の画分
Ｉを陰イオン交換カラム（Waters Protein-Pak Q）で２
０ｍＭトリス塩酸緩衝液を溶離液として用い、０Ｍ（１
０分）→１．０Ｍ塩化ナトリウム（３０分）の直線濃度
勾配法（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ）で分画した（図
２）。さらに図２の画分ＩをＣ４カラムによる逆相クロ
マトで精製し、ピーク画分を得た。この場合、１０％ア
セトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０
分→６０％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ３０分の直
線濃度勾配法（流速１ｍｌ／ｍｉｎ）で精製した。この
画分は、Ｃ４、Ｃ１８カラムによる分析で単一ピークを
示した（Ｃ１８カラム例：図３）。
Protein-Pak SP）で２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
ｐＨ７．０を溶離液として用い、０Ｍ（１０分）→１．
０Ｍ塩化ナトリウム（３０分）の直線濃度勾配法（流速
０．５ｍｌ／ｍｉｎ）で分画した（図１）。図１の画分
Ｉを陰イオン交換カラム（Waters Protein-Pak Q）で２
０ｍＭトリス塩酸緩衝液を溶離液として用い、０Ｍ（１
０分）→１．０Ｍ塩化ナトリウム（３０分）の直線濃度
勾配法（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ）で分画した（図
２）。さらに図２の画分ＩをＣ４カラムによる逆相クロ
マトで精製し、ピーク画分を得た。この場合、１０％ア
セトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０
分→６０％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ３０分の直
線濃度勾配法（流速１ｍｌ／ｍｉｎ）で精製した。この
画分は、Ｃ４、Ｃ１８カラムによる分析で単一ピークを
示した（Ｃ１８カラム例：図３）。
【００１８】このペプチドのＮ末端アミノ酸配列分析と
液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）による分
子量分析から、今回得られたペプチドはウシラクトフェ
リンのアミノ酸４８７残基と５２９残基間のペプチド
（以下、ＢＬｆ４８７−５２９）に相当する新規なペプ
チドであることが判明した。このペプチド（ＢＬｆ４８
７−５２９）は、従来未知の新規ペプチドであり、下記
からも明らかなようにすぐれた抗菌性を有することが確
認された。
液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）による分
子量分析から、今回得られたペプチドはウシラクトフェ
リンのアミノ酸４８７残基と５２９残基間のペプチド
（以下、ＢＬｆ４８７−５２９）に相当する新規なペプ
チドであることが判明した。このペプチド（ＢＬｆ４８
７−５２９）は、従来未知の新規ペプチドであり、下記
からも明らかなようにすぐれた抗菌性を有することが確
認された。
【００１９】
【実施例２】上記で得たペプチド（ＢＬｆ４８７−５２
９）の抗菌活性を以下により確認した。
９）の抗菌活性を以下により確認した。
【００２０】毒素原性大腸菌（Escherichia coli ATCC
31705）の培養と生菌数の測定には、ＣＦＡ ａｇａｒ
を用いた。サルモネラ菌(Salumonella Enteritidis 189
1)、リステリア菌（Listeria monocytogenes IID 57
7）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７（Escherichia coli RI
MD 0509939およびRIMD 0509861）そしてエルシニア菌
（Yersinia enterocollitica YE 98013）の培養と生菌
数の測定には、ＢＨＩ ｂｒｏｔｈおよびＢＨＩ ａｇ
ａｒを用いた。ＡＴＣＣ株は、American Type Culture
Collection (Rockville, USA）から、そしてＩＩＤ株
は、大阪大学微生物病研究所菌株保存施設からそれぞれ
入手した。
31705）の培養と生菌数の測定には、ＣＦＡ ａｇａｒ
を用いた。サルモネラ菌(Salumonella Enteritidis 189
1)、リステリア菌（Listeria monocytogenes IID 57
7）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７（Escherichia coli RI
MD 0509939およびRIMD 0509861）そしてエルシニア菌
（Yersinia enterocollitica YE 98013）の培養と生菌
数の測定には、ＢＨＩ ｂｒｏｔｈおよびＢＨＩ ａｇ
ａｒを用いた。ＡＴＣＣ株は、American Type Culture
Collection (Rockville, USA）から、そしてＩＩＤ株
は、大阪大学微生物病研究所菌株保存施設からそれぞれ
入手した。
【００２１】０．０３６％のＢＬｆ４８７−５２９水溶
液と約４×１０2／ｍｌの各菌懸濁液を３７℃で２４時
間培養後、生菌数を平板培養法により測定した。得られ
た結果を表１に示す。その結果から明らかなように、本
発明ペプチド無添加の場合、各菌の菌数は約１０9／ｍ
ｌまで増加したが、ＢＬｆ４８７−５２９ペプチドを添
加した場合には、各菌の増殖は完全に抑制された。毒素
原性大腸菌ＡＴＣＣ３１７０５では静菌的に、他の病原
菌に対しては殺菌的に作用した。
液と約４×１０2／ｍｌの各菌懸濁液を３７℃で２４時
間培養後、生菌数を平板培養法により測定した。得られ
た結果を表１に示す。その結果から明らかなように、本
発明ペプチド無添加の場合、各菌の菌数は約１０9／ｍ
ｌまで増加したが、ＢＬｆ４８７−５２９ペプチドを添
加した場合には、各菌の増殖は完全に抑制された。毒素
原性大腸菌ＡＴＣＣ３１７０５では静菌的に、他の病原
菌に対しては殺菌的に作用した。
【００２２】病原菌としては、以下の各菌を用いた。
（Ａ） Escherichia coli ATCC 31705毒素原性大腸菌
（Ｂ） Escherichia coli RIMD 0509939 O157;H7
（Ｃ） Escherichia coli RIMD 0509861 O157;H7
（Ｄ） Salmonella Enteritidis 1891
（Ｅ） Listeria monocytogenes IID 577
（Ｆ） Yersinia enterocollitica YE 98013
【００２３】
（表１）
病原菌 接種菌数 ２４時間培養後の菌数
(実測値) 無 添 加 BLf 487-529添加
（Ａ） 5.8×102/ml 2.6×109/ml 5.8×102/ml
（Ｂ） 7.8×102/ml 6.6×108/ml ＜3.3×10/ml
（Ｃ） 6.3×102/ml 1.6×109/ml ＜3.3×10/ml
（Ｄ） 4.3×102/ml 7.6×108/ml ＜3.3×10/ml
（Ｅ） 4.1×102/ml 3.0×108/ml ＜3.3×10/ml
（Ｆ） 1.0×103/ml 2.0×108/ml ＜3.3×10/ml
【００２４】
【実施例３】
（１）ＢＬｆ４８７−５２９ペプチド（凍結乾燥品） ５０ｇ
（２）ラクトース ９０ｇ
（３）コーンスターチ ２９ｇ
（４）ステアリン酸マグネシウム １ｇ
【００２５】（１）、（２）全量と（３）１７ｇとを混
合し、（３）７ｇから調製したペーストと共に顆粒化し
た。得られた顆粒に（３）の残量５ｇと（４）全量を加
えてよく混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮し
て、１錠あたり本発明ペプチドＢＬｆ４８７−５２９を
５０ｍｇ含有する錠剤１，０００個を製造した。投与量
は、患者の症状、年齢によっても異なるが、０．１〜
１，５００ｍｇ／Ｋｇ／Ｄａｙ、好ましくは１〜５０ｍ
ｇ／Ｋｇ／Ｄａｙである。
合し、（３）７ｇから調製したペーストと共に顆粒化し
た。得られた顆粒に（３）の残量５ｇと（４）全量を加
えてよく混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮し
て、１錠あたり本発明ペプチドＢＬｆ４８７−５２９を
５０ｍｇ含有する錠剤１，０００個を製造した。投与量
は、患者の症状、年齢によっても異なるが、０．１〜
１，５００ｍｇ／Ｋｇ／Ｄａｙ、好ましくは１〜５０ｍ
ｇ／Ｋｇ／Ｄａｙである。
【００２６】
【発明の効果】以上、詳述した通り、本発明の新規な抗
菌性ペプチドは各種の病原性微生物に対して強い抗菌活
性を示し、また天然物由来であるため薬剤としての安全
性に優れ、また酵素分解、加熱処理等を経た上で調製さ
れることから加工安定性、保存性にも優れている等、種
々の用途に応用可能な新規な抗菌剤として有望である。
菌性ペプチドは各種の病原性微生物に対して強い抗菌活
性を示し、また天然物由来であるため薬剤としての安全
性に優れ、また酵素分解、加熱処理等を経た上で調製さ
れることから加工安定性、保存性にも優れている等、種
々の用途に応用可能な新規な抗菌剤として有望である。
【００２７】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
＜110＞ Meiji Milk Products Co., Ltd.
＜120＞ Antifungal Peptide
＜130＞ 6166
＜141＞ 1999-5-14
＜160＞ 1
＜210＞ 1
＜211＞ 43
＜212＞ PRT
＜212＞ Artificial Sequence
＜400＞ 1
Phe Ser Gln Ser Cys Ala Pro Gly Ala Asp Pro Lys Ser Arg Leu
5 10 15
Cys Ala Leu Cys Ala Gly Asp Asp Gln Gly Leu Asp Lys Cys Val
20 25 30
Pro Asn Ser Lys Glu Lys Tyr Tyr Gly Tyr Thr Gly Ala
35 40
【図１】ウシラクトフェリンペプシン分解物（分子量３
Ｋ・１０Ｋ画分）の陽イオン交換カラムによる分画パタ
ーンを示す。図中、画分Ｉに本発明ペプチドが含まれ
る。
Ｋ・１０Ｋ画分）の陽イオン交換カラムによる分画パタ
ーンを示す。図中、画分Ｉに本発明ペプチドが含まれ
る。
【図２】図１の画分Ｉの陰イオン交換カラムによる分画
パターンを示す。図中、画分Ｉに本発明ペプチドが含ま
れる。
パターンを示す。図中、画分Ｉに本発明ペプチドが含ま
れる。
【図３】図２の画分ＩをＣ４カラムによる逆相クロマト
で精製後、その精製度をＣ１８カラムで確認した結果で
ある。ほぼ単一のピークを示す。
で精製後、その精製度をＣ１８カラムで確認した結果で
ある。ほぼ単一のピークを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
// Ｃ１２Ｐ 21/06 Ａ６１Ｋ 37/18
(56)参考文献 特開 平５−92994（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−238948（ＪＰ，Ａ)
特開 平８−291198（ＪＰ，Ａ)
特開 平７−300425（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 14/79
A01N 63/00
A61K 38/00 - 38/58
A61P 31/04
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】 配列番号１のアミノ酸配列で示されるペ
プチド又はその塩。 - 【請求項２】 配列番号１のアミノ酸配列で示されるペ
プチド又はその塩を有効成分として含有することを特徴
とする抗菌剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13455299A JP3488133B2 (ja) | 1999-05-14 | 1999-05-14 | 抗菌性ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13455299A JP3488133B2 (ja) | 1999-05-14 | 1999-05-14 | 抗菌性ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000319300A JP2000319300A (ja) | 2000-11-21 |
| JP3488133B2 true JP3488133B2 (ja) | 2004-01-19 |
Family
ID=15130997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13455299A Expired - Lifetime JP3488133B2 (ja) | 1999-05-14 | 1999-05-14 | 抗菌性ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3488133B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
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|---|---|---|---|---|
| WO2008114577A2 (ja) * | 2007-02-26 | 2008-09-25 | National University Corporation NARA Institute of Science and Technology | 抗菌性ペプチド |
| KR101167481B1 (ko) | 2010-05-07 | 2012-07-27 | 한경대학교 산학협력단 | 젖소락토페린 분해물 유래 항균 펩타이드를 포함하는 항균 조성물 |
| ITRM20110606A1 (it) * | 2011-11-16 | 2013-05-17 | Ist Superiore Sanita | Peptidi della lattoferrina per lo uso come inibitori ad ampio spettro dellainfezione da virus della influenza. |
| CN111072770B (zh) * | 2019-12-20 | 2021-11-09 | 华中农业大学 | 卵转铁蛋白抗菌肽及其制备方法 |
-
1999
- 1999-05-14 JP JP13455299A patent/JP3488133B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000319300A (ja) | 2000-11-21 |
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