JP3485025B2 - ヌクレオチド誘導体 - Google Patents
ヌクレオチド誘導体Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規なヌクレオチド
誘導体に関するものであり、該ヌクレオチド誘導体は、
例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造中間原
料として有機合成化学、生化学および医薬産業上、有用
な化合物である。 【０００２】 【従来の技術】従来のオリゴデオキシリボヌクレオチド
およびオリゴリボヌクレオチドの合成に関しては、固相
合成法が採用されている。この方法に従えば、ヌクレオ
シドの３’−水酸基を多孔質ガラスなどの不溶性担体上
に固定した出発物質を用い、オリゴヌクレオチド鎖を
３’末端から５’末端方向に１塩基ずつ伸長していくの
が一般的である。このために任意の配列のオリゴヌクレ
オチドの合成が可能となる（ケスターら，特開昭６２−
５０４７９号公報、カルザースら，特開昭６３−２８４
３９号公報を参照）。しかしながら、上記の方法では、
すべての工程が逐次反応によって構成されているため、
どの工程も反応収率１００％か限りなくそれに近く進行
しなければ、目的の配列を有するオリゴヌクレオチドは
得られないという点が問題である。特に、ヌクレオチド
鎖伸長工程であるリン酸化反応工程（縮合反応）は、現
在の最高レベルをもってしても、各伸長反応毎の収率が
９８．５〜９９．５％であって、この反応収率の高低
が、目的とする配列を有するオリゴヌクレオチドの全収
率を決定する要因となっている。最近、全収率を向上さ
せる方策として、縮合回数を減らすことの出来る２量体
ヌクレオチドを、ヌクレオチド鎖を構築する際のビルデ
ィングブロックとした合成法が有効という報告がある
｛クロッツら，バイオオルガニックアンドメディシナル
ケミストリーレターズ（Bioorg. Med. Chem. Let
t.,），1997，7，73-78.｝。また、２量体以上をビルデ
ィングブロックとしたオリゴヌクレオチドの化学合成法
も提案されている（例えば、総説として日本化学会編,
「核酸の化学と分子生物学−化学総説４６」, 学会出版
センター, 1985, pp. 209-240.など）。しかしながら、
これらのビルディングブロックは水酸基の保護・脱保護
及びリン酸化という一連の工程が非常に複雑であり、し
かも各工程で副生物や不純物を除去するために、抽出や
クロマトグラフィーなどの操作が必要となり、操作上の
繁雑さを招くだけでなく、ビルディングブロックを合成
するためのコストを高くしている。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、オリ
ゴヌクレオチドの製造において、抽出やクロマトグラフ
ィーなどの操作の繁雑さがなく、新規なビルディングブ
ロックとなるヌクレオチド誘導体を提供することであ
る。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意検討を行った結果、２量体ヌクレオチ
ド化合物を構成する核酸塩基の保護基部分にポリエチレ
ングリコール鎖を導入した場合、その入手が容易になる
だけでなく、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造に
利用できることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記式（１）で表されるヌクレオ
チド誘導体である。 【０００５】 【化３】 【０００６】（式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子、ヘテロ
原子を含んでいてもよいアルキル基、シクロアルキル
基、アリール基もしくはアラルキル基を示し、Ｒ1とＲ2
は同一であっても異なっていても良く、Ｒ3およびＲ4は
水素原子またはヌクレオチド化学において通常用いられ
る保護基を示し、Ｒ5およびＲ6は水素原子、水酸基、ア
ルコキシ基またはトリアルキルシリルオキシ基を示し、
Ｘは酸素原子または硫黄原子、Ｂ1およびＢ2はヌクレオ
チド化学において通常の保護基で保護した塩基または下
記式（２）で表されるＢ’を示し、Ｂ1およびＢ2のうち
少なくとも１つはＢ’である。ただし、Ｒ1およびＲ2の
いずれもが水素原子、メチル基またはエチル基である場
合を除く） 【０００７】 Ｂ’＝−Ｂ”−Ｃ（＝Ｏ）−Ａ−（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯＣＨ3 （２） 【０００８】（式中、Ｂ”は下記式（３）で示されるい
ずれかの基を示し、ｎは３以上の整数、Ａは２価基でア
リレン基、もしくはヘテロ原子を含んでも良い直鎖ある
いは分岐鎖を含むアルキレン基をそれぞれ示す。） 【０００９】 【化４】 【００１０】 【発明の実施の形態】本発明におけるヌクレオチド誘導
体は、核酸塩基のアミノ基またはイミノ基の保護基とし
て、ポリエチレングリコール鎖を含む化合物であり、前
記式（１）で表される化合物である。式（１）におい
て、Ｒ1およびＲ2としては水素原子、メチル基、イソプ
ロピル基、ターシャリーブチル基および１，１−ジエチ
ル−３−ブテニル基などが挙げられ（ただし、Ｒ1およ
びＲ2のいずれもが水素原子、メチル基またはエチル基
の場合を除く）、Ｒ3およびＲ4としては水素原子、４，
４’−ジメトキシトリチル基、アセチル基、ベンゾイル
基、トリメチルシリル基およびターシャリーブチルジメ
チルシリル基が挙げられ、Ｒ5およびＲ6としては水素原
子、メトキシ基、ターシャリーブチルジメチルシリルオ
キシ基および水酸基が挙げられ、Ｘとしては酸素原子お
よび硫黄原子が挙げられる。またＢ1およびＢ2はヌクレ
オチド化学において通常の保護基で保護した塩基、例え
ば、１−（Ｎ−４−ベンゾイルシトシニル）基、９−
（Ｎ−６−ベンゾイルアデニニル）基、９−（Ｎ−２−
イソブチリルグアニニル）基、１−チミニル基、１−ウ
ラニル基および前記式（２）で表されるＢ’が挙げら
れ、Ｂ1、Ｂ2のうち少なくとも１つはＢ’である。 【００１１】前記ヌクレオチド誘導体は下記式（４）で
表されるヌクレオシドを亜リン酸化し、さらに、得られ
た亜リン酸トリエステルを酸化もしくは硫化することに
よって得られる。 【００１２】 【化５】 【００１３】（式中、Ｂ”、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ａおよび
ｎは前記式（１）と同じ） 【００１４】上記亜リン酸化の方法は、先に取り上げた
ケスターやカルザースらの方法を用いることもできる
し、本発明者らの別の報告による方法（北村ら、特願平
１０−３６７３８４）も利用できる。例えば、前記式
（４）で表される５’−Ｏ,塩基保護−ヌクレオシド
（例えば、Ｒ3が４，４’−ジメトキシトリチル、Ｒ4お
よびＲ5が水素原子の化合物）を減圧乾燥するか、ある
いはピリジンもしくは１，４−ジオキサン等の有機溶媒
に溶解してから共沸脱水した後、トルエン、ピリジン、
テトラヒドロフラン、クロロホルムまたはアセトニトリ
ル等の有機溶媒溶液中、０．９〜１．２当量のオルガノ
オキシビスアゾリルホスフィン｛例えば、２−シアノ−
１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビス
イミダゾリルホスフィン｝を−８０℃〜室温の条件で反
応させることにより、下記式（５）で表されるホスホル
モノアゾリド化合物が得られる。この反応は低温で行な
った方が、目的のホスホルモノアゾリド化合物の収率は
良い。また、有機溶媒は乾燥剤で乾燥後、蒸留精製した
ものを用いた方が良い。この反応溶液の31P ＮＭＲスペ
クトルを測定して反応が完了したことを確認すれば良
い。 【００１５】 【化６】 【００１６】（式中、Ｂ、Ｒ１〜Ｒ４、Ａおよびｎは前
記式（１）と同じであり、Ｘはを示す） 【００１７】上記で得られたホスホルモノアゾリド化合
物は、分離・精製すること無く、次の反応に用いること
ができ、オルガノオキシビスアゾリルホスフィンに対し
て０．８〜１．２当量の、少なくとも核酸塩基だけは適
当に保護されたヌクレオシドを、別に減圧乾燥するか共
沸操作をした後、トルエン、ピリジン、テトラヒドロフ
ラン、クロロホルムまたはアセトニトリル等の有機溶媒
の溶液として、−８０℃〜室温の条件で、上記で得られ
た反応溶液に混合し反応させることにより２量化反応は
達成される。この場合、第２番目のヌクレオシドの３’
水酸基は、必ずしも保護されている必要はない。 【００１８】次に、オルガノオキシビスアゾリルホスフ
ィンに対して１．５〜１０当量の、別に減圧乾燥させて
おいた硫黄粉末を、2量化反応の進行が確認された上記
反応溶液に加え、０℃〜室温条件下、２時間〜１２時間
硫化反応を行なうことで、本発明におけるヌクレオシド
誘導体（Ｘは硫黄原子）であるチオリン酸トリエステル
が生成する。得られたチオリン酸トリエステルは室温以
下であれば、空気中で取り扱うことができ、例えば、反
応溶液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
に供すれば、容易にその高純度品を得ることができる。 【００１９】上記のヌクレオチド誘導体の合成反応は、
核酸塩基に結合しているポリエチレングリコール鎖とは
直接的には関係が無い。例えば、上記反応においてオル
ガノオキシビスアゾリルホスフィンに対して０．８〜
１．２当量の、核酸塩基の保護基部分にポリエチレング
リコール鎖を有するヌクレオシド化合物｛前記式（４）
においてＲ3、Ｒ4、Ｒ5がいずれも水素原子のもの｝を
用いて２量化反応を実施すれば、２つの核酸塩基の双方
にポリエチレングリコール鎖が導入された２量体を得る
こともできる。また、最初の亜リン酸化反応を通常のヌ
クレオチド化学で用いられる５’−Ｏ,塩基保護−ヌク
レオシドに対して実施し（北村ら、特願平１０−３６７
３８４号公報参照）、第２番目のヌクレオシドとして核
酸塩基の保護基部分にポリエチレングリコール鎖を有す
るヌクレオシド化合物｛前記式（４）においてＲ3、
Ｒ4、Ｒ5がいずれも水素原子のもの｝を用いれば、３’
末端側の核酸塩基にのみポリエチレングリコール鎖が導
入された２量体が得ることができる。 【００２０】本願発明におけるヌクレオチド誘導体は、
エーテル類には難溶であり、例えば、ヌクレオチド誘導
体を含むクロロホルム溶液をジエチルエーテル中に加え
ると、このヌクレオチド誘導体は白色固体として沈澱す
る。また、２−プロパノールによる再結晶を試みても、
白色固体として沈澱する。従って、ヌクレオチド誘導体
は容易に回収することができる。ゆえに、ポリエチレン
グリコール鎖を有しない通常の保護ヌクレオチドを利用
して２量体成分を得るときに必要であった分離・精製操
作の大半は、本願発明におけるヌクレオチド誘導体にお
いては不要となる。さらに、ヌクレオチド誘導体は、ア
セトニトリル、テトラヒドロフラン、ピリジンおよび有
機塩素系溶媒に可溶であり、これらポリエチレングリコ
ールに対する良溶媒中、適当に保護された第３番目以降
のヌクレオシ（チ）ドを反応させることにより、配列が
明らかな多量体を得ることができる。 【００２１】 【実施例】以下、実施例により本発明について詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。 （合成例１） ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシビスイミダゾリルホスフィンの合成 ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシジクロロホスフィン（３５０ｍｇ，１．２５ｍ
ｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気
下、室温の条件で、トリメチルシリルイミダゾール
（０．４０ｍｌ，２．７５ｍｍｏｌ）を加え５分間反応
させた。副生したクロロトリメチルシランおよびトルエ
ンを室温で１０分間減圧留去した後、残留トルエンおよ
び過剰のトリメチルシリルイミダゾールを３５℃の条件
で2時間減圧留去し、無色透明、油状の２−シアノ−１
−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビスイ
ミダゾリルホスフィン（Ｖ）を得た。得られた化合物の
31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3
Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１０９．
３であった。 【００２２】（合成例２） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物の合成 合成例１で得られた２−シアノ−１−（１，１−ジエチ
ル−３−ブテニル）エトキシビスイミダゾリルホスフィ
ンを（重）クロロホルム（２．５ｍｌ）に溶解させて
０．５０Ｍ溶液とし、アルゴン雰囲気下、室温で２時間
減圧乾燥させた５’−Ｏ−（４，４−ジメトキシトリチ
ル）−２’−デオキシシチジン−Ｎ−ポリエチレングリ
コール誘導体（ポリエチレングリコールの数平均分子量
（Ｍｎ）３５０，前記式（４）においてＢ”＝シトシン
誘導体，Ｒ4＝４，４−ジメトキシトリチル基、Ｒ4＝Ｒ
5＝水素原子、Ａ＝フェニレン基のもの、１．２０ｇ、
１．２５ｍｍｏｌ）に室温で加えた。均一になった後、
そのまま一晩静置して反応させ、目的のホスホルアゾリ
ド化合物を得た。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６
１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐ
ｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１３４．３，１３１．５，１
３０．８，１２７．４であった。 【００２３】（合成例３） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣｐＣ前駆体の合
成） 上記合成例２で得られたのホスホルアゾリド化合物（in
situ DNA合成試薬）の（重）クロロホルム反応溶液
（２．０ｍｌ，約１ｍｍｏｌ）に、５’−Ｏ，塩基保護
−２’−デオキシシチジン−ポリエチレングリコール誘
導体（ポリエチレングリコールの数平均分子量（Ｍｎ）
３５０，前記式（４）においてＢ”＝シトシン誘導体，
Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝水素，Ａ＝フェニレン基のもの，６５
０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）の重クロロホルム溶液（２ｍｌ）
をアルゴン雰囲気下、０℃で加え、そのまま一晩４℃で
静置して反応させ、２量体を得た。この時の第２番目の
ヌクレオシドの水酸基の反応選択性は、31Ｐ ＮＭＲに
よると５’水酸基／３’水酸基＝９２／８であった。得
られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部
標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝１４１．７，１４１．０，１４０．８，１４
０．４であった。上記で得られた２量化反応溶液の一部
（２ｍｌ，総重量２．９５ｇ，約０．５ｍｍｏｌ）を測
り取り、これを無水ジエチルエーテル（３０ｍｌ）に攪
拌しながら加えると、２〜５分で白色の固体が析出し
た。更に１０分間激しく攪拌した後、４℃で一晩放置し
た。デカンテーションしてエーテルを除去し、残査は無
水エーテル（５ｍｌ）で３回洗浄した。この残査を減圧
乾燥し、31Ｐ ＮＭＲを測定した結果、上記に示したス
ペクトルと同様であり、目的とした２量体が回収された
ことが確認できた（８８２mg，回収率８８％）。 【００２４】（実施例１） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣpsＡ保護体の合
成） 上記合成例２で得られたホスホルアゾリド化合物（in s
itu ＤＮＡ合成試薬）のクロロホルム反応溶液（５ｍ
ｌ，約２．５ｍｍｏｌ）に、Ｎ−ベンゾイル−２’−デ
オキシアデノシン（８９０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）のク
ロロホルム／ピリジン混合溶液（１／２（ｖ／ｖ），５
ｍｌ）をアルゴン雰囲気下、０℃で加え、そのまま一晩
４℃で静置して反応させ２量化させた。この反応溶液
に、室温条件下、予め別に３時間以上減圧乾燥させてお
いた硫黄粉末（１６０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を投入し、更
に１２時間攪拌した。溶媒を室温以下の温度で減圧留去
し、残査をクロロホルム（２０ｍｌ）に再溶解し、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタ
ノール＝１００／３）で精製すると、目的とする２量体
（チオリン酸トリエステル）が得られた（３．４３ｇ，
収率８８％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６
１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０pp
m，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６６．３，６６．０，６５．６
であった。得られた２量体（ＣpsＡ保護体）を１．０ｇ
秤取り、クロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、これにジエ
チルエーテル（５０ｍｌ）を攪拌しながら加えると、白
色の固体が析出した。４℃で一晩放置したのち、デカン
テーションしてエーテルを除去し、残査はエーテル（５
ｍｌ）で３回洗浄した。この残査を減圧乾燥し、31ＰＮ
ＭＲを測定した結果、スペクトルは上記のものと同様で
あり、２量体が回収されたことが確認できた（０．９７
g，回収率９７％）。また同様に２量体を１．３０ｇ秤
取り、２−プロパノール（４０ｍｌ）を加えて５０〜５
５℃に加温して一旦均一溶液とした後に４℃で一晩放置
すると、上記と同じく白色固体が得られた（１．０４
ｇ，回収率８０％）。 【００２５】（実施例２） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣpsＧ保護体の合
成） Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシンの代わり
に、Ｎ−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン（８
９０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）のクロロホルム／ピリジン
混合溶液（１／２（ｖ／ｖ），５ｍｌ）を用いた以外
は、実施例１と同様に反応を行ない、目的とする２量体
（チオリン酸トリエステル）を得た（３．１５ｇ，収率
８１％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９
ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ppm，ＣＤ
Ｃｌ3）は、δ＝６６．６，６６．２，６５．８，６
５．４であった。 【００２６】（実施例３） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物の２量体の合成（ＡpsＣ保護体の合成） ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシジクロロホスフィン（５７０ｍｇ，２．０２ｍ
ｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気
下、室温の条件で、トリメチルシリルイミダゾール
（０．６５ｍｌ，４．４４ｍｍｏｌ）を加え５分間反応
させた。副生したクロロトリメチルシランおよびトルエ
ンを室温で１０分間減圧留去した後、残留トルエンおよ
び過剰のトリメチルシリルイミダゾールを３５℃の条件
で2時間減圧留去し、無色透明、油状の２−シアノ−１
−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビスイ
ミダゾリルホスフィンを得た。これを無水クロロホルム
（４．０ｍｌ）に溶解させて０．５０Ｍ溶液とし、アル
ゴン雰囲気下、室温の条件で、室温で２時間減圧乾燥し
たＮ−６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４−ジメトキ
シトリチル）−２’−デオキシアデノシン（１．３９
ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）に加えた。反応液は均一とな
り、そのまま一晩４℃で静置して反応させ、ホスホルア
ゾリド化合物（in situ ＤＮＡ合成試薬）を調製した。
この反応溶液を、１，４−ジオキサンで共沸処理した
５’−Ｏ，塩基保護−２’−デオキシシチジン−ポリエ
チレングリコール誘導体（ポリエチレングリコールの数
平均分子量（Ｍｎ）３５０，前記式（４）においてＢ”
＝シトシン誘導体，Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝水素，Ａ＝フェニ
レン基のもの，１．６ｇ，２．４ｍｍｏｌ）に０℃で加
え、そのまま一晩４℃で静置し２量化させ、亜リン酸ト
リエステルを得た。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１
６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐ
ｐｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１４２．８，１４２．６，
１４２．０，１４０．６であった。更に、室温条件下、
予め別に３時間以上減圧乾燥させておいた硫黄粉末（１
６０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を投入し、１２時間攪拌した。
溶媒を室温以下の温度で減圧留去し、残査をクロロホル
ム（２０ｍｌ）に再溶解し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／３）
で精製すると、目的とする２量体（チオリン酸トリエス
テル）が得られた（３．１６ｇ，ジクロロホスフィンか
らの通算収率７０％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ
（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４
０ppm，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６６．５，６６．５，６
５．８，６５．６であった。さらに、上記で得られたチ
オリン酸トリエステルを、トリクロロ酢酸のクロロホル
ム・メタノール溶液（９／１（ｖ／ｖ），３％）中で、
室温下、３０分処理すると、リン酸部分を損なうこと無
く、脱トリチル化反応が完了した。得られた化合物の31
Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ
3Ｏ）3Ｐ＝１４０ppm，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６７．０，
６６．７，６６．２であった。 【００２７】 【発明の効果】本発明のヌクレオチド誘導体は、オリゴ
ヌクレオチドの製造において、ヌクレオチド鎖を構築す
る際の出発原料として、あるいは鎖長を伸長する基本構
成単位（ビルディングブロック）として利用できる。こ
れを利用して調製する多量体は、ポリエチレングリコー
ルの性質を利用して分離・精製することが可能で、従来
法のそれと比較すると生成物の取り扱いが極めて容易と
なる。従って、本発明のヌクレオチド誘導体は多量体ビ
ルディングブロックの調製に対して極めて有用である。
誘導体に関するものであり、該ヌクレオチド誘導体は、
例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造中間原
料として有機合成化学、生化学および医薬産業上、有用
な化合物である。 【０００２】 【従来の技術】従来のオリゴデオキシリボヌクレオチド
およびオリゴリボヌクレオチドの合成に関しては、固相
合成法が採用されている。この方法に従えば、ヌクレオ
シドの３’−水酸基を多孔質ガラスなどの不溶性担体上
に固定した出発物質を用い、オリゴヌクレオチド鎖を
３’末端から５’末端方向に１塩基ずつ伸長していくの
が一般的である。このために任意の配列のオリゴヌクレ
オチドの合成が可能となる（ケスターら，特開昭６２−
５０４７９号公報、カルザースら，特開昭６３−２８４
３９号公報を参照）。しかしながら、上記の方法では、
すべての工程が逐次反応によって構成されているため、
どの工程も反応収率１００％か限りなくそれに近く進行
しなければ、目的の配列を有するオリゴヌクレオチドは
得られないという点が問題である。特に、ヌクレオチド
鎖伸長工程であるリン酸化反応工程（縮合反応）は、現
在の最高レベルをもってしても、各伸長反応毎の収率が
９８．５〜９９．５％であって、この反応収率の高低
が、目的とする配列を有するオリゴヌクレオチドの全収
率を決定する要因となっている。最近、全収率を向上さ
せる方策として、縮合回数を減らすことの出来る２量体
ヌクレオチドを、ヌクレオチド鎖を構築する際のビルデ
ィングブロックとした合成法が有効という報告がある
｛クロッツら，バイオオルガニックアンドメディシナル
ケミストリーレターズ（Bioorg. Med. Chem. Let
t.,），1997，7，73-78.｝。また、２量体以上をビルデ
ィングブロックとしたオリゴヌクレオチドの化学合成法
も提案されている（例えば、総説として日本化学会編,
「核酸の化学と分子生物学−化学総説４６」, 学会出版
センター, 1985, pp. 209-240.など）。しかしながら、
これらのビルディングブロックは水酸基の保護・脱保護
及びリン酸化という一連の工程が非常に複雑であり、し
かも各工程で副生物や不純物を除去するために、抽出や
クロマトグラフィーなどの操作が必要となり、操作上の
繁雑さを招くだけでなく、ビルディングブロックを合成
するためのコストを高くしている。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、オリ
ゴヌクレオチドの製造において、抽出やクロマトグラフ
ィーなどの操作の繁雑さがなく、新規なビルディングブ
ロックとなるヌクレオチド誘導体を提供することであ
る。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意検討を行った結果、２量体ヌクレオチ
ド化合物を構成する核酸塩基の保護基部分にポリエチレ
ングリコール鎖を導入した場合、その入手が容易になる
だけでなく、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造に
利用できることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記式（１）で表されるヌクレオ
チド誘導体である。 【０００５】 【化３】 【０００６】（式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子、ヘテロ
原子を含んでいてもよいアルキル基、シクロアルキル
基、アリール基もしくはアラルキル基を示し、Ｒ1とＲ2
は同一であっても異なっていても良く、Ｒ3およびＲ4は
水素原子またはヌクレオチド化学において通常用いられ
る保護基を示し、Ｒ5およびＲ6は水素原子、水酸基、ア
ルコキシ基またはトリアルキルシリルオキシ基を示し、
Ｘは酸素原子または硫黄原子、Ｂ1およびＢ2はヌクレオ
チド化学において通常の保護基で保護した塩基または下
記式（２）で表されるＢ’を示し、Ｂ1およびＢ2のうち
少なくとも１つはＢ’である。ただし、Ｒ1およびＲ2の
いずれもが水素原子、メチル基またはエチル基である場
合を除く） 【０００７】 Ｂ’＝−Ｂ”−Ｃ（＝Ｏ）−Ａ−（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯＣＨ3 （２） 【０００８】（式中、Ｂ”は下記式（３）で示されるい
ずれかの基を示し、ｎは３以上の整数、Ａは２価基でア
リレン基、もしくはヘテロ原子を含んでも良い直鎖ある
いは分岐鎖を含むアルキレン基をそれぞれ示す。） 【０００９】 【化４】 【００１０】 【発明の実施の形態】本発明におけるヌクレオチド誘導
体は、核酸塩基のアミノ基またはイミノ基の保護基とし
て、ポリエチレングリコール鎖を含む化合物であり、前
記式（１）で表される化合物である。式（１）におい
て、Ｒ1およびＲ2としては水素原子、メチル基、イソプ
ロピル基、ターシャリーブチル基および１，１−ジエチ
ル−３−ブテニル基などが挙げられ（ただし、Ｒ1およ
びＲ2のいずれもが水素原子、メチル基またはエチル基
の場合を除く）、Ｒ3およびＲ4としては水素原子、４，
４’−ジメトキシトリチル基、アセチル基、ベンゾイル
基、トリメチルシリル基およびターシャリーブチルジメ
チルシリル基が挙げられ、Ｒ5およびＲ6としては水素原
子、メトキシ基、ターシャリーブチルジメチルシリルオ
キシ基および水酸基が挙げられ、Ｘとしては酸素原子お
よび硫黄原子が挙げられる。またＢ1およびＢ2はヌクレ
オチド化学において通常の保護基で保護した塩基、例え
ば、１−（Ｎ−４−ベンゾイルシトシニル）基、９−
（Ｎ−６−ベンゾイルアデニニル）基、９−（Ｎ−２−
イソブチリルグアニニル）基、１−チミニル基、１−ウ
ラニル基および前記式（２）で表されるＢ’が挙げら
れ、Ｂ1、Ｂ2のうち少なくとも１つはＢ’である。 【００１１】前記ヌクレオチド誘導体は下記式（４）で
表されるヌクレオシドを亜リン酸化し、さらに、得られ
た亜リン酸トリエステルを酸化もしくは硫化することに
よって得られる。 【００１２】 【化５】 【００１３】（式中、Ｂ”、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ａおよび
ｎは前記式（１）と同じ） 【００１４】上記亜リン酸化の方法は、先に取り上げた
ケスターやカルザースらの方法を用いることもできる
し、本発明者らの別の報告による方法（北村ら、特願平
１０−３６７３８４）も利用できる。例えば、前記式
（４）で表される５’−Ｏ,塩基保護−ヌクレオシド
（例えば、Ｒ3が４，４’−ジメトキシトリチル、Ｒ4お
よびＲ5が水素原子の化合物）を減圧乾燥するか、ある
いはピリジンもしくは１，４−ジオキサン等の有機溶媒
に溶解してから共沸脱水した後、トルエン、ピリジン、
テトラヒドロフラン、クロロホルムまたはアセトニトリ
ル等の有機溶媒溶液中、０．９〜１．２当量のオルガノ
オキシビスアゾリルホスフィン｛例えば、２−シアノ−
１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビス
イミダゾリルホスフィン｝を−８０℃〜室温の条件で反
応させることにより、下記式（５）で表されるホスホル
モノアゾリド化合物が得られる。この反応は低温で行な
った方が、目的のホスホルモノアゾリド化合物の収率は
良い。また、有機溶媒は乾燥剤で乾燥後、蒸留精製した
ものを用いた方が良い。この反応溶液の31P ＮＭＲスペ
クトルを測定して反応が完了したことを確認すれば良
い。 【００１５】 【化６】 【００１６】（式中、Ｂ、Ｒ１〜Ｒ４、Ａおよびｎは前
記式（１）と同じであり、Ｘはを示す） 【００１７】上記で得られたホスホルモノアゾリド化合
物は、分離・精製すること無く、次の反応に用いること
ができ、オルガノオキシビスアゾリルホスフィンに対し
て０．８〜１．２当量の、少なくとも核酸塩基だけは適
当に保護されたヌクレオシドを、別に減圧乾燥するか共
沸操作をした後、トルエン、ピリジン、テトラヒドロフ
ラン、クロロホルムまたはアセトニトリル等の有機溶媒
の溶液として、−８０℃〜室温の条件で、上記で得られ
た反応溶液に混合し反応させることにより２量化反応は
達成される。この場合、第２番目のヌクレオシドの３’
水酸基は、必ずしも保護されている必要はない。 【００１８】次に、オルガノオキシビスアゾリルホスフ
ィンに対して１．５〜１０当量の、別に減圧乾燥させて
おいた硫黄粉末を、2量化反応の進行が確認された上記
反応溶液に加え、０℃〜室温条件下、２時間〜１２時間
硫化反応を行なうことで、本発明におけるヌクレオシド
誘導体（Ｘは硫黄原子）であるチオリン酸トリエステル
が生成する。得られたチオリン酸トリエステルは室温以
下であれば、空気中で取り扱うことができ、例えば、反
応溶液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
に供すれば、容易にその高純度品を得ることができる。 【００１９】上記のヌクレオチド誘導体の合成反応は、
核酸塩基に結合しているポリエチレングリコール鎖とは
直接的には関係が無い。例えば、上記反応においてオル
ガノオキシビスアゾリルホスフィンに対して０．８〜
１．２当量の、核酸塩基の保護基部分にポリエチレング
リコール鎖を有するヌクレオシド化合物｛前記式（４）
においてＲ3、Ｒ4、Ｒ5がいずれも水素原子のもの｝を
用いて２量化反応を実施すれば、２つの核酸塩基の双方
にポリエチレングリコール鎖が導入された２量体を得る
こともできる。また、最初の亜リン酸化反応を通常のヌ
クレオチド化学で用いられる５’−Ｏ,塩基保護−ヌク
レオシドに対して実施し（北村ら、特願平１０−３６７
３８４号公報参照）、第２番目のヌクレオシドとして核
酸塩基の保護基部分にポリエチレングリコール鎖を有す
るヌクレオシド化合物｛前記式（４）においてＲ3、
Ｒ4、Ｒ5がいずれも水素原子のもの｝を用いれば、３’
末端側の核酸塩基にのみポリエチレングリコール鎖が導
入された２量体が得ることができる。 【００２０】本願発明におけるヌクレオチド誘導体は、
エーテル類には難溶であり、例えば、ヌクレオチド誘導
体を含むクロロホルム溶液をジエチルエーテル中に加え
ると、このヌクレオチド誘導体は白色固体として沈澱す
る。また、２−プロパノールによる再結晶を試みても、
白色固体として沈澱する。従って、ヌクレオチド誘導体
は容易に回収することができる。ゆえに、ポリエチレン
グリコール鎖を有しない通常の保護ヌクレオチドを利用
して２量体成分を得るときに必要であった分離・精製操
作の大半は、本願発明におけるヌクレオチド誘導体にお
いては不要となる。さらに、ヌクレオチド誘導体は、ア
セトニトリル、テトラヒドロフラン、ピリジンおよび有
機塩素系溶媒に可溶であり、これらポリエチレングリコ
ールに対する良溶媒中、適当に保護された第３番目以降
のヌクレオシ（チ）ドを反応させることにより、配列が
明らかな多量体を得ることができる。 【００２１】 【実施例】以下、実施例により本発明について詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。 （合成例１） ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシビスイミダゾリルホスフィンの合成 ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシジクロロホスフィン（３５０ｍｇ，１．２５ｍ
ｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気
下、室温の条件で、トリメチルシリルイミダゾール
（０．４０ｍｌ，２．７５ｍｍｏｌ）を加え５分間反応
させた。副生したクロロトリメチルシランおよびトルエ
ンを室温で１０分間減圧留去した後、残留トルエンおよ
び過剰のトリメチルシリルイミダゾールを３５℃の条件
で2時間減圧留去し、無色透明、油状の２−シアノ−１
−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビスイ
ミダゾリルホスフィン（Ｖ）を得た。得られた化合物の
31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3
Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１０９．
３であった。 【００２２】（合成例２） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物の合成 合成例１で得られた２−シアノ−１−（１，１−ジエチ
ル−３−ブテニル）エトキシビスイミダゾリルホスフィ
ンを（重）クロロホルム（２．５ｍｌ）に溶解させて
０．５０Ｍ溶液とし、アルゴン雰囲気下、室温で２時間
減圧乾燥させた５’−Ｏ−（４，４−ジメトキシトリチ
ル）−２’−デオキシシチジン−Ｎ−ポリエチレングリ
コール誘導体（ポリエチレングリコールの数平均分子量
（Ｍｎ）３５０，前記式（４）においてＢ”＝シトシン
誘導体，Ｒ4＝４，４−ジメトキシトリチル基、Ｒ4＝Ｒ
5＝水素原子、Ａ＝フェニレン基のもの、１．２０ｇ、
１．２５ｍｍｏｌ）に室温で加えた。均一になった後、
そのまま一晩静置して反応させ、目的のホスホルアゾリ
ド化合物を得た。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６
１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐ
ｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１３４．３，１３１．５，１
３０．８，１２７．４であった。 【００２３】（合成例３） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣｐＣ前駆体の合
成） 上記合成例２で得られたのホスホルアゾリド化合物（in
situ DNA合成試薬）の（重）クロロホルム反応溶液
（２．０ｍｌ，約１ｍｍｏｌ）に、５’−Ｏ，塩基保護
−２’−デオキシシチジン−ポリエチレングリコール誘
導体（ポリエチレングリコールの数平均分子量（Ｍｎ）
３５０，前記式（４）においてＢ”＝シトシン誘導体，
Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝水素，Ａ＝フェニレン基のもの，６５
０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）の重クロロホルム溶液（２ｍｌ）
をアルゴン雰囲気下、０℃で加え、そのまま一晩４℃で
静置して反応させ、２量体を得た。この時の第２番目の
ヌクレオシドの水酸基の反応選択性は、31Ｐ ＮＭＲに
よると５’水酸基／３’水酸基＝９２／８であった。得
られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部
標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝１４１．７，１４１．０，１４０．８，１４
０．４であった。上記で得られた２量化反応溶液の一部
（２ｍｌ，総重量２．９５ｇ，約０．５ｍｍｏｌ）を測
り取り、これを無水ジエチルエーテル（３０ｍｌ）に攪
拌しながら加えると、２〜５分で白色の固体が析出し
た。更に１０分間激しく攪拌した後、４℃で一晩放置し
た。デカンテーションしてエーテルを除去し、残査は無
水エーテル（５ｍｌ）で３回洗浄した。この残査を減圧
乾燥し、31Ｐ ＮＭＲを測定した結果、上記に示したス
ペクトルと同様であり、目的とした２量体が回収された
ことが確認できた（８８２mg，回収率８８％）。 【００２４】（実施例１） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣpsＡ保護体の合
成） 上記合成例２で得られたホスホルアゾリド化合物（in s
itu ＤＮＡ合成試薬）のクロロホルム反応溶液（５ｍ
ｌ，約２．５ｍｍｏｌ）に、Ｎ−ベンゾイル−２’−デ
オキシアデノシン（８９０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）のク
ロロホルム／ピリジン混合溶液（１／２（ｖ／ｖ），５
ｍｌ）をアルゴン雰囲気下、０℃で加え、そのまま一晩
４℃で静置して反応させ２量化させた。この反応溶液
に、室温条件下、予め別に３時間以上減圧乾燥させてお
いた硫黄粉末（１６０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を投入し、更
に１２時間攪拌した。溶媒を室温以下の温度で減圧留去
し、残査をクロロホルム（２０ｍｌ）に再溶解し、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタ
ノール＝１００／３）で精製すると、目的とする２量体
（チオリン酸トリエステル）が得られた（３．４３ｇ，
収率８８％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６
１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０pp
m，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６６．３，６６．０，６５．６
であった。得られた２量体（ＣpsＡ保護体）を１．０ｇ
秤取り、クロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、これにジエ
チルエーテル（５０ｍｌ）を攪拌しながら加えると、白
色の固体が析出した。４℃で一晩放置したのち、デカン
テーションしてエーテルを除去し、残査はエーテル（５
ｍｌ）で３回洗浄した。この残査を減圧乾燥し、31ＰＮ
ＭＲを測定した結果、スペクトルは上記のものと同様で
あり、２量体が回収されたことが確認できた（０．９７
g，回収率９７％）。また同様に２量体を１．３０ｇ秤
取り、２−プロパノール（４０ｍｌ）を加えて５０〜５
５℃に加温して一旦均一溶液とした後に４℃で一晩放置
すると、上記と同じく白色固体が得られた（１．０４
ｇ，回収率８０％）。 【００２５】（実施例２） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物を用いた２量化反応（ＣpsＧ保護体の合
成） Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシンの代わり
に、Ｎ−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン（８
９０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）のクロロホルム／ピリジン
混合溶液（１／２（ｖ／ｖ），５ｍｌ）を用いた以外
は、実施例１と同様に反応を行ない、目的とする２量体
（チオリン酸トリエステル）を得た（３．１５ｇ，収率
８１％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１６１．９
ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ppm，ＣＤ
Ｃｌ3）は、δ＝６６．６，６６．２，６５．８，６
５．４であった。 【００２６】（実施例３） メトキシポリエチレングリコール鎖を有するホスホルア
ゾリド化合物の２量体の合成（ＡpsＣ保護体の合成） ２−シアノ−１−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）
エトキシジクロロホスフィン（５７０ｍｇ，２．０２ｍ
ｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気
下、室温の条件で、トリメチルシリルイミダゾール
（０．６５ｍｌ，４．４４ｍｍｏｌ）を加え５分間反応
させた。副生したクロロトリメチルシランおよびトルエ
ンを室温で１０分間減圧留去した後、残留トルエンおよ
び過剰のトリメチルシリルイミダゾールを３５℃の条件
で2時間減圧留去し、無色透明、油状の２−シアノ−１
−（１，１−ジエチル−３−ブテニル）エトキシビスイ
ミダゾリルホスフィンを得た。これを無水クロロホルム
（４．０ｍｌ）に溶解させて０．５０Ｍ溶液とし、アル
ゴン雰囲気下、室温の条件で、室温で２時間減圧乾燥し
たＮ−６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４−ジメトキ
シトリチル）−２’−デオキシアデノシン（１．３９
ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）に加えた。反応液は均一とな
り、そのまま一晩４℃で静置して反応させ、ホスホルア
ゾリド化合物（in situ ＤＮＡ合成試薬）を調製した。
この反応溶液を、１，４−ジオキサンで共沸処理した
５’−Ｏ，塩基保護−２’−デオキシシチジン−ポリエ
チレングリコール誘導体（ポリエチレングリコールの数
平均分子量（Ｍｎ）３５０，前記式（４）においてＢ”
＝シトシン誘導体，Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝水素，Ａ＝フェニ
レン基のもの，１．６ｇ，２．４ｍｍｏｌ）に０℃で加
え、そのまま一晩４℃で静置し２量化させ、亜リン酸ト
リエステルを得た。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ（１
６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４０ｐ
ｐｍ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１４２．８，１４２．６，
１４２．０，１４０．６であった。更に、室温条件下、
予め別に３時間以上減圧乾燥させておいた硫黄粉末（１
６０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を投入し、１２時間攪拌した。
溶媒を室温以下の温度で減圧留去し、残査をクロロホル
ム（２０ｍｌ）に再溶解し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／３）
で精製すると、目的とする２量体（チオリン酸トリエス
テル）が得られた（３．１６ｇ，ジクロロホスフィンか
らの通算収率７０％）。得られた化合物の31Ｐ ＮＭＲ
（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ3Ｏ）3Ｐ＝１４
０ppm，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６６．５，６６．５，６
５．８，６５．６であった。さらに、上記で得られたチ
オリン酸トリエステルを、トリクロロ酢酸のクロロホル
ム・メタノール溶液（９／１（ｖ／ｖ），３％）中で、
室温下、３０分処理すると、リン酸部分を損なうこと無
く、脱トリチル化反応が完了した。得られた化合物の31
Ｐ ＮＭＲ（１６１．９ＭＨｚ，外部標準；（ＣＨ
3Ｏ）3Ｐ＝１４０ppm，ＣＤＣｌ3）は、δ＝６７．０，
６６．７，６６．２であった。 【００２７】 【発明の効果】本発明のヌクレオチド誘導体は、オリゴ
ヌクレオチドの製造において、ヌクレオチド鎖を構築す
る際の出発原料として、あるいは鎖長を伸長する基本構
成単位（ビルディングブロック）として利用できる。こ
れを利用して調製する多量体は、ポリエチレングリコー
ルの性質を利用して分離・精製することが可能で、従来
法のそれと比較すると生成物の取り扱いが極めて容易と
なる。従って、本発明のヌクレオチド誘導体は多量体ビ
ルディングブロックの調製に対して極めて有用である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ，1989年，Ｖｏｌ．17， Ｎ
ｏ．２，ｐ．4863−4871
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07H 19/06 - 19/10
C07H 19/16 - 19/207
C07H 21/00 - 21/04
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】下記式（１）で表されるヌクレオチド誘導
体。 【化１】 （式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子、ヘテロ原子を含んで
いてもよいアルキル基、シクロアルキル基、アリール基
もしくはアラルキル基を示し、Ｒ1とＲ2は同一であって
も異なっていても良く、Ｒ3およびＲ4は水素原子または
ヌクレオチド化学において通常用いられる保護基を示
し、Ｒ5およびＲ6は水素原子、水酸基、アルコキシ基ま
たはトリアルキルシリルオキシ基を示し、Ｘは酸素原子
または硫黄原子、Ｂ1およびＢ2はヌクレオチド化学にお
いて通常の保護基で保護した塩基または下記式（２）で
表されるＢ’を示し、Ｂ1およびＢ2のうち少なくとも１
つはＢ’である。ただし、Ｒ1およびＲ2のいずれもが水
素原子、メチル基またはエチル基である場合を除く） Ｂ’＝−Ｂ”−Ｃ（＝Ｏ）−Ａ−（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯＣＨ3 （２） （式中、Ｂ”は下記式（３）で示されるいずれかの基を
示し、ｎは３以上の整数、Ａは２価基でアリレン基、も
しくはヘテロ原子を含んでも良い直鎖あるいは分岐鎖を
含むアルキレン基をそれぞれ示す。） 【化２】
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| JP13988399A JP3485025B2 (ja) | 1999-05-20 | 1999-05-20 | ヌクレオチド誘導体 |
| US09/471,802 US6380378B1 (en) | 1998-12-24 | 1999-12-23 | Nucleotide compound, nucleotide block oligonucleotide, and method for producing them |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP13988399A JP3485025B2 (ja) | 1999-05-20 | 1999-05-20 | ヌクレオチド誘導体 |
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| Publication Number | Publication Date |
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ID=15255814
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP13988399A Expired - Fee Related JP3485025B2 (ja) | 1998-12-24 | 1999-05-20 | ヌクレオチド誘導体 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3485025B2 (ja) |
-
1999
- 1999-05-20 JP JP13988399A patent/JP3485025B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８９年，Ｖｏｌ．１７， Ｎｏ．２，ｐ．４８６３−４８７１ |
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