JP3238192B2 - 動植物中の有用成分を濃縮し精製する方法 - Google Patents
動植物中の有用成分を濃縮し精製する方法Info
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Description
【０００１】本発明は、動植物中の有用な配糖体成分を
効率的に濃縮分離し精製する方法に関するものである。
効率的に濃縮分離し精製する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】動植物中には、種々の有用成分が存在す
る。例えば、漢方薬等のように古くから経験的にその薬
理効果が知られ、利用されているものがある。近年、種
々の研究により、漢方薬等の有用成分の多くは配糖体で
あることが明らかにされてきた。例えば、甘草中のグリ
チルリチン、柴胡中のサイコサポニン、薬用人参中のジ
ンセノサイド、黄ごん中のバイカリン、アロエ中のバイ
カリン、梔中のゲニポサイド等である。動物由来のもの
としては、海参中のホロトキシンＡおよびＢ、五倍子中
のペンタ−ω−ジガロイル−β−グルコース、蟾酥中の
カルデノライドの配糖体等が知られている。
る。例えば、漢方薬等のように古くから経験的にその薬
理効果が知られ、利用されているものがある。近年、種
々の研究により、漢方薬等の有用成分の多くは配糖体で
あることが明らかにされてきた。例えば、甘草中のグリ
チルリチン、柴胡中のサイコサポニン、薬用人参中のジ
ンセノサイド、黄ごん中のバイカリン、アロエ中のバイ
カリン、梔中のゲニポサイド等である。動物由来のもの
としては、海参中のホロトキシンＡおよびＢ、五倍子中
のペンタ−ω−ジガロイル−β−グルコース、蟾酥中の
カルデノライドの配糖体等が知られている。
【０００３】そして、従来、これら動植物中の有用成分
（例えば、漢方薬においては薬効成分）を利用する場
合、一般的には熱水抽出し（煎じて）、それをそのまま
服用してきた。しかしながら、この熱水抽出物中には薬
効成分以外のものも含まれ、それらが不快なにおいや苦
味、渋味等を発現し、漢方薬等を服用しにくいものにし
てきた。また、薬効成分の抽出効率も十分に高いとは言
えず、その効果を期待するためには多量に服用する必要
があった。さらに、濃縮方法も加熱濃縮、凍結乾燥等の
方法に頼っており、薬効成分のみならず、不要な成分ま
で濃縮されるという欠点があった。
（例えば、漢方薬においては薬効成分）を利用する場
合、一般的には熱水抽出し（煎じて）、それをそのまま
服用してきた。しかしながら、この熱水抽出物中には薬
効成分以外のものも含まれ、それらが不快なにおいや苦
味、渋味等を発現し、漢方薬等を服用しにくいものにし
てきた。また、薬効成分の抽出効率も十分に高いとは言
えず、その効果を期待するためには多量に服用する必要
があった。さらに、濃縮方法も加熱濃縮、凍結乾燥等の
方法に頼っており、薬効成分のみならず、不要な成分ま
で濃縮されるという欠点があった。
【０００４】そのため、従来の方法で薬効成分のみを得
ようとすると、種々の精製手段を用いねばならず、多大
な設備と技術と労力が必要である。例えば、味覚変換物
質および糖質吸収抑制物質として最近注目されているギ
ムネマ酸の場合、ギムネマの葉をノーマルヘキサン抽
出、次いで温水抽出を繰り返し、酸沈澱したものをアル
コールに溶解し、これを濃縮して粗ギムネマ酸とする。
これをＲＰ−２カラムクロマトグラフィーにかけ、その
活性画分を逆相疎水（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィ
ーを繰り返すことにより精製している。粗ギムネマ酸以
降の精製方法は実験室レベルのもので、大量の精製ギム
ネマ酸を得ようとすると、極めて困難である。また、動
植物由来の色素等を利用する際も、薬効成分の場合と同
様に抽出効率、濃縮方法等に種々問題がある。したがっ
て、その精製にも多大な設備と技術と労力が必要であ
る。
ようとすると、種々の精製手段を用いねばならず、多大
な設備と技術と労力が必要である。例えば、味覚変換物
質および糖質吸収抑制物質として最近注目されているギ
ムネマ酸の場合、ギムネマの葉をノーマルヘキサン抽
出、次いで温水抽出を繰り返し、酸沈澱したものをアル
コールに溶解し、これを濃縮して粗ギムネマ酸とする。
これをＲＰ−２カラムクロマトグラフィーにかけ、その
活性画分を逆相疎水（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィ
ーを繰り返すことにより精製している。粗ギムネマ酸以
降の精製方法は実験室レベルのもので、大量の精製ギム
ネマ酸を得ようとすると、極めて困難である。また、動
植物由来の色素等を利用する際も、薬効成分の場合と同
様に抽出効率、濃縮方法等に種々問題がある。したがっ
て、その精製にも多大な設備と技術と労力が必要であ
る。
【０００５】よって、動植物中の有用な配糖体成分のみ
を選択的に効率よく濃縮分離し精製する方法を開発する
ことを目的とした。
を選択的に効率よく濃縮分離し精製する方法を開発する
ことを目的とした。
【０００６】本発明は、酵素の糖転移反応を利用し、有
用成分である配糖体に糖鎖を付加し、高分子化すること
により選択的に配糖体を水に不溶性化して濃縮分離し、
次いで、この水不溶性区分の糖鎖を加水分解することに
より、容易に有用成分である配糖体を分離・精製しよう
とするものである。本発明にいう動植物とは、海参、五
倍子、蟾酥、黄ごん、アロエ、地黄、薬用人参、梔、甘
草、芍草、柴胡、大黄等をいう。本発明にいう有用成分
の配糖体（以下、アクセプターという）とは、グリチル
リチン、ゲニポサイド、ステビオサイド、サリシン、ホ
ロトキシンＡおよびホロトキシンＢからなる群より選ば
れる配糖体である。
用成分である配糖体に糖鎖を付加し、高分子化すること
により選択的に配糖体を水に不溶性化して濃縮分離し、
次いで、この水不溶性区分の糖鎖を加水分解することに
より、容易に有用成分である配糖体を分離・精製しよう
とするものである。本発明にいう動植物とは、海参、五
倍子、蟾酥、黄ごん、アロエ、地黄、薬用人参、梔、甘
草、芍草、柴胡、大黄等をいう。本発明にいう有用成分
の配糖体（以下、アクセプターという）とは、グリチル
リチン、ゲニポサイド、ステビオサイド、サリシン、ホ
ロトキシンＡおよびホロトキシンＢからなる群より選ば
れる配糖体である。
【０００７】本発明において、糖転移反応を行わせるに
は、１，４−α−Ｄ−グルカン：４−α−Ｄ−（１，４
−α−Ｄ−グルカノ）−トランスフェラーゼ（E.C.2.4.
1.19) （以下、ＣＧＴアーゼという）、または、１，４
−α−Ｄ−グルカン：１，４−α−Ｄ−グルカン ４−
α−Ｄ−グリコシルトランスフェラーゼ（E.C.2.4.1.2
5) （以下、Ｄ−酵素という）を使用する。
は、１，４−α−Ｄ−グルカン：４−α−Ｄ−（１，４
−α−Ｄ−グルカノ）−トランスフェラーゼ（E.C.2.4.
1.19) （以下、ＣＧＴアーゼという）、または、１，４
−α−Ｄ−グルカン：１，４−α−Ｄ−グルカン ４−
α−Ｄ−グリコシルトランスフェラーゼ（E.C.2.4.1.2
5) （以下、Ｄ−酵素という）を使用する。
【０００８】これらの酵素反応の条件は、常法による。
好ましくは温度２０〜７５℃、ドナーの濃度は０．１〜
３０％好ましくは１〜２０％、アクセプターの濃度は
０．１〜３０％好ましくは１〜２０％、酵素の濃度は２
〜１００単位／ｍｌとなるようにして反応を開始させ
る。反応時間は１〜数１０時間、好ましくは２〜２４時
間程度が適している。反応は１００℃、５分間加熱する
ことにより停止する。その後４℃に２時間以上放置し、
目的糖化合物の高分子区分を沈澱させる。また、その上
清の低分子区分は、さらにドナーと酵素を加えて反応を
継続し沈澱として回収する。ここでいうドナーとは、オ
リゴ糖、アミロース、アミロペクチン、可溶性でんぷ
ん、サイクロデキストリン（環状デキストリン、以下Ｃ
Ｄという）等をいう。アミロースおよびアミロペクチン
は、でんぷんの構成成分である。サイクロデキストリン
（ＣＤ）は、グルコースが６〜８個α−１，４結合で環
状に結合した物質で、グルコースが６、７、８個のもの
をそれぞれα−ＣＤ、β−ＣＤ、γ−ＣＤという。オリ
ゴ糖とは、シュークロース、マルトース、イソマルトー
ス、セロビオースゲンチオビオース、マルトトリオー
ス、パノース、スタキオース等、数個の単糖がグリコシ
ド結合によって脱水縮合したもので、通常１０糖程度ま
でをいう。
好ましくは温度２０〜７５℃、ドナーの濃度は０．１〜
３０％好ましくは１〜２０％、アクセプターの濃度は
０．１〜３０％好ましくは１〜２０％、酵素の濃度は２
〜１００単位／ｍｌとなるようにして反応を開始させ
る。反応時間は１〜数１０時間、好ましくは２〜２４時
間程度が適している。反応は１００℃、５分間加熱する
ことにより停止する。その後４℃に２時間以上放置し、
目的糖化合物の高分子区分を沈澱させる。また、その上
清の低分子区分は、さらにドナーと酵素を加えて反応を
継続し沈澱として回収する。ここでいうドナーとは、オ
リゴ糖、アミロース、アミロペクチン、可溶性でんぷ
ん、サイクロデキストリン（環状デキストリン、以下Ｃ
Ｄという）等をいう。アミロースおよびアミロペクチン
は、でんぷんの構成成分である。サイクロデキストリン
（ＣＤ）は、グルコースが６〜８個α−１，４結合で環
状に結合した物質で、グルコースが６、７、８個のもの
をそれぞれα−ＣＤ、β−ＣＤ、γ−ＣＤという。オリ
ゴ糖とは、シュークロース、マルトース、イソマルトー
ス、セロビオースゲンチオビオース、マルトトリオー
ス、パノース、スタキオース等、数個の単糖がグリコシ
ド結合によって脱水縮合したもので、通常１０糖程度ま
でをいう。
【０００９】加水分解反応には、１，４−α−Ｄ−グル
カン グルコヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３）
（以下、グルコアミラーゼという）、もしくは、α−Ｄ
−グルコシド グルコヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．
１．２０）（以下、α−グルコシダーゼという）を使用
する。または、１，４−α−Ｄ−グルカン グルカノヒ
ドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）（以下、α−ア
ミラーゼという）、もしくは、１，４−α−Ｄ−グルカ
ン マルトヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２）
（以下、β−アミラーゼという）を、上記のグルコアミ
ラーゼもしくはα−グルコシダーゼと共存させて使用す
る。これらの酵素反応の条件は、常法による。分離した
水不溶性区分を２０〜８０℃の温水、より好ましくは３
０〜７５℃の温水に懸濁せしめ、、酵素の濃度は１〜１
００単位／ｍｌとなるようにして反応を開始させる。反
応時間は１〜数１０時間、好ましくは２〜２４時間程度
が適している。反応は１００℃、５分間加熱することに
より停止する。
カン グルコヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３）
（以下、グルコアミラーゼという）、もしくは、α−Ｄ
−グルコシド グルコヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．
１．２０）（以下、α−グルコシダーゼという）を使用
する。または、１，４−α−Ｄ−グルカン グルカノヒ
ドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）（以下、α−ア
ミラーゼという）、もしくは、１，４−α−Ｄ−グルカ
ン マルトヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２）
（以下、β−アミラーゼという）を、上記のグルコアミ
ラーゼもしくはα−グルコシダーゼと共存させて使用す
る。これらの酵素反応の条件は、常法による。分離した
水不溶性区分を２０〜８０℃の温水、より好ましくは３
０〜７５℃の温水に懸濁せしめ、、酵素の濃度は１〜１
００単位／ｍｌとなるようにして反応を開始させる。反
応時間は１〜数１０時間、好ましくは２〜２４時間程度
が適している。反応は１００℃、５分間加熱することに
より停止する。
【００１０】
【作用】動植物からの粗抽出液にα−ＣＤ、可溶性でん
ぷん等のドナーを加え、ＣＧＴアーゼまたはＤ−酵素を
作用させ、抽出液中の配糖体に糖鎖を付加して選択的に
析出させる。この析出物を回収し、グルコアミラーゼ、
α−アミラーゼ等の加水分解酵素で糖鎖を分解する。一
般に、天然の配糖体のアグリコン（非糖質部）と糖との
結合はβ−グルコシド結合である。一方、ＣＧＴアー
ゼ、または、Ｄ−酵素などで付加した糖鎖はα−グルコ
シド結合である。それゆえ、α−グルコシド結合のみを
分解する加水分解酵素を用いれば、目的の配糖体を得る
ことができる。そして、この加水分解酵素による分解物
を活性炭等で処理すれば、目的の配糖体と分解された糖
鎖は容易に分別できる。すなわち、従来、単離精製が極
めて困難であった配糖体でも、例えば、ＣＧＴアーゼ
の反応、グルコアミラーゼの反応、活性炭による分
別の３段階のステップで精製することができる。
ぷん等のドナーを加え、ＣＧＴアーゼまたはＤ−酵素を
作用させ、抽出液中の配糖体に糖鎖を付加して選択的に
析出させる。この析出物を回収し、グルコアミラーゼ、
α−アミラーゼ等の加水分解酵素で糖鎖を分解する。一
般に、天然の配糖体のアグリコン（非糖質部）と糖との
結合はβ−グルコシド結合である。一方、ＣＧＴアー
ゼ、または、Ｄ−酵素などで付加した糖鎖はα−グルコ
シド結合である。それゆえ、α−グルコシド結合のみを
分解する加水分解酵素を用いれば、目的の配糖体を得る
ことができる。そして、この加水分解酵素による分解物
を活性炭等で処理すれば、目的の配糖体と分解された糖
鎖は容易に分別できる。すなわち、従来、単離精製が極
めて困難であった配糖体でも、例えば、ＣＧＴアーゼ
の反応、グルコアミラーゼの反応、活性炭による分
別の３段階のステップで精製することができる。
【００１１】各酵素の作用は以下のとおりである。ＣＧ
Ｔアーゼは、でんぷんに作用してグルコース６〜８個か
らなる環状デキストリン（サイクロデキストリン、Ｃ
Ｄ）を生成する酵素として知られているが、ＣＤ及びで
んぷんの存在下で適当なアクセプターに作用させると、
ＣＤ及びでんぷんをドナーとして、アクセプターにグル
コース基をα−１，４結合で転移させる。そして、該グ
ルコース鎖をα−１，４結合で伸長させ、高分子の水不
溶性の物質を生成する。Ｄ−酵素は、例えば、マルトト
ライオースに作用し、グルコースのほか各種マルトオリ
ゴ糖を生成する酵素として知られているが、高濃度オリ
ゴ糖をドナーとし、適当なアクセプターがあれば、これ
にグルコース基をα−１，４結合で転移させ、該グルコ
ース鎖をα−１，４結合で伸長させて高分子の水不溶性
の物質を生成する。グルコアミラーゼおよびα−グルコ
シダーゼは、両者ともα−１，４−グルコシド鎖を非還
元末端から加水分解する酵素である。α−アミラーゼ
は、α−１，４−グルカンをエンド型で加水分解する酵
素であり、β−アミラーゼは、α−１，４−グルカンの
非還元末端から順次マルトース単位で加水分解する酵素
である。α−アミラーゼまたはβ−アミラーゼをグルコ
アミラーゼもしくはα−グルコシダーゼと共存させて使
用することにより、付加した糖鎖をより効率的に分解す
ることができる。
Ｔアーゼは、でんぷんに作用してグルコース６〜８個か
らなる環状デキストリン（サイクロデキストリン、Ｃ
Ｄ）を生成する酵素として知られているが、ＣＤ及びで
んぷんの存在下で適当なアクセプターに作用させると、
ＣＤ及びでんぷんをドナーとして、アクセプターにグル
コース基をα−１，４結合で転移させる。そして、該グ
ルコース鎖をα−１，４結合で伸長させ、高分子の水不
溶性の物質を生成する。Ｄ−酵素は、例えば、マルトト
ライオースに作用し、グルコースのほか各種マルトオリ
ゴ糖を生成する酵素として知られているが、高濃度オリ
ゴ糖をドナーとし、適当なアクセプターがあれば、これ
にグルコース基をα−１，４結合で転移させ、該グルコ
ース鎖をα−１，４結合で伸長させて高分子の水不溶性
の物質を生成する。グルコアミラーゼおよびα−グルコ
シダーゼは、両者ともα−１，４−グルコシド鎖を非還
元末端から加水分解する酵素である。α−アミラーゼ
は、α−１，４−グルカンをエンド型で加水分解する酵
素であり、β−アミラーゼは、α−１，４−グルカンの
非還元末端から順次マルトース単位で加水分解する酵素
である。α−アミラーゼまたはβ−アミラーゼをグルコ
アミラーゼもしくはα−グルコシダーゼと共存させて使
用することにより、付加した糖鎖をより効率的に分解す
ることができる。
【００１２】
〔実施例１〕甘草根２ｇに１００ｍｌの５０％エタノー
ルを加え、ホモジナイズし抽出した。該抽出液からエタ
ノールを除去し、これにドナーとしてα−ＣＤを１０％
（Ｗ／Ｗ）になるように加え、３０℃の恒温とした。次
いで、ＣＧＴアーゼを８単位／ｍｌとなるように加えて
反応を開始させた。１６時間後、１００℃、５分間の加
熱により反応を停止させた。これを４℃に３時間放置
し、反応生成物を析出させた。この析出物を収集し、高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）や薄層クロマト
グラフィー（ＴＬＣ）を用いて分析したところ、分子量
２０００〜２００００の物質であった。また、該物質の
グルコアミラーゼ処理（３７℃で３時間反応）によりグ
リチルリチンとグルコースを生じた。これらのことか
ら、該物質はグリチルリチンにグルコースが１０〜４２
個結合した化合物であると確認された。さらに、グリチ
ルリチンに対してドナーのα−ＣＤの添加量が多くなれ
ばなるほど、グリチルリチンに糖鎖が付加された該物質
の分子量が大きくなり反応液中に析出し易いものが増加
した。また、該物質は唾液中のアミラーゼ等により容易
に分解され、グリチルリチンを放出した。すなわち、該
物質を摂取した際にはグリチルリチンの生理作用が発現
され得る。
ルを加え、ホモジナイズし抽出した。該抽出液からエタ
ノールを除去し、これにドナーとしてα−ＣＤを１０％
（Ｗ／Ｗ）になるように加え、３０℃の恒温とした。次
いで、ＣＧＴアーゼを８単位／ｍｌとなるように加えて
反応を開始させた。１６時間後、１００℃、５分間の加
熱により反応を停止させた。これを４℃に３時間放置
し、反応生成物を析出させた。この析出物を収集し、高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）や薄層クロマト
グラフィー（ＴＬＣ）を用いて分析したところ、分子量
２０００〜２００００の物質であった。また、該物質の
グルコアミラーゼ処理（３７℃で３時間反応）によりグ
リチルリチンとグルコースを生じた。これらのことか
ら、該物質はグリチルリチンにグルコースが１０〜４２
個結合した化合物であると確認された。さらに、グリチ
ルリチンに対してドナーのα−ＣＤの添加量が多くなれ
ばなるほど、グリチルリチンに糖鎖が付加された該物質
の分子量が大きくなり反応液中に析出し易いものが増加
した。また、該物質は唾液中のアミラーゼ等により容易
に分解され、グリチルリチンを放出した。すなわち、該
物質を摂取した際にはグリチルリチンの生理作用が発現
され得る。
【００１３】〔実施例２〕梔の果実１０ｇに２００ｍｌ
の５０％エタノールを加え、ホモジナイズし抽出した。
該抽出液からエタノールを除去し、これにドナーとして
可溶性でんぷんを２０％（Ｗ／Ｗ）になるように加え、
４０℃の恒温とした。次いで、ＣＧＴアーゼを２０単位
／ｍｌとなるように加えて反応を開始させた。以下、上
記実施例１と同様の操作を行い、反応生成物を分析した
ところ、該物質はゲニポサイドにグルコースが１０〜４
０数個結合した化合物であることが確認できた。この時
のゲニポサイドの回収率は４３．４％であった。また、
反応溶液上清を同様に分析したところ、ゲニポサイドに
グルコースが１〜９個結合した化合物が存在することが
分かった。そこで、反応溶液上清に可溶性でんぷんを追
添加して酵素反応を継続させ、上記と同様に、析出物と
してさらにゲニポサイドの糖付加物を回収することがで
きた。これらの析出物を合わせ水洗し、再び温水に分散
し、グルコアミラーゼを作用させた。その結果、該析出
物はゲニポサイドとグルコースとに分解された。この分
解液に活性炭を加えるとゲニポサイドのみが吸着される
ので、グルコースを水で洗い流し、次いでメタノールで
ゲニポサイドを溶出した。溶出されたゲニポサイドはＨ
ＰＬＣ的に単一なものであった。
の５０％エタノールを加え、ホモジナイズし抽出した。
該抽出液からエタノールを除去し、これにドナーとして
可溶性でんぷんを２０％（Ｗ／Ｗ）になるように加え、
４０℃の恒温とした。次いで、ＣＧＴアーゼを２０単位
／ｍｌとなるように加えて反応を開始させた。以下、上
記実施例１と同様の操作を行い、反応生成物を分析した
ところ、該物質はゲニポサイドにグルコースが１０〜４
０数個結合した化合物であることが確認できた。この時
のゲニポサイドの回収率は４３．４％であった。また、
反応溶液上清を同様に分析したところ、ゲニポサイドに
グルコースが１〜９個結合した化合物が存在することが
分かった。そこで、反応溶液上清に可溶性でんぷんを追
添加して酵素反応を継続させ、上記と同様に、析出物と
してさらにゲニポサイドの糖付加物を回収することがで
きた。これらの析出物を合わせ水洗し、再び温水に分散
し、グルコアミラーゼを作用させた。その結果、該析出
物はゲニポサイドとグルコースとに分解された。この分
解液に活性炭を加えるとゲニポサイドのみが吸着される
ので、グルコースを水で洗い流し、次いでメタノールで
ゲニポサイドを溶出した。溶出されたゲニポサイドはＨ
ＰＬＣ的に単一なものであった。
【００１４】〔実施例３〕ステビア葉２ｇに１００ｍｌ
の５０％エタノールを加え、ホモジナイズし抽出した。
該抽出液からエタノールを除去し、これにドナーとして
α−ＣＤを６．７％（Ｗ／Ｗ）になるように加え、３７
℃の恒温とした。次いで、ＣＧＴアーゼを８単位／ｍｌ
となるように加えて反応を開始させた。以下、上記実施
例２と同様の操作を行い、反応生成物を分析したとこ
ろ、ステビオサイドにグルコースが１〜４０数個結合し
た化合物であった。このうち、グルコースが１０数個以
上結合したものは、４℃に３時間静置すると沈澱した。
該沈澱物を温水に溶解し、β−アミラーゼを作用させる
ことによりステビオサイドを回収した。この時のステビ
オサイドの回収率は７９．２％であった。また、ステビ
オサイドにグルコースが１０個以下結合したものは、４
℃に３時間静置後その上清に残存したが、実施例２と同
様にして回収することができた。
の５０％エタノールを加え、ホモジナイズし抽出した。
該抽出液からエタノールを除去し、これにドナーとして
α−ＣＤを６．７％（Ｗ／Ｗ）になるように加え、３７
℃の恒温とした。次いで、ＣＧＴアーゼを８単位／ｍｌ
となるように加えて反応を開始させた。以下、上記実施
例２と同様の操作を行い、反応生成物を分析したとこ
ろ、ステビオサイドにグルコースが１〜４０数個結合し
た化合物であった。このうち、グルコースが１０数個以
上結合したものは、４℃に３時間静置すると沈澱した。
該沈澱物を温水に溶解し、β−アミラーゼを作用させる
ことによりステビオサイドを回収した。この時のステビ
オサイドの回収率は７９．２％であった。また、ステビ
オサイドにグルコースが１０個以下結合したものは、４
℃に３時間静置後その上清に残存したが、実施例２と同
様にして回収することができた。
【００１５】〔実施例４〕モデル実験としてステビア葉
２ｇにサリシンを２００ｍｇ加え、実施例３と同様の操
作を行ったところ、サリシンにグルコースが１０〜４０
数個結合した化合物が得られた。この時のサリシンの回
収率は７２．８％であった。
２ｇにサリシンを２００ｍｇ加え、実施例３と同様の操
作を行ったところ、サリシンにグルコースが１０〜４０
数個結合した化合物が得られた。この時のサリシンの回
収率は７２．８％であった。
【００１６】〔実施例５〕実施例２の抽出物上清にドナ
ーとしてマルトトライオースを５％（Ｗ／Ｗ）になるよ
うに加え、４０℃の恒温とした。次いで、Ｄ−酵素を１
０単位／ｍｌとなるように加えて反応を開始させた。以
下、上記実施例２と同様の操作を行い、反応生成物を分
析したところ、実施例２とほぼ同様の結果がえられた。
ーとしてマルトトライオースを５％（Ｗ／Ｗ）になるよ
うに加え、４０℃の恒温とした。次いで、Ｄ−酵素を１
０単位／ｍｌとなるように加えて反応を開始させた。以
下、上記実施例２と同様の操作を行い、反応生成物を分
析したところ、実施例２とほぼ同様の結果がえられた。
【００１７】〔実施例６〕海参１０ｇについて実施例１
と同様に処理し、海参中のホロトキシンＡおよびＢを単
離した。この時のホロトキシンＡおよびＢの回収率は、
それぞれ５２．３％と４８．６％であった。
と同様に処理し、海参中のホロトキシンＡおよびＢを単
離した。この時のホロトキシンＡおよびＢの回収率は、
それぞれ５２．３％と４８．６％であった。
【００１８】以上説明したように、本発明の方法を用い
ることにより、動植物中の有用な前記特定の配糖体成分
を選択的に効率よく濃縮して分離回収し、さらには精製
することができる。
ることにより、動植物中の有用な前記特定の配糖体成分
を選択的に効率よく濃縮して分離回収し、さらには精製
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 西村 隆久 大阪市阿倍野区昭和町１丁目18−１ 301 (56)参考文献 特開 平２−131592（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−27293（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−196297（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−58791（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 19/00 - 19/64
Claims (2)
- 【請求項１】 動植物から抽出された水溶液であって、
グリチルリチン、ゲニポサイド、ステビオサイド、サリ
シン、ホロトキシンＡおよびホロトキシンＢからなる群
より選ばれる配糖体を含有する水溶液に、グルコース基
のドナーと糖転移酵素を加えて前記配糖体とグルコース
基のドナーとを反応させて、配糖体にグルコースが１０
個以上４０数個以下付加した水不溶性の配糖体糖鎖付加
物を生成させ、該配糖体糖鎖付加物のみを分離回収する
ことを特徴とする動植物中の配糖体成分の濃縮分離方
法。 - 【請求項２】 前記糖転移酵素が、１，４−α−Ｄ−グ
ルカン：４−α−Ｄ−（１，４−α−Ｄ−グルカノ）−
トランスフェラーゼ（ＥＣ２．４．１．１９）、また
は、１，４−α−Ｄ−グルカン：１，４−α−Ｄ−グル
カン ４−α−Ｄ−グリコシルトランスフェラーゼ（Ｅ
Ｃ２．４．１．２５）であることを特徴とする請求項１
記載の動植物中の配糖体成分の濃縮分離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10928392A JP3238192B2 (ja) | 1992-04-01 | 1992-04-01 | 動植物中の有用成分を濃縮し精製する方法 |
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|---|---|---|---|
| JP10928392A JP3238192B2 (ja) | 1992-04-01 | 1992-04-01 | 動植物中の有用成分を濃縮し精製する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05276971A JPH05276971A (ja) | 1993-10-26 |
| JP3238192B2 true JP3238192B2 (ja) | 2001-12-10 |
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ID=14506246
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| JP (1) | JP3238192B2 (ja) |
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| JP6977940B2 (ja) | 2017-08-29 | 2021-12-08 | Ｉｓｆ合同会社 | ナマコサポニン含有エキス抽出および定量化方法 |
-
1992
- 1992-04-01 JP JP10928392A patent/JP3238192B2/ja not_active Expired - Fee Related
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