JP3199995B2

JP3199995B2 - Ｃ型肝炎の感染の診断および検出に効果的なペプチド

Info

Publication number: JP3199995B2
Application number: JP28502095A
Authority: JP
Inventors: チャン・イ・ワン; バーバラ・エイチ・ホセイン
Original assignee: United Biomedical Inc
Current assignee: United Biomedical Inc
Priority date: 1994-11-01
Filing date: 1995-11-01
Publication date: 2001-08-20
Anticipated expiration: 2015-11-01
Also published as: US5736321A; JPH11100397A; DE19500394C2; AU3966995A; SG49183A1; GB2294690B; GB2294690A; JPH08208695A; NL9402224A; NL194971C; WO1996013616A1; DE19500394A1; GB9425604D0

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス
（ＨＣＶ）感染の診断および予防を特定の目的とする新
規の直鎖および分枝鎖ペプチドに関する。より詳しく
は、本発明は、免疫検定手法を用いて患者のＨＣＶ関連
抗体を検出するのに有効である、少なくとも１つの抗原
性部位を含有する直鎖および分枝鎖合成ペプチドに向け
られている。ある場合には、これらのペプチドは、縮重
したアミノ酸の位置を有するライブラリーペプチドでも
ある。

【０００２】

【従来の技術】ＨＣＶが生起する非Ａ非Ｂ型肝炎（ＮＡ
ＮＢＨ）は、輸血後肝炎の最も一般的な形態として存続
しており、このウイルスの保有者（キャリア）で、この
疾病を伝染させうるおそれのある潜在的供血者その他の
人物を特定するための高感度で特異的な診断用スクリー
ニング方法に対する強い必要性がある。したがって、汚
染された血液および血液製品を、高い信頼度で血液供給
物から除去することを可能にするために、正確なスクリ
ーニング法が必要とされる。

【０００３】病因論上の作因であるＨＣＶは、いくつか
のグループによってクローン化され、同定されている
〔Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、ヨーロッパ公開特許第０３１８
２１６号公報、１９８９年５月発行; Okamoto ら（1990
年）, Jpn. J. Exp. Med., 60: 167; Houghtonら、ヨー
ロッパ公開特許第０３８８２３２号公報、１９９０年９
月発行;およびKatoら（1990年）, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 87: 9524; Arima ら（1989年ａ）, Gastroent
erologia Japonica, 24: 540; Reyesら（1990年）, Sci
ence, 247: 1335; Arima ら（1989年ｂ）, Gastroenter
ologia Japonica, 24: 545; Maenoら（1990年）, Nucle
ic Acids Res., 18: 2685〕。

【０００４】ＨＣＶゲノムは、長さが約１０キロべース
（kb）であり、構造蛋白質と非構造蛋白質とにプロセシ
ングされる単一のポリ蛋白質をコードしている。Ｎ末端
から、このポリ蛋白質は、構造領域のキャプシドおよび
エンベロープ蛋白質、ならびに非構造領域のＮＳ−１な
いしＮＳ−５蛋白質を包含する。

【０００５】ＨＣＶの抗原性領域のいくつかは同定され
ているが、これらの領域からのペプチドおよび組換え蛋
白質は、ＨＣＶ保有者の検出および診断において様々な
程度の感度および選択性を示す。抗原性領域は、コア、
すなわちキャプシドの蛋白質〔Wang、米国特許第５，１
０６，７２６号明細書；Hoseinら（1991年）, Proc.Nat
l. Acad. Sci. USA, 88: 3647; Okamoto ら（1990年）,
Jap. J. Exp. Med.,60: 223; Takahashi ら（1992
年）, J. Gen. Virol., 73: 667; Kotwal ら（1992
年）, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4486〕；エン
ベロープ、ＮＳ−１、ＮＳ−２およびＮＳ−３の蛋白質
〔Wangら、ヨーロッパ公開特許第０４６８５２７号公
報、１９９２年１月２９日発行〕；ＮＳ−４蛋白質〔Ho
ughton（1989年）; Kuo ら（1989年）, Science, 244:
362;米国特許第５，１０６，７２６号明細書〕；および
ＮＳ−５蛋白質〔Maeno ら（1990年）, Nucleic Acids
Res., 18:2685；Wang（1992年）〕で報告されている。

【０００６】ＨＣＶ由来の抗原に加え、宿主の細胞性配
列によってコードされていると思われる他のＨＣＶ関連
抗原も存在する。ＧＯＲエピトープとして公知のそのよ
うな抗原の一つは、ＨＣＶに関してＰＣＲ陽性である個
体からの血清に対して反応性である〔Mishiro ら（1990
年）, Lancet, 336: 1400 〕。

【０００７】ある種のＨＣＶ抗原性領域内での抗原性部
位の位置をマッピングするには、Wang（1992年）および
米国特許第５，１０６，７２６号明細書に記載されてい
るとおり、血清学的分析が用いられている。これらのマ
ッピングの研究は、充分に特徴付けされたＨＣＶの血清
パネルをスクリーニングするのに合成ペプチドを用い、
高度に免疫反応性であるＨＣＶ抗原性部位の同定を可能
にした。

【０００８】ＨＣＶに対する抗体の検出に合成ペプチド
が効果的であることが立証されたことにより、短い合成
ペプチドを用いて抗原性部位を特徴付ける多数の研究が
導かれた。例えば、ＨＣＶ−１ゲノム全体にペプスキャ
ン（Pepscan ）という手法が適用されて、免疫反応性部
位の解明が始められた〔Chien ら、国際公開公報第９３
／００３６５号〕。

【０００９】コア蛋白質においては、第２１〜４５位の
アミノ酸残基内に位置する免疫優性抗原性部位が記載さ
れている〔Nagayamaら（1994年）, J. Med. Virol., 4
2: 311-317; Siemoneitら（1994年）, Hybridoma, 13:
9-13; Ferroniら（1993年）,J. Clin. Microbiol., 31:
1586-1591; Ishidaら（1993年）, J. Clin. Microbio
l., 31: 936-940〕（註：ここでは、アミノ酸の番号付
けの体系は、ＨＣＶ−１ポリ蛋白質の番号付けの体系を
意味する）。ヒト単一特異性抗体が第３３〜５０位のコ
ア残基に対応するペプチドに結合すること〔Akatsukaら
（1993年）, Hepatology, 18: 503-510 〕が見出され、
また、コアに対するヒトモノクローナル抗体の結合部位
が第３４〜４５位の残基にマッピングされた〔Cerinoら
（1993年）, J. Immunol., 151: 7005-7015 〕。第２６
〜４５位のコア残基に結合するマウスモノクローナル抗
体が記載されている〔Gonzalez-Peraltaら（1994年）,
J. Hepatol., 20: 143-147〕。合成ペプチドによる研究
によって、コアのＮ末端の別の抗原性部位が、第１〜１
８位の残基に示されている〔Sallbergら（1992年ａ）,
J. Clin. Microbiol., 30: 1989-1994; Sallbergら（19
92年ｂ）, Immunol. Lett., 33: 27-33 〕。これら２つ
の部位の間には、第１１〜２８位の残基〔Sallberg（19
92年ａ）〕および第７〜２１位の残基〔Ferroni 〕に、
更に抗原性ペプチドが同定された。

【００１０】ＮＳ−３においては、コンフォメーショナ
ルエピトープが、ｃ−３３ｃクローンのＣ末端の１００
個のアミノ酸の中に同定された〔Kinkら、国際公開公報
第９３／０９２５３号〕。この免疫優性抗原性部位に特
異的なヒトモノクローナル抗体も、ＮＳ−３のＣ末端に
結合した〔Mondelliら（1994年）, J. Virol., 68: 482
9-4836; Habetsら、国際公開公報第９４／１４９７４
号〕。

【００１１】合成ペプチドによる研究によって、ＮＳ−
４蛋白質中の２個のエピトープが第１，６９１〜１，７
０８位および第１，７１０〜１，７２８位のアミノ酸残
基にマッピングされた〔Simmondsら（1993年）, J. Cli
n. Microbiol., 31: 1493-1503〕。マウスモノクローナ
ル抗体が第１，７００〜１，７０５位の残基に結合し
〔Gonzalez-Peralta（前出）〕、ＮＳ−４蛋白質に対す
るヒトモノクローナル抗体が、第１，６８８〜１，７０
５位の残基に結合することが報告された〔Cerinoら（19
91年）, J. Immunol., 147: 2692-2696 〕。

【００１２】感染性因子からの多くの蛋白質、または少
なくともこれらの蛋白質の部位は、配列レベルでの株変
異を示す。例えば、与えられた時間に、または特定の地
理的位置で、ある特定の抗原が、任意の原型（プロトタ
イプ）株に関して１種類またはそれ以上の点突然変異を
有することがある。それによって、動的な変異は、極め
て複雑な抗原プロフィールをそのような部位に生み出す
ことができ、そのような部位についての高感度な、また
は特異的な検出は、その部位が原型から更に「漂移する
（drifts）」ことから、ますます困難となる可能性があ
る。したがって、複雑な抗原は、複数の株を検出するた
めの単純化された手段を提供する可能性がある。

【００１３】ＨＣＶに関しては、現在までに、ＨＣＶの
複数の蛋白質または領域からの合成ペプチドの組合せが
ＨＣＶの診断試験として有効であることが証明されてい
る〔Ishida; Wang（1992年）〕。有用ではあるが、その
ような試験は、ある一つの株の配列を示すにすぎない。
公知のＨＣＶの配列変異性〔Bukhら（1993年）, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 90: 8234-8238 〕は、ペプチド
に基づく試験であれ、組換え蛋白質に基づく試験であ
れ、高感度な抗体検出のための問題を依然として提起し
ている。日本のＨＣＶ株に基づくＫＣＬ−１６３と呼ば
れる合成ペプチド試験は、日本人の集団においてはＣ１
００−３という試験（ＨＣＶ−１株に基づく）より高感
度で特異的であることが証明された〔Kawanoら（1991
年）, Gastroenterol. Jpn., 26: 218-220〕。ＲＩＢＡ
様式における５−１−１、Ｃ−３３ｃおよびＣ−２２と
いうＨＣＶ−１クローンは、１型のＨＣＶ感染血清より
も２型のＨＣＶ感染血清からの抗体を良好に検出した
〔Alonsoら（1994年）, J. Clin.Microbiol., 32: 211-
212〕のに対し、Ｃ１００−３は、２型の血清より１型
のそれについて高感度であった〔Nagayamaら（1993
年）, J. Clin. Invest., 92:1529-1533 〕。

【００１４】更に、ＮＳ−４からの型特異的合成ペプチ
ドは、ＨＣＶの遺伝子型を識別するのに用いることがで
きる〔Simmonds〕。しかし、あるＨＣＶ変異種のコアペ
プチド（第１０１〜１０８位のアミノ酸）中の１個のア
ミノ酸は、８種類の異なるＨＣＶ−１血清との反応性を
低下させた〔Sallberg（1992年ａ）〕。

【００１５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ペプチドラ
イブラリーを用いることによって、ＨＣＶ抗体の検出に
関して高感度かつ選択的であり、株に関連する抗原性変
異に順応できるペプチドを提供することを目的とする。

【００１６】

【課題を解決するための手段】本発明は、式：（ペプチド）−Ｙ、（ペプチド）₂ Ｘ、（ペプチド）₄ Ｘ₂ Ｘ、（ペプチド）₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘおよび（ペプチド）₁₆Ｘ₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘ〔式中、Ｙは、（ペプチド）のＣ末端アミノ酸のカルボ
キシル基のＯＨまたはＮＨ₂ 基であり、Ｘは、それぞれ
ペプチド結合を形成し得る２つのアミノ基と１つのカル
ボキシル基を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体であ
る〕で示される少なくとも１種類の直鎖のペプチドまた
は少なくとも１種類の分枝鎖のペプチドを含むペプチド
組成物に向けられている。本発明によれば、ペプチド部
分、すなわち（ペプチド）は、ＮＡＮＢＨ関連抗体と特
異的に免疫反応性であり、配列番号５〜３４（後記表
１、３、５および７を参照されたい）よりなる群から選
ばれたアミノ酸配列を含むか、または下記に記載された
とおりの特定の置換および縮重位置を含む後記式１、
２、３または４のペプチドのうちの１つである。

【００１７】本発明の別の側面は、免疫検定手順、特に
ＥＬＩＳＡ手順または受動血球凝集（ＰＨＡ）検定にお
いて、免疫有効量の主題ペプチド組成物を用いることに
よる、ＨＣＶに対する抗体を検出する方法、またはＨＣ
Ｖ感染もしくはＮＡＮＢＨの診断法を提供する。ＮＡＮ
ＢＨおよびＨＣＶ感染の検出および診断のための免疫検
定法およびキットも提供される。

【００１８】本発明によれば、大規模な血清学的分析に
よって、ＨＣＶ感染の検出および診断に有用である免疫
反応性ペプチドの精製およびより詳細な定義が導出され
る。予想外なことに、原型ＨＣＶ配列中に天然および非
天然アミノ酸の複数の置換を含む合成ペプチドは、ＨＣ
Ｖ感染の検出および診断に著しく効果的であることが発
見された。同様に、これらの多重置換ペプチドは、配列
変異性とともに縮重位置を有して、ＨＣＶの複数の株に
対する高度の選択性および感度を与えることができる。
上記により、本発明の好ましいペプチドを表１、３、５
および７に列挙する。

【００１９】表中の各ペプチドは、下記に示す４種類の
原型配列のうちの１つに関連するそのペプチド部分に、
特定のパターンの置換、欠失または縮重位置を有する：

【００２０】Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−
Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ− Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ− Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ（配列番号１）

【００２１】Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−
Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ− Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−
Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ− Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｙ−ＬｅｕＩＩＨ（配列番号２）

【００２２】 Ser-Thr-Ile-Pro-Lys-Pro-Gln-Arg-Lys-Thr-Lys-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro- Gln-Asp-Val-Lys-Phe-Pro-Gly-Gly-Gly-Gln-Ile-Val-Gly-Gly-Val-Tyr-Leu-Leu- Pro-Arg-Arg-Gly-Pro-Arg-Leu-Gly-Val-Arg-Ala-Thr-Arg-Lys-Thr-Ser-Glu-Arg- Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg VIIIＥ（配列番号３）

【００２３】 Lys-Ala-Ile-Pro-Leu-Glu-Val-Ile-Lys-Gly-Gly-Arg-His-Leu-Ile-Phe-Cys-His- Ser-Lys-Lys-Lys-Cys-Asp-Glu-Leu-Ala-Ala-Lys-Leu-Val-Ala-Leu-Gly-Ile-Asn- Ala-Val-Ala-Tyr-Tyr-Arg-Gly-Leu-Asp-Val-Ser-Val-Ile-Pro-Thr-Ser-Gly-Asp- Val-Val-Val-Val-Ala-Thr-Asp-Ala-Leu-Met-Thr-Gly-Tyr-Thr-Gly-Asp-Phe-Asp- Ser-Val-Ile-Asp-Cys-Asn-Thr-Cys-Val （配列番号４）

【００２４】ここで用いられる限り、原型配列中の、１
つのアミノ酸が他の１つのアミノ酸で置き換えられた位
置を、「置換位置」と呼ぶ。同様に、原型配列中の、そ
のアミノ酸が存在しない位置を、「欠失位置」と呼ぶ。
最後に、原型配列中の、単一のアミノ酸がペプチド合成
中に２以上のアミノ酸の混合物で置き換えられた位置
（すなわち、下記のライブラリーペプチドに関するよう
なもの）を、「縮重位置」と呼ぶ。

【００２５】本発明のペプチドは、直鎖であるか、また
は分枝鎖であることができ、本発明は、該ペプチドの重
合体、複合体（コンジュゲート）および混合物を包含す
る。いくつかのペプチドは、異なるＨＣＶ蛋白質、例え
ばＮＳ−４およびコア由来の１種類またはそれ以上のＨ
ＣＶ抗原のハイブリッドである。

【００２６】更に、ペプチドのうちいくつかは縮重位置
を含有する。すなわち、これらのペプチドは、ＷＯ９５
／１１９９８出願公開公報に一般的に記載されたとおり
のペプチドの「ライブラリー」を示す〔ここで用いられ
る限り、「ライブラリーペプチド」は、上記出願中の
「構造合成抗原ライブラリー」、すなわち「ＳＳＡＬ」
も意味する〕。

【００２７】ライブラリーペプチドに関しては、縮重ア
ミノ酸の位置は、既知の配列変異性を有するアミノ酸の
位置、すなわちＨＣＶ分離株の株間差によって生起され
るそれらの位置である。したがって、縮重位置は、２種
類以上のアミノ酸残基のうちいずれか１個を含む。与え
られた位置について可能な残基は、ペプチドの配列中の
その位置に生じる既知の配列変異から決定される。特定
の位置での合成の際に用いられるアミノ酸の比率は、与
えられたそれらの残基が既知の変異株中に出現する頻
度、またはその位置での可能なアミノ酸の単なる等モル
分布のいずれかによって表すことができる。本発明に関
しては、株変異を生じやすい配列位置の必ずしもすべて
を用いる必要はないことに注目しなければならない。

【００２８】ここで用いられる限りにおいて、直鎖ペプ
チドは、約３０〜約１００個、好ましくは約４０〜約８
５個のアミノ酸を有することができる。しかし、直鎖ペ
プチドは、８または９個という少数の残基からなること
もできる。

【００２９】本発明のペプチドは、体液中のＨＣＶに対
する抗体の検出、およびＨＣＶ感染の診断に役立つ。

【００３０】主題ペプチドは、末端アミノ酸に付加され
た、非天然アミノ酸を包含する更にいくつかのアミノ酸
を有することができる。例えば、ＫＫＫ（Lys-Lys-Lys
）という配列を、これらのどのペプチドのアミノ末端
にも付加することができる。分枝鎖ペプチドに関して
は、ペプチド部分のカルボキシル末端に、すなわちペプ
チド部分と分枝構造との間に、Ｍ（メチオニン）残基を
置くことができる。同様に、ペプチドは、Ｃ末端にシス
テインを有させて、Ｎα−クロロアセチル修飾アミノ酸
や、もう１つのペプチドのＮ末端に結合したリシン残基
のマレイミド誘導α−もしくはε−ＮＨ₂ 基などの求電
子的原子団との共有結合の形成を、システインのチオー
ル基を用いて促進することができる。

【００３１】ＨＣＶは、頻繁な突然変異を有することが
知られている。いくつかの変異株／分離株、例えばＰ
Ｔ、Ｊ、Ｊ１およびＪ４が存在することが知られ〔Houg
hton（1989年）; Okamoto （1990年）; Houghton（1990
年）；およびKato（1990年）〕、他の変異株も存在する
ことが予測されている（Bukh）。与えられたペプチド中
の置換、欠失または縮重位置のパターンが維持されるな
らば、規定された配列において、株変異から生じる保存
的置換に対する調整を実施することができる。このよう
にして、本発明のペプチドは、該ペプチドの抗原性には
影響しない変化を通じて、ＨＣＶの異なる分離株に存在
する株間変異に順応させることができる。

【００３２】上記により、本発明の範囲内で企図される
変化は、ＨＣＶ抗体とのペプチドの免疫反応性を保存す
るが、置換、欠失または縮重位置のパターンには影響し
ない。変化は、後記表１、３、５または７からのペプチ
ド中の約２〜約５ケ所の位置、またはこれに代えて約１
０％までの位置の置換、挿入、欠失もしくは縮重からな
ることができる。その上、企図される変化は公知のＨＣ
Ｖ株に由来する。

【００３３】本発明によるそのようなペプチドは、下記
に述べるとおり、合成され、かつＨＣＶ血清パネルに対
して試験されて、ペプチドの免疫反応性が決定される。

【００３４】主題ペプチドは、複合体を形成するのに用
いることもできる。すなわち、当業界に公知である方法
を用いて、該ペプチドを担体蛋白質、例えばウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）
と、または赤血球もしくはラテックス粒子と、直接もし
くは間接的に結合させることができる。

【００３５】ここで用いられる限り、天然アミノ酸と
は、蛋白質中に一般的に見いだされる２０のアミノ酸
（すなわち、アラニン、アスパラギン酸、アスパラギ
ン、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン、
グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、
リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セ
リン、スレオニン、チロシン、トリプトファンおよびバ
リン）である。ここで用いられる限り、天然アミノ酸
は、そのようなアミノ酸のＤ−およびＬ−形態も包含す
る。

【００３６】ここで用いられる限り、「非天然アミノ
酸」は、蛋白質中に見いだされるか、自然界に見いださ
れるか、または合成によって製造されるかを問わず、Ｄ
−およびＬ−形態両方の、その他のいかなるアミノ酸も
包含する。非天然アミノ酸としては、β−アラニン、オ
ルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロ
リン、チロキシン、γ−アミノ酪酸、ホモセリン、シト
ルリンその他を挙げられるが、それらに限定されない。

【００３７】本発明の直鎖ペプチドは、式：（ペプチド）−Ｙ〔式中、ＹはＣ末端アミノ酸のカルボキシル基の−ＯＨ
または−ＮＨ₂ である〕で示され、これら直鎖ペプチド
の混合物、複合体および重合体を包含する。該ペプチド
は、ＨＣＶに対する抗体と特異的に免疫反応性である少
なくとも１つの抗原性部位を含む。

【００３８】本発明の分枝鎖ペプチドは、式：（ペプチド）₂ Ｘ、（ペプチド）₄ Ｘ₂ Ｘ、（ペプチド）₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘまたは（ペプチド）₁₆Ｘ₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘ〔式中、Ｘは、それぞれペプチド結合による結合を形成
し得る２つのアミノ基と１つのカルボキシル基を有する
アミノ酸またはアミノ酸類似体である〕で示される。好
ましくは、Ｘはリシン、またはオルニチンなどのリシン
類似体である。アミノ酸類似体は、ペプチド結合を形成
するのに利用できる２つのアミノ基と１つのカルボキシ
ル基を有するα−アミノ酸、β−アミノ酸、または他の
天然もしくは非天然のいかなるアミノ酸であることもで
きる。本発明の好ましい分枝鎖ペプチドは、特にリシン
で構成される分岐したコア構造を有する、すなわちＸが
リシンである二量体、四量体および八量体である。分枝
鎖二量体および八量体が特に好適である。

【００３９】直鎖または分枝鎖ペプチドのペプチド部分
は、約８または９〜約１００アミノ酸残基の長さで変化
することができる。好ましくは、該ペプチド部分は、約
９〜約６０アミノ酸残基を含む。

【００４０】本発明の好ましいペプチドを後記表１、
３、５および７に挙げる。

【００４１】本発明のもう１つの側面は、式１、２、３
または４で示されるペプチドのうち１種類以上を有する
ペプチド組成物に関する。

【００４２】式１のペプチドは、配列番号４の８１アミ
ノ酸の原型配列のフレームを実質的に保持するペプチド
であって、ＨＣＶのＮＳ−３抗体と免疫反応性であり、
そして下記の置換、欠失または縮重位置、すなわち、位置３：ノルバリン、位置７：ノルバリン、もしくは３：３：１：１：１：１
の比のVal : Ala : Thr : Phe : Tyr : Nvl 、位置８：バリンもしくはノルバリン、位置１６：ノルバリン、位置２０：アルギニン、位置２６：ノルロイシン、位置３３：ノルロイシン、位置３９：セリン、位置４６：ノルバリン、位置５２：アラニン、位置６０：セリン、位置６３：ノルロイシン、位置６８：セリン、および位置７４：ノルバリンを有する。Nvl はノルバリンの略号である。ここで式１
〜４で参照される位置は、それぞれ配列番号１〜４中の
それらに関連付けられる。

【００４３】式２のペプチドは、配列番号３の６１アミ
ノ酸の原型配列のフレームを実質的に保持するペプチド
であって、ＨＣＶコア抗体と免疫反応性であり、そして
下記の置換または縮重位置、すなわち、位置４：９：１の比のPro : Gly 、位置８：オルニチン、位置１０：７：３の比のThr : Asn 、位置１６：リシン、位置２１：ノルバリン、位置２４：ヒドロキシプロリン、位置３０：ノルバリン、位置３６：バリンもしくはノルロイシン、位置４３：ノルロイシン、位置４５：ロイシン、位置４８：９：１の比のThr : Pro 、位置５２：スレオニン、もしくは１：１：１：１の比の
Thr : Ala : Glu : Lys 、および位置５７：ヒドロキシプロリン、を有する。

【００４４】式３のペプチドは、配列番号２の４７アミ
ノ酸の原型配列と、それに続く配列番号３の第２１〜２
９位の残基の９アミノ酸の原型配列とのフレームを実質
的に保持するペプチドであって、ＨＣＶのＮＳ−４また
はコア抗体と免疫反応性であり、そして下記の置換また
は縮重位置、すなわち、位置１：８：２の比のSer : Asn 、位置２：８：１：１の比のGly : Asp : Gln 、位置３：６：４の比のLys : Arg 、位置４：８：１：１の比のPro : Val : Ala 、位置５：スレオニン、位置６：６：４の比のIle : Val 、位置７：６：２：２の比のIle : Val : Ala 、位置１０：８：２の比のArg : Lys 、位置１２：ノルバリン、位置１５：３：５：２の比のArg : Gln : Glu 、位置１６：８：２の比のGlu : Ala 、位置１９：アスパラギン酸、位置２２：アスパラギン酸、位置２４：４：６の比のSer : Ala 、位置２５：４：６の比のGln : Ser 、位置２６：８：１：１の比のHis : Lys : Arg 、位置２７：８：２の比のLeu : Ala 、位置２８：８：２の比のPro : Ala 、位置２９：８：２の比のTyr : Leu 、位置３０：ノルロイシンもしくはノルバリン、位置３１：アスパラギン酸、位置３２：８：２の比のGln : Glu 、位置３４：８：２の比のMet : Gln 、位置３５：４：４：２の比のMet : Gln : Arg 、位置３６：８：１：１の比のLeu : Met : Ile 、位置３９：アスパラギン、位置４０：８：２の比のPhe : Leu 、位置４２：８：２の比のGln : Ser 、位置４４：８：２の比のAla : Ile 、または位置４５：
バリン、および位置５５：アスパラギン、を有する。

【００４５】式４のペプチドは、配列番号１の４４アミ
ノ酸の原型配列のフレームを実質的に保持するペプチド
であって、ＨＣＶのＮＳ−５抗体と免疫反応性であり、
そして下記の置換または縮重位置、すなわち、位置２：オルニチン、位置８：８：１：１の比のPro : Leu : Val 、位置１０：ノルバリン、位置１２：５：４：１の比のThr : Ser : Pro 、位置１５：４：４：２の比のLys : Asp : Arg 、位置１７：グルタミン酸、位置１９：５：４：１の比のGlu : Val : Gln 、位置２１：９：１の比のPro : Ala 、位置２２：８：２の比のVal : Thr 、位置２３：ノルバリン、位置２４：８：１：１の比のHis : Leu : Ala 、位置２７：８：２の比のPro : Ala 、位置３０：９：１の比のPro : Ser 、位置３１：ヒドロキシプロリン、位置３２：８：１：１の比のLys : Pro : Arg 、位置３３：４：４：１：１の比のSer : Ala : Lys : Gl
n 、位置３４：８：２の比のPro : Thr 、位置３６：５：４：１の比のVal : Ile : Thr 、位置３７：ヒドロキシプロリン、位置４１：４：６の比のLys : Arg 、位置４２：７：３の比のLys : Arg 、および位置４４：９：１の比のThr : Ala を有する。

【００４６】式１、２、３および４で示されるペプチド
は、直鎖であることも、分枝鎖であることもでき、本発
明は、ここに記載されるとおりの実施態様によれば、こ
れらのペプチドの重合体、複合体および混合物を包含す
る。

【００４７】ここで用いられる限り、「ＨＣＶのＮＳ−
３抗体」は、ペプチド第４番（配列番号４）と免疫反応
または結合する抗体を含む抗体または血清もしくは血漿
試料を包含する。ここで用いられる限り、「ＨＣＶのコ
ア抗体」は、ペプチドVIIIＥ（配列番号３）と免疫反応
または結合する抗体を含む抗体または血清もしくは血漿
試料を包含する。ここで用いられる限り、「ＨＣＶのＮ
Ｓ−４抗体」は、ペプチドIIＨ（配列番号２）と免疫反
応または結合する抗体を含む抗体または血清もしくは血
漿試料である。ここで用いられる限り、「ＨＣＶのＮＳ
−５抗体」は、ペプチド第１番（配列番号１）と免疫反
応または結合する抗体を含む抗体または血清もしくは血
漿試料を包含する。

【００４８】本発明のペプチド組成物は、主題ペプチド
のうち１種類またはそれ以上で構成されることができ
る。好ましくは、そのような組成物は、１〜１０種類の
ペプチド、より一層好ましくは１〜４種類のペプチドを
含有する。

【００４９】好適実施態様においては、本発明のペプチ
ド組成物は、ペプチド第２９、３３、２５、１９、２８
および２７番、好ましくはペプチド第２９、３３、２５
および１９番を含有する（ペプチドは、それらの各々の
配列表の配列番号によって指定されている）。

【００５０】その上、本発明のペプチド組成物は、ペプ
チドの混合物を包含する。主題ペプチドの混合物を含有
するペプチド組成物中に存在する、ＨＣＶを診断または
検出するのに有効なペプチドの比は、当業界の通常の技
量を有する者が容易に決定することができる。代表的に
は、これらの比は、ペプチドの重量あたりのベースで約
１〜約５０の範囲にわたる。

【００５１】ＨＣＶ感染の診断および検出に好適なペプ
チド組成物は、ペプチド第２９、３３、２５および１９
番を包含する混合物Ａ；ペプチド第２７、３３、２５お
よび１９番を包含する混合物Ｂ；ならびにペプチド第３
３、２５、１９および２８番を包含する混合物Ｃとして
知られるペプチドの混合物から選ばれる。好適実施態様
では、混合物Ａを１：１：０．５：８の重量比でコーテ
ィングする。

【００５２】ＨＣＶ抗体の検出かつ診断における主題ペ
プチドの効力を決定するには、ペプチドを、ＨＣＶとの
免疫反応性について何千もの患者および正常血清のスク
リーニングを通じて予め選んだ標本との免疫反応性につ
いて試験する。そのようなＨＣＶ特異的血清パネルは商
業的に入手可能であり、血清パネル、および適切なパネ
ルを選ぶ方法の例を実施例で提供する。

【００５３】血清学的確認のための戦略は、標的となる
抗原性部位の予測される特性に依存する。例えば、普遍
的な免疫優性部位、例えばＨＩＶ−１の膜貫通（トラン
スメンブレン）ペプチドであるｇｐ４１は、該ウイルス
に感染していることが知られている患者からの単一の代
表的血清試料を用いてスクリーニングすることができ
る。感染したすべての個体によって認識されない抗原性
部位、またはそれに対する抗体が遅れて、もしくは一時
的にのみ生成される抗原性部位は、血清の大規模なパネ
ルを用いてスクリーニングしなければならない。本発明
では、スクリーニングの両方法とも、本発明において主
題ペプチドを用いてＨＣＶについての抗原解析を精密化
するのに用いることができ、後者の方法は、より優れた
選択性および感度について主題ペプチドを評価するのに
特に役立つ。

【００５４】抗原性部位の同定は、用いた血清のパネル
にも依存する。ある部位について血清学的陽性である可
能性が最も高い集団をパネルがより近似的に表すほど、
その抗原性部位が同定され、完全にマッピングされる公
算が大となる。したがって、以前に同定された抗原性部
位またはエピトープを含む検定の反応性の範囲を拡大す
るには、感染のおそれがあるが、既知の抗原またはエピ
トープに対して血清学的陰性である個体からの多数の試
料をスクリーニングに用いるべきである。

【００５５】「血清学的確認」の方法は、同定しようと
する抗原性部位が、感染した患者群のサブ集団において
のみ抗体を生起する場合は、特に困難である。そのよう
な抗原が同定のための標的となるときは、非常に弱い反
応性を示す合成ペプチドに対して特別な注意を払わなけ
ればならない。

【００５６】この点で、合成ペプチド、特に非天然アミ
ノ酸を含むペプチドの低いバックグラウンド吸光度は、
弱い反応性の正確な検出を可能にする。ある場合には、
バックグラウンドの読みに対比して５０mAという吸光度
が充分に有意であり、ペプチドのアミノ酸配列の連続的
純化を通じて、重要な抗原性部位の同定に導くことがで
きる。優良な実験室実務によれば、２００〜３００mA未
満の吸光度の範囲で作業した場合に、整合性があり、信
頼し得る結果を得ることができる。

【００５７】ペプチドは、標準的手法、例えば合成のメ
リフィールド法〔Merrifield（1963年）, J. Am. Chem.
Soc., 85: 2149-2154〕を用いて、容易に合成すること
ができる。

【００５８】組換えによって発現させた蛋白質（または
ペプチド）ではないペプチドを用いることによって最小
化できるもう一つの問題は、ＨＣＶ組換え体とともに同
時精製された抗原性物質の存在が生起する偽陽性の結果
の比率である。例えば、ある正常な個体は大腸菌（Esch
erichia coli）または酵母の蛋白質に対する抗体を有す
るが、これらは、組換え体に基づく診断試験に用いられ
る発現系からの抗原性物質と交差反応性である。そのよ
うな正常個体からの血清は、そのような免疫検定では偽
陽性反応を示すことがあるが、この偽反応は、本発明の
免疫検定では排除される。

【００５９】その上、本発明のペプチド組成物は合成に
よって製造されることから、品質を制御することがで
き、その結果、試験結果の再現性を保証することができ
る。また、各試験操作には非常に少量のペプチドしか必
要とされないこと、そしてペプチドを調製する原価が相
対的に廉価であることから、ＨＣＶに対する抗体につい
ての体液のスクリーニング、およびＨＣＶ感染の診断の
費用が相対的に廉価である。

【００６０】その他の利点として、ライブラリーペプチ
ドの使用は、より多数のＨＣＶ株に対してより幅広い範
囲の反応性を有する検定を与える。本質的には、ライブ
ラリーペプチドの縮重位置は、ＨＣＶの複数の株に起因
する株特異的配列変異（およびそれに伴う抗体特異性の
変異）に順応する「開放的な」診断手段を表す。したが
って、ライブラリーペプチドは、抗原性ペプチドがより
広範囲のＨＣＶ変異株に特異的である抗体と反応できる
可能性を増大させる。

【００６１】本発明に従って製造されるペプチドおよび
ペプチド組成物は、それらを酵素結合免疫吸着検定（Ｅ
ＬＩＳＡ）、酵素免疫ドット検定、受動血球凝集検定
（例えばＰＨＡ試験）、抗体−ペプチド−抗体サンドイ
ッチ検定、ペプチド−抗体−ペプチドサンドイッチ検定
その他の周知の免疫検定法における試験試薬として用い
ることによって、ＨＣＶ感染を検出かつ診断するのに用
いることができる。本発明によれば、主題ペプチドは、
適切ないかなる免疫検定法に用いることもできる。その
ような手法は、通常の技量を有する当業者に充分に公知
であり、多くの標準的な免疫学マニュアルおよび教本
〔例えば、Harlowら著（1988年）, Antibodies: A Labo
ratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press
社，米国ニューヨーク州Cold Spring Harbor, ７２６ペ
ージを参照されたい〕に記載されている。好適実施態様
においては、免疫検定法は、本発明のペプチド組成物で
コーティングした固相を用いるＥＬＩＳＡである。ＥＬ
ＩＳＡの手法は、当業界で充分に公知である。もう一つ
の好適実施態様においては、免疫検定法はＰＨＡ検定で
ある。

【００６２】本発明の免疫検定法は、ＨＣＶ反応性抗体
の存在について体液および組織をスクリーニングし、そ
れによってＨＣＶ感染の診断の際に実施者を支援するの
に用いられる。スクリーニングすることができる体液と
しては、血液および血液画分（例えば血漿および血
清）、唾液、またはＨＣＶに対する抗体を含有すること
が疑われる他のいかなる液体もが包含される。

【００６３】本発明のもう一つの側面は、哺乳類の体液
（例えば血清、組織抽出物、組織液）、生体外（in vit
ro）細胞培養上清および細胞溶解物（ライセート）中の
ＨＣＶ抗体の検出またはＨＣＶ感染の診断のためのキッ
トに向けられている。該キットは、本発明の１種類また
はそれ以上のペプチド（すなわちペプチド組成物）を収
容するのに適合させた第一の容器を受容するよう区画化
することができる。

【００６４】好ましくは、本発明のキットは、ＨＣＶ抗
体の検出またはＨＣＶ感染の診断のためのＥＬＩＳＡま
たはＰＨＡ試験キットである。ＥＬＩＳＡ試験キットの
ためには、該キットは、（ａ）主題ペプチド組成物のう
ち１種類でコーティングした固相を有する容器（例えば
９６穴プレート）；（ｂ）陰性対照試料；（ｃ）陽性対
照試料；（ｄ）標本希釈剤、および（ｅ）レポーター分
子で標識された、ヒトＩｇＧに対する抗体、を包含す
る。レポーター分子が酵素である場合、キットは該酵素
の基質も含む。

【００６５】主題キットの例示された使用においては、
試験しようとする試料を、哺乳類の体液に（必要ならば
試料希釈剤で希釈したもの）、何らかの抗体が存在する
場合それが容器に含まれたペプチドと結合するような時
間および条件下で接触させる。結合していない物質を
（例えば無菌のリン酸緩衝生理食塩水で洗浄することに
よって）除去した後、二次複合体を、ヒトＩｇＧに対す
る標識抗体に接触させる。これらの抗体は、二次複合体
と結合して三次複合体を形成し、二次抗体がレポーター
分子で標識されていることから、検出手段に付されたと
きに、三次複合体が検出される。レポーター分子は、酵
素、放射性同位元素、蛍光団、生物発光分子、化学発光
分子、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンなどで
あることができる。ＥＬＩＳＡのためには、レポーター
分子は、好ましくは酵素である。

【００６６】

【実施例】実施例は、本発明を例示するのに役立つもの
であり、発明の範囲を限定するために用いられるべきで
はない。

【００６７】実施例１：ＥＬＩＳＡの検定方法９６穴プレートのウェルは、別途注記のない限り、１ウ
ェルあたり１００μlを用いて、１０mMのＮａＨＣＯ₃
緩衝液（pH９．５）中の５μg/mlのペプチドで、３７℃
で１時間、個別にコーティングした。

【００６８】ペプチドでコーティングしたウェルを、Ｐ
ＢＳに溶かした３重量％のゼラチン２５０μl と共に３
７℃で１時間インキュベートして、蛋白質の非特異的結
合部位をブロッキングし、次いで、０．０５体積％のTw
een ２０を含有するＰＢＳで３回洗浄し、乾燥した。Ｈ
ＣＶ抗体陽性患者の血清を含む試験標本を、２０体積％
の正常ヤギ血清、１重量％のゼラチンおよび０．０５体
積％のTween ２０を含有するＰＢＳで１：２０の体積比
に希釈した。希釈した標本１００μl を各ウェルに加
え、３７℃で３０分間反応させた。

【００６９】次いで、結合していない抗体を除くため
に、ＰＢＳに溶かした０．０５体積％のTween ２０でウ
ェルを６回洗浄した。セイヨウワサビのペルオキシダー
ゼを結合させたヤギの抗ヒトＩｇＧ抗体を第二の抗体ト
レーサーとして用いて、陽性のウェルに形成されたＨＣ
Ｖ抗体−ペプチド抗原複合体と結合させた。ＰＢＳに溶
かした１体積％の正常ヤギ血清および０．０５体積％の
Tween ２０で１：１，８００に希釈した、ペルオキシダ
ーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ１００μl を各ウェルに加
え、３７℃で更に１５分間インキュベートした。

【００７０】ＰＢＳに溶かした０．０５体積％のTween
２０でウェルを６回洗浄して結合していない抗体を除去
し、クエン酸ナトリウム緩衝液（pH５．０）中に０．０
４重量％のオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）および
０．１２体積％の過酸化水素を含有する基質混合物１０
０μl と反応させた。この基質混合物を、着色生成物を
形成させることによって、ペルオキシダーゼ標識を検出
するのに用いた。１．０M Ｈ₂ ＳＯ₄ １００μl の添
加によって反応を停止させ、Ａ₄₉₂nm を測定した。

【００７１】実施例２：ＮＳ−３反応性ペプチドの免疫
反応性実施例１のとおりに、９６穴プレートのウェルを表示さ
れた１７種類のペプチド（表２、その配列は表１に与え
られている）のそれぞれで、３７℃で１時間、個別にコ
ーティングした。ＮＳ−３蛋白質からの免疫優性コンフ
ォメーショナルエピトープとは反応性であるが、同じ領
域からの線状エピトープとは反応性でない血清の選ばれ
たパネルに対してペプチドを試験した。パネルのメンバ
ー（成員）は下記のとおりにして選んだ：商業的供給源
（North American Biologicals社）からのＨＣＶ血清学
的陽性の血漿標本を、コンフォメーショナルおよび線状
エピトープ〔Mondelli（1994年）〕を含有する合成ペプ
チド第４番（配列番号４）との反応性についてスクリー
ニングした。ペプチド第４番と反応性である標本を、Ｐ
ｅｐ１８〔Wang（1992年）〕に関して更にスクリーニン
グした。Ｐｅｐ１８は、線状エピトープを含有するが、
コンフォメーショナルエピトープは示さない。そうして
選ばれた血清パネルは、ペプチド第４番とは反応する
が、Ｐｅｐ１８とは反応しない標本を構成した。

【００７２】各ペプチドについて、４９２nmでのＥＩＡ
吸光度の読みの合計を表にまとめた（表２）。結果は、
ペプチドが、ペプチド第４番中に存在する部分的または
完全に保存されたコンフォメーショナルエピトープとの
反応性を有する（３６〜１０３％反応性）ことを示して
いる。

【００７３】

【表１】

【００７４】

【表２】

【００７５】実施例３：コア反応性ペプチドの免疫反応
性実施例１に記載したとおりのＥＬＩＳＡ検定様式で、コ
アに対する抗体を含有するＨＣＶパネル第３番からの一
群の既知のＨＣＶ血清試料を用いて、ペプチド第２２番
八量体および第２６番（表３）の免疫反応性を決定し
た。結果を表４に示す。ペプチド第２２番八量体および
第２６番の吸光度は、両方とも、試料第３−１、３−
３、３−８、３−２６および３−４１番で、ペプチドVI
IIＥ（配列番号３）のそれより大きかった。ペプチド第
２６番は試料第３−３９番でVIIIＥより強く、ペプチド
第２２番八量体は試料第３−１および３−４１番でVIII
Ｅより強かった。

【００７６】

【表３】

【００７７】

【表４】

【００７８】実施例４：ＮＳ−４反応性ペプチドおよび
ＮＳ−４／コア反応性ハイブリッドペプチドの免疫反応
性実施例１に記載したとおりのＥＬＩＳＡ検定様式で、Ｎ
Ｓ−４蛋白質に対する抗体を含有するＨＣＶパネル第３
番からの既知のＨＣＶ血清のパネルを用いて、ペプチド
３ＫIIＨ、第２７、２８、２９および３０番（表５）の
免疫反応性を決定した。結果を表６に示す。ペプチドは
すべて、いくつかの場合におけるペプチド第２７番を除
いて、原型のＨＣＶ−１株ペプチドである３ＫIIＨより
強い反応性を示した。

【００７９】

【表５】

【００８０】

【表６】

【００８１】実施例５：ＮＳ−５反応性ペプチドの免疫
反応性実施例１に記載したとおりのＥＬＩＳＡ検定様式で、Ｈ
ＣＶパネル第３番からの既知のＨＣＶ血清のパネルを用
いて、ＮＳ−５反応性ペプチド（表７）の免疫反応性を
評価した。結果（表８）は、これらのペプチドが同様の
免疫反応性を示すことを示している。定位置にアミノ酸
の混合物を含む３種類のライブラリーペプチド（第３
１、３２および３３番）はすべて、ライブラリーペプチ
ドではないペプチド第３４番に匹敵するか、またはそれ
より大きい免疫反応性を示した。

【００８２】

【表７】

【００８３】

【表８】

【００８４】実施例６：ペプチド混合物を用いたＨＣＶ
抗体の検出実施例１に記載したとおりのＥＬＩＳＡ検定様式で、ペ
プチド第２５、２９、３３および１９番（後者のペプチ
ドはＢＳＡとのコンジュゲート）を含有する混合物Ａ
を、２：２：０．５：８（μg/ml）の重量比でコーティ
ングし、２：２：０．５：８（μg/ml）の重量比でコー
ティングしたペプチド第２５番、第２７番八量体、第３
３および１９番（後者のペプチドはＢＳＡとのコンジュ
ゲート）を含有する混合物Ｂと比較した。

【００８５】ペプチド第１９番は、製造者の勧告（Pier
ce Chemical 社）またはKitagawaら（1976年）〔J. Bio
chem., 79: 233-236〕に従い、ｍ−マレイミドベンゾイ
ル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）
を用いて、ＢＳＡと結合させた。混合物Ａおよび混合物
Ｂの感度を評価するために、ＨＣＶのコア、ＮＳ−３、
ＮＳ−４またはＮＳ−５領域に特異的な免疫反応性を有
するパネルのメンバーを含有する特別に選んだ血清パネ
ルを用いて、これらの混合物を検定した。このパネル
は、コア特異的血清を同定するためにはペプチドVIIIＥ
（配列番号３）に対して、ＮＳ−４特異的血清を同定す
るためにはペプチドIIＨ（配列番号２）に対して、ＮＳ
−５特異的血清を同定するためにはＰｅｐ１１〔Wang
（1992年）〕に対して、そしてＮＳ−３特異的血清を同
定するためにはペプチド第４番（配列番号４）に対し
て、血清をスクリーニングすることによって調製した。
次いで、このように同定した血清を、これらの同じペプ
チドに対して弱ないし中程度の反応性を示すよう（すな
わち、４９２nmで０．３〜２．０の範囲の吸光度を与え
るよう）、正常ヒト血清で希釈した。そうして、希釈し
た試料は、混合物ＡおよびＢでの検定に用いられる特別
な感度のパネルを構成した（表９）。

【００８６】

【表９】

【００８７】この２種類の混合物は匹敵する感度を有し
た（表９）。

【００８８】実施例７混合物Ａ（実施例６）を、（ａ）ＨＣＶのコア蛋白質、
Ｂ１２．Ｆ８〔Cerino（1993年）〕、（ｂ）ＨＣＶのＮ
Ｓ−４蛋白質、６０Ｈ９

〔９〕Ｄ１０Ｅ６〔Cerino（19
91年）〕、および（ｃ）ＮＳ−３蛋白質のコンフォメー
ショナルエピトープ、ＣＭ３．Ｂ６〔Mondelli（1994
年）〕に特異的なヒトモノクローナル抗体の希釈系列を
用いて、感度について試験した。並行して、コア、ＮＳ
−３、ＮＳ−４およびＮＳ−５領域からの組換え蛋白質
の混合物で構成される商業的に入手可能な抗ＨＣＶキッ
ト（Ortho ＨＣＶ３．０）を用いて、同じ希釈系列を試
験した。３領域のすべてに対する抗体の検出の分析学的
感度は、混合物Ａのペプチドを用いると、商業的に入手
可能なキットの組換え蛋白質を用いて得られたものより
２〜８倍高かった（図１〜３）。

【００８９】実施例８ＰＣＲ分析〔Wangら（1992年）, Gastroenterology, 10
3: 609〕、またはChiron^* ＲＩＢＡ^* ＨＣＶ２．０スト
リップ免疫ブロット検定（^* ：米国ニュージャージー州
Raritan の、Ortho Diagnostic Systems社の登録商標）
によってＨＣＶ抗体陽性であると確認された合計１，０
３４の試料を、実施例１および６に従って、混合物Ａの
ＥＬＩＳＡで検定した。これらの試料は、慢性もしくは
急性肝炎のＮＡＮＢＨ患者、血友病患者、多重輸血患
者、血清変換を生じたＨＣＶ感染患者、および以前にＨ
ＣＶに感染したとして特定された供血者から採集した。
１，０３４の確認された陽性の試料はすべて、混合物Ａ
の検定において、１０という平均シグナル／カットオフ
比を有して陽性であった。

【００９０】無作為抽出の３，１５４の供血者試料の採
集物を、混合物ＡのＥＬＩＳＡで同様に試験した。検定
の特異性は、供血者集団で９９．５％を上回った。試料
の平均シグナル／カットオフ比は０．３であった。した
がって、確認された陽性試料は、無作為抽出の供血者試
料のそれより３３倍も高い平均シグナル／カットオフ比
を有した。

【００９１】

【配列表】

（１）一般的な情報：（ｉ）出願人：バーバラ・ホセインチャン・イー・ワン（ii）発明の名称：Ｃ型肝炎の感染の診断および検出に
効果的なペプチド（iii ）配列の数：３４（iv）連絡先：（Ａ）名宛人：Ｍ．リサ・ウィルソン（Ｂ）街：２５デービッズ・ドライブ（Ｃ）市：ホーポージ（Ｄ）州：ニューヨーク（Ｅ）国：米国（Ｆ）郵便番号：１１７８８（ｖ）コンピューター読取り形態：（Ａ）媒体タイプ：フロッピーディスク（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣ互換機（Ｃ）作動システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：PatentIn Release＃１．０、バー
ジョン＃１．２５（vi）本出願のデータ：（Ａ）出願番号：（Ｂ）出願日：１９９４年１１月１日（Ｃ）分類：（viii）代理人の情報：（Ａ）氏名：Ｍ．リサ・ウィルソン（Ｂ）登録番号：３４，０４５（Ｃ）参照／ドケット番号：２０００Ｙ（ix）電気通信情報：（Ａ）電話：（５１６）２７３−２８２８（Ｂ）テレファックス：（５１６）２７３−１７１７

【００９２】（２）配列番号：１（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号１

【００９３】

【表１０】

【００９４】（２）配列番号：２（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号２

【００９５】

【表１１】

【００９６】（２）配列番号：３（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号３

【００９７】

【表１２】

【００９８】（２）配列番号：４（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号４

【００９９】

【表１３】

【０１００】（２）配列番号：５（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７５アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号５

【０１０１】

【表１４】

【０１０２】（２）配列番号：６（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号６

【０１０３】

【表１５】

【０１０４】（２）配列番号：７（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号７

【０１０５】

【表１６】

【０１０６】（２）配列番号：８（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３８（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号８

【０１０７】

【表１７】

【０１０８】（２）配列番号：９（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３８（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号９

【０１０９】

【表１８】

【０１１０】（２）配列番号：１０（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（xi）配列の記載：配列番号１０

【０１１１】

【表１９】

【０１１２】（２）配列番号：１１（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１１

【０１１３】

【表２０】

【０１１４】（２）配列番号：１２（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（xi）配列の記載：配列番号１２

【０１１５】

【表２１】

【０１１６】（２）配列番号：１３（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５０（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（xi）配列の記載：配列番号１３

【０１１７】

【表２２】

【０１１８】（２）配列番号：１４（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｖ０．３０；Ａ０．３０；
Ｔ０．１０；Ｆ０．１０；Ｙ０．１０；ノルバリ
ン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３５（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（xi）配列の記載：配列番号１４

【０１１９】

【表２３】

【０１２０】（２）配列番号：１５（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１５

【０１２１】

【表２４】

【０１２２】（２）配列番号：１６（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１６

【０１２３】

【表２５】

【０１２４】（２）配列番号：１７（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１７

【０１２５】

【表２６】

【０１２６】（２）配列番号：１８（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｖ０．３０；Ａ０．３０；
Ｔ０．１０；Ｆ０．１０；Ｙ０．１０；ノルバリ
ン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１８

【０１２７】

【表２７】

【０１２８】（２）配列番号：１９（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号１９

【０１２９】

【表２８】

【０１３０】（２）配列番号：２０（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.30; A0.30; T0.10; F0.1
0; Y0.10;ノルバリン0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：８（Ｄ）他の情報：／注＝「バリン」または「ノルバリ
ン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号２０

【０１３１】

【表２９】

【０１３２】（２）配列番号：２１（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号２１

【０１３３】

【表３０】

【０１３４】（２）配列番号：２２（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号２２

【０１３５】

【表３１】

【０１３６】（２）配列番号：２３（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６２アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：９（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２２（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５８（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（xi）配列の記載：配列番号２３

【０１３７】

【表３２】

【０１３８】（２）配列番号：２４（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; G0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１１（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.70; N0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：５１（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｔ０．９０；Ｐ０．１０」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６０（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（xi）配列の記載：配列番号２４

【０１３９】

【表３３】

【０１４０】（２）配列番号：２５（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; G0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１１（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（ｉｘ）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.70; N0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２７（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５１（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.90; P0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６０（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（xi）配列の記載：配列番号２５

【０１４１】

【表３４】

【０１４２】（２）配列番号：２６（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; G0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１１（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.70; N0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５１（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.90; P0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５３（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５５（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.25; A0.25; E0.25; K0.2
5」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６０（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（xi）配列の記載：配列番号２６

【０１４３】

【表３５】

【０１４４】（２）配列番号：２７（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（xi）配列の記載：配列番号２７

【０１４５】

【表３６】

【０１４６】（２）配列番号：２８（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：５０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１５（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（xi）配列の記載：配列番号２８

【０１４７】

【表３７】

【０１４８】（２）配列番号：２９（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：５９アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.80; N0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５（Ｄ）他の情報：／注＝「G0.80; D0.10; Q0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.60; R0.40」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; V0.10; A0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：９（Ｄ）他の情報：／注＝「I0.60; V0.40」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１０（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｉ０．６０；Ｖ０．２０；
Ａ０．２０」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「R0.80; K0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１５（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１８（Ｄ）他の情報：／注＝「R0.30; Q0.50; E0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１９（Ｄ）他の情報：／注＝「E0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２７（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.40; A0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２８（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.40; S0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２９（Ｄ）他の情報：／注＝「H0.80; K0.10; R0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３０（Ｄ）他の情報：／注＝「L0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３２（Ｄ）他の情報：／注＝「Y0.80; L0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルロイシン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３５（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.80; E0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３７（Ｄ）他の情報：／注＝「M0.80; Q0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３８（Ｄ）他の情報：／注＝「M0.40; Q0.40; R0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「L0.80; M0.10; I0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４３（Ｄ）他の情報：／注＝「F0.80; L0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４５（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.80; S0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４７（Ｄ）他の情報：／注＝「A0.80; I0.20」（xi）配列の記載：配列番号２９

【０１４９】

【表３８】

【０１５０】（２）配列番号：３０（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：５９アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.80; N0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５（Ｄ）他の情報：／注＝「G0.80; D0.10; Q0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.60; R0.40」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; V0.10; A0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：９（Ｄ）他の情報：／注＝「I0.60; V0.40」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１０（Ｄ）他の情報：／注＝「I0.60; V0.20; A0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｒ０．８０；Ｋ０．２０」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１５（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１８（Ｄ）他の情報：／注＝「R0.30; Q0.50; E0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１９（Ｄ）他の情報：／注＝「E0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２７（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.40; A0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２８（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.40; S0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２９（Ｄ）他の情報：／注＝「H0.80; K0.10; R0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３０（Ｄ）他の情報：／注＝「L0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３２（Ｄ）他の情報：／注＝「Y0.80; L0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３５（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.80; E0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３７（Ｄ）他の情報：／注＝「M0.80; Q0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３８（Ｄ）他の情報：／注＝「M0.40; Q0.40; R0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「L0.80; M0.10; I0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４３（Ｄ）他の情報：／注＝「F0.80; L0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４５（Ｄ）他の情報：／注＝「Q0.80; S0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４７（Ｄ）他の情報：／注＝「A0.80; I0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４８（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（xi）配列の記載：配列番号３０

【０１５１】

【表３９】

【０１５２】（２）配列番号：３１（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４１アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：５（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; L0.10; V0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：７（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：９（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.50; S0.40; P0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１２（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; D0.40; R0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「E0.50; V0.40; Q0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１８（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; A0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−ｓｉｔｅ（Ｂ）存在位置：１９（Ｄ）他の情報：／注＝「Ｖ０．８０；Ｔ０．２０」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２０（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２１（Ｄ）他の情報：／注＝「H0.80; L0.10; A0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; S0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２８（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２９（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.80; P0.10; R0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３０（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.40; A0.40; K0.10; Q0.1
0」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; T0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.50; I0.40; T0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３４（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３８（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; R0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.70; R0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４１（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.90; A0.10」（xi）配列の記載：配列番号３１

【０１５３】

【表４０】

【０１５４】（２）配列番号：３２（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４２アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; L0.10; V0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：８（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１０（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.50; S0.40; P0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１３（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; D0.40; R0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１７（Ｄ）他の情報：／注＝「E0.50; V0.40; Q0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１９（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; A0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２０（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.80; T0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２１（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２２（Ｄ）他の情報：／注＝「H0.80; L0.10; A0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２５（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２８（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; S0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２９（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３０（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.80; P0.10; R0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.40; A0.40; K0.10; Q0.1
0」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３２（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; T0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３４（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.50; I0.40; T0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３５（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３９（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; R0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４０（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.70; R0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４２（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.90; A0.10」（xi）配列の記載：配列番号３２

【０１５５】

【表４１】

【０１５６】（２）配列番号：３３（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：８（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; L0.10; V0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１０（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１２（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.50; S0.40; P0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１５（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; D0.40; R0.20 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１９（Ｄ）他の情報：／注＝「E0.50; V0.40; Q0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２１（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; A0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２２（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.80; T0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「H0.80; L0.10; A0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２７（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; A0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３０（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.90; S0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３１（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３２（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.80; P0.10; R0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３３（Ｄ）他の情報：／注＝「S0.40; A0.40; K0.10; Q0.1
0」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３４（Ｄ）他の情報：／注＝「P0.80; T0.20」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３６（Ｄ）他の情報：／注＝「V0.50; I0.40; T0.10 」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-s
ite （Ｂ）存在位置：３７（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４１（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.40; R0.60」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４２（Ｄ）他の情報：／注＝「K0.70; R0.30」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：４４（Ｄ）他の情報：／注＝「T0.90; A0.10」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２（Ｄ）他の情報：／注＝「オルニチン」（xi）配列の記載：配列番号３３

【０１５７】

【表４２】

【０１５８】（２）配列番号：３４（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３８アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ii）配列の種類：ペプチド（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：１６（Ｄ）他の情報：／注＝「ノルバリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：２４（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（ix）配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：Modified-site （Ｂ）存在位置：３２（Ｄ）他の情報：／注＝「ヒドロキシプロリン」（xi）配列の記載：配列番号３４

【０１５９】

【表４３】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＨＣＶのコアに特異的なヒトモノクローナル抗
体（Ｂ１２．Ｆ８）の希釈系列の、混合物Ａのペプチド
（実施例６）および商業的に入手可能なＨＣＶ抗体検出
キット（Ortho ＨＣＶ３．０；Ortho Diagnostic Syste
ms社）との免疫反応性を示すグラフである。

【図２】ＨＣＶのＮＳ−４に特異的なヒトモノクローナ
ル抗体（６０Ｈ９

〔９〕Ｄ１０Ｅ６）の希釈系列の、混
合物Ａのペプチド（実施例６）および商業的に入手可能
なＨＣＶ抗体検出キット（Ortho ＨＣＶ３．０）との免
疫反応性を示すグラフである。

【図３】ＨＣＶのＮＳ−３に特異的なヒトモノクローナ
ル抗体（ＣＭ３．Ｂ６）の希釈系列の、混合物Ａのペプ
チド（実施例６）および商業的に入手可能なＨＣＶ抗体
検出キット（Ortho ＨＣＶ３．０）との免疫反応性を示
すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者バーバラ・エイチ・ホセインアメリカ合衆国、ニューヨーク 10021、ニューヨーク、イースト・75ス・ストリート 196 (56)参考文献特開平３−190898（ＪＰ，Ａ) 特開平４−159298（ＪＰ，Ａ) 特開平６−56891（ＪＰ，Ａ) 特開平５−222094（ＪＰ，Ａ) 特開平４−305156（ＪＰ，Ａ) 特開平５−194593（ＪＰ，Ａ) 特表平３−503539（ＪＰ，Ａ) 特表平５−503722（ＪＰ，Ａ) 特表平６−505806（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 14/18 G01N 33/53 G01N 33/576 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＰＩＲ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／Ｇｅｎｓｅｑ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】式：（ペプチド）−Ｙ、（ペプチド）₂ Ｘ、（ペプチド）₄ Ｘ₂ Ｘ、（ペプチド）₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘおよび（ペプチド）₁₆Ｘ₈ Ｘ₄ Ｘ₂ Ｘ〔式中、Ｙは、（ペプチド）のＣ末端アミノ酸のカルボ
キシル基のＯＨまたはＮＨ₂ 基であり、Ｘは、それぞれ
ペプチド結合を形成し得る２つのアミノ基と１つのカル
ボキシル基を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体であ
り、該ペプチド部分、すなわち（ペプチド）は、Ｃ型肝
炎ウイルス抗体と特異的に免疫反応性である〕から選ば
れる少なくとも１種類の直鎖または分枝鎖ペプチドを含
むペプチド組成物であって、該ペプチド部分、すなわち
（ペプチド）が、配列番号５〜２１よりなる群から選ば
れるアミノ酸配列である、Ｃ型肝炎ウイルスの感染の診
断または検出用ペプチド組成物。
【請求項２】２種類以上の上記ペプチドの混合物を含
む、請求項１記載のペプチド組成物。
【請求項３】１種類以上の上記ペプチドが担体と結合
している、請求項１記載のペプチド組成物。
【請求項４】上記ペプチドが直鎖である、請求項１記
載のペプチド組成物。
【請求項５】上記ペプチドが、配列番号１９のペプチ
ドである、請求項４記載のペプチド組成物。
【請求項６】上記ペプチドが分枝鎖である、請求項１
記載のペプチド組成物。
【請求項７】式：（ペプチド）−Ｙ、（ペプチド）₂Ｘ、（ペプチド）₄Ｘ₂Ｘ、（ペプチド）₈Ｘ₄Ｘ₂Ｘおよび（ペプチド）₁₆Ｘ₈Ｘ₄Ｘ₂Ｘ〔式中、Ｙは、（ペプチド）のＣ末端アミノ酸のカルボ
キシル基のＯＨまたはＮＨ₂基であり、Ｘは、それぞれ
ペプチド結合を形成し得る２つのアミノ基と１つのカル
ボキシル基を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体であ
り、該ペプチド部分、すなわち（ペプチド）は、Ｃ型肝
炎ウイルス抗体と特異的に免疫反応性である〕から選ば
れる少なくとも１種類の直鎖または分枝鎖ペプチドを含
むペプチド組成物であって、該ペプチド部分が、配列番
号４の８１アミノ酸の原型配列におけるアミノ酸の付
加、欠失、置換及び/又は縮重により誘導されたペプチ
ドであって、ＨＣＶのＮＳ−３の抗体と免疫反応性であ
り、そして下記の欠失、置換または縮重位置、すなわ
ち、位置３：ノルバリン（Nvl ）、位置７：ノルバリン、もしくは３：３：１：１：１：１
の比のVal : Ala : Thr : Phe : Tyr : Nvl 、位置８：バリンもしくはノルバリン、位置１６：ノルバリン、位置２０：アルギニン、位置２６：ノルロイシン、位置３３：ノルロイシン、位置３９：セリン、位置４６：ノルバリン、位置５２：アラニン、位置６０：セリン、位置６３：ノルロイシン、位置６８：セリン、および位置７４：ノルバリンを有するペプチドを含む、Ｃ型肝炎ウイルスの感染の診
断または検出用ペプチド組成物。
【請求項８】配列番号２９、３３、２５および１９の
ペプチドを包含する混合物Ａ、配列番号２７、３３、２
５および１９のペプチドを包含する混合物Ｂまたは配列
番号３３、２５、１９および２８のペプチドを包含する
混合物Ｃを含む、Ｃ型肝炎ウイルスの感染の診断または
検出用ペプチド組成物。
【請求項９】組成物が混合物Ａを含む、請求項８記載
のペプチド組成物。
【請求項１０】ＨＣＶ抗体の検出法であって、免疫検
定手順において請求項１〜９のいずれか１項記載の有効
量のペプチド組成物を用いることを特徴とする検出法。
【請求項１１】ＨＣＶ感染の検出法であって、免疫検
定手順において請求項１〜９のいずれか１項記載の有効
量のペプチド組成物を、体液、組織または組織抽出物
と、該ペプチド組成物と該体液、該組織または該組織抽
出物中の抗体との間で複合体が形成されるのに、充分な
時間接触させること、および上記複合体を検出手段に付
すことを特徴とする検出法。
【請求項１２】免疫検定手順が、ＥＬＩＳＡ検定、サ
ンドイッチ検定またはＰＨＡ検定である、請求項１０記
載の検出法。
【請求項１３】免疫検定手順が、ＥＬＩＳＡ検定、サ
ンドイッチ検定またはＰＨＡ検定である、請求項１１記
載の検出法。
【請求項１４】ＨＣＶ抗体の検出またはＨＣＶ感染の
診断のためのキットであって、請求項１〜９のいずれか
１項記載のペプチド組成物を含有するよう適合させた第
一の容器を含むキット。
【請求項１５】キットが、ＥＬＩＳＡ検定キット、サ
ンドイッチ検定キットまたはＰＨＡ検定キットである、
請求項１４記載のキット。
【請求項１６】ＨＣＶ抗体の検出またはＨＣＶ感染の
診断のためのＥＬＩＳＡ試験キットであって、（ａ）請求項１〜９のいずれか１項記載のペプチド組成
物でコーティングされた固相を有する容器、（ｂ）陰性対照試料、（ｃ）陽性対照試料、（ｄ）標本希釈剤、および（ｅ）レポーター分子で標識された、ヒトＩｇＧに対す
る抗体を含むキット。