JP3144556B2 - 線虫類に対する活性を持つバシルス ツリンギエンシスの新規単離物 - Google Patents
線虫類に対する活性を持つバシルス ツリンギエンシスの新規単離物Info
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 望ましくない生物を抑制する為の化学薬品の通常使用
によって薬剤耐性の菌株が選択されることになり得る。
このことは経済的に重要な意味を持つ昆虫の多くの種に
つき起こっており、羊、山羊、馬中の線虫にも起こって
いる。薬剤耐性の発達によって、異なった作用型を持つ
新しい抑制剤を引き続き追及することが必要となってく
る。
によって薬剤耐性の菌株が選択されることになり得る。
このことは経済的に重要な意味を持つ昆虫の多くの種に
つき起こっており、羊、山羊、馬中の線虫にも起こって
いる。薬剤耐性の発達によって、異なった作用型を持つ
新しい抑制剤を引き続き追及することが必要となってく
る。
近年の線虫類を抑制する為の異論のない方法論は、ベ
ンズイミダゾール薬及びその同種のものに集中してい
る。広範な規模でのこれらの薬の使用は、線虫集団間の
多くの耐性事例に導いている〔プリカード，アール．ケ
ー．（Prichard,P.K.）ら、1980年、線虫類に於ける耐
駆虫性の問題、Austr.Vet.J.56巻、239〜251頁；コレ
ス，ジー．シー．（Coles,G.C.）1986年、「羊に於ける
耐駆虫性、北アメリカ家畜診療所に於いて（Anthelmint
ic resistance in sheep.In Veterinary Clinics of No
rth America）」フード アニマル プラクティス（Foo
d Animal Practice.）２巻、423〜432頁、ハード，アー
ル．ピー．（Herd,R.P.）版、ダブリュー．ビー．サウ
ンダーズ（W.B.Saunders）ニューヨーク〕。100,000以
上もの線虫の記載された種が存在する。
ンズイミダゾール薬及びその同種のものに集中してい
る。広範な規模でのこれらの薬の使用は、線虫集団間の
多くの耐性事例に導いている〔プリカード，アール．ケ
ー．（Prichard,P.K.）ら、1980年、線虫類に於ける耐
駆虫性の問題、Austr.Vet.J.56巻、239〜251頁；コレ
ス，ジー．シー．（Coles,G.C.）1986年、「羊に於ける
耐駆虫性、北アメリカ家畜診療所に於いて（Anthelmint
ic resistance in sheep.In Veterinary Clinics of No
rth America）」フード アニマル プラクティス（Foo
d Animal Practice.）２巻、423〜432頁、ハード，アー
ル．ピー．（Herd,R.P.）版、ダブリュー．ビー．サウ
ンダーズ（W.B.Saunders）ニューヨーク〕。100,000以
上もの線虫の記載された種が存在する。
バシルス ツリンギエンシス（B.t.）細菌は急速に増
大しつつある昆虫種に対して活性を持つと示されている
ポリペプチド毒素をつくる。最初は鱗翅目の昆虫に対し
てのみの毒性が観察されたが、双翅目及び鞘翅目の昆虫
に対する毒性を持つB.t.単離物の記載によって広げられ
てきた。これらの毒素は生体内で結晶性包有物として堆
積される。B.t.の多くの菌株は試験されるどの昆虫に対
しても示されるべき毒性を持たない結晶性包有物をつく
る。
大しつつある昆虫種に対して活性を持つと示されている
ポリペプチド毒素をつくる。最初は鱗翅目の昆虫に対し
てのみの毒性が観察されたが、双翅目及び鞘翅目の昆虫
に対する毒性を持つB.t.単離物の記載によって広げられ
てきた。これらの毒素は生体内で結晶性包有物として堆
積される。B.t.の多くの菌株は試験されるどの昆虫に対
しても示されるべき毒性を持たない結晶性包有物をつく
る。
線虫類の卵の生存に対するバシルス ツリンギエンシ
ス種からのデルタ内毒素の効果について、少数の研究記
事が公表されている。ボティエール（Bottjer）、ボー
ン（Bone）及びギル（Gill）〔イクスペリメンタル パ
ラジトロジイ（Experimental Parasitology）60巻、239
〜244頁、1985年〕は、B.t.クルスタキ（kurstaki）及
びB.t.イスラエレンシス（israelensis）が線虫類トリ
コストロンギルス コルブリフォルミス（Trichostrong
ylus colubriformis）の卵に対して生体外で毒性である
ことを報告している。更に、28の別のB.t.菌株を試験す
ると、広く変化する毒性であった。最高効力はナノグラ
ム（10億分の１）の範囲でLD50の値を持つ。イグノッホ
（Ignoffo）及びドロプキン（Dropkin）〔イグノッホ，
シー．エム．及びドロプキン，ブイ．エイチ.J.Kans.En
tomol.Soc.50巻、394〜398頁、1977年〕はバシルス ツ
リンギエンシス（ベータ外毒素）からの熱安定性の毒素
が自由生活の線虫類のバナグレルス レディビブス（Pa
nagrellus redivivus）（グッディ（Goodey））；植物
寄生の線虫類のメロイドジン インコグニタ（Meloidog
yne incognita）（チトウッド（Chitwood））及び真菌
類摂取の線虫類アフェレンクス アベナ（Aphelenchusa
vena）（バスチェン（Bastien））に対して活性であっ
たことを報告している。ベータ外毒素は少しも又は全く
特異性を持たない一般的にいう細胞毒素剤である。又、
エイチ．チオルジア（H.Ciordia）、及びダブリュー．
イー．ビゼル（W.E.Bizzell）（Jour.of Parasitology4
7巻、41頁［抄録］1961年）は、いくらかの家畜の線虫
類上のバシルス ツリンギエンシスの効果について、予
備的報告を出している。
ス種からのデルタ内毒素の効果について、少数の研究記
事が公表されている。ボティエール（Bottjer）、ボー
ン（Bone）及びギル（Gill）〔イクスペリメンタル パ
ラジトロジイ（Experimental Parasitology）60巻、239
〜244頁、1985年〕は、B.t.クルスタキ（kurstaki）及
びB.t.イスラエレンシス（israelensis）が線虫類トリ
コストロンギルス コルブリフォルミス（Trichostrong
ylus colubriformis）の卵に対して生体外で毒性である
ことを報告している。更に、28の別のB.t.菌株を試験す
ると、広く変化する毒性であった。最高効力はナノグラ
ム（10億分の１）の範囲でLD50の値を持つ。イグノッホ
（Ignoffo）及びドロプキン（Dropkin）〔イグノッホ，
シー．エム．及びドロプキン，ブイ．エイチ.J.Kans.En
tomol.Soc.50巻、394〜398頁、1977年〕はバシルス ツ
リンギエンシス（ベータ外毒素）からの熱安定性の毒素
が自由生活の線虫類のバナグレルス レディビブス（Pa
nagrellus redivivus）（グッディ（Goodey））；植物
寄生の線虫類のメロイドジン インコグニタ（Meloidog
yne incognita）（チトウッド（Chitwood））及び真菌
類摂取の線虫類アフェレンクス アベナ（Aphelenchusa
vena）（バスチェン（Bastien））に対して活性であっ
たことを報告している。ベータ外毒素は少しも又は全く
特異性を持たない一般的にいう細胞毒素剤である。又、
エイチ．チオルジア（H.Ciordia）、及びダブリュー．
イー．ビゼル（W.E.Bizzell）（Jour.of Parasitology4
7巻、41頁［抄録］1961年）は、いくらかの家畜の線虫
類上のバシルス ツリンギエンシスの効果について、予
備的報告を出している。
現在、感染しやすい宿主にかなりの損傷を生じる多く
の線虫類を抑制する為の更に効果的手段を持つことが必
要である。
の線虫類を抑制する為の更に効果的手段を持つことが必
要である。
本発明は、試験される線虫類、例えばカエノルハブデ
ィチス エレガンス（Caenorhabditis elegans）及びハ
エモンクス コントルトス（Haemonchus contortus）に
対して活性であるバシルス ツリンギエンシスの５つの
新規単離物に関している。好都合にも、また意外にも、
これらの新規B.t.単離物は線虫類の幼虫及び成虫に対し
て活性である。
ィチス エレガンス（Caenorhabditis elegans）及びハ
エモンクス コントルトス（Haemonchus contortus）に
対して活性であるバシルス ツリンギエンシスの５つの
新規単離物に関している。好都合にも、また意外にも、
これらの新規B.t.単離物は線虫類の幼虫及び成虫に対し
て活性である。
本発明のB.t.単離物は成長させることができ、つくら
れるデルタ内毒素は標準的手順で回収される。回収した
毒素は線虫を駆除できる生成物の使用と関連した標準的
手順を用いて処方することができる。
れるデルタ内毒素は標準的手順で回収される。回収した
毒素は線虫を駆除できる生成物の使用と関連した標準的
手順を用いて処方することができる。
新規のB.t.単離物はB.t.菌株PS−17、B.t.菌株PS−33
F2、B.t.菌株PS−52A1、B.t.菌株PS−63B、及びB.t.菌
株PS−69D1と命名された。
F2、B.t.菌株PS−52A1、B.t.菌株PS−63B、及びB.t.菌
株PS−69D1と命名された。
本発明の新規B.t.単離物はアメリカ合衆国61604イリ
ノイ州ピオリア ノース ユニバーシティー ストリー
ト 1915のアグリカルチュラル リサーチ サービス
パテント カルチャーコレクション（Agricultural Res
earch Service Patent Culture Collection）（NRR
L）、ノーザン リージョナル リサーチ センター（N
orthern Regional Research Center）に寄託されてい
る。 培養基 保管番号 供託日 B.t.菌株PS−17 NRRL B−18243 1987年７月28日 B.t.菌株PS−33F2 NRRL B−18244 1987年７月28日 B.t.菌株PS−52A1 NRRL B−18245 1987年７月28日 B.t.菌株PS−63B NRRL B−18246 1987年７月28日 B.t.菌株PS−69D1 NRRL B−18247 1987年７月28日 37 CFR 1.14及び35 USC 122の下に米国特許商標庁長
官により権限ある旨決定された者に、該米国特許出願の
係属中に、培養基の入手が可能であるという条件の下
に、本培養は寄託されている。この寄託は、その出願の
対応出願あるいはその子孫出願が出願されている国に於
いても米国以外の特許法により要求される時に、入手可
能である。しかしながら、寄託物を利用出来ることは、
行政行為により許可される特許権の価値を損って本発明
の実施権を構成するものではないということを了解され
たい。
ノイ州ピオリア ノース ユニバーシティー ストリー
ト 1915のアグリカルチュラル リサーチ サービス
パテント カルチャーコレクション（Agricultural Res
earch Service Patent Culture Collection）（NRR
L）、ノーザン リージョナル リサーチ センター（N
orthern Regional Research Center）に寄託されてい
る。 培養基 保管番号 供託日 B.t.菌株PS−17 NRRL B−18243 1987年７月28日 B.t.菌株PS−33F2 NRRL B−18244 1987年７月28日 B.t.菌株PS−52A1 NRRL B−18245 1987年７月28日 B.t.菌株PS−63B NRRL B−18246 1987年７月28日 B.t.菌株PS−69D1 NRRL B−18247 1987年７月28日 37 CFR 1.14及び35 USC 122の下に米国特許商標庁長
官により権限ある旨決定された者に、該米国特許出願の
係属中に、培養基の入手が可能であるという条件の下
に、本培養は寄託されている。この寄託は、その出願の
対応出願あるいはその子孫出願が出願されている国に於
いても米国以外の特許法により要求される時に、入手可
能である。しかしながら、寄託物を利用出来ることは、
行政行為により許可される特許権の価値を損って本発明
の実施権を構成するものではないということを了解され
たい。
更に、本培養基の寄託物は、微生物の寄託の為のブタ
ペスト条約の規定に従って、保存され一般に入手可能に
されるであろう。即ち、寄託の試料の最も最近の提供要
求後少なくとも５年の間、いかなる場合にも、寄託の日
付け後少なくとも30年の間、あるいは培養を開示して発
行されるすべての特許の権利行使できる寿命の間、それ
らが生存でき汚されないように保つのに必要なあらゆる
注意を払って、それらは保存されるであろう。寄託者
は、要求された場合に寄託物の状態によって保存所が試
料を供給できない場合に寄託物を取り替える義務を認め
る。本培養基寄託の一般への入手可能性に於けるあらゆ
る制限はそれらを開示した特許の付与によって永久に取
り除かれる。
ペスト条約の規定に従って、保存され一般に入手可能に
されるであろう。即ち、寄託の試料の最も最近の提供要
求後少なくとも５年の間、いかなる場合にも、寄託の日
付け後少なくとも30年の間、あるいは培養を開示して発
行されるすべての特許の権利行使できる寿命の間、それ
らが生存でき汚されないように保つのに必要なあらゆる
注意を払って、それらは保存されるであろう。寄託者
は、要求された場合に寄託物の状態によって保存所が試
料を供給できない場合に寄託物を取り替える義務を認め
る。本培養基寄託の一般への入手可能性に於けるあらゆ
る制限はそれらを開示した特許の付与によって永久に取
り除かれる。
本発明の新規B.t.単離物は試験した線虫類に対して活
性を示す。寄生虫症（helminthiasis）として一般に記
載される病気のグループは蠕虫（helminths）として知
られる寄生虫が動物宿主へ感染したものである。寄生虫
症は、豚、羊、馬、家畜、山羊、犬、猫及び家禽の様な
飼いならされた動物にとって流行している重大な経済問
題である。蠕虫（腸内寄生虫）の間で、線虫類として記
載された寄生虫のグループは、様々な動物種に広くひろ
がった、そしてしばしば重大な感染を引き起こす。上記
に参照した動物に感染する線虫類の最も一般的な属はハ
エモンクス（Haemonchus）、トリコストロンギルス（Tr
ichostrongylus）、オスターテギア（Ostertagia）、ネ
マトディルス（Nematodirus）、コーペリア（Cooperi
a）、アスカリス（Ascaris）、ブノストマム（Bunostom
um）、オエソファゴストマム（Oesophagostomum）、カ
ベルチア（Chabertia）、トリクリス（Trichuris）、ス
トロンギルス（Strongylus）、トリコネマ（Trichonem
a）、ディクチョカウルス（Dictyocaulus）、カピラリ
ア（Capillaria）、ヘテラキス（Heterakis）、トキソ
カラ（Toxocara）、アスカリディア（Ascaridia）、オ
キシウリス（Oxyuris）、アンシロストマ（Ancylostom
a）、ウンシナリア（Uncinaria）、トキサスカリス（To
xascaris）、カエノルハブディチス（Caenorhabditis）
及びパラスカリス（Parascaris）である。ネマトディル
ス（Nematodirus）、コーペリア（Cooperia）及びオエ
ソファゴストマム（Oesophagostomum）の様な、これら
のあるものは、腸管を主として攻撃し、一方ディクチョ
カルウス（Dictyocaulus）の様な、別のものは肺で発見
される。更に、別の寄生虫は、体の別の組織及び器官に
いる。
性を示す。寄生虫症（helminthiasis）として一般に記
載される病気のグループは蠕虫（helminths）として知
られる寄生虫が動物宿主へ感染したものである。寄生虫
症は、豚、羊、馬、家畜、山羊、犬、猫及び家禽の様な
飼いならされた動物にとって流行している重大な経済問
題である。蠕虫（腸内寄生虫）の間で、線虫類として記
載された寄生虫のグループは、様々な動物種に広くひろ
がった、そしてしばしば重大な感染を引き起こす。上記
に参照した動物に感染する線虫類の最も一般的な属はハ
エモンクス（Haemonchus）、トリコストロンギルス（Tr
ichostrongylus）、オスターテギア（Ostertagia）、ネ
マトディルス（Nematodirus）、コーペリア（Cooperi
a）、アスカリス（Ascaris）、ブノストマム（Bunostom
um）、オエソファゴストマム（Oesophagostomum）、カ
ベルチア（Chabertia）、トリクリス（Trichuris）、ス
トロンギルス（Strongylus）、トリコネマ（Trichonem
a）、ディクチョカウルス（Dictyocaulus）、カピラリ
ア（Capillaria）、ヘテラキス（Heterakis）、トキソ
カラ（Toxocara）、アスカリディア（Ascaridia）、オ
キシウリス（Oxyuris）、アンシロストマ（Ancylostom
a）、ウンシナリア（Uncinaria）、トキサスカリス（To
xascaris）、カエノルハブディチス（Caenorhabditis）
及びパラスカリス（Parascaris）である。ネマトディル
ス（Nematodirus）、コーペリア（Cooperia）及びオエ
ソファゴストマム（Oesophagostomum）の様な、これら
のあるものは、腸管を主として攻撃し、一方ディクチョ
カルウス（Dictyocaulus）の様な、別のものは肺で発見
される。更に、別の寄生虫は、体の別の組織及び器官に
いる。
本発明の新規なB.t.単離物からの毒素はブルサファレ
ンクス（Bursaphalenchus）、クリコネメラ（Criconeme
lla）、ディチレンクス（Ditylenchus）、グロボデラ
（Globodera）、ヘリコチレンクス（Helicotylenchu
s）、ヘテロデラ（Heterodera）、メロディオジン（Mel
odiogyne）、プラチレンクス（Pratylenchus）、ラドル
フォルス（Radolpholus）、ロテリンクス（Rotelynchu
s）、又はチレンクス（Tylenchus）から選ばれた土の線
虫類及び植物寄生虫の抑制のための線虫駆除剤として有
用である。
ンクス（Bursaphalenchus）、クリコネメラ（Criconeme
lla）、ディチレンクス（Ditylenchus）、グロボデラ
（Globodera）、ヘリコチレンクス（Helicotylenchu
s）、ヘテロデラ（Heterodera）、メロディオジン（Mel
odiogyne）、プラチレンクス（Pratylenchus）、ラドル
フォルス（Radolpholus）、ロテリンクス（Rotelynchu
s）、又はチレンクス（Tylenchus）から選ばれた土の線
虫類及び植物寄生虫の抑制のための線虫駆除剤として有
用である。
一方、いくつかの植物寄生線虫類は真正寄生虫である
ので、線虫駆除剤B.t.毒素をコードした遺伝子は植物細
胞中へ遺伝子工学的に組み込んで線虫抵抗性の植物を得
ることができる。植物細胞を遺伝子工学的に処理するた
めの方法論は十分に確立されている（ネスター，イー．
ダブリュー．（Nester,E.W.）、ゴードン，エム．ピ
ー．（Gordon,M.P.）、アマジノ，アール．エム．（Ama
sino,R.M.）及びヤノフスキー，エム．エフ．（Yanofsk
y,M.F.）Ann.Rev.Plant.Physiol.35巻387〜399頁、1984
年を参照）。
ので、線虫駆除剤B.t.毒素をコードした遺伝子は植物細
胞中へ遺伝子工学的に組み込んで線虫抵抗性の植物を得
ることができる。植物細胞を遺伝子工学的に処理するた
めの方法論は十分に確立されている（ネスター，イー．
ダブリュー．（Nester,E.W.）、ゴードン，エム．ピ
ー．（Gordon,M.P.）、アマジノ，アール．エム．（Ama
sino,R.M.）及びヤノフスキー，エム．エフ．（Yanofsk
y,M.F.）Ann.Rev.Plant.Physiol.35巻387〜399頁、1984
年を参照）。
本発明のB.t.毒素は、哺乳動物の駆虫剤として用いる
場合、カプセル、丸薬、錠剤の様な、あるいは水薬の様
な投薬単位形体で経口投与され得る。普通は水薬は、ベ
ントナイトの様な懸濁剤、及び湿潤剤又は同様の賦形剤
と共に、通常水中の活性成分の溶液、懸濁液、分散液で
ある。一般に、水薬は消泡剤も含む。一般に水薬処方は
活性化合物約0.001〜0.5重量％含有する。好ましい水薬
処方は約0.01〜0.1重量％を含有する。カプセル及び丸
薬は、澱粉、滑石、ステアリン酸マグネシウム、又は燐
酸ジカルシウムの様な担体ベヒクルと共に混合した活性
成分から成る。
場合、カプセル、丸薬、錠剤の様な、あるいは水薬の様
な投薬単位形体で経口投与され得る。普通は水薬は、ベ
ントナイトの様な懸濁剤、及び湿潤剤又は同様の賦形剤
と共に、通常水中の活性成分の溶液、懸濁液、分散液で
ある。一般に、水薬は消泡剤も含む。一般に水薬処方は
活性化合物約0.001〜0.5重量％含有する。好ましい水薬
処方は約0.01〜0.1重量％を含有する。カプセル及び丸
薬は、澱粉、滑石、ステアリン酸マグネシウム、又は燐
酸ジカルシウムの様な担体ベヒクルと共に混合した活性
成分から成る。
乾燥した固体単位投与形で毒素化合物を投与すること
が望ましい場合には、活性化合物の所望の量を含有し
た、カプセル、丸薬又は錠剤が通常用いられている。こ
れらの投与形態は、澱粉、ラクトース、滑石、ステアリ
ン酸マグネシウム、植物性ゴム等の様な、適当に微細に
分割した希釈剤、充填剤、崩壊剤及び／又は結合剤と共
に活性成分を直接的に、均一に混合することによってつ
くられる。この様な単位投与の処方は、処理される宿主
動物の種類、感染のひどさと型、及び宿主の重要の様な
因子によって、全重量及び抗寄生虫薬の含有量が広く変
化する。
が望ましい場合には、活性化合物の所望の量を含有し
た、カプセル、丸薬又は錠剤が通常用いられている。こ
れらの投与形態は、澱粉、ラクトース、滑石、ステアリ
ン酸マグネシウム、植物性ゴム等の様な、適当に微細に
分割した希釈剤、充填剤、崩壊剤及び／又は結合剤と共
に活性成分を直接的に、均一に混合することによってつ
くられる。この様な単位投与の処方は、処理される宿主
動物の種類、感染のひどさと型、及び宿主の重要の様な
因子によって、全重量及び抗寄生虫薬の含有量が広く変
化する。
活性化合物が動物の飼料を経て投与される場合は、飼
料中に緊密に分散させるか、追加飼料（トップドレッシ
ング）として使用するか、あるいはペレット形にし、こ
れを次に最終飼料に加えたり、又は任意的に別々に与え
る。一方、抗寄生虫化合物は非経口的に、例えば胃内、
筋肉内、気管内又は皮下注射により動物に投与され、そ
の場合、活性成分は液状担体ベヒクル中に溶解又は分散
される。非経口投与の場合、活性物質は、好ましくは落
花生油、綿実油等の様な様々の植物性油の、受け入れら
れるベヒクルと共に適当に混合される。ゾルケタール、
グリセロール、フォルマール及び水溶性の非経口的処方
を用いる有機的製剤の様に、別の非経口的ベヒクル類も
又用いられる。活性化合物は、投与のための非経口的処
方に溶解あるいは懸濁される。一般にその様な処方剤
は、活性化合物0.005〜５重量％を含有する。
料中に緊密に分散させるか、追加飼料（トップドレッシ
ング）として使用するか、あるいはペレット形にし、こ
れを次に最終飼料に加えたり、又は任意的に別々に与え
る。一方、抗寄生虫化合物は非経口的に、例えば胃内、
筋肉内、気管内又は皮下注射により動物に投与され、そ
の場合、活性成分は液状担体ベヒクル中に溶解又は分散
される。非経口投与の場合、活性物質は、好ましくは落
花生油、綿実油等の様な様々の植物性油の、受け入れら
れるベヒクルと共に適当に混合される。ゾルケタール、
グリセロール、フォルマール及び水溶性の非経口的処方
を用いる有機的製剤の様に、別の非経口的ベヒクル類も
又用いられる。活性化合物は、投与のための非経口的処
方に溶解あるいは懸濁される。一般にその様な処方剤
は、活性化合物0.005〜５重量％を含有する。
毒素が動物の飼料の成分として投与される時あるいは
飲み水中に溶解又は懸濁される時は、活性化合物が不活
性な担体又は希釈剤中に緊密に分散された組成物が提供
される。不活性担体とは、抗寄生虫薬と反応しない動物
に対して安全に投与され得る担体を意味している。好ま
しくは、飼料投与のための担体は、動物の飼料の成分で
ある。
飲み水中に溶解又は懸濁される時は、活性化合物が不活
性な担体又は希釈剤中に緊密に分散された組成物が提供
される。不活性担体とは、抗寄生虫薬と反応しない動物
に対して安全に投与され得る担体を意味している。好ま
しくは、飼料投与のための担体は、動物の飼料の成分で
ある。
適当な組成物には、飼料のプレミックス又は補充物を
包含され、この場合活性成分が比較的大量にあり、か
つ、動物に直接摂取させるか、あるいは直接飼料に添加
するか又は、中間の希釈又は配合段階の後、飼料に添加
するのが適当である。この様な組成物に適当な典型的な
担体又は希釈剤は、例えば醸造元の乾燥麦芽かす、コー
ンミール、柑橘類のミール、発酵残渣、粉にした砕いた
牡礪、小麦のふすま、モラセス可溶物、コーン穂軸ミー
ル、食用豆粉飼料、大豆つぶ、砕いた石灰炭等を包含す
る。
包含され、この場合活性成分が比較的大量にあり、か
つ、動物に直接摂取させるか、あるいは直接飼料に添加
するか又は、中間の希釈又は配合段階の後、飼料に添加
するのが適当である。この様な組成物に適当な典型的な
担体又は希釈剤は、例えば醸造元の乾燥麦芽かす、コー
ンミール、柑橘類のミール、発酵残渣、粉にした砕いた
牡礪、小麦のふすま、モラセス可溶物、コーン穂軸ミー
ル、食用豆粉飼料、大豆つぶ、砕いた石灰炭等を包含す
る。
哺乳類の消火器官内での駆虫剤活性を持つのに加え
て、線虫類を駆虫するB.t.単離物からの胞子（生殖細
胞）は、動物の消化器官を通り、発芽し、排せつ物中で
増殖し、それにより、その中でふ化し、増殖する線虫類
の幼虫を更に抑制することになる。
て、線虫類を駆虫するB.t.単離物からの胞子（生殖細
胞）は、動物の消化器官を通り、発芽し、排せつ物中で
増殖し、それにより、その中でふ化し、増殖する線虫類
の幼虫を更に抑制することになる。
本発明の新規B.t.単離物からの遺伝子は、ヨーロッパ
特許出願0200344号に開示された手順に従って植物のフ
ィトスフェア（phytosphere）を占拠し、生存し、かつ
増殖することができる微生物中に導入することができ
る。線虫類を宿す動物がこの様な植物を摂取すると、線
虫類に活性な毒素は、線虫類の潜入を抑制するために動
物宿主中で利用できるようになる。
特許出願0200344号に開示された手順に従って植物のフ
ィトスフェア（phytosphere）を占拠し、生存し、かつ
増殖することができる微生物中に導入することができ
る。線虫類を宿す動物がこの様な植物を摂取すると、線
虫類に活性な毒素は、線虫類の潜入を抑制するために動
物宿主中で利用できるようになる。
次は、本発明を実施するにあたり、最良方法を含む手
順を例示するものである。これらの実施例は限定するも
のとして解釈されるべきではない。全てのパーセンテー
ジは重量により、全ての溶媒混合割合は別に記さないか
ぎり体積による。
順を例示するものである。これらの実施例は限定するも
のとして解釈されるべきではない。全てのパーセンテー
ジは重量により、全ての溶媒混合割合は別に記さないか
ぎり体積による。
実施例１−−B.t.単離物の培養 B.t.単離物の虹培養基を次の培地、即ちペプトン、グ
ルコース、塩培地に接種するために使用できる。
ルコース、塩培地に接種するために使用できる。
培地：バクト ペプトン 7.5 g/ グルコース 1.0 g/ KH2PO4 3.4 g/ K2HPO4 4.35g/ 塩溶液 5.0 ml/ CaCl2溶液 5.0 ml/ 塩溶液（100ml） MgSO4−7H2O 2.46 g MnSO4−H2 0.04 g ZNSO4−7H2O 0.28 g FeSO4−7H2O 0.40 g CaCl2溶液（100ml） CaCl2−2H2O 3.66 g 塩溶液及びCaCl2溶液は瀘過滅菌し、接種時に、オー
トクレーブ及び熱処理したブロスに加えられる。フラス
コは64時間、200rpmの回転振とう機上30℃で培養され
る。
トクレーブ及び熱処理したブロスに加えられる。フラス
コは64時間、200rpmの回転振とう機上30℃で培養され
る。
上記手順はこの技術で知られた手順によって、大きな
発酵器に容易に規模拡大できる。
発酵器に容易に規模拡大できる。
上記発酵で得られたBt胞子及び結晶は、この技術で知
られた手順により単離できる。しばしば使われる手順は
収穫した発酵ブロスを分離技術、例えば遠心分離にかけ
ることである。
られた手順により単離できる。しばしば使われる手順は
収穫した発酵ブロスを分離技術、例えば遠心分離にかけ
ることである。
実施例２−−カエノルハブディチス エレガンス（Caen
orhabditis elegans）に対するバシルス ツリンギエン
シス単離物の活性 C.エレガンスの新たな単離物をステリリン（STERILI
N）の多数のウェルの設けられた（multiwell）プレート
中5mgアムピシリン/100mlと共にシンプキシ（Simpkin）
とコールズ（Coles）（J.Chem.Tech.Biotechnol.）によ
り記載されたように培養した。各ウェル（well）は約15
0の寄生虫を含有していた。B.t.単離物を胞子形成が完
成するまで育成した。発酵ブロス中の試料は、次いで60
Co源から10キログレイのガンマ放射線で照射された。こ
れらの条件下では生育できる細胞は残らなかった。1ml
づつに分別したB.t.試料は11,000×g/10分で遠心分離さ
れ、上澄み液は除去された。ペレットは線虫洗浄用緩衝
液で二度洗浄し（ブレンナー（Brenner），エス．、Gen
etics 77巻、71〜94頁、1974年）、1ml緩衝液中に再懸
濁した。上澄み液又は再懸濁したペレット物質の一部分
を寄生虫の懸濁液中に加え、７日間20℃で培養し、その
後ウェル（well）を観察し、バシルス スブチリス培養
基のアリコートを含有する対照例と比較して生きた寄生
虫の数を記した。すべての実験は二重に行なわれた。結
果を次に示す。
orhabditis elegans）に対するバシルス ツリンギエン
シス単離物の活性 C.エレガンスの新たな単離物をステリリン（STERILI
N）の多数のウェルの設けられた（multiwell）プレート
中5mgアムピシリン/100mlと共にシンプキシ（Simpkin）
とコールズ（Coles）（J.Chem.Tech.Biotechnol.）によ
り記載されたように培養した。各ウェル（well）は約15
0の寄生虫を含有していた。B.t.単離物を胞子形成が完
成するまで育成した。発酵ブロス中の試料は、次いで60
Co源から10キログレイのガンマ放射線で照射された。こ
れらの条件下では生育できる細胞は残らなかった。1ml
づつに分別したB.t.試料は11,000×g/10分で遠心分離さ
れ、上澄み液は除去された。ペレットは線虫洗浄用緩衝
液で二度洗浄し（ブレンナー（Brenner），エス．、Gen
etics 77巻、71〜94頁、1974年）、1ml緩衝液中に再懸
濁した。上澄み液又は再懸濁したペレット物質の一部分
を寄生虫の懸濁液中に加え、７日間20℃で培養し、その
後ウェル（well）を観察し、バシルス スブチリス培養
基のアリコートを含有する対照例と比較して生きた寄生
虫の数を記した。すべての実験は二重に行なわれた。結
果を次に示す。
実施例３−−C.エレガンス上に対するバシルス ツリン
ギエンシス単離物のデルタ内毒素調製物の活性 バシルス ツリンギエンシス単離物を、胞子形成が完
成するまで育成した。デルタ内毒素結晶は、ファンネン
スティール（Pfannenstiel）等により記載されたように
臭化ナトリウム傾斜上のそれらの培養からつくられた
（ファンネンスティール，エム．エー．（M.A.）、ロ
ス，イー．ジェイ．（Ross,E.J.）、クレイマー，ブ
イ．シー．（Kramer,V.C.）及びニッカーソン，ケイ．
ダブリュー．（Nickerson,K.W.）1984年、FEMS Microbi
ol.Lett.21巻、39〜42頁）。毒素の結晶の調製物を、次
いで調製物中に在るいかなるバクテリアの胞子をも不活
性にするために、60Co源から10キログレイのガンマ放射
線で照射した。結晶調製物の蛋白質含量はロウリィ（Lo
wry）の方法により決定され、｛ロウリィ，オー．エイ
チ．、ローズボラフ，エヌ．ジェイ．（Roseborough,N.
J.）、ファー，エー．エル．（Farr,A.L.）及びランド
ル，アール．ジェイ．（Randall,R.J.）、J.Biol.Chem.
193巻、265〜275頁、1951年｝、そして100μｇの物質が
試験用ウェル（well）に加えられた。全ての実験は、二
重に行なわれた。結果を次に示す。
ギエンシス単離物のデルタ内毒素調製物の活性 バシルス ツリンギエンシス単離物を、胞子形成が完
成するまで育成した。デルタ内毒素結晶は、ファンネン
スティール（Pfannenstiel）等により記載されたように
臭化ナトリウム傾斜上のそれらの培養からつくられた
（ファンネンスティール，エム．エー．（M.A.）、ロ
ス，イー．ジェイ．（Ross,E.J.）、クレイマー，ブ
イ．シー．（Kramer,V.C.）及びニッカーソン，ケイ．
ダブリュー．（Nickerson,K.W.）1984年、FEMS Microbi
ol.Lett.21巻、39〜42頁）。毒素の結晶の調製物を、次
いで調製物中に在るいかなるバクテリアの胞子をも不活
性にするために、60Co源から10キログレイのガンマ放射
線で照射した。結晶調製物の蛋白質含量はロウリィ（Lo
wry）の方法により決定され、｛ロウリィ，オー．エイ
チ．、ローズボラフ，エヌ．ジェイ．（Roseborough,N.
J.）、ファー，エー．エル．（Farr,A.L.）及びランド
ル，アール．ジェイ．（Randall,R.J.）、J.Biol.Chem.
193巻、265〜275頁、1951年｝、そして100μｇの物質が
試験用ウェル（well）に加えられた。全ての実験は、二
重に行なわれた。結果を次に示す。
実施例４−−羊の線虫類ハエモンクス コントルツス
（Haemonchus contortus）に対するバシルス ツリンギ
エンシス単離物の活性 1mlのB.t.細胞懸濁液のアリコートを水で二回洗浄
し、10mlの水に再懸濁した。1mlのこの懸濁液を、ステ
リリン（STERILIN）の多数のウェルを設けた平板中の、
熱処理した凍結乾燥した大腸菌（E.Coli）（0.75mg/m
l）1mlへ加えた。そして各ウェル中のH.コントルツスの
耐レバミゾール／ベンズイミダゾール菌株の卵を数え
た。各試料は４回繰り返された。死んだ幼虫のパーセン
トはバシルス スブチリスを含んだ対照例と比較して計
算された。結果を次に示す。
（Haemonchus contortus）に対するバシルス ツリンギ
エンシス単離物の活性 1mlのB.t.細胞懸濁液のアリコートを水で二回洗浄
し、10mlの水に再懸濁した。1mlのこの懸濁液を、ステ
リリン（STERILIN）の多数のウェルを設けた平板中の、
熱処理した凍結乾燥した大腸菌（E.Coli）（0.75mg/m
l）1mlへ加えた。そして各ウェル中のH.コントルツスの
耐レバミゾール／ベンズイミダゾール菌株の卵を数え
た。各試料は４回繰り返された。死んだ幼虫のパーセン
トはバシルス スブチリスを含んだ対照例と比較して計
算された。結果を次に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 ジヨージ ジー．ソーレス アメリカ合衆国 92129 カリフォルニ ア州 サンディエゴ バックヒート コ ート 12620 (56)参考文献 特開 昭61−254187（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−111689（ＪＰ，Ａ) Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｒａ ｓｉｔｏｌｏｇｙ，60，239−244 （1985) Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｒａ ｓｉｔｏｌｏｇｙ，62，247−253 （1986) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 1/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (14)
- 【請求項１】バシルス ツリンギエンシス菌株PS−17、
バシルス ツリンギエンシス菌株PS−33F2、バシルス
ツリンギエンシス菌株PS−52A1、バシルス ツリンギエ
ンシス菌株PS−63B、及びバシルス ツリンギエンシス
菌株PS−69D1から選ばれる線虫類に対して活性なバシル
ス ツリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）単離
物。 - 【請求項２】請求項１に記載のバシルス ツリンギエン
シス菌株PS−17。 - 【請求項３】請求項１に記載のバシルス ツリンギエン
シス菌株PS−33F2。 - 【請求項４】請求項１に記載のバシルス ツリンギエン
シス菌株PS−52A1。 - 【請求項５】請求項１に記載のバシルス ツリンギエン
シス菌株PS−63B。 - 【請求項６】請求項１に記載のバシルス ツリンギエン
シス菌株PS−69D1。 - 【請求項７】線虫類を、バシルス ツリンギエンシス菌
株PS−17、バシルス ツリンギエンシス菌株PS−33F2、
バシルス ツリンギエンシス菌株PS−52A1、バシルス
ツリンギエンシス菌株PS−63B、及びバシルス ツリン
ギエンシス菌株PS−69D1から選ばれるバシルス ツリン
ギエンシス単離物によってつくられる、線虫類を抑制す
るのに効果的な量の毒素と、人体以外の場所で接触させ
ることから成る、線虫類の抑制方法。 - 【請求項８】毒素がバシルス ツリンギエンシスPS−17
によってつくられる請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】毒素がバシルス ツリンギエンシスPS−33
F2によってつくられる請求項７に記載の方法。 - 【請求項１０】毒素がバシルス ツリンギエンシスPS−
52A1によってつくられる請求項７に記載の方法。 - 【請求項１１】毒素がバシルス ツリンギエンシスPS−
63Bによってつくられる請求項７に記載の方法。 - 【請求項１２】毒素がバシルス ツリンギエンシスPS−
69D1によりつくられる請求項７に記載の方法。 - 【請求項１３】線虫類がハエモンクス（Haemonchus）、
トリコストロンギルス（Trichostrongylus）、オスター
テギア（Ostertagia）、ネマトディルス（Nematodiru
s）、コーペリア（Cooperia）、アスカリス（Ascari
s）、ブノストマム（Bunostomum）、オエソファゴスト
マム（Oesophagostomum）、カベルチア（Chabertia）、
トリクリス（Trichuris）、ストロンギルス（Strongylu
s）、トリコネマ（Trichonema）、ディクチョカウルス
（Dictyocaulus）、カピラリア（Capillaria）、ヘテラ
キス（Heterakis）、トキソカラ（Toxocara）、アスカ
リディア（Ascaridia）、オキシウリス（Oxyuris）、ア
ンシロストマ（Ancylostoma）、ウンシナリア（Uncinar
ia）、トキサスカリス（Toxascaris）、カエノルハブデ
ィチス（Caenorhabditis）、パラスカリス（Parascari
s）、ブルサファレンクス（Bursaphalenchus）、クリコ
ネメラ（Criconemella）、ディチレンクス（Ditylenchu
s）、グロボデラ（Globodera）、ヘリコチレンクス（He
licotylenchus）、ヘテロデラ（Heterodera）、メロデ
ィオジン（Melodiogyne）、プラチレンクス（Pratylenc
hus）、ラドルフォルス（Radolpholus）、ロテリンクス
（Rotelynchus）、又はチレンクス（Tylenchus）属から
選ばれる、請求項７に記載の方法。 - 【請求項１４】線虫類が、カエノルハブディチス エレ
ガンス（Caenorhabditiselegans）又はハエモンクスコ
ントルツス（Haemonchus contortus）である請求項13に
記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US084653 | 1987-08-12 | ||
| US07/084,653 US4948734A (en) | 1987-08-12 | 1987-08-12 | Novel isolates of bacillus thuringiensis having activity against nematodes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6467192A JPS6467192A (en) | 1989-03-13 |
| JP3144556B2 true JP3144556B2 (ja) | 2001-03-12 |
Family
ID=22186346
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19904688A Expired - Lifetime JP3144556B2 (ja) | 1987-08-12 | 1988-08-11 | 線虫類に対する活性を持つバシルス ツリンギエンシスの新規単離物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4948734A (ja) |
| EP (1) | EP0303426B1 (ja) |
| JP (1) | JP3144556B2 (ja) |
| AT (1) | ATE79722T1 (ja) |
| CA (1) | CA1335664C (ja) |
| DE (1) | DE3874052T2 (ja) |
| ES (1) | ES2046304T3 (ja) |
| GR (1) | GR3006350T3 (ja) |
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| US11819523B2 (en) | 2016-07-01 | 2023-11-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for C. difficile treatment |
| US11865145B2 (en) | 2017-08-07 | 2024-01-09 | Finch Therapeutics Holdings Llc | Compositions and methods for maintaining and restoring a healthy gut barrier |
| US11890306B2 (en) | 2017-05-26 | 2024-02-06 | Finch Therapeutics Holdings Llc | Lyophilized compositions comprising fecal microbe-based therapeutic agents and methods for making and using same |
| US11911419B2 (en) | 2018-09-27 | 2024-02-27 | Finch Therapeutics Holdings Llc | Compositions and methods for treating epilepsy and related disorders |
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