JP3138733B2 - 安定化リポソーム及びその形成方法 - Google Patents
安定化リポソーム及びその形成方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、リポソームの利用
技術に関し、具体的には、リポソームを安定に形成する
技術に関する。このようなリポソームは、内包する親水
相に種々の化合物を含ませておくことで、ＤＤＳ（ドラ
ッグデリバリーシステム）等への応用が期待されるもの
で、種種の環境で安定に存在することが期待されるとと
もに、構成する脂質にも毒性、生体内での分解性等につ
いての安全性が求められている。また、その安定性のコ
ントロールにより、種々薬品の検査等にも応用が期待さ
れている。
技術に関し、具体的には、リポソームを安定に形成する
技術に関する。このようなリポソームは、内包する親水
相に種々の化合物を含ませておくことで、ＤＤＳ（ドラ
ッグデリバリーシステム）等への応用が期待されるもの
で、種種の環境で安定に存在することが期待されるとと
もに、構成する脂質にも毒性、生体内での分解性等につ
いての安全性が求められている。また、その安定性のコ
ントロールにより、種々薬品の検査等にも応用が期待さ
れている。
【０００２】
【従来の技術】従来、リポソームを構成する脂質二分子
膜の構造中にコレステロールに代表されるステロイド等
を導入することにより前記脂質二分子膜が強化されるこ
とが知られているが、これら化合物のリポソーム安定化
の機構は明確にされておらず、種々の化合物がさらに検
討されている。
膜の構造中にコレステロールに代表されるステロイド等
を導入することにより前記脂質二分子膜が強化されるこ
とが知られているが、これら化合物のリポソーム安定化
の機構は明確にされておらず、種々の化合物がさらに検
討されている。
【０００３】上述の化合物群は、前記脂質の一部に置き
換わって、前記脂質二分子膜を構成することで、二分子
膜上に釘状に入り込む構造をとっているものと考えられ
ている。さらに近年、脂質二分子膜を構成する脂質より
も十分に長く、前記二分子膜を貫通する構造のカロテノ
イド等の化合物群が見いだされている。このような化合
物群は、前記脂質二分子膜中にリベット状に取り込まれ
る構造をとり、前記二分子膜をさらに安定化させられる
ものとして期待されている。
換わって、前記脂質二分子膜を構成することで、二分子
膜上に釘状に入り込む構造をとっているものと考えられ
ている。さらに近年、脂質二分子膜を構成する脂質より
も十分に長く、前記二分子膜を貫通する構造のカロテノ
イド等の化合物群が見いだされている。このような化合
物群は、前記脂質二分子膜中にリベット状に取り込まれ
る構造をとり、前記二分子膜をさらに安定化させられる
ものとして期待されている。
【０００４】この中で、ゼアキサンチンがホスファチジ
ルコリン（ＰＣ）からなる脂質二分子膜に対する安定化
作用を示すことが報告されている（中谷陽一ら、化学と
生物Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．９（１９９０）５６８頁〜５７
６頁）。
ルコリン（ＰＣ）からなる脂質二分子膜に対する安定化
作用を示すことが報告されている（中谷陽一ら、化学と
生物Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．９（１９９０）５６８頁〜５７
６頁）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上述のような
安定化作用を受けた既知の安定化リポソームといえど
も、安定性には限度があり、安定化の機構解明が不十分
であることからも、さらに安定化させられるリポソーム
の安定化が望まれている。また、上述のゼアキサンチン
に関しても、ジミリストイルホスファチジルコリン（Ｄ
ＭＰＣ）からなるリポソームとの関係については検討さ
れているが、他のＰＣとの間における安定化については
検討されておらず、リポソームを用いる多種多様な環境
下に応用すべく、さらに、多様な安定化リポソームが望
まれている現状にある。従って、本発明の目的は、上記
欠点に鑑み、よりいっそう安定な安定化リポソームを提
供すること、および、多様な安定化リポソームを提供す
る点にある。
安定化作用を受けた既知の安定化リポソームといえど
も、安定性には限度があり、安定化の機構解明が不十分
であることからも、さらに安定化させられるリポソーム
の安定化が望まれている。また、上述のゼアキサンチン
に関しても、ジミリストイルホスファチジルコリン（Ｄ
ＭＰＣ）からなるリポソームとの関係については検討さ
れているが、他のＰＣとの間における安定化については
検討されておらず、リポソームを用いる多種多様な環境
下に応用すべく、さらに、多様な安定化リポソームが望
まれている現状にある。従って、本発明の目的は、上記
欠点に鑑み、よりいっそう安定な安定化リポソームを提
供すること、および、多様な安定化リポソームを提供す
る点にある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、安定化リ
ポソームを形成すべく種々の化合物を検討したところ、
少なくとも一端側に糖修飾されたゼアキサンチンの誘導
体が、種々の油脂材料からなるリポソームに対して極め
て高いリポソーム安定化効果を発揮することを見いだ
し、本発明を完成するに到った。そこで、この目的を達
成するための本発明の安定化リポソームの特徴構成は、
ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成されるリポソ
ームをカロテノイド化合物により安定化させてなる安定
化リポソームを、少なくとも一端側に糖修飾されたカロ
テノイド化合物を、卵黄由来のＰＣ、あるいは、ＤＰＰ
Ｃ、ＤＯＰＣから選ばれる少なくとも一種の合成ＰＣを
主剤としてなる油脂材料と膜形成させて構成する、もし
くは、ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成される
リポソームをカロテノイド化合物により安定化させてな
る安定化リポソームを、少なくとも一端側に糖修飾され
たゼアキサンチン（ｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）類を、ＰＣ
を主剤としてなる油脂材料とから膜形成して構成する点
にある。
ポソームを形成すべく種々の化合物を検討したところ、
少なくとも一端側に糖修飾されたゼアキサンチンの誘導
体が、種々の油脂材料からなるリポソームに対して極め
て高いリポソーム安定化効果を発揮することを見いだ
し、本発明を完成するに到った。そこで、この目的を達
成するための本発明の安定化リポソームの特徴構成は、
ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成されるリポソ
ームをカロテノイド化合物により安定化させてなる安定
化リポソームを、少なくとも一端側に糖修飾されたカロ
テノイド化合物を、卵黄由来のＰＣ、あるいは、ＤＰＰ
Ｃ、ＤＯＰＣから選ばれる少なくとも一種の合成ＰＣを
主剤としてなる油脂材料と膜形成させて構成する、もし
くは、ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成される
リポソームをカロテノイド化合物により安定化させてな
る安定化リポソームを、少なくとも一端側に糖修飾され
たゼアキサンチン（ｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）類を、ＰＣ
を主剤としてなる油脂材料とから膜形成して構成する点
にある。
【０００７】尚、好ましくは、少なくとも一端側に糖修
飾されたゼアキサンチン類を、卵黄由来のＰＣ、あるい
は、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣから選ばれる少なくとも一種の
合成ＰＣを主剤としてなる油脂材料と膜形成させて構成
する。
飾されたゼアキサンチン類を、卵黄由来のＰＣ、あるい
は、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣから選ばれる少なくとも一種の
合成ＰＣを主剤としてなる油脂材料と膜形成させて構成
する。
【０００８】また、前記ゼアキサンチン類が、化１に示
すサーモゼアキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｚｅａｘａｎｔ
ｈｉｎ）、化２に示すサーモビスゼアキサンチン（ｔｈ
ｅｒｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、化３に示すサ
ーモクリプトキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏｘ
ａｎｔｈｉｎ）から選ばれる少なくとも一種の化合物で
あることが望ましい。
すサーモゼアキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｚｅａｘａｎｔ
ｈｉｎ）、化２に示すサーモビスゼアキサンチン（ｔｈ
ｅｒｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、化３に示すサ
ーモクリプトキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏｘ
ａｎｔｈｉｎ）から選ばれる少なくとも一種の化合物で
あることが望ましい。
【０００９】
【化１】
【００１０】
【化２】
【００１１】
【化３】 Ｒ1 〜Ｒ3 はＣ8 〜Ｃ18のアシル基。
【００１２】〔作用効果〕つまり、ＰＣを主剤としてな
る油脂材料から膜形成されるリポソームにカロテノイド
化合物を添加してあれば、前記ＰＣの二分子膜構造に前
記カロテノイド化合物が、リベット構造で導入されるた
めに、従来知られているゼアキサンチン等と同様に、安
定化効果が得られることが期待できる。ここで、今般、
特開平８−３３７５９２号として新規に見いだされた微
生物由来のゼアキサンチン類を適用したところ、極めて
高いリポソーム安定化効果を発揮することがわかった。
これは、前記ゼアキサンチンが、末端に糖鎖を有するこ
とに由来し、種々のＰＣと安定なリポソームの二分子膜
構造を形成するためではないかと考えられる。すなわ
ち、前記糖鎖の水酸基が、前記ＰＣの親水基と相互作用
して、前記ゼアキサンチンに代表されるカロテノイドを
前記二分子膜中に安定に存在させるのに寄与しているも
のと予想されるのである。
る油脂材料から膜形成されるリポソームにカロテノイド
化合物を添加してあれば、前記ＰＣの二分子膜構造に前
記カロテノイド化合物が、リベット構造で導入されるた
めに、従来知られているゼアキサンチン等と同様に、安
定化効果が得られることが期待できる。ここで、今般、
特開平８−３３７５９２号として新規に見いだされた微
生物由来のゼアキサンチン類を適用したところ、極めて
高いリポソーム安定化効果を発揮することがわかった。
これは、前記ゼアキサンチンが、末端に糖鎖を有するこ
とに由来し、種々のＰＣと安定なリポソームの二分子膜
構造を形成するためではないかと考えられる。すなわ
ち、前記糖鎖の水酸基が、前記ＰＣの親水基と相互作用
して、前記ゼアキサンチンに代表されるカロテノイドを
前記二分子膜中に安定に存在させるのに寄与しているも
のと予想されるのである。
【００１３】従って、糖修飾されたカロテノイドは、卵
黄由来のＰＣや、特定の合成ＰＣから形成されるリポソ
ームを安定化することがわかり、種々多様な安定化リポ
ソームの提供が可能となった。また、ここで、詳細に検
討されたサーモゼアキサンチンは、種々のＰＣからなる
リポソームを安定化することが見いだされ、糖修飾され
たゼアキサンチン類は種々のＰＣからなるリポソームを
安定化し、種々多様な安定化リポソームの提供が可能と
なった。
黄由来のＰＣや、特定の合成ＰＣから形成されるリポソ
ームを安定化することがわかり、種々多様な安定化リポ
ソームの提供が可能となった。また、ここで、詳細に検
討されたサーモゼアキサンチンは、種々のＰＣからなる
リポソームを安定化することが見いだされ、糖修飾され
たゼアキサンチン類は種々のＰＣからなるリポソームを
安定化し、種々多様な安定化リポソームの提供が可能と
なった。
【００１４】尚、前記ゼアキサンチン類として新規に見
いだされたものとしては、サーモゼアキサンチン（ｔｈ
ｅｒｍｏｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、サーモビスゼアキサ
ンチン（ｔｈｅｒｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、
サーモクリプトキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏ
ｘａｎｔｈｉｎ）が有効であると考えられり、これらゼ
アキサンチン類を用いれば多種多様な安定化リポソーム
を提供するのに役立てられる。また、上述の安定化リポ
ソームは、リポソーム形成用脂質に、前記ゼアキサンチ
ン類が、サーモゼアキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｚｅａｘ
ａｎｔｈｉｎ）、サーモビスゼアキサンチン（ｔｈｅｒ
ｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、サーモクリプトキ
サンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏｘａｎｔｈｉｎ）
から選ばれる少なくとも一種の化合物を添加し、膜形成
させる事によって得られる。
いだされたものとしては、サーモゼアキサンチン（ｔｈ
ｅｒｍｏｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、サーモビスゼアキサ
ンチン（ｔｈｅｒｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、
サーモクリプトキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏ
ｘａｎｔｈｉｎ）が有効であると考えられり、これらゼ
アキサンチン類を用いれば多種多様な安定化リポソーム
を提供するのに役立てられる。また、上述の安定化リポ
ソームは、リポソーム形成用脂質に、前記ゼアキサンチ
ン類が、サーモゼアキサンチン（ｔｈｅｒｍｏｚｅａｘ
ａｎｔｈｉｎ）、サーモビスゼアキサンチン（ｔｈｅｒ
ｍｏｂｉｓｚｅａｘａｎｔｈｉｎ）、サーモクリプトキ
サンチン（ｔｈｅｒｍｏｃｒｙｐｔｏｘａｎｔｈｉｎ）
から選ばれる少なくとも一種の化合物を添加し、膜形成
させる事によって得られる。
【００１５】
【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の形態を図面
に基づいて説明する。
に基づいて説明する。
【００１６】本発明の安定化リポソームは、図１に示す
ように、ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成され
る二分子膜中に少なくとも一端側に糖修飾されたカロテ
ノイド化合物が、リベット状に組み込まれ、前記二分子
膜を安定化させるものと考えられる。このとき前記糖鎖
は、前記二分子膜の親水基と相互作用して、膜表面に位
置固定され、また、前記カロテノイドの疎水性骨格が、
前記二分子膜の厚さとほぼ一致して、リベット状に組み
込まれた姿勢が安定に保持されるとともに、前記二分子
膜を構成する脂質の挙動を拘束していると考えられる。
また、糖鎖から延出する脂肪酸基は、前記二分子膜中に
取り込まれて、さらに、複雑な相互作用を発揮し、安定
化に寄与しているものと考えられる。以下、リポソーム
の製造方法の一例を示す。サーモゼアキサンチン（以下
ＴＺと称する）と卵黄由来のＰＣ（以下ＥＰＣと称す
る）とをモル比で１：１００に混合してある脂質（以下
１：１００混合脂質と称する、他の混合比率のものにつ
いても同様）を少量のジエチルエーテルに溶解し、なす
型フラスコに入れる。これを器壁で薄膜を形成するよう
に減圧乾燥させる。これに、１００ｍＭのカルセイン水
溶液（ｐＨ７．５）を加え、窒素雰囲気下にてよく懸濁
して乳白色の懸濁液（１０ｍｇＰＣ／ｍｌ）を得た。こ
の懸濁液を液体窒素により凍結する急速凍結行程と、凍
結した懸濁液を室温で融解する融解行程とを交互に５回
繰り返し行い、孔径１００ｎｍのフィルターで限外濾過
した。 （この過程で粒径のそろった一枚膜リポソーム
が調整されることが知られている。（ＤＬＳ法（動的光
散乱法）によると１００ｎｍ付近に中心を持つ径分布
の、比較的大きな一枚膜リポソームが確認できる。）ま
た、リポソーム内部にはカルセインが自己消光する濃度
で封入されている。）さらに、得られたリポソームをゲ
ル濾過（セファクリルＳ３００）することにより、余剰
のカルセインを除去して、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．５）緩衝液に懸濁されたカルセイン封入リポ
ソームを得た。一方前記１００ｍＭのカルセイン水溶液
（ｐＨ７．５）に代え、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．５）緩衝液を用いてカルセイン非封入のリポ
ソーム等も同様にして得られる。また、前記混合脂質に
代えＥＰＣのみのものを用いて調整したＴＺ非添加リポ
ソーム等も同様にして得られる。尚、このようなリポソ
ーム調整法としては、上述の凍結融解法の他に、界面活
性剤透析法、水和法、エーテル注入法、逆層蒸留法等他
の種々公知の方法を用いることができる。また、粒径の
そろった一枚膜リポソームとするには、上述の限外濾過
の他、超音波処理等の種々公知の方法を採用することが
出来る。
ように、ＰＣを主剤としてなる油脂材料から膜形成され
る二分子膜中に少なくとも一端側に糖修飾されたカロテ
ノイド化合物が、リベット状に組み込まれ、前記二分子
膜を安定化させるものと考えられる。このとき前記糖鎖
は、前記二分子膜の親水基と相互作用して、膜表面に位
置固定され、また、前記カロテノイドの疎水性骨格が、
前記二分子膜の厚さとほぼ一致して、リベット状に組み
込まれた姿勢が安定に保持されるとともに、前記二分子
膜を構成する脂質の挙動を拘束していると考えられる。
また、糖鎖から延出する脂肪酸基は、前記二分子膜中に
取り込まれて、さらに、複雑な相互作用を発揮し、安定
化に寄与しているものと考えられる。以下、リポソーム
の製造方法の一例を示す。サーモゼアキサンチン（以下
ＴＺと称する）と卵黄由来のＰＣ（以下ＥＰＣと称す
る）とをモル比で１：１００に混合してある脂質（以下
１：１００混合脂質と称する、他の混合比率のものにつ
いても同様）を少量のジエチルエーテルに溶解し、なす
型フラスコに入れる。これを器壁で薄膜を形成するよう
に減圧乾燥させる。これに、１００ｍＭのカルセイン水
溶液（ｐＨ７．５）を加え、窒素雰囲気下にてよく懸濁
して乳白色の懸濁液（１０ｍｇＰＣ／ｍｌ）を得た。こ
の懸濁液を液体窒素により凍結する急速凍結行程と、凍
結した懸濁液を室温で融解する融解行程とを交互に５回
繰り返し行い、孔径１００ｎｍのフィルターで限外濾過
した。 （この過程で粒径のそろった一枚膜リポソーム
が調整されることが知られている。（ＤＬＳ法（動的光
散乱法）によると１００ｎｍ付近に中心を持つ径分布
の、比較的大きな一枚膜リポソームが確認できる。）ま
た、リポソーム内部にはカルセインが自己消光する濃度
で封入されている。）さらに、得られたリポソームをゲ
ル濾過（セファクリルＳ３００）することにより、余剰
のカルセインを除去して、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．５）緩衝液に懸濁されたカルセイン封入リポ
ソームを得た。一方前記１００ｍＭのカルセイン水溶液
（ｐＨ７．５）に代え、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．５）緩衝液を用いてカルセイン非封入のリポ
ソーム等も同様にして得られる。また、前記混合脂質に
代えＥＰＣのみのものを用いて調整したＴＺ非添加リポ
ソーム等も同様にして得られる。尚、このようなリポソ
ーム調整法としては、上述の凍結融解法の他に、界面活
性剤透析法、水和法、エーテル注入法、逆層蒸留法等他
の種々公知の方法を用いることができる。また、粒径の
そろった一枚膜リポソームとするには、上述の限外濾過
の他、超音波処理等の種々公知の方法を採用することが
出来る。
【００１７】
【実施例】以下に本発明の実施例を図面に基づいて説明
する。
する。
【００１８】上述のリポソームの熱安定性を調べたとこ
ろ、ＴＺの安定化効果が確認できた。尚、リポソームの
安定性は、以下のように試験、評価した。
ろ、ＴＺの安定化効果が確認できた。尚、リポソームの
安定性は、以下のように試験、評価した。
【００１９】＜安定性試験方法＞前記カルセイン封入リ
ポソームを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．
５）緩衝液で１０００倍希釈し、所定温度に所定時間間
維持する熱処理を行う。このとき、破壊されたリポソー
ムからは、カルセインが漏出し、前記緩衝液内で希釈さ
れて蛍光を発する（リポソーム内に封入された状態のま
までは自己消光を起こして蛍光は発しない）。この蛍光
を蛍光分析器で測定する（励起波長４８８ｎｍ、発光波
長５１７ｎｍ）と、カルセイン量が測定できる。この放
出カルセイン量は、破壊されたカルセイン封入リポソー
ム量に比例するから、この量が少ないほど安定なリポソ
ームが得られていることがわかる。尚、熱安定性の試験
では、温度を変えながら１０分間の熱処理によるカルセ
イン漏出量の測定、経時安定性の試験では、室温にて維
持時間に対するカルセイン漏出量の測定を行った。
ポソームを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．
５）緩衝液で１０００倍希釈し、所定温度に所定時間間
維持する熱処理を行う。このとき、破壊されたリポソー
ムからは、カルセインが漏出し、前記緩衝液内で希釈さ
れて蛍光を発する（リポソーム内に封入された状態のま
までは自己消光を起こして蛍光は発しない）。この蛍光
を蛍光分析器で測定する（励起波長４８８ｎｍ、発光波
長５１７ｎｍ）と、カルセイン量が測定できる。この放
出カルセイン量は、破壊されたカルセイン封入リポソー
ム量に比例するから、この量が少ないほど安定なリポソ
ームが得られていることがわかる。尚、熱安定性の試験
では、温度を変えながら１０分間の熱処理によるカルセ
イン漏出量の測定、経時安定性の試験では、室温にて維
持時間に対するカルセイン漏出量の測定を行った。
【００２０】尚、カルセイン量は、当初封入されていた
カルセインに対する放出カルセインの量の割合として求
め、カルセイン封入リポソームの大きさ、量等の差異を
補償できるように換算している。当初封入されていたカ
ルセイン量は、全カルセイン封入リポソームを、界面活
性剤等により破壊し、前記放出カルセイン量と同様に求
めた。
カルセインに対する放出カルセインの量の割合として求
め、カルセイン封入リポソームの大きさ、量等の差異を
補償できるように換算している。当初封入されていたカ
ルセイン量は、全カルセイン封入リポソームを、界面活
性剤等により破壊し、前記放出カルセイン量と同様に求
めた。
【００２１】＜ＥＰＣ：ＴＺ添加の効果＞ＴＺ：ＥＰＣ
のモル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂
質を用いてカルセイン封入リポソームを形成し、それぞ
れの安定性を試験した。その結果、図２のようになっ
た。このグラフから前記ＴＺは、リポソームを広い温度
範囲で安定化していることがわかる。また、ＥＰＣに代
えて、大腸菌由来のホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥ）を用いて同様の検討を行ったところ、図３のよ
うになり、ＰＥを用いた場合にも低温域においては、Ｔ
Ｚの耐熱安定化の寄与が認められることがわかった。
尚、従来用いられていたコレステロールや、β−カロテ
ンは、同様の条件下で、ＥＰＣリポソームを不安定化し
ていることがわかり（下記参考１参照）、ＥＰＣリポソ
ームの安定化には、ＴＺあるいはその類縁体に代表され
る糖カロテノイドを用いることが特に有効であることが
わかる。
のモル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂
質を用いてカルセイン封入リポソームを形成し、それぞ
れの安定性を試験した。その結果、図２のようになっ
た。このグラフから前記ＴＺは、リポソームを広い温度
範囲で安定化していることがわかる。また、ＥＰＣに代
えて、大腸菌由来のホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥ）を用いて同様の検討を行ったところ、図３のよ
うになり、ＰＥを用いた場合にも低温域においては、Ｔ
Ｚの耐熱安定化の寄与が認められることがわかった。
尚、従来用いられていたコレステロールや、β−カロテ
ンは、同様の条件下で、ＥＰＣリポソームを不安定化し
ていることがわかり（下記参考１参照）、ＥＰＣリポソ
ームの安定化には、ＴＺあるいはその類縁体に代表され
る糖カロテノイドを用いることが特に有効であることが
わかる。
【００２２】＜ＤＰＰＣ：ＴＺ添加の効果＞先と同様に
ＥＰＣに代えてＤＰＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＰＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成し、それぞれの安定
性を試験した。すると、図４、図５のようになり、低温
側での熱安定性が向上しており（図４）、経時安定性も
向上している（図５）ことがわかり、ＤＰＰＣのリポソ
ームも安定化されることがわかった。
ＥＰＣに代えてＤＰＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＰＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成し、それぞれの安定
性を試験した。すると、図４、図５のようになり、低温
側での熱安定性が向上しており（図４）、経時安定性も
向上している（図５）ことがわかり、ＤＰＰＣのリポソ
ームも安定化されることがわかった。
【００２３】また、希釈液のｐＨを種々変更して同様に
経時安定性を調べたところ、図６〜７のようになり、い
ずれのｐＨにおいてもカルセイン放出量の飽和量がＴＺ
添加なしの場合に比べて低く抑えられ、耐酸性も向上し
ていることがわかる。
経時安定性を調べたところ、図６〜７のようになり、い
ずれのｐＨにおいてもカルセイン放出量の飽和量がＴＺ
添加なしの場合に比べて低く抑えられ、耐酸性も向上し
ていることがわかる。
【００２４】＜ＤＯＰＣ：ＴＺ添加の効果＞先と同様に
ＥＰＣに代えてＤＯＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＯＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成し、それぞれの安定
性を試験した。すると、図８のようになり、低温側での
熱安定性が向上していることがわかり、ＤＯＰＣのリポ
ソームも安定化されることがわかった。尚、ＤＰＰＣ、
ＤＯＰＣのような合成ＰＣの場合は、相転移を伴うため
に、相転移温度の前後で膜内の脂質分子の運動性や流動
性が著しく異なり、安定化の寄与に温度領域の限界が生
じるのではないかと考えられる。
ＥＰＣに代えてＤＯＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＯＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成し、それぞれの安定
性を試験した。すると、図８のようになり、低温側での
熱安定性が向上していることがわかり、ＤＯＰＣのリポ
ソームも安定化されることがわかった。尚、ＤＰＰＣ、
ＤＯＰＣのような合成ＰＣの場合は、相転移を伴うため
に、相転移温度の前後で膜内の脂質分子の運動性や流動
性が著しく異なり、安定化の寄与に温度領域の限界が生
じるのではないかと考えられる。
【００２５】＜ＤＭＰＣ：ＴＺ添加の効果＞先と同様に
ＥＰＣに代えてＤＭＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＭＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成したところ、ＤＭＰ
Ｃのリポソームと同様の安定性を発揮することがわかっ
たが、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣほどの安定化効果はみられな
かった。これは、疎水基部分の長さの影響、あるいは、
糖鎖に結合したアルキル基による安定化効果もしくは不
安定化効果が発揮されていることが示唆される。つま
り、ＰＣとしては、ＥＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣがＴＺ
類との関係で特に好ましく、安定化の効果を受けやすい
といえるが、他のＤＭＰＣ等のＰＣについても利用可能
であることがわかる。
ＥＰＣに代えてＤＭＰＣを用いて、ＴＺ：ＤＭＰＣのモ
ル比が１：５００の混合脂質、１：１００の混合脂質か
らカルセイン封入リポソームを形成したところ、ＤＭＰ
Ｃのリポソームと同様の安定性を発揮することがわかっ
たが、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣほどの安定化効果はみられな
かった。これは、疎水基部分の長さの影響、あるいは、
糖鎖に結合したアルキル基による安定化効果もしくは不
安定化効果が発揮されていることが示唆される。つま
り、ＰＣとしては、ＥＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣがＴＺ
類との関係で特に好ましく、安定化の効果を受けやすい
といえるが、他のＤＭＰＣ等のＰＣについても利用可能
であることがわかる。
【００２６】＜参考１＞ＥＰＣにβ−カロテンやコレス
テロールを添加した際の熱安定化を調べたところ、図９
のようになり、これらの添加剤は、少なくとも合成脂質
から成るリポソームでは図６，７に示されるように安定
化の効果を発揮するものと報告されているものの、本実
験に於けるｐＨ７．５の条件でのＥＰＣリポソームの熱
安定性に関しては不安定化に働いていることがわかる。
テロールを添加した際の熱安定化を調べたところ、図９
のようになり、これらの添加剤は、少なくとも合成脂質
から成るリポソームでは図６，７に示されるように安定
化の効果を発揮するものと報告されているものの、本実
験に於けるｐＨ７．５の条件でのＥＰＣリポソームの熱
安定性に関しては不安定化に働いていることがわかる。
【図１】糖修飾されたカロテノイドによるリポソーム安
定化の作用説明図
定化の作用説明図
【図２】ＥＰＣに対するＴＺによる熱安定化効果を示す
グラフ
グラフ
【図３】ＰＥに対するＴＺによる熱安定化効果を示すグ
ラフ
ラフ
【図４】ＤＰＰＣに対するＴＺによる熱安定化効果を示
すグラフ
すグラフ
【図５】ＤＰＰＣに対するＴＺによる経時的安定化効果
を示すグラフ（ｐＨ７．５）
を示すグラフ（ｐＨ７．５）
【図６】ＤＰＰＣに対するＴＺによる経時的安定化効果
を示すグラフ（ｐＨ６．５）
を示すグラフ（ｐＨ６．５）
【図７】ＤＰＰＣに対するＴＺによる経時的安定化効果
を示すグラフ（ｐＨ９．０）
を示すグラフ（ｐＨ９．０）
【図８】ＤＰＰＣに対するＴＺによる熱安定化効果を示
すグラフ
すグラフ
【図９】ＥＰＣに対するβ−カロテンやコレステロール
による熱安定化効果を示すグラフ
による熱安定化効果を示すグラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 横山 昭裕 静岡県清水市袖師町1900番 株式会社海 洋バイオテクノロジー研究所 清水研究 所 (56)参考文献 特開 平８−337592（ＪＰ，Ａ) 特表 平７−503014（ＪＰ，Ａ) 国際公開96／4891（ＷＯ，Ａ１) 国際公開98／47534（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 9/00 - 9/72 A61K 47/00 - 47/48 ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】 ホスファチジルコリン（phosphatidylch
oline，以下ＰＣと称する）を主剤としてなる油脂材料
から膜形成されるリポソームをゼアキサンチン（zeaxan
thin）類により安定化させてなる安定化リポソームであ
って、 少なくとも一端側に糖修飾されたゼアキサンチン類を、
ＰＣを主剤としてなる油脂材料とともに膜形成してある
安定化リポソーム。 - 【請求項２】 前記ＰＣを主剤としてなる油脂材料が、
卵黄由来のＰＣ、あるいは、ジパルミトイルホスファチ
ジルコリン（以下ＤＰＰＣと称する）、ジオレイルホス
ファチジルコリン（以下ＤＯＰＣと称する）から選ばれ
る少なくとも一種の合成ＰＣである請求項1記載の安定
化リポソーム。 - 【請求項３】 前記ゼアキサンチン類が、サーモゼアキ
サンチン（thermozeaxanthin）、サーモビスゼアキサン
チン（thermobiszeaxanthin）、サーモクリプトキサン
チン（thermocryptoxanthin）から選ばれる少なくとも
一種の化合物である請求項１又は２記載の安定化リポソ
ーム。 - 【請求項４】 ＰＣを主剤としてなるリポソーム形成用
脂質に、前記ゼアキサンチン類が、サーモゼアキサンチ
ン（thermozeaxanthin）、サーモビスゼアキサンチン
（thermobiszeaxanthin）、サーモクリプトキサンチン
（thermocryptoxanthin）から選ばれる少なくとも一種
の化合物を添加し、膜形成する請求項1、２又は３のい
ずれかに記載の安定化リポソームの形成方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11177486A JP3138733B2 (ja) | 1999-06-23 | 1999-06-23 | 安定化リポソーム及びその形成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11177486A JP3138733B2 (ja) | 1999-06-23 | 1999-06-23 | 安定化リポソーム及びその形成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001002566A JP2001002566A (ja) | 2001-01-09 |
| JP3138733B2 true JP3138733B2 (ja) | 2001-02-26 |
Family
ID=16031755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11177486A Expired - Lifetime JP3138733B2 (ja) | 1999-06-23 | 1999-06-23 | 安定化リポソーム及びその形成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3138733B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7048943B2 (en) | 2001-02-13 | 2006-05-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Carotenoid-loaded liposomes |
| JP5585981B2 (ja) * | 2010-02-26 | 2014-09-10 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 光応答性リポソーム及び光応答性リポソームを利用した物質の運搬方法 |
| CN103169141B (zh) * | 2013-03-18 | 2016-04-06 | 北京林业大学 | 一种利用类脂囊泡包封类胡萝卜素的制备方法 |
-
1999
- 1999-06-23 JP JP11177486A patent/JP3138733B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2001002566A (ja) | 2001-01-09 |
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Legal Events
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