JP3070773B2 - タンパク質の同定または測定方法、およびそれの適用 - Google Patents
タンパク質の同定または測定方法、およびそれの適用Info
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Description
は測定方法、およびこの方法の適用に関する。
一般に遭遇するような少量におけるそれらのタンパク質
の検出を可能にする程それらのタンパク質に対して十分
に高い親和性を有する抗体が必要である。更に、それら
の抗体は、測定を行う媒体中の他の成分による干渉を排
除するのに十分な位に特異的でなければならない。しか
しながら、十分に多量で且つ適当に純粋な問題の抗原源
を得ることが困難であるため、そのような抗体はしばし
ば入手不可能である。
を使用することにより、稀である抗原、アミノ酸配列の
みが既知である抗原、およびタンパク質分子中に存在す
る或る種の弱免疫原性エピトープ、に対する抗体を得る
ことが可能になった。しかし、ほとんどの場合、そのよ
うな合成ペプチドに対して得られた抗体は、抗体をベー
スにした必要な感度のイムノアッセイを可能にする程十
分な結合力で完全タンパク質を認識しない。
他の成分による干渉を除去するために多くの試みがなさ
れている。ヨーロッパ特許出願第51,985号に記載された
それらの方法の1つにおいては、試料をタンパク質分解
剤で処理した後で測定を行っている。この方法は、測定
しようとするタンパク質上のエピトープをそのまま維持
した状態で汚染タンパク質上のエピトープの選択的破壊
を可能にし、また特異的エピトープを担持しておりそし
てタンパク質分解開裂により得られるタンパク質断片の
測定を可能にすることが記載されている。これは、前記
タンパク質を開裂させることにより得られた精製断片で
動物を免疫処置することによって得られた抗体を用いて
達成することができる。
された方法は2つとも幾つかの欠点を有する。上記に略
述した第一の方法では、a)測定に関与する抗体により
認識されるエピトープの位置とb)汚染タンパク質の性
質の両方が正確に既知である場合、またはタンパク質分
解による断片化の種々の技術の広範な実験を行う場合に
のみ、干渉タンパク質分子上のエピトープの選択的破壊
を達成することができる。
での免疫処置によって得られた抗体を用いたタンパク質
分解生成断片の測定は、非常に純粋な多量の生来のタン
パク質を必要とする。更に、特異的抗体の検出は、免疫
原として使用する前にタンパク質分解により得られた精
製断片の特徴づけを必要とし、または異なるペプチドで
の免疫処置後に得られた抗体の特異性の徹底的な調査を
必要とする。
いたバソプレッシン前駆体の測定方法も記載されてい
る。この方法では、測定前に抗原決定基が酵素的または
化学的処理により再構成される〔A. Cupo, G. Rougon-R
apuzziおよびM. Delaage, "Immunochemical detection
of vasopressin precursors : artificial processinga
nd quantitation along the hypothalamo-hypophyseal
axis", Eur. J. Biochem., 115 ,169-174 (1981) を参
照のこと〕。
して惹起された抗体を使用することによりmet-エンケフ
ァリンを測定する類似方法が好結果に用いられている。
この測定は、まず天然断片を除去するために試料をトリ
クロロ酢酸で処理し、次いでトリプシンで処理した後に
行われる〔A. Cupo, P.A. Pontarotti, T. Jarryおよび
M.A. Delaage, "A new immunological approach to the
detection and quantitation of met-enkephalin prec
ursors in the rat brain", Neuropeptides ,4 ,375-38
7 (1984) を参照のこと〕。
技術の欠点の幾つか、例えば他のタンパク質による干渉
を削除する。実際に、従来技術の方法は、この点で有効
な解決策を全く提供せず、そして干渉タンパク質を除去
する酵素的および/または化学的開裂を見つけるために
多大な予備実験を行わなければならない。
ク質の一次構造の研究によって、前処理または後の修飾
を行うことなく、タンパク質分解で得られた特異的断片
の簡単な直接測定が可能である。この方法は、次の3つ
の本質的な点で上述の従来方法と異なっている。 1)免疫処置用ペプチドが人工的な断片であること、 2)天然の断片を除去するための抽出を行わないこと、
および 3)試料に化学的修飾を行う必要がないこと。
は、着目のタンパク質の同定または測定方法であって、
必要ならば免疫原性にされたペプチドを用いて抗体を調
製し、次いでこうして得られた抗体を使って、前記タン
パク質を含有し且つ前記ペプチドを遊離させる処理をし
た試料を用いて出発して前記着目のタンパク質を決定す
ることを含んで成り、前記ペプチドが、酵素処理によっ
て遊離され得るタンパク質断片またはタンパク質断片の
一部分として前記タンパク質の既知の配列から選択さ
れ、その後で合成により調製されることを特徴とする方
法を提供することである。
原の使用が、着目のエピトープの容易な調製および選択
を提供するという利点を有する。そのため、生来のタン
パク質のイムノアッセイにおいて起こる親和性の低下に
より生じる問題を回避することが可能になる。これは免
疫原が測定しようとする抗原と完全に一致するために可
能であり、例えばそれと完全に同一であることができ
る。更に、タンパク質の一次構造中に容易に同定される
特異的部位での結合の切断を確実にするタンパク質分解
酵素を用いてタンパク質の開裂を行うための当業者に利
用可能な技術が多数存在しており、そしてこの技術領域
は使用されるペプチド断片の広範な選択範囲を提供す
る。
から周知である。ペプチドが免疫原性でないかまたは十
分に免疫原性でないならば、例えばそれらを巨大分子、
特にタンパク質由来のもの、に結合することによって、
それらを免疫原性にすることができる。
することができ、または対応する遺伝子中の核酸配列か
ら推定することができる。ペプチドは、タンパク質、例
えばホルモンまたはウイルスタンパク質の断片と一致す
るように選択される。選択されるペプチドは、実際は、
それらが酵素処理により得ることができるタンパク質断
片と一致するように選択される。それらの例は、問題の
タンパク質をトリプシンで処理することによって得られ
る「トリプシン断片」である。
は、タンパク質断片のC−末端、N−末端または中間部
分である。以下の記載において、「断片」なる用語は、
断片と断片の一部分の両方を意味するために用いられ
る。
の組合せ、例えばトリプシン−キモトリプシン−プロリ
ンエンドペプチダーゼの組合せ、を用いて出発タンパク
質を処理することも可能である。
てそれらが単一タンパク質のまたはタンパク質のグルー
プもしくは「ファミリー」のどんな代表物であるかに従
って選択される。本発明の方法の実際の適用において、
1または複数(例えば2,3または4つ)のペプチドを
用いることができる。
質の既知の配列と一致するように且つ適当な処理によっ
てタンパク質から遊離され得るタンパク質断片として働
くように選択されるペプチドは、6〜30、好ましくは
6〜20のアミノ酸残基を含む。
要条件を満たすならばそのまま使用することができる
が、或る場合にはそれらを変更することが有利である。
これは例えば置換によって行うことができる。
択したペプチド中に存在する1または複数のアミノ酸を
1または複数のアミノ酸により置換することが可能であ
る。しかし、この置換は好ましくは存在するアミノ酸の
4分の1未満、特に1,2または3個のアミノ酸に作用
すべきである。こうして導入された新たな1または複数
のアミノ酸は、好ましくは幾つかの遊離基、例えば -NH
2, -COOHまたは-SH 基を有するだろう。
ることができるアミノ酸の中で、チロシン、および着目
の担体タンパク質、酵素または他のいずれかの分子との
標的指向性カップリングを可能にするアミノ酸を挙げる
ことができる。選択したペプチドに1または複数のアミ
ノ酸を付加することも有用であるだろう。付加される新
たな1または複数のアミノ酸は、有利には置換と同じア
ミノ酸の中から選択されるだろう。
よって前記断片を変更することも有利であろうが、これ
は好ましくは存在するアミノ酸の半分未満に限定すべき
である。本発明に従ったタンパク質の同定または測定に
おける干渉を防ぐために、ペプチドはタンパク質のアミ
ノ酸配列中に複製物を有するがタンパク質断片として天
然に存在しないように選択することができる。上述した
ように、ペプチドは与えられたタンパク質またはタンパ
ク質のグループもしくはファミリー全体に対して特異的
であるように選択することができる。
ドは重合形において存在することができる。これは例え
ば適当な処理によってタンパク質から遊離させることが
できる2つのタンパク質断片に対応することができ、問
題の断片は生来のシステイン残基にある1または複数の
ジスルフィド結合によって結合している。
性を変更するためにも使用することができる。ポリマー
は同一のまたは異なるモノマーから成ることができる。
種々の基(例えばアミノ、カルボキシルまたはスルフヒ
ドリル基)によりモノマーを一緒に結合することがで
き、そして特に1または複数の分子を介してそれらのモ
ノマーを一緒に連結することができる。
物質的存在としてタンパク質を所有することはもはや必
要でない。実際、測定しようとする1または複数のタン
パク質のアミノ酸配列またはアミノ酸配列の部分を文献
から知ることで十分である。1または複数の酵素による
酵素的開裂方法に詳しい技術者は、どのペプチドが適当
な処理によりタンパク質から遊離させることができる断
片に対応するだろうかを予想することができる。
ものであるためか、または実際は次のような逆の理由:
それを構成しているアミノ酸配列がタンパク質のグルー
プまたはファミリー全体に共通であるためにペプチドを
選択してもよい。後者のねらいはタンパク質のグループ
全体を一緒に測定することである。
イズを有するペプチドを提供すること、を満たすアミノ
酸配列を選択することも可能である。
を可能にするために変更することができる: a)ペプチド断片の与えられた部分に対する抗原−抗体
反応を標的するための担体タンパク質との結合; b)着目の分子、例えば酵素との結合;または c)ヨウ素-125での標識を可能にするための、アミノ酸
例えばチロシンの導入。
か、例えば他のタンパク質による干渉を削除する。実際
に、従来技術の方法は、この点で有効な解決策を全く提
供せず、そして干渉タンパク質を除去する酵素的および
/または化学的開裂を見つけるために多大な予備実験を
行わなければならない。
固相ペプチド合成によって、選択したペプチドを合成す
ることができるであろう。
しばしば構造的相同性を示す多数のタンパク質タイプの
ホルモンのイムノアッセイに特に適当である。それはま
た、他の方法では次のような問題点により妨害され得る
ウイルスタンパク質のイムノアッセイにも適当である: 1)使用する動物を免疫処置するのに十分に多量で且つ
高純度で抗原を得ることが困難である; 2)同一ウイルスの異なる株に対応する抗原が大きな株
間変異を示す; 3)感染された個体の血清中に存在するウイルスタンパ
ク質に対する抗体が分析を干渉し、この干渉が、測定に
関与する抗体により認識されるエピトープの全部また部
分を遮蔽し得る。
上記の3つの問題点も解決する。第一に、タンパク質分
解断片に対応する合成ペプチドは、非常に純粋で且つ多
量に入手できる免疫原である。第二に、アミノ酸配列の
正確な選択は、同一ウイルスの異なる株に共通であるか
または反対に1つの与えられた株に特異的である断片を
選択することを可能にする。第三に、天然には存在しな
い測定に関与する抗体のエピトープは、もちろん血清抗
体によって遮蔽されない。本発明の方法を以下の実施例
によりさらに説明するが、これは本発明の範囲を限定す
るものではない。
のP25タンパク質の測定 1.ペプチド断片の選択 効果的で、安価で、単純で且つ特異的であるため、タン
パク質のトリプシン誘導断片化を使用し、アルギニンお
よびリジン単位の後ろで分子を開裂させた。比較標準株
HIV-1 BRUの P25タンパク質をトリプシンで消化するこ
とにより得られた断片を、GENPROデータベースおよびBI
SANCE(CITI 2) ソフトウエアを使って、アミノ酸配列に
基づいてマッピングした。
片のみを考慮に入れた。次にそれらの断片を、NBRFおよ
びGENPROデータベースに列挙されたHIV-1 およびHIV-2
ウイルスの他の株のP25 タンパク質のアミノ酸配列と比
較した。
2 ウイルスの他の株の対応領域に渡り80%を越える相同
性を示したならば、トリプシン生成断片自体(または6
以上のアミノ酸を含み且つそのような断片のCOOH末端ま
たはNH2 末端に対応するペプチド)を保持した。次いで
それらのペプチドをNBRFおよびGENPROデータベースに記
憶されたあらゆるタンパク質のアミノ酸配列と比較し
た。しかし、HIV およびSIV ウイルスの P25タンパク質
以外のタンパク質のアミノ酸配列とは有意な相同性が認
められなかった。これに基づいて4つのペプチド(T7K,
G11C, N17K およびT18K) を選択しそして合成した。そ
れらのペプチドを下記に記載する。
p-Val-Lys の素性 このペプチドは、トリプシン処理により得られた完全な
断片であり、そして比較標準ウイルスHIV-1 BRU の P25
タンパク質中の19位から25位までのアミノ酸の配列に対
応する。この配列は、今までにアミノ酸配列が決定され
ているHIV ウイルスの全ての株に常に存在する。
la-Gly-Thr-Thr-Ser-Thr-Cysの素性 このペプチドは、比較標準ウイルス株、即ちHIV-1 BRU
、のアミノ酸 101からアミノ酸 131までに含まれる、
トリプシン生成断片の NH2末端のアミノ酸 101からアミ
ノ酸 110までに及ぶ配列により構成されるが、SH基を介
した化学結合を可能にするため余分なシステインがその
COOH末端に付加されている。このペプチドも、今までに
アミノ酸配列が決定されているHIV ウイルスの他の株全
てに常に存在する。
lu-Thr-Leu-Leu-Val-Gln-Asn-Ala-Asn-Pro-Asp-Cys-Lys
の素性 このペプチドは、トリプシン処理により得られた完全な
断片であり、そして比較標準HIV-1 BRU 株のP25 タンパ
ク質中のアミノ酸 183からアミノ酸 199までの配列に対
応する。しかしながら、異なるHIV ウイルス株間で次の
ような相違が観察され得る。 ─ 187位のグルタミン酸のグルタミンによる置換(HIV-2
ROD株について) ; ─ 187位のグルタミン酸のグルタミンによる置換、 193
位のアスパラギンのセリンによる置換および 194位のア
ラニンの削除(HIV-2 SBLISY 株について) ; ─ 187位のグルタミン酸のグルタミンによる置換および
191位のバリンのイソロイシンによる置換(HIV-2 FG 株
について) ;並びに ─ 183位のアスパラギンのグリシンによる置換(HIV-1 Z
2 株について) 。
et-Met-Thr-Ala-Cys-Gln-Gly-Val-Gly-Gly-Pro-Gly-His
-Lysの素性 このペプチドは、HIV-1 BRU のアミノ酸 204からアミノ
酸 227までの区域に含まれる、トリプシン生成断片のCO
OH末端の 210位から 227位までに及ぶアミノ酸配列から
成る。しかしながら、異なるHIV ウイルス株間で次のよ
うな相違が観察され得る。 ─ 215位のメチオニンのロイシンによる置換および 226
位のヒスチジンのグルタミンによる置換(HIV-2 ROD株に
ついて) ; ─ 215位のメチオニンのロイシンによる置換および 220
位のグリシンのイソロイシンによる置換(HIV-2 SBLISY
株について) ; ─ 215位のメチオニンのロイシンによる置換、217 位の
アラニンのスレオニンによる置換および226 位のヒスチ
ジンのグルタミンによる置換(HIV-2 FG 株について) ;
並びに ─225 位のグリシンのセリンによる置換(HIV-1 ELI, HI
V-1 MAL およびHIV-1Z2株について) 。
せ、必要な免疫原を作製した。より詳しくは、ペプチド
中の生来のシステインのSH基と担体タンパク質中のリジ
ン残基のε-NH2基の両方と反応するスクシンイミジル4
−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カル
ボキシレート(SMCC)を介して、ペプチドN17Kをウシ血清
アルブミン(BSA) と結合させた。Serva からのウシ血清
アルブミンを0.1Mリン酸塩緩衝液(pH 7)中に5 mg/ml の
濃度に溶解した。PierceからのSMCC試薬をジメチルホル
ムアミド(DMF) 中に25 mg/mlの濃度に溶解し、そして得
られた溶液を1:50のモル比で BSA溶液に添加した。
0.1Mリン酸塩緩衝液(pH 6)で平衡化されているBio-Rad
からのBiogel P2 カラムの分子篩を通過させることによ
り、種々の試薬を分離した。次いで30:1のモル比におい
てペプチドをBSA-SMCC溶液に導入し、そして反応混合物
を4℃で12時間インキュベートした。
平衡化されているBio-Rad からのBiogel P4 カラムの分
子篩に反応混合物を通過させることにより、こうして得
られた免疫原を精製した。4匹のBALB/cマウスに、完全
フロイントアジュバントに混和された50μg の免疫原を
一ヵ月おきに接種した。半分は皮下に、そして残りの半
分は腹腔内に注射した。
(GT)と結合された放射性トレーサー(ここではペプチド
N17K) を結合する能力を使うことにより、得られた抗体
を特徴づけた。
リシル−L−チロシン(GT; Sigmaから) の20ミリモル溶
液を調製し、そしてジメチルホルムアミド(DMF) 中25 m
g/mlのSMCC(Pierce から) 溶液を1:1 のモル比において
前記GT溶液に添加した。得られた反応混合物を20℃で2
時間インキュベートした。
ロマトグラフィー(HPLC)により精製し、次いで0.1Mリン
酸塩緩衝液(pH6.0) 中の0.5 ミリモル溶液中のペプチド
N17Kと1:1 のモル比においてカップリングさせた。4℃
で12時間インキュベートした後、生じたN17K-SMCC-GTを
逆相HPLCにより精製した。得られたN17K-SMCC-GTトレー
サー系をクロラミンT法によりヨウ素-125で標識し、そ
して再び高圧液体クロマトグラフィーにより精製した。
されたマウスの抗血清を用いて得られた結果を示す。よ
り詳しくは、この図は次のようにして得られた。マウス
の抗血清 100μl を0.1% BSA-PBS緩衝液混合物(pH 7.2)
で1:1000希釈した。この希釈液に、同じ緩衝液中の同位
体標識N17K-SMCC-GTトレーサー50μl と共に ─第一の場合はペプチドN17K 50μl 、 ─第二の場合はHIV-1 BRU 株の P25タンパク質(Transge
neから) 50μl 、そして ─第三の場合はトリプシン処理された P25タンパク質
50μl (これらの成分は通常ヒト血漿中様々な濃度で添加され
る) を添加した。
し、そして生成した抗原−抗体複合体を、6000の平均分
子量を有するポリエチレングリコール(REG 6000)の 20%
水溶液 200μlの添加により沈澱させ、次いで遠心分離
した。最後に、生じた沈澱の放射能を測定した。図1に
示されるように、抗体はペプチドN17Kとトリプシン処理
されたP25 タンパク質の両者を認識するが、生来の P25
タンパク質には応答しなかった。
V-1 BRU 株の P25タンパク質の測定を可能にするが、こ
の断片と構造的相同性を示すHIV-1 ウイルスの他の株全
てにおける P25タンパク質の測定も可能にするであろ
う。
PH)の測定 NH2-末端ヘキサペプチド(E6R) Glu-Leu-Thr-Gly-Gln-Ar
g に対して惹起された抗体を用いる向脂肪性脳下垂体ホ
ルモンのイムノアッセイ方法を開発した。このペプチド
はトリプシン生成断片に対応するが、NBRFおよびGENPRO
データベース中に記憶されているタンパク質のアミノ酸
配列のいずれとも有意な相同性を示さない。
異的に向けられた抗体を生産するため、システインのSH
基を介してこのペプチドを担体タンパク質に結合させる
ことを可能にするためにもとの断片中に存在していたグ
リシン残基がシステイン残基により置換されたアミノ酸
配列Glu-Leu-Thr-Cys-Gln-Arg を有するペプチドを用い
て、動物を免疫処置した。
チル)シクロヘキサン−1−カルボキシレート(SMCC)
は、ペプチドの生来のまたは付加されたシステイン残基
のSH基と、担体タンパク質中に存在するリジン残基のε
-NH2基の両方と反応するので、SMCCを用いてこのカップ
リングを行った。
0.1Mリン酸塩緩衝液(pH 7)中に 5 mg/mlの濃度に溶解し
た。PierceからのSMCC試薬をジメチルホルムアミド(DM
F) 中に25 mg/mlの濃度に溶解し、そしてSMCC溶液を1:5
0のモル比においてBSA 溶液に添加した。
0.1Mリン酸塩緩衝液(pH 6)で平衡化されているBio-Rad
からのBiogel P2 カラムの分子篩を通過させることによ
り、種々の試薬を分離した。次いで30:1のモル比におい
てペプチドをBSA-SMCC溶液に導入し、反応混合物を4℃
で12時間インキュベートした。
平衡化されているBio-Rad からのBiogel P4 カラムの分
子篩に反応混合物を通過させることにより、形成された
免疫原を精製した。
ジュバント中に混和された50および250μg の免疫原を
一ヵ月おきに皮下注射により接種した。それらの動物の
うちの2匹が、向脂肪性脳下垂体ホルモンを測定するの
に使用することができる抗体を生産した。
ペプチドを遊離させ、そしてこのペプチドと、SMCCを介
してグリシル−L−チロシン(GT)(ここでGTは放射性ヨ
ウ素-125で標識されている)に結合された同じペプチド
との間の競合に基づいて測定を行った。イムノアッセイ
の結果を図2に示す。
のために十分に多量の適当に純粋なタンパク質を得るこ
とが困難である向脂肪性脳下垂体ホルモンのイムノアッ
セイに使用できることを示す。
置されたマウスの抗血清の、N17K, P25 またはトリプシ
ン処理されたP25 とN17K-SMCC-GT(ここでGTはヨウ素-1
25で標識されている)との間の競合に基づくイムノアッ
セイの結果を示す。
されたマウスの抗血清をトリプシンで処理して遊離させ
たNH2-末端ペプチドと、SMCCを介してGT(ここでGTは放
射性ヨウ素-125で標識されている)に結合された同じペ
プチドとの間の競合に基づくイムノアッセイの結果を示
す。
Claims (18)
- 【請求項1】 既知タンパク質の同定または測定方法で
あって、 (a) 該タンパク質の配列の調査後、該タンパク質中に、
タンパク質分解酵素処理により遊離可能であるが断片の
形では天然に存在しないペプチドを選択し; (b) 前記ペプチドの配列を有する合成ペプチドをペプチ
ド合成により調製し; (c) この合成ペプチドに対する抗体を調製し; (d) 前記タンパク質を含むと思われる試料に前記タンパ
ク質分解酵素を添加し、存在するならば前記タンパク質
を開裂せしめそして前記ペプチドを遊離させ; (e) 前記試料を前記抗体と接触せしめることにより、前
記試料中の遊離可能なペプチドの存否についての免疫測
定を行い;そして (f) 必要であれば前記試料中に存在するタンパク質の量
を推定することを含んで成る方法。 - 【請求項2】 前記ペプチドが6〜30個のアミノ酸残
基を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。 - 【請求項3】 前記ペプチドが6〜20個のアミノ酸残
基を含むことを特徴とする、請求項1または2に記載の
方法。 - 【請求項4】 前記ペプチドがC−末端、N−末端また
は中間部の断片に相当することを特徴とする、請求項1
〜3のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項5】 選ばれた前記ペプチドが変更される、請
求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項6】 前記ペプチドが1または複数のアミノ酸
の置換により変更される、請求項1〜5のいずれか一項
に記載の方法。 - 【請求項7】 前記ペプチドが1または複数のアミノ酸
の付加により変更される、請求項1〜5のいずれか一項
に記載の方法。 - 【請求項8】 前記ペプチドが1または複数のアミノ酸
の削除により変更される、請求項1〜5のいずれか一項
に記載の方法。 - 【請求項9】 前記ペプチドが単一のタンパク質に対す
るそれの特異性のために選択されることを特徴とする、
請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項10】 前記ペプチドがタンパク質ファミリー
に対するそれの特異性のために選択されることを特徴と
する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項11】 前記ペプチドがポリマー形において見
つかることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか一
項に記載の方法。 - 【請求項12】 タンパク質の同定のために使用され
る、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項13】 タンパク質の測定のために使用され
る、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項14】 前記タンパク質がHIVウイルスのP
25タンパク質であることを特徴とする、請求項1〜1
3のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項15】 前記タンパク質がヒトリポトロピン
(LPH)であることを特徴とする、請求項1〜13の
いずれか一項に記載の方法。 - 【請求項16】 前記既知タンパク質がHIVウイルス
のP25タンパク質であり、前記合成ペプチドがGly-Se
r-Asp-Ile-Ala-Gly-Thr-Thr-Ser-Thr-Cys であり、そし
て前記タンパク質分解酵素がトリプシンである、請求項
1に記載の方法。 - 【請求項17】 前記既知タンパク質がHIVウイルス
のP25タンパク質であり、前記合成ペプチドがAsn-Tr
p-Met-Thr-Glu-Thr-Leu-Leu-Val-Gln-Asn-Ala-Asn-Pro-
Asp-Cys-Lys であり、そして前記タンパク質分解酵素が
トリプシンである、請求項1に記載の方法。 - 【請求項18】 前記既知タンパク質がHIVウイルス
のP25タンパク質であり、前記合成ペプチドがThr-Le
u-Glu-Glu-Met-Met-Thr-Ala-Cys-Gln-Gly-Val-Gly-Gly-
Pro-Gly-His-Lys であり、そして前記タンパク質分解酵
素がトリプシンである、請求項1に記載の方法。
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