JP3040507B2 - 硝酸菌の保存と復元方法 - Google Patents
硝酸菌の保存と復元方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は水産動物の畜養・輸送設
備、水族館等の閉鎖系循環水に含まれる硝化細菌のうち
硝酸菌の保存と復元方法に関し、廃水、下水およびし尿
処理設備、土壌、海水および河川水など、自然界に広く
分布する硝酸菌の保存と復元としても利用できる。
備、水族館等の閉鎖系循環水に含まれる硝化細菌のうち
硝酸菌の保存と復元方法に関し、廃水、下水およびし尿
処理設備、土壌、海水および河川水など、自然界に広く
分布する硝酸菌の保存と復元としても利用できる。
【０００２】
【従来の技術】 硝化菌はアンモニアまたは亜硝酸を亜
硝酸または硝酸に酸化し、二酸化炭素を唯一の炭素源と
して菌体成分を合成する独立栄養細菌であり、有機物が
共存すると硝化菌の硝化反応は阻害されるといわれてき
た。
硝酸または硝酸に酸化し、二酸化炭素を唯一の炭素源と
して菌体成分を合成する独立栄養細菌であり、有機物が
共存すると硝化菌の硝化反応は阻害されるといわれてき
た。
【０００３】硝化細菌にはアンモニアを酸化して亜硝酸
塩にするアンモニア酸化細菌（以下「亜硝酸菌」とい
う）と、亜硝酸塩を酸化して硝酸塩にする亜硝酸酸化菌
（以下「硝酸菌という）の２つの細菌群からなる。それ
ぞれの化学反応式はつぎの通りである。
塩にするアンモニア酸化細菌（以下「亜硝酸菌」とい
う）と、亜硝酸塩を酸化して硝酸塩にする亜硝酸酸化菌
（以下「硝酸菌という）の２つの細菌群からなる。それ
ぞれの化学反応式はつぎの通りである。
【０００４】（ａ）亜硝酸菌のアンモニア酸化反応 ＮＨ4 + ＋ 3/2Ｏ2 → ＮＯ2 - ＋Ｈ2 Ｏ＋３９．５ｋ
ｃａｌ （ｂ）硝酸菌の亜硝酸酸化反応 ＮＯ2 - ＋ 1/2Ｏ2 → ＮＯ3 - ＋２１．６ｋｃａｌ
ｃａｌ （ｂ）硝酸菌の亜硝酸酸化反応 ＮＯ2 - ＋ 1/2Ｏ2 → ＮＯ3 - ＋２１．６ｋｃａｌ
【０００５】これらの細菌は従属栄養細菌（有機物の酸
化反応によって生ずるエネルギーを利用して増殖する）
に比べて増殖速度が遅く、硝化反応が十分に現れるだけ
の菌量に達するまでに長期間を要する（この期間を「馴
致期間」という）。
化反応によって生ずるエネルギーを利用して増殖する）
に比べて増殖速度が遅く、硝化反応が十分に現れるだけ
の菌量に達するまでに長期間を要する（この期間を「馴
致期間」という）。
【０００６】そこで馴致期間を短縮するためには、別途
準備しておいた多量の硝化菌を種菌として浄化装置など
に加えることが最も効果的である。そのためには適時任
意に用いることができ、復元力が優れた硝化菌の保存方
法が望まれていた。
準備しておいた多量の硝化菌を種菌として浄化装置など
に加えることが最も効果的である。そのためには適時任
意に用いることができ、復元力が優れた硝化菌の保存方
法が望まれていた。
【０００７】従来より細菌の保存方法には継代培養法、
凍結乾燥法およびＬ−乾燥法などがあるが、このうち亜
硝酸菌の有効な保存法は継代培養法しかなかった。
凍結乾燥法およびＬ−乾燥法などがあるが、このうち亜
硝酸菌の有効な保存法は継代培養法しかなかった。
【０００８】なお継代培養法とは、硝化菌を培地に植種
し最適温度で一定期間培養した（硝化菌の場合は通常５
〜７日間）のち、その培養液の一部を別の新鮮培地に直
ちに植種するという操作を繰り返すことによって硝化菌
の保存を図る方法である。
し最適温度で一定期間培養した（硝化菌の場合は通常５
〜７日間）のち、その培養液の一部を別の新鮮培地に直
ちに植種するという操作を繰り返すことによって硝化菌
の保存を図る方法である。
【０００９】
（１）継代培養法は操作が煩雑で多くの労力を要する。
また移植を繰り返すうちに変異を起こしやすく、硝化能
力が低下することがある。
また移植を繰り返すうちに変異を起こしやすく、硝化能
力が低下することがある。
【００１０】（２）細菌を保存処理する際、その細菌濃
度をあらかじめ高めることにより復元効率が大きく向上
する。しかし硝酸菌の菌体収率は０．０２〜０．０７ｇ
硝酸菌／ｇ除去ＮＯ2 −Ｎと従属栄養細菌に比べて極め
て低く、高い硝酸菌濃度を得るためには長時間を要す
る。したがって従来は硝酸菌培養液を遠心分離機で集菌
し濃縮したのち保存処理していた。この操作は煩雑で、
雑菌にも汚染されやすい。また保存処理していた硝酸菌
を復元させるときは従属栄養細菌に比べて依然として長
時間を要する。
度をあらかじめ高めることにより復元効率が大きく向上
する。しかし硝酸菌の菌体収率は０．０２〜０．０７ｇ
硝酸菌／ｇ除去ＮＯ2 −Ｎと従属栄養細菌に比べて極め
て低く、高い硝酸菌濃度を得るためには長時間を要す
る。したがって従来は硝酸菌培養液を遠心分離機で集菌
し濃縮したのち保存処理していた。この操作は煩雑で、
雑菌にも汚染されやすい。また保存処理していた硝酸菌
を復元させるときは従属栄養細菌に比べて依然として長
時間を要する。
【００１１】（３）硝化装置の馴致期間を短縮するため
には、硝化性能を十分に発揮するだけの硝化菌量をあら
かじめ準備しておき、起動時の装置に投入すればよい。
しかし硝化菌は上記のとおり菌体収率が低く増殖が遅い
ため、長時間培養しても低濃度の菌液しか得られないと
いう欠点があった。そのため大量の硝化菌液を運搬する
しかなかった。
には、硝化性能を十分に発揮するだけの硝化菌量をあら
かじめ準備しておき、起動時の装置に投入すればよい。
しかし硝化菌は上記のとおり菌体収率が低く増殖が遅い
ため、長時間培養しても低濃度の菌液しか得られないと
いう欠点があった。そのため大量の硝化菌液を運搬する
しかなかった。
【００１２】（４）硝化装置の馴致が完了した定常運転
に入って後も、系内のなんらかの原因により硝化菌がダ
メージを受け硝化性能が低下することがある。その場合
性能回復に要する時間は有機物廃水浄化装置などに比べ
て長時間を要する。これも硝化菌の菌体収率が低く、増
殖が遅いことによる。性能回復の時間を短縮するために
は、硝化性能を十分に回復するだけの高濃度の硝化菌を
系内に再度供給すればよいが、従来低濃度の硝化菌液し
か得られず実現は難しかった。
に入って後も、系内のなんらかの原因により硝化菌がダ
メージを受け硝化性能が低下することがある。その場合
性能回復に要する時間は有機物廃水浄化装置などに比べ
て長時間を要する。これも硝化菌の菌体収率が低く、増
殖が遅いことによる。性能回復の時間を短縮するために
は、硝化性能を十分に回復するだけの高濃度の硝化菌を
系内に再度供給すればよいが、従来低濃度の硝化菌液し
か得られず実現は難しかった。
【００１３】上記の問題点のうち、硝酸菌を保存処理す
る前にあらかじめ高濃度の菌液を短時間で得る方法は既
に提案した（特願平２−３２５６１３号）。本発明はさ
らにこれ以外の問題点を解決するために、硝酸菌の有効
な保存と復元方法を提供しようとするものである。
る前にあらかじめ高濃度の菌液を短時間で得る方法は既
に提案した（特願平２−３２５６１３号）。本発明はさ
らにこれ以外の問題点を解決するために、硝酸菌の有効
な保存と復元方法を提供しようとするものである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明は、 （１）硝酸菌を保存する方法において、硝酸菌をオキサ
ル酢酸もしくはその塩、クエン酸もしくはその塩、シス
アコニット酸もしくはその塩、イソクエン酸もしくはそ
の塩、２−オキソグルタル酸もしくはその塩、コハク酸
もしくはその塩、フマル酸もしくはその塩、リンゴ酸も
しくはその塩、グリオキシル酸またはその塩、酢酸また
はその塩、アデノシン３リン酸またはその塩、Ｄ−グル
コース、Ｄ−フルクトース、α−Ｌ−ラムノース、α−
Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１分子および
Ｄ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユニットが直
鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくとも１種類以
上の有機化合物を含む液で硝酸菌を培養した菌液をその
ままかまたはシリカゲルと混合後、凍結保存することを
特徴とする硝酸菌の保存方法。
ル酢酸もしくはその塩、クエン酸もしくはその塩、シス
アコニット酸もしくはその塩、イソクエン酸もしくはそ
の塩、２−オキソグルタル酸もしくはその塩、コハク酸
もしくはその塩、フマル酸もしくはその塩、リンゴ酸も
しくはその塩、グリオキシル酸またはその塩、酢酸また
はその塩、アデノシン３リン酸またはその塩、Ｄ−グル
コース、Ｄ−フルクトース、α−Ｌ−ラムノース、α−
Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１分子および
Ｄ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユニットが直
鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくとも１種類以
上の有機化合物を含む液で硝酸菌を培養した菌液をその
ままかまたはシリカゲルと混合後、凍結保存することを
特徴とする硝酸菌の保存方法。
【００１５】（２）上記１の凍結保存した亜硝酸菌を復
元する方法において、上記１の有機化合物、乳酸もしく
はその塩、Ｌ−グルタミン酸もしくはその塩、Ｌ−アス
パラギン酸もしくはその塩、Ｌ−セリンもしくはその塩
のうち１種類以上の有機化合物を含む培地で培養するこ
とを特徴とする硝酸菌の復元方法。である。
元する方法において、上記１の有機化合物、乳酸もしく
はその塩、Ｌ−グルタミン酸もしくはその塩、Ｌ−アス
パラギン酸もしくはその塩、Ｌ−セリンもしくはその塩
のうち１種類以上の有機化合物を含む培地で培養するこ
とを特徴とする硝酸菌の復元方法。である。
【００１６】
（１）硝酸菌にダメージを与えることなく保存すること
ができる。 （２）保存していた硝酸菌を復元するとき、特定有機化
合物によって硝酸菌の増殖または硝化作用が促進され、
従来の方法では得られなかった高濃度の硝酸菌液または
硝化能力の復元が比較的短時間で得られる。
ができる。 （２）保存していた硝酸菌を復元するとき、特定有機化
合物によって硝酸菌の増殖または硝化作用が促進され、
従来の方法では得られなかった高濃度の硝酸菌液または
硝化能力の復元が比較的短時間で得られる。
【００１７】なお特定の有機化合物による硝酸菌増殖ま
たは硝化作用の促進のメカニズムはまだ不明である。お
そらくこれらの特定有機化合物は従属栄養細菌では他の
有機化合物から容易に生合成されるが、硝酸菌では代謝
経路の違いからその生合成に相当の時間を要するのでは
ないかと考えられる。
たは硝化作用の促進のメカニズムはまだ不明である。お
そらくこれらの特定有機化合物は従属栄養細菌では他の
有機化合物から容易に生合成されるが、硝酸菌では代謝
経路の違いからその生合成に相当の時間を要するのでは
ないかと考えられる。
【００１８】
（実施例１）以下に硝酸菌の代表菌株（Nitrobacter ag
ilis ATCC 14123)を例にとって、本発明の一実施例を説
明する。
ilis ATCC 14123)を例にとって、本発明の一実施例を説
明する。
【００１９】なお実施例での硝酸菌の培養は表１に示す
高圧滅菌した培地（Lewis, R.F. and D.Pramer, 1958,
"Isolation of Nitrosomonas in pure culture", J.Ba
cteriol., 76, 524-528) （以下「Ｐ培地」という）を
用いて、すべて無菌的に操作した。
高圧滅菌した培地（Lewis, R.F. and D.Pramer, 1958,
"Isolation of Nitrosomonas in pure culture", J.Ba
cteriol., 76, 524-528) （以下「Ｐ培地」という）を
用いて、すべて無菌的に操作した。
【表１】
【００２０】ピルビン酸ナトリウムが１０ｍＭ、オキサ
ル酢酸が１０ｍＭ、クエン酸三ナトリウム２水和物が１
ｍＭ、シスアコニット酸水和物が１０ｍＭ、イソクエン
酸三ナトリウム２水和物が１０ｍＭ、２−オキソグルタ
ル酸が５ｍＭ、コハク酸ナトリウム６水和物が１ｍＭ、
フマル酸一ナトリウムが１０ｍＭ、Ｌ−リンゴ酸二ナト
リウムが１０ｍＭ、グルオキシル酸一水和物が１０ｍ
Ｍ、酢酸ナトリウムが１０ｍＭ、アデノシン３リン酸
（ＡＴＰ）二ナトリウムが５ｍｇ／リットル、Ｄ−グル
コースが５ｍＭ、Ｄ−フルクトースが１０ｍＭ、α−Ｌ
−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−ラムノース１分子と
Ｄ−グルクロン酸１分子およびＤ−グルコース２分子を
１ユニットとし、該ユニットが直鎖状に重合した高分子
多糖類（以下これを「ゲランガム」という）が０．１％
となるようにそれぞれ別個の培地（表１）３０ｍｌに加
え、培地（表１）であらかじめ３日間前培養しておいた
硝酸菌３ｍｌを植種した。この液を３０℃、１２０ｒｐ
ｍで５日間回転培養した。
ル酢酸が１０ｍＭ、クエン酸三ナトリウム２水和物が１
ｍＭ、シスアコニット酸水和物が１０ｍＭ、イソクエン
酸三ナトリウム２水和物が１０ｍＭ、２−オキソグルタ
ル酸が５ｍＭ、コハク酸ナトリウム６水和物が１ｍＭ、
フマル酸一ナトリウムが１０ｍＭ、Ｌ−リンゴ酸二ナト
リウムが１０ｍＭ、グルオキシル酸一水和物が１０ｍ
Ｍ、酢酸ナトリウムが１０ｍＭ、アデノシン３リン酸
（ＡＴＰ）二ナトリウムが５ｍｇ／リットル、Ｄ−グル
コースが５ｍＭ、Ｄ−フルクトースが１０ｍＭ、α−Ｌ
−ラムノースが１０ｍＭ、α−Ｌ−ラムノース１分子と
Ｄ−グルクロン酸１分子およびＤ−グルコース２分子を
１ユニットとし、該ユニットが直鎖状に重合した高分子
多糖類（以下これを「ゲランガム」という）が０．１％
となるようにそれぞれ別個の培地（表１）３０ｍｌに加
え、培地（表１）であらかじめ３日間前培養しておいた
硝酸菌３ｍｌを植種した。この液を３０℃、１２０ｒｐ
ｍで５日間回転培養した。
【００２１】 またこれと並行して添加物質を含まない
培地（コントロール）について同様に５日間回転培養
し、これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果を
表２に示す。
培地（コントロール）について同様に５日間回転培養
し、これらの培養液の菌数を直接計数した。その結果を
表２に示す。
【００２２】ピルビン酸およびグルコースを除くいずれ
の添加培地でも最終菌濃度が７．０×１０8 cells/ml以
上となったが、無添加培地（コントロール）の最終菌濃
度は２．６×１０8 cells/mlにとどまった。
の添加培地でも最終菌濃度が７．０×１０8 cells/ml以
上となったが、無添加培地（コントロール）の最終菌濃
度は２．６×１０8 cells/mlにとどまった。
【表２】
【００２３】表２のうち最終菌濃度が最高のゲランガム
添加培地で増菌した菌液（２．０×１０9 cells/ml）、
最終菌濃度が最低のグルコース添加培地で増菌した菌液
（１．０×１０9 cells/ml）および無添加培地（コント
ロール）の菌液を以下の保存試験に供した。
添加培地で増菌した菌液（２．０×１０9 cells/ml）、
最終菌濃度が最低のグルコース添加培地で増菌した菌液
（１．０×１０9 cells/ml）および無添加培地（コント
ロール）の菌液を以下の保存試験に供した。
【００２４】 なお無添加培地（コントロール）の菌液
は遠心分離（９，０００×Ｇ，５分間）により集菌した
のら５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液
（このときの菌濃度は２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍ
ｌ）を使った。
は遠心分離（９，０００×Ｇ，５分間）により集菌した
のら５倍濃縮となるように培地（表１）で再懸濁した液
（このときの菌濃度は２．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍ
ｌ）を使った。
【００２５】まず無色シリカゲルを水洗後乾燥し、その
０．４ｇを試験管にいれて１８０℃、２時間乾熱滅菌し
た。それを氷冷しながら上記３種類の菌液１ｍｌを滴下
し、ディープフリーザー（−８０℃）で凍結保存した。
また上記３種類の菌液１ｍｌをそのままディープフリー
ザー（−８０℃）で凍結保存した。以上の操作と同様に
してコントロールも保存処理した。
０．４ｇを試験管にいれて１８０℃、２時間乾熱滅菌し
た。それを氷冷しながら上記３種類の菌液１ｍｌを滴下
し、ディープフリーザー（−８０℃）で凍結保存した。
また上記３種類の菌液１ｍｌをそのままディープフリー
ザー（−８０℃）で凍結保存した。以上の操作と同様に
してコントロールも保存処理した。
【００２６】 これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は培
養中の亜硝酸濃度を定量することにより観察した。その
結果を表３に示す。
【００２７】これよりいずれの添加または無添加培地で
も凍結またはシリカゲル凍結保存によれば遅くとも４日
後に硝酸菌は亜硝酸を消費した。
も凍結またはシリカゲル凍結保存によれば遅くとも４日
後に硝酸菌は亜硝酸を消費した。
【００２８】なおピルビン酸、オキサル酢酸、クエン
酸、イソクエン酸、２−オキソグルタル酸、コハク酸、
フマル酸、リンゴ酸、グリオキシル酸、酢酸、ＡＴＰ、
グルコース、フルクトース、ラムノースおよびゲランガ
ム添加培地についても、表３と同じ結果が得られた。
酸、イソクエン酸、２−オキソグルタル酸、コハク酸、
フマル酸、リンゴ酸、グリオキシル酸、酢酸、ＡＴＰ、
グルコース、フルクトース、ラムノースおよびゲランガ
ム添加培地についても、表３と同じ結果が得られた。
【００２９】（比較例１）実施例１の３種類の保存用亜
硝酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、真空乾燥機によっ
て室温下で減圧しながら水分を除去（この方法はＬ−乾
燥と呼ばれている）した。
硝酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、真空乾燥機によっ
て室温下で減圧しながら水分を除去（この方法はＬ−乾
燥と呼ばれている）した。
【００３０】 またこれは並行して３種類の保存用亜硝
酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセ
トンで予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を
除去した。
酸菌液各１ｍｌをアンプルに入れ、ドライアイス−アセ
トンで予備凍結後、真空乾燥機によって減圧下で水分を
除去した。
【００３１】 これらの保存菌を２４時間後に培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にその硝化能力の復元を試みた。硝
化能力の発現は培養液中の亜硝酸濃度を定量することに
より観察した。その結果を表４に示す。
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、実施例１と同様にその硝化能力の復元を試みた。硝
化能力の発現は培養液中の亜硝酸濃度を定量することに
より観察した。その結果を表４に示す。
【００３２】 これよりいずれの添加培地または無添加
培地でもＬ−乾燥によれば５日後に硝酸菌の硝化反応が
発現してくるが、凍結乾燥では復元が遅かった。
培地でもＬ−乾燥によれば５日後に硝酸菌の硝化反応が
発現してくるが、凍結乾燥では復元が遅かった。
【００３３】なおＬ−乾燥において３％のＬ−グルタミ
ン酸ソーダ溶液に懸濁した場合も表４と同様の結果が得
られた。
ン酸ソーダ溶液に懸濁した場合も表４と同様の結果が得
られた。
【００３４】この比較例１と実施例１を比較すれば、硝
酸菌の保存は凍結保存またはシリカゲル凍結保存の方が
優れていることが分かる。
酸菌の保存は凍結保存またはシリカゲル凍結保存の方が
優れていることが分かる。
【００３５】 （実施例２） 実施例１と同様に、ラム
ノースおよびグルコース添加培地で増菌した硝酸菌液を
１０カ月間シリカゲル凍結保存した。この保存菌液１ｍ
ｌずつを、ピルビン酸ナトリウムが１０ｍＭ、オキサル
酢酸が１０ｍＭ、クエン酸三ナトリウム２水和物が１ｍ
Ｍ、シスアコニット酸水和物が１０ｍＭ、イソクエン酸
三ナトリウム２水和物が１０ｍＭ、２−オキソグルタル
酸が５ｍＭ、コハク酸ナトリウム６水和物が１ｍＭ、フ
マル酸−ナトリウムが１０ｍＭ、Ｌ−リンゴ酸二ナトリ
ウムが１０ｍＭ、グルオキシル酸−水和物が１０ｍＭ、
酢酸ナトリウムが１０ｍＭ、アデノシン３リン酸（ＡＴ
Ｐ）二ナトリウムが５ｍｇ／ｌ、Ｄ−グルコースが５ｍ
Ｍ、Ｄ−フルクトースが１０ｍＭ、α−Ｌ−ラムノース
が１０ｍＭ、ゲランガムが０．１％、乳酸ナトリウムが
１ｍＭ、Ｌ−グルタミン酸ナトリウムが１ｍｇ／ｌ、Ｌ
−アスパラギン酸ナトリウムが５ｍｇ／ｌ、Ｌ−セリン
が１０ｍｇ／ｌとなるようにそれぞれ添加した培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は実
施例１と同様に培養液中の亜硝酸濃度を定量することに
より観察した。その結果を表５に示す。
ノースおよびグルコース添加培地で増菌した硝酸菌液を
１０カ月間シリカゲル凍結保存した。この保存菌液１ｍ
ｌずつを、ピルビン酸ナトリウムが１０ｍＭ、オキサル
酢酸が１０ｍＭ、クエン酸三ナトリウム２水和物が１ｍ
Ｍ、シスアコニット酸水和物が１０ｍＭ、イソクエン酸
三ナトリウム２水和物が１０ｍＭ、２−オキソグルタル
酸が５ｍＭ、コハク酸ナトリウム６水和物が１ｍＭ、フ
マル酸−ナトリウムが１０ｍＭ、Ｌ−リンゴ酸二ナトリ
ウムが１０ｍＭ、グルオキシル酸−水和物が１０ｍＭ、
酢酸ナトリウムが１０ｍＭ、アデノシン３リン酸（ＡＴ
Ｐ）二ナトリウムが５ｍｇ／ｌ、Ｄ−グルコースが５ｍ
Ｍ、Ｄ−フルクトースが１０ｍＭ、α−Ｌ−ラムノース
が１０ｍＭ、ゲランガムが０．１％、乳酸ナトリウムが
１ｍＭ、Ｌ−グルタミン酸ナトリウムが１ｍｇ／ｌ、Ｌ
−アスパラギン酸ナトリウムが５ｍｇ／ｌ、Ｌ−セリン
が１０ｍｇ／ｌとなるようにそれぞれ添加した培地（表
１）１０ｍｌに懸濁し、３０℃、１２０ｒｐｍで培養
し、その硝化能力の復元を試みた。硝化能力の発現は実
施例１と同様に培養液中の亜硝酸濃度を定量することに
より観察した。その結果を表５に示す。
【００３６】これより添加培地の場合は、無添加培地に
比べて硝酸菌の硝化性能の発現が速く、復元が速くなる
ことがわかる。
比べて硝酸菌の硝化性能の発現が速く、復元が速くなる
ことがわかる。
【００３７】
（１）本発明では硝酸菌を比較的短時間の培養で高濃度
化できるため保存処理するに際し菌液をそのまま保存処
理でき、濃縮などの操作が不要となる。
化できるため保存処理するに際し菌液をそのまま保存処
理でき、濃縮などの操作が不要となる。
【００３８】（２）シリカゲル凍結保存により保存期間
を大幅に長くできるため、継代培養法のように多くの労
力を要せず、しかも移植に伴う変異の発生を最小限に防
ぐことができる。
を大幅に長くできるため、継代培養法のように多くの労
力を要せず、しかも移植に伴う変異の発生を最小限に防
ぐことができる。
【００３９】 （３）シリカゲル凍結保存していた硝酸
菌を復元させるとき、従来の無機化合物（亜硝酸）によ
る培養に比べて硝化能力の復元が著しく速められる。
菌を復元させるとき、従来の無機化合物（亜硝酸）によ
る培養に比べて硝化能力の復元が著しく速められる。
【００４０】（４）以上の効果に加えて、硝化装置の馴
致またはトラブル対策用の植種菌として、従来に比べて
少容量の硝化菌液量で、短時間のうちに硝化性能が発揮
または回復させられる。
致またはトラブル対策用の植種菌として、従来に比べて
少容量の硝化菌液量で、短時間のうちに硝化性能が発揮
または回復させられる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (56)参考文献 特開 昭53−21861（ＪＰ，Ａ) 国際公開89／547（ＷＯ，Ａ１) Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．, 1969，Ｖｏｌ．58，ｐ．423−425 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 1/04 C12N 1/20 C02F 3/34 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 硝酸菌を保存する方法において、硝酸菌
をオキサル酢酸もしくはその塩、クエン酸もしくはその
塩、シスアコニット酸もしくはその塩、イソクエン酸も
しくはその塩、２−オキソグルタル酸もしくはその塩、
コハク酸もしくはその塩、フマル酸もしくはその塩、リ
ンゴ酸もしくはその塩、グリオキシル酸またはその塩、
酢酸またはその塩、アデノシン３リン酸またはその塩、
Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、α−Ｌ−ラムノー
ス、α−Ｌ−ラムノース１分子とＤ−グルクロン酸１分
子およびＤ−グルコース２分子を１ユニットとし該ユニ
ットが直鎖状に重合した高分子多糖類のうち少なくとも
１種類以上の有機化合物を含む液で硝酸菌を培養した菌
液をそのままかまたはシリカゲルと混合後、凍結保存す
ることを特徴とする硝酸菌の保存方法。 - 【請求項２】 上記請求項１の凍結保存した硝酸菌を復
元する方法において、上記請求項１の有機化合物、乳酸
もしくはその塩、Ｌ−グルタミン酸もしくはその塩、Ｌ
−アスパラギン酸もしくはその塩、Ｌ−セリンもしくは
その塩のうち１種類以上の有機化合物を含む培地で培養
することを特徴とする硝酸菌の復元方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5440591A JP3040507B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 硝酸菌の保存と復元方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5440591A JP3040507B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 硝酸菌の保存と復元方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05308956A JPH05308956A (ja) | 1993-11-22 |
| JP3040507B2 true JP3040507B2 (ja) | 2000-05-15 |
Family
ID=12969790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5440591A Expired - Lifetime JP3040507B2 (ja) | 1991-03-19 | 1991-03-19 | 硝酸菌の保存と復元方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3040507B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
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|---|---|---|---|---|
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| US9289003B2 (en) | 2003-07-02 | 2016-03-22 | Chr. Hansen A/S | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents |
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-
1991
- 1991-03-19 JP JP5440591A patent/JP3040507B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１９６９，Ｖｏｌ．５８，ｐ．４２３−４２５ |
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| JPH05308956A (ja) | 1993-11-22 |
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