JP3028847B2 - マウスｇｐ１３０蛋白質 - Google Patents
マウスｇｐ１３０蛋白質Info
- Publication number
- JP3028847B2 JP3028847B2 JP2317892A JP31789290A JP3028847B2 JP 3028847 B2 JP3028847 B2 JP 3028847B2 JP 2317892 A JP2317892 A JP 2317892A JP 31789290 A JP31789290 A JP 31789290A JP 3028847 B2 JP3028847 B2 JP 3028847B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- mouse
- amino acid
- dna
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、インターロイキン−６（IL−６）のシグナ
ル伝達に関与する蛋白質であるマウスgp130蛋白質、該
蛋白質をコードするDNA、さらには該蛋白質を遺伝子工
学的に生産するための手段および方法に関するものであ
る。
ル伝達に関与する蛋白質であるマウスgp130蛋白質、該
蛋白質をコードするDNA、さらには該蛋白質を遺伝子工
学的に生産するための手段および方法に関するものであ
る。
IL−６は、免疫、造血、炎症という生体防御系におい
て重要な役割を果たしていることを特徴とする、生体の
増殖分化に広く関与するタンパク質である。さらにIL−
６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子であるこ
とが示されている（岸本、Blood,74,Pl,1989年参照）。
て重要な役割を果たしていることを特徴とする、生体の
増殖分化に広く関与するタンパク質である。さらにIL−
６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子であるこ
とが示されている（岸本、Blood,74,Pl,1989年参照）。
本発明者はヒトIL−６と特異的に結合する細胞膜上の
ヒトIL−６レセプターの遺伝子を単離し、一次構造を決
定した（特願昭63−194885号明細書参照）。次にマウス
IL−６と特異的に結合する細胞膜上のマウスIL−６レセ
プターの遺伝子を単離し、一次構造を決定した（特願平
１−292230明細書参照）。またヒトIL−６レセプター遺
伝子を出発材料として、治療薬、診断薬として期待され
る、可溶性IL−６レセプター（IL−６レセプターの細胞
外部分）を作製した（特願平１−9774号明細書参照）。
さらに本発明者は、IL−６のシグナル伝達に関与する、
見かけの分子量が130KDaの蛋白質（gp130）を発見し、
該蛋白質の遺伝子を単離し、一次構造を決定した（特願
平１−200230）。
ヒトIL−６レセプターの遺伝子を単離し、一次構造を決
定した（特願昭63−194885号明細書参照）。次にマウス
IL−６と特異的に結合する細胞膜上のマウスIL−６レセ
プターの遺伝子を単離し、一次構造を決定した（特願平
１−292230明細書参照）。またヒトIL−６レセプター遺
伝子を出発材料として、治療薬、診断薬として期待され
る、可溶性IL−６レセプター（IL−６レセプターの細胞
外部分）を作製した（特願平１−9774号明細書参照）。
さらに本発明者は、IL−６のシグナル伝達に関与する、
見かけの分子量が130KDaの蛋白質（gp130）を発見し、
該蛋白質の遺伝子を単離し、一次構造を決定した（特願
平１−200230）。
生体内で生理活性を強く発揮するIL−６の作用を人為
的に調節することは、各種疾患の新しい治療のメカニズ
ムとして期待されている。
的に調節することは、各種疾患の新しい治療のメカニズ
ムとして期待されている。
可溶性ヒトgp130（ヒトgp130の細胞外部分）をIL−６
作用を阻害する薬剤として開発するためには、マウス等
の実験動物に投与して、その効果を調べることが必須と
なる。しかし、可溶性ヒトgp130をマウス等の実験動物
に投与しても、実験動物由来のIL−６とIL−６レセプタ
ーの結合物に結合することが期待できない。さらには、
可溶性ヒトgp130の実験動物に対する抗原性も問題とな
る。実験動物の中では、マウスが、取り扱いの容易さに
おいて、さらにはIL−６過剰産生により自己免疫疾患に
なるストレインが確立されているという点において、最
もその使用が望まれる。しかし、可溶性マウスgp130を
遺伝子工学を用いて大量に生産するためには、マウスgp
130をコードするDNA配列が必須である。
作用を阻害する薬剤として開発するためには、マウス等
の実験動物に投与して、その効果を調べることが必須と
なる。しかし、可溶性ヒトgp130をマウス等の実験動物
に投与しても、実験動物由来のIL−６とIL−６レセプタ
ーの結合物に結合することが期待できない。さらには、
可溶性ヒトgp130の実験動物に対する抗原性も問題とな
る。実験動物の中では、マウスが、取り扱いの容易さに
おいて、さらにはIL−６過剰産生により自己免疫疾患に
なるストレインが確立されているという点において、最
もその使用が望まれる。しかし、可溶性マウスgp130を
遺伝子工学を用いて大量に生産するためには、マウスgp
130をコードするDNA配列が必須である。
従って、本発明はマウスgp130、及びそれをコードす
るDNA、並びに該DNAを用いるマウスgp130の製造方法を
提供しようとするものである。
るDNA、並びに該DNAを用いるマウスgp130の製造方法を
提供しようとするものである。
本発明者は、IL−６のシグナル伝達について鋭意研究
を行った結果、マウスgp130をコードするDNAをクローニ
ングすることに成功し、そしてその塩基配列を決定し
た。
を行った結果、マウスgp130をコードするDNAをクローニ
ングすることに成功し、そしてその塩基配列を決定し
た。
本発明は上記の成果を基礎とするものであって、IL−
６のシグナル伝達に関与するマウスgp130;マウスgp130
をコードするDNA配列；組換微生物または培養細胞中で
前記DNA配列を発現し得る複製可能な発現ベクター；前
記発現ベクターにより形質転換された微生物または培養
細胞；及び前記微生物または培養細胞においてマウスgp
130をコードするDNA配列を発現させることを特徴とする
マウスgp130の生産方法、を提供するものであり、以下
詳細に説明する。
６のシグナル伝達に関与するマウスgp130;マウスgp130
をコードするDNA配列；組換微生物または培養細胞中で
前記DNA配列を発現し得る複製可能な発現ベクター；前
記発現ベクターにより形質転換された微生物または培養
細胞；及び前記微生物または培養細胞においてマウスgp
130をコードするDNA配列を発現させることを特徴とする
マウスgp130の生産方法、を提供するものであり、以下
詳細に説明する。
1. マウスgp130 本発明のIL−６のシグナル伝達に関与する細胞膜由来
の蛋白質、すなわちマウスgp130は、IL−６がIL−６レ
セプターと結合して、最終的に種々の増殖分化等の生物
活性を発揮させる際に重要な働きを担っており、天然状
態においては細胞膜に局在している蛋白質である。ここ
で、IL−６とは生体内で作られたマウスIL−６、遺伝子
工学的に作られたマウスあるいはその他の種由来のIL−
６及びその誘導体等を例示することができる。また、IL
−６レセプターとは生体内で作られたマウスIL−６レセ
プター、遺伝子工学的に作られたマウスあるいはその他
の種由来のIL−６レセプター及びその誘導体等を例示す
ることができる。
の蛋白質、すなわちマウスgp130は、IL−６がIL−６レ
セプターと結合して、最終的に種々の増殖分化等の生物
活性を発揮させる際に重要な働きを担っており、天然状
態においては細胞膜に局在している蛋白質である。ここ
で、IL−６とは生体内で作られたマウスIL−６、遺伝子
工学的に作られたマウスあるいはその他の種由来のIL−
６及びその誘導体等を例示することができる。また、IL
−６レセプターとは生体内で作られたマウスIL−６レセ
プター、遺伝子工学的に作られたマウスあるいはその他
の種由来のIL−６レセプター及びその誘導体等を例示す
ることができる。
上記蛋白質は次の性質： （１）マウスIL−６（インターロイキン−６）とマウス
IL−６レセプター（インターロイキン−６レセプター）
との複合体と結合し； （２）マウスIL−６単独又はマウスIL−６レセプター単
独とは結合せず；そして （３）SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動において1
30KDaの見かけの分子量を示す； を有する、IL−６のシグナル伝達に関与する蛋白質であ
って、その天然の形態においては第１図中１位のMetか
ら917位のGlnまでのアミノ酸配列を有する。本発明では
前記アミノ酸配列を有する蛋白質の他、前記アミノ酸配
列中の、IL−６とIL−６レセプターの複合体への特異的
な結合に寄与する部分を含有する蛋白質またはポリペプ
チドであれば良い。すなわち前記アミノ酸配列中の１個
または複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基により
置換されているかまたは欠失もしくは付加されているア
ミノ酸配列を有し、かつIL−６とIL−６レセプターの複
合体と特異的に結合する能力を保持している蛋白質また
はポリペプチドはすべて本発明のマウスgp130の範囲に
含まれる。例えば、このような蛋白質として、前記アミ
ノ酸配列中のIL−６とIL−６レセプターの複合体との結
合に寄与するアミノ酸配列および／またはアミノ酸残基
部分以外のアミノ酸配列および／またはアミノ酸残基が
置換、欠損、挿入等により変化したもの、さらには前記
アミノ酸配列のＮ未端側および／またはＣ未端側にアミ
ノ酸配列および／またはアミノ酸残基が追加された蛋白
質、あるいは例えばヒト成長ホルモン等の他の蛋白質等
が融合したものであっても良い。なお、本発明におい
て、第１図に示すアミノ酸配列において１又は複数のア
ミノ酸残基の欠失、付加及び／又は他のアミノ酸残基に
よる置換によって修飾されたアミノ酸配列の修飾の程度
は、部位特定変異誘発法、PCR法等、本件出願当時の周
知技術によって修飾可能であり、且つIL−６とIL−６レ
セプターとの複合体と特異的に結合する能力を維持して
いる範囲内の修飾を意味する。
IL−６レセプター（インターロイキン−６レセプター）
との複合体と結合し； （２）マウスIL−６単独又はマウスIL−６レセプター単
独とは結合せず；そして （３）SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動において1
30KDaの見かけの分子量を示す； を有する、IL−６のシグナル伝達に関与する蛋白質であ
って、その天然の形態においては第１図中１位のMetか
ら917位のGlnまでのアミノ酸配列を有する。本発明では
前記アミノ酸配列を有する蛋白質の他、前記アミノ酸配
列中の、IL−６とIL−６レセプターの複合体への特異的
な結合に寄与する部分を含有する蛋白質またはポリペプ
チドであれば良い。すなわち前記アミノ酸配列中の１個
または複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基により
置換されているかまたは欠失もしくは付加されているア
ミノ酸配列を有し、かつIL−６とIL−６レセプターの複
合体と特異的に結合する能力を保持している蛋白質また
はポリペプチドはすべて本発明のマウスgp130の範囲に
含まれる。例えば、このような蛋白質として、前記アミ
ノ酸配列中のIL−６とIL−６レセプターの複合体との結
合に寄与するアミノ酸配列および／またはアミノ酸残基
部分以外のアミノ酸配列および／またはアミノ酸残基が
置換、欠損、挿入等により変化したもの、さらには前記
アミノ酸配列のＮ未端側および／またはＣ未端側にアミ
ノ酸配列および／またはアミノ酸残基が追加された蛋白
質、あるいは例えばヒト成長ホルモン等の他の蛋白質等
が融合したものであっても良い。なお、本発明におい
て、第１図に示すアミノ酸配列において１又は複数のア
ミノ酸残基の欠失、付加及び／又は他のアミノ酸残基に
よる置換によって修飾されたアミノ酸配列の修飾の程度
は、部位特定変異誘発法、PCR法等、本件出願当時の周
知技術によって修飾可能であり、且つIL−６とIL−６レ
セプターとの複合体と特異的に結合する能力を維持して
いる範囲内の修飾を意味する。
式（１）で示されるアミノ酸配列は917アミノ酸残基
からなり、Ｎ末端側から第２番目に位置するセリンから
第16番目に位置するロイシンにかけてと、第618番目に
位置するアラニンから第639番目に位置するフェニルア
ラニンにかけての部分に疎水性アミノ酸残基が位置して
いる。この２つの疎水性領域は、前者がシグナルペプチ
ド領域、後者が膜貫通領域であると考えられる。
からなり、Ｎ末端側から第２番目に位置するセリンから
第16番目に位置するロイシンにかけてと、第618番目に
位置するアラニンから第639番目に位置するフェニルア
ラニンにかけての部分に疎水性アミノ酸残基が位置して
いる。この２つの疎水性領域は、前者がシグナルペプチ
ド領域、後者が膜貫通領域であると考えられる。
2. DNA配列 本発明のマウスgp130蛋白質をコードするDNAは、例え
ば第５図中、１位のMetから917位のGlnまでのアミノ酸
配列をコードするものであり、これを代表するcDNAの場
合、89位のＡから2839位のＧまでの塩基配列を有する。
本発明のDNA配列は、上記のDNA配列の他、このDNA配列
中の１個または複数個のヌクレオシドが他のヌクレオシ
ドにより置換されているかまたは欠失もしくは付加され
ているDNA配列を有し、かつIL−６とIL−６レセプター
の複合体と特異的に結合する能力を有する蛋白質をコー
ドしているDNA配列をも含有する。例えば、前記１にお
いて記載した種々のアミノ酸配列を有する蛋白質をコー
ドするDNA配列があげられる。
ば第５図中、１位のMetから917位のGlnまでのアミノ酸
配列をコードするものであり、これを代表するcDNAの場
合、89位のＡから2839位のＧまでの塩基配列を有する。
本発明のDNA配列は、上記のDNA配列の他、このDNA配列
中の１個または複数個のヌクレオシドが他のヌクレオシ
ドにより置換されているかまたは欠失もしくは付加され
ているDNA配列を有し、かつIL−６とIL−６レセプター
の複合体と特異的に結合する能力を有する蛋白質をコー
ドしているDNA配列をも含有する。例えば、前記１にお
いて記載した種々のアミノ酸配列を有する蛋白質をコー
ドするDNA配列があげられる。
3. マウスgp130蛋白質の製造方法 本発明のマウスgp130蛋白質の製造のための方法とし
て、この蛋白質を産生する動物細胞から製造する方法と
遺伝子組換による方法の２種類の方法があげられる。こ
のうち第１の方法は、細胞あたりのマウスgp130蛋白質
の発現量が極めてわずかであるので非効率的である。従
って第２の方法が望ましい。
て、この蛋白質を産生する動物細胞から製造する方法と
遺伝子組換による方法の２種類の方法があげられる。こ
のうち第１の方法は、細胞あたりのマウスgp130蛋白質
の発現量が極めてわずかであるので非効率的である。従
って第２の方法が望ましい。
この方法においては、マウスgp130蛋白質をコードす
るDNA配列は、種々の方法で得ることができる。例えば
該蛋白質を発現しているマウス細胞、例えばM1細胞から
公知な方法で抽出した種々のメッセンジャーRNAから常
法に従ってcDNAライブラリーを作製し、これを本発明に
より提供されるDNA配列をもとに作製したプローブ等を
用いてスクリーニングしても良いし、また一部あるいは
全部を本発明をもとに化学的に合成しても良い。
るDNA配列は、種々の方法で得ることができる。例えば
該蛋白質を発現しているマウス細胞、例えばM1細胞から
公知な方法で抽出した種々のメッセンジャーRNAから常
法に従ってcDNAライブラリーを作製し、これを本発明に
より提供されるDNA配列をもとに作製したプローブ等を
用いてスクリーニングしても良いし、また一部あるいは
全部を本発明をもとに化学的に合成しても良い。
こうしてクローン化されたDNAを常法に従って発現せ
しめることにより、本発明の蛋白質を製造することがで
きる。
しめることにより、本発明の蛋白質を製造することがで
きる。
4. 発現ベクター 本発明で提供されるマウスgp130をコードするDNA配列
を発現、すなわち生産し得る複製可能な発現ベクター
は、前記２で説明されたようなDNA配列を発現させ得るD
NA配列と読取り可能に結合しているマウスgp130をコー
ドするDNA配列および宿主中でベクターDNAを複製するた
めの複製オリジン等を有し、選定した宿主を形質転換で
きるものであれば制限なく適宜選定して使用できる。例
えば宿主として大腸菌等の細菌株を用いる場合は、pBR3
22,pBR327等のプラスミドが例示できる。また例えば、
宿主として哺乳動物等の培養細胞を用いる場合には、SV
40ウイルス由来のDNA複製オリジンを有するベクターが
例示できる。
を発現、すなわち生産し得る複製可能な発現ベクター
は、前記２で説明されたようなDNA配列を発現させ得るD
NA配列と読取り可能に結合しているマウスgp130をコー
ドするDNA配列および宿主中でベクターDNAを複製するた
めの複製オリジン等を有し、選定した宿主を形質転換で
きるものであれば制限なく適宜選定して使用できる。例
えば宿主として大腸菌等の細菌株を用いる場合は、pBR3
22,pBR327等のプラスミドが例示できる。また例えば、
宿主として哺乳動物等の培養細胞を用いる場合には、SV
40ウイルス由来のDNA複製オリジンを有するベクターが
例示できる。
DNA配列を発現させるためのDNA配列の中でも、プロモ
ーター系は重要であり、しかも選定した宿主との関係に
おいて適宜選定する必要がある。宿主として大腸菌を使
用する場合のプロモーター系としては、乳糖プロモータ
ー系、トリプトファンプロモーター系、さらにはこれら
のハイブリッドプロモーター系が例示できる。宿主とし
て哺乳動物由来の培養細胞を使用する場合のプロモータ
ー系としては、SV40プロモーター系、アデノウイルスプ
ロモーター系、サイトメガロウイルス系が例示できる。
ーター系は重要であり、しかも選定した宿主との関係に
おいて適宜選定する必要がある。宿主として大腸菌を使
用する場合のプロモーター系としては、乳糖プロモータ
ー系、トリプトファンプロモーター系、さらにはこれら
のハイブリッドプロモーター系が例示できる。宿主とし
て哺乳動物由来の培養細胞を使用する場合のプロモータ
ー系としては、SV40プロモーター系、アデノウイルスプ
ロモーター系、サイトメガロウイルス系が例示できる。
5. 宿主 本発明では、特別の制限なしに通常の遺伝子工学的に
蛋白質を生産するために用いられる微生物または培養細
胞が使用できる。微生物としては、Ｋ−12,W−3110等の
大腸菌類、枯草菌類、酵母等を例示できる。培養細胞と
しては、COS細胞（猿の腎臓繊維芽細胞）、CHO細胞（チ
ャイニーズハムスターの卵巣細胞）、ミエローマ細胞等
が例示できる。
蛋白質を生産するために用いられる微生物または培養細
胞が使用できる。微生物としては、Ｋ−12,W−3110等の
大腸菌類、枯草菌類、酵母等を例示できる。培養細胞と
しては、COS細胞（猿の腎臓繊維芽細胞）、CHO細胞（チ
ャイニーズハムスターの卵巣細胞）、ミエローマ細胞等
が例示できる。
前記４で説明したベクターにより形質転換された前記
５で説明された様な宿主を培養し、ベクターDNA中のマ
ウスgp130をコードするDNA配列を発現させることでマウ
スgp130を生産することができる。これはマウスgp130を
コードするDNA配列と結合した該DNA配列を発現させ得る
DNA配列中のプロモーター系の活性化により実現され
る。
５で説明された様な宿主を培養し、ベクターDNA中のマ
ウスgp130をコードするDNA配列を発現させることでマウ
スgp130を生産することができる。これはマウスgp130を
コードするDNA配列と結合した該DNA配列を発現させ得る
DNA配列中のプロモーター系の活性化により実現され
る。
上記の種々の方法により製造される本発明の蛋白質又
は該蛋白質を産生する細胞を免疫原として用いて、該蛋
白質に対するポリクローナル抗体、又はモノクローナル
抗体を常法に従って調製することができる。これらの調
製法に用いる細胞原又は動物としてマウス、ウサギ、モ
ルモット、ラット、ヒツジ、ヤギ等が例示できる。
は該蛋白質を産生する細胞を免疫原として用いて、該蛋
白質に対するポリクローナル抗体、又はモノクローナル
抗体を常法に従って調製することができる。これらの調
製法に用いる細胞原又は動物としてマウス、ウサギ、モ
ルモット、ラット、ヒツジ、ヤギ等が例示できる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
実施例1. マウスgp130 cDNA単離 一連の遺伝子組み換え操作方法（ｍ−RNAの抽出、DNA
の制限酵素による切断等）は、マニアティスらの方法
（Molecular cloning,coldspring Harbor Laboratory19
82年参照）、ハーウィンらの方法（DNA cloning,a Prac
tical Approach vol.1,p49,IRL,Oxford,1985年参照）を
参照に行った。また、λgtllcDNAライブラリーのスクリ
ーニングも常法に従った。
の制限酵素による切断等）は、マニアティスらの方法
（Molecular cloning,coldspring Harbor Laboratory19
82年参照）、ハーウィンらの方法（DNA cloning,a Prac
tical Approach vol.1,p49,IRL,Oxford,1985年参照）を
参照に行った。また、λgtllcDNAライブラリーのスクリ
ーニングも常法に従った。
まず、ICRマウス血液からマクロファージを常法に従
って調製した。次にマクロファージを常法に従ってリノ
ール酸で刺激してから、mRNAを抽出し、ラムダファージ
λgtll（クローンテック社）を用いてcDNAライブラリー
を作製した。次に、pGP130（特願平１−200230号明細書
参照）のインサートcDNAのAcc II−Spe I断片（約2770b
p）をプローブとして用い、以下の条件により、約1.0×
106クローンをスクリーニングした。プラークをブロッ
トするファルターにはナイロンフィルターであるジーン
スクリーンプラス（NEN社）を用いた。ハイブリダイゼ
ーションは、ハイブリダイゼーションバッファ（アマシ
ャム）を用い、65℃で16時間行った。その後、２×SSC,
1％SDSで、60℃にてフィルターを洗って、非特異的にフ
ィルターに結合したプローブを分離させ、乾燥後、オー
トラジオグラフィーを行った。
って調製した。次にマクロファージを常法に従ってリノ
ール酸で刺激してから、mRNAを抽出し、ラムダファージ
λgtll（クローンテック社）を用いてcDNAライブラリー
を作製した。次に、pGP130（特願平１−200230号明細書
参照）のインサートcDNAのAcc II−Spe I断片（約2770b
p）をプローブとして用い、以下の条件により、約1.0×
106クローンをスクリーニングした。プラークをブロッ
トするファルターにはナイロンフィルターであるジーン
スクリーンプラス（NEN社）を用いた。ハイブリダイゼ
ーションは、ハイブリダイゼーションバッファ（アマシ
ャム）を用い、65℃で16時間行った。その後、２×SSC,
1％SDSで、60℃にてフィルターを洗って、非特異的にフ
ィルターに結合したプローブを分離させ、乾燥後、オー
トラジオグラフィーを行った。
なお前記プラスミドpGP130を含有する大腸菌HB101−p
GP130は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第2912号（FERMBP−2912）として寄託されている。こ
のプラスミドから常法に従って適当な制限酵素によりヒ
トgp130蛋白質をコードするDNA断片を切り出し、本発明
で用いるプローブを作製することができる。
GP130は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第2912号（FERMBP−2912）として寄託されている。こ
のプラスミドから常法に従って適当な制限酵素によりヒ
トgp130蛋白質をコードするDNA断片を切り出し、本発明
で用いるプローブを作製することができる。
このようにして単離された１つのクローンをλマウス
gp130−１と名付けた。λマウスgp130−１のインサート
cDNAの塩基配列を決定した結果、ヒトgp130との比較に
より、完全長のマウスgp130がコードされていることが
判明した。ヒトgp130とマウスgp130の相同性は、アミノ
酸レベルで77％であった。第１−１図〜第１−４図にλ
マウスgp130−１のインサートcDNAの配列、および推定
されるアミノ酸配列を示す。
gp130−１と名付けた。λマウスgp130−１のインサート
cDNAの塩基配列を決定した結果、ヒトgp130との比較に
より、完全長のマウスgp130がコードされていることが
判明した。ヒトgp130とマウスgp130の相同性は、アミノ
酸レベルで77％であった。第１−１図〜第１−４図にλ
マウスgp130−１のインサートcDNAの配列、および推定
されるアミノ酸配列を示す。
次にλマウスgp130−１の13位のXbalサイトから2990
位のEcoRlサイトまでの断片を、pBlueScript SK（Strat
agene社）のXbal部位とEcoRl部位に挿入し、マウスgp13
0コード領域を完全に含むインサートDNAを持つプラスミ
ド、pMGP130を作製した。第２図にpMGP130の構造を示
す。
位のEcoRlサイトまでの断片を、pBlueScript SK（Strat
agene社）のXbal部位とEcoRl部位に挿入し、マウスgp13
0コード領域を完全に含むインサートDNAを持つプラスミ
ド、pMGP130を作製した。第２図にpMGP130の構造を示
す。
実施例2. マウスgp130mRNAの各種細胞での発現 各種細胞でのマウスgp130の発現を調べるためにノー
ザンブロット解析を行った。細胞の培養、細胞からのmR
NAの抽出、電気泳動、ブロッティング、プローブの標
識、ハイブリダイゼーション、フィルターの洗浄、オー
トラジオグラフィー等はすべて常法どおり行った。
ザンブロット解析を行った。細胞の培養、細胞からのmR
NAの抽出、電気泳動、ブロッティング、プローブの標
識、ハイブリダイゼーション、フィルターの洗浄、オー
トラジオグラフィー等はすべて常法どおり行った。
まず、マウスM1細胞およびマウス胎児細胞からmRNAを
抽出した。次に各mRNA1μｇをホルムアミド法で変性さ
せ、0.8％アガロースゲル電気泳動にかけ、ナイロンフ
ィルター膜にノザンブロッティングした。続いて、pGP1
30（特願平１−200230号明細書参照）のインサートcDNA
のAcc II−Spe I断片（約2770bp）をプローブとして用
い、42℃、24時間のハイブリダイゼーションを行った。
洗浄後、オートラジオグラフィーを行った。
抽出した。次に各mRNA1μｇをホルムアミド法で変性さ
せ、0.8％アガロースゲル電気泳動にかけ、ナイロンフ
ィルター膜にノザンブロッティングした。続いて、pGP1
30（特願平１−200230号明細書参照）のインサートcDNA
のAcc II−Spe I断片（約2770bp）をプローブとして用
い、42℃、24時間のハイブリダイゼーションを行った。
洗浄後、オートラジオグラフィーを行った。
その結果、第３図に示すように、約7kbのマウスgp130
mRNAの発現を確認した。
mRNAの発現を確認した。
本発明で提供されるマウスgp130をコードするDNA配
列、さらには該蛋白質を遺伝子工学的に生産するための
手段および方法により、自然状態では極めて微量にしか
生産されない該蛋白質を大量に生産することが可能であ
る。また本発明は、gp130蛋白質の生理的役割の解析、I
L−６のシグナル伝達機構の解析、さらにはサイトカイ
ン類のシグナル伝達機構の解析に極めて重要である。こ
のことはIL−６のみならずサイトカインが関与する免疫
疾患に対する治療薬診断薬等の開発に大きな意義をもつ
ものである。
列、さらには該蛋白質を遺伝子工学的に生産するための
手段および方法により、自然状態では極めて微量にしか
生産されない該蛋白質を大量に生産することが可能であ
る。また本発明は、gp130蛋白質の生理的役割の解析、I
L−６のシグナル伝達機構の解析、さらにはサイトカイ
ン類のシグナル伝達機構の解析に極めて重要である。こ
のことはIL−６のみならずサイトカインが関与する免疫
疾患に対する治療薬診断薬等の開発に大きな意義をもつ
ものである。
第１−１図〜第１−４図は、λマウスgp130−１のイン
サートDNA、すなわちマウスgp130をコードするDNA配列
について、その塩基配列を解析した結果、及びこのDNA
配列が発現された場合に生産される蛋白質、すなわちマ
ウスgp130の推定されるアミノ酸配列を示す。下線部分
はＮ末端側の疎水性アミノ酸領域を示し、二重下線部分
はＣ末端側の疎水性アミノ酸領域を示す。 第２図は、pMGP130の構造を示す。SSはシグナル配列、E
Cは細胞外領域、TMは膜貫通領域、Ｃは細胞内領域を示
す。 第３図は、実施例２に基づく方法でノーザンブロット解
析を行った際のマウスM1細胞、マウス胎児細胞のマ
ウスgp130・mRNAの発現を示す。
サートDNA、すなわちマウスgp130をコードするDNA配列
について、その塩基配列を解析した結果、及びこのDNA
配列が発現された場合に生産される蛋白質、すなわちマ
ウスgp130の推定されるアミノ酸配列を示す。下線部分
はＮ末端側の疎水性アミノ酸領域を示し、二重下線部分
はＣ末端側の疎水性アミノ酸領域を示す。 第２図は、pMGP130の構造を示す。SSはシグナル配列、E
Cは細胞外領域、TMは膜貫通領域、Ｃは細胞内領域を示
す。 第３図は、実施例２に基づく方法でノーザンブロット解
析を行った際のマウスM1細胞、マウス胎児細胞のマ
ウスgp130・mRNAの発現を示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (7)
- 【請求項１】次のアミノ酸配列（１文字表記）（Ｉ）： を有するか、あるいは、該アミノ酸配列において、１個
又は複数個のアミノ酸残基の欠失、付加及び／又は他の
アミノ酸残基による置換によって修飾されているアミノ
酸配列を有し、且つインターロイキン−６とインターロ
イキン−６レセプターとの複合体と特異的に結合する能
力を有するgp130蛋白質。 - 【請求項２】請求項１に記載のgp130蛋白質のＮ−末端
にさらにシグナル配列が結合している蛋白質。 - 【請求項３】前記シグナル配列が下記のアミノ酸配列
（II）： を有する、請求項２に記載の蛋白質。 - 【請求項４】請求項１〜３のいずれか１項に記載の蛋白
質をコードするDNA。 - 【請求項５】請求項４に記載のDNAを含み、宿主細胞中
で当該DNAを発現させることができる発現ベクター。 - 【請求項６】請求項第５項に記載の発現ベクターにより
形質転換された宿主細胞を培養することを含む、gp130
蛋白質の製造方法。 - 【請求項７】請求項４に記載のDNAを用いて製造されるg
p130蛋白質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2317892A JP3028847B2 (ja) | 1990-11-26 | 1990-11-26 | マウスｇｐ１３０蛋白質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2317892A JP3028847B2 (ja) | 1990-11-26 | 1990-11-26 | マウスｇｐ１３０蛋白質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04190796A JPH04190796A (ja) | 1992-07-09 |
| JP3028847B2 true JP3028847B2 (ja) | 2000-04-04 |
Family
ID=18093219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2317892A Expired - Lifetime JP3028847B2 (ja) | 1990-11-26 | 1990-11-26 | マウスｇｐ１３０蛋白質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3028847B2 (ja) |
-
1990
- 1990-11-26 JP JP2317892A patent/JP3028847B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04190796A (ja) | 1992-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2898064B2 (ja) | ヒトｇｐ１３０蛋白質 | |
| JP2865300B2 (ja) | ヒトｂ細胞刺激因子２レセプター蛋白質 | |
| JP2744821B2 (ja) | インターロイキン４レセプター | |
| JP3705732B2 (ja) | 新規なポリペプチド、その製造方法、そのポリペプチドをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞 | |
| WO1991017184A1 (en) | Modified interleukin-1 inhibitors | |
| US5386013A (en) | Tumor necrosis factor-induced protein TSG-6 | |
| US5846763A (en) | DNA encoding tumor necrosis factor stimulated gene 6 (TSG-6) | |
| JP2002526073A (ja) | 新規のヒト生長分化因子のコード配列、そのｄｎａ配列によりコードされるポリペプチド、およびこれらの製造方法。 | |
| JPH03155795A (ja) | マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質 | |
| WO1993001827A1 (en) | Osteoclast growth regulatory factor | |
| JP2001526892A (ja) | Ｓｉｇｉｒｒｄｎａおよびポリペプチド | |
| KR100270348B1 (ko) | 전사인자 에이피알에프 | |
| EP0708112B9 (en) | RPDL protein and DNA encoding the same | |
| JP2002500046A (ja) | ＩＬ−１δのＤＮＡおよびポリペプチド | |
| JP3028847B2 (ja) | マウスｇｐ１３０蛋白質 | |
| JP2003500016A (ja) | ｈＯＢ−ＢＰ２ｈ組成物、方法およびその使用 | |
| JP2003502006A (ja) | Ｉｌ−１７ｒｈｄｎａ及びポリペプチド | |
| JP2002500011A (ja) | Ｖ２０１ｄｎａ及びポリペプチド | |
| US20060275865A1 (en) | Autotaxin: motility stimulating protein useful in cancer diagnosis and therapy | |
| JP3049613B2 (ja) | 組換えマウスｉｌ―６レセプターの製造方法 | |
| JP4444506B2 (ja) | ヒトｉｌ−１エプシロンｄｎａおよびポリペプチド | |
| US6420544B1 (en) | Polynucleotide and polypeptide sequences encoding murine organic anion transporter 5 (mOATP5) | |
| JP2935511B2 (ja) | ヒトｉｌ―６レセプターの製造方法 | |
| WO2004063226A2 (en) | Novel fibrillin-like polypeptides | |
| JP2007512803A (ja) | 新規ｉｌ−８様ポリペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080204 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090204 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100204 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110204 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |