JP3014387B2 - ヒト成長ホルモンの測定方法 - Google Patents
ヒト成長ホルモンの測定方法Info
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- hgh
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は投与されたヒト成長
ホルモンのヒト血液中又はヒト尿中濃度の測定方法、あ
るいはヒト成長ホルモンの投与の有無を検査する方法に
関する。更に詳しくは、本発明はヒト血液または尿中に
存在する２種類のヒト成長ホルモンの濃度の比率、或い
はヒト成長ホルモン全体に占めるそれぞれのヒト成長ホ
ルモンの比率を正常時（否投与時）と投与時又は投与が
疑われる時とで比較して、それらの比率の変化に基づい
て、投与されたヒト成長ホルモンの血液又は尿中濃度測
定、あるいはヒト成長ホルモンの投与の有無を判定する
方法に関する。
ホルモンのヒト血液中又はヒト尿中濃度の測定方法、あ
るいはヒト成長ホルモンの投与の有無を検査する方法に
関する。更に詳しくは、本発明はヒト血液または尿中に
存在する２種類のヒト成長ホルモンの濃度の比率、或い
はヒト成長ホルモン全体に占めるそれぞれのヒト成長ホ
ルモンの比率を正常時（否投与時）と投与時又は投与が
疑われる時とで比較して、それらの比率の変化に基づい
て、投与されたヒト成長ホルモンの血液又は尿中濃度測
定、あるいはヒト成長ホルモンの投与の有無を判定する
方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒト成長ホルモン（以下ｈＧＨ）には、
同一の遺伝子からオルタナティヴスプライシングによっ
て生じる分子量約２２０００のヒト成長ホルモン（以下
２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００の成長ホルモン
（以下２０ＫｈＧＨ）の２種類が存在することが知られ
ている。２２ＫｈＧＨはアミノ酸１９１個からなる蛋白
質である。血液中のｈＧＨのうち９０％程度がこの２２
ＫｈＧＨであることが知られている。一方、２０ＫｈＧ
Ｈはアミノ酸１７６個からなる蛋白質である。その血液
中の存在量は２２ＫｈＧＨに比べて少なく、血液中のｈ
ＧＨのうち約１０％程度がこの２０ＫｈＧＨであると予
測されてきた。２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨは元々唯一
の遺伝子にコードされている蛋白質である。そのため両
者は構造、即ちアミノ酸配列がよく似ている。唯一の相
違点は、２０ＫｈＧＨが２２ＫｈＧＨのＮ末端から３２
番目から４６番目までの１５アミノ酸残基が欠失した構
造をしている点のみである。
同一の遺伝子からオルタナティヴスプライシングによっ
て生じる分子量約２２０００のヒト成長ホルモン（以下
２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００の成長ホルモン
（以下２０ＫｈＧＨ）の２種類が存在することが知られ
ている。２２ＫｈＧＨはアミノ酸１９１個からなる蛋白
質である。血液中のｈＧＨのうち９０％程度がこの２２
ＫｈＧＨであることが知られている。一方、２０ＫｈＧ
Ｈはアミノ酸１７６個からなる蛋白質である。その血液
中の存在量は２２ＫｈＧＨに比べて少なく、血液中のｈ
ＧＨのうち約１０％程度がこの２０ＫｈＧＨであると予
測されてきた。２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨは元々唯一
の遺伝子にコードされている蛋白質である。そのため両
者は構造、即ちアミノ酸配列がよく似ている。唯一の相
違点は、２０ＫｈＧＨが２２ＫｈＧＨのＮ末端から３２
番目から４６番目までの１５アミノ酸残基が欠失した構
造をしている点のみである。
【０００３】２２ＫｈＧＨは１０年以上前から組換えＤ
ＮＡ技術を応用して多量に生産され、それに特異的な抗
体も得られていた。そのため、２２ＫｈＧＨ特異的な免
疫化学的測定法も開発されていた。一方、２０ＫｈＧＨ
は組換えＤＮＡ技術を応用して発現させることが困難で
あり、天然型の２０ＫｈＧＨと同じ構造を持つ組換え２
０ＫｈＧＨを、高純度でかつ多量に得ることが不可能で
あった。従って２０ＫｈＧＨに特異的な測定方法も知ら
れていなかった。近年、大腸菌の形質転換体を用いて、
この天然型２０ＫｈＧＨを高純度でかつ多量に得る方法
が開発された（Uchida et al., J.Biotechnology:55:10
1-112、(1997)）。また、天然型２０ＫｈＧＨに特異的で
あり２２ＫｈＧＨと実質的に交差反応をしないモノクロ
ーナル抗体が作製されると共に、特異的抗体を用いた血
液中の２０ＫｈＧＨ濃度測定法が開発された（欧州特許
公開第０８１４０９１号明細書）。
ＮＡ技術を応用して多量に生産され、それに特異的な抗
体も得られていた。そのため、２２ＫｈＧＨ特異的な免
疫化学的測定法も開発されていた。一方、２０ＫｈＧＨ
は組換えＤＮＡ技術を応用して発現させることが困難で
あり、天然型の２０ＫｈＧＨと同じ構造を持つ組換え２
０ＫｈＧＨを、高純度でかつ多量に得ることが不可能で
あった。従って２０ＫｈＧＨに特異的な測定方法も知ら
れていなかった。近年、大腸菌の形質転換体を用いて、
この天然型２０ＫｈＧＨを高純度でかつ多量に得る方法
が開発された（Uchida et al., J.Biotechnology:55:10
1-112、(1997)）。また、天然型２０ＫｈＧＨに特異的で
あり２２ＫｈＧＨと実質的に交差反応をしないモノクロ
ーナル抗体が作製されると共に、特異的抗体を用いた血
液中の２０ＫｈＧＨ濃度測定法が開発された（欧州特許
公開第０８１４０９１号明細書）。
【０００４】近年、２２ＫｈＧＨが比較的多量に供給さ
れるようになるに従い、２２ＫｈＧＨの様々な生理活性
が明らかにされるようになった。ｈＧＨは、当初のヒト
成長ホルモン分泌不全性低身長症の治療から、成人ヒト
成長ホルモン欠損症等の治療に適応拡大が進められてい
る。更に現在、ｈＧＨの分泌は欠損していない場合の低
身長症、火傷や創傷の治療、術後回復、骨粗鬆症等への
適応拡大が図られている。そのような臨床試験における
ｈＧＨの使用に際しては、投与されたｈＧＨの動態を把
握する必要がある。しかし、ｈＧＨが完全に欠損してい
ない患者の場合、その人体中には本来生産されているｈ
ＧＨが存在するために、単に血液中のｈＧＨ濃度を測定
しただけでは、その測定値が外部からの投与によるもの
か、本来血液中に存在していたもの（生理的なｈＧＨ）
かの区別が付かない。これまで、そのための測定方法は
全く知られていなかった。一方、このような医薬品とし
ての使用の他に、さらに近年、スポーツにおいて、ｈＧ
Ｈが禁止薬物（ドーピング、doping）として検査対象と
なるようになっていることは周知の事実である。
れるようになるに従い、２２ＫｈＧＨの様々な生理活性
が明らかにされるようになった。ｈＧＨは、当初のヒト
成長ホルモン分泌不全性低身長症の治療から、成人ヒト
成長ホルモン欠損症等の治療に適応拡大が進められてい
る。更に現在、ｈＧＨの分泌は欠損していない場合の低
身長症、火傷や創傷の治療、術後回復、骨粗鬆症等への
適応拡大が図られている。そのような臨床試験における
ｈＧＨの使用に際しては、投与されたｈＧＨの動態を把
握する必要がある。しかし、ｈＧＨが完全に欠損してい
ない患者の場合、その人体中には本来生産されているｈ
ＧＨが存在するために、単に血液中のｈＧＨ濃度を測定
しただけでは、その測定値が外部からの投与によるもの
か、本来血液中に存在していたもの（生理的なｈＧＨ）
かの区別が付かない。これまで、そのための測定方法は
全く知られていなかった。一方、このような医薬品とし
ての使用の他に、さらに近年、スポーツにおいて、ｈＧ
Ｈが禁止薬物（ドーピング、doping）として検査対象と
なるようになっていることは周知の事実である。
【０００５】とはいえ、ｈＧＨは、存在量が多い２２Ｋ
ｈＧＨであっても、その血液中濃度が数ｎｇ／ｍｌ〜
数十ｎｇ／ｍｌと低く、検出が困難であること、また検
出が可能であっても、血液中濃度が、個人差、性差、
年齢差等によって著しく異なること、さらにｈＧＨは
間欠的に下垂体から分泌されるため、同一個人であって
も、採血をする時間によって著しく異なること等によ
り、単に血液中のｈＧＨ濃度を測定しその高低からのみ
では、ｈＧＨが投与されたかどうかを判断することは不
可能である。また、ｈＧＨにより二次的に引き起こされ
る生理反応も、個人差、性差、年齢差が大きく、投与し
たｈＧＨとの相関も複雑であるため、ドーピング検査の
指標としては不適切である。現在ドーピング検査の対象
となっているのは２２ＫｈＧＨである。一方、生体内の
２２ＫｈＧＨは、ｈＧＨ全体の大部分を占めると言わ
れ、２２ＫｈＧＨのみを特異的に測定しても、ドーピン
グの有無は判定できない。
ｈＧＨであっても、その血液中濃度が数ｎｇ／ｍｌ〜
数十ｎｇ／ｍｌと低く、検出が困難であること、また検
出が可能であっても、血液中濃度が、個人差、性差、
年齢差等によって著しく異なること、さらにｈＧＨは
間欠的に下垂体から分泌されるため、同一個人であって
も、採血をする時間によって著しく異なること等によ
り、単に血液中のｈＧＨ濃度を測定しその高低からのみ
では、ｈＧＨが投与されたかどうかを判断することは不
可能である。また、ｈＧＨにより二次的に引き起こされ
る生理反応も、個人差、性差、年齢差が大きく、投与し
たｈＧＨとの相関も複雑であるため、ドーピング検査の
指標としては不適切である。現在ドーピング検査の対象
となっているのは２２ＫｈＧＨである。一方、生体内の
２２ＫｈＧＨは、ｈＧＨ全体の大部分を占めると言わ
れ、２２ＫｈＧＨのみを特異的に測定しても、ドーピン
グの有無は判定できない。
【０００６】２０ＫｈＧＨについては、前述のように特
異的な測定法が極最近開発されたばかりであり、血液中
の全ｈＧＨ濃度及び２２ＫｈＧＨ濃度の測定から、全ｈ
ＧＨの１０％程度存在すると予測されてはいたが、２２
ＫｈＧＨと２０ＫｈＧＨの正確な存在比率は測定された
例がなく、況や、個人差、性差、年齢差、さらに一日に
おける変動、負荷試験によりｈＧＨ分泌を促して血液中
ｈＧＨ濃度を向上させた場合の変化等々については全く
知られていなかった。
異的な測定法が極最近開発されたばかりであり、血液中
の全ｈＧＨ濃度及び２２ＫｈＧＨ濃度の測定から、全ｈ
ＧＨの１０％程度存在すると予測されてはいたが、２２
ＫｈＧＨと２０ＫｈＧＨの正確な存在比率は測定された
例がなく、況や、個人差、性差、年齢差、さらに一日に
おける変動、負荷試験によりｈＧＨ分泌を促して血液中
ｈＧＨ濃度を向上させた場合の変化等々については全く
知られていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、血液
中又は尿中の２２ＫｈＧＨと２０ＫｈＧＨの比率を指標
として、正常時（ｈＧＨ否投与時）と投与時のこれらｈ
ＧＨの濃度比率に基づいて、ｈＧＨの投与の有無の判
定、及び生理的なｈＧＨ以外の投与されたｈＧＨに起因
するｈＧＨの血液中又は尿中濃度の測定を行う方法を提
供するものである。
中又は尿中の２２ＫｈＧＨと２０ＫｈＧＨの比率を指標
として、正常時（ｈＧＨ否投与時）と投与時のこれらｈ
ＧＨの濃度比率に基づいて、ｈＧＨの投与の有無の判
定、及び生理的なｈＧＨ以外の投与されたｈＧＨに起因
するｈＧＨの血液中又は尿中濃度の測定を行う方法を提
供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、多種のヒ
ト血漿あるいは血清を用い、２２ＫｈＧＨ及び２０Ｋｈ
ＧＨに特異的な測定方法によって、血液中の２２ＫｈＧ
Ｈ濃度及び２０ＫｈＧＨ濃度を測定すると共に、それら
の比率を算出した。また、この２２ＫｈＧＨと２０Ｋｈ
ＧＨの血液中における濃度比率が、種々の要因によって
どのように変動するかについて検討を行った。その結
果、個々の２２ＫｈＧＨ濃度及び２０ＫｈＧＨ濃度は、
個人差、性差、年齢差が大きく、また、一日における大
きな変動もあり、さらに、負荷試験によって大きく上昇
する場合もあることがわかった。しかし、全ｈＧＨ濃度
（２２ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度の和）に対する
２０ＫｈＧＨ（又は２２ＫｈＧＨ）濃度の比率は、個人
差、性差、年齢差が比較的小さいことが初めて明らかに
なった。さらに、驚くべきことに、全ｈＧＨ濃度は、一
日の間大きく変動するにも関わらず、上記比率はほぼ一
定であること、また、負荷試験によって血液中ｈＧＨ濃
度が変化しても、上記比率は大きな影響を受けないこと
がわかった。
ト血漿あるいは血清を用い、２２ＫｈＧＨ及び２０Ｋｈ
ＧＨに特異的な測定方法によって、血液中の２２ＫｈＧ
Ｈ濃度及び２０ＫｈＧＨ濃度を測定すると共に、それら
の比率を算出した。また、この２２ＫｈＧＨと２０Ｋｈ
ＧＨの血液中における濃度比率が、種々の要因によって
どのように変動するかについて検討を行った。その結
果、個々の２２ＫｈＧＨ濃度及び２０ＫｈＧＨ濃度は、
個人差、性差、年齢差が大きく、また、一日における大
きな変動もあり、さらに、負荷試験によって大きく上昇
する場合もあることがわかった。しかし、全ｈＧＨ濃度
（２２ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度の和）に対する
２０ＫｈＧＨ（又は２２ＫｈＧＨ）濃度の比率は、個人
差、性差、年齢差が比較的小さいことが初めて明らかに
なった。さらに、驚くべきことに、全ｈＧＨ濃度は、一
日の間大きく変動するにも関わらず、上記比率はほぼ一
定であること、また、負荷試験によって血液中ｈＧＨ濃
度が変化しても、上記比率は大きな影響を受けないこと
がわかった。
【０００９】これらの知見から、ヒトに２２ＫｈＧＨま
たは２０ＫｈＧＨを単独で投与した場合、投与前後で血
液中における２２ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度の比
率が変化することが示唆された。そして、血液中の２２
ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度をそれぞれ測定し、そ
れらの比率をモニターすることによって、ｈＧＨが投与
されたかどうかの判定、及び投与されたｈＧＨの血液中
の濃度を算出することができると考えられた。また、こ
のような考え方は、測定対象をヒトの血液からヒト尿と
しても、同様であると予測された。本発明は以上の知見
に基づいてなされたものである。
たは２０ＫｈＧＨを単独で投与した場合、投与前後で血
液中における２２ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度の比
率が変化することが示唆された。そして、血液中の２２
ＫｈＧＨ濃度と２０ＫｈＧＨ濃度をそれぞれ測定し、そ
れらの比率をモニターすることによって、ｈＧＨが投与
されたかどうかの判定、及び投与されたｈＧＨの血液中
の濃度を算出することができると考えられた。また、こ
のような考え方は、測定対象をヒトの血液からヒト尿と
しても、同様であると予測された。本発明は以上の知見
に基づいてなされたものである。
【００１０】即ち、本発明は、分子量約２２０００のヒ
ト成長ホルモン（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００
のヒト成長ホルモン（２０ＫｈＧＨ）の血液中又は尿中
濃度の比に基づいて、投与されたヒト成長ホルモン（ｈ
ＧＨ）の血液中濃度を測定する方法、及び、分子量約２
２０００のヒト成長ホルモン（２２ＫｈＧＨ）と分子量
約２００００のヒト成長ホルモン（２０ＫｈＧＨ）の血
液中又は尿中濃度の比に基づいて、ヒト成長ホルモン
（ｈＧＨ）の投与を判定する方法である。
ト成長ホルモン（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００
のヒト成長ホルモン（２０ＫｈＧＨ）の血液中又は尿中
濃度の比に基づいて、投与されたヒト成長ホルモン（ｈ
ＧＨ）の血液中濃度を測定する方法、及び、分子量約２
２０００のヒト成長ホルモン（２２ＫｈＧＨ）と分子量
約２００００のヒト成長ホルモン（２０ＫｈＧＨ）の血
液中又は尿中濃度の比に基づいて、ヒト成長ホルモン
（ｈＧＨ）の投与を判定する方法である。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下本発明の詳細について述べ
る。本発明において測定対象となるヒト成長ホルモンと
は、２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨを含むものの総称で
ある。そのうち２０ＫｈＧＨは、ヒト血液中の２０Ｋｈ
ＧＨ、ヒト尿中の２０ＫｈＧＨであり、アミノ酸１７６
個からなる蛋白質である。２０ＫｈＧＨはＮ末端から１
４番目のアミノ酸がメチオニンであるものと、セリンで
あるものが知られているが本発明に係る２０ＫｈＧＨと
しては、そのどちらでもよい。２０ＫｈＧＨは例えば欧
州特許公開第０５８７４２７号明細書に記載の方法に従
って遺伝子組み換えの方法により得ることが出来る。２
２ＫｈＧＨはヒト血液中の２２ＫｈＧＨ、ヒト尿中の２
２ＫｈＧＨであり、アミノ酸１９１個からなる蛋白質で
ある。２２ＫｈＧＨは例えば商品名：ジェノトロピン
（ファルマシア・アップジョン製）として市販されてい
る。
る。本発明において測定対象となるヒト成長ホルモンと
は、２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨを含むものの総称で
ある。そのうち２０ＫｈＧＨは、ヒト血液中の２０Ｋｈ
ＧＨ、ヒト尿中の２０ＫｈＧＨであり、アミノ酸１７６
個からなる蛋白質である。２０ＫｈＧＨはＮ末端から１
４番目のアミノ酸がメチオニンであるものと、セリンで
あるものが知られているが本発明に係る２０ＫｈＧＨと
しては、そのどちらでもよい。２０ＫｈＧＨは例えば欧
州特許公開第０５８７４２７号明細書に記載の方法に従
って遺伝子組み換えの方法により得ることが出来る。２
２ＫｈＧＨはヒト血液中の２２ＫｈＧＨ、ヒト尿中の２
２ＫｈＧＨであり、アミノ酸１９１個からなる蛋白質で
ある。２２ＫｈＧＨは例えば商品名：ジェノトロピン
（ファルマシア・アップジョン製）として市販されてい
る。
【００１２】ヒト血液中又は尿中の２２ＫｈＧＨ及び２
０ＫｈＧＨの濃度を測定するには、抗体測定法を用いれ
ばよい。特に抗体としてモノクローナル抗体を用いると
感度よく測定することが出来る。抗体測定法を用いる場
合には、測定感度が１０ｐｇ／ｍｌであることが好まし
く、特に１ｐｇ／ｍｌ前後であることがより好ましい。
また、抗体測定法の他に、ＳＤＳ電気泳動等の電気泳
動、各種のカラムクロマトグラフィー、液体クロマトフ
ラフィー（ＨＰＬＣ）等の方法がヒト血液中又は尿中の
２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨの濃度の測定に使用可能
であり、更に、それらのカラムクロマトグラフィー法と
抗体測定法を組み合わせて実施してもよい。
０ＫｈＧＨの濃度を測定するには、抗体測定法を用いれ
ばよい。特に抗体としてモノクローナル抗体を用いると
感度よく測定することが出来る。抗体測定法を用いる場
合には、測定感度が１０ｐｇ／ｍｌであることが好まし
く、特に１ｐｇ／ｍｌ前後であることがより好ましい。
また、抗体測定法の他に、ＳＤＳ電気泳動等の電気泳
動、各種のカラムクロマトグラフィー、液体クロマトフ
ラフィー（ＨＰＬＣ）等の方法がヒト血液中又は尿中の
２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨの濃度の測定に使用可能
であり、更に、それらのカラムクロマトグラフィー法と
抗体測定法を組み合わせて実施してもよい。
【００１３】ヒト血液中の２２ＫｈＧＨの濃度を測定す
る方法には、特開昭６３−２７３４９６号公報に記載さ
れているように、２２ＫｈＧＨに特異的に反応するモノ
クローナル抗体を用いた免疫化学的測定方法により行え
ばよい。上記モノクローナル抗体は、抗２２ＫｈＧＨ抗
体産生細胞とミエローマ細胞株との細胞融合により得ら
れるハイブリドーマから得ることが出来る。該モノクロ
ーナル抗体としてはＡ３６０２００４７Ｐ（BiosPacifi
c社）が例示される。
る方法には、特開昭６３−２７３４９６号公報に記載さ
れているように、２２ＫｈＧＨに特異的に反応するモノ
クローナル抗体を用いた免疫化学的測定方法により行え
ばよい。上記モノクローナル抗体は、抗２２ＫｈＧＨ抗
体産生細胞とミエローマ細胞株との細胞融合により得ら
れるハイブリドーマから得ることが出来る。該モノクロ
ーナル抗体としてはＡ３６０２００４７Ｐ（BiosPacifi
c社）が例示される。
【００１４】一方、ヒト血液中の２０ＫｈＧＨの濃度を
測定するには、欧州特許公開第０８１４０９１号明細書
に記載されたように、２０ＫｈＧＨに特異的に反応し２
２ＫｈＧＨと実質的に反応しないモノクローナル抗体を
用いた免疫測定方法で行えばよい。上記モノクローナル
抗体は、抗２０ＫｈＧＨ抗体産生細胞とミエローマ細胞
株との細胞融合により得られるハイブリドーマから得る
ことが出来る。そのようなハイブリドーマとしてＭＴＣ
６Ａ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５９１３）が例示される。Ｍ
ＴＣ６Ａ株は、茨城県つくば市東１丁目１番３号の通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に受託番号Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−５９１３として微生物の寄託に関するブ
タペスト条約に基づいて寄託されている。
測定するには、欧州特許公開第０８１４０９１号明細書
に記載されたように、２０ＫｈＧＨに特異的に反応し２
２ＫｈＧＨと実質的に反応しないモノクローナル抗体を
用いた免疫測定方法で行えばよい。上記モノクローナル
抗体は、抗２０ＫｈＧＨ抗体産生細胞とミエローマ細胞
株との細胞融合により得られるハイブリドーマから得る
ことが出来る。そのようなハイブリドーマとしてＭＴＣ
６Ａ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５９１３）が例示される。Ｍ
ＴＣ６Ａ株は、茨城県つくば市東１丁目１番３号の通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に受託番号Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−５９１３として微生物の寄託に関するブ
タペスト条約に基づいて寄託されている。
【００１５】２０ＫｈＧＨに特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体生産性ハイブリドーマから目的とするモノク
ローナル抗体を製造するには、通常の細胞培養法や腹水
形成法により該ハイブリドーマを培養し、培養上清ある
いは腹水から該モノクローナル抗体を精製すればよい。
培養上清もしくは腹水からのモノクローナル抗体の精製
は、常法により行なうことができる。例えば、硫安分
画、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、アフィ
ニティークロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて使
用すればよい。
ーナル抗体生産性ハイブリドーマから目的とするモノク
ローナル抗体を製造するには、通常の細胞培養法や腹水
形成法により該ハイブリドーマを培養し、培養上清ある
いは腹水から該モノクローナル抗体を精製すればよい。
培養上清もしくは腹水からのモノクローナル抗体の精製
は、常法により行なうことができる。例えば、硫安分
画、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、アフィ
ニティークロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて使
用すればよい。
【００１６】モノクローナル抗体を用いる２２ＫｈＧＨ
及び２０ＫｈＧＨの免疫測定方法とは、該モノクローナ
ル抗体を利用したものである。本発明の免疫測定方法と
しは、例えば酵素免疫測定法、ラジオイムノアッセイ、
蛍光免疫測定法、発光免疫測定法等が例示され、好まし
くは酵素免疫測定法である。特に酵素免疫測定法におい
て、該モノクローナル抗体を不溶性担体に結合させてモ
ノクローナル抗体結合不溶性担体を得、このモノクロー
ナル抗体結合不溶性担体を用いた、いわゆるサンドイッ
チ酵素免疫測定法が好ましい。
及び２０ＫｈＧＨの免疫測定方法とは、該モノクローナ
ル抗体を利用したものである。本発明の免疫測定方法と
しは、例えば酵素免疫測定法、ラジオイムノアッセイ、
蛍光免疫測定法、発光免疫測定法等が例示され、好まし
くは酵素免疫測定法である。特に酵素免疫測定法におい
て、該モノクローナル抗体を不溶性担体に結合させてモ
ノクローナル抗体結合不溶性担体を得、このモノクロー
ナル抗体結合不溶性担体を用いた、いわゆるサンドイッ
チ酵素免疫測定法が好ましい。
【００１７】以下、サンドイッチ酵素免疫測定法に基づ
いて２０ＫｈＧＨの測定方法を説明する。２２ＫｈＧＨ
の測定方法は、２０ＫｈＧＨを２２ＫｈＧＨに置き換え
て考えればよい。第１段階として、本発明のモノクロー
ナル抗体を不溶性担体に結合させたモノクローナル抗体
結合不溶性担体と、ヒト成長ホルモンを含む被検液を反
応させて、２０ＫｈＧＨのみを特異的に該モノクローナ
ル抗体結合不溶性担体に結合させた結合体を形成する。
不溶性担体としては、マイクロプレート、プラスティッ
クビーズ、ガラスビーズ、磁性微粒子等が挙げられる。
モノクローナル抗体をこれらの不溶性担体に結合させる
方法は、公知の化学的結合方法でもよいが物理的吸着方
法で十分である。即ち、本発明のモノクローナル抗体を
炭酸緩衝液やリン酸緩衝液等に溶解し、前記不溶性担体
を加えて、０℃〜室温にて１時間以上放置した後、Ｔｗ
ｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン・ソルビタール・モノ
ラウレート）、アジ化ナトリウム等を添加したＴｒｉｓ
塩酸緩衝液、リン酸緩衝液等により洗浄して未結合の抗
体を除去する。次に、得られたモノクローナル抗体結合
不溶性担体にヒト成長ホルモンを含む被検液を反応さ
せ、被検液中の２０ＫｈＧＨを結合させる。
いて２０ＫｈＧＨの測定方法を説明する。２２ＫｈＧＨ
の測定方法は、２０ＫｈＧＨを２２ＫｈＧＨに置き換え
て考えればよい。第１段階として、本発明のモノクロー
ナル抗体を不溶性担体に結合させたモノクローナル抗体
結合不溶性担体と、ヒト成長ホルモンを含む被検液を反
応させて、２０ＫｈＧＨのみを特異的に該モノクローナ
ル抗体結合不溶性担体に結合させた結合体を形成する。
不溶性担体としては、マイクロプレート、プラスティッ
クビーズ、ガラスビーズ、磁性微粒子等が挙げられる。
モノクローナル抗体をこれらの不溶性担体に結合させる
方法は、公知の化学的結合方法でもよいが物理的吸着方
法で十分である。即ち、本発明のモノクローナル抗体を
炭酸緩衝液やリン酸緩衝液等に溶解し、前記不溶性担体
を加えて、０℃〜室温にて１時間以上放置した後、Ｔｗ
ｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン・ソルビタール・モノ
ラウレート）、アジ化ナトリウム等を添加したＴｒｉｓ
塩酸緩衝液、リン酸緩衝液等により洗浄して未結合の抗
体を除去する。次に、得られたモノクローナル抗体結合
不溶性担体にヒト成長ホルモンを含む被検液を反応さ
せ、被検液中の２０ＫｈＧＨを結合させる。
【００１８】さらに第２段階として、第１段階で得られ
た結合体に抗ｈＧＨ抗体を酵素標識したもの（以下抗ｈ
ＧＨ酵素標識抗体と略す）を反応させ、モノクローナル
抗体結合不溶性担体上に本発明の抗２０ＫｈＧＨモノク
ローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−抗ｈＧＨ酵素標識抗体と
いうサンドイッチ状複合体を形成させる。
た結合体に抗ｈＧＨ抗体を酵素標識したもの（以下抗ｈ
ＧＨ酵素標識抗体と略す）を反応させ、モノクローナル
抗体結合不溶性担体上に本発明の抗２０ＫｈＧＨモノク
ローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−抗ｈＧＨ酵素標識抗体と
いうサンドイッチ状複合体を形成させる。
【００１９】ここで抗ｈＧＨ酵素標識抗体に用いる抗ｈ
ＧＨ抗体は、２０ＫｈＧＨのみに反応し前記の抗２０Ｋ
ｈＧＨモノクローナル抗体とは認識するエピトープの異
なる抗体、もしくは２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨの両方
に反応する抗体のいずれでもよく、モノクローナル抗体
またはポリクローナル抗体のいずれでもよい。そのよう
な抗体は、それ自体公知の方法で容易に得ることが出来
る。そのような例としてモノクローナル抗体Ｄ１４を例
示することが出来る。
ＧＨ抗体は、２０ＫｈＧＨのみに反応し前記の抗２０Ｋ
ｈＧＨモノクローナル抗体とは認識するエピトープの異
なる抗体、もしくは２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨの両方
に反応する抗体のいずれでもよく、モノクローナル抗体
またはポリクローナル抗体のいずれでもよい。そのよう
な抗体は、それ自体公知の方法で容易に得ることが出来
る。そのような例としてモノクローナル抗体Ｄ１４を例
示することが出来る。
【００２０】抗ｈＧＨを標識する酵素としては、西洋ワ
サビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ等が挙げ
られる。
サビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ等が挙げ
られる。
【００２１】これらの酵素を抗ｈＧＨ抗体または抗体の
Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’フラグメントに標識する方法
は、酵素の糖鎖を過ヨウ素酸で酸化し、生成したアルデ
ヒド基に抗ｈＧＨ抗体などのアミノ酸を結合させる方法
や、酵素にマレイミド基あるいはピリジルスルフィド基
等を導入し、抗ｈＧＨ抗体のＦａｂ’フラグメントに存
在するチオール基と結合させる方法等の公知の方法で実
施することができる。
Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’フラグメントに標識する方法
は、酵素の糖鎖を過ヨウ素酸で酸化し、生成したアルデ
ヒド基に抗ｈＧＨ抗体などのアミノ酸を結合させる方法
や、酵素にマレイミド基あるいはピリジルスルフィド基
等を導入し、抗ｈＧＨ抗体のＦａｂ’フラグメントに存
在するチオール基と結合させる方法等の公知の方法で実
施することができる。
【００２２】第３段階として、第２段階で得られたサン
ドイッチ状複合体中の標識に用いた酵素の活性量を測定
する。すなわち該酵素の活性量は、最初に反応させた２
０ＫｈＧＨ量に依存するので、被検液中の２０ＫｈＧＨ
量のみを測定することができる。該酵素の活性測定はそ
の酵素の基質となる物質を添加することにより行なわれ
る。また、抗ｈＧＨ酵素標識抗体の代わりに、抗ｈＧＨ
抗体をビオチンで標識した抗ｈＧＨビオチン標識抗体を
使用し、モノクローナル抗体結合不溶性担体上に本発明
の抗２０ＫｈＧＨモノクローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−
抗ｈＧＨビオチン標識抗体というサンドイッチ状複合体
を形成さた後、酵素標識アビジンまたは酵素標識ストレ
プトアビジンを反応させ、本発明の抗２０ＫｈＧＨモノ
クローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−抗ｈＧＨビオチン標識
抗体−酵素標識アビジンまたは酵素標識ストレプトアビ
ジンというサンドイッチ状複合体を形成させ、該サンド
イッチ状複合体中の酵素活性量を測定する方法でもよ
い。
ドイッチ状複合体中の標識に用いた酵素の活性量を測定
する。すなわち該酵素の活性量は、最初に反応させた２
０ＫｈＧＨ量に依存するので、被検液中の２０ＫｈＧＨ
量のみを測定することができる。該酵素の活性測定はそ
の酵素の基質となる物質を添加することにより行なわれ
る。また、抗ｈＧＨ酵素標識抗体の代わりに、抗ｈＧＨ
抗体をビオチンで標識した抗ｈＧＨビオチン標識抗体を
使用し、モノクローナル抗体結合不溶性担体上に本発明
の抗２０ＫｈＧＨモノクローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−
抗ｈＧＨビオチン標識抗体というサンドイッチ状複合体
を形成さた後、酵素標識アビジンまたは酵素標識ストレ
プトアビジンを反応させ、本発明の抗２０ＫｈＧＨモノ
クローナル抗体−２０ＫｈＧＨ−抗ｈＧＨビオチン標識
抗体−酵素標識アビジンまたは酵素標識ストレプトアビ
ジンというサンドイッチ状複合体を形成させ、該サンド
イッチ状複合体中の酵素活性量を測定する方法でもよ
い。
【００２３】尚、上記サンドイッチ酵素免疫測定法にお
いて、本発明の抗２０ＫｈＧＨモノクロ−ナル抗体（抗
２２ＫｈＧＨモノクロ−ナル抗体）と抗ｈＧＨ酵素標識
抗体とを入れ代えて用いる測定法も当然ながら可能であ
る。
いて、本発明の抗２０ＫｈＧＨモノクロ−ナル抗体（抗
２２ＫｈＧＨモノクロ−ナル抗体）と抗ｈＧＨ酵素標識
抗体とを入れ代えて用いる測定法も当然ながら可能であ
る。
【００２４】免疫測定方法の測定対照となる試料として
は、ヒト血液、ヒト尿、その他のヒト体液、それらを希
釈、精製又はｐＨ調製等の処理をしたものが挙げられ
る。
は、ヒト血液、ヒト尿、その他のヒト体液、それらを希
釈、精製又はｐＨ調製等の処理をしたものが挙げられ
る。
【００２５】免疫測定方法の検量線作成に用いる標準２
０ＫｈＧＨ及び標準２２ＫｈＧＨとしては、遺伝子組換
えによって作製された２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨを
用いることができる。
０ＫｈＧＨ及び標準２２ＫｈＧＨとしては、遺伝子組換
えによって作製された２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨを
用いることができる。
【００２６】上記の測定法によって測定された２０Ｋｈ
ＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中又は尿中の濃度を用いて
投与されたｈＧＨの血液中、又は尿中濃度を測定する方
法としては、得られた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液
中濃度と２０ＫｈＧＨ血液中濃度の和、或いは２２Ｋｈ
ＧＨ尿中濃度と２０ＫｈＧＨ尿中濃度の和）に対する２
０ＫｈＧＨの血液中又は尿中濃度或いは２２ＫｈＧＨ濃
度の血液中又は尿中濃度の比率から算出する方法が考え
られる。
ＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中又は尿中の濃度を用いて
投与されたｈＧＨの血液中、又は尿中濃度を測定する方
法としては、得られた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液
中濃度と２０ＫｈＧＨ血液中濃度の和、或いは２２Ｋｈ
ＧＨ尿中濃度と２０ＫｈＧＨ尿中濃度の和）に対する２
０ＫｈＧＨの血液中又は尿中濃度或いは２２ＫｈＧＨ濃
度の血液中又は尿中濃度の比率から算出する方法が考え
られる。
【００２７】２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中又
は尿中の濃度の比率から算出する方法は以下のとおりで
ある。まずはじめに、患者等の測定対象となる者につい
て、明らかにヒト成長ホルモンが投与されていない時に
血液又は尿を採取し、該血液又は尿中の２２ＫｈＧＨと
２０ＫｈＧＨの濃度をそれぞれ別々に測定する。得られ
た２２ＫｈＧＨ（又は２０ＫｈＧＨ）の血液又は尿中濃
度と全ｈＧＨ濃度に対するの比率を生理的比率として決
定する。この生理的比率はヒトによってほぼ安定してお
り、時間、全ｈＧＨ量に影響されずほぼ一定の値を示
す。生理的比率を正確に決定するためには、時間、日を
変えて何度が測定を行い、得られた値を平均するなどす
ればよい。
は尿中の濃度の比率から算出する方法は以下のとおりで
ある。まずはじめに、患者等の測定対象となる者につい
て、明らかにヒト成長ホルモンが投与されていない時に
血液又は尿を採取し、該血液又は尿中の２２ＫｈＧＨと
２０ＫｈＧＨの濃度をそれぞれ別々に測定する。得られ
た２２ＫｈＧＨ（又は２０ＫｈＧＨ）の血液又は尿中濃
度と全ｈＧＨ濃度に対するの比率を生理的比率として決
定する。この生理的比率はヒトによってほぼ安定してお
り、時間、全ｈＧＨ量に影響されずほぼ一定の値を示
す。生理的比率を正確に決定するためには、時間、日を
変えて何度が測定を行い、得られた値を平均するなどす
ればよい。
【００２８】次に、生理的比率を測定したのと同一の対
象者について、ヒト成長ホルモンを投与したことが明ら
かな時、またはヒト成長ホルモン投与が疑われる時の血
液又は尿を採取し、上記と同様に２２ＫｈＧＨ（又は２
０ＫｈＧＨ）の血液又は尿中濃度の全ｈＧＨ濃度に対す
る比率を測定比率として決定する。そして、上記で得ら
れた生理的比率と測定比率とを比較してその相違から投
与されたｈＧＨの量を算出する。
象者について、ヒト成長ホルモンを投与したことが明ら
かな時、またはヒト成長ホルモン投与が疑われる時の血
液又は尿を採取し、上記と同様に２２ＫｈＧＨ（又は２
０ＫｈＧＨ）の血液又は尿中濃度の全ｈＧＨ濃度に対す
る比率を測定比率として決定する。そして、上記で得ら
れた生理的比率と測定比率とを比較してその相違から投
与されたｈＧＨの量を算出する。
【００２９】一方のｈＧＨを投与したことが明らかな場
合には、投与したｈＧＨとは反対のｈＧＨ（２２ＫｈＧ
Ｈが投与された場合には２０ＫｈＧＨ）を基準とし、測
定比率算出時の基準のｈＧＨの血液中又は尿濃度から測
定比率算出時の生理的なｈＧＨ濃度を決定し、この測定
比率算出時の生理的なｈＧＨ濃度と測定比率算出時のｈ
ＧＨ濃度の差から投与されることによって増加した血液
中又は尿のｈＧＨ濃度を決定する。
合には、投与したｈＧＨとは反対のｈＧＨ（２２ＫｈＧ
Ｈが投与された場合には２０ＫｈＧＨ）を基準とし、測
定比率算出時の基準のｈＧＨの血液中又は尿濃度から測
定比率算出時の生理的なｈＧＨ濃度を決定し、この測定
比率算出時の生理的なｈＧＨ濃度と測定比率算出時のｈ
ＧＨ濃度の差から投与されることによって増加した血液
中又は尿のｈＧＨ濃度を決定する。
【００３０】例えば、２２ＫｈＧＨを投与したことが明
らかな場合には、２０ＫｈＧＨの生理的比率を基準とす
る。２０ＫｈＧＨ濃度に対する２２ＫｈＧＨの比は一定
であり、このことは測定比率算出時の測定においても同
様である。よって測定比率算出時の２０ＫｈＧＨ濃度に
基づいて、２０ＫｈＧＨ濃度に対する２２ＫｈＧＨの比
により、生理的な２２ＫｈＧＨ濃度が決定される。この
測定比率算出時の生理的な２２ＫｈＧＨ濃度と測定比率
算出時の実際の２２ＫｈＧＨ濃度の差が投与によって増
加した血液中又は尿中の２２ｈＧＨの濃度であることに
なる。
らかな場合には、２０ＫｈＧＨの生理的比率を基準とす
る。２０ＫｈＧＨ濃度に対する２２ＫｈＧＨの比は一定
であり、このことは測定比率算出時の測定においても同
様である。よって測定比率算出時の２０ＫｈＧＨ濃度に
基づいて、２０ＫｈＧＨ濃度に対する２２ＫｈＧＨの比
により、生理的な２２ＫｈＧＨ濃度が決定される。この
測定比率算出時の生理的な２２ＫｈＧＨ濃度と測定比率
算出時の実際の２２ＫｈＧＨ濃度の差が投与によって増
加した血液中又は尿中の２２ｈＧＨの濃度であることに
なる。
【００３１】生理的比率の測定は必ずしも測定比率の測
定に先立って行う必要はなく。測定比率の測定の後で生
理的比率の測定を行ってもよい。本発明の方法は、投与
されたｈＧＨが２０ＫｈＧＨのみ或は２２ＫｈＧＨのみ
の場合により有効であり、投与されたｈＧＨが２０Ｋｈ
ＧＨと２２ＫｈＧＨの混合物である場合にも有効である
が、混合物中の２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨの比が本発
明における生理的比率と一致または近似している場合は
ｈＧＨの生理的比率と測定比率との差以外の判定方法を
併用することが好ましい。
定に先立って行う必要はなく。測定比率の測定の後で生
理的比率の測定を行ってもよい。本発明の方法は、投与
されたｈＧＨが２０ＫｈＧＨのみ或は２２ＫｈＧＨのみ
の場合により有効であり、投与されたｈＧＨが２０Ｋｈ
ＧＨと２２ＫｈＧＨの混合物である場合にも有効である
が、混合物中の２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨの比が本発
明における生理的比率と一致または近似している場合は
ｈＧＨの生理的比率と測定比率との差以外の判定方法を
併用することが好ましい。
【００３２】２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの尿中の濃
度を用いて投与されたｈＧＨの尿中濃度を測定する方法
としては、得られた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ尿中濃
度と２０ＫｈＧＨ尿中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ
濃度或いは２２ＫｈＧＨ濃度の比率から算出する方法が
考えられる。算出方法の詳細は上記の血液を試料として
用いる場合と同様である。
度を用いて投与されたｈＧＨの尿中濃度を測定する方法
としては、得られた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ尿中濃
度と２０ＫｈＧＨ尿中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ
濃度或いは２２ＫｈＧＨ濃度の比率から算出する方法が
考えられる。算出方法の詳細は上記の血液を試料として
用いる場合と同様である。
【００３３】次に、ｈＧＨが投与されたか否かを判定す
る方法について述べる。ｈＧＨ投与の有無を判定する方
法としては、上記の生理的比率と測定比率を用いる投与
されたｈＧＨの濃度を測定する方法の場合と同様に、各
測定対象者について、血液中（又は尿中）の２０ＫｈＧ
Ｈ及び２２ＫｈＧＨの濃度を別々に測定し、生理的比率
と測定比率を決定すればよい。
る方法について述べる。ｈＧＨ投与の有無を判定する方
法としては、上記の生理的比率と測定比率を用いる投与
されたｈＧＨの濃度を測定する方法の場合と同様に、各
測定対象者について、血液中（又は尿中）の２０ＫｈＧ
Ｈ及び２２ＫｈＧＨの濃度を別々に測定し、生理的比率
と測定比率を決定すればよい。
【００３４】ｈＧＨ投与の有無を判定する方法において
は、投与されたｈＧＨの濃度を測定する方法の場合とは
異なり、生理的比率と測定比率が相違していることを確
認すればよい。例えば、２２ＫｈＧＨに関する測定比率
が生理的比率よりも増加していれば、２２ＫｈＧＨが投
与されたと判定し、逆にそれが生理的比率よりも減少し
ていれば、２０ＫｈＧＨが投与されたと判定される。
は、投与されたｈＧＨの濃度を測定する方法の場合とは
異なり、生理的比率と測定比率が相違していることを確
認すればよい。例えば、２２ＫｈＧＨに関する測定比率
が生理的比率よりも増加していれば、２２ＫｈＧＨが投
与されたと判定し、逆にそれが生理的比率よりも減少し
ていれば、２０ＫｈＧＨが投与されたと判定される。
【００３５】本発明の態様としては、投与されたｈＧＨ
の血液中又は尿中濃度を測定するための測定キット、或
いはｈＧＨが外部から投与されたか否かを判定するため
の判定キットを含む。このようなものは、血液中又は尿
中の２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨの濃度を免疫測定す
るために必要な試薬、抗体、溶媒、洗浄液、器具等より
構成され、本発明の測定方法及び判定方法をより簡便に
実施しうるためのものである。
の血液中又は尿中濃度を測定するための測定キット、或
いはｈＧＨが外部から投与されたか否かを判定するため
の判定キットを含む。このようなものは、血液中又は尿
中の２２ＫｈＧＨ及び２０ＫｈＧＨの濃度を免疫測定す
るために必要な試薬、抗体、溶媒、洗浄液、器具等より
構成され、本発明の測定方法及び判定方法をより簡便に
実施しうるためのものである。
【００３６】本発明の別の態様としては、投与されたｈ
ＧＨの血液中又は尿中濃度を測定するための方法、或い
はｈＧＨが外部から投与されたか否かを判定するための
方法を自動化した機械、又は装置を含む。これら機械及
び装置においては、本発明の本発明の測定方法及び判定
方法をより簡便に実施しうるため手順が自動化されてい
る。そして、そのような自動化のプログラムを内蔵した
装置も広義には本発明の範疇である。
ＧＨの血液中又は尿中濃度を測定するための方法、或い
はｈＧＨが外部から投与されたか否かを判定するための
方法を自動化した機械、又は装置を含む。これら機械及
び装置においては、本発明の本発明の測定方法及び判定
方法をより簡便に実施しうるため手順が自動化されてい
る。そして、そのような自動化のプログラムを内蔵した
装置も広義には本発明の範疇である。
【００３７】
【実施例】［実施例１］ ヒト血液中の２２ＫｈＧＨ、
２０ＫｈＧＨの濃度測定 (1) ２０ＫｈＧＨの免疫測定方法 (1)-1.モノクローナル抗体の調製 ２０ＫｈＧＨ特異的なモノクローナル抗体；ＭＴＣ６Ａ
は、ハイブリドーマＭＴＣ６Ａ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
９１３）より欧州特許公開第０８１４０９１号明細書に
記載の方法により分離した。２２ＫｈＧＨ特異的なモノ
クローナル抗体Ａ３６０２００４７ＰはBiosPacificよ
り購入した。ＭＴＣ６ＡあるいはＡ３６０２００４７Ｐ
と競合することなく２０Ｋあるいは２２ＫｈＧＨ両者に
反応しうるモノクローナル抗体Ｄ１４は、上記ＭＴＣ６
Ａ獲得時の方法を用いて発明者らが得たものである。BI
Acore（ファルマシア製）を用い、３種類のモノクロー
ナル抗体ＭＴＣ６Ａ、Ａ３６０２００４７Ｐ、Ｄ１４の
２０Ｋおよび２２ＫｈＧＨに対する解離常数（ＫＤ）を
求めたところ表１（表１）の様な結果が得られた。表１
（表１）中ＮＤではＢＩＡｃｏｒｅでは結合性が認めら
れなかったことを示す。
２０ＫｈＧＨの濃度測定 (1) ２０ＫｈＧＨの免疫測定方法 (1)-1.モノクローナル抗体の調製 ２０ＫｈＧＨ特異的なモノクローナル抗体；ＭＴＣ６Ａ
は、ハイブリドーマＭＴＣ６Ａ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５
９１３）より欧州特許公開第０８１４０９１号明細書に
記載の方法により分離した。２２ＫｈＧＨ特異的なモノ
クローナル抗体Ａ３６０２００４７ＰはBiosPacificよ
り購入した。ＭＴＣ６ＡあるいはＡ３６０２００４７Ｐ
と競合することなく２０Ｋあるいは２２ＫｈＧＨ両者に
反応しうるモノクローナル抗体Ｄ１４は、上記ＭＴＣ６
Ａ獲得時の方法を用いて発明者らが得たものである。BI
Acore（ファルマシア製）を用い、３種類のモノクロー
ナル抗体ＭＴＣ６Ａ、Ａ３６０２００４７Ｐ、Ｄ１４の
２０Ｋおよび２２ＫｈＧＨに対する解離常数（ＫＤ）を
求めたところ表１（表１）の様な結果が得られた。表１
（表１）中ＮＤではＢＩＡｃｏｒｅでは結合性が認めら
れなかったことを示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】(1)-2.酵素標識抗体の調製 抗体の酵素標識は石川らの方法（Nonisotopic Immunoas
say; Ngo, T.T.編; Plenum Press発行; ｐ27-55(198
8)）に従って実施した。すなわち、精製したモノクロー
ナル抗体Ｄ１４に、Ｓ−アセチルメルカプトスクシニッ
クアンハイドライドを用いＳＨ基を導入し、マレイミド
化した西洋わさびペルオキシダーゼ（以下ＰＯＤと略）
と反応させＰＯＤ標識Ｄ１４を得た。
say; Ngo, T.T.編; Plenum Press発行; ｐ27-55(198
8)）に従って実施した。すなわち、精製したモノクロー
ナル抗体Ｄ１４に、Ｓ−アセチルメルカプトスクシニッ
クアンハイドライドを用いＳＨ基を導入し、マレイミド
化した西洋わさびペルオキシダーゼ（以下ＰＯＤと略）
と反応させＰＯＤ標識Ｄ１４を得た。
【００４０】(1)-3.ヒト血中２０ＫｈＧＨ濃度の測定 血液中の２０ＫｈＧＨ濃度測定は以下のとおりにして行
った。２０ＫｈＧＨに特異的に結合するモノクローナル
抗体ＭＴＣ６ＡをＰＢＳで４０μｇ／ｍｌに希釈し、９
６ウェルマイクロプレート（Greiner製）に１ウェルあ
たり６０μｌずつ分注し、４℃で２晩放置した。このプ
レートを洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０））で洗浄後、ブロ
ックエース（大日本製薬製）でブロッキングした。ブロ
ックエースを除去した後、反応緩衝液（１％ＢＳＡ、１
０μｇ／ｍｌ Ｈｅｔｅｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｂｌｏｃｋ
ｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ １（Scantibodies社製）、１
Ｍ ＮａＣｌを含むＰＢＳ）１００μｌと、標準２０Ｋ
ｈＧＨまたは被検試料液２５μｌを添加し、２時間振と
うした。プレートを洗浄液で洗浄した後、０．５％ＢＳ
Ａ、０．１５ＭＮａＣｌ、０．０５％カゼイン、１％ウ
サギ血清および０．０２％８−アニリノ−１−ナフタレ
ンスルホン酸アンモニウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ
６．５）（以下、標識抗体希釈液と略）で希釈し調製し
たＰＯＤ標識抗ｈＧＨモノクローナル抗体Ｄ１４（０．
５μｇ／ｍｌ）１００μｌを添加し、２時間振とうし
た。プレートを洗浄液で洗浄した後、ＰＯＤ基質溶液
（１００ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．８）に希釈した
３,３',５,５'−テトラメチルベンジジン（６５μｇ／
ｍｌ））１００μｌを添加し、３０分間静置した。反応
液に１Ｎ硫酸１００μｌを添加し、４５０ｎｍにおける
吸光度を６２０ｎｍの吸光度を対照にイムノリーダー
（インターメッド製）により測定し、検量線と対比して
被検試料中の２０ＫｈＧＨ濃度を求めた。標準曲線を図
１（図１）に示す。２２ＫｈＧＨとの交叉反応は０．１
％以下であった。
った。２０ＫｈＧＨに特異的に結合するモノクローナル
抗体ＭＴＣ６ＡをＰＢＳで４０μｇ／ｍｌに希釈し、９
６ウェルマイクロプレート（Greiner製）に１ウェルあ
たり６０μｌずつ分注し、４℃で２晩放置した。このプ
レートを洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０））で洗浄後、ブロ
ックエース（大日本製薬製）でブロッキングした。ブロ
ックエースを除去した後、反応緩衝液（１％ＢＳＡ、１
０μｇ／ｍｌ Ｈｅｔｅｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｂｌｏｃｋ
ｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ １（Scantibodies社製）、１
Ｍ ＮａＣｌを含むＰＢＳ）１００μｌと、標準２０Ｋ
ｈＧＨまたは被検試料液２５μｌを添加し、２時間振と
うした。プレートを洗浄液で洗浄した後、０．５％ＢＳ
Ａ、０．１５ＭＮａＣｌ、０．０５％カゼイン、１％ウ
サギ血清および０．０２％８−アニリノ−１−ナフタレ
ンスルホン酸アンモニウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ
６．５）（以下、標識抗体希釈液と略）で希釈し調製し
たＰＯＤ標識抗ｈＧＨモノクローナル抗体Ｄ１４（０．
５μｇ／ｍｌ）１００μｌを添加し、２時間振とうし
た。プレートを洗浄液で洗浄した後、ＰＯＤ基質溶液
（１００ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．８）に希釈した
３,３',５,５'−テトラメチルベンジジン（６５μｇ／
ｍｌ））１００μｌを添加し、３０分間静置した。反応
液に１Ｎ硫酸１００μｌを添加し、４５０ｎｍにおける
吸光度を６２０ｎｍの吸光度を対照にイムノリーダー
（インターメッド製）により測定し、検量線と対比して
被検試料中の２０ＫｈＧＨ濃度を求めた。標準曲線を図
１（図１）に示す。２２ＫｈＧＨとの交叉反応は０．１
％以下であった。
【００４１】(2) ２２ＫｈＧＨの免疫測定方法 本発明の血中２２ＫｈＧＨ濃度測定法は、２２ＫｈＧＨ
に特異的なモノクローナル抗体として市販ｈＧＨモノク
ローナル抗体の中からＡ３６０２００４７Ｐ（BiosPaci
fic製）を選択した。２２ＫｈＧＨ特異抗体Ａ３６０２
００４７ＰをＰＢＳで１０μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウ
ェルマイクロプレートに１ウェルあたり６０μｌずつ分
注し、４℃で２晩放置した。このプレートを上記洗浄液
で洗浄後、ブロックエースでブロッキングした。ブロッ
クエースを除去した後、上記反応緩衝液１００μｌと、
標準２２ＫｈＧＨまたは被検試料液２５μｌを添加し、
２時間振とうした。プレートを洗浄液で洗浄した後、上
記標識抗体希釈液で希釈し調製したＰＯＤ標識抗ｈＧＨ
モノクローナル抗体Ｄ１４（０．０５μｇ／ｍｌ）１０
０μｌを添加し、２時間振とうした。プレートを洗浄液
で洗浄した後、上記ＰＯＤ基質溶液１００μｌを添加
し、３０分間静置した。反応液に１Ｎ硫酸１００μｌを
添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を６２０ｎｍの吸光
度を対照にイムノリーダーにより測定し、検量線と対比
して被検試料中の２２ＫｈＧＨ濃度を求めた。標準曲線
を図２（図２）に示す。２０ＫｈＧＨとの交差性は、
０．１％以下であった。
に特異的なモノクローナル抗体として市販ｈＧＨモノク
ローナル抗体の中からＡ３６０２００４７Ｐ（BiosPaci
fic製）を選択した。２２ＫｈＧＨ特異抗体Ａ３６０２
００４７ＰをＰＢＳで１０μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウ
ェルマイクロプレートに１ウェルあたり６０μｌずつ分
注し、４℃で２晩放置した。このプレートを上記洗浄液
で洗浄後、ブロックエースでブロッキングした。ブロッ
クエースを除去した後、上記反応緩衝液１００μｌと、
標準２２ＫｈＧＨまたは被検試料液２５μｌを添加し、
２時間振とうした。プレートを洗浄液で洗浄した後、上
記標識抗体希釈液で希釈し調製したＰＯＤ標識抗ｈＧＨ
モノクローナル抗体Ｄ１４（０．０５μｇ／ｍｌ）１０
０μｌを添加し、２時間振とうした。プレートを洗浄液
で洗浄した後、上記ＰＯＤ基質溶液１００μｌを添加
し、３０分間静置した。反応液に１Ｎ硫酸１００μｌを
添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を６２０ｎｍの吸光
度を対照にイムノリーダーにより測定し、検量線と対比
して被検試料中の２２ＫｈＧＨ濃度を求めた。標準曲線
を図２（図２）に示す。２０ＫｈＧＨとの交差性は、
０．１％以下であった。
【００４２】(3) ｈＧＨの分泌と性別の関係 健常な男性２７５人、健常な女性２６３人より、血液を
採取し、上記（１）及び（２）に記載の方法で、２２Ｋ
ｈＧＨと２０ＫｈＧＨの血液中濃度を測定した。測定値
に基づき、生理的比率を算出し、それぞれの値の男女否
を計算した。結果を表２（表２）に示した。表中の値は
平均値±標準偏差を表している。その結果、２２ＫｈＧ
Ｈ及び２０ＫｈＧＨの血液中濃度（表２の左欄及び中央
欄）は個人によってバラツキが極めて大きく、標準偏差
は平均値の２倍前後であった。また、男女間でも差が見
られ、２２ＫｈＧＨ、２０ＫｈＧＨとも女性の方が男性
よりも約５０％も高い値を示した。一方、生理的比率の
値（表２の右欄）はｈＧＨ濃度に比べて一定しており、
標準偏差は平均値の１／３程度であるとともに、男性・
女性間で全く差がなかった。
採取し、上記（１）及び（２）に記載の方法で、２２Ｋ
ｈＧＨと２０ＫｈＧＨの血液中濃度を測定した。測定値
に基づき、生理的比率を算出し、それぞれの値の男女否
を計算した。結果を表２（表２）に示した。表中の値は
平均値±標準偏差を表している。その結果、２２ＫｈＧ
Ｈ及び２０ＫｈＧＨの血液中濃度（表２の左欄及び中央
欄）は個人によってバラツキが極めて大きく、標準偏差
は平均値の２倍前後であった。また、男女間でも差が見
られ、２２ＫｈＧＨ、２０ＫｈＧＨとも女性の方が男性
よりも約５０％も高い値を示した。一方、生理的比率の
値（表２の右欄）はｈＧＨ濃度に比べて一定しており、
標準偏差は平均値の１／３程度であるとともに、男性・
女性間で全く差がなかった。
【００４３】
【表２】
【００４４】(4) ｈＧＨの分泌と年齢との関係 ０歳から７９歳までの健常人４６０人から採取して調製
した血清試料を上記（１）及び（２）に記載の方法で、
２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中濃度を測定し、
２０ＫｈＧＨの生理的比率を求めた。その結果は図３〜
図６（図３〜図６）に示したとおりであり、２０ＫｈＧ
Ｈおよび２２ＫｈＧＨ濃度は個々人において大きく異な
った（図３、４）が、両ｈＧＨ濃度には高い相関性（ｒ
＝０．９４７）が認められ（図６）、その生理的比率は
年齢によらずほぼ一定（約６％）であった（図５）。
した血清試料を上記（１）及び（２）に記載の方法で、
２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中濃度を測定し、
２０ＫｈＧＨの生理的比率を求めた。その結果は図３〜
図６（図３〜図６）に示したとおりであり、２０ＫｈＧ
Ｈおよび２２ＫｈＧＨ濃度は個々人において大きく異な
った（図３、４）が、両ｈＧＨ濃度には高い相関性（ｒ
＝０．９４７）が認められ（図６）、その生理的比率は
年齢によらずほぼ一定（約６％）であった（図５）。
【００４５】(5) 個人による濃度の変動 Ａ〜Ｆの対象者に対し、何回か血液を採取し、（１）及
び（２）に記載の方法で、２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧ
Ｈの血液中を濃度測定し、血液中のｈＧＨ濃度のばらつ
きと、２０ＫｈＧＨの生理的比率を比較した。表３（表
３，４）に示したとおり、個人によっても、血液中のｈ
ＧＨ濃度は大きくばらつくことがわかる。しかし、２０
ＫｈＧＨの生理的比率はほぼ一定していることがわかっ
た。
び（２）に記載の方法で、２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧ
Ｈの血液中を濃度測定し、血液中のｈＧＨ濃度のばらつ
きと、２０ＫｈＧＨの生理的比率を比較した。表３（表
３，４）に示したとおり、個人によっても、血液中のｈ
ＧＨ濃度は大きくばらつくことがわかる。しかし、２０
ＫｈＧＨの生理的比率はほぼ一定していることがわかっ
た。
【００４６】
【表３】
【００４７】
【表４】
【００４８】(6) ｈＧＨの生理的比率と身長、体重、体
脂肪との関係 健常成人７０人から採取して調製した血清試料を上記
（１）、（２）に記載のの方法で２０ＫｈＧＨ及び２２
ＫｈＧＨの血液中濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的
比率を求めた。図７〜９（図７〜９）に示すように、両
ｈＧＨの生理的比率と身長、体重、体脂肪との相関は認
められなかった。
脂肪との関係 健常成人７０人から採取して調製した血清試料を上記
（１）、（２）に記載のの方法で２０ＫｈＧＨ及び２２
ＫｈＧＨの血液中濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的
比率を求めた。図７〜９（図７〜９）に示すように、両
ｈＧＨの生理的比率と身長、体重、体脂肪との相関は認
められなかった。
【００４９】(7) ｈＧＨの経時的な血液中の動態（１） 小児から夜間就寝後２０分おきに採取して調製した血清
試料を上記（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２
２ＫｈＧＨ濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的比率を
求めた。図１０（図１０）に示すように、夜間の生理的
ｈＧＨ分泌亢進時において両ｈＧＨはほぼ同時に分泌ピ
ークを示し両者の比率に大きな変化は認められなかっ
た。
試料を上記（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２
２ＫｈＧＨ濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的比率を
求めた。図１０（図１０）に示すように、夜間の生理的
ｈＧＨ分泌亢進時において両ｈＧＨはほぼ同時に分泌ピ
ークを示し両者の比率に大きな変化は認められなかっ
た。
【００５０】(8) ｈＧＨの経時的な血液中の動態（２） 同一健常成人から４日おきに採取して調製した血清試料
を上記（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２Ｋ
ｈＧＨ濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的比率を求め
た。図１１（図１１）に示すように約１ヶ月間において
両ｈＧＨの比率に大きな変化は認められなかった。
を上記（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２Ｋ
ｈＧＨ濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの生理的比率を求め
た。図１１（図１１）に示すように約１ヶ月間において
両ｈＧＨの比率に大きな変化は認められなかった。
【００５１】(9) ｈＧＨ亢進時のｈＧＨの血液中濃度の
測定（負荷試験１） 同一小児にインスリンまたはグロニジンを負荷しｈＧＨ
の分泌を亢進せしめて調製した血清試料を上記１の
（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨ
の濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの測定比率を求めた。図
１２（図１２）、図１３（図１３）に示すように両負荷
試験のｈＧＨ分泌亢進時において両イソフォームはほぼ
同時に分泌ピークを示し両者の比率に大きな変化は認め
られなかった。
測定（負荷試験１） 同一小児にインスリンまたはグロニジンを負荷しｈＧＨ
の分泌を亢進せしめて調製した血清試料を上記１の
（１）、（２）の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨ
の濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの測定比率を求めた。図
１２（図１２）、図１３（図１３）に示すように両負荷
試験のｈＧＨ分泌亢進時において両イソフォームはほぼ
同時に分泌ピークを示し両者の比率に大きな変化は認め
られなかった。
【００５２】［実施例２］ 投与されたｈＧＨの測定 小児に２２ＫｈＧＨ（２．７５Ｕ）（約１ｍｇ）を皮下
投与して調製した血清試料を実施例１の（１）、（２）
に記載の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中
濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの、生理的比率と測定比率
を求めた。表４（表５）に示すように２０ＫｈＧＨの比
率は投与前の４．８％から投与４時間後に０．４％と大
きな低下が認められた。
投与して調製した血清試料を実施例１の（１）、（２）
に記載の方法で２０ＫｈＧＨ及び２２ＫｈＧＨの血液中
濃度を測定し、２０ＫｈＧＨの、生理的比率と測定比率
を求めた。表４（表５）に示すように２０ＫｈＧＨの比
率は投与前の４．８％から投与４時間後に０．４％と大
きな低下が認められた。
【００５３】
【表５】
【００５４】
【発明の効果】本発明により、血液または尿中のｈＧＨ
のうち外部より投与されたｈＧＨに起因する濃度を測定
することができる。そのため、本発明により、投与され
たｈＧＨに起因する血液または尿中のｈＧＨ濃度の簡便
且つ正確な測定が可能となる。本発明の測定方法は２０
ＫｈＧＨ又は２２ＫｈＧＨの臨床適応において、投与さ
れたｈＧＨの体内動態をモニターするために極めて有用
である。
のうち外部より投与されたｈＧＨに起因する濃度を測定
することができる。そのため、本発明により、投与され
たｈＧＨに起因する血液または尿中のｈＧＨ濃度の簡便
且つ正確な測定が可能となる。本発明の測定方法は２０
ＫｈＧＨ又は２２ＫｈＧＨの臨床適応において、投与さ
れたｈＧＨの体内動態をモニターするために極めて有用
である。
【００５５】また、外部よりｈＧＨが投与されたか否か
を判定することが出来る。そのため、本発明の判定方法
はスポーツのドーピング検査にとって有用である。
を判定することが出来る。そのため、本発明の判定方法
はスポーツのドーピング検査にとって有用である。
【図１】 ２０ＫｈＧＨの免疫測定における標準曲線を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図２】 ２２ＫｈＧＨの免疫測定における標準曲線を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図３】 ２０ＫｈＧＨの分泌と年齢との関係を示すグ
ラフである。
ラフである。
【図４】 ２２ＫｈＧＨの分泌と年齢との関係を示すグ
ラフである。
ラフである。
【図５】 ２０ＫｈＧＨの生理的比率と年齢との関係を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図６】 ２０ＫｈＧＨと２２ＫｈＧＨと血液中濃度の
相関性を示すグラフである。
相関性を示すグラフである。
【図７】 ２０ＫｈＧＨの生理的比率と身長との関係を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図８】 ２０ＫｈＧＨの生理的比率と体重との関係を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図９】 ２０ＫｈＧＨの生理的比率と体脂肪との関係
を示すグラフである。
を示すグラフである。
【図１０】 小児の就寝後ｈＧＨの血中動態を示すグラ
フである。
フである。
【図１１】 成人の約１カ月間にわたるｈＧＨの血中動
態を示すグラフである。
態を示すグラフである。
【図１２】 インスリン負荷によりｈＧＨが亢進した時
のｈＧＨの血中動態を示すグラフである。
のｈＧＨの血中動態を示すグラフである。
【図１３】 クロニジン負荷によりｈＧＨが亢進した時
のｈＧＨの血中動態を示すグラフである。
のｈＧＨの血中動態を示すグラフである。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/74 G01N 33/53 G01N 33/577 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (14)
- 【請求項１】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモン
（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホル
モン（２０ＫｈＧＨ）の血液中濃度の比に基づいて、投
与されたヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の血液中濃度を測
定する方法。 - 【請求項２】 以下の行程よりなる、請求項１記載の投
与されたｈＧＨの血液中濃度を測定する方法、 （１）ヒト成長ホルモンを投与していない時の対象者に
ついて、分子量約２２０００のヒト成長ホルモン（２２
ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホルモン
（２０ＫｈＧＨ）の血液中濃度をそれぞれ測定し、得ら
れた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液中濃度と２０Ｋｈ
ＧＨ血中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ濃度或いは２
２ＫｈＧＨ濃度の比率を生理的比率として決定する。 （２）ヒト成長ホルモンを投与したか又は投与が疑われ
る時の該対象者の血液を採取し、行程（１）と同様に全
ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液中濃度と２０ＫｈＧＨ血
液中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ濃度或いは２２Ｋ
ｈＧＨ濃度の比率を測定比率として決定する。 （３）行程（１）で決定された生理的比率と、行程
（２）で決定された測定比率との違いから、投与された
ヒト成長ホルモンの血液中濃度を決定する。 - 【請求項３】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモン
と分子量約２００００のヒト成長ホルモンの血液中濃度
の測定を、それぞれのヒト成長ホルモンに特異的な抗体
を用いて行うことを特徴とする、請求項２記載の測定方
法。 - 【請求項４】 抗体がモノクローナル抗体であることを
特徴とする、請求項３記載の測定方法。 - 【請求項５】 投与されたヒト成長ホルモンが分子量約
２２０００のヒト成長ホルモンであることを特徴とす
る、請求項２記載の測定方法。 - 【請求項６】 投与されたヒト成長ホルモンが分子量約
２００００のヒト成長ホルモンであることを特徴とす
る、請求項２記載の測定方法。 - 【請求項７】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモン
（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホル
モン（２０ＫｈＧＨ）の血液中濃度の比に基づいて、ヒ
ト成長ホルモン（ｈＧＨ）の投与を判定する方法。 - 【請求項８】 以下の行程よりなる、請求項７記載のヒ
ト成長ホルモン（ｈＧＨ）の投与を判定する方法、 （１）ヒト成長ホルモンを投与していない時の対象者に
ついて、分子量約２２０００のヒト成長ホルモン（２２
ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホルモン
（２０ＫｈＧＨ）の血液中濃度をそれぞれ測定し、得ら
れた全ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液中濃度と２０Ｋｈ
ＧＨ血液中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ濃度或いは
２２ＫｈＧＨ濃度の比率を生理的比率として決定する。 （２）ヒト成長ホルモンを投与したか又は投与が疑われ
る時の該対象者の血液を採取し、行程（１）と同様に全
ｈＧＨ濃度（２２ＫｈＧＨ血液中濃度と２０ＫｈＧＨ血
液中濃度の和）に対する２０ＫｈＧＨ濃度或いは２２Ｋ
ｈＧＨ濃度の比率を測定比率として決定する。 （３）行程（１）で決定された生理的比率と、行程
（２）で決定された測定比率とを比較して、ヒト成長ホ
ルモンの投与の有無を決定する。 - 【請求項９】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモン
と分子量約２００００のヒト成長ホルモンの血液中濃度
の測定を、それぞれのヒト成長ホルモンに特異的な抗体
を用いて行うことを特徴とする、請求項８記載の判定方
法。 - 【請求項１０】 抗体がモノクローナル抗体であること
を特徴とする、請求項９記載の判定方法。 - 【請求項１１】 投与されたヒト成長ホルモンが分子量
約２２０００のヒト成長ホルモンであることを特徴とす
る、請求項８記載の判定方法。 - 【請求項１２】 投与されたヒト成長ホルモンが分子量
約２００００のヒト成長ホルモンであることを特徴とす
る、請求項８記載の判定方法。 - 【請求項１３】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモ
ン（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホ
ルモン（２０ＫｈＧＨ）の尿中濃度の比に基づいて、投
与されたヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の尿中濃度を測定
する方法。 - 【請求項１４】 分子量約２２０００のヒト成長ホルモ
ン（２２ＫｈＧＨ）と分子量約２００００のヒト成長ホ
ルモン（２０ＫｈＧＨ）の尿中濃度の比に基づいて、ヒ
ト成長ホルモン（ｈＧＨ）の投与を判定する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11078756A JP3014387B2 (ja) | 1998-03-30 | 1999-03-24 | ヒト成長ホルモンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10-84333 | 1998-03-30 | ||
| JP8433398 | 1998-03-30 | ||
| JP11078756A JP3014387B2 (ja) | 1998-03-30 | 1999-03-24 | ヒト成長ホルモンの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11344496A JPH11344496A (ja) | 1999-12-14 |
| JP3014387B2 true JP3014387B2 (ja) | 2000-02-28 |
Family
ID=26419820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11078756A Expired - Lifetime JP3014387B2 (ja) | 1998-03-30 | 1999-03-24 | ヒト成長ホルモンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3014387B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7793769B2 (en) | 2003-12-26 | 2010-09-14 | Konami Digital Entertainment Co., Ltd. | Automatic vending machine |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE335763T1 (de) * | 2002-11-20 | 2006-09-15 | Brahms Ag | Sandwich-immunoassay zur bestimmung von proanp- teilpeptiden |
-
1999
- 1999-03-24 JP JP11078756A patent/JP3014387B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7793769B2 (en) | 2003-12-26 | 2010-09-14 | Konami Digital Entertainment Co., Ltd. | Automatic vending machine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11344496A (ja) | 1999-12-14 |
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