JP2993979B2 - トランスジェニック塊茎形成双子葉植物の製法、発現カセットを含有する植物細胞、パタチンプロモータ配列及び発現カセット - Google Patents

トランスジェニック塊茎形成双子葉植物の製法、発現カセットを含有する植物細胞、パタチンプロモータ配列及び発現カセット

Info

Publication number
JP2993979B2
JP2993979B2 JP1329772A JP32977289A JP2993979B2 JP 2993979 B2 JP2993979 B2 JP 2993979B2 JP 1329772 A JP1329772 A JP 1329772A JP 32977289 A JP32977289 A JP 32977289A JP 2993979 B2 JP2993979 B2 JP 2993979B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
sequence
tuber
dna
dna sequence
plant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP1329772A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH02283276A (ja
Inventor
マリオ・ロチヤ―ソサ
ウヴエ・ゾネヴアルト
ヴオルフ‐ベルント・フロマー
ロタール・ヴイルミツツアー
マリーナ・シユトラートマン
Original Assignee
ヘキスト シェーリング アグレヴォ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ヘキスト シェーリング アグレヴォ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング filed Critical ヘキスト シェーリング アグレヴォ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
Publication of JPH02283276A publication Critical patent/JPH02283276A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2993979B2 publication Critical patent/JP2993979B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/8223—Vegetative tissue-specific promoters
    • C12N15/8227—Root-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
    • C12N15/8235—Fruit-specific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Preparation Of Fruits And Vegetables (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ジヤガイモ塊茎に特異的な調節域が局在す
る発現カセツトの新規DNA配列、並びにこのDNA配列を植
物ゲノム中に転移微生物としてアグロバクテリウム属菌
（Agrobacterium）を使用して転移することに関する。
このDNA配列はパタチン遺伝子プロモータを有するパタ
チン遺伝子を含有する。このDNAは栽培植物中で内生産
物の調節にも外来産物の製造にも役立つ。
従来の技術 世界人口が絶えず増加することによつて生じる連続的
に高まる食料品及び原料に対する要求により、長期的に
予測すると耕地面積が減少するので有用植物及びその内
容成分の生産高を上昇させるということが増々大きなバ
イオテクノロジーの研究課題となつている。生産高の上
昇は植物に対する有害動植物及び植物の病気及び／又は
不利な土壌状態に対する有用植物の抵抗性を強めること
により達せられる。抵抗性の強化は、例えば植物を誘発
し、保護物質の形成を増大させるようにすることにより
達せられる。このためには植物の代謝を操作しなければ
ならない。このことは特に細胞核中に含有されるデオキ
シリボ核酸（DNA）の変化により惹起される。植物の１
つ又は複数の部分領域中での転写に、又は植物成長サイ
クルにおける一定の時期における転写に関与するDNA片
に作用を与えることがしばしば有利である。従つて、内
生植物産物の転写又は発現に関与する植物ゲノム中のDN
A配列の同定には大きな興味が寄せられる。この種のDNA
配列を見い出すために、まず初めに細胞成長サイクルの
一定期間に、又は一定の植物部分に現われる産物をさが
さなければならない。これに属する遺伝子を同定し、単
離したならば、この配列の十分な調査と特に所望の転写
調節領域の同定及び単離が必要である。引続いて、その
機能が実験により証明されなければならない好適なモデ
ルをつくらなければならない。この種のDNA配列の同定
は、多くの誤りと不確かさを伴なう挑戦的な研究課題で
ある。植物を遺伝学的に変更するという可能性への興味
は一層大きくなり、このことは、これと関連する、転写
配列の同定及び一定の用途へのその配列の操作に伴なう
費用及び努力を正当化するものである。双子葉及び単子
葉植物の遺伝学的変更法はすでに公知であり（ヨーロツ
パ特許第267159号明細書）、更に多くの文献が出ている
〔Crouch等著、In.:Molecular Form and Function of t
he Plant Genome、編者、van Volten−Doting、Groot a
nd Hall、Plenum Publishing Corp.、1985年、第555〜5
66頁;Crouch及びSussex著、Planta、1981年、第153巻、
第64〜74頁;Crouch等著、J.Mol.Appl.Genet、1983年、
第２巻、第273〜283頁；及びSimon等著、Plant Molecul
ar Biology、1985年、第５巻、第191〜201頁（前記の文
献中にはBrassica napus中の蓄積蛋白質の種々の形を記
載している:Beachy等著、EMBO J.、1985年、第４巻、第
3047〜3057頁;Sengupta−Gopalan等著、Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA、1985年、第82巻、第3320〜3324頁;Greenwoo
d及びChrispeels著、Plant Physiol、1985年、第79巻、
第65〜71頁及びChen等著、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、19
86年、第83巻、第8560〜8564頁（前記文献中には種子蓄
積蛋白質及び遺伝学的操作を包含する実験が記載されて
いる）及びEckes等著、Mol.Gen.Genet.、1986年、第205
巻、第14〜22頁及びFluhr等著、Science、1986年、第23
2巻、第1106〜1112頁（これらの文献は光誘発性植物遺
伝子の遺伝学的操作を記載している）〕。
発明の構成 ところで、本発明において発現カセツトの新規DNA配
列が提供され、このDNA配列にはジヤガイモ塊茎特異性
調節域が局在しており、かつパタチン（Patatin）遺伝
子プロモータを有するパタチン遺伝子を含有する。
塊茎特異性のための調節転写開始域を有しこの開始域
の配列の後に、該当する細胞組織の表現型の変更及び内
生生成物の形成並びに量分布又は新しい機能のための外
来性発現生成物の形成のための情報を有する配列が接続
してよい。転写域及び終止域を転写方向において、この
配列を挿入するための制限部位１個又は数個を含有する
リンカー又はポリリンカーにより作成すると有利であ
る。一般に、リンカーは制限部位１〜10個、殆んどの場
合１〜８個、殊に２〜６個を有する。一般に、リンカー
は100bpより少ない大きさ、しばしば60bpより少なく、
しかしながら少なくとも5bpの大きさを有する。転写開
始域は宿主植物に対して天然もしくは相同性であつて
も、また異種もしくは非相同性であつてもよい。特に重
要なことは、ジヤガイモのほふく茎の形成から熟成した
塊茎までのジヤガイモ塊茎の全成長にわたつて発現する
ジヤガイモ（ソラヌム・ツベロスム:Solanum tuberosu
m）パタチン遺伝子と対合している転写開始域である。
転写カセツトの中味は５′−３′の転写方向において、
その植物に典型的な転写及び翻訳のための域、任意の配
列及び転写及び翻訳の終止域である。終止域は任意に交
換可能である。
DNA配列は、任意のペプチドのすべての可能な転写解
読枠も、また１個又は数個のイントロンも含有していて
よい。例として次のものが挙げられる：酵素のための配
列;a）転写解読枠であつてもよいゲノム配列に対して、
ｂ）イントロンに対して、ｃ）コードしないリーダー配
列（Leitsequenz）に対して、ｄ）相補性により転写、m
RNAプロセツシング（例えばスプライシング）又は翻訳
を阻害する配列に対して相補性である配列。所望のDNA
配列を合成してもよいし、または天然であつてもよく、
もしくは合成DNA成分と天然DNA成分とからの混合物を含
有してもよい。一般に、植物において優先的であるコド
ンを有する合成DNA配列を生成する。この植物において
優先するコドンは、殆んどの興味深い植物種において発
現する、最大蛋白質頻度のコドンから決定することがで
きる。転写カセツトの生成の際に、種々のDNAフラグメ
ントを操作して、有利に正しい方向で解読しかつ正しい
解読枠を有するDNA配列を得ることができる。DNAフラグ
メント相互の結合には、フラグメント末端でアダプター
又はリンカーを使用することができる。更に、適合する
制限部位を供給したり又は余分のDNA又は制限部位を除
去したりという操作を適用することができる。挿入、欠
失又は例えばトランジシヨン及びトランバージヨンのよ
うな置換が該当する場合には、試験管内突然変異、プラ
イマー修復、制限又は連結を適用することができる。
例えば制限、チユーイングバツク（Chewingback）又
はブラント末端（blunt−end）の突出部分を満たすよう
な好適な操作では、一緒にして連結するためのフラグメ
ントの相補性末端を使用することができる。異なる工程
を実施するに当り、DNA量を高めかつ望ましい処理結果
を確保するのに有用なDNA分析をするにはクローン化が
必要である。E.コリ中の複製機構及び形質転換した細胞
の選択を可能にするマーカーを含む多数のクローン化用
ベクターを使用することができる。ベクターは例えばpB
R332、pUCシリーズ、M13mpシリーズ、pACYC184等を含
む。それに相応して配列を適当な制限部位でベクター中
に導入することができる。得られたプラスミドをE.コリ
中で形質転換するために使用する。E.コリ細胞を好適な
培地中で培養し、引続いて収穫しかつ溶菌する。プラス
ミドを再び取得する。分析法としては、一般に配列分
析、制限分析、電気泳動及び他の生化学的−分子生物学
的方法を実施する。核操作後に、使用したDNA配列を制
限しかつ次のDNA配列と結合する。それぞれのプラスミ
ド配列を同一の又は他のプラスミド中でクローン化する
ことができる。所望の遺伝子を植物中に導入する方法に
応じて他のDNA配列が必要となるはずである。例えば形
質転換に植物細胞のTi−又はRiプラスミドを使用する場
合、少なくとも右側の境界、しかししばしば左右の境界
をTi−及びRiプラスミドに導入すべき遺伝子のフランケ
ン域（Flankenbereich）として結合させなければならな
い。植物細胞の形質転換のためにＴ−DNAを使用するこ
とについては熱心に研究されかつヨーロツパ特許第1205
16号明細書;Hoehema著,The Binary Plant Vector Syste
m Offset−drukkerij Kanters B.V.,Ablasserdam（198
5），第Ｖ章;Fraley等著,Crit.Rev.Plant Sci.,4巻,1〜
46頁及びAn等著,EMBO J.（1985）４巻,277〜284頁に十
分に記載されている。
導入されたDNAがゲノム中に組込まれると、DNAはそこ
でも比較的安定でありかつ一般的にはもはやとび出さな
い。DNAは通常、殺生物剤もしくはカナマイシン、G41
8、ブレオマイシン、ヒグロマイシン又はクロラムフエ
ニコール等のような抗生物質に対する耐性を形質転換植
物細胞に付与する選択マーカーを含有する。それ故、マ
ーカーは形質転換した細胞を、導入DNAが欠損している
細胞から選択するのを可能にする。
DNAを植物系宿主細胞中に導入するために、多数の技
術が使える。この技術には形質転換手段としてアグロバ
クテリウム・ツメフアチエンス（Agrobacterium tumefa
ciens）又はアグロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobac
terium rhizogenes）を使うＴ−DNAによる形質転換、融
合、注入又はエレクトロポレーシヨン等がある。形質転
換にアグロバクテリウム属菌を使う場合、導入すべきDN
Aを特別なプラスミド中に、つまり中間ベクター（inter
mediaerer Vektor）又はバイナリー（binaerer）ベクタ
ー中にクローン化すべきである。中間ベクターは、Ｔ−
DNA中の配列に相同の配列に基づいて相同組み換えによ
りTi−又はRiプラスミド中に組込むことができる。更
に、このプラスミドはＴ−DNAの転移に必要なVir領域を
有する。中間ベクターはアグロバクテリウム属菌中では
複製しない。ヘルパープラスミドによつて中間ベクター
はアグロバクテリウム・ツメフアチエンスに転移させる
ことができる（接合）。バイナリーベクターはE.コリ中
でも、アグロバクテリウム属菌中でも複製し得る。それ
は、右側及び左側のＴ−DNA限界域にとり囲まれる選択
マーカー遺伝子及びリンカー又はポリリンカーを含有す
る。それらを直接アグロバクテリウム属菌中に形質転換
させることができる〔Holsterts等著,Mol.Gen.Genet.
（1978年）,163巻,181〜187頁〕。宿主細胞として有用
なアグロバクテリウム属菌は、Ｔ−DNAが植物細胞中に
転移するのに必要なVir域を有するプラスミドを含有す
べきであり、その際に付加的なＴ−DNAが含まれていて
もよい。このように形質転換された細菌を植物細胞の形
質転換に使用する。DNAの植物細胞中への転移には、植
物外植片を有利にアグロバクテリウム・ツメフアチエン
ス又はアグロバクテリウム・リゾゲネスと一緒に培養す
ることができる。感染した植物材料（例えば葉、茎、根
あるいはプロトプラスト又は浮遊培養した細胞）から好
適な培地（これは選択のために抗生物質又は殺生剤を含
有していてもよい）中で植物全体を再生することがで
き、その後この植物を導入されたDNAの存在について試
験することができる。注入及びエレクトロポレーシヨン
の場合は、プラスミドに対して特別な要件はなく、例え
ばpUC誘導体のような簡単なプラスミドを使用すること
ができる。
外来遺伝子を植物中に導入するために多くの可能性が
明らかであるが、例えば血液因子；リンホカイン；コロ
ニー刺激因子；インターフエロン；プラスミノーゲンア
クチベータ；例えばスーパーオキシドジスムターゼ又は
キモシンのような酵素；ホルモン；ラツト乳からのチオ
エステラーゼ−２又はヒト血清アルブミンのような哺乳
動物生産物の遺伝子の発現が特に興味深い、他の可能性
は、塊茎蛋白質、特に最適なアミノ酸組成（必須アミノ
酸）を有する突然変異塊茎蛋白質の量を高めることであ
り、かつこのようにして塊茎の栄養価を高めることがで
きる。
一定の内生産物の量を低減しようとする場合は、更
に、プロモータに対して偽方向づけで遺伝子又はその一
部を発現させることが考えられ、これは内生遺伝子全体
又はその一部に相補性であるRNAの合成に案内し、それ
故この遺伝子の転写もしくは内生mRNAのプロセツシング
及び／又は翻訳を阻害することができる。
形質転換した細胞は植物内で常法で成長する〔McCorm
ick等著,Plant Cell Reports（1986年）,5巻,81〜84頁
も参照〕。これらの植物は正常に成育させることができ
かつ形質転換した同じ遺伝素質又は他の遺伝素質を有す
る植物と交叉させることができる。その結果発生するハ
イブリツド個体は相応する発現型特性を有する。この発
現型特性が確実に保持されかつ遺伝するように、２世代
又はそれ以上成育させるべきである。また、確実に相応
する発現型又は他の特性が含まれているようにするため
に、種子もまた収獲すべきである。塊茎特異性発現用の
宿主植物としてはすべての茎葉−又は塊根形成植物種、
特にソラヌム・ツベロスムが好適である。
有用な転写開始領域の同定は多くの方法で行なうこと
ができる。通常この際に、植物の一定の部分（塊茎）か
ら単離したmRNAを使用する。特異的に組織又は植物の段
階に関連するmRNAの付加的な濃度上昇のためにcDNAを調
製することができ、その際にこのmRNA又はcDNAに非特異
的なcDNAを他の組織又は植物段階（例えば塊茎／葉）か
ら取り除くことができる。残りのcDNAを、相補性配列の
ゲノムのプローブ検査（Sondierung）のために、好適な
植物ライブラリーの利用下に使用することができる。蛋
白質が単離されているか又は単離されるところでは部分
的に配列することができ、それにより植物DNAライブラ
リー中の相応する配列を直接同定するためのプローブを
製造することができる。引続いて、プローブによりハイ
ブリツド形成する配列を単離しかつ操作することができ
る。更に、コード付け領域を伴なう未翻訳５′域を単離
しかつ発現カセツト中で未翻訳の５′域の転写活性を同
定するために使用することができる。未翻訳５′域を使
用する、得られた発現カセツトを植物中で形質転換する
ことができ（前記参照）、それによつて外来構造遺伝子
（未翻訳の５′域を伴なう野生型の転写解読枠とは別の
もの）を有するその機能性及び塊茎特異性を試験する。
このようにして、塊茎に特異的な転写に必要な特異的配
列を同定することができる。特に重要な発現カセツトは
パタチン遺伝子の転写開始部位を含む。
概念及び略語 略 語 d,kd＝ダルトン、キロダルトン bp＝塩基対 DNA＝デオキシリボ核酸、遺伝情報の担い手 cDNA＝リバース・トランスクリプターゼにより製造され
たmRNAのコピー mRNA＝メツセンジヤーリボ核酸 Ｔ−DNA＝転移DNA（アグロバクテリウム・ツメフアチエ
ンスのTiプラスミド上に局在） 概 念 ブラント末端＝２つのDNA鎖が正確に同じ長さであるDNA
末端 チユーイングバツク＝DNA分子の相補性鎖よりより長いD
NA鎖のヌクレオチドの酵素的除去 電気泳動＝大きさ及び荷電により蛋白質及び核酸を分離
するための生化学分離法 発現＝遺伝子の活性 遺伝子＝遺伝因子、遺伝物の単位、一定の特性の部分情
報の担い手、遺伝子は核酸（例えばDNA,RNA）より成
る。
ゲノム＝細胞の染色体上に局在する全遺伝子 ゲノム配列＝ゲノムのDNA配列で、連続して並ぶ３個の
ヌクレオチド塩基（トリプレツト）が、一定のアミノ酸
をコード付けするコドンを形成する。
RNAスプライシング＝遺伝子はいつも一続きの単位とし
て存在するわけではなく、コード付けしない配列（イン
トロン）を含有していてもよい。
非相同遺伝子又はDNA＝外来遺伝子又は外来DNA 相同遺伝子又はDNA＝遺伝子又はDNAが同じ種に由来す
る。
クローン＝単一母細胞に由来する細胞集団、子孫は遺伝
子型が同じである。クローン化により細胞系統の単一性
を高めることができる。
連結＝DNAの５′−ホスフエート基と３′−ヒドロキシ
ル基との間のホスホジエステル結合の酵素的形成 リンカー、ポリリンカー＝制限切断部位１個又は数個を
直接的な順序で含有する合成DNA配列 ノザンプロツト、サザンプロツト＝電気泳動で分離した
RNA又はDNAをニトロセルロース膜又はナイロン膜上に転
移させかつ固定すること パタチン＝ジヤガイモ塊茎の主要蓄積蛋白質の慣用名、
分子量約40kdのグリコ蛋白質 発現型＝遺伝子型とは反対に生体中で現われる全特性 プラスミド＝細菌細胞中（場合によつては真核生物中）
の付加的な染色体外DNA遺伝子担体で、これは細菌染色
体とは関係なく倍加する。プラスミドは他の宿主DNA中
に組み込むことができる。
プライマー＝開始部分；他のヌクレオチドをつぎ足すこ
とのできるポリヌクレオチド鎖 プロモータ＝相同又は外来のDNA遺伝子配列の転写を保
証するDNA発現の制御配列 複製＝DNA配列の培加 制限酵素＝エンドデオキシリボヌクレアーゼの亜族であ
る制限エンドヌクレアーゼ（例えばE.コリからのEcoR I は基質を認識する高い特異性により優れている（↓＝切
断部位）。
制限部位＝特異的に制限酵素により生成される切断部位 終止＝ポリペプチド鎖を完成する蛋白質合成の最終工程 形質転換＝細菌の外来DNAを受容細胞中に挿入 転写＝DNA上にのつている遺伝学的情報をRNAに転写 翻訳＝核酸の鎖状塩基配列の形で蓄積されている遺伝情
報の翻訳 転位＝塩基対置換、プリン−ピリミジンがプリン−ピリ
ミジンに、例えばＡ−ＴがＧ−Ｃにより 転換＝塩基対置換、プリン−ピリミジンがピリミジン−
プリンに、例えばＡ−ＴがＴ−Ａにより 欠失＝１個又は数個の塩基対の除去 挿入＝１個又は数個の塩基対の導入；転位、転換、欠失
及び挿入は点突然変異である。
ベクター＝遺伝子を受容し、これを他の細胞に運搬する
宿主特異的な、複製可能な構造。プラスミドはベクター
として使用することができる。
1988年12月16日付けで、ドイツ微生物保存機関（DSM;
西ドイツ国、ブラウンシユヴアイク在）に次の微生物を
寄託した（寄託番号）： プラスミドpBI101−B33を含有するアグロバクテリウム
・ツメフアチエンスLBA4405、Ａ−tumB33（DSM5089）。
本発明をベースとする実施例を理解し易くするため
に、この実験に必要な公知の方法を予め記載する： 1.クローン化ベクター クローン化のために、ベクターpUC18/19及びM13mp18/
19〔Yanisch−Perron等著,Gene（1985年）,33巻,103〜1
19頁〕を使用した。
植物形質転換のために、遺伝子構造物をバイナリーベ
クターBIN19〔Bevan著,Nucl.Acids.Res.（1984年）,12
巻,8711〜8720頁〕中にクローン化した。
2.細菌菌株 pUC−及びM13ベクターにはE.コリ菌株BMH71−18〔Mes
sing等著,Proc.Nat.Acad.Sci.USA（1977年）,24巻,6342
〜6346頁〕又はTB1を使用した。ベクターBIN19には専ら
菌株TB1を使つた。TB1は菌株JM101の組換えマイナス、
テトラサイクリン耐性誘導体である〔Yanisch−Perron
等著,Gene（1985年）,33巻,103〜119頁〕。TB1菌株の遺
伝子型は（Bart Barrel,pers.Mitteilung）:F′（traD3
6,proAB,lacl,lacZ△M15），△（lac,pro）,SupE,thiS,
recA,Sr1::Tn10（TcR）である。
植物の形質転換はアグロバクテリウム・ツメフアチエ
ンス菌株LBA4404〔Bevan,M.,Nucleic Acids Research12
巻,8711〜8721頁（1984年）;BIN19誘導体〕を用いて実
施した。
媒 地 YT培地：酵母エキス0.5％、NaCl0.5％、バクト−トリ
プトン0.8％、場合により寒天1.5％ YEB培地：牛肉エキス0.5％、酵母エキス0.1％、ペプ
トン0.5％、サツカロース0.5％、MgSO4 2mM、場合によ
り寒天1.5％ MS培地:Murashige及びSkoogによる〔Physiologia Pla
ntarum（1962年）、15巻、473〜497頁〕 3.アグロバクテリウム・ツメフアチエンスの形質転換 Bin19誘導体ではアグロバクテリウム属菌中へのDNAの
導入はHolster等の方法〔Mol.Gen.Genet.（1978年）,16
3巻,181〜187頁〕で直接形質転換により行なう。形質転
換されたアグロバクテリウム属菌のプラスミドDNAをBir
nboim及びDolyの方法〔Nucl.Acids,Res.（1979年）,7
巻,1513〜1523頁〕により単離しかつ好適な制限切断に
よりゲル電気泳動で分離する。
4.植物形質転換 ジヤガイモ滅菌栽培の小葉10枚をスカルベルで傷つけ
て、それを、選択下に成長したアグロバクテリウム・ツ
メフアチエンス−一晩培養物30〜50μを含有する、サ
ツカロース２％含有MS培地10ml中に浸した。３〜５分間
軽く振盪した後でペトリ皿を25℃暗所で恒温保持した。
２日後、葉をグルコース1.6％、ゼアチンリボース2mg/
、ナフチル酢酸0.02mg/、ジベレリン酸0.02mg/、
クラホラン（Claforan）500mg/、カナマイシン50mg/
及びバクト寒天0.8％を含有するMS培地上にのせた。2
5℃、3000Luxで１週間恒温保持した後で培地中のクラホ
ラン濃度を半分に低めた。
5.遺伝子転換植物からのゲノムDNAの分析 ゲノム植物DNAの単離をRogers及びBendich〔Plant Mo
l.Biol.（1985年）,5巻,69〜76頁〕により行なつた。
DNA分析のためにDNA10〜20μｇを好適な制限切断後に
サザンプロツトにより検出すべきDNA配列の組込みにつ
いて試験した。
6.遺伝子転換植物からの全RNAの分析 植物の全RNAの単離はLogemann等〔Analytical Bioche
m.（1987年）,163巻,16〜20頁〕により行なつた。
分析に当り、１回当り50μｇの全RNAをノザンプロツ
トにより目的の転写物の存在を試験した。
7.GUS試験 遺伝子転換植物中のβ−グルクロニダーゼ（GUS）の
活性をJefferson法〔Plant Mol.Biol.Rep.（1987年）,5
巻,387〜405頁〕により測定した。蛋白質測定はBradfor
d法〔Anal.Biochem.（1976年）,72巻,248〜254頁〕によ
り行なつた。GUS活性の測定には蛋白質50μｇを使用
し、恒温保持を37℃で30分間行なつた。
実施例 次の実施例によりジヤガイモ塊茎からのパタチンプロ
モータの単離及び同定並びに機能及び使用について詳説
する。
実施例１ ソラヌム・ツベロスムからのパタチン遺伝子のクローン
化及び構造分析 ジヤガイモのパタチン蛋白質をコードするcDNA−クロ
ーンをジヤガイモの変種ベロリーナ（Berolina）から単
離しかつ配列した〔Rosahl等著,Mol.Gen.Genetics（198
6年）,203巻,214〜220頁〕。このcDNA−クローンは、内
生ゲノムパタチンクローンをジヤガイモの変種ベロリー
ナ（Max−Planck−Institut fuer Zuechtungsforschun
g,Koeln在）から単離するのに有用であつた。
実施例２ ゲノムパタチンクローンのクローン化、同定及び一次構
造 λフアージから誘導されたベクターEMBL4中で形成さ
れた、ジヤガイモの変種ベロリーナからの核DNAのゲノ
ムライブラリーをパタチンcDNA pcT58によりスクリーニ
ングした。13個の独立したクローンが得られ、それらの
うち部分配列後にクローンB33をそれ以後の操作に使用
した。クローンB33の制限地図は第１図に図示した。遺
伝子の一部を配列し、転写調節に重要な領域の配列は第
２図に図示した。
実施例３ 塊茎に特異的なパタチン遺伝子B33の発現に関与する調
節領域の同定 位置＋14と−1513との間に局在している1.527kbのDra
I/Dra I−フラグメント（第２図参照）をプラスミドpB
I101〔Jefferson等著,EMBO J.（1987年）,6巻,3901〜39
07頁〕のSma I切断部位中に挿入した。これにより、パ
タチン遺伝子B33のこのプロモータフラグメントはE.コ
リからのβ−グルコロニダーゼのコード付け領域及びノ
パリンシンターゼ遺伝子のポリ−Ａ含有領域と融合した
（第３図参照）。この構成物をアグロバクテリウム属菌
LBA4404〔Bevan,M.著,Nucl.Acids Res.（1984年）,12
巻,8711〜8721頁〕中に転移させ、かつキメラパタチン
遺伝子を含有するアグロバクテリウム属菌をジヤガイモ
の葉の形質転換に使用する。
再配列されなかつた完全なキメラのパタチン−グルコ
ロニダーゼ遺伝子の存在をサザンプロツト分析により検
出した、独立して得られた10個の形質転換体について
葉、茎、塊茎及び根のβ−グルクロニダーゼ活性を試験
した。
結果を表１に記載した。このデータから、β−グルク
ロニダーゼ遺伝子と融合したパタチン遺伝子B33のDra I
/Dra I−フラグメントが強力な塊茎特異的β−グルクロ
ニダーゼ活性を誘発することが全く明らかである。
c.v.Desiree 活性はメチルウンベリフエロールｐモル／蛋白質mg/
分で記載した。
c.v.Desireeは形質転換されなかつたジヤガイモの相
応する活性を示す。
【図面の簡単な説明】
第１図はパタチン遺伝子B33をコード付けするゲノムク
ローンの制限地図の図、第２図はパタチン遺伝子の、転
写調節に重要である領域の核酸配列を示す図であり、配
列中、Dra I/Dra I−フラグメントの位置は＋14と−151
3との間で矢印で示し、▼で示すATGは翻訳開始点であ
り、第３図は2.0kbのカナマイシン耐性遺伝子、1.527kb
のパタチンプロモータB33、2.0kbのβ−グルクロニダー
ゼ遺伝子及びノパリンシンターゼターミネータをその中
に含む13.5kbのプラスミドpBI101−B33の構造を示す図
である。
フロントページの続き (72)発明者 ヴオルフ‐ベルント・フロマー ドイツ連邦共和国ベルリン30・ハイルブ ロナーシユトラーセ ３ (72)発明者 ロタール・ヴイルミツツアー ドイツ連邦共和国ベルリン39・アム・ク ライネン・ヴアンゼー 34 (72)発明者 マリーナ・シユトラートマン ドイツ連邦共和国ベルリン37・パルフオ ルヒヤーハイデ 11 (56)参考文献 Ｐｌａｎｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ ｉｏｌｏｇｙ ９（1987）ｐ．345−375 Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ 03 （1986）ｐ．214−220 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ／Ｇ ｅｎｅｓｅｑ

Claims (7)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】トランスジェニック塊茎形成双子葉植物を
    製造する方法において、該トランスジェニック塊茎形成
    双子葉植物がその塊茎中に非相同オリジンのDNA配列を
    特異的に発現すること、及び該方法は次の工程： ａ）次の配列： ｉ）Kpn I/Hind IIIフラグメントの配列： の位置＋14〜−1513の間に位置するDra I/Dra I−フラ
    グメントからなる、ソラヌム・ツベロスムから得られ
    た、パタチン遺伝子のB33プロモータ配列、これは該B33
    プロモータ配列に融合した配列の塊茎特異的発現に導
    く、 ii）該B33プロモータ配列にセンス方向で融合する非相
    同オリジンのDNA配列、及び iii）転写及び翻訳終止のためのDNA配列、 を有する発現カセットを製造する工程； ｂ）塊茎形成双子葉植物の細胞中に該発現カセットを導
    入する工程、これにより形質転換塊茎形成双子葉植物細
    胞が製造される；及び ｃ）形質転換した塊茎形成双子葉植物細胞から完全なト
    ランスジェニック塊茎形成双子葉植物全体を再生する工
    程、その際トランスジェニック塊茎形成双子葉植物はそ
    の塊茎中で非相同オリジンのDNA配列を特異的に発現す
    る； からなることを特徴とするトランスジェニック塊茎形成
    双子葉植物の製造法。
  2. 【請求項２】B33プロモータ配列が のDNA配列からなる、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】トランスジェニックジャガイモ植物を製造
    する方法において、該トランスジェニックジャガイモ植
    物がその塊茎中に非相同オリジンのDNA配列を特異的に
    発現すること、及び該方法は次の工程： ａ）次の配列： ｉ）Kpn I/Hind IIIフラグメントの配列： の位置＋14〜−1513の間に位置するDra I/Dra I−フラ
    グメントである、ソラヌム・ツベロスムから得られた、
    パタチン遺伝子のB33プロモータ配列、これは該B33プロ
    モータ配列に融合した配列の塊茎特異的発現に導く、 ii）該B33プロモータ配列にセンス方向で融合する非相
    同オリジンのDNA配列、及び iii）転写及び翻訳終止のためのDNA配列、 を有する発現カセットを製造する工程； ｂ）ジャガイモ細胞中への該発現カセットを導入する工
    程、これにより形質転換したジャガイモ細胞が製造され
    る；及び ｃ）該形質転換したジャガイモ細胞から完全なトランス
    ジェニックジャガイモ植物全体を再生する工程、その際
    トランスジェニックジャガイモ植物はその塊茎中で非相
    同オリジンのDNA配列をその根、茎又は葉中に比較して
    少なくとも100倍高いレベルで発現する、 からなることを特徴とするトランスジェニックジャガイ
    モ植物の製造法。
  4. 【請求項４】次の配列： ｉ） のDNA配列からなるソラヌム・ツベロスムから得られた
    パタチン遺伝子のプロモータ配列、 ii）該プロモータ配列にセンス方向で融合する非相同オ
    リジンのDNA配列、及び iii）転写及び翻訳終止のためのDNA配列、 を有する発現カセットを含有する植物細胞。
  5. 【請求項５】DNA配列： からなる単離されたパタチンプロモータ配列。
  6. 【請求項６】次の要素： ｉ） のDNA配列からなるソラヌム・ツベロスムから得られた
    パタチン遺伝子のプロモータ配列、 ii）該プロモータ配列にセンス方向で融合する非相同オ
    リジンのDNA配列、及び iii）転写及び翻訳終止のためのDNA配列、 を有するキメラ遺伝子を有するトランスジェニックジャ
    ガイモ。
  7. 【請求項７】次の配列： ｉ）Kpn I/Hind IIIフラグメントの配列： の位置＋14〜−1513の間に位置するDra I/Dra I−フラ
    グメントからなる、ソラヌム・ツベロスムから得られ
    た、パタチン遺伝子のB33プロモータ配列、これは該B33
    プロモータ配列に融合した配列の塊茎特異的発現に導
    く、 ii）前記B33プロモータ配列にセンス方向で融合する非
    相同オリジンのDNA配列、及び iii）転写及び翻訳終止のためのDNA配列、 を有する発現カセット。
JP1329772A 1988-12-21 1989-12-21 トランスジェニック塊茎形成双子葉植物の製法、発現カセットを含有する植物細胞、パタチンプロモータ配列及び発現カセット Expired - Lifetime JP2993979B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3843627A DE3843627A1 (de) 1988-12-21 1988-12-21 Kartoffelknollenspezifische transkriptionale regulation
DE3843627.2 1988-12-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH02283276A JPH02283276A (ja) 1990-11-20
JP2993979B2 true JP2993979B2 (ja) 1999-12-27

Family

ID=6370095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP1329772A Expired - Lifetime JP2993979B2 (ja) 1988-12-21 1989-12-21 トランスジェニック塊茎形成双子葉植物の製法、発現カセットを含有する植物細胞、パタチンプロモータ配列及び発現カセット

Country Status (10)

Country Link
US (1) US5436393A (ja)
EP (1) EP0375092B1 (ja)
JP (1) JP2993979B2 (ja)
AT (1) ATE133448T1 (ja)
CA (1) CA2006454C (ja)
DE (2) DE3843627A1 (ja)
DK (1) DK175753B1 (ja)
ES (1) ES2086315T3 (ja)
GR (1) GR3019743T3 (ja)
IL (1) IL92838A (ja)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5723757A (en) * 1988-12-21 1998-03-03 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Plant promoters specific for sink organ expression of genes
US5550318A (en) * 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6803499B1 (en) 1989-08-09 2004-10-12 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6777589B1 (en) 1990-01-22 2004-08-17 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
HU220773B1 (hu) 1990-01-22 2002-05-28 Dekalb Genetics Corporation Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására
US6329574B1 (en) * 1990-01-22 2001-12-11 Dekalb Genetics Corporation High lysine fertile transgenic corn plants
US6025545A (en) * 1990-01-22 2000-02-15 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6946587B1 (en) * 1990-01-22 2005-09-20 Dekalb Genetics Corporation Method for preparing fertile transgenic corn plants
DE4013144A1 (de) * 1990-04-20 1991-10-24 Inst Genbiologische Forschung Neue plasmide, enthaltend dna-sequenzen, die veraenderungen der karbohydrat- und proteinkonzentration und der karbohydrat- und proteinzusammensetzung in kartoffelknollen hervorrufen, sowie zellen einer kartoffelpflanze, enthaltend diese plasmide
US6395966B1 (en) * 1990-08-09 2002-05-28 Dekalb Genetics Corp. Fertile transgenic maize plants containing a gene encoding the pat protein
US6326527B1 (en) * 1993-08-25 2001-12-04 Dekalb Genetics Corporation Method for altering the nutritional content of plant seed
US6118047A (en) 1993-08-25 2000-09-12 Dekalb Genetic Corporation Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction
US6281411B1 (en) 1993-08-25 2001-08-28 Dekalb Genetics Corporation Transgenic monocots plants with increased glycine-betaine content
GB9421292D0 (en) * 1994-10-21 1994-12-07 Danisco Promoter
GB9421286D0 (en) 1994-10-21 1994-12-07 Danisco Promoter
US5536653A (en) * 1994-11-04 1996-07-16 Monsanto Company Tomato fruit promoters
PT1435205E (pt) 1995-09-19 2010-02-04 Bayer Bioscience Gmbh Plantas que sintetizam um amido modificado, processo para a sua produção e amido modificado
DE19644478A1 (de) 1996-10-25 1998-04-30 Basf Ag Blattspezifische Expression von Genen in transgenen Pflanzen
US6483009B1 (en) 1997-02-21 2002-11-19 Danisco A/S Antisense intron inhibition of starch branching enzyme expression
US6777546B2 (en) * 1997-10-07 2004-08-17 Loma Linda University Methods and substances for preventing and treating autoimmune disease
US6518486B1 (en) * 1998-06-12 2003-02-11 University Of Guelph Enhanced storage organ production in plants
WO2000023462A1 (en) * 1998-10-21 2000-04-27 St. Louis University Method for the production of purified invasin protein and use thereof
GB9914210D0 (en) 1999-06-17 1999-08-18 Danisco Promoter
US20030159178A1 (en) * 2000-02-10 2003-08-21 Peter Ulvskov Method for remodelling cell wall polysaccharide structures in plants
JP4771656B2 (ja) 2001-05-30 2011-09-14 カリックス・バイオ−ベンチャーズ・インコーポレイテッド 植物人工染色体、その使用及び植物人工染色体の製造方法
EP1840211A1 (en) 2001-10-31 2007-10-03 Danisco A/S Pyranosone dehydratase from phanerochaete chrysosporium
US20030177517A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Su-May Yu Sweet potato sporamin gene promoter
US7411115B2 (en) 2002-03-13 2008-08-12 Academia Sinica Sweet potato sporamin gene promoter
WO2004002216A2 (en) 2002-06-28 2004-01-08 University Of Guelph Harvest-inducible genes from alfalfa (medicago sativa) and methods of use thereof
US7329798B2 (en) * 2002-06-28 2008-02-12 University Of Guelph Harvest-inducible regulatory elements and methods of using same
DE50311379D1 (de) 2002-09-10 2009-05-14 Sungene Gmbh & Co Kgaa Expressionskassetten zur expression von nukleinsäuren in kohlenhydrat-speichernden sink-geweben von pflanzen
EP1604027A2 (de) 2003-01-20 2005-12-14 Sungene GmbH & Co. KGaA Expressionskassette mit promotoren der stärkesynthase 3 zur expression von nukleinsäuren in stärkehaltigen geweben von pflanzen
AR047598A1 (es) * 2004-02-10 2006-01-25 Monsanto Technology Llc Semilla de maiz transgenica con mayor contenido de aminoacidos
KR100604186B1 (ko) 2004-08-25 2006-07-25 고려대학교 산학협력단 고구마 유래 식물 저장뿌리용 고효율 발현 프로모터염기서열, 이를 포함하는 식물체 고효율 일시적 발현벡터및 상기 발현벡터를 이용하여 식물의 저장뿌리에일시적으로 발현시키는 방법
JP2008099634A (ja) * 2006-10-20 2008-05-01 Institute Of Physical & Chemical Research 環境ストレス応答性プロモーター及びこれを用いた組織特異的遺伝子発現方法
AR065544A1 (es) 2007-01-30 2009-06-17 Verenium Corp Enzimas para el tratamiento de lignocelulosicos acidos nucleicos que las codifican y metodos para prepararlas y usarlas
CN116904483B (zh) * 2023-08-25 2024-05-03 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心 调控马铃薯块茎的多肽基因StUCG5P及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ ０３（１９８６）ｐ．２１４−２２０
Ｐｌａｎｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ９（１９８７）ｐ．３４５−３７５

Also Published As

Publication number Publication date
US5436393A (en) 1995-07-25
JPH02283276A (ja) 1990-11-20
EP0375092B1 (de) 1996-01-24
EP0375092A1 (de) 1990-06-27
DE3843627A1 (de) 1990-07-05
DK175753B1 (da) 2005-02-07
IL92838A (en) 1997-11-20
DK651589A (da) 1990-06-22
IL92838A0 (en) 1990-09-17
CA2006454C (en) 1999-07-27
DE58909581D1 (de) 1996-03-07
ES2086315T3 (es) 1996-07-01
ATE133448T1 (de) 1996-02-15
CA2006454A1 (en) 1990-06-21
DK651589D0 (da) 1989-12-20
GR3019743T3 (en) 1996-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2993979B2 (ja) トランスジェニック塊茎形成双子葉植物の製法、発現カセットを含有する植物細胞、パタチンプロモータ配列及び発現カセット
JP3670662B2 (ja) 植物プラスチドにおけるトランスジェニック構造体の制御された発現
AU773736B2 (en) Novel expression cassette for expressing genes in plant seed
US6359197B1 (en) Transgenic plants with altered senescence characteristics
JP3288395B2 (ja) プラスミド、トランスジェニック植物の製法、トランスジェニック植物、及び特異ｄｎａ配列を含有する植物細胞もしくは植物
AU671099B2 (en) Expression cassette and plasmids for a guard cell specific expression and their use for the introduction of transgenic plant cells and plants
CA2007091A1 (en) Wound-inducible and potato tuber specific transcriptional regulation
AU672017B2 (en) Dna sequences and plasmids for the preparation of plants with changed sucrose concentration
JP2011172578A (ja) エンハンサーによって増大した植物における遺伝子の発現
JP3431177B2 (ja) 習性及び収量において変更されたトランスジェニック植物を作製するプラスミド
WO1991013991A1 (en) Plant promoter
WO1993006711A1 (en) Tomato acid invertase gene
JP5186076B2 (ja) ｍｙｂ遺伝子プロモーターおよびサイトカイニン生合成遺伝子を使用する植物の老化の操作
US5723757A (en) Plant promoters specific for sink organ expression of genes
US5917127A (en) Plasmids useful for and methods of preparing transgenic plants with modifications of habit and yield
JP2001512685A (ja) 植物において収量を増加させるための方法
EP0754757B1 (en) A plant promoter and an application thereof
AU701718B2 (en) Processes for modifying plant flowering behaviour
KR101359305B1 (ko) 감자 유래의 괴경 조직 특이적 라케이즈 프로모터 및 이의 용도
KR100574563B1 (ko) 애기장대 유래 식물체 고효율 발현 프로모터 및 이를함유하는 식물체 고효율 발현 벡터
Holmes-Davis et al. The matrix attachment regions (MARs) associated with the Heat Shock Cognate 80 gene (HSC80) of tomato represent specific regulatory elements
CA2379259A1 (en) Construction of barley with decreased gel protein content
JPH08256777A (ja) 翻訳エンハンサー配列およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071022

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081022

Year of fee payment: 9

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081022

Year of fee payment: 9

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081022

Year of fee payment: 9

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091022

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091022

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101022

Year of fee payment: 11

EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101022

Year of fee payment: 11