JP2963178B2 - 水溶性フェオホーバイドａの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は癌等に対する光化学療法において感光性物質
として用いられるフェオホーバイドａ（pheophorbide
a）の製造方法に関する。

〔従来の技術〕

癌等の悪性腫瘍の診断・治療法の一種として光化学療
法（photoradiation therapy）がある。この光化学療法
は、腫瘍細胞に特異的に取り込まれる感光性物質（有機
色素等）を、低出力レーザー光の照射により励起し、殺
細胞効果を引き起こすことを利用したものであり、理論
的には腫瘍細胞のみを障害させることができる点で極め
て合理的な方法である。

かかる光化学治療に用いられる感光性物質としては、
最低限次に列挙するような基準をクリアする必要があ
る。すなわち、腫瘍への親和性、光感受性（光化学
反応性）、安全性（毒性、水溶性、代謝性）、腫瘍
での残留時間、製造の再現性、臨床の使用実績（無
事故、治療効果等）等の諸基準である。

地方、上記感光性物質としては、従来、フェオホーバ
イドａが知られている。フェオホーバイドａは上記基準
からみて極めて有効なものであるが、上記の安全性に
ついて問題がある。すなわち、フェオホーバイドａは水
溶性がないため生体内で析出してしまい、それによるシ
ョック事故が十分に考えられるからである。そのため従
来、実際に人体に使用することは困難であった。

従ってフェオホーバイドａの水溶化ということが重要
課題となる。従来、フェオホーバイドａの水溶化に用い
られている方法としては、 （ａ）フェオホーバイドａを有機溶媒ジメチルスルホキ
シド（DMSO）に溶解し、それを燐酸緩衝液にて希釈し使
用する方法、 （ｂ）フェオホーバイドａの粉末を少量のアルカリ水溶
液とともにペースト状に練り、燐酸緩衝液にて希釈し使
用する方法、 （ｃ）フェオホーバイドａをアルブミンに溶解し使用す
る方法、 （ｄ）フェオホーバイドａをリピオドール（油剤）に溶
解し使用する方法、 等が提案されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、上記各方法にはそれぞれ次のように大
きな欠点がある。

上記（ａ）法に関しては、特に有機溶媒DMSOの毒性が
大きく、安全性に大きな問題が残されている。

上記（ｂ）法は、希釈後に沈澱を生じやすく安全性に
大きな問題点がある。

上記（ｃ）法では、アルブミンがアナフェラキシーシ
ョックを起こしやすくやはり安全性の面において問題点
を残す。

上記（ｄ）法では、リピオドールが油性のため静脈内
投与は不可能であり、使用範囲が非常に狭く限定されて
しまう。

そこで本発明の主目的は、水溶性であり、かつ人体に
対して安全なフェオホーバイドａの製造方法を提供する
ことにある。

〔課題を解決するための手段〕

上記課題は、水酸化ナトリウムを、ｎ−プロピルアル
コールまたはイソプロピルアルコールあるいはそれらの
混合液中に溶解して溶液を調製し、この溶液と相溶性の
ある溶媒中にフェオホーバイドａを溶解して得られるフ
ェオホーバイドａ溶液と前記水酸化ナトリウム溶液を溶
解させることで解決できる。

〔作 用〕

フェオホーバイドａを水溶化するには、例えばフェオ
ホーバイドａを水酸化ナトリウムと反応させ塩を形成す
ればよい。その製造に際しては、まず水酸化ナトリウム
を特定溶媒Ａ′中に溶解させて溶液Ａとするとともに、
フェオホーバイドａを別の溶媒Ｂ′に溶解させて溶液Ｂ
を調製した後、両溶液Ａ、Ｂを混合させる方法が採られ
る。従ってこの場合、上記各溶媒Ａ′、Ｂ′が相互に溶
解することが必要であるとともに、それら溶媒とフェオ
ホーバイドａが反応して分子変性を生じたりしないこと
が重要である。さらに、得られるフェオホーバイドａナ
トリウムの分離が容易であるためには、上記混合溶媒中
でフェオホーバイドａの塩が不溶性で沈澱を生じるもの
でなければならない。

本発明では、水酸化ナトリウムの溶媒としてｎ−又は
イソプロピルアルコールを使用しているから、フェオホ
ーバイドａの溶媒としては従来公知のエーテル等を使用
することによって上記各条件を満足でき、しかもフェオ
ホーバイドａの変性等を生じることがなく、容易に水溶
性フェオホーバイドａのナトリウム化物を沈澱分離させ
ることができる。

〔発明の具体的構成〕

以下本発明をさらに具体的に説明する。

前述のように、フェオホーバイドａ｛C₃₂H₃₂N₄O（COO
H）COOCH₃ ⁺｝をナトリウム塩化する場合、フェオホーバ
イドａを溶解する溶媒と水酸化ナトリウムを溶解する溶
媒が混合しあうことが必要不可欠である。また生成した
フェオホーバイドａナトリウムがその溶媒系では不溶と
なり沈澱を生成し分離を可能とする溶媒でなくてはなら
ない。それら条件を満足するフェオホーバイドａ溶解溶
媒として、エーテル、アセトン、クロロホルム等があ
る。また水酸化ナトリウム溶解溶媒には従来メチルアル
コールやエチルアルコールが一般的に使用されていた。

しかしフェオホーバイドａはアルカリ存在下メチルア
ルコールやエチルアルコールに接触することにより激し
く分子変性を起こし酸化を促進することが知られてい
る。従ってフェオホーバイドａをナトリウム塩とする場
合酸化反応を促進しない水酸化ナトリウム溶解溶媒の選
択が最も重要なこととなる。

そこで、本発明では水酸化ナトリウムの溶媒としてｎ
−プロピルアルコール、イソプロピルアルコールを用い
るものであり、これにより、フェオホーバイドａの分子
変性を全く起こさずにナトリウム塩を生成することがで
きる。さらに本発明によりフェオホーバイドａの水溶化
に際し、溶解補助剤を用いることなく、しかも特殊な溶
解技法を用いることなく極めて容易にフェオホーバイド
ａの水溶液を調製できる。

〔実施例〕

次に実施例を説明する。

（１）フェオホーバイドａナトリウムの合成法 既知の製法（クロロフィルａをエーテル中、濃塩酸に
より脱マグネシウム、および加水分解による脱フィトー
ル化する方法）により得られたフェオホーバイドa500mg
を300mlのエーテルに溶解する。一方、水酸化ナトリウ
ム100mgを30mlのｎ−プロピルアルコール、又はイソプ
ロピルアルコールに溶解する。次いでフェオホーバイド
ａのエーテル溶液中に水酸化ナトリウムのｎ−又はイソ
プロピルアルコール溶液を攪拌しながら滴下する。この
際、反応の進行状態は、濾紙上に溶液を一滴落とすこと
により沈澱の生成を観察するという方法で確認し、その
終点は沈澱の周囲に広がる溶液の色が無色となった時と
する。

次に上記沈澱（フェオホーバイドａナトリウム）を含
有する溶液を遠心管に入れ遠心分離（2500rpm、２分
間）することにより沈澱部分を分離することができる。
上澄みを捨て、遠心管底部に残る固形分を真空乾燥機に
て乾燥することにより粉末状フェオホーバイドａナトリ
ウムを得ることができる。

（２）フェオホーバイドａナトリウムの水溶液の調製 フェオホーバイドａナトリウム約10mgに2mlの蒸留水
を入れ軽く振るとフェオホーバイドａナトリウムは透明
に溶解する。その溶液のpHは約9.2〜9.5を示すため、燐
酸緩衝液（pH7.4あるいは7.8）を用い適宜適当濃度に希
釈し使用される。

（３）フェオホーバイドａナトリウムのHPLC（高機能性
液体クロマトグラフィー）分析及び紫外−可視吸収スペ
クトルによる同定 フェオホーバイドａナトリウムの同定は次のようにし
て行った。すなわち、フェオホーバイドａナトリウムを
希塩酸により脱ナトリウム化し、そのエーテル溶液を得
る。次いでこの溶液と既知のフェオホーバイドａとの両
サンプルのHPLC分析及び吸収スペクトルの測定を行い、
比較検討する。

そこでまずHPLC分析については、第１図に示すよう
に、フェオホーバイドａのチャート（同図（ａ））と、
上記エーテル溶液のチャート（同図（ｂ））を得、その
保持時間を比較したとろ、上記エーテル溶液の保持時間
が既知のフェオホーバイドａの保持時間に一致すること
が判り、これをもってフェオホーバイドａの存在を確認
することができた。第１図中、１は10−OHフェオホーバ
イドａ、２はフェオホーバイドａ、３はフェオホーバイ
ドａ、４はパイロフェオホーバイドａのピーク位置をそ
れぞれ示すものである。

ただし、上記HPLC分析の分離条件は次の通りであっ
た。

カラム …ODS SSCpack 4×250mm 溶離液 …アセトニトリル:0.1％リン酸溶液テトラヒ
ドロフラン＝88:10:2 流量 …1.0ml/分 波長 …λ＝410nm チャート…0.5cm/分 温度 …12℃ 他方、第２図のように、そのエーテル溶液の上記吸収
スペクトルの吸収波長についても、上記エーテル溶液の
波長（同図（ａ））が既知のフェオホーバイドａ溶液の
吸収波長（同図（ｂ））にほぼ完全に一致し、これによ
ってもフェオホーバイドａの存在を確認できた。なお、
同図（ｃ）はフェオホーバイドａナトリウムの吸収スペ
クトルを比較参照のために併記したものである。

〔発明の効果〕

以上の通り、本発明によれば、水溶性であり、人体に
対して安全なフェオホーバイドａの製造方法を提供でき
る。

【図面の簡単な説明】

第１図はHPLC分析チャート、第２図は紫外−可視吸収ス
ペクトルを示す図である。

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】水酸化ナトリウムを、ｎ−プロピルアルコ
   ールまたはイソプロピルアルコールあるいはそれらの混
   合液中に溶解して溶液を調製し、この溶液と相溶性のあ
   る溶媒中にフェオホーバイドａを溶解して得られるフェ
   オホーバイドａ溶液と前記水酸化ナトリウム溶液を溶解
   させることを特徴とする水溶性フェオホーバイドａの製
   造方法。