JP2868553B2 - ジアホラーゼの活性測定法 - Google Patents
ジアホラーゼの活性測定法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は，ニトロブルーテトラゾリウム（以後,NBTと
略称する。）によるジアホラーゼの活性測定法に関する
ものである。
略称する。）によるジアホラーゼの活性測定法に関する
ものである。
（従来の技術） ジアホラーゼは，ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド（以後,NADHと略称する。）又はニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドリン酸（以後,NADPHと略称す
る。）（以後，いずれか一方を意味するときはNAD
（Ｐ）Ｈという。）による色素の還元反応を触媒する酵
素である。
チド（以後,NADHと略称する。）又はニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドリン酸（以後,NADPHと略称す
る。）（以後，いずれか一方を意味するときはNAD
（Ｐ）Ｈという。）による色素の還元反応を触媒する酵
素である。
ジアホラーゼの活性測定法には，色素の還元に伴う吸
光度の変化を分光光度計を用いて測定する比色法が一般
に用いられている。ジアホラーゼにより還元される色素
としては，ジクロロフエノールインドフエノール（以
後,DCIPと略称する。）やNBTが知られているが，感度が
優れている点でNBTが用いられている（特開昭60−21490
0号公報，特開昭60−58097号公報）。
光度の変化を分光光度計を用いて測定する比色法が一般
に用いられている。ジアホラーゼにより還元される色素
としては，ジクロロフエノールインドフエノール（以
後,DCIPと略称する。）やNBTが知られているが，感度が
優れている点でNBTが用いられている（特開昭60−21490
0号公報，特開昭60−58097号公報）。
NBTを用いたジアホラーゼの活性測定法は,NBTの還元
により生成するジホルマザンの550nmにおける吸光度の
増加を測定するものである。したがって，測定開始時の
吸光度はすべての測定溶液でゼロであるのが望ましい
が,NBTはNAD（Ｐ）Ｈとの共存下において非酵素的にジ
ホルマザンに変換され,550nmにおける吸光度が徐々に上
昇することが知られている。この非酵素的な吸光度の上
昇がブランクと呼ばれるものであり，特に微量のジアホ
ラーゼの活性測定を行う場合には，正確さを欠く原因と
なっていた。
により生成するジホルマザンの550nmにおける吸光度の
増加を測定するものである。したがって，測定開始時の
吸光度はすべての測定溶液でゼロであるのが望ましい
が,NBTはNAD（Ｐ）Ｈとの共存下において非酵素的にジ
ホルマザンに変換され,550nmにおける吸光度が徐々に上
昇することが知られている。この非酵素的な吸光度の上
昇がブランクと呼ばれるものであり，特に微量のジアホ
ラーゼの活性測定を行う場合には，正確さを欠く原因と
なっていた。
そこで，本発明者らは，測定溶液中にエチレンジアミ
ン四酢酸（以後,EDTAと略称する。）を含有させると，
上記したようなブランクが抑制されることを見出し，す
でに特許出願した。この測定方法の要旨は，ジアホラー
ゼを含有する検体と,NBT,EDTA,NAD（Ｐ）H,界面活性剤
（通常はトリトンＸ−100が用いられている。）及び緩
衝液等の成分を混合して測定溶液とし,NBTの還元により
生成するジホルマザンの吸光度の増加量を測定するもの
である。
ン四酢酸（以後,EDTAと略称する。）を含有させると，
上記したようなブランクが抑制されることを見出し，す
でに特許出願した。この測定方法の要旨は，ジアホラー
ゼを含有する検体と,NBT,EDTA,NAD（Ｐ）H,界面活性剤
（通常はトリトンＸ−100が用いられている。）及び緩
衝液等の成分を混合して測定溶液とし,NBTの還元により
生成するジホルマザンの吸光度の増加量を測定するもの
である。
（発明が解決しようとする課題） 本発明者らが提案した，測定溶液中にEDTAを含有させ
るという方法は，ブランクが抑制され正確な測定値が得
られると言う効果が認められるものの，得られる測定値
は十分には満足できるものではなく，また，この方法
を，酵素免疫測定法等において利用されるようなポリス
チレンやナイロンなどのプラスチツク製固相とともに使
用しようとする場合には,NBTの還元により生成されるジ
ホルマザンが固相に強く吸着され，液相におけるジホル
マザンの吸光度に反映されず，ジアホラーゼの測定を正
確に行うにはいまだ十分でなかった。
るという方法は，ブランクが抑制され正確な測定値が得
られると言う効果が認められるものの，得られる測定値
は十分には満足できるものではなく，また，この方法
を，酵素免疫測定法等において利用されるようなポリス
チレンやナイロンなどのプラスチツク製固相とともに使
用しようとする場合には,NBTの還元により生成されるジ
ホルマザンが固相に強く吸着され，液相におけるジホル
マザンの吸光度に反映されず，ジアホラーゼの測定を正
確に行うにはいまだ十分でなかった。
本発明は，ジアホラーゼ活性を上昇させ，正確なジア
ホラーゼの活性値を得ることができ，さらにプラスチツ
ク製固相におけるジホルマザンの吸着を解消することが
可能となるジアホラーゼの活性測定法を提供することを
目的とするものである。
ホラーゼの活性値を得ることができ，さらにプラスチツ
ク製固相におけるジホルマザンの吸着を解消することが
可能となるジアホラーゼの活性測定法を提供することを
目的とするものである。
（課題を解決するための手段） 本発明者らは，上記の課題を解決するために鋭意検討
の結果，測定溶液中に界面活性剤として従来用いられて
いるトリトンＸ−1000に代えて，炭素数14以上の直鎖脂
肪族飽和炭化水素の末端にトリメチルアンモニウム基を
有する特定の陽イオン界面活性剤とEDTAを含有させるこ
とによりブランク値が減少し，ジアホラーゼ活性は上昇
し，さらにプラスチツク製固相へのジホルマザンの吸着
が激減することを見出し本発明に到達した。
の結果，測定溶液中に界面活性剤として従来用いられて
いるトリトンＸ−1000に代えて，炭素数14以上の直鎖脂
肪族飽和炭化水素の末端にトリメチルアンモニウム基を
有する特定の陽イオン界面活性剤とEDTAを含有させるこ
とによりブランク値が減少し，ジアホラーゼ活性は上昇
し，さらにプラスチツク製固相へのジホルマザンの吸着
が激減することを見出し本発明に到達した。
すなわち，本発明は,NBTを用いてジアホラーゼの活性
を測定するに際し，測定溶液中に炭素数14以上の直鎖脂
肪族飽和炭化水素の末端にトリメチルアンモニウム基を
有する特定の陽イオン界面活性剤（以後,TACDと略称す
る。）及びEDTAを含有させることを特徴とするジアホラ
ーゼの活性測定法を要旨とするものである。
を測定するに際し，測定溶液中に炭素数14以上の直鎖脂
肪族飽和炭化水素の末端にトリメチルアンモニウム基を
有する特定の陽イオン界面活性剤（以後,TACDと略称す
る。）及びEDTAを含有させることを特徴とするジアホラ
ーゼの活性測定法を要旨とするものである。
以下，本発明を詳細に説明する。
本発明の活性測定法においては，ジアホラーゼを含有
する検体と,NBT,EDTA,NAD（Ｐ）H,TACD,緩衝液等の成分
を混合して測定溶液とし,NBTの還元により生成するジホ
ルマザンの吸光度の増加を測定すればよい。
する検体と,NBT,EDTA,NAD（Ｐ）H,TACD,緩衝液等の成分
を混合して測定溶液とし,NBTの還元により生成するジホ
ルマザンの吸光度の増加を測定すればよい。
本発明で使用されるTACDとしては，ハロゲン化ミリス
チルトリメチルアンモニウム，ハロゲン化セチルトリメ
チルアンモニウム，ハロゲン化ステアリルトリメチルア
ンモニウムなどがあげられる。これらの中で，塩化セチ
ルトリメチルアンモニウム，臭化セチルトリメチルアン
モニウム（以後,CTABと略称する。），塩化ステアリン
トリメチルアンモニウム（以後,STACと略称する。），
臭化ステアリルトリメチルアンモニウムが好ましい。
チルトリメチルアンモニウム，ハロゲン化セチルトリメ
チルアンモニウム，ハロゲン化ステアリルトリメチルア
ンモニウムなどがあげられる。これらの中で，塩化セチ
ルトリメチルアンモニウム，臭化セチルトリメチルアン
モニウム（以後,CTABと略称する。），塩化ステアリン
トリメチルアンモニウム（以後,STACと略称する。），
臭化ステアリルトリメチルアンモニウムが好ましい。
本発明で使用されるTACDの測定溶液中の濃度として
は,0.01W/V％以上が好ましく，より好ましくは,0.1〜1W
/V％である。
は,0.01W/V％以上が好ましく，より好ましくは,0.1〜1W
/V％である。
本発明で使用されるEDTAとしては，無塩のもの，カリ
ウム塩，ナトリウム塩等任意のものを用いることができ
る。このときの測定溶液中のEDTA濃度としては,1〜50mM
であることが好ましく，より好ましくは３〜10mMであ
る。
ウム塩，ナトリウム塩等任意のものを用いることができ
る。このときの測定溶液中のEDTA濃度としては,1〜50mM
であることが好ましく，より好ましくは３〜10mMであ
る。
本発明で使用されるTACD,EDTA以外の成分としては，
従来の活性測定法において用いられるものが以下に記す
ように従来通りに用いられる。
従来の活性測定法において用いられるものが以下に記す
ように従来通りに用いられる。
本発明で使用される緩衝液としては，リン酸緩衝液，
トリエタノールアミン緩衝液等，中性付近に緩衝作用の
あるものを用いることができ，これらのpHとしては,5〜
10が好ましく，より好ましくは６〜８である。また，こ
のときの測定溶液中の緩衝液の濃度としては,10〜500mM
が好ましく，より好ましくは50〜100mMである。
トリエタノールアミン緩衝液等，中性付近に緩衝作用の
あるものを用いることができ，これらのpHとしては,5〜
10が好ましく，より好ましくは６〜８である。また，こ
のときの測定溶液中の緩衝液の濃度としては,10〜500mM
が好ましく，より好ましくは50〜100mMである。
本発明で用いられるNBTの測定溶液中の濃度としては,
0.1〜10mMが好ましく，より好ましくは0.2〜1mMであ
る。
0.1〜10mMが好ましく，より好ましくは0.2〜1mMであ
る。
本発明で使用されるNAD（Ｐ）Ｈとしては,NADH又はNA
DPHのいずれでもよいが,NADHが望ましい。このときの測
定溶液中のNAD（Ｐ）Ｈの濃度としては,0.1〜5mMが好ま
しく，より好ましくは0.5〜2mMである。
DPHのいずれでもよいが,NADHが望ましい。このときの測
定溶液中のNAD（Ｐ）Ｈの濃度としては,0.1〜5mMが好ま
しく，より好ましくは0.5〜2mMである。
本発明の活性測定法においては，吸光度の増加量の測
定開始時点において，測定溶液中にジアホラーゼと上記
したような成分が存在すればよく，それらの混合順序は
特に限定されるものではない。
定開始時点において，測定溶液中にジアホラーゼと上記
したような成分が存在すればよく，それらの混合順序は
特に限定されるものではない。
本発明の活性測定法は，具体的には例えば以下のよう
にすることができる。
にすることができる。
すなわち，ジアホラーゼを含有する検体としては，測
定溶液中のジアホラーゼの濃度が0.002〜0.2単位/ml含
まれるように調製するのが好ましい。そのためには，例
えば検体中のジアホラーゼの濃度が２単位/ml以下にな
るように，必要であれば中性付近に緩衝作用を持つ緩衝
液で希釈し，この検体を100μ以下で用いればよい。
定溶液中のジアホラーゼの濃度が0.002〜0.2単位/ml含
まれるように調製するのが好ましい。そのためには，例
えば検体中のジアホラーゼの濃度が２単位/ml以下にな
るように，必要であれば中性付近に緩衝作用を持つ緩衝
液で希釈し，この検体を100μ以下で用いればよい。
このようなジアホラーゼを含有する検体に，上記した
濃度のEDTA,NAD（Ｐ）H,TACDを含んだ緩衝液を800〜900
μ程度加え，全量を900μにする。
濃度のEDTA,NAD（Ｐ）H,TACDを含んだ緩衝液を800〜900
μ程度加え，全量を900μにする。
次いでこの溶液を20〜40℃になるように予備加温す
る。このときの予備加温時間としては，上記溶液が設定
温度に達する時間でよく，通常３〜５分程度が好まし
い。
る。このときの予備加温時間としては，上記溶液が設定
温度に達する時間でよく，通常３〜５分程度が好まし
い。
次いで,1〜100mM,好ましくは２〜10mMのNBT溶液を，
容量として上記溶液に100μ加える。
容量として上記溶液に100μ加える。
この後に，比色定量を行えばよい。
本発明で用いられる比色定量法としては，吸光度を経
時変化で測定するレートアツセイ法と，酵素反応を一定
時間行った後，反応を停止させ，吸光度を測定し，吸光
度の変化量により酵素活性を算出するエンドポイントア
ツセイ法があげられ，いずれの方法でも，市販の分光光
度計を用いて波長520〜550nmにおける吸光度を測定する
ことができる。エンドポイント法における反応の停止に
は，例えば塩酸を用い，測定液のpHを好ましくは３以下
にすればよい。
時変化で測定するレートアツセイ法と，酵素反応を一定
時間行った後，反応を停止させ，吸光度を測定し，吸光
度の変化量により酵素活性を算出するエンドポイントア
ツセイ法があげられ，いずれの方法でも，市販の分光光
度計を用いて波長520〜550nmにおける吸光度を測定する
ことができる。エンドポイント法における反応の停止に
は，例えば塩酸を用い，測定液のpHを好ましくは３以下
にすればよい。
また，ブランクの測定は，上述の方法からジアホラー
ゼを除いたもので，同様の操作で行えばよい。
ゼを除いたもので，同様の操作で行えばよい。
本発明の活性測定法により測定できるジアホラーゼと
しては，特に限定されるものではなく，例えば細菌由来
のものあるいは動物組織由来のものなどがあげられる。
しては，特に限定されるものではなく，例えば細菌由来
のものあるいは動物組織由来のものなどがあげられる。
なお，ジアホラーゼの活性１単位とは，界面活性剤と
してトリトンＸ−100を用い,pH7.0,30℃で１分間あたり
NBT1μmolを還元する酵素量として定義されるものであ
る。
してトリトンＸ−100を用い,pH7.0,30℃で１分間あたり
NBT1μmolを還元する酵素量として定義されるものであ
る。
（実施例） 次に，本発明を実施例によって具体的に説明する。な
お，実施例中％はすべて重量％を表す。
お，実施例中％はすべて重量％を表す。
実施例１〜２及び比較例１ 先ず，下記のような３種の組成の溶液を調製した。
500mMトリエタノールアミン−HCl（pH7.0） 60μ 20mM NADH 60μ １％トリトンＸ−100（比較例１）,50mM EDTAを含む
５％CTAB（実施例１）又は50mM EDTAを含む５％STAC
（実施例２） 60μ H2O 350μ 0,10,20,30,40ngのジアホラーゼ（バチルスステアロ
サーモフイラス由来,120単位/mg），いずれかを含有す
る液 10μ 次に，これを30℃で３分間インキユベート後,5mMNBT
を60μ添加し,30℃で10分間反応させた後,1NHCl150μ
を添加し，反応を停止させて550nmにおける吸光度を
測定した。その結果を表１及び第１図に示した。第１図
は，横軸にジアホラーゼ量を，縦軸に550nmにおける吸
光度を示しており，図中の●印及び▲印は,CTABとEDTA
添加の場合及びSTACとEDTA添加の場合のブランクを含ん
だジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○印は，界面
活性剤として，トリトンＸ−100を用いた場合のブラン
クを含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を示す。
５％CTAB（実施例１）又は50mM EDTAを含む５％STAC
（実施例２） 60μ H2O 350μ 0,10,20,30,40ngのジアホラーゼ（バチルスステアロ
サーモフイラス由来,120単位/mg），いずれかを含有す
る液 10μ 次に，これを30℃で３分間インキユベート後,5mMNBT
を60μ添加し,30℃で10分間反応させた後,1NHCl150μ
を添加し，反応を停止させて550nmにおける吸光度を
測定した。その結果を表１及び第１図に示した。第１図
は，横軸にジアホラーゼ量を，縦軸に550nmにおける吸
光度を示しており，図中の●印及び▲印は,CTABとEDTA
添加の場合及びSTACとEDTA添加の場合のブランクを含ん
だジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○印は，界面
活性剤として，トリトンＸ−100を用いた場合のブラン
クを含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を示す。
表１及び第１図から明らかなごとく,CTABとEDTA添加
のもの（実施例１）及びSTACとEDTA添加のもの（実施例
２）は，トリトンＸ−100を用いたもの（比較例１）と
比べて，酵素活性（表中の各々の値から，表中のジアホ
ラーゼ0ngの値を差し引いた値）は，ジアホラーゼ10ng
の場合で1.7倍,40ngでは2.2倍上昇した。これによりジ
アホラーゼ測定感度が上昇した。
のもの（実施例１）及びSTACとEDTA添加のもの（実施例
２）は，トリトンＸ−100を用いたもの（比較例１）と
比べて，酵素活性（表中の各々の値から，表中のジアホ
ラーゼ0ngの値を差し引いた値）は，ジアホラーゼ10ng
の場合で1.7倍,40ngでは2.2倍上昇した。これによりジ
アホラーゼ測定感度が上昇した。
参考例１ ポリスチレンビーズ（6.5mmΦ，イチコ（株）より購
入）を，抗癌胎児性抗原抗体（以後，抗CEA抗体と略称
する。メディックス社製）0.1mg/ml濃度の溶液に１晩浸
した後,1％ウシ血清アルブミンでブロッキングして，抗
CEA抗体固定化ポリスチレンビーズを調製した。
入）を，抗癌胎児性抗原抗体（以後，抗CEA抗体と略称
する。メディックス社製）0.1mg/ml濃度の溶液に１晩浸
した後,1％ウシ血清アルブミンでブロッキングして，抗
CEA抗体固定化ポリスチレンビーズを調製した。
ジアホラーゼ（バチルス・ステアロサーモフィルス由
来，ユニチカ（株）製）1.0mgにスクシニミジル４−
（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボ
キシレート（ジーベンケミカル（株）製）30μｇをpH7
で反応させて，ジアホラーゼにマレイミド基を導入し
た。次いで，これに抗CEA抗体Fab′（抗体をペプシン消
化しその後還元して調製したもの）1.5mgをpH6で混合
し，マレイミド基とSH基とを架橋してジアホラーゼ標識
抗CEA抗体を調製した。
来，ユニチカ（株）製）1.0mgにスクシニミジル４−
（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボ
キシレート（ジーベンケミカル（株）製）30μｇをpH7
で反応させて，ジアホラーゼにマレイミド基を導入し
た。次いで，これに抗CEA抗体Fab′（抗体をペプシン消
化しその後還元して調製したもの）1.5mgをpH6で混合
し，マレイミド基とSH基とを架橋してジアホラーゼ標識
抗CEA抗体を調製した。
実施例３及び比較例２ 参考例１で作成した抗CEA抗体固定化ポリスチレンビ
ーズに,CEA0,5,10及び20ng/ml濃度のものを50μ及び
参考例１で作成したジアホラーゼ標識抗CEA抗体100ng/m
l濃度のものを200μ加え,37℃で18時間インキユベー
トし，抗原抗体反応を行った。液相を除き,0.2％ツウイ
ーン20,0.2％ウシ血清アルブミン,0.15M塩化ナトリウム
を含む20mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7.2）でビーズ
をよく洗浄した。
ーズに,CEA0,5,10及び20ng/ml濃度のものを50μ及び
参考例１で作成したジアホラーゼ標識抗CEA抗体100ng/m
l濃度のものを200μ加え,37℃で18時間インキユベー
トし，抗原抗体反応を行った。液相を除き,0.2％ツウイ
ーン20,0.2％ウシ血清アルブミン,0.15M塩化ナトリウム
を含む20mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7.2）でビーズ
をよく洗浄した。
次に，ビーズに下記に示す２種のジアホラーゼ測定溶
液 500mMトリエタノールアミン−HCl（pH7.0） 60μ 20mM NADH 60μ １％トリトンＸ−100（比較例１）又は50mM EDTAを含
む５％CTAB（実施例３） 60μ H2O 360μ を加え,30℃で３分間インキユベート後,5mMNBTを60μ
添加し,30℃で反応させ,10分後にHCl150μを添加し反
応を停止させ,550nmにおける吸光度を測定した。
液 500mMトリエタノールアミン−HCl（pH7.0） 60μ 20mM NADH 60μ １％トリトンＸ−100（比較例１）又は50mM EDTAを含
む５％CTAB（実施例３） 60μ H2O 360μ を加え,30℃で３分間インキユベート後,5mMNBTを60μ
添加し,30℃で反応させ,10分後にHCl150μを添加し反
応を停止させ,550nmにおける吸光度を測定した。
その結果を表２及び第２図に示した。第２図は，横軸
にCEA量を，縦軸に550nmにおける吸光度を示しており，
図中の●印は,CTABとEDTA添加の場合のブランクを含ん
だジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○印は，界面
活性剤としてトリトンＸ−100を用いた場合のブランク
を含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を示す。
にCEA量を，縦軸に550nmにおける吸光度を示しており，
図中の●印は,CTABとEDTA添加の場合のブランクを含ん
だジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○印は，界面
活性剤としてトリトンＸ−100を用いた場合のブランク
を含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を示す。
また，そのときのビーズへのジホマザンの着色は,EDT
Aを含むCTABを用いた本発明ではほとんどなかったが，
トリトンＸ−100を用いた従来技術ではビーズの着色度
はCEA濃度が濃くなるにつれて大きくなっていた。
Aを含むCTABを用いた本発明ではほとんどなかったが，
トリトンＸ−100を用いた従来技術ではビーズの着色度
はCEA濃度が濃くなるにつれて大きくなっていた。
表２及び第２図から明らかなように，本発明では固相
としてポリスチレンビーズを用いた場合においても正確
なジアホラーゼの測定が可能であった。
としてポリスチレンビーズを用いた場合においても正確
なジアホラーゼの測定が可能であった。
（発明の効果） 本発明によれば，ジアホラーゼ活性を上昇させるの
で，ジアホラーゼ測定感度を上昇させることができる。
また，本発明によれば，プラスチツク製の固相を用いた
ジアホラーゼ活性測定の場合において，ジホルマザンの
固相への吸着がなく正確なジアホラーゼ活性を測定する
ことができる。
で，ジアホラーゼ測定感度を上昇させることができる。
また，本発明によれば，プラスチツク製の固相を用いた
ジアホラーゼ活性測定の場合において，ジホルマザンの
固相への吸着がなく正確なジアホラーゼ活性を測定する
ことができる。
第１図は，ジアホラーゼ量と吸光度の関係を示す図であ
り，第２図は,CEA量と吸光度の関係を示す図である。 第１図中の●印及び▲印は,CTABとEDTA添加の場合及びS
TACとEDTA添加の場合のブランクを含んだジアホラーゼ
活性値（本発明）を示し，○印は，界面活性剤として，
トリトンＸ−100を用いた場合のブランクを含んだジア
ホラーゼ活性値（従来技術）を示す。 また，第２図中の●印は,CTABとEDTA添加の場合のブラ
ンクを含んだジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○
印は，界面活性剤としてトリトンＸ−100を用いた場合
のブランクを含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を
示す。
り，第２図は,CEA量と吸光度の関係を示す図である。 第１図中の●印及び▲印は,CTABとEDTA添加の場合及びS
TACとEDTA添加の場合のブランクを含んだジアホラーゼ
活性値（本発明）を示し，○印は，界面活性剤として，
トリトンＸ−100を用いた場合のブランクを含んだジア
ホラーゼ活性値（従来技術）を示す。 また，第２図中の●印は,CTABとEDTA添加の場合のブラ
ンクを含んだジアホラーゼ活性値（本発明）を示し，○
印は，界面活性剤としてトリトンＸ−100を用いた場合
のブランクを含んだジアホラーゼ活性値（従来技術）を
示す。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平３−151897（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 3/00
Claims (1)
- 【請求項１】ニトロブルーテトラゾリウムを用いてジア
ホラーゼの活性を測定するに際し，測定溶液中に炭素数
14以上の直鎖脂肪族飽和炭化水素の末端にトリメチルア
ンモニウム基を有する陽イオン界面活性剤とエチレンジ
アミン四酢酸を含有させることを特徴とするジアホラー
ゼの活性測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32011189A JP2868553B2 (ja) | 1989-12-07 | 1989-12-07 | ジアホラーゼの活性測定法 |
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| DE69020496T DE69020496T2 (de) | 1989-11-08 | 1990-11-08 | Vermessung von Diaphoraseaktivität und Reagenz dazu. |
| US07/610,679 US5166049A (en) | 1989-11-08 | 1990-11-08 | Measurement of diaphorase activity and reagent therefor |
Applications Claiming Priority (1)
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| JP32011189A JP2868553B2 (ja) | 1989-12-07 | 1989-12-07 | ジアホラーゼの活性測定法 |
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Family Applications (1)
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1989
- 1989-12-07 JP JP32011189A patent/JP2868553B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03180198A (ja) | 1991-08-06 |
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