JP2832760B2 - 固定化酵素の殺菌方法 - Google Patents
固定化酵素の殺菌方法Info
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- JP2832760B2 JP2832760B2 JP3075839A JP7583991A JP2832760B2 JP 2832760 B2 JP2832760 B2 JP 2832760B2 JP 3075839 A JP3075839 A JP 3075839A JP 7583991 A JP7583991 A JP 7583991A JP 2832760 B2 JP2832760 B2 JP 2832760B2
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- Japan
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- immobilized enzyme
- treatment
- enzyme
- ultrasonic treatment
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、超音波処理と紫外線照
射処理を併用する固定化酵素の殺菌方法に関する。本発
明の殺菌方法を用いることによって、酵素活性を低下さ
せずに固定化酵素に付着している微生物を殺菌すること
ができる。
射処理を併用する固定化酵素の殺菌方法に関する。本発
明の殺菌方法を用いることによって、酵素活性を低下さ
せずに固定化酵素に付着している微生物を殺菌すること
ができる。
【０００２】
【従来の技術】従来、物質の生産あるいは改良に広く固
定化酵素が利用されている。しかし、固定化酵素を長期
間連続して使用した場合、固定化酵素に付着した細菌な
どの微生物が増殖し、その結果、生成物の微生物汚染や
固定化酵素の活性低下などの問題が生じてくる。
定化酵素が利用されている。しかし、固定化酵素を長期
間連続して使用した場合、固定化酵素に付着した細菌な
どの微生物が増殖し、その結果、生成物の微生物汚染や
固定化酵素の活性低下などの問題が生じてくる。
【０００３】このような問題点を改善するため、固定化
酵素を洗浄する際に殺菌剤あるいは洗浄剤を用いること
が提案されている。例えば、固定化酵素をジオクチルジ
エチレントリアミンなどの置換ジエチレントリアミンの
希釈水溶液と接触させて殺菌する方法（特開昭５６−９
２７９１）、微生物汚染した固定化酵素を多価アルコー
ルに浸漬して殺菌する方法（特開昭５９−１７５８７
９）、固定化酵素をラウリルベンゼンスルホン酸塩とエ
タノールを含む混合液で処理して洗浄殺菌する方法（特
開昭５９−９８６８９）などである。しかし、これらの
固定化酵素を殺菌剤や洗浄剤で洗浄殺菌する方法は、そ
の洗浄殺菌に長時間を要したり、あるいは洗浄殺菌効果
が必ずしも十分でなく、また、固定化酵素の活性を低下
させたり、洗浄殺菌後、固定化酵素に残存付着している
洗浄剤や殺菌剤を完全に除去する操作を必要とするな
ど、種々の解決をしなければならない問題があった。
酵素を洗浄する際に殺菌剤あるいは洗浄剤を用いること
が提案されている。例えば、固定化酵素をジオクチルジ
エチレントリアミンなどの置換ジエチレントリアミンの
希釈水溶液と接触させて殺菌する方法（特開昭５６−９
２７９１）、微生物汚染した固定化酵素を多価アルコー
ルに浸漬して殺菌する方法（特開昭５９−１７５８７
９）、固定化酵素をラウリルベンゼンスルホン酸塩とエ
タノールを含む混合液で処理して洗浄殺菌する方法（特
開昭５９−９８６８９）などである。しかし、これらの
固定化酵素を殺菌剤や洗浄剤で洗浄殺菌する方法は、そ
の洗浄殺菌に長時間を要したり、あるいは洗浄殺菌効果
が必ずしも十分でなく、また、固定化酵素の活性を低下
させたり、洗浄殺菌後、固定化酵素に残存付着している
洗浄剤や殺菌剤を完全に除去する操作を必要とするな
ど、種々の解決をしなければならない問題があった。
【０００４】また、固定化酵素に紫外線を照射強度０．
５ｍＷ／ｃｍ2 以下で照射することによって、固定化酵
素の活性を低下させずに担体に付着している微生物を死
滅させる固定化酵素の殺菌方法（特開平１−２２８４５
４）が開示されている。この方法において望ましい殺菌
効果をえるためには、固定化酵素の全面に紫外線を安定
的かつ均等に照射する必要があり、特定の殺菌装置を必
要とした。本出願人は、このような点に注目し、洗浄殺
菌反応槽内で固定化酵素を回転及び／または昇降動作を
繰り返させ、その上から紫外線を照射する固定化酵素殺
菌装置（特願平２−４３８９３）を発明した。
５ｍＷ／ｃｍ2 以下で照射することによって、固定化酵
素の活性を低下させずに担体に付着している微生物を死
滅させる固定化酵素の殺菌方法（特開平１−２２８４５
４）が開示されている。この方法において望ましい殺菌
効果をえるためには、固定化酵素の全面に紫外線を安定
的かつ均等に照射する必要があり、特定の殺菌装置を必
要とした。本出願人は、このような点に注目し、洗浄殺
菌反応槽内で固定化酵素を回転及び／または昇降動作を
繰り返させ、その上から紫外線を照射する固定化酵素殺
菌装置（特願平２−４３８９３）を発明した。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、固定化
酵素の活性を低下させることなく、紫外線照射による殺
菌効果を高める方法について鋭意研究を重ねてきた。そ
して、長期間使用した固定化酵素に紫外線照射してその
殺菌効果を測定したところ、本来１０4 〜１０5 あるは
ずの殺菌力が実際には１０1 程度しかないことを見出し
た。そこで、この原因について検討し、（ａ）固定化酵
素に付着する微生物が重なり合っていること、（ｂ）固
定化酵素が基質やその加水分解物などで層状あるいは膜
状に覆われていること、などの原因によって紫外線が微
生物に到達しないものと想定した。
酵素の活性を低下させることなく、紫外線照射による殺
菌効果を高める方法について鋭意研究を重ねてきた。そ
して、長期間使用した固定化酵素に紫外線照射してその
殺菌効果を測定したところ、本来１０4 〜１０5 あるは
ずの殺菌力が実際には１０1 程度しかないことを見出し
た。そこで、この原因について検討し、（ａ）固定化酵
素に付着する微生物が重なり合っていること、（ｂ）固
定化酵素が基質やその加水分解物などで層状あるいは膜
状に覆われていること、などの原因によって紫外線が微
生物に到達しないものと想定した。
【０００６】次いで、これらの障害を取り除くために超
音波処理を併用することを検討した結果、（１）紫外線
照射処理単独では１０1 程度の殺菌力であり、紫外線照
射量を増しても殺菌力は増加しないこと、（２）超音波
処理単独では３０分間処理後に１０3 程度の殺菌力であ
り、処理時間を延長しても殺菌力は増加せず、洗浄効果
だけが得られること、（３）超音波処理を行った後、紫
外線照射処理を行うと殺菌力が急激に増大し、紫外線照
射量を４０００ｍＷｓ／ｃｍ2 とすると１０6 程度の殺
菌力であり、超音波処理と紫外線照射処理との相加効果
以上の効果が得られること、（４）超音波処理と紫外線
照射処理を併用した場合、超音波処理の時間が長いほう
が殺菌効果が増大すること等の知見を得た。
音波処理を併用することを検討した結果、（１）紫外線
照射処理単独では１０1 程度の殺菌力であり、紫外線照
射量を増しても殺菌力は増加しないこと、（２）超音波
処理単独では３０分間処理後に１０3 程度の殺菌力であ
り、処理時間を延長しても殺菌力は増加せず、洗浄効果
だけが得られること、（３）超音波処理を行った後、紫
外線照射処理を行うと殺菌力が急激に増大し、紫外線照
射量を４０００ｍＷｓ／ｃｍ2 とすると１０6 程度の殺
菌力であり、超音波処理と紫外線照射処理との相加効果
以上の効果が得られること、（４）超音波処理と紫外線
照射処理を併用した場合、超音波処理の時間が長いほう
が殺菌効果が増大すること等の知見を得た。
【０００７】これらの知見から、紫外線照射処理単独で
殺菌力に限界があるのは、（ａ）微生物が重なり合い、
（ｂ）基質などによって被覆されることに原因があり、
超音波処理と紫外線照射処理を併用するとそれらの妨害
要因が取り除かれ、紫外線が固定化酵素に到達して殺菌
効果を高めることができることを見出し、本発明を完成
するに至った。また、超音波処理を行う際に、界面活性
剤を含む液体中で処理を行うことにより、さらに殺菌効
果を高めることができることも見出した。したがって、
本発明は酵素活性を低下させずに固定化酵素に付着して
いる微生物を殺菌する方法を提供することを課題とす
る。
殺菌力に限界があるのは、（ａ）微生物が重なり合い、
（ｂ）基質などによって被覆されることに原因があり、
超音波処理と紫外線照射処理を併用するとそれらの妨害
要因が取り除かれ、紫外線が固定化酵素に到達して殺菌
効果を高めることができることを見出し、本発明を完成
するに至った。また、超音波処理を行う際に、界面活性
剤を含む液体中で処理を行うことにより、さらに殺菌効
果を高めることができることも見出した。したがって、
本発明は酵素活性を低下させずに固定化酵素に付着して
いる微生物を殺菌する方法を提供することを課題とす
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明の特徴は、固定化
酵素を殺菌する際に、超音波処理と紫外線照射処理を併
用することにある。さらには、超音波処理を行うに際し
て界面活性剤を含む液体中で処理を行うことにある。こ
のような処理を行うことにより、酵素活性を低下させず
に固定化酵素に付着している微生物を殺菌することがで
きる。
酵素を殺菌する際に、超音波処理と紫外線照射処理を併
用することにある。さらには、超音波処理を行うに際し
て界面活性剤を含む液体中で処理を行うことにある。こ
のような処理を行うことにより、酵素活性を低下させず
に固定化酵素に付着している微生物を殺菌することがで
きる。
【０００９】本発明の殺菌方法は、いかなる固定化酵素
にも適応できる。これらの固定化酵素としては、ラクタ
ーゼ、グルコースイソメラーゼ、プロテアーゼなどの酵
素をキトサン、キチン、樹脂など水不溶性の担体に化学
結合させるか、あるいはセルローストリアセテート、ポ
リアクリルアミドゲルなどに包括させて固定化したもの
を例示することができる。これらの固定化酵素は、カラ
ムなどに充填された状態であっても、撹拌槽に拡散され
た状態であっても、あるいはそれらの装置から取り出し
た状態であっても、超音波処理と紫外線照射処理を併用
することができる。
にも適応できる。これらの固定化酵素としては、ラクタ
ーゼ、グルコースイソメラーゼ、プロテアーゼなどの酵
素をキトサン、キチン、樹脂など水不溶性の担体に化学
結合させるか、あるいはセルローストリアセテート、ポ
リアクリルアミドゲルなどに包括させて固定化したもの
を例示することができる。これらの固定化酵素は、カラ
ムなどに充填された状態であっても、撹拌槽に拡散され
た状態であっても、あるいはそれらの装置から取り出し
た状態であっても、超音波処理と紫外線照射処理を併用
することができる。
【００１０】超音波処理は、固定化酵素が充填あるいは
拡散している装置中に設置した超音波振動子か、装置か
ら固定化酵素を取り出して超音波洗浄器で、数分間〜６
０分間程度行う。この際、超音波処理を行う液体中に界
面活性剤を加えておくと、さらに洗浄効果を増大させる
ことができる。また、超音波処理を行う前に界面活性剤
を加えた液体で処理してもよい。本発明における界面活
性剤を含む溶液中で超音波処理とはこのいずれかの場合
であってもよい。ここで用いる界面活性剤は特に限定は
されず、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸
エステル、ショ糖脂肪酸エステルあるいはレシチン等が
用いられる。グリセリン脂肪酸エステルはモノグリセリ
ン脂肪酸エステルであってもポリグリセリン脂肪酸エス
テルであってもよい。例えば、グリセリン脂肪酸エステ
ル、グリセリン酢酸脂肪酸エステル、グリセリン乳酸脂
肪酸エステル、グリセリンクエン酸脂肪酸エステル、グ
リセリンコハク酸脂肪酸エステル、グリセリンジアセチ
ル酒石酸エステル、グリセリン酢酸エステル等が、ソル
ビタン脂肪酸エステルとしてはソルビタンモノオレイン
酸エステル（スパン８０）、ソルビタンモノラウリル酸
エステル（スパン２０）等が、またショ糖脂肪酸エステ
ルとしては脂肪酸としてパルミチン酸、ステアリン酸を
含むエステルが用いられる。これらの界面活性剤は、通
常、０．５〜２．０重量％蒸留水に溶解して用いられ
る。これらの界面活性剤のなかでポリグリセリン脂肪酸
エステルは食品添加物として広く用いられている乳化剤
であり、安全性が高く、しかも洗浄効果を高めると共に
固定化酵素の活性を低下させないので本発明で使用する
のに特に好適である。
拡散している装置中に設置した超音波振動子か、装置か
ら固定化酵素を取り出して超音波洗浄器で、数分間〜６
０分間程度行う。この際、超音波処理を行う液体中に界
面活性剤を加えておくと、さらに洗浄効果を増大させる
ことができる。また、超音波処理を行う前に界面活性剤
を加えた液体で処理してもよい。本発明における界面活
性剤を含む溶液中で超音波処理とはこのいずれかの場合
であってもよい。ここで用いる界面活性剤は特に限定は
されず、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸
エステル、ショ糖脂肪酸エステルあるいはレシチン等が
用いられる。グリセリン脂肪酸エステルはモノグリセリ
ン脂肪酸エステルであってもポリグリセリン脂肪酸エス
テルであってもよい。例えば、グリセリン脂肪酸エステ
ル、グリセリン酢酸脂肪酸エステル、グリセリン乳酸脂
肪酸エステル、グリセリンクエン酸脂肪酸エステル、グ
リセリンコハク酸脂肪酸エステル、グリセリンジアセチ
ル酒石酸エステル、グリセリン酢酸エステル等が、ソル
ビタン脂肪酸エステルとしてはソルビタンモノオレイン
酸エステル（スパン８０）、ソルビタンモノラウリル酸
エステル（スパン２０）等が、またショ糖脂肪酸エステ
ルとしては脂肪酸としてパルミチン酸、ステアリン酸を
含むエステルが用いられる。これらの界面活性剤は、通
常、０．５〜２．０重量％蒸留水に溶解して用いられ
る。これらの界面活性剤のなかでポリグリセリン脂肪酸
エステルは食品添加物として広く用いられている乳化剤
であり、安全性が高く、しかも洗浄効果を高めると共に
固定化酵素の活性を低下させないので本発明で使用する
のに特に好適である。
【００１１】紫外線照射処理は、固定化酵素に付着する
微生物を殺菌できる程度の照度及び時間で行うが、通常
は照度１０ｍＷ／ｃｍ2 前後で１００秒間〜２０００秒
間行い、照射量が１０００〜２００００ｍＷｓ／ｃｍ2
となるように行うことが好ましい。特に照射量が３００
０ｍＷｓ／ｃｍ2 以上で効果を奏する。
微生物を殺菌できる程度の照度及び時間で行うが、通常
は照度１０ｍＷ／ｃｍ2 前後で１００秒間〜２０００秒
間行い、照射量が１０００〜２００００ｍＷｓ／ｃｍ2
となるように行うことが好ましい。特に照射量が３００
０ｍＷｓ／ｃｍ2 以上で効果を奏する。
【００１２】超音波処理と紫外線照射処理の組み合わせ
は、超音波処理を行った後に紫外線照射処理を行っても
よく、また、超音波処理と紫外線照射処理を同時に平行
して行ってもよい。この際、従来知られている紫外線照
射方法あるいは処理装置、例えば、特開平１−２２８４
５４や特願平２−４３８９３に開示のものと超音波処理
を併用することができる。
は、超音波処理を行った後に紫外線照射処理を行っても
よく、また、超音波処理と紫外線照射処理を同時に平行
して行ってもよい。この際、従来知られている紫外線照
射方法あるいは処理装置、例えば、特開平１−２２８４
５４や特願平２−４３８９３に開示のものと超音波処理
を併用することができる。
【００１３】また、超音波処理や紫外線照射処理の前後
に、固定化酵素を蒸留水や緩衝液などで洗浄することに
よって、固定化酵素に付着している基質やその分解物、
あるいは微生物を除去しておくことが望ましい。
に、固定化酵素を蒸留水や緩衝液などで洗浄することに
よって、固定化酵素に付着している基質やその分解物、
あるいは微生物を除去しておくことが望ましい。
【００１４】本発明の殺菌方法は、具体的には、牛乳中
の乳糖をグルコースとガクトースに分解する際に用いる
ラクターゼを担体に固定化した固定化酵素の殺菌、ある
いは乳糖、ホエー、脱脂乳などからオリゴ糖を生成させ
る際に用いるβ−ガラクトシダーゼを担体に固定化した
固定化酵素の殺菌などに用いることができる。さらに
は、蛋白質をペプチドや遊離アミノ酸に分解する際に用
いるプロテアーゼを担体に固定化した固定化酵素の殺菌
などにも用いることができる。
の乳糖をグルコースとガクトースに分解する際に用いる
ラクターゼを担体に固定化した固定化酵素の殺菌、ある
いは乳糖、ホエー、脱脂乳などからオリゴ糖を生成させ
る際に用いるβ−ガラクトシダーゼを担体に固定化した
固定化酵素の殺菌などに用いることができる。さらに
は、蛋白質をペプチドや遊離アミノ酸に分解する際に用
いるプロテアーゼを担体に固定化した固定化酵素の殺菌
などにも用いることができる。
【００１５】
【発明の効果】本発明の効果について、試験例をあげて
説明する。
説明する。
【試験例１】酵素としてプロテアーゼＳ（天野製薬
（株）製）を用い、グルタルアルデヒドで架橋して担体
であるキトサンビーズ（商標名：キトパール、富士紡績
（株）製）に固定化し、固定化酵素（固定化プロテアー
ゼＳ）を調製した。この固定化プロテアーゼＳをカゼイ
ンの加水分解処理に反復使用し、その結果、付着した微
生物の菌数が２．７×１０6 ＣＦＵ／ｍｌまでに増殖し
て汚染されたものを洗浄殺菌試験に供した。
（株）製）を用い、グルタルアルデヒドで架橋して担体
であるキトサンビーズ（商標名：キトパール、富士紡績
（株）製）に固定化し、固定化酵素（固定化プロテアー
ゼＳ）を調製した。この固定化プロテアーゼＳをカゼイ
ンの加水分解処理に反復使用し、その結果、付着した微
生物の菌数が２．７×１０6 ＣＦＵ／ｍｌまでに増殖し
て汚染されたものを洗浄殺菌試験に供した。
【００１６】上述のように汚染された固定化プロテアー
ゼＳを出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で３
０〜６０分間超音波処理し、それと同時平行して上方か
ら紫外線を照射した。この結果を表１に示す。残存微生
物の菌数は、対照に比べ、超音波処理と紫外線照射処理
を併用することによって顕著に低下し、特に、紫外線照
射量３０００ｍＷｓ／ｃｍ2 以上では殆ど微生物が残存
しなくなった。この結果から、固定化酵素の殺菌に超音
波処理と紫外線照射処理を併用すると、酵素活性を低下
させることなく、付着した微生物を殺菌することができ
ることが判明した。また、この殺菌効果は、紫外線照射
量３０００ｍＷｓ／ｃｍ2 以上で顕著であった。
ゼＳを出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で３
０〜６０分間超音波処理し、それと同時平行して上方か
ら紫外線を照射した。この結果を表１に示す。残存微生
物の菌数は、対照に比べ、超音波処理と紫外線照射処理
を併用することによって顕著に低下し、特に、紫外線照
射量３０００ｍＷｓ／ｃｍ2 以上では殆ど微生物が残存
しなくなった。この結果から、固定化酵素の殺菌に超音
波処理と紫外線照射処理を併用すると、酵素活性を低下
させることなく、付着した微生物を殺菌することができ
ることが判明した。また、この殺菌効果は、紫外線照射
量３０００ｍＷｓ／ｃｍ2 以上で顕著であった。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【試験例２】試験例１と同様の処理で汚染された固定化
プロテアーゼＳを用い、界面活性剤の効果を確認するた
め、以下のような試料を調製し、固定化プロテアーゼＳ
の残存活性を測定した。
プロテアーゼＳを用い、界面活性剤の効果を確認するた
め、以下のような試料を調製し、固定化プロテアーゼＳ
の残存活性を測定した。
【００１９】（１）試料１ 使用済固定化プロテアーゼＳを蒸留水中で出力１００Ｗ
程度の通常用いる超音波洗浄器で超音波処理したもの。 （２）試料２ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理したもの。 （３）試料３ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照射し
たもの。
程度の通常用いる超音波洗浄器で超音波処理したもの。 （２）試料２ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理したもの。 （３）試料３ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照射し
たもの。
【００２０】紫外線照度は平均５ｍＷ／ｃｍ2 であっ
た。結果を図１に示す。この図が示すように、界面活性
剤は酵素活性をほとんど低下させないことが分る。な
お、超音波処理６０分間で固定化プロテアーゼＳの残存
活性が初発より高くなった理由は、固定化プロテアーゼ
Ｓ表面に付着した加水分解物や微生物が除去されて、基
質との接触が円滑になったためである。
た。結果を図１に示す。この図が示すように、界面活性
剤は酵素活性をほとんど低下させないことが分る。な
お、超音波処理６０分間で固定化プロテアーゼＳの残存
活性が初発より高くなった理由は、固定化プロテアーゼ
Ｓ表面に付着した加水分解物や微生物が除去されて、基
質との接触が円滑になったためである。
【００２１】
【試験例３】試験例１と同様の処理で汚染された固定化
プロテアーゼＳを用い、界面活性剤の効果を確認するた
め、以下のような試料を調製し、固定化プロテアーゼＳ
表面に残存している微生物の菌数を計測することによっ
て、洗浄殺菌試験を行った。
プロテアーゼＳを用い、界面活性剤の効果を確認するた
め、以下のような試料を調製し、固定化プロテアーゼＳ
表面に残存している微生物の菌数を計測することによっ
て、洗浄殺菌試験を行った。
【００２２】（１）試料１ 使用済固定化プロテアーゼＳを蒸留水中で出力１００Ｗ
程度の通常用いる超音波洗浄器で超音波処理し、それと
同時平行して上方から紫外線を照射したもの。なお、紫
外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度となるように調整した。 （２）試料２ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を０．５重量％添加した蒸
留水中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で
超音波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照
射したもの。なお、紫外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度と
なるように調整した。 （３）試料３ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照射し
たもの。なお、紫外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度となる
ように調整した。いずれの場合も処理時間は０〜６０分
であった。
程度の通常用いる超音波洗浄器で超音波処理し、それと
同時平行して上方から紫外線を照射したもの。なお、紫
外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度となるように調整した。 （２）試料２ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を０．５重量％添加した蒸
留水中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で
超音波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照
射したもの。なお、紫外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度と
なるように調整した。 （３）試料３ 使用済固定化プロテアーゼＳを界面活性剤としてグリセ
リン脂肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標
名、阪本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水
中で出力１００Ｗ程度の通常用いる超音波洗浄器で超音
波処理し、それと同時平行して上方から紫外線を照射し
たもの。なお、紫外線照度は５ｍＷ／ｃｍ2 程度となる
ように調整した。いずれの場合も処理時間は０〜６０分
であった。
【００２３】その結果を図２に示す。この表にみられる
ように界面活性剤は殺菌処理時間の経過とともにその使
用量に応じて殺菌効果を表わし、特に５０〜６０分の処
理では生残菌数をほとんど０とする効果を奏する。
ように界面活性剤は殺菌処理時間の経過とともにその使
用量に応じて殺菌効果を表わし、特に５０〜６０分の処
理では生残菌数をほとんど０とする効果を奏する。
【００２４】次に本発明の実施例を挙げて本発明を具体
的に説明する。
的に説明する。
【実施例１】直径６ｃｍ、長さ１８ｃｍのカラムに３０
０ｍｌの固定化プロテアーゼＳを充填した後、ダウンフ
ローで１０％カゼインを反応温度４０℃、ＳＶ＝３で連
続通液を行って加水分解物を調製した。時間の経過と共
に菌の生育が始まり、固定化プロテアーゼＳへの乳タン
パク付着と細菌汚染が生じた。１２時間通液後の残存酵
素比活性は７０％であり、微生物菌数は１０6 オーダー
であった。このとき、カラムから固定化プロテアーゼＳ
を取り出し、ｐＨ７．０のリン酸緩衝液で洗浄して固形
分を除去した後、この固定化プロテアーゼＳを殺菌槽に
移し、殺菌槽を回転させながら５ｍＷ／ｃｍ2 の紫外線
を６０分間照射すると同時に出力１００Ｗの超音波振動
子により超音波を照射した。このようにして処理した固
定化プロテアーゼＳを無菌処理したｐＨ７．０のリン酸
緩衝液で洗浄し、残存の酵素比活性は１００％に回復
し、付着微生物の菌数０．０×１０1 であった。この固
定化プロテアーゼＳを再びカラムに充填して、カゼイン
の加水分解に用いた。
０ｍｌの固定化プロテアーゼＳを充填した後、ダウンフ
ローで１０％カゼインを反応温度４０℃、ＳＶ＝３で連
続通液を行って加水分解物を調製した。時間の経過と共
に菌の生育が始まり、固定化プロテアーゼＳへの乳タン
パク付着と細菌汚染が生じた。１２時間通液後の残存酵
素比活性は７０％であり、微生物菌数は１０6 オーダー
であった。このとき、カラムから固定化プロテアーゼＳ
を取り出し、ｐＨ７．０のリン酸緩衝液で洗浄して固形
分を除去した後、この固定化プロテアーゼＳを殺菌槽に
移し、殺菌槽を回転させながら５ｍＷ／ｃｍ2 の紫外線
を６０分間照射すると同時に出力１００Ｗの超音波振動
子により超音波を照射した。このようにして処理した固
定化プロテアーゼＳを無菌処理したｐＨ７．０のリン酸
緩衝液で洗浄し、残存の酵素比活性は１００％に回復
し、付着微生物の菌数０．０×１０1 であった。この固
定化プロテアーゼＳを再びカラムに充填して、カゼイン
の加水分解に用いた。
【００２５】
【実施例２】直径６ｃｍ、長さ１８ｃｍのカラムに３０
０ｍｌの固定化プロテアーゼＳを充填した後、ダウンフ
ローで１０％カゼインを反応温度４０℃、ＳＶ＝３で連
続通液を行って加水分解物を調製した。時間の経過と共
に菌の生育が始まり、固定化プロテアーゼＳへの乳タン
パク付着と細菌汚染が生じた。１２時間通液後の残存酵
素比活性は７０％であり、微生物菌数は１０6 オーダー
であった。このとき、カラムから固定化プロテアーゼＳ
を取り出し、ｐＨ７．０のリン酸緩衝液で洗浄して固形
分を除去した後、これを界面活性剤としてグリセリン脂
肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標名、阪
本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水中で出
力１００Ｗの超音波発振器を使用して超音波を照射する
と共に、殺菌槽を回転させながら５ｍＷ／ｃｍ2 の紫外
線を６０分間照射した。このようにして処理した固定化
プロテアーゼＳを無菌処理したｐＨ７．０のリン酸緩衝
液で洗浄し、残存の酵素比活性は１００％であり、付着
微生物の菌数０．０×１０1 以下であった。この固定化
プロテアーゼＳを再びカラムに充填して、カゼインの加
水分解に用いた。
０ｍｌの固定化プロテアーゼＳを充填した後、ダウンフ
ローで１０％カゼインを反応温度４０℃、ＳＶ＝３で連
続通液を行って加水分解物を調製した。時間の経過と共
に菌の生育が始まり、固定化プロテアーゼＳへの乳タン
パク付着と細菌汚染が生じた。１２時間通液後の残存酵
素比活性は７０％であり、微生物菌数は１０6 オーダー
であった。このとき、カラムから固定化プロテアーゼＳ
を取り出し、ｐＨ７．０のリン酸緩衝液で洗浄して固形
分を除去した後、これを界面活性剤としてグリセリン脂
肪酸エステル・ＳＹグリスターＭＬ７５０（商標名、阪
本薬品工業（株）製）を１重量％添加した蒸留水中で出
力１００Ｗの超音波発振器を使用して超音波を照射する
と共に、殺菌槽を回転させながら５ｍＷ／ｃｍ2 の紫外
線を６０分間照射した。このようにして処理した固定化
プロテアーゼＳを無菌処理したｐＨ７．０のリン酸緩衝
液で洗浄し、残存の酵素比活性は１００％であり、付着
微生物の菌数０．０×１０1 以下であった。この固定化
プロテアーゼＳを再びカラムに充填して、カゼインの加
水分解に用いた。
【図１】試験例２の洗浄殺菌処理が酵素活性に及ぼす影
響を示す。
響を示す。
─○─ 超音波処理 ─△─ 超音波処理と界面活性剤との併用 ─□─ 超音波処理、界面活性剤及び紫外線照射処理の
併用
併用
【図２】試験例３の界面活性剤の洗浄・殺菌補助処理効
果を示す。
果を示す。
─□─ 界面活性剤無添加 ─△─ 界面活性剤０．５％添加 ─○─ 界面活性剤１％添加
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−228454（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−237787（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−12280（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−247269（ＪＰ，Ａ) 実開 昭63−145500（ＪＰ，Ｕ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 11/00 - 11/18
Claims (4)
- 【請求項１】 固定化酵素に超音波処理と紫外線照射処
理とを併用して固定化酵素に付着する微生物を殺菌する
ことを特徴とする固定化酵素の殺菌方法。 - 【請求項２】 界面活性剤を含む液体中で超音波処理を
行う請求項１に記載の固定化酵素の殺菌方法。 - 【請求項３】 界面活性剤がグリセリン脂肪酸エステル
である請求項２に記載の固定化酵素の殺菌方法。 - 【請求項４】 紫外線照射処理を３０００ｍＷｓ／ｃｍ
2 以上の紫外線照射量で行う請求項１乃至３のいずれか
に記載の固定化酵素の殺菌方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3075839A JP2832760B2 (ja) | 1990-09-07 | 1991-03-15 | 固定化酵素の殺菌方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-238235 | 1990-09-07 | ||
| JP23823590 | 1990-09-07 | ||
| JP3075839A JP2832760B2 (ja) | 1990-09-07 | 1991-03-15 | 固定化酵素の殺菌方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04218371A JPH04218371A (ja) | 1992-08-07 |
| JP2832760B2 true JP2832760B2 (ja) | 1998-12-09 |
Family
ID=26416997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3075839A Expired - Lifetime JP2832760B2 (ja) | 1990-09-07 | 1991-03-15 | 固定化酵素の殺菌方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2832760B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6572820B2 (en) | 1996-02-05 | 2003-06-03 | Asahi Medical Co., Ltd. | Sterilization-protecting agent and sterilization method |
| US5997907A (en) * | 1997-03-12 | 1999-12-07 | Rhodia Inc. | Enhancement of guar solution stability |
| ATA37099A (de) * | 1999-03-04 | 2000-02-15 | Lactoprot Alpenlaendische Milc | Verfahren zur enzymatischen lactosespaltung, insbesondere mittels membrandiffusionsreaktoren |
| EP1852443A1 (en) | 2006-05-05 | 2007-11-07 | Leukocare AG | Biocompatible three dimensional matrix for the immobilization of biological substances |
| CN107252108B (zh) * | 2017-06-27 | 2021-01-29 | 福建农林大学 | 一种乳糖酶微胶囊及其制备方法 |
| CN112280638A (zh) * | 2019-07-24 | 2021-01-29 | 宁波晨实生物科技有限公司 | 一种利用超声波灭菌制备生鲜米酒的方法 |
-
1991
- 1991-03-15 JP JP3075839A patent/JP2832760B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04218371A (ja) | 1992-08-07 |
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