JP2830243B2 - ポリエン含有組成物 - Google Patents
ポリエン含有組成物Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 ポリエンは主に抗真菌剤等の医薬に用いられるが、ヒ
ト、動物に非経口的に投与する場合、水に溶解する組成
物として投与されることが必要である。本発明はこれら
の水に溶解する組成物及びその組成物の製造方法を提供
するものである。
ト、動物に非経口的に投与する場合、水に溶解する組成
物として投与されることが必要である。本発明はこれら
の水に溶解する組成物及びその組成物の製造方法を提供
するものである。
ポリエンは、主にポリエン抗生物質として真菌症に対
する治療薬剤として用いられる。しかし臨床に応用され
ている薬剤の数は、細菌感染症に対する薬剤に比較して
極めて少ない。ポリエン構造体の特徴は分子の一部が極
めて疎水的であり、数個のヒドロキシ基と多くの二重結
合を有する多不飽和疎水性クロモホア、及び、場合によ
っては糖で構成されており、その特徴的性質は、熱、紫
外線、極端な低あるいは高pH、酸素に極めで不安定な点
である。ポリエンクロモホアの分解は抗真菌活性を失活
させ、二重結合の増加は疎水性の増加すなわち溶解度の
減少につながる。一般にポリエンはジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシドに良く溶解するが、これらの
溶解物を医療の場で注射剤などの非経口投与剤として使
用できない。ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
シドに溶解した溶液を水に希釈すると不透析性のミセル
を形成する。ミセルは分子がお互いに付着した状態で、
この現象はクロモホアの安定化に役立っている。しかし
この状態の組成物を経口投与しても、吸収されないため
薬効を示さない（S.M.Hammond:Biological Activity of
Polyene Antibiotics、Progress in Medical Chemistr
y、vol.14、North Holland Publishing Campany、197
7）。
する治療薬剤として用いられる。しかし臨床に応用され
ている薬剤の数は、細菌感染症に対する薬剤に比較して
極めて少ない。ポリエン構造体の特徴は分子の一部が極
めて疎水的であり、数個のヒドロキシ基と多くの二重結
合を有する多不飽和疎水性クロモホア、及び、場合によ
っては糖で構成されており、その特徴的性質は、熱、紫
外線、極端な低あるいは高pH、酸素に極めで不安定な点
である。ポリエンクロモホアの分解は抗真菌活性を失活
させ、二重結合の増加は疎水性の増加すなわち溶解度の
減少につながる。一般にポリエンはジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシドに良く溶解するが、これらの
溶解物を医療の場で注射剤などの非経口投与剤として使
用できない。ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
シドに溶解した溶液を水に希釈すると不透析性のミセル
を形成する。ミセルは分子がお互いに付着した状態で、
この現象はクロモホアの安定化に役立っている。しかし
この状態の組成物を経口投与しても、吸収されないため
薬効を示さない（S.M.Hammond:Biological Activity of
Polyene Antibiotics、Progress in Medical Chemistr
y、vol.14、North Holland Publishing Campany、197
7）。
このようにポリエンはその性質の為に用途が制限され
てきた。そのため水溶性ポリエン並びにそれを製造する
方法は長年研究されてきた。一般に、ポリエンはナトリ
ウム・デソキシコレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ホ
ウ酸ナトリウムと錯体を形成させるとコロイド性分散体
となる。このものから塩を添加して、共沈物を調製する
と、その錯体は、水に対する溶解度が、元のポリエンに
比較して増加する。しかし物理的な安定性が極めて悪く
なる。ナイスタチンの例でみると、ナイスタチンはポリ
ビニルピロリドンと共沈させ共沈物を得ると、そのもの
は溶解度が上昇する。しかし、極めて不安定になり医薬
に用いられない（M.B.Dexter:J.Pharm.Pharmacal.,27,5
89,1975）。
てきた。そのため水溶性ポリエン並びにそれを製造する
方法は長年研究されてきた。一般に、ポリエンはナトリ
ウム・デソキシコレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ホ
ウ酸ナトリウムと錯体を形成させるとコロイド性分散体
となる。このものから塩を添加して、共沈物を調製する
と、その錯体は、水に対する溶解度が、元のポリエンに
比較して増加する。しかし物理的な安定性が極めて悪く
なる。ナイスタチンの例でみると、ナイスタチンはポリ
ビニルピロリドンと共沈させ共沈物を得ると、そのもの
は溶解度が上昇する。しかし、極めて不安定になり医薬
に用いられない（M.B.Dexter:J.Pharm.Pharmacal.,27,5
89,1975）。
また、ポリエンマクロライドに属するＶ−28−３メチ
ルエステル（特開昭63−218686号公報）はジメチルスル
ホキサイド、ジメチルホルムアミド、メタノール等の溶
剤に溶解するが水に難溶でほとんど溶けない。パートリ
シンはラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤を加える
と水に溶解するが、医薬に用いる場合、安全性の面で問
題がある（特開昭50−40715号公報）。
ルエステル（特開昭63−218686号公報）はジメチルスル
ホキサイド、ジメチルホルムアミド、メタノール等の溶
剤に溶解するが水に難溶でほとんど溶けない。パートリ
シンはラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤を加える
と水に溶解するが、医薬に用いる場合、安全性の面で問
題がある（特開昭50−40715号公報）。
更に、フラボファジン、ナイスタチン、アンホテリシ
ンＢはクロロホルムに溶解しメタノールで希釈し、水に
溶解したγ−シクロデキストリンに窒素気流中でゆっく
り撹拌しながら加えると錯体を形成して水に対する溶解
性が増加することが知られている。しかしこの水溶性ポ
リエン錯体の製造方法は有機溶剤を使用し、それを除去
する工程が示されておらず、注射剤としての使用に問題
が考えられるし工程が煩雑である（特開昭60−15818
8）。又、ポリエンに比べ使用するγ−シクロデキスト
リンの量が多い。
ンＢはクロロホルムに溶解しメタノールで希釈し、水に
溶解したγ−シクロデキストリンに窒素気流中でゆっく
り撹拌しながら加えると錯体を形成して水に対する溶解
性が増加することが知られている。しかしこの水溶性ポ
リエン錯体の製造方法は有機溶剤を使用し、それを除去
する工程が示されておらず、注射剤としての使用に問題
が考えられるし工程が煩雑である（特開昭60−15818
8）。又、ポリエンに比べ使用するγ−シクロデキスト
リンの量が多い。
更に、Streptomyces nodosusの生産するポリエン抗生
物質アンホテリシンＢは酵母、カビ、原生物質に広範囲
な活性スペクトルを有する。このものは静脈内投与で使
用されている唯一の医療用薬剤である。静脈内投与に使
用されるアンホテリシンＢはナトリウム・デソキシコレ
ート錯体の形態でFungizoneの商品名で医家向けに販売
されている（Satoshi Omura;Macroride antibiotics、1
984、Academic press）。このナトリウム・デソキシコ
レート錯体の形で使用するのは水溶性を増加させるため
にほかならない。しかしこの物を使用した場合、はき
け、貧血、発熱、腎臓障害等の毒性が増加することが知
られている。この毒性にはデソキシコレートの存在が指
摘されている。水溶性の増加と毒性の増加が分離できな
い点に問題がある（Thomas:The Analyst、101、321、19
76）。水溶性を増加させる方法として、アンホテリシン
Ｂのメチルエステル誘導体を合成し使用することも考え
られた。アンホテリシンＢメチルエステルはアンホテリ
シンＢに比較して水溶性で分散性ミセルになり易いが、
不安定な物質である。一般に水溶性の増加は、分子の化
学的安定性の低下につながり、現在これを避けられない
（Bonner:J.Antibiot.、28、132、1975）。
物質アンホテリシンＢは酵母、カビ、原生物質に広範囲
な活性スペクトルを有する。このものは静脈内投与で使
用されている唯一の医療用薬剤である。静脈内投与に使
用されるアンホテリシンＢはナトリウム・デソキシコレ
ート錯体の形態でFungizoneの商品名で医家向けに販売
されている（Satoshi Omura;Macroride antibiotics、1
984、Academic press）。このナトリウム・デソキシコ
レート錯体の形で使用するのは水溶性を増加させるため
にほかならない。しかしこの物を使用した場合、はき
け、貧血、発熱、腎臓障害等の毒性が増加することが知
られている。この毒性にはデソキシコレートの存在が指
摘されている。水溶性の増加と毒性の増加が分離できな
い点に問題がある（Thomas:The Analyst、101、321、19
76）。水溶性を増加させる方法として、アンホテリシン
Ｂのメチルエステル誘導体を合成し使用することも考え
られた。アンホテリシンＢメチルエステルはアンホテリ
シンＢに比較して水溶性で分散性ミセルになり易いが、
不安定な物質である。一般に水溶性の増加は、分子の化
学的安定性の低下につながり、現在これを避けられない
（Bonner:J.Antibiot.、28、132、1975）。
ポリエンが水に難溶で水性コロイドが極度に不安定で
ある点、水に溶解するための可溶化剤の安定性の問題、
水に可溶な組成物の製造方法の問題、調製した組成物の
安定性の問題が医薬等への応用を極度に制限しており、
水に易溶な安全で、安定した組成物並びにその製造方法
の出現が望まれている。本発明の目的は水に易溶な新し
いポリエン組成物とその製造方法を提供することにあ
る。
ある点、水に溶解するための可溶化剤の安定性の問題、
水に可溶な組成物の製造方法の問題、調製した組成物の
安定性の問題が医薬等への応用を極度に制限しており、
水に易溶な安全で、安定した組成物並びにその製造方法
の出現が望まれている。本発明の目的は水に易溶な新し
いポリエン組成物とその製造方法を提供することにあ
る。
本発明者は、ポリエンが水に安定かつ均一に溶解する
組成物及びその製造方法について種々検討した結果、ニ
コチン酸アミドを含有せしめることによりポリエンを水
に溶解させることができることを発見し、本発明を完成
するにいたった。すなわち、本発明は、ニコチン酸アミ
ドとポリエンを含有する抗菌剤組成物とその製造方法に
関する。
組成物及びその製造方法について種々検討した結果、ニ
コチン酸アミドを含有せしめることによりポリエンを水
に溶解させることができることを発見し、本発明を完成
するにいたった。すなわち、本発明は、ニコチン酸アミ
ドとポリエンを含有する抗菌剤組成物とその製造方法に
関する。
本発明で用いるポリエンは、分子内に多数のエチレン
結合をもつ炭化水素構造の化合物をいう。例えば、Ｖ−
28−３（特開昭61−189224号公報）またはそのエステル
誘導体、例えばＶ−28−3M（特開昭63−218686号公
報）、パートリシンＢまたはそのエステル誘導体（J.An
tibiot.,35,997,1982）、アンホテリシンＢ（シグマ社
製品）またはそのエステル誘導体等があり、抗生物質と
しての用途が知られているが、特に限定されるものでは
ない。
結合をもつ炭化水素構造の化合物をいう。例えば、Ｖ−
28−３（特開昭61−189224号公報）またはそのエステル
誘導体、例えばＶ−28−3M（特開昭63−218686号公
報）、パートリシンＢまたはそのエステル誘導体（J.An
tibiot.,35,997,1982）、アンホテリシンＢ（シグマ社
製品）またはそのエステル誘導体等があり、抗生物質と
しての用途が知られているが、特に限定されるものでは
ない。
また、本発明で用いるニコチン酸アミド（ニコチンア
ミドともいう）は、白色の結晶または結晶性粉末で臭い
はなく、水、エチルアルコールに溶け易く、アセトン、
アミルアルコール、エチレングリコール、クロロホル
ム、ブタノールにも溶解するが、エーテル、ベンゼンに
はほとんど溶けない性質を有するものである。この致死
量は、マウスに対して２〜3g/kg、ヒトには１日500mgを
連日非経口的に投与しても毒性は認められないものであ
る。従来、ニコチン酸アミドは、リボフラビンの溶解補
助剤として用いられているが、ポリエンに用いられた例
はない。
ミドともいう）は、白色の結晶または結晶性粉末で臭い
はなく、水、エチルアルコールに溶け易く、アセトン、
アミルアルコール、エチレングリコール、クロロホル
ム、ブタノールにも溶解するが、エーテル、ベンゼンに
はほとんど溶けない性質を有するものである。この致死
量は、マウスに対して２〜3g/kg、ヒトには１日500mgを
連日非経口的に投与しても毒性は認められないものであ
る。従来、ニコチン酸アミドは、リボフラビンの溶解補
助剤として用いられているが、ポリエンに用いられた例
はない。
当該組成物のポリエンに対するニコチン酸アミドの重
量比率は、１以上が好ましい。
量比率は、１以上が好ましい。
また、当該組成物の形態は、特に限定されず、固形
物、溶液及び溶液を乾燥させた固形物等、どの様なもの
でも適用できる。また、本発明の組成物は、ポリエンを
溶解させた時あるいは溶液時に不溶化させない化合物で
あれば何を含有してもかまわない。
物、溶液及び溶液を乾燥させた固形物等、どの様なもの
でも適用できる。また、本発明の組成物は、ポリエンを
溶解させた時あるいは溶液時に不溶化させない化合物で
あれば何を含有してもかまわない。
当該組成物が溶液の場合、黄色から黄褐色澄明液で、
pHは３〜７に維持する。好ましくは4.5〜6.8に調製され
る。又、ここで得られた組成物は、５％グルコース溶液
にも、水と同様に溶解する。保存は−80℃あるいは−25
℃で冷凍が好ましく、暗所では１週間以上安定である。
当該組成物が固形物の場合、ポリエンとニコチン酸アミ
ドを単に共存させる場合は白色結晶と黄色ないしは黄褐
色粉末あるいは結晶の混合物として不均一に存在する。
均一に混合した場合及び溶液状態の組成物を凍結乾燥な
どで乾燥した場合は黄色から黄褐色の粉末である。固形
物はきわめて安定であり、暗冷所に保存した場合は１ケ
月以上安定である。ポリエンはメタノール等の可溶性溶
剤中ではモノマーで存在し、400nm〜360nmに特徴的なUV
吸収帯が認められる。しかし、コロイド状態では400nm
付近の極大吸収が消失するか、弱くなり、短波長側のUV
吸収が強くなるが、本発明の組成物は400〜360nm付近に
明瞭な極大吸収を与えた。
pHは３〜７に維持する。好ましくは4.5〜6.8に調製され
る。又、ここで得られた組成物は、５％グルコース溶液
にも、水と同様に溶解する。保存は−80℃あるいは−25
℃で冷凍が好ましく、暗所では１週間以上安定である。
当該組成物が固形物の場合、ポリエンとニコチン酸アミ
ドを単に共存させる場合は白色結晶と黄色ないしは黄褐
色粉末あるいは結晶の混合物として不均一に存在する。
均一に混合した場合及び溶液状態の組成物を凍結乾燥な
どで乾燥した場合は黄色から黄褐色の粉末である。固形
物はきわめて安定であり、暗冷所に保存した場合は１ケ
月以上安定である。ポリエンはメタノール等の可溶性溶
剤中ではモノマーで存在し、400nm〜360nmに特徴的なUV
吸収帯が認められる。しかし、コロイド状態では400nm
付近の極大吸収が消失するか、弱くなり、短波長側のUV
吸収が強くなるが、本発明の組成物は400〜360nm付近に
明瞭な極大吸収を与えた。
当該組成物の製造法は、 （１） 単に、ポリエン粉末あるいは結晶にニコチン酸
アミドの粉末あるいは結晶及びその他の化合物を加える
製法、 （２） （１）の組成物を均一に混合する製法、 （３） ポリエンの粉末あるいは結晶をニコチン酸アミ
ド含有溶液（溶媒：水、エタノール、メタノール等のニ
コチン酸アミドが溶解する有機溶媒又は、水−有機溶媒
混合系）に加える製法、 （４） （３）の溶液を凍結する製法、 （５） （３）の溶液を凍結乾燥などによって乾燥させ
る製法、 などがある。ここで、ニコチン酸アミドの溶液濃度は高
濃度であることが好ましいが、１％〜飽和濃度の範囲で
可能である。更に、ポリエンを溶解させる場合は、溶液
が氷結しない温度ならば良いが、高温である方が溶解性
が良く、ポリエン、ニコチン酸アミドが分解しない温度
時間が選ばれる。
アミドの粉末あるいは結晶及びその他の化合物を加える
製法、 （２） （１）の組成物を均一に混合する製法、 （３） ポリエンの粉末あるいは結晶をニコチン酸アミ
ド含有溶液（溶媒：水、エタノール、メタノール等のニ
コチン酸アミドが溶解する有機溶媒又は、水−有機溶媒
混合系）に加える製法、 （４） （３）の溶液を凍結する製法、 （５） （３）の溶液を凍結乾燥などによって乾燥させ
る製法、 などがある。ここで、ニコチン酸アミドの溶液濃度は高
濃度であることが好ましいが、１％〜飽和濃度の範囲で
可能である。更に、ポリエンを溶解させる場合は、溶液
が氷結しない温度ならば良いが、高温である方が溶解性
が良く、ポリエン、ニコチン酸アミドが分解しない温度
時間が選ばれる。
こうして取得される当該組成物は、抗菌活性、抗真菌
活性を維持しており、医薬品として利用することができ
る。
活性を維持しており、医薬品として利用することができ
る。
以下、実施例に基づき本発明を詳細に説明する。
実施例１ 第１表に示す組成の培地1klを加熱殺菌して発酵槽に
入れ、これにパートリシンＢ生産菌ストレプトミセス・
アレネ（Streptomyces arenae）（FERM P−8099）を接
種して28℃で３日間培養した。培養後、遠心分離にて菌
糸を集め、これにMeOH100を加えた。酢酸でpHを6.0に
調節し、室温で24時間放置した。次いで、濾過し、得ら
れた濾液100を40℃で減圧下10まで濃縮した。遠心
分離して沈澱物を集め、凍結乾燥して、200gの粗パート
リシンＢ（純度65％）が得られた。
入れ、これにパートリシンＢ生産菌ストレプトミセス・
アレネ（Streptomyces arenae）（FERM P−8099）を接
種して28℃で３日間培養した。培養後、遠心分離にて菌
糸を集め、これにMeOH100を加えた。酢酸でpHを6.0に
調節し、室温で24時間放置した。次いで、濾過し、得ら
れた濾液100を40℃で減圧下10まで濃縮した。遠心
分離して沈澱物を集め、凍結乾燥して、200gの粗パート
リシンＢ（純度65％）が得られた。
粗パートリシンB100gを逆相分配高速液体クロマトグ
ラフィー（カプセル・パックODSカラム、資生堂社製）
により精製し、80gの精製パートリシンＢ（純度98％）
乾燥物を得た。精製パートリシンＢの理化学的性質を調
べたところ、分子量1112（MSにより測定した）、薄層ク
ロマトグラフィー（TLC）に於けるRf値0.34、逆相分配
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に於ける保持時間
7.71分、UVスペクトル及びIRスペクトルが、パートリシ
ンＢ（J.Antibiotics、35、997、1982）と良く一致し、
TLCで単一のスポットを、HPLCで単一のピークを与え
た。
ラフィー（カプセル・パックODSカラム、資生堂社製）
により精製し、80gの精製パートリシンＢ（純度98％）
乾燥物を得た。精製パートリシンＢの理化学的性質を調
べたところ、分子量1112（MSにより測定した）、薄層ク
ロマトグラフィー（TLC）に於けるRf値0.34、逆相分配
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に於ける保持時間
7.71分、UVスペクトル及びIRスペクトルが、パートリシ
ンＢ（J.Antibiotics、35、997、1982）と良く一致し、
TLCで単一のスポットを、HPLCで単一のピークを与え
た。
前記方法で調製した精製パートリシンB10mgを４個の
ビーカーに入ったそれぞれを10％ニコチン酸アミド水溶
液10mlに加え、それぞれを20℃,37℃,40℃,50℃で60分
間撹拌した。撹拌後、すばやく、1000r.p.m.,10分間遠
心分離して不溶物を除去し透明な黄色上清液を得た。こ
れを10％ニコチン酸アミド水溶液で希釈し、HPLC（カプ
セルパックＣ−18、4.6φ×15mm、溶媒:10mM酢酸アンモ
ニウム含有37％アセトニトリル溶液）により溶解量を測
定した結果は、第２表の通りであった。
ビーカーに入ったそれぞれを10％ニコチン酸アミド水溶
液10mlに加え、それぞれを20℃,37℃,40℃,50℃で60分
間撹拌した。撹拌後、すばやく、1000r.p.m.,10分間遠
心分離して不溶物を除去し透明な黄色上清液を得た。こ
れを10％ニコチン酸アミド水溶液で希釈し、HPLC（カプ
セルパックＣ−18、4.6φ×15mm、溶媒:10mM酢酸アンモ
ニウム含有37％アセトニトリル溶液）により溶解量を測
定した結果は、第２表の通りであった。
実施例２ 実施例１と同様な方法で得た精製パートリシンB10mg
を４個のビーカーに入った水10mlに加え、それぞれを20
℃,37℃,40℃,50℃で60分間撹拌した。撹拌後すばやく1
000r.p.m.,10分間遠心分離して不溶物を除去し、透明液
を得た。これをHPLCで実施例１と同様な方法で分析した
結果は第３表の通りであった。
を４個のビーカーに入った水10mlに加え、それぞれを20
℃,37℃,40℃,50℃で60分間撹拌した。撹拌後すばやく1
000r.p.m.,10分間遠心分離して不溶物を除去し、透明液
を得た。これをHPLCで実施例１と同様な方法で分析した
結果は第３表の通りであった。
実施例３ 実施例１と同様な方法で調製したパートリシンB30gを
ジメチルスルホキサイド250mlに溶解し、これにジアゾ
メタンの２％エーテル溶液200mlを室温にてゆっくりと
撹拌しながら添加した。次いで光を遮断した状態で一晩
放置した後、エーテルを加えて生成物を沈澱させた。沈
澱を濾過により回収し、エーテルで洗浄後、真空乾燥さ
せた。得られた粗パートリシンＢメチルエステルは、特
公昭55−50960号公報の記載の方法で精製し、5mgの精製
物を乾燥品として得た。本化合物は、以下の物理化学的
性質を示しパートリシンＢメチルエステル（特公昭55−
50960号公報記載の物質）と同定された。
ジメチルスルホキサイド250mlに溶解し、これにジアゾ
メタンの２％エーテル溶液200mlを室温にてゆっくりと
撹拌しながら添加した。次いで光を遮断した状態で一晩
放置した後、エーテルを加えて生成物を沈澱させた。沈
澱を濾過により回収し、エーテルで洗浄後、真空乾燥さ
せた。得られた粗パートリシンＢメチルエステルは、特
公昭55−50960号公報の記載の方法で精製し、5mgの精製
物を乾燥品として得た。本化合物は、以下の物理化学的
性質を示しパートリシンＢメチルエステル（特公昭55−
50960号公報記載の物質）と同定された。
（１） 性 状：黄色粉末 （２） 分子量:1126（FABMSにより測定） （３） 分子式:C59H86N2O19 （４） UVmax :401,378,359,340nm 更に、赤外吸収スペクトルにおいてメチルエステルの
Ｃ＝０に由来する1715cm-1の吸収が観察され、1H−NMR
においてエステル基の存在によるメチル基の3.25ppmの
特徴的なピークが認められた。
Ｃ＝０に由来する1715cm-1の吸収が観察され、1H−NMR
においてエステル基の存在によるメチル基の3.25ppmの
特徴的なピークが認められた。
上記方法で得た、パートリシンＢメチルエステル50mg
を４個のビーカーに入った10％ニコチン酸アミド1mlに
加えそれぞれ20分間室温で撹拌した所、透明な黄褐色溶
液が得られた。これらのpHをそれぞれ、3.0,5.4,6.5,8.
0に調整した後、凍結乾燥して黄褐色乾燥粉末を得た。
凍結乾燥粉末に水1mlを加え、1000r.p.m.,10分間遠心分
離し、その上清中のパートリシンＢメチルエステルをHP
LCで分析した結果は、第４表の通りであった。
を４個のビーカーに入った10％ニコチン酸アミド1mlに
加えそれぞれ20分間室温で撹拌した所、透明な黄褐色溶
液が得られた。これらのpHをそれぞれ、3.0,5.4,6.5,8.
0に調整した後、凍結乾燥して黄褐色乾燥粉末を得た。
凍結乾燥粉末に水1mlを加え、1000r.p.m.,10分間遠心分
離し、その上清中のパートリシンＢメチルエステルをHP
LCで分析した結果は、第４表の通りであった。
実施例４ アンホテリシンＢ（シグマ社製品）1mgを10％ニコチ
ンアミド水溶液1mlに加え、室温で60分間撹拌した所、
溶解して透明な黄色液が得られた。
ンアミド水溶液1mlに加え、室温で60分間撹拌した所、
溶解して透明な黄色液が得られた。
実施例５ アンホテリシンB10mgを実施例３と同様な方法でエス
テル化し、メチルエステル誘導体5mgを得た。このアン
ホテリシンＢメチルエステル誘導体5mgに10％ニコチン
アミド1mlを加え室温で60分間撹拌した所、黄色な透明
液が得られた。これを1000r.p.m.,10分間遠心分離し、
上清に溶解しているアンホテリシンＢメチルエステルの
量をHPLCで分析した所、5.0mg/mlであった。更に上清0.
5mlを凍結乾燥し黄色粉末を得た。これに水を0.5ml加え
撹拌した所、溶解して黄色透明液が得られた。
テル化し、メチルエステル誘導体5mgを得た。このアン
ホテリシンＢメチルエステル誘導体5mgに10％ニコチン
アミド1mlを加え室温で60分間撹拌した所、黄色な透明
液が得られた。これを1000r.p.m.,10分間遠心分離し、
上清に溶解しているアンホテリシンＢメチルエステルの
量をHPLCで分析した所、5.0mg/mlであった。更に上清0.
5mlを凍結乾燥し黄色粉末を得た。これに水を0.5ml加え
撹拌した所、溶解して黄色透明液が得られた。
実施例６ 第１表に示す組成の培地1klを加熱殺菌して発酵槽に
入れ、これにストレプトミセス・アレネ（Streptomyces
arenae）（FERM P−8099）を接種して28℃で３日間培
養した。培養後、遠心分離にて菌糸を集め、これにMeOH
100を加えた。酢酸でpH6.0に調節し、室温で24時間放
置した。次いで、濾過し、得られた濾液100を40℃で
減圧下10まで濃縮した。遠心分離して沈澱物を集め、
凍結乾燥して、100gの粗Ｖ−28−３（純度65％）が得ら
れた。
入れ、これにストレプトミセス・アレネ（Streptomyces
arenae）（FERM P−8099）を接種して28℃で３日間培
養した。培養後、遠心分離にて菌糸を集め、これにMeOH
100を加えた。酢酸でpH6.0に調節し、室温で24時間放
置した。次いで、濾過し、得られた濾液100を40℃で
減圧下10まで濃縮した。遠心分離して沈澱物を集め、
凍結乾燥して、100gの粗Ｖ−28−３（純度65％）が得ら
れた。
粗Ｖ−28−3 100gを逆相分配高速液体クロマトグラフ
ィー（カプセル・パックODSカラム、資生堂社製）によ
り精製し、80gの精製Ｖ−28−３（純度98％）乾燥物を
得た。精製Ｖ−28−３の理化学的性質を調べたところ、
分子量1112（MSにより測定した）で が404（150,380）,380（130,700）,361（82,900）,342
（44,440）でTLC（ワットマンPLKC18F）でのRf値が0.23
で特開昭61−189224号公報に示されているＶ−28−３と
一致した。
ィー（カプセル・パックODSカラム、資生堂社製）によ
り精製し、80gの精製Ｖ−28−３（純度98％）乾燥物を
得た。精製Ｖ−28−３の理化学的性質を調べたところ、
分子量1112（MSにより測定した）で が404（150,380）,380（130,700）,361（82,900）,342
（44,440）でTLC（ワットマンPLKC18F）でのRf値が0.23
で特開昭61−189224号公報に示されているＶ−28−３と
一致した。
上記方法で得たＶ−28−3 1mgを10％ニコチン酸アミ
ド溶液1mlに加えた所、黄褐色透明液が得られた。HPLC
で溶解したＶ−28−３を測定した所1mg/mlであった。同
様に、Ｖ−28−3 1mgを水1mgに加えた所、黄褐色物質が
沈澱した状態であり、3000r.p.m.,5分間遠心分離して得
た上清は無色透明であった。HPLCでこの上清を分析した
所Ｖ−28−３は検出されなかった。
ド溶液1mlに加えた所、黄褐色透明液が得られた。HPLC
で溶解したＶ−28−３を測定した所1mg/mlであった。同
様に、Ｖ−28−3 1mgを水1mgに加えた所、黄褐色物質が
沈澱した状態であり、3000r.p.m.,5分間遠心分離して得
た上清は無色透明であった。HPLCでこの上清を分析した
所Ｖ−28−３は検出されなかった。
実施例７ 実施例６で得たＶ−28−3 40gを実施例３で示したと
同様な方法でエステル化しＶ−28−3M 12gを得た。得ら
れたＶ−28−3Mは黄色粉末で、分子量はFABMSで測定し
て1126であった。1H−NMRスペクトル、13C−NMRスペク
トルも特開昭63−218686号公報に示された物質と一致し
Ｖ−28−3Mと同定された。
同様な方法でエステル化しＶ−28−3M 12gを得た。得ら
れたＶ−28−3Mは黄色粉末で、分子量はFABMSで測定し
て1126であった。1H−NMRスペクトル、13C−NMRスペク
トルも特開昭63−218686号公報に示された物質と一致し
Ｖ−28−3Mと同定された。
上記方法で得られたＶ−28−3M 50mgを10％ニコチン
酸アミド水溶液1mlに加えた所黄褐色透明液が得られ
た。これを遠心分離（3000r.p.m.,5分間）後、HPLCで分
析した所Ｖ−28−3M 50mg/mlの溶液であった。
酸アミド水溶液1mlに加えた所黄褐色透明液が得られ
た。これを遠心分離（3000r.p.m.,5分間）後、HPLCで分
析した所Ｖ−28−3M 50mg/mlの溶液であった。
実施例８ 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3M 50mgをそれ
ぞれ０％,1％,5％,10％,20％のニコチン酸アミド水溶液
1mlに投入し、室温で５分間撹拌後、遠心分離（3000r.
p.m.,5分間）し上清中に溶解しているＶ−28−3M量をHP
LCで測定した結果第５表の通りであった。
ぞれ０％,1％,5％,10％,20％のニコチン酸アミド水溶液
1mlに投入し、室温で５分間撹拌後、遠心分離（3000r.
p.m.,5分間）し上清中に溶解しているＶ−28−3M量をHP
LCで測定した結果第５表の通りであった。
更に、Ｖ−28−3M 50mgを５％ニコチン酸アミド水溶
液1mlに投入し、50℃で５分間撹拌後、遠心分離（3000
r.p.m.,5分間）し上清中に溶解しているＶ−28−3MをHP
LCで測定した所50mg/mlであった。
液1mlに投入し、50℃で５分間撹拌後、遠心分離（3000
r.p.m.,5分間）し上清中に溶解しているＶ−28−3MをHP
LCで測定した所50mg/mlであった。
実施例９ 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3Mの50mg/ml溶
液（pH5.0）1mlを凍結乾燥した。乾燥物は黄色粉末であ
り水1mlを加えた所溶解して黄色透明液となった。この
溶液をHPLCで分析した所50mg/mlのＶ−28−3Mを含んで
いた。
液（pH5.0）1mlを凍結乾燥した。乾燥物は黄色粉末であ
り水1mlを加えた所溶解して黄色透明液となった。この
溶液をHPLCで分析した所50mg/mlのＶ−28−3Mを含んで
いた。
同様にして得られた凍結乾燥物（50mgのＶ−28−3M含
有）に５％グルコース水溶液1mlを加えた所、黄色澄明
な液となった。更に、同様にして得られた凍結乾燥物に
５％グルコース水溶液10mlを加えた所黄色澄明な液が得
られた。
有）に５％グルコース水溶液1mlを加えた所、黄色澄明
な液となった。更に、同様にして得られた凍結乾燥物に
５％グルコース水溶液10mlを加えた所黄色澄明な液が得
られた。
実施例10 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3Mのニコチン酸
アミド溶解液、及びジメチルスルホキシド溶解液各50mg
/mlのそれぞれについて、−20℃,4℃,20℃で暗所下20時
間の保存安定性試験をした結果、第６表の通りであっ
た。
アミド溶解液、及びジメチルスルホキシド溶解液各50mg
/mlのそれぞれについて、−20℃,4℃,20℃で暗所下20時
間の保存安定性試験をした結果、第６表の通りであっ
た。
実施例11 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3Mの50mgとニコ
チン酸アミド100mgを粉体状のまま混合し、そこに水1ml
を加え、室温で撹拌した所、50mg/mlの澄明な黄色溶液
が得られた。
チン酸アミド100mgを粉体状のまま混合し、そこに水1ml
を加え、室温で撹拌した所、50mg/mlの澄明な黄色溶液
が得られた。
実施例12 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3Mの5mgづつ
を、10％ニコチン酸アミドメタノール溶液の1ml、10％
ニコチン酸アミドエタノール溶液の1ml、10％ニコチン
酸アミドアセトン溶液の1mlの各々に投入し、室温で撹
拌後、遠心分離（3,000r.p.m.,5分間）後、上清中のＶ
−28−3M量をHPLCで測定した結果、第７表の通りであっ
た。
を、10％ニコチン酸アミドメタノール溶液の1ml、10％
ニコチン酸アミドエタノール溶液の1ml、10％ニコチン
酸アミドアセトン溶液の1mlの各々に投入し、室温で撹
拌後、遠心分離（3,000r.p.m.,5分間）後、上清中のＶ
−28−3M量をHPLCで測定した結果、第７表の通りであっ
た。
実施例13 実施例７と同様な方法で得たＶ−28−3Mの50mg/mlニ
コチン酸アミド溶解液を水で100μg/mlに希釈し、その5
0μをペーパーディスクにしみこませた。別に、Ｖ−2
8−3Mをジメチルスルホキシドに溶解し、水で希釈し100
μg/ml（但し、ジメチルスルホキシド濃度として１％）
の溶液を作成し、その50μを同様にペーパーディスク
にしみこませた。これらのディスクを用いてCandida al
bicans ATCC 10231を用いてディスク法により抗菌力を
測定した所、いずれの処方のディスクも直径12mmの生育
阻止円を与えた。
コチン酸アミド溶解液を水で100μg/mlに希釈し、その5
0μをペーパーディスクにしみこませた。別に、Ｖ−2
8−3Mをジメチルスルホキシドに溶解し、水で希釈し100
μg/ml（但し、ジメチルスルホキシド濃度として１％）
の溶液を作成し、その50μを同様にペーパーディスク
にしみこませた。これらのディスクを用いてCandida al
bicans ATCC 10231を用いてディスク法により抗菌力を
測定した所、いずれの処方のディスクも直径12mmの生育
阻止円を与えた。
本発明によれば、水難溶性のポリエンを易溶にするこ
とができ、しかも、保存安定性、安全性にも優れ、か
つ、抗菌活性も維持されることから、ポリエン系製剤と
しての利用も含め、医薬産業上大いに貢献することが期
待される。
とができ、しかも、保存安定性、安全性にも優れ、か
つ、抗菌活性も維持されることから、ポリエン系製剤と
しての利用も含め、医薬産業上大いに貢献することが期
待される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ０７Ｈ 17/08 Ｋ Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ０７Ｈ 17/08 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 31/71 A61K 31/035 A61K 47/22 C12P 1/04 C12R 1/465 C07H 17/08
Claims (3)
- 【請求項１】ニコチン酸アミドとポリエンを含有する抗
菌剤組成物 - 【請求項２】ポリエンがＶ−28−３またはそのエステル
誘導体、パートリシンまたはそのエステル誘導体及びア
ンホテリシンＢまたはそのエステル誘導体の少なくとも
一種から選ばれる請求項１に記載の組成物 - 【請求項３】ポリエンに対するニコチン酸アミドの重量
比率が１以上である請求項１に記載の組成物
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1331953A JP2830243B2 (ja) | 1989-12-21 | 1989-12-21 | ポリエン含有組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1331953A JP2830243B2 (ja) | 1989-12-21 | 1989-12-21 | ポリエン含有組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03190819A JPH03190819A (ja) | 1991-08-20 |
| JP2830243B2 true JP2830243B2 (ja) | 1998-12-02 |
Family
ID=18249488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1331953A Expired - Lifetime JP2830243B2 (ja) | 1989-12-21 | 1989-12-21 | ポリエン含有組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2830243B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5981721A (en) * | 1997-10-23 | 1999-11-09 | Karykion Corporation | Polyene macrolide schiff bases, their alkyl esters and processes for preparing polyene macrolide alkyl ester salts thereof |
| IT1301807B1 (it) * | 1998-06-25 | 2000-07-07 | Tiberio Bruzzese | Formulazioni farmaceutiche iniettabili di derivati della partricina. |
| CN106390130B (zh) * | 2016-09-18 | 2018-06-01 | 中国人民解放军第二军医大学 | 烟酰胺作为抗真菌药物增效剂的用途 |
-
1989
- 1989-12-21 JP JP1331953A patent/JP2830243B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03190819A (ja) | 1991-08-20 |
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