JP2789879B2 - 植物カルス細胞分化剤の製造法 - Google Patents
植物カルス細胞分化剤の製造法Info
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- JP2789879B2 JP2789879B2 JP3242621A JP24262191A JP2789879B2 JP 2789879 B2 JP2789879 B2 JP 2789879B2 JP 3242621 A JP3242621 A JP 3242621A JP 24262191 A JP24262191 A JP 24262191A JP 2789879 B2 JP2789879 B2 JP 2789879B2
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- cell differentiation
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、植物カルス細胞分化剤
の製造法に関する。更に詳しくは、微生物を培養して植
物カルス細胞分化剤を製造する方法に関する。
の製造法に関する。更に詳しくは、微生物を培養して植
物カルス細胞分化剤を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】分化した植物組織の一部(外植片)を適当
な培地に移して培養すると脱分化が起こり、細胞分裂を
くり返して無定形の組織塊である植物カルスを生ずる。
外植片からカルスを誘導し、増殖するには、一般に基本
培地に植物ホルモンであるサイトカイニン類(カイネチ
ンなど)またはオーキシン類(2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、インドール酢酸、インドール酪酸など)が添加され
て用いられる。
な培地に移して培養すると脱分化が起こり、細胞分裂を
くり返して無定形の組織塊である植物カルスを生ずる。
外植片からカルスを誘導し、増殖するには、一般に基本
培地に植物ホルモンであるサイトカイニン類(カイネチ
ンなど)またはオーキシン類(2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、インドール酢酸、インドール酪酸など)が添加され
て用いられる。
【０００３】このように、現在植物カルス細胞の再分化
には、種々の植物ホルモンが使用されているが、その際
厳密な濃度のコントロールが要求され、そのため多くの
実験例を必要とし、また培地の選択が難しいなどの難点
がある。
には、種々の植物ホルモンが使用されているが、その際
厳密な濃度のコントロールが要求され、そのため多くの
実験例を必要とし、また培地の選択が難しいなどの難点
がある。
【０００４】本発明者は先に、このような難点のみられ
ない植物カルス細胞分化剤の製造法として、微生物を培
養して植物カルス細胞分化剤を製造する方法を提案して
いる(特開昭63-207,379号公報)。
ない植物カルス細胞分化剤の製造法として、微生物を培
養して植物カルス細胞分化剤を製造する方法を提案して
いる(特開昭63-207,379号公報)。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】この提案された方法で
は、微生物としてエンターバクター属に属するＥｎｔｅ
ｒｏ−ｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ Ｎｏ．１１−５
（ＦＥＲＭ Ｐ−８８８４）が用いられ、その培養は好
ましくはトリプトファンの存在下において行われ、得ら
れた植物カルス細胞分化剤は、イネカルス細胞やレッド
キャベツカルス細胞の再分化に有効である。
は、微生物としてエンターバクター属に属するＥｎｔｅ
ｒｏ−ｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ Ｎｏ．１１−５
（ＦＥＲＭ Ｐ−８８８４）が用いられ、その培養は好
ましくはトリプトファンの存在下において行われ、得ら
れた植物カルス細胞分化剤は、イネカルス細胞やレッド
キャベツカルス細胞の再分化に有効である。
【０００６】 本発明の目的は、エンターバクター属に
属する他の微生物を用い、その培養をアデニンの存在下
で行い、ワサビカルス細胞、カーネーションカルス細
胞、ダイズカルス細胞などの再分化に有効な植物カルス
細胞分化剤の製造法を提供することにある。
属する他の微生物を用い、その培養をアデニンの存在下
で行い、ワサビカルス細胞、カーネーションカルス細
胞、ダイズカルス細胞などの再分化に有効な植物カルス
細胞分化剤の製造法を提供することにある。
【０００７】
【０００８】
【課題を解決するための手段】かかる本発明の目的は、
下記の微生物をアデニンの存在下で培養し、培養液中の
菌を死滅させた後、植物カルス細胞分化剤を採取する植
物カルス細胞分化剤の製造法によって達成される。
下記の微生物をアデニンの存在下で培養し、培養液中の
菌を死滅させた後、植物カルス細胞分化剤を採取する植
物カルス細胞分化剤の製造法によって達成される。
【０００９】 ［微生物１］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ
Ｎｏ．３０５−０５（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０４）静岡
県天城湯ヶ島町の温泉水中から採取 ［微生物２］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．２０３−０５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０５）長野県小谷村の温泉水中
から採取 ［微生物３］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３１０−０３
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０９）石川県白峰村の温泉水中
から採取 ［微生物４］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３０８−０３
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０８）石川県白峰村の温泉水中
から採取 ［微生物５］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３１５−０５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０７）石川県吉野谷村の温泉水
中から採取 ［微生物６］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．２１３−０９
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０６）長野県安曇村の温泉水中
から採取
Ｎｏ．３０５−０５（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０４）静岡
県天城湯ヶ島町の温泉水中から採取 ［微生物２］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．２０３−０５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０５）長野県小谷村の温泉水中
から採取 ［微生物３］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３１０−０３
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０９）石川県白峰村の温泉水中
から採取 ［微生物４］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３０８−０３
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０８）石川県白峰村の温泉水中
から採取 ［微生物５］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３１５−０５
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０７）石川県吉野谷村の温泉水
中から採取 ［微生物６］ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．２１３−０９
（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０６）長野県安曇村の温泉水中
から採取
【００１０】 これらの温泉水からの各微生物の分離
は、Ｌ−ブイヨン（トリプトン１％、酵母エキス０．５
％、ＮａＣｌ ０．５％、殺菌前のｐＨ７．２）５ｍｌ
を試験管に入れ、これに温泉水１ｍｌを添加して、４０
℃（微生物３〜６）または３７℃（微生物１、２）で２
４時間振とう培養することにより行われた。
は、Ｌ−ブイヨン（トリプトン１％、酵母エキス０．５
％、ＮａＣｌ ０．５％、殺菌前のｐＨ７．２）５ｍｌ
を試験管に入れ、これに温泉水１ｍｌを添加して、４０
℃（微生物３〜６）または３７℃（微生物１、２）で２
４時間振とう培養することにより行われた。
【００１１】 これらの各微生物は、下記表１に示され
るような菌学的性質を有し、このような菌学的性質に基
いて、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌｏｆ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第９
版により検索した結果、エンターバクター属に属する菌
であることが確認された。
るような菌学的性質を有し、このような菌学的性質に基
いて、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌｏｆ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第９
版により検索した結果、エンターバクター属に属する菌
であることが確認された。
【００１２】
【表１】
【００１３】
【００１４】なお、糖からの酸の生成では、次の培地
で、添加濃度1%で試験された。 ペプトン2g、NaCl 5g、K2HPO4 0.3g、炭水化物10g、ブ
ロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水1000ml(pH
7.1)
で、添加濃度1%で試験された。 ペプトン2g、NaCl 5g、K2HPO4 0.3g、炭水化物10g、ブ
ロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水1000ml(pH
7.1)
【００１５】 各微生物の培養は、任意の培地を用い、
振とう条件下で４０℃または３７℃で約７２〜９０時間
程度行われる。その際、培地１リットル当り約０．５〜
５ｍｇ程度のアデニンを添加しておくと、それから得ら
れる植物カルス細胞分化剤の再分化作用は一層高められ
る。培養後は、培養液に塩酸によって代表される無機酸
などを加えて菌を死滅させ、その上澄液を細胞分化剤と
して採取する。
振とう条件下で４０℃または３７℃で約７２〜９０時間
程度行われる。その際、培地１リットル当り約０．５〜
５ｍｇ程度のアデニンを添加しておくと、それから得ら
れる植物カルス細胞分化剤の再分化作用は一層高められ
る。培養後は、培養液に塩酸によって代表される無機酸
などを加えて菌を死滅させ、その上澄液を細胞分化剤と
して採取する。
【００１６】かかる植物カルス細胞分化剤を用いての植
物カルス細胞の再分化は Murashige& Skoog 培地(1962)
などを基本培地に用い、これに上記細胞分化剤を基本培
地１リットル当り約4〜16ml添加したものに、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞、ダイズカルス細
胞などの植物カルス細胞をピンセットなどで移し、光の
照射下(約10〜16時間明条件下)に、25〜30℃で約1〜2ヶ
月間培養することにより行われる。
物カルス細胞の再分化は Murashige& Skoog 培地(1962)
などを基本培地に用い、これに上記細胞分化剤を基本培
地１リットル当り約4〜16ml添加したものに、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞、ダイズカルス細
胞などの植物カルス細胞をピンセットなどで移し、光の
照射下(約10〜16時間明条件下)に、25〜30℃で約1〜2ヶ
月間培養することにより行われる。
【００１７】
【発明の効果】本発明により、上記の如き各種植物カル
ス細胞分化剤として有効な、植物ホルモン様の活性を有
する物質が、微生物の培養物から得られる。この細胞分
化剤は、その濃度のコントロールおよび培地の選択の点
において従来の植物ホルモンの場合程厳格さを要せず、
またその活性も大である。
ス細胞分化剤として有効な、植物ホルモン様の活性を有
する物質が、微生物の培養物から得られる。この細胞分
化剤は、その濃度のコントロールおよび培地の選択の点
において従来の植物ホルモンの場合程厳格さを要せず、
またその活性も大である。
【００１８】次に、実施例について本発明を説明する。
【００１９】 参考例１〜６ 前記微生物１〜６を、次の組成を有するＬ−ブイヨン培
地（１０ｍｌ）を用いて、振とう回数１２０ｒｐｍで振
とうさせながら、４０℃で７０時間培養した。 トリプトン １０．０ｇ 酵母エキス ５．０ｇ ＮａＣｌ ５．０ｇ 蒸留水（ｐＨ７．０） １０００ｍｌ
地（１０ｍｌ）を用いて、振とう回数１２０ｒｐｍで振
とうさせながら、４０℃で７０時間培養した。 トリプトン １０．０ｇ 酵母エキス ５．０ｇ ＮａＣｌ ５．０ｇ 蒸留水（ｐＨ７．０） １０００ｍｌ
【００２０】 これらの培養液に、１Ｎ塩酸５００μｌ
を加えて菌を死滅させ、遠心機（１００００ｒｐｍ、１
０分間、４℃）で集菌し、上澄液を採取して、細胞分化
剤Ｉ〜ＶＩとした。
を加えて菌を死滅させ、遠心機（１００００ｒｐｍ、１
０分間、４℃）で集菌し、上澄液を採取して、細胞分化
剤Ｉ〜ＶＩとした。
【００２１】 実施例１ 微生物２を用いた培養の際、最終濃度が０．５ｍｇ／ｍ
ｌになる量のアデニンが培地成分として更に添加されて
用いられ、細胞分化剤ＩＩａを得た。
ｌになる量のアデニンが培地成分として更に添加されて
用いられ、細胞分化剤ＩＩａを得た。
【００２２】 実施例２ 微生物４を用いた培養の際、最終濃度が０．５ｍｇ／ｍ
ｌになる量のアデニンが培地成分として更に添加されて
用いられ、細胞分化剤ＩＶａを得た。
ｌになる量のアデニンが培地成分として更に添加されて
用いられ、細胞分化剤ＩＶａを得た。
【００２３】
【００２４】
【００２５】
【００２６】
【００２７】 以上の各参考例および実施例で得られた
細胞分化剤を、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇ培
地（培地１リットル当りｍｅｓｏ−イノシトール１００
ｍｇ、しょ糖３０ｇおよびチアミン塩酸塩０．４ｍｇを
添加；ＭＳ培地）１リットル当り４ｍｌ添加し、ワサビ
カルス細胞またはカーネーションカルス細胞の再分化テ
ストを行った。
細胞分化剤を、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇ培
地（培地１リットル当りｍｅｓｏ−イノシトール１００
ｍｇ、しょ糖３０ｇおよびチアミン塩酸塩０．４ｍｇを
添加；ＭＳ培地）１リットル当り４ｍｌ添加し、ワサビ
カルス細胞またはカーネーションカルス細胞の再分化テ
ストを行った。
【００２８】再分化テストは、約100mgのカルス細胞を
用い、25℃、30日間、4000ルックスのライトを連続的に
照射しながら行い、４サンプル中何個のサンプルが分化
(根分化)したかを観察することによって行われ、次の表
３に示されるような結果を得た。
用い、25℃、30日間、4000ルックスのライトを連続的に
照射しながら行い、４サンプル中何個のサンプルが分化
(根分化)したかを観察することによって行われ、次の表
３に示されるような結果を得た。
【００２９】
【表３】
【００３０】 比較例 各参考例および実施例で用いられた細胞分化剤の代わり
に、ＭＳ培地に対してそれぞれ１ｐｐｍの（ア）２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸、（イ）インドール酢酸、
（ウ）ナフチル酢酸、（エ）６−ベンジルアデニンまた
は（オ）カイネチンである植物ホルモンを用いて、上記
２種の植物カルス細胞の再分化テストを行った。
に、ＭＳ培地に対してそれぞれ１ｐｐｍの（ア）２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸、（イ）インドール酢酸、
（ウ）ナフチル酢酸、（エ）６−ベンジルアデニンまた
は（オ）カイネチンである植物ホルモンを用いて、上記
２種の植物カルス細胞の再分化テストを行った。
【００３１】 ワサビカルス細胞に対しては、（ア）、
（エ）が０、（イ）、（オ）が１、（ウ）が２という分
化サンプル数が得られたが、カーネーションカルス細胞
に対しては、いずれも０であった。
（エ）が０、（イ）、（オ）が１、（ウ）が２という分
化サンプル数が得られたが、カーネーションカルス細胞
に対しては、いずれも０であった。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 1/00 - 1/38 C12N 5/00 - 5/28 C12P 1/00 A01N 63/02 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 エンターバクター属に属する微生物 Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ Ｎ
ｏ．３０５−０５（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０４）、Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．２０３−０５（Ｆ
ＥＲＭＰ−１２４０５）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ Ｎｏ．３１０−０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０
９）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３０８
−０３（ＦＥＲＭＰ−１２４０８）、Ｅｎｔｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｓｐ Ｎｏ．３１５−０５（ＦＥＲＭ Ｐ−
１２４０７）またはＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐＮ
ｏ．２１３−０９（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０６）をアデ
ニンの存在下で培養し、培養液中の菌を死滅させた後、
植物カルス細胞分化剤を採取することを特徴とする植物
カルス細胞分化剤の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3242621A JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3242621A JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10051465A Division JP2998736B2 (ja) | 1998-02-17 | 1998-02-17 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
| JP10051466A Division JP3013835B2 (ja) | 1998-02-17 | 1998-02-17 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0549470A JPH0549470A (ja) | 1993-03-02 |
| JP2789879B2 true JP2789879B2 (ja) | 1998-08-27 |
Family
ID=17091783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3242621A Expired - Lifetime JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2789879B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001302427A (ja) * | 2000-04-25 | 2001-10-31 | Nok Corp | 植物生長促進剤およびこれを用いた植物生長促進方法 |
| US7479267B2 (en) | 2000-04-25 | 2009-01-20 | Okayama Prefecture | Cell-or organ-differentiation controllers and method of controlling morphogenesis by using the same |
| US8999888B2 (en) | 2006-12-11 | 2015-04-07 | Japan Science And Technology Agency | Plant growth regulator and use thereof |
| KR101703180B1 (ko) | 2011-12-12 | 2017-02-06 | 오카야마켄 | 식물의 아미노산 함량을 높이기 위한 화합물 및 그 이용 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0797985B2 (ja) * | 1987-02-20 | 1995-10-25 | エヌオーケー株式会社 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
-
1991
- 1991-08-28 JP JP3242621A patent/JP2789879B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0549470A (ja) | 1993-03-02 |
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