JP2681369B2 - ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬 - Google Patents
ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬Info
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- C07D491/04—Ortho-condensed systems
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D249/16—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D249/18—Benzotriazoles
- C07D249/20—Benzotriazoles with aryl radicals directly attached in position 2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 カルボン酸類は炭水化物、脂質、蛋白質の代謝産物と
して広く生体内に存在し、それぞれ重要な役割を果たし
ている。本発明は、これらのカルボン酸類の微量分析に
適した化合物およびそれを含有する螢光ラベル化剤に関
するものである。
して広く生体内に存在し、それぞれ重要な役割を果たし
ている。本発明は、これらのカルボン酸類の微量分析に
適した化合物およびそれを含有する螢光ラベル化剤に関
するものである。
従来の技術 最近では、広範な生理活性を有するプロスタグランジ
ンやコレステロールより生成される胆汁酸、あるい先天
性代謝異常の診断・治療に重要と考えられるオキシ酸や
ケト酸等が注目されており、これらの簡便、迅速かつ高
感度な測定法の開発が望まれている。
ンやコレステロールより生成される胆汁酸、あるい先天
性代謝異常の診断・治療に重要と考えられるオキシ酸や
ケト酸等が注目されており、これらの簡便、迅速かつ高
感度な測定法の開発が望まれている。
二村らは９−アンスリルジアゾメタンを開示している
（N.Nimura,T.Kinosita:Anal.Lett.,13,191（198
0））。９−アンスリルジアゾメタンは室温でカルボン
酸類と反応するという利点があるが、比較的不安定で使
用時の試薬由来の妨害がしばしば問題になっている。
（N.Nimura,T.Kinosita:Anal.Lett.,13,191（198
0））。９−アンスリルジアゾメタンは室温でカルボン
酸類と反応するという利点があるが、比較的不安定で使
用時の試薬由来の妨害がしばしば問題になっている。
土屋らは、７−アセトキシ−４−ブロモメチルクマリ
ン（ABMC）を用いてカルボン酸をラベルし、逆相HPLCで
分離後、溶出液にアルカリを加え、加水分解して生成す
る７−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルクマリンを螢
光検出する方法を開示している（H.Tsuchiya et al:J.C
hroma−togr.,234,121（1982））。この方法は移動相溶
媒の影響を受けず、検出限界が高い（数＋fmol）という
利点があるが、カルボン酸類とABMCの反応に加熱を要し
たり、分離後のアルカリ加水分解等、操作が繁雑になる
等の欠点もある。
ン（ABMC）を用いてカルボン酸をラベルし、逆相HPLCで
分離後、溶出液にアルカリを加え、加水分解して生成す
る７−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルクマリンを螢
光検出する方法を開示している（H.Tsuchiya et al:J.C
hroma−togr.,234,121（1982））。この方法は移動相溶
媒の影響を受けず、検出限界が高い（数＋fmol）という
利点があるが、カルボン酸類とABMCの反応に加熱を要し
たり、分離後のアルカリ加水分解等、操作が繁雑になる
等の欠点もある。
発明が解決しようとする課題 本発明者らは以上の点に鑑み、緩和な条件下で反応
し、かつ高感度で試薬自体による分析への妨害のないラ
ベル化剤の開発を意図し、本発明を完成した。
し、かつ高感度で試薬自体による分析への妨害のないラ
ベル化剤の開発を意図し、本発明を完成した。
課題を解決する手段 本発明が提供する次式： ［式中、R1はC1〜C5アルキレンを意味し、R2およびR3は
互いに同一または異なって、水素、C1〜C5アルキル、C1
〜C5アルキルオキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−C1〜
C5アルキルアミノ（但し、同時に水素である場合を除
く。）を意味するか、または一緒になってC1〜C5アルキ
レンジオキシを形成し、R4は水素またはC1〜C5アルキル
を意味する。］で表わされる化合物またはその塩（以
下、単に本発明化合物という）は、縮合剤の存在下、室
温でカルボン酸類と短時間に反応する。反応物は強い螢
光を有するアミド体であり、過剰の試薬は容易に除去さ
れる。このように、本発明化合物はカルボン酸類の簡
便、迅速かつ高感度な測定法を可能にした有用な化合物
である。
互いに同一または異なって、水素、C1〜C5アルキル、C1
〜C5アルキルオキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−C1〜
C5アルキルアミノ（但し、同時に水素である場合を除
く。）を意味するか、または一緒になってC1〜C5アルキ
レンジオキシを形成し、R4は水素またはC1〜C5アルキル
を意味する。］で表わされる化合物またはその塩（以
下、単に本発明化合物という）は、縮合剤の存在下、室
温でカルボン酸類と短時間に反応する。反応物は強い螢
光を有するアミド体であり、過剰の試薬は容易に除去さ
れる。このように、本発明化合物はカルボン酸類の簡
便、迅速かつ高感度な測定法を可能にした有用な化合物
である。
本発明化合物は非プロトン性溶媒中、縮合剤および塩
基、またはそれに代わる酸捕捉剤の存在下、室温にて約
30分でカルボン酸類と反応し、対応する強い螢光を有す
るアミド体を生成する。また、過剰の試薬は前処理用シ
リカカラムに反応液と通すことにより容易に除去できる
ものである。本発明化合物は脂肪族、芳香族を問わず広
範囲なカルボン酸類と反応する。置換基R2およびR3は電
子供与性が強ければ、化合物の螢光性が強くなり、好ま
しい。
基、またはそれに代わる酸捕捉剤の存在下、室温にて約
30分でカルボン酸類と反応し、対応する強い螢光を有す
るアミド体を生成する。また、過剰の試薬は前処理用シ
リカカラムに反応液と通すことにより容易に除去できる
ものである。本発明化合物は脂肪族、芳香族を問わず広
範囲なカルボン酸類と反応する。置換基R2およびR3は電
子供与性が強ければ、化合物の螢光性が強くなり、好ま
しい。
本発明化合物は有機化学の公知の反応を用いて容易に
製造可能である。例えば、以下に示すように、置換−ア
ニリン（ａ）と適当な保護基で保護されたアミノアルキ
ル基を有するジアゾ化合物（ｂ）とを公知のジアゾカッ
プリング反応（第１工程）、酸化的閉環反応（第２工
程）、続いて脱保護（第３工程）に付して本発明化合物
（Ｉ）を得る事ができる。
製造可能である。例えば、以下に示すように、置換−ア
ニリン（ａ）と適当な保護基で保護されたアミノアルキ
ル基を有するジアゾ化合物（ｂ）とを公知のジアゾカッ
プリング反応（第１工程）、酸化的閉環反応（第２工
程）、続いて脱保護（第３工程）に付して本発明化合物
（Ｉ）を得る事ができる。
（式中、R1、R2、R3およびR4は前記と同意義であり、R5
は保護基を表わす。） 以下に各工程の説明をする。
は保護基を表わす。） 以下に各工程の説明をする。
（第１工程） 本反応は通常、氷冷下〜15℃にて水溶液中で行なう。
ジアゾ化合物（ｂ）に対応するアニリン誘導体を無機酸
に溶解または懸濁し、亜硝酸ナトリウム等の亜硝酸と反
応させて反応性に富んだジアゾ化合物（ｂ）を調製す
る。過剰の亜硝酸を除去するため、スルファミン酸や尿
素を添加してこれを分解する。
ジアゾ化合物（ｂ）に対応するアニリン誘導体を無機酸
に溶解または懸濁し、亜硝酸ナトリウム等の亜硝酸と反
応させて反応性に富んだジアゾ化合物（ｂ）を調製す
る。過剰の亜硝酸を除去するため、スルファミン酸や尿
素を添加してこれを分解する。
次いで、置換−アニリン化合物（ａ）を添加すれば容
易にジアゾ化合物（ｂ）とカップリングを起こして化合
物（ｃ）を与える。反応は数分〜数時間で完了する。
易にジアゾ化合物（ｂ）とカップリングを起こして化合
物（ｃ）を与える。反応は数分〜数時間で完了する。
（第２工程） 化合物（ｃ）のアゾ基は隣接するアミンと容易に酸化
的閉環し、トリアゾール化合物（ｄ）を与える。酸化的
閉環反応は銅・アンモニア錯体の存在下、含水有機溶媒
中で行なえば、室温〜加熱下、数分〜数十時間で完了す
る。
的閉環し、トリアゾール化合物（ｄ）を与える。酸化的
閉環反応は銅・アンモニア錯体の存在下、含水有機溶媒
中で行なえば、室温〜加熱下、数分〜数十時間で完了す
る。
（第３工程） 化合物（ｄ）を酸または塩基の存在下、含水有機溶媒
中で加水分解反応に付して本発明化合物（Ｉ）を得る。
反応は室温〜加熱下で数分〜数日間で完了する。
中で加水分解反応に付して本発明化合物（Ｉ）を得る。
反応は室温〜加熱下で数分〜数日間で完了する。
本発明において、C1〜C5アルキレンとは直鎖状C1〜C5
アルキレンを意味し、具体的にはメチレン、エチレン、
プロピレン、ブチレン、ペンチレンであり、とりわけメ
チレンまたはエチレンが好ましい。
アルキレンを意味し、具体的にはメチレン、エチレン、
プロピレン、ブチレン、ペンチレンであり、とりわけメ
チレンまたはエチレンが好ましい。
C1〜C5アルキルとは直鎖状または分枝状C1〜C5アルキ
ルを意味し、具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピ
ル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、tert−
ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルま
たはtert−ペンチル等が例示される。
ルを意味し、具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピ
ル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、tert−
ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルま
たはtert−ペンチル等が例示される。
保護基としてはアミンの保護基として公知のもの全て
が使用できるが、中でも酸に安定なものが望ましい。例
えば、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル等
が例示できる。
が使用できるが、中でも酸に安定なものが望ましい。例
えば、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル等
が例示できる。
以下に本発明化合物の代表例を列挙するが、本発明は
これらに限定されるものではない。
これらに限定されるものではない。
（１） ２−（ｐ−アミノメチルフェニル）−N,N−ジ
メチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン、 （２） ２−［ｐ−（２−アミノエチル）フェニル］−
N,N−ジメチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン
・２塩酸塩、 （３） ２−（ｐ−アミノメチルフェニル）−2H−ベン
ゾトリアゾリル−５−アミン、 （４） ｐ−（5,6−ジメトキシ−2H−ベンゾトリアゾ
ール−２−イル）ベンジルアミン、 （５） ２−［ｐ−（5,6−メチレンジオキシ−2H−ベ
ンゾトリアゾール−２−イル）］フェネチルアミン、 （６） ４−［ｍ−（５−プロポキシ−2H−ベンゾトリ
アゾール−２−イル）フェニル］ブチルアミン、 （７） ４−ブトキシ−２−［（３−ｍ−メチルアミノ
プロピル）フェニル］−2H−ベンゾトリアゾリル−５−
アミン、 （８） Ｎ−ブチル−５−［ｏ−（５−エトキシ−７−
ブチル−2H−ベンゾトリアゾール−２−イル）フェニ
ル］ペンチルアミン、 （９） Ｎ−イソプロピル−２−［ｍ−（5,6−エチレ
ンジオキシ−2H−ベンゾトリアゾール−２−イル）］フ
ェネチルアミン、および （10） ２−（ｏ−アミノメチルフェニル）−N,N−ジ
メチル−2H−ベンゾトリアゾリレン−5,6−ジアミン。
メチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン、 （２） ２−［ｐ−（２−アミノエチル）フェニル］−
N,N−ジメチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン
・２塩酸塩、 （３） ２−（ｐ−アミノメチルフェニル）−2H−ベン
ゾトリアゾリル−５−アミン、 （４） ｐ−（5,6−ジメトキシ−2H−ベンゾトリアゾ
ール−２−イル）ベンジルアミン、 （５） ２−［ｐ−（5,6−メチレンジオキシ−2H−ベ
ンゾトリアゾール−２−イル）］フェネチルアミン、 （６） ４−［ｍ−（５−プロポキシ−2H−ベンゾトリ
アゾール−２−イル）フェニル］ブチルアミン、 （７） ４−ブトキシ−２−［（３−ｍ−メチルアミノ
プロピル）フェニル］−2H−ベンゾトリアゾリル−５−
アミン、 （８） Ｎ−ブチル−５−［ｏ−（５−エトキシ−７−
ブチル−2H−ベンゾトリアゾール−２−イル）フェニ
ル］ペンチルアミン、 （９） Ｎ−イソプロピル−２−［ｍ−（5,6−エチレ
ンジオキシ−2H−ベンゾトリアゾール−２−イル）］フ
ェネチルアミン、および （10） ２−（ｏ−アミノメチルフェニル）−N,N−ジ
メチル−2H−ベンゾトリアゾリレン−5,6−ジアミン。
以下に実施例および実施例を示し、本発明を更に詳し
く説明するが、これらは本発明を何等限定するものでは
ない。
く説明するが、これらは本発明を何等限定するものでは
ない。
実施例 以下に示す実施例１〜５で本発明化合物１〜５を製造
した。物理恒数を表１に示す。
した。物理恒数を表１に示す。
実施例１ ２−（ｐ−アミノエチルフェニル）−N,N−ジメチル−2
H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン（１）の製造 Ｎ−（ｐ−アミノベンジル）アセトアミド（6.6g）を
10％塩酸100mlに溶かし、氷冷下、撹拌しながら10％亜
硝酸ナトリウム水溶液（30ml）を加えた。15分後、10％
スルファミン酸アンモニウム水溶液（50ml）を加え、さ
らに15分撹拌した。酢酸ナトリウムにて反応液の液性を
約pH5とした後、N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミ
ン２塩酸塩（8.4g）を加え、さらに４時間撹拌した。
H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン（１）の製造 Ｎ−（ｐ−アミノベンジル）アセトアミド（6.6g）を
10％塩酸100mlに溶かし、氷冷下、撹拌しながら10％亜
硝酸ナトリウム水溶液（30ml）を加えた。15分後、10％
スルファミン酸アンモニウム水溶液（50ml）を加え、さ
らに15分撹拌した。酢酸ナトリウムにて反応液の液性を
約pH5とした後、N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミ
ン２塩酸塩（8.4g）を加え、さらに４時間撹拌した。
1N水酸化ナトリウム水溶液にて反応液の液性を約pH9
とした後、析出物を濾取し、水で十分に洗った。ジメチ
ルホルムアミド／メタノール溶液より再結晶することに
より、アゾ化合物を融点138〜139℃の赤色プレート晶と
して得た。
とした後、析出物を濾取し、水で十分に洗った。ジメチ
ルホルムアミド／メタノール溶液より再結晶することに
より、アゾ化合物を融点138〜139℃の赤色プレート晶と
して得た。
このアゾ化合物（8.7g）をピリジン（100ml）に溶か
し、アンモニア性硫酸銅溶液（硫酸銅・５水和物を14％
アンモニア水150mlに溶かしたもの）を加えた後、４時
間還流した。反応終了後、冷却してから酢酸エチルにて
抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥
させた後、減圧下で濃縮した。含水エタノールより再結
晶することにより、化合物（１）のアセチル体を融点19
6〜197℃の黄色針状晶として得た。
し、アンモニア性硫酸銅溶液（硫酸銅・５水和物を14％
アンモニア水150mlに溶かしたもの）を加えた後、４時
間還流した。反応終了後、冷却してから酢酸エチルにて
抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥
させた後、減圧下で濃縮した。含水エタノールより再結
晶することにより、化合物（１）のアセチル体を融点19
6〜197℃の黄色針状晶として得た。
このアセチル体（7g）をエタノール（200ml）に溶か
した後、10％塩酸（50ml）を加え、５日間還流した。反
応終了後、全量が約50mlになるまで濃縮した後、濾過し
た。濾液を炭酸水素ナトリウムにて中和した後、析出物
を濾取し、水で十分洗った。メタノールより再結晶する
ことにより、目的化合物（１）を得た。
した後、10％塩酸（50ml）を加え、５日間還流した。反
応終了後、全量が約50mlになるまで濃縮した後、濾過し
た。濾液を炭酸水素ナトリウムにて中和した後、析出物
を濾取し、水で十分洗った。メタノールより再結晶する
ことにより、目的化合物（１）を得た。
実施例２ ２−［ｐ−（２−アミノエチル）フェニル］−N,N−ジ
メチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン・２塩酸
塩（２）の製造 Ｎ−（ｐ−アミノベンジル）アセトアミドをＮ−（ｐ
−アミノフェネチル）−2,2,2−トリフルオロアセトア
ミド塩酸塩（8.1g）に代える以外は実施例１の製造法に
準じた操作を行なった。ただし、アンモニア性硫酸銅溶
液にて酸化閉環後、抽出した生成物を再結晶することな
く、エタノール（50ml）に溶かし、5N水酸化ナトリウム
水溶液（20ml）を加えて２時間還流した。反応終了後、
水（100ml）を加えた後、酢酸エチルにて抽出した。酢
酸エチル層を減圧下で濃縮し、得られた油状物質をエチ
ルエーテル（20ml）に溶かした。この溶液を濾過した
後、濾液をエタノール性塩酸溶液に加えることにより、
目的化合物（２）を得た。
メチル−2H−ベンゾトリアゾリル−５−アミン・２塩酸
塩（２）の製造 Ｎ−（ｐ−アミノベンジル）アセトアミドをＮ−（ｐ
−アミノフェネチル）−2,2,2−トリフルオロアセトア
ミド塩酸塩（8.1g）に代える以外は実施例１の製造法に
準じた操作を行なった。ただし、アンモニア性硫酸銅溶
液にて酸化閉環後、抽出した生成物を再結晶することな
く、エタノール（50ml）に溶かし、5N水酸化ナトリウム
水溶液（20ml）を加えて２時間還流した。反応終了後、
水（100ml）を加えた後、酢酸エチルにて抽出した。酢
酸エチル層を減圧下で濃縮し、得られた油状物質をエチ
ルエーテル（20ml）に溶かした。この溶液を濾過した
後、濾液をエタノール性塩酸溶液に加えることにより、
目的化合物（２）を得た。
実施例３ ２−（ｐ−アミノメチルフェニル）−2H−ベンゾトリア
ゾリル−５−アミノ（３）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩（7.2g）に代える以外
は実施例１の製造法に準じた操作を行ない、目的化合物
（３）を得た。
ゾリル−５−アミノ（３）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩（7.2g）に代える以外
は実施例１の製造法に準じた操作を行ない、目的化合物
（３）を得た。
実施例４ ｐ−（5,6−ジメトキシ−2H−ベンゾトリアゾール−２
−イル）ベンジルアミン（４）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
3,4−ジメトキシアニリン（6.4g）に代える以外は実施
例１の製造法に準じた操作を行ない、目的化合物（４）
を得た。
−イル）ベンジルアミン（４）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
3,4−ジメトキシアニリン（6.4g）に代える以外は実施
例１の製造法に準じた操作を行ない、目的化合物（４）
を得た。
実施例５ ２−［ｐ−（5,6−メチレンジオキシ−2H−ベンゾトリ
アゾール−２−イル）］フェネチルアミン（５）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
3,4−メチレンジオキシアニリン（5.6g）に代える以外
は実施例２の製造法に準じた操作を行なった。ただし、
加水分解終了後、生成物を酢酸エチルにて抽出し、次い
で減圧下で酢酸エチルを濃縮して得た残渣をメタノール
より再結晶することにより、目的化合物（５）を得た。
アゾール−２−イル）］フェネチルアミン（５）の製造 N,N−ジメチル−ｍ−フェニレンジアミン２塩酸塩を
3,4−メチレンジオキシアニリン（5.6g）に代える以外
は実施例２の製造法に準じた操作を行なった。ただし、
加水分解終了後、生成物を酢酸エチルにて抽出し、次い
で減圧下で酢酸エチルを濃縮して得た残渣をメタノール
より再結晶することにより、目的化合物（５）を得た。
実験例 （一般分析法） カルボン酸化合物を含むアセトニトリル溶液0.5mlを1
0mlバイアルにとり、これに２−ブロモ−１−エチルピ
リジニウムテトラフルオロボレート（3.7mM）、９−メ
チル−3,4−ジヒドロ−2H−ピリド［1,2−ａ］ピリミジ
ン−２−オン（2.7mM）および本発明化合物（3.7mM）の
アセトニトリル溶液各50μｌを加え、約10秒間混和す
る。この溶液を室温下で約30分間放置する。
0mlバイアルにとり、これに２−ブロモ−１−エチルピ
リジニウムテトラフルオロボレート（3.7mM）、９−メ
チル−3,4−ジヒドロ−2H−ピリド［1,2−ａ］ピリミジ
ン−２−オン（2.7mM）および本発明化合物（3.7mM）の
アセトニトリル溶液各50μｌを加え、約10秒間混和す
る。この溶液を室温下で約30分間放置する。
この反応液0.5mlを前処理用シリカカラムに通し、ア
セトニトリル（1.5ml）にて溶出する。全量をアセトニ
トリルにて2.5mlとした後、その20μｌをHPLCに付す。
尚、各試薬についてのアセトニトリル溶液中の励起波長
および螢光波長は表２に示す。
セトニトリル（1.5ml）にて溶出する。全量をアセトニ
トリルにて2.5mlとした後、その20μｌをHPLCに付す。
尚、各試薬についてのアセトニトリル溶液中の励起波長
および螢光波長は表２に示す。
実験例１（本発明化合物１を試薬として使用） フルフェナム酸を３、６、15、30または60ng含有する
アセトニトリル溶液の各0.5mlを10mlバイアルにとり、
これに２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフル
オロボレート（3.7mM）、９−メチル−3,4−ジヒドロ−
2H−ピリド［1,2−ａ］ピリミジン−２−オン（2.7mM）
および本発明化合物１（3.7mM）のアセトニトリル溶液
各50μｌを加え、10秒間混和した。この溶液を室温下で
約30分間放置した。
アセトニトリル溶液の各0.5mlを10mlバイアルにとり、
これに２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフル
オロボレート（3.7mM）、９−メチル−3,4−ジヒドロ−
2H−ピリド［1,2−ａ］ピリミジン−２−オン（2.7mM）
および本発明化合物１（3.7mM）のアセトニトリル溶液
各50μｌを加え、10秒間混和した。この溶液を室温下で
約30分間放置した。
この反応液0.5mlをボンドエルート（シリカ）に通
し、アセトニトリル（1.5ml）にて溶出する。全量をア
セトニトリルにて2.5mlとした後、その20μｌをHPLCに
付した。
し、アセトニトリル（1.5ml）にて溶出する。全量をア
セトニトリルにて2.5mlとした後、その20μｌをHPLCに
付した。
（測定条件） 測定装置：島津LC−4A（島津製作所製） 島津RF−535螢光検出器（同前） カラム：ノバパックC18（3.9×150mm;ウォーターズ社 製） ガードカラム；ヌクレオジル5C18（4.0×30mm;ナーゲル 社製） 移動相：アセトニトリル／水＝2/1 流速:1.2ml/分 測定波長：励起波長395nm、螢光波長510nm （結果） 以上の実験より得たフルフェナム酸濃度とクロマトグ
ラムのピーク面積との関係を第１図に示し、クロマトグ
ラムを第２図に示した。
ラムのピーク面積との関係を第１図に示し、クロマトグ
ラムを第２図に示した。
実験例２（本発明化合物５を試薬として使用） イブプロフェンを0.6、３、６、15、30または60ng含
むアセトニトリル溶液の各0.5mlについて、本発明化合
物５を試薬として使用した以外は、実験例１と同様の操
作を行なった。
むアセトニトリル溶液の各0.5mlについて、本発明化合
物５を試薬として使用した以外は、実験例１と同様の操
作を行なった。
（測定条件） 測定装置：実験例１に同じ。
カラム：ヌクレオジル5C18（4.6×150mm;ナーゲル社 製） ガードカラム；実験例１に同じ。
移動相：アセトニトリル／水＝5/3 流速:1.0ml/分 測定波長：励起波長333nm、螢光波長375nm （結果） 以上の実験より得たイブプロフェン濃度とクロマトグ
ラムのピーク面積との関係を第３図に示し、クロマトグ
ラムを第４図に示した。
ラムのピーク面積との関係を第３図に示し、クロマトグ
ラムを第４図に示した。
実験例３ 本発明化合物（１）〜（５）と安息香酸との反応物で
あるアミド体のアセトニトリル溶液中における励起・螢
光波長は表２に示す通りである。また、各アミド体のHP
LCによる検出限界を合わせて示す。
あるアミド体のアセトニトリル溶液中における励起・螢
光波長は表２に示す通りである。また、各アミド体のHP
LCによる検出限界を合わせて示す。
第１図はフルフェナム酸濃度とクロマトグラムのピーク
面積の関係を示す図であり、縦軸はピーク面積（×1
04）を表わし、横軸はフルフェナム酸濃度（ng/500μ
ｌ）を表わす。 第２図は実験例１で得たクロマトグラムであり、横軸は
保持時間（分）を表わし、図中の矢印で示したピークが
フルフェナム酸（約0.2ng）に相当する。 第３図はイブプロフェン濃度とクロマトグラムのピーク
面積の関係を示す図であり、縦軸はピーク面積（×1
06）を表わし、横軸はイブプロフェン濃度（ng/500μ
ｌ）を表わす。 第４図は実験例２で得たクロマトグラムであり、横軸は
保持時間（分）を表わし、図中の矢印で示したピークが
イブプロフェン（約0.02ng）に相当する。
面積の関係を示す図であり、縦軸はピーク面積（×1
04）を表わし、横軸はフルフェナム酸濃度（ng/500μ
ｌ）を表わす。 第２図は実験例１で得たクロマトグラムであり、横軸は
保持時間（分）を表わし、図中の矢印で示したピークが
フルフェナム酸（約0.2ng）に相当する。 第３図はイブプロフェン濃度とクロマトグラムのピーク
面積の関係を示す図であり、縦軸はピーク面積（×1
06）を表わし、横軸はイブプロフェン濃度（ng/500μ
ｌ）を表わす。 第４図は実験例２で得たクロマトグラムであり、横軸は
保持時間（分）を表わし、図中の矢印で示したピークが
イブプロフェン（約0.02ng）に相当する。
Claims (2)
- 【請求項１】次式： ［式中、R1はC1〜C5アルキレンを意味し、R2およびR3は
互いに同一または異なって、水素、C1〜C5アルキル、C1
〜C5アルキルオキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−C1〜
C5アルキルアミノ（但し、同時に水素である場合を除
く。）を意味するか、または一緒になってC1〜C5アルキ
レンジオキシを形成し、R4は水素またはC1〜C5アルキル
を意味する。］で表わされる化合物またはその塩。 - 【請求項２】次式： ［式中、R1はC1〜C5アルキレンを意味し、R2およびR3は
互いに同一または異なって、水素、C1〜C5アルキル、C1
〜C5アルキルオキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−C1〜
C5アルキルアミノ（但し、同時に水素である場合を除
く。）を意味するか、または一緒になってC1〜C5アルキ
レンジオキシを形成し、R4は水素またはC1〜C5アルキル
を意味する。］で表わされる化合物またはその塩を含有
する事を特徴とするカルボン酸類の分析用試薬。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63138039A JP2681369B2 (ja) | 1988-06-03 | 1988-06-03 | ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬 |
| US07/613,688 US5097040A (en) | 1988-06-03 | 1989-05-25 | Benzotriazole derivatives and reagents for determining carboxylic acids thereof |
| PCT/JP1989/000519 WO1989012045A1 (en) | 1988-06-03 | 1989-05-25 | Benzotriazole derivatives and reagents containing same for analyzing carboxylic acids |
| DE68917728T DE68917728T2 (de) | 1988-06-03 | 1989-05-25 | Benzotriazol-derivate und reagenzien, die diese enthalten, zur analyse von carbonsäuren. |
| EP89906425A EP0418385B1 (en) | 1988-06-03 | 1989-05-25 | Benzotriazole derivatives and reagents containing same for analyzing carboxylic acids |
| AT89906425T ATE110372T1 (de) | 1988-06-03 | 1989-05-25 | Benzotriazol-derivate und reagenzien, die diese enthalten, zur analyse von carbonsäuren. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63138039A JP2681369B2 (ja) | 1988-06-03 | 1988-06-03 | ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01308268A JPH01308268A (ja) | 1989-12-12 |
| JP2681369B2 true JP2681369B2 (ja) | 1997-11-26 |
Family
ID=15212598
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Country Status (6)
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|---|---|
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| EP (1) | EP0418385B1 (ja) |
| JP (1) | JP2681369B2 (ja) |
| AT (1) | ATE110372T1 (ja) |
| DE (1) | DE68917728T2 (ja) |
| WO (1) | WO1989012045A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2681369B2 (ja) * | 1988-06-03 | 1997-11-26 | 塩野義製薬株式会社 | ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬 |
| EP1520450B1 (en) | 2002-06-06 | 2017-08-02 | UDC Ireland Limited | Electroluminescent device |
| EP1718622A2 (en) * | 2003-12-05 | 2006-11-08 | Ciba SC Holding AG | Electroluminescent device |
| EP1963276B9 (en) * | 2005-12-21 | 2012-09-26 | Decode Genetics EHF | N-linked aryl heteroaryl inhibitors of lta4h for treating inflammation |
| JP5424505B2 (ja) | 2011-02-28 | 2014-02-26 | 株式会社タニタ | ８−イソプラスタンを精製する方法 |
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|---|---|---|---|---|
| US4937348A (en) * | 1984-11-09 | 1990-06-26 | Adeka Argus Chemical Co., Ltd. | Process for preparing 2,2'-methylene-bis-(4-hydrocarbyl-6-benzotriazolylphenols) |
| JPH01305069A (ja) * | 1988-05-31 | 1989-12-08 | Shionogi & Co Ltd | ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有する発螢光試薬 |
| JP2681369B2 (ja) * | 1988-06-03 | 1997-11-26 | 塩野義製薬株式会社 | ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有するカルボン酸類分析用試薬 |
| US5003076A (en) * | 1988-10-12 | 1991-03-26 | Shionogi & Co., Ltd. | Benzotriazole derivatives and chiral derivatization reagents for carboxylic acids thereof |
-
1988
- 1988-06-03 JP JP63138039A patent/JP2681369B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-05-25 DE DE68917728T patent/DE68917728T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-25 EP EP89906425A patent/EP0418385B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-25 US US07/613,688 patent/US5097040A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-25 WO PCT/JP1989/000519 patent/WO1989012045A1/ja active IP Right Grant
- 1989-05-25 AT AT89906425T patent/ATE110372T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01308268A (ja) | 1989-12-12 |
| DE68917728D1 (de) | 1994-09-29 |
| US5097040A (en) | 1992-03-17 |
| ATE110372T1 (de) | 1994-09-15 |
| DE68917728T2 (de) | 1995-03-23 |
| WO1989012045A1 (en) | 1989-12-14 |
| EP0418385A4 (en) | 1991-11-13 |
| EP0418385B1 (en) | 1994-08-24 |
| EP0418385A1 (en) | 1991-03-27 |
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