JPH02191264A

JPH02191264A - ベンゾトリアゾール誘導体およびそれを含有する光学活性カルボン酸類キラル誘導化分析用試薬

Info

Publication number: JPH02191264A
Application number: JP1142348A
Authority: JP
Inventors: Shigeru Narita; 成田　滋; Takayasu Kitagawa; 北川　隆康
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1988-10-12
Filing date: 1989-06-05
Publication date: 1990-07-27
Also published as: KR900006303A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】支果上二旦月且１医薬品には光学活性な化合物が多く存在するが、これら
はしばしばラセミ体として使用きれている．しかし、異
性体間で薬効や毒性あるいは代謝等に著しい差のある例
が知られており、異性体を別個に評価することが必要で
ある．本発明は、光学活性な化合物の中で、特にカルボ
ン酸光学異性体の微量分析に適した化合物およびそれを
含有する螢光性のキラル誘導化試薬に関するものである
。

ｋ米五弦豊光学活性なカルボン酸を感度良く分析しうる螢光性キラ
ル誘導化試薬は現在までに下記の三種があるのみである
。

後層らは、１−（４−ジメチルアミノ−１−ナフチル）
エチルアミンを用いてＮ−アセチルアミノ酸類やα−ア
リルプロピオン酸類を順相系高速液体クロマトグラフィ
ーで分析している（　Ｊ、　Ｇｏｔｏ　ａｔａｌ：　Ａ
ｎａｌ、　Ｃｈｉｌｌｌ、　Ａｃｔａ、　１２０．１８
７（１９８０））−さらに、この試薬よりも１０倍高感
度なものとして、１−（１または２−アンスリル）エチ
ルアミンを開示している（　Ｊ、　Ｇｏｔｏ　ａｔ　ａ
ｌ：　Ｊ、　Ｌｉｑ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏ−ｇｒ、　、
　！、　６８３（１９８６）　）　。

しかし、これらの試薬は、１−（１または２−アンスリ
ル）エチルアミンで検出限界が１００　ｆｍｏｌと必ず
しも高感度ではなく、また、生体試料分析において順相
系よりも有利な逆相系クロマトグラフィーでは用いられ
ていない。

明が　　しようとする本発明者らは以上の点に鑑み、従来の試薬よりも高感度
で、かつ、逆相系高速液体クロマトグラフィーにおいて
も十分に異性体を分離できる螢光性キラル誘導化試薬の
開発を意図し、本発明を完成した。

毘１」」口ＬＬＬ１丞本発明が提供する次式：［ただし、式中、Ｘはフェニレンまたはナフチレンを意
味し　Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なって、水
素、Ｃ８〜Ｃ，アルキル、Ｃ１〜Ｃ，アルキルオキシ、
アミノまたはモノ−もしくはジーＣ３〜Ｃ，アルキルア
ミノを意味するか、または−緒になって、Ｃ１〜Ｃ，ア
ルキレンまたは０１〜Ｃ，アルキレンジオキシを形成し
、Ｒは式：（式中、Ｒ３およびＲ４は互いに興なって、水素、ＣＩ
−Ｃ，アルキル、ＣＩ−Ｃ，アルキルオキシ、シアン、
Ｃ，＃Ｃ，アルキルオキシカルボニルまたはＣ，−Ｃ・
アルキルカルボニルを意味し　Ｒ１１は水素またはＣ３
〜Ｃ，アルキルを意味し、Ｒ６およびＲ７は互いに同一
または興なって、水素、ＣＩ〜Ｃ，アルキル、Ｃ１〜Ｃ
，アルキルオキシ、シアノ、ｃｌ〜Ｃ，アルキルオキシ
カルボニルまたはＣＩ〜Ｃ，アルキルカルボニルを意味
し、ｎは０〜２の整数を意味する）］で表わされる化合
物またはその塩（以下、単に本発明化合物という）は、
縮合剤の存在下、室温で光学活性カルボン酸類と反応す
る０反応物は強い螢光を有するアミド体のジアステレオ
ｉ−であり、逆相系高速液体クロマトグラフィーにおい
て良好な分離を示す、また、過剰の試薬は容易に除去さ
れる。このように、本発明化合物は光学活性カルボン酸
類の簡便、かつ高感度な測定法を可能にした有用な化合
物である。

本発明化合物は非プロトン性溶媒中、縮合剤、および塩
基またはそれに代わる酸捕捉剤の存在下、室温にて約１
〜２時間で光学活性カルボン酸類と反応し、対応する強
い螢光を有するアミド体のジアステレオマーを生成する
。また、過剰の試薬は前処理用シリカカラムに反応液を
通すことにより容易に除去できるものである。置換基Ｒ
１およびＲ２は電子供与性が強ければ、化合物の螢光性
が強くなり、好ましい。

本発明化合物は重機化学の公知の反応を用いて容易に製
造可能である０例えば、以下に示すように、置換−アニ
リン（１１）と適当な保護基で保護きれた光学活性なア
ミノアルキル基を有するジアゾ化合物（ｂ）とを公知の
ジアゾカップリング反応（第１工程）、酸化的閉環反応
（第２工程）、絖いて脱保護（第３工程）に付して本発
明化合物を得る事ができる。

（式中、Ｈｌ、Ｒ２およびＸは前記と同意義であ（式中
、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は前記と同意義で
あり、Ｒ８は保護基を表わす））。

以下に各工程の説明をする。

（第１工程）本反応は通常、水冷下〜１５°Ｃにて水溶液中で行なう
、ジアゾ化合物（ｂ）に対応する光学活性なアニリンま
たはナフチルアミン誘導体を無機酸に溶解または懸濁し
、亜硝酸ナトリウム等の亜硝酸と反応させて反応性に富
んだジアゾ化合物（ｂ）を調製する。過剰の亜硝酸を除
去するため、スルファミン酸や尿素を添加してこれを分
解する。

次いで、置換−アニリン化合物（ａ）を添加すれば容易
にジアゾ化合物（ｂ）とカップリングを起こして化合物
（ｃ）を与える０反応は数分〜数時間で完了する。

（第２工程）化合物（ｃ）のアゾ基は隣接するアミンと容易に酸化的
閉環し、トリアゾール化合物（ｄ）を与える。酸化的閉
環反応は鋼・アンモニア錯体の存在下、含水有機溶媒中
で行なえば、室温〜加熱下、数分〜数十時間で完了する
。

（第３工程）脱保護して本発明化合物を得る工程である。化金物（ｄ
）を酸の存在下、含水有機溶媒中で加水分解反応に付し
て本発明化合物を得る１反応は室温〜加熱下で数分〜数
日間で完了する。

本発明において、Ｃ，−ＣＳアルキレンとは直鎖状Ｃ１
〜Ｃ，アルキレンを意味し、具体的にはメチレン、エチ
レン、プロピレン、ブチレン、ベンチレンであり、とり
わけメチレンまたはエチレンが好ましい。

Ｃ８〜Ｃ，アルキルとは直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ，
アルキルを意味し、具体的にはメチル、エチル、ｎ−プ
ロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、箕ｃ−フチル、　
ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオ
ペンチルまたはｔｅｒｔ−ペンチル等が例示される。

保護基としてはアミンの保護基として公知のもの全てが
使用できるが、中でも酸に安定なものが望ましい０例え
ば、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル等が
例示できる。

以下に実施例および実験例を示し、本発明を更に詳しく
説明するが、これらは本発明を何部限定するものではな
い。

実施例１（アミン−１−（４−７ミノナフチル）−Ｎ−アセチル
エチルアミン（２，３ｇ　）を１０％塩＃５０ｍ１に溶
かし、水冷下、攪拌しながら７％亜硝酸ナトリウム水溶
液（１０ｍｌ）を加えた。１５分後、１０％スルファミ
ン酸アンモニウム水ｍＷＩ　（１０ｍｌ）　ヲ加え、さ
らに１５分攪拌した。酢酸ナトリウムにて反応液の液性
を約ｐＨ５とした後、４−アミノ−２−Ｎ−メチルアミ
ノアニソール・２塩酸塩（２，３ｇ）を加え、さらに４
時間攪拌した。ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液にて反応液
の液性を約ｐＨ９とした後、酢酸エチルにて生成物を抽
出した。酢酸エチルを留去した後、残渣を少量のエタノ
ールに溶かし、この溶液を１Ｍ塩酸・エーテル溶液（５
０ｍｌ）に加えた。アゾ化合物を暗赤色粉末（３，５ｇ
）として得た。

このアゾ化合物（３，４ｇ　）をピリジン（５〇−１）
に溶かし、アンモニア性硫酸鋼溶液（硫厳銅・５水和物
１０ｇと塩化アンモニウム１０ｇを水５０ｍ１に溶かし
、炭酸水素ナトリウムにて中和したもの）を加えた後、
１時間還流した１反応終了後、冷却してから、酢酸エチ
ルにて抽出した。酢酸エチルを留去した後、残渣をエタ
ノール（５０ｍｍｌ）に溶かし、これに１０％塩Ｗａ３
０ｍｌを加えて、５日間、還流した。

反応終了後、反応液を留去した後、残渣を少量のエタノ
ールに溶かし、１Ｍ塩酸・エーテル溶液に加えた。析出
物を濾取し、これをエーテル／メタノール混合溶液より
再結晶することにより、目的化合物（１）を得た。淡黄
色針状晶、融点：２５５〜２５７°Ｃ０ＩＲ（ヌジョール）　：　１６１０．１６４０．３４０
０　ａｌｌ［α］甘せ１６．８”（ｃｍｌ、メタノール
）元素分析（Ｃ＊＊ＨａｓＮｓＯＣｊ！＊・Ｈ２Ｏ）と
して理論値：　Ｃ，５４，８０；　Ｈ，５，７５；　Ｎ
、１５．９８；　Ｃ１，１６，１８実測値、　Ｃ，５４
，９２＋　Ｈ，６，０６Ｓ　Ｎ、１６．０７；　Ｃ１，
１５，９７実施例２（１５）−１−（４−アミノナフチル）−Ｎ−アセチル
エチルアミンをＳ−１−（４−アミノフェニル）−Ｎ−
アセチルエチルアミンに代え、４−アミノ−２−Ｎ−メ
チルアミノアニソール・２塩酸塩をＮ、Ｎ−ジメチル−
ｍ−フェニレンジアミン・２塩酸塩に代えた以外は、実
施例１と同様の操作を行なった。

但し、アゾ化合物は析出したものを濾取したのち、イン
プロパツールより再結晶し、目的化合物（２）はメタノ
ール／イソプロパツールより再Ｍ晶することにより、無
色針状晶として得た。

融点：２５７〜２６０℃（分解）。

ＩＲ（メジ５−ル）’：　１６５０．２４６０　ａｍ”
［ｆｆ　］＋　”　−７，５”　（ｃ−１，０７、メタ
ノール）。

元素分析（Ｃ＋ａＨ＊＋ＮｉＣ１ｍ）として理論値：　
Ｃ，５４，２４；　Ｈ，５，９７；　Ｎ、１９．７７；
　Ｃ１，２０，０１、実測値：　Ｃ，５４，０９；　Ｈ
，５，９８；　Ｎ、１９．５６ｉ　Ｃ１，２０，０２゜
夾監碧（一般分析法）光学活性カルボン酸化合物を含むアセトニトリル溶液０
　、５　ｍｌを１０ｍ１バイアルにとり、これに２−ブ
ロモー１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレー）
（３，７ａ＋Ｍ）、９−メチル−３，４−ジヒドｔ７−
２　Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−２−才＞（
２，７ｍＭ）および本発明化合物（３，７ｍＭ）のアセ
トニトリル溶液各５０μｍを加え、約１０秒間混和する
。この溶液を室温下で約２時間放置する。この反応液０
　、５　ｍｌを前処理用シリカカラムに通し、アセトニ
トリル（１，５ｍ１）にて溶出する。全量をアセトニト
リルにて２　、５　ｍｌとした後、その２０μｍをＨＰ
ＬＣに付す。

！（本発明化合物（１）を試薬として使用）５−（Ｎ、
Ｎ−ジメチルスルファモイル）−６，７−ジクロロ−２
，３−ジヒドロベンゾフラン−２−カルボン酸（以下、
化合物Ａという）をＯ，ＯＳ、０．１．０゜２．０．４
．０．６．０．８または１μｇ含有するアセトニトリル
溶液の各０　、５　ｍｌを１０ｍ１バイアルにとり、こ
れに２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオ
ロボレート（３，７ｍＭ）、９−メゾルー３．４−ジヒ
ドＯ−２Ｈ−ピリド［１，２−ａｌピリミジン−２−オ
ン（２，７ｍＭ）および本発明化合物（１）（３，７ｍ
Ｍ）のアセトニトリル溶液各５０μｍを加え、１０秒間
混和した。この溶液を室温下で約２時間放置した。

この反応液０　、５　ｍｌをボンドエルート（シリカ）
に通し、アセトニトリル（１，５ｍ１）にて溶出する。

全量をアセトニトリルにて２　、５　ｍｌとした後、そ
の２０μｍをＨＰＬＣに付した。

（測定条件）測定装置：高滓ＬＣ−４Ａ（高滓製作所製）高滓ＲＦ−
５３５螢光検出器（同前）カラム：ヌクレオジル５Ｃ１ｓ（４，６Ｘ２５０ｍｎ；
ナーゲル社製）ガードカラム；ヌクレオジル５Ｃ＋ａ（４，０Ｘ３０１
１１１：す゛−ゲル社製）移動相ニアセトニトリル／水−３／　２　（Ｖ／Ｖ）流
速：１．Ｏｍｌ／分測定波長：励起波長３５５ｎｍ、螢光波長４８０１（結
果）以上の実験より得た化合物Ａ濃度とクロマトグラムのピ
ーク面積との関係を第１図に示し、クロマトグラムを第
２図に示した。

！ＬＩＪＩ（本発明化合物（１）を試薬として使用）イ
ブプロフェン、２−フェニルプロピオン酸、２−フェニ
ル−ｎ−酪酸の１μｇを含むアセトニトリル溶液の各０
　、５　ｍｌについて、本発明化合物（１）を試薬とし
て、実験例１と同様の操作を行なった。

（測定条件）測定装置、カラム、ガードカラム、流速および測定波長
については実験例１と同じ。

移動相ニアセトニトリル／水−２／１（イブプロフェン
）、４／３　（２−フェニルプロピオン酸、２−フェニ
ル−ｎ−酪酸）。

（結果）以上の実験より得た各化合物の異性体の分離データを表
１に示す、なお、化合物Ａのデータも付記する。

表まただし、ｋｏは容量比、αは分離係数、Ｒｓは分離度で
ある。

！ｌ！Ｌ！（本発明化合物（２）を試薬として使用）化
合物Ａ１ナプロキセン、イブプロフェンの１μｇを含む
アセトニトリル溶液の各０　、５　ｆｆ１ｌについて、
本発明化合物（２）を試薬として使用した以外は実験例
１と同様の操作を行なった。

（測定条件）測定装置、カラム、ガードカラムおよび流速については
実験例１と同じ。

測定波長：励起波長３９５ｎｍ、螢光波長５１０Ｈｍ移
動相：　アセトニトリル／水−３／２（化合物Ａ）、５
／３（ナプロキセン）、２／１（イブプロフェン）。

（結果）以上の実験より得た各化合物の異性体の分離データを表
２に示す。

表２に′　　　　α　　　Ｒｓただし、ｋｏは容量比、αは分離係数、Ｒｓは分離度で
ある。

以上の実験例は特定の本発明化合物について検証してい
るが、本発明はこれらに限定されるべきではない、以下
に好ましい本発明化合物の代表例を列挙する。

（１）Ｒ−（＋）−２−［４−（１−アミノエチル）ナ
フチル］−６−メドキシーＮ−メチル−２Ｈ−ベンゾト
リアゾリル−５−アミン・２塩酸塩、（り　Ｓ−またはＲ−２−［１）−（１−アミノエチル
）フェニル］−Ｎ、Ｎ−’、；メチル−２Ｈ−ベンゾト
リアゾリル−５−アミン・２塩酸塩、（３）　　Ｓ−またはＲ−３−［ｐ−（５、ｓ−メチレ
ンジオキシ−２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）ツ
ー２−プロピルアミンおよび（４）Ｓ−またはＲ−１−［ｐ−（５、６−シメトキシ
ー２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）ツー１−プロ
ピルアミン。

【図面の簡単な説明】

第１図は化合物Ａ濃度とクロマトグラムのピーク面積の
関係を示す図であり、縦軸はピーク面積（ｘ１ｏ’）を
表わし、横軸は化合物Ａｆｉ度（μｇ／　０．５ｍｌ　
）を表わす。第２図は実験例１で得たクロマトグラムであり、横軸は
保持時間（分）を表わし、図中の矢印で示したピークが
化合物ＡのＲ−（＋）体、Ｓ　−（−）体（約２ｎｇ）
に相当する。第一図ピーク下面積（ＸＩＯ’）化合物Ａ濃度（μｇ１０．５肩ｌ）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［ただし、式中、Ｘはフェニレンまたはナフチレンを意
味し、Ｒ＾１およびＲ＾２は互いに同一または異なって
、水素、Ｃ＿１〜Ｃ＿■アルキル、Ｃ＿１〜Ｃ＿６アル
キルオキシ、アミノまたはモノ−もしくはジ−Ｃ＿１〜
Ｃ＿■アルキルアミノを意味するか、または一緒になっ
て、Ｃ＿１〜Ｃ＿５アルキレンまたはＣ＿１〜Ｃ＿■ア
ルキレンジオキシを形成し、Ｒは式； ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学
式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾３およびＲ＾４は互いに異なって、水素、
Ｃ＿１〜Ｃ＿６アルキル、Ｃ＿１〜Ｃ＿■アルキルオキ
シ、シアノ、Ｃ＿１〜Ｃ＿５アルキルオキシカルボニル
またはＣ＿１〜Ｃ＿６アルキルカルボニルを意味し、Ｒ
＾５は水素またはＣ＿１〜Ｃ＿５アルキルを意味し、Ｒ
＾６およびＲ＾７は互いに同一または異なって、水素、
Ｃ＿１〜Ｃ＿５アルキル、Ｃ＿１〜Ｃ＿■アルキルオキ
シ、シアノ、Ｃ＿１〜Ｃ＿６アルキルオキシカルボニル
またはＣ＿１〜Ｃ＿６アルキルカルボニルを意味し、ｎ
は０〜２の整数を意味する）］で表わされる化合物また
はその塩。
（２）請求項（１）に記載された化合物またはその塩を
含有する光学活性カルボン酸類キラル誘導化分析用試薬
。