JP2662311B2 - 生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法 - Google Patents
生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法Info
- Publication number
- JP2662311B2 JP2662311B2 JP2510696A JP51069690A JP2662311B2 JP 2662311 B2 JP2662311 B2 JP 2662311B2 JP 2510696 A JP2510696 A JP 2510696A JP 51069690 A JP51069690 A JP 51069690A JP 2662311 B2 JP2662311 B2 JP 2662311B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gly
- peg
- biologically active
- group
- drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は，生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導
体，すなわち，医薬品として有用な，ペプチドもしくは
タンパク質の誘導体に関する。さらに詳しくは，本発明
は，ペプチドもしくはタンパク質のポリエチレングリコ
ール誘導体に関する。ここで，ペプチドもしくはタンパ
ク質部分は，アミノ酸もしくはペプチドからなるスペー
サーアームによってポリエチレングリコール残基に結合
している。
体，すなわち，医薬品として有用な，ペプチドもしくは
タンパク質の誘導体に関する。さらに詳しくは，本発明
は，ペプチドもしくはタンパク質のポリエチレングリコ
ール誘導体に関する。ここで，ペプチドもしくはタンパ
ク質部分は，アミノ酸もしくはペプチドからなるスペー
サーアームによってポリエチレングリコール残基に結合
している。
生物学的に活性な物質（例えば，ペプチドもしくはタ
ンパク質）をモノメトキシポリエチレングリコールで改
質すると，これら物質の物理的，化学的，酵素学的，免
疫学的，ならびに薬理学的および薬理運動学的な性質が
広範囲に変化すると報告されている。これまで，このよ
うな改質を行うための方法がいくつか報告されている
（例えば，米国特許第4,179,337号および第4,766,106
号;Appl.Biochem and Biotechnology,Vol.11,p.141/198
5を参照されたい）。
ンパク質）をモノメトキシポリエチレングリコールで改
質すると，これら物質の物理的，化学的，酵素学的，免
疫学的，ならびに薬理学的および薬理運動学的な性質が
広範囲に変化すると報告されている。これまで，このよ
うな改質を行うための方法がいくつか報告されている
（例えば，米国特許第4,179,337号および第4,766,106
号;Appl.Biochem and Biotechnology,Vol.11,p.141/198
5を参照されたい）。
このような改質されたペプチドもしくはタンパク質誘
導体は，ペプチドもしくはタンパク質それ自体と比較す
ると，水に対する溶解性が増大したり，抗原性が減少し
たり，あるいは体内を循環するペプチドもしくはタンパ
ク質の半減期が増大したりするなど，いくつかの利点を
示す。
導体は，ペプチドもしくはタンパク質それ自体と比較す
ると，水に対する溶解性が増大したり，抗原性が減少し
たり，あるいは体内を循環するペプチドもしくはタンパ
ク質の半減期が増大したりするなど，いくつかの利点を
示す。
しかしながら，このような改質された生物活性化合物
を使用することは，以下のような問題点が見い出されて
いるので，満足なことではない：薬理運動学的な実験に
必要なポリマー・薬剤付加体に放射性のプローブを選択
的に導入することが困難であること；いくつかの酵素が
不活性であること；ポリマー・タンパク質間の結合を体
内の特定の酵素が切断するように設定する（または調節
する）のが困難であること；ポリマー・薬剤付加体中
に，目標とする性質をこの付加体自体に与えうるアミノ
酸配列を導入することが困難であること。これらの問題
点は，ポリマーを活性化させるのに利用される化学的作
用と，ポリマーが薬剤に直接結合しているということに
関係している。
を使用することは，以下のような問題点が見い出されて
いるので，満足なことではない：薬理運動学的な実験に
必要なポリマー・薬剤付加体に放射性のプローブを選択
的に導入することが困難であること；いくつかの酵素が
不活性であること；ポリマー・タンパク質間の結合を体
内の特定の酵素が切断するように設定する（または調節
する）のが困難であること；ポリマー・薬剤付加体中
に，目標とする性質をこの付加体自体に与えうるアミノ
酸配列を導入することが困難であること。これらの問題
点は，ポリマーを活性化させるのに利用される化学的作
用と，ポリマーが薬剤に直接結合しているということに
関係している。
上記問題点のうち，たとえすべてではないにしても，
そのいくつかが，以下に示す本発明の新規薬剤・ポリマ
ー誘導体を使用することによって，解消されるか，ある
いは少なくとも有意に低減され得ることがわかった。本
発明の新規薬剤・ポリマー誘導体は下記の一般式で表さ
れる： RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）−NH−
Ｚ （Ｉ） ここで， Ｒは低級アルキル基を表し， ｎは25と250との間の整数であり， Ｘは隣接するNH基およびCO基と組み合わせると，アミ
ノ酸残基もしくはジペプチド残基もしくはトリペプチド
残基を表し，そして Ｚは隣接するNH基と組み合わせると，生物学的に活性
なペプチドもしくはタンパク質，またはNH基もしくはNH
2基を含む薬剤残基を表す。
そのいくつかが，以下に示す本発明の新規薬剤・ポリマ
ー誘導体を使用することによって，解消されるか，ある
いは少なくとも有意に低減され得ることがわかった。本
発明の新規薬剤・ポリマー誘導体は下記の一般式で表さ
れる： RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）−NH−
Ｚ （Ｉ） ここで， Ｒは低級アルキル基を表し， ｎは25と250との間の整数であり， Ｘは隣接するNH基およびCO基と組み合わせると，アミ
ノ酸残基もしくはジペプチド残基もしくはトリペプチド
残基を表し，そして Ｚは隣接するNH基と組み合わせると，生物学的に活性
なペプチドもしくはタンパク質，またはNH基もしくはNH
2基を含む薬剤残基を表す。
式（Ｉ）で表される化合物のうち，好ましい化合物
は,Rがメチル基を表し,nが40と115との間の整数を表す
ような化合物，すなわち，ポリエチレン部分が約1,800
〜5,500の分子量（例えば,1,900および5,000という分子
量）を示すような化合物である。
は,Rがメチル基を表し,nが40と115との間の整数を表す
ような化合物，すなわち，ポリエチレン部分が約1,800
〜5,500の分子量（例えば,1,900および5,000という分子
量）を示すような化合物である。
式（Ｉ）で表される化合物のうち，記号Ｘが，隣接す
るNH基およびCO基と組み合わせると，グリシン，フェニ
ルアラニン，トリプトファンおよびノルロイシンから選
択されるアミノ酸，あるいはGly−Gly,Arg−Arg,Phe−A
rg,Gly−Gly−Arg,Gly−Gly−PheもしくはGly−Leu−Gl
y−Leuのようなジペプチドまたはトリペプチドを表すよ
うな化合物も好ましい。
るNH基およびCO基と組み合わせると，グリシン，フェニ
ルアラニン，トリプトファンおよびノルロイシンから選
択されるアミノ酸，あるいはGly−Gly,Arg−Arg,Phe−A
rg,Gly−Gly−Arg,Gly−Gly−PheもしくはGly−Leu−Gl
y−Leuのようなジペプチドまたはトリペプチドを表すよ
うな化合物も好ましい。
式（Ｉ）で表される化合物のうち，記号Ｚが，隣接す
るNH基と組み合わせると，以下のものから選択される，
生物学的に活性なペプチド，タンパク質もしくは薬剤の
残基を表すような化合物も好ましい： − 酵素（例えば，スーパーオキシドジスムターゼ，リ
ボヌクレアーゼ，アルギナーゼ，アスパラギナーゼ，ウ
ロキナーゼ）； − 抗生物質（例えば，アンピシリン，ドキソルビシ
ン）； − 合成薬剤（例えば,N−デスメチル−タモキシフェ
ン）； − ペプチド（例えば,LHRHおよびその合成類似体，ソ
マトスタチンおよびその合成類似体）； − タンパク質（例えば，インターロイキン2,腫瘍壊死
因子，インシュリン,IGF−１）； − ヌクレオシド（例えば，アデニン−アラビノシド
（ara−Ａ），シトシン−アラビノシド（ara−Ｃ），ア
シクロバール）。
るNH基と組み合わせると，以下のものから選択される，
生物学的に活性なペプチド，タンパク質もしくは薬剤の
残基を表すような化合物も好ましい： − 酵素（例えば，スーパーオキシドジスムターゼ，リ
ボヌクレアーゼ，アルギナーゼ，アスパラギナーゼ，ウ
ロキナーゼ）； − 抗生物質（例えば，アンピシリン，ドキソルビシ
ン）； − 合成薬剤（例えば,N−デスメチル−タモキシフェ
ン）； − ペプチド（例えば,LHRHおよびその合成類似体，ソ
マトスタチンおよびその合成類似体）； − タンパク質（例えば，インターロイキン2,腫瘍壊死
因子，インシュリン,IGF−１）； − ヌクレオシド（例えば，アデニン−アラビノシド
（ara−Ａ），シトシン−アラビノシド（ara−Ｃ），ア
シクロバール）。
ここに掲げたものは如何なる限定を行うものではな
い。
い。
式（Ｉ）で表される最も興味深いペプチド誘導体のう
ち，すべてではないが，いくつかの誘導体は，実施例に
おいて個々に説明され，かつ特徴づけられている。
ち，すべてではないが，いくつかの誘導体は，実施例に
おいて個々に説明され，かつ特徴づけられている。
したがって，本発明は，上で定義されたような式
（Ｉ）で表される生物学的に活性な新規ペプチド誘導
体，およびその製造方法に関する。
（Ｉ）で表される生物学的に活性な新規ペプチド誘導
体，およびその製造方法に関する。
本発明は，また，式（Ｉ）で表される化合物の少なく
とも１つを活性成分として含有する薬剤組成物に関す
る。本発明の他の目的は，この明細書および特許請求の
範囲から明らかになる。
とも１つを活性成分として含有する薬剤組成物に関す
る。本発明の他の目的は，この明細書および特許請求の
範囲から明らかになる。
本発明の方法は，様々な構造および性質を有する，ア
ミノ酸もしくはペプチドからなるスペーサーアームを，
モノアルコキシポリエチレングリコールの水酸基に，こ
のアミノ酸もしくはペプチドのNH2基を含むカーボネー
ト結合によって結合させることに基づいている。この反
応の後，アミノ酸もしくはペプチドからなるスペーサア
ームのCOOH基はスクシンイミジルエステルとして活性化
される。このようにして，スペーサアームは，生物学的
に活性なペプチド，タンパク質または薬剤のアミノ基に
対して反応性を有するようになる。
ミノ酸もしくはペプチドからなるスペーサーアームを，
モノアルコキシポリエチレングリコールの水酸基に，こ
のアミノ酸もしくはペプチドのNH2基を含むカーボネー
ト結合によって結合させることに基づいている。この反
応の後，アミノ酸もしくはペプチドからなるスペーサア
ームのCOOH基はスクシンイミジルエステルとして活性化
される。このようにして，スペーサアームは，生物学的
に活性なペプチド，タンパク質または薬剤のアミノ基に
対して反応性を有するようになる。
さらに詳しくは，本発明の方法は，以下の工程からな
る： ａ）下記の式 RO−（CH2−CH2O）nH （II） （ここで,Rおよびｎは上で定義したとおりである） で表されるモノアルコキシポリエチレングリコール誘導
体を,2,4,5−トリクロルフェニルクロロホルメートもし
くは４−ニトロフェニルクロロホルメートと反応させ
て，対応するカーボネートを得る工程； ｂ）このようにして得られたカーボネートを，下記の式 H2N−Ｘ−（CO）OH （III） （ここで,Xは上で定義したとおりである） で表されるアミノ酸もしくはジペプチドもしくはトリペ
プチドと反応させて下記の式 RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）OH （IV） で表される化合物を得る工程； ｃ）このようにして得られた式（IV）で表される化合物
を対応するスクシンイミジルエステルに転換する工程；
および ｄ）最後に，このスクシンイミジルエステルを，下記の
式 Ｒ−NH−ＺまたはH2N−Ｚ （Ｖ） （ここで,RおよびＺは上で定義したとおりである） で表される生物学的に活性なペプチドもしくはタンパク
質，またはNH基もしくはNH2基を含む薬剤と反応させる
工程。
る： ａ）下記の式 RO−（CH2−CH2O）nH （II） （ここで,Rおよびｎは上で定義したとおりである） で表されるモノアルコキシポリエチレングリコール誘導
体を,2,4,5−トリクロルフェニルクロロホルメートもし
くは４−ニトロフェニルクロロホルメートと反応させ
て，対応するカーボネートを得る工程； ｂ）このようにして得られたカーボネートを，下記の式 H2N−Ｘ−（CO）OH （III） （ここで,Xは上で定義したとおりである） で表されるアミノ酸もしくはジペプチドもしくはトリペ
プチドと反応させて下記の式 RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）OH （IV） で表される化合物を得る工程； ｃ）このようにして得られた式（IV）で表される化合物
を対応するスクシンイミジルエステルに転換する工程；
および ｄ）最後に，このスクシンイミジルエステルを，下記の
式 Ｒ−NH−ＺまたはH2N−Ｚ （Ｖ） （ここで,RおよびＺは上で定義したとおりである） で表される生物学的に活性なペプチドもしくはタンパク
質，またはNH基もしくはNH2基を含む薬剤と反応させる
工程。
上記方法の工程ａ）〜ｄ）は，特別な反応条件を必要
とするものではなく，通常の方法に従って実施すること
ができる。上記の各反応工程の詳細は，本発明を例示す
る実施例で示す。
とするものではなく，通常の方法に従って実施すること
ができる。上記の各反応工程の詳細は，本発明を例示す
る実施例で示す。
このような新規なスペーサアーム（アミノ酸もしくは
ペプチド）を導入することによって，生物活性なタンパ
ク質もしくは薬剤に所定の性質を与えることができる。
即ち：式（Ｉ）で表されるペプチド誘導体の促進リポソ
ーム分解を促進し，特定の細胞酵素によって，この誘導
体の特定の部位の切断を可能にし，さらに場合によって
は，この誘導体の，アミノ酸部分を認識する特定の細胞
受容体に対し結合力を増大させることを可能にする性質
である。
ペプチド）を導入することによって，生物活性なタンパ
ク質もしくは薬剤に所定の性質を与えることができる。
即ち：式（Ｉ）で表されるペプチド誘導体の促進リポソ
ーム分解を促進し，特定の細胞酵素によって，この誘導
体の特定の部位の切断を可能にし，さらに場合によって
は，この誘導体の，アミノ酸部分を認識する特定の細胞
受容体に対し結合力を増大させることを可能にする性質
である。
さらに，以下のような付加的な利点もある：新規なス
ペーサーアームに，タンパク質に導入されたポリマー鎖
を直接定量するのに好都合に用いられ得る残基を含ませ
ることができるということである。これは，トリプトフ
ァンもしくはフェニルアラニンの場合にはUV吸収によっ
て，あるいは天然物由来のタンパク質には本来存在しな
いノルロイシンの場合にはアミノ酸分析によって，実施
することができる。
ペーサーアームに，タンパク質に導入されたポリマー鎖
を直接定量するのに好都合に用いられ得る残基を含ませ
ることができるということである。これは，トリプトフ
ァンもしくはフェニルアラニンの場合にはUV吸収によっ
て，あるいは天然物由来のタンパク質には本来存在しな
いノルロイシンの場合にはアミノ酸分析によって，実施
することができる。
スペーサーアームは，また，標識化されたアミノ酸を
用いて放射活性化してもよい。放射活性化すれば，薬理
運動学的または代謝に関する実験の間に，生物学的に活
性なペプチド誘導体の検出が非常に容易になる。
用いて放射活性化してもよい。放射活性化すれば，薬理
運動学的または代謝に関する実験の間に，生物学的に活
性なペプチド誘導体の検出が非常に容易になる。
これらの興味深い性質のいくつかは，以下の実施例に
例示されているが，これらの実施例に限定はされない。
以下の実施例において，「Ｍ−PEG」という用語はモノ
メトキシポリエチレングリコールを意味し，アミノ酸も
しくはペプチドは当該分野の一般的な用語によって記述
されている。
例示されているが，これらの実施例に限定はされない。
以下の実施例において，「Ｍ−PEG」という用語はモノ
メトキシポリエチレングリコールを意味し，アミノ酸も
しくはペプチドは当該分野の一般的な用語によって記述
されている。
A.アミノ酸もしくはペプチドからなるスペーサーアーム
を有する活性化Ｍ−PEGの製造 実施例１ Ｍ−PEG 5000−Gly−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−Gly−OSu） 50mlの無水塩化メチレンに溶解した10g（2mM）のＭ−
PEG−5000に,0.56ml（4mM）のトリエチルアミン（TEA）
および0.81g（4mM）の４−ニトロフェニルクロロホルメ
ートを，撹拌しながら,TEAでpH7.5〜8.0に調節した状態
で添加した。この反応混合物を室温で４時間放置した。
この混合物を真空下で約10mlに濃縮し,200mlの撹拌した
ジエチルエーテル中に滴下した。沈澱物を濾別し，熱い
酢酸エチルから２度結晶化させた。Ｍ−PEG−ｐ−ニト
ロフェニルカーボネート（Ｍ−PEG−OCO−OPh−NO2）の
収率は,p−ニトロフェノールの吸収に基づく分光光度法
によって算出したところ,95％以上であった。
を有する活性化Ｍ−PEGの製造 実施例１ Ｍ−PEG 5000−Gly−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−Gly−OSu） 50mlの無水塩化メチレンに溶解した10g（2mM）のＭ−
PEG−5000に,0.56ml（4mM）のトリエチルアミン（TEA）
および0.81g（4mM）の４−ニトロフェニルクロロホルメ
ートを，撹拌しながら,TEAでpH7.5〜8.0に調節した状態
で添加した。この反応混合物を室温で４時間放置した。
この混合物を真空下で約10mlに濃縮し,200mlの撹拌した
ジエチルエーテル中に滴下した。沈澱物を濾別し，熱い
酢酸エチルから２度結晶化させた。Ｍ−PEG−ｐ−ニト
ロフェニルカーボネート（Ｍ−PEG−OCO−OPh−NO2）の
収率は,p−ニトロフェノールの吸収に基づく分光光度法
によって算出したところ,95％以上であった。
グリシン1.5g（20mM）を20mlの水に溶解させ，この溶
液をpH8.0〜8.3に調節し,10.33g（2mM）のＭ−PEG−OCO
−Ｏ−Ph−NO2を，撹拌下,NaOHでpH8.3に調節しなが
ら，添加した。室温で４時間後，この溶液を０℃に冷却
して,2N HClでpH3とし,CHCl3で３回抽出した。クロロホ
ルム層を水で洗浄し,Na2SO4で乾燥させ，濃縮し，ジエ
チルエーテルで沈澱させ，そして沈澱物をエタノールか
ら再結晶させた。収率は,COOH滴定と，酸加水分解させ
た後で通常のアミノ酸分析によって得られたグリシン含
有量とから算出したところ,85％であった。
液をpH8.0〜8.3に調節し,10.33g（2mM）のＭ−PEG−OCO
−Ｏ−Ph−NO2を，撹拌下,NaOHでpH8.3に調節しなが
ら，添加した。室温で４時間後，この溶液を０℃に冷却
して,2N HClでpH3とし,CHCl3で３回抽出した。クロロホ
ルム層を水で洗浄し,Na2SO4で乾燥させ，濃縮し，ジエ
チルエーテルで沈澱させ，そして沈澱物をエタノールか
ら再結晶させた。収率は,COOH滴定と，酸加水分解させ
た後で通常のアミノ酸分析によって得られたグリシン含
有量とから算出したところ,85％であった。
Ｍ−PEG−Gly−OH10.2g（2mM）を50mlの無水塩化メチ
レンに溶解させ,0℃に冷却し,0.46g（4mM）のＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドおよび0.83g（4mM）のN,N−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを撹拌しながら添加した。
温度を20℃に上昇させながら,4時間，撹拌し続けた。沈
澱したジシクロヘキシル尿素を反応混合物から濾去し，
濾液を真空下で濃縮し，生成物をジエチルエーテルで沈
澱させ，酢酸エチルから再結晶させた。エステル化の収
率は，ヒドロキシスクシンイミドのUV吸収から算出した
ところ,85％であった。
レンに溶解させ,0℃に冷却し,0.46g（4mM）のＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドおよび0.83g（4mM）のN,N−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを撹拌しながら添加した。
温度を20℃に上昇させながら,4時間，撹拌し続けた。沈
澱したジシクロヘキシル尿素を反応混合物から濾去し，
濾液を真空下で濃縮し，生成物をジエチルエーテルで沈
澱させ，酢酸エチルから再結晶させた。エステル化の収
率は，ヒドロキシスクシンイミドのUV吸収から算出した
ところ,85％であった。
Ｍ−PEG 1900を出発材料として，同一の手順により，
同様の収率で,M−PEG−1900−Gly−OSu誘導体を得た。
同様の収率で,M−PEG−1900−Gly−OSu誘導体を得た。
実施例２ Ｍ−PEG 5000−Trp−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−Trp−OSu） 上記の手順により,80％の収率で,PEG−トリプトファ
ン誘導体を得た。なお，収率は，ヒドロキシスクシンイ
ミドの吸収と,280nmにおけるトリプトファンの吸収（第
1a図）とに基づいて算出した。
ン誘導体を得た。なお，収率は，ヒドロキシスクシンイ
ミドの吸収と,280nmにおけるトリプトファンの吸収（第
1a図）とに基づいて算出した。
生成物は，第１図に示すようなトリプトファンの特徴
的な吸収スペクトルを示した。
的な吸収スペクトルを示した。
実施例３ Ｍ−PEG 5000−Phe−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−Phe−OSu） 実施例１で述べた手順に従って,M−PEGフェニルアラ
ニン誘導体を得た。生成物は，フェニルアラニンの典型
的な吸収が260nmである（第2a図），第２図に示すよう
なスペクトルを示した。
ニン誘導体を得た。生成物は，フェニルアラニンの典型
的な吸収が260nmである（第2a図），第２図に示すよう
なスペクトルを示した。
実施例４ Ｍ−PEG 5000−nor−Leu−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−nor−Leu−OSu） この誘導体は，上述したようにＭ−PEG 5000およびＭ
−PEG 1900の両方によって得られた。95％の収率は，酸
加水分解させた後でアミノ酸分析装置によってnor−Leu
の含有量から算出された。
−PEG 1900の両方によって得られた。95％の収率は，酸
加水分解させた後でアミノ酸分析装置によってnor−Leu
の含有量から算出された。
実施例５ Ｍ−PEG 5000−Gly−Gly−スクシンイミジルエステル （Ｍ−PEG 5000−Gly−Gly−OSu） モデル化合物としてGly−Glyを用い，すでに実施例１
で述べた手順に従って，ジペプチドをスペーサーアーム
として有する活性化されたモノメトキシポリエチレング
リコールを製造した。酢酸エチルから結晶化させた生成
物が85％の収率で得られた。
で述べた手順に従って，ジペプチドをスペーサーアーム
として有する活性化されたモノメトキシポリエチレング
リコールを製造した。酢酸エチルから結晶化させた生成
物が85％の収率で得られた。
B.アミノ酸誘導体化されたＭ−PEGによる生物活性物質
の改質 実施例６ スーパーオキシドジスムターゼの改質 6.1 Ｍ−PEG 5000−Gly−OSuによる改質 酵母スーパーオキシドジスムターゼ（ＳOD,EC1.15.1.
1）（100mg）を,10mlのホウ酸緩衝液（0.2M,pH8）に溶
解させ,640mgのＭ−PEG 5000−Gly−OSuを室温にて激し
い撹拌下,pHを一定に保持しながら，添加した。この混
合物を30分間放置した。
の改質 実施例６ スーパーオキシドジスムターゼの改質 6.1 Ｍ−PEG 5000−Gly−OSuによる改質 酵母スーパーオキシドジスムターゼ（ＳOD,EC1.15.1.
1）（100mg）を,10mlのホウ酸緩衝液（0.2M,pH8）に溶
解させ,640mgのＭ−PEG 5000−Gly−OSuを室温にて激し
い撹拌下,pHを一定に保持しながら，添加した。この混
合物を30分間放置した。
ポリマー鎖の結合度を,SnyderおよびSabocinskiのト
リニトロフェニル化法（Snyder S.I.およびSabocinsky
P.Z.,Anal.Biochem.，64 248−288,1975）によって評価
したアミノ基の改質率に基づいて求めたところ,85％〜9
0％以上であった。一方，酵素活性は20％低下した。酵
素活性は,Paolettiらの方法（Paoletti F.,Aldinicci
D.,Mocali A.and Caparrini A.,Anal.Biochem.，154 53
6−541,1986）によって評価した。
リニトロフェニル化法（Snyder S.I.およびSabocinsky
P.Z.,Anal.Biochem.，64 248−288,1975）によって評価
したアミノ基の改質率に基づいて求めたところ,85％〜9
0％以上であった。一方，酵素活性は20％低下した。酵
素活性は,Paolettiらの方法（Paoletti F.,Aldinicci
D.,Mocali A.and Caparrini A.,Anal.Biochem.，154 53
6−541,1986）によって評価した。
PM 10 AMICONメンブレン上で，遠心分離を２回行うこ
とによって，過剰のポリマーを除去し，濃縮された酵素
を,BIO−GEL A カラム（0.5m）上でクロマトグラフィー
にかけた。Ｍ−PEGで改質された酵素は,UV吸収（第3a
図）,M−PEGのヨウ素反応，および酵素活性から明らか
なように，最初は対称的なピークで溶出する。その後過
剰のＭ−PEGが溶出し，次いで，脱離基であるヒドロキ
シスクシンイミドが溶出する。タンパク質のピーク画分
を採取し，メンブレンで限外濾過を行った後，凍結乾燥
させる。Ｍ−PEGで改質したSODは，デシケーター中,0℃
にて保存される。
とによって，過剰のポリマーを除去し，濃縮された酵素
を,BIO−GEL A カラム（0.5m）上でクロマトグラフィー
にかけた。Ｍ−PEGで改質された酵素は,UV吸収（第3a
図）,M−PEGのヨウ素反応，および酵素活性から明らか
なように，最初は対称的なピークで溶出する。その後過
剰のＭ−PEGが溶出し，次いで，脱離基であるヒドロキ
シスクシンイミドが溶出する。タンパク質のピーク画分
を採取し，メンブレンで限外濾過を行った後，凍結乾燥
させる。Ｍ−PEGで改質したSODは，デシケーター中,0℃
にて保存される。
6.2 Ｍ−PEG 5000−Trp−OSuによる改質 上述のように反応を行った（6.1を参照）。SODに対す
るポリマー鎖の結合度，および酵素活性の低下は同程度
であったが，生成物は第３図に示すスペクトルを示し
た。このスペクトルでは，トリプトファンの寄与が明白
である。
るポリマー鎖の結合度，および酵素活性の低下は同程度
であったが，生成物は第３図に示すスペクトルを示し
た。このスペクトルでは，トリプトファンの寄与が明白
である。
6.3 Ｍ−PEG 5000−nor−Leu−OSuによる改質 6.1節で述べたように反応を行って，同様の酵素的性
質を有し，かつTNBS分析によって同程度の改質率を示す
生成物を得た。この場合，酸加水分解させた後でアミノ
酸分析を行ったところ，各SOD分子に18個のＭ−PEG鎖が
結合していることを示すノルロイシンの存在が明らかと
なり，これはTNBS試験の結果と一致した。
質を有し，かつTNBS分析によって同程度の改質率を示す
生成物を得た。この場合，酸加水分解させた後でアミノ
酸分析を行ったところ，各SOD分子に18個のＭ−PEG鎖が
結合していることを示すノルロイシンの存在が明らかと
なり，これはTNBS試験の結果と一致した。
6.4 Ｍ−PEG 1900−Gly−OSuによる改質 6.1節のように反応を行ったところ，ポリマーの結合
および酵素活性に関する限り，同様の結果を得た。この
生成物は，改質に用いたポリマーが低分子量であること
から予想されるように，遅い段階でカラムから溶出す
る。
および酵素活性に関する限り，同様の結果を得た。この
生成物は，改質に用いたポリマーが低分子量であること
から予想されるように，遅い段階でカラムから溶出す
る。
6.1〜6.4節に対する注釈：未反応のＭ−PEG 5000また
はＭ−PEG 1900からの精製は，反応混合物を希釈（約１
〜10倍）した後,AMICONメンブレン上の限外濾過による
濃縮によって，成功裏に行うことができた；この希釈お
よび限外濾過の手順は少なくとも４回繰り返さなければ
ならない。
はＭ−PEG 1900からの精製は，反応混合物を希釈（約１
〜10倍）した後,AMICONメンブレン上の限外濾過による
濃縮によって，成功裏に行うことができた；この希釈お
よび限外濾過の手順は少なくとも４回繰り返さなければ
ならない。
天然型SODおよびＭ−PEGで改質されたSODの薬理運動学
的な挙動 改質されていない酵母スーパーオキシドジスムターゼ
（5.5mg）と,M−PEG 5000−GlyもしくはＭ−PEG 1900−
Glyで改質された等活性量のSODを，ウィスター（Wista
r）の雄シロネズミの尾部静脈に注射した。
的な挙動 改質されていない酵母スーパーオキシドジスムターゼ
（5.5mg）と,M−PEG 5000−GlyもしくはＭ−PEG 1900−
Glyで改質された等活性量のSODを，ウィスター（Wista
r）の雄シロネズミの尾部静脈に注射した。
予定された時点で，ヘパリン処理した注射器で心臓を
刺して血液を採取し，血漿中のSOD量を，その酵素活性
に基づいて評価した。血漿中の活性を評価する前に,CM
セルロースとSEPHADEX G 25とのカラムクロマトグラフ
ィーによって妨害物質を除去した。天然型,M−PEG 1900
およびＭ−PEG 5000で改質された各誘導体に対して,6分
間,15時間および28時間の50％クリアランスを，それぞ
れ求めた。
刺して血液を採取し，血漿中のSOD量を，その酵素活性
に基づいて評価した。血漿中の活性を評価する前に,CM
セルロースとSEPHADEX G 25とのカラムクロマトグラフ
ィーによって妨害物質を除去した。天然型,M−PEG 1900
およびＭ−PEG 5000で改質された各誘導体に対して,6分
間,15時間および28時間の50％クリアランスを，それぞ
れ求めた。
酵素的性質 Ｍ−PEG 1900およびＭ−PEG 5000で改質された各酵母
スーパーオキシドジスムターゼの様々な条件に対する安
定性は以下のとおりである： a.M−PEGで改質された酵素は，タンパク質変性剤（例え
ば,2M塩化グアニジウム）中におけるインキュベーショ
ンに対して不安定である;4時間後，その残存活性は天然
型の酵素が20％であるのに比較して10％である。
スーパーオキシドジスムターゼの様々な条件に対する安
定性は以下のとおりである： a.M−PEGで改質された酵素は，タンパク質変性剤（例え
ば,2M塩化グアニジウム）中におけるインキュベーショ
ンに対して不安定である;4時間後，その残存活性は天然
型の酵素が20％であるのに比較して10％である。
b.M−PEG 5000−Gly−SODを，水中,1mg/mlの濃度で,0
℃,20℃または35℃にて放置した。少なくとも８日間の
インキュベーションに対して活性はまったく失われなか
った。0.01mg/mlまでの低濃度では,20℃にて８日間放置
しても安定であった。
℃,20℃または35℃にて放置した。少なくとも８日間の
インキュベーションに対して活性はまったく失われなか
った。0.01mg/mlまでの低濃度では,20℃にて８日間放置
しても安定であった。
Ｍ−PEG 5000−Gly−SODは，凍結および融解の繰り返
しサイクルに対して安定であることがわかった。
しサイクルに対して安定であることがわかった。
Ｍ−PEG酵素溶液を，真空下，低温で蒸発乾燥させ，
溶解させ，そして再び濃縮した;M−PEGで修飾された酵
素は，少なくとも６回のこのようなサイクルに対して安
定であったが，改質されていない酵素は，同じ条件下で
少なくとも15％の活性を失った。
溶解させ，そして再び濃縮した;M−PEGで修飾された酵
素は，少なくとも６回のこのようなサイクルに対して安
定であったが，改質されていない酵素は，同じ条件下で
少なくとも15％の活性を失った。
Ｍ−PEG 5000−Gly−SODは，溶解および凍結乾燥の繰
り返しサイクルに対して完全に安定であったが，フリー
の酵素は各処理段階で約５％の活性を失った。
り返しサイクルに対して完全に安定であったが，フリー
の酵素は各処理段階で約５％の活性を失った。
Ｍ−PEG 5000−Gly−SODは，金属キレートの存在下で
は，フリーの酵素に比較して，活性に不可欠な金属を非
常に失いにくいことがわかった。
は，フリーの酵素に比較して，活性に不可欠な金属を非
常に失いにくいことがわかった。
実施例７ アルギナーゼによる改質 （Ｍ−PEG 5000−Gly−アルギナーゼ） 文献に従って比活性が1900IU/mgになるまで高度に精
製された,100mgのウシ肝臓アルギナーゼ（EC3.5.3.1）
を,15mlの炭酸緩衝液（pH8.5,0.2M）に溶解させ，そし
て800mgのＭ−PEG 5000−Gly−OSuを，激しい撹拌下，
マイクロビュレットに0.1N NaOHを入れたpH維持装置に
よってpHを一定に保持しながら，添加した。30分後，こ
の溶液を水で50mlに希釈し,AMICON PM 10限外濾過メン
ブレンを用いて４℃にて限外濾過することによって，容
積を約5mlに減少させた。Ｍ−PEGで改質したアルギナー
ゼを，実施例１で述べたように，過剰の試薬および反応
副産物からカラムクロマトグラフィーによって精製し
た。ポリマーの結合度はアルギナーゼのアミノ基50％を
越えていたが，アルギナーゼの活性は，わずか５％しか
低下していなかった。
製された,100mgのウシ肝臓アルギナーゼ（EC3.5.3.1）
を,15mlの炭酸緩衝液（pH8.5,0.2M）に溶解させ，そし
て800mgのＭ−PEG 5000−Gly−OSuを，激しい撹拌下，
マイクロビュレットに0.1N NaOHを入れたpH維持装置に
よってpHを一定に保持しながら，添加した。30分後，こ
の溶液を水で50mlに希釈し,AMICON PM 10限外濾過メン
ブレンを用いて４℃にて限外濾過することによって，容
積を約5mlに減少させた。Ｍ−PEGで改質したアルギナー
ゼを，実施例１で述べたように，過剰の試薬および反応
副産物からカラムクロマトグラフィーによって精製し
た。ポリマーの結合度はアルギナーゼのアミノ基50％を
越えていたが，アルギナーゼの活性は，わずか５％しか
低下していなかった。
Ｍ−PEG 5000−Gly−アルギナーゼの酵素的および薬理
運動学的な性質 改質を行うことによって，タンパク質分解酵素（例え
ば，トリプシン，キモトリプシン，エラスターゼおよび
サブチリシン）の作用に対する上記酵素の安定性が増大
した。
運動学的な性質 改質を行うことによって，タンパク質分解酵素（例え
ば，トリプシン，キモトリプシン，エラスターゼおよび
サブチリシン）の作用に対する上記酵素の安定性が増大
した。
天然型酵素と,PEGで誘導体化された酵素との薬理運動
学的な挙動を,6.1節で述べたように，ラットで評価し
た。1.5時間および８時間の50％クリアランス時間を，
改質されていないアルギナーゼと，ポリマーで改質した
アルギナーゼとについて，それぞれ求めた。
学的な挙動を,6.1節で述べたように，ラットで評価し
た。1.5時間および８時間の50％クリアランス時間を，
改質されていないアルギナーゼと，ポリマーで改質した
アルギナーゼとについて，それぞれ求めた。
実施例８ リボヌクレアーゼによる改質 （Ｍ−PEG 5000−Gly−リボヌクレアーゼ） ウシ膵臓由来のリボヌクレアーゼＡ（EC2.7.7.16）
を,6.1節のように改質して精製した。改質に用いたＭ−
PEG−Gly−OSuの量は，酵素の利用可能なアミノ基に基
づいて計算したところ，モル比で2.5:1であった。改質
を行った結果，リボヌクレアーゼ１分子に対してポリマ
ー11分子が共有結合した。
を,6.1節のように改質して精製した。改質に用いたＭ−
PEG−Gly−OSuの量は，酵素の利用可能なアミノ基に基
づいて計算したところ，モル比で2.5:1であった。改質
を行った結果，リボヌクレアーゼ１分子に対してポリマ
ー11分子が共有結合した。
改質を行うと，シチジン−２′,3′−環状リン酸を用
いて確認したところ，酵素活性が約10％低下するが，改
質された酵素はリボ核酸に対して50％の活性を有するこ
とがわかった。
いて確認したところ，酵素活性が約10％低下するが，改
質された酵素はリボ核酸に対して50％の活性を有するこ
とがわかった。
実施例９ ウロキナーゼによる改質 （Ｍ−PEG 5000−Gly−ウロキナーゼ） 尿由来のウロキナーゼ（EC3.4.4.a）を,6.1節で述べ
たように改質して精製した。この酵素を用い，活性化ポ
リマーとタンパク質のアミノ基とのモル比を1:2とし
て，改質を行った。これらの条件下では，約10個のポリ
マー分子が各ウロキナーゼ分子に結合した。血栓溶解に
ついて評価した酵素活性は天然型酵素の30％であった
が，合成基質であるカルボベンゾキシリジン−０−ニト
ロフェニルエステルのエステル分解活性は改質されてい
ないウロキナーゼと同一であった。
たように改質して精製した。この酵素を用い，活性化ポ
リマーとタンパク質のアミノ基とのモル比を1:2とし
て，改質を行った。これらの条件下では，約10個のポリ
マー分子が各ウロキナーゼ分子に結合した。血栓溶解に
ついて評価した酵素活性は天然型酵素の30％であった
が，合成基質であるカルボベンゾキシリジン−０−ニト
ロフェニルエステルのエステル分解活性は改質されてい
ないウロキナーゼと同一であった。
実施例10 アルピシリンによる改質 10.1 Ｍ−PEG 5000−Gly−アンピシリン 5mlのホウ酸緩衝液（0.2M,pH8）中に50mgのアンピシ
リン・ナトリウム塩を含む溶液に,600mg（0.12mM）のＭ
−PEG 5000−Gly−OSu）を，激しい撹拌下，添加した。
リン・ナトリウム塩を含む溶液に,600mg（0.12mM）のＭ
−PEG 5000−Gly−OSu）を，激しい撹拌下，添加した。
反応混合物を20分間放置した後，過剰のアンピシリン
および反応副産物を,BIO GEL P 60（100〜200メッシ
ュ）のカラム上でのゲル濾過クロマトグラフィーによっ
て分離した。Ｍ−PEGで改質された薬剤は，アンピシリ
ンのUV吸収およびPEGに対するヨウ素反応によって明ら
かなように，最初は対称的なピークで溶出した。
および反応副産物を,BIO GEL P 60（100〜200メッシ
ュ）のカラム上でのゲル濾過クロマトグラフィーによっ
て分離した。Ｍ−PEGで改質された薬剤は，アンピシリ
ンのUV吸収およびPEGに対するヨウ素反応によって明ら
かなように，最初は対称的なピークで溶出した。
改質された薬剤のピーク分画を採取し，限外濾過によ
って濃縮し，そして凍結乾燥した。生成物は，酢酸エチ
ルから再結晶させたところ，出発原料のアルピシリンを
基準にして70％の収率であった。以下に述べる手順によ
っても同じ生成物が製造された。
って濃縮し，そして凍結乾燥した。生成物は，酢酸エチ
ルから再結晶させたところ，出発原料のアルピシリンを
基準にして70％の収率であった。以下に述べる手順によ
っても同じ生成物が製造された。
10.2 Ｍ−PEG 5000−Gly−アンピシリン 100mg（0.27mM）のアンピシリン・ナトリウム塩を,20
mlのN,N−ジメチルホルムアミド（DMF）に溶解させ,1.0
g（0.2mM）のＭ−PEG 5000−Gly−OSuおよび0.03mlの４
−メチルモルホリン（NMM）を,NMMでpH8〜8.3に調節し
ながら，添加した。反応混合物を，撹拌下，室温で約４
時間保持した後，高真空下で濃縮乾燥させた。残留物を
5mlのCH2Cl2に溶解させ，撹拌したジエチルエーテル（1
00ml）中に滴下した。沈澱物を濾別して結晶化させた。
１回目は熱い酢酸エチルから結晶化させ,2回目は熱いメ
タノールから結晶化させた。収率は出発原料のアンピシ
リンを基準にして60％であった。
mlのN,N−ジメチルホルムアミド（DMF）に溶解させ,1.0
g（0.2mM）のＭ−PEG 5000−Gly−OSuおよび0.03mlの４
−メチルモルホリン（NMM）を,NMMでpH8〜8.3に調節し
ながら，添加した。反応混合物を，撹拌下，室温で約４
時間保持した後，高真空下で濃縮乾燥させた。残留物を
5mlのCH2Cl2に溶解させ，撹拌したジエチルエーテル（1
00ml）中に滴下した。沈澱物を濾別して結晶化させた。
１回目は熱い酢酸エチルから結晶化させ,2回目は熱いメ
タノールから結晶化させた。収率は出発原料のアンピシ
リンを基準にして60％であった。
実施例11 ドキソルビシンによる改質 （Ｍ−PEG 5000−Gly−ドキソルビシン） 塩酸ドキソルビシンの溶液に,50mg（8.6×10-2mM）の
Ｍ−PEG 5000−Gly−OSuを少しずつ添加した。この混合
物を，激しい撹拌下，室温にて放置した。15分後,1M HC
lでpH7に調節し，生成物を，遊離した薬剤および脱離基
であるヒドロキシスクシンイミドから,BIO GEL P 60（1
00〜200メッシュ）のカラム上でのゲル濾過クロマトグ
ラフィーによって精製した。Ｍ−PEGで改質された薬剤
は，ドキソルビシンの典型的なUV吸収（OD 230および48
0nm）と,M−PEGに対して予想されるヨウ素反応とを示す
ピークで溶出した。Ｍ−PEG 5000−Gly−ドキソルビシ
ンの画分を採取し，限外濾過によって濃縮し，そして凍
結乾燥した。生成物を,BIO GEL A カラム（0.5m）上で
のクロマトグラフィーによって，さらに精製した。全収
率は，出発原料の薬剤を基準にして,50％であった。
Ｍ−PEG 5000−Gly−OSuを少しずつ添加した。この混合
物を，激しい撹拌下，室温にて放置した。15分後,1M HC
lでpH7に調節し，生成物を，遊離した薬剤および脱離基
であるヒドロキシスクシンイミドから,BIO GEL P 60（1
00〜200メッシュ）のカラム上でのゲル濾過クロマトグ
ラフィーによって精製した。Ｍ−PEGで改質された薬剤
は，ドキソルビシンの典型的なUV吸収（OD 230および48
0nm）と,M−PEGに対して予想されるヨウ素反応とを示す
ピークで溶出した。Ｍ−PEG 5000−Gly−ドキソルビシ
ンの画分を採取し，限外濾過によって濃縮し，そして凍
結乾燥した。生成物を,BIO GEL A カラム（0.5m）上で
のクロマトグラフィーによって，さらに精製した。全収
率は，出発原料の薬剤を基準にして,50％であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/48 Ａ６１Ｋ 37/36 (72)発明者 オルソリニ ピエロ スイス ツェーハー 1920 マルティニ リュ ドゥ ロピタル 11 (72)発明者 デゲンギ ロマノ スイス ツェーハー 1264 サン セル グ シュゾ デシュ ビー １
Claims (6)
- 【請求項１】下記の式で表される生物学的に活性な薬剤
ポリマー誘導体： RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）−NH−
Ｚ （Ｉ） ここで， Ｒは低級アルキル基を表し， ｎは25と250との間の整数であり， Ｘは隣接するNH基およびCO基と組み合わせると，アミノ
酸残基もしくはジペプチド残基もしくはトリペプチド残
基を表し，そして Ｚは隣接するNH基と組み合わせると，生物学的に活性な
ペプチドもしくはタンパク質，またはNH基もしくはNH2
基を含む薬剤残基を表す。 - 【請求項２】Ｒが，メチル基を表し， ｎが,40と115との間の整数を表し， Ｘが，隣接するNH基およびCO基と組み合わせると，グリ
シン，フェニルアラニン，トリプトファンおよびノルロ
イシンから選択されるアミノ酸残基，あるいはGly−Gl
y,Arg−Arg,Phe−Arg,Gly−Gly−Arg,Gly−Gly−Pheお
よびGly−Leu−Gly−Leuから選択されるジペプチドもし
くはトリペプチドを表し， Ｚが，隣接するNH基と組み合わせると，スーパーオキシ
ドジスムターゼ，リボヌクレアーゼ，アルギナーゼ，ア
スパラギナーゼ，ウロキナーゼ，アンピシリン，ドキソ
ルビシン,N−デスメチル−タモキシフェン,LHRHおよび
その合成類似体，ソマトスタチンおよびその合成類似
体，インターロイキン2,腫瘍壊死因子，インシュリン,I
GF−1,天然型もしくは組換え型のインターフェロン，ア
デニン−アラビノシド（ara−Ａ），シトシン−アラビ
ノシド（ara−Ｃ）またはアシクロバールから選択され
る，生物学的に活性なペプチド，タンパク質もしくは薬
剤の残基を表すことを特徴とする請求項１に記載の薬剤
・ポリマー誘導体。 - 【請求項３】請求項１で定義された式（Ｉ）で表される
生物学的に活性な薬剤・ポリマー誘導体を製造する方法
であって， ａ）下記の式 RO−（CH2−CH2O）nH （II） （ここで,Rおよびｎは上で定義したとおりである） で表されるモノアルコキシポリエチレングリコール誘導
体を,2,4,5−トリクロロフェニルクロロホルメートもし
くは４−ニトロフェニルクロロホルメートと反応させ
て，対応するカーボネートを得る工程と； ｂ）このようにして得られたカーボネートを，下記の式 H2N−Ｘ−（CO）OH （III） （ここで,Xは上で定義したとおりである） で表されるアミノ酸もしくはジペプチドもしくはトリペ
プチドと反応させて下記の式 RO−（CH2−CH2O）ｎ−（CO）−NH−Ｘ−（CO）OH （IV） で表される化合物を得る工程と； ｃ）このようにして得られた式（IV）で表される化合物
を対応するスクシンイミジルエステルに転換する工程
と； ｄ）最後に，このスクシンイミジルエステルを，下記の
式 Ｒ−NH−ＺまたはH2N−Ｚ （Ｖ） （ここで,RおよびＺはクレーム１で定義したとおりであ
る） で表される生物学的に活性なペプチドもしくはタンパク
質，またはNH基もしくはNH2基を含む薬剤と反応させる
工程とからなることを特徴とする製造方法。 - 【請求項４】請求項１に定義される式（Ｉ）で表される
少なくとも１つの生物学的に活性な薬剤・ポリマー誘導
体を活性成分として含有する薬剤組成物。 - 【請求項５】式（Ｉ）で表される生物学的に活性な薬剤
・ポリマー誘導体を活性成分として含有する請求項４に
記載の薬剤組成物であって， Ｒが，メチル基を表し， ｎが,40と115との間の整数を表し， Ｘが，隣接するNH基およびCO基と組み合わせると，グリ
シン，フェニルアラニン，トリプトファンおよびノルロ
イシンから選択されるアミノ酸残基，あるいはGly−Gl
y,Arg−Arg,Phe−Arg,Gly−Gly−Arg,Gly−Gly−Pheお
よびGly−Leu−Gly−Leuから選択されるジペプチドもし
くはトリペプチドを表し， Ｚが，隣接するNH基と組み合わせると，スーパーオキシ
ドジスムターゼ，リボヌクレアーゼ，アルギナーゼ，ア
スパラギナーゼ，ウロキナーゼ，アンピシリン，ドキソ
ルビシン,N−デスメチル−タモキシフェン,LHRHおよび
その合成類似体，ソマトスタチンおよびその合成類似
体，カルシトニン，インターロイキン2,腫瘍壊死因子，
インシュリン,IGF−1,天然型もしくは組換え型のインタ
ーフェロン，アデニン−アラビノシド（ara−Ａ），シ
トシン−アラビノシド（ara−Ｃ）またはアシクロバー
ルから選択される，生物学的に活性なペプチド，タンパ
ク質もしくは薬剤の残基を表すことを特徴とする薬剤組
成物。 - 【請求項６】請求項５に記載の薬剤組成物であって，以
下のものからなる群から選択される生物学的に活性な薬
剤・ポリマー誘導体を活性成分として含有する薬剤組成
物： Ｍ−PEG 5000−Gly−スパーオキシドジスムターゼ， Ｍ−PEG 5000−Trp−スパーオキシドジスムターゼ， Ｍ−PEG 5000−nor−Leu−スパーオキシドジスムター
ゼ， Ｍ−PEG 1900−Gly−スパーオキシドジスムターゼ， Ｍ−PEG 5000−Gly−アルギナーゼ， Ｍ−PEG 5000−Gly−リボヌクレアーゼ， Ｍ−PEG 5000−Gly−ウロキナーゼ， Ｍ−PEG 5000−Gly−アンピシリン，および Ｍ−PEG 5000−Gly−ドキソルビシン， （ここで,M−PEGはモノメトキシポリエチレンを表
す）。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8918009.5 | 1989-08-07 | ||
| GB898918009A GB8918009D0 (en) | 1989-08-07 | 1989-08-07 | New biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
| GB8919618.2 | 1989-08-30 | ||
| GB898919618A GB8919618D0 (en) | 1989-08-30 | 1989-08-30 | New biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04501121A JPH04501121A (ja) | 1992-02-27 |
| JP2662311B2 true JP2662311B2 (ja) | 1997-10-08 |
Family
ID=26295714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2510696A Expired - Fee Related JP2662311B2 (ja) | 1989-08-07 | 1990-07-26 | 生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0437563B1 (ja) |
| JP (1) | JP2662311B2 (ja) |
| AT (1) | ATE118686T1 (ja) |
| CA (1) | CA2038935C (ja) |
| DE (1) | DE69017180T2 (ja) |
| DK (1) | DK0437563T3 (ja) |
| ES (1) | ES2069082T3 (ja) |
| WO (1) | WO1991001758A1 (ja) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5880131A (en) * | 1993-10-20 | 1999-03-09 | Enzon, Inc. | High molecular weight polymer-based prodrugs |
| US5951974A (en) * | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
| DK0730470T3 (da) * | 1993-11-10 | 2002-06-03 | Enzon Inc | Forbedrede interferonpolymerkonjugater |
| US5738846A (en) * | 1994-11-10 | 1998-04-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates and process for preparing the same |
| DE19514087A1 (de) * | 1995-04-13 | 1996-10-17 | Deutsches Krebsforsch | Konjugat aus einem Wirkstoff, einem Polyether und ggfs. einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein |
| AU5893796A (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
| AU5893696A (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
| GB9812550D0 (en) * | 1998-06-11 | 1998-08-05 | Aepact Ltd | Tumour therapy and imaging |
| EP1008355A1 (en) * | 1998-12-08 | 2000-06-14 | Debio Recherche Pharmaceutique S.A. | Method for identifying or analyzing polymer linkage sites on macromolecules using amino acid report binding |
| US6309633B1 (en) * | 1999-06-19 | 2001-10-30 | Nobex Corporation | Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same |
| GB0202906D0 (en) | 2002-02-07 | 2002-03-27 | Univ London | Prevention of myocardial damage |
| WO2004099245A1 (de) * | 2003-05-05 | 2004-11-18 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Stabilisiertes interferon-ϝ |
| JP2008505853A (ja) | 2004-04-13 | 2008-02-28 | クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド | 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体 |
| JP4877225B2 (ja) * | 2005-02-18 | 2012-02-15 | 日油株式会社 | ポリオキシアルキレン誘導体 |
| EP2044097A4 (en) | 2006-06-23 | 2010-10-06 | Quintessence Biosciences Inc | MODIFIED RIBONUCLEASES |
| US8298801B2 (en) | 2006-07-17 | 2012-10-30 | Quintessence Biosciences, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| US20110059921A1 (en) * | 2008-03-27 | 2011-03-10 | Ektar Therapeutics | Oligomer-Nitrogenous Base Conjugates |
| US8029782B2 (en) | 2008-10-01 | 2011-10-04 | Quintessence Biosciences, Inc. | Therapeutic ribonucleases |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4609546A (en) * | 1982-06-24 | 1986-09-02 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Long-acting composition |
| JPS60176586A (ja) * | 1984-02-21 | 1985-09-10 | Sanwa Kagaku Kenkyusho:Kk | 新規な修飾ウロキナ−ゼ、その製法並びにこれを含有する血栓溶解剤 |
| EP0229108B1 (en) * | 1985-06-26 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| CA1283046C (en) * | 1986-05-29 | 1991-04-16 | Nandini Katre | Tumor necrosis factor formulation |
| CA1308377C (en) * | 1987-08-21 | 1992-10-06 | Henry Berger, Jr. | Complex of polyethyleneglycol and tissue plasminogen activator |
-
1990
- 1990-07-26 JP JP2510696A patent/JP2662311B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-26 CA CA002038935A patent/CA2038935C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-26 EP EP90910711A patent/EP0437563B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-26 ES ES90910711T patent/ES2069082T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-26 DK DK90910711.2T patent/DK0437563T3/da active
- 1990-07-26 WO PCT/EP1990/001261 patent/WO1991001758A1/en active IP Right Grant
- 1990-07-26 AT AT90910711T patent/ATE118686T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-07-26 DE DE69017180T patent/DE69017180T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2038935C (en) | 1998-12-08 |
| ATE118686T1 (de) | 1995-03-15 |
| WO1991001758A1 (en) | 1991-02-21 |
| ES2069082T3 (es) | 1995-05-01 |
| EP0437563A1 (en) | 1991-07-24 |
| DE69017180D1 (de) | 1995-03-30 |
| CA2038935A1 (en) | 1991-02-08 |
| DE69017180T2 (de) | 1995-07-20 |
| DK0437563T3 (da) | 1995-05-29 |
| EP0437563B1 (en) | 1995-02-22 |
| JPH04501121A (ja) | 1992-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5286637A (en) | Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same | |
| JP2662311B2 (ja) | 生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法 | |
| EP1909845B1 (en) | N,n-bis-(2-hydroxyethyl) glycine amide as linker in polymer conjugated prodrugs | |
| JP2620517B2 (ja) | 重合性薬剤 | |
| AU698944B2 (en) | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations | |
| US5359030A (en) | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same | |
| KR100396983B1 (ko) | 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체 | |
| EP2089052A1 (en) | Peg linker compounds and biologically active conjugates thereof | |
| TWI254641B (en) | Solution-phase site-specific preparation of GRE-PEG conjugates, and composition of the conjugate | |
| JP3173794B2 (ja) | タンパク質またはポリペプチド類とその製造法および中間化合物 | |
| WO1996041813A9 (en) | Functionalized polymers for site-specific attachment | |
| CA2106519A1 (en) | Lyophilized polyethylene oxide modified protein and polypeptide complexes with cyclodextrin | |
| AU7327296A (en) | Functionalized polymers for site-specific attachment | |
| WO2012024613A1 (en) | Synergistic biomolecule-polymer conjugates | |
| EP1579873A1 (en) | Polymeric prodrugs | |
| EP1137442B1 (en) | Biologically active conjugates having a detectable reporter moiety and method of identification of said derivative | |
| WO1991015242A1 (en) | Conjugate compounds of polymers with other organic molecular entities | |
| EP1625855A1 (en) | Polymeric prodrug with a self-immolative linker | |
| WO2007061148A1 (en) | Site-specific peg conjugates of glp-1 and methods for production thereof | |
| JPH10509208A (ja) | 部位特異的結合のための官能化されたポリマー | |
| KR20060029770A (ko) | Ｇｌｐ－１의 선택적 ｐｅｇ 접합체 및 그 제조방법 | |
| MXPA98000883A (en) | Compositions of therapeutic agent stabilized by conjugation, supply and formulations of diagnost |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |