JP2659982B2 - カルシウムの測定法 - Google Patents
カルシウムの測定法Info
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- JP2659982B2 JP2659982B2 JP5894688A JP5894688A JP2659982B2 JP 2659982 B2 JP2659982 B2 JP 2659982B2 JP 5894688 A JP5894688 A JP 5894688A JP 5894688 A JP5894688 A JP 5894688A JP 2659982 B2 JP2659982 B2 JP 2659982B2
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- Japan
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- calcium
- present
- phospholipase
- measuring
- phosphorylcholine
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、他の金属の影響を受けることなく特異性が
高くかつ操作が簡便なカルシウムの測定法に関する。
高くかつ操作が簡便なカルシウムの測定法に関する。
（従来の技術） 生体内のカルシウム（Ca）のほとんど（99％）は骨中
に存在するが、その他微量ながら体中のあらゆる組織に
含まれている。
に存在するが、その他微量ながら体中のあらゆる組織に
含まれている。
血清中のカルシウムのうち50〜60％はイオン（Ca2+）
として存在し、他は血漿蛋白と結合している。臨床的意
義を持つのはイオン型の方で、血液凝固、筋収縮、刺激
の伝達および酵素活性等に必須の物質である。
として存在し、他は血漿蛋白と結合している。臨床的意
義を持つのはイオン型の方で、血液凝固、筋収縮、刺激
の伝達および酵素活性等に必須の物質である。
カルシウムの代謝は各種のホルモン（副甲状腺ホルモ
ン、カルシトニン、成長ホルモン等）と密接な関連を持
ち、血清カルシウム量はカルシウム吸収異常、骨疾患の
他内分泌疾患でも変動する。このように血清カルシウム
量は各種の病態を反映する一つの指標となるため、無機
リンの測定と共に主要な無機質測定項目の一つとなって
いる。
ン、カルシトニン、成長ホルモン等）と密接な関連を持
ち、血清カルシウム量はカルシウム吸収異常、骨疾患の
他内分泌疾患でも変動する。このように血清カルシウム
量は各種の病態を反映する一つの指標となるため、無機
リンの測定と共に主要な無機質測定項目の一つとなって
いる。
臨床検査室で従来から用いられているカルシウムの測
定法にOCPC法がある。この方法は、ｏ−クレゾールフタ
レインコンプレクソンがアルカリ下で血清中のカルシウ
ムと反応して生成する赤紫色の色素を測定して血清中の
カルシウムを求めるものである。
定法にOCPC法がある。この方法は、ｏ−クレゾールフタ
レインコンプレクソンがアルカリ下で血清中のカルシウ
ムと反応して生成する赤紫色の色素を測定して血清中の
カルシウムを求めるものである。
（発明が解決しようとする課題） 上記したOCPC法は、操作が簡単ではあるが、低値の
カルシウムを測定できない、温度の影響を受ける、
着色性が強く機器を汚す、発色後の安定性が悪い、
他の金属の影響を受ける、等の多くの欠点があった。
カルシウムを測定できない、温度の影響を受ける、
着色性が強く機器を汚す、発色後の安定性が悪い、
他の金属の影響を受ける、等の多くの欠点があった。
本発明方法は、上記欠点を解決するためにホスホリパ
ーゼA2のカルシウム依存性に着目して開発されたもの
で、Rate Assayができる、他の金属の影響を受ける
ことがなく特異性が高い、着色性が少ない、操作が
簡便である、ようにしたカルシウムの測定法を提供する
ことを目的とするものである。
ーゼA2のカルシウム依存性に着目して開発されたもの
で、Rate Assayができる、他の金属の影響を受ける
ことがなく特異性が高い、着色性が少ない、操作が
簡便である、ようにしたカルシウムの測定法を提供する
ことを目的とするものである。
（課題を解決するための手段） 上記目的を達成するために、本発明方法においては、
ホスホリルコリンチオエステルを基質に用い、検体中の
カルシウム量に応じて変化するホスホリパーゼA2の酵素
活性を測定することによって、検体中のカルシウム量を
測定するようにしたものである。
ホスホリルコリンチオエステルを基質に用い、検体中の
カルシウム量に応じて変化するホスホリパーゼA2の酵素
活性を測定することによって、検体中のカルシウム量を
測定するようにしたものである。
本発明で使用できるホスホリルコリンチオエステルの
代表例としては、下記式に示される２−ヘキサデカノイ
ルチオ−１−エチルホスホリルコリンがあるが、これに
限定されるものではなく、下記式中のＲを脂肪属及び芳
香属の炭化水素とした化合物及びその誘導体が包含され
る。さらに、チオグリコールのみならず、ホスホリルコ
リン類のチオール化合物も広範囲に使用できる。
代表例としては、下記式に示される２−ヘキサデカノイ
ルチオ−１−エチルホスホリルコリンがあるが、これに
限定されるものではなく、下記式中のＲを脂肪属及び芳
香属の炭化水素とした化合物及びその誘導体が包含され
る。さらに、チオグリコールのみならず、ホスホリルコ
リン類のチオール化合物も広範囲に使用できる。
ホスホリパーゼA2は、ブタ膵、ヘビ毒等の由来のもの
が使用できる。
が使用できる。
本発明方法の反応を式で示せば下記の通りである。
（上式中Ｒを−（CH2）14−CH3）とすれば、２−ヘキサ
デカノイルチオ−１−エチルホスホリルコリンであ
る。） （DTNBは5,5′−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）で
ある。） （作用） 本発明方法の測定原理は、ホスホリルコリンチオエス
テル、例えば２−ヘキサデカノイルチオ−１−エチルホ
スホリルコリン（チオグリコールレシチン）にCa2+の存
在下で活性化するホスホリパーゼA2を作用させチオール
化合物を生成させ、−SH基を発色させる発色剤、例えば
DTNB等を作用させて黄色色素を生成せしめ、これを比色
定量してCa2+を測定するものである。
デカノイルチオ−１−エチルホスホリルコリンであ
る。） （DTNBは5,5′−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）で
ある。） （作用） 本発明方法の測定原理は、ホスホリルコリンチオエス
テル、例えば２−ヘキサデカノイルチオ−１−エチルホ
スホリルコリン（チオグリコールレシチン）にCa2+の存
在下で活性化するホスホリパーゼA2を作用させチオール
化合物を生成させ、−SH基を発色させる発色剤、例えば
DTNB等を作用させて黄色色素を生成せしめ、これを比色
定量してCa2+を測定するものである。
（発明の効果） 以上のように、本発明方法によれば、Rate Assayが
できる、他の金属の影響を受けることがなく特異性が
高い、着色性が少ない、操作が簡便であるという大
きな効果を奏する。
できる、他の金属の影響を受けることがなく特異性が
高い、着色性が少ない、操作が簡便であるという大
きな効果を奏する。
（実施例） 以下に本発明の実施例を挙げて説明する。
実施例１ 試薬： トリスマレイン酸緩衝液 ……200mM,pH7.5 ２−ヘキサデカノイルチオ−１−エチルホスホリルコリ
ン ……0.1mM DTNB ……1mM ホスホリパーゼA2 ……0.8U/ml 測定条件： 試薬2mlを予め37℃で予備加温し、試料20μを加え
たのち、410nmで１分間当たりの吸光度変化と比較して
検体中のCa2+量を測定した。
ン ……0.1mM DTNB ……1mM ホスホリパーゼA2 ……0.8U/ml 測定条件： 試薬2mlを予め37℃で予備加温し、試料20μを加え
たのち、410nmで１分間当たりの吸光度変化と比較して
検体中のCa2+量を測定した。
直線性 Ca2+10mg/dl以下５段階希釈して△E/minを測定した結
果、第１図に示した如く、原点を通る良好な直線性が得
られた。
果、第１図に示した如く、原点を通る良好な直線性が得
られた。
反応の経時変化 Ca2+10mg/dlを加えて37℃における反応の経時変化を
とったところ、第２図に示したごとく直線的に反応が進
むことが確認された。
とったところ、第２図に示したごとく直線的に反応が進
むことが確認された。
第１図は実施例１の直線性を示すグラフ及び第２図は実
施例１の経時変化を示すグラフである。
施例１の経時変化を示すグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】ホスホリルコリンチオエステルを基質に用
い、検体中のカルシウム量に応じて変化するホスホリパ
ーゼA2の酵素活性を測定することによって、検体中のカ
ルシウム量を測定する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5894688A JP2659982B2 (ja) | 1988-03-12 | 1988-03-12 | カルシウムの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5894688A JP2659982B2 (ja) | 1988-03-12 | 1988-03-12 | カルシウムの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01231896A JPH01231896A (ja) | 1989-09-18 |
| JP2659982B2 true JP2659982B2 (ja) | 1997-09-30 |
Family
ID=13098997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5894688A Expired - Lifetime JP2659982B2 (ja) | 1988-03-12 | 1988-03-12 | カルシウムの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2659982B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5196087A (en) * | 1991-06-18 | 1993-03-23 | Multimedia Design, Inc. | Method for making multi-layer printed circuit board |
| US5618684A (en) * | 1992-02-07 | 1997-04-08 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Method of determination of calcium |
| JPH06335400A (ja) * | 1993-05-31 | 1994-12-06 | Kyowa Medex Co Ltd | イオン化カルシウムの測定法 |
| US5464754A (en) * | 1993-08-17 | 1995-11-07 | The Regents Of The University Of California | Assay and substrate for arachidonoyl-specific phospholipase A2 |
| US5948632A (en) | 1995-11-28 | 1999-09-07 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Method and reagent for measuring chlorine and calcium ions using a maltose derivative |
| CN100354630C (zh) * | 2002-10-31 | 2007-12-12 | 世诺临床诊断制品株式会社 | 样品中钙的测定试剂和测定方法 |
-
1988
- 1988-03-12 JP JP5894688A patent/JP2659982B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01231896A (ja) | 1989-09-18 |
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