JP2549665B2 - フロ−サイトメトリ用網状赤血球測定試薬 - Google Patents
フロ−サイトメトリ用網状赤血球測定試薬Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はフローサイトメトリ用網状赤血球測定試薬に
関する。より詳細には、本発明は染色原液と緩衝液との
二液からなるフローサイトメトリ用網状赤血球測定試薬
に関する。
関する。より詳細には、本発明は染色原液と緩衝液との
二液からなるフローサイトメトリ用網状赤血球測定試薬
に関する。
（従来の技術） 血液中の未成熟の赤血球は網状赤血球（レチクロサイ
ト,Reticulocyto）と呼ばれ、全赤血球数中に通常0.7〜
2.2％含まれる。網状赤血球数を測定することは急性内
出血，溶血性貧血，再生不良性貧血その他の疾病の診断
を裏付けること、あるいは薬剤投与後の経過を監視する
こと等に役立ち、臨床検査分野において重要視されてい
る。
ト,Reticulocyto）と呼ばれ、全赤血球数中に通常0.7〜
2.2％含まれる。網状赤血球数を測定することは急性内
出血，溶血性貧血，再生不良性貧血その他の疾病の診断
を裏付けること、あるいは薬剤投与後の経過を監視する
こと等に役立ち、臨床検査分野において重要視されてい
る。
上記網状赤血球の係数には、従来からニューメチレン
ブルー，ブリリアントクレシルブルー等の塩基性染料に
より染色された塗抹血液試料を観察し、発色して見られ
る網状赤血球の全赤血球数中に占める割合を求める方法
が用いられていた。
ブルー，ブリリアントクレシルブルー等の塩基性染料に
より染色された塗抹血液試料を観察し、発色して見られ
る網状赤血球の全赤血球数中に占める割合を求める方法
が用いられていた。
この方法は、染色等の血液試料の前処理および染色後
の目視算定に多大の時間と労力を要し、検体数の大い場
合には不適当なものであった。
の目視算定に多大の時間と労力を要し、検体数の大い場
合には不適当なものであった。
そのためフローサイトメトリを利用し網状赤血球計数
を自動化する方法がいくつか提案されている。たとえ
ば、特開昭61−280565号公報および特開昭62−34058号
公報には、オーラミンＯ（Auramine O）を含有する螢光
染色試薬を用いフローサイトメトリにより網状赤血球を
計数する方法が示されている。
を自動化する方法がいくつか提案されている。たとえ
ば、特開昭61−280565号公報および特開昭62−34058号
公報には、オーラミンＯ（Auramine O）を含有する螢光
染色試薬を用いフローサイトメトリにより網状赤血球を
計数する方法が示されている。
（発明が解決しようとする問題点） 上記オーラミンＯは酸またはアルカリを触媒として下
式に示す加水分解反応を起し、その速度定数は高温度ほ
ど大きいことが、W.C.ホルムズ（W.C.Holms）他「ジャ
ーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.
Amer.Chem.Soc.）」、第46巻、2343〜2348頁、1924年に
記載されている。
式に示す加水分解反応を起し、その速度定数は高温度ほ
ど大きいことが、W.C.ホルムズ（W.C.Holms）他「ジャ
ーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.
Amer.Chem.Soc.）」、第46巻、2343〜2348頁、1924年に
記載されている。
たとえば、上記文献に示された条件下でオーラミンＯ
が５％減少する時間を文献の記載に基づいて算出した結
果を第１表に示す。ここでＫは反応速度定数である。
が５％減少する時間を文献の記載に基づいて算出した結
果を第１表に示す。ここでＫは反応速度定数である。
さらに、表１の条件ではオーラミンＯが網状赤血球測
定用試薬として使用されるときの条件をカバーしきれな
いため、実際の染色条件下でオーラミンＯが５％減少す
る時間を以下に示す実験１により詳細に求めた。
定用試薬として使用されるときの条件をカバーしきれな
いため、実際の染色条件下でオーラミンＯが５％減少す
る時間を以下に示す実験１により詳細に求めた。
実験 １ 表２に示す４種の組成の染色液を調製後、5.4℃、22.
3℃,39.0℃の恒温槽中に保存し、12日後までのオーラミ
ンＯ残存量を高速液体クロマトグラフィ（HPLC）により
測定した。
3℃,39.0℃の恒温槽中に保存し、12日後までのオーラミ
ンＯ残存量を高速液体クロマトグラフィ（HPLC）により
測定した。
たとえば、37℃での測定結果を第１図に示す。この図
からオーラミンＯの分解反応は一時反応であることが明
瞭に見られる。各温度で求められた各染色液の分解速度
定数を表３に示す。
からオーラミンＯの分解反応は一時反応であることが明
瞭に見られる。各温度で求められた各染色液の分解速度
定数を表３に示す。
また、各染色液の分解速度定数と温度との関係（アル
レニウス プロット,Arrhenius plot）を第２図に示
す。この図に示されるように測定点は、ほぼ直線上にの
っているため、測定点以外の温度における分解速度定数
も容易に求められる。上記結果から、オーラミンＯの染
色条件下で、オーラミンＯが５％減少する時間を推定し
た結果を表４に示す。
レニウス プロット,Arrhenius plot）を第２図に示
す。この図に示されるように測定点は、ほぼ直線上にの
っているため、測定点以外の温度における分解速度定数
も容易に求められる。上記結果から、オーラミンＯの染
色条件下で、オーラミンＯが５％減少する時間を推定し
た結果を表４に示す。
HPLCにより染料の残存量を求めた染色液を濾過した
（析出したミヒラーケトンが測定に悪影響を与えるた
め）もの2mlに、EDTA抗凝固新鮮血10μを加え、１分
間incubatoした後、488nm（10mW）のアルゴンイオンレ
ーザを光源とするフローサイトメーターにより、血球の
前方散乱光と螢光とを測定した。
（析出したミヒラーケトンが測定に悪影響を与えるた
め）もの2mlに、EDTA抗凝固新鮮血10μを加え、１分
間incubatoした後、488nm（10mW）のアルゴンイオンレ
ーザを光源とするフローサイトメーターにより、血球の
前方散乱光と螢光とを測定した。
この測定はHPLC分析と同時に表２に示す４種のpH（染
料濃度）の染色液を表５に示す。３水準の温度（5.4
℃、22.3℃39.0℃）で保存したものについて、５回（作
製当日〜12日後）、即ち60回の測定を行っているが、こ
こでは染色液の保存温度による影響が最も大きいpH8.5
での例のみを示した。
料濃度）の染色液を表５に示す。３水準の温度（5.4
℃、22.3℃39.0℃）で保存したものについて、５回（作
製当日〜12日後）、即ち60回の測定を行っているが、こ
こでは染色液の保存温度による影響が最も大きいpH8.5
での例のみを示した。
第３−Ｉ−ａ図ないし第３−III−ｃ図に示した様にH
PLCでの残存率が減少するに従い染色強度が低くなる。
PLCでの残存率が減少するに従い染色強度が低くなる。
以上、実験１の結果からオーラミンＯの染色条件下で
もオーラミンＯは分解することが示された。このとき生
成するミヒラーケトン（Michler's Ketone）の水に対す
る溶解度は著しく低く、オーラミンO 10μg/mlに相当す
る量以下しか溶解されない。したがって、たとえばpH8.
0、オーラミンO 400μg/mlの染色液では、４℃の冷蔵保
存においては５日で、室温放置においては約半日でミヒ
ラーケトンが析出するため、この染色液を使用すると網
状赤血球測定に悪影響を与える。
もオーラミンＯは分解することが示された。このとき生
成するミヒラーケトン（Michler's Ketone）の水に対す
る溶解度は著しく低く、オーラミンO 10μg/mlに相当す
る量以下しか溶解されない。したがって、たとえばpH8.
0、オーラミンO 400μg/mlの染色液では、４℃の冷蔵保
存においては５日で、室温放置においては約半日でミヒ
ラーケトンが析出するため、この染色液を使用すると網
状赤血球測定に悪影響を与える。
この問題を解決する方法の一つとして、溶媒添加によ
ってミヒラーケトンを可溶化することが考えられる。し
かし、この方法は、ミヒラーケトンの析出による網状赤
血球測定への阻害を抑えることのみを目的とし、オーラ
ミンＯの減少による試薬性能の劣化に対しては何ら補償
するものではない。
ってミヒラーケトンを可溶化することが考えられる。し
かし、この方法は、ミヒラーケトンの析出による網状赤
血球測定への阻害を抑えることのみを目的とし、オーラ
ミンＯの減少による試薬性能の劣化に対しては何ら補償
するものではない。
（問題を解決するための手段） 本発明は、螢光染料オーラミンＯの加水分解による減
少を防止するために、試薬を水を含まない溶媒に溶解し
た染料と至適染色条件の緩衝水溶液との二液に分割し、
使用前に二液を混合することにより、劣化すなわち、試
料の残存率の低下のない安定した網状赤血球測定試薬を
提供するものである。
少を防止するために、試薬を水を含まない溶媒に溶解し
た染料と至適染色条件の緩衝水溶液との二液に分割し、
使用前に二液を混合することにより、劣化すなわち、試
料の残存率の低下のない安定した網状赤血球測定試薬を
提供するものである。
すなわち、本発明によれば、非水溶媒に溶解した染色
原液と至適染色条件の緩衝液との二液からなるフローサ
イトメトリ用網状赤血球測定試薬が提供される。
原液と至適染色条件の緩衝液との二液からなるフローサ
イトメトリ用網状赤血球測定試薬が提供される。
ここで試料原液はオーラミンＯおよび非水溶媒からな
り、該非水溶媒の条件としては次のようなものが挙げら
れる： （１） オーラミンＯを溶解するための極性があり、オ
ーラミンＯ溶解度が数％以上であること。
り、該非水溶媒の条件としては次のようなものが挙げら
れる： （１） オーラミンＯを溶解するための極性があり、オ
ーラミンＯ溶解度が数％以上であること。
（２） 血球に影響を与えないこと。少なくともフロー
サイトメトリの測定結果を変化させないこと。
サイトメトリの測定結果を変化させないこと。
（３） フローサイトメトリ装置の流体系に悪影響を与
えないこと。
えないこと。
（４） 揮発性が少なく、長期保存でも劣化，変性また
は減少しないこと。
は減少しないこと。
上記の点から溶媒としてはアルコール類が望ましく、
10種類の溶媒について上記の点について詳細に検討し
た。
10種類の溶媒について上記の点について詳細に検討し
た。
まず、第（２）の点である溶媒添加による網状赤血球
測定への影響について、下記の実験２において検討し
た。実際には、上述のように、オーラミンＯを溶媒に溶
解させておき、この試料原液と緩衝水溶液とを混合して
最終的な染色液を調製して、網状赤血球測定を供するわ
けであるが、この実験においては、あらかじめオーラミ
ンＯを含んだ染色液に溶媒のみを添加し、溶媒添加によ
る測定への影響を調べた。
測定への影響について、下記の実験２において検討し
た。実際には、上述のように、オーラミンＯを溶媒に溶
解させておき、この試料原液と緩衝水溶液とを混合して
最終的な染色液を調製して、網状赤血球測定を供するわ
けであるが、この実験においては、あらかじめオーラミ
ンＯを含んだ染色液に溶媒のみを添加し、溶媒添加によ
る測定への影響を調べた。
実験 ２ オーラミンＯ 400mg/ リン酸 20mM/ 塩化ナトリウム 150mM/ 上記組成でpH8.0の染色液が、各種溶媒を容量％にお
いて、0.40％、0.63％、1.00％,1.6％,2.5％,4.0％,6.2
5％,10.0％,16.0％,25.0％含む様に測定直前に調製し
た。
いて、0.40％、0.63％、1.00％,1.6％,2.5％,4.0％,6.2
5％,10.0％,16.0％,25.0％含む様に測定直前に調製し
た。
この染色液2mlにEDTA抗凝固新鮮血10μを加え、25
℃で30秒間染色した後、フローサイトメトリで前方散乱
光および螢光を測定した。
℃で30秒間染色した後、フローサイトメトリで前方散乱
光および螢光を測定した。
溶媒の種類により、赤血球溶解の起こしやすさに差が
あるが、溶媒添加量が約10％を越えても赤血球溶解が起
こらないものにおいては約10％の添加まで、また、溶媒
添加量が約10％以下で赤血球溶解を起こすものにおいて
も溶解現象の起こる直前までは、前方散乱光の測定に、
ほとんど影響は見られなかった。
あるが、溶媒添加量が約10％を越えても赤血球溶解が起
こらないものにおいては約10％の添加まで、また、溶媒
添加量が約10％以下で赤血球溶解を起こすものにおいて
も溶解現象の起こる直前までは、前方散乱光の測定に、
ほとんど影響は見られなかった。
一方、螢光染色強度は溶媒添加濃度の増大につれて減
少する。この場合、螢光測定感度を上げることにより、
ある限界の添加量までは網状赤血球測定に影響を及ぼさ
ずに済ますことが出来る。その限界の添加量は溶媒の種
類によってそれぞれ異なる。
少する。この場合、螢光測定感度を上げることにより、
ある限界の添加量までは網状赤血球測定に影響を及ぼさ
ずに済ますことが出来る。その限界の添加量は溶媒の種
類によってそれぞれ異なる。
各溶媒の添加において、赤血球の溶解の起こる添加量
および螢光測定により網状赤血球測定が可能な最大添加
量を表６に示す。
および螢光測定により網状赤血球測定が可能な最大添加
量を表６に示す。
表６から、溶媒の最大添加量は螢光測定の可能な範囲
で限定されることが明らかとなる。しかしながら、螢光
強度の減少は極力抑える方が望ましいので、溶媒添加量
はできる限り少ない方が好ましい。
で限定されることが明らかとなる。しかしながら、螢光
強度の減少は極力抑える方が望ましいので、溶媒添加量
はできる限り少ない方が好ましい。
網状赤血球測定を可能とするためには、最終の染色液
において所定の染料濃度が必要であるが、そのためには
染料原液に所定量の染料が溶解されていなければならな
い。一方、上述の様に染料原液において使用される溶媒
は、最終の染色液の中に極力少なく含まれることが要求
されている。したがって、この溶媒としてはオーラミン
Ｏの溶解度の大きいものが望まれる。そうすれば、少な
い染料原液（したがって溶媒）の添加量によって、所定
の最終染色液濃度を得ることができる。これが、前述の
非水溶媒に必要とされる第（１）の点に相当する。
において所定の染料濃度が必要であるが、そのためには
染料原液に所定量の染料が溶解されていなければならな
い。一方、上述の様に染料原液において使用される溶媒
は、最終の染色液の中に極力少なく含まれることが要求
されている。したがって、この溶媒としてはオーラミン
Ｏの溶解度の大きいものが望まれる。そうすれば、少な
い染料原液（したがって溶媒）の添加量によって、所定
の最終染色液濃度を得ることができる。これが、前述の
非水溶媒に必要とされる第（１）の点に相当する。
もちろん、表６に示した最大添加量を越える量を添加
しなければ、所定の最終染色液濃度を達成できない様な
低いオーラミンＯ溶解度しか有しない溶媒は、染料原液
において使用することは出来ない。
しなければ、所定の最終染色液濃度を達成できない様な
低いオーラミンＯ溶解度しか有しない溶媒は、染料原液
において使用することは出来ない。
たとえば、表２に示した最小濃度の染色液を作製する
ためには、溶媒のオーラミンＯ溶解度は、各溶媒添加量
において表７を示す値が必要である。表７は、たとえば
最終染色液濃度1000μg/mlを溶媒添加量1v/v％で実現す
るためには、溶媒のオーラミンＯ溶解度は10.0g/100ml
である必要がある、と言う様に見るものである。
ためには、溶媒のオーラミンＯ溶解度は、各溶媒添加量
において表７を示す値が必要である。表７は、たとえば
最終染色液濃度1000μg/mlを溶媒添加量1v/v％で実現す
るためには、溶媒のオーラミンＯ溶解度は10.0g/100ml
である必要がある、と言う様に見るものである。
溶媒の実際の溶解度はメタノール，エタノール，およ
びｎ−プロパノールの場合、２〜3g/100mlであるが、メ
タノール，エタノールの最大添加可能量は表６より6.25
v/v％であり、この添加量で1000μg/mlの最終染色液濃
度を実現するためには表７から1.6g/100mlの溶解度があ
れば良いことがわかるので、溶解度の点においてはメタ
ノール，エタノールは使用可能である。これに対しｎ−
プロパノールの最大添加可能量は2.5v/v％であるので、
1000μg/mlの最終染色液濃度を実現するのには溶解度が
足らず、せいぜい500〜750μg/mlの濃度の最終染色液し
か作れないことが表７より示される。
びｎ−プロパノールの場合、２〜3g/100mlであるが、メ
タノール，エタノールの最大添加可能量は表６より6.25
v/v％であり、この添加量で1000μg/mlの最終染色液濃
度を実現するためには表７から1.6g/100mlの溶解度があ
れば良いことがわかるので、溶解度の点においてはメタ
ノール，エタノールは使用可能である。これに対しｎ−
プロパノールの最大添加可能量は2.5v/v％であるので、
1000μg/mlの最終染色液濃度を実現するのには溶解度が
足らず、せいぜい500〜750μg/mlの濃度の最終染色液し
か作れないことが表７より示される。
また、エチレングリコール，ジエチレングリコール，
トリエチレングリコールの場合、オーラミンＯの溶解度
は６〜８％あり、表６に示す最大添加量の範囲内で表２
の濃度の染色液を充分に作製することが出来る。
トリエチレングリコールの場合、オーラミンＯの溶解度
は６〜８％あり、表６に示す最大添加量の範囲内で表２
の濃度の染色液を充分に作製することが出来る。
表１に示す溶媒のうち、残りの４種のものは、２〜３
％の溶解度を有するが、1000μg/mlの染色液を網状赤血
球測定に影響させることなく作製できるだけの溶解度は
無く、750μg/mlの染色液を作製するのが限界である。
また、これら４種の溶媒は上述の第（３）の点において
も問題がある。
％の溶解度を有するが、1000μg/mlの染色液を網状赤血
球測定に影響させることなく作製できるだけの溶解度は
無く、750μg/mlの染色液を作製するのが限界である。
また、これら４種の溶媒は上述の第（３）の点において
も問題がある。
また、上述の第（４）の点については、メタノール，
エターノール，およびｎ−プロパノールは揮発性が高
く、問題がある。
エターノール，およびｎ−プロパノールは揮発性が高
く、問題がある。
したがって、本発明の目的のために使用する溶媒とし
ては、エチレングリコール，ジエチレングリコール，お
よびトリエチレングリコールが望ましく、さらに、赤血
球への影響や粘性等を考慮するとエチレングリコールが
最も望ましい。
ては、エチレングリコール，ジエチレングリコール，お
よびトリエチレングリコールが望ましく、さらに、赤血
球への影響や粘性等を考慮するとエチレングリコールが
最も望ましい。
B.緩衝液 緩衝液は、緩衝剤と浸透圧補償剤とを含有する。緩衝
剤は染色液のpHを保つために加えるもので、染色液のpH
変動による螢光強度変化が起きない量が含有されていれ
ば良い。浸透圧補償剤は血球の極端な変形を抑えるため
に加えるものである。
剤は染色液のpHを保つために加えるもので、染色液のpH
変動による螢光強度変化が起きない量が含有されていれ
ば良い。浸透圧補償剤は血球の極端な変形を抑えるため
に加えるものである。
これらの含有量については、特開昭61−280565号公報
に示されている通りであり、最終染色液において、浸透
圧補償剤は５〜20mg/mlであり、緩衝剤はpH6.0〜9.5に
調整するものである。
に示されている通りであり、最終染色液において、浸透
圧補償剤は５〜20mg/mlであり、緩衝剤はpH6.0〜9.5に
調整するものである。
（作 用） 本発明の試薬は染色原液と緩衝液との二液に分けられ
ており、染色オーラミンＯは測定直前まで非水溶媒中に
保存されるため、網状赤血球測定に悪影響を与えるミヒ
ラーケトンを析出することは無く、また、オーラミンＯ
が保存中に減少することも無い。測定直前に二液を混合
することにより、常に安定な網状赤血球測定用の最終染
色液が得られる。
ており、染色オーラミンＯは測定直前まで非水溶媒中に
保存されるため、網状赤血球測定に悪影響を与えるミヒ
ラーケトンを析出することは無く、また、オーラミンＯ
が保存中に減少することも無い。測定直前に二液を混合
することにより、常に安定な網状赤血球測定用の最終染
色液が得られる。
（実 施 例） 以下、実施例によって本発明をさらに説明する。
実施例１ まず、下記組成の第１液および第２液を調製した。
第１液 成 分 濃度 ヘペス（HEPES）緩衝液 20mM NaCl 160mM pH8.5 第２液 成 分 濃度 オーラミンＯ 1.25％ エチレングリコール 残 部 上記第１液1960μと第２液40μとを混合して染色
液2mlをつくり、オーラミンＯ染料濃度を250μg/mlとし
た。これにEDTA抗凝固新鮮血10μを加えて試料とし
た。室温で30秒間染色後、上記フローサイトメーターで
前方散乱光と螢光とを測定した。
液2mlをつくり、オーラミンＯ染料濃度を250μg/mlとし
た。これにEDTA抗凝固新鮮血10μを加えて試料とし
た。室温で30秒間染色後、上記フローサイトメーターで
前方散乱光と螢光とを測定した。
このように二液組成にすると染色液作成直後に測定す
ることになるため、前述の実験２の表５および第３−II
−ａ図ないし第３−III−ｃ図に見られる染色液作成後
の時間経過につれて生じる染料の残存率の低下は全く見
られない。すなわち、第１液と第２液を使用直前に混合
することにより、表５の染料作成２時間後および第３−
Ｉ−ａ図，第３−Ｉ−ｂ図および第３−Ｉ−ｃ図のデー
タと同じ測定結果が常に得られる。
ることになるため、前述の実験２の表５および第３−II
−ａ図ないし第３−III−ｃ図に見られる染色液作成後
の時間経過につれて生じる染料の残存率の低下は全く見
られない。すなわち、第１液と第２液を使用直前に混合
することにより、表５の染料作成２時間後および第３−
Ｉ−ａ図，第３−Ｉ−ｂ図および第３−Ｉ−ｃ図のデー
タと同じ測定結果が常に得られる。
第１図は表２に示す４種の組成の染色液を調製後、37℃
の恒温槽中に存在し、12日後までのオーラミンＯ残存量
の経時変化を示すグラフであり； 第２図は上記各染色液の分解速度定数と温度との関係
（アルレニウス プロット）を示すグラフであり； 第３−Ｉ−a,3−Ｉ−b,3−Ｉ−c,3−II−a,3−II−b,3
−II−c,3−III−a,3−III−b,および３−III−ｃ図は
表５の各欄の時間および温度の条件下での染色液（pH＝
8.5）を使用して血球の前方散乱光と螢光を測定した結
果を各々示す。ここで各図の配置は表５の各欄の配置に
対応する。 図中 Ａは赤血球領域,Bは網状赤血球領域,Cは血小板領域を示
す。
の恒温槽中に存在し、12日後までのオーラミンＯ残存量
の経時変化を示すグラフであり； 第２図は上記各染色液の分解速度定数と温度との関係
（アルレニウス プロット）を示すグラフであり； 第３−Ｉ−a,3−Ｉ−b,3−Ｉ−c,3−II−a,3−II−b,3
−II−c,3−III−a,3−III−b,および３−III−ｃ図は
表５の各欄の時間および温度の条件下での染色液（pH＝
8.5）を使用して血球の前方散乱光と螢光を測定した結
果を各々示す。ここで各図の配置は表５の各欄の配置に
対応する。 図中 Ａは赤血球領域,Bは網状赤血球領域,Cは血小板領域を示
す。
Claims (2)
- 【請求項１】非水溶媒に溶解した染色原液と至適染色条
件の緩衝液との二液からなるフローサイトメトリ用網状
赤血球測定試薬であって、該染色原液の染料がオーラミ
ンＯであり、染色原液の非水溶媒がエチレングリコー
ル，トリエチレングリコールまたはジエチレングリコー
ルである、上記フローサイトメトリ用網状赤血球測定試
薬。 - 【請求項２】緩衝液がヘペス緩衝液、リン酸塩緩衝液ま
たはトリス−トライシン緩衝液である特許請求の範囲第
１項の試薬。
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP62192413A JP2549665B2 (ja) | 1987-07-31 | 1987-07-31 | フロ−サイトメトリ用網状赤血球測定試薬 |
| US07/117,026 US4981803A (en) | 1987-07-31 | 1987-11-04 | Reagent for reticulocyte counting by flow cytometry |
| EP88107088A EP0301181B1 (en) | 1987-07-31 | 1988-05-03 | Reagent for reticulocyte counting by flow cytometry |
| DE3851923T DE3851923T2 (de) | 1987-07-31 | 1988-05-03 | Reagenz zur Retikulozytenzählung mittels Durchflusszytometrie. |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62192413A JP2549665B2 (ja) | 1987-07-31 | 1987-07-31 | フロ−サイトメトリ用網状赤血球測定試薬 |
Publications (2)
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|---|---|
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| JP2549665B2 true JP2549665B2 (ja) | 1996-10-30 |
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|---|---|---|---|
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| US4288543A (en) * | 1977-01-28 | 1981-09-08 | Pfizer Inc. | Method and apparatus for identifying microorganisms |
| CA1132034A (en) * | 1978-06-26 | 1982-09-21 | Ivan E. Modrovich | Stabilization of hydrolysis prone labile organic reagents in liquid media |
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| EP0226272B1 (en) * | 1985-11-01 | 1991-03-06 | Becton, Dickinson and Company | Detection of reticulocytes |
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| DE3736490A1 (de) * | 1987-10-28 | 1989-05-11 | Merck Patent Gmbh | Stabilisatoren fuer faerbeloesungen |
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1987
- 1987-07-31 JP JP62192413A patent/JP2549665B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-04 US US07/117,026 patent/US4981803A/en not_active Expired - Lifetime
-
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- 1988-05-03 EP EP88107088A patent/EP0301181B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-03 DE DE3851923T patent/DE3851923T2/de not_active Expired - Fee Related
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