JP2524248B2 - 新規制ガン剤 - Google Patents
新規制ガン剤Info
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- JP2524248B2 JP2524248B2 JP2165727A JP16572790A JP2524248B2 JP 2524248 B2 JP2524248 B2 JP 2524248B2 JP 2165727 A JP2165727 A JP 2165727A JP 16572790 A JP16572790 A JP 16572790A JP 2524248 B2 JP2524248 B2 JP 2524248B2
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- JP
- Japan
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- polypeptide
- present
- cancer drug
- amino acid
- cancer
- Prior art date
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は制ガン剤に関し、更に詳細には生体内活性ポ
リペプチドであるフィブロネクチン（以下、FNと略称す
る）分子中の機能性ドメインの制ガン剤としての用途に
関する。
リペプチドであるフィブロネクチン（以下、FNと略称す
る）分子中の機能性ドメインの制ガン剤としての用途に
関する。
ガンの治療剤としては、アルキル化剤、制ガン性抗生
物質、代謝拮抗物実、そしてアルカロイド類等、種々の
制ガン剤があり、現在、臨床で使用が可能な制ガン剤は
数十種に及んでいる。
物質、代謝拮抗物実、そしてアルカロイド類等、種々の
制ガン剤があり、現在、臨床で使用が可能な制ガン剤は
数十種に及んでいる。
しかし、一般には、これらの制ガン剤は毒性及び副作
用が強く、十分な治療効果を上げるには至っていない。
用が強く、十分な治療効果を上げるには至っていない。
本発明は上記現状にかんがみ、生体内関連物質を利用
した、より安全性の高い新たな制ガン剤を提供すること
を目的とする。
した、より安全性の高い新たな制ガン剤を提供すること
を目的とする。
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は新規な機
能性ポリペプチドに関し、下記式I: で表されることを特徴とする。
能性ポリペプチドに関し、下記式I: で表されることを特徴とする。
また、本発明の第２の発明は制ガン剤に関し、第１の
発明のポリペプチドを含有していることを特徴とする。
発明のポリペプチドを含有していることを特徴とする。
FNは、分子量約25万のポリペプチドがＣ末端付近でＳ
−Ｓ結合で２量体を形成している。分子内アミノ酸配列
は、繰返し構造を有し、Ｉ、II、III型に分けられる。
更に、種々の機能を有するドメイン構造を有し、細胞接
着、コラーゲン、ヘパリン及びフィブリン等に対する結
合活性を示す。
−Ｓ結合で２量体を形成している。分子内アミノ酸配列
は、繰返し構造を有し、Ｉ、II、III型に分けられる。
更に、種々の機能を有するドメイン構造を有し、細胞接
着、コラーゲン、ヘパリン及びフィブリン等に対する結
合活性を示す。
本発明者らはFNの機能性ドメインの新たな用途につい
て研究を行った結果、前記式Ｉで表されるヘパリン結合
ポリペプチドが顕著な制ガン作用を有することを見出し
た。
て研究を行った結果、前記式Ｉで表されるヘパリン結合
ポリペプチドが顕著な制ガン作用を有することを見出し
た。
以下、本発明を具体的に説明する。
なお、本明細書において、アミノ酸に付された肩数字
は、EMBLデータバンク（EMBL DATA BANK）のFNのcDNA配
列を翻訳して得られるアミノ酸に付与されたＮ末からの
アミノ酸残基数を示す。
は、EMBLデータバンク（EMBL DATA BANK）のFNのcDNA配
列を翻訳して得られるアミノ酸に付与されたＮ末からの
アミノ酸残基数を示す。
本発明におけるヘパリン結合ポリペプチドは遺伝子工
学的手法により効率よく製造可能である。
学的手法により効率よく製造可能である。
その製造方法は特願平１−131453号（特開平２−3114
98号）明細書に示されており、以下具体的に説明する。
98号）明細書に示されており、以下具体的に説明する。
ヒトFNのヘパリン結合ドメインをコードするcDNA断片
を含むプラスミドpLF 2435はバイオケミストリー（Bioc
hemistry）、第25巻、第4936〜4941頁（1986）に記載さ
れている、pLF2、４、３及び５のコード領域を連結させ
て再構築されたプラスミドである。
を含むプラスミドpLF 2435はバイオケミストリー（Bioc
hemistry）、第25巻、第4936〜4941頁（1986）に記載さ
れている、pLF2、４、３及び５のコード領域を連結させ
て再構築されたプラスミドである。
このプラスミドpLF 2435から必要なcDNA断片を制限酵
素で切出し、５′側に開始コドンを含む合成DNAを、ま
た、３′側には、終止コドンを含む合成DNAをDNAリガー
ゼで連結した後、適当な発現ベクターに接続することに
より、ヘパリン結合ドメインの271アミノ酸酸基ポリペ
プチド（Ala1690−Thr1960）を発現するプラスミドpHD
101が構築される。
素で切出し、５′側に開始コドンを含む合成DNAを、ま
た、３′側には、終止コドンを含む合成DNAをDNAリガー
ゼで連結した後、適当な発現ベクターに接続することに
より、ヘパリン結合ドメインの271アミノ酸酸基ポリペ
プチド（Ala1690−Thr1960）を発現するプラスミドpHD
101が構築される。
発現ベクターとしては、既存のものはすべて利用する
ことができるが、例えばpUC 118N/pUC119N〔フェブス
レターズ（FEBS Letters）、及びその誘導体を用いるこ
とにより好結果を得ることができる。このプラスミドを
大腸菌に導入することにより、ヘパリン結合ポリペプチ
ドを発現させ、その性質を調べることができる。
ことができるが、例えばpUC 118N/pUC119N〔フェブス
レターズ（FEBS Letters）、及びその誘導体を用いるこ
とにより好結果を得ることができる。このプラスミドを
大腸菌に導入することにより、ヘパリン結合ポリペプチ
ドを発現させ、その性質を調べることができる。
271アミノ酸残基ポリペプチド（Ala1690−Thr1960）
を発現するプラスミドを導入した大腸菌Escherichia co
li HB 101/pHD 101は微工研条寄第2264号（FERM BP−22
64）として寄託されている。
を発現するプラスミドを導入した大腸菌Escherichia co
li HB 101/pHD 101は微工研条寄第2264号（FERM BP−22
64）として寄託されている。
組換え体からこのヘパリン結合ポリペプチドの精製
は、例えば次のように行う。組換え大腸菌をＬ−ブロス
等の培地に培養し、集菌した後、超音波処理により、菌
体破砕液を得、これを遠心分離して上清を得る。上清を
透析後、DEAEイオン交換体のカラムを通過させ、次いで
CMイオン交換体のカラムを通過させ、次いでCMイオン交
換体及び／又はヘパリン−アガロース等のアフィニティ
クロマトを行う。以上の操作により、目的のポリペプチ
ドを精製することができる。
は、例えば次のように行う。組換え大腸菌をＬ−ブロス
等の培地に培養し、集菌した後、超音波処理により、菌
体破砕液を得、これを遠心分離して上清を得る。上清を
透析後、DEAEイオン交換体のカラムを通過させ、次いで
CMイオン交換体のカラムを通過させ、次いでCMイオン交
換体及び／又はヘパリン−アガロース等のアフィニティ
クロマトを行う。以上の操作により、目的のポリペプチ
ドを精製することができる。
以上のようにして得られた本発明のポリペプチドを医
薬として使用する場合、必要に応じて医薬用担体と共に
常法により製剤化し、経口投与又は非経口投与すればよ
い。賦形剤あるいは担体としては薬理学的に許容される
ものが選ばれ、その種類及び組成は投与経路や投与方法
によって異なる。例えば液状担体として水、アルコール
類若しくは大豆油、オリーブ油、ミネラル油等の動植物
油、又は合成油が用いられる。固体担体としてマルトー
ス、スクロースなどの糖類、アミノ酸類、ヒドロキシプ
ロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ステアリン
酸マグネシウムなどの有機酸塩などが使用される。
薬として使用する場合、必要に応じて医薬用担体と共に
常法により製剤化し、経口投与又は非経口投与すればよ
い。賦形剤あるいは担体としては薬理学的に許容される
ものが選ばれ、その種類及び組成は投与経路や投与方法
によって異なる。例えば液状担体として水、アルコール
類若しくは大豆油、オリーブ油、ミネラル油等の動植物
油、又は合成油が用いられる。固体担体としてマルトー
ス、スクロースなどの糖類、アミノ酸類、ヒドロキシプ
ロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ステアリン
酸マグネシウムなどの有機酸塩などが使用される。
注射剤の場合は溶解度は生理食塩液、各種緩衝液、グ
ルコース、イノシトール、マンニトール、ラクトースな
どの糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレングリ
コールなどのグリコール類が望ましい。またイノシトー
ル、マンニトール、ラクトース、スクロース等の糖類、
フェニルアラニン等のアミノ酸等の賦形剤と共に凍結乾
燥製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例え
ば滅菌水、生理食塩液、ブドウ糖液、電解質溶液、アミ
ノ酸溶液等静脈投与用液体に溶解させて投与することも
できる。製剤中における本発明のポリペプチドの含量は
製剤により異なるが、通常0.1〜100重量％好ましくは１
〜98重量％である。例えば注射液の場合には、通常0.1
〜30重量％、好ましくは１〜10重量％の有効成分を含む
ようにすることが望ましい。経口投与する場合には前記
固体担体若しくは液状担体と共に、錠剤、カプセル剤、
粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ剤等の形態で用い
られる。カプセル、顆粒、粉剤は一般に５〜100重量
％、好ましくは25〜98重量％の有効成分を含む。
ルコース、イノシトール、マンニトール、ラクトースな
どの糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレングリ
コールなどのグリコール類が望ましい。またイノシトー
ル、マンニトール、ラクトース、スクロース等の糖類、
フェニルアラニン等のアミノ酸等の賦形剤と共に凍結乾
燥製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例え
ば滅菌水、生理食塩液、ブドウ糖液、電解質溶液、アミ
ノ酸溶液等静脈投与用液体に溶解させて投与することも
できる。製剤中における本発明のポリペプチドの含量は
製剤により異なるが、通常0.1〜100重量％好ましくは１
〜98重量％である。例えば注射液の場合には、通常0.1
〜30重量％、好ましくは１〜10重量％の有効成分を含む
ようにすることが望ましい。経口投与する場合には前記
固体担体若しくは液状担体と共に、錠剤、カプセル剤、
粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ剤等の形態で用い
られる。カプセル、顆粒、粉剤は一般に５〜100重量
％、好ましくは25〜98重量％の有効成分を含む。
投与量は、患者の年令、体重、症状、治療目的等によ
り決定されるが治療量は一般に、非経口投与で１〜100m
g/kg/日、経口投与で５〜500mg/kg/日である。
り決定されるが治療量は一般に、非経口投与で１〜100m
g/kg/日、経口投与で５〜500mg/kg/日である。
次に本発明のポリペプチドの生理活性を実験例により
示す。
示す。
実施例１ 制ガン作用 CDF1マウス（１群10匹）に、L5178Y−ML25白血病細胞
４×104個、又は本発明のポリペプチド250μｇとL5178Y
−ML25細胞４×104個の混合物の静脈内注射を行う。
４×104個、又は本発明のポリペプチド250μｇとL5178Y
−ML25細胞４×104個の混合物の静脈内注射を行う。
本発明のポリペプチド投与群の延命率は、各群マウス
及び対照群マウスの白血病細胞静脈内移植後の平均生存
日数より、下記式で表される。
及び対照群マウスの白血病細胞静脈内移植後の平均生存
日数より、下記式で表される。
ガン細胞の移植後26日目における各群マウスの生存日
数、生存比（26日目での生存マウス数／群の使用マウス
数）、平均生存日数、及び延命率を第１表に示す。
数、生存比（26日目での生存マウス数／群の使用マウス
数）、平均生存日数、及び延命率を第１表に示す。
以上のように、本発明のポリペプチドの投与で、制ガ
ン効果が発現している。
ン効果が発現している。
実験例２ 急性毒性試験 CDF1マウスに本発明のポリペプチドを静脈内投与し
た。100mg/1kg投与において毒性は認められなかった。
た。100mg/1kg投与において毒性は認められなかった。
以上本発明ポリペプチドは、以上の実験例に示した通
り、安全性に優れ、良好な制ガン効果を示すもので、各
種ガン治療において有用なものである。
り、安全性に優れ、良好な制ガン効果を示すもので、各
種ガン治療において有用なものである。
〔実施例〕 次に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明の範囲は実施例に限定されるものではない。
明の範囲は実施例に限定されるものではない。
なお、各例において、部は重量部を意味する。
製剤例１ 271アミノ酸残基ポリペプチド30部に対しPBSを加え、
全量を2000部としてこれ溶解後、ミリポアフィルターGS
タイプを用いて除菌ろ過する。このろ液2gを10mlのバイ
アル瓶により連結乾燥し、１バイアルに該ポリペプチド
30mgを含む凍結乾燥注射剤を得た。
全量を2000部としてこれ溶解後、ミリポアフィルターGS
タイプを用いて除菌ろ過する。このろ液2gを10mlのバイ
アル瓶により連結乾燥し、１バイアルに該ポリペプチド
30mgを含む凍結乾燥注射剤を得た。
製剤例２ 271アミノ酸残基ポリペプチド50部、乳糖600部、結晶
セルロース330部及びヒドロキシプロピルセルロース20
部をよく混和し、ロール型圧縮機（ローラーコンパクタ
ー）を用いて圧縮し、破砕して16〜60メッシュの間に入
るように篩過し、顆粒とした。
セルロース330部及びヒドロキシプロピルセルロース20
部をよく混和し、ロール型圧縮機（ローラーコンパクタ
ー）を用いて圧縮し、破砕して16〜60メッシュの間に入
るように篩過し、顆粒とした。
本発明のポリペプチドは生体内関連物質であり安全性
が高く、制ガン剤として有用である。また遺伝子工学的
に大量に供給可能である点で顕著な効果を有する。
が高く、制ガン剤として有用である。また遺伝子工学的
に大量に供給可能である点で顕著な効果を有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 加藤 郁之進 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寶酒 造株式会社中央研究所内 (56)参考文献 特開 昭59−206313（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−128238（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−173828（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−127742（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−240020（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−123799（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−311498（ＪＰ，Ａ) 国際公開89／1942（ＷＯ，Ａ)
Claims (2)
- 【請求項１】下記式I: で表されることを特徴とするポリペプチド。
- 【請求項２】請求項１に記載のポリペプチドを含有して
いることを特徴とする制ガン剤。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2165727A JP2524248B2 (ja) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | 新規制ガン剤 |
| DE1990612950 DE69012950T2 (de) | 1989-10-13 | 1990-10-12 | Antikrebsmittel. |
| EP90311189A EP0428266B1 (en) | 1989-10-13 | 1990-10-12 | Anticancer agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2165727A JP2524248B2 (ja) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | 新規制ガン剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0459734A JPH0459734A (ja) | 1992-02-26 |
| JP2524248B2 true JP2524248B2 (ja) | 1996-08-14 |
Family
ID=15817930
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2165727A Expired - Fee Related JP2524248B2 (ja) | 1989-10-13 | 1990-06-26 | 新規制ガン剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2524248B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4928209B2 (ja) * | 2006-09-26 | 2012-05-09 | 本田技研工業株式会社 | 車両用通信装置の取付構造 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1213827A (en) * | 1983-04-29 | 1986-11-12 | Ricardo H. Landaburu | Process for pasteurizing fibronectin |
| JP2862140B2 (ja) * | 1989-12-01 | 1999-02-24 | 寳酒造株式会社 | 脈管形成抑制剤 |
| JP2868800B2 (ja) * | 1989-10-13 | 1999-03-10 | 寳酒造株式会社 | 癌転移抑制剤 |
| JP3088744B2 (ja) * | 1990-05-28 | 2000-09-18 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | フィブロネクチン組成物 |
-
1990
- 1990-06-26 JP JP2165727A patent/JP2524248B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0459734A (ja) | 1992-02-26 |
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