JP2024525757A

JP2024525757A - 卵巣機能不全を治療するための無細胞脂肪抽出物

Info

Publication number: JP2024525757A
Application number: JP2024501900A
Authority: JP
Inventors: 文杰張
Original assignee: 上海薩美細胞技術有限公司
Priority date: 2021-07-14
Filing date: 2022-06-13
Publication date: 2024-07-12

Abstract

無細胞脂肪抽出物の用途であって、組成物または製剤を調製するために使用され、前記組成物または製剤は、卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するために使用される。前記無細胞脂肪抽出物は、卵巣機能不全および／またはその合併症に対して優れた治療効果を有する。
【選択図】なし

Description

本発明は、医薬の分野に関し、具体的には、卵巣機能不全を治療するための無細胞脂肪抽出物に関する。

「卵巣機能低下」とも呼ばれる卵巣機能不全（ｐｒｅｍａｔｕｒｅｏｖａｒｉａｎｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ、ＰＯＩ）とは、４０歳未満で後天性の高性線刺激性異形成を指す。女性の胎児から老年期までの期間は、段階的な生理的プロセスであり、卵巣は、生殖線器官として、周期的な排卵および性ホルモンの分泌という重要な生理学的機能を果たしている。化学療法レジメンの絶え間ない進歩により、悪性腫瘍患者の多くは、長期間生存でき、さらには治療されることができるが、化学療法による卵巣機能の損傷により、早発無月経および不妊症が発生し、女性患者の生活の質に影響を及ぼす。疾患を治療しながら生殖能力および生理機能を保持できることは、女性悪性腫瘍患者が解決を切望している課題である。現在、国内外で主にホルモン補充療法を使用しているが、長期にわたる使用は、卵巣がんの罹患率の増加につながるため、当該療法の使用については、大きな議論が巻き起こっている。従って、女性の卵巣機能を回復するのに役立つ信頼できる治療法はない。従って、当技術分野では、卵巣機能不全を効果的に治療できる薬物を開発する必要がある。

本発明の目的は、卵巣機能不全および／またはその合併症の予防および／または治療における無細胞脂肪抽出物の用途を提供することである。

本発明の第１の態様は、無細胞脂肪抽出物の用途を提供し、組成物または製剤を調製するために使用され、前記組成物または製剤卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するために使用される。

別の好ましい例において、前記卵巣機能不全および／またはその合併症の対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。

別の好ましい例において、前記卵巣機能不全合併症は、続発性無月経、エストロゲンレベルの低下、性腺刺激ホルモンレベルの上昇、卵胞数の減少、卵胞の質の低下、早発無月経、不妊症、またはその組み合わせからなる群から選択される。

別の好ましい例において、前記卵巣機能不全は、化学的損傷による卵巣機能不全を含む。

別の好ましい例において、前記化学的損傷は、化学療法薬による損傷を含む。

別の好ましい例において、前記化学療法薬は、腫瘍の予防および／または治療に使用される化学療法薬を含む。

別の好ましい例において、前記化学療法薬は、パクリタキセルまたはドキソルビシンを含む。

別の好ましい例において、前記化学療法薬は、シクロホスファミド、ブスルファン、パクリタキセル、ドキソルビシン、またはその組み合わせからなる群から選択される。

別の好ましい例において、前記卵巣機能不全および／またはその合併症の予防および／または治療は、
（ｉ）卵巣機能の回復の促進と、
（ｉｉ）生殖能力の向上とを含む。
別の好ましい例において、前記卵巣機能の回復の促進は、
（ｉ）エストラジオールホルモンレベルの上昇と、
（ｉｉ）抗ミュラー管ホルモンレベルの上昇と、
（ｉｉｉ）卵胞刺激ホルモンレベルの低下と、
（ｉｖ）卵胞構造の回復とからなる群から選択される一つまたは複数の特徴を含む。

別の好ましい例において、前記生殖能力の改善は、同腹子の数を増加することを含む。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物の脂肪から抽出調製して取得した無細胞脂肪抽出物である。

別の好ましい例において、前記非人哺乳動物は、サル、オランウータン、ウシ、ブタ、イヌ、ヒツジ、マウスまたはウサギである。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤は、医薬組成物または製剤、食品組成物または製剤、栄養補助食品組成物または製剤または栄養補助食品を含む。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤は、薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体をさらに含む。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤は、卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するための他の薬物を含む。

別の好ましい例において、前記卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するための他の薬物は、ホルモン補充療法（ＨＲＴ）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、クロミフェン等からなる群から選択される。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤の剤形は、経口製剤、外用製剤または注射製剤である。

別の好ましい例において、前記注射製剤は、静脈内注射剤または筋肉内注射剤である。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤の剤形は、固体剤形、半固体剤形、または例えば、溶液、ゲル、クリーム、乳液、軟膏剤、クリーム剤、ペースト剤、ケーキ、粉末剤、パッチ剤等の液体剤形である。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤の剤形は、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、チンキ剤、経口液、錠剤またはトローチ剤である。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤は、外用、局所、または注射方法によって投与される。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、細胞も脂肪滴も含まない。

別の好ましい例において、前記脂肪滴は、脂肪細胞が粉砕された後に放出された油滴である。

別の好ましい例において、前記「脂肪滴を含まない」とは、前記無細胞脂肪抽出物において、油滴の体積が総液体の１％未満、好ましくは０．５％未満、より好ましくは０．１％未満であることを指す。

別の好ましい例において、前記細胞は、内皮細胞、脂肪幹細胞、マクロファージ、間質細胞からなる群から選択される。

別の好ましい例において、前記「無細胞」とは、１ｍｌの無細胞脂肪抽出物中の細胞平均数が≦１個、好ましくは≦０．５個、より好ましくは≦０．１個、または０個であることを指す。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、添加成分を含まない天然に得られるナノ脂肪抽出物である。

別の好ましい例において、前記「添加成分を含まない」とは、すすぎ段階を除いて、前記脂肪抽出物の調製中に任意の溶液、溶媒、小分子、化学製剤、および生物学的添加剤が添加されていないことを指す。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、脂肪組織を乳化した後に遠心分離することによって調製される。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、ＩＧＦ－１、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＴＧＦ－β１、ＨＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＮＴ－３、ＧＨ、Ｇ－ＣＳＦ、またはその組み合わせからなる群から選択される一種または複数種の成分を含む。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、ＩＧＦ－１、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、またはその組み合わせからなる群から選択される一種または複数種の成分を含むが、これらに限定されない。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、無細胞脂肪抽出液である。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＩＧＦ－１の濃度は、５０００～３００００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは６０００～２００００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは７０００～１５０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８０００～１２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９０００～１１０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９５００～１０５００ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＢＤＮＦの濃度は、８００～５０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１０００～４０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２００～２５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７００～１８５０ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＧＤＮＦの濃度は、８００～５０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１０００～４０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２００～２５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７００～１９００ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ｂＦＧＦの濃度は、５０～６００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１００～５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２０～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１５０～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは２００～２８０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは２２０～２６０ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＶＥＧＦの濃度は、５０～５００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１００～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２０～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１５０～２５０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７０～２３０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１９０～２１０ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＴＧＦ－β１の濃度は、２００～３０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１１００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９００～１０００ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＨＧＦの濃度は、２００～３０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８５０～９５０ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＰＤＧＦの濃度は、５０～６００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは８０～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１００～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４０～２２０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６０～２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７０～１９０ｐｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記ＩＧＦ－１とＶＥＧＦとの重量比は、２０～１００：１、好ましくは３０～７０：１、より好ましくは４０～６０：１、最も好ましくは４５～５５：１である。

別の好ましい例において、前記ＢＤＮＦとＶＥＧＦとの重量比は、２～２０：１、好ましくは４～１５：１、より好ましくは６～１２：１、最も好ましくは８～９．５：１である。

別の好ましい例において、前記ＧＤＮＦとＶＥＧＦとの重量比は、２～２０：１、好ましくは４～１５：１、より好ましくは６～１２：１、最も好ましくは８．５～９．５：１である。

別の好ましい例において、前記ｂＦＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、０．２～８：１、好ましくは０．５～５：１、より好ましくは０．６～２：１、より好ましくは０．８～１．６：１、最も好ましくは１～１．５：１である。

別の好ましい例において、前記ＴＧＦ－β１とＶＥＧＦとの重量比は、１～２０：１、好ましくは１～１５：１、より好ましくは１～１０：１、より好ましくは２～８：１、より好ましくは４～６：１である。

別の好ましい例において、前記ＨＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、１～２０：１、好ましくは１～１５：１、より好ましくは１～１０：１、より好ましくは２～８：１、より好ましくは４～５．５：１である。

別の好ましい例において、前記ＰＤＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、０．１～３：１、好ましくは０．２～２：１、より好ましくは０．４～１．５：１、最も好ましくは０．７～１．２：１である。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、以下の方法によって調製され、
（１）脂肪組織原料を提供し、前記脂肪組織原料を粉砕し、すすぎ（例えば、生理食塩水を使用する）、それによってすすいだ脂肪組織を得、
（２）前記すすいだ脂肪組織を遠心分離し、層状混合物を得、
（３）前記層状混合物に対して、上層の油層および下層の水層を除去し、中間層（即ち、脂肪細胞を含む脂肪層）を収集し、
（４）前記中間層を乳化して、乳化した脂肪混合物（ナノ脂肪とも呼ばれる）を得、
（５）前記乳化した脂肪混合物を遠心分離して、一次脂肪抽出物である中間液体層を得、および
（６）前記一次脂肪抽出物をろ過および滅菌し、それによって無細胞脂肪抽出物を得る。

本発明の第２の態様は、無細胞脂肪抽出物を調製する方法を提供し、前記方法は、次のような段階を含み、
（１）脂肪組織原料を提供し、前記脂肪組織原料を粉砕し、すすぎ（例えば、生理食塩水を使用する）、それによってすすいだ脂肪組織を得、
（２）前記すすいだ脂肪組織を遠心分離し、層状混合物を得、
（３）前記層状混合物に対して、上層の油層および下層の水層を除去し、中間層（即ち、脂肪細胞を含む脂肪層）を収集し、
（４）前記中間層を乳化して、乳化した脂肪混合物（ナノ脂肪とも呼ばれる）を得、
（５）前記乳化した脂肪混合物を遠心分離して、一次脂肪抽出物である中間液体層を得、および
（６）前記一次脂肪抽出物をろ過および滅菌し、それによって無細胞脂肪抽出物を得る。

別の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、本発明の第１の態様に記載されたとおりである。

別の好ましい例において、前記段階（２）において、前記遠心分離は、８００～２５００ｇ、好ましくは８００～２０００ｇ、より好ましくは１０００～１５００ｇ、最も好ましくは１１００～１３００ｇで遠心分離される。

別の好ましい例において、前記段階（２）において、前記遠心分離の時間は、１～１５分間、好ましくは１～１０分間、より好ましくは１～８分間、最も好ましくは１～５分間である。

別の好ましい例において、前記遠心分離の温度は、２～６℃である。

別の好ましい例において、前記段階（４）において、前記乳化は、機械的乳化である。

別の好ましい例において、前記機械的乳化は、シリンジを用いて繰り返しピペッティング（例えば、２０～２００回、好ましくは２０～１５０回、より好ましくは２０～１００回、より好ましくは３０～５０回ピペッティングする）によって機械的乳化される。

別の好ましい例において、前記ピペッティングの方法は、１０ｍｌの注射器２本をティーチューブに接続し、一定速度で押し出してピペッティングすることを繰り返す方法である。

別の好ましい例において、前記段階（４）において、前記乳化は、組織ホモジナイザーによって粉砕される方法である。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、前記乳化した脂肪混合物を遠心分離する前に、前記乳化した脂肪混合物を凍結した後に解凍することをさらに含む。

別の好ましい例において、凍結した後に解凍した後、解凍した混合物を遠心分離する。

別の好ましい例において、前記凍結温度は、－５０℃～－１２０℃、好ましくは－６０℃～－１００℃、より好ましくは－７０℃～－９０℃である。

別の好ましい例において、前記解凍温度は、２０～４０℃、好ましくは２５～４０℃、より好ましくは３７℃である。

別の好ましい例において、前記凍結後解凍の循環回数は、１～５回（好ましくは１、２、３または４回）である。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、遠心分離後、前記乳化した脂肪混合物を４層に重ね、第１層は、油層であり、第２層は、残留脂肪組織層であり、第３層は、液体層（即ち、中間液体層である）であり、第４層は、細胞／組織破片沈降層である。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、前記遠心分離は、８００～２５００ｇ、好ましくは８００～２０００ｇ、より好ましくは１０００～１５００ｇ、最も好ましくは１１００～１３００ｇで遠心分離される。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、前記遠心分離の時間は、１～１５分間、好ましくは１～１０分間、より好ましくは２～８分間、最も好ましくは３～７分間である。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、第１層、第２層、第３層および第４層は、上から下までに順次に配列される。

別の好ましい例において、前記段階（５）において、前記中間液体層は、透明または実質的に透明な層である。

別の好ましい例において、前記段階（６）において、前記フィルターバッグは、一次脂肪抽出物中の脂肪細胞を除去することができる。

別の好ましい例において、前記段階（６）において、前記ろ過および滅菌は、フィルター（例えば、０．２２μｍの微多孔性フィルター膜）を介して行われる。

別の好ましい例において、前記フィルターは、微多孔性フィルター膜のフィルターである。

別の好ましい例において、前記微多孔性フィルター膜の孔径の大きさは、０．０５～０．８μｍ、好ましくは０．１～０．５μｍ、より好ましくは０．１～０．４μｍ、より好ましくは０．１５～０．３μｍ、より好ましくは０．２～０．２５μｍ、最も好ましくは０．２２μｍである。

別の好ましい例において、前記段階（６）において、前記ろ過および滅菌は、最初に細胞をろ過できる第１フィルターを通過させた後、病原体（例えば、細菌）をろ過できる第２フィルター（例えば、０．２２μｍのフィルター）を通過させることによって実行される。

別の好ましい例において、前記段階（６）において、前記脂肪抽出物を分注して、分注製品を形成する。（前記分注した抽出物は、－２０℃で保存して備蓄し、低温（例えば、－４℃）もしくは常温で解凍後そのまま使用するか、または解凍後低温（例えば、４℃）で一定期間保存してから使用することができる）。

本発明の第３の態様は、無細胞脂肪抽出物を提供し、前記無細胞脂肪抽出物は、本発明の第２の態様に記載の方法によって調製される。

本発明の第４の態様は、組成物または製剤を提供し、前記組成物または製剤は、（ａ）本発明の第３の態様に記載の無細胞脂肪抽出物、ならびに（ｂ）薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体または賦形剤を含む。

別の好ましい例において、前記組成物は、医薬組成物、食品組成物、栄養補助食品組成物または栄養補助食品である。

別の好ましい例において、前記注射剤は、静脈内注射剤または筋肉内注射剤である。

別の好ましい例において、前記組成物または製剤において、無細胞脂肪抽出物の質量百分率は、化合物または調製物の総重量に基づいて５ｗｔ％、好ましくは１～２０ｗｔ％である。

本発明の第５の態様は、本発明の第４の態様に記載の組成物または製剤を調製する方法を提供し、前記方法は、本発明の第３の態様に記載の無細胞脂肪抽出物と薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体または賦形剤とを混合することにより、組成物または製剤を形成する段階を含む。

本発明の第６の態様は、必要とする対象に本発明の第３の態様に記載の的無細胞脂肪抽出物を投与する段階を含む、卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療する方法を提供する。

別の好ましい例において、前記対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。

別の好ましい例において、前記非人哺乳動物は、ラットおよびマウス等のげっ歯類動物を含む。

別の好ましい例において、前記投与方法は、経口方法、外用方法または注射方法である。

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

ＰＯＩマウスのＥ２ホルモンレベルに対するＣＥＦＦＥの影響を示す。ＰＯＩマウスのＡＭＨホルモンレベルに対するＣＥＦＦＥの影響を示す。ＰＯＩマウスのＦＳＨホルモンレベルに対するＣＥＦＦＥの影響を示す。ＣＥＦＦＥ治療前後のＰＯＩマウスの卵巣組織学的検出結果を示す。図４Ａ：２週間のＰＯＩ、図４Ｂ：２週間のＰＯＩ＋ＣＥＦＦＥ治療、図４Ｃ：４週間のＰＯＩ、図４Ｄ：４週間のＰＯＩ＋ＣＥＦＦＥ治療、図４Ｅ：正常卵巣。

本発明者らは、広範囲かつ綿密な研究の結果、卵巣機能不全および／またはその合併症（特に化学的損傷による卵巣機能不全および／またはその合併症である）に対して優れた治療作用を有する無細胞脂肪抽出物を初めて開発した。

用語
特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
本明細書で使用されるように、「包括」、「含む」および「含有」という用語は、交換可能に使用され、開放式定義だけでなく、反閉鎖式および閉鎖式定義も含む。言い換えれば、前記用語は、「からなる」、「基本的に……からなる」も含む。
本明細書で使用されるように、「ＩＧＦ－１」という用語は、インスリン様成長因子１（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ－１）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＢＤＮＦ」という用語は、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＧＤＮＦ」という用語は、グリア細胞由来神経栄養因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ｂＦＧＦ」という用語は、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＶＥＧＦ」という用語は、血管内皮増殖因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＴＧＦ－β１」という用語は、トランスフォーミング成長因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＨＧＦ」という用語は、肝細胞増殖因子と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＰＤＧＦ」という用語は、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＥＧＦ」という用語は、上皮細胞成長因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＮＴ－３」という用語は、ニューロトロフィン３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ－３）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「ＧＨ」という用語は、成長ホルモン（ＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅ）と呼ばれる。
本明細書で使用されるように、「Ｇ－ＣＳＦ」という用語は、顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。

無細胞脂肪抽出物（Ｃｅｌｌｆｒｅｅｆａｔｅｘｔｒａｃｔ、ＣＥＦＦＥ）およびその調製方法
本明細書で使用されるように、「本発明の無細胞脂肪抽出物」、「本発明の抽出物」、「本発明の脂肪抽出物」等という用語は、交換可能に使用され、脂肪抽出物の調製中（すすぎ段階を除く）で任意の溶液、溶媒、小分子、化学製剤、および生物学的添加剤を添加せずに調製された脂肪組織由来の抽出物（または抽出液）を指す。本発明の抽出物を調製するための典型的な方法は、本発明の第２の態様に記載されたとおりである。さらに、本発明の抽出物の調製中にいかなる添加剤（または添加成分）も添加する必要はないが、本発明の抽出物の活性に悪影響を及ぼさないかまたは不利影響を及ぼさない安全な物質（例えば、少量の水）をいくつかまたは少量加えてもよいことを理解されたい。

本発明の無細胞脂肪抽出物は、ヒト脂肪組織に由来するものであり、それは、遠心分離後に油および細胞／細胞外マトリックス部分を除去することにより、ナノ脂肪から精製され、細胞を含まず、様々な成長因子の液体を豊富に含む。

本発明の好ましい例において、前記無細胞脂肪抽出物は、無細胞脂肪抽出液である。

本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、様々なサイトカインを含むことができる。代表的には、前記無細胞脂肪抽出物は、ＩＧＦ－１、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＴＧＦ－β、ＨＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＮＴ－３、ＧＨ和Ｇ－ＣＳＦの一種または複数種を含む。

別の好ましい例において、前記ＰＤＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、０．１～３：１、好ましくは０．２～２：１、より好ましくは０．４～１．５：１、最も好ましくは０．７～１．２：１である。
好ましくは，本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、上記の本発明の第２の態様に記載の方法によって調製される。

代表的には、本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、以下の方法によって調製され、
（１）脂肪組織原料を提供し、前記脂肪組織原料を粉砕し、すすぎ（例えば、生理食塩水を使用する）、それによってすすいだ脂肪組織を得、
（２）前記すすいだ脂肪組織を遠心分離し、層状混合物を得、
（３）前記層状混合物に対して、上層の油層および下層の水層を除去し、中間層（即ち、脂肪細胞を含む脂肪層）を収集し、
（４）前記中間層を乳化して、乳化した脂肪混合物（ナノ脂肪とも呼ばれる）を得、
（５）前記乳化した脂肪混合物を遠心分離して、一次脂肪抽出物である中間液体層を得、および
（６）前記一次脂肪抽出物をろ過および滅菌し、それによって無細胞脂肪抽出物を得る。

別の好ましい例において、前記解凍的温度は、２０～４０℃、好ましくは２５～４０℃、より好ましくは３７℃である。

用途
本発明は、無細胞脂肪抽出物の用途を提供し、組成物または製剤を調製するために使用され、前記組成物または製剤卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するために使用される。
本発明において、「予防」という用語は、疾患および／またはそれに伴う症状の発症を予防するか、または対象を疾患の罹患から保護する方法を指す。本明細書で使用される「予防」は、疾患および／またはそれに伴う症状の発症の遅延、ならびに対象の疾患を発症するリスクを軽減することも含む。

本発明に記載の「治療」は、疾患の進行の遅延および停止、または疾患の排除を含み、１００％の阻害、排除および逆転を必要とするわけではない。いくつかの実施形態において、本発明に記載の無細胞脂肪抽出物が存在しない場合と比較して、本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、卵巣機能不全を、例えば少なくとも約１０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約８０％軽減、阻害および／または逆転させる。

本発明は、必要とする対象に本発明に記載の的無細胞脂肪抽出物を投与する段階を含む、卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療する方法をさらに提供する。

組成物および投与
本発明に記載の組成物は、医薬組成物、食品組成物、保健組成物、栄養補助食品等を含む（これらに限定されない）。
代表的には、本発明の無細胞脂肪抽出物を、例えば、錠剤、カプセル、粉末剤、微顆粒剤、溶液剤、トローチ剤、ゼリー、クリーム製剤、濃エタノール溶液剤、懸濁液、チンキ剤、湿布剤、塗布剤、洗浄剤、およびエアゾール剤等の医薬組成物に調製することができる。医薬組成物は、一般的に知られている調製技術によって調製されることができ、適切な薬物添加剤を当該薬物に添加することができる。

本発明の組成物は、薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体をさらに含むことができる。「薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体」とは、ヒトへの使用に適し、十分な純度および十分に低い毒性を有していなければならない、一つまたは複数の適合性固体または液体の充填剤またはゲル物質を指す。「適合性」とは、組成物の各成分が、本発明の化合物およびそれらの間で、化合物の効力を顕著に低下させることなく、互いにブレンドすることができることを指す。薬学的に、食品的に、栄養補助食品的にまたは食事的に許容される担体の一部の例としては、セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース等）、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム）、硫酸カルシウム、植物油（例えば、大豆油、ごま油、落花生油、オリーブ油等）、ポリオール（例えば、プロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトール等）、乳化剤（例えば、トゥイーン(R)）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等を含む。

本発明の組成物の投与方法は特に限定されず、代表的な投与方法としては、経口、非経口（静脈内、筋肉内）、局所投与を含み（これらに限定されない）、好ましい投与方法は、経口投与および注射投与である。

本発明に記載の組成物または製剤の剤形は、経口製剤、外用製剤または注射製剤である。代表的には、経口投与用または投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含む。これらの固形剤形において、活性化合物は、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム等の少なくとも一つの従来の不活性賦形剤（または担体）と混合されるか、または（ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または相溶化剤、（ｂ）ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴム等の結合剤、（ｃ）グリセリン等の保湿剤、（ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）パラフィン等の遅延溶剤、（ｆ）第四級アミン化合物等の吸収促進剤、（ｇ）セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセリル等の湿潤剤、（ｈ）カオリン等の吸着剤、ならびに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム）、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の潤滑剤、またはその混合物等の成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤において、剤形は、緩衝剤も含むことができる。

錠剤、シュガーピル、カプセル剤、丸剤および顆粒剤等の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび当技術分野で公知の他の材料等の、コーティングおよびシェル材料を用いて調製することができる。それらは、乳白剤を含むことができる。

経口投与または投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳濁液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物に加えて、液体剤形は、水または他の溶媒等の当技術分野で従来から使用される不活性希釈剤、および例えば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、１，３―ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、蓖麻子油およびごま油またはこれらの物質の混合物等の可溶化剤および乳化剤を含むことができる。

これらの不活性希釈剤に加えて、組成物は、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤和香料等の補助剤も含むことができる。

有効成分に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよび脱水ソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメトキシドおよび寒天またはこれらの物質の混合物等の懸濁剤を含むことができる。

非経口注射用の組成物は、生理学的に許容される滅菌含水または無水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および滅菌注射可能な溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含むことができる。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、ポリオールおよびその適切な混合物を含む。

局所投与用または投与用の本発明の化合物の剤形は、軟膏剤、粉末剤、パッチ剤、スプレー剤および吸入剤を含む。有効成分は、無菌条件下で、生理学的に許容される担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要に応じて必要となる可能性のある推進剤と一緒に混合される。

本発明の無細胞脂肪抽出物は、単独で投与もしくは投薬するか、または卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療する他の薬物と併用して投与もしくは投薬されることができる。

組成物を投与する場合、安全かつ有効量の本発明の無細胞脂肪抽出物を治療を必要とするヒトまたは非ヒト動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウシ、ニワトリ、アヒル等）に提要することであり、ここで、投与時の用量は、薬学的に、食品的にまたは栄養補助食品的に許容される有効な投与量である。本明細書で使用されるように、「安全かつ有効量」という用語は、ヒトおよび／または動物に対して機能または活性を生じ、且つヒトおよび／または動物に許容される量を指す。当業者であれば、前記「安全かつ有効量」は、医薬組成物の形態、投与経路、使用される薬物の賦形剤、疾患の重症度、ならびに他の薬物との併用投与等の状況に応じて変化できることを理解すべきである。例えば、体重６０ｋｇの人の場合、一日量は、通常０．１～１０００ｍｇ、好ましくは１～６００ｍｇ、より好ましくは２～３００ｍｇである。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状況等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。

本発明の主な利点は、次のとおりである。
１．本発明は、無細胞脂肪抽出物が卵巣機能不全および／またはその合併症に対して優れた予防効果および治療効果を有することを初めて発見した。
２．本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、無細胞成分であり、臨床応用において細胞関連問題を回避することができ、例えば、細胞処理後の遺伝的安定性、注射後の細胞の活性および生存率、細胞の複数回の投与および保存、ならびに同種異系脂肪を使用した場合の細胞の免疫原性を含み、本発明に記載の無細胞脂肪抽出物は、卵巣機能不全および／またはその合併症の予防および治療において、安全性が高く、副作用が少ないという利点を有する。

以下、本発明は、具体的実施例と併せてさらに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常従来の条件または製造業者によって提案された条件に従う。特に明記されない限り、パーセンテージと部数とは、重量で計算される。

実施例１
１．無細胞脂肪抽出液（ＣＥＦＦＥ）の調製
脂肪は、インフォームドコンセントを得たボランティアから取得される。無細胞脂肪組織抽出液の調製方法は、次のとおりである。
（１）脂肪組織は、脂肪吸引術を受けた平均年齢３１歳（２４歳～３６歳）の健康な女性６名から採取される。膨潤性液体麻酔を局所注射した後、大きな横穴（２ｍｍ×７ｍｍ）を有する３ｍｍ脂肪吸引カニューレを使用して２０ｍＬシリンジに接続し、手動陰圧下で放射状吸引を実行し、得られた脂肪を直立したまま静止して膨潤液除去した後、生理食塩水で３回すすぐ。
（２）すすいだ脂肪組織を取り、遠心分離管に移し、遠心分離機に入れ、１２００ｇ、４℃で３分間遠心分離して、層状混合物を取得する。
（３）前記層状混合物に対して、上層の油層および下層の水層を除去し、中間層（即ち、脂肪細胞を含む脂肪層）を収集する。
（４）前記中間層については、１０ｍｌの注射器２本を使用してティーチューブを接続し、一定の速度で３０回繰り返し押し出すことにより、機械的乳化を実行し、機械的に乳化した脂肪混合物（ナノ脂肪とも呼ばれる）を取得する。
（５）前記機械的に乳化した脂肪混合物を－８０℃の冷蔵庫に入れて凍結し、３７℃の水浴で解凍し、１回の凍結および解凍の循環後、解凍した脂肪混合物を１２００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、層状混合物を取得し、層状混合物を合計４層に分け、第１層は、油層であり、第２層は、残留脂肪組織層であり、第３層は、液体層であり、第４層は、細胞／組織破片沈降層であり、油層および残留脂肪組織層を除去し、液体層を吸収し、吸収中に細胞／組織破片沈降層の汚染を回避することにより、一次脂肪抽出液を得る。
（６）得られた一次脂肪抽出液を０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌して、滅菌し、且つ混合生細胞の可能性のあるものを除去して、無細胞脂肪抽出液（ＣＥＦＦＥ）を取得し、分注し、－２０℃で凍結保存し、使用する場合に４℃で解凍する。

調製した無細胞脂肪抽出液について、ＥＬＩＳＡ免疫吸着測定キットを使用して、ＩＧＦ－１、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１、ＨＧＦおよびＰＤＧＦ等のサイトカインを含むサイトカイン含有量を検出する。六つのサンプルで検出された平均濃度は、次のとおりである。ＩＧＦ－１（９８４０．６ｐｇ／ｍｌ）、ＢＤＮＦ（１７６４．５ｐｇ／ｍｌ）、ＧＤＮＦ（１８３１．９ｐｇ／ｍｌ）、ｂＦＧＦ（２４２．３ｐｇ／ｍｌ）、ＶＥＧＦ（２０２．９ｐｇ／ｍｌ）、ＴＧＦ－β１（９５４．５ｐｇ／ｍｌ）、ＨＧＦ（８９８．４ｐｇ／ｍｌ）およびＰＤＧＦ（１７９．９ｐｇ／ｍｌ）。

２．実験方法および結果
化学的損傷による卵巣機能不全およびその合併症に対する無細胞脂肪抽出液（ＣＥＦＦＥ）の治療効果を調査する。具体的には、化学薬物による卵巣機能不全（ＰＯＩ）マウスモデルを確立し、ＣＥＦＦＥを応用して治療し、マウスの卵巣機能の改善を様々な指標で観察することを目的とする。

ＰＯＩ群では、Ｃ５７マウスを選択してモデルを確立し、負荷剤量１２０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの１回腹腔内注射と、ブスルファン１２ｍｇ／ｋｇの皮内注射との併用は、合計０．１ｍＬ（ＰＢＳを溶媒として使用する）である。対照群は、化学療法薬を注射していない正常なマウスを実験観察の対象として使用する。

インビボ実験：ＰＯＩマウスモデルを正常に確立したことを確認した後、マウスをＣＥＦＦＥで治療する。実験群は、連続７日間、０．１ｍＬ／日の腹腔内注射用に、タンパク質含有量が３．０以上であるＣＥＦＦＥ製剤を選択される。一部のマウスを処理２週間および４週間後に卵巣を採取して、性ホルモンレベルおよび卵巣組織学を含む検出が実行される。性ホルモンレベルの結果は、図１、図２、図３に示されたとおりであり、卵巣組織学結果は、図４に示されたとおりである。

図１および図２は、化学療法によって卵巣機能不全を引き起こされるマウスのＥ２（エストラジオール）ホルモンおよびＡＭＨ（抗ミュラー管ホルモン）のレベルが大幅に低下し、ＣＥＦＦＥを腹腔内注射した後、Ｅ２ホルモンレベルが明らかに増加し、４週間の観察期間の終点まで安定して維持することを示す。ＣＥＦＦＥ注射前後のホルモンレベルの差は、統計的に有意である。当該結果は、ＣＥＦＦＥが化学療法による卵巣機能不全マウスのＥ２ホルモンレベルおよびＡＭＨホルモンレベルに対して明らかな向上効果をもたらし、卵巣機能の回復に有益であることを証明する。（＊Ｐ＜０．０５）

図３は、化学療法によって卵巣機能不全を引き起こされるマウスのＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）ホルモンレベルが大幅に増加し、ＣＥＦＦＥを腹腔内注射した後、ＦＳＨ値が明らかに減少し、４週間の観察期間の終了時点で徐々に安定化することを示す。ＣＥＦＦＥ注射前後のホルモンレベルの差は、統計的に有意である。当該結果は、ＣＥＦＦＥが化学療法による卵巣機能不全マウスのＦＳＨホルモンレベルに明らかな低下効果をもたらし、卵巣機能の回復に有益であることを証明する。（＊Ｐ＜０．０５）

ＰＯＩ２週間群では、大量の二次卵胞が変性して閉鎖状態になり、少量の炎症細胞が浸潤していることがわかる（図４Ａ）。ＰＯＩ＋ＣＥＦＦＥ２週間群では、卵胞の構造が基本的に正常で、髄質は、部分的に潰れていることがわかる（図４Ｂ）。ＰＯＩ４週間群では、原子卵胞の数が減少し、黄体およびより多くの間質線が排卵直後であるはずであることがわかる（図４Ｃ）。ＰＯＩ＋ＣＥＦＦＥ４週間群では、少量の炎症細胞が浸潤され、全体的な構造が正常であることがわかり（図４Ｄ）、正常な卵巣切片は、図４Ｅに示されたとおりである。
その結果、ＣＥＦＦＥが化学的損傷による卵巣機能不全の卵巣の機能および構造の回復を促進できることが示される。
従って、ＣＥＦＦＥは、化学的損傷による卵巣機能不全およびその合併症に対して優れた治療効果を有する。

本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。

Claims

無細胞脂肪抽出物の用途であって、
組成物または製剤を調製するために使用され、前記組成物または製剤は、卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療するために使用されることを特徴とする、前記用途。
前記卵巣機能不全合併症は、続発性無月経、エストロゲンレベルの低下、性腺刺激ホルモンレベルの上昇、卵胞数の減少、卵胞の質の低下、早発無月経、不妊症、またはその組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記卵巣機能不全は、化学的損傷による卵巣機能不全を含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記化学的損傷は、化学療法薬による損傷を含むことを特徴とする
請求項３に記載の用途。
前記化学療法薬は、シクロホスファミド、ブスルファン、パクリタキセル、ドキソルビシン、またはその組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする
請求項４に記載の用途。
前記卵巣機能不全および／またはその合併症の予防および／または治療は、
（ｉ）卵巣機能の回復の促進と、
（ｉｉ）生殖能力の向上とを含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記卵巣機能の回復の促進は、
（ｉ）エストラジオールホルモンのレベルの増加と、
（ｉｉ）抗ミュラー管ホルモンのレベルの増加と、
（ｉｉｉ）卵胞刺激ホルモンのレベルの低下と、
（ｉｖ）卵胞構造の回復の促進とからなる群から選択される一つまたは複数の特徴を含むことを特徴とする
請求項６に記載の用途。
前記組成物または製剤は、医薬組成物または製剤、食品組成物または製剤、栄養補助食品組成物または製剤または栄養補助食品を含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記組成物または製剤の剤形は、経口製剤、外用製剤または注射製剤であることを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記組成物または製剤は、外用、局所、または注射方法によって投与されることを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記無細胞脂肪抽出物は、ＩＧＦ－１、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＴＧＦ－β１、ＨＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＮＴ－３、ＧＨ、Ｇ－ＣＳＦ、またはその組み合わせからなる群から選択される一種または複数種の成分を含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。
前記無細胞脂肪抽出物は、以下からなる群から選択される一種または複数種の特徴を含み、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＩＧＦ－１の濃度は、５０００～３００００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは６０００～２００００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは７０００～１５０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８０００～１２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９０００～１１０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９５００～１０５００ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＢＤＮＦの濃度は、８００～５０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１０００～４０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２００～２５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７００～１８５０ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＧＤＮＦの濃度は、８００～５０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１０００～４０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２００～２５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７００～１９００ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ｂＦＧＦの濃度は、５０～６００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１００～５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２０～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１５０～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは２００～２８０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは２２０～２６０ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＶＥＧＦの濃度は、５０～５００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは１００～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１２０～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１５０～２５０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７０～２３０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１９０～２１０ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＴＧＦ－β１の濃度は、２００～３０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１１００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは９００～１０００ｐｇ／ｍｌであり、
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＨＧＦの濃度は、２００～３０００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは４００～２０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは６００～１２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８００～１０００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは８５０～９５０ｐｇ／ｍｌであり、および／または
前記無細胞脂肪抽出物において、前記ＰＤＧＦの濃度は、５０～６００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは８０～４００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１００～３００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１４０～２２０ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１６０～２００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは１７０～１９０ｐｇ／ｍｌであることを特徴とする
請求項１１に記載の用途。
前記無細胞脂肪抽出物は、以下からなる群から選択される一種または複数種の特徴を含み、
前記ＩＧＦ－１とＶＥＧＦとの重量比は、２０～１００：１、好ましくは３０～７０：１、より好ましくは４０～６０：１、最も好ましくは４５～５５：１であり、
前記ＢＤＮＦとＶＥＧＦとの重量比は、２～２０：１、好ましくは４～１５：１、より好ましくは６～１２：１、最も好ましくは８～９．５：１であり、
前記ＧＤＮＦとＶＥＧＦとの重量比は、２～２０：１、好ましくは４～１５：１、より好ましくは６～１２：１、最も好ましくは８．５～９．５：１であり、
前記ｂＦＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、０．２～８：１、好ましくは０．５～５：１、より好ましくは０．６～２：１、より好ましくは０．８～１．６：１、最も好ましくは１～１．５：１であり、
前記ＴＧＦ－β１とＶＥＧＦとの重量比は、１～２０：１、好ましくは１～１５：１、より好ましくは１～１０：１、より好ましくは２～８：１、より好ましくは４～６：１であり、
前記ＨＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、１～２０：１、好ましくは１～１５：１、より好ましくは１～１０：１、より好ましくは２～８：１、より好ましくは４～５．５：１であり、および／または
前記ＰＤＧＦとＶＥＧＦとの重量比は、０．１～３：１、好ましくは０．２～２：１、より好ましくは０．４～１．５：１、最も好ましくは０．７～１．２：１であることを特徴とする
請求項１１に記載の用途。
前記無細胞脂肪抽出物は、以下の方法によって調製され、
（１）脂肪組織原料を提供し、前記脂肪組織原料を粉砕し、すすぎ（例えば、生理食塩水を使用する）、それによってすすいだ脂肪組織を得、
（２）前記すすいだ脂肪組織を遠心分離し、層状混合物を得、
（３）前記層状混合物に対して、上層の油層および下層の水層を除去し、中間層（即ち、脂肪細胞を含む脂肪層）を収集し、
（４）前記中間層を乳化して、乳化した脂肪混合物（ナノ脂肪とも呼ばれる）を得、
（５）前記乳化した脂肪混合物を遠心分離して、一次脂肪抽出物である中間液体層を得、および
（６）前記一次脂肪抽出物をろ過および滅菌し、それによって無細胞脂肪抽出物を得ることを特徴とする
請求項１に記載の用途。
卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療する方法であって、
必要とする対象に無細胞脂肪抽出物を投与することを特徴とする、前記卵巣機能不全および／またはその合併症を予防および／または治療する方法。