JP2024520952A - 免疫原性ペプチドを使用した改善された処置方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、抗原のT細胞エピトープとオキシドレダクターゼモチーフとを含む免疫原性ペプチドの特定の投与スキームに関する。

Description

抗原に対する望ましくない免疫応答の生成を予防するためのいくつかの戦略が説明されている。国際公開第2008/017517号は、所与の抗原性タンパク質のMHCクラスII T細胞エピトープ及びオキシドレダクターゼモチーフを含むペプチドを使用した戦略について説明している。これらのペプチドは、CD4+ T細胞を、細胞溶解性CD4+ T細胞と称される細胞溶解特性を有する細胞型へと変換する。これらの細胞は、アポトーシスをトリガーすることを通じて、ペプチドが由来する抗原を提示する抗原提示細胞(APC)を殺滅させることができる。国際公開第2008/017517号は、アレルギー及び自己免疫疾患、例えば、1型糖尿病に関してこの概念を提示している。ここで、インスリンは、自己抗原として作用し得る。
国際公開第2009101207号及びCarlierら、(2012) Plos one 7、10 e45366は、更に、抗原特異的細胞溶解性細胞についてより詳細に説明している。
国際公開第2016059236号は、追加のヒスチジンがオキシドレダクターゼモチーフの近傍に存在する更に改変されたペプチドを開示している。
国際公開第2018162498号は、追加のヒスチジンを有するオキシドレダクターゼモチーフ及びインスリンに由来するMHCII T細胞エピトープを含むペプチド、並びに1型糖尿病(T1D)の処置におけるその使用を更に開示している。
国際公開第2016059236号 欧州特許第2018162498号 国際公開第2014111841号 国際公開第2008/017517号
Jason E. Hawkesら、2017: Current Dermatology Reports volume 6、pages 104-112 McCluskeyら、Current Protocols in Immunology (2017)、118、A.1S.1-A.1S.6 Marshら、Tissue Antigens (2010)、75、p291 Lubetzki及びStankoff. (2014). Handb Clin Neurol. 122、89-99 Rendon及び、Int J Mol Sci. 2019 Mar; 20(6): 1475 「McCutcheon's Detergents and Emulsifiers Annual」 (MC Publishing Crop.、Ridgewood、New Jersey、1981) 「Tensid-Taschenbucw」2 d ed. (Hanser Verlag、Vienna、1981) 「Encyclopaedia of Surfactants」(Chemical Publishing Co.、New York、1981)
しかしながら、上記を考慮した場合であっても、処置中の患者におけるそのようなペプチドの実際の作用に関してはほとんど知られておらず、そのような免疫原性ペプチドの治療作用を改善する必要性が残っている。
本発明は、自己抗原のエピトープとオキシドレダクターゼモチーフとを含む免疫原性ペプチドを用いて自己免疫疾患を処置するための改善された方法を提供する。
本発明者らは、患者において、応答性のレベルが、処置及び前記免疫原性ペプチドを投与する投薬スキームを調節することによって増加し得ることを発見した。
本発明は、したがって、以下の態様を提供する。
1.対象における自己免疫障害、脱髄性障害、同種移植片若しくは移植片拒絶、腫瘍若しくはがん、細胞内病原体による感染、可溶性同種因子に対する免疫応答、アレルゲン曝露に対する免疫応答、又は遺伝子療法若しくは遺伝子ワクチン接種に使用されるウイルスベクターに対する免疫応答から選択される疾患又は障害の予防又は処置における使用のための、9～50個のアミノ酸の長さを有する免疫原性ペプチドであって、オキシドレダクターゼモチーフと、このモチーフから0～7個のアミノ酸分離れた、前記疾患又は障害に関与する抗原のT細胞エピトープ配列とを含み、
前記オキシドレダクターゼモチーフが、モチーフ:
Zm-[CST]-Xn-C-(配列番号12～36)又はZm-C-Xn-[CST]-(配列番号37～61)
(式中、nは、0～6の整数、好ましくは、2、1、0、又は3であり、
mは、0～2の整数であり、
Cはシステインを表し、Sはセリンを表し、Tはスレオニンを表し、Xは任意のアミノ酸を表し、Zは任意のアミノ酸、好ましくは、塩基性アミノ酸を表す)
を含み、
前記免疫原性ペプチドが、300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量で、少なくとも5回、2回の用量の間隔が約12日～約28日で投与される、
免疫原性ペプチド。
好ましい実施形態において、前記投与は、筋肉内又は皮下注射を通じて行われる。
オキシドレダクターゼモチーフの前記一般式において、ハイフン(-)は、リンカー若しくはT細胞エピトープのN末端、又はリンカー若しくはT細胞エピトープのC末端へのオキシドレダクターゼモチーフの結合点を示す。
好ましい実施形態において、前記免疫原性ペプチドにおけるT細胞エピトープは、MHCクラスII T細胞エピトープFLRVPCWKI(配列番号4)及びFLRVPSWKI(配列番号5)、又はNKT細胞エピトープFLRVPCW(配列番号10)及びFLRVPSW(配列番号11)からなる群から選択されるアミノ酸配列ではなく、それを含むこともない。
好ましい実施形態において、前記オキシドレダクターゼモチーフは、標準的なC-XX-[CST](配列番号1)又は[CST]-XX-C(配列番号2)オキシドレダクターゼモチーフのリピート、例えば、互いに1つ若しくは複数のアミノ酸で離間されていてもよい前記モチーフのリピート(例えば、CXXC X CXXC X CXXC(配列番号6))、互いに隣接しているリピート(CXXCCXXCCXXC(配列番号7))、又は特に、態様1に定義される一般式においてnが0若しくは1であり、mが0である場合の互いにオーバーラップするリピートCXXCXXCXXC(配列番号8)若しくはCXCCXCCXCC(配列番号9))の一部ではない。
好ましい実施形態において、抗原は、自己抗原である。
2.前記免疫原性ペプチドが、300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量で、6回、2回の用量の間隔が約12～28日間で、筋肉内又は皮下注射を通じて投与される、態様1に記載の使用のため免疫原性ペプチド。
3. 300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの前記用量のそれぞれが、2回の用量間の間隔が約12～約16日間、又は約2週間で投与される、態様1又は2に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
4.それぞれの用量が、
- 300～600μgの前記免疫原性ペプチド、
- 600～800μgの前記免疫原性ペプチド、
- 800～1000μgの前記免疫原性ペプチド、
- 1000～1200μgの前記免疫原性ペプチド、又は
- 1200～1500μgの前記免疫原性ペプチド
を含む、態様1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
前記態様の好ましい実施形態において、前記用量は、450又は1350μgの前記免疫原性ペプチドを含む。
更により好ましい実施形態において、前記用量は、用量間の間隔が約12～約16日間、又は約2週間で、6回投与される。
5.処置の開始から数えて約22～30週目に、300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量のブースト投与が行われる、態様1から4のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド。
6.前記ブースト投与が、処置の開始から数えて約22～26週目に行われる、態様5に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
7.前記ブーストが、
- 300～600μgの前記免疫原性ペプチド、
- 600～800μgの前記免疫原性ペプチド、
- 800～1000μgの前記免疫原性ペプチド、
- 1000～1200μgの前記免疫原性ペプチド、又は
- 1200～1500μgの前記免疫原性ペプチド
を含む、態様5又は6に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
前記態様の好ましい実施形態において、前記用量は、好ましくは、処置の約23～25週目、より好ましくは、処置のおよそ24週目に、450又は1350μgの前記免疫原性ペプチドを含む。
8.用量の半量が、2つの部位(両上腕、好ましくは、腕の側部領域、より好ましくは、肘と肩との中間)に同時に投与される、態様1から7のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド。
9.対象における自己免疫障害、脱髄性障害、同種移植片若しくは移植片拒絶、腫瘍若しくはがん、細胞内病原体による感染、可溶性同種因子に対する免疫応答、アレルゲン曝露に対する免疫応答、又は遺伝子療法若しくは遺伝子ワクチン接種に使用されるウイルスベクターに対する免疫応答から選択される疾患又は障害の、9～50個のアミノ酸の長さを有する免疫原性ペプチドでの処置に対する患者の応答を分析するためのインビトロ方法であって、前記ペプチドが、オキシドレダクターゼモチーフと、このモチーフから0～7個のアミノ酸分離れた、前記疾患又は障害に関与する(自己)抗原のMHCクラスII T細胞エピトープ配列とを含み、
前記オキシドレダクターゼモチーフが、モチーフ:
Zm-[CST]-Xn-C-(配列番号12～36)又はZm-C-Xn-[CST]-(配列番号37～61)
(式中、nは、0～6の整数、好ましくは、2、1、0、又は3であり、
mは、0～2の整数であり、Cはシステインを表し、Sはセリンを表し、Tはスレオニンを表し、Xは任意のアミノ酸を表し、Zは任意のアミノ酸、好ましくは、塩基性アミノ酸を表す)
を含み、
前記方法が、以下の時点:
- 処置の0日目、
- 処置の11～13週目、例えば、12週目、
- 処置の23～25週目、例えば、24週目、及び
- 処置の47～49週目、例えば、48週目において
前記免疫原性ペプチドで処置されている患者から採取されたサンプルの分析を含む、
インビトロ方法。
10.更に、前記患者のサンプルが、処置の開始の約8～10週間前、好ましくは、前記処置の開始の約9週間前に分析される、態様9に記載の方法。
11.前記自己免疫疾患が、1型糖尿病(T1D)、多発性硬化症(MS)、視神経脊髄炎(NMO)、リウマチ性関節炎(RA)、乾癬、多発性関節炎、喘息、アトピー性皮膚炎、強皮症、潰瘍性大腸炎、若年性糖尿病、甲状腺炎(thyreoiditis)、グレーブス病、全身性エリテマトーデス(SLE)、シェーグレン症候群、悪性貧血、慢性活動性肝炎、移植片拒絶、及びがんからなる群から選択される、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9若しくは10に記載の方法。
12.前記(自己)抗原が、前記エピトープに隣接するN末端又はC末端側の11個のアミノ酸以内に、オキシドレダクターゼモチーフを天然に含まない、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から11のいずれか1つに記載の方法。
13.前記免疫原性ペプチドにおいて、前記エピトープが、その配列内にオキシドレダクターゼモチーフを天然に含まない、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から12のいずれか1つに記載の方法。
14.前記免疫原性ペプチドにおいて、T細胞エピトープが、MHCクラスI若しくはII T細胞エピトープ、又はNKT細胞エピトープである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から13のいずれか1つに記載の方法。
- MHCクラスIIエピトープは、典型的には、7～20個のアミノ酸の長さ、より通常は、8～20個又は9～20個のアミノ酸の長さ、更により好ましくは、7～17個、8～17個、9～17個、10～17個、11～17個、12～17個、13～17個のアミノ酸、例えば、14～16個のアミノ酸の長さを有する。MHCクラスII分子に結合するペプチドはまた、これらのペプチドが、(MHCクラスIペプチド結合溝とは異なり)両端が開放されているMHC IIペプチド-結合溝に沿って延長された立体構造にあるため、より長くてもよい。ペプチドは、主として、主鎖原子がペプチド結合溝に沿う保存された残基と接触することによって正しい位置に保持される。
- NKT細胞エピトープは、NKT細胞の細胞表面の受容体、具体的には、CD1d分子によって認識及び結合され得る。そのようなエピトープは、典型的には、7～20個のアミノ酸の長さ、より通常は、7～17個のアミノ酸の長さ、更により好ましくは、8～17個、9～17個、10～17個、11～17個、12～17個、13～17個のアミノ酸、例えば、14～16個のアミノ酸の長さを有する。そのようなエピトープは、典型的には、モチーフ[FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY][配列番号62]又は[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW][配列番号63]を有する。
15.前記免疫原性ペプチドにおいて、オキシドレダクターゼモチーフが、リンカー若しくはエピトープのN末端、又はリンカー若しくはエピトープのC末端、好ましくは、リンカー若しくはエピトープのN末端側に位置する、且つ/或いはオキシドレダクターゼモチーフが、免疫原性ペプチドのN末端又はC末端に位置する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から14のいずれか1つに記載の方法。
16.前記免疫原性ペプチドにおいて、抗原性タンパク質の前記T細胞エピトープが、NKT細胞エピトープ又はMHCクラスII T細胞エピトープであり、
好ましくは、抗原性タンパク質の前記T細胞エピトープが、NKT細胞エピトープである場合に、それが7～25個のアミノ酸の長さを有するか、又は抗原性タンパク質の前記T細胞エピトープが、MHCクラスII T細胞エピトープである場合に、それが9～25個のアミノ酸の長さを有する、
態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から15のいずれか1つに記載の方法。
17. NKTエピトープを有する前記免疫原性ペプチドが、7～50個のアミノ酸の長さを有し、且つ/又はMHCクラスII T細胞エピトープを含む前記免疫原性ペプチドが、9～50個のアミノ酸の長さを有する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から16のいずれか1つに記載の方法。
18.前記免疫原性ペプチドにおいて、オキシドレダクターゼモチーフとT細胞エピトープとの間のリンカーが、0～4個のアミノ酸のものである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から17のいずれか1つに記載の方法。
19.前記免疫原性ペプチドにおいて、配列:
態様1に定義されるZm-[CST]-Xn-C-(配列番号12～36)又はZm-C-Xn-[CST]-(配列番号37～61)を有する前記オキシドレダクターゼモチーフが、以下のアミノ酸モチーフ:
(a)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-
(式中、nは、0であり、mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、好ましくはH、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、
(b)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-、
(式中、nは、1であり、Xは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはRであり、
mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、好ましくはH、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、
(c)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、2であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2アミノ酸連結が作製され、Xは、任意のアミノ酸であり、好ましくは、少なくとも1つのXは、H、K、R、及び非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはRであり、
mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、好ましくはH、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、
(d)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、3であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3アミノ酸ストレッチが作製され、Xは、任意のアミノ酸であり、好ましくは、少なくとも1つのXは、H、K、R、及び非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはRであり、
mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、好ましくはH、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、より好ましくは、K若しくはHである)、
(e)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、4であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4(配列番号64)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、
(f)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、5であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4X5(配列番号65)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、
(g)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、6であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4X5X6(配列番号66)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0、1、若しくは2から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはHであり、もっとも好ましくは、Kである)、又は
(h)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、0～6であり、mは、0であり、C若しくは[CST]残基のうちの1つは、モチーフのアミノ酸残基のN末端アミド若しくはC末端カルボキシ基のいずれかにアセチル、メチル、エチル、若しくはプロピオニル基を有するように改変されている)
から選択される、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から18のいずれか1つに記載の方法。
そのようなモチーフの好ましい実施形態において、nは、2であり、mは、1又は2であり、ここで、内部X1X2は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1及びX2は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。更なる例において、前記モチーフにおけるX1又はX2のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、又は本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸である。モチーフの別の例において、前記モチーフにおけるX1又はX2のうちの少なくとも1つは、P又はYである。オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2アミノ酸連結の具体的な非限定的な例は、PY、HY、KY、RY、PH、PK、PR、HG、KG、RG、HH、HK、HR、GP、HP、KP、RP、GH、GK、GR、GH、KH、及びRHである。好ましくは、前記改変は、モチーフの最初のシステインのN末端アセチル化をもたらす(N-アセチル-システイン)。
20.前記免疫原性ペプチドが、配列CC、KCC、RCC、CRC、CKC、KCRC(配列番号154)、KCKC(配列番号152)、KCHC(配列番号225)、RCRC(配列番号156)、RCKC(配列番号226)、CPYC(配列番号227)、HCPYC(配列番号228)、KCPYC(配列番号229)、RCPYC(配列番号230)、CRPYC(配列番号231)、CPRYC(配列番号232)、CPYRC(配列番号233)、CKPYC(配列番号234)、CPKYC(配列番号235)、CPYKC(配列番号236)、RCRPYC(配列番号237)、RCPRYC(配列番号238)、RCPYRC(配列番号239)、RCKPYC(配列番号240)、RCPKYC(配列番号241)、RCPYKC(配列番号242)、KCRPYC(配列番号243)、KCPRYC(配列番号244)、KCPYRC(配列番号245)、KCKPYC(配列番号246)、KCPKYC(配列番号247)、又はKCPYKC(配列番号248)を含むオキシドレダクターゼモチーフを有する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から19のいずれか1つに記載の方法。
21.自己免疫疾患が、T1Dであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、(プロ-)インスリン又はC-ペプチドに由来するMHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープであり、好ましくは、前記エピトープのアミノ酸配列が、アミノ酸配列LALEGSLQK[配列番号3]によって定義される、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法。
22.前記患者が、ホモ接合性又はヘテロ接合性HLA型DR3又はDR4陽性である、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から21のいずれか1つに記載の方法。
23.前記ペプチドが、Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK[配列番号67]、[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[配列番号68]、CxxCSLQPLALEGSLQK[配列番号69]、HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK[配列番号70]、H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[配列番号71]、HCxxCSLQPLALEGSLQK[配列番号72]、及びHCPYCSLQPLALEGSLQKRG[配列番号73]からなる群から選択される配列を含む、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から22のいずれか1つに記載の方法。
24.前記抗原が、自己抗原、アレルゲン、可溶性同種因子、グラフトによって放出される同種抗原、細胞内病原体の抗原、遺伝子療法若しくは遺伝子ワクチン接種に使用されるウイルスベクターの抗原、腫瘍関連抗原、又はアレルゲンである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から202のいずれか1つに記載の方法。
例示的な抗原は、
- MSの場合には、ミエリン抗原、ニューロン抗原、及び星状細胞由来抗原、例えば、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、プロテオリピドタンパク質(PLP)、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質(OSP)、ミエリン関連抗原(MAG)、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質(MOBP)、及び2',3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ(CNPase)、S100βタンパク質、又はトランスアルドラーゼH自己抗原(Riedhammer及びWeissert、2015; Front Immunol. 2015; 6: 322)、好ましくは、MOG、MBP、PLP、及びMOBPであり得る。
- 乾癬の場合、ADAMTSL5、PLA2G4D、ケラチン、例えば、ケラチン14若しくはケラチン17、パンコムギ(Triticum aestivum)由来の抗原、Pso p27、カテリシジン抗微生物ペプチド、好中球ディフェンシン(ceutrophil defensin)1、及びLL37、好ましくは、LL37(Jason E. Hawkesら、2017: Current Dermatology Reports volume 6、104～112頁)。
- 喘息の場合には、アレルゲン、例えば、花粉、胞子、ダニ、及びペットの鱗屑に由来するものであり得る。
- がんの場合には、腫瘍又はがん関連抗原、例えば、がん遺伝子、がん原遺伝子、ウイルスタンパク質、生存因子、又はクローンタイプ若しくはイディオタイプ決定基であり得る。具体的な例としては、MAGE(黒色腫関連遺伝子)産物があり、これは、MHCクラスI決定基の状況において、腫瘍細胞によって自発的に発現され、そうしてCD8+細胞溶解性T細胞によって認識されることが示されている。しかしながら、MAGE由来の抗原、例えば、MAGE-3は、MHCクラスII決定基においても発現され、CD4+特異的T細胞が、黒色腫患者からクローニングされている(Schutzら、(2000) Cancer Research 60: 6272-6275、Schuler-Thurnerら、(2002) J. Exp. Med. 195: 1279-1288)。MHCクラスII決定基によって提示されるペプチドは、当該技術分野において公知である。他の例としては、P815肥満細胞腫及び黒色腫細胞によって発現されるgp100抗原が挙げられる(Lapointe (2001; J. Immunol. 167: 4758-4764、Cochloviusら、(1999) Int. J. Cancer、83: 547- 554)。がん原遺伝子は、腫瘍細胞において優先的に発現され、健常組織においては最小限にしか発現されない、いくつかのポリペプチド及びタンパク質を含む。サイクリンD1は、細胞周期調節因子であり、G1からSへの移行に関与する。高いサイクリンD1発現が、腎細胞癌、副甲状腺癌、及び多発性骨髄腫において示されている。残基198～212を包含するペプチドは、MHCクラスII決定基の状況で認識されるT細胞エピトープを有することが示されている(Dengielら、(2004) Eur. J. of Immunol. 34: 3644-3651)。サバイビンは、アポトーシスを阻害し、それによって、サバイビンを発現する細胞に拡大の利益を付与する因子の一例である。サバイビンは、上皮及び造血系起源のヒトがんにおいて異常に発現され、胸腺、精巣、及び胎盤を除く健常な成体組織、並びに成長ホルモンに刺激された造血系前駆体及び内皮細胞においては発現されない。興味深いことに、サバイビン特異的CD8+ T細胞は、黒色腫患者の血液において検出可能である。サバイビンは、腎臓癌、乳がん、及び多発性骨髄腫を含む広範な悪性腫瘍細胞系によって発現されるが、急性骨髄性白血病、並びに急性及び慢性リンパ性白血病においても発現される(Schmidt (2003) Blood 102: 571 -576)。アポトーシスの阻害剤の他の例は、Bcl2及びspi6である。イディオタイプ決定基は、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、及び一部の形態の白血病においてB細胞によって、並びにT細胞リンパ腫及び一部のT細胞性白血病によって提示される。イディオタイプ決定基は、B細胞受容体(BCR)又はT細胞受容体(TCR)のいずれかの抗原特異的受容体の一部である。そのような決定基は、B細胞の場合はVH若しくはVL領域のいずれかの相補性決定領域(CDR)、又はT細胞の場合はベータ鎖のCDR3に対応する、受容体の超可変領域によって本質的にコードされる。受容体は、ランダムな遺伝子再配列によって作製されるため、それらは、それぞれの個体に固有である。イディオタイプ決定基に由来するペプチドは、MHCクラスII決定基において提示される(Baskarら、(2004) J. Clin. Invest. 113: 1498-1510)。いくつかの腫瘍は、ウイルス由来の抗原の発現と関連付けられている。したがって、ホジキン病の一部の形態は、エプスタイン・バーウイルス(EBV)由来の抗原を発現する。そのような抗原は、クラスI及びクラスIIの決定基の両方において発現される。EBV抗原に特異的なCD8+細胞溶解性T細胞は、ホジキンリンパ腫細胞を排除することができる(Bollardら、(2004) J. Exp. Med. 200: 1623-1633)。抗原決定基、例えば、LMP-1及びLMP-2は、MHCクラスII決定基によって提示される。
- 移植片拒絶の場合には、移植片特異的抗原であり得、これは、移植されている組織又は器官の種類に依存することが明らかであろう。例としては、組織、例えば、角膜、皮膚、骨(骨片)、血管若しくは筋膜; 器官、例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、膵臓、若しくは消化管;、又は更には個々の細胞、例えば、膵島細胞、アルファ細胞、ベータ細胞、筋細胞、軟骨細胞、心臓細胞、脳細胞、血液細胞、骨髄細胞、腎臓細胞、及び肝臓細胞があり得る。移植片拒絶に関与する具体的な例示的な抗原は、マイナー組織適合抗原、主要組織適合抗原、又は組織特異的抗原がある。同種抗原性タンパク質が、主要組織適合抗原である場合、これは、MHCクラスI抗原又はMHCクラスII抗原のいずれかである。念頭におく重要なポイントとして、同種抗原特異的T細胞がAPCの表面の同種ペプチドを認識する機序の変動性がある。同種反応性T細胞は、MHC分子自体の同種抗原決定基、自己若しくは同種のいずれかの源のMHC分子に結合した同種抗原ペプチド、又は同種抗原由来のペプチド及び自己若しくは同種起源のMHC分子内に位置する残基の組合せのいずれかを認識し得る。マイナー組織適合抗原の例としては、HY染色体によってコードされるタンパク質に由来するもの(H-Y抗原)、例えば、Dbyがある。他の例は、例えば、Goulmy E、Current Opinion in Immunology、vol 8、75-81、1996において見出すことができる(特に、その中の表3を参照されたい)。ヒトにおいて、多数のマイナー組織適合抗原が、細胞溶解性CD8+ T細胞の使用によって、MHCクラスI決定基への提示を通じて検出されていることに留意しなければならない。しかしながら、そのようなペプチドは、MHCクラスII制限T細胞エピトープも含むタンパク質のプロセシングによって導出され、それによって、本発明のペプチドを設計する可能性を提供する。組織特異的同種抗原は、同じ手順を使用して特定することができる。この1つの例は、腎臓において発現されるが脾臓においては発現されないタンパク質に由来し、腎臓細胞に対する細胞傷害性活性を有するCD8+ T細胞を誘起することが可能な、MHCクラスI制限エピトープである(Poindexterら、Journal of Immunology、154: 3880- 3887、1995)。
より好ましくは、前記抗原性タンパク質は、1型糖尿病(T1D)、脱髄性障害、例えば、多発性硬化症(MS)若しくは視神経脊髄炎(NMO)、又はリウマチ性関節炎(RA)に関与する自己抗原である。
T1Dに関与する自己抗原の非限定的な例。
典拠:Mallone Rら、Clin Dev Immunol. 2011:513210。
MSに関与する自己抗原の非限定的な例。
RAに関与する自己抗原の非限定的な例。
NMOに関与する自己抗原の例。
いくつかの実施形態において、本明細書に定義される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記ペプチドにおけるエピトープは、MOG抗原アミノ酸配列に由来する配列ではない。
いくつかの実施形態において、本明細書に定義される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記疾患又は障害は、MSではない。
いくつかの実施形態において、本明細書に定義される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記疾患又は障害は、フマル酸によって処置されることが知られている疾患ではなく、本明細書において他の箇所に定義されるフマル酸関連疾患若しくは障害でもない。
25.自己免疫疾患が、MSであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、プロテオリピドタンパク質(PLP)、ミエリン関連抗原(MAG)、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質(OSP)、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質(MOBP)、2',3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ(CNPase)、S100βタンパク質、及びトランスアルドラーゼHを含む群から選択される抗原性タンパク質、好ましくは、MOGに由来する、MHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法。
代替的な実施形態において、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法において、自己免疫疾患は、MSであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープは、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、プロテオリピドタンパク質(PLP)、ミエリン関連抗原(MAG)、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質(OSP)、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質(MOBP)、2',3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ(CNPase)、S100βタンパク質、及びトランスアルドラーゼHを含む群から選択される抗原性タンパク質に由来するMHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープである。
26.自己免疫疾患が、NMOであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)に由来するMHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法。
27.自己免疫疾患が、RAであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、GRP78、HSP60、60kDaシャペロニン2、ゲルゾリン、キチナーゼ-3様タンパク質1、カテプシンS、血清アルブミン、ビンクリン、及びカテプシンDを含む群から選択される抗原性タンパク質に由来するMHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープである、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法。
28.自己免疫疾患が、乾癬であり、前記抗原性タンパク質が、ADAMTSL5、PLA2G4D、ケラチン、例えば、ケラチン14又はケラチン17、パンコムギ由来の抗原、Pso p27、カテリシジン抗微生物ペプチド、好中球ディフェンシン(ceutrophil defensin)1、及びLL37からなる群から選択され、好ましくは、LL37である、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20のいずれか1つに記載の方法。
29.前記自己免疫疾患が、MS、NMO、又は乾癬であり、前記処置が、本明細書に定義されるフマル酸化合物又はその誘導体での処置を含まない、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から28のいずれか1つに記載の方法。
好ましい実施形態において、前記ペプチドのT細胞エピトープは、抗原性タンパク質、又はフマル酸関連若しくはフマル酸処置疾患若しくは障害に関与する抗原の、T細胞エピトープ、より好ましくは、MHCクラスI若しくはII分子又はNKT細胞エピトープではない。
26.前記エピトープが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)抗原アミノ酸配列に由来する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20及び24若しくは25のいずれか1つに記載の方法。より好ましくは、前記エピトープは、配列番号74:
によって定義される成熟MOGアミノ酸配列のアミノ酸残基:40～60、41～55、43～57、44～58、45～59、及び35～55を含む群、例えば、
YRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD(配列番号75)
RPPFSRVVHLYRNGK(配列番号76)
PFSRVVHLYRNGKDQ(配列番号77)
FSRVVHLYRNGKDQD(配列番号78)
SRVVHLYRNGKDQDG(配列番号79)
VVHLYRNGK(配列番号80)
MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK(マウス配列番号81)、
MEVGWYRPPFSRVVHLYRNGK(ヒト配列番号82)、
YRSPFSRVV(マウス配列番号83)、及び
YRPPFSRVV(ヒト配列番号84)、
又はこれらの組合せを含む群から選択されるものから選択される。
態様6又は7の好ましい実施形態において、前記免疫原性ペプチドは、以下の配列:FLRVPCWKI(配列番号4)若しくはFLRVPSWKI(配列番号5)によって定義されるT細胞エピトープを有するか若しくは含む、T細胞エピトープを含むか、
又は前記免疫原性ペプチドは、アミノ酸配列:
HCPYCVRYFLRVPSWKITLF(配列番号85)、
HCPYCVRYFLRVPCWKITLF(配列番号86)、
KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK(配列番号87)、又は
KHCPYCVRYFLRVPCWKITLFKK(配列番号88)
を含むか若しくはそれから本質的になる。
27.前記免疫原性又は寛容原性ペプチドにおけるエピトープが、ミエリンプロテオリピドタンパク質(プロテオリピドタンパク質(PLP)又はリポフィリン(lipohilin)とも称される)抗原アミノ酸配列に由来する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20及び24のいずれか1つに記載の方法。より好ましくは、特許出願国際公開第2014111841号に関連して、前記エピトープは、配列番号89によって定義されるPLPアミノ酸配列(UniProtKB - P60201(MYPR_HUMAN)):
のアミノ酸残基:36～61、179～206、207～234、39～57、180～198、208～222、39～53、42～56、43～57、180～194、181～195、182～196、183～197、184～198、208～222、36～61、179～206、及び207～234を含む群から選択される。
例えば、
PLP 36-61:HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI(配列番号90);
PLP 179-206:TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY(配列番号91);
PLP 207-234:GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM(配列番号92)
PLP 39-57:LTGTEKLIETYFSKNYQDY(配列番号93)
PLP 180-198:WTTCQSIAFPSKTSASIGS(配列番号94)
PLP 208-222:VLPWNAFPGKVCGSN(配列番号95)
PLP 39-53:LTGTEKLIETYFSKN(配列番号96)
PLP 42-56:TEKLIETYFSKNYQD(配列番号97)
PLP 43-57:EKLIETYFSKNYQDY(配列番号98)
PLP 180-194:WTTCQSIAFPSKTSA(配列番号99)
PLP 181-195:TTCQSIAFPSKTSAS(配列番号100)
PLP 182-196:TCQSIAFPSKTSASI(配列番号101)
PLP183-197:CQSIAFPSKTSASIG(配列番号102)
PLP 184-198:QSIAFPSKTSASIGS(配列番号103)
PLP 208-222:VLPWNAFPGKVCGSN(配列番号104)
PLP 36-61:HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI(配列番号105)
PLP 179-206:TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY(配列番号106)及び
PLP 207-234:GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM(配列番号107)
又はこれらの組合せを含む群から選択されるもの。
28.前記免疫原性又は寛容原性ペプチドにおけるエピトープが、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)抗原アミノ酸配列に由来する、態様1から8のいずれか1つに記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は態様9から20及び24のいずれか1つに記載の方法。より好ましくは、前記MBPエピトープは、以下の配列:
PRHRDTGILDSIGRF(配列番号108)
ENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号109)
RASDYKSAHKGFKGV(配列番号110)
GFKGVDAQGTLSKIF(配列番号111)
LGGRDSRSGSPMARR(配列番号112)
TQDENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号113)
TQDENPVVHFFKNIV(配列番号114)
QDENPVVHFFKNIVT(配列番号115)
DENPVVHFFKNIVTP(配列番号116)
ENPVVHFFKNIVTPR(配列番号117)
NPVVHFFKNIVTPRT(配列番号118)
PVVHFFKNIVTPRTP(配列番号119)
ASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGG(配列番号120)
ASDYKSAHKGFKGVD(配列番号121)
SDYKSAHKGFKGVDA(配列番号122)
DYKSAHKGFKGVDAQ(配列番号123)
YKSAHKGFKGVDAQG(配列番号124)
KSAHKGFKGVDAQGT(配列番号125)
SAHKGFKGVDAQGTL(配列番号126)
AHKGFKGVDAQGTLS(配列番号127)
HKGFKGVDAQGTLSK(配列番号128)
KGFKGVDAQGTLSKI(配列番号129)
GFKGVDAQGTLSKIF(配列番号130)
FKGVDAQGTLSKIFK(配列番号131)
KGVDAQGTLSKIFKL(配列番号132)
GVDAQGTLSKIFKLG(配列番号133)
VDAQGTLSKIFKLGG(配列番号134)、及び
LSRFSWGAEGQRPG(配列番号135)、
若しくはこれらの組合せを含む群、
又は配列番号136によって定義されるMBPアミノ酸配列(UniProtKB - P02686-5(MBP_HUMAN)):
のアミノ酸残基30～44、80～94、83～99、81～95、82～96、83～97、84～98、110～124、130～144、131～158、131～145、140～148、142～152、132～146、134～148、135～149、136～150、137～151、138～152、139～153、140～154、及び133～147によって定義されるフラグメントのうちのいずれか1つ若しくは複数から選択される。
29.免疫原性ペプチドの処置の方法又は医療用使用に関して本明細書に開示される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記ペプチドはまた、前記それぞれのペプチドをコードする核酸として投与することができる。本明細書に開示される態様又は例のいずれか1つに記載の免疫原性又は寛容原性ペプチドをコードする核酸であって、好ましくは、単離されたデオキシリボ核酸(DNA)、プラスミドDNA(pDNA)、コーディングDNA(cDNA)、リボ核酸(RNA)、メッセンジャーRNA(mRNA)、又はこれらの改変されたバージョン、例えば、N(1)-メチル-シュードウリジン(m1ψ)を含む非免疫原性mRNAから選択される、核酸。いくつかの実施形態において、前記核酸は、発現カセットの一部であり得、任意選択で、遺伝子療法に使用され得る(ウイルス)ベクター若しくはプラスミドに組み込まれ得るか、又は医薬及び遺伝子治療の分野において公知の技術に従って投与される封入型若しくはネイキッド型DNA若しくはRNAの形態で存在し得る。
30.免疫原性ペプチドの処置の方法又は医療用使用に関して本明細書に開示される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記ペプチドは、特定のHLA型によって認識され得る:
- 前記疾患が、T1Dである場合、前記抗原は、好ましくは、HLA-DRB1*03及びDRB1*04ハプロタイプ群の状況において認識される。DRB1*03群の場合、2つの対立遺伝子、すなわち、DRB1*0301及びDRB1*0302が一般的であるが、他の対立遺伝子、例えば、DRB1*0303、DRB1*0304、及びDRB1*0307が報告されている。DRB1*04群の場合、10個の主要な対立遺伝子、すなわち、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0403、DRB1*0404、DRB1*0405、DRB1*0406、DRB1*0407、DRB1*0408、DRB1*0410、及びDRB1*0411が見出されている。
- 前記疾患又は障害が、MSである場合、前記抗原は、好ましくは、HLA-DRB1*15:01、HLA-DRB1*03:01、HLA-DRB1*04:01、HLA-DRB1*07:01、HLA DRB5*0101、又はDQ6のHLA型の状況において認識され得る。HLA-DRB1*15:01型を有する患者が、より好ましい。
- 前記疾患若しくは障害が、NMOである場合、前記抗原は、好ましくは、HLA-DRB1*03:01若しくはHLA-DPB1*05:01(アジアについて)の状況において認識されるか、又は
- 前記疾患若しくは障害が、RAである場合、前記抗原は、好ましくは、HLA-DRB1*01:01、04:01、若しくは04:04の状況において認識される。
31.好ましい実施形態において、免疫原性ペプチドで処置されるT1D患者は、DR4陽性(すなわち、DRB1*04ハプロタイプのうちの1つに関して陽性)であり、より好ましくは、免疫原性ペプチドで処置されるT1D患者は、DR4陽性(すなわち、DRB1*04ハプロタイプのうちの1つに関して陽性)であり、且つDR3陰性(すなわち、すべてのDRB1*03ハプロタイプに関して陰性)である。代替的には、免疫原性ペプチドで処置されるT1D患者は、DR3陽性(すなわち、DRB1*03ハプロタイプのうちの1つに関して陽性)である。「HLA DR4陽性」という用語は、ヘテロ接合性HLA-DR4陽性又はホモ接合性HLA-DR4の患者の両方を包含する。一実施形態において、前記患者は、HLA-DR3陰性(HLA-DR3-)でもある。「HLA-DR3陰性」という用語は、ホモ接合性HLA-DR3陰性である患者を指す。
32.本明細書に定義される態様のうちのいずれか1つにおいて、前記ペプチドは、前記ペプチドと、薬学的に許容される担体及び/又はアジュバントとを含む、医薬組成物として投与され得る。
33.本発明はまた、自己免疫障害、脱髄性障害、移植片拒絶、又はがんを予防又は処置する方法であって、上記の態様のうちのいずれか1つの投与スキームを使用して、上記の態様のうちのいずれか1つに定義される免疫原性ペプチドを投与する工程を含む、方法も提供する。
34.本発明はまた、自己免疫障害、脱髄性障害、移植片拒絶、又はがんを予防又は処置するための医薬の製造のための、上記の態様のうちのいずれか1つに定義される免疫原性ペプチドの使用であって、前記免疫原性ペプチドが、上記の態様のうちのいずれか1つの投与スキームに従って投与される、使用も提供する。
35.自己免疫障害、脱髄性障害、移植片拒絶、又はがんを予防又は処置する方法であって、それを必要とする対象に、先行する態様のうちのいずれか1つに定義される免疫原性ペプチド又はそれをコードする核酸を投与する工程を含み、前記免疫原性ペプチド又は核酸が、先行する態様のうちのいずれか1つの投与スキームに従って投与される、方法。
被験薬(IMP)を用いて行われたメイン臨床研究及びサブ臨床研究の概略図である。詳細については文章を参照されたい。 診断後9週間以後から48週目までの患者の経過を示す。DBS:乾燥血液スポット分析。FUp:フォローアップ。詳細については文章を参照されたい。 IMP(実線)及びプラセボ(破線)で処置した患者群における様々な時点でのプロインスリンエピトープC20-A1刺激に対して応答する正味のCD4+ T細胞%を示す。直線は、平均値を繋いだものであり、一方でエラーバーは、それぞれの時点における標準誤差を示す。個々の時点におけるp値は、マン-ホイットニー-ウィルコクソンのU検定を使用して、IMP及びプラセボで処置した患者群を比較する。線グラフの右手側に示されるp値は、反復測定ANOVAを使用して平均応答の時間依存性を表す。
本発明は、特定の実施形態に関連して記載されているが、本発明は、それらに限定されるものではなく、特許請求の範囲によってのみ定められる。特許請求の範囲における任意の参照符号は、その範囲を制限すると解釈されるものではない。以下の用語又は定義は、単に本発明の理解を補助するために提供されている。本明細書に具体的に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての用語は、本発明の分野の当業者が有するであろうものと同じ意味を有する。本明細書に提供される定義は、当業者によって理解されるものよりも小さい範囲を有すると解釈されるものではない。
別途示されない限り、当業者には明らかであろうように、具体的に詳述されていないすべての方法、工程、技法、及び操作は、本質的に公知の様式で実行することができ、また実行されている。更に、例えば、標準的な教本、上記で言及されている一般的な背景技術、及びそこに引用されている更なる参考文献への参照がなされる。
本明細書において使用される場合、単数形の「1つの(a)」、「1つの(an)」、及び「その(the)」は、文脈により別途明確に示されない限り、単数形及び複数形の両方の参照物を含む。「任意の」という用語は、本明細書において使用される態様、特許請求の範囲、又は実施形態と関連して使用される場合、任意の単数形のもの(すなわち、いずれか)、並びに参照された前記態様、特許請求の範囲、又は実施形態のすべての組合せを指す。
「含む(comprising)」、「含む(comprises)」、及び「から構成される(comprised of)」という用語は、本明細書において使用される場合、「含む(including)」、「含む(includes)」、又は「含む(containing)」、「含む(contains)」、と同義であり、包括的又は拡張可能であり、追加の言及されていないメンバー、要素、又は方法工程を除外するものではない。前記用語はまた、「から本質的になる」及び「からなる」実施形態も包含する。
端点による数値範囲の記述は、それぞれの範囲内に含まれるすべての数字及び分数、並びに記載された端点を含む。
「約」という用語は、測定可能な値、例えば、パラメーター、量、時間範囲等に言及して本明細書において使用される場合、指定された値の±10%以下、好ましくは±5%以下、より好ましくは±1%以下、更により好ましくは±0.1%以下の変動を包含することを意味するが、ただし、そのような変動が開示される発明を実行するのに適している場合に限る。修飾語「約」が指す値は、それ自体も、具体的且つ好ましく開示されることを理解されたい。より具体的には、週数で期間に言及する場合、「約」という用語は、±2日間を指す。
本明細書において使用される場合、「疾患の処置における使用のための組成物」において使用される「使用のための」という用語は、対応する処置の方法、及び疾患の処置のための医薬の製造のための調製物の対応する使用も同様に開示するものとする。
「フマル酸化合物」という用語は、本明細書において使用される場合、一般式(I)の化合物
を指し、式中、R1及びR2は、それぞれ独立して、OH、O-、及び任意選択で置換された(C1～10)アルコキシ、好ましくは、任意選択で置換された(C1～6)アルコキシ、又は任意選択で置換された(C1～3)アルコキシからなる群から選択され、
R3及びR4は、それぞれ独立して、H又は重水素からなる群から選択され、
それぞれの群は、独立して、任意選択で置換されていてもよい。
「ペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、ペプチド結合によって接続された12～200個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む分子を指すが、これは、非アミノ酸構造を含み得る。
本発明によるペプチドは、従来的な20種のアミノ酸若しくはそれらの改変された形態のうちのいずれかを含み得るか、或いは化学的ペプチド合成によって又は化学的若しくは酵素的改変によって組み込まれる天然に存在しないアミノ酸を含み得る。
「抗原」という用語は、本明細書において使用される場合、高分子、典型的には、タンパク質(多糖あり若しくはなし)の構造、又は1つ若しくは複数のハプテンを含みT細胞エピトープを含むタンパク質組成物から作成される構造を指す。
「抗原性タンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、1つ又は複数のT細胞エピトープを含むタンパク質を指す。本明細書において使用される自己抗原又は自己抗原性タンパク質は、ヒト又は動物の身体内で免疫応答を誘起する、身体内に存在する同じヒト又は動物のタンパク質を指す。
「エピトープ」という用語は、抗体若しくはその一部分(Fab'、Fab2'等)、又はB細胞若しくはT細胞リンパ球の細胞表面に存在する受容体によって特異的に認識及び結合され、前記結合によって、免疫応答を誘導することができる、抗原性タンパク質の1つ又はいくつかの部分(立体構造エピトープを定義し得る)を指す。
本発明の文脈における「T細胞エピトープ」という用語は、MHCクラスIIT細胞エピトープ、ドミナント、サブドミナント、又はマイナーT細胞エピトープ、すなわち、MHCクラスII分子と複合体を形成すると、Tリンパ球の細胞表面において受容体によって特異的に認識及び結合される抗原性タンパク質の一部を指すか、又はNKT細胞エピトープを指す。エピトープがドミナントであるか、サブドミナントであるか、又はマイナーであるかは、エピトープに対して誘起される免疫反応に依存する。ドミナンスは、そのようなエピトープがT細胞によって認識され、タンパク質のすべての可能性のあるT細胞エピトープのなかで、それらを活性化することができる頻度に依存する。
T細胞エピトープは、MHCクラスII分子によって認識され、それと会合するエピトープであり、これは、MHC II分子の溝に適合する±9個のアミノ酸の配列からなる。T細胞エピトープを表すペプチド配列内で、エピトープにおけるアミノ酸は、P1～P9と番号付けされ、エピトープのN末端側のアミノ酸は、P-1、P-2等と番号付けされ、エピトープのC末端側のアミノ酸は、P+1、P+2等と番号付けされる。MHCクラスII分子によって認識され、MHCクラスI分子によっては認識されないペプチドは、MHCクラスII制限T細胞エピトープと称される。
「MHC」という用語は、「主要組織適合抗原」を指す。ヒトにおいて、MHC遺伝子は、HLA(「ヒト白血球抗原」)遺伝子として知られている。一貫した慣例はないが、いくつかの文献では、HLAタンパク質分子を指すためにHLAを使用し、HLAタンパク質をコードする遺伝子を指すためにMHCを使用する。そのため、「MHC」及び「HLA」は、本明細書において使用される場合には同義である。ヒトにおけるHLA系には、マウスにおけるその同等物、すなわち、H2系がある。もっともよく研究されているHLA遺伝子は、9個のいわゆる古典的なMHC遺伝子である:HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLAs DQB1、HLA-DRA、及びHLA-DRB1。ヒトにおいて、MHCは、3つの領域:クラスI、II、及びIIIに分割される。A、B、及びC遺伝子は、MHCクラスIに属し、一方で6つのD遺伝子は、クラスIIに属する。MHCクラスI分子は、3つのドメイン(アルファ1、2、及び3)を含む、細胞表面においてベータ2ミクログロブリンと会合する単一の多形性鎖から構成される。クラスII分子は、それぞれが2つの鎖(アルファ1及び2、並びにベータ1及び2)を含む2つの多形性鎖から構成される。
クラスI MHC分子は、事実上すべての有核細胞上に発現される。
遺伝子レベルで、MHCクラスIIクラスターは、第6染色体の短いアーム(6p21)に位置する。クラスターは、3つの古典的なクラスII遺伝子(HLA-DP、-DQ、及びDR)、並びに2つの非古典的なクラスII遺伝子(HLA-DM及び-DO)を含む。MHCクラスIIの構造は、MHCクラスIIの抗原結合裂溝を形成するα及びβと称される2つの膜結合鎖の会合によって達成される。α鎖及びβ鎖のいずれも、α及びβ遺伝子の対、すなわち、DRα/DRβ、DQα/DQβ、及びDPα/DPβとして緊密に連結された異なる遺伝子座によってコードされる。HLA-DP、-DQ、及びDR遺伝子座は、特にクラスII分子の抗原結合ポケットにおいて、高度に多型である。HLA-DP及び-DQは、-α及び-β鎖遺伝子(DPA、DPB、DQA、及びDQB)の両方に多型性を含む。HLA-DRにおいて、多型性は、DR β鎖(DRB遺伝子)のみに関係する。9個のDRB遺伝子座(DRB1からDRB9と番号付けされる)があるが、DRB1遺伝子座のみが、すべてのハプロタイプで見出されており、したがって、古典的DR血清学の主要な決定基を構成する(McCluskeyら、Current Protocols in Immunology (2017)、118、A.1S.1-A.1S.6)。
HLA-DRB1群を例として挙げると、40個を上回る異なるハプロタイプの存在が、文献により報告されている(Marshら、Tissue Antigens (2010)、75、291頁)。DRB1*03及びDRB1*04ハプロタイプ群が、ヒト集団全体でもっとも適合性が高い。DRB1*03群の場合、2つの対立遺伝子、すなわち、DRB1*0301及びDRB1*0302が一般的であるが、他の対立遺伝子、例えば、DRB1*0303、DRB1*0304、及びDRB1*0307が報告されている。DRB1*04群の場合、10個の主要な対立遺伝子、すなわち、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0403、DRB1*0404、DRB1*0405、DRB1*0406、DRB1*0407、DRB1*0408、DRB1*0410、及びDRB1*0411が見出されている。本出願全体を通じて使用される「DR4陽性」又は「DR4+」という用語は、対象が、DRB1*04ハプロタイプのうちの1つに関して陽性であることを示す。同様に、本出願全体を通じて使用される「DR3陽性」又は「DR3+」という用語は、対象が、DRB1*03ハプロタイプのうちの1つに関して陽性であることを示す。本出願全体を通じて使用される「DR4陰性」又は「DR4-」という用語は、対象が、DRB1*04ハプロタイプのいずれも有さないことを示す。同様に、本出願全体を通じて使用される「DR3陰性」又は「DR3-」という用語は、対象が、DRB1*03ハプロタイプのいずれも有さないことを示す。
HLA型判定は、限定されないが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づく分析、配列分析、及び電気泳動分析を含む、当該技術分野において公知の技法を使用して行うことができる。PCRに基づく分析の非限定的な例としては、Applied Biosystems社から入手可能なTaqman(登録商標)対立遺伝子判別アッセイが挙げられる。配列分析の非限定的な例としては、マキサム・ギルバートシーケンシング、サンガーシーケンシング、キャピラリーアレイDNAシーケンシング、サーマルサイクルシーケンシング、固相シーケンシング、質量分析法、例えば、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析を用いたシーケンシング、及びハイブリダイゼーションによるシーケンシングが挙げられる。電気泳動分析の非限定的な例としては、研究室ゲル電気泳動、例えば、アガロース又はポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、及び変性剤勾配ゲル電気泳動が挙げられる。マーカーにおける多型部位で個体を遺伝子型判定するための他の方法としては、例えば、Third Wave Technologies, Inc.社からのINVADER(登録商標)アッセイ、制限フラグメント長多型(RFLP)分析、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、ヘテロ二重鎖移動度アッセイ、及び一本鎖立体構造多型(SSCP)分析が挙げられる。代替的には、HLA型判定は、抗体試験によって行うことができる。
クラスI MHC分子の状況で提示されるペプチドフラグメントは、CD8+ Tリンパ球(細胞溶解性Tリンパ球又はCTL)によって認識される。CD8+ Tリンパ球は、刺激性抗原を有する細胞を溶解することができる細胞溶解性エフェクターへと成熟することが多い。クラスII MHC分子は、主として、活性化されたリンパ球及び抗原提示細胞上に発現される。CD4+ Tリンパ球(ヘルパーTリンパ球又はTh)は、通常、マクロファージ又は樹状細胞等の抗原提示細胞上に見出されるクラスII MHC分子によって提示される固有のペプチドフラグメントの認識によって活性化される。CD4+ Tリンパ球は、増殖し、抗体媒介性及び細胞媒介性応答を補助するサイトカイン、例えば、IL-2、IFN-ガンマ、及びIL-4を分泌する。
機能性HLAは、内因性、並びに外来性、可能性として抗原性のペプチドが結合する、深い結合溝によって特徴付けられる。溝は、十分に規定された形状及び物理化学的特性によって更に特徴付けられる。HLAクラスI結合部位は、ペプチド両末端が溝の両端に固定されるという点で、閉鎖されている。それらは、保存されたHLA残基との水素結合のネットワークにも関与する。これらの拘束の観点から、結合されるペプチドの長さは、8、9、又は10個の残基に制限される。しかしながら、最大12個のアミノ酸残基のペプチドもまた、HLAクラスIに結合することができることが、示されている。異なるHLA複合体の構造を比較することにより、ペプチドが比較的直線的な拡がった構成をとるか、又は溝の外側に膨らむ中央の残基を含み得る、一般的な結合の様式が確認された。
HLAクラスI結合部位とは対照的に、クラスII部位は、両端が開放されている。これは、ペプチドが、実際の結合領域から伸びて、それによって、両端が「突出する」ことが可能となる。クラスII HLAは、したがって、9個から25個を上回るアミノ酸残基の範囲の可変の長さのペプチドリガンドに結合することができる。HLAクラスIと同様に、クラスIIリガンドの親和性は、「定常」及び「可変」成分によって決定される。定常部分は、ここでも、HLAクラスII溝の保存された残基と、結合されるペプチドの主鎖との間で形成される水素結合のネットワークにより生じる。しかしながら、この水素結合パターンは、ペプチドのN及びC末端残基に限定されず、鎖全体に分布している。後者は、複合体を形成したペプチドの立体構造を、厳密に直鎖状の結合様式に限定するため、重要である。これは、すべてのクラスIIアロタイプに共通している。ペプチドの結合親和性を決定する第2の成分は、クラスII結合部位内のある特定の多形性の位置に起因して、可変である。異なるアロタイプは、溝内に異なる相補性ポケットを形成し、それによって、ペプチドのサブタイプ依存性選択、又は特異性をもたらす。重要なことには、クラスIIポケット内に保持されるアミノ酸残基に対する制約は、一般に、クラスIよりも「柔軟」である。異なるHLAクラスIIアロタイプ間には、はるかに高いペプチドの交差反応性が存在する。MHC II分子の溝に適合するMHCクラスII T細胞エピトープの±9個のアミノ酸(すなわち、8個、9個、又は10個)の配列は、通常、P1～P9と番号付けされる。エピトープのN末端側の追加のアミノ酸は、P-1、P-2等と番号付けされ、エピトープのC末端側のアミノ酸は、P+1、P+2等と番号付けされる。
「NKT細胞エピトープ」という用語は、NKT細胞の細胞表面において受容体によって特異的に認識及び結合される抗原性タンパク質の部分を指す。具体的には、NKT細胞ペプチドエピトープは、モチーフ[FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY](配列番号62)又はそのより制限的な形態、例えば、[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW](配列番号63)を有する、CD1d分子によって結合されるエピトープである。このモチーフにおいて、Fはフェニルアラニンを表し、Wはトリプトファンを表し、Hはヒスチジンを表し、Yはチロシンを表し、Iはイソロイシンを表し、Lはロイシンを表し、Mはメチオニンを表し、Vはバリンを表し、Xは任意のアミノ酸を表す。[FWHY]は、F、W、H、又はYのいずれかが、第1のアンカー残基(P1)を占有し得ること、P4位が、I、L、M、又はVによって専有され得ること、P7位が、F、W、H、又はYによって占有され得ることを示す。これらのアミノ酸残基の様々な組合せが可能であることは、当業者には明らかなはずである。
「NKT細胞」という用語は、受容体、例えば、NK1.1及びNKG2Dを有し、CD1d分子によって提示されるペプチドエピトープを認識するという事実によって特徴付けられる、自然免疫系の細胞を指す。本発明の文脈において、NKT細胞は、1型(不変)若しくは2型のサブセット、又は1型若しくは2型のNKT細胞よりも多型性のT細胞受容体を有するあまり特徴付けられていないNKT細胞のうちのいずれかに属し得る。
「CD1d分子」は、様々なAPCの表面に発現され、両端が開放された深い疎水性溝に配置された3つのアルファ鎖及び逆平行のベータ鎖セットから作製された、脂質、糖脂質、又は疎水性ペプチドをNKT細胞に提示することができる、非MHC由来の分子を指す。
本発明は、インビボ又はインビトロのいずれかで、抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞を生成するための方法、並びにそれとは独立して、細胞溶解性CD4+ T細胞を、特徴的な発現データに基づいて、他の細胞集団、例えば、Foxp3+ Tregとは区別するための方法を提供する。
「ホモログ」という用語は、本発明の状況で使用されるエピトープを参照して本明細書において使用される場合、天然に存在するエピトープとの少なくとも50%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも98%のアミノ酸配列同一性を有し、それによって、抗体又はB及び/若しくはT細胞の細胞表面受容体に結合するエピトープの能力を維持する、分子を指す。エピトープの特定のホモログは、多くとも3つ、より具体的には多くとも2つ、もっとも具体的には1つのアミノ酸が改変された天然のエピトープに対応する。
「誘導体」という用語は、本発明のペプチドを参照して本明細書において使用される場合、少なくともペプチド活性部分(すなわち、レドックスモチーフ及び細胞溶解性CD4+ T細胞活性を誘起することができるMHCクラスIIエピトープ)を含み、それに加えて、ペプチドを安定化させること、又はペプチドの薬物動態若しくは薬力学的特性を変更することといった異なる目的を有し得る補完的部分を含む、分子を指す。
本明細書において使用される場合、2つの配列の「配列同一性」という用語は、2つの配列をアライメントした場合に、同一なヌクレオチド又はアミノ酸を有する位置の数を、それらの配列のうちの短い方におけるヌクレオチド又はアミノ酸の数で除算したものに関する。具体的には、配列同一性は、70%～80%、81%～85%、86%～90%、91%～95%、96%～100%、又は100%である。
「ペプチドコーディングポリヌクレオチド(又は核酸)」及び「ペプチドをコードするポリヌクレオチド(又は核酸)」という用語は、本明細書において使用される場合、適切な環境において発現されると、関連するペプチド配列又はその誘導体若しくはホモログの生成をもたらす、(ポリ)ヌクレオチド配列を指す。そのようなポリヌクレオチド又は核酸は、ペプチドをコードする通常のデオキシリボヌクレオチド(DNA)又はリボヌクレオチド(RNA)配列、並びに要求された活性を有するペプチドを発現させることができるこれらの核酸の誘導体及びフラグメントを含む。本発明によるペプチド又はそのフラグメントをコードする核酸は、哺乳動物を起源とするか又は哺乳動物に対応するペプチド又はそのフラグメント、もっとも具体的には、ヒトペプチドフラグメントをコードする、配列である。前記免疫原性又は寛容原性ペプチドをコードするそのような核酸は、好ましくは、単離されたデオキシリボ核酸(DNA)、プラスミドDNA(pDNA)、コーディングDNA(cDNA)、リボ核酸(RNA)、メッセンジャーRNA(mRNA)、又はこれらの改変された形態から選択される。
治療的手段について、本明細書に開示される免疫原性ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、発現系、カセット、プラスミド、又はベクター系、例えば、ウイルス及び非ウイルス発現系の一部であり得る。治療目的で知られているウイルスベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、レンチウイルス、及びレトロウイルスである。非ウイルスベクターも同様に使用することができ、非限定的な例としては、トランスポゾンに基づくベクター系、例えば、スリーピングビューティー(Sleeping Beauty)(SB)又はピギーバック(PiggyBac)(PB)に由来するものが挙げられる。核酸はまた、例えば、ナノ粒子、カチオン性脂質、リポソーム等であるがこれらに限定されない他の担体を通じて送達することができる。
「免疫障害」又は「免疫疾患」という用語は、免疫系の反応が、生物における機能不全又は非生理学的状況を担うか又はそれを持続させる、疾患である。とりわけ、アレルギー障害及び自己免疫疾患が、免疫障害に含まれる。
「自己免疫疾患」又は「自己免疫障害」という用語は、生物が自身の構成要素である部分を(分子下レベルまで下がって)「自己」として認識することができないことに起因して、生物自身の細胞及び組織に対するその生物の異常な免疫応答により生じる疾患を指す。この疾患群は、器官特異的疾患及び全身性疾患という2つのカテゴリーに分割することができる。「アレルゲン」は、素因がある、特に、遺伝的素因がある個体(アトピー性)患者においてIgE抗体の産生を誘起する物質、通常、高分子又はタンパク質組成物として定義される。同様の定義は、Liebersら、(1996) Clin. Exp. Allergy 26、494-516において提示されている。
「1型糖尿病」(T1D)又は「糖尿病1型」(「1型真性糖尿病」若しくは「免疫媒介性糖尿病」としても知られているか、又は以前は「若年性糖尿病」若しくは「インスリン依存性糖尿病」としても知られていた)という用語は、典型的に、小児期の感受性個体において発症する自己免疫障害である。ほとんどのインスリン産生膵ベータ細胞が自己免疫機序により破壊されることが、T1D発症機序の根底にある。簡単に述べると、生物は、インスリン産生を担う膵ベータ細胞に対する免疫寛容を消失し、主として細胞に媒介される、自己抗体の産生と関連する免疫応答が誘導され、これによって、ベータ細胞の自己破壊がもたらされる。「フマル酸関連疾患」という用語は、フマル酸での処置により利益が得られるすべての障害又は疾患を包含する。そのような疾患又は障害の好ましい例は、自己免疫障害、脱髄性疾患、移植片拒絶、及びがんである。そのような疾患及び障害の好ましい例は、多発性硬化症(MS)、乾癬、視神経脊髄炎(NMO)、リウマチ性関節炎(RA)、多発性関節炎、喘息、アトピー性皮膚炎、強皮症、潰瘍性大腸炎、若年性糖尿病、甲状腺炎(thyreoiditis)、グレーブス病、全身性エリテマトーデス(SLE)、シェーグレン症候群、悪性貧血、慢性活動性肝炎、移植片拒絶、及びがんである。好ましい例は、MOG自己抗原関連疾患及び障害、例えば、MS及びNMOである。
「脱髄」という用語は、本明細書において脱髄性疾患又は障害のフレームワーク内で使用される場合、ニューロンの軸索を包囲するミエリン鞘の損傷及び/又は分解を指し、これは、結果として、病変又はプラークの形成をもたらす。脱髄に起因して、罹患した神経に沿ったシグナル伝達が損なわれ、神経学的症状、例えば、感覚、運動、認知、及び/又は他の神経学的機能における欠損が生じ得る。脱髄性疾患に罹患した患者の実際の症状は、疾患及び疾患の進行状態に応じて変動するであろう。これらとしては、霧視及び/又は複視、運動失調、クローヌス、ディサースリア、疲労、巧緻運動障害、手の麻痺、片側不全麻痺、生殖器感覚消失(genital anaesthesia)、協調運動障害(incoordination)、感覚異常(paresthesias)、眼球麻痺、筋協調障害(impaired muscle coordination)、筋衰弱、感覚消失、視覚障害、神経学的症状、不安定な歩き方(歩行)、痙性対性不全麻痺(spastic paraparesis)、失禁、難聴、発話障害等を挙げることができる。脱髄性疾患は、中枢神経系脱髄性疾患及び末梢神経系に層別化され得る。代替的には、脱髄性疾患は、脱髄の原因に応じて分類され得る:ミエリンの破壊(脱髄性ミエリン破壊性)、又は異常及び変性ミエリン(ミエリン形成不全白質ジストロフィー)。MSは、当該技術分野において、中枢神経系の脱髄性障害であると考えられている(Lubetzki及びStankoff. (2014). Handb Clin Neurol. 122、89-99)。そのような脱髄性疾患及び障害の他の具体的であるが非限定的な例としては、視神経脊髄炎(NMO)、急性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー(AIDP)、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー(CIDP)、急性横断性脊髄炎、進行性多巣性白質脳症(PML)、急性散在性脳脊髄炎(ADEM)、又は他の遺伝性脱髄性障害が挙げられる。
「多発性硬化症」という用語は、本明細書及び当該技術分野において「MS」と略されるが、中枢神経系に罹患する自己免疫障害を示す。MSは、若齢成人におけるもっとも一般的な非外傷性身体障害性疾患であり(Dobson及びGiovannoni、(2019) Eur. J. Neurol. 26(1)、27-40)、中枢神経系に罹患するもっとも一般的な自己免疫障害(Berer及びKrishnamoorthy (2014) FEBS Lett. 588(22)、4207-4213)であると考えられている。MSは、身体的なものから精神的なもの、精神医学的な問題までの範囲に及ぶ多数の異なる症状によって対象に現れ得る。典型的な症状としては、霧視又は複視、筋衰弱、片目の視力消失、並びに協調運動及び感覚の困難が挙げられる。ほとんどの症例において、MSは、二段階性の疾患であると考えられており、初期の炎症が、疾患の再発-寛解をもたらし、遅発する神経変性が、非再発性進行、すなわち、二次及び一次進行性MSを引き起こす。この分野において進歩がなされているが、この疾患の決定的な根本的原因はこれまでわかっておらず、150を上回る単一ヌクレオチド多型が、MS感受性と関連付けられている(International Multiple Sclerosis Genetics Consortium Nat Genet. (2013). 45(11):1353-60)。ビタミンD欠乏、喫煙、紫外線B (UVB)曝露、小児肥満、及びエプスタイン・バーウイルスによる感染が、疾患の発症に寄与することが報告されている(Ascherio (2013) Expert Rev Neurother. 13(12 Suppl)、3-9)。
したがって、MSは、再発性(炎症が主要な特徴である)から進行性(神経変性が主要)に及ぶ範囲内に存在する単一の疾患とみなすことができる。したがって、本明細書において使用される多発性硬化症という用語は、疾患過程分類の任意の種類に属する任意のタイプの多発性硬化症を包含する。具体的には、本発明は、臨床的孤立症候群(CIS)、再発寛解性MS(RRMS)、二次進行性MS(SPMS)、一次進行性MS(PPMS)、及び更にはMSが疑われる放射線学的孤立症候群(RIS)と診断されたか、又はその疑いのある患者に対する強力な治療戦略となることが想定される。厳密にはMSの疾患過程とは考えられないが、RISは、脳及び/又は脊髄の磁気共鳴イメージング(MRI)で、MS病変部に対応し、他の診断によって明白に説明できない異常を示す対象を分類するために使用される。CISは、中枢神経系における炎症及び脱髄によって引き起こされる神経学的症状の最初のエピソード(24時間超にわたって持続すると定義される)である。RISによると、CISに分類された対象は、MSの発症が継続される場合もされない場合もあり、脳MRIでMS様病変を示している対象は、MSを発症する可能性がより高い。RRMSは、MSのもっとも一般的な疾患過程であり、MSを有する対象のうち85%が、RRMSと診断されている。RRMSと診断された患者は、本発明の観点で、好ましい患者群である。RRMSは、新しいか又は増加する神経学的症状の発作、換言すると再発又は増悪によって特徴付けられる。RRMSにおいて、前記再発には、症状の部分的若しくは完全な寛解の期間が続き、これらの寛解期間中には、疾患の進行は経験及び/又は観察されない。RRMSは、更に、活動性RRMS(再発及び/若しくは新しいMRI活動の根拠)、非活動性RRMS、RRMSの悪化(再発後の指定された期間にわたる身体障害の悪化)、又はRRMSの悪化なしとして分類される。RRMSと診断された対象の一部分は、SPMS疾患過程へと進行し、これは、神経学的機能の進行的な悪化、すなわち、経時的な身体障害の蓄積によって特徴付けられる。活動性(再発及び/若しくは新しいMRI活動)、非活動性、進行性(経時的な疾患の悪化)、又は非進行性SPMSといった、SPMSの下位分類を作製することができる。最終的に、PPMSは、初期の再発又は寛解がなく、神経学的機能の悪化、及びしたがって症状の発症以来の身体障害の蓄積によって特徴付けられる、MS疾患過程である。活動性PPMS(時折の再発及び/新しいMRI活動)、非活動性PPMS、進行性PPMS(新しいMRI活動に関係なく、経時的な疾患の悪化の根拠がある)、及び非進行性PPMSといった更なるPPMS下位群を形成してもよい。一般に、MS疾患過程は、再発及び寛解の期間の観点で、重症度(再発の場合)及び持続期間の両方に関して、実質的な対象間での変動性によって特徴付けられる。
いくつかの疾患を改変する治療法が、MSに利用可能であり、したがって、本発明は、代替的な処置戦略として、又はこれらの既存の治療法と組み合わせて、使用することができる。活性医薬成分の非限定的な例としては、インターフェロンベータ-1a、インターフェロンベータ-1b、グラチラマー酢酸塩、グラチラマー酢酸塩、ペグインターフェロンベータ-1a、テリフルノミド、フィンゴリモド、クラドリビン、シポニモド、フマル酸ジメチル、フマル酸ジロキシメル、オザニモド、アレムツズマブ、ミトキサントロン、オクレリズマブ、及びナタリズマブが挙げられる。代替的には、本発明は、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、及び副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)等であるがこれらに限定されない、再発の管理を目的とする処置又は医薬と組み合わせて使用され得る。更に、本発明は、特定の症状の緩和を目的とする治療法と組み合わせて使用されてもよい。非限定的な例としては、膀胱の問題、消化管機能障害、鬱、めまい、空間識失調、感情変化、疲労、掻痒、疼痛、性的問題、痙縮、振戦、及び歩行困難からなる群から選択される症状を改善又は回避することを目的とする医薬が挙げられる。
MSは、1)中枢神経系における病変の形成、2)炎症、及び3)ニューロンのミエリン鞘の分解という3つの絡み合った顕著な特徴によって特徴付けられる。従来的には、中枢神経系及び白質の脱髄性疾患と考えられていたが、より最近の報告では、皮質及び深部の灰白質の脱髄が、白質の脱髄を上回り得ることがわかってきた(Kutzelniggら、(2005). Brain. 128(11)、2705-2712)。2つの主要な仮説は、MSが分子レベルでどのようにして生じるかに関して仮定している。一般的に許容されている「外から内への仮説」は、中枢神経系へと遊走し、疾患プロセスを開始する末梢自己反応性エフェクターCD4+ T細胞の活性化に基づく。中枢神経系に入ると、前記T細胞は、APCによって局所的に再活性化され、更なるT細胞及びマクロファージを動員して、炎症性病変を構築する。注目すべきことに、MS病変は、病変の縁部に主として見出されるCD8+ T細胞及び病変のより中心部で見出されるCD4+ T細胞を含むことが示されている。これらの細胞は、脱髄、オリゴデンドロサイト破壊、及び軸索損傷を引き起こし、神経学的機能不全をもたらすと考えられている。加えて、免疫調節性ネットワークが、炎症を制限し、修復を開始するようにトリガーされ、それによって、臨床寛解によって反映される少なくとも部分的なミエリン再形成が生じる。いずれにせよ、適切な処置なしには、更なる発作により疾患進行がもたらされることが多い。
MSの発症は、患者のMRIにおける明らかな古く不活性な病変の発生が典型的であることからわかるように、最初の臨床症状が検出されるよりもはるかに前に起こると考えられている。診断方法の開発が進んだことにより、MSは、現在では、疾患の臨床症状が出るよりも更に前に検出することができる(すなわち、前症候性MS)。本発明の文脈において、「MSの処置」及び類似の表現は、症候性及び前症候性の両方のMSの処置及びそのための処置戦略を想定する。具体的には、免疫原性ペプチド及び/又は結果として得られる細胞溶解性CD4+ T細胞が、前症候性MS患者を処置するために使用される場合、疾患は、臨床症状が部分的又は更には完全に回避され得るような早期段階で停止される。対象がインターフェロンベータに完全に応答性ではないMSもまた、「MS」という用語に包含される。
「視神経脊髄炎」又は「NMO」及び「NMOスペクトル障害(NMOSD)」という用語は、「デビック病」としても知られており、白血球及び抗体が、主として視神経及び脊髄を攻撃するが、脳も攻撃し得る、自己免疫障害を指す(Wingerchuk 2006、Int MS J. 2006 May;13(2):42-50において考察されている)。視神経の損傷により、疼痛及び視力消失を引き起こす腫脹及び炎症が生じ、脊髄の損傷により、脚又は腕の衰弱又は麻痺、感覚消失、並びに膀胱及び消化管機能の問題が引き起こされる。NMOは、再発寛解性疾患である。再発期において、視神経及び/又は脊髄への新たな損傷により、身体障害の蓄積がもたらされ得る。MSとは異なり、この疾患の進行期はない。したがって、発作を予防することが、良好な長期予後に極めて重要である。抗MOG抗体と関連する症例では、抗MOG抗体が、ミエリン鞘への攻撃をトリガーし、脱髄を引き起こし得ると考えられている。症例の大半において、NMOの原因は、自己抗原に対する特異的な攻撃に起因する。対象の3分の1までもが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)と称されるミエリンの成分に対する自己抗体に関して陽性であり得る。抗MOG関連NMOを有する人物も、同様に、横断性脊髄炎及び視神経炎のエピソードを有する。本出願のフレームワーク内では、MOG自己抗原によって誘導される、及び/又は抗MOG抗体によって引き起こされる、NMOが、特に想定される。
「リウマチ性関節炎」又は「RA」という用語は、様々な関節(もっとも一般的には、手、手首、及び膝)における疼痛、腫脹、こわばり、及び機能消失を引き起こす、自己免疫性炎症性疾患である。それぞれの関節の滑膜が、炎症した状態となり、組織損傷、並びに慢性疼痛、不安定(unsteadiness)、及び変形を引き起こす。一般に、両側性/対称性の疾患進行パターンがある(例えば、両手又は両膝に罹患する)。RAはまた、眼、口、肺、及び心臓を含む、関節外部位に罹患することがある。患者は、症状の急性悪化(フレアと称される)を経験し得るが、早期介入及び適切な処置により、症状は、ある特定の期間、緩和され得る(Sana Iqbalら、2019、US Pharm. 2019;44(1)(Specialty&Oncology suppl):8-11によって考察されている)。免疫系によって攻撃されるこの疾患に関与する抗原は、多様であるが、いくつかの例としては、GRP78、HSP60、60kDaシャペロニン2、ゲルゾリン、キチナーゼ-3様タンパク質1、カテプシンS、血清アルブミン、及びカテプシンDがある。
「乾癬」という用語は、強力な遺伝的素因及び自己免疫病原特徴を有する慢性炎症性皮膚疾患を指す。世界的な有病率は、約2%であるが、地域によって変動する。アジア人及び一部のアフリカ人集団では低い有病率を示し、白人種及びスカンジナビア人集団においては最大11%である。乾癬の皮膚科学的症状は、多様であり、尋常性乾癬は、プラーク型乾癬とも呼ばれ、もっとも有病率の高い型である。乾癬及び尋常性乾癬という用語は、科学文献において互換可能に使用されているが、いずれにせよ、異なる臨床サブタイプ間には重要な違いがある。尋常性乾癬(乾癬の症例のうちの約90%)は、慢性プラーク型乾癬である。古典的な臨床症状は、境界のはっきりした、紅斑状の、銀色の鱗屑で覆われたそう痒性プラークである。プラークは合体し、皮膚の広い範囲を覆うことがある。一般的な位置としては、体幹、四肢の伸側面、及び頭皮が挙げられる。他の種類としては、屈曲性乾癬とも呼ばれ、間擦部に罹患し、わずかにびらん性の紅斑状のプラーク及びパッチによって臨床的に特徴付けられる逆性乾癬、並びに小さな紅斑状のプラークの急性発症を伴うバリアントである滴状乾癬がある。これは、通常、小児期又は青年期に罹患し、扁桃腺のA群連鎖球菌感染によってトリガーされることが多い。滴状乾癬を有する患者の約3分の1は、成人期にプラーク型乾癬を発症する;膿疱性乾癬は、多数の合体性無菌性膿疱を特徴とする。膿疱性乾癬は、限局型又は汎発型であり得る。2つの異なる局在化された表現型が説明されている:乾癬性掌蹠膿疱症(PPP)及びアロポー稽留性肢端皮膚炎(acrodermatitis continua of Hallopeau)。これらのいずれも、手足に罹患し、PPPは、手のひら及び足の裏に限局され、ACSは、より遠位に手指及び足指の先端に位置し、爪部分に罹患する。汎発型膿疱性乾癬は、びまん性発赤及び角膜下膿疱によって特徴付けられる急性及び急速に進行する経過を示し、全身症状を伴うことが多い。乾癬の特徴は、制御不能なケラチノサイト増殖及び機能不全の分化をもたらす、持続的な炎症である。乾癬性プラークの組織学は、真皮の樹状細胞、マクロファージ、T細胞、及び好中球から構成される炎症性浸潤の上にある有棘細胞肥厚(表皮過形成)を示す。血管新生もまた、顕著な特徴である。プラーク型乾癬及び臨床バリアントの残りにおいて活性な炎症性経路は、オーバーラップするが、異なる表現型及び処置結果を説明するはっきりとした違いも示す。(Rendon及びSchakel、Int J Mol Sci. 2019 Mar; 20(6): 1475によって考察されている)。
「天然の」という用語は、ペプチドに言及する場合、配列が、天然に存在するタンパク質(野生型又は突然変異体)のフラグメントと同一であるという事実に関する。それとは対照的に、「人工」という用語は、天然に存在しない配列を指す。人工配列は、天然に存在する配列内の1つ若しくは複数のアミノ酸の変更/欠失/挿入等の限定された改変によって、又は天然に存在する配列のN若しくはC末端のアミノ酸の付加/除去によって、天然の配列から得られる。本明細書に記載される免疫原性又は寛容原性ペプチドのエピトープが設計される抗原の選択は、フマル酸関連疾患に依存するであろう。
「治療有効量」という用語は、患者において所望される治療又は予防作用をもたらす、本発明のペプチド又はその誘導体の量を指す。例えば、疾患又は障害に関連して、これは、疾患又は障害の1つ又は複数の症状をある程度低減させ、より具体的には、部分的又は完全にのいずれかで、疾患又は障害と関連するか又はその原因である生理学的又は生化学的パラメーターを正常に戻す、量である。典型的には、治療有効量は、正常な生理学的状況の改善又は回復をもたらすであろう、本発明のペプチド又はその誘導体の量である。例えば、免疫障害に罹患した哺乳動物を治療的に処置するために使用される場合、それは、1日量のペプチド/前記哺乳動物の体重kgである。代替的には、投与が、遺伝子療法を通じたものである場合、ネイキッド型DNA又はウイルスベクターの量は、本発明のペプチド、その誘導体、又はホモログの関連投薬量の局所産生を確実するにするように調節される。
「天然の」という用語は、ペプチドに言及する場合、配列が、天然に存在するタンパク質(野生型又は突然変異体)のフラグメントと同一であるという事実に関する。それとは対照的に、「人工」という用語は、天然に存在しない配列を指す。人工配列は、天然に存在する配列内の1つ若しくは複数のアミノ酸の変更/欠失/挿入等の限定された改変によって、又は天然に存在する配列のN若しくはC末端のアミノ酸の付加/除去によって、天然の配列から得られる。
アミノ酸は、本明細書において、それらの完全な名称、それらの三文字の略語、又はそれらの一文字の略語で言及される。
アミノ酸配列のモチーフは、Prositeの形式に従って、本明細書では記述される。モチーフは、配列の特定の部分におけるある特定の配列変動性を説明するために使用される。Xという符号は、任意のアミノ酸が許容される位置に使用される。選択肢は、所与の位置に関して許容されるアミノ酸を角括弧(「[]」)間に列挙することによって示される。例えば、[CST]は、Cys、Ser、又はThrから選択されるアミノ酸を示す。選択肢として除外されるアミノ酸は、波括弧(「{ }」)間に列挙することによって示される。例えば、{AM}は、Ala及びMetを除く任意のアミノ酸を示す。モチーフ内の異なるエレメントは、任意選択で、ハイフン(-)によって互いに分離される。モチーフ内の同一なエレメントの反復は、そのエレメントの後ろに、括弧に入れた数値又は数値範囲を置くことによって示すことができる。例えば、X(2)は、X-X又はXXに対応し、X(2, 5)は、2、3、4、又は5個のXアミノ酸に対応し、A(3)は、A-A-A又はAAAに対応する。
アミノ酸X間で区別を行うために、HとCとの間にあるものは、外部アミノ酸Xと称され(上記の配列内で一本の下線で示される)、レドックスモチーフ内のものは、内部アミノ酸Xと称される(上記の配列内で二重下線で示される)。
Xは、任意のアミノ酸、具体的には、L-アミノ酸、より具体的には、20個の天然に存在するL-アミノ酸のうちの1つを表す。
T細胞エピトープ及び還元活性を有する改変されたペプチドモチーフ配列を含むペプチドは、それぞれ、抗原提示細胞に対する抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞の集団を生成することができる。
したがって、そのもっとも広い意味で、本発明は、免疫反応をトリガーする能力を有する抗原(自己又は非自己)の少なくとも1つのT細胞エピトープと、ペプチドジスルフィド結合に対する還元活性を有する「オキシドレダクターゼ」、「チオレダクターゼ」、「チオレドックス」、又は「レドックス」(すべての用語は本明細書において互換可能に使用され得る)配列モチーフとを含む、ペプチドの使用に関する。MHCクラスII T細胞エピトープ及び改変されたレドックスモチーフ配列は、ペプチドにおいて互いにすぐに隣接していてもよく、又は任意選択で、1つ若しくは複数のアミノ酸(いわゆるリンカー配列)によって分離していてもよい。任意選択で、ペプチドは、更に、エンドソーム標的化配列及び/又は追加の「フランキング」配列を含む。
本明細書に開示されるペプチドは、免疫反応をトリガーする能力を有するインスリン抗原のMHCクラスII T細胞エピトープ、及び改変されたレドックスモチーフを含む。ペプチドにおけるモチーフ配列の還元活性は、スルフヒドリル基を還元するその能力について、例えば、インスリンの可溶性が還元時に変更されるインスリン可溶性アッセイにおいて、又は蛍光標識化されたインスリン等の基質を用いて、アッセイすることができる。そのようなアッセイの例は、蛍光性ペプチドを使用しており、Tomazzolliら、(2006) Anal. Biochem. 350、105-112に記載されている。FITC標識を有する2つのペプチドは、それらが、ジスルフィド架橋によって互いに共有結合的に結合されると、自己消光性となる。本発明によるペプチドによって還元されると、還元された個々のペプチドは、再度蛍光性となる。
(改変された)レドックスモチーフは、T細胞エピトープのアミノ末端側又はT細胞エピトープのカルボキシ末端側に位置し得る。
還元活性を有するペプチドフラグメントは、グルタレドキシン、ヌクレオレドキシン、チオレドキシン、及び他のチオール/ジスルフィドオキシドレダクターゼを含む、小さなジスルフィド還元酵素であるチオレダクターゼにおいて見出される(Holmgren (2000) Antioxid. Redox Signal. 2、811-820、Jacquotら、(2002) Biochem. Pharm. 64、1065-1069)。それらは、多機能性であり、遍在性であり、多数の原核生物及び真核生物において見出される。それらは、保存された活性ドメインコンセンサス配列内のレドックス活性システインを通じて、タンパク質(例えば、酵素)上のジスルフィド結合に対する還元活性を発揮する: CXXC[配列番号18]、CXXS[配列番号23]、CXXT[配列番号24]、SXXC[配列番号21]、TXXC[配列番号22](Fomenkoら(2003) Biochemistry 42、11214-11225、Fomenkoら、(2002) Prot. Science 11、2285-2296)(Xは、任意のアミノ酸を表す)。そのようなドメインは、より大きなタンパク質、例えば、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ(PDI)及びホスホイノシチド特異的ホスホリパーゼCにおいても見出される。
例えば、Fomenko及び国際公開第2008/017517号から公知の4つのアミノ酸のレドックスモチーフは、1位及び/又は4位にシステインを含み、したがって、モチーフは、CXX[CST][配列番号1]又は[CST]XXC[配列番号2]のいずれかである。そのようなテトラペプチド配列は、「モチーフ」と称されるであろう。ペプチドにおけるモチーフは、選択肢CXXC[配列番号137]、SXXC[配列番号138]、TXXC[配列番号139]、CXXS[配列番号140]、又はCXXT[配列番号141]のうちのいずれかであり得る。具体的には、ペプチドは、配列モチーフCXXC[配列番号137]を含む。
更に詳細に説明されるように、本発明において使用されるペプチドは、非天然のアミノ酸の組込みを可能にする化学合成によって作製することができる。したがって、上記に引用されるレドックス改変されたレドックスモチーフにおける「C」は、システイン、又はチオール基を有する別のアミノ酸、例えば、メルカプトバリン、ホモシステイン、又はチオール官能基を有する他の天然若しくは非天然のアミノ酸のいずれかを表す。還元活性を有するために、改変されたレドックスモチーフに存在するシステインは、シスチンジスルフィド架橋の一部として存在しないものとする。いずれにせよ、レドックス改変されたレドックスモチーフは、改変されたシステイン、例えば、メチル化システインを含み得、これは、インビボで遊離チオール基を有するシステインに変換される。Xは、S、C、若しくはTを含む20種の天然のアミノ酸のうちのいずれかであり得るか、又は非天然のアミノ酸であってもよい。具体的な実施形態において、Xは、小さな側鎖を有するアミノ酸、例えば、Gly、Ala、Ser、又はThrである。更に具体的な実施形態において、Xは、かさ高い側鎖を有するアミノ酸、例えば、Trpではない。更に具体的な実施形態において、Xは、システインではない。更に具体的な実施形態において、改変されたレドックスモチーフにおける少なくとも1つのXは、Hisである。他の更に具体的な実施形態において、改変されたレドックスにおける少なくとも1つのXは、Proである。
ペプチドは、更に、安定性又は可溶性を増加させる改変、例えば、N末端NH2基又はC末端COOH基の改変(例えば、COOHからCONH2基への改変)を含み得る。
「オキシドレダクターゼモチーフ」、「チオールオキシドレダクターゼモチーフ」、「チオレダクターゼモチーフ」、「チオレドックスモチーフ」、又は「レドックスモチーフ」という用語は、本明細書において同義の用語として使用され、1つの分子(還元剤、水素又は電子ドナーとも称される)から別のもの(酸化剤、水素又は電子アクセプターとも称される)への電子の移動に関与するモチーフを指す。
本明細書に定義される免疫原性ペプチドは、以下の一般アミノ酸配列のオキシドレダクターゼモチーフを含む:態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-(配列番号12～36)又はZm-C-Xn-[CST]-(配列番号37～61)は、以下のアミノ酸モチーフから選択される:
(a)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、0であり、
mは、0～3から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
モチーフ(a)の好ましい実施形態において、mは、1若しくは2であり、Zは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
そのようなモチーフの特に好ましいが非限定的な例は、CC、KCC、KKCC(配列番号142)、RCC、RKCC(配列番号143)、KRCC(配列番号144)、若しくはRRCC(配列番号145)である。)
(b)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、1であり、
Xは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
mは、0～3から選択される整数であり、
Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
モチーフ(b)の好ましい実施形態において、mは、1若しくは2であり、Zは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
そのようなモチーフの特に好ましいが非限定的な例は、CRC、CKC、KCXC(配列番号146)、KKCXC(配列番号147)、RCXC(配列番号148)、RRCXC(配列番号149)、RKCXC(配列番号150)、KRCXC(配列番号151)、KCKC(配列番号152)、KKCKC(配列番号153)、KCRC(配列番号154)、KKCRC(配列番号155)、RCRC(配列番号156)、RRCRC(配列番号157)、RKCKC(配列番号158)、又はKRCKC(配列番号159)である。)
(c)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、2であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2アミノ酸連結が作製され、mは、0～3から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。mが1若しくは2であるモチーフが、好ましい。
好ましい実施形態において、mは、1であり、Zは、H、K、若しくはR、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。
好ましい実施形態において、X1及びX2は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、若しくは非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1及びX2は、C、S、若しくはTを除く任意のアミノ酸である。特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1若しくはX2のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸である。別の特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1若しくはX2のうちの少なくとも1つは、P若しくはYである。オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2アミノ酸連結の具体的な例は、PY、HY、KY、RY、PH、PK、PR、HG、KG、RG、HH、HK、HR、GP、HP、KP、RP、GH、GK、GR、GH、KH、及びRHである。
このタイプの特に好ましいモチーフは、HCPYC、KCPYC、RCPYC、HCGHC、KCGHC、及びRCGHC(配列番号160～165に対応する)である。)
(d)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、3であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0～3から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。mが1若しくは2であるモチーフが、好ましい。)
いくつかの実施形態において、X1、X2、及びX3は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1、X2、及びX3は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1、X2、又はX3のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、又は本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸である。
オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3アミノ酸ストレッチの具体的な例は、XPY、PXY、及びPYXであり、式中、Xは、任意のアミノ酸、好ましくは、塩基性アミノ酸、例えば、K、R、若しくはH、又は非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンであり得る。
非限定的な例は、以下である:
KPY、RPY、HPY、GPY、APY、VPY、LPY、IPY、MPY、FPY、WPY、PPY、SPY、TPY、CPY、YPY、NPY、QPY、DPY、EPY、及びKPY、若しくは
PKY、PRY、PHY、PGY、PAY、PVY、PLY、PIY、PMY、PFY、PWY、PPY、PSY、PTY、PCY、PYY、PNY、PQY、PDY、PEY、及びPLY、若しくは
PYK、PYR、PYH、PYG、PYA、PYV、PYL、PYI、PYM、PYF、PYW、PYP、PYS、PYT、PYC、PYY、PYN、PYQ、PYD、PYE、及びPYL;
XHG、HXG、及びHGX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KHG、RHG、HHG、GHG、AHG、VHG、LHG、IHG、MHG、FHG、WHG、PHG、SHG、THG、CHG、YHG、NHG、QHG、DHG、EHG、及びKHG、若しくは
HKG、HRG、HHG、HGG、HAG、HVG、HLG、HIG、HMG、HFG、HWG、HPG、HSG、HTG、HCG、HYG、HNG、HQG、HDG、HEG、及びHLG、若しくは
HGK、HGR、HGH、HGG、HGA、HGV、HGL、HGI、HGM、HGF、HGW、HGP、HGS、HGT、HGC、HGY、HGN、HGQ、HGD、HGE、及びHGLである);
XGP、GXP、及びGPX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KGP、RGP、HGP、GGP、AGP、VGP、LGP、IGP、MGP、FGP、WGP、PGP、SGP、TGP、CGP、YGP、NGP、QGP、DGP、EGP、及びKGP、若しくは
GKP、GRP、GHP、GGP、GAP、GVP、GLP、GIP、GMP、GFP、GWP、GPP、GSP、GTP、GCP、GYP、GNP、GQP、GDP、GEP、及びGLP、若しくは
GPK、GPR、GPH、GPG、GPA、GPV、GPL、GPI、GPM、GPF、GPW、GPP、GPS、GPT、GPC、GPY、GPN、GPQ、GPD、GPE、及びGPLである)、
XGH、GXH、及びGHX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KGH、RGH、HGH、GGH、AGH、VGH、LGH、IGH、MGH、FGH、WGH、PGH、SGH、TGH、CGH、YGH、NGH、QGH、DGH、EGH、及びKGH、若しくは
GKH、GRH、GHH、GGH、GAH、GVH、GLH、GIH、GMH、GFH、GWH、GPH、GSH、GTH、GCH、GYH、GNH、GQH、GDH、GEH、及びGLH、若しくは
GHK、GHR、GHH、GHG、GHA、GHV、GHL、GHI、GHM、GHF、GHW、GHP、GHS、GHT、GHC、GHY、GHN、GHQ、GHD、GHE、及びGHLである);
XGF、GXF、及びGFX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KGF、RGF、HGF、GGF、AGF、VGF、LGF、IGF、MGF、FGF、WGF、PGF、SGF、TGF、CGF、YGF、NGF、QGF、DGF、EGF、及びKGF、若しくは
GKF、GRF、GHF、GGF、GAF、GVF、GLF、GIF、GMF、GFF、GWF、GPF、GSF、GTF、GCF、GYF、GNF、GQF、GDF、GEF、及びGLF、若しくは
GFK、GFR、GFH、GFG、GFA、GFV、GFL、GFI、GFM、GFF、GFW、GFP、GFS、GFT、GFC、GFY、GFN、GFQ、GFD、GFE、及びGFLである);
XRL、RXL、及びRLX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KRL、RRL、HRL、GRL、ARL、VRL、LRL、IRL、MRL、FRL、WRL、PRL、SRL、TRL、CRL、YRL、NRL、QRLRL、DRL、ERL、及びKRL、若しくは
GKF、GRF、GHF、GGF、GAF、GVF、GLF、GIF、GMF、GFF、GWF、GPF、GSF、GTF、GCF、GYF、GNF、GQF、GDF、GEF、及びGLF、若しくは
RLK、RLR、RLH、RLG、RLA、RLV、RLL、RLI、RLM、RLF、RLW、RLP、RLS、RLT、RLC、RLY、RLN、RLQ、RLD、RLE、及びRLLである);
XHP、HXP、及びHPX(ここで、Xは、任意のアミノ酸、例えば、
KHP、RHP、HHP、GHP、AHP、VHP、LHP、IHP、MHP、FHP、WHP、PHP、SHP、THP、CHP、YHP、NHP、QHP、DHP、EHP、及びKHP、若しくは
HKP、HRP、HHP、HGP、HAF、HVF、HLF、HIF、HMF、HFF、HWF、HPF、HSF、HTF、HCF、HYP、HNF、HQF、HDF、HEF、及びHLP、若しくは
HPK、HPR、HPH、HPG、HPA、HPV、HPL、HPI、HPM、HPF、HPW、HPP、HPS、HPT、HPC、HPY、HPN、HPQ、HPD、HPE、及びHPLである)。
特に好ましい例は、CRPYC、KCRPYC、KHCRPYC、RCRPYC、HCRPYC、CPRYC、KCPRYC、RCPRYC、HCPRYC、CPYRC、KCPYRC、RCPYRC、HCPYRC、CKPYC、KCKPYC、RCKPYC、HCKPYC、CPKYC、KCPKYC、RCPKYC、HCPKYC、CPYKC、KCPYKC、RCPYKC、及びHCPYKC(配列番号166～190に対応する)である。)
(e)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、4であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4(配列番号64)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0～3から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。mが1若しくは2であるモチーフが、好ましい。X1、X2、X3、及びX4は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は本明細書に定義される非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、及びX4は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、若しくはX4のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸から選択される、塩基性アミノ酸である。
特定の例は、LAVL(配列番号191)、TVQA(配列番号192)、若しくはGAVH(配列番号193)、及びそれらのバリアント、例えば、X1AVL、LX2VL、LAX3L、若しくはLAVX4;X1VQA、TX2QA、TVX3A、若しくはTVQX4;X1AVH、GX2VH、GAX3H、若しくはGAVX4(配列番号194～205に対応する)であり、ここで、X1、X2、X3、及びX4は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸であり得る)。
(f)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、5であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4X5(配列番号65)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0～3から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。mが1若しくは2であるモチーフが、好ましい。X1、X2、X3、X4、及びX5は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、X4、及びX5は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、X4、若しくはX5のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸から選択される、塩基性アミノ酸である。
特定の例は、PAFPL(配列番号123)若しくはDQGGE(配列番号124)、及びそれらのバリアント、例えば、X1AFPL、PX2FPL、PAX3PL、PAFX4L、若しくはPAFPX5;X1QGGE、DX2GGE、DQX3GE、DQGX4E、若しくはDQGGX5(配列番号208～217に対応する)であり、ここで、X1、X2、X3、X4、及びX5は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、若しくは本明細書に定義される非天然のアミノ酸であり得る。)
(g)態様2に定義されるZm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、6であり、それによって、オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2X3X4X5X6(配列番号66)アミノ酸ストレッチが作製され、mは、0～3から選択される整数であり、Zは、任意のアミノ酸、好ましくは、H、K、R、及び本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸であり、好ましくは、K若しくはRであり、もっとも好ましくは、Kである。mが1若しくは2であるモチーフが、好ましい。X1、X2、X3、X4、X5、及びX6は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、X4、X5、及びX6は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。
特定の実施形態において、前記モチーフにおけるX1、X2、X3、X4、X5、若しくはX6のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくはR、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸から選択される、塩基性アミノ酸である。
特定の例は、DIADKY(配列番号218)若しくはそのバリアント、例えば、X1IADKY、DX2ADKY、DIX3DKY、DIAX4KY、DIADX5Y、若しくはDIADKX6(配列番号219～224に対応する)であり、ここで、X1、X2、X3、X4、X5、及びX6は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、若しくは本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸であり得る。)
(h)Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-(式中、nは、0～6であり、mは、0であり、C若しくは[CST]残基のうちの1つは、モチーフのアミノ酸残基のN末端アミド若しくはC末端カルボキシ基のいずれかにアセチル、メチル、エチル、若しくはプロピオニル基を有するように改変されている(配列番号144～163)。)
そのようなモチーフの好ましい実施形態において、nは、2であり、mは、0であり、ここで、内部X1X2は、それぞれ個別に、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、及びHからなる群から選択される任意のアミノ酸、又は非天然のアミノ酸であり得る。好ましくは、前記モチーフにおけるX1及びX2は、C、S、又はTを除く任意のアミノ酸である。更なる例において、前記モチーフにおけるX1又はX2のうちの少なくとも1つは、H、K、若しくは、又は本明細書に定義される非天然の塩基性アミノ酸、例えば、L-オルニチンから選択される、塩基性アミノ酸である。モチーフの別の例において、前記モチーフにおけるX1又はX2のうちの少なくとも1つは、P又はYである。オキシドレダクターゼモチーフ内の内部X1X2アミノ酸連結の具体的な非限定的な例は、PY、HY、KY、RY、PH、PK、PR、HG、KG、RG、HH、HK、HR、GP、HP、KP、RP、GH、GK、GR、GH、KH、及びRHである。好ましくは、前記改変は、モチーフの最初のシステインのN末端アセチル化をもたらす(N-アセチル-システイン)。
「塩基性アミノ酸」という用語は、ブレンステッド・ローリー及びルイス塩基のように作用する任意のアミノ酸を指し、これには、天然の塩基性アミノ酸、例えば、アルギニン(R)、リジン(K)、若しくはヒスチジン(H)、又は
・ Fmoc-β-Lys(Boc)-OH(CAS番号219967-68-7)、L-オルニチン若しくはオルニチンと称されるFmoc-Orn(Boc)-OH(CAS番号109425-55-0)、Fmoc-β-Homolys(Boc)-OH(CAS番号203854-47-1)、Fmoc-Dap(Boc)-OH(CAS番号162558-25-0)、又はFmoc-Lys(Boc)OH(DiMe)-OH(CAS番号441020-33-3)等のリジンバリアント、
・ Fmoc-L-3Pal-OH(CAS番号175453-07-3)、Fmoc-β-HomoPhe(CN)-OH(CAS番号270065-87-7)、Fmoc-L-β-HomoAla(4-ピリジル)-OH(CAS番号270065-69-5)、又はFmoc-L-Phe(4-NHBoc)-OH(CAS番号174132-31-1)等のチロシン/フェニルアラニンバリアント、
・ Fmoc-Pro(4-NHBoc)-OH(CAS番号221352-74-5)又はFmoc-Hyp(tBu)-OH(CAS番号122996-47-8)等のプロリンバリアント、
・ Fmoc-β-Homoarg(Pmc)-OH(CAS番号700377-76-0)等のアルギニンバリアント
等であるがこれらに限定されない非天然の塩基性アミノ酸が、含まれる。
オキシドレダクターゼモチーフは、本発明のペプチド内のエピトープ配列にすぐに隣接して配置されるか、又はリンカーによってT若しくはNKT細胞エピトープから分離されているかのいずれかである。より具体的には、リンカーは、0～7個のアミノ酸、すなわち、0個、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、又は10個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。より具体的には、リンカーは、0～4個のアミノ酸、すなわち、0個、1個、2個、3個、又は4個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。代替的には、リンカーは、5個、6個、7個、8個、9個、又は10個のアミノ酸を含み得る。
ペプチドリンカーとは別に、他の有機化合物を、ペプチドの部分を互いに(例えば、オキシドレダクターゼモチーフ配列をT又はNKT細胞エピトープ配列に)連結させるためのリンカーとして使用することができる。
本発明のペプチドは、T又はNKT細胞エピトープ及びオキシドレダクターゼモチーフを含む(人工)配列のN末端側又はC末端側に、追加の短いアミノ酸配列を更に含み得る。そのようなアミノ酸配列は、一般に、本明細書において「フランキング配列」と称される。フランキング配列は、エピトープとエンドソーム標的化配列との間、及び/又はオキシドレダクターゼモチーフとエンドソーム標的化配列との間に位置付けられ得る。エンドソーム標的化配列を含まない更なる実施形態において、短いアミノ酸配列が、ペプチドにおけるオキシドレダクターゼモチーフ及び/又はエピトープ配列のN末端側及び/又はC末端側に存在してもよい。より具体的には、フランキング配列は、1～7個のアミノ酸の配列、もっとも具体的には、2個のアミノ酸の配列である。
本明細書におけるモチーフの実施形態のいずれか1つにおいて、mが0である場合、及びN末端オキシドレダクターゼモチーフの場合(オキシドレダクターゼモチーフが、免疫原性ペプチドのN末端側の最初に位置する)、モチーフの第1のシステイン、スレオニン、又はセリンは、N-アセチル化、N-メチル化、N-エチル化、又はN-プロピオニル化によって化学的に改変されていてもよい。
本明細書におけるモチーフの実施形態のいずれか1つにおいて、mが0である場合、及びC末端オキシドレダクターゼモチーフの場合(オキシドレダクターゼモチーフが、免疫原性ペプチドのC末端に位置する)、モチーフの最後のシステイン、スレオニン、又はセリンは、そのC末端アミド基又は酸性基のアセチル、メチル、エチル、又はプロピオニル基によるC末端置換によって化学的に改変されていてもよい。
レドックスモチーフを含む本発明において使用されるペプチドにおいて、モチーフは、エピトープがMHC溝に適合したときに、モチーフがMHC結合溝の外側にとどまるように位置付けられる。改変されたレドックスモチーフは、ペプチド内でエピトープ配列にすぐに隣接している[換言すると、モチーフとエピトープとの間にゼロ個のアミノ酸のリンカー配列がある]か、又は7個以下のアミノ酸のアミノ酸配列を含むリンカーによってT細胞エピトープから分離されているかのいずれかで配置される。より具体的には、リンカーは、1個、2個、3個、4個、5個、6個、又は7個のアミノ酸を含む。特定の実施形態は、エピトープ配列と改変されたレドックスモチーフ配列との間に0個、1個、2個、3個、又は4個のアミノ酸のリンカーを有するペプチドである。好ましくは、リンカーは、4個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。改変されたレドックスモチーフ配列が、エピトープ配列に隣接するペプチドにおいて、これは、エピトープ配列と比較して、P-4からP-1位、又はP+1からP+4位として示される。ペプチドリンカーとは別に、他の有機化合物を、ペプチドの部分を互いに(例えば、改変されたレドックスモチーフ配列をT細胞エピトープ配列に)連結させるためのリンカーとして使用することができる。
本発明において使用されるペプチドは、T細胞エピトープ及び改変されたレドックスモチーフを含む配列のN末端側又はC末端側に、追加の短いアミノ酸配列を更に含み得る。そのようなアミノ酸配列は、一般に、本明細書において「フランキング配列」と称される。フランキング配列は、エピトープとエンドソーム標的化配列との間、及び/又は改変されたレドックスモチーフとエンドソーム標的化配列との間に位置付けられ得る。エンドソーム標的化配列を含まないある特定のペプチドにおいて、短いアミノ酸配列が、ペプチドにおける改変されたレドックスモチーフ及び/又はエピトープ配列のN末端側及び/又はC末端側に存在してもよい。より具体的には、フランキング配列は、1～7個のアミノ酸の配列、もっとも具体的には、2個のアミノ酸の配列である。
改変されたレドックスモチーフは、エピトープからN末端側に位置付けられ得る。
本発明のある特定の実施形態において、使用されるペプチドは、1つのエピトープ配列及び改変されたレドックスモチーフ配列を含んで提供される。更に具体的な実施形態において、改変されたレドックスモチーフは、ペプチドにおいて複数回(1回、2回、3回、4回、又は更に多い回数)、例えば、互いに1つ若しくは複数のアミノ酸で離間されていてもよい改変されたレドックスモチーフのリピートとして、又は互いにすぐに隣接しているリピートとして、生じる。代替的には、1つ又は複数の改変されたレドックスモチーフは、T細胞エピトープ配列のN末端及びC末端の両方に提供される。
本発明のペプチドに想定される他の変化形としては、T細胞エピトープ配列のリピートを含むペプチドが挙げられ、ここで、それぞれのエピトープ配列は、改変されたレドックスモチーフが先行する、及び/又はそれが続く(例えば、「改変されたレドックスモチーフ-エピトープ」のリピート又は「改変されたレドックスモチーフ-エピトープ-改変されたレドックスモチーフ」のリピート)。本明細書において、改変されたレドックスモチーフは、すべてが同じ配列を有し得るが、これは、必須ではない。それ自体が改変されたレドックスモチーフを含むエピトープを含むペプチドの反復配列もまた、「エピトープ」及び「改変されたレドックスモチーフ」の両方を含む配列をもたらすことに、留意されたい。そのようなペプチドにおいて、1つのエピトープ配列内の改変されたレドックスモチーフは、第2のエピトープ配列の外側の改変されたレドックスモチーフとして機能する。
典型的には、本発明において使用されるペプチドは、1つのT細胞エピトープしか含まない。以下に記載されるように、タンパク質配列内のT細胞エピトープは、機能性アッセイ及び/又は1つ若しくは複数のインシリカ予測アッセイによって特定することができる。T細胞エピトープ配列におけるアミノ酸は、MHCタンパク質の溝に結合する位置に従って番号付けされる。ペプチド内に存在するT細胞エピトープは、8～25個のアミノ酸、なおもより具体的には、8～16個のアミノ酸からなり、なおももっとも具体的には、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、又は16個のアミノ酸からなる。
より具体的な実施形態において、T細胞エピトープは、9個のアミノ酸の配列からなる。更に具体的な実施形態において、T細胞エピトープは、MHCクラスII分子によってT細胞に提示されるエピトープ[MHCクラスII制限T細胞エピトープ]である。典型的には、T細胞エピトープ配列は、MHC IIタンパク質の裂溝に適合するオクタペプチド、又はより具体的にはノナペプチド配列を指す。
本発明のペプチドのT細胞エピトープは、タンパク質の天然のエピトープ配列に対応し得るか又はその改変されたバージョンであり得るかのいずれかであるが、ただし、改変されたT細胞エピトープが、天然のT細胞エピトープ配列と同様に、MHC裂溝内に結合するその能力を保持することを条件とする。改変されたT細胞エピトープは、MHCタンパク質に対して、天然のエピトープと同じ結合親和性を有し得るが、低下した親和性を有してもよい。具体的には、改変されたペプチドの結合親和性は、もともとのペプチドの10分の1を下回らず、より具体的には、5分の1を下回らない。本発明のペプチドは、タンパク質複合体に対して安定化作用を有する。したがって、ペプチド-MHC複合体の安定化作用は、改変されたエピトープのMHC分子に対する親和性の低下を補う。
ペプチド内のT細胞エピトープ及び還元性化合物を含む配列は、MHCクラスII決定基内でのプロセシング及び提示のためのペプチドの後期エンドソームへの取り込みを促進するアミノ酸配列(又は別の有機化合物)に更に連結されてもよい。後期エンドソーム標的化は、タンパク質の細胞質尾部に存在する、十分に特定されたペプチドモチーフに対応するシグナルによって媒介される。後期エンドソーム標的化配列は、MHCクラスII分子による抗原由来のT細胞エピトープのプロセシング及び効率的な提示を可能にする。そのようなエンドソーム標的化配列は、例えば、gp75タンパク質(Vijayasaradhiら、(1995) J. Cell. Biol. 130、807-820)、ヒトCD3ガンマタンパク質、HLA-BM 11(Copierら、(1996) J. lmmunol. 157、1017-1027)、DEC205受容体の細胞質尾部(Mahnkeら、(2000) J. Cell Biol. 151、673-683)内に含まれる。エンドソームへの分類シグナルとして機能するペプチドの他の例は、Bonifacio及びTraub (2003) Annu. Rev. Biochem. 72、395-447の概説に開示されている。代替的には、配列は、タンパク質由来のサブドミナント又はマイナーT細胞エピトープのものであってもよく、これは、抗原に対するT細胞応答を弱めることなく、後期エンドソームへの取り込みを促進する。後期エンドソーム標的化配列は、効率的な取り込み及びプロセシングのために、抗原由来のペプチドのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかに位置付けることができ、また、フランキング配列、例えば、最大10個のアミノ酸のペプチド配列を通じて連結され得る。標的化目的でマイナーT細胞エピトープを使用する場合、後者は、典型的には、抗原由来のペプチドのアミノ末端に位置付けられる。
したがって、本発明は、抗原性タンパク質のペプチドの使用及び特異的免疫反応を誘起することにおけるそれらの使用を想起する。これらのペプチドは、それらの配列内に、すなわち、多くとも10個、好ましくは、7個以下のアミノ酸によって分離された、還元性化合物及びT細胞エピトープを含む、タンパク質のフラグメントに対応し得る。代替的には、またほとんどの抗原性タンパク質については、本発明のペプチドは、N末端又はC末端で抗原性タンパク質のT細胞エピトープに(それに直接的に隣接するか、又は多くとも10個、より具体的には多くとも7個のアミノ酸のリンカーを用いてのいずれかで)、還元性化合物、より具体的には、本明細書に記載される還元性の改変されたレドックスモチーフを連結することにより生成される。更に、天然に存在する配列と比較して、タンパク質のT細胞エピトープ配列及び/又は改変されたレドックスモチーフは、改変されていてもよく、並びに/又は1つ若しくは複数のフランキング配列及び/若しくは標的化配列が、導入(若しくは改変)されていてもよい。したがって、本発明の特徴が目的の抗原性タンパク質の配列内に見出され得るかどうかに応じて、本発明のペプチドは、「人工」又は「天然に存在する」配列を含み得る。
本発明のペプチドは、長さが実質的に変動し得る。ペプチドの長さは、13個、又は14個のアミノ酸で変動し得る、すなわち、ヒスチジンを有する、改変されたレドックスモチーフの5個のアミノ酸に隣接して、8個、9個のアミノ酸から、最大20個、25個、30個、40個、又は50個のアミノ酸のエピトープからなる。例えば、ペプチドは、40個のアミノ酸のエンドソーム標的化配列、約2個のアミノ酸のフランキング配列、5個のアミノ酸の本明細書に記載されるモチーフ、4個のアミノ酸のリンカー、及び9個のアミノ酸のT細胞エピトープペプチドを含み得る。
したがって、具体的な実施形態において、完全なペプチドは、13個のアミノ酸から、最大20個、25個、30個、40個、50個、75個、又は100個のアミノ酸からなる。より具体的には、還元性化合物が、本明細書に記載される改変されたレドックスモチーフである場合、エンドソーム標的化配列を含まず、任意選択でリンカーによって接続されたエピトープ及び改変されたレドックスモチーフを含む(人工又は天然の)配列(本明細書において、「エピトープ-改変されたレドックスモチーフ」配列と称される)の長さは、極めて重要である。「エピトープ-改変されたレドックスモチーフ」は、より具体的には、13個、14個、15個、16個、17個、18個、又は19個のアミノ酸の長さを有する。そのような13個、又は14～19個のアミノ酸のペプチドは、任意選択で、サイズの重要性が低いエンドソーム標的化シグナルに連結され得る。
上記に詳述されるように、具体的な実施形態において、本発明のペプチドは、T細胞エピトープ配列に連結された本明細書に記載される還元性の改変されたレドックスモチーフを含む。
更に具体的な実施形態において、本発明において使用されるペプチドは、それらの天然の配列内にレドックス特性を有するアミノ酸配列を含まないT細胞エピトープを含むペプチドである。
しかしながら、代替的な実施形態において、T細胞エピトープは、エピトープのMHC裂溝への結合を確実にする任意のアミノ酸配列を含み得る。抗原性タンパク質の目的のエピトープが、改変されたレドックスモチーフ、例えば、本明細書に記載されるものを、そのエピトープ配列内に含む場合、本発明による免疫原性ペプチドは、(裂溝内に埋め込まれているエピトープ内に存在する改変されたレドックスモチーフとは対照的に)結合した改変されたレドックスモチーフが還元活性を確実にし得るように、N末端又はC末端でエピトープ配列に連結された本明細書に記載される改変されたレドックスモチーフの配列及び/又は別の還元性配列を含む。
したがって、T細胞エピトープ及びモチーフは、すぐに隣接しているか、又は互いに分離されておりオーバーラップしない。「すぐに隣接している」又は「分離されている」の概念を評価するために、MHC裂溝に適合する8個又は9個のアミノ酸配列を判定し、このオクタペプチド又はノナペプチドと、レドックスモチーフテトラペプチド又はヒスチジンを含む改変されたレドックスモチーフペンタペプチドとの間の距離を、判定する。
一般に、本発明において使用されるペプチドは、天然ではなく(したがって、タンパク質のフラグメントはそのようなものではない)、T細胞エピトープに加えて、本明細書に記載される改変されたレドックスモチーフを含む人工のペプチドであり、それによって、改変されたレドックスモチーフは、最大7個、もっとも具体的には最大4個又は最大2個のアミノ酸からなるリンカーによって、T細胞エピトープから分離されている。
本明細書に開示されるペプチド(又はそのようなペプチドを含む組成物)を哺乳動物に投与(すなわち、注射)すると、ペプチドが、抗原由来のT細胞エピトープを認識するT細胞の活性化を誘起し、表面受容体の還元を通じてT細胞に更なるシグナルを提供することが、示されている。この最適を上回る活性化の結果として、T細胞は、T細胞エピトープを提示する細胞に対する細胞溶解特性、並びにバイスタンダーT細胞に対する抑制特性を獲得する。このようにして、抗原由来のT細胞エピトープ、及びエピトープの外側に改変されたレドックスモチーフを含む、本発明に記載されるペプチド又はペプチドを含む組成物は、ヒトを含む哺乳動物の直接的な免疫付与に使用することができる。本発明は、したがって、本明細書に開示されるペプチド又はその誘導体の医薬としての使用を提供する。したがって、本発明は、本明細書に開示される1つ又は複数のペプチドをそれを必要とする患者に投与する工程を含む、治療方法を提供する。
本発明は、細胞溶解特性が付与された抗原特異的T細胞を、小さなペプチドを用いた免疫付与によって誘起することができる、方法を提供する。(i)抗原由来のT細胞エピトープをコードする配列、及び(ii)レドックス特性を有するコンセンサス配列を含み、任意選択で、効率的なMHCクラスII提示のためのペプチドの後期エンドソームへの取り込みを促進する配列も更に含む、ペプチドが、サプレッサーT細胞を誘起することが、見出されている。
開示されたペプチドの免疫原性の特性は、免疫反応の処置及び予防において、特に関心が持たれている。
本明細書に記載されるペプチドは、医薬として、より具体的には、哺乳動物、より具体的にはヒトにおける免疫障害の予防又は処置のための医薬の製造に使用される。
本発明は、本明細書に開示されるペプチド、そのホモログ、又は誘導体を使用することによる、免疫障害の処置又は予防を必要とする哺乳動物におけるそのような処置又は予防の方法であって、免疫障害の症状を低減させるために、免疫障害に罹患しているか又はそのリスクにある前記哺乳動物に、治療有効量の本明細書に開示されるペプチド、そのホモログ、又は誘導体を投与する工程を含む、方法について記載する。ヒト並びに愛玩動物及び家畜動物といった動物の両方の処置が、想定される。ある実施形態において、処置しようとする哺乳動物は、ヒトである。上記で言及された免疫障害は、具体的な実施形態において、アレルギー疾患及び自己免疫疾患から選択される。
本発明における使用のためのペプチド、又は本明細書に定義されるそのようなペプチドを含む医薬組成物は、好ましくは、皮下又は筋肉内投与を通じて投与される。好ましくは、ペプチド又はそれを含む医薬組成物は、肘と肩との中間にある上腕の側部領域において、皮下(SC)注射され得る。2回以上の別個の注射が必要とされる場合、それらは、両腕に同時に投与することができる。
本発明における使用のためのペプチド、又はそれを含む医薬組成物は、治療有効用量で投与される。例示的であるが非限定的な投薬量レジメンは、300～1500μg、好ましくは、300～600μg、又は1200～1500μgである。
例示的な投薬量は、300～600μgの前記免疫原性ペプチド、
600～800μgの前記免疫原性ペプチド、
800～1000μgの前記免疫原性ペプチド、
1000～1200μgの前記免疫原性ペプチド、又は
1200～1500μgの前記免疫原性ペプチドである。
より具体的な投薬量スキームは、300～500μg若しくは約450μgであり得るか、又は1300～1500μg若しくは約1350μgであり得る。
投薬量レジメンは、単回用量での投与、又は2、3、4、5、6、若しくはそれ以上の用量で同時若しくは連続的のいずれかでの投与を含み得る。
例示的な非限定的な投与スキームは、以下である:
- 1回又は2回の別個の連続的な投与での300～500μg、又は約450μgのペプチドのSC投与を含み、前記投与が、約2～3週間、例えば、約2週間、又は約10～20日間、約11～19日間、約12～17日間、約13～16日間、約14～15日間、若しくは約14日間の間隔で、4～6回反復される、低用量スキーム。
- 1回又は2回の別個の連続的な投与での1300～1500μg、又は約1350μgのペプチドのSC投与を含み、前記投与が、1～3週間、例えば、約2週間、又は約10～20日間、約11～19日間、約12～17日間、約13～16日間、約14～15日間、若しくは約14日間の間隔で、4～6回反復される、高用量スキーム。
これらの処置スキームのそれぞれは、有利なことには、処置の開始から数えておよそ24～30週目、例えば、処置の開始から数えて24週目、25週目、26週目、27週目、28週目、29週目、又は30週目に、同じ用量でのブースト注射を含み得る。
本発明における使用のためのペプチドはまた、サンプル中のクラスII制限CD4 + T細胞を検出するための診断用インビトロ方法において使用することができる。この方法では、サンプルを、MHCクラスII分子及び本明細書に開示されるペプチドの複合体と接触させる。CD4+ T細胞は、サンプル中での複合体と細胞との結合を測定することによって検出され、ここで、複合体と細胞との結合は、サンプルにおけるCD4 + T細胞の存在を示す。
複合体は、ペプチドとMHCクラスII分子との融合タンパク質であり得る。
代替的には、複合体におけるMHC分子は、四量体である。複合体は、可溶性分子として提供されてもよく、又は担体に結合していてもよい。
したがって、具体的な実施形態において、本発明の処置及び予防の方法は、本明細書に記載される免疫原性ペプチドの投与を含み、ここで、ペプチドは、処置しようとする疾患(例えば、上記に記載されるもの等)において役割を果たす抗原性タンパク質のT細胞エピトープを含む。更に具体的な実施形態において、使用されるエピトープは、前記処置からもっとも利益を得られると想定される患者の層別化又は選択の方法と組み合わされる、ドミナントエピトープである。
本発明による使用のためのペプチドは、T細胞エピトープ及び改変されたレドックスモチーフが0～5個のアミノ酸分離しているであろうペプチドを合成することによって調製することができる。ある特定の実施形態において、改変されたレドックスモチーフは、エピトープ配列の外側に1個、2個、又は3個の突然変異を導入して、タンパク質において生じる配列の内容を保存することによって得ることができる。典型的には、ノナペプチドに関して、天然の配列の一部であるP-2及びP-1並びにP+10及びP+11にあるアミノ酸は、ペプチド配列において保存される。これらのフランキング残基は、一般的に、MHCクラスIIへの結合を安定させる。他の実施形態において、エピトープのN末端側又はC末端側の配列は、T細胞エピトープ配列を含む抗原性タンパク質の配列に無関係であろう。
したがって、ペプチドを設計するための上記の方法に基づいて、ペプチドは、化学的ペプチド合成、組換え発現方法、又はより例外的な事例では、タンパク質のタンパク質分解若しくは化学的フラグメント形成によって、生成される。
上記の方法において産生されるペプチドは、インビトロ及びインビボ方法において、T細胞エピトープの存在について試験することができ、インビトロアッセイにおいてそれらの還元活性について試験することができる。最終的な品質管理として、ペプチドは、インビトロアッセイにおいて試験して、ペプチドが、改変されたレドックスモチーフを有するペプチドにおいても存在するエピトープ配列を含む抗原を提示する抗原提示細胞に対するアポトーシス経路を介して、細胞溶解性であるCD4+ T細胞を生成することができるかどうかを検証することができる。
本発明における使用のためのペプチドは、組換えDNA技法を使用して、細菌、酵母、昆虫細胞、植物細胞、又は哺乳動物細胞において、生成することができる。ペプチドの限定された長さを考慮して、それらを、化学的ペプチド合成によって調製してもよく、その場合、ペプチドは、異なるアミノ酸を互いに連結させることによって調製される。化学的合成は、例えば、D-アミノ酸、天然に存在しない側鎖を有するアミノ酸、又は改変された側鎖を有する天然のアミノ酸、例えば、メチル化システインを含めるのに特に好適である。
化学的ペプチド合成方法は、十分に説明されており、ペプチドは、企業、例えば、Applied Biosystems社及び他の企業から、注文することができる。
ペプチド合成は、固相ペプチド合成(SPPS)、又は対照的には溶液相ペプチド合成のいずれかとして行うことができる。もっとも知られているSPPS方法は、t-Boc及びFmoc固相化学反応である。
ペプチド合成中、いくつかの保護基が使用される。例えば、ヒドロキシル及びカルボキシル官能基を、t-ブチル基によって保護し、リジン及びトリプトファンを、t-Boc基によって保護し、アスパラギン、グルタミン、システイン、及びヒスチジンを、トリチル基によって保護し、アルギニンを、pbf基によって保護する。適切な場合、そのような保護基を、合成の後にペプチドに残してもよい。もともとKent(Schnelzer & Kent (1992) lnt. J. Pept. Protein Res. 40、180-193)によって説明されており、例えば、Tamら、(2001) Biopolymers 60、194-205において考察されている、SPPSの範囲を超えるタンパク質合成を達成する大きな可能性をもたらすライゲーション戦略(2つの保護されていないペプチドフラグメントの化学選択的カップリング)を使用して、ペプチドを互いに連結させて、より長いペプチドを形成することができる。100～300個の残基のサイズを有する多数のタンパク質の合成が、この方法によって成功している。合成ペプチドは、SPPSにおける大きな進歩に起因して、生化学、薬理学、神経生物学、酵素学、及び分子生物学の研究分野において、これまで以上に重要な役割を果たし続けている。
代替的には、ペプチドは、コーディングするヌクレオチド配列を含む適切な発現ベクターにおいて本発明のペプチドをコードする核酸分子を使用することによって、合成することができる。そのようなDNA分子は、自動化DNA合成装置及び遺伝子コードの周知のコドン-アミノ酸の関連性を使用して、容易に調製することができる。そのようなDNA分子はまた、オリゴヌクレオチドプローブ及び従来的なハイブリダイゼーション手法を使用して、ゲノムDNAとして、又はcDNAとして、得ることができる。そのようなDNA分子は、好適な宿主、例えば、細菌、例えば、大腸菌、酵母細胞、動物細胞、又は植物細胞におけるDNAの発現及びポリペプチドの産生のために適合された、プラスミドを含む発現ベクターに組み込まれ得る。
目的のペプチドの物理的及び化学的特性(例えば、可溶性、安定性)は、ペプチドが、治療用組成物における使用に好適であるかどうかを判定するために、試験される。典型的には、これは、ペプチドの配列を調節することによって最適化される。任意選択で、ペプチドは、当該技術分野において公知の技法を使用して、合成の後に改変され得る(化学的改変、例えば、官能基の付加/欠失)。
T細胞エピトープ自体は、抗原提示細胞の表面上の適切なHLA分子への結合、及び関連するT細胞部分集団の刺激によって、ヘルパーT細胞のレベルで、早期事象をトリガーすると考えられる。これらの事象は、T細胞増殖、リンホカイン分泌、局所的炎症反応、その部位への追加の免疫細胞の動員、並びに抗体の産生をもたらすB細胞カスケードの活性化をもたらす。これらの抗体の1つのアイソタイプであるlgEは、アレルギー症状の発症に根本的に重要であり、その産生は、事象カスケードの早期にヘルパーT細胞のレベルで、分泌されるリンホカインの性質によって影響を受ける。T細胞エピトープは、T細胞受容体よる認識の基本エレメント又は最小単位であり、エピトープが、タンパク質のアミノ酸配列において連続している受容体認識に必須のアミノ酸残基を含む。
しかしながら、T細胞エピトープ及びレドックスモチーフを有するペプチドを投与すると、以下の事象が生じると考えられる:
MHC-クラスII分子によって提示される抗原由来ペプチドとの同種相互作用により生じる抗原(i)特異的T細胞の活性化;
レダクターゼ配列が、T細胞表面タンパク質、例えば、第2のドメインが拘束されたジスルフィド架橋を含むCD4分子を還元する。これにより、シグナルがT細胞に伝達される。酸化経路の増加に関連する一連の結果のなかでも、重要な事象は、増加したカルシウム流入及びNF-kB転写因子の核内への転位である。後者は、IFN-ガンマ及びグランザイムの転写の増加をもたらし、これにより、細胞に、アポトーシス誘導機序を介して細胞溶解特性を獲得させ、細胞溶解特性は、グランザイムB分泌が関与する機序及びFas-FasL相互作用によってペプチドを提示する細胞に影響を及ぼす。細胞殺滅作用は、アポトーシス経路によって得られるため、細胞溶解性細胞は、細胞傷害性細胞よりもこれらの細胞に適した用語である。抗原提示標的細胞の破壊は、同じ抗原上に位置するエピトープに特異的な、又は同じ抗原提示細胞によってプロセシングされるであろう無関係の抗原に対する、他のT細胞の活性化を防止し、T細胞活性化の更なる結果は、細胞-細胞接触依存性機序によるバイスタンダーT細胞の活性化を抑制することである。そのような事例において、異なる抗原提示細胞によって提示される抗原によって活性化されるT細胞もまた、抑制されるが、ただし、細胞溶解性及びバイスタンダーT細胞の両方が、緊密に近接していること、すなわち、同じ抗原提示細胞の表面上で活性化されることが条件である。
上記で仮定した作用機序は、上記に引用されるPCT出願国際公開第2008/017517号に開示される実験データによって実証される。
本発明は、インビボ又はインビトロのいずれかで抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞を生成するための方法、並びに前記処置からもっとも利益を得られるとして層別化又は選択されている患者の処置におけるそれらの使用を提供する。それとは独立して、特徴的な発現データに基づいて、細胞溶解性CD4+ T細胞を他の細胞集団、例えば、Foxp3+ Tregとは区別するための方法が、想定され得る。
本発明は、本発明を踏まえて処置に使用することができる抗原特異的CD4+ T細胞の産生のためのインビボ方法について記載する。特定の実施形態は、動物(ヒトを含む)を、本明細書に記載されるペプチドで免疫付与し、次いで、免疫付与した動物からCD4+ T細胞を単離することによって、CD4+ T細胞を産生させるか又は単離するための方法に関する。本発明は、APCに対する抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞の産生のためのインビトロ方法について説明する。本明細書は、また、APCに対する抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞を生成するための方法を開示する。
一実施形態において、末梢血細胞の単離、インビトロでの本明細書に記載される免疫原性ペプチドによる細胞集団の刺激、及び刺激された細胞集団の拡大、より具体的には、IL-2の存在下におけるものを含む、方法が、提供される。本発明による方法は、多数のCD4+ T細胞が産生され、抗原性タンパク質に特異的なCD4+ T細胞を生成することができる(抗原特異的エピトープを含むペプチドを使用して)という利点を有する。
代替的な実施形態において、CD4+ T細胞は、インビボで、すなわち、対象への本明細書に記載される免疫原性ペプチドの注射及びインビボで生成された細胞溶解性CD4+ T細胞の回収によって、生成することができる。
本明細書に開示される方法によって得ることができるAPCに対する抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞は、免疫療法のための哺乳動物への投与に、アレルギー反応の予防及び自己免疫疾患の処置において、特に関心が高い。同種及び自家の両方の細胞の使用が、想定される。
細胞溶解性CD4+ T細胞集団は、本明細書に以下に記載されるように得られる。
本明細書に記載される抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞は、医薬として使用され得、より具体的には、養子細胞療法、より具体的には急性アレルギー反応及び自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症の再発の処置における使用のためのものであり得る。単離された細胞溶解性CD4+ T細胞又は細胞集団、より具体的には、記載されるように生成される抗原特異的細胞溶解性CD4+ T細胞又はNKT細胞集団は、免疫障害の予防又は処置のための医薬の製造のために使用される。単離又は生成された細胞溶解性CD4+ T細胞を使用することによる処置の方法が、開示される。
本発明において使用のためのペプチドは、生きた動物、典型的にはヒトに投与されると、バイスタンダーT細胞に対して抑制活性を発揮する特定のT細胞を誘起するであろう。
特定の実施形態において、本明細書に開示される細胞溶解性細胞集団は、FasL及び/又はインターフェロンガンマの発現によって特徴付けられる。特定の実施形態において、本発明の細胞溶解性細胞集団は、更に、グランザイムBの発現によって特徴付けられる。
この機序はまた、本発明のペプチドが、ある特定の抗原の特定のT細胞エピトープを含むとはいえ、本発明のペプチドによって活性化されるT細胞の近傍にあるMHCクラスII分子によって同じ機序を通じて提示された場合、同じ抗原の他のT細胞エピトープに対する免疫反応によって誘起される障害の予防又は処置に、又はある特定の状況において、他の異なる抗原の他のT細胞エピトープに対する免疫反応によって誘起される障害の処置にさえも、使用することができることを意味し、また、実験結果によりそれが示される。
更に、抗原特異的である、すなわち、抗原特異的免疫応答を抑制することができる、上述の特徴を有する細胞型の単離された細胞集団が、開示される。
本発明は、本発明による1つ又は複数のペプチドを含み、薬学的に許容される担体を更に含む、医薬組成物の使用を提供する。上記に詳述されるように、本発明はまた、医薬としての使用のための組成物、又は組成物を使用して免疫障害について哺乳動物を処置する方法、並びに前記処置からもっとも利益を得られると想定される患者の層別化又は選択の方法と組み合わせた、免疫障害の予防又は処置のための医薬の製造のための組成物の使用に関する。医薬組成物は、例えば、免疫障害、特に、空気伝搬性アレルギー及び食物アレルギー、並びにアレルギー起源の疾患を処置又は予防するのに好適なワクチンであり得る。本明細書に更に記載される医薬組成物の例として、本発明によるペプチドは、哺乳動物への投与に好適なアジュバント、例えば、水酸化アルミニウム(ミョウバン)に吸着される。典型的には、ミョウバンに吸着させた、本明細書に記載される所望される投薬量、例えば、50μg～1500μgのペプチドを、2週間間隔で、3回、皮下経路によって注射する。経口、鼻内、又は筋肉内を含む、他の投与経路が可能であることは、当業者には明らかなはずである。また、注射の回数及び注射される量は、処置しようとする状態に応じて変動し得る。更に、ミョウバン以外の他のアジュバントを使用することができるが、ただし、それらが、MHCクラスII提示でのペプチド提示及びT細胞活性化を促進することを条件とする。したがって、活性成分を単独で投与することは、可能であるが、それらは、典型的には医薬製剤として提示される。本発明の獣医学用及びヒト用の両方の使用のための製剤は、上述のように少なくとも1つの活性成分を、1つ又は複数の薬学的に許容される担体と一緒に含む。本開示は、活性成分として、本明細書に記載される1つ又は複数のペプチドを、薬学的に許容される担体と混合して含む、医薬組成物に関する。医薬組成物は、治療有効量の活性成分、例えば、処置又は予防の方法に関して以降に示されるものを含む。任意選択で、組成物は、他の治療成分を更に含む。好適な他の治療成分、並びにそれらが属するクラスに応じたそれらの通常の投薬量は、当業者に周知であり、免疫障害を処置するために使用される他の公知の薬物から選択され得る。
「薬学的に許容される担体」という用語は、本明細書において使用される場合、例えば、組成物を溶解、分散、若しくは拡散させることによって、処置しようとする場所への活性成分の適用若しくは分配を促進するため、及び/又はその有効性を損なうことなくその保管、輸送、若しくは取り扱いを容易にするために活性成分が製剤化される、任意の材料又は物質を意味する。それらとしては、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤(例えば、フェノール、ソルビン酸、クロロブタノール)、等張剤(例えば、糖又は塩化ナトリウム)等が挙げられる。組成物中の免疫原性ペプチドの作用の持続期間を制御するために、追加の成分が含まれてもよい。薬学的に許容される担体は、固体であっても、液体であっても、液体を形成するために圧縮されている気体であってもよい、すなわち、本発明の組成物は、濃縮物、エマルション、溶液、顆粒、微粉末、スプレー、エアロゾル、懸濁液、軟膏、クリーム、錠剤、ペレット、又は粉末剤として好適に使用され得る。医薬組成物及びそれらの製剤における使用に好適な薬学的担体は、当業者に周知であり、本発明内でそれらの選択に特に制限はない。それらはまた、添加剤、例えば、湿潤剤、分散剤、展着剤、接着剤、乳化剤、溶媒、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤(例えば、フェノール、ソルビン酸、クロロブタノール)、等張剤(例えば、糖又は塩化ナトリウム)等も含んでもよいが、ただし、医薬実務と整合性がある、すなわち、哺乳動物に対して恒久的な損傷をもたらさない担体及び添加剤であることを条件とする。本発明の医薬組成物は、任意の公知の様式で、例えば、活性成分を、一段階又は複数段階の手順において、選択された担体材料、及び適宜、他の添加剤、例えば、界面活性剤と均一に混合する、コーティングする、及び/又は粉砕することによって、調製され得る。それらはまた、例えば、通常約1～10μmの直径を有するマイクロスフィアの形態でそれらを得る目的で、すなわち、活性成分の制御又は持続放出のためのマイクロカプセルの製造のために、微粒子化によって調製されてもよい。
本発明の医薬組成物において使用しようとする、エマルジェント又は乳化剤としても知られている好適な界面活性剤は、良好な乳化、分散、及び/又は湿潤特性を有する非イオン性、カチオン性、及び/又はアニオン性材料である。好適なアニオン性界面活性剤としては、水溶性の石鹸、及び水溶性の合成界面活性剤の両方が挙げられる。好適な石鹸は、アルカリ若しくはアルカリ土類金属塩、高級脂肪酸(C10～C22)の非置換若しくは置換アンモニウム塩、例えば、オレイン酸若しくはステアリン酸又はココナツ油若しくは獣脂から得られる天然の脂肪酸混合物のナトリウム又はカリウム塩である。合成界面活性剤としては、ポリアクリル酸のナトリウム若しくはカルシウム塩、脂肪族スルホネート及びスルフェート、スルホン化ベンズイミダゾール誘導体、及びアルキルアリールスルホネートが挙げられる。脂肪族スルホネート又はスルフェートは、通常、アルカリ又はアルカリ土類金属塩、8～22個の炭素原子を有する非置換アンモニウム塩又はアルキル若しくはアシルラジカルで置換されたアンモニウム塩、例えば、リグニンスルホン酸若しくはドデシルスルホン酸のナトリウム又はカルシウム塩、又は天然の脂肪酸から得られる脂肪族アルコールスルフェートの混合物、硫酸又はスルホン酸エステル及び脂肪族アルコール/エチレンオキシド付加物のスルホン酸のアルカリ又はアルカリ土類金属塩(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム)の形態である。好適なスルホン化ベンズイミダゾール誘導体は、典型的には、8～22個の炭素原子を含む。アルキルアリールスルホネートの例は、ドデシルベンゼンスルホン酸又はジブチル-ナフタレンスルホン酸又はナフタレン-スルホン酸/ホルムアルデヒド縮合産物のナトリウム、カルシウム、又はアルカノールアミン塩である。対応するホスフェート、例えば、リン酸エステルの塩、並びにp-ノニルフェノールのエチレン及び/又はプロピレンオキシドとの付加物、又はリン脂質もまた、好適である。この目的で好適なリン脂質は、セファリン又はレシチン型の天然(動物若しくは植物細胞を起源とする)又は合成のリン脂質、例えば、ホスファチジル-エタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセリン、リゾレシチン、カルジオリピン、ジオクタニルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及びそれらの混合物である。
好適な非イオン性界面活性剤としては、分子内に少なくとも12個の炭素原子を含むアルキルフェノール、脂肪族アルコール、脂肪酸、脂肪族アミン又はアミド、アルキルアレンスルホネート(alkylarene sulphonate)、及びジアルキルスルホスクシネートのポリエトキシル化及びポリプロポキシル化誘導体、例えば、脂肪族及び脂環式アルコール、飽和及び不飽和脂肪酸、及びアルキルフェノールのポリグリコールエーテル誘導体、アルキルフェノールの(脂肪族)炭化水素部分に3～10個のグリコールエーテル基及び8～20個の炭素原子、並びにアルキル部分に6～18個の炭素原子を典型的に含む誘導体が挙げられる。更に好適な非イオン性界面活性剤は、ポリエチレンオキシドの、ポリプロピレングリコール、アルキル鎖に1～10個の炭素原子を含むエチレンジアミンポリプロピレングリコールとの水溶性付加物であり、付加物は、20～250個のエチレングリコールエーテル基及び/又は10～100個のプロピレングリコールエーテル基を含む。そのような化合物は、通常、プロピレングリコール単位当たり1～5エチレングリコール単位を含む。非イオン性界面活性剤の代表的な例は、ノニルフェノール-ポリエトキシエタノール、ヒマシ油ポリグリコールエーテル、ポリプロピレン/ポリエチレンオキシド付加物、トリブチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリエチレングリコール、及びオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである。ポリエチレンソルビタン(例えば、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート)、グリセロール、ソルビタン、スクロース、及びペンタエリスリトールの脂肪酸エステルもまた、好適な非イオン性界面活性剤である。好適なカチオン性界面活性剤としては、ハロ、フェニル、置換したフェニル、又はヒドロキシで任意選択で置換された4つの炭化水素ラジカルを有する第4級アンモニウム塩、特に、ハロゲン化物、例えば、N置換基として少なくとも1つのC8C22アルキルラジカル(例えば、セチル、ラウリル、パルミチル、ミリスチル、オレイル等)を含み、更なる置換基として非置換又はハロゲン化低級アルキル、ベンジル、及び/又はヒドロキシ-低級アルキルラジカルを含む第4級アンモニウム塩が挙げられる。
この目的で好適な界面活性剤のより詳細な説明は、例えば、「McCutcheon's Detergents and Emulsifiers Annual」(MC Publishing Crop.、Ridgewood、New Jersey、1981)、「Tensid-Taschenbucw」 2 d ed. (Hanser Verlag、Vienna、1981)、及び「Encyclopaedia of Surfactants」、(Chemical Publishing Co.、New York、1981)に見出すことができる。本発明によるペプチド、そのホモログ又は誘導体(並びにすべてが「活性成分」という用語に含まれるそれらの生理学的に許容される塩又は医薬組成物)は、処置しようとする状態に適切且つ投与しようとする化合物、ここではタンパク質及びフラグメントに適切な任意の経路によって投与され得る。可能性のある経路としては、部分的、全身的、経口(固体形態又は吸入)、直腸、鼻内、局所(眼内、頬側、及び舌下を含む)、腟内、並びに非経口(皮下、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、髄腔内、及び硬膜外を含む)が挙げられる。好ましい投与経路は、例えば、レシピエントの状態又は処置しようとする疾患により変動し得る。本明細書に記載されるように、担体は、最適には、製剤の他の成分と適合性があり、そのレシピエントに有害ではないという意味で、「許容」される。製剤は、経口、直腸、鼻内、局所(頬側及び舌下を含む)、腟内、又は非経口(皮下、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、髄腔内、及び硬膜外を含む)投与に好適なものが挙げられる。
非経口投与に好適な製剤としては、抗酸化剤、緩衝化剤、静菌剤、及び製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有し得る水性及び非水性の滅菌注射用溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量又は複数回用量の容器、例えば、密封されたアンプル及びバイアルで提示されてもよく、使用の直前に、滅菌液体担体、例えば、注射用水を添加することのみを必要とする凍結乾燥(freeze-dried)(凍結乾燥(lyophilised))した状態で保管されてもよい。即時注射溶液及び懸濁液は、前述の種類の滅菌の粉末、顆粒、及び錠剤から調製することができる。
典型的な単位投薬量製剤は、本明細書において上記に引用されたように、活性成分の1日用量又は単位1日部分用量、又はその適切な画分を含むものである。上記に具体的に言及された成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤タイプに関係する当該技術分野において従来的な他の薬剤を含み得、例えば、経口投与に好適なものとしては、香味剤を挙げることができる。本発明によるペプチド、そのホモログ、又は誘導体は、活性成分の放出が所与の発明化合物の低頻度での投薬を可能にし、その薬物動態若しくは毒性プロファイルを改善するように制御及び調節され得る、活性成分として本発明の1つ又は複数の化合物を含む制御放出医薬製剤(「制御放出製剤」)を提供するために使用され得る。別個の単位が本発明の1つ又は複数の化合物を含む経口投与に適合された制御放出製剤は、従来的な方法に従って調製することができる。組成物中の活性成分の作用の持続期間を制御するために、追加の成分が含まれてもよい。制御放出組成物は、したがって、適切なポリマー担体、例えば、例として、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレン-ビニル酢酸コポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、プロタミン硫酸塩等を選択することによって、達成され得る。薬物の放出速度及び作用の持続期間はまた、活性成分を、ポリマー物質、例えば、ヒドロゲル、ポリ乳酸、ヒドロキシメチルセルロース、ポリニエチルメタクリレート、及び他の上述のポリマーを粒子、例えばマイクロカプセルに組み込むことによって、制御され得る。そのような方法としては、コロイド薬物送達系、例えば、親油性組成物、マイクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子、ナノカプセル等が挙げられる。投与経路に応じて、医薬組成物は、保護的コーティングを必要とし得る。注射に好適な医薬形態としては、その即時調製のための滅菌水溶液又は分散剤及び滅菌粉末が挙げられる。この目的に典型的な担体としては、したがって、生体適合性水性緩衝化剤、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等、及びこれらの混合物が挙げられる。複数の活性成分を組み合わせて使用する場合、それらは、必ずしも、処置しようとする哺乳動物において同時にそれらの合わせた治療作用を直接的にもたらすわけではないという事実を踏まえると、対応する組成物は、2つの成分を別個であるが隣接したレポジトリ又はコンパートメントに含む医療用キット又はパッケージの形態であってもよい。後者の文脈において、それぞれの活性成分は、したがって、他の成分のものとは異なる投与経路に好適な様式で製剤化されてもよく、例えば、それらのうちの一方は、経口又は非経口製剤の形態であり得るが、他方は、静脈内注射又はエアロゾルのためのアンプルの形態である。
本明細書に記載されるように得られる細胞溶解性CD4+ T細胞は、インビトロ及びインビボにおいて示されるように、樹状細胞及びB細胞の両方に影響を及ぼすMHC-クラスII依存性同種活性化の後にAPCアポトーシスを誘導し、(2)IL-10及び/又はTGF-ベータの非存在下において接触依存性機序によってバイスタンダーT細胞を抑制する。細胞溶解性CD4+ T細胞は、国際公開第2008/017517号において詳細に考察されているように、天然及び適応Tregのいずれとも区別され得る。
本発明は、ここで、以下の実施例を用いて例示され、これらは、限定する意図をまったく有することなく提供されている。更に、本明細書に記載されるすべての参考文献は、参照により本明細書に明示的に含まれる。
(実施例1)
サンプルサイズ
参加者を1:1:1の比(プラセボ:被験薬450μg:被験薬1350μg)で、処置又はプラセボに割り当てる。試験のベイジアンアダプティブデザインは、線形縦断的ランダム効果モデルに基づき、操作特徴をシミュレーションによって評価する。このデザインは、84人の参加者(28:28:28)を用いて、48週間(最終来院予定)で少なくとも1つの処置アームとプラセボとの間で対数変換した乾燥血液スポット(DBS)C-ペプチドレベルに0.2nmol/Lの変化を検出する少なくとも80%の検出力を達成する。
(実施例2)
研究デザイン
これは、スクリーニング時点で診断(最初のインスリン注射の日として定義する)から最大9週間以内及び診断からランダム化まで最大12週間以内の1型糖尿病(T1D)を有する患者における、多施設での用量比較、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照研究である。
メイン研究
84人のHLA DR4+成人参加者を、3つの処置アーム:プラセボ、被験薬(IMP)450μg、及びIMP 1350μg(1:1:1)にランダムに割り当てる(=メイン研究)。すべての参加者に、各投与間の間隔が2週間で、IMP又はプラセボを6回受容させる。24週間の時点で、参加者にブースト注射を受容させる。処置した参加者は、それらがランダム化された用量と同等のブースト投与を受けるが、プラセボ参加者は、プラセボブーストを受ける。参加者を、最大48週間、フォローアップした(図1)。
サブ研究
最大24人のHLA DR4陰性であるがHLA DR3+の成人参加者も、免疫応答を研究するために、純粋に機械論的なサブ研究に含める。参加者を、IMP 450μg又はIMP 1350μgにランダムに割り当てる(=サブ研究)。安全性データもまた収集し、研究の完全な安全性データセットに追加する(図1)。
サブ研究に含まれる者を含め、それぞれの参加者について、研究は、およそ52週間の間発生する合計11回の来院を含む(スクリーニング来院から、最終来院予定まで)。
登用基準:
(1)書面による告知に基づく同意があること。
(2)参加者の年齢が、同意の時点で18歳以上且つ45歳未満であること。
(3)スクリーニング(最初のインスリン注射日)時点で最大9週間以内にT1Dの診断を受けていなければならない。
(4)スクリーニング時点で存在する少なくとも1つ又は複数の糖尿病関連自己抗体を有していなければならない(GAD65、IA-2、又はZnT8)。
(5)スクリーニング時点で測定したランダムC-ペプチドレベルが200pmol/L以上でなければならない。
(6)メイン研究についてはHLA DR4陽性でなければならない。
a. HLA DR4陰性ステータスであるがHLA DR3陽性である最大24人の参加者は、サブ研究に適格となるであろう。
(7)集中的な糖尿病管理に従う意志がなければならない。
(8)地域の標準治療に従ってインスリン療法で処置されること。
(9)生殖能力のある男性は、最終処置の完了後最大90日間適切な避妊法を使用することに同意しなければならない。これには、
- バリア避妊法(コンドーム及び殺精子剤)、又は
- 完全な禁欲(参加者がそれを好み通常の生活様式に即する場合)
が含まれる。
(10)すべての女性はスクリーニング時点で血清妊娠検査で陰性でなければならない。性的に活動的な女性及び出産能力のある女性は、スクリーニングから被験薬での最終処置後最大90日間、有効性の高い避妊法を使用することに同意しなければならない。
除外基準:
(1)スクリーニング時点で全血数(FBC)、腎機能、又は肝機能に臨床的に有意な異常があること、これには以下が含まれる。
a.免疫欠損であるか、又は臨床的に有意な慢性リンパ球減少がある:白血球減少(3,000個未満の白血球/μL)、好中球減少(1,500個未満の好中球/μL)、リンパ球減少(800個未満のリンパ球減少/μL)、又は血小板減少(100,000個未満の血小板/μL)。
b.クレアチニンが正常値上限の1.5倍を上回る腎機能障害の証拠がある。
c.アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)又はアラニントランスアミナーゼ(ALT)が正常値上限の3倍を上回る肝機能障害の証拠がある。未コンジュゲートビリルビンが高い参加者(ジルベール症候群)は、ビリルビンが正常値上限の3倍以下であり、肝臓酵素及び機能がそれ以外は正常であり(AST/ALT/アルカリホスファターゼがULN以内)、溶血の証拠がなければ、適格となる。
(2)研究エントリー時点でIV抗生物質及び/又は入院を要する重度の活動性感染症の兆候又は症状を有する。
(3)スクリーニング期間中に活動性COVID感染症の兆候若しくは症状を有するか、又はCOVID PCR検査で陽性である(更なる詳細については節7.5を参照されたい)。
(4)被験薬の初回投与予定前3ヶ月以内に任意の生弱毒化ワクチンを受けている(これには、経口ポリオワクチン、麻疹-流行性耳下腺炎-風疹ワクチン、黄熱ワクチン、日本脳炎ワクチン、デング熱ワクチン、ロタウイルスワクチン、水痘ワクチン、生弱毒化帯状疱疹ワクチン、カルメット-ゲラン桿菌[BCG]ワクチン、経口腸チフスワクチンが含まれるが、これらに限定されない)。
(5)現在妊娠中であるか若しくは授乳中であるか、又は最終研究薬投与後少なくとも24週間までに妊娠する可能性がある。
(6)全身性ステロイドの慢性使用を含む、免疫抑制剤の使用を要すること。局所、吸入、又は鼻内コルチコステロイドは許容される。
(7)現在又は過去のヒト免疫不全ウイルス(HIV)、B型肝炎、又はC型肝炎感染症の証拠がある。
(8)治験責任医師によって判断される研究実行を妨害し得るなんらかの制御不能な疾患(制御不能な自己免疫疾患を含む)又は異常な臨床研究室結果が存在する。
(9)悪性腫瘍の病歴があるか又は現在罹患している(切除された基底細胞皮膚がんを除く)。
(10)スクリーニング来院前7日以内の血糖制御に影響を及ぼす非インスリン医薬を現在使用しているか又は使用中である。
(11)別のT1D処置研究に参加中であるか、又は過去30日以内に任意の調査介入研究に参加していた。
(12)薬物製品の任意の成分に対する過感受性が判明している。
(13)CRO又はスポンサーの従業員であるか、又は治験責任医師の直接的な指導下にある及び/若しくは研究に直接的に関与する従業員。
被験薬及び投薬量
被験薬(IMP)は、オキシドレダクターゼモチーフが隣接した公知のプロインスリンのヒトエピトープ(エピトープC20-A1 LALEGSLQK、配列番号3)を含む小さな合成ペプチド(20個のアミノ酸)からなる。IMPは、以下の配列:HCPYCSLQPLALEGSLQKRG(配列番号73)を有する。
IMPは、皮下(SC)投与のための凍結乾燥粉末及び溶媒の形態で提示される。溶媒は、900μg/mLの濃度のアジュバント水酸化アルミニウム(ミョウバン)を含む。
プラセボは、IMPと同じ希釈剤で再構成するための10mgのマンニトールから作製された凍結乾燥滅菌粉末として提供される。
処置は、IMP又はプラセボのSC経路による6回の投与(14日間離れている)からなる。投与しようとする用量の半量を、2つの部位(両上腕、腕の側部領域、肘と肩との中間)に同時に投与する。
用量Aは、それぞれ225μgずつの2つの別個の注射(片腕500μL)で450μgのペプチドの6回のSC投与からなる。追加の投与(ブースト)は、24週目に行う。
用量Bは、それぞれ675μgずつの2つの別個の注射(片腕500μL)で1350μgのペプチドの6回のSC投与からなる。追加の投与(ブースト)は、24週目に行う。
プラセボアームは、盲検を保持するために、用量A及びBと同じスキームに従って6回のSC投与並びに24週目でのプラセボブースト投与からなる。
患者の経過
患者の経過は、以下の通りであり、図2に示される。
スクリーニング評価
来院V-1(診断から9週間以内)
告知に基づく同意に署名した後、登用及び除外基準(T1D診断日を含む)、デモグラフィックデータ、病歴、及び併発症、並びに以前及び現在の服用医薬リストを調べる。
治験責任医師/指定された者が、バイタルサインを調べ、完全な身体検査を行い、12リード心電図(ECG)を行う。
参加者は、SARS-CoV2ウイルスの存在に関してスワブを採取される(PCR)。
尿のディップスティック分析を行い、以下のスクリーニング評価のために、採血する:
・ C-ペプチド(ランダム)、
・ 自己抗体、
・ HLAクラスI/クラスII遺伝子型判定、
・ 免疫細胞(PBMC)単離、
・ HbA1c、
・ 安全性パラメーター:血液学(全血数、CD4/CD8比を含む)、生化学(完全代謝プロファイル)、ウイルス学、
・ すべての女性参加者に関して、血清妊娠検査。
処置期間
来院0(V0)からV7
V0(0日目)、V6(12週目)、及びV7(24週目)に、すべての参加者は、ベータ細胞応答の測定としてC-ペプチドを測定するために、EnsurePlusを用いた120分間の混合食寛容試験(MMTT)を受ける。
便サンプルを採取する。
血液サンプルを、HbA1c測定のために採取する。
身体検査を行う。
V7時に、自己抗体検出のために血液サンプルを採取する。
各来院時に、治験責任医師/指定された者が、同時服用医薬、バイタルサイン、e-ダイアリーデータ、及び最後の来院後に生じた有害事象について調べた。尿のディップスティック検査を行う。すべての女性に関して、妊娠検査を行うために採尿する。
血液サンプルを、安全性パラメーター及びPBMC単離のために採取する。
参加者は、次いで、V6を除き、450μg若しくは1350μgのIMP又はプラセボのSC用量を受容し、7日間(来院日を含む)e-ダイアリーに列挙された有害事象を報告することについての説明を受ける。
フォローアップ期間及び研究の終了(EoS)
V6(12週目)、V8(26週目)、及びV9(48週目)
各来院時に、治験責任医師/指定された者が、同時服用医薬、バイタルサイン、e-ダイアリーデータ、及び最後の来院後に生じた有害事象について調べる。
完全な身体検査を行う1。
便サンプルを採取する1。
尿サンプルを採取し、ディップスティック分析を行う。
以下の評価のために採血した:
・ 免疫細胞(PBMC)単離
・ HbA1c1
・ 安全性パラメーター
1V8時を除く
V9時に、自己抗体検出のために血液サンプルを採取する。
V6及びV9時に、ECGを行う。
EoS来院(V9)時、すべての女性参加者は、尿妊娠検査を受ける。
すべての参加者は、試験終了後更に12ヶ月間の継続監察研究への参加が提案され、これには、診断から24ヶ月時点での1回の来院が含まれる。
中間分析で得られた結果に基づいて、24ヶ月時点でのこの追加のフォローアップ来院は、変更を通じてこのプロトコールに含めてもよい。
この治験に登用された参加者は、適切な標準治療(インスリン療法)をすでに受けており、この治療は研究後継続する。
自宅での採取
V0からEoS来院(V9、48週目)
・ C-ペプチド測定のために、完全な48週間のフォローアップの間、自宅において、1ヶ月に2回、EnsurePlusを摂取する前及び摂取した60分後にDBSを採取する(新しいDBSカードは、それぞれの来院時に配布される)。
・ 参加者は、持続グルコースモニタリング(CGM)デバイス、Dexcom G6をV0時に受け取る。参加者は、研究終了時までそれを継続的に使用することが要求され(新しいセンサーはそれぞれの来院時に配布される)、少なくともV0、V6、V7、及びV9の既定の期間の間使用することが要求される。
e-ダイアリーは、指示された通り、インスリンレジメン、列挙された注射部位の反応、他のAE、及び同時服用医薬に関して、参加者が記入する。
(実施例3)
免疫分析の手順及び結果
これらの分析は、盲検様式で行い、以下の結果を伝える。
処置によって生成された免疫シグネチャーの具体的な特徴。これには、以下のパラメーターが含まれる(非網羅的):活性化マーカー、表現型マーカー(例えば、メモリーマーカー)、サイトカインプロファイル。
具体的には、研究は、IMPでの処置後のプロインスリンエピトープC20-A1特異的CD4+ T細胞を評価及び特徴付けることを目的としている。
これらの免疫分析は、2つの研究室方法、すなわち、フローサイトメトリー(FACS)及び単一細胞トランスクリプトーム分析に依存する。天然のプロインスリンエピトープC20-A1でのPBMCの短いインビトロ刺激の後に、細胞を、活性化及び特徴付けマーカーのパネルで標識して、その表現型判定及び分取を行う。
採血
6つの時点(免疫付与前である来院V-1又はベースライン、及びそれぞれ2、3、4、5、又は6回の注射の2週間後である来院V2～V6)で採取した患者の血液サンプルを使用して、プロインスリンエピトープC20-A1刺激に応答するCD4+ T細胞を定量した。
続いて、単一細胞トランスクリプトーム分析もまた、10x技術を使用して適用して、それぞれの細胞トランスクリプトームを特徴付け、それらを異なる部分集団にクラスター化することができる。
フローサイトメトリー
細胞を、蛍光色素にコンジュゲートした抗体の異なる組合せで染色した。LIVE/DEAD(商標)Fixable Near-IR死細胞染色キット(Thermo Fisher社)を使用して、細胞の生存性を判定した。FlowJo(Treestar(登録商標))ソフトウェアを、分析に使用した。
FACSデータ分析
蛍光活性化細胞分取(FACS)分析を行って、プロインスリンエピトープ刺激に応答するCD4+ T細胞を定量した。応答性細胞を、エフェクター表現型又は調節性表現型のいずれかを有するCD4+ T細胞として特定した。プロインスリンエピトープC20-A1で刺激したサンプルにおいて、「応答性CD4+ T細胞の正味の%」を、刺激したサンプルにおけるエフェクター又は調節性表現型を有するCD4+ T細胞の%から、対応する未刺激サンプルにおけるエフェクター又は調節性表現型を有するCD4+ T細胞の%を差し引いたものとして計算した。統計学的分析のために、患者を、IMP処置及びプラセボ処置の2つの群に分けた。それぞれの時点において、マン-ホイットニー-ウィルコクソンの順位和検定を行って、2つの群間で応答性CD4+ T細胞の正味の%間に有意差があるかどうかを判定した。処置が、応答性CD4+ T細胞の正味の%に対して経時的に作用を有するかどうかを試験するために、反復測定ANOVAモデルを、Imotope及びプラセボ処置患者のデータに別個に適合させた。モークリーの球面性検定を使用して、球面性の仮定が反復測定ANOVA分析において満たされるかどうかを検証した。球面性条件に満たなかった場合、グリーンハウス-ガイサー及びフィン-フェルトの手順を使用して、p値を補正し、2つのp値のうちより保守的であるものを採用した。すべての統計学的分析は、R統計学環境において実施した。
結果
本明細書に提示されるデータは、IMP(450及び1350μg)で処置した16人の患者、並びにプラセボで処置した8人の患者を含む、24人の患者から得られた。プロインスリンエピトープC20-A1刺激に応答するCD4+ T細胞の正味の%の統計学的分析(図3)は、IMP処置が、複数の時点にわたって応答性CD4+ T細胞の%に対して統計学的に有意な作用を有し(反復測定ANOVAのp値、GG球面性補正後0.046又はHF球面性補正後0.037)、一方でプラセボ処置は、そのような作用を示さなかった(反復測定ANOVA p値、GG球面性補正後0.337又はHF球面性補正後0.339)ことを示した。IMP処置患者において応答性CD4+ T細胞のより高い存在度は、IMP特異的細胞溶解性CD4+ T細胞が誘導され得たことを示す。個々の時点では、IMP処置における応答性CD4+ T細胞が、来院3～6(投与3～6の影響を測定した)の間で、プラセボ処置患者と比較して、より高い正味の%であるという傾向があった。個々の時点において、ノンパラメトリックマン-ホイットニー-ウィルコクソンの順位和検定を使用したIMP処置患者とプラセボ処置患者との間での応答性CD4+ T細胞の%の統計学的比較は、統計学的有意差に達しなかった。しかしながら、p値は、V3(p=0.188)からV4(p=0.113)、V5(p=0.078)と低下した。これは、6回の投与後に応答がプラトーに達する前に、3、4、及び5回の投与までの時間で、一貫して応答が向上する傾向を示し得る。したがって、5又は6回の投与スケジュールは、自己免疫疾患、例えば、T1Dを制御するのに有益であり得る持続的なCD4+ T細胞応答をもたらす。

Claims (32)

  1. 対象における自己免疫障害、脱髄性障害、同種移植片若しくは移植片拒絶、腫瘍若しくはがん、細胞内病原体による感染、可溶性同種因子に対する免疫応答、アレルゲン曝露に対する免疫応答、又は遺伝子療法若しくは遺伝子ワクチン接種に使用されるウイルスベクターに対する免疫応答から選択される疾患又は障害の予防又は処置における使用のための、9～50個のアミノ酸の長さを有する免疫原性ペプチドであって、オキシドレダクターゼモチーフと、このモチーフから0～7個のアミノ酸分離れた、前記疾患又は障害に関与する抗原のMHCクラスII T細胞エピトープ配列とを含み、
    前記オキシドレダクターゼモチーフが、モチーフ:
    Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-
    (式中、nは、2、1、0、3、4、5、又は6から選択される整数、好ましくは、2、1、0、又は3であり、
    mは、0～2の整数であり、
    Cはシステインを表し、Sはセリンを表し、Tはスレオニンを表し、Xは任意のアミノ酸を表し、Zは任意のアミノ酸、好ましくは、塩基性アミノ酸を表す)
    を含み、
    前記免疫原性ペプチドが、300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量で、少なくとも5回、2回の用量の間隔が約12日～約28日で投与される、
    免疫原性ペプチド。
  2. 前記投与が、筋肉内又は皮下注射を通じて行われる、請求項1に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  3. 300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量で、6回、2回の用量の間隔が約2～3週間で、筋肉内又は皮下注射を通じて投与される、請求項1又は2に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  4. 前記免疫原性ペプチドにおけるT細胞エピトープが、MHCクラスII T細胞エピトープFLRVPCWKI(配列番号4)及びFLRVPSWKI(配列番号5)、又はNKT細胞エピトープFLRVPCW(配列番号10)及びFLRVPSW(配列番号11)からなる群から選択されるアミノ酸配列ではなく、それを含むこともない、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  5. 前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、MOG抗原アミノ酸配列に由来する配列ではない、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  6. 前記疾患又は障害が、MSではない、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  7. 前記疾患又は障害が、フマル酸によって処置されることが知られている疾患ではなく、フマル酸関連疾患若しくは障害でもない、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  8. 前記疾患又は障害が、MSであり、前記処置が、本明細書に定義されるフマル酸化合物の投与を含まない、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  9. 300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの前記用量のそれぞれが、2回の用量間の間隔が約12～約16日間、又は約2週間で投与される、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  10. それぞれの用量が、
    300～600μgの前記免疫原性ペプチド、
    600～800μgの前記免疫原性ペプチド、
    800～1000μgの前記免疫原性ペプチド、
    1000～1200μgの前記免疫原性ペプチド、又は
    1200～1500μgの前記免疫原性ペプチド
    を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  11. 前記用量が、450又は1350μgの前記免疫原性ペプチドを含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  12. 前記用量が、用量間の間隔が約12～約16日間、又は約2週間で、6回投与される、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  13. 処置の開始から数えて約22～30週目に、300～1500μgの前記免疫原性ペプチドの用量のブースト投与が行われる、請求項1から12のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  14. 前記ブースト投与が、処置の開始から数えて約22～26週目に行われる、請求項13に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  15. 前記ブーストが、
    300～600μgの前記免疫原性ペプチド、
    600～800μgの前記免疫原性ペプチド、
    800～1000μgの前記免疫原性ペプチド、
    1000～1200μgの前記免疫原性ペプチド、又は
    1200～1500μgの前記免疫原性ペプチド
    を含む、請求項13又は14に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  16. 前記ブーストが、450又は1350μgの前記免疫原性ペプチドを含む、請求項15に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  17. 前記ブーストが、処置の約23～25週目、より好ましくは処置のおよそ24週目に投与される、請求項15に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  18. 用量の半量が、2つの部位(両上腕、好ましくは、腕の側部領域、より好ましくは、肘と肩との中間)に同時に投与される、請求項1から17のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  19. 対象における自己免疫障害、脱髄性障害、同種移植片若しくは移植片拒絶、腫瘍若しくはがん、細胞内病原体による感染、可溶性同種因子に対する免疫応答、アレルゲン曝露に対する免疫応答、又は遺伝子療法若しくは遺伝子ワクチン接種に使用されるウイルスベクターに対する免疫応答から選択される疾患又は障害の、9～50個のアミノ酸の長さを有する免疫原性ペプチドでの処置に対する患者の応答を分析するためのインビトロ方法であって、前記ペプチドが、オキシドレダクターゼモチーフと、このモチーフから0～7個のアミノ酸分離れた、前記疾患又は障害に関与する抗原のMHCクラスII T細胞エピトープ配列とを含み、
    前記オキシドレダクターゼモチーフが、モチーフ:
    Zm-[CST]-Xn-C-又はZm-C-Xn-[CST]-
    (式中、nは、0～6の整数、好ましくは、2、1、0、又は3であり、
    mは、0～2の整数であり、
    Cはシステインを表し、Sはセリンを表し、Tはスレオニンを表し、Xは任意のアミノ酸を表し、Zは任意のアミノ酸、好ましくは、塩基性アミノ酸を表す)
    を含み、
    前記方法が、以下の時点:
    処置の0日目、
    処置の約11～13週目、例えば、12週目、
    処置の約23～25週目、例えば、24週目、及び
    処置の約47～49週目、例えば、48週目において
    前記免疫原性ペプチドで処置されている患者から採取されたサンプルの分析を含む、
    インビトロ方法。
  20. 前記患者のサンプルが、処置の開始の約8～10週間前、好ましくは、前記処置の開始の約9週間前に分析される、請求項19に記載のインビトロ方法。
  21. 前記自己免疫疾患が、1型糖尿病(T1D)又はリウマチ性関節炎(RA)である、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19若しくは20に記載の方法。
  22. 自己免疫疾患が、T1Dであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、(プロ-)インスリンに由来するMHCクラスII T細胞エピトープであり、好ましくは、前記エピトープのアミノ酸配列が、アミノ酸配列LALEGSLQK[配列番号3]によって定義される、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から21のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記患者が、ホモ接合性又はヘテロ接合性HLA型DR3又はDR4陽性である、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から22のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記ペプチドが、
    Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK[配列番号67]、[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[配列番号68]、CxxCSLQPLALEGSLQK[配列番号69]、HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK[配列番号70]、H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[配列番号71]、HCxxCSLQPLALEGSLQK[配列番号72]、及びHCPYCSLQPLALEGSLQKRG[配列番号73]
    からなる群から選択される配列を含む、
    請求項1から3及び9から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から23のいずれか一項に記載の方法。
  25. 自己免疫疾患が、RAであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、GRP78、HSP60、60kDaシャペロニン2、ゲルゾリン、キチナーゼ-3様タンパク質1、カテプシンS、血清アルブミン、ビンクリン、及びカテプシンDを含む群から選択される抗原性タンパク質に由来するMHCクラスII T細胞又はNKT細胞エピトープである、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から21のいずれか一項に記載の方法。
  26. 自己免疫疾患が、乾癬であり、前記抗原性タンパク質が、ADAMTSL5、PLA2G4D、ケラチン、例えば、ケラチン14又はケラチン17、パンコムギ由来の抗原、Pso p27、カテリシジン抗微生物ペプチド、好中球ディフェンシン(ceutrophil defensin)1、及びLL37からなる群から選択され、好ましくは、LL37である、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から21のいずれか一項に記載の方法。
  27. 自己免疫疾患が、MSであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、プロテオリピドタンパク質(PLP)、ミエリン関連抗原(MAG)、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質(OSP)、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質(MOBP)、2',3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ(CNPase)、S100βタンパク質、及びトランスアルドラーゼHを含む群から選択される抗原性タンパク質、好ましくは、MOGに由来する、MHCクラスII T細胞若しくはNKT細胞エピトープであるか、
    又は
    自己免疫疾患が、NMOであり、前記ペプチドにおけるT細胞エピトープが、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)に由来するMHCクラスII T細胞若しくはNKT細胞エピトープであり、
    好ましくは、前記エピトープのアミノ酸配列が、アミノ酸配列FLRVPSWKI(配列番号4)によって定義されるか、又は
    前記免疫原性ペプチドが、以下の配列:
    HCPYCVRYFLRVPSWKITLF(配列番号85)、
    HCPYCVRYFLRVPCWKITLF(配列番号86)、
    KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK(配列番号87)、又は
    KHCPYCVRYFLRVPCWKITLFKK(配列番号88)
    のうちのいずれか1つを有する、
    請求項1から3及び9から18のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド、又は請求項19から21のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記ペプチドが、前記それぞれのペプチドをコードする核酸として投与される、請求項1から27のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  29. 免疫原性ペプチドをコードする前記核酸が、単離されたデオキシリボ核酸(DNA)、プラスミドDNA(pDNA)、コーディングDNA(cDNA)、リボ核酸(RNA)、メッセンジャーRNA(mRNA)、又はこれらの改変されたバージョン、例えば、N(1)-メチル-シュードウリジン(m1ψ)を含む非免疫原性mRNAから選択される、請求項28に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  30. 前記核酸が、発現カセットの一部であり得、任意選択で、遺伝子療法に使用され得る(ウイルス)ベクター若しくはプラスミドに組み込まれ得るか、又は封入型若しくはネイキッド型DNA若しくはRNAの形態で存在し得る、請求項29に記載の使用のための免疫原性ペプチド。
  31. 自己免疫障害、脱髄性障害、移植片拒絶、又はがんを予防又は処置するための医薬の製造のための、請求項1から30のいずれか一項に記載の免疫原性ペプチド又はそれをコードする核酸の使用であって、前記免疫原性ペプチド又は核酸が、請求項1から30のいずれか一項に規定の投与スキームに従って投与される、使用。
  32. 自己免疫障害、脱髄性障害、移植片拒絶、又はがんを予防又は処置する方法であって、それを必要とする対象に、請求項1から30のいずれか一項に記載の免疫原性ペプチド又はそれをコードする核酸を投与する工程を含み、前記免疫原性ペプチド又は核酸が、請求項1から30のいずれか一項に規定の投与スキームに従って投与される、方法。
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