CN117729932A

CN117729932A - 用于治疗视神经脊髓炎的肽和方法

Info

Publication number: CN117729932A
Application number: CN202280045668.0A
Authority: CN
Inventors: 米洛斯·埃拉克
Original assignee: Imcyse SA
Current assignee: Imcyse SA
Priority date: 2021-06-29
Filing date: 2022-06-29
Publication date: 2024-03-19
Also published as: AU2022304222A9; IL309258A; WO2023275108A1; KR20240025673A; CO2024000603A2; AR126654A1; TW202306971A; EP4362972A1; CA3222570A1; AU2022304222A1

Abstract

本发明涉及用于治疗视神经脊髓炎谱系病症(NMOSD)的来源于水通道蛋白4(AQP4)的免疫原性肽，并且涉及针对呈递野生型AQP4表位序列的抗原呈递细胞的溶细胞性CD4+T细胞或NKT细胞的产生。

Description

用于治疗视神经脊髓炎的肽和方法

技术领域

本发明涉及免疫原性肽。特别地，本发明涉及来源于水通道蛋白-4(Aquaporin-4，AQP4)的包含与T细胞表位连接的氧化还原酶基序的免疫原性肽以及由这些肽产生的溶细胞性CD4+ T细胞，其用于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症(NeuromyelitisOptica Spectrum Disorder，NMOSD)，更特别地视神经脊髓炎(Neuromyelitis Optica，NMO)。

背景技术

已描述了数种策略来防止针对抗原的不希望免疫应答的产生。WO2008/017517描述了使用包含给定抗原蛋白MHC II类T细胞表位和氧化还原酶基序的肽的新策略。这些肽将CD4+ T细胞转化成具有溶细胞特性的细胞类型，称为溶细胞性CD4+ T细胞。这些细胞能够通过触发凋亡杀伤那些抗原呈递细胞(antigen presenting cell，APC)，所述抗原呈递细胞呈递从中获得肽的抗原。WO2008/017517示出了用于变态反应和自身免疫病(例如I型糖尿病)的这一概念。

WO2009101207和Carlier et al.(2012)Plos one 7，10 e45366进一步更详细地描述了抗原特异性溶细胞性细胞。WO2016059236还公开了经修饰的肽，其中在氧化还原酶基序附近存在另外的组氨酸。WO2012069568还公开了包含抗原蛋白NKT细胞表位和氧化还原酶基序的肽。这些肽能够引发NKT细胞的活化，其代表用于治疗许多疾病例如感染性疾病和自身免疫病或癌症的有价值的方法。WO2017182528描述了包含MOG表位的免疫原性肽用于治疗多发性硬化的用途。

视神经脊髓炎(NMO)是中枢神经系统(central nervous system，CNS)的炎性疾病，其特征在于视神经炎(optic neuritis，ON)和纵向广泛性(横贯性)脊髓炎(longitudinally extensive(transverse)myelitis，LE(T)M)的严重发作，在一些情况下，其在临床症状中与(某些)MS亚型具有显著重叠，也称为视神经脊髓炎谱系病症(NMOSD)(参见例如，Wingerchuk et al.，2007-Lancet Neurol 6：805-815；Kim et al.，2012-Neurology 78：1179-1185)。最近的发展使得发现了疾病特异性自身抗体，NMO-免疫球蛋白G(NMO-IgG)，并随后鉴定了主要靶标自身抗原，水通道蛋白-4(AQP4)。这有助于在近年来将NMO与多发性硬化(multiple sclerosis，MS)区分为不同的疾病。NMOSD原则上涵盖患有局限型或起始型NMO和患有特定脑异常(specific brain abnormality)的所有抗AQP4抗体血清阳性患者。因此，其还包括患有其他自身免疫病症(例如系统性红斑狼疮和舍格伦综合征(syndrome))的抗AQP4抗体血清阳性患者。

因此，需要用于AQP4自身抗原诱导的或抗AQP4抗体诱导的疾病(例如NMOSD和NMO)的新的和/或改进的治疗策略。

发明内容

本发明提供了包含来源于水通道蛋白-4(AQP4)抗原的表位的新的肽，其用于治疗脱髓鞘病症，一般例如但不限于视神经脊髓炎(NMO)、视神经脊髓炎谱系病症(NMOSD)或抗AQP4疾病。本发明的肽具有这样的优势：它们与HLA-DRB1*03：01和/或HLA-DPB1*05：01结合；最优选与HLA-DRB1*03：01结合。用本发明的肽刺激NMO患者细胞可以诱导针对呈递AQP4表位的APC的具有裂解特性的特异性CD4+ T细胞，从而允许停止靶向AQP4的自身免疫应答。

因此，本发明提供了以下方面：

方面1.分离的免疫原性肽，其包含：

-具有序列Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-的氧化还原酶基序，其中n是选自0至6，优选0、1、2或3的整数；其中m是选自0至3的整数，其中X是任意氨基酸，其中Z是任意氨基酸，其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸；和

-水通道蛋白-4(AQP4)的T细胞表位，所述水通道蛋白-4(AQP4)优选人水通道蛋白-4，更优选由如SEQ ID NO：136限定的氨基酸序列所限定的水通道蛋白-4；

其中所述氧化还原酶基序和所述表位由0至7个氨基酸的接头序列隔开，并且任选地包含0至7个氨基酸的C端侧翼序列。

在一个实施方案中，所述表位不是小鼠水通道蛋白-4表位，更特别地，所述表位不是小鼠AQP4表位SIMVAFKGVWTQAFWKAV(SEQ ID NO：400)，并且所述免疫原性肽不是HCPYCSIMVAFKGVWTQAFWKAV(SEQ ID NO：401)。

在所述氧化还原酶基序的通式中，连字符(-)指示氧化还原酶基序与接头或表位的N端末端、或者与接头或T细胞表位的C端末端的连接点。

在一些优选实施方案中，所述氧化还原酶基序序列不存在于AQP4的天然(野生型)氨基酸序列中。一般而言，这意味着选择这样的表位：使得在AQP4的天然(野生型)序列中与所述表位N端或C端相邻的11个氨基酸内不存在如本文中所述的氧化还原酶基序。

AQP4的T细胞表位可包含以下序列中的任一者或更多者，或者由以下序列中的任一者或更多者组成(基于SEQ ID NO：136中的AQP4氨基酸位置)：

AQP4区19至33：

AQP4区64至77：

AQP4区101至114：

AQP4区107至121：

AQP4区161至174：

AQP4区171至185：

AQP4区202至216：

AQP4区249至263：

AQP4区284至298：

其中，当存在于这些表位序列的任一者中时，残基[CS]代表单个半胱氨酸(C)或单个丝氨酸(S)残基。

方面2.根据方面1所述的肽，其中接头-表位序列选自：

方面3.根据方面1所述的肽，其中表位-侧翼序列选自：

方面4.根据方面1所述的肽，其中接头-表位-侧翼序列选自：

在方面4的一个优选实施方案中，所述接头-表位-侧翼选自：TRKISIAKSVFYIAA、TRKISIAKSVFYIAAKK和TRKISIAKSVFYIAAKKK。

在方面4的另一个优选实施方案中，所述接头-表位选自：EYVFSPDVEFKRRFK和EYVFCPDVEFKRRFK。

方面5.根据方面1至4中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序选自以下氨基酸基序：

(a)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是0，并且其中m是选自0、1或2的整数，

其中Z是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸，所述碱性氨基酸优选选自：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选K；

(b)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是1，其中X是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，

其中m是选自0、1或2的整数，

(c)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是2，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²氨基酸偶联物，其中X是任意氨基酸，优选地其中至少一个X是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，

其中m是选自0、1或2的整数，

其中Z是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸，所述碱性氨基酸优选选自：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选H；

(d)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是3，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³氨基酸段，其中X是任意氨基酸，优选地其中至少一个X是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，

其中m是选自0、1或2的整数，

(e)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是4，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴氨基酸段，其中m是选自0、1或2的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；

(f)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是5，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴X⁵氨基酸段，其中m是选自0、1或2的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；

(g)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是6，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴X⁵X⁶氨基酸段，其中m是选自0、1或2的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；或者

(h)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是0至6并且其中m是0，并且其中C或[CST]残基之一已被修饰以在基序的氨基酸残基的N端酰胺上或在C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基。

方面6.根据方面1至5中任一项所述的肽，其中氧化还原酶基序具有以下通用序列式：

Z_m-[CST]-XX-C-或Z_m-C-XX-[CST]-。

方面7.根据方面1至6中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序的X_n或XX部分包含序列PY或GH。

方面8.根据方面1至7中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序的氨基酸Z是碱性氨基酸，优选是选自由以下组成的氨基酸的组的碱性氨基酸：H、K、R和任意非天然碱性氨基酸，更优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K和R，最优选地其中Z是H或K。

方面9.根据方面1至8中任一项所述的肽，其中氧化还原酶基序由以下序列中的任一者标识：

CPYC(SEQ ID NO：157)，HCPYC(SEQ ID NO：158)，KHCPYC(SEQ ID NO：159)，KCPYC(SEQ ID NO：160)，RCPYC(SEQ ID NO：161)，KKCPYC(SEQ ID NO：162)，KRCPYC(SEQ ID NO：163)，CHGC(SEQ ID NO：164)，HCGHC(SEQ ID NO：165)，KCGHC(SEQ ID NO：166)，KHCGHC(SEQID NO：167)，RCGHC(SEQ ID NO：168)，KKCGHC(SEQ ID NO：169)，和KRCGHC(SEQ ID NO：170)，更优选HCPYC(SEQ ID NO：158)或KHCPYC(SEQ ID NO：159)。

这样的基序的一些替代实例是：

KCC，KKCC(SEQ ID NO：231)，RCC，RRCC (SEQ ID NO：232)，RKCC(SEQ ID NO：233)，或KRCC(SEQ ID NO：234)，KCXC(SEQ ID NO：235)，KKCXC(SEQ ID NO：242)，RCXC(SEQ IDNO：237)，RRCXC(SEQ ID NO：238)，RKCXC(SEQ ID NO：247)，KRCXC(SEQ ID NO：248)，KCKC(SEQ ID NO：235)，KKCKC(SEQ ID NO：242)，KCRC(SEQ ID NO：243)，KKCRC(SEQ ID NO：244)，RCRC(SEQ ID NO：245)，RRCRC(SEQ ID NO：246)，RKCKC(SEQ ID NO：247)，KRCKC(SEQID NO：248)，或RCKC(SEQ ID NO：249)，更优选KCRC(SEQ ID NO：243)。

这样的基序的另一些替代实例是：

CRPYC(SEQ ID NO：250)，KCRPYC(SEQ ID NO：251)，KHCRPYC(SEQ ID NO：252)，RCRPYC(SEQ ID NO：253)，HCRPYC(SEQ ID NO：254)，CPRYC(SEQ ID NO：255)，KCPRYC(SEQID NO：256)，RCPRYC(SEQ ID NO：257)，HCPRYC(SEQ ID NO：258)，CPYRC(SEQ ID NO：259)，KCPYRC(SEQ ID NO：260)，RCPYRC(SEQ ID NO：261)，HCPYRC(SEQ ID NO：262)，CKPYC(SEQID NO：263)，KCKPYC(SEQ ID NO：264)，RCKPYC(SEQ ID NO：265)，HCKPYC(SEQ ID NO：266)，CPKYC(SEQ ID NO：267)，KCPKYC(SEQ ID NO：268)，RCPKYC(SEQ ID NO：269)，HCPKYC(SEQID NO：270)，CPYKC(SEQ ID NO：271)，KCPYKC(SEQ ID NO：272)，RCPYKC(SEQ ID NO：273)，和HCPYKC(SEQ ID NO：274)，更优选KCRPYC(SEQ ID NO：251)。

在方面9的一个具体实施方案中，所述基序选自：HCPYC和KHCPYC。

在方面9的另一个具体实施方案中，所述基序选自：KCRC和KCRPYC。

方面10.根据方面1至9中任一项所述的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO 137至156中描述的氨基序列或由SEQ ID NO 137至156中描述的氨基序列组成：

在一个具体实施方案中，所述免疫原性肽具有以下序列：HCPYCTRKISIAKSVFYIAAKKK(也称为P12)或HCPYCEYVFSPDVEFKRRFK(也称为P20)。

方面11.根据方面1至10中任一项所述的免疫原性肽，其中所述T细胞表位是NKT细胞表位，并且所述肽的长度为12至50个氨基酸，优选12至30个氨基酸；或者

其中所述T细胞表位是MHC II类T细胞表位，并且所述肽的长度为12至50个氨基酸，优选12至30个氨基酸。

方面12.多核苷酸(核酸分子)，其编码根据方面1至11中任一项所述的免疫原性肽，所述多核苷酸优选选自分离的脱氧核糖核酸(desoxyribonucleic acid，DNA)、质粒DNA(plasmid DNA，pDNA)、编码DNA(coding DNA，cDNA)、核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)、信使RNA(messenger RNA，mRNA)或其经修饰形式，例如包含N(1)-甲基-假尿苷(m1ψ)的非免疫原性mRNA。在一些实施方案中，所述核酸可以是表达盒的一部分，其任选地并入到可用于基因治疗的(病毒)载体或质粒中，或者可以以根据药物和基因治疗领域中已知的技术待施用的经包封的或裸DNA或RNA的形式存在。

方面13.根据方面1至11中任一项所述的肽、或根据方面12所述的多核苷酸，其用作药物。

方面14.根据方面13所述的肽或多核苷酸，其用于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症、改善抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的症状、或者预防抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症。优选的是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的疾病或病症。这样的疾病或病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病(Devic’s disease)；AQP4阳性视脊髓MS(Optic-Spinal MS，OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

在一个优选实施方案中，所述治疗与如本文中所限定的抗体耗竭治疗组合，例如同时、顺序或分开。在一个优选实施方案中，这样的抗体耗竭治疗先于免疫原性肽治疗。

方面15.用于产生针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+ T细胞群的体外方法，其包括以下步骤：

-提供外周血细胞；

-使所述细胞在体外与方面1至11中任一项所述的肽或根据方面12所述的多核苷酸接触；以及

-在存在IL-2的情况下扩增所述细胞。

方面16.用于产生针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+ T细胞群的方法，其包括以下步骤：

-向对象施用有效量的方面1至11中任一项所述的肽，或根据方面12所述的多核苷酸；

-从所述对象的外周血细胞群中获得所述溶细胞性CD4+ T细胞。

方面17.用于产生针对呈递AQP4表位的APC的NKT细胞群的方法，其包括以下步骤：

-从所述对象的外周血细胞群中获得所述NKT细胞。

方面18.针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+ T细胞群或NKT细胞群，其可通过方面15、16或17所述的方法获得。

方面19.可通过方面15、16或17所述的方法获得的针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+ T细胞群或NKT细胞群，其用作药物。

方面20.根据方面19所述应用的溶细胞性CD4+ T细胞群或NKT细胞群，其用于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症、改善抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的症状、和/或者预防抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症。优选的病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

方面21.药物组合物，其包含方面1至11中任一项所述的肽、根据方面12所述的多核苷酸、或方面18至20中任一项所述的CD4+ T细胞或NKT细胞，或者其任意混合物。

方面22.方面21所述的药物组合物，其任选地还包含可药用载体，并且任选地还包含适于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症、改善抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的症状、或者预防抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的另外的活性成分。优选的是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的疾病或病症。这样的疾病或病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

方面23.方面21或22所述的药物组合物，其用作药物。

方面24.根据方面23所述应用的药物组合物，其用于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症、改善抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的症状、或者预防抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症。优选的是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的疾病或病症。这样的疾病或病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

方面25.根据前述方面中任一项所述的肽、多核苷酸、CD4+ T细胞、NKT细胞或药物组合物，其用于治疗视神经脊髓炎(NMO)、改善视神经脊髓炎(NMO)的症状和/或预防视神经脊髓炎(NMO)

方面26.根据前述方面中任一项所述的用于治疗NMO、改善NMO的症状和/或预防NMO的肽、多核苷酸、CD4+ T细胞、NKT细胞或药物组合物，其中对象具有选自以下的HLA类型：HLA-DRB1*03：01和HLA-DPB1*05：01，优选HLA-DRB1*03：01。

方面27.根据方面1至11中任一项所述的免疫原性肽、根据方面12所述的多核苷酸、或方面18至20中任一项所述的CD4+ T细胞或NKT细胞、或者其任意混合物用于制备用于治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的药物的用途，所述视神经脊髓炎谱系病症优选是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的病症，最优选是视神经脊髓炎(NMO)。

方面28.用于在对象中治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的方法，其包括以下步骤：向对象施用治疗有效量的根据方面1至11所述的肽、根据方面12所述的多核苷酸、或方面18至20中任一项所述的CD4+ T细胞或NKT细胞、或者其任意混合物。

方面29.根据方面28所述的方法，其中所述抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的疾病或病症。这样的疾病或病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

方面30.用于在样品中检测对AQP4抗原具有特异性的MHC II类限制性CD4+ T细胞的体外方法，其包括以下步骤：

-使对象的样品与分离的MHC II类分子和根据方面1至11所述的肽的复合物接触；

-通过测量所述复合物与所述样品中细胞的结合来检测CD4+ T细胞，其中复合物与细胞的结合指示所述样品中存在对AQP4具有特异性的CD4+ T细胞。

方面31.用于在对象中治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的方法，其包括以下步骤：向对象施用治疗有效量的根据方面1至11中任一项所述的肽、根据方面12所述的多核苷酸、或方面18至20中任一项所述的CD4+ T细胞或NKT细胞以及具有B细胞耗竭活性的抗体，其中所述抗体与所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞同时、顺序或分开施用。

方面32.根据方面31所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体在所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞之前施用。

方面33.根据方面31或32所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合这样的抗原的抗体，所述抗原选自：

CD10，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD37，CD53，CD72，CD73，CD74，CDw75，CDw76，CD77，CDw78，CD79a，CD79b，CD80(B7.1)，CD81，CD82，CD83，CDw84，CD85和CD86(B7.2)。

在一个优选实施方案中，所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD19的抗体，例如伊奈利珠单抗(Inebilizumab)(MEDI-551)。

在另一个优选实施方案中，所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD20的抗体，例如利妥昔单抗(Rituximab)或优利妥昔单抗(Ublituximab)(LFB-R603、TGT-1101、TGTX-1101)。

方面34.药物制剂(组合或药物组合物或药盒)，其包含根据方面1至11所述的肽、根据方面12所述的多核苷酸、或方面18至20中任一项所述的CD4+ T细胞或NKT细胞，和具有B细胞耗竭活性的抗体。

方面35.根据方面34所述的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合这样的抗原的抗体，所述抗原选自：

在一个优选实施方案中，所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD19的抗体，例如伊奈利珠单抗(MEDI-551)。

在另一个优选实施方案中，所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD20的抗体，例如利妥昔单抗或优利妥昔单抗(LFB-R603、TGT-1101、TGTX-1101)。

方面36.根据方面34至35中任一项所述的药物制剂，其用作药物。

方面37.根据方面34至35中任一项所述的药物制剂，其用于治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症。

方面38.根据方面36或37所述应用的药物制剂，其中所述抗体与所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞同时、顺序或分开施用。

方面39.根据方面38所述应用的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体在所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞之前施用。

本发明的上述和另一些方面以及一些优选实施方案在以下部分中和所附权利要求书中描述。所附权利要求书的主题在此特别地并入本说明书中。

附图说明

图1：肽P12和P20(A)，P1、P3、P7和P15(B)，P4、P11和P22(C)，P5、P6、P16和P21(D)，以及P10、P17和P18(E)的氧化还原活性的动力学。DTT用作阳性对照，而空白表示测定缓冲液。结果以相对荧光单位(Relative Fluorescent Unit，RFU)表示。在实施例部分中详细描述了该测定。

图2：肽P12和P20(A)，P10和P21(B)，P15和P18(C)，P4和P6(D)，以及P1、P3和P7(E)的HLA-DR3(DRB1*03：01)结合。降低的荧光信号(RFU)表明在与生物素标记的高亲和力对照肽竞争之后产生并通过Eu3+链霉亲和素相互作用揭示的剂量依赖性关系。

图3：在患者NMO-001(S8)、NMO-003(S11)(S，用P20刺激的数目)的CD4+ T细胞系中对P20肽具有特异性的效应细胞(CD154+)的频率。

图4：在患者NMO-001(S14)(S，用P20刺激的数目)的CD4+ T细胞系上对P20肽及其相应的短S-WT表位(AGGLYEYVFSPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：397)具有特异性的效应细胞(CD154+)的频率。

图5：在NMO-006CD4+ T细胞系(S11)(S，用P20刺激的数目)的培养物上清液中，由两个剂量的P20肽及其相应的短C-WT表位(AGGLYEYVFCPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：398)诱导的细胞因子(IL-5和IL-13)的特异性分泌。

图6：当加载有P20肽、其相应的短S-WT表位(AGGLYEYVFSPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：397)或P10无关肽的经标记自体LCL与患者NMO-001(S14)、NMO-003(S14)(S，用P20刺激的数目)的P20特异性CD4+ T细胞系共培养时，特异性LCL凋亡的百分比(ND，未确定)。

图7：当加载有两个剂量的P20肽、两个剂量的其相应的短C-WT表位(AGGLYEYVFCPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：398)，或P10无关肽的经标记自体LCL与患者NMO-001(S16)(S，用P20刺激的数目)的P20特异性CD4+ T细胞系共培养时，特异性LCL凋亡的百分比。

图8：在NMO-001和NMO-003CD4+ T细胞系(S14)(S，用P20刺激的数目)的培养物上清液中，由P20、其相应的短S-WT表位(AGGLYEYVFSPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：397)或P10无关肽诱导的裂解标志物颗粒酶B(Granzyme B，GZMB)的分泌(ND，未确定)。

图9：在NMO-006CD4+ T细胞系(S11)(S，用P20刺激的数目)的培养物上清液中，由两个剂量的P20、其相应的短C-WT表位(AGGLYEYVFCPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：398)诱导的裂解标志物颗粒酶B(GZMB)的分泌。

图10：在患者NMO-001(S7)、NMO-003(S8)(S，用P12刺激的数目)的CD4+ T细胞系上对P12肽具有特异性的效应细胞(CD154+)的频率。

图11：在患者NMO-001(S12)(S，用P12刺激的数目)的CD4+ T细胞系上对P12肽及其相应的短WT表位(KVAMVCTRKISIAKSVFYIAAKK，SEQ ID NO：399)具有特异性的效应细胞(CD154+)的频率。

图12：在NMO-003 CD4+ T细胞系(S8)(S，用P12刺激的数目)的培养物上清液中由P12诱导的细胞因子(IL-5和IL-13)的特异性分泌。

图13：当加载有P12肽、其相应的短WT表位(KVAMVCTRKISIAKSVFYIAAKK，SEQ IDNO：399)或P20无关肽的经标记自体LCL与患者NMO-001(S13)(S，用P12刺激的数目)的P12特异性CD4+ T细胞系共培养时，特异性LCL凋亡的百分比。

图14：在NMO-001 CD4+ T细胞系(S13)(S，用P12刺激的数目)的培养物上清液中，由P12、其相应的短WT表位(KVAMVCTRKISIAKSVFYIAAKK，SEQ ID NO：399)或P20无关肽诱导的裂解标志物颗粒酶B(GZMB)的分泌。

具体实施方式

将针对具体实施方案来描述本发明，但是本发明不限于此，而是仅由权利要求书来限定。权利要求书中的任何附图标记不应被解释为限制范围。仅提供以下术语或定义来帮助理解本发明。除非本文中明确定义，否则本文中使用的所有术语具有与其对于本发明领域的技术人员来说相同的含义。本文中提供的定义的范围不应被解释为小于本领域普通技术人员所理解的范围。

除非另外指明，否则对技术人员将明显的是，可以以本身已知的方式进行并且已经进行了未具体详细描述的所有方法、步骤、技术和操作。例如，再次参考标准手册、上面提及的一般背景技术以及其中引用的另一些参考文献。

除非上下文另外明确地指出，否则本文中使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种和更多个/种。当与本文中使用的方面、权利要求或实施方案相关使用时，术语“任何/任意”是指所提及的所述方面、权利要求或实施方案中任何单个(即任一)以及所有组合。

本文中使用的术语“包含/包括”和“由......构成”与“包括/包含”或“含有”同义，并且是包括性的或开放式的，而不排除另外的非记载成员、要素或方法步骤。所述术语还涵盖“基本上由......组成”和“由......组成”的实施方案。

通过端点对数值范围的列举包括在相应范围内纳入的所有数字和分数，以及所列举的端点。

当提及可测量值例如参数、量、时距(temporal duration)等时，本文中使用的术语“约/大约”意在涵盖指定值的或相对于指定值的+/-10％或更小、优选+/-5％或更小、更优选+/-1％或更小、并且还更优选+/-0.1％或更小的变化，在此范围内这样的变化适合于在所公开的发明中实施。应理解，修饰语“约/大约”所指的值本身也被具体地且优选地公开。

本文中使用的，在“用于治疗疾病的组合物”中使用的术语“用于”还应公开相应的治疗方法和相应的制剂用于制备用于治疗疾病的药物的用途。

本文中使用的术语“肽”是指包含通过肽键连接的9至200个氨基酸的氨基酸序列但其可包含非氨基酸结构、合成氨基酸或经修饰氨基酸的分子。

根据本发明的肽可包含蛋白原性和/或非蛋白原性氨基酸。所述肽可包含任何常规的20种氨基酸或其经修饰形式，或者可包含通过化学肽合成或者通过化学或酶修饰而并入的非天然存在的氨基酸。

本文中使用的术语“抗原”是指大分子，通常是蛋白质(具有或不具有多糖)，或者由包含一种或更多种半抗原并包含T细胞表位的蛋白质组合物构成的结构。

本文中使用的术语“抗原蛋白”是指包含一个或更多个T细胞表位的蛋白质。本文中使用的自身抗原或自身抗原蛋白是指存在于体内的人或动物蛋白，其在同一人或动物体内引发免疫应答。

术语“表位”是指抗原蛋白的一个或数个部分(其可定义构象表位)，其被抗体或其部分(Fab’，Fab2’等)或者在B或T细胞淋巴细胞的细胞表面处存在的受体特异性地识别并结合，并且所述B或T细胞淋巴细胞能够通过所述结合诱导免疫应答。

在本发明的上下文中，术语“T细胞表位”是指优势(dominant)、亚优势(sub-dominant)或次要(minor)的T细胞表位，即抗原蛋白的一部分，其被在T细胞或NKT细胞的细胞表面处的受体特异性地识别并结合。表位是优势、亚优势还是次要的取决于针对该表位引发的免疫反应。优势性取决于在蛋白质的所有可能的T细胞表位中这样的表位被T细胞或NKT细胞识别并能够活化它们的频率。

在本发明的上下文中，T细胞表位可以是由MHC II类分子识别并呈递至CD4+ T细胞的表位，或者可以是由CD1d分子识别并呈递至NKT细胞的表位。

由MHC II类分子识别的表位通常包含以下或由以下组成：适合于MHC II分子的沟(groove)的+/-9个氨基酸的序列。在表示T细胞表位的肽序列中，表位中的氨基酸编号为P1至P9，表位的N端氨基酸编号为P-1、P-2等，表位的C端氨基酸编号为P+1、P+2等。由MHC II类分子而非由MHC I类分子识别的肽被称为MHC II类限制性T细胞表位。

MHC II类限制性T细胞表位的鉴定是本领域公知的。通常来说，使用预测软件并且该预测软件允许鉴定抗原内针对一种或更多种期望HLA分子的表位。

在表A中示出了可使用的程序：

表A：T-表位预测工具。

然后通过使用特性计算器(表B)筛选所选择的表位，从而允许预测表位的物理化学特性，例如分子量、等电点、疏水性/亲水性、pH 7下的净电荷等。

表B：肽特性计算器。

然后测试所选择的表位的如本文中所述的HLA结合能力和CD4 T细胞活化能力。

术语“MHC”是指“主要组织相容性抗原(major histocompatibility antigen)”。在人中，MHC基因被称为HLA(“人白细胞抗原(human leukocyte antigen)”)基因。尽管没有始终遵循的惯例，但是一些文献使用HLA指代HLA蛋白分子，并且使用MHC指代编码HLA蛋白的基因。因此，当在本文中使用时，术语“MHC”和“HLA”是等同物。人中的HLA系统在小鼠中具有其等同物，即H2系统。研究最深入的HLA基因是九种所谓的经典MHC基因：HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA DQB1、HLA-DRA和HLA-DRB1。在人中，MHC分为三个区域：I、II和III类。A、B和C基因属于MHC I类，而六个D基因属于II类。MHC I类分子由包含3个结构域(α1、2和3)的单一多态链构成，该链与细胞表面处的β-2-微球蛋白缔合。II类分子由2种多态链构成，每种链包含2条链(α1和2，以及β1和2)。I类MHC分子在几乎所有的有核细胞上表达。由于HLA系统以孟德尔(Mendelian)方式遗传，因此可在给定群体的对象中区分HLA系列基因或单倍型。

因此，本发明中NMO患者的优选HLA单倍型是HLA-DRB1*03：01和HLA-DPB1*05：01，更优选HLA-DRB1*03：01。

在I类MHC分子的背景下呈递的肽片段由CD8+ T淋巴细胞(溶细胞性T淋巴细胞或CTL)识别。CD8+ T淋巴细胞经常成熟为溶细胞性效应物，其可裂解带有刺激性抗原的细胞。II类MHC分子主要在活化的淋巴细胞和抗原呈递细胞上表达。CD4+ T淋巴细胞(辅助T淋巴细胞或Th)通过识别由II类MHC分子呈递的独特肽片段而活化，该片段通常存在于抗原呈递细胞(如巨噬细胞或树突细胞)上。CD4+ T淋巴细胞增殖并分泌支持抗体介导的应答和细胞介导的应答的细胞因子，例如IL-2、IFN-γ和IL-4。

功能性HLA的特征在于内源性以及外来的、潜在的抗原肽与之结合的深结合沟。该沟的特征还在于明确限定的形状和物理化学特性。HLA I类结合位点是封闭的，因为肽末端被固定在沟的末端中。它们还参与具有保守HLA残基的氢键网络。考虑到这些限制，结合的肽的长度限制为8、9或10个残基。然而，已表明多至12个氨基酸残基的肽也能够结合HLA I类。不同HLA复合物结构的比较证实了一般的结合方式，其中肽采用相对线性、延伸的构象或者可涉及中心残基向沟外凸出。

与HLA I类结合位点相反，II类位点在两端处均开放。这允许肽从实际结合区延伸，从而在两端“悬垂(hanging out)”。因此，II类HLA可结合具有7、8或9个至超过25个氨基酸残基的可变长度的肽配体。与HLA I类类似，II类配体的亲和力由“恒定”和“可变”分量(component)确定。恒定部分同样由HLA II类沟中保守残基与结合肽的主链之间形成的氢键网络产生。然而，该氢键模式不限于肽的N端和C端残基，而是分布在整个链上。后者是重要的，因为它将复合肽的构象限制为严格的线性结合方式。这对于所有II类同种异型都是常见的。由于II类结合位点内的某些多态性位置，决定肽结合亲和力的第二分量是可变的。不同的同种异型在沟内形成不同的互补口袋，从而解释了肽的亚型依赖性选择或特异性。重要地，对II类口袋中保留的氨基酸残基的限制通常比对I类的更“柔和”。在不同的HLA II类同种异型之间，存在多得多的肽交叉反应性。适合于MHC II分子的沟的MHC II类T细胞表位的+/-9个氨基酸(即8、9或10)的序列通常编号为P1至P9。另外的表位N端氨基酸编号为P-1、P-2等，表位C端氨基酸编号为P+1、P+2等。

由CD1d分子识别的表位是指抗原蛋白的一部分，其由T淋巴细胞，特别是NKT细胞的细胞表面处的受体特异性识别并结合。由CD1d分子识别的表位通常包含以下或由以下组成：适合于CD1d分子的沟的+/-7个氨基酸的序列。通常来说，NKT细胞表位是疏水性的。CD1d分子的结构表明需要疏水性氨基酸残基占据位于CD1d槽(cleft)末端的两个疏水性口袋，并且脂肪族残基应占据槽中间的位置。因此，作为CD1d结合序列的一个一般但非限制性实例，可使用基序[FWHY]-xx-[[LMV]-xx-[FWHY](SEQ ID NO：312)或[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW](SEQ ID NO：313)，其中[FWHY]表示F、W、H或Y可占据第一锚定残基(P1)，P4位置可被I、L、M或V占据，并且P7可被F、W、H或Y占据。在该通用模型基序中，“x”代表任意氨基酸。在一个具体实施方案中，通用模型基序可由序列[FW]-xx-[ILM]-xx-[FW](SEQ ID NO：318)，优选由序列[FW]-xx-[ILM]-xx-[W](SEQ ID NO：319)所限定。

术语“NKT细胞”是指先天免疫系统的细胞，其特征在于其携带受体例如NK1.1和NKG2D且识别由CD1d分子呈递的表位的事实。在本发明的上下文中，NKT细胞可属于1型(不变的)或2型亚群，或者属于比1型或2型NKT细胞具有更多的多态T细胞受体的较少表征的NKT细胞中的任一者。已经在许多场合报道了NKT细胞参与自身免疫病中的或者针对同种因子(allofactor)或变应原的免疫应答的控制(Jahng et al Journal of experimentalMedicine 199：947-957，2004；Van Belle and von Herrath，Molecular Immunology 47：8-1 1，2009)，但其相对难以描述。在本发明的上下文中，得出了肽可由CD1d分子呈递的出乎意料的观察结果。CD1d分子的特征是由两条反平行的α链构成，形成位于由两条反平行β链构成的平台的顶部的槽。槽是窄且深的，并且仅接受疏水性残基，典型地仅视为脂质。实际上，具有疏水性残基的肽具有与CD1d槽结合的能力。此外，由于槽在两侧均是开放的，因此可容纳比7个氨基酸更长的肽。在自身抗原、同种因子和变应原中存在携带CD1d基序的疏水肽，从而赋予所述自身抗原、同种因子或变应原活化CD4+ NKT细胞的能力。通过杀伤呈递所述自身抗原、同种因子或变应原的细胞进行的直接消除消除了建立针对这些抗原/因子的免疫应答的能力。

术语“CD1d分子”是指由3条α链和反平行β链组构成的非MHC来源的分子，所述β链被布置到两侧开放并且能够将脂质、糖脂或疏水肽呈递至NKT细胞的深疏水沟中。术语“免疫病症”或“免疫疾病”是指其中免疫系统的反应负责或维持生物体中功能异常或非生理状况的疾病。

关于本发明上下文中使用的表位，本文中使用的术语“同源物”是指这样的分子，其与天然存在的表位具有至少50％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％氨基酸序列同一性，从而维持表位结合抗体或者B和/或T细胞的细胞表面受体的能力。表位的特定同源物对应于在至多三个，更特别地在至多2个，最特别地在一个氨基酸中修饰的天然表位。

关于本发明的肽，本文中使用的术语“衍生物”是指这样的分子，其包含至少肽活性部分(即氧化还原基序和能够引发溶细胞性CD4+ T细胞活性的MHC II类表位)并且除此之外还包含可具有不同的目的(例如稳定肽或改变肽的药代动力学或药效学特性)的互补部分。

本文中使用的术语两个序列的“序列同一性”涉及当比对当两个序列时，具有相同核苷酸或氨基酸的位置数除以序列中较短者的核苷酸或氨基酸数。特别地，序列同一性为在所涉及序列的整个长度上计算的70％至80％、81％至85％、86％至90％、91％至95％、96％至100％、或100％。

本文中使用的术语“肽编码多核苷酸(或核酸)”和“编码肽的多核苷酸(或核酸)”是指这样的核苷酸序列，其在适当的环境中表达时导致相关肽序列或其衍生物或同源物的产生。这样的多核苷酸或核酸包括编码该肽的正常序列，以及能够表达具有所需活性的肽的这些核酸的衍生物和片段。编码根据本发明的肽或其片段的核酸是编码源自于哺乳动物或对应于哺乳动物的肽或其片段(最特别是人肽片段)的序列。这样的多核苷酸或核酸分子可使用自动合成仪和遗传密码的公知密码子-氨基酸关系来容易地制备。可将这样的多核苷酸或核酸并入到表达载体(包括质粒)中，所述表达载体适合于在合适的宿主中表达多核苷酸或核酸并产生多肽，所述合适的宿主例如细菌(例如大肠杆菌(Escherichia coli))、酵母细胞、人细胞、动物细胞或植物细胞。对于治疗手段，编码本文中所公开的免疫原性肽的多核苷酸可以是表达系统、盒、质粒或载体系统(例如病毒和非病毒表达系统)的一部分。已知用于治疗目的的病毒载体是腺病毒、腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)、慢病毒和逆转录病毒。也可使用非病毒载体并且一些非限制性实例包括：基于转座子的载体系统，例如来源于Sleeping Beauty(SB)或PiggyBac(PB)的那些。核酸也可通过其他载体(例如但不限于纳米粒、阳离子脂质、脂质体等)递送。在一个优选实施方案中，编码肽的核酸是包含N(1)-甲基-假尿苷(m1ψ)的非免疫原性mRNA。非免疫原性mRNA的设计和合成是本领域公知的，例如在WO2018188730中。

术语“免疫病症”或“免疫疾病”是指其中免疫系统的反应负责或维持生物体中功能异常或非生理状况的疾病。免疫病症中尤其包括变应性病症和自身免疫病。

术语“自身免疫病”或“自身免疫病症”是指由于生物体无法将其自身组成部分(下至亚分子水平)识别为“自身”而引起生物体针对其自身细胞和组织的异常免疫应答所导致的疾病。疾病组可分为两类：器官特异性疾病和全身性疾病。“变应原”被定义为在易患(特别是遗传倾向的)个体(特应性)患者中引发IgE抗体的产生的物质，通常为大分子或蛋白质组合物。在Liebers et al.(1996)Clin.Exp.Allergy 26，494-516中提出了类似的定义。

本文中使用的术语“脱髓鞘”是指包围神经元轴突的髓鞘的损伤和/或退化，其结果为形成病变或斑块。应当理解，髓鞘在脑、视神经和脊髓中充当包围神经纤维的保护层。由于脱髓鞘，沿着受影响神经的信号转导受损(即减慢或停止)，并且可引起神经症状，例如感觉、运动、认知和/或其他神经功能的缺陷。患有脱髓鞘疾病的患者的具体症状将根据疾病和疾病进展状态而变化。这些可包括：视力模糊和/或视歧(double vision)、共济失调、阵挛、构音障碍、疲劳、笨拙、手麻痹、轻偏瘫、生殖器麻醉、动作失调、感觉异常、眼麻痹、肌协调受损、肌无力、感觉丧失、视力受损、神经症状、行走方式(步态)不稳定、痉挛性轻截瘫(spastic paraparesis)、失禁、听力问题、言语问题等。

因此，本文中使用的且在本领域通常使用的“脱髓鞘疾病”或“脱髓鞘病症”表示涉及损害(例如损伤)的神经系统或神经元的髓鞘的任何病理状况。脱髓鞘疾病可分为中枢神经系统脱髓鞘疾病和周围神经系统。替代地，脱髓鞘疾病可根据脱髓鞘的原因进行分类：髓鞘的损坏(脱髓鞘性髓鞘脱失(demyelinating myelinoclastic))，或异常和退化性髓鞘(脱髓鞘性脑白质营养不良(dysmyelinating leukodystrophic))。脱髓鞘疾病的一些非限制性实例是：多发性硬化(MS)-(例如，复发/缓解型多发性硬化、继发进展型多发性硬化、进展复发型多发性硬化、原发进展型多发性硬化和急性暴发性多发性硬化)、视神经脊髓炎(NMO)、视神经炎、急性播散性脑脊髓炎、巴洛病(Balo’s Disease)、HTLV-I相关脊髓病、希尔德病(Schilder’s Disease)、横贯性脊髓炎、特发性炎性脱髓鞘病、维生素B 12诱导的中枢神经系统神经病、脑桥中央髓鞘溶解、包括脊髓痨的脊髓病、脑白质营养不良例如肾上腺脑白质营养不良、白质脑病例如进行性多灶性白质脑病(Progressive multifocalleukoencephalopathy，PML)和风疹诱导的智力低下。技术人员理解的是，上述注释中的数种是表示疾病组的通用分类名称，所述疾病的特征在于在分子水平上的相同或类似的异常过程组和/或者相同或类似的(临床)症状组。患有脱髓鞘病症的人患者可具有脱髓鞘病症的一种或更多种症状，例如但不限于视力受损、麻木、四肢无力、震颤或痉挛、热不耐受、言语障碍、失禁、头晕或本体感觉(例如，平衡、协调、肢体位置感觉)受损。出于该方法的目的，具有脱髓鞘病症家族史(例如，脱髓鞘病症的遗传倾向)或者表现出上述脱髓鞘病症的轻度或罕见症状的人(例如，人患者)，可被认为处于发生脱髓鞘病症(例如，多发性硬化)的风险中。在本公开内容的上下文中，优选的脱髓鞘疾病是由AQP4自身抗原引起的或涉及抗AQP4抗体(定义为“抗AQP4疾病”)的那些，其包括但不限于视神经脊髓炎(NMO)或NMOSD。

抗AQP4自身抗体已在患有多重病症的患者中鉴定了，所述多重病症也称为“NMO谱系病症”(NMOSD或NMSD)、“抗AQP4疾病”或“自身免疫性水通道蛋白-4离子通道病(autoimmune aquaporin-4 channelopathy)”，这些可在本文中互换使用。这样的疾病的谱系实质上包含与对象中抗AQP4自身抗体的存在相关的所有疾病或病症。一些实例是：德维克病，例如涵盖纵向广泛性(横贯性)脊髓炎的单一或复发事件以及双侧同时的或复发性视神经炎的德维克病；视脊髓MS(OSMS)，其先前被认为是MS的亚型，涵盖如在MS中的脑病变，但是是AQP4阳性的；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；与全身性自身免疫病和较高AQP4自身抗体水平相关的视神经炎；与特定脑区域(例如下丘脑、室周核和脑干)中的病变相关的视神经炎或脊髓炎；肿瘤样脱髓鞘，其涵盖肿瘤样病变。德维克病目前被认为是一种综合征而不只是一种疾病，其以视脊髓MS的形式表现出与广谱多发性硬化重叠。

本文中“具有B细胞耗竭活性的抗体”或“B细胞耗竭抗体”是与B细胞标志物结合的抗体或片段，其在施用之后导致显著的B细胞耗竭(即循环B细胞水平的降低或抑制)。这样的耗竭可通过多种机制实现，所述多种机制例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(complement dependent cytotoxicity，CDC)、抑制B细胞增殖和/或诱导B细胞死亡(例如，通过凋亡)。优选地，这样的抗体在施用之后，通常在约数天或更短时间内，将导致B细胞数目耗竭约50％或更多。在一个优选实施方案中，B细胞耗竭抗体将是利妥昔单抗或优利妥昔单抗(嵌合抗CD20抗体)或具有基本相同或更大细胞耗竭活性的抗体。在另一个优选实施方案中，B细胞耗竭抗体将是伊奈利珠单抗(嵌合抗CD19抗体)或具有基本相同或更大细胞耗竭活性的抗体。

本文中“B细胞表面标志物”是在B细胞表面上表达的抗原，其可被与其结合的拮抗剂靶向。示例性的B细胞表面标志物包括：

CD10，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD37，CD53，CD72，CD73，CD74，CDw75，CDw76，CD77，CDw78，CD79a，CD79b，CD80(B7.1)，CD81，CD82，CD83，CDw84，CD85和CD86(B7.2)白细胞表面标志物。

与哺乳动物的另一些非B细胞组织相比，特别感兴趣的B细胞表面标志物优先在B细胞上表达，并且可以在前体B细胞和成熟B细胞二者上表达。在一个实施方案中，标志物是这样的标志物，如CD20或CD19，其存在于从干细胞阶段直至恰好终末分化为浆细胞之前时的整个谱系分化过程中的B细胞上。本文中优选的B细胞表面标志物是CD19或CD20。

“CD20”抗原是35kDa非糖基化磷蛋白，其存在于多于90％的来自外周血或淋巴器官的B细胞的表面上。CD20在早期前-B细胞发育期间表达并保持直至浆细胞分化。CD20存在于正常B细胞和恶性B细胞二者上。

文献中CD20的另一些名称包括“B淋巴细胞限制性抗原”和“Bp35”。CD20抗原描述于Clark et al.PNAS(USA)82：1766(1985)中。

“CD19”抗原是指例如由HD237-CD19或B4抗体识别的90kDa抗原(Kiesel etal.Leukemia Research Il，12：1119(1987))。与CD20一样，CD19存在于从干细胞阶段直至恰好终末分化为浆细胞之前时的整个谱系分化过程中的细胞上。拮抗剂与CD19的结合可引起CD19抗原的内化。

用B细胞耗竭抗体的治疗

一种或更多种包含B细胞耗竭抗体的组合物将以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。如前所述，根据本发明的B细胞耗竭抗体和免疫原性肽、多核苷酸或细胞可以在同一制剂中或在不同制剂中。这些制剂可以分开或同时以及按任一顺序施用。

优选地，对B细胞抗原靶标(例如CD20或CD19)具有特异性的B细胞耗竭抗体将与根据本发明的免疫原性肽、多核苷酸或细胞分开施用。甚至更优选地，B细胞耗竭抗体将在根据本发明的免疫原性肽、多核苷酸或细胞之前施用。仅作为一个实例，B细胞耗竭抗体的典型施用方案是每6个月一个剂量。

作为一般建议，每剂量经肠胃外施用的抗体的治疗有效量将通常为约0.1至500mg/kg患者体重/天，其中所用拮抗剂的典型初始范围为约2至100mg/kg。

优选的B细胞耗竭抗体是利妥昔单抗。用于这样的抗体的合适剂量为例如约20mg/m2至约1000mg/m2。

抗体的剂量可以与目前建议的利妥昔单抗用于治疗非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)的剂量相同或不同。例如，可以向患者施用一个或更多个剂量的基本上小于375mg/m2的抗体，例如其中该剂量为约20mg/m2至约250mg2，例如约50mg/m2至约200mg/m2。

此外，可以施用一个或更多个初始剂量的抗体，随后是一个或更多个后续剂量，其中后续剂量中抗体的mg/m2剂量超过初始剂量中抗体的mg/m2剂量。

例如，初始剂量可以为约20mg/m2至约250mg/m2(例如，约50mg/m2至约200mg/m2)且后续剂量可以为约250mg/m2至约1000mg/m2。

然而，如上所述，这些建议的抗体量以大量治疗判断为准。所获得的结果是选择合适的剂量和方案的关键因素。

抗体通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内，以及病灶内(如果期望进行局部免疫抑制治疗的话)施用。肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。另外，抗体可以适当地通过例如抗体剂量逐渐降低的脉冲输注施用。优选地，给药通过注射给予，最优选静脉内或皮下注射，这部分地取决于施用是短暂的还是长期的。

术语“视神经脊髓炎”或“NMO”，也称为“德维克病”，是指其中白细胞和抗体主要攻击视神经和脊髓但也可攻击脑的自身免疫病症(在Wingerchuk 2006，Int MS J.2006May；13(2)：42-50中进行了综述)。视神经的损伤产生引起疼痛和视力丧失的肿胀和炎症；脊髓的损伤引起腿或臂的无力或瘫痪、感觉丧失、以及膀胱和肠功能的问题。NMO是复发缓解型疾病。在复发期间，视神经和/或脊髓的新的损伤可导致累积性残疾。与MS不同，没有该疾病的进展期。因此，预防攻击对于良好的长期结局至关重要。在与抗AQP4抗体相关的情况下，认为抗AQP4抗体可触发对髓鞘的攻击，引起脱髓鞘。在大多数情况下，NMO的原因是由于对自身抗原的特异性攻击。多至三分之一的对象可对针对称为水通道蛋白-4(AQP4)的髓鞘组分的自身抗体呈阳性。患有抗AQP4相关NMO的患者类似地可具有横贯性脊髓炎和视神经炎的发作。

术语“治疗有效量”是指在患者中产生期望的治疗或预防作用的本发明的肽或其衍生物的量。例如，关于疾病或病症，其是在一定程度上减少该疾病或病症的一种或更多种症状的量，并且更特别地是使与该疾病或病症相关或引起该疾病或病症的生理或生化参数部分或完全地恢复正常的量。通常来说，治疗有效量是将导致正常生理状况的改善或恢复的本发明的肽或其衍生物的量。例如，当用于治疗性治疗受免疫病症影响的哺乳动物时，其为每日量肽/所述哺乳动物的kg体重。或者，在通过基因治疗施用的情况下，调节裸DNA或病毒载体的量以确保局部产生本发明的肽、其衍生物或同源物的相关剂量。

当涉及肽时，术语“天然”涉及以下事实：序列与天然存在蛋白质(野生型或突变体)的片段相同。与此相反，术语“人工”是指其本身在自然界中不存在的序列。人工序列通过有限的修饰，例如在天然存在序列内改变/缺失/插入一个或更多个氨基酸或者通过添加/去除天然存在序列的N端或C端氨基酸而从天然序列获得。

还设想的是用如本文中所限定的免疫原性肽与另外的活性成分或者当前和未来治疗方法或策略相组合的组合治疗，所述治疗方法或策略用于减轻疾病的症状或其发作和复发或者用于预防发作和复发。这些包括但不限于：施用皮质类固醇、免疫抑制剂或富马酸酯。

术语“氧化还原酶基序”、“巯基-氧化还原酶基序”、“硫还原酶基序”、“硫氧化还原基序”或“氧化还原基序”在此作为同义术语使用，并且是指通用序列硫还原酶序列基序C-X_n-[CST]-或[CST]-X_n-C-的基序，其中n是0至6的整数。这样的肽基序通过以下保守活性结构域共有序列内的氧化还原活性半胱氨酸对蛋白质(例如酶)上的二硫键发挥还原活性：C-X_n-[CST]-或[CST]-X_n-C-，例如如CXXC(SEQ ID NO：222)，C-XX-S(SEQ ID NO：223)，C-XX-T(SEQ ID NO：224)，S-XX-C(SEQ ID NO：225)，T-XX-C(SEQ ID NO：226)中(Fomenko et al.(2003)Biochemistry 42，11214-11225)，其中“X”代表任意氨基酸，其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，以及X代表除酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸之外的任意氨基酸。

当根据本文中所公开的氧化还原酶基序中存在的氨基酸残基使用时，术语“半胱氨酸”(“C”)、“丝氨酸”(“S”)和“苏氨酸”(“T”)分别是指天然存在的半胱氨酸、丝氨酸或苏氨酸氨基酸。除非明确不同地说明，否则所述术语因此不包括经化学修饰的半胱氨酸、丝氨酸和苏氨酸，例如经修饰以在基序的氨基酸残基的N端酰胺上或在C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基的那些。

在其另一个实施方案中，所述氧化还原酶基序位于T细胞表位的N端。

替代地，免疫原性肽可包含以下通用氨基酸式形式的氧化还原酶基序：Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，其中n是选自0至6的整数，其中m是选自0至3的整数，其中X是任意氨基酸，其中Z是任意氨基酸，其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸。

优选地，所述氧化还原酶基序不是标准C-XX-[CST]或[CST]-XX-C氧化还原酶基序的重复的一部分，例如可通过一个或更多个氨基酸彼此间隔的所述基序的重复(例如，CXXCX CXXC X CXXC(SEQ ID NO：227))、如彼此相邻的重复(CXXCCXXCCXXC(SEQ ID NO：228))或者如彼此重叠的重复CXXCXXCXXC(SEQ ID NO：229)或CXCCXCCXCC(SEQ ID NO：230))，尤其当n是0或1并且m是0时。

因此，由此设想的是Z_m-[CST]-C-或Z_m-C-[CST]-形式的基序，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。这样的基序的一些非限制性优选实例是：

KCC，KKCC(SEQ ID NO：231)，RCC，RRCC(SEQ ID NO：232)，RKCC(SEQ ID NO：233)，或KRCC(SEQ ID NO：234)。

还设想的是Z_m-[CST]-X-C-或Z_m-C-X-[CST]-形式的基序，其中X是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。这样的基序的一些非限制性优选实例是：

KCXC(SEQ ID NO：235)，KKCXC(SEQ ID NO：236)，RCXC(SEQ ID NO：237)，RRCXC(SEQ ID NO：238)，RKCXC(SEQ ID NO：239)，KRCXC(SEQ ID NO：240)，KCKC(SEQ ID NO：241)，KKCKC(SEQ ID NO：242)，KCRC(SEQ ID NO：243)，KKCRC(SEQ ID NO：244)，RCRC(SEQID NO：245)，RRCRC(SEQ ID NO：246)，RKCKC(SEQ ID NO：247)，KRCKC(SEQ ID NO：248)，RCKC(SEQ ID NO：249)，HCRC(SEQ ID NO：320)或KHCRC(SEQ ID NO：321)。

还设想的是Z_m-[CST]-XX-C-或Z_m-C-XX-[CST]-形式的基序。在这些基序中，内部X¹X²氨基酸偶联物位于氧化还原酶基序内，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。X¹和X²各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹和X²是除C、S或T之外的任意氨基酸。在另一个实例中，所述基序中的X¹或X²中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。在基序的另一个实例中，所述基序中的X¹或X²中的至少一者是P或Y。氧化还原酶基序内的内部X¹X²氨基酸偶联物的一些具体非限制性实例是PY，HY，KY，RY，PH，PK，PR，HG，KG，RG，HH，HK，HR，GP，HP，KP，RP，GH，GK，GR，GH，KH，和RH。这种形式的特别优选的基序是CPYC，HCPYC，KHCPYC，KCPYC，RCPYC，KKCPYC，KRCPYC，CHGC，HCGHC，KCGHC，KHCGHC，RCGHC，KKCGHC，和KRCGHC(SEQ ID NO：157至170)。

还设想的是Z_m-[CST]-XXX-C-或Z_m-C-XXX-[CST]-形式的基序，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³氨基酸段，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。在某些实例中，X¹、X²和X³各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹、X²和X³是除C、S或T之外的任意氨基酸。在一个具体实施方案中，所述基序中的X¹、X²或X³中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的一些具体实例是：XPY、PXY和PYX，其中X可以是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸例如K、R或H或者非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。一些非限制性实例包括：

KPY，RPY，HPY，GPY，APY，VPY，LPY，IPY，MPY，FPY，WPY，PPY，SPY，TPY，CPY，YPY，NPY，QPY，DPY，EPY，KPY，PKY，PRY，PHY，PGY，PAY，PVY，PLY，PIY，PMY，PFY，PWY，PPY，PSY，PTY，PCY，PYY，PNY，PQY，PDY，PEY，PLY，PYK，PYR，PYH，PYG，PYA，PYV，PYL，PYI，PYM，PYF，PYW，PYP，PYS，PYT，PYC，PYY，PYN，PYQ，PYD，或PYE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的一些替代实例是XHG、HXG和HGX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KHG，RHG，HHG，GHG，AHG，VHG，LHG，IHG，MHG，FHG，WHG，PHG，SHG，THG，CHG，YHG，NHG，QHG，DHG，EHG，and KHG，HKG，HRG，HHG，HGG，HAG，HVG，HLG，HIG，HMG，HFG，HWG，HPG，HSG，HTG，HCG，HYG，HNG，HQG，HDG，HEG，HLG，HGK，HGR，HGH，HGG，HGA，HGV，HGL，HGI，HGM，HGF，HGW，HGP，HGS，HGT，HGC，HGY，HGN，HGQ，HGD，或HGE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的又一些替代实例是XGP、GXP和GPX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KGP，RGP，HGP，GGP，AGP，VGP，LGP，IGP，MGP，FGP，WGP，PGP，SGP，TGP，CGP，YGP，NGP，QGP，DGP，EGP，KGP，GKP，GRP，GHP，GGP，GAP，GVP，GLP，GIP，GMP，GFP，GWP，GPP，GSP，GTP，GCP，GYP，GNP，GQP，GDP，GEP，GLP，GPK，GPR，GPH，GPG，GPA，GPV，GPL，GPI，GPM，GPF，GPW，GPP，GPS，GPT，GPC，GPY，GPN，GPQ，GPD，或GPE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的又一些替代实例是XGH、GXH和GHX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KGH，RGH，HGH，GGH，AGH，VGH，LGH，IGH，MGH，FGH，WGH，PGH，SGH，TGH，CGH，YGH，NGH，QGH，DGH，EGH，KGH，GKH，GRH，GHH，GGH，GAH，GVH，GLH，GIH，GMH，GFH，GWH，GPH，GSH，GTH，GCH，GYH，GNH，GQH，GDH，GEH，GLH，GHK，GHR，GHH，GHG，GHA，GHV，GHL，GHI，GHM，GHF，GHW，GHP，GHS，GHT，GHC，GHY，GHN，GHQ，GHD，或GHE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的又一些替代实例是XGF、GXF和GFX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KGF，RGF，HGF，GGF，AGF，VGF，LGF，IGF，MGF，FGF，WGF，PGF，SGF，TGF，CGF，YGF，NGF，QGF，DGF，EGF，和KGF，GKF，GRF，GHF，GGF，GAF，GVF，GLF，GIF，GMF，GFF，GWF，GPF，GSF，GTF，GCF，GYF，GNF，GQF，GDF，GEF，GLF，GFK，GFR，GFH，GFG，GFA，GFV，GFL，GFI，GFM，GFF，GFW，GFP，GFS，GFT，GFC，GFY，GFN，GFQ，GFD，或GFE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的又一些替代实例是XRL、RXL和RLX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KRL，RRL，HRL，GRL，ARL，VRL，LRL，IRL，MRL，FRL，WRL，PRL，SRL，TRL，CRL，YRL，NRL，QRLRL，DRL，ERL，KRL，GKF，GRF，GHF，GGF，GAF，GVF，GLF，GIF，GMF，GFF，GWF，GPF，GSF，GTF，GCF，GYF，GNF，GQF，GDF，GEF，和GLF，RLK，RLR，RLH，RLG，RLA，RLV，RLL，RLI，RLM，RLF，RLW，RLP，RLS，RLT，RLC，RLY，RLN，RLQ，RLD，或RLE。

氧化还原酶基序内的内部X¹X²X³氨基酸段的又一些替代实例是XHP、HXP和HPX，其中X可以是任意氨基酸，例如呈：

KHP，RHP，HHP，GHP，AHP，VHP，LHP，IHP，MHP，FHP，WHP，PHP，SHP，THP，CHP，YHP，NHP，QHP，DHP，EHP，KHP，HKP，HRP，HHP，HGP，HAF，HVF，HLF，HIF，HMF，HFF，HWF，HPF，HSF，HTF，HCF，HYP，HNF，HQF，HDF，HEF，HLP，HPK，HPR，HPH，HPG，HPA，HPV，HPL，HPI，HPM，HPF，HPW，HPP，HPS，HPT，HPC，HPY，HPN，HPQ，HPD，或HPE。

一些特别优选的实例是：

CRPYC(SEQ ID NO：250)，KCRPYC(SEQ ID NO：251)，KHCRPYC(SEQ ID NO：252)，RCRPYC(SEQ ID NO：253)，HCRPYC(SEQ ID NO：254)，CPRYC(SEQ ID NO：255)，KCPRYC(SEQID NO：256)，RCPRYC(SEQ ID NO：257)，HCPRYC(SEQ ID NO：258)，CPYRC(SEQ ID NO：259)，KCPYRC(SEQ ID NO：260)，RCPYRC(SEQ ID NO：261)，HCPYRC(SEQ ID NO：262)，CKPYC(SEQID NO：263)，KCKPYC(SEQ ID NO：264)，RCKPYC(SEQ ID NO：265)，HCKPYC(SEQ ID NO：266)，CPKYC(SEQ ID NO：267)，KCPKYC(SEQ ID NO：268)，RCPKYC(SEQ ID NO：269)，HCPKYC(SEQID NO：270)，CPYKC(SEQ ID NO：271)，KCPYKC(SEQ ID NO：272)，RCPYKC(SEQ ID NO：273)，和HCPYKC(SEQ ID NO：274)。

还设想的是Z_m-[CST]-XXXX-C-或Z_m-C-XXXX-[CST]-形式的基序，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴(SEQ ID NO：275)氨基酸段，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。X¹、X²、X³和X⁴各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹、X²、X³和X⁴是除C、S或T之外的任意氨基酸。在某些非限制性实例中，所述基序中的X¹、X²、X³或X⁴中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。一些具体实例包括LAVL(SEQ ID NO：276)、TVQA(SEQ ID NO：277)或GAVH(SEQ ID NO：278)及其变体，例如：

X¹AVL，LX²VL，LAX³L，或LAVX⁴；X¹VQA，TX²QA，TVX³A，或TVQX⁴；X¹AVH，GX²VH，GAX³H，或GAVX⁴(对应于SEQ ID NO：279至290)；

其中X¹、X²、X³和X⁴各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。

还设想的是Z_m-[CST]-XXXXX-C-或Z_m-C-XXXXX-[CST]-形式的基序，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴X⁵(SEQ ID NO：291)氨基酸段，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。X¹、X²、X³、X⁴和X⁵各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹、X²、X³、X⁴和X⁵是除C、S或T之外的任意氨基酸。在某些实例中，所述基序中的X¹、X²、X³、X⁴或X⁵中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。一些具体实例包括PAFPL(SEQ ID NO：292)或DQGGE(SEQ ID NO：293)及其变体，例如：

X¹AFPL，PX²FPL，PAX³PL，PAFX⁴L，或PAFPX⁵；X¹QGGE，DX²GGE，DQX³GE，DQGX⁴E，或DQGGX⁵(对应于SEQ ID NO：294至303)，

其中X¹、X²、X³、X⁴和X⁵各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然氨基酸。

还设想的是如方面1中所限定的Z_m-[CST]-XXXXXX-C-或Z_m-C-XXXXXX-[CST]-形式的基序，其中n是6，从而在氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³X⁴X⁵X⁶(SEQ ID NO：304)氨基酸段，其中m是选自0至3的整数，其中Z是任意氨基酸，优选是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。优选的是其中m是1或2并且Z是选自以下的碱性氨基酸的基序：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H。X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶是除C、S或T之外的任意氨基酸。在某些实例中，所述基序中的X¹、X²、X³、X⁴、X⁵或X⁶中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。一些具体实例包括DIADKY(SEQ ID NO：305)或其变体，例如：X¹IADKY，DX²ADKY，DIX³DKY，DIAX⁴KY，DIADX⁵Y，或DIADKX⁶(对应于SEQ ID NO：306至311)，其中X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。

还设想的是Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-形式的基序，其中n是0至6并且其中m是0(即[CST]-X_n-C-或C-X_n-[CST]-)，并且其中C或[CST]残基之一已被修饰以在基序的氨基酸残基的N端酰胺上或在C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基。在这样的基序的一些优选实施方案中，n是2并且m是0，其中内部X¹X²各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X¹和X²是除C、S或T之外的任意氨基酸。在另一个实例中，所述基序中的X¹或X²中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。在基序的另一个实例中，所述基序中的X¹或X²中的至少一者是P或Y。氧化还原酶基序内的内部X¹X²氨基酸偶联物的一些具体非限制性实例是：PY，HY，KY，RY，PH，PK，PR，HG，KG，RG，HH，HK，HR，GP，HP，KP，RP，GH，GK，GR，GH，KH，和RH。优选地，所述修饰导致基序中第一半胱氨酸的N端乙酰化(N-乙酰基-半胱氨酸)。

上述免疫原性肽中的氧化还原基序紧邻于免疫原性肽内的T细胞表位序列放置，或者通过接头序列(“接头”)与T细胞表位隔开。更特别地，接头包含7个氨基酸或更少的氨基酸序列。最特别地，接头包含1、2、3或4、5、6或7个氨基酸。所述接头可涵盖侧接天然AQP4氨基酸序列中的表位的氨基酸，或者可与这些氨基酸不同。

另外，免疫原性肽可以在表位序列之后(在其C端)具有侧翼序列(“侧翼”)。更特别地，侧翼包含7个氨基酸或更少的氨基酸序列。最特别地，接头包含1、2、3或4、5、6或7个氨基酸。所述侧翼可涵盖侧接天然AQP4氨基酸序列中的表位的氨基酸，或者可与这些氨基酸不同。

接头和/或侧翼序列的序列可对作为整体的免疫原性肽的免疫原性具有影响。

术语水通道蛋白-4或AQP4是指由水通道蛋白基因编码的人蛋白质。本文中使用的术语AQP4(蛋白)或水通道蛋白-4由对应于NCBI基因361和UniProtKB标识符P55087(AQP4_HUMAN)的氨基酸序列(SEQ ID NO：136)所限定：

水通道蛋白-4(AQP4)是脑中最丰富的分子之一，并且在血脑和脑液界面(brain-liquor interface)处的星形胶质膜中特别普遍。虽然AQP4参与许多病理生理过程，但其在脑生理学中的作用仍然难以捉摸。直到最近才有累积的证据表明AQP4参与这样的不同功能，如调节胞外空间体积、钾缓冲、脑脊液循环、组织间液再吸收、废物清除、神经炎症、渗透感觉(osmosensation)、细胞迁移和Ca2+信号传导。AQP4对于视网膜、内耳和嗅觉系统的正常功能也是必需的。将提供有关AQP4在脑中的生理作用和越来越多的强调星形胶质细胞极化性质的数据列表的综述(Nagelhus and Ottersen，Physiol Rev.2013 Oct；93(4)：1543-1562)。

在本文中，氨基酸以其全称、其三字母缩写或其单字母缩写来提及。

氨基酸序列的基序在本文中根据Prosite的格式书写。基序用于描述在序列的特定部分处的某个序列变化。符号X用于其中接受任意氨基酸的位置。通过在方括号(“[]”)之间列出给定位置的可接受氨基酸来指明替代项。例如：[CST]代表选自Cys、Ser或Thr的氨基酸。被排除作为替代项的氨基酸通过在波形括号(“{}”)之间将它们列出来指明。例如：{AM}代表除Ala和Met之外的任意氨基酸。基序中的不同要素任选地由连字符(-)彼此隔开。在本说明书中所公开的基序的上下文中，所公开的通用氧化还原酶基序通常伴有连字符而不与基序外的不同要素形成连接。这些“开放的”连字符指示基序与免疫原性肽的另一部分例如接头序列或表位序列的物理连接的位置。例如，“Z_m-C-X_n-[CST]-”形式的基序指示[CST]是与免疫原性肽的其它部分连接的氨基酸，并且Z是免疫原性肽的末端氨基酸。优选的物理连接是肽键。基序内相同要素的重复可通过在该要素后放置圆括号之间的数值或数值范围来指明。例如在该方面中，“X_n”指的是n个“X”。X(2)对应于X-X或XX；X(2，5)对应于2、3、4或5个X氨基酸，A(3)对应于A-A-A或AAA。为了区分氨基酸，氧化还原酶基序之外的那些可被称为外部氨基酸，氧化还原基序内的那些被称为内部氨基酸。除非另有说明，否则X表示任意氨基酸，特别是L-氨基酸，更特别是20种天然存在的L-氨基酸中的一种。

具有还原活性的包含AQP4的T细胞表位和经修饰的肽基序序列的本文中所公开的任一种肽能够产生针对抗原呈递细胞的抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞群或NKT细胞群。T细胞表位可以是长度通常为9个氨基酸的MHC II类表位或长度通常为7个氨基酸的NKT细胞表位。

因此，在其最广泛的意义上，本发明涉及包含具有触发免疫反应的潜力的AQP4的至少一种T细胞表位、以及对肽二硫键具有还原活性的经修饰氧化还原酶序列基序的肽。T细胞表位和经修饰氧化还原酶基序序列可在肽中彼此紧邻或任选地被一个或更多个氨基酸(所谓的接头序列)隔开。

任选地，该肽另外地包含内体靶向序列和/或另外的“侧翼”序列。

本发明的肽包含具有触发免疫反应潜力的AQP4的MHC II类T细胞表位或NKT细胞表位、以及经修饰氧化还原酶基序。肽中基序序列的还原活性可针对例如在胰岛素溶解度测定(其中胰岛素的溶解度在还原之后改变)中其还原巯基的能力来测定，或者用经荧光标记的底物(例如胰岛素)来测定。这样的测定的一个实例使用荧光肽，并在Tomazzolli etal.(2006)Anal.Biochem.350，105-112中描述。当带有FITC标记的两个肽通过二硫桥彼此共价连接时，它们会自猝灭。在被根据本发明的肽还原之后，被还原的单独肽再次变为具有荧光。

经修饰氧化还原酶基序可位于T细胞表位的氨基端侧或T细胞表位的羧基端处。

如进一步详细说明的，本发明的肽可通过化学合成来制备，其允许并入非天然氨基酸。因此，在以上记载的氧化还原酶基序中“C”代表半胱氨酸或具有巯基的另一种氨基酸，例如巯基缬氨酸(mercaptovaline)、高半胱氨酸或者其他具有巯基官能团的天然或非天然氨基酸。为了具有还原活性，存在于经修饰氧化还原酶基序中的半胱氨酸不应作为胱氨酸二硫桥的一部分出现。X可以是20种天然氨基酸中的任一种，包括S、C或T，或者可以是非天然氨基酸。在一些具体实施方案中，X是具有小侧链的氨基酸，例如Gly、Ala、Ser或Thr。在另一些具体实施方案中，X不是具有大侧链的氨基酸，例如Trp。在另一些具体实施方案中，X不是半胱氨酸。在另一些具体实施方案中，在经修饰氧化还原酶基序中的至少一个X是His。在另外的另一些具体实施方案中，在经修饰氧化还原酶中的至少一个X是Pro。

肽还可包含修饰以提高稳定性或溶解性，例如N端NH₂基团或C端COOH基团的修饰(例如，将COOH修饰成CONH₂基团)。

在包含经修饰氧化还原酶基序的本发明的肽中，对基序进行定位以使得当表位适合于MHC或CD1d沟时，基序保留在MHC或CD1d结合沟的外部。经修饰氧化还原酶基序置于紧邻肽内的表位序列[换言之，基序与表位之间的接头序列为零个氨基酸]，或者通过包含7个氨基酸或更少的氨基酸序列的接头与T细胞表位隔开。更特别地，接头包含1、2、3、4、5、6或7个氨基酸。一些具体实施方案是在表位序列与经修饰氧化还原酶基序序列之间具有0、1、2或3个氨基酸接头的肽。在其中经修饰氧化还原酶基序序列与表位序列相邻的那些肽中，这表示为与表位序列相比的第P-4位至第P-1位或第P+1位至第P+4位。除肽接头之外，其他有机化合物也可用作接头，以将肽的部分(例如，经修饰氧化还原酶基序序列与T细胞表位序列)彼此连接。

本发明的肽还可在包含T细胞表位和经修饰氧化还原酶基序的序列的N端或C端包含另外的短氨基酸序列。这样的氨基酸序列在本文中通常被称为“侧翼序列”。侧翼序列可位于表位与内体靶向序列之间和/或经修饰氧化还原酶基序与内体靶向序列之间。在某些不包含内体靶向序列的肽中，短氨基酸序列可在肽中经修饰氧化还原酶基序和/或表位序列的N端和/或C端存在。更特别地，侧翼序列是1至7个氨基酸的序列，最特别是1、2或3个氨基酸的序列。

优选地，氧化还原酶基序中的Z对应于免疫原性肽的N端或C端末端。

经修饰氧化还原酶基序可位于表位的N端。

在本发明的某些实施方案中，提供了包含一个表位序列和经修饰氧化还原酶基序序列的肽。在另一些具体实施方案中，经修饰氧化还原酶基序在肽中出现数次(1、2、3、4或甚至更多次)，例如作为可通过一个或更多个氨基酸彼此间隔的经修饰氧化还原酶基序的重复，或者作为彼此紧邻的重复。替代地，在T细胞表位序列的N端和C端二者均提供一个或更多个经修饰氧化还原酶基序。

针对本发明的肽设想的其他变化形式包含含有T细胞表位序列的重复的肽，其中每个表位序列在经修饰氧化还原酶基序之前和/或之后(例如“经修饰氧化还原酶基序-表位”的重复或“经修饰氧化还原酶基序-表位-经修饰氧化还原酶基序”的重复)。在本文中，经修饰氧化还原酶基序可都具有相同的序列，但这不是必须的。应注意，包含其本身包含经修饰氧化还原酶基序的表位的肽的重复序列还将导致序列包含“表位”和“经修饰氧化还原酶基序”二者。在这样的肽中，在一个表位序列内的经修饰氧化还原酶基序作为在第二个表位序列外的经修饰氧化还原酶基序发挥作用。

通常来说，本发明的肽仅包含一个T细胞表位。如下所述，可通过功能测定和/或二氧化硅预测测定中的一个或更多个来鉴定蛋白质序列中的T细胞表位。T细胞表位序列中的氨基酸根据其在MHC蛋白的结合沟中的位置来编号。存在于肽中的T细胞表位由8至25个氨基酸，但更特别地8至16个氨基酸组成，但最特别地由8、9、10、11、12、13、14、15或16个氨基酸组成。

在一个更具体实施方案中，T细胞表位由9个氨基酸的序列组成。在另一个具体实施方案中，T细胞表位是由MHC II类分子呈递至T细胞的表位[MHC II类限制性T细胞表位]。在一个替代实施方案中，T细胞表位是由CD1d分子呈递至T细胞的NKT细胞表位[NKT细胞特异性表位]。通常来说，T细胞表位序列是指适合MHC II蛋白或CD1d蛋白的槽的八肽或更特别地是九肽序列。

本发明的肽的T细胞表位可对应于蛋白质的天然表位序列，或者可以是其经修饰形式，前提是：与天然T细胞表位序列类似，经修饰T细胞表位保留其在MHC或CD1d槽内结合的能力。经修饰T细胞表位可具有与天然表位相同的对MHC或CD1d蛋白的结合亲和力，但也可具有降低的亲和力。特别地，经修饰肽的结合亲和力是原始肽的不少于10倍小，更特别地是不少于5倍小。本发明的肽对蛋白质复合物具有稳定作用。因此，肽-MHC/CD1d复合物的稳定作用补偿了经修饰表位对MHC或CD1d分子的降低的亲和力。

肽内包含T细胞表位和还原性化合物的序列可进一步与促进肽被摄取到晚期内体中以进行加工并在MHC II类或CD1d决定簇中呈递的氨基酸序列(或另一种有机化合物)连接。晚期内体靶向是由存在于蛋白质的胞质尾中的信号介导的，并且对应于公认的肽基序。晚期内体靶向是由存在于蛋白质的胞质尾中的信号介导的，并且对应于公认的肽基序，例如基于双亮氨酸的[DE]XXXL[LI](SEQ ID NO：312)或DXXLL基序(SEQ ID NO：313)(例如DXXXLL，SEQ ID NO 314))、基于酪氨酸的YXX0基序或所谓的酸性簇基序(SEQ ID NO：315)。符号0表示具有大疏水性侧链的氨基酸残基，例如Phe、Tyr和Trp。晚期内体靶向序列允许对抗原来源的T细胞表位进行加工并通过MHC II类或CD1d分子有效呈递。这样的内体靶向序列包含在例如gp75蛋白(Vijayasaradhi et al.(1995)J.Cell.Biol.130，807-820)、人CD3γ蛋白、HLA-BM 11(Copier et al.(1996)J.lmmunol.157，1017-1027)、DEC205受体胞质尾(Mahnke et al.(2000)J.Cell Biol.151，673-683)内。在Bonifacio and Traub(2003)Annu.Rev.Biochem.72，395-447的综述中公开了作为内体的分拣信号发挥作用的肽的另一些实例。替代地，该序列可以是来自蛋白质的亚优势或次要T细胞表位的序列，其促进晚期内体中的摄取但未克服针对抗原的T细胞应答。晚期内体靶向序列可位于抗原来源肽的氨基端或羧基端末端处，以用于有效摄取和加工，并且也可通过侧翼序列，例如多至10个氨基酸的肽序列偶联。当出于靶向目的使用次要T细胞表位时，后者通常位于抗原来源肽的氨基端末端处。

因此，本发明设想了抗原蛋白的肽及其在引发特异性免疫反应中的用途。这些肽可对应于在其序列内包含即被至多10个，优选7个氨基酸或更少的氨基酸隔开的还原性化合物和T细胞表位的蛋白质片段。替代地，并且对于大多数抗原蛋白，本发明的肽是通过将还原性化合物，更特别地如本文中所述的还原性经修饰氧化还原酶基序与抗原蛋白的T细胞表位在N端或C端偶联(与其直接相邻或用至多10个、更特别地至多7个氨基酸的接头)而产生的。此外，与天然存在的序列相比，可对蛋白质的T细胞表位序列和/或经修饰氧化还原酶基序进行修饰和/或可引入一个或更多个侧翼序列和/或靶向序列(或对其进行修饰)。因此，取决于本发明的特征是否可存在于目的抗原蛋白的序列内，本发明的肽可包含“人工的”或“天然存在的”序列。

当提及肽时，术语“天然”涉及序列与天然存在蛋白质(野生型或突变体)的片段相同的事实。与此相反，术语“人工”是指其本身在自然界中不存在的序列。通过有限的修饰，例如在天然存在序列内改变/缺失/插入一个或更多个氨基酸，或者通过添加/去除天然存在序列的N端或C端的氨基酸，而从天然序列中获得人工序列。

本发明的肽的长度可显著变化。肽的长度可以为9或11个氨基酸(即由7至9个氨基酸的表位、与其相邻的2至11个氨基酸的经修饰氧化还原酶基序组成)多至12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40或50个氨基酸而不等。例如，肽可包含40个氨基酸的内体靶向序列、约2个氨基酸的侧翼序列、2至11个氨基酸的如本文中所述的氧化还原酶基序、4至7个氨基酸的接头以及7、8或9个氨基酸最小长度的T细胞表位肽。

因此，在一些具体实施方案中，完整的肽由9个氨基酸多至20、25、30、40、50、75或100个氨基酸组成。更特别地，在还原性化合物是如本文中所述的经修饰氧化还原酶基序的情况下，无内体靶向序列的包含任选地通过接头连接的表位和经修饰氧化还原酶基序的(人工或天然)序列(本文中称为“表位-经修饰氧化还原酶基序”序列)的长度是至关重要的。“表位-经修饰氧化还原酶基序”更特别地具有9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个氨基酸的长度。这样的9、10、11、12、13或14至19个氨基酸的肽可任选地与其大小不太关键的内体靶向信号偶联。

如上所述，在一些具体实施方案中，本发明的肽包含与T细胞表位序列连接的如本文中所述的还原性经修饰氧化还原酶基序。

在另一些具体实施方案中，本发明的肽是包含T细胞表位的肽，该T细胞表位不包含在其天然序列内具有氧化还原酶特性的氨基酸序列。

一般而言，本发明的肽不是天然的(因此没有像这样的蛋白质片段)而是人工肽，其除T细胞表位之外还包含如本文中所述的经修饰氧化还原酶基序，其中经修饰氧化还原酶基序通过由多至七个氨基酸、最特别地多至四个或多至2个氨基酸组成的接头与T细胞表位直接隔开。

已表明，在向哺乳动物施用(即注射)根据本发明的肽(或包含这样的肽的组合物)之后，该肽引发识别抗原来源的T细胞表位的T细胞的活化，并通过还原表面受体向T细胞提供另外的信号。这种超最佳活化导致T细胞获得对呈递T细胞表位的细胞的溶细胞特性，以及对旁观者T细胞的抑制特性。以这种方式，本发明中所述的包含抗原来源的T细胞表位以及表位之外的经修饰氧化还原酶基序的肽或包含所述肽的组合物可用于哺乳动物包括人的直接免疫接种。因此，本发明提供了本发明的肽或其衍生物，其用作药物。因此，本发明提供了治疗方法，其包括向有此需要的患者施用一种或更多种根据本发明的肽。

本发明提供了这样的方法，通过该方法，被赋予溶细胞特性的抗原特异性T细胞可通过用小肽进行的免疫接种来引发。已经发现包含以下的肽引发抑制性T细胞：(i)编码来自抗原的T细胞表位的序列和(ii)具有氧化还原特性的共有序列，并且另外任选地还包含促进该肽被摄取到晚期内体中以用于有效的MHC II类或CD1d呈递的序列。

本发明的肽的免疫原性特性在治疗和预防免疫反应中是特别令人感兴趣的。

本文中所述的肽用作药物，更特别地用于制备用于在哺乳动物中(更特别地在人中)预防或治疗免疫病症的药物。

本发明描述了通过使用本发明的肽、其同源物或衍生物来治疗需要这样的治疗的哺乳动物的免疫病症的方法，该方法包括向患有免疫病症或处于免疫病症的风险之中的所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的肽、其同源物或衍生物例如以降低免疫病症的症状的步骤。设想了对人和动物(例如宠物和农场动物)二者的治疗。在一个实施方案中，待治疗的哺乳动物是人。在一个具体实施方案中，以上提及的免疫病症选自变应性疾病和自身免疫病。更特别地，提供了这样的免疫原性肽，其用于治疗或减轻MS的症状。

本发明的肽或包含如本文中所限定的这样的肽的药物组合物优选通过皮下或肌内施用来施用。优选地，可将肽或包含这样的肽的药物组合物皮下(sub-cutaneously，SC)注射到位于肘和肩中间的上臂的外侧部的区域中。当需要两次或更多次分开的注射时，其可伴随地在两条臂中施用。

根据本发明的肽或包含这样的肽的药物组合物以治疗有效剂量施用。一些示例性但非限制性的剂量方案为50至1500μg，优选100至1200μg。一些更具体的剂量方案可以为50至250μg、250至450μg、或850至1300μg，这取决于患者的状况和疾病的严重程度。剂量方案可包含以单剂量或者以2、3、4、5或更多个剂量同时或连续地施用。一些示例性的非限制性施用方案如下：

-低剂量方案，其包括SC施用50μg肽，以各25μg(各100μL)的两次分开注射进行；随后三次连续注射25μg肽，所述注射25μg肽是以各12.5μg(各50μL)的两次分开注射进行的。

-中剂量方案，其包括SC施用150μg肽，以各75μg(各300μL)的两次分开注射进行；随后三次连续施用75μg肽，所述施用75μg肽是以各37.5μg(各150μL)的两次分开注射进行的。

-高剂量方案，其包括SC施用450μg肽，以各225μg(各900μL)的两次分开注射进行；随后三次连续施用225μg肽，所述施用225μg肽是以各112.5μg(各450μL)的两次分开注射进行的。

另一些示例性非限制性施用方案如下：

-剂量方案，其包括6次SC施用(间隔2周)450μg肽，所述施用450μg肽是以各225μg的两次分开注射进行的。

-剂量方案，其包括6次SC施用(间隔2周，SC)1350μg肽，所述施用1350μg肽是以各675μg的两次分开注射进行的。

如本文中所限定的免疫原性肽的一个具体但非限制性剂量方案是50至1500μg，优选450至1500μg。剂量方案可包括以单剂量或者以2、3、4、5、6或更多个剂量同时或连续地施用。所述用免疫原性肽进行的治疗可进行1至6次，例如1至4次，优选每5至9天，例如约每7天。

对于所有上述肽，设想了另外的变体，其中在组氨酸侧翼残基与氧化还原酶基序的第一半胱氨酸之间存在一个或两个氨基酸X。通常来说，这些外部氨基酸X不是His、Cys、Ser或Thr。

本发明的肽还可在用于在样品中检测II类限制性CD4+ T细胞或NKT细胞的体外诊断方法中使用。在该方法中，使样品与MHC II类或CD1d分子和根据本发明的肽的复合物接触。通过测量复合物与样品中细胞的结合来检测CD4+ T细胞或NKT细胞，其中复合物与细胞的结合指示样品中存在CD4+ T细胞或NKT细胞。

复合物可以是肽与MHC II类或CD1d分子的融合蛋白。

替代地，复合物中的MHC或CD1d分子是四聚体。复合物可作为可溶性分子提供或者可与载体连接。

因此，在一些具体实施方案中，本发明的治疗和预防方法包括施用如本文中所述的免疫原性肽，其中所述肽包含在待治疗的疾病中发挥作用的抗原蛋白的T细胞表位(例如如以上描述的那些)。在另一些具体实施方案中，使用的表位是优势表位。

根据本发明的肽将通过合成其中T细胞表位与经修饰氧化还原酶基序将被0至7个氨基酸隔开的肽来制备。在某些实施方案中，经修饰氧化还原酶基序可通过在表位序列之外引入1、2或3个突变来获得，以保留如在蛋白质中存在的序列背景。通常来说，参照作为天然序列的一部分的九肽，P-2和P-1中以及P+10和P+11中的氨基酸被保留在肽序列中。这些侧翼残基通常使与MHC II类或CD1d的结合稳定。在另一些实施方案中，表位的N端或C端序列与包含T细胞表位序列的抗原蛋白的序列无关。

因此，基于以上用于设计肽的方法，通过化学肽合成、重组表达方法或在更特殊情况下的蛋白质的蛋白水解或化学片段化来产生肽。

可在体外和体内方法中测试如在上述方法中产生的肽的T细胞表位的存在，并且可在体外测定中测试其还原活性。作为最终的品质控制，可在体外测定中测试肽以验证该肽是否可产生CD4+ T细胞或NKT细胞，所述细胞通过针对呈递包含表位序列(其也存在于具有经修饰氧化还原酶基序的肽中)的抗原的抗原呈递细胞的凋亡途径而具有溶细胞性。

本发明的肽可使用重组DNA技术在细菌、酵母、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞中产生。考虑到肽的有限长度，其可通过化学肽合成来制备，其中通过将不同的氨基酸彼此偶联来制备肽。化学合成特别适合于包含例如D-氨基酸、具有非天然存在侧链的氨基酸等。

化学肽合成方法已被充分描述，并且肽可从公司例如Applied Biosystems和其他公司订购。

肽合成可以作为固相肽合成(solid phase peptide synthesis，SPPS)或与液相肽合成相反地进行。最著名的SPPS方法是t-Boc和Fmoc固相化学：在肽合成期间，使用了数个保护基。例如，羟基和羧基官能团被叔丁基保护，赖氨酸和色氨酸被t-Boc基团保护，并且天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和组氨酸被三苯甲基保护，并且精氨酸被pbf基团保护。如果合适的话，这样的保护基可在合成之后留在肽上。可使用如Kent(Schnelzer&Kent(1992)lnt.J.Pept.Protein Res.40，180-193)最初所描述并且例如在Tam et al.(2001)Biopolymers 60，194-205中所综述的连接策略(两个未经保护的肽片段的化学选择性偶联)将肽彼此连接以形成更长的肽，所述连接策略为实现蛋白质合成提供了巨大的潜力，这超出了SPPS的范围。通过这种方法已成功地合成了大小为100至300个残基的许多蛋白质。由于SPPS的巨大进步，合成肽在生物化学、药理学、神经生物学、酶学和分子生物学的研究领域中继续发挥着越来越重要的作用。

替代地，所述肽可通过在包含编码核苷酸序列的合适的表达载体中使用编码本发明肽的核酸分子来合成。这样的DNA分子可使用自动DNA合成仪和遗传密码的公知密码子-氨基酸关系来容易地制备。这样的DNA分子还可使用寡核苷酸探针和常规杂交方法作为基因组DNA或作为cDNA来获得。可将这样的DNA分子并入到表达载体(包括质粒)中，所述表达载体适合于在合适的宿主中表达DNA和产生多肽，所述合适的宿主例如细菌(例如大肠杆菌)、酵母细胞、动物细胞或植物细胞。

检查目的肽的物理和化学特性(例如溶解性、稳定性)，以确定该肽是否/是否将适合用于治疗性组合物中。通常来说，这是通过调节肽的序列来优化的。任选地，可在合成之后使用本领域已知的技术对肽进行修饰(化学修饰，例如添加/缺失官能团)。

认为T细胞表位本身通过与抗原呈递细胞表面上的适当HLA分子结合并刺激相关T细胞亚群来触发早期的T辅助细胞水平事件。这些事件导致T细胞增殖、淋巴因子分泌、局部炎性反应、向该部位募集另外的免疫细胞以及激活B细胞级联，从而产生抗体。这些抗体的一种同种型IgE在变应性症状的发展中具有根本性的重要性，并且它的产生在T辅助细胞水平事件的级联早期受到分泌的淋巴因子性质的影响。T细胞表位是T细胞受体识别的基本要素或最小单位，其中表位包含受体识别所必需的氨基酸残基，所述氨基酸残基在蛋白质的氨基酸序列中是连续的。

然而，在施用具有T细胞表位和氧化还原酶基序的肽之后，认为会发生以下事件：

由与MHC II类分子呈递的抗原来源肽的同源相互作用引起的抗原(i)特异性T细胞的活化；

还原酶序列还原T细胞表面蛋白，例如CD4分子，其第二结构域包含受限制的二硫桥。这将信号转导到T细胞中。在与氧化途径提高相关的一系列结果中，重要事件是钙内流提高和NF-kB转录因子易位至细胞核。后者导致IFN-γ和颗粒酶的转录提高，这使得细胞通过凋亡诱导机制获得溶细胞特性；溶细胞特性通过涉及颗粒酶B分泌和Fas-FasL相互作用的机制影响呈递肽的细胞。由于细胞杀伤作用是通过凋亡途径获得的，因此与细胞毒性细胞相比，溶细胞性细胞是更适合这些细胞的术语。抗原呈递靶细胞的破坏阻止了对位于同一抗原上的表位或对将由同一抗原呈递细胞加工的不相关抗原的表位具有特异性的其他T细胞的活化；T细胞活化的另外的结果是通过细胞间接触依赖机制抑制旁观者T细胞的活化。在这样的情况下，由不同抗原呈递细胞呈递的抗原活化的T细胞也被抑制，前提是溶细胞性T细胞和旁观者T细胞二者非常接近，即在同一抗原呈递细胞的表面上被活化。

以上假定的作用机制由以上引用的PCT申请WO2008/017517和本发明人的出版物中公开的实验数据证实。

类似地，如WO2012/069568和本发明人的出版物中所假定和显示的，NKT细胞表位将根据以下机制降低免疫应答。当NKT细胞通过经修饰为以含有硫还原酶活性的肽而活化时，后者显著提高了NKT细胞的特性，并且从而提高了通过抗原特异性CD4+NKT细胞对携带自身抗原的细胞的杀伤，这抑制了针对所述自身抗原的免疫应答。已经在许多场合报道了NKT细胞参与自身免疫病中的或者针对同种因子或变应原的免疫应答的控制(Jahng et alJournal of experimental Medicine 199：947-957，2004；Van Belle and von Herrath，Molecular Immunology 47：8-11，2009)，但其相对难以描述。在WO2012/069568中，显示了肽可由CD1d分子呈递。CD1d分子的特征是由2条反平行的α链构成，形成位于由两条反平行β链构成的平台的顶部的槽。槽是窄且深的，并且仅接受疏水性残基，典型地仅视为脂质。具有疏水性残基的肽具有与CD1d槽结合的能力。此外，由于槽在两侧均是开放的，因此可容纳比7个氨基酸更长的肽。在自身抗原、同种因子和变应原中通常存在携带CD1d基序的疏水肽，从而赋予所述自身抗原、同种因子或变应原活化CD4+ NKT细胞的能力。通过杀伤呈递所述自身抗原、同种因子或变应原的细胞进行的直接消除消除了建立针对这些抗原/因子的免疫应答的能力。

本发明涉及包含来源于AQP4的疏水性残基的肽的产生，所述疏水性残基赋予与CD1d分子结合的能力。在施用之后，这样的肽被APC吸收，被引导至晚期内体，在那里它们被加载到CD1d上并在APC表面处呈递。所述疏水性AQP4肽的特征在于对应于通用序列[FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY](SEQ ID NO：316)或[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW](SEQ ID NO：317)的基序，其中第P1和P7位被疏水性残基例如苯丙氨酸(F)或色氨酸(W)占据。然而，P7在其接受苯丙氨酸或色氨酸的替代疏水性残基例如苏氨酸(T)或组氨酸(H)的意义上是允许的。第P4位被脂肪族残基例如异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或甲硫氨酸(M)占据。

本发明提供了用于在体内或体外产生抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞的方法，以及与其无关的，基于特征表达数据区分溶细胞性CD4+ T细胞与其他细胞群例如Foxp3+Treg的方法。

本发明描述了用于产生抗原特异性CD4+ T细胞的体内方法。一个具体实施方案涉及用于通过以下来产生或分离CD4+ T细胞的方法：用如本文中所述的本发明的肽来免疫接种动物(包括人)，并随后从经免疫接种的动物中分离CD4+ T细胞。本发明描述了用于产生针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞的体外方法。本发明提供了用于产生针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞的方法。

在一个实施方案中，提供了这样的方法，其包括分离外周血细胞、通过根据本发明的免疫原性肽体外刺激细胞群、以及扩增经刺激的细胞群，更特别地在存在IL-2的情况下进行。根据本发明的方法具有以下优点：产生高数目的CD4+ T细胞，并且可产生对抗原蛋白具有特异性的CD4+ T细胞(通过使用包含抗原特异性表位的肽)。

在一个替代实施方案中，CD4+ T细胞可在体内产生，即通过向对象注射本文中所述的免疫原性肽，并收集体内产生的溶细胞性CD4+ T细胞来产生。

可通过本发明的方法获得的针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞在预防变应性反应和治疗自身免疫病中向哺乳动物施用免疫治疗是特别令人感兴趣的。设想了使用同种细胞和自体细胞(autogeneic cell)二者。

溶细胞性CD4+ T细胞群如下文中所述获得。

如本文中所述的抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞可用作药物，更特别地用于过继细胞治疗，更特别地用于治疗急性变应性反应和自身免疫病(例如多发性硬化)的复发。如所述产生的分离的溶细胞性CD4+ T细胞或细胞群，更特别地抗原特异性溶细胞性CD4+ T细胞群用于制备用于预防或治疗免疫病症的药物。公开了通过使用分离的或产生的溶细胞性CD4+ T细胞进行治疗的方法。

在施用于活的动物(通常是人)之后，本发明的肽将引发对旁观者T细胞发挥抑制活性的特异性T细胞。

在一些具体实施方案中，本发明的溶细胞性细胞群的特征在于FasL和/或干扰素γ的表达。在一些具体实施方案中，本发明的溶细胞性细胞群的特征还在于颗粒酶B的表达。

该机制还意味着并且实验结果表明，本发明的肽尽管包含某抗原的特定T细胞表位，但可用于预防或治疗由针对相同抗原的其他T细胞表位的免疫反应引发的病症，或者在某些情况下甚至用于治疗由针对其他不同抗原的其他T细胞表位的免疫反应引发的病症，如果所述其他不同抗原将由MHC II类分子在被本发明的肽活化的T细胞附近通过相同的机制来呈递的话。

公开了具有上述特征的细胞类型的分离的细胞群，其另外是抗原特异性的，即能够抑制抗原特异性免疫应答。

本发明提供了包含一种或更多种根据本发明的肽的药物组合物，所述药物组合物还包含可药用载体。如上所详述的，本发明还涉及用作药物的组合物或涉及通过使用所述组合物来治疗哺乳动物免疫病症的方法，以及涉及所述组合物用于制备用于预防或治疗免疫病症的药物的用途。药物组合物可例如是疫苗，其适用于治疗或预防免疫病症，尤其是空气源性(airborne)和食源性(foodbome)变态反应以及变应性源的疾病。作为药物组合物的本文中进一步描述的一个实例，将根据本发明的肽吸附在适合于向哺乳动物施用的佐剂，例如氢氧化铝(明矾)上。通常来说，以2周的间隔通过皮下途径注射3次50μg的吸附在明矾上的肽。对于本领域技术人员来说应明显的是，其他施用途径也是可能的，包括经口、鼻内或肌内。同样，注射次数和注射量可根据待治疗的病症而变化。此外，可使用除明矾之外的其他佐剂，前提是其促进MHC II类或CD1d呈递中的肽呈递和T细胞活化。因此，尽管可单独施用活性成分，但它们通常作为药物制剂存在。本发明的用于兽用用途和用于人用途二者的制剂均包含至少一种如上所述的活性成分以及一种或更多种可药用载体。本发明涉及药物组合物，其包含与可药用载体混合的作为活性成分的一种或更多种根据本发明的肽。本发明的药物组合物应包含治疗有效量的活性成分，例如下文关于治疗或预防方法所指示的。任选地，组合物还包含其他治疗性成分。合适的其他治疗性成分以及其取决于其所属类别的常用剂量是本领域技术人员公知的，并且可选自用于治疗免疫病症的其他已知药物。

如本文中所限定的免疫原性肽可吸附在适合于向哺乳动物施用的佐剂，例如氢氧化铝(明矾)上。通常来说，以2周的间隔通过皮下途径注射3次50μg的吸附在明矾上的肽。对于本领域技术人员来说应明显的是，其他施用途径也是可能的，包括但不限于经口、鼻内或肌内。此外，注射次数和注射量可根据待治疗的病症的严重程度和其他参数，例如患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食而变化。此外，可使用除明矾之外的其他佐剂，前提是其促进MHC II类或CD1d中的肽呈递以及T细胞或NKT细胞活化。因此，尽管免疫原性肽可在没有任何佐剂的情况下施用，但其通常作为药物制剂存在。用于兽用用途和用于人用途二者的制剂均包含至少一种如上所述的免疫原性肽以及一种或更多种可药用载体。

本文中使用的关于如本文中所限定的免疫原性肽的术语“可药用载体”意指与免疫原性肽一起配制以便于例如通过溶解、分散或扩散该组合物来有助于其在待治疗的部位的施加或散布，和/或在不损害其效力的情况下有助于其储存、运输或处理的任何材料或物质。可药用载体包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂(例如酚、山梨酸、氯丁醇)、等张剂(例如糖或氯化钠)等。为了控制药物制剂中免疫原性肽的作用持续时间，可包含另外的成分。可药用载体可以是固体或液体或已被压缩以形成液体的气体，即制剂可合适地用作浓缩剂、乳剂、溶液剂、颗粒剂、粉尘剂(dust)、喷雾剂、气雾剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、片剂、丸剂或散剂。用于肽的药物制剂的合适的药物载体是本领域技术人员公知的，并且在本发明内对其选择没有特别限制。可药用载体还可包括添加剂，例如润湿剂、分散剂、黏贴剂(sticker)、黏合剂、乳化剂、溶剂、包衣、抗细菌和抗真菌剂(例如酚、山梨酸、氯丁醇)、等张剂(例如糖或氯化钠)等，前提是它们与药学实践一致，即不会对哺乳动物造成永久损害的载体和添加剂。免疫原性肽的药物制剂可以以任何已知方式制备，例如通过以一步或多步操作将活性成分与所选的载体材料以及(合适的话)其他添加剂(例如表面活性剂)一起均质地混合、对其进行包衣和/或研磨来制备。它们也可通过微粉化(micronisation)来制备，例如，考虑到以通常具有约1至10μm直径的微球形式获得它们，即用于制备用于控制或持续释放免疫原性肽的微胶囊剂。

用于免疫原性肽的药物制剂的合适表面活性剂(也称为乳化剂(emulgent)或乳化剂(emulsifier))是具有良好的乳化、分散和/或润湿特性的非离子型、阳离子型和/或阴离子型材料。合适的阴离子型表面活性剂包括水溶性皂和水溶性合成表面活性剂二者。合适的皂是高级脂肪酸(C₁₀至C₂₂)的碱金属盐或碱土金属盐、未经取代或经取代的铵盐，例如油酸或硬脂酸的钠盐或钾盐，或者可从椰子油或动物脂油(tallow oil)获得的天然脂肪酸混合物的钠盐或钾盐。合成的表面活性剂包括聚丙烯酸的钠盐或钙盐；脂肪磺酸盐和硫酸盐；磺化苯并咪唑衍生物和烷基芳基磺酸盐。脂肪磺酸盐或硫酸盐通常为以下形式：碱金属盐或碱土金属盐、未经取代的铵盐或被具有8至22个碳原子的烷基或酰基基团取代的铵盐，例如，木质素磺酸(lignosulphonic acid)或十二烷基磺酸的钠盐或钙盐，或从天然脂肪酸中获得的脂肪醇硫酸盐的混合物、硫酸酯或磺酸酯的碱金属盐或碱土金属盐(例如月桂基硫酸钠)和脂肪醇/环氧乙烷加合物的磺酸。合适的磺化苯并咪唑衍生物通常包含8至22个碳原子。烷基芳基磺酸盐的一些实例是十二烷基苯磺酸或二丁基-萘磺酸或萘-磺酸/甲醛缩合产物的钠盐、钙盐或链烷醇胺盐。同样合适的是相应的磷酸盐，例如磷酸酯和对壬基苯酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的加合物，或磷脂的盐。用于此目的的合适的磷脂是脑磷脂或卵磷脂类型的天然的(来源于动物或植物细胞的)或合成的磷脂，例如如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、溶血卵磷脂、心磷脂、二辛基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱，及其混合物。合适的非离子型表面活性剂包括烷基酚、脂肪醇、脂肪酸、分子中包含至少12个碳原子的脂肪族胺或酰胺、烷基芳烃磺酸盐和二烷基磺基琥珀酸盐的聚乙氧基化和聚丙氧基化衍生物，例如脂肪族和脂环族醇、饱和和不饱和脂肪酸和烷基酚的聚乙二醇醚衍生物，所述衍生物通常在(脂肪族)烃部分中包含3至10个乙二醇醚基和8至20个碳原子，并且在烷基酚的烷基部分中包含6至18个碳原子。另外的合适的非离子型表面活性剂是聚环氧乙烷与聚丙二醇、在烷基链中包含1至10个碳原子的乙二胺基聚丙二醇(ethylenediamino-polypropylene glycol)的水溶性加合物，该加合物包含20至250个乙二醇醚基和/或10至100个丙二醇醚基。这样的化合物通常包含1至5个乙二醇单元/丙二醇单元。非离子型表面活性剂的一些代表性实例是壬基酚-聚乙氧基乙醇、蓖麻油聚乙醇醚(castor oilpolyglycolic ether)、聚丙烯/聚环氧乙烷加合物、三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚乙二醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。如下物质也是合适的非离子型表面活性剂：聚乙烯脱水山梨糖醇的脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇三油酸酯)、甘油、脱水山梨糖醇、蔗糖和季戊四醇。合适的阳离子型表面活性剂包括具有4个任选地被卤素、苯基、经取代的苯基或羟基取代的烃基的季铵盐，特别是卤化物；例如包含作为N-取代基的至少一个C8C22烷基基团(例如鲸蜡基、月桂基、棕榈基、肉豆蔻基、油烯基等)以及作为另外的取代基的未经取代或卤代的低级烷基、苄基和/或羟基-低级烷基基团的季铵盐。

适合于可注射使用的免疫原性肽的药物剂型或药物制剂包括无菌水溶液剂或分散体；包括芝麻油、花生油或水性丙二醇的制剂；以及用于无菌可注射溶液剂或分散体的即用型(extemporaneous)制剂的无菌散剂。在所有情况下，形式必须是无菌的并且必须是以达到易于注射之程度存在的流体。其在制备和储存条件下必须是稳定的，并且必须抵御微生物(例如细菌和真菌)的污染作用而保存。载体也可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和植物油。适当的流动性可例如通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过在分散体的情况下维持所需的颗粒尺寸以及通过使用表面活性剂来维持。微生物作用的防止可通过多种抗细菌和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等来产生。在许多情况下，将优选地包含等张剂，例如糖或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中使用延迟吸收剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来产生。

无菌可注射溶液剂是通过将所需量的免疫原性肽根据需要与以上列举的多种其他成分一起并入适当的溶剂中，随后通过过滤灭菌来制备的。一般而言，分散体是通过将灭菌的免疫原性肽并入到无菌载剂中来制备的，所述无菌载剂包含基础分散介质和所需要的来自以上列举的那些的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液剂的无菌散剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其由经预先无菌过滤的溶液产生免疫原性肽加任何另外期望成分的散剂。

在配制时，如本文中所限定的药物制剂或如本文中所限定的肽或如本文中所限定的富马酸酯化合物可以以与剂型相容的方式和以如治疗有效的这样的量来施用。

本发明的肽或包含如本文中所限定的这样的肽的药物组合物优选通过皮下或肌内施用来施用。优选地，可将肽或包含这样的肽的药物组合物皮下(SC)注射到位于肘和肩中间的上臂的外侧部的区域中。当需要两次或更多次分开的注射时，其可伴随地在两条臂中施用。

根据本发明的肽或包含这样的肽的药物组合物以治疗有效剂量施用。一些示例性但非限制性的剂量方案为50至1500μg，优选100至1200μg。一些更具体的剂量方案可以为50至250μg，250至450μg或850至1300μg，这取决于患者的状况和疾病的严重程度。剂量方案可包含以单剂量或者以2、3、4、5或更多个剂量同时或连续地施用。

在某些实施方案中，治疗可在对象的整个疾病中重复数次。这样的连续治疗可每天进行，或者以1至10天的间隔，例如如每5至9天(例如约每7天)进行。

替代地，所述治疗可每周、每两周、每月、每两个月或每三至四个月重复一次。

一些示例性的非限制性施用方案如下：

另一些示例性非限制性施用方案如下：

在一个优选实施方案中，所述免疫原性肽以至少5个剂量的300至1500μg的所述免疫原性肽施用，其中两个剂量之间的间隔为约12天至约28天，优选地所述施用通过肌内或皮下注射进行。

根据方面1所述应用的免疫原性肽，其中所述免疫原性肽通过肌内或皮下注射6个剂量的300至1500μg的所述免疫原性肽来施用，其中两个剂量之间的间隔为约12至28天。

优选地，每个所述剂量的300至1500μg的所述免疫原性肽以约12至约16天的间隔、或两个剂量之间约2周的间隔施用。

优选地，每个剂量包含：

-300至600μg的所述免疫原性肽；

-600至800μg的所述免疫原性肽；

-800至1000μg的所述免疫原性肽；

-1000至1200μg的所述免疫原性肽；或

-1200至1500μg的所述免疫原性肽。

在一些优选实施方案中，在从开始治疗起开始计数的约第22至第30周进行300至1500μg剂量的所述免疫原性肽的加强施用。更优选地，所述加强施用可以在从开始治疗起开始计数的约第22至第26周进行。

在一些优选实施方案中，所述加强包含：

-300至600μg的所述免疫原性肽；

-600至800μg的所述免疫原性肽；

-800至1000μg的所述免疫原性肽；

-1000至1200μg的所述免疫原性肽；或

-1200至1500μg的所述免疫原性肽。

免疫原性肽制剂易于以多种剂型(例如以上所述的可注射溶液剂的类型)施用，但也可使用药物释放胶囊剂等。例如，对于在水溶液中的肠胃外施用，如果需要的话，溶液应适当缓冲，并且液体稀释剂首先用足够的盐水或葡萄糖等张。这些特定的水溶液尤其适用于静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用。在该方面中，根据本公开内容，可采用的无菌水性介质将是本领域技术人员已知的。例如，可将一个剂量溶解在1ml等张NaCl溶液中，并添加至1000ml皮下灌注流体中，或者在建议的输注部位注射。根据所治疗对象的状况，剂量必然会发生一些变化。在任何情况下，负责施用的人员将确定用于个体对象的适当剂量。免疫原性肽可以在两个部位(两个上臂，优选在臂外侧部分的区域中，更优选在肘与肩中间)中伴随地施用。

技术人员可容易地设想免疫原性肽的其它可药用形式。

根据本发明的肽、其同源物或衍生物(及其全部包括在术语“活性成分”中的生理学上可接受的盐或药物组合物)可通过适合于待治疗病症和适合于所述化合物(在此为待施用的蛋白质和片段)的任何途径来施用。可能的途径包括区域性、全身性、经口(固体形式或吸入)、经直肠、经鼻、局部(包括经眼、经颊和舌下)、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、动脉内、鞘内和硬膜外)。优选的施用途径可根据例如接受者的状况或待治疗的疾病而变化。如本文中所述，在与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上，载体最佳地是“可接受的”。所述制剂包括适用于经口、经直肠、经鼻、局部(包括经颊和舌下)、经阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、动脉内、鞘内和硬膜外)施用的那些。

适用于肠胃外施用的制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液剂，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质(其使制剂与预期接受者的血液等张)；以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包括助悬剂和增稠剂。制剂可存在于单位剂量或多剂量的容器(例如密封的安瓿和小瓶)中，并且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在使用之前立即添加无菌液体载体(例如注射用水)。即用型注射溶液剂和混悬剂可由前述类型的无菌散剂、颗粒剂和片剂制备。

典型的单位剂量制剂是包含如上文中所述的活性成分的每日剂量或单位每日亚剂量或其适当分数的那些。应理解，除以上特别提及的成分之外，考虑到所讨论的制剂的类型，本发明的制剂可包含本领域常规的其他试剂，例如适用于经口施用的那些可包含矫味剂。根据本发明的肽、其同源物或衍生物可用于提供包含一种或更多种本发明化合物作为活性成分的控制释放药物制剂(“控制释放制剂”)，其中活性成分的释放可被控制和调节，以允许较低频率的给药或改善给定的本发明化合物的药代动力学谱或毒性谱。可根据常规方法制备适用于经口施用的控制释放制剂，其中离散单元包含一种或更多种本发明化合物。为了控制组合物中活性成分的作用持续时间，可包含另外的成分。因此，可通过选择合适的聚合物载体来获得控制释放组合物，所述合适的聚合物载体例如如聚酯、聚氨基酸、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硫酸鱼精蛋白等。药物释放的速率和作用的持续时间还可通过将活性成分并入到颗粒(例如微胶囊、微球、微乳剂、纳米粒、纳米胶囊剂等)中来控制。根据施用途径，药物组合物可需要保护性包衣。适用于注射的药物形式包括无菌水溶液剂或分散体以及用于其即用型制剂的无菌散剂。因此，用于此目的的典型载体包括生物相容性水性缓冲剂、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇等，及其混合物。鉴于以下事实：当组合使用数种活性成分时，其不一定在待治疗的哺乳动物中同时直接发挥其联合的治疗作用，因此相应的组合物也可以是在分开但相邻的储库或室中包含两种成分的医学药盒或包装的形式。因此，在后一种情况下，每种活性成分可以以适合于与另一种成分的施用途径不同的施用途径的方式配制，例如，它们之一可以是经口或肠胃外制剂的形式，而另一种是用于静脉内注射的安瓿或气雾剂的形式。

如在体外和体内所证实的，如在本发明中的获得的溶细胞性CD4+ T细胞在MHC II类依赖性的同源活化之后诱导APC凋亡，影响树突细胞和B细胞二者，并且(2)在不存在IL-10和/或TGF-β的情况下通过接触依赖性机制抑制旁观者T细胞。如WO2008/017517中详细讨论的，可将溶细胞性CD4+ T细胞与天然Treg和适应性Treg区分开。

类似地，如在本发明中获得的NKT细胞，即通过包含硫还原酶活性的根据本发明的AQP4来源的肽活化的，后者显著提高了NKT细胞的特性，并且从而提高了由抗原特异性CD4+NKT细胞对携带AQP4自身抗原的细胞的杀伤，这抑制了针对所述AQP4自身抗原的免疫应答。在WO2012/069568中详细讨论了这种机制。

虽然已结合本发明的一些具体实施方案对本发明进行了描述，但明显的是，根据前述描述，许多替代、修改和变化对本领域技术人员将是明显的。因此，其旨在包含在所附权利要求书的精神和广泛范围内的所有如下这样的替代、修改和变化。以下非限制性实施例进一步支持本文中公开的本发明的一些方面和实施方案。

实施例

实施例1：肽设计

设计并合成了免疫原性肽，其包含氧化还原酶基序CPYC(SEQ ID NO：157)，更特别地具有与水通道蛋白4(AQP4)的HLA-DRB1^＊03：01和/或HLA-DPB1^＊05：01人T细胞表位连接的序列HCPYC(SEQ ID NO：158)或KHCPYC(SEQ ID NO：159)(表1)。所有肽均包含天然人AQP4表位或具有丝氨酸(S)而非半胱氨酸(C)的变体。

表1：免疫原性肽的列表

*加粗的残基是添加的不天然存在于AQP4自身抗原的氨基酸序列中该位置处的残基；带下划线的残基是相对于AQP4自身抗原的野生型氨基酸序列而突变的残基。

实施例2：免疫原性肽的氧化还原酶活性的评估

表1的免疫原性肽的氧化还原酶活性使用在Tomazzolli et al.(2006)Anal.Biochem.350，105-112中描述的荧光测定来确定。具有FITC标记的两个肽在其形成共价二硫键时会自猝灭。在被根据本发明的肽还原之后，被还原的单独FITC标记的肽再次发射荧光。活性表示为重复的平均值。结果以相对荧光单位(RFU)表示。

实施例4中使用的用于产生溶细胞性CD4+ T细胞的肽P12和P20具有相似的氧化还原酶活性，其快速提高并在5分钟之后达到平稳期(图1A)。还测试了表1的另一些肽，并表明它们全部显示出氧化还原酶活性，尽管就P15和P22而言其程度较低(图1B至1E)。

实施例3：免疫原性肽与可溶性HLA-DRB1^＊03：01和HLA-DPB1^＊05：01蛋白的结合活性的评估。

为了测试表1的免疫原性肽与MHCII分子的结合，进行了可溶相竞争测定。提高浓度的肽与生物素标记的对照肽(对应MHCII分子的高亲和力结合物，Eurogentec，Seraing，Belgium)竞争与可溶性HLA-DRB1*03：01(也命名为DR3)人MHC II蛋白(购自BenaroyaResearch Institute，Seattle，US)结合。当结合接近其平衡(18小时)时，生物素标记的肽/MHC II复合物被捕获，与未结合的试剂分离，并通过时间分辨荧光(Eu³⁺链霉亲和素，PerkinElmer，Brussels，Belgium)定量检测。由于生物素化的对照肽负责荧光信号(Eu³⁺链霉亲和素/生物素相互作用)，因此荧光强度的降低反映了受试肽的结合。处理数据并绘图以确定肽的剂量依赖性结合特性。所有测试均一式三份地进行。表明实施例4中使用的用于产生溶细胞性CD4+ T细胞的肽P12和P20以相似的亲和力与HLA-DRB1*03：01结合(图2A)。还测试了表1的另一些肽，并表明它们全部与HLA-DRB1*03：01结合，尽管就P1、P3、P6、P15和P18而言，其亲和力比P12和P20亲和力低(图2B至2G)。

还评估了表1的肽与可溶性HLA-DPB1*05：01蛋白的结合。

实施例4：免疫原性肽诱导具有裂解特性的特异性CD4+ T细胞的能力。

材料和方法

本研究中使用的患者的单倍型在下表2中示出。

表2：本研究中包括的患者的单倍型

在Lymphoprep密度梯度上从患有NMO的患者的血液样品中分离PBMC。通过用CD14微珠(Miltenyi Biotec，130-050-201)根据供应商的建议进行阳性免疫磁性分离来从这些PBMC中分离CD14+单核细胞。使CD14+单核细胞分化六天并成熟以产生自体树突细胞(mDC)。通过用CD19微珠(Miltenyi Biotec，130-050-301)根据供应商的建议进行阳性免疫磁性分离来从CD14-PBMC级分中分离CD19+ B细胞。将CD19+ B细胞进行培养并用EBV使其永生化以产生自体类淋巴母细胞细胞系(lymphoblastoid cell line，LCL)。

还通过用初始CD4+ T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec，130-094-131)根据供应商的建议进行阴性免疫磁性分离来从CD14-PBMC级分中纯化初始CD4+ T细胞。在存在表1的肽的情况下，将初始CD4+ T细胞与自体mDC或LCL共培养。约每10至12天周期性地再刺激CD4+ T细胞，以产生肽特异性细胞系。

对表1的肽产生肽特异性CD4+ T细胞的能力的评价是在静止状态下在不具有肽(无肽)或具有表1的肽的情况下与自体LCL共培养过夜之后，通过流式细胞术分析TCR诱导的表面活化标志物CD154表达来评价的。还在不具有肽(无肽)或具有表1的肽的情况下与自体LCL共培养过夜的上清液中通过流式细胞术分析评价了裂解标志物颗粒酶B的表达。用BioLegend试剂盒根据供应商的建议分析上清液。

在静止状态下在不具有肽(无肽)或具有表1的肽的情况下与自体mDC或LCL共培养过夜之后，通过流式细胞术分析来评价表1的肽诱导CD4+ T细胞培养物上清液中细胞因子分泌的能力。用LEGENDplex Human Th板(13-plex)(BioLegend，740721)根据供应商的建议分析上清液。

通过量化在用作抗原呈递细胞的LCL上诱导的凋亡来评价肽特异性CD4+ T细胞的溶细胞活性。将荧光标记的加载或未加载肽的自体LCL在静止状态下与肽特异性CD4+ T细胞共培养过夜，并通过流式细胞术经膜联蛋白V染色来量化LCL凋亡。考虑到用作对照的未经加载的LCL的凋亡百分比，如下计算特异性凋亡百分比：

P20的结果

产生对表1的P20肽具有特异性的CD4+ T细胞系。表明对NMO患者-001和-003的初始CD4+ T细胞的多次刺激诱导了具有高频率效应细胞(CD3+CD4+CD154+，图3)的P20特异性CD4+ T细胞系。

NMO-001患者的P20特异性CD4+ T细胞也可以被相应的短S-WT表位再活化，所述短S-WT表位在其序列中包含丝氨酸而非半胱氨酸(AGGLYEYVFSPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：397，图4)。此外，观察到在从患者NMO-006产生的P20-CD4+细胞系的培养物上清液中由P20或相应的天然短C-WT T细胞表位(序列：AGGLYEYVFCPDVEFKRRFK，SEQ ID NO：398)诱导的细胞因子(IL-5和IL-13)的特异性分泌，证实了该细胞系的抗原特异性(图5)。

这也表明P20特异性CD4+ T细胞能够与呈递相应WT AQP4表位序列的APC交叉反应。

当加载有P20或相应的短S WT T细胞表位的经标记自体LCL与来自患者NMO-001的P20特异性CD4+ T细胞系(在14次刺激之后)共培养时，观察到了特异性LCL凋亡百分比的提高，进一步表明了该P20诱导的CD4+ T细胞系的裂解活性(图6)。在与14次刺激之后的来自患者NMO-003的P20特异性CD4+ T细胞系共培养之后，也观察到加载有P20的LCL的凋亡(图6)。由与用P20刺激16次之后的患者NMO-001的CD4+ T细胞共培养所诱导的LCL凋亡达到50％(图7)。然而，在这种情况下，与短C WT T细胞表位的交叉反应性较低(图7)。

最后，还表明了用P20或相应的短C或S-WT T细胞表位刺激诱导了表达裂解标志物颗粒酶B的效应细胞的特异性提高(图8和9)。

总之，这些结果表明P20能够诱导具有裂解特性的特异性CD4+ T细胞，称为溶细胞性CD4+ T细胞。

P12的结果

用P12对来自NMO患者-001和-003的初始CD4+ T细胞的多次刺激诱导了具有高频率效应细胞(CD3+CD4+CD154+，图10)的P12特异性CD4+ T细胞系。NMO-001患者的P12特异性CD4+ T细胞也可以被其相应的短WT表位(KVAMVCTRKISIAKSVFYIAAKK，SEQ ID NO：SEQ IDNO：399，图11)再活化。在P12特异性CD4+细胞系的培养物上清液中也观察到了由P12诱导的细胞因子(IL-5和IL-13)的特异性分泌(图12)。

当加载有P12或相应的短WT T细胞表位的经标记自体LCL与来自患者NMO-001的P12特异性CD4+ T细胞系共培养时，观察到特异性LCL凋亡百分比的提高(图13)，表明P12诱导的CD4+ T细胞的裂解活性，并进一步表明P12特异性CD4+ T细胞能够与呈递相应的WTAQP4表位序列的APC交叉反应。

最后，还表明用P12或其相应的短WT T细胞表位刺激诱导了表达裂解标志物颗粒酶B的效应细胞的特异性提高(图14)。

总之，这些结果表明P12能够诱导具有裂解特性的特异性CD4+ T细胞，称为溶细胞性CD4+ T细胞。

实施例5：肽的施用对小鼠中抗AQP4抗体产生的作用。

为了表明用表1的肽处理可以降低针对AQP4的抗体应答，使用了鼠血清学模型。在该研究中，将C57BL/6小鼠用10μg的首先在CFA中乳化然后在IFA中乳化的AQP4长肽免疫接种两次，间隔35天。在两次长肽注射之间，将C57BL/6小鼠在存在明矾的情况下用100μg的表1的肽免疫接种4次，间隔7天。对照小鼠仅接受明矾。在研究期间的不同时间点(在免疫接种之前和之后)收集血液，以确定针对AQP4的IgG的产生动力学。使用包被的生物素化形式的AQP4长肽和小鼠单克隆抗AQP4抗体通过ELISA进行抗AQP4 IgG的量化。表明表1的肽能够降低由AQP4长肽诱导的抗AQP4 IgG产生。

Claims

1.长度为12至50个氨基酸的分离的免疫原性肽，所述免疫原性肽包含：

-具有序列Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-的氧化还原酶基序，其中n是选自2、0、1或3的整数，其中m是选自1、0、2或3的整数，其中X是任意氨基酸，其中Z是任意氨基酸，其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸；和

-来自水通道蛋白4(AQP4)抗原的T细胞表位；

其中所述氧化还原酶基序和所述表位由0至7个氨基酸的接头序列隔开，优选地其中所述表位包含选自SEQ ID NO：1至135的序列。

2.根据权利要求1所述的肽，其中所述表位不是小鼠水通道蛋白-4表位，更特别地，所述表位不是小鼠AQP4表位SIMVAFKGVWTQAFWKAV，并且所述免疫原性肽不是HCPYCSIMVAFKGVWTQAFWKAV。

3.根据权利要求1或2所述的肽，其中所述接头-表位-侧翼选自：

TRKISIAKSVFYIAA、TRKISIAKSVFYIAAKK和TRKISIAKSVFYIAAKKK。

4.根据权利要求1或2所述的肽，其中所述接头-表位选自：EYVFSPDVEFKRRFK和EYVFCPDVEFKRRFK。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序选自以下氨基酸基序：

(a)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是0，并且其中m是选自0、1或2的整数，

其中Z是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸，所述碱性氨基酸优选选自：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选K；

(b)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中m是选自0、1或2的整数，

(c)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是2，从而在所述氧化还原酶基序内产生内部X¹X²氨基酸偶联物，其中X是任意氨基酸，优选地其中至少一个X是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，

其中m是选自0、1或2的整数，

其中Z是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸，所述碱性氨基酸优选选自：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选H；

(d)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是3，从而在所述氧化还原酶基序内产生内部X¹X²X³氨基酸段，其中X是任意氨基酸，优选地其中至少一个X是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，

其中m是选自0、1或2的整数，

其中Z是任意氨基酸，优选是碱性氨基酸，所述碱性氨基酸优选选自：H、K、R和本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H；或者

(h)Z_m-[CST]-X_n-C-或Z_m-C-X_n-[CST]-，

其中n是0至3并且其中m是0，并且其中C或[CST]残基之一已被修饰以在所述基序的氨基酸残基的N端酰胺上或在C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的肽，其中所述T细胞表位在其C端侧翼为0至7个氨基酸的序列。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的肽，其中所述免疫原性肽另外包含一个或更多个在所述表位C端侧翼的K或D氨基酸残基。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有Zm-C-XX-C-的序列，其中Z是碱性氨基酸，优选选自K和H，m是0、1或2。

9.根据权利要求8所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有选自以下的序列：

CPYC(SEQ ID NO：157)，HCPYC(SEQ ID NO：158)，KHCPYC(SEQ ID NO：159)，KCPYC(SEQID NO：160)，RCPYC(SEQ ID NO：161)，KKCPYC(SEQ ID NO：162)，KRCPYC(SEQ ID NO：163)，CHGC(SEQ ID NO：164)，HCGHC(SEQ ID NO：165)，KCGHC(SEQ ID NO：166)，KHCGHC(SEQ IDNO：167)，RCGHC(SEQ ID NO：168)，KKCGHC(SEQ ID NO：169)，和KRCGHC(SEQ ID NO：170)。

10.根据权利要求9所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有选自HCPYC(SEQ ID NO：158)或KHCPYC(SEQ ID NO：159)的序列。

11.根据权利要求9所述的肽，其中所述免疫原性肽包含选自SEQ ID NO：137至156的氨基序列中的任一者或由选自SEQ ID NO：137至156的氨基序列中的任一者组成。

12.根据权利要求11所述的肽，其具有以下序列：HCPYCTRKISIAKSVFYIAAKKK(SEQ IDNO：146)或HCPYCEYVFSPDVEFKRRFK(SEQ ID NO：154)。

13.根据权利要求1至7中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有Z_m-C-X-C-的序列，其中Z是碱性氨基酸，优选选自K和H，m是0、1或2，并且X优选是R，优选地其中所述氧化还原酶基序具有选自以下的序列：

KCC，CRC，KCRC(SEQ ID NO：243)，HCRC(SEQ ID NO：320)和KHCRC(SEQ ID NO：321)。

14.根据权利要求13所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有序列KCRC(SEQ ID NO：243)。

15.根据权利要求1至7中任一项所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有Z_m-C-XXX-C-的序列，其中Z是碱性氨基酸，优选选自K和H，m是0、1或2，并且X优选是R，优选地其中所述氧还原酶基序具有选自以下的序列：

CRPYC(SEQ ID NO：250)，KCRPYC(SEQ ID NO：251)，KHCRPYC(SEQ ID NO：252)，RCRPYC(SEQ ID NO：253)，HCRPYC(SEQ ID NO：254)，CPRYC(SEQ ID NO：255)，KCPRYC(SEQ ID NO：256)，RCPRYC(SEQ ID NO：257)，HCPRYC(SEQ ID NO：258)，CPYRC(SEQ ID NO：259)，KCPYRC(SEQ ID NO：260)，RCPYRC(SEQ ID NO：261)，HCPYRC(SEQ ID NO：262)，CKPYC(SEQ ID NO：263)，KCKPYC(SEQ ID NO：264)，RCKPYC(SEQ ID NO：265)，HCKPYC(SEQ ID NO：266)，CPKYC(SEQ ID NO：267)，KCPKYC(SEQ ID NO：268)，RCPKYC(SEQ ID NO：269)，HCPKYC(SEQ ID NO：270)，CPYKC(SEQ ID NO：271)，KCPYKC(SEQ ID NO：272)，RCPYKC(SEQ ID NO：273)，和HCPYKC(SEQ ID NO：274)。

16.根据权利要求15所述的肽，其中所述氧化还原酶基序具有序列KCRPYC(SEQ ID NO：251)。

17.多核苷酸，其编码根据权利要求1至16中任一项所述的肽，其中所述多核苷酸选自包含以下的组：DNA、pDNA、cDNA、RNA和mRNA或其经修饰形式，优选包含N(1)-甲基-假尿苷(m1ψ)的非免疫原性mRNA。

18.药物组合物，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的肽或根据权利要求17所述的多核苷酸。

19.根据权利要求1至16中任一项所述的肽、根据权利要求17所述的多核苷酸、或根据权利要求18所述的药物组合物，其用作药物。

20.根据权利要求19所述的肽、多核苷酸或药物组合物，其用于治疗、预防由AQP4自身抗原或抗AQP4抗体引起的疾病或病症、和/或用于减轻由AQP4自身抗原或抗AQP4抗体引起的疾病或病症的症状，所述由AQP4自身抗原或抗AQP4抗体引起的疾病或病症优选地选自视神经脊髓炎(NMO)；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选地与特定脑区域例如下丘脑、室周核和脑干中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

21.根据权利要求19所述应用的肽、多核苷酸或药物组合物，其中所述药物与抗体耗竭治疗组合使用，优选地在所述药物之前进行抗体耗竭治疗。

22.用于产生针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+T细胞群或NKT细胞群的体外方法，其包括以下步骤：

-提供外周血细胞；

-使所述细胞在体外与权利要求1至16中任一项所述的肽或根据权利要求17所述的多核苷酸接触；以及

-在存在IL-2的情况下扩增所述细胞。

23.针对呈递AQP4表位的APC的溶细胞性CD4+T细胞群或NKT细胞群，其可通过权利要求22所述的方法获得。

24.根据权利要求23所述的溶细胞性CD4+T细胞群或NKT细胞群，其用作药物。

25.根据权利要求23所述的溶细胞性CD4+T细胞群或NKT细胞群，其用于治疗抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症、改善抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症的症状、和/或者预防抗AQP4疾病或视神经脊髓炎谱系病症，优选的病症包括但不限于：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域例如下丘脑、室周核和脑干中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变。

26.根据权利要求25所述应用的溶细胞性CD4+T细胞群或NKT细胞群，其中所述治疗与抗体耗竭治疗组合，优选地在所述治疗之前进行抗体耗竭治疗。

27.根据权利要求1至16中任一项所述的免疫原性肽、根据权利要求17所述的多核苷酸、或权利要求23所述的CD4+T细胞或NKT细胞，或其任意混合物用于制备用于治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的药物的用途。

28.根据权利要求27所述的用途，其中所述病症选自：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域例如下丘脑、室周核和脑干中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变，所述病症优选是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的病症，最优选是视神经脊髓炎(NMO)。

29.根据权利要求27或28所述的用途，其中所述药物与抗体耗竭治疗组合使用，优选地在所述药物之前进行抗体耗竭治疗。

30.用于在对象中治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的方法，其包括以下步骤：向对象施用治疗有效量的根据权利要求1至16中任一项所述的肽、根据权利要求17所述的多核苷酸、或权利要求23所述的CD4+T细胞或NKT细胞，或其任意混合物。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述病症选自：NMO；视神经炎；德维克病；AQP4阳性视脊髓MS(OSMS)；纵向广泛性(横贯性)脊髓炎；AQP4阳性脊髓炎，其优选与特定脑区域例如下丘脑、室周核和脑干中的病变相关；和肿瘤样脱髓鞘或病变，所述病症优选是由AQP4自身抗原和/或抗AQP4抗体引起或加重的病症，最优选是视神经脊髓炎(NMO)。

32.权利要求30或31所述的方法，其中所述治疗与抗体耗竭治疗组合，优选地在所述治疗之前进行抗体耗竭治疗。

33.用于在样品中检测对AQP4抗原具有特异性的MHC II类限制性CD4+T细胞的体外方法，其包括以下步骤：

-使对象的样品与以下接触：分离的MHC II类分子与根据权利要求1至16所述的肽的复合物；

-通过测量所述复合物与所述样品中细胞的结合来检测CD4+T细胞，其中所述复合物与细胞的结合指示所述样品中存在对AQP4抗原具有特异性的CD4+T细胞。

34.用于在对象中治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症的方法，其包括以下步骤：向对象施用治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的肽、根据权利要求18所述的多核苷酸、或权利要求23所述的CD4+T细胞或NKT细胞以及具有B细胞耗竭活性的抗体，其中所述抗体与所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞同时、顺序或分开施用。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体在所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞之前施用。

36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合这样的抗原的抗体，所述抗原选自：

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD19的抗体，例如伊奈利珠单抗(MEDI-551)。

38.根据权利要求36所述的方法，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD20的抗体，例如利妥昔单抗或优利妥昔单抗(LFB-R603、TGT-1101、TGTX-1101)。

39.药物制剂、组合、组合物或药盒，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的肽、根据权利要求18所述的多核苷酸、或权利要求23所述的CD4+T细胞或NKT细胞以及具有B细胞耗竭活性的抗体。

40.根据权利要求39所述的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合这样的抗原的抗体，所述抗原选自：

41.根据权利要求39或40所述的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD19的抗体，例如伊奈利珠单抗(MEDI-551)。

42.根据权利要求39或40所述的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体选自结合CD20的抗体，例如利妥昔单抗或优利妥昔单抗(LFB-R603、TGT-1101、TGTX-1101)。

43.根据权利要求39至42中任一项所述的药物制剂，其用作药物。

44.根据权利要求39至42中任一项所述的药物制剂，其用于治疗视神经脊髓炎谱系病症、改善视神经脊髓炎谱系病症的症状和/或预防视神经脊髓炎谱系病症。

45.根据权利要求43或44所述应用的药物制剂，其中所述抗体与所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞同时、顺序或分开施用。

46.根据权利要求45所述应用的药物制剂，其中所述具有B细胞耗竭活性的抗体在所述免疫原性肽、多核苷酸或细胞之前施用。