CN117651711A - 使用免疫原性肽的改进的治疗方法 - Google Patents

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CN117651711A CN202280039477.3A CN202280039477A CN117651711A CN 117651711 A CN117651711 A CN 117651711A CN 202280039477 A CN202280039477 A CN 202280039477A CN 117651711 A CN117651711 A CN 117651711A
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Abstract

本发明涉及包含抗原的T细胞表位和氧化还原酶基序的免疫原性肽的具体施用方案。

Description

使用免疫原性肽的改进的治疗方法
背景技术
已经描述了数种策略来防止产生针对抗原的不期望的免疫应答。WO2008/017517描述了使用包含氧化还原酶基序和给定抗原蛋白质的MHC II类T细胞表位的肽的策略。这些肽将CD4+T细胞转化为具有溶细胞特性(cytolytic property)的细胞类型，称为溶细胞性CD4+T细胞。这些细胞能够通过触发凋亡来杀伤那些抗原呈递细胞(antigen presentingcell，APC)，所述抗原呈递细胞呈递从中获得肽的抗原。WO2008/017517表明了用于变态反应和自身免疫病(例如1型糖尿病)的这一概念。此处，胰岛素可充当自身抗原。
WO2009101207和Carlier et al.(2012)Plos one 7，10 e45366进一步更详细地描述了抗原特异性溶细胞性细胞。
WO2016059236还公开了经修饰的肽，其中在氧化还原酶基序附近存在另外的组氨酸。
WO2018162498还公开了包含氧化还原酶基序和另外的组氨酸以及来自胰岛素的MHCII T细胞表位的肽及其在治疗1型糖尿病(type 1 diabetes，T1D)中的用途。
然而，即使考虑到上述情况，关于在治疗期间这样的肽在患者中的实际作用知之甚少，并且仍然需要改进这样的免疫原性肽的治疗作用。
发明内容
本发明提供了用于用包含自身抗原表位和氧化还原酶基序的免疫原性肽治疗自身免疫病的改进方法。
本发明人发现，在患者中，可以通过调整施用所述免疫原性肽的治疗和剂量方案来提高响应性水平。
因此，本发明提供了以下方面：
1.长度为9至50个氨基酸的免疫原性肽，其用于预防或治疗选自以下的疾病或病症：自身免疫病、脱髓鞘病、同种移植或移植排斥、肿瘤或癌症、胞内病原体感染、针对可溶性同种因子(soluble allofactor)的免疫应答、针对变应原暴露的免疫应答、或者针对用于在对象中的基因治疗或基因疫苗接种的病毒载体的免疫应答，所述肽包含氧化还原酶基序和与该基序相隔0至7个氨基酸的参与所述疾病或病症的抗原的T细胞表位序列，
其中所述氧化还原酶基序包含以下基序：
Zm-[CST]-Xn-C-(SEQ ID NO：12至36)或Zm-C-Xn-[CST]-(SEQ ID NO：37至61)，
其中n为0至6的整数，优选2、1、0或3。
其中m代表0至2的整数，
其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，X代表任意氨基酸并且Z代表任意氨基酸，优选碱性氨基酸，
其中所述免疫原性肽以至少5剂300至1500μg所述免疫原性肽进行施用，并且两剂之间的间隔为约12天至约28天。
在一个优选实施方案中，所述施用通过肌内或皮下注射进行。
在所述氧化还原酶基序的通式中，连字符(-)指示氧化还原酶基序与接头或T细胞表位的N端末端，或者与接头或T细胞表位的C端末端的连接点。
在一个优选实施方案中，所述免疫原性肽中的T细胞表位不是选自以下的氨基酸序列或不包含选自以下的氨基酸序列：MHC II类T细胞表位FLRVPCWKI(SEQ ID NO：4)和FLRVPSWKI(SEQ ID NO：5)，或者NKT细胞表位FLRVPCW(SEQ ID NO：10)和FLRVPSW(SEQ IDNO：11)。
在一个优选实施方案中，所述氧化还原酶基序不是标准C-XX-[CST](SEQ ID NO：1)或[CST]-XX-C(SEQ ID NO 2)氧化还原酶基序的重复的一部分，例如可以彼此间隔一个或更多个氨基酸的所述基序的重复(例如CXXC X CXXC X CXXC(SEQ ID NO：6))，作为彼此相邻的重复(CXXCCXXCCXXC(SEQ ID NO：7))或者作为彼此重叠的重复CXXCXXCXXC(SEQ IDNO：8)或CXCCXCCXCC(SEQ ID NO：9))，特别是当在如方面1中所限定的通式中n为0或1且m为0时。
在一个优选实施方案中，抗原是自身抗原。
2.根据方面1所述应用的免疫原性肽，其中所述免疫原性肽通过肌内或皮下注射6剂300至1500μg所述免疫原性肽来施用，并且两剂之间的间隔为约12至28天。
3.根据方面1或2所述应用的免疫原性肽，其中每剂所述300至1500μg所述免疫原性肽以两剂之间约12至约16天或约2周的间隔进行施用。
4.根据方面1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中每剂含有：
-300至600μg的所述免疫原性肽；
-600至800μg的所述免疫原性肽；
-800至1000μg的所述免疫原性肽；
-1000至1200μg的所述免疫原性肽；或
-1200至1500μg的所述免疫原性肽。
在所述方面的一个优选实施方案中，所述剂含有450或1350μg的所述免疫原性肽。
在一个甚至更优选的实施方案中，所述剂被施用6次，并且剂之间的间隔为约12至约16天，或约2周。
5.根据方面1至4中任一项所述应用的免疫原性肽，其中在从治疗开始算起的约22至30周，进行一剂300至1500μg所述免疫原性肽的加强施用。
6.根据方面5所述应用的免疫原性肽，其中所述加强施用在从治疗开始算起的约22至26周进行。
7.根据方面5或6所述应用的免疫原性肽，其中所述加强含有：
-300至600μg的所述免疫原性肽；
-600至800μg的所述免疫原性肽；
-800至1000μg的所述免疫原性肽；
-1000至1200μg的所述免疫原性肽；或
-1200至1500μg的所述免疫原性肽。
在所述方面的一个优选实施方案中，所述剂含有450或1350μg的所述免疫原性肽，优选在治疗的约23至25周，更优选在治疗的约第24周。
8.根据方面1至7中任一项所述应用的免疫原性肽，其中在两个部位(两个上臂，优选在臂的外侧部分的区域，更优选在肘与肩之间的中间)同时施用所述剂的一半。
9.用于分析患者对选自以下的疾病或病症的治疗的响应的体外方法：自身免疫病、脱髓鞘病、同种移植或移植物排斥、肿瘤或癌症、胞内病原体感染、针对可溶性同种因子的免疫应答、针对变应原暴露的免疫应答、或者针对用于在对象中的基因治疗或基因疫苗接种的病毒载体的免疫应答，其中免疫原性肽的长度为9至50个氨基酸，所述肽包含氧化还原酶基序和与该基序相隔0至7个氨基酸的参与所述疾病或病症的(自身)抗原的MHC II类T细胞表位序列，
其中所述氧化还原酶基序包含以下基序：
Zm-[CST]-Xn-C-(SEQ ID NO：12至36)或Zm-C-Xn-[CST]-(SEQ ID NO：37至61)，
其中n为0至6的整数，优选2、1、0或3。
其中m代表0至2的整数，其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，X代表任意氨基酸并且Z代表任意氨基酸，优选碱性氨基酸，
其中所述方法包括在以下时间点分析取自用所述免疫原性肽治疗的患者的样品：
-在治疗的第0天，
-在治疗的第11至13周，例如在第12周，
-在治疗的第23至25周，例如在第24周，以及
-在治疗的第47至49周，例如在第48周。
10.根据方面9所述的方法，其中另外在所述治疗开始之前约8至10周、优选在所述治疗开始之前约9周分析所述患者的样品。
11.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9或10所述的方法，其中所述自身免疫病选自以下：1型糖尿病(T1D)、多发性硬化(multiple sclerosis，MS)、视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，NMO)、类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)、银屑病、多关节炎、哮喘、特应性皮炎、硬皮病、溃疡性结肠炎、青少年糖尿病(juveline diabetes)、甲状腺炎、格雷夫病(Grave’s disease)、系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythromatosis，SLE)、干燥综合征(syndrome)、恶性贫血、慢性活动性肝炎、移植排斥和癌症。
12.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至11中任一项所述的方法，其中所述(自身)抗原在与所述表位相邻的N端或C端的11个氨基酸内未天然包含氧化还原酶基序。
13.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至12中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，所述表位在其序列中未天然包含氧化还原酶基序。
14.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至13中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，T细胞表位是MHC I类或II类T细胞表位或者NKT细胞表位。
-MHC II类表位的长度通常为7至20个氨基酸长，更通常为8至20个或9至20个氨基酸长，甚至更优选为7至17个、8至17个、9至17个、10至17个、11至17个、12至17个、13至17个氨基酸，例如14至16个氨基酸。与MHC II类分子结合的肽还可以更长，因为这些肽位于沿着在两端处开放的MHC II肽结合沟(groove)(不同于MHC I类肽结合沟)的延伸构象中。肽主要通过使主链原子与排列在肽结合沟上的保守残基接触而保持在适当位置。
-NKT细胞表位可以被NKT细胞的细胞表面处的受体(特别是被CD1d分子)识别和结合。这样的表位的长度通常为7至20个氨基酸，更通常为7至17个氨基酸长，甚至更优选为8至17个、9至17个、10至17个、11至17个、11至17个、12至17个、13至17个氨基酸，例如14至16个氨基酸。这样的表位通常具有基序[FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY][SEQ ID NO：62]或[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW][SEQ ID NO：63]。
15.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至14中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，氧化还原酶基序位于接头或表位的N端，或者接头或表位的C端，优选接头或表位的N端，和/或者其中氧化还原酶基序位于免疫原性肽的N端末端或C端末端。
16.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至15中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，抗原蛋白的所述T细胞表位是NKT细胞表位或MHCII类T细胞表位，
优选地，其中当抗原蛋白的所述T细胞表位是NKT细胞表位时，其长度为7至25个氨基酸；或者其中当抗原蛋白的所述T细胞表位是MHC II类T细胞表位时，其长度为9至25个氨基酸。
17.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至16中任一项所述的方法，其中具有NKT表位的所述免疫原性肽的长度为7至50个氨基酸，和/或者其中包含MHC II类T细胞表位的所述免疫原性肽的长度为9至50个氨基酸。
18.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至17中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，氧化还原酶基序与T细胞表位之间的接头为0至4个氨基酸。
19.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至18中任一项所述的方法，其中在所述免疫原性肽中，所述氧化还原酶基序具有以下序列：
如方面1中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-(SEQ ID NO：12至36)或Zm-C-Xn-[CST]-(SEQID NO：37至61)，其选自以下氨基酸基序：
(a)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，
其中n为0，并且其中m为选自0、1或2的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选碱性氨基酸，其优选选自：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选K；
(b)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，
其中n为1，其中X为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，
其中m为选自0、1或2的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选碱性氨基酸，其优选选自：H、K、R，和本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选K；
(c)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为2，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2氨基酸偶联物，其中X为任意氨基酸，优选其中至少一个X为选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，
其中m为选自0、1或2的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选碱性氨基酸，其优选选自：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H，最优选K；
(d)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为3，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3氨基酸段，其中X为任意氨基酸，优选其中至少一个X是选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或R，
其中m为选自0、1或2的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选碱性氨基酸，其优选选自：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，更优选K或H；
(e)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为4，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4(SEQ ID NO：64)氨基酸序列段，其中m为选自0、1或2的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；
(f)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CSr]-，其中n为5，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4X5(SEQ ID NO：65)氨基酸段，其中m为选自0、1或2的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；
(g)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为6，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO：66)氨基酸段，其中m为选自0、1或2的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或H，最优选K；或者
(h)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为0至6并且其中m为0，并且其中C或[CST]残基中的一者已被修饰以在基序的氨基酸残基的N端酰胺上或C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基基团。
在这样的基序的一个优选实施方案中，n为2，并且m为1或2，其中内部X1X2各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1和X2是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在另一个实例中，所述基序中的X1或X2中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。在基序的另一个实例中，所述基序中的X1或X2中的至少一者是P或Y。氧化还原酶基序内的内部X1X2氨基酸偶联物的一些具体非限制性实例是是FY，HY，KY，RY，PH，PK，PR，HG，KG，RG，HH，HK，HR，GP，HP，KP，RP，GH，GK，GR，GH，KH，和RH。优选地，所述修饰导致基序中第一半胱氨酸的N端乙酰化(N-乙酰基-半胱氨酸)。
20.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至19中任一项所述的方法，其中所述免疫原性肽具有包含以下序列的氧化还原酶基序：
CC，KCC，RCC，CRC，CKC，KCRC(SEQ ID NO：154)，KCKC(SEQ ID NO：152)，KCHC(SEQID NO：225)，RCRC(SEQ ID NO：156)，RCKC(SEQ ID NO：226)，CPYC(SEQ ID NO：227)，HCPYC(SEQ ID NO：228)，KCPYC(SEQ ID NO：229)，RCPYC(SEQ ID NO：230)，CRPYC(SEQ ID NO：231)，CPRYC(SEQ ID NO：232)，CPYRC(SEQ ID NO：233)，
CKPYC(SEQ ID NO：234)，CPKYC(SEQ ID NO：235)，CPYKC(SEQ ID NO：236)，
RCRPYC(SEQ ID NO：237)，RCPRYC(SEQ ID NO：238)，RCPYRC(SEQ ID NO：239)，
RCKPYC(SEQ ID NO：240)，RCPKYC(SEQ ID NO：241)，RCPYKC(SEQ ID NO：242)，
KCRPYC(SEQ ID NO：243)，KCPRYC(SEQ ID NO：244)，KCPYRC(SEQ ID NO：245)，
KCKPYC(SEQ ID NO：246)，KCPKYC(SEQ ID NO：247)，或KCPYKC(SEQ ID NO：248)。
21.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述自身免疫疾病是T1D并且其中所述肽中的T细胞表位是来自胰岛素(原)或C肽的MHC II类T细胞或NKT细胞表位，优选地，其中所述表位的氨基酸序列由氨基酸序列LALEGSLQK[SEQ ID NO：3]限定。
22.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至21中任一项所述的方法，其中所述患者为纯合或杂合HLA型DR3或DR4阳性。
23.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至22中任一项所述的方法，其中所述肽包含选自以下的序列：
Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：67]，[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：68]，CxxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：69]，HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：70]，H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：71]，HCxxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：72]，和HCPYCSLQPLALEGSLQKRG[SEQ ID NO：73]。
24.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述抗原是自身抗原、变应原、可溶性同种因子、由移植物脱落的同种抗原、胞内病原体的抗原、用于基因治疗或基因疫苗接种的病毒载体的抗原、肿瘤相关抗原或变应原。
示例性抗原可以是：
-在MS情况下，髓鞘抗原、神经元抗原和星形胶质细胞来源的抗原，例如：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein，MOG)、髓鞘碱性蛋白(Myelinbasic protein，MBP)、蛋白脂质蛋白(Proteolipid protein，PLP)、少突胶质细胞特异性蛋白(Oligodendrocyte-specific protein，OSP)、髓鞘相关抗原(myelin-associatedantigen，MAG)、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白(myelin-associated oligodendrocytebasic protein，MOBP)和2’，3’-环核苷酸3’-磷酸二酯酶(2′，3′-cyclic-nucleotide 3′-phosphodiesterase，CNPase)、S100β蛋白或转醛醇酶H自身抗原(Riedhammer和Weissert，2015；Front Immunol.2015；6：322)，优选MOG、MBP、MOG和MOBP。
-在银屑病的情况下，ADAMTSL5、PLA2G4D、角蛋白例如角蛋白14或角蛋白17、来自小麦(Triticum aestivum)的抗原、Pso p27、抗菌肽抗微生物肽，嗜中性防御素(ceutrophil defensin)1和LL37，优选LL37(Jason E.Hawkes et al.，2017：CurrentDermatology Reports第6卷，第104至112页)。
-在哮喘的情况下，变应原，例如来自花粉、芽孢、尘螨和哮喘患者的宠物毛屑的那些。
-在癌症的情况下，肿瘤或癌症相关抗原，例如癌基因、原癌基因、病毒蛋白、存活因子或者克隆型或独特型决定簇。一些具体实例是：示出了在MHC I类决定簇的背景下由肿瘤细胞自发表达并且同样地由CD8+溶细胞性T细胞识别的MAGE(黑素瘤相关基因)产物。然而，MAGE来源的抗原(例如MAGE-3)也在已从黑色素瘤患者克隆了CD4+特异性T细胞和MHCII类决定簇中表达(Schutz et al.(2000)Cancer Research 60：6272-6275；Schuler-Thurner et al.(2002)J.Exp.Med.195：1279-1288)。由MHC II类决定簇呈递的肽是本领域已知的。另一些实例包括由P815肥大细胞瘤和由黑素瘤细胞表达的gp100抗原(Lapointe(2001；J.Immunol.167：4758-4764；Cochlovius et al.(1999)Int.J.Cancer 83：547-554)。原癌基因包括许多优先在肿瘤细胞中表达而在健康组织中最小地表达的多肽和蛋白质。细胞周期蛋白D1是参与G1至S的转变的细胞周期调节因子。细胞周期蛋白D1的高表达已在肾细胞癌、甲状旁腺癌和多发性骨髓瘤中被证实。涵盖第198至212位残基的肽已显示携带在MHC II类决定簇的背景下被识别的T细胞表位(Dengiel et al.(2004)Eur.J.ofImmunol.34：3644-3651)。存活蛋白是抑制凋亡从而赋予存活蛋白表达细胞扩增优势的因子的一个实例。存活蛋白在上皮和造血起源的人癌症中异常表达，并且在除了胸腺、睾丸和胎盘之外的健康成人组织中以及在经生长激素刺激的造血祖细胞和内皮细胞中不表达。令人感兴趣的是，在黑素瘤患者的血液中可检测到存活蛋白特异性CD8+T细胞。存活蛋白由广泛多种恶性细胞系(包括肾癌、乳腺癌和多发性骨髓瘤)表达，但也在急性髓性白血病以及急性和慢性淋巴性白血病中表达(Schmidt(2003)Blood 102：571-576)。关于凋亡抑制剂的另一些实例是Bcl2和spi6。独特型决定簇由滤泡性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和一些形式的白血病中的B细胞呈递以及由T细胞淋巴瘤和一些T细胞白血病呈递。独特型决定簇是B细胞受体(B cell receptor，BCR)或T细胞受体(T cell receptor，TCR)的抗原特异性受体的一部分。这样的决定簇基本上由受体的高变区编码，所述高变区对应于B细胞中VH或VL区的互补决定区(complementarity-determining region，CDR)，或者T细胞中β链的CDR3。由于受体是由基因的随机重排产生的，因此其对各个体都是独特的。来源于独特型决定簇的肽存在于MHC II类决定簇中(Baskar et al.(2004)J.Clin.Invest.113：1498-1510)。一些肿瘤与病毒来源抗原的表达相关。因此，一些形式的霍奇金病(Hodgkin disease)表达来自EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)的抗原。这样的抗原在I类和II类决定簇二者中均有表达。对EBV抗原具有特异性的CD8+溶细胞性T细胞可消除霍奇金淋巴瘤细胞(Bollard et a/.(2004)J.Exp.Med.200：1623-1633)。抗原决定簇(例如LMP-1和LMP-2)由MHC II类决定簇呈递。
-在移植排斥的情况下，移植特异性抗原，其将明显取决于被移植的组织或器官的类型。一些实例可以是：组织，例如角膜、皮肤、骨(骨碎片)、血管或筋膜；器官，例如肾、心脏、肝、肺、胰腺或肠；或者甚至单独的细胞，例如胰岛细胞、α细胞、β细胞、肌细胞、软骨细胞、心脏细胞、脑细胞、血细胞、骨髓细胞、肾细胞和肝细胞。参与移植排斥的一些特定示例性抗原是次要组织相容性抗原、主要组织相容性抗原或组织特异性抗原。当同种抗原蛋白质是主要组织相容性抗原时，其是MHC I类抗原或MHC II类抗原。要记住的重要点是同种抗原特异性T细胞识别APC表面处同源肽的机制的可变性。同种反应性T细胞可识别MHC分子本身的同种抗原决定簇、与自体或同种异体来源的MHC分子结合的同种抗原肽、或者位于同种抗原来源的肽和MHC分子(后者是自体或同种异体起源的)内的残基的组合。次要组织相容性抗原的一些实例是来源于由HY染色体编码的蛋白质(H-Y抗原)的那些，例如Dby。另一些实例可见于例如Goulmy E，Current Opinion in Immunology，第8卷，75-81，1996(特别地参见其中的表3)。必须注意的是，人中的许多次要组织相容性抗原是通过使用溶细胞性CD8+T细胞将其呈递到MHC I类决定簇中而被检测到的。然而，这样的肽是通过加工也包含MHCII类限制性T细胞表位的蛋白质而衍生的，从而提供了设计本发明肽的可行性。组织特异性同种抗原可使用相同的程序来鉴定。这方面的一个实例是来源于在肾中表达但在脾中不表达的蛋白质并且能够引发对肾细胞具有细胞毒性活性的CD8+T细胞的MHC I类限制性表位(Poindexter et al，Journal of Immunology，154：3880-3887，1995)。
更优选地，所述抗原蛋白质是涉及1型糖尿病(type-1diabetes，T1D)、脱髓鞘病(例如多发性硬化(MS)或视神经脊髓炎(NMO))或类风湿性关节炎(RA)的自身抗原。
涉及T1D的自身抗原的一些非限制性实例。
来源：Mallone R et al.，Clin Dev Immunol.2011：513210。
涉及MS的自身抗原的一些非限制性实例。
涉及RA的自身抗原的一些非限制性实例。
自身抗原 UniProtKB标识符
GRP78 P11021
HSP60 P10809
60kDa伴侣蛋白2 P9WPE7
凝溶胶蛋白 P06396
壳多糖酶3样蛋白1 P36222
组织蛋白酶S P25774
血清白蛋白 P02768
组织蛋白酶D P07339
涉及NMO的自身抗原的一些实例。
在一些实施方案中，在本文中所限定的方面中的任一者中，所述肽中的表位不是来源于MOG抗原氨基酸序列的序列。
在一些实施方案中，在本文中所限定的方面中的任一者中，所述疾病或病症不是MS。
在一些实施方案中，在本文中所限定的方面中的任一者中，所述疾病或病症不是已知通过富马酸/酸根/酸酯治疗的疾病，或者不是如本文别处所限定的富马酸/酸根/酸酯相关疾病或病症。
25.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是MS并且其中所述肽中的T细胞表位是来自选自包含以下的组的抗原蛋白的MHC II类T细胞或NKT细胞表位：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、蛋白脂质蛋白(PLP)、髓鞘相关抗原(MAG)、少突胶质细胞特异性蛋白(OSP)、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白(MOBP)、2’，3’-环核苷酸3’-磷酸二酯酶(CNPase)、S100β蛋白和转醛醇酶H，优选MOG。
在一个替代实施方案中，在根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法中，所述自身免疫病是MS并且所述肽中的T细胞表位是来自选自包含以下的组的抗原蛋白的MHC II类T细胞或NKT细胞表位：髓鞘碱性蛋白(MBP)、蛋白脂质蛋白(PLP)、髓鞘相关抗原(MAG)、少突胶质细胞特异性蛋白(OSP)、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白(MOBP)、2’，3’-环核苷酸3’-磷酸二酯酶(CNPase)、S100β蛋白和转醛醇酶H。
26.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是NMO并且其中所述肽中的T细胞表位是来自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的MHC II类T细胞或NKT细胞表位。
27.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是RA并且其中所述肽中的T细胞表位是来自选自包含以下的组的抗原蛋白的MHC II类T细胞或NKT细胞表位：GRP78、HSP60、60kDa伴侣蛋白2、凝溶胶蛋白(Gelsolin)、壳多糖酶3样蛋白1、组织蛋白酶S、血清白蛋白、黏着斑蛋白(vinculin)和组织蛋白酶D。
28.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是银屑病并且其中所述抗原蛋白选自以下：ADAMTSL5、PLA2G4D、角蛋白例如角蛋白14或角蛋白17、来自小麦的抗原、Pso p27、抗菌肽抗微生物肽、嗜中性防御素1和LL37，优选LL37。
29.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至28中任一项所述的方法，其中当所述自身免疫病是MS、NMO或银屑病时，所述治疗不包括用如本文中所限定的富马酸/酸根/酸酯化合物或其衍生物进行治疗。
在一个优选实施方案中，所述肽的T细胞表位不是涉及富马酸/酸根/酸酯相关或富马酸/酸根/酸酯治疗的疾病或病症的抗原蛋白或抗原的T细胞表位，更优选MHC I类或II类分子或者NKT细胞表位。
26.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20和24或25中任一项所述的方法，其中所述表位来源于髓鞘-少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗原氨基酸序列。更优选地，所述表位选自包含以下的氨基酸残基的组：由以下SEQ ID NO：74限定的成熟MOG氨基酸序列的第40至60、41至55、43至57、44至58、45至59和35至55位氨基酸残基：
例如选自包含以下的组的那些：
MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK(小鼠SEQ ID NO：81)，
MEVGWYRPPFSRVVHLYRNGK(人SEQ ID NO：82)，
YRSPFSRVV(小鼠SEQ ID NO：83)，和
YRPPFSRVV(人SEQ ID NO：84)，
或其组合。
在方面6或7的一个优选实施方案中，所述免疫原性肽包含具有由以下序列限定的T细胞表位或包含含有由以下序列限定的T细胞表位的T细胞表位：FLRVPCWKI(SEQ ID NO：4)或FLRVPSWKI(SEQ ID NO：5)，
或者所述免疫原性肽包含以下氨基酸序列或基本上由以下氨基酸序列组成：
KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK(SEQ ID NO：87)，或
27.根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20和24中任一项所述的方法，其中所述免疫原性或致耐受性肽中的表位来源于髓鞘蛋白脂质蛋白(也称为蛋白脂质蛋白(PLP)或亲脂素(lipohilin))抗原氨基酸序列。更优选地，参考专利申请WO2014111841，所述表位选自包含以下氨基酸残基的组：由以下SEQ ID NO：89(UniProtKB-P60201(MYPR_HUMAN))限定的PLP氨基酸序列的第36至61、179至206、207至234、39至57、180至198、208至222、39至53、42至56、43至57、180至194、181至195、182至196、183至197、184至198、208至222、36至61、179至206和207至234位氨基酸残基：
例如选自包含以下的组的那些：
PLP第36至61位：HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI(SEQ ID NO：90)；
PLP第179至206位：TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY(SEQ ID NO：91)；
PLP第207至234位：GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM(SEQ ID NO：92)
PLP第39至57位：LTGTEKLIETYFSKNYQDY(SEQ ID NO：93)
PLP第180至198位：WTTCQSIAFPSKTSASIGS(SEQ ID NO：94)
PLP第208至222位：VLPWNAFPGKVCGSN(SEQ ID NO：95)
PLP第39至53位：LTGTEKLIETYFSKN(SEQ ID NO：96)
PLP第42至56位：TEKLIETYFSKNYQD(SEQ ID NO：97)
PLP第43至57位：EKLIETYFSKNYQDY(SEQ ID NO：98)
PLP第180至194位：WTTCQSIAFPSKTSA(SEQ ID NO：99)
PLP第181至195位：TTCQSIAFPSKTSAS(SEQ ID NO：100)
PLP第182至196位：TCQSIAFPSKTSASI(SEQ ID NO：101)
PLP第183至197位：CQSIAFPSKTSASIG(SEQ ID NO：102)
PLP第184至198位：QSIAFPSKTSASIGS(SEQ ID NO：103)
PLP第208至222位：VLPWNAFPGKVCGSN(SEQ ID NO：104)
PLP第36至61位：HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI(SEQ ID NO：105)
PLP第179至206位：TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY(SEQ ID NO：106)和
PLP第207至234位：GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM(SEQ ID NO：107)或其组合。
根据方面1至8中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据方面9至20和24中任一项所述的方法，其中所述免疫原性或耐受原性肽中的表位来源于髓鞘碱性蛋白(MBP)抗原氨基酸序列。更优选地，所述MBP表位选自包含以下序列的组：
VDAQGTLSKIFKLGG(SEQ ID NO：134)，和
或其组合，
或者由MBP氨基酸序列的第30至44、80至94、83至99、81至95、82至96、83至97、84至98、110至124、130至144、131至158、131至145、140至148、142至152、132至146、134至148、135至149、136至150、137至151、138至152、139至153、140至154和133至147位氨基酸残基限定的片段中的任一者或更多者，所述MBP氨基酸序列由以下SEQ ID NO：136(UniProtKB-P02686-5(MBP_HUMAN))限定：
29.在本文中所公开的涉及免疫原性肽的治疗方法或医学用途的方面中的任一者中，所述肽还可以作为编码所述相应肽的核酸施用。编码根据本文中所公开的方面或实例中任一者的免疫原性或耐受原性肽的核酸，所述核酸优选选自分离的脱氧核糖核酸(desoxyribonucleic acid，DNA)、质粒DNA(plasmid DNA，pDNA)、编码DNA(coding DNA，cDNA)、核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)、信使RNA(messenger RNA，mRNA)或其经修饰形式例如包含N(1)-甲基-假尿苷(m1ψ)的非免疫原性mRNA。在一些实施方案中，所述核酸可以是表达盒的一部分，任选地被并入到可用于基因治疗的(病毒)载体或质粒中或者可以以的经包封或裸的DNA或RNA的形式存在，以根据药物和基因治疗领域中已知的技术施用。
30.在本文中所公开的涉及免疫原性肽的治疗方法或医学用途的方面中任一者中，所述肽可以被特异性HLA类型识别：
-当所述疾病是T1D时，所述抗原优选在HLA-DRB1*03和DRB1*04单倍型组的背景下被识别。在DRB1*03组中，两个等位基因是常见的，即DRB1*0301和DRB1*0302，但也已报道了另一些等位基因，例如DRB1*0303、DRB1*0304和DRB1*0307。在DRB1*04组中，可发现十个主要等位基因，即：
DRB1*0401，DRB1*0402，DRB1*0403，DRB1*0404，DRB1*0405，DRB1*0406，DRB1*0407，DRB1*0408，DRB1*0410和DRB1*0411。
-当所述疾病或病症是MS时，所述抗原优选在HLA-DRB1*15：01、HLA-DRB1*03：01、HLA-DRB1*04：01、HLA-DRB1*07：01、HLA-DRB5*0101、或HLA的DQ6型的背景下被识别。更优选的是具有HLA-DRB1*型15：01的患者；
-当所述疾病或病症是NMO时，所述抗原优选在HLA-DRB1*03：01或HLA-DPB1*05：01(针对亚洲)的背景下被识别；或者
-当所述疾病或病症是RA时，所述抗原优选在HLA-DRB1*01：01、04：01或04：04的背景下被识别。
31.在一个优选实施方案中，用免疫原性肽治疗的T1D患者是DR4阳性的(即对DRB1*04单倍型之一呈阳性)，更优选地，用免疫原性肽治疗的T1D患者是DR4阳性(即对DRB1*04单倍型之一呈阳性)。DRB1*04单倍型)且DR3阴性的(即对所有DRB1*03单倍型均呈阴性)。或者，用免疫原性肽治疗的T1D患者是DR3阳性的(即对DRB1*03单倍型之一呈阳性)。术语“HLA DR4阳性”涵盖杂合或纯合HLA-DR4阳性的患者。在一个实施方案中，所述患者也是HLA-DR3阴性的(HLA-DR3-)。术语“HLA-DR3阴性”是指纯合HLA-DR3阴性的患者。
32.在本文中所限定的方面中任一者中，所述肽可以作为包含所述肽和可药用载体和/或佐剂的药物组合物来施用。
33.本发明还提供了用于预防或治疗自身免疫病、脱髓鞘病、移植排斥或癌症的方法，其包括使用以上方面中任一者的施用方案来施用如以上方面中任一者所限定的免疫原性肽。
34.本发明还提供了用于以上方面中任一者所限定的免疫原性肽在制备用于预防或治疗以下的药物中的用途：自身免疫病、脱髓鞘病、移植排斥或癌症，其中所述免疫原性肽根据以上方面中任一者所述的施用方案来施用。
35.预防或治疗自身免疫病、脱髓鞘疾病、移植排斥或癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用前述方面中任一者所限定的免疫原性肽或编码所述免疫原性肽的核酸的步骤，其中所述免疫原性肽或核酸根据前述方面中任一者所述的施用方案来施用。
附图说明
图1：用研究药物产品(investigational medicinal product，IMP)进行的主要临床研究(main clinical study)和亚临床(sub clinical study)研究的示意图。详见文本。
图2：代表患者从诊断后≤9周到第48周的历程。DBS：干血斑(Dry Blood Spot)分析。FUp：跟进。详见文本。
图3：代表在不同时间点时经IMP(实线)和安慰剂(虚线)治疗的患者组中响应于胰岛素原表位C20-A1刺激的CD4+T细胞的净％。直线连接平均值，而误差线显示在每个时间点时的标准误差。使用Mann-Whitney-Wilcoxon U检验比较经IMP和安慰剂治疗的患者组在各个时间点的p值。线图右侧示出的p值表示使用重复测量ANOVA的平均响应随时间的依赖性。
具体实施方式
将针对具体实施方案来描述本发明，但是本发明不限于此，而是仅由权利要求书来限定。权利要求书中的任何附图标记不应被解释为限制范围。仅提供以下术语或定义以帮助理解本发明。除非本文中明确定义，否则本文中使用的所有术语具有与其对于本发明领域的技术人员来说相同的含义。本文中提供的定义的范围不应被解释为小于本领域普通技术人员所理解的范围。
除非另外指明，否则对本领域技术人员将明显的是，可以以本身已知的方式进行并且已经进行了未具体详细描述的所有方法、步骤、技术和操作。例如，再次参考标准手册、上面提及的一般背景技术以及其中引用的其他参考文献。
除非上下文另外明确地指出，否则本文中使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种和更多个/种。当与本文中使用的方面、权利要求或实施方案相关使用时，术语“任何/任意”是指所涉及的所述方面、权利要求或实施方案中任何单个(即任一)以及所有组合。
本文中使用的术语“包含/包括”和“由……构成”与“包括/包含”或“含有”同义，并且是包括性的或开放式的，而不排除另外的非记载成员、要素或方法步骤。所述术语还涵盖“基本上由……组成”和“由……组成”的实施方案。
通过端点对数值范围的列举包括在相应范围内纳入的所有数字和分数，以及所列举的端点。
本文中涉及例如参数、量、时距(temporal duration)等可测量值时使用的术语“约/大约”意在涵盖指定值的或相对于指定值的+/-10％或更小、优选+/-5％或更小、更优选+/-1％或更小、并且还更优选+/-0.1％或更小的变化，并且在此范围内这样的变化适合于在所公开的发明中实施。应理解，修饰语“约/大约”所指的值本身也被具体地且优选地公开。更具体地，当提及以周的一段时间时，术语“约/大约”是指+/-2天。
本文中使用的，在“用于治疗疾病的组合物”中使用的术语“用于”还应公开相应的治疗方法和相应的制剂用于制备用于治疗疾病的药物的用途。
本文中使用的术语“富马酸/酸根/酸酯化合物(fumarate compound)”是指通式(I)的化合物
其中R1和R2各自独立地选自：OH、O-、和任选经取代的(C1-10)烷氧基，优选任选经取代的(C1-6)烷氧基、或任选经取代的(C1-3)烷氧基，
其中R3和R4各自独立地选自以下：H或氘，
其中每个基团可以独立地任选被取代。
本文中使用的术语“肽”是指包含通过肽键连接的12至200个氨基酸的氨基酸序列但是其可包含非氨基酸结构的分子。
根据本发明的肽可包含任何常规的20种氨基酸或其经修饰形式，或者可包含通过化学肽合成或通过化学或酶修饰并入的非天然存在氨基酸。
本文中使用的术语“抗原”是指大分子，通常是蛋白质(具有或不具有多糖)的结构，或者由包含一种或更多种半抗原并包含T细胞表位的蛋白质组合物构成的结构。
本文中使用的术语“抗原蛋白”是指包含一个或更多个T细胞表位的蛋白质。本文中使用的自身抗原或自身抗原蛋白是指存在于体内的人或动物蛋白，其在同一人或动物体内引发免疫应答。
术语“表位”是指抗原蛋白的一个或数个部分(其可定义构象表位)，其被抗体或其部分(Fab’，Fab2’等)或者在B或T细胞淋巴细胞的细胞表面存在的受体特异性地识别并结合，并且所述B或T细胞淋巴细胞能够通过所述结合以诱导免疫应答。
在本发明的上下文中，术语“T细胞表位”是指MHC II类T细胞表位即优势(dominant)、亚优势(sub-dominant)或次要(minor)的T细胞表位(即抗原蛋白的一部分，当与MHC II类分子复合时其被在T淋巴细胞的细胞表面处表达的受体特异性地识别并结合)或者是指NKT细胞表位。表位是优势、亚优势还是次要的取决于针对该表位引发的免疫应答。优势性取决于在蛋白质的所有可能的T细胞表位中，这样的表位被T细胞识别并能够活化它们的频率。
T细胞表位是由MHC II类分子识别并与之相关的表位，其由适合MHC II分子的沟的+/-9个氨基酸的序列组成。在表示T细胞表位的肽序列中，表位中的氨基酸编号为P1至P9，表位的N端氨基酸编号为P-1、P-2等，表位的C端氨基酸编号为P+1、P+2等。由MHC II类分子而非MHC I类分子识别的肽称为MHC II类限制性T细胞表位。
术语“MHC”是指“主要组织相容性抗原(major histocompatibility antigen)”。在人中，MHC基因被称为HLA(“人白细胞抗原(human leukocyte antigen)”)基因。尽管没有始终遵循的惯例，但是一些文献使用HLA指代HLA蛋白分子，并且使用MHC指代编码HLA蛋白的基因。因此，当在本文中使用时，术语“MHC”和“HLA”是等同物。人中的HLA系统在小鼠中具有其等同物，即H2系统。研究最深入的HLA基因是九种所谓的经典MHC基因：HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA DQB1、HLA-DRA和HLA-DRB1。在人中，MHC分为三个区域：I、II和III类。A、B和C基因属于MHC I类，而六个D基因属于II类。MHC I类分子由包含3个结构域(α1、2和3)的单一多态链构成，该链与细胞表面上的β2微球蛋白缔合。II类分子由2种多态链构成，每种链包含2条链(α1和2，以及β1和2)。
I类MHC分子在几乎所有有核细胞上表达。
在遗传水平上，MHC II类簇位于6号染色体的短臂(6p21)上。该簇包括三个经典II类基因(HLA-DP、-DQ和DR)和两个非经典II类基因(HLA-DM和-DO)。MHC II类的结构是通过两条膜结合链(称为α和β)的缔合来实现的，这产生了MHC II类的抗原结合槽(cleft)。α链和β链二者由紧密连接为α和β基因对的不同基因座(即DRα/DRβ、DQα/DQβ和DPα/DPβ)编码。HLA-DP、-DQ和DR基因座具有高度多态性，尤其是在II类分子的抗原结合口袋中。HLA-DP和-DQ在-α和-β链基因二者中都包含多态性(DPA、DPB、DQA和DQB)。在HLA-DR中，多态性仅涉及DRβ链(DRB基因)。存在9个DRB基因座(编号从DRB1到DRB9)，但在所有单倍型上仅发现DRB1基因座，并因此构成了经典DR血清学的主要决定簇(McCluskey et al，Current Protocolsin Immunology(2017)，118，A.1S.1-A.1S.6)。
以HLA-DRB1组为例，文献已报道存在超过40种不同的单倍型(Marsh et al，Tissue Antigens(2010)，75，p291)。在整个人群体中最相关的是DRB1*03和DRB1*04单倍型组。在DRB1*03组中，两个等位基因是常见的，即DRB1*0301和DRB1*0302，但也已报道了另一些等位基因，例如DRB1*0303、DRB1*0304和DRB1*0307。在DRB1*04组中，可发现十个主要等位基因，即DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0403、DRB1*0404、DRB1*0405、DRB1*0406、DRB1*0407、DRB1*0408、DRB1*0410和DRB1*0411。在本申请通篇使用的术语“DR4阳性”或“DR4+”表示对象对DRB1*04单倍型之一呈阳性。类似地，在本申请通篇使用的术语“DR3阳性”或“DR3+”表示对象对DRB1*03单倍型之一呈阳性。在本申请通篇使用的术语“DR4阴性”或“DR4-”表示对象不具有任何DRB1*04单倍型。类似地，在本申请通篇使用的术语“DR3阴性”或“DR3-”表示对象不具有任何DRB1*03单倍型。
HLA分型可使用本领域已知的技术进行，包括但不限于基于聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)的分析、序列分析和电泳分析。基于PCR的分析的非限制性实例包括可从Applied Biosystems获得的等位基因鉴别测定。序列分析的非限制性实例包括Maxam-Gilbert测序、Sanger测序、毛细管阵列DNA测序、热循环测序、固相测序、用质谱例如基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的测序以及通过杂交的测序。电泳分析的非限制性实例包括平板凝胶电泳(例如琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳)、毛细管电泳和变性梯度凝胶电泳。用于在标志物中的多态性位点对个体进行基因分型的另一些方法包括，例如，来自Third Wave Technologies，Inc.的/>测定、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)分析、等位基因特异性寡核苷酸杂交、异源双链体迁移率测定和单链构象多态性(single strand conformationalpolymorphism，SSCP)分析。或者，HLA分型可通过抗体测试进行。
在I类MHC分子情况下呈递的肽片段被CD8+T淋巴细胞(溶细胞性T淋巴细胞或CTL(cytolytic T lymphocyte))识别。CD8+T淋巴细胞频繁成熟为溶细胞性效应物，其可裂解荷带刺激性抗原的细胞。II类MHC分子主要在活化的淋巴细胞和抗原提呈细胞上表达。CD4+T淋巴细胞(辅助性T淋巴细胞或Th)通过识别由通常存在于抗原提呈细胞(如巨噬细胞或树突细胞)上的II类MHC分子呈递的独特肽片段而活化。CD4+T淋巴细胞增殖并分泌支持抗体介导和细胞介导的应答的细胞因子，例如IL-2、IFN-γ和IL-4。
功能性HLA的特征在于深结合沟，内源性以及外来的、潜在抗原肽与之结合。进一步地，该沟的特征在于明确的形状和物理化学特性。HLA I类结合位点是封闭的，因为肽端被钉到沟的末端中。它们还参与了与保守HLA残基的氢键的网络。鉴于这些限制，结合的肽的长度限制于8、9或10个残基。然而，已显示具有多至12个氨基酸残基的肽也能够结合HLAI类。不同HLA复合物的结构的比较确定了其中肽采用相对线性、延伸的构象或者可涉及中央残基从沟中凸出的一般的结合方式。
与HLA I类结合位点相反，II类位点在两端均开放。这允许肽从实际结合区域延伸，从而在两端“悬垂”。因此，II类HLA可结合可变长度(9个至超过25个氨基酸残基)的肽配体。类似于HLA I类，II类配体的亲和力由“恒定”和“可变”分量决定。恒定部分再次由HLAII类沟中保守性残基与结合的肽的主链之间形成的氢键网络形成。然而，该氢键模式不限于肽的N端和C端残基，而是分布在整个链上。后者很重要，因为其将复合肽的构象限制为严格线性结合方式。这对于所有II类同种异型都是共同的。决定肽结合亲和力的第二分量是可变的，这是由于II类结合位点中的某些多态性位置。不同的同种异型在沟内形成不同的互补袋，从而解释了肽的亚型依赖性选择或特异性。重要地，对II类袋中持有的氨基酸残基的限制通常比对I类的“柔和”。在不同的HLA II类同种异型之间，肽存在更多的交叉反应性。适配于MHC II分子的沟中的MHC II类T细胞表位的+/-9个氨基酸(即8、9或10)的序列通常以P1至P9进行编号。表位的N端另外的氨基酸以P-1、P-2等进行编号，表位的C端氨基酸以P+1、P+2等进行编号。
术语“NKT细胞表位”是指抗原蛋白质的一部分，其由NKT细胞的细胞表面处的受体特异性识别并结合。特别地，NKT细胞肽表位是由CD1d分子结合的表位，具有基序[FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY](SEQ ID NO：62)或其更限制性形式，例如[FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW](SEQ ID NO：63)。在该基序中，F代表苯丙氨酸，W代表色氨酸，H代表组氨酸，Y代表酪氨酸，I代表异亮氨酸，L代表亮氨酸，M代表甲硫氨酸，V代表缬氨酸，以及X代表任意氨基酸。[FWHY]指示F、W、H或Y可占据第一锚定残基(P1)，P4位置可被I、L、M或V占据，并且P7可被F、W、H或Y占据。本领域技术人员应清楚这些氨基酸残基的多种组合是可以的。
术语“NKT细胞”是指先天免疫系统的细胞，其特征在于其携带受体例如NK1.1和NKG2D且识别由CD1d分子呈递的肽表位的事实。在本发明的上下文中，NKT细胞可属于1型(不变的)或2型亚群，或者属于比1型或2型NKT细胞具有更多的多态性T细胞受体的较少表征的NKT细胞中的任一者。
“CD1d分子”是指在多种APC的表面表达的由3条α链和反平行β链构成的非MHC来源的分子，所述β链被布置到两侧开放并且能够将脂质、糖脂或疏水性肽呈递至NKT细胞的深疏水沟中。
本发明提供了用于在体内或体外产生抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞的方法，以及与其无关的，基于特征表达数据区分溶细胞性CD4+T细胞与其他细胞群例如Foxp3+Treg的方法。
关于本发明上下文中使用的表位，本文中使用的术语“同源物”是指这样的分子，其与天然存在表位具有至少50％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％氨基酸序列同一性，从而维持表位结合抗体或者B和/或T细胞的细胞表面受体的能力。表位的特定同源物对应于在至多三个，更特别地在至多2个，最特别地在一个氨基酸中修饰的天然表位。
关于本发明的肽，本文中使用的术语“衍生物”是指这样的分子，其包含至少肽活性部分(即氧化还原基序和能够引发溶细胞性CD4+T细胞活性的MHC II类表位)并且除此之外还包含可具有不同的目的(例如稳定肽或改变肽的药代动力学或药效学特性)的互补部分。
本文中使用的术语两个序列的“序列同一性”涉及当比对当两个序列时，具有相同核苷酸或氨基酸的位置数除以序列中较短者的核苷酸或氨基酸数。特别地，序列同一性为70％至80％、81％至85％、86％至90％、91％至95％、96％至100％、或100％。
本文中使用的术语“肽编码多核苷酸(或核酸)”和“编码肽的多核苷酸(或核酸)”是指这样的(聚)核苷酸序列，其在适当的环境中表达时导致相关肽序列或其衍生物或同源物的产生。这样的多核苷酸或核酸包括编码该肽的正常的脱氧核糖核苷酸(desoxyribonucleotide，DNA)或核糖核苷酸(ribonucleotide，RNA)序列，以及能够表达具有所需活性的肽的这些核酸的衍生物和片段。编码根据本发明的肽或其片段的核酸是编码源自于哺乳动物或对应于哺乳动物的肽或其片段(最特别是人肽片段)的序列。编码所述免疫原性或耐受原性肽的这样的核酸优选选自分离的脱氧核糖核酸(DNA)、质粒DNA(pDNA)、编码DNA(cDNA)、核糖核酸(RNA)、信使RNA(mRNA)或其经修饰形式。
对于治疗手段，编码本文中所公开的免疫原性肽的多核苷酸可以是表达系统、表达盒、质粒或载体系统(例如病毒和非病毒表达系统)的一部分。已知用于治疗目的的病毒载体是腺病毒、腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)、慢病毒和逆转录病毒。也可以使用非病毒载体并且一些非限制性实例包括：基于转座子的载体系统，例如来源于Sleeping Beauty(SB)或PiggyBac(PB)的那些。核酸还可通过其他载体(例如但不限于纳米粒、阳离子脂质、脂质体等)递送。
术语“免疫病症”或“免疫疾病”是指其中免疫系统的反应负责或维持生物体中功能异常或非生理状况的疾病。免疫病症中尤其包括变应性病症和自身免疫病。
术语“自身免疫病”或“自身免疫疾病”是指由于生物体无法将其自身组成部分(下至亚分子水平)识别为“自身”而引起针对其自身细胞和组织的异常免疫应答所导致的疾病。疾病组可分为两类：器官特异性疾病和全身性疾病。“变应原”被定义为在易患(特别是遗传倾向的)个体(特应性)患者中引发IgE抗体的产生的物质，通常为大分子或蛋白质组合物。在Liebers et al.(1996)Clin.Exp.Allergy 26，494-516中也提出了类似的定义。
术语“1型糖尿病”(T1D)或“糖尿病1型”(也称为“1型糖尿病(type 1 diabetesmellitus)”或“免疫介导的糖尿病”或以前称为“幼年型糖尿病”或“胰岛素依赖型糖尿病”)是一种自身免疫病，其通常在儿童时期在易感个体中发生。T1D发病机制的基础是通过自身免疫机制破坏大多数产生胰岛素的胰腺β细胞。简言之，生物体失去了针对负责胰岛素产生的胰腺β细胞的免疫耐受，并诱导主要是细胞介导的、与自身抗体的产生相关的免疫应答，从而导致β细胞的自我破坏。术语“富马酸/酸根/酸酯相关疾病”涵盖所有受益于用富马酸/酸根/酸酯治疗的病症或疾病。这样的疾病或病症的一些优选实例是自身免疫病、脱髓鞘疾病、移植排斥和癌症。这样的疾病和病症的一些优选实例是：多发性硬化(MS)、银屑病、视神经脊髓炎(NMO)、类风湿性关节炎(RA)、多关节炎、哮喘、特应性皮炎、硬皮病、溃疡性结肠炎、青少年糖尿病、甲状腺炎、格雷夫病、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、恶性贫血、慢性活动性肝炎、移植排斥和癌症。一些优选实例是MOG自身抗原相关疾病和病症，例如MS和NMO。
本文在脱髓鞘疾病或病症的框架内使用的术语“脱髓鞘”是指围绕神经元轴突的髓鞘的损伤和/或降解，其结果是病变或斑块的形成。由于脱髓鞘，沿着受影响的神经的信号传导受损，并可导致神经症状，例如在感觉、运动、认知和/或其他神经功能上的不足。患有脱髓鞘疾病的患者的具体症状将根据疾病和疾病进展状态而变化。这些症状可包括视力模糊和/或视歧、共济失调、阵挛、构音障碍、疲劳、笨拙、手麻痹、轻偏瘫、生殖器感觉缺失(genital anaesthesia)、协调运动障碍、感觉异常(paresthesias)、眼麻痹、肌肉协调受损、肌无力、感觉丧失、视力受损、神经症状、行走方式(步态)不稳、痉挛性瘫痪、失禁、听力问题、言语问题等。脱髓鞘疾病可分为中枢神经系统脱髓鞘疾病和周围神经系统。或者，脱髓鞘疾病可根据脱髓鞘的原因进行分类：髓鞘的损坏(脱髓鞘性髓鞘脱失(demyelinatingmyelinoclastic))，或异常和退化性髓鞘(脱髓鞘性脑白质营养不良(dysmyelinatingleukodystrophic))。在本领域中，MS被认为是中枢神经系统的脱髓鞘病(Lubetzki andStankoff.(2014).Handb Clin Neurol.122，89-99)。这样的脱髓鞘疾病和病症的另一些具体但非限制性实例包括：视神经脊髓炎(NMO)、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(acuteinflammatory demyelinating polyneuropathy，AIDP)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy，CIDP)、急性横贯性脊髓炎、进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leucoencephalopathy，PML)、急性播散性脑脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis ADEM)或其他遗传性脱髓鞘病。
术语“多发性硬化”，在本文中和本领域中缩写为“MS”，表示影响中枢神经系统的自身免疫病。MS被认为是年轻成人中最常见的非创伤性致残疾病(Dobson andGiovannoni，(2019)Eur.J.Neurol.26(1)，27-40)，以及影响中枢神经系统的最常见的自身免疫病(Berer and Krishnamoorthy(2014)FEBS Lett.588(22)，4207-4213)。MS可通过从身体到心理至精神问题范围的大量不同症状而在对象中表现其自身。典型的症状包括视力模糊或视歧、肌无力、一只眼失明、以及协调和感觉困难。在大多数情况下，MS可被视为两个阶段的疾病，其中早期炎症是复发缓解型疾病的原因并且延迟的神经退行性变导致非复发性进展，即继发和原发进展型MS。尽管在该领域中取得了进展，但疾病的决定性基本原因迄今仍难以理解，并且超过150个单核苷酸多态性已与MS易感性相关(InternationalMultiple Sclerosis Genetics Consortium Nat Genet.(2013).45(11)：1353-60)。已报道了维生素D缺乏、吸烟、紫外线B(ultraviolet B，UVB)暴露、儿童肥胖和通过EB病毒的感染都有助于疾病的发生(Ascherio(2013)Expert Rev Neurother.13(12增刊)，3-9)。
因此，MS可被认为是存在于从复发型(其中炎症是优势特征)延伸至进展型(神经退行性变优势)的范围内的单一疾病。因此，明显的是本文中使用的术语多发性硬化涵盖属于任何类型的疾病病程分类的任何类型的多发性硬化。特别地，本发明被设想为针对被诊断患有或怀疑患有临床孤立综合征(clinically Isolated Syndrome，CIS)、复发缓解型MS(relapse-remitting MS，RRMS)、继发进展型MS(secondary progressive MS，SPMS)、原发进展型MS(primary progressive MS，PPMS)、以及甚至疑似MS的放射学孤立综合征(radiology isolated syndrome，RIS)的患者的有效治疗策略。虽然不严格考虑MS的疾病病程，但RIS用于对在对应于MS病变并且不能通过其他诊断初步解释的脑和/或脊髓的磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging，MRI)上显示异常的对象进行分类。CIS是由中枢神经系统中的炎症和脱髓鞘引起的神经症状的首次发作(根据定义，持续超过24小时)。根据RIS、CIS分类的对象可能继续发生MS或可能不继续发生MS，其中在脑MRI上显示MS样病变的对象更可能发生MS。RRMS是MS的最常见的疾病病程，其中患有MS的对象中85％被诊断患有RRMS。鉴于本发明，经RRMS诊断的患者是优选的患者组。RRMS的特征在于新的或提高的神经症状的攻击，或者是复发或恶化。在RRMS中，所述复发之后是症状的周期或者部分或完全缓解，并且在这些缓解期内没有经历和/或观察到疾病进展。RRMS可进一步分类为活性RRMS(复发和/或新MRI活动的证据)、非活性RRMS、恶化的RRMS(在复发之后在特定时间段内残疾提高)或未恶化的RRMS。一部分经RRMS诊断的对象将进展为SPMS疾病病程，其特征在于神经功能随时间的进展型恶化，即残疾的累积。可对SPMS进行亚分类，例如活性(复发和/或新的MRI活性)、非活性、进展型(疾病随时间恶化)或非进展型SPMS。最后，PPMS是MS疾病病程，其特征在于神经功能恶化以及因此从症状发作开始的残疾累积，无早期复发或缓解。可形成另一些PPMS亚组，例如活性PPMS(偶尔复发和/或新的MRI活性)、非活性PPMS、进展型PPMS(疾病随时间恶化的证据，无论新的MRI活性如何)和非进展型PPMS。一般而言，MS疾病病程的特征在于就复发和缓解期而言，在严重程度(在复发的情况下)和持续时间二者上有基本的对象间可变性。
数种疾病改善治疗可用于MS，并因此本发明可作为替代治疗策略使用，或与这些现有治疗组合使用。活性药物成分的一些非限制性实例包括：干扰素β-1a、干扰素β-1b、乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)、乙酸格拉替雷、聚乙二醇干扰素β-1a、特立氟胺(teriflunomide)、芬戈莫德(fingolimod)、克拉屈滨(cladribine)、西尼莫德(siponimod)、富马酸二甲酯、富马酸地洛西美酯、奥扎莫德(ozanimod)、阿仑单抗(alemtuzumab)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥美珠单抗(ocrelizumab)和那他珠单抗(natalizumab)。作为替代地，本发明可与旨在复发管理的治疗或药物，例如但不限于甲基泼尼松龙、强的松和促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)组合使用。此外，本发明可与旨在减轻特定症状的治疗组合使用。一些非限制性实例包括旨在改善或避免选自以下的症状的药物：膀胱问题、肠功能障碍、抑郁、头晕、眩晕、情绪变化、疲劳、瘙痒、疼痛、性问题、痉挛、震颤和行走困难。
MS的特征在于三个交织的标志性特征：1)中枢神经系统中的病变形成，2)炎症，以及3)神经元髓鞘的退化。尽管传统上被认为是中枢神经系统和白质的脱髓鞘疾病，但最近报道表明皮质和深层灰质的脱髓鞘可超过白质脱髓鞘(Kutzelnigg et al.(2005).Brain.128(11)，2705-2712)。已假定关于如何在分子水平上引起MS的两个主要假设。通常可接受的“由外向内假说(outside-in hypothesis)”是基于外周自体反应性效应物CD4+T细胞的活化，该CD4+T细胞迁移到中枢神经系统并启动疾病病程。一旦在中枢神经系统中，所述T细胞通过APC局部再活化并募集另外的T细胞和巨噬细胞以建立炎性病变。值得注意的是，已显示MS病变包含主要存在于病变边缘处的CD8+T细胞以及存在于病变更中心的CD4+T细胞。认为这些细胞引起了脱髓鞘、少突胶质细胞破坏和轴突损伤，导致神经功能障碍。另外，触发免疫调节网络以限制炎症并启动修复，这导致通过临床缓解反映的至少部分髓鞘再生。然而，在没有足够的治疗的情况下，进一步的攻击通常导致疾病的进展。
认为MS的发作远在检测到第一临床症状之前就开始了，如由患者的MRI上明显的较老和不活跃病变的典型出现所证明的。由于在诊断方法的发展中的进步，现可检测到MS，甚至在疾病的临床表现之前(即症状前MS)也是如此。在本发明的上下文中，“MS的治疗”和类似的表达设想了针对有症状MS和症状前MS二者的治疗和治疗策略。特别地，当免疫原性肽和/或所产生的溶细胞性CD4+T细胞可用于治疗症状前MS患者时，疾病在可部分或甚至完全避免临床表现的这样的早期阶段停止。其中对象对干扰素β治疗没有完全响应的MS也涵盖在术语“MS”内
术语“视神经脊髓炎”或“NMO”和“NMO谱系障碍(NMO Spectrum Disorder，NMOSD)”也称为“德维克病(Devic’s disease)”，是指其中白细胞和抗体主要攻击视神经和脊髓但也可攻击脑的自身免疫病(在Wingerchuk 2006，Int MS J.2006 May；13(2)：42-50中进行了综述)。视神经的损伤产生引起疼痛和视力丧失的肿胀和炎症；脊髓的损伤引起腿或臂的无力或瘫痪、感觉丧失、以及膀胱和肠功能的问题。NMO是复发缓解型疾病。在复发期间，视神经和/或脊髓的新的损伤可导致累积性残疾。与MS不同，没有该疾病的进展期。因此，预防攻击对于良好的长期结局至关重要。在与抗MOG抗体相关的情况下，认为抗MOG抗体可触发对髓鞘的攻击，引起脱髓鞘。在大多数情况下，NMO的原因是由于对自身抗原的特异性攻击。至多三分之一的对象可对针对称为髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的髓鞘组分的自身抗体呈阳性。患有抗MOG相关NMO的患者类似地具有横贯性脊髓炎和视神经炎的发作。在本申请的框架内特别设想的是由MOG自身抗原诱导的NMO和/或由抗MOG抗体引起的NMO。
术语“类风湿性关节炎”或“RA”是在多种关节(最常见于手、腕和膝)中引起疼痛、肿胀、僵硬和功能丧失的自身免疫性炎性疾病。相应关节的衬里(lining)发炎，导致组织损伤以及慢性疼痛、不稳定和畸形。通常存在疾病进展的双侧/对称模式(例如，双手或双膝受到影响)。RA还可影响关节外部位，包括眼、口、肺和心脏。患者可经历其症状的急性恶化(称为突然恶化(flare))，但在早期干预和适当治疗的情况下，症状可在特定持续时间内得到改善(由Sana Iqbal et al.，2019，US Pharm.2019；44(1)(Specialty&Oncology suppl)：8-11综述)。受免疫系统攻击并导致疾病的抗原是多种多样的，但一些实例是：GRP78、HSP60、60kDa伴侣蛋白2、凝溶胶蛋白、壳多糖酶-3样蛋白1、组织蛋白酶S、血清白蛋白和组织蛋白酶D。
术语“银屑病”是指具有强烈遗传倾向和自身免疫致病性状的慢性炎性皮肤病。全球患病率为约2％，但根据地区而变化。其在亚洲和一些非洲群体中显示出较低的患病率，而在高加索(Caucasian)和斯堪的纳维亚(Scandinavian)群体中高至11％。银屑病的皮肤病学表现是不同的；寻常型银屑病也被称为斑块型银屑病，并且是最普遍的类型。术语银屑病和寻常型银屑病在科学文献中可互换使用；然而，在不同的临床亚型之间有重要的区别。寻常型银屑病(银屑病病例中的约90％)是慢性斑块型银屑病。典型的临床表现是明显分界、红斑、瘙痒的斑块覆盖在银色鳞屑上。斑块可合并(coalesce)并覆盖大面积的皮肤。常见位置包括躯干、肢体的伸肌表面、和头皮。另一些类型为：反向银屑病，也称为屈侧银屑病，其影响皱褶交织(intertriginous)位置，并且其临床特征在于轻度糜烂性红斑斑块(plaque)和斑块(patch)；点滴状银屑病，其是在小红斑斑块急性发作的情况下的变体。其通常影响儿童或青少年，并且通常由扁桃体的A组链球菌感染触发。患有点滴状银屑病的患者中约三分之一将在其整个成年期发生斑块型银屑病；脓疱性银屑病，其特征在于多个、合并的无菌脓疱。脓疱型银屑病可以是局部性或泛发性。已描述了两种不同的局部表型：掌跖脓疱型银屑病(psoriasis pustulosa palmoplantaris，PPP)和Hallopeau连续性肢端皮炎。其二者均影响手和脚；PPP局限于手掌和脚掌，而ACS更远地位于手指尖和脚趾尖并且影响指甲器官(nail apparatus)。泛发性脓疱型银屑病表现为急性且迅速进展的病程，其特征在于弥漫性发红和角膜下脓疱并且通常伴有全身症状。银屑病的标志是导致不受控制的角质形成细胞增殖和功能障碍性分化的持续炎症。银屑病斑块的组织学显示出棘层肥厚(表皮增生)，其覆盖由真皮树突细胞、巨噬细胞、T细胞和中性粒细胞构成的炎性浸润。新生血管形成也是显著特征。斑块型银屑病中活跃的炎性途径与其余临床变体中的重叠，但也表现出导致不同的表型和治疗结局的不同差异。(由Rendon andInt J MolSci.2019 Mar；20(6)：1475综述)。
当提及肽时，术语“天然”涉及序列与天然存在的蛋白质(野生型或突变体)的片段相同的事实。与此相比之下，术语“人工”是指本身在自然界中不存在的序列。通过有限的修饰，例如在天然存在的序列中改变/缺失/插入一个或更多个氨基酸或通过添加/去除天然存在的序列的N端或C端氨基酸来由天然序列获得人工序列。抗原的选择将取决于富马酸/酸根/酸酯相关疾病，在所述抗原上设计如本文中所述的免疫原性或耐受原性肽的表位。
术语“治疗有效量”是指在患者中产生期望的治疗或预防作用的本发明的肽或其衍生物的量。例如，对于疾病或病症，其是在某种程度上降低该疾病或病症的一种或更多种症状，并且更特别地使与该疾病或病症相关或为其成因的生理或生物化学参数部分或完全地恢复至正常的量。通常来说，治疗有效量是将导致正常生理状况的改善或恢复的本发明的肽或其衍生物的量。例如，当用于治疗性治疗受免疫病症影响的哺乳动物时，其为每日量肽/所述哺乳动物的kg体重。或者，在通过基因治疗施用的情况下，调节裸DNA或病毒载体的量以确保本发明肽、其衍生物或同源物的相关剂量的局部产生。
当涉及肽时，术语“天然”是指序列与天然存在的蛋白质(野生型或突变体)的片段相同的事实。与此相比之下，术语“人工”是指本身在自然界中不存在的序列。通过有限的修饰，例如在天然存在的序列中改变/缺失/插入一个或更多个氨基酸或通过添加/去除天然存在的序列的N端或C端氨基酸来由天然序列获得人工序列。
在本文中，氨基酸以其全称、其三字母缩写或其单字母缩写来提及。
氨基酸序列的基序在本文中根据Prosite的格式书写。基序用于描述在序列的特定部分处的某个序列变化。符号X用于其中接受任意氨基酸的位置。通过在方括号(“[]”)之间列出给定位置的可接受氨基酸来指明替代项。例如：[CST]代表选自Cys、Ser或Thr的氨基酸。被排除作为替代项的氨基酸通过在波形括号(“{}”)之间将它们列出来指明。例如：{AM}代表除Ala和Met之外的任意氨基酸。基序中的不同要素任选地由连字符(-)彼此隔开。一个基序内相同要素的重复可通过在该要素后放置圆括号之间的数值或数值范围来指明。例如X(2)对应于X-X或XX；X(2，5)对应于2、3、4或5个X氨基酸，A(3)对应于A-A-A或AAA。
为了区分氨基酸X，将H和C之间的那些称为外部氨基酸X(在上述序列中加单下划线)，在氧化还原基序内的那些称为内部氨基酸X(在上述序列中加双下划线)。
X表示任意氨基酸，特别是L-氨基酸，更特别是20种天然存在的L-氨基酸之一。
包含T细胞表位和具有还原活性的经修饰肽基序序列的肽能够产生针对抗原呈递细胞的抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞的群。
因此，在其最广泛的意义上，本发明涉及包含具有触发免疫应答的潜力的抗原(自身或非自身)的至少一种T细胞表位以及对肽二硫键具有还原活性的“氧化还原酶”、“硫还原酶”、“硫氧化还原”或“氧化还原”(所有术语在本文中可互换使用)序列基序的肽的用途。MHC II类T细胞表位和经修饰氧化还原基序序列可在肽中彼此紧邻或任选地被一个或更多个氨基酸(所谓的接头序列)隔开。任选地，该肽另外地包含内体靶向序列和/或另外的“侧翼”序列。
本文中公开的肽包含具有触发免疫应答潜力的胰岛素抗原的MHC II类T细胞表位和经修饰氧化还原基序。肽中基序序列的还原活性可针对例如在胰岛素溶解度测定(其中胰岛素的溶解度在还原之后改变)中其还原巯基的能力来测定，或者用经荧光标记的底物(例如胰岛素)来测定。这样的测定的一个实例使用荧光肽，并描述于Tomazzolli et al.(2006)Anal.Biochem.350，105-112中。当带有FITC标记的两个肽通过二硫桥彼此共价连接时，它们会自猝灭。在被根据本发明的肽还原之后，被还原的单独肽再次变为具有荧光。
(经修饰)氧化还原基序可位于T细胞表位的氨基末端侧或T细胞表位的羧基末端处。
具有还原活性的肽片段见于硫还原酶中，所述硫还原酶是小的二硫化物还原酶，包括谷氧还蛋白、核氧化还原蛋白(nucleoredoxin)、硫氧还蛋白和其他硫醇/二硫化物氧化还原酶(Holmgren(2000)Antioxid.Redox Signal.2，811-820；Jacquot et al.(2002)Biochem.Pharm.64，1065-1069)。它们是多功能、普遍存在的，并且存在于许多原核生物和真核生物中。它们通过以下保守活性结构域共有序列内的氧化还原活性半胱氨酸对蛋白质(例如酶)上的二硫键发挥还原活性：
CXXC[SEQ ID NO：18]，CXXS[SEQ ID NO：23]，CXXT[SEQ ID NO：24]，SXXC[SEQ IDNO：21]，TXXC[SEQ ID NO：22]
(Fomenko et al.(2003)Biochemistry 42，11214-11225；Fomenko et al.(2002)Prot.Science 11，2285-2296)，其中X代表任意氨基酸。这样的结构域也存在于较大蛋白质，例如蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase，PDI)和磷酸肌醇特异性磷脂酶C中。
如从例如Fomenko和WO2008/017517已知的4个氨基酸氧化还原基序在第1位和/或第4位包含半胱氨酸；因此基序是CXX[CST][SEQ ID NO：1]或[CST]XXC[SEQ ID NO：2]。这样的四肽序列将被称为“基序”。肽中的基序可以是CXXC[SEQ ID NO：137]，SXXC[SEQ ID NO：138]，TXXC[SEQ ID NO：139]，CXXS[SEQ ID NO：140]或CXXT[SEQ ID NO：141]。特别地，肽包含序列基序CXXC[SEQ ID NO：137]。
如进一步详细说明的，本发明中使用的肽可通过允许并入非天然氨基酸的化学合成来制备。因此，在以上记载的经氧化还原修饰的氧化还原基序中“C”代表半胱氨酸或具有巯基的另一种氨基酸例如巯基缬氨酸(mercaptovaline)、高半胱氨酸或者其他具有巯基功能的天然或非天然氨基酸。为了具有还原活性，存在于经修饰氧化还原基序中的半胱氨酸不应作为胱氨酸二硫桥的一部分出现。然而，经氧化还原修饰的氧化还原基序可包含经修饰半胱氨酸，例如甲基化的半胱氨酸，其在体内被转化为具有游离巯基的半胱氨酸。X可以是20种天然氨基酸中的任一种，包括S、C或T，或者可以是非天然氨基酸。在一些具体实施方案中，X是具有小侧链的氨基酸，例如Gly、Ala、Ser或Thr。在另一些具体实施方案中，X不是具有大侧链的氨基酸，例如Trp。在另一些具体实施方案中，X不是半胱氨酸。在另一些具体实施方案中，在经修饰氧化还原基序中的至少一个X是His。在另外的另一些具体实施方案中，在经修饰氧化还原中的至少一个X是Pro。
肽还可包含修饰以提高稳定性或溶解性，例如N端NH2基团或C端COOH基团的修饰(例如，将COOH修饰成CONH2基团)。
术语“氧化还原酶基序”、“硫醇-氧化还原酶基序”、“硫还原酶基序”、“硫氧化还原基序”或“氧化还原基序”在本文中用作同义术语，并且是指参与将电子从一个分子(还原剂，也称为氢或电子供体)转移至另一分子(氧化剂，也称为氢或电子接纳体)的基序。
如本文中所限定的免疫原性肽包含以下通用氨基酸序列的氧化还原酶基序：如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-(SEQ ID NO：12至36)或Zm-C-Xn-[CST]-(SEQ ID NO：37至61)，其选自以下氨基酸基序：
(a)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为0，并且其中
其中m为选自0至3的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K
在基序(a)一些优选实施方案中，m为1或2，并且Z为选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。
这样的基序的一些特别优选但非限制性实例是：
CC，KCC，KKCC(SEQ ID NO：142)，RCC，RKCC(SEQ ID NO：143)，KRCC(SEQ ID NO：144)，或RRCC(SEQ ID NO：145).。
(b)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为1，
其中X为任意氨基酸，优选选以下的碱性氨基酸：H、K、R，和非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K，
其中m为选自0至3的整数，
其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。
在基序(b)的一些优选实施方案中，m为1或2，并且Z为选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。
这样的基序的一些特别优选但非限制性实例是：
CRC，CKC，KCXC(SEQ ID NO：146)，KKCXC(SEQ ID NO：147)，RCXC(SEQ ID NO：148)，RRCXC(SEQ ID NO：149)，RKCXC(SEQ ID NO：150)，KRCXC(SEQ ID NO：151)，KCKC(SEQ IDNO：152)，KKCKC(SEQ ID NO：153)，KCRC(SEQ ID NO：154)，KKCRC(SEQ ID NO：155)，RCRC(SEQ ID NO：156)，RRCRC(SEQ ID NO：157)，RKCKC(SEQ ID NO：158)，或KRCKC(SEQ ID NO：159)。
(c)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为2，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2氨基酸偶联物，其中m为选自0至3的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。优选的是其中m为1或2的基序。
在一些优选实施方案中，m为1，Z为选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。
在一些优选实施方案中，X1和X2各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1和X2是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在一个具体实施方案中，所述基序中X1或X2中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。在另一个具体实施方案中，所述基序中X1或X2中的至少一者是P或Y。氧化还原酶基序内的内部X1X2氨基酸偶联物的一些具体实例是：PY，HY，KY，RY，PH，PK，PR，HG，KG，RG，HH，HK，HR，GP，HP，KP，RP，GH，GK，GR，GH，KH，和RH。
该类型的一些特别优选的基序是HCPYC，KCPYC，RCPYC，HCGHC，KCGHC，和RCGHC(对应于SEQ ID NO：160至165)。
(d)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为3，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3氨基酸段，其中m为选自0至3的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。优选的是其中m为1或2的基序。
在一些实施方案中，X1、X2和X3各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1、X2和X3是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在一个具体实施方案中，所述基序中X1、X2或X3中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。
氧化还原酶基序内的内部X1X2X3氨基酸段的一些具体实例是：XPY、PXY和PYX，其中X可以是任意氨基酸，优选碱性氨基酸例如K、R或H，或非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。
一些非限制性实例是：
KPY，RPY，HPY，GPY，APY，VPY，LPY，IPY，MPY，FPY，WPY，PPY，SPY，TPY，CPY，YPY，NPY，QPY，DPY，EPY，和KPY；或者
PKY，PRY，PHY，PGY，PAY，PVY，PLY，PIY，PMY，PFY，PWY，PPY，PSY，PTY，PCY，PYY，PNY，PQY，PDY，PEY，和PLY；或者
PYK，PYR，PYH，PYG，PYA，PYV，PYL，PYI，PYM，PYF，PYW，PYP，PYS，PYT，PYC，PYY，PYN，PYQ，PYD，PYE，和PYL；
XHG、HXG和HGX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KHG，RHG，HHG，GHG，AHG，VHG，LHG，IHG，MHG，FHG，WHG，PHG，SHG，THG，CHG，YHG，NHG，QHG，DHG，EHG，和KHG；或者
HKG，HRG，HHG，HGG，HAG，HVG，HLG，HIG，HMG，HFG，HWG，HPG，HSG，HTG，HCG，HYG，HNG，HQG，HDG，HEG，和HLG；或者
HGK，HGR，HGH，HGG，HGA，HGV，HGL，HGI，HGM，HGF，HGW，HGP，HGS，HGT，HGC，HGY，HGN，HGQ，HGD，HGE，和HGL；
XGP、GXP和GPX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KGP，RGP，HGP，GGP，AGP，VGP，LGP，IGP，MGP，FGP，WGP，PGP，SGP，TGP，CGP，YGP，NGP，QGP，DGP，EGP，和KGP；或者
GKP，GRP，GHP，GGP，GAP，GVP，GLP，GIP，GMP，GFP，GWP，GPP，GSP，GTP，GCP，GYP，GNP，GQP，GDP，GEP，和GLP；或者
GPK，GPR，GPH，GPG，GPA，GPV，GPL，GPI，GPM，GPF，GPW，GPP，GPS，GPT，GPC，GPY，GPN，GPQ，GPD，GPE，和GPL；
XGH、GXH和GHX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KGH，RGH，HGH，GGH，AGH，VGH，LGH，IGH，MGH，FGH，WGH，PGH，SGH，TGH，CGH，YGH，NGH，QGH，DGH，EGH，和KGH；或者
GKH，GRH，GHH，GGH，GAH，GVH，GLH，GIH，GMH，GFH，GWH，GPH，GSH，GTH，GCH，GYH，GNH，GQH，GDH，GEH，和GLH；或者
GHK，GHR，GHH，GHG，GHA，GHV，GHL，GHI，GHM，GHF，GHW，GHP，GHS，GHT，GHC，GHY，GHN，GHQ，GHD，GHE，和GHL；
XGF、GXF和GFX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KGF，RGF，HGF，GGF，AGF，VGF，LGF，IGF，MGF，FGF，WGF，PGF，SGF，TGF，CGF，YGF，NGF，QGF，DGF，EGF，和KGF；或者
GKF，GRF，GHF，GGF，GAF，GVF，GLF，GIF，GMF，GFF，GWF，GPF，GSF，GTF，GCF，GYF，GNF，GQF，GDF，GEF，和GLF；或者
GFK，GFR，GFH，GFG，GFA，GFV，GFL，GFI，GFM，GFF，GFW，GFP，GFS，GFT，GFC，GFY，GFN，GFQ，GFD，GFE，和GFL；
XRL、RXL和RLX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KRL，RRL，HRL，GRL，ARL，VRL，LRL，IRL，MRL，FRL，WRL，PRL，SRL，TRL，CRL，YRL，NRL，QRLRL，DRL，ERL，和KRL；或者
GKF，GRF，GHF，GGF，GAF，GVF，GLF，GIF，GMF，GFF，GWF，GPF，GSF，GTF，GCF，GYF，GNF，GQF，GDF，GEF，和GLF；或者
RLK，RLR，RLH，RLG，RLA，RLV，RLL，RLI，RLM，RLF，RLW，RLP，RLS，RLT，RLC，RLY，RLN，RLQ，RLD，RLE，和RLL；
XHP、HXP和HPX，其中X可以是任意氨基酸，例如在以下中的：
KHP，RHP，HHP，GHP，AHP，VHP，LHP，IHP，MHP，FHP，WHP，PHP，SHP，THP，CHP，YHP，NHP，QHP，DHP，EHP，和KHP；或者
HKP，HRP，HHP，HGP，HAF，HVF，HLF，HIF，HMF，HFF，HWF，HPF，HSF，HTF，HCF，HYP，HNF，HQF，HDF，HEF，和HLP；或者
HPK，HPR，HPH，HPG，HPA，HPV，HPL，HPI，HPM，HPF，HPW，HPP，HPS，HPT，HPC，HPY，HPN，HPQ，HPD，HPE，和HPL；
一些特别优选的实例是：
CRPYC，KCRPYC，KHCRPYC，RCRPYC，HCRPYC，CPRYC，KCPRYC，RCPRYC，HCPRYC，CPYRC，KCPYRC，RCPYRC，HCPYRC，CKPYC，KCKPYC，RCKPYC，HCKPYC，CPKYC，KCPKYC，RCPKYC，HCPKYC，CPYKC，KCPYKC，RCPYKC，和HCPYKC。
(对应于SEQ ID NO：166至190)。
(e)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为4，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4氨基酸段，其中m为选自0至3的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。优选的是其中m为1或2的基序。X1、X2、X3和X4各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1、X2、X3和X4是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在一个具体实施方案中，所述基序中的X1、X2、X3或X4中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。
一些具体实例是：LAVL(SEQ ID NO：191)、TVQA(SEQ ID NO：192)或GAVH(SEQ IDNO：193)、及其变体例如：X1AVL，LX2VL，LAX3L，或LAVX4；X1VQA，TX2QA，TVX3A，或TVQX4；X1AVH，GX2VH，GAX3H，或GAVX4(对应于SEQ ID NO：194至205)；其中X1、X2、X3和X4各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。
(f)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为5，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4X5(SEQ ID NO：65)氨基酸段，其中m为选自0至3的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。优选的是其中m为1或2的基序。X1、X2、X3、X4和X5各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1、X2、X3、X4和X5是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在一个具体实施方案中，所述基序中的X1、X2、X3、X4和X5中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。
一些具体实例是：PAFPL(SEQ ID NO：123)或DQGGE(SEQ ID NO：124)、及其变体例如：X1AFPL，PX2FPL，PAX3PL，PAFX4L，或PAFPX5；X1QGGE，DX2GGE，DQX3GE，DQGX4E，或DQGGX5(对应于SEQ ID NO：208至217)，其中X1、X2、X3、X4和X5各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然氨基酸。
(g)如方面2中所限定的Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为6，从而在氧化还原酶基序内产生内部X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO：66)氨基酸段，其中m为选自0至3的整数，其中Z为任意氨基酸，优选选自以下的碱性氨基酸：H、K、R，和如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸，优选K或R，最优选K。优选的是其中m为1或2的基序。X1、X2、X3、X4、X5和X6各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1、X2、X3、X4、X5和X6是除了C、S或T之外的任意氨基酸。
在一个具体实施方案中，所述基序中的X1、X2、X3、X4、X5或X6中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。
一些具体实例是：DIADKY(SEQ ID NO：218)、或其变体例如：X1IADKY，DX2ADKY，DIX3DKY，DIAX4KY，DIADX5Y，或DIADKX6(对应于SEQ ID NO：219至224)，其中X1、X2、X3、X4、X5和X6各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或如本文中所限定的非天然碱性氨基酸。
(h)Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，其中n为0至6并且其中m为0，并且其中C或[CST]残基中的一者已被修饰以在基序的氨基酸残基的N端酰胺上或在C端羧基上携带乙酰基、甲基、乙基或丙酰基(SEQ ID NO：144至163)。
在这样的基序的一些优选实施方案中，n为2，并且m为0，其中内部X1X2各自独立地可以是选自以下的任意氨基酸：G，A，V，L，I，M，F，W，P，S，T，C，Y，N，Q，D，E，K，R，和H，或非天然氨基酸。优选地，所述基序中的X1和X2是除了C、S或T之外的任意氨基酸。在另一个实例中，所述基序中的X1或X2中的至少一者是选自以下的碱性氨基酸：H、K或R，或者如本文中所限定的非天然碱性氨基酸例如L-鸟氨酸。在基序的另一个实例中，所述基序中的X1或X2中的至少一者是P或Y。氧化还原酶基序内的内部X1X2氨基酸偶联物的一些具体非限制性实例是：PY，HY，KY，RY，PH，PK，PR，HG，KG，RG，HH，HK，HR，GP，HP，KP，RP，GH，GK，GR，GH，KH，和RH。优选地，所述修饰导致基序中第一半胱氨酸的N端乙酰化(N-乙酰基-半胱氨酸)。
术语“碱性氨基酸”是指像布朗斯特-劳里碱(Bronsted-Lowry base)和路易斯碱(Lewis base)一样发挥作用的任意氨基酸，并且包括天然的碱性氨基酸，例如精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)，或者非天然的碱性氨基酸，例如但不限于：
-赖氨酸变体，如Fmoc-β-Lys(Boc)-OH(CAS号219967-68-7)、Fmoc-Orn(Boc)-OH(也称为L-鸟氨酸或鸟氨酸(CAS号109425-55-0))、Fmoc-β-Homolys(Boc)-OH(CAS号203854-47-1)、Fmoc-Dap(Boc)-OH(CAS号162558-25-0)或Fmoc-Lys(Boc)OH(DiMe)-OH(CAS号441020-33-3)；
-酪氨酸/苯丙氨酸变体，如Fmoc-L-3Pal-OH(CAS号175453-07-3)、Fmoc-β-HomoPhe(CN)-OH(CAS号270065-87-7)、Fmoc-L-β-HomoAla(4-吡啶基)-oH(CAS号270065-69-5)或Fmoc-L-Phe(4-NHBoc)-OH(CAS号174132-31-1)；
-脯氨酸变体，如Fmoc-Pro(4-NHBoc)-OH(CAS号221352-74-5)或Fmoc-Hyp(tBu)-OH(CAS号122996-47-8)；
-精氨酸变体，如Fmoc-β-Homoarg(Pmc)-OH(CAS号700377-76-0)。
氧化还原酶基序紧邻于本发明的肽内的表位序列放置，或者通过接头与T细胞或NKT细胞表位隔开。更特别地，接头包含0至7个氨基酸，即0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的氨基酸序列。最特别地，接头包含0至4个氨基酸，即0、1、2、3或4个氨基酸的氨基酸序列。或者，接头可包含5、6、7、8、9或10个氨基酸。
除肽接头之外，其他有机化合物也可用作接头以将肽的部分彼此(例如氧化还原酶基序与T细胞或NKT细胞表位序列)连接。
本发明的肽还可在包含T细胞或NKT细胞表位和氧化还原酶基序的(人工)序列的N端或C端包含另外的短氨基酸序列。这样的氨基酸序列在本文中通常被称为“侧翼序列”。侧翼序列可位于表位和内体靶向序列之间和/或氧化还原酶基序和内体靶向序列之间。在不包含内体靶向序列的另一些实施方案中，短氨基酸序列可存在于肽中氧化还原酶基序和/或表位序列的N端和/或C端。更特别地，侧翼序列是1至7个氨基酸的序列，最特别地是2个氨基酸的序列。
在本文中的任一个基序实施方案中，如果m为0并且在N端氧化还原酶基序(氧化还原酶基序位于免疫原性肽的N端开端处)的情况下，该基序最先的半胱氨酸、苏氨酸或丝氨酸可通过N-乙酰化、N-甲基化、N-乙基化或N-丙酰化进行化学修饰。
在本文中的任一个基序实施方案中，如果m为0并且在C端氧化还原酶基序(氧化还原酶基序位于免疫原性肽的C端末端处)的情况下，该基序最后的半胱氨酸、苏氨酸或丝氨酸可通过其C端酰胺或酸基团的乙酰基、甲基、乙基或丙酰基的C端取代进行化学修饰。
在本发明中使用的包含氧化还原基序的肽中，对基序进行定位以使得当表位适合于MHC沟时，基序保留在MHC结合沟的外部。经修饰氧化还原基序置于紧邻肽内的表位序列[换句话说，基序与表位之间的接头序列为零个氨基酸]，或者通过包含7个氨基酸或更少的氨基酸序列的接头与T细胞表位隔开。更特别地，接头包含1、2、3、4、5、6或7个氨基酸。一些具体的实施方案是在表位序列与经修饰氧化还原基序序列之间具有0、1、2、3或4个氨基酸接头的肽。优选地，接头包含4个氨基酸的氨基酸序列。在其中经修饰氧化还原基序序列与表位序列相邻的那些肽中，这表示为与表位序列相比的第P-4位至第P-1位或第P+1位至第P+4位。除肽接头之外，其他有机化合物也可用作接头，以将肽的部分彼此(例如经修饰氧化还原基序序列与T细胞表位序列)连接。
用于本发明的肽还可在包含T细胞表位和经修饰氧化还原基序的序列的N端或C端包含另外的短氨基酸序列。这样的氨基酸序列在本文中通常被称为“侧翼序列”。侧翼序列可位于表位与内体靶向序列之间和/或经修饰氧化还原基序与内体靶向序列之间。在某些不包含内体靶向序列的肽中，短氨基酸序列可在肽中经修饰氧化还原基序和/或表位序列的N和/或C端存在。更特别地，侧翼序列是1至7个氨基酸的序列，最特别是2个氨基酸的序列。
经修饰氧化还原基序可位于表位的N端。
在本发明的某些实施方案中，提供了所用的包含一个表位序列和经修饰氧化还原基序序列的肽。在另一些具体实施方案中，经修饰氧化还原基序在肽中出现数次(1、2、3、4或甚至更多次)，例如作为可通过一个或更多个氨基酸彼此间隔的经修饰氧化还原基序的重复序列，或者作为彼此紧邻的重复序列。或者，在T细胞表位序列的N端和C端二者均提供一个或更多个经修饰氧化还原基序。
针对本发明的肽设想的其他变化形式包含含有T细胞表位序列的重复序列的肽，其中每个表位序列在经修饰氧化还原基序之前和/或之后(例如“经修饰氧化还原基序-表位”的重复序列或“经修饰氧化还原基序-表位-经修饰氧化还原基序”的重复序列)。在本文中，经修饰氧化还原基序可都具有相同的序列，但这不是必须的。应注意，包含其本身包含经修饰氧化还原基序的表位的肽的重复序列还将导致序列包含“表位”和“经修饰氧化还原基序”二者。在这样的肽中，在一个表位序列内的经修饰氧化还原基序作为在第二个表位序列外的经修饰氧化还原基序发挥作用。
通常来说，用于本发明的肽仅包含一个T细胞表位。如下所述，可通过功能测定和/或二氧化硅预测测定中的一个或更多个来鉴定蛋白质序列中的T细胞表位。T细胞表位序列中的氨基酸根据其在MHC蛋白的结合沟中的位置来编号。存在于肽中的T细胞表位由8至25个氨基酸，但更特别地8至16个氨基酸组成，但最特别地由8、9、10、11、12、13、14、15或16个氨基酸组成。
在一个更具体的实施方案中，T细胞表位由9个氨基酸的序列组成。在另一个具体实施方案中，T细胞表位是由MHC II类分子呈递给T细胞的表位[MHC II类限制性T细胞表位]。通常来说，T细胞表位序列是指适合MHC II蛋白的槽的八肽或更特别地是九肽序列。
本发明的肽的T细胞表位可对应于蛋白质的天然表位序列，或者可以是其经修饰形式，前提是：与天然T细胞表位序列类似，经修饰T细胞表位保留其在MHC槽内结合的能力。经修饰T细胞表位可具有与天然表位相同的对MHC蛋白的结合亲和力，但也可具有降低的亲和力。特别地，经修饰肽的结合亲和力比原始肽小不少于10倍，更特别地小不少于5倍。本发明的肽对蛋白质复合物具有稳定作用。因此，肽-MHC复合物的稳定作用补偿了经修饰表位对MHC分子的降低的亲和力。
肽内包含T细胞表位和还原性化合物的序列可进一步与促进肽被摄取到晚期内体中以进行加工并在MHC II类决定簇中呈递的氨基酸序列(或另一种有机化合物)连接。晚期内体靶向是由存在于蛋白质的胞质尾中的信号介导的，并且对应于公认的肽基序。晚期内体靶向序列允许对抗原来源的T细胞表位进行加工并通过MHC II类分子高效呈递。这样的内体靶向序列包含在例如gp75蛋白(Vijayasaradhi et al.(1995)J.Cell.Biol.130，807-820)、人CD3γ蛋白、HLA-BM 11(Copier et al.(1996)J.lmmunol.157，1017-1027)、DEC205受体胞质尾(Mahnke et al.(2000)J.Cell Biol.151，673-683)内。在Bonifacio和Traub(2003)Annu.Rev.Biochem.72，395-447的综述中公开了作为内体的分拣信号发挥作用的肽的其他实例。或者，该序列可以是来自蛋白质的亚优势或次要T细胞表位的序列，其促进晚期内体中的摄取但未克服针对抗原的T细胞应答。晚期内体靶向序列可位于抗原来源肽的氨基端或羧基端末端处，以用于高效摄取和加工，并且也可通过侧翼序列，例如多至10个氨基酸的肽序列偶联。当出于靶向目的使用次要T细胞表位时，后者通常位于抗原来源肽的氨基端末端处。
因此，本发明设想了抗原蛋白的肽的用途及其在引发特异性免疫应答中的用途。这些肽可对应于在其序列内包含即被至多10个，优选7个氨基酸或更少的氨基酸隔开的还原性化合物和T细胞表位的蛋白质片段。或者，并且对于大多数抗原蛋白，本发明的肽是通过将还原性化合物，更特别地本文中所述的还原性经修饰氧化还原基序与抗原蛋白的T细胞表位在N端或C端偶联(与其直接相邻或用至多10个、更特别地至多7个氨基酸的接头)而产生的。此外，与天然存在的序列相比，可对蛋白质的T细胞表位序列和/或经修饰氧化还原基序修饰和/或可引入一个或更多个侧翼序列和/或靶向序列(或对其进行修饰)。因此，取决于是否可在目的抗原蛋白的序列内发现本发明的特征，本发明的肽可包含“人工的”或“天然存在的”序列。
本发明的肽的长度可显著变化。肽的长度可以为13或14个氨基酸(即由8至9个氨基酸的表位、与其相邻的具有组氨酸的5个氨基酸的经修饰的氧化还原基序组成)多至20、25、30、40或50个氨基酸而不等。例如，肽可包含40个氨基酸的内体靶向序列、约2个氨基酸的侧翼序列、5个氨基酸的如本文中所述的基序、4个氨基酸的接头和9个氨基酸的T细胞表位肽。
因此，在一些具体实施方案中，完整的肽由13个氨基酸多至20、25、30、40、50、75或100个氨基酸组成。更特别地，在还原性化合物是如本文中所述的经修饰氧化还原基序的情况下，无内体靶向序列的包含任选地通过接头连接的表位和经修饰氧化还原基序的(人工或天然)序列(本文中称为“表位-经修饰氧化还原基序”序列)的长度是至关重要的。“表位-经修饰氧化还原基序”更特别地具有13、14、15、16、17、18或19个氨基酸的长度。这样的13或14至19个氨基酸的肽可任选地与其大小不太关键的内体靶向信号偶联。
如上所述，在一些具体实施方案中，本发明的肽包含与T细胞表位序列连接的如本文中所述的还原性经修饰氧化还原基序。
在另一些具体实施方案中，用于本发明的肽是包含T细胞表位的肽，该T细胞表位不包含在其天然序列内具有氧化还原特性的氨基酸序列。
然而，在一些替代实施方案中，T细胞表位可包含确保表位与MHC槽结合的任意氨基酸序列。在抗原蛋白的目的表位在其表位序列内包含如本文中所述的经修饰氧化还原基序的情况下，根据本发明的免疫原性肽包含如本文中所述的经修饰氧化还原基序的序列和/或与表位序列N端或C端偶联的另一种还原性序列的序列，以使得(与埋在槽中的表位中存在的经修饰氧化还原基序相反)连接的经修饰氧化还原基序可确保还原活性。
因此，T细胞表位和基序彼此紧邻或隔开，并且不重叠。为了评估“紧邻”或“隔开”的概念，确定适合MHC槽的8或9个氨基酸的序列，并确定该八肽或九肽与氧化还原基序四肽或经修饰氧化还原基序五肽(包含组氨酸)之间的距离。
通常来说，用于本发明的肽不是天然的(因此没有像这样的蛋白质片段)而是人工肽，其除T细胞表位之外还包含如本文中所述的经修饰氧化还原基序，其中经修饰氧化还原基序通过由多至七个氨基酸、最特别地多至四个或多至2个氨基酸组成的接头与T细胞表位直接隔开。
已表明，在向哺乳动物施用(即注射)本文中公开的肽(或包含这样的肽的组合物)之后，该肽引发识别抗原来源的T细胞表位的T细胞活化，并通过还原表面受体向T细胞提供另外的信号。这种超最佳活化导致T细胞获得对呈递T细胞表位的细胞的溶细胞特性，以及对旁观者T细胞的抑制特性。以这种方式，本发明中所述的包含抗原来源的T细胞表位以及表位之外的经修饰氧化还原基序的肽或包含所述肽的组合物可用于哺乳动物包括人的直接免疫接种。因此，本发明提供了本文中公开的肽或其衍生物用作药物的用途。因此，本发明提供了治疗方法，其包括向有此需要的患者施用一种或更多种本文中公开的肽。
本发明提供了这样的方法，通过该方法，被赋予溶细胞特性的抗原特异性T细胞可通过用小肽进行的免疫接种来引发。已经发现包含以下的肽引发抑制性T细胞：(i)编码来自抗原的T细胞表位的序列和(ii)具有氧化还原特性的共有序列，并且另外任选地还包含促进该肽被摄取到晚期内体中以用于高效的MHC II类呈递的序列。
所公开肽的免疫原性特性在治疗和预防免疫应答中是特别令人感兴趣的。
本文中所述的肽用作药物，更特别地用于制备用于在哺乳动物中(更特别地在人中)预防或治疗免疫病症的药物。
本发明描述了通过使用本文中公开的肽、其同源物或衍生物来治疗或预防需要这样的治疗或预防的哺乳动物的免疫病症的方法，该方法包括向患有免疫病症或处于免疫病症的风险之中的所述哺乳动物施用治疗有效量的本文中公开的肽、其同源物或衍生物例如以降低免疫病症的症状的步骤。设想了对人和动物(例如宠物和农场动物)二者的治疗。在一个实施方案中，待治疗的哺乳动物是人。在一个具体实施方案中，以上提及的免疫病症选自变应性疾病和自身免疫病。
用于本发明的肽或包含如本文中所限定的这样的肽的药物组合物优选通过皮下或肌内施用来施用。优选地，可将肽或包含这样的肽的药物组合物皮下(SC)注射到位于肘和肩中间的上臂的外侧部的区域中。当需要两次或更多次分开的注射时，其可伴随地在两条臂中施用。
用于本发明的肽或包含这样的肽的药物组合物以治疗有效剂量施用。示例性但非限制性的剂量方案为300至1500μg，优选300至600μg或1200至1500μg。
示例性剂量为：300至600μg的所述免疫原性肽；
600至800μg的所述免疫原性肽；
800至1000μg的所述免疫原性肽；
1000至1200μg的所述免疫原性肽；或
1200至1500μg的所述免疫原性肽。
更具体的剂量方案可以是300至500μg，或约450μg，或者可以是1300至1500μg，或约1350μg。
剂量方案可包含以单剂或者以2、3、4、5、6或更多剂同时或连续地施用。
一些示例性的非限制性施用方案如下：
-低剂量方案，其包括在一次或在两次单独的连续施用中SC施用300至500μg，或约450μg肽，所述施用重复4至6次，并且间隔约2至3周，例如约2周或例如约10至20天、约11至19天、约12至17天、约13至16天、约14至15天或约14天。
-高剂量方案，其包括在一次或两次单独的连续施用中SC施用1300至1500μg，或约1350μg的肽，所述施用重复4至6次，并且间隔1至3周，例如约2周或例如约10至20天、约11至19天、约12至17天、约13至16天、约14至15天或约14天。
这些治疗方案中的每一者都可以有利地包括在从治疗开始算起的约第24至30周，例如从治疗开始算起的第24、25、26、27、28、29或30周，以相同剂量进行加强注射。
用于本发明的肽还可在用于在样品中检测II类限制性CD4+T细胞的体外诊断方法中使用。在该方法中，使样品与MHC II类分子和本文中公开的肽的复合物接触。通过测量复合物与样品中细胞的结合来检测CD4+T细胞，其中复合物与细胞的结合指示样品中存在CD4+T细胞。
复合物可以是肽与MHC II类分子的融合蛋白。
或者，复合物中的MHC分子是四聚体。复合物可作为可溶性分子提供或者可与载体连接。
因此，在一些具体实施方案中，本发明的治疗和预防方法包括施用如本文中所述的免疫原性肽，其中所述肽包含在待治疗的疾病中发挥作用的抗原蛋白的T细胞表位(例如如以上描述的那些)。在另一些具体实施方案中，使用的表位是优势表位，其与对被认为受益于所述治疗最多的那些患者进行分层或选择的方法组合。
根据本发明使用的肽可通过合成其中T细胞表位与经修饰氧化还原基序将被0至5个氨基酸隔开的肽来制备。在某些实施方案中，经修饰氧化还原基序可通过在表位序列之外引入1、2或3个突变来获得，以保留如在蛋白质中存在的序列背景。通常来说，参照作为天然序列的一部分的九肽，P-2和P-1以及P+10和P+11中的氨基酸被保留在肽序列中。这些侧翼残基通常使与MHC II类的结合稳定。在另一些实施方案中，表位的N端或C端序列与包含T细胞表位序列的抗原蛋白的序列无关。
因此，基于以上用于设计肽的方法，通过化学肽合成、重组表达方法或在更特殊情况下的蛋白质的蛋白水解或化学片段化来产生肽。
可在体外和体内方法中测试如在上述方法中产生的肽的T细胞表位的存在，并且可在体外测定中测试其还原活性。作为最终的质量控制，可在体外测定中测试肽以验证该肽是否可产生CD4+T细胞，所述细胞通过针对呈递包含表位序列(其也存在于具有经修饰氧化还原基序的肽中)的抗原的抗原呈递细胞的凋亡途径而具有溶细胞性。
用于本发明的肽可使用重组DNA技术在细菌、酵母、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞中产生。考虑到肽的有限长度，其可通过化学肽合成来制备，其中通过将不同的氨基酸彼此偶联来制备肽。化学合成特别适合于包含例如D-氨基酸、具有非天然存在侧链的氨基酸或具有经修饰侧链的天然氨基酸，例如甲基化半胱氨酸。
化学肽合成方法已被充分描述，并且肽可从例如Applied Biosystems和其他公司的公司订购。
肽合成可以作为固相肽合成(solid phase peptide synthesis，SPPS)或与液相肽合成相反地进行。最著名的SPPS方法是t-Boc和Fmoc固相化学：
在肽合成期间，使用了数个保护基。例如，羟基和羧基官能团被叔丁基保护，赖氨酸和色氨酸被t-Boc基团保护，并且天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和组氨酸被三苯甲基保护，并且精氨酸被pbf基团保护。如果合适的话，这样的保护基可在合成之后留在肽上。可使用如Kent(Schnelzer&Kent(1992)lnt.J.Pept.Protein Res.40，180-193)最初所描述并且例如在Tam et al.(2001)Biopolymers 60，194-205中所综述的连接策略(两个未经保护的肽片段的化学选择性偶联)将肽彼此连接以形成更长的肽，所述连接策略为实现蛋白质合成提供了巨大的潜力，这超出了SPPS的范围。通过这种方法已成功地合成了大小为100至300个残基的许多蛋白质。由于SPPS的巨大进步，合成肽在生物化学、药理学、神经生物学、酶学和分子生物学的研究领域中继续发挥着越来越重要的作用。
或者，所述肽可通过在包含编码核苷酸序列的合适的表达载体中使用编码本发明肽的核酸分子来合成。这样的DNA分子可使用自动DNA合成仪和遗传密码的公知密码子-氨基酸关系来容易地制备。这样的DNA分子还可使用寡核苷酸探针和常规杂交方法作为基因组DNA或作为cDNA来获得。可将这样的DNA分子并入到表达载体(包括质粒)中，所述表达载体适合于在合适的宿主中表达DNA和产生多肽，所述合适的宿主例如细菌(例如大肠杆菌(Escherichia coli))、酵母细胞、动物细胞或植物细胞。
检查目的肽的物理和化学特性(例如溶解性、稳定性)，以确定该肽是否/是否将适合用于治疗性组合物中。通常来说，这是通过调节肽的序列来优化的。任选地，可在合成之后使用本领域已知的技术对肽进行修饰(化学修饰，例如添加/缺失官能团)。
认为T细胞表位本身通过与抗原呈递细胞表面的适当HLA分子结合并刺激相关T细胞亚群来触发早期的T辅助细胞水平事件。这些事件导致T细胞增殖、淋巴因子分泌、局部炎症反应、向该部位募集另外的免疫细胞以及激活B细胞级联反应，从而产生抗体。这些抗体的一种同种型，IgE，在变应性症状的发展中具有根本性的重要性，并且它的产生在T辅助细胞水平事件的级联早期受到分泌的淋巴因子性质的影响。T细胞表位是T细胞受体识别的基本要素或最小单位，其中表位包含受体识别所必需的氨基酸残基，所述氨基酸残基在蛋白质的氨基酸序列中是连续的。
然而，在施用具有T细胞表位和氧化还原基序的肽之后，认为会发生以下事件：
由与MHC II类分子呈递的抗原衍生肽的同源相互作用引起的抗原(i)特异性T细胞的活化；
还原酶序列还原T细胞表面蛋白，例如CD4分子，其第二结构域包含受限制的二硫桥。这将信号转导到T细胞中。在与氧化途径提高相关的一系列结果中，重要事件是钙内流提高和NF-kB转录因子易位至细胞核。后者导致IFN-γ和颗粒酶的转录提高，这使得细胞通过凋亡诱导机制获得溶细胞特性；溶细胞特性通过涉及颗粒酶B分泌和Fas-FasL相互作用的机制影响呈递肽的细胞。由于细胞杀伤作用是通过凋亡途径获得的，因此与细胞毒性细胞相比，溶细胞性细胞是更适合这些细胞的术语。抗原呈递靶细胞的破坏阻止了针对位于同一抗原上的表位或针对将由同一抗原呈递细胞加工的不相关抗原的表位特异性的其他T细胞的活化；T细胞活化的另外的结果是通过细胞间接触依赖机制抑制旁观者T细胞的活化。在这样的情况下，由不同抗原呈递细胞呈递的抗原活化的T细胞也被抑制，前提是溶细胞性T细胞和旁观者T细胞二者非常接近，即在同一抗原呈递细胞的表面上被活化。
以上假定的作用机制由以上引用的PCT申请WO2008/017517中公开的实验数据证实。
本发明提供了用于在体内或体外产生抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞的方法以及其在治疗已被分层或选择为受益于所述治疗最多的患者中的用途。与其无关，可设想基于特征表达数据区分溶细胞性CD4+T细胞与其他细胞群例如Foxp3+Treg的方法。
本发明描述了用于产生可用于根据本发明进行治疗的抗原特异性CD4+T细胞的体内方法。一个具体实施方案涉及用于通过以下来产生或分离CD4+T细胞的方法：用如本文中所述的肽来免疫接种动物(包括人)，并随后从经免疫接种的动物中分离CD4+T细胞。本发明描述了用于产生针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞的体外方法。本申请还公开了用于产生针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞的方法。
在一个实施方案中，提供了这样的方法，其包括分离外周血细胞，通过本文中所述的免疫原性肽体外刺激细胞群，以及扩增经刺激的细胞群，更特别地在存在IL-2的情况下进行。根据本发明的方法具有以下优点：产生高数目的CD4+T细胞，并且可产生对抗原蛋白具有特异性的CD4+T细胞(通过使用包含抗原特异性表位的肽)。
在一个替代实施方案中，CD4+T细胞可在体内产生，即通过向对象注射本文中所述的免疫原性肽，并收集体内产生的溶细胞性CD4+T细胞。
可通过本文中公开的方法获得的针对APC的抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞在预防变应性反应和治疗自身免疫病中向哺乳动物施用免疫治疗是特别令人感兴趣的。设想了使用同种细胞和自体细胞(autogeneic cell)二者。
溶细胞性CD4+T细胞群如下文中所述获得。
如本文中所述的抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞可用作药物，更特别地用于过继细胞治疗，更特别地用于治疗急性变应性反应和自身免疫病(例如多发性硬化)的复发。如所述产生的分离的溶细胞性CD4+T细胞或细胞群，更特别地抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞群用于制备用于预防或治疗免疫病症的药物。公开了通过使用分离的或产生的溶细胞性CD4+T细胞进行治疗的方法。
在施用于活的动物(通常是人)之后，用于本发明的肽将引发对旁观者T细胞发挥抑制活性的特异性T细胞。
在一些具体实施方案中，本文中公开的溶细胞性细胞群的特征在于FasL和/或干扰素γ的表达。在一些具体实施方案中，本发明的溶细胞性细胞群的特征还在于颗粒酶B的表达。
该机制还意味着并且实验结果表明，本发明的肽尽管包含某抗原的特定T细胞表位，但可用于预防或治疗由针对相同抗原的其他T细胞表位的免疫应答引发的病症，或者在某些情况下甚至用于治疗由针对其他不同抗原的其他T细胞表位的免疫应答引发的病症，如果所述其他不同抗原将由MHC II类分子在被本发明肽活化的T细胞附近通过相同的机制来呈递的话。
公开了具有上述特征的细胞类型的分离的细胞群，其另外是抗原特异性的，即能够抑制抗原特异性免疫应答。
本发明提供了包含一种或更多种根据本发明的肽的药物组合物的用途，所述药物组合物还包含可药用载体。如上所详述的，本发明还涉及用作药物的组合物或涉及通过使用所述组合物来治疗哺乳动物免疫病症的方法，以及涉及所述组合物用于制备用于预防或治疗免疫病症的药物的用途，其与对被认为受益于所述治疗最多的那些患者进行分层或选择的方法组合。药物组合物可例如是疫苗，其适用于治疗或预防免疫病症，尤其是空气源性(airborne)和食源性(foodborne)变态反应以及变应性源的疾病。作为药物组合物的本文中进一步描述的一个实例，将根据本发明的肽吸附在适合于向哺乳动物施用的佐剂，例如氢氧化铝(明矾)上。通常来说，以2周的间隔通过皮下途径注射3次本文中所述的期望剂量(例如50μg至1500μg)的吸附在明矾上的肽。对于本领域技术人员来说应明显的是，其他施用途径也是可能的，包括经口、鼻内或肌内。同样，注射次数和注射量可根据待治疗的病症而变化。此外，可使用除明矾之外的其他佐剂，前提是其促进MHC II类呈递中的肽呈递和T细胞活化。因此，尽管可单独施用活性成分，但它们通常作为药物制剂存在。本发明的用于兽用用途和用于人用途二者的制剂均包含至少一种如上所述的活性成分以及一种或更多种可药用载体。本公开内容涉及药物组合物，其包含与可药用载体混合的作为活性成分的一种或更多种本文中所述的肽。药物组合物应包含治疗有效量的活性成分，例如下文关于治疗或预防方法所指示的。任选地，组合物还包含其他治疗性成分。合适的其他治疗性成分以及其取决于其所属类别的常用剂量是本领域技术人员公知的，并且可选自用于治疗免疫病症的其他已知药物。
本文中使用的术语“可药用载体”意指与活性成分一起配制以便于例如通过溶解、分散或扩散该组合物来有助于其在待治疗的部位的施加或散布，和/或在不损害其效力的情况下有助于其储存、运输或处理的任何材料或物质。可药用载体包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂(例如酚、山梨酸、氯丁醇)、等张剂(例如糖或氯化钠)等。为了控制组合物中免疫原性肽的作用持续时间，可包含另外的成分。可药用载体可以是固体或液体或已被压缩以形成液体的气体，即本发明的组合物可合适地用作浓缩剂、乳剂、溶液剂、颗粒剂、粉尘剂(dust)、喷雾剂、气雾剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、片剂、丸剂或粉剂。用于药物组合物及其制剂的合适的药物载体是本领域技术人员公知的，并且在本发明内对其选择没有特别限制。可药用载体还可包括添加剂，例如润湿剂、分散剂、黏贴剂(sticker)、黏合剂、乳化剂、溶剂、包衣、抗细菌和抗真菌剂(例如酚、山梨酸、氯丁醇)、等张剂(例如糖或氯化钠)等，前提是它们与药学实践一致，即不会对哺乳动物造成永久损害的载体和添加剂。本发明的药物组合物可以以任何已知方式制备，例如通过以一步或多步操作将活性成分与所选的载体材料以及(合适的话)其他添加剂(例如表面活性剂)一起均质地混合、对其进行包衣和/或研磨来制备。它们也可通过微粉化(micronisation)来制备，例如，考虑到以通常具有约1至10μm直径的微球形式获得它们，即用于制备用于控制或持续释放活性成分的微胶囊剂。
待用于本发明药物组合物中的合适的表面活性剂(也称为乳化剂(emulgent)或乳化剂(emulsifier))是具有良好的乳化、分散和/或润湿特性的非离子型、阳离子型和/或阴离子型材料。合适的阴离子型表面活性剂包括水溶性皂和水溶性合成表面活性剂。合适的皂是高级脂肪酸(C10至C22)的碱金属盐或碱土金属盐、未经取代或经取代的铵盐，例如油酸或硬脂酸的钠盐或钾盐，或者可从椰子油或动物脂油(tallow oil)获得的天然脂肪酸混合物的钠盐或钾盐。合成的表面活性剂包括聚丙烯酸的钠盐或钙盐；脂肪磺酸盐和硫酸盐；磺化苯并咪唑衍生物和烷基芳基磺酸盐。脂肪磺酸盐或硫酸盐通常为以下形式：碱金属盐或碱土金属盐、未经取代的铵盐或被具有8至22个碳原子的烷基或酰基基团取代的铵盐，例如，木质素磺酸(lignosulphonic acid)或十二烷基磺酸的钠盐或钙盐，或从天然脂肪酸中获得的脂肪醇硫酸盐的混合物、硫酸酯或磺酸酯的碱金属盐或碱土金属盐(例如月桂基硫酸钠)和脂肪醇/环氧乙烷加合物的磺酸。合适的磺化苯并咪唑衍生物通常包含8至22个碳原子。烷基芳基磺酸盐的一些实例是十二烷基苯磺酸或二丁基-萘磺酸或萘-磺酸/甲醛缩合产物的钠盐、钙盐或链烷醇胺盐。同样合适的是相应的磷酸盐，例如磷酸酯和对壬基苯酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的加合物，或磷脂的盐。用于此目的的合适的磷脂是脑磷脂或卵磷脂类型的天然的(来源于动物或植物细胞的)或合成的磷脂，例如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、溶血卵磷脂、心磷脂、二辛基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱，及其混合物。
合适的非离子型表面活性剂包括烷基酚、脂肪醇、脂肪酸、分子中包含至少12个碳原子的脂肪族胺或酰胺、烷基芳烃磺酸盐和二烷基磺基琥珀酸盐的聚乙氧基化和聚丙氧基化衍生物，例如脂肪族和脂环族醇、饱和和不饱和脂肪酸和烷基酚的聚乙二醇醚衍生物，所述衍生物通常在(脂肪族)烃部分中包含3至10个乙二醇醚基和8至20个碳原子，并且在烷基酚的烷基部分中包含6至18个碳原子。另外的合适的非离子型表面活性剂是聚环氧乙烷与聚丙二醇、在烷基链中包含1至10个碳原子的乙二胺基聚丙二醇(ethylenediaminopolypropylene glycol)的水溶性加合物，该加合物包含20至250个乙二醇醚基和/或10至100个丙二醇醚基。这样的化合物通常包含1至5个乙二醇单元/丙二醇单元。非离子型表面活性剂的代表性实例是壬基酚-聚乙氧基乙醇、蓖麻油聚乙醇醚(castoroil polyglycolic ether)、聚丙烯/聚环氧乙烷加合物、三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚乙二醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。如下物质也是合适的非离子型表面活性剂：聚乙烯脱水山梨糖醇的脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇三油酸酯)、甘油、脱水山梨糖醇、蔗糖和季戊四醇。合适的阳离子型表面活性剂包括具有4个任选地被卤素、苯基、经取代的苯基或羟基取代的烃基的季铵盐，特别是卤化物；例如包含作为N-取代基的至少一个C8C22烷基基团(例如鲸蜡基、月桂基、棕榈基、肉豆蔻基、油烯基等)以及作为另外的取代基的未经取代或卤代的低级烷基、苄基和/或羟基-低级烷基的季铵盐。
适用于此目的的表面活性剂的更详细描述可见于例如“McCutcheon’sDetergents and Emulsifiers Annual”(MC Publishing Crop.，Ridgewood，New Jersey，1981)、“Tensid-Taschenbucw”2 d ed.(Hanser Verlag，Vienna，1981)和“Encyclopaediaof Surfactants，(Chemical Publishing Co.，New York，1981)中。根据本发明的肽、其同源物或衍生物(及其全部包括在术语“活性成分”中的其生理学上可接受的盐或药物组合物)可通过适合于待治疗病症和适合于所述化合物(在此为待施用的蛋白质和片段)的任何途径来施用。可能的途径包括区域性、全身性、经口(固体形式或吸入)、经直肠、经鼻、局部(包括经眼、经颊和舌下)、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、动脉内、鞘内和硬膜外)。优选的施用途径可根据例如接受者的状况或待治疗的疾病而变化。如本文中所述，在与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上，载体最佳地是“可接受的”。所述制剂包括适用于经口、经直肠、经鼻、局部(包括经颊和舌下)、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、动脉内、鞘内和硬膜外)施用的那些。
适用于肠胃外施用的制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液剂，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使制剂与预期接受者的血液等张；以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包括助悬剂和增稠剂。制剂可存在于单位剂量或多剂量的容器(例如密封的安瓿和小瓶)中，并且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在使用之前立即添加无菌液体载体(例如注射用水)。即用型(extemporaneous)注射溶液剂和混悬剂可由前述类型的无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备。
典型的单位剂量制剂是包含如上文中所述的活性成分的每日剂量或单位每日亚剂量或其适当分数的那些。应理解，除以上特别提及的成分之外，考虑到所讨论的制剂的类型，本发明的制剂可包含本领域常规的其他试剂，例如适用于经口施用的那些可包含矫味剂。根据本发明的肽、其同源物或衍生物可用于提供包含一种或更多种本发明化合物作为活性成分的控制释放药物制剂(“控制释放制剂”)，其中活性成分的释放可被控制和调节，以允许较低频率的给药或改善给定的本发明化合物的药代动力学谱或毒性谱。可根据常规方法制备适用于经口施用的控制释放制剂，其中离散单元包含一种或更多种本发明化合物。为了控制组合物中活性成分的作用持续时间，可包含另外的成分。因此，可通过选择合适的聚合物载体来获得控制释放组合物，所述合适的聚合物载体例如如聚酯、聚氨基酸、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硫酸鱼精蛋白等。药物释放的速率和作用的持续时间还可通过将活性成分并入到聚合物的颗粒(例如微胶囊)中来控制，所述聚合物例如水凝胶、聚乳酸、羟甲基纤维素、聚甲基丙烯酸甲酯和其他上述聚合物。这样的方法包括胶体药物递送系统，如脂质体、微球、微乳剂、纳米粒、纳米胶囊剂等。根据施用途径，药物组合物可需要保护性包衣。适用于注射的药物形式包括无菌水性溶液剂或分散体以及用于其即用型制剂的无菌粉剂。因此，用于此目的的典型载体包括生物相容性水性缓冲剂、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇等，以及其混合物。鉴于以下事实：当组合使用数种活性成分时，其不一定在待治疗的哺乳动物中同时直接发挥其联合的治疗作用，因此相应的组合物也可以是在分开但相邻的储器或室中包含两种成分的医学药盒或包装的形式。因此，在后一种情况下，每种活性成分可以以适用于不同于另一种成分的施用途径的方式配制，例如，它们之一可以是经口或肠胃外制剂的形式，而另一种是用于静脉内注射的安瓿或气雾剂的形式。
如在体外和体内所证实的，如本文中所述的获得的溶细胞性CD4+T细胞在MHC-II类依赖性的同源激活之后诱导APC凋亡，影响树突细胞和B细胞二者，并且(2)在IL-10和/或TGF-β不存在的情况下通过接触依赖性机制抑制旁观者T细胞。如WO2008/017517中详细讨论的，可将溶细胞性CD4+T细胞与天然Treg和适应性Treg区分开。
现在将通过以下实施例对本发明进行举例说明，所述实施例是在不具有任何限制意图的情况下提供的。此外，本文中所述的所有参考文献均通过引用明确地包含在本文中。
实施例
实施例1：样本量
参与者以1∶1∶1比例(安慰剂：研究药物产品450μg：研究药物产品1350μg)分配至治疗或安慰剂。该试验的贝叶斯自适应设计(Bayesian adaptive design)基于线性纵向随机作用模型，并通过模拟评价操作特征。该设计使用84位参与者(28∶28∶28)，以在48周(最后一次计划访视)时在至少一个治疗组与安慰剂之间检测到0.2nmol/L对数转换干血斑(DBS)C肽水平变化的能力达到至少80％。
实施例2：研究设计
这是在患有1型糖尿病(T1D)的患者中的多中心、剂量比较、随机、双盲、安慰剂对照研究，所述患有1型糖尿病(T1D)的患者为筛选时诊断的最多9周内(被定义为首次注射胰岛素之日)、以及从诊断到随机化最多12周内的患者。
主要研究
84位HLA DR4+成人参与者被随机分配(1∶1∶1)至三个治疗组之一：安慰剂、研究药物产品(IMP)450μg和IMP 1350μg(＝主要研究)。所有参与者均接受6次IMP或安慰剂的施用，并且每次施用间隔2周。在24周时，参与者接受加强注射。当经治疗的参与者接受与他们随机接受的剂量相等的加强施用时，安慰剂参与者则接受安慰剂加强。参与者被随访长至48周(图1)。
亚研究
多至24位HLA DR4阴性但HLA DR3+成年参与者也被纳入完全的机制亚研究中，以研究其免疫应答。参与者被随机分配至IMP 450μg或IMP 1350μg(＝亚研究)。还收集了安全数据并将其添加至研究的完整安全数据集(图1)。
对于每位参与者(包括亚研究中的参与者)，该研究总共包括11次访视发生，持续约52周(从筛选访视到最后一次计划访视)。
纳入标准：
(1)已给予书面知情同意。
(2)参与者在同意时间时年龄≥18岁且＜45岁。
(3)筛选时最多9周内(首次注射胰岛素的日期)必须诊断出T1D。
(4)筛选时必须存在至少一种或更多种糖尿病相关自身抗体(GAD65、IA-2或ZnT8)。
(5)筛选时测量的随机C肽水平必须≥200pmol/L。
(6)对于主要研究，HLA DR4必须呈阳性。
a.多至24位具有HLA DR4阴性但HLA DR3阳性的参与者将符合该亚研究的资格。
(7)必须愿意遵守加强的糖尿病管理。
(8)根据当地标准护理用胰岛素治疗进行治疗。
(9)具有生育潜力的男性必须同意在最后一次治疗完成之后多至90天使用适当的避孕。这包括：
-屏障避孕(避孕套和杀精子剂)或
-真正的禁欲(其中这符合参与者的优选和通常生活方式)。
(10)所有女性在筛选时必须进行阴性血清妊娠测试。性活跃且有生育潜力的女性必须同意在最后一次用研究产品治疗之后从筛选到多至90天使用高效的避孕方法。
排除标准：
(1)在筛选时出现临床显著的全血细胞计数(full blood count，FBC)、肾功能或肝功能异常，其包括
a.存在免疫缺陷或具有临床显著的慢性淋巴细胞减少：白细胞减少症(＜3,000个白细胞/μL)、中性粒细胞减少(＜1,500个中性粒细胞/μL)、淋巴细胞减少(＜800个淋巴细胞/μL)或血小板减少(＜100,000个血小板/μL)。
b.肾功能障碍的证据，其中肌酐大于正常上限的1.5倍。
c.肝功能障碍的证据，其中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)或丙氨酸转氨酶(alanine transaminase，ALT)大于正常上限3倍。如果胆红素≤正常上限的3倍，并且肝酶和肝功能另外是正常的(AST/ALT/碱性磷酸酶在ULN内)，以及不存在溶血的证据，则具有非结合胆红素升高(吉尔伯特综合征(Gilbert’s syndrome))的参与者有资格。
(2)在研究进入时具有严重活动性感染的体征或症状，需要IV抗生素和/或住院治疗。
(3)在筛选时段期间具有活动性COVID感染的体征或症状或者COVID PCR测试呈阳性(对于另外的细节参考第7.5节)。
(4)在首次计划施用研究产品之前3个月内已接受任何减毒活疫苗(其包括但不限于：经口脊髓灰质炎疫苗、麻疹腮腺炎风疹疫苗、黄热病疫苗、日本脑炎疫苗、登革热疫苗、轮状病毒疫苗、水痘疫苗、带状疱疹减毒活疫苗、卡介苗[Bacillus Calmette-Guérin，BCG]疫苗、经口伤寒疫苗)。
(5)目前正在妊娠或哺乳期，或者预计在上次研究药物施用之后直至至少24周内进行妊娠。
(6)需要使用免疫抑制剂，包括长期使用全身性类固醇。允许表面、吸入或鼻内皮质类固醇。
(7)具有当前或既往患有人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、乙型肝炎或丙型肝炎感染的证据。
(8)存在任何不受控制的疾病(包括不受控制的自身免疫病)或如通过研究者判断的可能干扰研究进行的异常临床实验室结果。
(9)具有恶性肿瘤(除切除的基底细胞皮肤癌外)史或目前患有恶性肿瘤(除切除的基底细胞皮肤癌外)。
(10)在筛选访视之前7天内当前或持续使用影响血糖控制的非胰岛素药物。
(11)过去30天内积极参与另一项T1D治疗研究或任何研究性干预研究。
(12)已知对药物产品的任意成分具有超敏反应。
(13)CRO或申办者雇员或者在研究者直接监督下和/或直接参与研究的雇员。
研究药物产品和剂量
研究药物产品(IMP)由小的合成肽(20个氨基酸)组成，所述合成肽包含侧翼具有氧化还原酶基序的已知人胰岛素原表位(表位C20-A1 LALEGSLQK，SEQ ID NO：3)。IMP具有以下序列：HCPYCSLQPLALEGSLQKRG(SED.ID NO：73)。
IMP以冻干粉末和溶剂的形式呈现，用于皮下(subcutaneous，SC)施用。该溶剂包含浓度为900μg/mL的佐剂氢氧化铝(明矾)。
安慰剂以由10mg甘露醇制成的冻干无菌粉末形式提供，用于用与IMP相同的稀释剂重构。
治疗由以下组成：通过SC途径施用六次(间隔14天)IMP或安慰剂。一半的剂在两个部位(两个上臂、在臂的外侧部分的区域、在肘与肩之间的中间)同时施用。
剂A由以下组成：六次SC施用450μg肽，所述450μg肽：分两次单独注射，每次225μg(每个臂500μL)。在第24周时给予另外的施用(加强)。
剂B由以下组成：六次SC施用1350μg肽，所述1350μg肽：分两次单独注射，每次675μg(每个臂500μL)。在第24周时给予另外的施用(加强)。
安慰剂组由以下组成：根据与剂A和剂B相同的方案进行六次SC施用，并在第24周时进行安慰剂加强施用以保持不知情。
患者的历程
患者的历程如下，并且在图2中示出。
筛选评估
访视V-1(诊断的9周内)
在签署知情同意书之后，将检查纳入和排除标准(包括T1D诊断的日期)、人口统计数据、病史和伴随疾病以及之前和当前的药物清单。
研究者/指定人员检查生命体征、进行完整的身体检查并进行12导联心电图(electrocardiogram，ECG)。
针对SARS-CoV2病毒(PCR)存在，对参与者进行拭子拭抹(swab)。
进行尿试纸分析，并收集血液用于以下筛选评估：
·C肽(随机)；
·自身抗体；
·HLA I类/II类基因型确定；
·免疫细胞(PBMC)分离；
·HbA1c：
·安全参数：血液学(全血细胞计数，包括CD4/CD8比率)、生物化学(完整代谢谱)、病毒学；
·对所有女性参与者进行血清妊娠测试。
治疗期
从访视0(V0)到V7
在V0(第0天)、V6(第12周)和V7(第24周)时，所有参与者均用EnsurePlus进行120分钟混合膳食耐受测试(minutes mixed meal tolerance test，MMTT)以用于测量C肽作为β细胞响应的测量结果。
收集粪便样品。
采集血液样品用于HbA1c测量。
进行身体检查。
在V7时，收集用于自身抗体检测的血液样品。
每次访视时，研究者/指定人员都会检查自上次访视以来的伴随用药、生命体征、电子日记数据和不良事件。进行尿试纸检查。对于所有女性，收集尿以进行妊娠测试。
采集血液样品用于安全参数和PBMC分离。
然后，参与者接受(除在V6时外)SC 450μg或1350μg IMP或者安慰剂的剂量，并接受关于报告电子日记中列出的不良事件的说明，持续7天(包括访视日)。
随访期和研究结束(end of the study，EoS)
在V6(第12周)、V8(第26周)和V9(第48周)时
在每次访视时，研究者/指定人员都会检查自上次访视以来发生的伴随用药、生命体征、电子日记数据和不良事件。
进行全面的身体检查1。
收集粪便样品1。
收集尿样品，并进行试纸分析。
收集血液用于以下评估：
·免疫细胞(PBMC)分离
·HbA1c1
·安全参数
·MMTT1
1除在V8时外
在V9时，收集用于自身抗体检测的血液样品。
在V6和V9时，进行ECG。
在EoS访视(V9)时，所有女性参与者均进行尿妊娠测试。
所有参与者都可以在试验结束后参加另外12个月的正在进行的观察性研究，所述研究将涉及在诊断的24个月内进行1次单次访视。
基于中期分析的结果，24个月时的另外的随访可通过修订纳入本方案中。
招募到该试验中的参与者已经接受了适当的标准护理(胰岛素治疗)，并且这种护理在研究之后仍在继续。
家庭收集
从V0到EoS访视(V9，第48周)
·在服用EnsurePlus之前和之后60分钟在家中收集DBS，每月两次，持续整个48周的随访以用于DBS C肽测量(每次访视时都会分发新的DBS卡)。
·在V0时，参与者接受连续血糖监测(Continuous Glucose Monitoring，CGM)设备(Dexcom G6)。要求他们持续使用其直至研究结束(每次访视时都会分发新的传感器)，并要求至少在V0、V6、V7和V9时预定义时段期间使用其。
电子日记由参与者按照指示完成，并与胰岛素方案、列出的注射部位反应、其他AE和伴随药物相关。
实施例3：用于免疫分析的程序及结果
这些分析以盲法方式进行，并传达以下结果：
通过治疗产生的免疫特征的具体特征。这可包括以下参数(非详尽的)：激活标志物；表型标志物(例如记忆标志物)；细胞因子谱。
特别地，该研究旨在评价和表征在用IMP治疗之后胰岛素原表位C20-A1特异性CD4+T细胞。
这些免疫分析依赖于2种实验室方法，即流式细胞术(FACS)和单细胞转录组分析。用天然胰岛素原表位C20-A1对PBMC进行短暂的体外刺激后，用一组激活和表征标记物对细胞进行标记，以对其进行表型和分类。血液收集
使用在六个时间点(访视V-1或在免疫之前的基线，以及访视V2至V6，其分别在2、3、4、5或6次注射之后两周)收集的患者血液样品来量化响应于胰岛素原表位C20-A1刺激的CD4+T细胞。
随后，还可以使用10×技术施加单细胞转录组分析来表征每个细胞转录组并将其聚类到不同的亚群中。
流式细胞仪
以荧光染料缀合抗体的不同组合对细胞进行染色。使用LIVE/DEADTM可固定近红外死细胞染色试剂盒(Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit)(Thermo Fisher)来确定细胞的生存力。使用FlowJo软件进行分析。
FACS数据分析
进行荧光活化细胞分选(Fluorescent activated cell sorting，FACS)分析以量化响应于胰岛素原表位刺激的CD4+T细胞。响应细胞被鉴定为具有效应表型或调节表型的CD4+T细胞。在胰岛素原表位C20-A1刺激的样品中，“响应性CD4+T细胞的净％”计算为受刺激样品中具有效应或调节表型的CD4+T细胞的％减去相应的未刺激样本中具有效应或调节表型的CD4+T细胞的％。为了进行统计分析，患者被分成两组——经IMP和安慰剂治疗。在每个时间点进行Mann-Whiteny-Wilcoxon秩和检验以确定这两组之间响应性CD4+T细胞的净％之间是否存在显著差异。为了测试随时间治疗是否对响应性CD4+T细胞的净百分比％有影响，对经Imotope和安慰剂治疗患者的数据分别拟合了重复测量ANOVA模型。Mauchly球形检验用于验证重复测量ANOVA分析是否满足球形假设。在不满足球形条件的情况下，则使用Greenhouse-Geisser和Huynd-Feldt程序来校正p值，并采用两个p值中更保守的一个。所有统计分析均在R统计学环境中进行。
结果
此处存在的数据是从24位患者，包括16位用IMP(450和1350μg)治疗的患者和8位用安慰剂治疗的患者中获得。响应于胰岛素原表位C20-A1刺激的CD4+T细胞净％的统计分析(图3)示出了，IMP治疗对跨时间点的响应性CD4+T细胞％在统计学上具有显著影响(在GG球形度校正之后重复测量ANOVA p值为0.046或者在HF球形度校正之后重复测量ANOVA p值为0.037)，而经安慰剂治疗没有显示出这样的作用(在GG球形度校正后重复测量ANOVA p值为0.337或者在HF球形度校正之后重复测量ANOVA p值为0.339)。在经IMP治疗的患者中响应性CD4+T细胞的较高存在指示可以诱导IMP特异性溶细胞性CD4+T细胞。在各个时间点，在访视3至6之间，与经安慰剂治疗的患者相比，经IMP治疗的患者中出现响应性CD4+T细胞的更高净％的趋势(测量了第3至6次施用的影响)。使用非参数Mann-Whitney-Wilcoxon秩和检验对经IMP与安慰剂治疗患者在各个时间点的响应性CD4+T细胞的％进行的统计学比较未达到统计学显著。然而，p值从V3(p＝0.188)下降到V4(p＝0.113)到V5(p＝0.078)。这可能指示在第6次施用之后响应稳定之前，随第3、4和5次施用的时间，响应持续改善的趋势。因此，第5或6次施用的时间表提供了持续的CD4+T细胞响应，其可有益于控制自身免疫病(例如T1D)。

Claims (32)

1.长度为9至50个氨基酸的免疫原性肽，其用于预防或治疗选自以下的疾病或病症：自身免疫病、脱髓鞘病、同种移植或移植排斥、肿瘤或癌症、胞内病原体感染、针对可溶性同种因子的免疫应答、针对变应原暴露的免疫应答、或者针对用于在对象中进行基因治疗或基因疫苗接种的病毒载体的免疫应答，所述肽包含氧化还原酶基序和与该基序相隔0至7个氨基酸的参与所述疾病或病症的抗原的MHC II类T细胞表位序列，
其中所述氧化还原酶基序包含以下基序：
Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，
其中n为选自2、1、0、3、4、5或6的整数，优选2、1、0或3，
其中m代表0至2的整数，
其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，X代表任意氨基酸并且Z代表任意氨基酸，优选碱性氨基酸，
其中所述免疫原性肽以至少5剂300至1500μg所述免疫原性肽进行施用，并且两剂之间的间隔为约12天至约28天。
2.根据权利要求1所述应用的免疫原性肽，其中所述施用通过肌内或皮下注射进行。
3.根据权利要求1或2所述应用的免疫原性肽，其中所述免疫原性肽通过肌内或皮下注射6剂300至1500μg所述免疫原性肽来施用，并且两剂之间的间隔为约2至3周。
4.根据权利要求1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述免疫原性肽中的T细胞表位不是选自以下的氨基酸序列或不包含选自以下的氨基酸序列：MHC II类T细胞表位FLRVPCWKI(SEQ ID NO：4)和FLRVPSWKI(SEQ ID NO：5)，或者NKT细胞表位FLRVPCW(SEQ IDNO：10)和FLRVPSW(SEQ ID NO：11)。
5.根据权利要求1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述肽中的T细胞表位不是来源于MOG抗原氨基酸序列的序列。
6.根据权利要求1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述疾病或病症不是MS。
7.根据权利要求1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述疾病或病症不是已知通过富马酸/酸根/酸酯治疗的疾病，或者不是富马酸/酸根/酸酯相关的疾病或病症。
8.根据权利要求1至3中任一项所述应用的免疫原性肽，其中当所述疾病或病症是MS时，所述治疗不包括施用本文中所限定的富马酸/酸根/酸酯化合物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述应用的免疫原性肽，其中每剂所述300至1500μg所述免疫原性肽以两剂之间约12至约16天或约2周的间隔进行施用。
10.根据权利要求1至9中任一项所述应用的免疫原性肽，其中每剂含有：
300至600μg的所述免疫原性肽；
600至800μg的所述免疫原性肽；
800至1000μg的所述免疫原性肽；
1000至1200μg的所述免疫原性肽；或
1200至1500μg的所述免疫原性肽。
11.根据权利要求1至10中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述剂含有450或1350μg的所述免疫原性肽。
12.根据权利要求1至11中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述剂被施用6次，并且剂之间的间隔为约12至约16天，或约2周。
13.根据权利要求1至12中任一项所述应用的免疫原性肽，其中在从治疗开始算起的约第22至30周，进行一剂300至1500μg所述免疫原性肽的加强施用。
14.根据权利要求13所述应用的免疫原性肽，其中所述加强施用在从治疗开始算起的约第22至26周进行。
15.根据权利要求13或14所述应用的免疫原性肽，其中所述加强含有：
300至600μg的所述免疫原性肽；
600至800μg的所述免疫原性肽；
800至1000μg的所述免疫原性肽；
1000至1200μg的所述免疫原性肽；或
1200至1500μg的所述免疫原性肽。
16.根据权利要求15所述应用的免疫原性肽，其中所述加强含有450或1350μg的所述免疫原性肽。
17.根据权利要求15所述应用的免疫原性肽，其中所述加强在治疗的约23至25周、更优选治疗的约第24周进行施用。
18.根据权利要求1至17中任一项所述应用的免疫原性肽，其中在两个部位(两个上臂，优选在臂的外侧部分的区域，更优选在肘与肩之间的中间)同时施用所述剂的一半。
19.用于分析患者对选自以下的疾病或病症的治疗的响应的体外方法：自身免疫病、脱髓鞘病、同种移植或移植物排斥、肿瘤或癌症、胞内病原体感染、针对可溶性同种因子的免疫应答、针对变应原暴露的免疫应答、或者针对用于在对象中进行基因治疗或基因疫苗接种的病毒载体的免疫应答，其中免疫原性肽的长度为9至50个氨基酸，所述肽包含氧化还原酶基序和与该基序相隔0至7个氨基酸的参与所述疾病或病症的抗原的MHC II类T细胞表位序列，
其中所述氧化还原酶基序包含以下基序：
Zm-[CST]-Xn-C-或Zm-C-Xn-[CST]-，
其中n为0至6的整数，优选2、1、0或3。
其中m代表0至2的整数，
其中C代表半胱氨酸，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，X代表任意氨基酸并且Z代表任意氨基酸，优选碱性氨基酸。
其中所述方法包括分析在以下时间点取自用所述免疫原性肽治疗的患者的样品：
在治疗的第0天，
在治疗的约第11至13周，例如在第12周，
在治疗的约第23至25周，例如在第24周，以及
在治疗的约第47至49周，例如在第48周。
20.根据权利要求19所述的体外方法，其中在所述治疗开始之前约8至10周、优选在所述治疗开始之前约9周分析所述患者的样品。
21.根据权利要求1至18中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据权利要求19或20所述的方法，其中所述自身免疫病是1型糖尿病(T1D)或类风湿性关节炎(RA)。
22.根据权利要求1至18中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是T1D并且其中所述肽中的T细胞表位是来自胰岛素(原)的MHC II类T细胞表位，优选地其中所述表位的氨基酸序列由氨基酸序列LALEGSLQK[SEQ ID NO：3]限定。
23.根据权利要求1至18中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中所述患者为纯合或杂合HLA型DR3或DR4阳性。
24.根据权利要求1至3和9至18中任一项所述的应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至23中任一项所述的方法，其中所述肽包含选自以下的序列：
Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：67]，[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：68]，CxxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：69]，HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：70]，H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：71]，HCxxCSLQPLALEGSLQK[SEQ ID NO：72]，和HCPYCSLQPLALEGSLQKRG[SEQ ID NO：73]。
25.根据权利要求1至18中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是RA并且其中所述肽中的T细胞表位是来自选自包含以下的组的抗原蛋白的MHC II类T细胞或NKT细胞表位：GRP78、HSP60、60kDa伴侣蛋白2、凝溶胶蛋白、壳多糖酶-3样蛋白1、组织蛋白酶S、血清白蛋白、黏着斑蛋白和组织蛋白酶D。
26.根据权利要求1至18中任一项所述应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是银屑病并且其中所述抗原蛋白选自以下：ADAMTSL5、PLA2G4D、角蛋白例如角蛋白14或角蛋白17、来自小麦(Triticum aestivum)的抗原、Pso p27、抗菌肽抗微生物肽、嗜中性防御素1和LL37，优选LL37。
27.根据权利要求1至3和9至18中任一项所述的应用的免疫原性肽或者根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述自身免疫病是MS并且其中所述肽中的T细胞表位是来自选自包含以下的组的抗原蛋白的MHC II类T细胞或NKT细胞表位：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、蛋白脂质蛋白(PLP)、髓鞘相关抗原(MAG)、少突胶质细胞特异性蛋白(OSP)、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白(MOBP)、2’，3’-环核苷酸3’-磷酸二酯酶(CNPase)、S100β蛋白和转醛醇酶H，优选MOG；
或者
其中所述自身免疫病是NMO并且其中所述肽中的T细胞表位是来自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的MHC II类T细胞或NKT细胞表位，
优选地，其中所述表位的氨基酸序列由氨基酸序列FLRVPSWKI(SEQ ID NO：4)限定，或者
其中所述免疫原性肽具有以下序列中的任一种：
HCPYCVRYFLRVPSWKITLF(SEQ ID NO：85)，
HCPYCVRYFLRVPCWKITLF(SEQ ID NO：86)，
KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK(SEQ ID NO：87)，或
KHCPYCVRYFLRVPCWKITLFKK(SEQ ID NO：88)。
28.根据前述权利要求中任一项所述应用的免疫原性肽，其中所述肽作为编码所述相应肽的核酸施用。
29.根据权利要求28所述应用的免疫原性肽，其中编码免疫原性肽的所述核酸选自：分离的脱氧核糖核酸(DNA)、质粒DNA(pDNA)、编码DNA(cDNA)、核糖核酸(RNA)、信使RNA(mRNA)或其经修饰形式例如包含N(1)-甲基-假尿苷(m1ψ)的非免疫原性mRNNA。
30.根据权利要求29所述应用的免疫原性肽，其中所述核酸可以是表达盒的一部分，任选地被并入到可用于基因治疗的(病毒)载体或质粒中或者可以以经包封或者裸的DNA或RNA的形式存在。
31.前述权利要求中任一项所限定的免疫原性肽或编码所述免疫原性肽的核酸用于制备用于预防或治疗以下的药物的用途：自身免疫病、脱髓鞘病、移植排斥或癌症，其中所述免疫原性肽或核酸根据前述权利要求中任一项所述的施用方案来施用。
32.预防或治疗自身免疫病、脱髓鞘病、移植排斥或癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用前述权利要求中任一项所限定的免疫原性肽或编码所述免疫原性肽的核酸的步骤，其中所述免疫原性肽或核酸根据前述权利要求中任一项所述的施用方案来施用。
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