KR20240015672A - 면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법 - Google Patents

면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240015672A
KR20240015672A KR1020237044841A KR20237044841A KR20240015672A KR 20240015672 A KR20240015672 A KR 20240015672A KR 1020237044841 A KR1020237044841 A KR 1020237044841A KR 20237044841 A KR20237044841 A KR 20237044841A KR 20240015672 A KR20240015672 A KR 20240015672A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
immunogenic peptide
seq
amino acid
immunogenic
Prior art date
Application number
KR1020237044841A
Other languages
English (en)
Inventor
람펠베르그 진 반
Original Assignee
임시스 에스에이
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 임시스 에스에이 filed Critical 임시스 에스에이
Publication of KR20240015672A publication Critical patent/KR20240015672A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)

Abstract

본 발명은 항원의 T 세포 에피토프 및 산화환원효소 모티프를 포함하는 면역원성 펩티드의 구체적인 투여 방식에 관한 것이다.

Description

면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법
항원에 대한 원치않는 면역 반응의 생성을 방지하기 위한 몇 가지 전략이 설명되었다. WO2008/017517호는 주어진 항원성 단백질의 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 및 산화환원효소 모티프(oxidoreductase motif)를 포함하는 펩티드를 사용한 전략을 기술한다. 이들 펩티드는 CD4+ T 세포를 세포용해성 CD4+ T 세포라고 하는 세포용해 특성을 가진 세포형으로 전환시킨다. 이들 세포는 펩티드가 유래된 항원을 제시하는 항원 제시 세포 (APC)를 세포자멸사 유발을 통해 사멸시킬 수 있다. WO2008/017517호는 알레르기 및 제1형 당뇨병과 같은 자가면역 질환에 대한 이러한 개념을 입증한다. 여기서, 인슐린은 자가 항원으로 작용할 수 있다.
WO2009101207 및 Carlier et al. (2012) Plos one 7,10 e45366에서는 항원 특이적 세포용해 세포를 더 자세히 추가로 설명한다.
WO2016059236은 추가 히스티딘이 산화환원효소 모티프에 인접하여 존재하는 추가 변형된 펩티드를 개시한다.
WO2018162498은 추가의 히스티딘 및 인슐린으로부터의 MHCII T 세포 에피토프와 함께 산화환원효소 모티프를 포함하는 펩티드 및 제1형 당뇨병(T1D) 치료에서의 이의 용도를 추가로 개시한다.
그러나, 위의 사항을 고려하더라도, 치료 중 환자에 대한 이러한 펩티드의 실제 효과에 대해서는 알려진 바가 거의 없으며, 이러한 면역원성 펩티드의 치료 효과를 개선할 필요성이 여전히 남아 있다.
발명의 요약
본 발명은 자가항원의 에피토프와 산화환원효소 모티프를 포함하는 면역원성 펩티드를 사용하여 자가면역 질환을 치료하는 개선된 방법을 제공한다.
본 발명자들은 상기 면역원성 펩티드 투여의 치료 및 투여 계획을 조정함으로써 환자에서 반응성 수준이 증가될 수 있음을 발견하였다.
따라서 본 발명은 다음과 같은 측면을 제공한다:
1. 대상체에서 자가면역 장애, 탈수초 장애(demyelinating disorder), 동종이식(allograft) 또는 이식 거부반응(transplant rejection), 종양 또는 암, 세포내 병원체로의 감염, 가용성 동종인자(soluble allofactor)에 대한 면역 반응, 알레르겐(allergen) 노출에 대한 면역 반응 또는 유전자 치료 또는 유전자 예방접종에 사용되는 바이러스 벡터에 대한 면역 반응으로부터 선택되는 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는데 사용하기 위한 9 내지 50개 아미노산 길이의 면역원성 펩티드로서, 상기 펩티드는 산화환원효소 모티프 및 이 모티프로부터 0 내지 7개의 아미노산으로 분리된, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원의 T 세포 에피토프 서열을 포함하고, 여기서 상기 산화환원효소 모티프는 다음 모티프를 포함하고:
Zm-[CST]-Xn-C- (서열 번호 12 내지 36) 또는 Zm-C-Xn-[CST]- (서열 번호 37 내지 61),
여기서 n은 0 내지 6의 정수, 바람직하게는 2, 1, 0 또는 3이고,
m은 0 내지 2의 정수이고,
C는 시스테인, S는 세린, T는 트레오닌, X는 임의의 아미노산, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 염기성 아미노산을 나타내고,
상기 면역원성 펩티드는 두 용량 사이에 약 12일 내지 약 28일의 간격을 두고 300 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드가 적어도 5회 용량으로 투여된다.
바람직한 실시양태에서, 상기 투여는 근육내 또는 피하 주사를 통해 수행된다.
산화환원효소 모티프의 상기 일반식에서, 하이픈(-)은 산화환원효소 모티프가 링커 또는 T 세포 에피토프의 N-말단 끝, 또는 링커 또는 T 세포 에피토프의 C-말단 끝에 부착되는 지점을 나타낸다.
바람직한 실시양태에서, 상기 면역원성 펩티드의 T 세포 에피토프는 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 FLRVPCWKI (서열 번호 4), 및 FLRVPSWKI (서열 번호 5), 또는 NKT 세포 에피토프 FLRVPCW (서열 번호 10), 및 FLRVPSW (서열 번호 11)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열이 아니거나 이를 포함하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 상기 산화환원효소 모티프는 표준 C-XX-[CST] (서열 번호 1) 또는 [CST]-XX-C (서열 번호 2) 산화환원효소 모티프의 반복체, 예컨대 하나 이상의 아미노산(예를 들어 CXXC X CXXC X CXXC (서열 번호 6))으로 서로 이격될 수 있는 상기 모티프의 반복체, 서로 인접한 반복체(CXXCCXXCCXXC (서열 번호 7)) 또는 특히 측면 1에 정의된 바와 같은 일반식에서 n이 0 또는 1이고 m이 0인 경우, 서로 CXXCXXCXXC (서열 번호 8) 또는 CXCCXCCXCC (서열 번호 9))와 중첩되는 반복체의 일부가 아니다.
바람직한 실시양태에서, 항원은 자가항원이다.
2. 측면 1에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 상기 면역원성 펩티드는 두 용량 사이에 약 12일 내지 28일의 간격을 두고 300 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드의 6회 용량이 근육내 또는 피하 주사를 통해 투여되는 면역원성 펩티드.
3. 측면 1 또는 2에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 상기 면역원성 펩티드 300 내지 1500 μg의 각각의 용량이 두 용량 사이에 약 12 내지 약 16일, 또는 약 2주의 간격으로 투여되는 면역원성 펩티드.
4. 측면 1 내지 3 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 각 용량은 다음을 함유하는 면역원성 펩티드:
- 300 내지 600 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 600 내지 800 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 800 내지 1000 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 1000 내지 1200 μg의 상기 면역원성 펩티드; 또는
- 1200 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드;.
상기 측면의 바람직한 실시양태에서, 상기 용량은 450 또는 1350 μg의 상기 면역원성 펩티드를 함유한다.
보다 더 바람직한 실시양태에서, 상기 용량은 약 12 내지 약 16일, 또는 용량 사이에 약 2주의 간격을 두고 6회 투여된다.
5. 측면 1 내지 4 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 치료 시작으로부터 계산하여 약 22주 내지 30주차에 상기 면역원성 펩티드 300 내지 1500 μg의 용량으로 부스트 투여(boost administration)가 수행되는 면역원성 펩티드.
6. 측면 5에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 상기 부스트 투여는 치료 시작으로부터 계산하여 약 22주 내지 26주차에 수행되는 면역원성 펩티드.
7. 측면 5 또는 6에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 상기 부스트는 다음을 함유하는 면역원성 펩티드:
- 300 내지 600 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 600 내지 800 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 800 내지 1000 μg의 상기 면역원성 펩티드;
- 1000 내지 1200 μg의 상기 면역원성 펩티드; 또는
- 1200 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드;.
상기 측면의 바람직한 실시양태에서, 상기 용량은 치료 약 23 내지 25주차, 보다 바람직하게는 치료 약 24주차에 450 또는 1350 μg의 상기 면역원성 펩티드를 함유한다.
8. 측면 1 내지 7 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드로서, 여기서 용량의 절반은 두 부위(양 상박, 바람직하게는 팔의 측면부 영역, 보다 바람직하게는 팔꿈치와 어깨 사이 중간)에 동시에 투여되는 면역원성 펩티드.
9. 9 내지 50개 아미노산 길이의 면역원성 펩티드를 사용하여 대상체에서 자가면역 장애, 탈수초 장애, 동종이식 또는 이식 거부반응, 종양 또는 암, 세포내 병원체로의 감염, 가용성 동종인자에 대한 면역 반응, 알레르겐 노출에 대한 면역 반응 또는 유전자 치료 또는 유전자 예방접종에 사용되는 바이러스 벡터에 대한 면역 반응으로부터 선택되는 질환 또는 장애의 치료에 대한 환자의 반응을 분석하기 위한 시험관내 방법으로서, 상기 펩티드는 산화환원효소 모티프 및 이 모티프로부터 0 내지 7개의 아미노산으로 분리된, 상기 질환 또는 장애와 관련된 (자가)항원의 T 세포 에피토프 서열을 포함하고, 여기서 상기 산화환원효소 모티프는 다음 모티프를 포함하고:
Zm-[CST]-Xn-C- (서열 번호 12 내지 36) 또는 Zm-C-Xn-[CST]- (서열 번호 37 내지 61),
여기서 n은 0 내지 6의 정수, 바람직하게는 2, 1, 0 또는 3이고,
m은 0 내지 2의 정수이고,
C는 시스테인, S는 세린, T는 트레오닌, X는 임의의 아미노산, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 염기성 아미노산을 나타내고,
상기 방법은 다음 시점에 상기 면역원성 펩티드로 치료받는 환자로부터 채취한 샘플을 분석하는 것을 포함하는 방법:
- 치료 0일째,
- 치료 약 11 내지 13주차, 예컨대 12주차,
- 치료 약 23 내지 25주차, 예컨대 24주차,
- 치료 약 47 내지 49주차, 예컨대 48주차.
10. 측면 9에 따른 방법으로서, 추가로 상기 환자의 샘플이 치료 시작 약 8 내지 10주 전, 바람직하게는 치료 시작 약 9주 전에 분석되는 방법.
11. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 또는 10에 따른 방법으로서, 상기 자가면역 질환은 제1형 당뇨병(T1D), 다발성 당뇨병, 경화증(MS) 시신경척수염(NMO), 류마티스 관절염(RA), 건선, 다발관절염, 천식, 아토피성 피부염, 피부경화증, 궤양성 대장염, 청소년 당뇨병, 갑상선염, 그레이브병, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 쇼그렌 증후군, 악성 빈혈(anemia perniciosa), 만성 활동성 간염, 이식 거부 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역원성 펩티드 또는 방법.
12. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 11 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 (자가)항원은 자연적으로 상기 에피토프에 N- 또는 C-말단적으로 인접해 있는 11개 아미노산 내에 산화환원효소 모티프를 포함하지 않는 면역원성 펩티드 또는 방법.
13. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 12 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 상기 에피토프는 자연적으로 그 서열에 산화환원효소 모티프를 포함하지 않는 면역원성 펩티드 또는 방법.
14. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 13 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 T 세포 에피토프는 MHC 클래스 I 또는 II T 세포 에피토프 또는 NKT 세포 에피토프인 면역원성 펩티드 또는 방법.
- MHC 클래스 II 에피토프는 전형적으로 7 내지 20개의 아미노산 길이, 보다 일반적으로 8 내지 20개 또는 9 및 20개의 아미노산 길이, 보다 더 바람직하게는 7 내지 17개, 8 내지 17개, 9 내지 17개, 10 내지 17개, 11 내지 17개, 12 내지 17개, 13 내지 17개의 아미노산, 예컨대 14 내지 16개의 아미노산 길이를 갖는다. MHC 클래스 II 분자에 결합하는 펩티드는 또한 (MHC 클래스 I 펩티드 결합 홈(groove)과 달리) 양쪽 끝이 열려 있는 MHC II 펩티드 결합 홈을 따라 확장된 형태로 놓여 있기 때문에 더 길 수도 있다. 펩티드는 주로 펩티드 결합 홈을 이루는 보존된 잔기와 주쇄 원자 접촉에 의해 제자리에 고정된다.
- NKT 세포 에피토프는 NKT 세포의 세포 표면에서 수용체, 특히 CD1d 분자에 의해 인식되고 결합될 수 있다. 이러한 에피토프는 전형적으로 7 내지 20개의 아미노산, 보다 일반적으로 7 내지 17개의 아미노산 길이, 보다 더 바람직하게는 8 내지 17개, 9 내지 17개, 10 내지 17개, 11 내지 17개, 12 내지 17개, 13 내지 17 아미노산, 예컨대 14 내지 16개의 아미노산 길이를 갖는다. 이러한 에피토프는 전형적으로 모티프 [FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY] [서열 번호 62] 또는 [FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW] [서열 번호 63]를 갖는다.
15. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 14 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 산화환원효소 모티프는 링커 또는 에피토프로부터 N-말단에 위치하거나, 또는 링커 또는 에피토프로부터 C-말단, 바람직하게는 링커 또는 에피토프로부터 N-말단에 위치하고/거나, 산화환원효소 모티프는 면역원성 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 위치한 면역원성 펩티드 또는 방법.
16. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 15 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 항원성 단백질의 상기 T 세포 에피토프는 NKT 세포 에피토프 또는 MHC 클래스 II T 세포 에피토프이고,
바람직하게는 항원성 단백질의 상기 T 세포 에피토프가 NKT 세포 에피토프인 경우, 이는 7 내지 25개 아미노산의 길이를 갖거나; 항원성 단백질의 상기 T 세포 에피토프가 MHC 클래스 II T 세포 에피토프인 경우, 이는 9 내지 25개 아미노산의 길이를 갖는 면역원성 펩티드 또는 방법.
17. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 16 중 어느 하나에 따른 방법으로서, NKT 에피토프를 갖는 상기 면역원성 펩티드가 7 내지 50개 아미노산의 길이를 갖고/거나, MHC 클래스 II T 세포 에피토프를 포함하는 상기 면역원성 펩티드는 9 내지 50개 아미노산의 길이를 갖는 면역원성 펩티드 또는 방법.
18. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 17 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 산화환원효소 모티프와 T 세포 에피토프 사이의 링커는 0 내지 4개의 아미노산의 것인 면역원성 펩티드 또는 방법.
19. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 18 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드에서 측면 1에 정의된 바와 같은 서열 Zm-[CST]-Xn-C- (서열 번호 12 내지 36) 또는 Zm-C-Xn-[CST]- (서열 번호 37 내지 61)을 갖는 상기 산화환원효소 모티프는 다음 아미노산 모티프로부터 선택되는 면역원성 펩티드 또는 방법:
(a) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서,
n은 0이고,
m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 보다 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(b) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서,
n은 1이고,
X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 L-오르니틴과 같은 비천연 염기성 아미노산, 보다 바람직하게는 K 또는 R로부터 선택되는 염기성 아미노산이고,
m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 보다 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(c) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서 n은 2이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2 아미노산 쌍이 생성되고, 여기서 X는 임의의 아미노산이고, 바람직하게는 적어도 하나의 X는 H, K, R, 및 L-오르니틴과 같은 비천연 염기성 아미노산, 보다 바람직하게는 K 또는 R로부터 선택되는 염기성 아미노산이고,
m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 보다 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(d) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서, n은 3이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3 아미노산 스트레치를 생성하고,
X는 임의의 아미노산이고, 바람직하게는 적어도 하나의 X는 H, K, R, 및 L-오르니틴과 같은 비천연 염기성 아미노산, 보다 바람직하게는 K 또는 R로부터 선택되는 염기성 아미노산이고,
m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 보다 바람직하게는 K 또는 H로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(e) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서 n은 4이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4 (서열 번호 64) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(f) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서 n은 5이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4X5 (서열 번호 65) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다);
(g) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서 n은 6이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4X5X6 (서열 번호 66) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0, 1 또는 2로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다); 또는
(h) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
(여기서 n은 0 내지 6이고, m은 0이고, C 또는 [CST] 잔기 중 하나는 모티프의 아미노산 잔기의 N-말단 아미드 또는 C-말단 카복시기에 아세틸, 메틸, 에틸 또는 프로피오닐기를 가지도록 변형되었다).
이러한 모티프의 바람직한 실시양태에서, n은 2이고 m은 1 또는 2이며, 여기서 내부 X1X2는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1 및 X2는 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 추가 예에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 L-오르니틴과 같은 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. 모티프의 또 다른 예에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2 중 적어도 하나는 P 또는 Y이다. 산화환원효소 모티프 내의 내부 X1X2 아미노산 쌍의 특정 비제한적 예는 다음과 같다: PY, HY, KY, RY, PH, PK, PR, HG, KG, RG, HH, HK, HR, GP, HP, KP, RP, GH, GK, GR, GH, KH, 및 RH. 바람직하게는 상기 변형은 모티프에서 첫 번째 시스테인의 N-말단 아세틸화를 초래한다(N-아세틸-시스테인).
20. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 19 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드는 서열 CC, KCC, RCC, CRC, CKC, KCRC (서열 번호 154), KCKC (서열 번호 152), KCHC (서열 번호 225), RCRC (서열 번호 156), RCKC (서열 번호 226), CPYC (서열 번호 227), HCPYC (서열 번호 228), KCPYC (서열 번호 229), RCPYC (서열 번호 230), CRPYC (서열 번호 231), CPRYC (서열 번호 232), CPYRC (서열 번호 233), CKPYC (서열 번호 234), CPKYC (서열 번호 235), CPYKC (서열 번호 236), RCRPYC (서열 번호 237), RCPRYC (서열 번호 238), RCPYRC (서열 번호 239), RCKPYC (서열 번호 240), RCPKYC (서열 번호 241), RCPYKC (서열 번호 242), KCRPYC (서열 번호 243), KCPRYC (서열 번호 244), KCPYRC (서열 번호 245), KCKPYC (서열 번호 246), KCPKYC (서열 번호 247), 또는 KCPYKC (서열 번호 248)를 포함하는 산화환원효소 모티프를 갖는 면역원성 펩티드 또는 방법.
21. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 T1D이고, 상기 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 (프로)인슐린 또는 C-펩티드로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프이고, 바람직하게는 상기 에피토프의 아미노산 서열은 아미노산 서열 LALEGSLQK [서열 번호 3]에 의해 정의되는 면역원성 펩티드 또는 방법.
22. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 21 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 환자는 동형접합성 또는 이형접합성 HLA 유형 DR3 또는 DR4 양성인 면역원성 펩티드 또는 방법.
23. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 22 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 펩티드는 Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK [서열 번호 67], [CST]xxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호68], CxxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호 69], HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK [서열 번호70], H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호71], HCxxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호 72], 및 HCPYCSLQPLALEGSLQKRG [서열 번호 73]로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 면역원성 펩티드 또는 방법.
24. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 항원은 자가항원, 알레르겐, 가용성 동종인자, 항원에 의해 배출되는(shed) 동종항원, 세포내 병원체의 항원, 유전자 치료 또는 유전자 예방접종에 사용되는 바이러스 벡터의 항원, 종양 관련 항원 또는 알레르겐인 면역원성 펩티드 또는 방법.
예시적인 항원은 다음의 것일 수 있다:
- MS의 경우 미엘린 항원, 뉴런성 항원 및 성상교세포 유래 항원, 예를 들어 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG), 미엘린 염기성 단백질(MBP), 프로테오리피드(Proteolipid) 단백질(PLP), 희소돌기아교세포 특이적 단백질(OSP), 미엘린 관련 항원(MAG), 미엘린 관련 희돌기아교세포 염기성 단백질(MOBP) 및 2',3'-사이클릭 뉴클레오티드 3'-포스포디에스테라제(CNPase), S100β 단백질 또는 트랜스알돌라제 H 자가항원(Riedhammer and Weissert, 2015; Front Immunol. 2015; 6: 322), 바람직하게는 MOG, MBP, PLP 및 MOBP.
- 건선의 경우 ADAMTSL5, PLA2G4D, 케라틴(Keratin) 14 또는 케라틴 17과 같은 케라틴, Triticum aestivum 유래 항원, Pso p27, 카텔리시딘(cathelicidin) 항균 펩티드, ceutrophil defensin 1 및 LL37, 바람직하게는 LL37 (Jason E. Hawkes et al., 2017: Current Dermatology Reports volume 6, pages 104-112).
- 천식의 경우 꽃가루, 포자, 집먼지진드기 및 애완동물 비듬 등에서 유래한 것과 같은 알레르겐.
- 암의 경우 종양유전자, 원발암유전자, 바이러스 단백질, 생존 인자 또는 클론타입 또는 이디오타입 결정인자와 같은 종양 또는 암 관련 항원. 구체적인 예는 다음과 같다: MAGE(흑색종 관련 유전자) 산물은 MHC 클래스 I 결정인자와 관련하여 종양 세포에 의해 자발적으로 발현되는 것으로 나타났으며, 따라서 CD8+ 세포용해 T 세포에 의해 인식된다. 그러나 MAGE-3과 같은 MAGE 유래 항원도 MHC 클래스 II 결정인자에서 발현되며 CD4+ 특이적 T 세포는 흑색종 환자로부터 클로닝되었다(Schutz et al. (2000) Cancer Research 60: 6272-6275; Schuler-Thurner et al. (2002) J. Exp. Med. 195: 1279-1288). MHC 클래스 II 결정인자에 의해 제시된 펩티드는 당업계에 공지되어 있다. 다른 예에는 P815 비만세포종 및 흑색종 세포에 의해 발현되는 gp100 항원이 포함된다(Lapointe (2001; J. Immunol. 167: 4758-4764; Cochlovius et al. (1999) Int. J. Cancer, 83: 547- 554). 원발암유전자에는 종양 세포에서 우선적으로 발현되고 건강한 조직에서는 최소한으로만 발현되는 다수의 폴리펩티드와 단백질이 포함되어 있다. 사이클린(Cyclin) D1은 G1에서 S로의 전이에 관여하는 세포 주기 조절인자이다. 사이클린 D1의 높은 발현이 신장 세포 암종, 부갑상선 암종 및 다발성 골수종에서 입증되었다. 잔기 198 내지 212를 포함하는 펩티드는 MHC 클래스 II 결정인자와 관련하여 인식되는 T 세포 에피토프를 운반하는 것으로 나타났다(Dengiel et al. (2004) Eur. J. of Immunol. 34: 3644-3651). 서바이빈은 세포자멸사를 억제하는 인자의 한 예로서 서바이빈 발현 세포에 확장 이점을 부여한다. 서바이빈은 상피 및 조혈 기원의 인간 암에서 비정상적으로 발현되며 흉선, 고환 및 태반을 제외한 건강한 성인 조직, 및 성장 호르몬 자극 조혈 전구 세포 및 내피 세포에서는 발현되지 않았다. 흥미롭게도, 서바이빈 특이적 CD8+ T 세포는 흑색종 환자의 혈액에서 검출 가능하다. 서바이빈은 신장 암종, 유방암 및 다발성 골수종을 비롯한 다양한 악성 세포주에서 발현될 뿐만 아니라 급성 골수성 백혈병, 급성 및 만성 림프성 백혈병에서도 발현된다(Schmidt (2003) Blood 102: 571-576). 세포자멸사 억제제에 대한 다른 예는 Bcl2 및 spi6이다. 이디오타입 결정인자는 여포성 림프종, 다발성 골수종 및 일부 백혈병 형태의 B 세포와 T 세포 림프종 및 일부 T 세포 백혈병에서 나타난다. 이디오타입 결정인자는 B 세포 수용체(BCR) 또는 T 세포 수용체(TCR)의 항원 특이적 수용체의 일부이다. 이러한 결정인자는 본질적으로 B 세포의 VH 또는 VL 영역의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 T 세포의 베타 사슬의 CDR3에 해당하는 수용체의 초가변 영역에 의해 인코딩된다. 수용체는 유전자의 무작위 재배열에 의해 생성되므로 각 개인마다 고유하다. 이디오타입 결정인자로부터 유래된 펩티드는 MHC 클래스 II 결정인자에 제시된다(Baskar et al. (2004) J. Clin. Invest. 113: 1498-1510). 일부 종양은 바이러스 유래 항원의 발현과 관련이 있다. 따라서 일부 형태의 호지킨병은 엡스타인-바 바이러스(EBV)로부터의 항원을 발현한다. 이러한 항원은 클래스 I 및 클래스 II 결정인자 모두에서 발현된다. EBV 항원에 특이적인 CD8+ 세포용해 T 세포는 호지킨 림프종 세포를 제거할 수 있다(Bollard et a/. (2004) J. Exp. Med. 200: 1623-1633). LMP-1 및 LMP-2와 같은 항원 결정인자는 MHC 클래스 II 결정인자로 제시된다.
- 이식 거부의 경우 이식 특이적 항원 - 이식되는 조직이나 장기의 유형에 따를 것임이 분명함 -. 예로는 각막, 피부, 뼈(뼈조각), 혈관 또는 근막과 같은 조직; 신장, 심장, 간, 폐, 췌장 또는 장과 같은 기관; 또는 심지어는 췌장 섬 세포, 알파 세포, 베타 세포, 근육 세포, 연골 세포, 심장 세포, 뇌 세포, 혈액 세포, 골수 세포, 신장 세포 및 간 세포와 같은 개별 세포가 있을 수 있다. 이식 거부와 관련된 구체적인 예시 항원은 소수 조직적합성 항원, 주요 조직적합성 항원 또는 조직 특이적 항원이다. 동종항원성 단백질이 주요 조직적합성 항원인 경우, 이는 MHC 클래스 I 항원 또는 MHC 클래스 II 항원이다. 명심해야 할 중요한 점은 동종항원 특이적 T 세포가 APC 표면에서 동족 펩티드를 인식하는 메커니즘의 가변성이다. 동종반응성 T 세포는 MHC 분자 자체의 동종항원 결정인자, 자가 또는 동종이계 소스의 MHC 분자에 결합된 동종항원 펩티드, 또는 동종항원 유래 펩티드와 MHC 분자 내에 위치한 잔기의 조합을 인식할 수 있으며, 후자는 자가 기원 또는 동종 기원의 것이다. 소수 조직적합성 항원의 예는 Dby와 같은 HY 염색체에 의해 인코딩된 단백질에서 유래된 항원(H-Y 항원)이다. 다른 예는 예를 들어 [Goulmy E, Current Opinion in Immunology, vol 8, 75-81, 1996(특히 표 3 참조)]에서 찾을 수 있다. 인간의 많은 소수 조직적합성 항원이 세포용해성 CD8+ T 세포를 사용하여 MHC 클래스 I 결정인자로 제시되는 방식으로 검출되었다는 점에 유의해야 한다. 그러나, 이러한 펩티드는 MHC 클래스 II 제한 T 세포 에피토프도 함유하는 단백질의 처리에 의해 유래되며, 이에 따라 본 발명의 펩티드를 설계할 가능성을 제공한다. 동일한 절차를 사용하여 조직 특이적 동종항원을 식별할 수 있다. 이에 대한 일례는 신장에서는 발현되지만 비장에서는 발현되지 않고 신장 세포에서 세포독성 활성을 갖는 CD8+ T 세포를 유도할 수 있는 단백질로부터 유래된 MHC 클래스 I 제한 에피토프이다(Poindexter et al, Journal of Immunology, 154: 3880-3887, 1995).
보다 바람직하게는, 상기 항원성 단백질은 제1형 당뇨병(T1D), 다발성 경화증(MS) 또는 시신경척수염(NMO)과 같은 탈수초성 질환, 또는 류마티스 관절염(RA)과 관련된 자가항원이다.
일부 실시양태에서, 본원에 정의된 측면 중 어느 하나에서, 상기 펩티드의 에피토프는 MOG 항원 아미노산 서열로부터 유래된 서열이 아니다.
일부 실시양태에서, 본원에 정의된 측면 중 어느 하나에서, 상기 질환 또는 장애는 MS가 아니다.
일부 실시양태에서, 본원에 정의된 측면 중 어느 하나에서, 상기 질환 또는 장애는 푸마레이트에 의해 치료되는 것으로 알려진 질환이 아니거나, 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 푸마레이트 관련 질환 또는 장애가 아니다.
25. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 MS이고 상기 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 (MOG), 미엘린 염기성 단백질(MBP), 프로테오리피드 단백질(PLP), 미엘린 관련 항원(MAG), 희소돌기아교세포 특이적 단백질(OSP), 미엘린 관련 희소돌기아교세포 염기성 단백질(MOBP), 2',3'-사이클릭 뉴클레오티드 3'-포스포디에스테라제(CNPase), S100β 단백질 및 트랜스알돌라제 H, 바람직하게는 MOG로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프인 면역원성 펩티드 또는 방법.
대안적인 실시양태에서, 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법에서, 자가면역 질환은 MS이고 상기 펩티드 내 T 세포 에피토프는 미엘린 염기성 단백질(MBP), 프로테오리피드 단백질(PLP), 미엘린 관련 항원(MAG), 희소돌기아교세포 특이적 단백질(OSP), 미엘린-관련 희돌기아교세포 염기성 단백질(MOBP), 2',3'-사이클릭 뉴클레오티드 3'-포스포디에스테라제(CNPase), S100β 단백질 및 트랜스알돌라제 H로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프이다.
26. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드, 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 NMO이고, 상기 펩티드 내의 T-세포 에피토프는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프인 면역원성 펩티드 또는 방법.
27. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 방법으로서, 자가면역 질환은 RA이고, 상기 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 GRP78, HSP60, 60 kDa 샤페로닌 2, 겔솔린, 치티나제-3-유사 단백질 1, 카텝신 S, 혈청 알부민, 빈쿨린 및 카텝신 D로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프인 면역원성 펩티드 또는 방법.
28. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 건선이고, 상기 항원성 단백질은 ADAMTSL5, PLA2G4D, 케라틴(예: 케라틴 14 또는 케라틴 17), Triticum aestivum 유래 항원, Pso p27, 카텔리시딘 항균 펩티드, ceutrophil defensin 1 및 LL37, 바람직하게는 LL37로 이루어진 군으로부터 선택된 면역원성 펩티드 또는 방법.
29. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 28 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 자가 면역 질환이 MS, NMO 또는 건선인 경우, 상기 치료는 본원에 정의된 바와 같은 푸마레이트 화합물 또는 이의 유도체로의 치료를 포함하지 않는 면역원성 펩티드 또는 방법.
바람직한 실시양태에서, 상기 펩티드의 T 세포 에피토프는 푸마레이트 관련 또는 푸마레이트 처리 질환 또는 장애에 관여하는 항원성 단백질 또는 항원의 T 세포 에피토프, 보다 바람직하게는 MHC 클래스 I 또는 II 분자 또는 NKT 세포 에피토프가 아니다.
26. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 및 24 또는 25 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 에피토프는 미엘린-희소돌기아교세포 당단백질(MOG) 항원 아미노산 서열로부터 유래되고. 보다 바람직하게는 상기 에피토프는 다음 서열 번호 74로 정의된 성숙 MOG 아미노산 서열의 40-60, 41-55, 43-57, 44-58, 45-59, 및 35-55 아미노산 잔기를 포함하는 군으로부터 선택되며:
GQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTELLKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFYWVSPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLIFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDPHFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF,
예컨대, 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 면역원성 펩티드 또는 방법.
YRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD (서열 번호 75)
RPPFSRVVHLYRNGK (서열 번호 76)
PFSRVVHLYRNGKDQ (서열 번호 77)
FSRVVHLYRNGKDQD (서열 번호 78)
SRVVHLYRNGKDQDG (서열 번호 79)
VVHLYRNGK (서열 번호 80)
MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK (마우스 서열 번호 81),
MEVGWYRPPFSRVVHLYRNGK (인간 서열 번호 82),
YRSPFSRVV (마우스 서열 번호 83), 및
YRPPFSRVV (인간 서열 번호 84),
또는 이들의 조합.
측면 6 또는 7의 바람직한 실시양태에서, 상기 면역원성 펩티드는 다음 서열에 의해 정의된 T 세포 에피토프를 갖거나 포함하는 T 세포 에피토프를 포함하거나: FLRVPCWKI (서열 번호 4) 또는 FLRVPSWKI (서열 번호 5),
상기 면역원성 펩티드는 다음의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다:
HCPYCVRYFLRVPSWKITLF (서열 번호 85),
HCPYCVRYFLRVPCWKITLF (서열 번호 86),
KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK (서열 번호 87), 또는
KHCPYCVRYFLRVPCWKITLFKK (서열 번호 88).
27. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 및 24 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 또는 관용원성 펩티드(tolerogenic peptide) 중의 에피토프는 미엘린 프로테오리피드 단백질(또는 프로테오리피드 단백질(PLP) 또는 리포힐린이라고도 함) 항원 아미노산 서열로부터 유래된다. 보다 바람직하게는, 특허 출원 WO2014111841을 참조하여, 상기 에피토프는 다음 아미노산 잔기를 포함하는 군으로부터 선택되며: 다음 서열 번호 89에 의해 정의된 PLP 아미노산 서열(UniProtKB - P60201 (MYPR_HUMAN))의 36-61, 179-206, 207-234, 39-57, 180-198, 208-222, 39-53, 42-56, 43-57, 180-194, 181-195, 182-196, 183-197, 184-198, 208-222, 36-61, 179-206, 및 207-234:
MGLLECCARCLVGAPFASLVATGLCFFGVALFCGCGHEALTGTEKLIETY
FSKNYQDYEYLINVIHAFQYVIYGTASFFFLYGALLLAEGFYTTGAVRQI
FGDYKTTICGKGLSATVTGGQKGRGSRGQHQAHSLERVCHCLGKWLGHPD
KFVGITYALTVVWLLVFACSAVPVYIYFNTWTTCQSIAFPSKTSASIGSL
CADARMYGVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQMTFHLFIAAFVGAAAT
LVSLLTFMIAATYNFAVLKLMGRGTKF.
예컨대, 다음을 포함하는 군으로부터 선택된다.
PLP 36-61: HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI (서열 번호 90);
PLP 179-206: TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY (서열 번호 91);
PLP 207-234: GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM (서열 번호 92)
PLP 39-57: LTGTEKLIETYFSKNYQDY (서열 번호 93)
PLP 180-198: WTTCQSIAFPSKTSASIGS (서열 번호 94)
PLP 208-222: VLPWNAFPGKVCGSN (서열 번호 95)
PLP 39-53: LTGTEKLIETYFSKN (서열 번호 96)
PLP 42-56: TEKLIETYFSKNYQD (서열 번호 97)
PLP 43-57: EKLIETYFSKNYQDY (서열 번호 98)
PLP 180-194: WTTCQSIAFPSKTSA (서열 번호 99)
PLP 181-195: TTCQSIAFPSKTSAS (서열 번호 100)
PLP 182-196: TCQSIAFPSKTSASI (서열 번호 101)
PLP183-197: CQSIAFPSKTSASIG (서열 번호 102)
PLP 184-198: QSIAFPSKTSASIGS (서열 번호 103)
PLP 208-222: VLPWNAFPGKVCGSN (서열 번호 104)
PLP 36-61: HEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLI (서열 번호 105)
PLP 179-206: TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMY (서열 번호 106) 및
PLP 207-234: GVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQM(서열 번호 107)
또는 이들의 조합.
28. 측면 1 내지 8 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 측면 9 내지 20 및 24 중 어느 하나에 따른 방법으로서, 상기 면역원성 또는 관용원성 펩티드 중의 에피토프는 미엘린 염기성 단백질(MBP) 항원 아미노산 서열로부터 유래되는 면역원성 펩티드 또는 방법. 보다 바람직하게는 상기 MBP 에피토프는 다음 서열을 포함하는 군:
PRHRDTGILDSIGRF (서열 번호 108)
ENPVVHFFKNIVTPRTP (서열 번호 109)
RASDYKSAHKGFKGV (서열 번호 110)
GFKGVDAQGTLSKIF (서열 번호 111)
LGGRDSRSGSPMARR (서열 번호 112)
TQDENPVVHFFKNIVTPRTP (서열 번호 113)
TQDENPVVHFFKNIV (서열 번호 114)
QDENPVVHFFKNIVT (서열 번호 115)
DENPVVHFFKNIVTP (서열 번호 116)
ENPVVHFFKNIVTPR (서열 번호 117)
NPVVHFFKNIVTPRT (서열 번호 118)
PVVHFFKNIVTPRTP (서열 번호 119)
ASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGG (서열 번호 120)
ASDYKSAHKGFKGVD (서열 번호 121)
SDYKSAHKGFKGVDA (서열 번호 122)
DYKSAHKGFKGVDAQ (서열 번호 123)
YKSAHKGFKGVDAQG (서열 번호 124)
KSAHKGFKGVDAQGT (서열 번호 125)
SAHKGFKGVDAQGTL (서열 번호 126)
AHKGFKGVDAQGTLS (서열 번호 127)
HKGFKGVDAQGTLSK (서열 번호 128)
KGFKGVDAQGTLSKI (서열 번호 129)
GFKGVDAQGTLSKIF (서열 번호 130)
FKGVDAQGTLSKIFK (서열 번호 131)
KGVDAQGTLSKIFKL (서열 번호 132)
GVDAQGTLSKIFKLG (서열 번호 133)
VDAQGTLSKIFKLGG (서열 번호 134), 및
LSRFSWGAEGQRPG (서열 번호 135),
또는 이들의 조합,
또는 다음 서열 번호 136으로 정의되는 MBP 아미노산 서열(UniProtKB - P02686-5 (MBP_HUMAN))의 아미노산 잔기 30-44, 80-94, 83-99, 81-95, 82-96, 83-97, 84-98, 110-124, 130-144, 131-158, 131-145, 140-148, 142-152, 132-146, 134-148,135-149, 136-150,137-151, 138-152,139-153, 140-154 및 133-147에 의해 정의되는 단편 중 하나 이상으로부터 선택된다:
MASQKRPSQRHGSKYLATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDR
GAPKRGSGKDSHHPARTAHYGSLPQKSHGRTQDENPVVHFFKNIVTPRTP
PPSQGKGRGLSLSRFSWGAEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGT
LSKIFKLGGRDSRSGSPMARR.
29. 면역원성 펩티드의 치료 방법 또는 의학적 용도와 관련하여 본원에 개시된 측면 중 어느 하나에서, 상기 펩티드는 또한 상기 각각의 펩티드를 인코딩하는 핵산으로서 투여될 수 있다. 본원에 개시된 측면 또는 예시 중 어느 하나에 따른 면역원성 또는 관용원성 펩티드를 인코딩하는 핵산은 바람직하게는 단리된 데옥시리보핵산(DNA), 플라스미드 DNA(pDNA), 코딩 DNA(cDNA), 리보핵산(RNA), 메신저 RNA(mRNA) 또는 이의 변형 버전, 예컨대 N(1)-메틸-슈도우리딘(m1ψ)을 포함하는 비면역원성 mRNA로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산은 유전자 치료에 사용될 수 있거나 제약 및 유전자 치료 분야에 공지된 기술에 따라 투여될 캡슐화된 또는 네이키드(naked) DNA 또는 RNA의 형태로 존재할 수 있는 (바이러스) 벡터 또는 플라스미드에 선택적으로 도입된 발현 카세트의 일부일 수 있다.
30. 면역원성 펩티드의 치료 방법 또는 의학적 용도와 관련하여 본원에 개시된 측면 중 어느 하나에서, 상기 펩티드는 다음과 같이 특이적 HLA 유형에 의해 인식될 수 있다:
- 상기 질환이 T1D인 경우, 상기 항원은 바람직하게는 HLA-DRB1*03 및 DRB1*04 일배체형(haplotype) 그룹과 관련하여 인식된다. DRB1*03 그룹에서는 DRB1*0301 및 DRB1*0302라는 두 개의 대립 유전자가 공통이지만 DRB1*0303, DRB1*0304 및 DRB1*0307과 같은 다른 대립 유전자도 보고되었다. DRB1*04 그룹에는 DRB1*0401, DRB1*0402, DRB1*0403, DRB1*0404, DRB1*0405, DRB1*0406, DRB1*0407, DRB1*0408, DRB1*0410 및 DRB1*0411 등 10개의 주요 대립유전자가 있다.
- 상기 질환 또는 장애가 MS인 경우, 상기 항원은 바람직하게는 HLA-DRB1*15:01, HLA-DRB1*03:01, HLA-DRB1*04:01, HLA-DRB1*07:01, HLA DRB5*0101, 또는 DQ6 유형의 HLA와 관련하여 인식된다. HLA-DRB1* 유형 15:01을 갖는 환자가 더 바람직하다.
- 상기 질환 또는 장애가 NMO인 경우, 상기 항원은 바람직하게는 HLA-DRB1*03:01 또는 HLA-DPB1*05:01(아시아의 경우)과 관련하여 인식되거나;
- 상기 질환 또는 장애가 RA인 경우, 상기 항원은 바람직하게는 HLA-DRB1*01:01, 04:01 또는 04:04와 관련하여 인식된다.
31. 바람직한 실시양태에서, 면역원성 펩티드로 치료된 T1D 환자는 DR4 양성(즉, DRB1*04 일배체형 중 하나에 대해 양성)이고, 보다 바람직하게는 면역원성 펩티드로 치료된 T1D 환자는 DR4 양성(즉, DRB1*04 일배체형 중 하나에 대해 양성) 및 DR3 음성(즉, 모든 DRB1*03 일배체형에 대해 음성)이다. 대안적으로, 면역원성 펩티드로 치료된 T1D 환자는 DR3 양성(즉, DRB1*03 일배체형 중 하나에 대해 양성)이다. "HLA DR4 양성"이라는 용어는 이형접합성 또는 동형접합성 HLA-DR4 양성인 환자를 모두 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 환자는 또한 HLA-DR3 음성(HLA-DR3-)이다. "HLA-DR3 음성"이라는 용어는 동형접합성 HLA-DR3 음성인 환자를 지칭한다.
32. 본원에 정의된 측면 중 어느 하나에서, 상기 펩티드는 상기 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 애주번트를 포함하는 약학적 조성물로 투여될 수 있다.
33. 본 발명은 또한 상기 측면 중 어느 하나의 투여 방식을 사용하여 상기 측면 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 면역원성 펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 장애, 탈수초 장애, 이식 거부 또는 암을 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.
34. 본 발명은 또한 자가면역 장애, 탈수초 장애, 이식 거부 또는 암을 예방하거나 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 상기 측면 중 어느 하나에 정의된 면역원성 펩티드의 용도를 제공하며, 여기서 상기 면역원성 펩티드는 상기 측면 중 어느 하나의 투여 계획에 따라 투여된다.
35. 전술한 측면 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 면역원성 펩티드 또는 이를 인코딩하는 핵산을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 자가면역 장애, 탈수초성 장애, 이식 거부 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드 또는 핵산은 전술한 측면 중 어느 하나의 투여 계획에 따라 투여된다.
도 1: 임상시험용 의약품(investigational medicinal product: IMP)을 사용하여 수행된 주요 임상 연구 및 준임상 연구의 개략도. 자세한 내용에 대해서는 텍스트를 참조한다.
도 2: 진단 후 9주 이하부터 48주차까지의 환자의 여정을 나타낸다. DBS: 건혈반(Dry Blood Spot) 분석. FUp: 후속 조치. 자세한 내용에 대해서는 텍스트를 참조한다.
도 3: 다양한 시점에서 IMP(실선) 및 위약(점선) 치료 환자군에서 프로인슐린 에피토프 C20-A1 자극에 반응하는 CD4+ T 세포의 순(net) %. 직선은 평균값을 연결하고 오차 막대는 각 시점의 표준 오차를 나타낸다. 개별 시점에서의 p-값은 만-휘트니-윌콕슨(Mann-Whitney-Wilcoxon) U 검정을 사용하여 IMP와 위약 치료 환자군을 비교한다. 선 그래프의 오른쪽에 표시된 p-값은 반복 측정 ANOVA를 사용한 시간에 따른 평균 반응의 의존성을 나타낸다.
발명의 상세한 설명
본 발명이 특정 실시양태에 대해 설명될 것이지만, 본 발명은 이에 제한되지 않고 청구범위에 의해서만 제한된다. 청구범위에서 인용 부호는 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 다음 용어 또는 정의들은 단지 본 발명의 이해를 돕기 위해서만 제공되는 것이다. 본원에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 용어는 본 발명의 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 제공된 정의는 당업자가 이해하는 범위보다 좁은 범위를 갖는 것으로 해석되어서는 안 된다.
달리 지시되지 않는 한, 상세하게 설명되지 않은 모든 방법, 단계, 기술 및 조작은 당업자에게 명백한 바와 같이 그 자체로 알려진 방식으로 수행될 수 있고 수행된다. 예를 들어 표준 핸드북, 위에서 언급한 일반적인 배경 기술 및 그 안에 인용된 추가 문헌이 참조된다.
본원에서 사용되는 단수 형태는 문맥이 달리 명시하지 않는 한 단수 및 복수 지시 대상을 모두 포함한다. 본원에서 사용되는 측면, 청구항 또는 실시양태와 관련하여 사용되는 경우 용어 "임의의"는 언급된 상기 측면, 청구 범위 또는 실시양태의 임의의 단일의 것 (즉, 어느 하나)뿐만 아니라 모든 조합을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 '포함하는', '포함한다' 및 '구성된'은 '포함한', '포함하다' 또는 '함유하는', '함유한다'와 동의어이고, 포괄적이거나 개방적이며 추가적인 비-인용된 구성원, 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 상기 용어는 또한 "본질적으로 구성되는" 및 "구성되는" 실시양태를 포함한다.
끝점에 의한 수치 범위의 열거는 인용된 끝점뿐만 아니라 각 범위 내에 포함된 모든 숫자와 분수를 포함한다.
매개 변수, 양, 시간적 기간 등과 같은 측정 가능한 값을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 '약'은 개시된 발명에서 수행하기에 적절하다면 특정 값으로부터 +/-10% 이하, 바람직하게는 +/-5% 이하, 보다 바람직하게는 +/-1% 이하, 보다 더 바람직하게는 +/-0.1% 이하의 변동을 포함하는 것을 의미한다. 수식어 '약'이 지칭하는 값은 그 자체가 또한 구체적이고 바람직하게는 개시되는 것으로 이해되어야 한다. 보다 구체적으로, 기간을 주 단위로 지칭할 때, '약'이라는 용어는 +/- 2일을 지칭한다.
본원에서 사용되는 "질환 치료에 사용하기 위한 조성물"에 사용된 용어 "사용하기 위한"은 또한 상응하는 치료 방법 및 질환 치료용 약제의 제조를 위한 제제의 상응하는 용도를 나타낼 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "푸마레이트 화합물"은 일반식 (I)의 화합물을 지칭한다:
상기 식에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로 OH, O- 및 임의로 치환된 (C1-10)알콕시, 바람직하게는 임의로 치환된 (C1-6)알콕시, 또는 임의로 치환된 (C1-3) 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고,
R3 및 R4는 각각 독립적으로 H 또는 중수소로 이루어진 군으로부터 선택되고,
여기서 각 그룹은 독립적으로 임의로 치환될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결되지만 비-아미노산 구조를 포함할 수 있는 12개 내지 200개 아미노산의 아미노산 서열을 포함하는 분자를 지칭한다.
본 발명에 따른 펩티드는 임의의 통상적인 20개 아미노산 또는 이의 변형된 버전을 함유할 수 있거나, 화학적 펩티드 합성 또는 화학적 또는 효소적 변형에 의해 혼입된 비천연 아미노산을 함유할 수 있다.
본원에서 사용되는 "항원"이라는 용어는, 거대분자 구조, 전형적으로 (폴리사카라이드를 포함하거나 포함하지 않는) 단백질로 이루어지거나, 또는 하나 이상의 합텐(들)을 포함하고 T 세포 에피토프를 포함하는 단백질 조성물로 이루어진 구조를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "항원성 단백질"이라는 용어는 하나 이상의 T 세포 에피토프를 포함하는 단백질을 지칭한다. 본원에서 사용되는 자가항원 또는 자가항원성 단백질이란 동일 인간 또는 동물 체내에서 면역 반응을 유도하는, 체내에 존재하는 인간 또는 동물 단백질을 지칭한다.
"에피토프"라는 용어는, 항체 또는 그의 일부 (Fab', Fab2' 등), 또는 B 또는 T 세포 림프구의 세포 표면에 존재하는 수용체에 의해 특이적으로 인식되고 결합되며, 상기 결합에 의해 면역 반응을 유도할 수 있는, 항원성 단백질의 (입체형태적 에피토프를 정의할 수 있는) 한 부분 또는 여러 부분을 지칭한다.
본 발명와 관련하여 "T 세포 에피토프"라는 용어는 MHC 클래스 II T 세포 에피토프, 우세, 준우세 (sub-dominant) 또는 열세 (minor) T 세포 에피토프, 즉, MHC 클래스 II 분자와 복합체를 이루는 경우, T 림프구의 세포 표면에서 발현되는 수용체에 의해 특이적으로 인식되고 결합되는 항원성 단백질의 일부를 지칭하거나, NKT 세포 에피토프를 지칭한다. 에피토프가 우세 에피토프인지, 준우세 에피토프인지, 또는 열세 에피토프인지의 여부는 에피토프에 대해 유도되는 면역 반응에 좌우된다. 우세 정도는 상기 에피토프가 단백질의 모든 가능한 T 세포 에티토프들 중에서 T 세포에 의해 인식되고, 그를 활성화시킬 수 있는 빈도에 의존한다.
T 세포 에피토프는 MHC II 분자의 홈에 맞는 (fit) +/- 9 개의 아미노산 서열로 이루어진, MHC 클래스 II 분자에 의해 인식되고 결합되는 에피토프이다. T 세포 에피토프를 나타내는 펩티드 서열 내에서 에피토프 중의 아미노산은 P1 내지 P9로 번호가 매겨지는데, 에피토프의 아미노산 N-말단은 P-1, P-2 등으로 번호가 매겨지고, 에피토프의 아미노산 C-말단은 P+1, P+2 등으로 번호가 매겨진다. MHC 클래스 II 분자에 의해 인식되지만 MHC 클래스 I 분자에 의해 인식되지 않는 펩티드는 MHC 클래스 II 제한 T 세포 에피토프로 지칭된다.
용어 "MHC"는 "주요 조직적합성 항원"을 지칭한다. 인간에서, MHC 유전자는 HLA ("인간 백혈구 항원") 유전자로 알려져 있다. 일관되게 따르는 관례는 없지만, 일부 문헌은 HLA 단백질 분자를 지칭하기 위해 HLA를 사용하고, MHC는 HLA 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭하기 위해 사용된다. 이와 같이 "MHC" 및 "HLA"라는 용어는 본원에서 사용되는 경우 등가적이다. 인간의 HLA 시스템은 마우스, 즉 H2 시스템에 해당하는 시스템을 가지고 있다. 가장 심도있게 연구된 HLA 유전자는 다음 9 개의 소위 고전적인 MHC 유전자이다: HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DQA1, HLAs DQB1, HLA-DRA, 및 HLA-DRB1. 인간에서는 MHC는 클래스 I, II 및 III의 세 영역으로 구분된다. A, B 및 C 유전자는 MHC 클래스 I에 속하며, 6 개의 D 유전자는 클래스 II에 속한다. MHC 클래스 I 분자는 세포 표면에서 베타 2 마이크로글로불린과 결합하는 3 개의 도메인 (알파 1, 2 및 3)을 포함하는 단일 다형쇄로 구성된다. 클래스 II 분자는 2 개의 다형쇄로 이루어져 있으며 이들은 각각 2 개의 사슬 (알파 1과 2, 및 베타 1과 2)을 포함한다.
클래스 I MHC 분자는 실질적으로 모든 핵생성 세포에서 발현된다.
유전적 수준에서 MHC 클래스 II 클러스터는 염색체 6번의 짧은 팔(6p21)에 위치한다. 클러스터에는 3개의 고전적 클래스 II 유전자(HLA-DP, -DQ 및 DR)와 2개의 비고전적 클래스 II 유전자(HLA-DM 및 -DO)가 포함되어 있다. MHC 클래스 II의 구조는 MHC 클래스 II의 항원 결합 틈새(cleft)를 생성하는 α 및 β라고 불리는 두 개의 막 결합 사슬의 결합에 의해 달성된다. α 및 β 사슬은 모두 α 및 β 유전자 쌍, 즉 DRα/DRβ, DQα/DQβ 및 DPα/DPβ로 밀접하게 연결된 별개의 유전자좌에 의해 인코딩된다. HLA-DP, -DQ 및 DR 유전자좌는 특히 클래스 II 분자의 항원 결합 포켓에서 고도의 다형성을 가진다. HLA-DP 및 -DQ는 -α 및 -β 사슬 유전자(DPA, DPB, DQA 및 DQB) 모두에 다형성을 포함한다. HLA-DR에서 다형성은 DR β사슬(DRB 유전자)에만 관련된다. 9개의 DRB 유전자좌(DRB1부터 DRB9까지 번호가 매겨짐)가 있지만, DRB1 유전자좌만이 모든 일배체형에서 발견되며, 따라서 고전적인 DR 혈청학의 주요 결정인자를 구성한다(McCluskey et al, Current Protocols in Immunology (2017), 118, A.1S.1-A.1S.6).
HLA-DRB1 그룹을 예로 들면, 문헌에서는 40개 이상의 서로 다른 일배체형이 존재한다고 보고하였다(Marsh et al, Tissue Antigens(2010), 75, p291). 인류 전체에 걸쳐 가장 관련성이 높은 그룹은 DRB1*03 및 DRB1*04 일배체형 그룹이다. DRB1*03 그룹에서는 DRB1*0301 및 DRB1*0302라는 두 개의 대립 유전자가 공통이지만 DRB1*0303, DRB1*0304 및 DRB1*0307과 같은 다른 대립 유전자도 보고되었다. DRB1*04 그룹에는 DRB1*0401, DRB1*0402, DRB1*0403, DRB1*0404, DRB1*0405, DRB1*0406, DRB1*0407, DRB1*0408, DRB1*0410 및 DRB1*0411 등 10개의 주요 대립유전자가 있다. 출원 전반에 걸쳐 사용된 용어 "DR4 양성" 또는 "DR4+"는 대상체가 DRB1*04 일배체형 중 하나에 대해 양성임을 나타낸다. 마찬가지로, 출원 전반에 걸쳐 사용된 용어 "DR3 양성" 또는 "DR3+"는 대상체가 DRB1*03 일배체형 중 하나에 대해 양성임을 나타낸다. 출원 전반에 걸쳐 사용된 용어 "DR4 음성" 또는 "DR4-"는 대상체가 DRB1*04 일배체형을 갖지 않음을 나타낸다. 마찬가지로, 출원 전반에 걸쳐 사용된 용어 "DR3 음성" 또는 "DR3-"는 대상체가 DRB1*03 일배체형을 갖지 않음을 나타낸다.
HLA 형결정(typing)은 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기반 분석, 시퀀싱 및 전기영동 분석을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 기술을 사용하여 수행될 수 있다. PCR 기반 분석의 비제한적인 예에는 Applied Biosystems에서 입수가능한 Taqman® 대립유전자 식별 분석이 포함된다. 시퀀싱의 비제한적인 예에는 Maxam-Gilbert 시퀀싱, Sanger 시퀀싱, 모세관 어레이 DNA 시퀀싱, 열 주기 시퀀싱, 고체상 시퀀싱, 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분석법과 같은 질량 분석법을 사용한 시퀀싱 및 혼성화에 의한 시퀀싱이 포함된다. 전기영동 분석의 비제한적인 예에는 아가로스 또는 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 모세관 전기영동 및 변성 구배 겔 전기영동과 같은 실험실 겔 전기영동이 포함된다. 마커의 다형성 부위에서 개인의 유전자형을 분석하는 다른 방법으로 예를 들어 Third Wave Technologies, Inc.제인 INVADER® 분석, 제한 단편 길이 다형성(RFLP) 분석, 대립유전자 특이적 올리고뉴클레오티드 혼성화, 이종이중체 이동성 분석 및 단일 가닥 구조 다형성(SSCP) 분석이 포함된다. 대안적으로, 항체 검사를 통해 HLA 형결정을 수행할 수도 있다.
클래스 I MHC 분자와 관련하여 제시된 펩티드 단편은 CD8+ T 림프구 (세포용해성 T 림프구 또는 CTL)에 의해 인식된다. CD8+ T 림프구는 종종 자극 항원을 갖는 세포를 용해시킬 수 있는 세포용해 이펙터로 성숙한다. 클래스 II MHC 분자는 주로 활성화된 림프구 및 항원 제시 세포에서 발현된다. CD4+ T 림프구 (헬퍼 T 림프구 또는 Th)는 대식세포 또는 수지상 세포와 같은 항원 제시 세포에서 보통 발견되는 클래스 II MHC 분자에 의해 제시된 독특한 펩티드 단편의 인식으로 활성화된다. CD4+ T 림프구는 항체 매개 및 세포 매개 반응을 지원하는 IL-2, IFN-γ 및 IL-4와 같은 사이토카인을 증식 및 분비한다.
기능성 HLA는 내인성 및 외래성의 잠재적 항원성 펩티드가 결합하는 깊은 결합 홈을 특징으로 한다. 홈은 잘 정의된 모양과 물리화학적 특성으로 추가 특정된다. 펩티드 말단이 홈의 말단에 고정되어 있기 때문에 HLA 클래스 I 결합 부위는 닫혀 있다. 그들은 또한 보존 HLA 잔기가 있는 수소 결합의 네트워크에 관여한다. 이러한 제약의 관점에서, 결합된 펩티드의 길이는 8, 9 또는 10 잔기로 제한된다. 그러나, 12개 까지의 아미노산 잔기의 펩티드가 또한 HLA 클래스 I에 결합할 수 있음이 입증되었다. 상이한 HLA 복합체의 구조 비교로 펩티드가 비교적 선형의 확장된 형태를 채택하는 일반적인 결합 방식이거나, 중앙 잔기가 홈 밖으로 튀어나오게 포함할 수 있음을 확인하였다.
HLA 클래스 I 결합 부위와 달리, 클래스 II 부위는 양단이 개방되어 있다. 이것은 펩티드가 실제 결합 영역으로부터 확장되어 양쪽 단부에서 "유지되는 (hanging out)" 것을 허용한다. 따라서 클래스 II HLA는 9 개에서 25개 초과의 아미노산 잔기에 이르는 가변 길이의 펩티드 리간드에 결합할 수 있다. HLA 클래스 I와 유사하게, 클래스 II 리간드의 친화성은 "불변" 및 "가변" 성분에 의해 결정된다. 불변 부분은 다시 HLA 클래스 II 홈의 보존된 잔기와 결합된 펩티드의 주 사슬간에 형성된 수소 결합의 네트워크에 기인한다. 그러나, 이러한 수소 결합 패턴은 펩티드의 N- 및 C-말단 잔기에 국한되지 않고 전체 사슬에 분포된다. 후자는 복합화된 펩티드의 구조를 엄격하게 선형 결합 방식으로 제한하기 때문에 중요하다. 이것은 모든 클래스 II 동종이형(allotype)에 공통적이다. 펩티드의 결합 친화성을 결정하는 제2 성분은 클래스 II 결합 부위 내 다형성의 특정 위치로 인해 가변적이다. 상이한 동종이형은 홈 내에서 상이한 상보적 포켓을 형성함으로써, 펩티드의 아형 의존성 선택 또는 특이성을 설명한다. 중요하게, 클래스 II 포켓 내에서 유지되는 아미노산 잔기에 대한 제약은 일반적으로 클래스 I에 대한 것보다 "약하다". 상이한 HLA 클래스 II 동종이형 중에서 펩티드의 교차 반응이 훨씬 더 많다. MHC II 분자의 홈에 들어 맞는 MHC 클래스 II T 세포 에피토프의 +/-9 (즉, 8, 9 또는 10) 아미노산 서열은 일반적으로 P1 내지 P9로 번호가 매겨진다. 에피토프의 추가 아미노산 N-말단은 P-1, P-2 등으로 번호가 매겨지고, 에피토프의 아미노산 C-말단은 P+1, P+2 등으로 번호가 매겨진다.
"NKT 세포 에피토프"라는 용어는 NKT 세포의 세포 표면에서 수용체에 의해 특이적으로 인식되고 결합되는 항원성 단백질의 일부를 지칭한다. 특히, NKT 세포 펩티드 에피토프는 모티프 [FWHY]-XX-[ILMV]-XX-[FWTHY] (서열 번호 62) 또는 이의 보다 제한적인 형태, 예컨대 [FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW] (서열 번호 63)를 가지는 CD1d 분자에 의해 결합되는 에피토프이다. 이 모티프에서 F는 페닐알라닌, W는 트립토판, H는 히스티딘, Y는 티로신, I는 이소류신, L은 류신, M은 메티오닌, V는 발린, X는 임의의 아미노산을 나타낸다.　[FWHY]는 F, W, H 또는 Y가 첫 번째 고정 잔기(P1)를 차지할 수 있고, P4 위치는 I, L, M 또는 V가 차지할 수 있으며, P7은 F, W, H 또는 Y가 차지할 수 있음을 나타낸다. 이들 아미노산 잔기의 다양한 조합이 가능하다는 것은 당업자에게 명백할 것이다.
"NKT 세포" 라는 용어는 NK1.1 및 NKG2D와 같은 수용체를 운반하고 CD1d 분자에 의해 제시된 펩티드 에피토프를 인식하는 것을 특징으로 하는 선천성 면역 체계의 세포를 지칭한다. 본 발명과 관련하여, NKT 세포는 유형 1(불변) 또는 유형 2 하위세트에 속할 수 있거나, 유형 1 또는 유형 2 NKT 세포보다 다형성 T 세포 수용체가 더 많은 덜 특성화된 임의의 NKT 세포에 속할 수 있다.
"CD1d 분자"는 다양한 APC의 표면에서 발현되고 양면이 열린 깊은 소수성 홈에 배열된 3개의 알파 사슬 및 역평행 베타 사슬 세트로 구성되고 지질, 당지질 또는 소수성 펩티드를 NKT 세포에 제시할 수 있는 비-MHC 유래 분자를 지칭한다.
본 발명은 생체내 또는 시험관내에서 항원 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포를 생성하는 방법, 및 이와 독립적으로 특징적인 발현 데이터를 기반으로 Foxp3+ Treg와 같은 다른 세포 집단으로부터 세포용해성 CD4+ T 세포를 구별하는 방법을 제공한다.
에피토프와 관련하여 본원에서 사용되는 "상동체"라는 용어는 자연적으로 발생된 에피토프와 적어도 50%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 98%의 아미노산 서열 동일성을 가지며, 이로써 B 및/또는 T 세포의 세포 표면 수용체 또는 항체에 결합할 수 있는 에피토프의 능력을 유지하는 분자를 지칭한다. 에피토프의 특정 상동체는 최대 3개, 더욱 특히, 최대 2 개, 가장 특히 1 개의 아미노산에서 변형된 천연 에피토프에 상응한다.
펩티드와 관련하여 본원에서 사용되는 "유도체"라는 용어는 적어도 펩티드 활성 부분 (즉, 세포용해성 CD4+ T 세포 활성을 유도할 수 있는 산화환원 모티프 및 MHC 클래스 II 에피토프)를 함유하고, 그 이외에도, 다른 목적, 예컨대 펩티드를 안정화시키거나 또는 펩티드의 약동학적 또는 약력학적 특성을 변경시키고자 하는 목적을 가질 수 있는 상보적인 부분을 포함하는 분자를 지칭한다.
본원에서 사용되는 두 서열의 "서열 동일성"이라는 용어는 두 서열이 정렬될 때 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산을 갖는 위치의 수를 더 짧은 서열에서의 뉴클레오티드 또는 아미노산 수로 나눈 것을 가리킨다. 특히, 서열 동일성은 70% 내지 80%, 81% 내지 85%, 86% 내지 90%, 91% 내지 95%, 96% 내지 100% 또는 100%이다.
본원에 사용된 용어 "펩티드-인코딩 폴리뉴클레오티드 (또는 핵산)" 및 "폴리뉴클레오티드 (또는 핵산) 코딩 펩티드"는 적절한 환경에서 발현될 때 관련 펩티드 서열 또는 그의 유도체 또는 상동체를 생성하는 (폴리)뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 이러한 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 펩티드를 인코딩하는 정상적인 데속시리보뉴클레오티드(DNA) 또는 리보뉴클레오티드(RNA) 서열뿐만 아니라 요구되는 활성을 갖는 펩티드를 발현할 수 있는 이들 핵산의 유도체 및 단편을 포함한다. 본 발명에 따른 펩티드 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산은 포유동물 유래 또는 포유동물에 상응하는 펩티드 또는 그 단편, 가장 특히 인간 펩티드 단편을 인코딩하는 서열이다. 상기 면역원성 또는 관용원성 펩티드를 인코딩하는 이러한 핵산은 바람직하게는 단리된 데속시리보핵산(DNA), 플라스미드 DNA(pDNA), 코딩 DNA(cDNA), 리보핵산(RNA), 메신저 RNA(mRNA) 또는 그의 변형 버전으로부터 선택된다.
치료 수단의 경우, 본원에 개시된 면역원성 펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 바이러스 및 비바이러스 발현 시스템과 같은 발현 시스템, 카세트, 플라스미드 또는 벡터 시스템의 일부일 수 있다. 치료 목적으로 알려진 바이러스 벡터에는 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스(AAV), 렌티바이러스 및 레트로바이러스가 있다. 비바이러스 벡터도 사용될 수 있으며 비제한적인 예에는 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty: SB) 또는 PiggyBac(PB)에서 유래된 것과 같은 트랜스포존 기반 벡터 시스템이 포함된다. 핵산은 또한 나노입자, 양이온성 지질, 리포솜 등과 같은 다른 담체를 통해 전달될 수도 있지만 이에 제한되지 않는다.
"면역 장애" 또는 "면역 질환"이라는 용어는 면역계의 반응이 유기체에서 기능장애 또는 비생리학적인 상황의 원인이 되거나, 또는 그를 지속시키는 질환을 지칭한다. 그 중에서도 특히, 알레르기성 장애 및 자가면역 질환이 면역 질환에 포함된다.
"자가면역 질환" 또는 "자가면역 장애"라는 용어는 유기체가 (분자 수준 이하에 이르기까지의) 그 자신의 구성 성분을 "자가"인 것으로 인식하지 못함에 따라 발생되는 그 자신의 세포 및 조직에 대한 비정상적인 면역 반응으로부터 유발되는 질환을 지칭한다. 상기 질환 군은 2 개의 카테고리, 기관-특이적 질환 및 전신 질환으로 분류될 수 있다. "알레르겐"은 소인을 가진, 특히 유전적으로 소인을 가진 개인 (아토피) 환자에서 IgE 항체의 생성을 유도하는 물질, 일반적으로 거대분자 또는 단백질성 조성물로 정의된다. 유사한 정의는 문헌 [Liebers et al., (1996) Clin. Exp. Allergy 26, 494-516]에 제시되어 있다.
"제1형 당뇨병" (T1D) 또는 "당뇨병 제1형" (또한 "제1형 진성 당뇨병" 또는 "면역 매개성 당뇨병"으로 알려져 있거나, 이전에 "청소년 발병 당뇨병" 또는 "인슐린 의존성 당뇨병"으로도 알려져 있음)이란 용어는 소아기 동안 감수성 개인에서 전형적으로 발생하는 자가 면역 장애이다. T1D 병인에 기초하여 자가 면역 메카니즘에 의해 대부분의 인슐린 생산 췌장 베타 세포가 파괴된다. 간단히 말해, 유기체는 인슐린 생산을 담당하는 췌장 베타 세포에 대한 면역 저항성을 상실하고 베타 세포의 자가 파괴로 이어지는 자가 항체 생산과 관련된 면역 반응 (주로 세포 매개성)을 유도한다. "푸마레이트 관련 질환"이라는 용어는 푸마레이트 치료로 혜택을 받는 모든 장애 또는 질환을 포함한다. 그러한 질환 또는 장애의 바람직한 예는 자가면역 장애, 탈수초성 질환, 이식 거부 및 암이다. 이러한 질환 및 장애의 바람직한 예는 다음과 같다: 다발성 경화증(MS), 건선, 시신경척수염(NMO), 류마티스 관절염(RA), 다발성 관절염, 천식, 아토피성 피부염, 피부경화증, 궤양성 대장염, 청소년 당뇨병, 갑상선염, 그레이브스병, 전신성 홍반성 낭창(SLE), 쇼그렌 증후군, 악성 빈혈, 만성 활동성 간염, 이식 거부 및 암. 바람직한 예는 MS 및 NMO와 같은 MOG 자가항원 관련 질환 및 장애이다.
본원에서 탈수초화 질환 또는 장애의 틀 내에서 사용되는 용어 "탈수초화"는 뉴런의 축삭을 둘러싸는 수초가 손상 및/또는 분해되어 병변 또는 플라크가 형성되는 것을 지칭한다. 탈수초화로 인해 영향을 받은 신경을 따라 신호 전도가 손상되고 감각, 운동, 인지 및/또는 기타 신경 기능의 결핍과 같은 신경학적 증상이 나타날 수 있다. 탈수초성 질환을 앓고 있는 환자의 구체적인 증상은 질환 및 질환 진행 상태에 따라 다양하다. 여기에는 시야 흐림 및/또는 복시, 운동실조, 간대, 구음 장애, 피로, 서투름, 손 마비, 편마비, 생식기 마취, 조화 장애, 감각 이상, 안구 마비, 근육 협응 장애, 근육 약화, 감각 상실, 시력 장애, 신경학적 증상, 불안정한 걸음걸이(보행), 경직성 하반신마비, 요실금, 청력 문제, 언어 문제 등이 있다. 탈수초성 질환은 중추신경계 탈수초성 질환과 말초신경계로 계층화될 수 있다. 대안적으로, 탈수초성 질환은 탈수초화의 원인에 따라 수초 파괴(탈수초성 수초탈락성) 또는 비정상 및 퇴행성 수초(수초이상 백질이영양증)로 분류될 수 있다. MS는 당업계에서 중추신경계 탈수초 장애로 간주된다(Lubetzki and Stankoff. (2014). Handb Clin Neurol. 122, 89-99). 이러한 탈수초성 질환 및 장애의 기타 구체적이지만 비제한적인 예에는 시신경척수염(NMO), 급성 염증성 탈수초성 다발신경병증(AIDP), 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 급성 횡단 척수염, 진행성 다초점 백질뇌병증(PML), 급성 파종성 뇌척수염(ADEM) 또는 기타 유전성 탈수초성 장애가 포함된다.
본원 및 당업계에서 "MS"로 약칭되는 용어 "다발성 경화증"은 중추신경계에 영향을 미치는 자가면역 장애를 나타낸다. MS는 젊은 성인에게 가장 흔한 비외상성 장애 질환으로 간주되며(Dobson and Giovannoni, (2019) Eur. J. Neurol. 26(1), 27-40), 중추신경계에 영향을 미치는 가장 흔한 자가면역 장애이다(Berer and Krishnamoorthy (2014) FEBS Lett. 588(22), 4207-4213). MS는 신체적 문제부터 정신적 문제에 이르기까지 다양한 증상으로 대상체에서 나타날 수 있다. 전형적인 증상으로는 시야 흐림 도는 복시, 근육 약화, 한쪽 눈 실명, 협응 및 감각 장애 등이 있다. 대부분의 경우, MS는 2단계 질환으로 볼 수 있는데, 초기 염증은 재발-완화성 질환을 유발하고 신경변성 지연은 비-재발 진행, 즉 2차 및 1차 진행성 MS를 유발한다. 이 분야에서 진전이 이루어지고 있지만, 질환의 결정적인 근본 원인은 지금까지 파악하기 어려운 상태로 남아 있으며 150개 이상의 단일 뉴클레오티드 다형성이 MS 감수성과 관련되어 있다(International Multiple Sclerosis Genetics Consortium Nat Genet. (2013). 45(11):1353-60). 비타민 D 결핍, 흡연, 자외선 B(UVB) 노출, 소아 비만 및 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스에 의한 감염이 질환 발병에 기여하는 것으로 보고되었다(Ascherio (2013) Expert Rev Neurother. 13(12 Suppl), 3-9).
따라서, MS는 재발(염증이 우세한 특징임)부터 진행성(신경퇴화 우성)까지 확장되는 스펙트럼 내에 존재하는 단일 질환으로 간주될 수 있다. 그러므로, 본원에 사용된 다발성 경화증이라는 용어는 모든 종류의 질환 경과 분류에 속하는 모든 유형의 다발성 경화증을 포함하는 것이 분명하다. 특히, 본 발명은 임상적 단독 증후군(CIS), 재발 완화형 MS(RRMS), 이차 진행성 MS(SPMS), 원발성 진행성 MS(PPMS), 및 심지어 MS가 의심되는 방사선 고립 증후군(RIS)으로 진단되거나 의심되는 강력한 치료 전략 환자로 구상된다. 엄격하게 다발성 경화증의 질환 과정으로 간주되지는 않지만, RIS는 뇌 및/또는 척수의 자기 공명 영상(MRI)에서 MS 병변에 해당하고 다른 진단으로 설명할 수 없는 이상을 나타내는 대상체를 분류하는 데 사용된다. CIS는 중추신경계의 염증 및 탈수초화로 인한 신경학적 증상의 첫번째 에피소드(24시간 이상 지속됨)이다. RIS에 따라, CIS로 분류된 대상체는 MS가 계속 발병할 수도 있고 발병하지 않을 수도 있으며, 뇌 MRI에서 MS와 유사한 병변을 보이는 대상체는 MS가 발병할 가능성이 더 높다. RRMS는 MS가 있는 대상체의 85%가 RRMS로 진단되는 MS의 가장 흔한 질환 과정이다. RRMS로 진단된 환자가 본 발명의 관점에서 바람직한 환자군이다. RRMS는 새로운 또는 증가하는 신경학적 증상의 공격, 대안적으로 표현된 재발 또는 악화를 특징으로 한다. RRMS에서, 상기 재발은 증상의 기간 또는 부분적 또는 완전한 관해가 뒤따르며, 이러한 관해 기간 동안 질환 진행이 경험 및/또는 관찰되지 않는다. RRMS는 활동성 RRMS(재발 및/또는 새로운 MRI 활동의 증거), 비활동성 RRMS, RRMS 악화(재발 후 특정 기간 동안 장애 증가 또는 RRMS 악화 없음)로 추가 분류될 수 있다. RRMS로 진단된 대상체의 일부는 시간이 지남에 따라 신경 기능의 점진적인 악화, 즉 장애의 축적을 특징으로 하는 SPMS 질환 과정으로 진행할 것이다. SPMS 하위 분류는 활동성(재발 및/또는 새로운 MRI 활동성), 비활동성, 진행성(시간이 지남에 따라 질환이 악화됨) 또는 비진행성 SPMS로 구성될 수 있다. 마지막으로, PPMS는 조기 재발 또는 차도 없이, 신경계 기능이 악화되어 증상이 시작될 때부터 장애가 축적되는 것을 특징으로 하는 MS 질환 과정이다. 추가 PPMS 하위 그룹은 예로서 활동성 PPMS(가끔 재발 및/또는 새로운 MRI 활성), 비활동성 PPMS, 진행성 PPMS(새로운 MRI 활동에 관계없이 시간이 지남에 따라 질환이 악화되는 증거) 및 비-진행성 PPMS를 형성할 수 있다. 일반적으로, MS 질환 과정은 중증도(재발의 경우) 및 지속 기간 모두에서 재발 및 관해 기간의 측면에서 개체 간 상당한 변동성이 있다는 특징이 있다.
여러가지 질환 변형 요법이 MS에 대해 이용가능하고, 따라서 본 발명은 대안적 치료 전략으로서 또는 이러한 기존 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 활성 약학적 성분의 비제한적인 예는 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b, 글라티라머 아세테이트, 글라티라머 아세테이트, 페그인터페론 베타-1a, 테리플루노미드, 핑골리모드, 클라드리빈, 시포니모드, 디메틸 푸마레이트, 디록시멜 푸마레이트, 오자니모드, 알렘투주맙, 미톡산트론, 오크레리주맙, 및 나탈리주맙이 있다. 대안적으로, 본 발명은 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 및 부신피질자극호르몬(들)(ACTH)과 같은(이에 제한되지 않음) 재발 관리를 목표로 하는 치료 또는 약물과 함께 사용될 수 있다. 또한, 본 발명은 특정 증상을 완화시키는 것을 목표로 하는 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 비제한적인 예에는 방광 문제, 장 기능 장애, 우울증, 현기증, 어지러움, 감정적 변화, 피로, 가려움증, 통증, 성 문제, 경련, 떨림 및 보행 장애로 구성된 군에서 선택된 증상을 개선하거나 피하는 것을 목표로 하는 약물이 포함된다.
MS는 1) 중추 신경계의 병변 형성, 2) 염증, 및 3) 뉴런의 미엘린초(myelin sheath) 분해의 3가지 얽힌 특징을 특성으로 한다. 전통적으로 중추신경계 및 백질의 탈수초성 질환으로 간주되었음에도 불구하고, 보다 최근에 피질 및 심층 회백질의 탈수초화가 백질 탈수초화를 초과할 수 있다는 보고가 표면화되었다(Kutzelnigg et al.(2005). Brain. 128(11), 2705-2712). MS가 분자 수준에서 어떻게 발생하는지에 대한 두가지 주요 가설이 가정되었다. 일반적으로 수용되는 "외부 내부 가설"은 중추 신경계로 이동하여 질환 과정을 시작하는 말초 자가반응 이펙터 CD4+ T 세포의 활성화를 기반으로 한다. 일단 중추신경계에서, 상기 T 세포는 APC에 의해 국소적으로 재활성화되고 추가 T 세포와 대식세포를 동원하여 염증성 병변을 확립한다. 주목할만한 점은 MS 병변은 병변 가장자리에서 우세하게 발견되는 CD8+ T 세포를 포함하는 것으로 나타났고, CD4+ T 세포는 병변의 더 중심에 있는 것으로 나타났다는 것이다. 이들 세포는 탈수초화, 희소돌기아교세포 파괴 및 축삭 손상을 일으켜 신경학적 기능 장애를 일으키는 것으로 생각된다. 또한, 면역 조절 네트워크는 염증을 제한하고 복구를 시작하도록 촉발되며, 이는 임상적 관해에 의해 반영되는 적어도 부분적인 재수초화를 초래한다. 그럼에도 불구하고 적절한 치료 없이 추가 공격은 종종 질환의 진행으로 이어진다.
MS 발병은 환자의 MRI에서 명백하게 오래된 비활성 병변의 전형적인 발생에 의해 입증되는 바와 같이 첫번째 임상 증상이 감지되기 훨씬 전에 시작되는 것으로 믿어진다. 진단 방법의 발전으로 인해, 이제 MS는 질환의 임상적 징후(즉, 전증상 MS) 전에도 발견될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, "MS의 치료" 및 유사한 표현은 증상성 및 전증상성 MS 둘 모두의 치료 및 치료 전략을 구상한다. 특히, 면역원성 펩티드 및/또는 생성된 세포용해성 CD4+ T 세포가 전증상 MS 환자를 치료하기 위해 사용될 때, 임상 증상이 부분적으로 또는 심지어 완전히 회피될 수 있는 초기 단계에서 질환이 중단된다. 대상체가 인터페론 베타 치료에 완전히 반응하지 않는 MS도 용어 "MS"에 포함된다.
"데빅병(Devic's disease)"으로도 알려진, "시신경척수염" 또는 "NMO" 및 "NMO 스펙트럼 장애(NMOSD)"라는 용어는 백혈구 및 항체가 주로 시신경 및 척수를 공격하는 자가면역 질환을 말하지만, 뇌를 공격할 수도 있다(Wingerchuk 2006, Int MS J. 2006 May;13(2):42-50에서 검토). 시신경 손상은 통증과 시력 상실을 유발하는 부기와 염증을 유발하고; 척수 손상은 다리나 팔의 쇠약 또는 마비, 감각 상실, 방광 및 장 기능 문제를 유발한다. NMO는 재발 완화 질환이다. 재발하는 동안 시신경 및/또는 척수의 새로운 손상으로 인해 장애가 누적될 수 있다. MS와 달리, 이 질환에는 진행 단계가 없다. 따라서, 공격을 예방하는 것은 장기적으로 좋은 결과를 가져오는 데 매우 중요하다. 항-MOG 항체와 관련된 경우 항-MOG 항체가 미엘린초에 대한 공격을 유발하여 탈수초화를 유발할 수 있다고 생각된다. 대부분의 경우 NMO의 원인은 자가 항원에 대한 특정 공격 때문이다. 대상체의 최대 3분의 1이 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)이라고 하는 미엘린 성분에 대한 자가 항체에 대해 양성일 수 있다. 항-MOG 관련 NMO가 있는 사람들은 유사하게 횡단 척수염 및 시신경염 에피소드가 있다. 본 출원의 틀 내에서 특히 구상되는 것은 MOG 자가항원에 의해 유도되고/되거나 항-MOG 항체에 의해 유발되는 NMO이다.
"류마티스 관절염" 또는 "RA"라는 용어는 다양한 관절(가장 일반적으로 손, 손목 및 무릎)에서 통증, 부기, 경직 및 기능 상실을 유발하는 자가면역 염증성 질환이다. 각 관절의 내벽에 염증이 생겨 조직 손상은 물론 만성 통증, 불안정 및 기형을 초래한다. 일반적으로 질환 진행에는 양측/대칭 패턴이 있다(예를 들어 양손 또는 양쪽 무릎이 영향을 받음). RA는 눈, 입, 폐 및 심장 등 관절 외 부위에도 영향을 미칠 수 있다. 환자는 증상의 급성 악화(플레어(flare)라고 함)를 경험할 수 있지만 조기 개입과 적절한 치료를 통해 특정 기간 동안 증상이 완화될 수 있다(Sana Iqbal et al., 2019, US Pharm. 2019;44(1)(Specialty&Oncology suppl):8-11에서 검토). 면역 체계의 공격을 받고 질환을 일으키는 항원은 다양하지만 몇 가지 예를 들면 다음과 같다: GRP78, HSP60, 60 kDa 샤페로닌 2, 겔솔린, 치티나제-3 유사 단백질 1, 카텝신 S, 혈청 알부민, 카텝신 D.
"건선" 이라는 용어는 강한 유전적 소인과 자가면역 병원성 특성을 지닌 만성 염증성 피부 질환을 지칭한다. 전 세계적으로 유병률은 약 2% 정도이나 지역에 따라 차이가 있다. 아시아인과 일부 아프리카인 인구에서는 유병률이 낮고, 백인과 스칸디나비아인 인구에서는 최대 11%까지 나타난다. 건선의 피부과적 증상은 다양하다; 심상성 건선은 플라크형 건선이라고도 하며 가장 널리 퍼진 유형이다. 건선과 심상성 건선이라는 용어는 과학 문헌에서 같은 의미로 사용되나; 그럼에도 불구하고 다양한 임상 하위 유형 간에는 중요한 차이점이 있다. 심상성 건선(건선 사례의 약 90%)은 만성 플라크형 건선이다. 고전적인 임상 증상은 은빛 비늘로 덮인 뚜렷하게 구분되고 홍반성이며 소양성 반점이다. 플라크는 합쳐져 피부의 넓은 부위를 덮을 수 있다. 일반적인 위치에는 몸통, 팔다리의 신근 표면 및 두피가 포함된다. 다른 유형은 다음과 같다: 굴곡 건선이라고도 불리는 역 건선은 교질성 위치에 영향을 미치고 임상적으로 약간 침식성인 홍반성 플라크와 패치가 특징이다; 작은 홍반성 플라크가 급성으로 발병하는 변종인 물방울(Guttate) 건선. 이는 일반적으로 어린이나 청소년에게 영향을 미치며 종종 A군 연쇄구균 편도선 감염에 의해 유발된다. 물방울 건선 환자의 약 1/3은 성인이 되어서 플라크 건선으로 발전할 것이다;. 여러 개의 무균 농포가 합쳐지는 것이 특징인 농포성 건선. 농포성 건선은 국소화 또는 전신화일 수 있다. 두 가지 뚜렷한 국소 표현형이 설명되었다: 농포성 건선(psoriasis pustulosa palmoplantaris: PPP)과 알로포 지속성 선단 피부염(acrodermatitis continua of Hallopeau). 둘 다 손과 발에 영향을 미친다; PPP는 손바닥과 발바닥에만 국한되며 ACS는 손가락과 발가락 끝의 더 먼 곳에 위치하여 손톱 기관에 영향을 미친다. 전신 농포성 건선은 확산성 발적과 각막하 농포를 특징으로 하는 급격하고 빠르게 진행되는 경과로 나타나며 종종 전신 증상을 동반한다. 건선의 특징은 통제되지 않는 각질세포 증식과 기능 장애 분화를 초래하는 지속적인 염증이다. 건선성 플라크의 조직학은 진피 수지상 세포, 대식세포, T 세포 및 호중구로 구성된 염증성 침윤물 위에 나타나는 극세포증(표피 증식)을 보여준다. 혈관신생이 또한 두드러진 특징이다. 플라크 건선과 나머지 임상 변종에서 활성화되는 염증 경로는 중복되지만, 상이한 표현형 및 치료 결과를 설명하는 별개의 차이도 나타난다. (Rendon and Schaekel, Int J Mol Sci. 2019 Mar; 20(6): 1475에서 검토).
본원에서 펩티드를 언급할 때, "천연"이라는 용어는 서열이 자연적으로 발생된 단백질 (야생형 또는 돌연변이)의 단편과 동일하다는 것을 언급한다. 상기와 달리, "인공"이라는 용어는 자연상에는 존재하지 않는 서열을 지칭한다. 인공 서열은 자연 발생 서열 내 하나 이상의 아미노산을 변경/결실/삽입하거나, 자연 발생 서열의 아미노산 N- 또는 C-말단을 첨가/제거하는 것과 같은 제한된 변형에 의해 천연 서열로부터 얻어진다. 본원에 기술된 면역원성 또는 관용원성 펩티드의 에피토프가 설계되는 항원의 선택은 푸마레이트 관련 질환에 따라 달라질 것이다.
"치료적 유효량"이라는 용어는 환자에서 원하는 치료적 또는 예방적 효과를 일으키는 본 발명의 펩티드 또는 그의 유도체의 양을 지칭한다. 이는 예를 들어, 질환 또는 장애와 관련하여, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 어느 정도 감소시키는 양, 및 더욱 특히, 질환 또는 장애와 관련되거나, 또는 그의 원인이 되는 생리학적 또는 생화학적 파라미터를 부분적으로 또는 완전하게 정상 수준으로 회복시키는 양이다. 전형적으로, 치료적 유효량은 정상적인 생리학적 상황으로 개선 또는 회복될 수 있도록 하는 본 발명의 펩티드 또는 그의 유도체의 양이다. 예를 들어, 면역 장애를 앓는 포유동물을 치료학적으로 치료하는 데 사용될 때, 이는 포유동물 체중 1 kg당 1일 펩티드 양이다. 대안적으로, 투여가 유전자 요법을 통해 이루어지는 경우, 네이키드 DNA 또는 바이러스 벡터의 양은 본 발명의 펩티드, 이의 유도체 또는 상동체의 관련 투여량의 국부적인 생성을 보장하도록 조정된다.
본원에서 펩티드를 언급할 때, "천연"이라는 용어는 서열이 자연적으로 발생된 단백질 (야생형 또는 돌연변이)의 단편과 동일하다는 것을 언급한다. 상기와 달리, "인공"이라는 용어는 자연상에는 존재하지 않는 서열을 지칭한다. 인공 서열은 자연 발생 서열 내 하나 이상의 아미노산을 변경/결실/삽입하거나, 자연 발생 서열의 아미노산 N- 또는 C-말단을 첨가/제거하는 것과 같은 제한된 변형에 의해 천연 서열로부터 얻어진다.
아미노산은 본원에서 이들의 전체 이름, 3자 약어 또는 1자 약어로 지칭된다.
아미노산 서열의 모티프는 Prosite의 형식에 따라 본원에 쓰여진다. 모티프는 서열의 특정 부분에서 특정 서열 다양성을 설명하는 데 사용된다. 기호 X는 임의의 아미노산이 허용되는 위치에 대해 사용된다. 대체는 주어진 위치에 허용되는 아미노산을 대괄호('[]') 사이에 기입하여 표시된다. 예를 들어, [CST]는 Cys, Ser 또는 Thr에서 선택된 아미노산을 나타낸다. 대체에서 제외되는 아미노산은 중괄호('{ }') 안에 기입하여 표시한다. 예를 들어, {AM}은 Ala 및 Met를 제외한 임의의 아미노산을 나타낸다. 모티프의 상이한 요소는 선택적으로 하이픈(-)으로 서로 구분된다. 모티프 내에서 동일한 요소의 반복은 해당 요소 뒤에 괄호 사이에 숫자 값이나 숫자 범위를 배치하여 표시할 수 있다. 예를 들어 X(2)는 X-X 또는 XX에 해당하고; X(2, 5)는 2, 3, 4 또는 5개의 X 아미노산에 해당하고, A(3)은 A-A-A 또는 AAA에 해당한다.
아미노산 X를 구별하기 위해 H와 C 사이의 아미노산을 외부 아미노산 X(위 서열에서 단일 밑줄)라고 하고, 산화환원 모티프 내의 아미노산을 내부 아미노산 X(위 서열에서 이중 밑줄)라고 한다.
X는 임의의 아미노산, 특히 L-아미노산, 더욱 특히 20개의 자연 발생 L-아미노산 중 하나를 나타낸다.
T 세포 에피토프 및 변형된 펩티드 모티프 서열을 포함하고 환원 활성을 갖는 펩티드는 항원 제시 세포에 대해 항원 특이적 세포용해 CD4+ T 세포 집단을 생성할 수 있다.
따라서 가장 넓은 의미에서 본 발명은 면역 반응을 유발할 가능성이 있는 항원(자가 또는 비자가)의 적어도 하나의 T 세포 에피토프와 펩티드 디설파이드 결합에서 환원 활성을 갖는 "산화환원효소", "티오환원효소" "티오레독스" 또는 "레독스"(모든 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있음) 서열 모티프를 포함하는 펩티드의 용도에 관한 것이다. MHC 클래스 II T 세포 에피토프와 변형된 산화환원 모티프 서열은 펩티드에서 서로 바로 인접해 있거나 선택적으로 하나 이상의 아미노산(소위 링커 서열)에 의해 분리될 수 있다. 선택적으로, 펩티드는 엔도솜 표적화 서열 및/또는 추가적인 "플랭킹(flanking)" 서열을 추가로 포함한다.
본원에 개시된 펩티드는 면역 반응을 유발할 가능성이 있는 인슐린 항원의 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 및 변형된 산화환원 모티프를 포함한다. 펩티드에서 모티프 서열의 환원 활성은 환원에 따라 인슐린의 용해도가 달라지는 인슐린 용해도 분석, 또는 인슐린과 같은 형광 표지된 기질의 사용과 같이 설프히드릴 그룹을 환원시키는 능력에 대해 분석될 수 있다. 그러한 분석의 일례는 형광 펩티드를 사용하며 [Tomazzolli et al. (2006) Anal. Biochem. 350, 105-112]에 기술되어 있다. FITC 표지가 있는 두 개의 펩티드는 디설파이드 브릿지를 통해 서로 공유 결합되는 경우 자가 소광된다. 본 발명에 따른 펩티드에 의해 환원되면, 환원된 개별 펩티드는 다시 형광성으로 된다.
(변형된) 산화환원 모티프는 T-세포 에피토프의 아미노-말단 측 또는 T-세포 에피토프의 카복시-말단에 위치할 수 있다.
환원 활성을 갖는 펩티드 단편은 글루타레독신, 뉴클레오레독신, 티오레독신 및 기타 티올/디설파이드 산화환원효소를 포함하는 작은 디설파이드 환원 효소인 티오환원 효소에서 접한다 (Holmgren (2000) Antioxid. Redox Signal. 2, 811-820; Jacquot et al. (2002) Biochem. Pharm. 64, 1065-1069). 이들은 다기능성이며 유비쿼터스적이고 많은 원핵생물 및 진핵생물에서 발견된다. 이들은 보존된 활성 도메인 공통 서열 내에서 산화환원 활성 시스테인을 통해 단백질 (예컨대 효소) 상의 디설파이드 결합에 대해 환원 활성을 발휘한다: CXXC [서열 번호 18], CXXS [서열 번호 23], CXXT [서열 번호 24], SXXC [서열 번호 21], TXXC [서열 번호 22] (Fomenko et al. (2003) Biochemistry 42, 11214-11225; Fomenko et al. (2002) Prot. Science 11, 2285-2296), 여기서 X는 임의의 아미노산을 나타낸다. 이러한 도메인은 단백질 디설파이드 이성화효소(PDI) 및 포스포이노시티드 특이적 포스포리파제 C와 같은 더 큰 단백질에서도 발견된다.
예를 들어 Fomenko 및 WO2008/017517로부터 공지된 4개 아미노산 산화환원 모티프는 위치 1 및/또는 4에 시스테인을 포함하고; 따라서 모티프는 CXX[CST] [서열 번호 1] 또는 [CST]XXC [서열 번호 2]이다. 이러한 테트라펩티드 서열은 "모티프"로 지칭될 것이다. 펩티드의 모티프는 대안적인 CXXC [서열 번호137], SXXC [서열 번호138], TXXC [서열 번호139], CXXS [서열 번호140] 또는 CXXT [서열 번호141] 중 임의의 것일 수 있다. 특히, 펩티드는 서열 모티프 CXXC [서열 번호 137]를 함유한다.
이후에 상세히 설명하는 바와 같이, 본 발명에서 사용된 펩티드는 비천연 아미노산의 도입을 허용하는 화학적 합성에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 상기 언급된 산화환원 변형된 산화환원 모티프에서의 "C"는 시스테인 또는 티올기를 갖는 다른 아미노산, 예컨대 머캅토발린, 호모시스테인 또는 티올 작용기를 갖는 다른 천연 또는 비-천연 아미노산을 나타낸다. 환원 활성을 갖기 위해, 변형된 산화환원 모티프에 존재하는 시스테인은 시스틴 디설파이드 브릿지의 일부로서 발생하여서는 안 된다. 그렇지만, 변형된 산화환원 모티프는 생체내에서 자유 티올기를 갖는 시스테인으로 전환되는 메틸화된 시스테인과 같은 변형된 시스테인을 포함할 수 있다. X는 S, C, T를 포함한 20가지 천연 아미노산 중 하나일 수도 있고, 비천연 아미노산일 수도 있다. 특정 실시양태에서 X는 Gly, Ala, Ser 또는 Thr과 같은 작은 측쇄를 갖는 아미노산이다. 추가의 특정 실시양태에서, X는 Trp와 같은 벌키한 측쇄를 갖는 아미노산이 아니다. 추가의 특정 실시양태에서 X는 시스테인이 아니다. 추가의 특정 실시양태에서, 변형된 산화환원 모티프 중 적어도 하나의 X는 His이다. 다른 추가 특정 실시양태에서, 변형된 산화환원 중 적어도 하나의 X는 Pro이다.
펩티드는 N-말단 NH2 기 또는 C-말단 COOH 기의 변형 (예를 들어, COOH가 CONH2기로 변형)과 같이, 안정성 또는 용해도를 증가시키기 위한 변형을 추가로 포함할 수 있다.
용어 "산화환원효소 모티프", "티올-산화환원효소 모티프", "티오환원효소 모티프", "티오레독스 모티프" 또는 "산화환원 모티프"는 본원에서 동의어로 사용되며 하나의 분자(환원제, 수소 또는 전자 공여체라고도 함)로부터 다른 것(산화제, 수소 또는 전자 수용체라고도 함)으로 전자를 전달하는 데 관여하는 모티프를 지칭한다.
본원에 정의된 바와 같은 면역원성 펩티드는 다음의 일반 아미노산 서열의 산화환원효소 모티프를 포함한다: 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- (서열 번호 12 내지 36) 또는 Zm-C-Xn-[CST]- (서열 번호 37 내지 61)은 다음 아미노산 모티프로부터 선택된다:
(a) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
여기서 n은 0이고,
m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴으로부터 선택된 염기성 아미노, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K이다.
모티프 (a)의 바람직한 실시양태에서, m은 1 또는 2이고, Z는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
이러한 모티프의 특히 바람직하지만 비제한적인 예는 CC, KCC, KKCC (서열 번호 142), RCC, RKCC (서열 번호 143), KRCC (서열 번호 144), 또는 RRCC (서열 번호 145)이다.
(b) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 1이고,
X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이고,
m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고,
Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
모티프 (b)의 바람직한 실시양태에서, m은 1 또는 2이고, Z는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
이러한 모티프의 특히 바람직하지만 비제한적인 예는 CRC, CKC, KCXC (서열 번호 146), KKCXC (서열 번호 147), RCXC (서열 번호 148), RRCXC (서열 번호 149), RKCXC (서열 번호 150), KRCXC (서열 번호 151), KCKC (서열 번호 152), KKCKC (서열 번호 153), KCRC (서열 번호 154), KKCRC (서열 번호 155), RCRC (서열 번호 156), RRCRC (서열 번호 157), RKCKC (서열 번호 158), 또는 KRCKC (서열 번호 159)이다.
(c) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 2이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2 아미노산 쌍이 생성되고, 여기서 m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. m이 1 또는 2인 모티프가 바람직하다.
바람직한 실시양태에서, m은 1이고 Z는 H, K 또는 R, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
바람직한 실시양태에서 X1 및 X2는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으부터 선택된 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 바람직하게는 상기 모티프에서 X1 및 X2는 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 L-오르니틴과 같은 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2 중 적어도 하나는 P 또는 Y이다. 산화환원효소 모티프 내의 내부 X1X2 아미노산 쌍의 구체적인 예는 다음과 같다: PY, HY, KY, RY, PH, PK, PR, HG, KG, RG, HH, HK, HR, GP, HP, KP, RP, GH, GK, GR, GH, KH, 및 RH.
이러한 유형의 특히 바람직한 모티프는 HCPYC, KCPYC, RCPYC, HCGHC, KCGHC, 및 RCGHC (서열 번호 160 내지 165에 해당)이다.
(d) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 3이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3 아미노산 스트레치를 생성하고, m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. m이 1 또는 2인 모티프가 바람직하다.
일부 실시양태에서, X1, X2 및 X3은 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으부터 선택된 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산이다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1, X2 및 X3은 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 상기 모티프의 X1, X2 및 X3 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 L-오르니틴과 같은 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
내부 X1, X2 및 X3 아미노산 스트레치의 구체적인 예는 XPY, PXY 및 PYX이며, 여기서 X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 K, R 또는 H와 같은 염기성 아미노산, 또는 L-오르니틴과 같은 비천연 염기성 아미노산일 수 있다.
비제한적인 예에는 다음과 같다:
KPY, RPY, HPY, GPY, APY, VPY, LPY, IPY, MPY, FPY, WPY, PPY, SPY, TPY, CPY, YPY, NPY, QPY, DPY, EPY, 및 KPY; 또는
PKY, PRY, PHY, PGY, PAY, PVY, PLY, PIY, PMY, PFY, PWY, PPY, PSY, PTY, PCY, PYY, PNY, PQY, PDY, PEY, 및 PLY; 또는
PYK, PYR, PYH, PYG, PYA, PYV, PYL, PYI, PYM, PYF, PYW, PYP, PYS, PYT, PYC, PYY, PYN, PYQ, PYD, PYE, 및 PYL;
XHG, HXG, 및 HGX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KHG, RHG, HHG, GHG, AHG, VHG, LHG, IHG, MHG, FHG, WHG, PHG, SHG, THG, CHG, YHG, NHG, QHG, DHG, EHG, 및 KHG; 또는
HKG, HRG, HHG, HGG, HAG, HVG, HLG, HIG, HMG, HFG, HWG, HPG, HSG, HTG, HCG, HYG, HNG, HQG, HDG, HEG, 및 HLG; 또는
HGK, HGR, HGH, HGG, HGA, HGV, HGL, HGI, HGM, HGF, HGW, HGP, HGS, HGT, HGC, HGY, HGN, HGQ, HGD, HGE, 및 HGL;
XGP, GXP, 및 GPX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KGP, RGP, HGP, GGP, AGP, VGP, LGP, IGP, MGP, FGP, WGP, PGP, SGP, TGP, CGP, YGP, NGP, QGP, DGP, EGP, 및 KGP; 또는
GKP, GRP, GHP, GGP, GAP, GVP, GLP, GIP, GMP, GFP, GWP, GPP, GSP, GTP, GCP, GYP, GNP, GQP, GDP, GEP, 및 GLP; 또는
GPK, GPR, GPH, GPG, GPA, GPV, GPL, GPI, GPM, GPF, GPW, GPP, GPS, GPT, GPC, GPY, GPN, GPQ, GPD, GPE, 및 GPL;
XGH, GXH, 및 GHX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KGH, RGH, HGH, GGH, AGH, VGH, LGH, IGH, MGH, FGH, WGH, PGH, SGH, TGH, CGH, YGH, NGH, QGH, DGH, EGH, 및 KGH; 또는
GKH, GRH, GHH, GGH, GAH, GVH, GLH, GIH, GMH, GFH, GWH, GPH, GSH, GTH, GCH, GYH, GNH, GQH, GDH, GEH, 및 GLH; 또는
GHK, GHR, GHH, GHG, GHA, GHV, GHL, GHI, GHM, GHF, GHW, GHP, GHS, GHT, GHC, GHY, GHN, GHQ, GHD, GHE, 및 GHL;
XGF, GXF, 및 GFX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KGF, RGF, HGF, GGF, AGF, VGF, LGF, IGF, MGF, FGF, WGF, PGF, SGF, TGF, CGF, YGF, NGF, QGF, DGF, EGF, 및 KGF; 또는
GKF, GRF, GHF, GGF, GAF, GVF, GLF, GIF, GMF, GFF, GWF, GPF, GSF, GTF, GCF, GYF, GNF, GQF, GDF, GEF, 및 GLF; 또는
GFK, GFR, GFH, GFG, GFA, GFV, GFL, GFI, GFM, GFF, GFW, GFP, GFS, GFT, GFC, GFY, GFN, GFQ, GFD, GFE, 및 GFL;
XRL, RXL, 및 RLX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KRL, RRL, HRL, GRL, ARL, VRL, LRL, IRL, MRL, FRL, WRL, PRL, SRL, TRL, CRL, YRL, NRL, QRLRL, DRL, ERL, 및 KRL; 또는
GKF, GRF, GHF, GGF, GAF, GVF, GLF, GIF, GMF, GFF, GWF, GPF, GSF, GTF, GCF, GYF, GNF, GQF, GDF, GEF, 및 GLF; 또는
RLK, RLR, RLH, RLG, RLA, RLV, RLL, RLI, RLM, RLF, RLW, RLP, RLS, RLT, RLC, RLY, RLN, RLQ, RLD, RLE, 및 RLL;
XHP, HXP, 및 HPX, 여기서, X는 임의의 아미노산일 수 있음, 예컨대:
KHP, RHP, HHP, GHP, AHP, VHP, LHP, IHP, MHP, FHP, WHP, PHP, SHP, THP, CHP, YHP, NHP, QHP, DHP, EHP, 및 KHP; 또는
HKP, HRP, HHP, HGP, HAF, HVF, HLF, HIF, HMF, HFF, HWF, HPF, HSF, HTF, HCF, HYP, HNF, HQF, HDF, HEF, 및 HLP; 또는
HPK, HPR, HPH, HPG, HPA, HPV, HPL, HPI, HPM, HPF, HPW, HPP, HPS, HPT, HPC, HPY, HPN, HPQ, HPD, HPE, 및 HPL;
특히 바람직한 예는 다음과 같다:
CRPYC, KCRPYC, KHCRPYC, RCRPYC, HCRPYC, CPRYC, KCPRYC, RCPRYC, HCPRYC, CPYRC, KCPYRC, RCPYRC, HCPYRC, CKPYC, KCKPYC, RCKPYC, HCKPYC, CPKYC, KCPKYC, RCPKYC, HCPKYC, CPYKC, KCPYKC, RCPYKC, 및 HCPYKC (서열 번호 166 내지 190에 해당).
(e) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 4이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4 (서열 번호 64) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R 및 비-천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. m이 1 또는 2인 모티프가 바람직하다. X1, X2, X3 및 X4는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1, X2, X3 및 X4는 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 상기 모티프에서 X1, X2, X3 및 X4 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
구체적인 예는 다음과 같다: LAVL (서열 번호 191), TVQA (서열 번호 192) 또는 GAVH (서열 번호 193) 및 이의 변이체, 예컨대: X1AVL, LX2VL, LAX3L, 또는 LAVX4; X1VQA, TX2QA, TVX3A, 또는 TVQX4; X1AVH, GX2VH, GAX3H, 또는 GAVX4 (서열 번호 194 내지 205에 해당); 여기서 X1, X2, X3 및 X4는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으부터 선택된 임의의 아미노산, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산이다.
(f) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 5이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4X5 (서열 번호 65) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R 및 및 비-천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴, 바람직하게는 K 또는 R, 가장 바람직하게는 K로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. m이 1 또는 2인 모티프가 바람직하다. X1, X2, X3, X4 및 X5는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1, X2, X3, X4 및 X5는 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 상기 모티프에서 X1, X2, X3, X4 및 X5 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
구체적인 예는 다음과 같다: PAFPL (서열 번호 123) 또는 DQGGE (서열 번호 124) 및 이의 변이체, 예컨대: X1AFPL, PX2FPL, PAX3PL, PAFX4L, 또는 PAFPX5; X1QGGE, DX2GGE, DQX3GE, DQGX4E, 또는 DQGGX5 (서열 번호 208 내지 217에 해당), 여기서 X2, X3, X4, 및 X5는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 아미노산, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 아미노산일 수 있다.
(g) 측면 2에서 정의된 바와 같은 Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 6이므로 산화환원효소 모티프 내에 내부 X1X2X3X4X5X6 (서열 번호 66) 아미노산 스트레치를 형성하고, m은 0 내지 3으로부터 선택된 정수이고, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 H, K, R, 및 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산, 예컨대 L-오르니틴으로부터 선택되는 염기성 아미노산, 바람직하게는 K 또는 H, 가장 바람직하게는 K이다. m이 1 또는 2인 모티프가 바람직하다. X1, X2, X3, X4 X5 및 X6은 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1, X2, X3, X4 X5 및 X6은 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다.
구체적인 실시양태에서, 상기 모티프에서 X1, X2, X3, X4 X5 및 X6 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다.
구체적인 예는 다음과 같다: DIADKY (서열 번호 218) 또는 이의 변이체, 예컨대: X1IADKY, DX2ADKY, DIX3DKY, DIAX4KY, DIADX5Y, 또는 DIADKX6 (서열 번호 219 내지 서열 번호 219에 해당), 여기서 X1, X2, X3, X4, X5 및 X6은 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 아미노산, 또는 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산일 수 있다.
(h) Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-
여기서 n은 0 내지 6이고, m은 0이고, C 또는 [CST] 잔기 중 하나는 모티프의 아미노산 잔기의 N-말단 아미드 또는 C-말단 카복시기에 아세틸, 메틸, 에틸 또는 프로피오닐기를 가지도록 변형되었다(서열 번호 144 내지 163).
이러한 모티프의 바람직한 실시양태에서, n은 2이고, m은 0이며, 여기서 내부 X1X2는 각각 개별적으로 G, A, V, L, I, M, F, W, P, S, T, C, Y, N, Q, D, E, K, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 아미노산, 또는 비천연 아미노산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 모티프에서 X1 및 X2는 C, S 또는 T를 제외한 임의의 아미노산이다. 추가 예에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2는 중 적어도 하나는 H, K 또는 R, 또는 L-오르니틴과 같은 본원에 정의된 바와 같은 비천연 염기성 아미노산으로부터 선택되는 염기성 아미노산이다. 모티프의 또 다른 예에서, 상기 모티프에서 X1 또는 X2 중 적어도 하나는 P 또는 Y이다. 산화환원효소 모티프 내의 내부 X1X2 아미노산 쌍의 특정 비제한적 예는 다음과 같다: PY, HY, KY, RY, PH, PK, PR, HG, KG, RG, HH, HK, HR, GP, HP, KP, RP, GH, GK, GR, GH, KH, 및 RH. 바람직하게는 상기 변형은 모티프에서 첫 번째 시스테인의 N-말단 아세틸화를 초래한다(N-아세틸-시스테인).
"염기성 아미노산"이라는 용어는 브론스테드-로리 (Bronsted-Lowry) 및 루이스 (Lewis) 염기처럼 작용하는 모든 아미노산을 지칭하며 아르기닌 (R), 라이신 (K) 또는 히스티딘 (H)과 같은 천연 염기성 아미노산 또는 다음을 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는 비천연 염기성 아미노산을 포함한다:
· Fmoc-β-Lys(Boc)-OH (CAS Number 219967-68-7), Fmoc-Orn(Boc)-OH (L-오르니틴 또는 오르니틴이라고도 함) (CAS Number 109425-55-0), Fmoc-β-Homolys(Boc)-OH (CAS Number 203854-47-1), Fmoc-Dap(Boc)-OH (CAS Number 162558-25-0) 또는 Fmoc-Lys(Boc)OH(DiMe)-OH (CAS Number 441020-33-3) 등의 라이신 변이체;
· Fmoc-L-3Pal-OH (CAS Number 175453-07-3), Fmoc-β-HomoPhe(CN)-OH (CAS Number 270065-87-7), Fmoc-L-β-HomoAla(4-피리딜)-OH (CAS Number 270065-69-5) 또는 Fmoc-L-Phe(4-NHBoc)-OH (CAS Number 174132-31-1)등의 티로신/페닐알라닌 변이체;
· Fmoc-Pro(4-NHBoc)-OH (CAS Number 221352-74-5) 또는 Fmoc-Hyp(tBu)-OH (CAS Number 122996-47-8)등의 프롤린 변이체;
· Fmoc-β-Homoarg(Pmc)-OH (CAS Number 700377-76-0) 등의 아르기닌 변이체.
산화환원효소 모티프는 본 발명의 펩티드 내의 에피토프 서열에 바로 인접하여 위치하거나 링커에 의해 T 또는 NKT 세포 에피토프로부터 분리된다. 보다 구체적으로, 링커는 0 내지 7개 아미노산, 즉 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 아미노산의 아미노산 서열을 포함한다. 가장 특히, 링커는 0 내지 4개의 아미노산, 즉 0, 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산의 아미노산 서열을 포함한다. 대안적으로, 링커는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산을 포함할 수 있다.
펩티드 링커 외에도 다른 유기 화합물을 링커로 사용하여 펩티드 부분을 서로 연결할 수 있다(예를 들어, 산화환원효소 모티프를 T 또는 NKT 세포 에피토프 서열에 연결).
본 발명의 펩티드는 T 또는 NKT 세포 에피토프 및 산화환원효소 모티프를 포함하는 (인공) 서열의 N 또는 C-말단에 추가의 짧은 아미노산 서열을 더 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 서열은 일반적으로 본원에서 '플랭킹 서열'로 지칭된다. 플랭킹 서열은 에피토프와 엔도솜 표적화 서열 사이 및/또는 산화환원효소 모티프와 엔도솜 표적화 서열 사이에 위치할 수 있다. 추가 실시양태에서, 엔도솜 표적화 서열을 포함하지 않는 짧은 아미노산 서열은 펩티드 내 산화환원효소 모티프 및/또는 에피토프 서열의 N 및/또는 C-말단에 존재할 수 있다. 보다 구체적으로 플랭킹 서열은 1 내지 7개 아미노산의 서열, 가장 특히 2개 아미노산의 서열이다.
본원의 모티프 실시양태 중 어느 하나에서, m이 0이고 N-말단 산화환원효소 모티프(산화환원효소 모티프는 면역원성 펩티드의 N-말단 시작 부분에 위치함)의 경우, 모티프의 첫 번째 시스테인, 트레오닌 또는 세린은 N-아세틸화, N-메틸화, N-에틸화 또는 N-프로피오닐화를 통해 화학적으로 변형될 수 있다.
본원의 모티프 실시양태 중 어느 하나에서, m이 0이고 C-말단 산화환원효소 모티프(산화환원효소 모티프는 면역원성 펩티드의 C-말단 끝에 위치함)의 경우, 모티프의 마지막 시스테인, 트레오닌 또는 세린은 C-말단 아미드 또는 산 기의 아세틸, 메틸, 에틸 또는 프로피오닐 기에 의한 C-말단 치환을 통해 화학적으로 변형될 수 있다.
산화환원 모티프를 포함하는 본 발명에 사용되는 펩티드에서 모티프는 에피토프가 MHC 홈에 들어갈 때 모티프가 MHC 결합 홈 외부에 남아 있도록 위치한다. 변형된 산화환원 모티프는 펩티드 내의 에피토프 서열에 바로 인접하여(즉, 모티프와 에피토프 사이에 아미노산이 0개인 링커 서열) 위치하거나 7개 이하의 아미노산 서열을 포함하는 링커에 의해 T 세포 에피토프로부터 분리된다. 보다 구체적으로, 링커는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태는 에피토프 서열과 변형된 산화환원 모티프 서열 사이에 0, 12, 3 또는 4개의 아미노산 링커를 갖는 펩티드이다. 바람직하게는 링커는 4개 아미노산의 아미노산 서열을 포함한다. 변형된 산화환원 모티프 서열이 에피토프 서열에 인접한 펩티드에서 이는 에피토프 서열과 비교하여 위치 P-4에서 P-1 또는 P+1에서 P+4로 표시된다. 펩티드 링커와는 별도로, 다른 유기 화합물은 펩티드 부분을 서로 연결(예를 들어 T 세포 에피토프 서열에 대한 변형된 산화환원 모티프 서열)하기 위한 링커로 사용될 수 있다.
본 발명에 사용되는 펩티드는 T 세포 에피토프 및 변형된 산화환원 모티프를 포함하는 서열의 N- 또는 C-말단에 추가의 짧은 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 서열은 일반적으로 본원에서 '플랭킹 서열'이라 칭한다. 플랭킹 서열은 에피토프와 엔도솜 표적 서열 사이 및/또는 변형된 산화환원 모티프와 엔도솜 표적 서열 사이에 위치할 수 있다. 엔도솜 표적화 서열을 포함하지 않는 특정 펩티드에서, 짧은 아미노산 서열은 펩티드 내에 N- 및/또는 C-말단에 변형된 산화환원 모티프 및/또는 에피토프 서열을 제공할 수 있다. 특히, 플랭킹 서열은 1 내지 7개의 아미노산 서열, 특히 2개의 아미노산 서열이다.
변형된 산화환원 모티프는 에피토프로부터 N-말단에 위치할 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 하나의 에피토프 서열 및 변형된 산화환원 모티프 서열을 포함하는 펩티드가 제공된다. 추가의 특정 실시양태에서, 변형된 산화환원 모티프는 펩티드에서 수회 (1, 2, 3, 4 회 또는 심지어 그 이상), 예를 들어, 하나 이상의 아미노에 의해 서로 이격될 수 있는 변형된 산화환원 모티프의 반복체 또는 서로 인접한 반복체로서 존재할 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 변형된 산화환원 모티프가 T 세포 에피토프 서열의 N 및 C-말단 모두에 제공된다.
본 발명의 펩티드에 대해 예상되는 다른 변형은 T 세포 에피토프 서열의 반복을 포함하는 펩티드를 포함하며, 여기서 각 에피토프 서열은 변형된 산화환원 모티프가 선행되고/되거나 이어진다 (예를 들어, "변형된 산화환원 모티프-에피토프"의 반복체 또는 "변형된 산화환원 모티프-에피토프-변형된 산화환원 모티프"의 반복체). 여기서, 변형된 산화환원 모티프는 모두 동일한 서열을 가질 수 있지만, 반드시 그러해야 하는 것은 아니다. 자체로 변형된 산화환원 모티프를 가지는 에피토프를 포함하는 펩티드의 반복 서열은 또한 '에피토프' 및 '변형된 산화환원 모티프'를 모두 가지는 서열로 이어질 것이라는 점에 유의바란다. 이러한 펩티드에서, 제1 에피토프 서열 내의 변형된 산화환원 모티프는 제2 에피토프 서열 외부의 변형된 산화환원 모티프로서 기능한다.
전형적으로, 본 발명에 사용되는 펩티드는 단 하나의 T 세포 에피토프만을 포함한다. 하기 기술된 바와 같이, 단백질 서열에서의 T 세포 에피토프는 기능 분석 및/또는 실리카 예측 분석에서 하나 이상으로 동정될 수 있다. T 세포 에피토프 서열의 아미노산은 MHC 단백질의 결합 홈 내에서 그들의 위치에 따라 번호가 매겨진다. 펩티드 내에 존재하는 T-세포 에피토프는 8 내지 25개의 아미노산, 보다 특히 8 내지 16개의 아미노산, 보다 더 특히 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 아미노산으로 구성된다.
보다 특정한 실시양태에서, T 세포 에피토프는 9개의 아미노산 서열로 구성된다. 추가의 특정 실시양태에서, T-세포 에피토프는 MHC-클래스 II 분자 [MHC 클래스 II 제한 T 세포 에피토프]에 의해 T 세포에 제시되는 에피토프이다. 전형적으로 T 세포 에피토프 서열은 MHC II 단백질의 틈새에 맞는 옥타펩티드 또는 보다 구체적으로 노나펩티드 서열을 지칭한다.
본 발명의 펩티드의 T 세포 에피토프는 단백질의 천연 에피토프 서열 중 어느 하나에 상응할 수 있거나, 그의 변형된 버전일 수 있지만, 단 변형된 T 세포 에피토프는 천연 T 세포 에피토프 서열과 유사하게 MHC 틈새 내에서 결합하는 능력을 보유하여야 한다. 변형된 T 세포 에피토프는 천연 에피토프와 동일한 MHC 단백질에 대한 결합 친화력을 가질 수 있지만, 감소된 친화성을 가질 수도 있다. 특히, 변형된 펩티드의 결합 친화성은 원래의 펩티드보다 10배 이상 작지 않고, 특히 5배 이상 작지 않다. 본 발명의 펩티드는 단백질 복합체에 대해 안정화 효과를 갖는다. 따라서, 펩티드-MHC 복합체의 안정화 효과는 MHC 분자에 대한 변형된 에피토프의 저하된 친화성을 보상한다.
펩티드 내에 환원성 화합물 및 T 세포 에피토프를 포함하는 서열은 MHC 클래스 II 결정기 내에서 처리 및 제시를 위해 후기 엔도솜으로의 펩티드의 흡수를 용이하게 하는 아미노산 서열 (또는 다른 유기 화합물)에 추가로 연결될 수 있다. 후기 엔도솜 표적화는 단백질의 세포질 꼬리에 존재하는 신호에 의해 매개되며, 잘 규명된 펩티드 모티프에 상응한다. 후기 엔도솜 표적화 서열은 MHC-클래스 II 분자에 의한 항원 유래 T-세포 에피토프의 처리 및 효율적인 제시를 허용한다. 이러한 엔도솜 표적화 서열은 예를 들어, gp75 단백질 (Vijayasaradhi et al. (1995) J. Cell. Biol. 130, 807-820), 인간 CD3 감마 단백질, HLA-BM 11 (Copier et al. (1996) J. lmmunol. 157, 1017-1027), DEC205 수용체의 세포질 꼬리 (Mahnke et al. (2000) J. Cell Biol. 151, 673-683) 내에 함유된다. 엔도솜으로의 선별 신호로서 기능하는 펩티드의 다른 예는 [Bonifacio and Traub (2003) Annu. Rev. Biochem. 72, 395-447]의 리뷰편에 기재되었다. 대안적으로, 서열은 항원에 대한 T 세포 반응의 압도 없이 후기 엔도솜에서의 흡수를 용이하게 하는, 단백질로부터의 준우세 또는 열세 T 세포 에피토프의 것일 수 있다. 후기 엔도솜 표적화 서열은 효율적인 흡수 및 처리을 위해 항원 유래 펩티드의 아미노 말단부 또는 카복시 말단부에 위치할 수 있으며, 또한 10개 이하의 아미노산으로 이루어진 펩티드 서열과 같은 프랭킹 서열을 통해 결합될 수 있다. 표적화 목적을 위한 열세 T 세포 에피토프를 사용하는 경우, 후자는 전형적으로 항원 유래 펩티드의 아미노 말단부에 위치한다.
따라서, 본 발명은 항원성 단백질의 펩티드의 용도 및 특이적 면역 반응을 유도하는데 그의 용도를 구상한다. 이들 펩티드는 그 서열 내에, 최대 10 개, 바람직하게는 7개 이하의 아미노산에 의해 분리된 T 세포 에피토프 및 환원성 화합물을 포함하는 단백질 단편에 상응할 수 있다. 대안적으로, 대부분의 항원성 단백질에 대해, 본 발명의 펩티드는 환원성 화합물, 보다 구체적으로는 본원에 기재된 바와 같은 환원성 변형 산화환원 모티프를 (그에 직접 인접하거나 또는 10개 이하, 보다 특히 7개 이하의 아미노산 링커를 가지는) 항원성 단백질의 T 세포 에피토프에 N-말단 또는 C-말단에 커플링함으로써 생성된다. 또한, 자연 발생 서열과 비교하여 단백질 및/또는 변형된 산화환원 모티프의 T 세포 에피토프 서열이 변형될 수 있고/있거나, 하나 이상의 플랭킹 서열 및/또는 표적화 서열이 도입 (또는 변형)될 수 있다. 따라서, 본 발명의 특징이 대상 항원성 단백질의 서열 내에서 발견될 수 있는지의 여부에 따라, 본 발명의 펩티드는 '인공' 또는 '자연적으로 존재하는' 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 펩티드는 실질적으로 다양한 길이를 가질 수 있다. 펩티드의 길이는 13 또는 14개의 아미노산 (즉, 8 내지 9개 아미노산의 에피토프, 그에 인접하여 히스티딘을 가지는 5개 아미노산의 변형된 산화환원 모티프로 이루어짐)에서부터 20, 25, 30, 40 또는 50개 이하의 아미노산까지로 변할 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 40개 아미노산의 엔도솜 표적화 서열, 약 2개의 아미노산의 플랭킹 서열, 5개 아미노산의 본원에 기재된 모티프, 4개 아미노산의 링커 및 9개 아미노산의 T 세포 에피토프 펩티드를 포함할 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 완전한 펩티드는 13개 아미노산 내지 20, 25, 30, 40, 50, 75 또는 100개 까지의 아미노산으로 이루어진다. 더욱 특히, 환원성 화합물이 본원에 기재된 바와 같은 변형된 산화환원 모티프인 경우, 엔도솜 표적화 서열없이 링커에 의해 임의로 연결된 에피토프 및 변형된 산화환원 모티프를 포함하는 (인공 또는 천연) 서열 (본원에서 '에피토프-변형된 산화환원 모티프' 서열로 칭해짐)의 길이가 중요하다. '에피토프-변형된 산화환원 모티프'는 특히 13, 14, 15, 16, 17, 18 또는 19개의 아미노산 길이를 갖는다. 이러한 13 또는 14 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 펩티드는 선택적으로 크기가 덜 중요한 엔도솜 표적화 신호에 결합될 수 있다.
상술한 바와 같이, 특정 실시양태에서, 본 발명의 펩티드는 T 세포 에피토프 서열에 연결된 본원에 기재된 바와 같은 환원성 변형 산화환원 모티프를 포함한다.
추가의 특정 실시양태에서, 본 발명에 사용되는 펩티드는 그들의 천연 서열 내에 산화환원 특성을 갖는 아미노산 서열을 포함하지 않는 T 세포 에피토프를 포함하는 펩티드이다.
그러나, 대안적인 실시양태에서, T 세포 에피토프는 MHC 틈새에 에피토프의 결합을 보장하는 아미노산의 임의의 서열을 포함할 수 있다. 항원성 단백질의 관심 에피토프가 그의 에피토프 서열 내에 본원에 기재된 바와 같은 변형된 산화환원 모티프를 포함하는 경우, 본 발명에 따른 면역원성 펩티드는 (틈새 내에 묻힌 에피토프 내에 존재하는 변형된 산화환원 모티프와 달리) 부착된 변형된 산화환원 모티프가 환원 활성을 보장할 수 있도록 본원에 기재된 바와 같은 변형된 산화환원 모티프의 서열 및/또는 에피토프 서열에 N-말단 또는 C-말단에 커플링된 다른 환원성 서열을 포함한다.
따라서, T 세포 에피토프 및 모티프는 서로 인접하거나 또는 서로 분리되어 중첩되지 않는다. "바로 인접한" 또는 "분리된"의 개념을 평가하기 위해, MHC 틈새에 맞는 8 또는 9개 아미노산 서열을 결정하고, 이 옥타펩티드 또는 노나펩티드와 산화환원 모티프 테트라펩티드 또는 히스티딘을 포함한 변형된 산화환원 모티프 펜타펩티드 사이의 거리를 결정한다.
일반적으로, 본 발명에 사용되는 펩티드는 천연의 것이 아니라 (따라서 그러한 단백질 단편이 없음), T 세포 에피토프 이외에, 본원에 기재된 바와 같은 변형된 산화환원 모티프를 함유함으로써 변형된 산화환원 모티프가 7개 이하, 가장 특히 4 개 또는 2개 이하의 아미노산으로 이루어진 링커에 의해 T 세포 에피토프로부터 바로 분리되는 인공 펩티드이다.
본원에 개시된 펩티드 (또는 이러한 펩티드를 포함하는 조성물)를 포유동물에게 투여 (즉, 주사)한 경우, 펩티드는 항원 유래 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포의 활성화를 유도하고 표면 수용체의 감소를 통해 T 세포에 추가 신호를 제공하는 것으로 나타났다. 이러한 최적의 활성화는 T 세포가 T 세포 에피토프를 제시하는 세포에 대한 세포용해 특성뿐만 아니라 방관자 T 세포에 대한 억제 특성을 획득하게 한다.
이러한 방식으로, 항원 유래 T 세포 에피토프 및 에피토프 외부에 변형된 산화환원 모티프를 함유하는 펩티드 또는 본 발명에 기재된 펩티드를 포함하는 조성물이 인간을 비롯한 포유동물의 직접 면역화에 사용될 수 있다. 이에 따라, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한, 본원에 개시된 펩티드 또는 그의 유도체의 용도를 제공한다. 따라서, 본 발명은 본원에 개시된 하나 이상의 펩티드를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 작은 펩티드로 면역화하여 세포용해 특성이 부여된 항원 특이적 T 세포를 유도할 수 있는 방법을 제공한다. (i) 항원으로부터 T 세포 에피토프를 인코딩하는 서열 및 (ii) 산화환원 특성을 갖는 공통 서열을 포함하고, 또한 선택적으로 효율적인 MHC-클래스 II 제시를 위해 펩티드의 후기 엔도솜으로의 흡수를 용이하게 하는 서열을 포함하는 펩티드가 억제자 T-세포를 유도한다는 것이 발견되었다.
본원에 개시된 펩티드의 면역원성은 면역 반응의 치료 및 예방에 특히 중요하다.
본원에 기재된 펩티드는 약제로 사용되며, 보다 특히 포유동물, 특히 인간에서 면역 장애의 예방 또는 치료용 약제의 제조에 사용된다.
본 발명은 본원에 개시된 펩티드, 그의 상동체 또는 유도체를 사용하여 치료 또는 예방을 필요로 하는 포유동물의 면역 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 기술하며, 이 방법은 면역 장애로 고통받거나 그의 위험이 있는 상기 포유동물에게 예컨대 면역 장애의 증상을 감소시키기에 치료적 유효량의 본원에 개시된 펩티드, 상동체 또는 이의 유도체를 투여하는 단계를 포함한다. 인간과 애완 동물 및 농장 동물과 같은 동물 모두의 치료가 고려된다. 일 실시양태에서, 치료될 포유동물은 인간이다. 특정 실시양태에서 상기 언급된 면역 장애는 알레르기 질환 및 자가면역 질환 중에서 선택된다.
본 발명에 사용하기 위한 펩티드 또는 본원에 정의된 바와 같은 펩티드를 포함하는 약학적 조성물은 바람직하게는 피하 또는 근육 내 투여를 통해 투여된다. 바람직하게는, 이를 펩티드 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 팔꿈치와 어깨 사이의 중간인 상박의 측면 부분 영역에 피하 (SC) 주사될 수 있다. 두 번 이상의 개별 주사가 필요한 경우 두 팔에 동시에 투여될 수 있다.
본 발명에 사용하기 위한 펩티드 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 치료적 유효 용량으로 투여된다. 예시적이지만 비제한적인 투여 요법은 300 내지 1500 μg, 바람직하게는 300 내지 600 μg 또는 1200 내지 1500 μg이다.
예시적인 용량은 다음과 같다:
300 내지 600 μg의 상기 면역원성 펩티드;
600 내지 800 μg의 상기 면역원성 펩티드;
800 내지 1000 μg의 상기 면역원성 펩티드;
1000 내지 1200 μg의 상기 면역원성 펩티드; 또는
1200 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드
보다 구체적인 투여 계획은 300 내지 500 μg, 또는 약 450 μg일 수 있거나, 1300 내지 1500 μg 또는 약 1350 μg일 수 있다.
투여량 요법은 단일 투여량 또는 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 이상의 투여량을 동시에 또는 연속적으로 투여하는 것을 포함할 수 있다.
예시적인 비제한적인 투여 계획은 다음과 같다:
- 300 내지 500 μg 또는 약 450 μg의 펩티드를 1회 또는 2회 개별 연속 투여로 SC 투여를 포함하는 저용량 계획 - 상기 투여는 약 2 내지 3주, 예컨대 약 2주 또는 약 10 내지 20일, 약 11 내지 19일, 약 12 내지 17일, 약 13 내지 16일, 약 14 내지 15일, 또는 약 14일 간격으로 4 내지 6회 반복됨 -.
.- 1300 내지 1500 μg 또는 약 1350 μg의 펩티드를 1회 또는 2회 개별 연속 투여로 SC 투여를 포함하는 고용량 계획 - 상기 투여는 1 내지 3주, 예컨대 약 2주 또는 약 10일 내지 20일, 약 11일 내지 19일, 약 12일 내지 17일, 약 13일 내지 16일, 약 14일 내지 15일, 또는 약 14일 간격으로 4 내지 6회 반복됨 -.
이들 치료 계획 각각은 유리하게는 치료 시작부터 계산하여 약 24주 내지 30주차, 예를 들어 치료 시작부터 계산하여 24주차, 25주차, 26주차, 27주차, 28주차, 29주차 또는 30주차에 동일한 용량의 부스트 주사를 포함할 수 있다.
본 발명에 사용하기 위한 펩티드는 또한 샘플에서 클래스 II 제한 CD4+ T 세포를 검출하기 위한 시험관내 진단 방법에 사용될 수 있다. 이 방법에서, 샘플은 MHC 클래스 II 분자 및 본원에 개시된 펩티드의 복합체와 접촉된다. CD4+ T 세포는 샘플에서 복합체와 세포와의 결합을 측정함으로써 검출되며, 여기서, 세포에 대한 복합체의 결합은 샘플 중 CD4+ T 세포의 존재를 나타낸다.
복합체는 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 융합 단백질일 수 있다.
대안적으로, 복합체 내의 MHC 분자는 테트라머이다. 복합체는 가용성 분자로서 제공될 수 있거나, 담체에 부착될 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명의 치료 및 예방 방법은 치료하고자 하는 질환 (예를 들면, 상술한 바와 같은 것)에서 작용을 하는 항원성 단백질의 T 세포 에피토프를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 면역원성 펩티드의 투여를 포함한다. 추가의 특정 실시양태에서, 사용된 에피토프는 상기 치료의 대부분의 이익을 얻을 것으로 추정되는 환자의 계층화 또는 선택 방법과 결합된 우세 에피토프이다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 펩티드는 T 세포 에피토프 및 변형된 산화환원 모티프가 0 내지 5개의 아미노산에 의해 분리된 펩티드를 합성함으로써 제조될 것이다. 특정 실시양태에서, 변형된 산화환원 모티프는 에피토프 서열 외부에 1, 2 또는 3개의 돌연변이를 도입하여 단백질에서 발생하는 서열 컨텍스트를 보존함으로써 수득될 수 있다. 전형적으로, 천연 서열의 일부인 노나펩티드에 대해 P-2 및 P-1뿐만 아니라 P+10 및 P+11에서의 아미노산이 펩티드 서열에서 보존된다. 이들 플랭킹 잔기는 일반적으로 MHC 클래스 II에 대한 결합을 안정화시킨다. 다른 실시양태에서, 에피토프의 N-말단 또는 C-말단 서열은 T 세포 에피토프 서열을 함유하는 항원성 단백질의 서열과 무관할 것이다.
따라서, 펩티드를 설계하기 위한 상기 방법에 기초하여, 펩티드는 화학 펩티드 합성, 재조합 발현 방법 또는 보다 예외적인 경우 단백질의 단백질 분해 또는 화학적 단편화에 의해 생성된다.
상기 방법으로 제조된 펩티드는 시험관내 및 생체내 방법에서 T 세포 에피토프의 존재에 대해 시험될 수 있고, 시험관내 분석에서 이들의 환원 활성에 대해 시험될 수 있다. 최종 품질 관리로서, 펩티드는 펩티드가 변형된 산화환원 모티프를 갖는 펩티드에 또한 존재하는 에피토프 서열을 가지는 항원을 제시하는 항원 제시 세포에 대한 세포자멸 경로를 통해 세포용해성인 CD4+ T 세포를 생성할 수 있는지의 여부를 확인하기 위해 시험관내 분석법으로 시험될 수 있다.
본 발명에 사용하기 위한 펩티드는 박테리아, 효모, 곤충 세포, 식물 세포 또는 포유동물 세포에서 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 제한된 길이의 펩티드를 고려해, 이들은 화학적 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있으며, 여기서, 펩티드는 상이한 아미노산을 서로 커플링시켜 제조된다. 화학적 합성은 예를 들어, D-아미노산, 자연적으로 발생하지 않는 측쇄를 갖는 아미노산 또는 메틸화된 시스테인과 같은 변형된 측쇄를 갖는 천연 아미노산을 포함시키는데 특히 적합하다.
화학적 펩티드 합성 방법은 잘 설명되어 있으며, 펩티드는 Applied Biosystems와 같은 회사 및 다른 회사에서 주문할 수 있다.
펩티드 합성은 고상 펩티드 합성 (SPPS)으로 또는 반대로 용액상 펩티드 합성으로 수행될 수 있다. 가장 잘 알려진 SPPS 방법은 t-Boc 및 Fmoc 고상 화학법이다:
펩티드 합성 동안 몇몇 보호기가 사용된다. 예를 들어, 하이드록실 및 카복실 작용기는 t-부틸기에 의해 보호되고, 라이신 및 트립토판은 t-Boc기에 의해 보호되며, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인 및 히스티딘은 트리틸기에 의해 보호되고, 아르기닌은 pbf기에 의해 보호된다. 적절한 경우, 이러한 보호기는 합성 후 펩티드 상에 남아있을 수 있다. 펩티드는 켄트 (Kent) (Schnelzer & Kent (1992), J. Pept. Protein Res. 40, 180-193)에 의해 최초 기술되고, 예를 들어 [Tam et al. (2001) Biopolymers 60, 194-205]에서 검토된 바와 같이, 결찰 전략 (두개의 비보호된 펩티드 단편의 화학선택적 커플링)을 이용하여 더 긴 펩티드를 형성하도록 서로 연결될 수 있으며, SPPS의 범위를 벗어나는 단백질 합성을 달성할 엄청난 잠재력을 제공한다. 100-300 잔기의 크기를 갖는 많은 단백질이 이 방법으로 성공적으로 합성되었다. 합성 펩티드는 SPPS의 엄청난 발전으로 인해 생화학, 약리학, 신경생물학, 효소학 및 분자 생물학 분야의 연구 분야에서 끊임없이 중요한 역할을 계속해 왔다.
대안적으로, 펩티드는 코딩 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적절한 발현 벡터에서 본 발명의 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자를 사용하여 합성될 수 있다. 그러한 DNA 분자는 자동화 DNA 합성기 및 유전자 코드의 잘 알려진 코돈-아미노산 관계를 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 이러한 DNA 분자는 또한 올리고뉴클레오티드 프로브 및 통상적인 혼성화 방법을 사용하여 게놈 DNA 또는 cDNA로서 수득될 수 있다. 이러한 DNA 분자는 박테리아, 예를 들어 대장균 (Escherichia coli), 효모 세포, 동물 세포 또는 식물 세포와 같은 적합한 숙주에서 DNA의 발현 및 폴리펩티드의 생성에 적합한 플라스미드를 포함하는 발현 벡터에 도입될 수 있다.
펩티드가 치료 조성물에 사용하기에 적합한지의 여부를 결정하기 위해 대상 펩티드의 물리적 및 화학적 성질 (예를 들어 용해도, 안정성)이 조사된다. 전형적으로 이는 펩티드의 서열을 조절함으로써 최적화된다. 임의로, 펩티드는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 합성 후에 변형 (화학적 변형, 예를 들어, 작용기의 첨가/제거)될 수 있다.
T 세포 에피토프는 그 자체로 항원 제시 세포 표면 상의 적절한 HLA 분자에 결합하고 관련 T 세포 하위 집단을 자극함으로써 T 헬퍼 세포 수준에서 조기 사건을 유발하는 것으로 생각된다. 이러한 사건은 T 세포 증식, 림포카인 분비, 국소 염증 반응, 해당 부위에 추가적인 면역 세포 동원, 항체 생산을 유도하는 B 세포 캐스케이드 활성화로 이어진다. 이들 항체 중 하나인 IgE는 근본적으로 알레르기 증상의 발생에 중요하며 그 생산은 분비되는 림포카인의 특성에 따라 T 헬퍼 세포 수준에서 일련의 사건 초기에 영향을 받는다. T 세포 에피토프는 T 세포 수용체에 의한 인식의 기본 요소 또는 가장 작은 단위이며, 여기서 에피토프는 단백질의 아미노산 서열에 연속되어 있는 수용체 인식에 필수적인 아미노산 잔기를 포함한다.
그러나, T 세포 에피토프와 산화환원 모티프가 있는 펩티드를 투여하면 다음과 같은 사건이 일어나는 것으로 여겨진다: (i) MHC 클래스 II 분자에 의해 제시된 항원 유래 펩티드와의 동족 상호작용으로 인한 항원 특이적 T 세포의 활성화;
환원효소 서열은 CD4 분자와 같은 T 세포 표면 단백질을 환원시키며, 두 번째 도메인은 제한된 디설파이드 결합을 포함한다. 이는 신호를 T 세포로 변환시킨다. 증가된 산화 경로와 관련된 일련의 결과 중에서 중요한 사건은 칼슘 유입 증가와 NF-kB 전사 인자의 핵으로의 전위이다. 후자는 IFN-감마 및 그랜자임의 전사를 증가시켜 세포가 세포자멸 유도 메커니즘을 통해 세포용해 특성을 획득할 수 있도록 한다; 세포용해 특성은 그랜자임 B 분비 및 Fas-FasL 상호작용을 포함하는 메커니즘에 의해 펩티드를 제시하는 세포에 영향을 미친다. 세포 사멸 효과는 세포자멸 경로를 통해 얻어지기 때문에 세포독성 세포보다는 세포용해 세포가 이러한 세포에 더 적합한 용어이다. 항원 제시 표적 세포의 파괴는 동일한 항원에 위치한 에피토프 또는 동일한 항원 제시 세포에 의해 처리될 비관련 항원에 특이적인 다른 T 세포의 활성화를 방지한다; T 세포 활성화의 추가적인 결과는 세포-세포 간 접촉 의존 메커니즘에 의해 방관자 T 세포의 활성화를 억제하는 것이다. 이 경우, 다른 항원 제시 세포에 의해 제시된 항원에 의해 활성화된 T 세포는 세포용해 T 세포와 방관자 T 세포가 근접해 있는 경우, 즉 동일한 항원 제시 세포의 표면에서 활성화되는 경우 억제된다.
위에서 가정한 작용 메커니즘은 상기 인용된 PCT 출원 WO2008/017517에 개시된 실험 데이터로 입증되었다.
본 발명은 생체내 또는 시험관내에서 항원 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포를 생성하는 방법과, 상기 치료의 대부분에 이익이 되는 것으로 선택되거나 계층화된 환자를 치료하는데 있어서 이의 용도를 제공한다. 이와 독립적으로, 특징적인 발현 데이터에 기초하여 Foxp3+ Treg와 같은 다른 세포 집단으로부터 세포용해성 CD4+ T 세포를 구별하는 방법이 구상될 수 있다.
본 발명은 본 발명에 비추어 치료에 사용될 수 있는 항원-특이적 CD4+ T 세포의 생산을 위한 생체내 방법을 기술한다. 특정 실시양태는 동물(인간 포함)을 본원에 기술된 펩티드로 면역화한 후 면역화된 동물로부터 CD4+ T 세포를 단리함으로써 CD4+ T 세포를 생산하거나 단리하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 APC에 대한 항원 특이적 세포용해 CD4+ T 세포의 생산을 위한 시험관내 방법을 기술한다. 본 출원은 또한 APC에 대한 항원 특이적 세포용해 CD4+T 세포를 생성하는 방법을 기술한다.
일 실시양태에서, 말초 혈액 세포의 단리, 본원에 기재된 면역원성 펩티드에 의한 시험관내 세포 집단의 자극 및 자극된 세포 집단의 확장 (보다 특히는 IL-2의 존재하에서)을 포함하는 방법이 제공된다. 본 발명에 따른 방법은 많은 수의 CD4+ T 세포가 생성되고 (항원 특이적 에피토프를 포함하는 펩티드를 사용함으로써) 항원성 단백질에 특이적인 CD4+ T 세포가 생성될 수 있다는 이점을 갖는다.
대안적인 실시양태에서, CD4+ T 세포는 생체내에서, 즉 본원에 기술된 면역원성 펩티드를 대상으로 주입하고 생체내에서 생성된 세포용해성 CD4+ T 세포를 수집하여 생성할 수 있다.
본원에 개시된 방법에 의해 얻을 수 있는 APC에 대한 항원 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포는 알레르기 반응의 예방 및 자가면역 질환의 치료에서 면역 요법을 위해 포유동물에 투여하는데 특히 중요하다. 동종 및 자가생성 세포의 사용이 모두 고려된다.
세포용해성 CD4+ T 세포 집단은 본원에서 하기에 기술된 바와 같이 수득된다.
본원에 기재된 바와 같은 항원 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포는 약제로서, 특히 양자 세포 요법, 보다 특히 급성 알레르기 반응 및 다발성 경화증과 같은 자가면역 질환의 치료에 사용하기 위한 약제로서 사용될 수 있다. 단리된 세포용해성 CD4+ T 세포 또는 세포 집단, 보다 특히 기술된 바와 같이 생성된 항원 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포 집단은 면역 질환의 예방 또는 치료용 약제의 제조에 사용된다. 단리되거나 생성된 세포용해성 CD4+ T 세포를 사용한 치료 방법이 개시된다.
본 발명에 사용하기 위한 펩티드는 살아있는 동물, 전형적으로 인간에게 투여 시, 방관자 T 세포에 억제 활성을 발휘하는 특이적 T 세포를 유도할 것이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 세포용해 세포 집단은 FasL 및/또는 인터페론 감마의 발현을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서 본 발명의 세포용해 세포 집단은 추가로 그랜자임 B의 발현을 특징으로 한다.
이러한 메카니즘은 또한 특정 항원의 특이적 T 세포 에피토프를 포함함에도 불구하고 본 발명의 펩티드가 동일 항원의 다른 T 세포 에피토프에 대한 면역 반응에 의해 유발되는 장애의 예방 또는 치료에 사용될 수 있거나, 또는 특정 상황에서 이들이 본 발명의 펩티드에 의해 활성화되는 T 세포 근처에서 MHC 클래스 II 분자에 의해 동일한 메커니즘을 통해 제시될 수 있다면, 심지어 다른 상이한 항원의 다른 T 세포 에피토프에 대한 면역 반응에 의해 유발되는 장애의 치료에 사용될 수 있음을 함축하고 실험 결과는 이를 보여준다.
또한 항원 특이적인, 즉 항원 특이적 면역 반응을 억제할 수 있는, 전술한 특성을 갖는 세포 유형의 단리된 세포 집단이 개시된다.
본 발명은 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드를 포함하고 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 약학적 조성물의 용도를 제공한다. 상기에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명은 또한 상기 치료의 가장 큰 이점을 얻을 것으로 추정되는 환자의 계층화 또는 선택 방법과 결합하여, 의약으로 사용하기 위한 조성물 및 상기 조성물을 사용한 포유동물의 면역 장애 치료 방법, 및 면역 장애의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다. 약학적 조성물은, 예를 들어 면역 장애, 특히 공기로 운반되는 알레르기 및 식인성 알레르기뿐만 아니라 알레르기 기원의 질환을 치료 또는 예방하기에 적합한 백신일 수 있다. 본원에서 약학적 조성물로 기술된 예로서, 본 발명에 따른 펩티드는 수산화알루미늄 (명반)과 같은 포유동물에 투여하기에 적합한 애쥬번트에 흡착된다. 전형적으로, 명반에 흡착된 펩티드 50 μg 내지 1500 μg과 같은 본원에 기술된 원하는 투여량은 2주 간격으로 3회 피하 경로로 주사된다. 경구, 비강내 또는 근육내를 포함하는 다른 투여 경로가 가능하다는 것이 당업자에게 명백하다. 또한, 주입 횟수 및 주입량은 치료 상태에 따라 달라질 수 있다. 또한, MHC-클래스 II 제시 및 T 세포 활성화에서 펩티드 제시를 촉진한다면, 알룸 이외의 다른 보조제가 사용될 수 있다. 따라서, 활성 성분을 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 전형적으로는 약학적 제형으로서 제공된다. 본 발명의 수의학적 용도 및 인간 용도 모두를 위한 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 상기한 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을 포함한다. 본 개시내용은 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 활성 성분으로서 본원에 기재된 하나 이상의 펩티드를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 약학적 조성물은 치료 또는 예방의 방법과 관련하여 이후에 나타낸 바와 같은 치료적 유효량의 활성 성분을 포함해야 한다. 선택적으로, 조성물은 다른 치료 성분을 추가로 포함한다. 적합한 다른 치료 성분뿐만 아니라 이들이 속한 부류에 따른 그들의 일반적인 투여량은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 면역 장애의 치료에 사용되는 다른 공지된 약물로부터 선택될 수 있다.
본원에서 사용되는 "약학적으로 허용 가능한 담체"라는 용어는 활성 성분이 예를 들어 조성물을 용해, 분산 또는 확산시킴으로써 치료할 장소로의 적용 또는 전파을 용이하게 하고/하거나, 효과를 저해하지 않고 그의 저장, 운반 또는 취급을 용이하게 하도록 제형화하는 임의의 재료 또는 물질을 의미한다. 이들은 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제 (예를 들어, 페놀, 소르브산, 클로로부탄올), 등장제 (예를 들어 당 또는 염화나트륨) 등을 포함한다. 조성물 중 면역원성 펩티드의 작용 지속 시간을 조절하기 위해 추가 성분이 포함될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 고체 또는 액체 또는 액체를 형성하도록 압축된 기체일 수 있으며, 즉 본 발명의 조성물은 농축물, 에멀젼, 용액, 과립제, 더스트, 스프레이, 에어로졸, 현탁액, 연고, 크림, 정제, 알약 또는 분말로서 적절히 사용될 수 있다. 약학적 조성물 및 그의 제형에 사용하기에 적합한 약학적 담체는 당업자에게 공지되어 있으며, 본 발명의 범위 내에서 이들의 선택에 특별한 제한은 없다. 이들은 또한 습윤제, 분산제, 증점제, 접착제, 유화제, 용매, 코팅, 항균 및 항진균제 (예를 들어 페놀, 소르브산, 클로로부탄올), 등장제 (예를 들어 당 또는 염화나트륨) 등과 같은 첨가제를 포함할 수도 있으되, 단 이들은 제약 관행에 따라야 하며, 즉 담체 및 첨가제는 포유동물에 영구적인 손상을 주지 않아야 한다. 본 발명의 약학적 조성물은 임의의 공지된 방식으로, 예를 들면, 활성 성분을 선택된 담체 물질 및 적절한 경우, 계면활성제와 같은 다른 첨가제와 함께 단일 단계 또는 복수 단계의 절차로 균질하게 혼합, 코팅 및/또는 분쇄하여 제조할 수 있다. 이들은 또한 예를 들어 일반적으로 약 1 내지 10 μm의 직경을 갖는 미소구 형태를 수득하기 위한 관점에서, 즉 활성 성분의 조절 방출 또는 지속 방출을 위한 마이크로캡슐의 제조를 위해 미소화에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 사용하기에 적합한, 에멀젼 또는 유화제로도 알려진 적합한 계면활성제는 양호한 유화, 분산 및/또는 습윤성을 갖는 비이온성, 양이온성 및/또는 음이온성 물질이다. 적합한 음이온성 계면활성제는 수용성 비누 및 수용성 합성 계면활성제 모두를 포함한다. 적합한 비누는 알칼리 또는 알칼리 토금속염, 비치환되거나 치환된 고급 지방산 (C10-C22)의 암모늄염, 예를 들면, 올레산 또는 스테아르산의 나트륨 또는 칼륨염, 또는 코코넛오일 또는 우지로부터 수득할 수 있는 천연 지방산 혼합물이다. 합성 계면활성제는 폴리아크릴산의 나트륨 또는 칼슘 염; 지방 설포네이트 및 설페이트; 설폰화 벤즈이미다졸 유도체 및 알킬아릴설포네이트를 포함한다. 지방 설포네이트 또는 설페이트는 통상 알칼리 또는 알칼리 토금속 염, 비치환 암모늄 염 또는 8 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 알킬 또는 아실 라디칼로 치환된 암모늄 염, 예를 들어, 리그노설폰산 또는 도데실설폰산의 나트륨 또는 칼슘 염 또는 천연 지방산으로부터 수득된 지방 알콜 설페이트의 혼합물, 황산 또는 설폰산 에스테르 (예컨대 나트륨 라우릴 설페이트) 및 지방 알콜의 설폰산/에틸렌 옥사이드 부가물의 알칼리 또는 알칼리 토금속 염의 형태이다. 적합한 설폰화 벤즈이미다졸 유도체는 전형적으로 8 내지 22개의 탄소 원자를 함유한다. 알킬아릴설포네이트의 예로는 도데실벤젠 설폰산 또는 디부틸-나프탈렌설폰산 또는 나프탈렌-설폰산/포름알데히드 축합 생성물의 나트륨, 칼슘 또는 알칸올아민 염이 있다. 또한, 상응하는 포스페이트, 예를 들어 인산 에스테르 및 p-노닐페놀과 에틸렌 및/또는 프로필렌 옥사이드의 부가물, 또는 인지질의 염이 적합하다. 이러한 목적에 적합한 인지질은 천연 (동물 또는 식물 세포 유래) 또는 세팔린 또는 레시틴 유형의 합성 인지질, 예컨대 포스파티딜-에탄올, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세린, 리소레시틴, 카디오리핀, 디옥타닐포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린 및 이들의 혼합물을 포함한다.
적합한 비이온성 계면활성제는 분자 내에 적어도 12개의 탄소 원자를 함유하는 알킬 페놀, 지방 알콜, 지방산, 지방족 아민 또는 아미드의 폴리에톡실화 및 폴리프로폭실화 유도체, 알킬아렌 설포네이트 및 디알킬설포숙시네이트, 예컨대 지방족 및 지환식 알콜의 폴리글리콜 에테르 유도체, 포화 및 불포화 지방산 및 알킬 페놀을 포함하며, 유도체는 전형적으로 (지방족) 탄화수소 잔기에 3 내지 10개의 글리콜 에테르기 및 8 내지 20개의 탄소 원자와 알킬 페놀의 알킬 잔기에 6 내지 18개의 탄소 원자를 함유한다. 추가의 적합한 비이온성 계면활성제는 폴리에틸렌 옥사이드와 폴리프로필렌 글리콜, 알킬 사슬에 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 에틸렌디아미노폴리프로필렌 글리콜의 수용성 부가물이며, 부가물은 20 내지 250개의 에틸렌글리콜 에테르기 및/또는 10 내지 100개의 프로필렌글리콜 에테르기를 함유한다. 이러한 화합물은 일반적으로 프로필렌글리콜 단위당 1 내지 5개의 에틸렌글리콜 단위를 함유한다. 비이온성 계면활성제의 대표적인 예로는 노닐페놀-폴리에톡시에탄올, 피마자유 폴리글리콜 에테르, 폴리프로필렌/폴리에틸렌 옥사이드 부가물, 트리부틸페녹시폴리에톡시에탄올, 폴리에틸렌글리콜 및 옥틸페녹시폴리에톡시에탄올이 있다. 폴리에틸렌 소르비탄의 지방산 에스테르 (예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올레에이트), 글리세롤, 소르비탄, 수크로스 및 펜타에리트리톨이 또한 적합한 비이온성 계면활성제이다. 적합한 양이온성 계면활성제는 할로, 페닐, 치환된 페닐 또는 하이드록시로 임의로 치환된 4개의 탄화수소 라디칼을 갖는 4급 암모늄 염, 특히 할로겐화물; 예를 들어 N-치환체로서 적어도 하나의 C8-C22 알킬 라디칼 (예를 들어, 세틸, 라우릴, 팔미틸, 미리스틸, 올레일 등) 및 추가의 치환체로서 비치환 또는 할로겐화 저급 알킬, 벤질 및/하이드록시-저급 알킬 라디칼을 가지는 4급 암모늄 염을 포함한다.
이 목적에 적합한 계면활성제의 보다 상세한 설명은 예를 들어 "McCutcheon's Detergents and Emulsifiers Annual" (MC Publishing Crop., Ridgewood, New Jersey, 1981), "Tensid-Taschenbucw', 2d ed. (Hanser Verlag, Vienna, 1981) 및 "Encyclopaedia of Surfactants, (Chemical Publishing Co., New York, 1981)에 기술되어 있다. 본 발명에 따른 펩티드, 그의 상동체 또는 유도체 (및 이들의 생리학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적 조성물 - 모두 용어 "활성 성분"에 포함됨)는 치료할 상태에 적절하고 화합물, 여기에서는 투여되는 단백질 및 단편에 적절한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 가능한 경로는 국부, 전신, 구강 (고체 형태 또는 흡입), 직장, 비강, 국소 (안구, 협측 및 설하 포함), 질 및 비경구 (피하, 근육 내, 정맥 내, 피 내, 동맥 내, 척수강 내 및 경막 외 포함)를 포함한다. 바람직한 투여 경로는 예를 들어 수용자의 상태 또는 치료할 질환에 따라 달라질 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 담체(들)는 최적으로는 제형의 다른 성분과 양립할 수 있고 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용 가능하다". 제형은 경구, 직장, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근육 내, 정맥 내, 피 내, 동맥 내, 경 막내 및 경막 외 포함) 투여에 적합한 것들을 포함한다.
비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충액, 정균제 및 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제형은 단위 용량 또는 다회 용량 용기, 예를 들어 밀봉 앰플 및 바이알에 제공될 수 있으며, 사용 직전 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 냉동 건조 (동결 건조) 상태로 저장될 수 있다. 전술한 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 즉석 주사 용액 및 현탁액이 제조될 수 있다.
전형적인 단위 용량 제형은 활성 성분을 상기 언급된 바와 같이 1일 용량 또는 단위 1일 아용량 또는 이의 적절한 소부분을 함유하는 제형이다. 특히 상기 언급된 성분 이외에, 본 발명의 제형은 해당 제형의 타입을 고려하여 당업계에서 통상적인 다른 제제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 경구 투여에 적합한 것은 향미제를 포함할 수 있는 것으로 이해하여야 한다. 본 발명에 따른 펩티드, 그의 상동체 또는 유도체는 보다 적은 투여 빈도를 허용하거나 주어진 본 발명 화합물의 약동학 또는 독성 프로파일을 개선하도록 활성 성분의 방출을 제어 및 조절할 수 있는 하나 이상의 본 발명의 화합물을 활성 성분으로 함유하는 방출 조절 약학적 제형 ("방출 조절 제형")을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하는 개별 단위인 경구 투여에 적합한 조절 방출 제형은 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 조성물 중의 활성 성분의 작용 지속 시간을 조절하기 위해 추가의 성분이 포함될 수 있다. 따라서, 예를 들어 폴리에스테르, 폴리아미노산, 폴리비닐 피롤리돈, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체, 메틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 프로타민 황산염 등과 같은 적당한 중합체 담체를 선택함으로써 방출 조절 조성물을 수득할 수 있다. 약물 방출 속도 및 작용 지속 시간은 또한 활성 성분을 하이드로겔, 폴리락트산, 하이드록시메틸셀룰로오스, 폴리에틸 메타크릴레이트 및 기타 상기 기재된 폴리머와 같은 폴리머 물질의 입자, 예를 들어 마이크로캡슐에 도입시킴으로써 제어할 수 있다. 그러한 방법은 친유성 조성물, 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자, 나노캡슐 등과 같은 콜로이드 약물 전달 시스템을 포함한다. 투여 경로에 따라, 약학적 조성물은 보호 코팅을 필요로 할 수 있다. 주사에 적합한 약학 형태는 멸균 수용액 또는 분산액 및 그의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 따라서, 이러한 목적에 전형적인 담체는 생체적합성 수성 완충액, 에탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등 및 이들의 혼합물을 포함한다. 다수의 활성 성분을 조합하여 사용하는 경우, 이들은 치료하고자 하는 포유동물에서 동시에 공동 치료 효과를 직접적으로 발휘할 필요가 없다는 사실에 비추어 볼 때, 해당 조성물은 또한 분리되었지만 인접한 저장소 또는 구획에 두 가지 성분이 들어 있는 의학적 키트 또는 패키지의 형태일 수 있다. 따라서, 후자와 관련하여, 각 활성 성분은 다른 성분의 것과 상이한 투여 경로에 적합한 방식으로 제형화될 수 있으며, 예를 들어 그 중 하나는 경구 또는 비경구 제형의 형태일 수 있고, 다른 하나는 정맥 내 주사용 앰풀 또는 에어로졸 형태이다.
본원에 기재된 바와 같은 세포용해성 CD+ T 세포는 시험관내 및 생체내에서 입증된 바와 같이, 수지상 세포 및 B 세포 모두에 영향을 미치는 MHC-클래스 II 의존성 동족 활성화 후 APC 세포자멸을 유도하며, (2) IL-10 및/또는 TGF-β의 부재하에서 접촉 의존성 메카니즘에 의해 방관자 T 세포를 억제한다. 세포용해성 CD4+ T 세포는 WO2008/017517호에 상세히 논의된 바와 같이, 천연 및 입양성 Tregs 양자와 구별될 수 있다.
본 발명은 이제 어떤 제한의 의도도 없이 제공되는 하기 실시예에 의해 예시될 것이다. 또한, 여기에 기술된 모든 참조문헌은 본원에 참조로서 명시적으로 포함된다.
실시예
실시예 1: 샘플 크기
참가자를 1:1:1 비율로 치료제 또는 위약에 배정하였다(위약:시험용 의약품 450 μg:시험용 의약품 1350 μg). 시험의 베이지안 적응(Bayesian adaptive) 설계는 시뮬레이션을 통해 평가된 작동 특성을 갖춘 선형 종단 무작위 효과(linear longitudinal random effect) 모델을 기반으로 한다. 이 설계는 84명의 참가자(28:28:28)를 대상으로 48주차(마지막 계획 방문)에 적어도 하나의 치료 아암(treatment arm) 및 위약 간에 로그 변환된 건혈반(DBS) C-펩티드 수준에서 0.2 nmol/L의 변화를 감지할 수 있는 적어도 80%의 파워를 달성하기 위해 실시되었다.
실시예 2: 연구 설계
이는 스크리닝 시점에서 진단(첫 번째 인슐린 주사일로 정의됨) 후 최대 9주 이내와 진단부터 무작위 배정까지 최대 12주 이내에 제1형 당뇨병(T1D) 환자를 대상으로 한 다기관, 용량 비교, 무작위, 이중 맹검, 위약 대조 연구이다.
주요 연구
84명의 HLA DR4+ 성인 참가자를 위약, 시험용 의약품(IMP) 450 μg 및 IMP 1350 μg의 세 가지 치료군 중 하나에 무작위로(1:1:1) 배정하였다(= 주요 연구). 모든 참가자에게 각 투여 사이에 2주 간격으로 IMP 또는 위약을 6회 투여하였다. 24주차에 참가자들은 부스트 주사를 맞았다. 치료를 받은 참가자는 무작위로 배정된 용량과 동일한 부스트 투여를 받은 반면, 위약 참가자는 위약 부스트 투여를 받았다. 참가자들을 최대 48주 동안 추적 관찰하였다(도 1).
하위 연구
최대 24명의 HLA DR4 음성이지만 HLA DR3+ 성인 참가자도 면역 반응을 연구하기 위한 순수 기계적 하위 연구에 포함시켰다. 참가자를 IMP 450 μg 또는 IMP 1350 μg에 무작위로 배정하였다(= 하위 연구). 안전성 데이터도 수집하여 연구의 전체 안전성 데이터 세트에 추가하였다(도 1).
하위 연구에 포함된 참가자를 포함한 각 참가자에 대해 연구는 약 52주 동안(스크리닝 방문부터 마지막 계획 방문까지) 발생하는 총 11회의 방문으로 구성된다.
포함 기준:
(1) 서면 동의를 받음.
(2) 동의 당시 연령이 18세 이상, 45세 미만인 참가자.
(3) 스크리닝 시(첫 번째 인슐린 주사 날짜) 최대 9주 이내에 제1형 당뇨병 진단을 받아야 한다.
(4) 스크리닝 시 적어도 하나 이상의 당뇨병 관련 자가항체(GAD65, IA-2 또는 ZnT8)가 있어야 한다.
(5) 스크리닝 시 측정된 무작위 C-펩티드 수치가 200 pmol/L 이상이어야 한다.
(6) 본 연구에 대해 HLA DR4 양성이어야 한다.
a. HLA DR4 음성 상태이지만 HLA DR3 양성인 최대 24명의 참가자가 하위 연구에 참여할 수 있다.
(7) 집중적인 당뇨병 관리를 기꺼이 준수해야 한다.
(8) 현지 표준 치료에 따라 인슐린 요법으로 치료를 받는다.
(9) 가임기 남성은 마지막 치료 완료 후 최대 90일까지 적절한 피임법을 사용하는 데 동의해야 한다. 여기에는 다음이 포함된다.
- 장벽 피임법(콘돔 및 살정제) 또는
- 진정한 금욕(참가자가 선호하는 일반적인 생활 방식에 따른 경우).
(10) 모든 여성은 스크리닝 시 혈청 임신 검사 결과가 음성이어야 한다. 성적으로 활발하고 가임기인 여성은 스크리닝부터 임상 시험용 제품으로 마지막 치료를 받은 후 최대 90일까지 매우 효과적인 피임 방법을 사용하는 데 동의해야 한다.
제외 기준:
(1) 다음을 포함하는 스크리닝 시 임상적으로 유의미한 비정상 전혈구수(FBC), 신장 기능 또는 간 기능:
a. 면역결핍이거나 임상적으로 유의미한 만성 림프구 감소증이 있는 경우: 백혈구 감소증(<3,000 백혈구/μL), 호중구 감소증(<1,500 호중구/μL), 림프구 감소증(<800 림프구/μL) 또는 혈소판 감소증(<100,000 혈소판/μL).
b. 크레아티닌이 정상 상한치의 1.5배를 초과하는 신장 기능 장애의 증거.
c. 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 또는 알라닌 트랜스아미나제(ALT)가 정상 상한치의 3배를 초과하는 간 기능 장애의 증거. 상승된 비접합 빌리루빈(길버트 증후군)이 있는 참가자는 빌리루빈이 정상 상한치의 3배 이하이고 간 효소 및 기능이 정상(ULN 내 AST/ALT/알칼리성 포스파타제)이고 용혈의 증거가 없는 경우 자격이 있다.
(2) 연구 시작 시 IV 항생제 및/또는 입원이 필요한 심각한 활동성 감염의 징후 또는 증상이 있는 경우.
(3) 스크리닝 기간 동안 활동성 COVID 감염의 징후 또는 증상이 있거나 COVID PCR 검사에서 양성 반응을 보인 경우(자세한 내용은 섹션 7.5 참조)
(4) 연구 제품의 첫 번째 계획 투여 전 3개월 이내에 약독화 생백신을 접종한 경우(경구 소아마비 백신, 홍역-볼거리-풍진 백신, 황열병 백신, 일본뇌염 백신, 뎅기열 백신, 로타바이러스 백신, 수두 백신, 약독화 대상포진 백신, BCG(Bacillus Calmette-Gurin) 백신, 경구 장티푸스 백신 등을 포함하되 이에 국한되지 않음).
(5) 현재 임신 중이거나 수유 중이거나 마지막 연구 약물 투여 후 최소 24주까지 임신할 것으로 예상.
(6) 만성적인 전신 스테로이드 사용을 포함한 면역억제제 사용의 필요. 국소, 흡입 또는 비강내 코르티코스테로이드는 허용.
(7) 현재 또는 과거 인체 면역결핍 바이러스(HIV), B형 간염 또는 C형 간염에 감염된 증거가 있다.
(8) 연구자가 판단하여 연구 수행을 방해할 수 있는 조절되지 않는 질환(조절되지 않는 자가면역 질환 포함) 또는 비정상적인 임상 실험실 결과 존재.
(9) 악성종양의 병력 또는 현재 악성종양(절제된 기저세포 피부암 제외).
(10) 스크리닝 방문 전 7일 이내에 혈당 조절에 영향을 미치는 비인슐린 의약품을 현재 또는 지속적으로 사용하고 있는 경우.
(11) 이전 30일 동안 다른 T1D 치료 연구 또는 조사 개입 연구에 적극적으로 참여.
(12) 의약품의 모든 성분에 대해 과민증이 있는 것으로 알려져 있음.
(13) CRO 또는 후원자 직원 또는 연구자의 직접 감독 하에 있거나 연구에 직접 참여하는 직원.
연구용 의약품 및 투여량
연구용 의약품(IMP)은 산화환원효소 모티프가 플랭킹된 프로인슐린의 알려진 인간 에피토프(에피토프 C20-A1 LALEGSLQK, 서열 번호 3)를 포함하는 작은 합성 펩티드(20개 아미노산)로 이루어진다. IMP는 다음 서열을 갖는다: HCPYCSLQPLALEGSLQKRG(서열 번호 73).
IMP는 피하(SC) 투여용 동결건조 분말 및 용매 형태로 제공된다. 용매에는 900 μg/mL 농도의 보조제 수산화알루미늄(명반)이 포함된다.
위약은 IMP와 동일한 희석제로 재구성하기 위해 만니톨 10 mg으로 만든 동결 건조 멸균 분말로 제공된다.
치료는 SC 경로를 통해 IMP 또는 위약을 6회 투여(14일 간격)하는 것으로 구성된다. 용량의 절반을 두 부위(양 상박, 팔의 측면부 영역, 팔꿈치와 어깨 사이 중간)에 동시에 투여한다.
용량 A는 각각 225 μg을 2회(각 팔 500 μL) 개별 주사하여 450 μg의 펩티드를 6회 SC 투여하는 것으로 구성된다. 24주차에 추가 투여(부스트)를 실시한다.
투여량 B는 각각 675 μg(각 팔 500 μL)을 2회 개별 주사하여 1350 μg의 펩티드를 6회 SC 투여하는 것으로 구성된다. 24주차에 추가 투여(부스트)를 실시한다.
위약 아암은 용량 A 및 B와 동일한 방식에 따라 6회 SC 투여와 맹검 유지를 위한 24주차 위약 부스트 투여로 구성된다.
환자의 여정
환자의 여정은 다음과 같으며 도 2에 나와 있다.
스크리닝 평가
V-1 방문(진단 후 9주 이내)
사전 동의서에 서명한 후 포함 및 제외 기준(T1D 진단 날짜 포함), 인구통계학적 데이터, 병력 및 수반되는 질병, 이전 및 현재 약물 목록을 확인한다.
조사자/지정인은 활력 징후를 확인하고, 완전한 신체 검사를 수행하고, 12-리드 심전도(ECG)를 수행한다.
참가자들은 SARS-CoV2 바이러스 존재 여부(PCR)를 위해 면봉으로 채취된다.
소변 딥스틱 분석을 수행하고 다음 선별 평가를 위해 혈액을 수집한다.
· C-펩티드(무작위);
· 자가항체;
· HLA 클래스 I/클래스 II 유전자형 결정;
· 면역 세포(PBMC) 단리;
· HbA1c;
· 안전 매개변수: 혈액학(CD4/CD8 비율을 포함한 전체 혈구 수치), 생화학(완전한 대사 프로필), 바이러스학;
· 모든 여성 참가자를 위한 혈청 임신 테스트.
치료 기간
방문 0(V0)부터 V7까지
V0(0일), V6(12주) 및 V7(24주)에 모든 참가자는 베타 세포 반응 측정으로 C-펩티드를 측정하기 위해 EnachePlus를 사용하여 120분간 혼합 식사 내성 테스트(MMTT)를 받는다.
대변 샘플을 수집한다.
HbA1c 측정을 위해 혈액 샘플을 채취한다.
신체 검사가 수행된다.
V7에서는 자가항체 검출을 위한 혈액 샘플을 수집한다.
각 방문에서 조사자/지정인은 병용 약물, 활력 징후, 전자 일기 데이터 및 마지막 방문 이후 발생한 부작용을 확인한다. 소변 딥스틱이 시행된다. 모든 여성의 경우 소변을 채취하여 임신 테스트를 실시한다.
안전 매개변수 및 PBMC 분리를 위해 혈액 샘플을 채취한다.
그런 다음 참가자는 V6를 제외하고 450 μg 또는 1350 μg의 IMP SC 용량 또는 위약을 받고 7일 동안(방문일 포함) 전자 일기에 나열된 부작용 보고에 대한 지침을 받는다.
추적 기간 및 연구 종료(EoS)
V6(12주차), V8(26주차) 및 V9(48주차)에서
각 방문에서 조사자/지정인은 마지막 방문 이후 발생한 병용 약물, 활력 징후, 전자 일기 데이터 및 부작용을 확인한다.
완전한 신체 검사가 수행된다1.
대변 샘플을 수집한다1.
소변 샘플을 채취하고 딥스틱 분석을 수행한다.
다음 평가를 위해 혈액을 수집한다.
· 면역 세포(PBMC) 단리
· HbA1c1
· 안전성 매개변수
· MMTT1
1 V8에서 제외
V9에서 자가항체 검출을 위한 혈액 샘플을 수집한다.
V6 및 V9에서 ECG가 수행된다.
EoS 방문(V9)에서 모든 여성 참가자는 소변 임신 검사를 받는다.
모든 참가자는 임상 종료 후 추가 12개월 동안 진행 중인 관찰 연구에 참여할 수 있으며, 진단 후 24개월에 1회 방문이 포함된다.
중간 분석 결과에 따라 수정을 통해 24개월의 추가 후속 방문이 이 프로토콜에 포함될 수 있다.
이 시험에 등록한 참가자는 이미 적절한 표준 치료(인슐린 치료)를 받고 있으며, 이 치료는 연구가 끝난 후에도 계속된다.
홈 수집
V0부터 EoS 방문까지(V9, 48주차)
· DBS가 DBS C-펩티드 측정을 위해 전체 48주 추적 관찰 동안 한 달에 두 번, EnachePlus 소비 전과 소비 후 60분에 집에서 수집된다(매 방문마다 새 DBS 카드가 배포된다).
· 참가자는 V0에서 연속 혈당 모니터링(CGM) 장치인 Dexcom G6을 받는다. 사전 정의된 기간 동안 최소한 V0, V6, V7 및 V9에 사용하도록 요구하면서 연구가 끝날 때까지 지속적으로 사용하도록 요청한다(방문할 때마다 새 센서가 배포됨).
참가자는 지침에 따라 인슐린 요법, 나열된 주사 부위 반응, 기타 AE 및 병용 약물과 관련하여 전자 일기를 작성한다.
실시예 3: 면역 분석 절차 및 결과
이 분석은 맹검 방식으로 수행되며 다음 결과가 전달된다:
치료에 의해 생성된 면역 시그니처(immune signature)의 구체적인 특징. 여기에는 다음 매개변수(완전 포괄적이지 않음)가 포함될 수 있다: 활성화 마커; 표현형 마커(예: 기억 마커); 사이토카인 프로필.
특히, 이 연구의 목적은 IMP 치료 후 프로인슐린 에피토프 C20-A1 특이적 CD4+ T 세포를 평가하고 특성화하는 것이다.
이러한 면역 분석은 2가지 실험실 방법, 즉 유세포 분석법(FACS)과 단일 세포 전사체 분석에 의존한다. 천연 프로인슐린 에피토프 C20-A1을 사용하여 PBMC를 시험관내에서 짧게 자극한 후, 세포를 표현형에 대한 활성화 및 특성화 마커 패널로 라벨링하고 분류한다.
혈액 수집
여섯 시점(면역화 전 방문 V-1 또는 기준선, 및 각각 2, 3, 4, 5 또는 6회 주사 후 2주째인 V2 내지 V6 방문)에 수집된 환자 혈액 샘플을 사용하여 프로인슐린 에피토프 C20-A1 자극에 반응하는 CD4+ T 세포를 정량화한다.
이어서, 10x 기술을 사용하여 단일 세포 전사체 분석을 적용하여 각 세포 전사체를 특성화하고 이를 다양한 하위 집단으로 클러스터링할 수 있다.
유세포 분석법
세포를 형광 색소 접합 항체의 다양한 조합으로 염색한다. LIVE/DEAD™ Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit(Thermo Fisher)를 사용하여 세포의 생존 가능성을 확인한다. 분석에는 FlowJo(Treestar®) 소프트웨어가 사용된다.
FACS 데이터 분석
프로인슐린 에피토프 자극에 반응하는 CD4+ T 세포를 정량화하기 위해 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석을 수행하였다. 반응 세포는 이펙터 표현형 또는 조절 표현형을 갖는 CD4+ T 세포로 확인되었다. 프로인슐린 에피토프 C20-A1 자극 샘플에서 "반응 CD4+ T 세포의 순 %"는 자극된 샘플에서 이펙터 또는 조절 표현형이 있는 CD4+ T 세포의 %에서 해당 비자극 샘플에서 이펙터 또는 조절 표현형이 있는 CD4+ T 세포의 %를 뺀 값으로 계산되었다. 통계 분석을 위해 환자를 IMP 치료 그룹과 위약 치료 그룹의 두 그룹으로 분리하였다. 각 시점에서 만-휘트니-윌콕슨(Mann-Whiteny-Wilcoxon) 순위 합계 검정을 수행하여 이들 두 그룹 사이에 반응하는 CD4+ T 세포의 순 % 사이에 유의미한 차이가 있는지 확인하였다. 치료가 시간 경과에 따라 반응하는 CD4+ T 세포의 순 %에 영향을 미치는지 여부를 테스트하기 위해 반복 측정 ANOVA 모델을 Imotope 및 위약 치료 환자에 대해 별도로 데이터에 적용하였다. 반복 측정 ANOVA 분석에서 구형성 가정이 충족되는지 확인하기 위해 모클리(Mauchly) 구형성 검정을 사용하였다. 구형도 조건이 충족되지 않는 경우 그린하우스-가이써(Greenhouse-Geisser) 및 현트-펠트(Huynd-Feldt) 절차를 사용하여 p-값을 수정하고 두 p-값 중 보다 보전적인 방법을 사용하였다. 모든 통계 분석은 R 통계 환경에서 수행되었다.
결과
여기에 제시된 데이터는 IMP(450 및 1350 μg)로 치료받은 환자 16명과 위약으로 치료받은 환자 8명을 포함하여 24명의 환자로부터 얻은 것이다. 프로인슐린 에피토프 C20-A1 자극에 반응하는 CD4+ T 세포의 순 %에 대한 통계적 분석(도 3)은 IMP 치료가 여러 시점에 걸쳐 반응하는 CD4+ T 세포의 %에 통계적으로 유의미한 영향을 미쳤음을 보여준 반면(반복 측정 ANOVA p-값은 GG 구형성 보정 후 0.046 또는 HF 구형성 보정 후 0.037), 위약 처리에서는 그러한 효과가 나타나지 않았다(반복 측정 ANOVA p-값은 GG 구형성 보정 후 0.337 또는 HF 구형성 보정 후 0.339). IMP 치료 환자에서 반응하는 CD4+ T 세포의 존재가 더 높다는 것은 IMP 특이적 세포용해성 CD4+ T 세포가 유도될 수 있음을 나타낸다. 개별 시점에서, 방문 3 내지 6(3 내지 6회 투여의 영향을 측정) 사이에 위약 치료 환자와 비교하여 치료 IMP에서 반응하는 CD4+ T 세포 순 %가 더 큰 경향이 있었다. 비모수적 만-희트니-윌콕슨 순위 합계 검정을 사용하여 개별 시점에 IMP와 위약 치료 환자 사이의 반응 CD4+ T 세포 %의 통계적 비교는 통계적 유의성에 도달하지 못하였다. 그러나, p-값은 V3(p = 0.188)에서 V4(p = 0.113), V5(p = 0.078)로 감소하였다. 이는 6회 투여 후 반응이 안정되기 전에 3, 4, 5회 투여로 시간이 지남에 따라 반응이 지속적으로 개선되는 경향을 나타낼 수 있다. 따라서, 5회 또는 6회 투여 일정은 T1D와 같은 자가면역 질환을 제어하는 데 도움이 될 수 있는 지속적인 CD4+ T 세포 반응을 제공한다.
SEQUENCE LISTING <110> IMCYSE SA <120> IMPROVED METHODS OF TREATMENT USING IMMUNOGENIC PEPTIDES <130> IMCY-034-PCT <150> EP21177145.6 <151> 2021-06-01 <160> 248 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <400> 1 Cys Xaa Xaa Xaa 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 2 Xaa Xaa Xaa Cys 1 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 4 Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp Lys Ile 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 5 Phe Leu Arg Val Pro Ser Trp Lys Ile 1 5 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(8) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (10)..(10) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (12)..(13) <223> X can be any amino acid <400> 6 Cys Xaa Xaa Cys Xaa Cys Xaa Xaa Cys Xaa Cys Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(7) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (10)..(11) <223> X can be any amino acid <400> 7 Cys Xaa Xaa Cys Cys Xaa Xaa Cys Cys Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(9) <223> X can be any amino acid <400> 8 Cys Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(8) <223> X can be any amino acid <400> 9 Cys Xaa Cys Cys Xaa Cys Cys Xaa Cys Cys 1 5 10 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 10 Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp 1 5 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 11 Phe Leu Arg Val Pro Ser Trp 1 5 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can by any amino acid <400> 12 Xaa Xaa Xaa Cys 1 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 13 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 14 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(7) <223> X can be any amino acid <400> 16 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 17 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 17 Xaa Xaa Xaa Cys 1 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 18 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 19 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 20 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(7) <223> X can be any amino acid <400> 21 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(8) <223> X can be any amino acid <400> 22 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 23 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <400> 23 Xaa Xaa Xaa Cys 1 <210> 24 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any acid <400> 24 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 26 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(7) <223> X can be any amino acid <400> 27 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(8) <223> X can be any amino acid <400> 28 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(9) <223> X can be any amino acid <400> 29 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <400> 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 31 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 32 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(7) <223> X can be any amino acid <400> 33 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(8) <223> X can be any amino acid <400> 34 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(9) <223> X can be any amino acid <400> 35 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(10) <223> X can be any amino acid <400> 36 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 37 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <400> 37 Cys Xaa Xaa Xaa 1 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(4) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X is C, S, or T <400> 38 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(6) <223> X is C, S, or T <400> 39 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is C, S, or T <400> 40 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(7) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(8) <223> X is C, S, or T <400> 41 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 42 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <400> 42 Xaa Cys Xaa Xaa 1 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(4) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X is C, S, or T <400> 43 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 44 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(6) <223> X is C, S, or T <400> 44 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is C, S, or T <400> 45 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 46 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(7) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(8) <223> X is C, S, or T <400> 46 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(8) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (9)..(9) <223> X is C, S, or T <400> 47 Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 48 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C, S, or T <400> 48 Xaa Xaa Cys Xaa 1 <210> 49 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X is C, S, or T <400> 49 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa 1 5 <210> 50 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(6) <223> X is C, S, or T <400> 50 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is C, S, or T <400> 51 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(7) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(8) <223> X is C, S, or T <400> 52 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(8) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (9)..(9) <223> X is C, S, or T <400> 53 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(2) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(9) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (10)..(10) <223> X is C, S, or T <400> 54 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 55 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X is C, S, or T <400> 55 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 <210> 56 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(6) <223> X is C, S, or T <400> 56 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa 1 5 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is C, S, or T <400> 57 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 58 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(7) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (8)..(8) <223> X is C, S, or T <400> 58 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(8) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (9)..(9) <223> X is C, S, or T <400> 59 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artficial Sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(9) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (10)..(10) <223> X is C, S, or T <400> 60 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 61 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(10) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (11)..(11) <223> X is C, S, or T <400> 61 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is F, W, H, or Y <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is I, L, M, or V <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is F, W, T, H, Y <400> 62 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is F, W <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is I, L, M, or V <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(6) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (7)..(7) <223> X is F, W <400> 63 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 64 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 64 Xaa Xaa Xaa Xaa 1 <210> 65 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 65 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 66 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 66 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is C or S or T <400> 67 Cys Xaa Xaa Xaa Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln 1 5 10 15 Lys <210> 68 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X is C, S or T <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 68 Xaa Xaa Xaa Cys Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln 1 5 10 15 Lys <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 69 Cys Xaa Xaa Cys Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln 1 5 10 15 Lys <210> 70 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(4) <223> X can be any amino acid <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X is C, S or T <400> 70 His Cys Xaa Xaa Xaa Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Gln Lys <210> 71 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X is C, S or T <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 71 His Xaa Xaa Xaa Cys Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Gln Lys <210> 72 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 72 His Cys Xaa Xaa Cys Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Gln Lys <210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 73 His Cys Pro Tyr Cys Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Gln Lys Arg Gly 20 <210> 74 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Homo sapiens Myelin-oligodendrocyte glycoprotein (MOG) <400> 74 Gly Gln Phe Arg Val Ile Gly Pro Arg His Pro Ile Arg Ala Leu Val 1 5 10 15 Gly Asp Glu Val Glu Leu Pro Cys Arg Ile Ser Pro Gly Lys Asn Ala 20 25 30 Thr Gly Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val 35 40 45 His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Asp Gln Asp Gly Asp Gln Ala Pro Glu 50 55 60 Tyr Arg Gly Arg Thr Glu Leu Leu Lys Asp Ala Ile Gly Glu Gly Lys 65 70 75 80 Val Thr Leu Arg Ile Arg Asn Val Arg Phe Ser Asp Glu Gly Gly Phe 85 90 95 Thr Cys Phe Phe Arg Asp His Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Ala Met Glu 100 105 110 Leu Lys Val Glu Asp Pro Phe Tyr Trp Val Ser Pro Gly Val Leu Val 115 120 125 Leu Leu Ala Val Leu Pro Val Leu Leu Leu Gln Ile Thr Val Gly Leu 130 135 140 Ile Phe Leu Cys Leu Gln Tyr Arg Leu Arg Gly Lys Leu Arg Ala Glu 145 150 155 160 Ile Glu Asn Leu His Arg Thr Phe Asp Pro His Phe Leu Arg Val Pro 165 170 175 Cys Trp Lys Ile Thr Leu Phe Val Ile Val Pro Val Leu Gly Pro Leu 180 185 190 Val Ala Leu Ile Ile Cys Tyr Asn Trp Leu His Arg Arg Leu Ala Gly 195 200 205 Gln Phe Leu Glu Glu Leu Arg Asn Pro Phe 210 215 <210> 75 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 75 Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys 1 5 10 15 Asp Gln Asp Gly Asp 20 <210> 76 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 76 Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys 1 5 10 15 <210> 77 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 77 Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Asp Gln 1 5 10 15 <210> 78 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 78 Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Asp Gln Asp 1 5 10 15 <210> 79 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 79 Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Asp Gln Asp Gly 1 5 10 15 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 80 Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys 1 5 <210> 81 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 81 Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu 1 5 10 15 Tyr Arg Asn Gly Lys 20 <210> 82 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 82 Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu 1 5 10 15 Tyr Arg Asn Gly Lys 20 <210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 83 Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val 1 5 <210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 84 Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val 1 5 <210> 85 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 85 His Cys Pro Tyr Cys Val Arg Tyr Phe Leu Arg Val Pro Ser Trp Lys 1 5 10 15 Ile Thr Leu Phe 20 <210> 86 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 86 His Cys Pro Tyr Cys Val Arg Tyr Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp Lys 1 5 10 15 Ile Thr Leu Phe 20 <210> 87 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 87 Lys His Cys Pro Tyr Cys Val Arg Tyr Phe Leu Arg Val Pro Ser Trp 1 5 10 15 Lys Ile Thr Leu Phe Lys Lys 20 <210> 88 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 88 Lys His Cys Pro Tyr Cys Val Arg Tyr Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp 1 5 10 15 Lys Ile Thr Leu Phe Lys Lys 20 <210> 89 <211> 277 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Homo sapiens proteolipid protein (PLP) <400> 89 Met Gly Leu Leu Glu Cys Cys Ala Arg Cys Leu Val Gly Ala Pro Phe 1 5 10 15 Ala Ser Leu Val Ala Thr Gly Leu Cys Phe Phe Gly Val Ala Leu Phe 20 25 30 Cys Gly Cys Gly His Glu Ala Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu 35 40 45 Thr Tyr Phe Ser Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr Glu Tyr Leu Ile Asn Val 50 55 60 Ile His Ala Phe Gln Tyr Val Ile Tyr Gly Thr Ala Ser Phe Phe Phe 65 70 75 80 Leu Tyr Gly Ala Leu Leu Leu Ala Glu Gly Phe Tyr Thr Thr Gly Ala 85 90 95 Val Arg Gln Ile Phe Gly Asp Tyr Lys Thr Thr Ile Cys Gly Lys Gly 100 105 110 Leu Ser Ala Thr Val Thr Gly Gly Gln Lys Gly Arg Gly Ser Arg Gly 115 120 125 Gln His Gln Ala His Ser Leu Glu Arg Val Cys His Cys Leu Gly Lys 130 135 140 Trp Leu Gly His Pro Asp Lys Phe Val Gly Ile Thr Tyr Ala Leu Thr 145 150 155 160 Val Val Trp Leu Leu Val Phe Ala Cys Ser Ala Val Pro Val Tyr Ile 165 170 175 Tyr Phe Asn Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys 180 185 190 Thr Ser Ala Ser Ile Gly Ser Leu Cys Ala Asp Ala Arg Met Tyr Gly 195 200 205 Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn Leu 210 215 220 Leu Ser Ile Cys Lys Thr Ala Glu Phe Gln Met Thr Phe His Leu Phe 225 230 235 240 Ile Ala Ala Phe Val Gly Ala Ala Ala Thr Leu Val Ser Leu Leu Thr 245 250 255 Phe Met Ile Ala Ala Thr Tyr Asn Phe Ala Val Leu Lys Leu Met Gly 260 265 270 Arg Gly Thr Lys Phe 275 <210> 90 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 90 His Glu Ala Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser 1 5 10 15 Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr Glu Tyr Leu Ile 20 25 <210> 91 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 91 Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala 1 5 10 15 Ser Ile Gly Ser Leu Cys Ala Asp Ala Arg Met Tyr 20 25 <210> 92 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 92 Gly Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn 1 5 10 15 Leu Leu Ser Ile Cys Lys Thr Ala Glu Phe Gln Met 20 25 <210> 93 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 93 Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser Lys Asn Tyr 1 5 10 15 Gln Asp Tyr <210> 94 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 94 Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser 1 5 10 15 Ile Gly Ser <210> 95 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 95 Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn 1 5 10 15 <210> 96 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 96 Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser Lys Asn 1 5 10 15 <210> 97 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 97 Thr Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser Lys Asn Tyr Gln Asp 1 5 10 15 <210> 98 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 98 Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 99 Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala 1 5 10 15 <210> 100 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 100 Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser 1 5 10 15 <210> 101 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 101 Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser Ile 1 5 10 15 <210> 102 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 102 Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 <210> 103 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 103 Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser Ile Gly Ser 1 5 10 15 <210> 104 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 104 Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn 1 5 10 15 <210> 105 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 105 His Glu Ala Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu Thr Tyr Phe Ser 1 5 10 15 Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr Glu Tyr Leu Ile 20 25 <210> 106 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 106 Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala 1 5 10 15 Ser Ile Gly Ser Leu Cys Ala Asp Ala Arg Met Tyr 20 25 <210> 107 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 107 Gly Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn 1 5 10 15 Leu Leu Ser Ile Cys Lys Thr Ala Glu Phe Gln Met 20 25 <210> 108 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 108 Pro Arg His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly Arg Phe 1 5 10 15 <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 109 Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr 1 5 10 15 Pro <210> 110 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 110 Arg Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val 1 5 10 15 <210> 111 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 111 Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe 1 5 10 15 <210> 112 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 112 Leu Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Met Ala Arg Arg 1 5 10 15 <210> 113 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 113 Thr Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr 1 5 10 15 Pro Arg Thr Pro 20 <210> 114 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 114 Thr Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val 1 5 10 15 <210> 115 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 115 Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr 1 5 10 15 <210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 116 Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro 1 5 10 15 <210> 117 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 117 Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg 1 5 10 15 <210> 118 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 118 Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr 1 5 10 15 <210> 119 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 119 Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 15 <210> 120 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 120 Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala 1 5 10 15 Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly Gly 20 25 <210> 121 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 121 Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp 1 5 10 15 <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 122 Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala 1 5 10 15 <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 123 Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln 1 5 10 15 <210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 124 Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly 1 5 10 15 <210> 125 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 125 Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr 1 5 10 15 <210> 126 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 126 Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu 1 5 10 15 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 127 Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser 1 5 10 15 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 128 His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys 1 5 10 15 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 129 Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile 1 5 10 15 <210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 130 Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe 1 5 10 15 <210> 131 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 131 Phe Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys 1 5 10 15 <210> 132 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 132 Lys Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu 1 5 10 15 <210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 133 Gly Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly 1 5 10 15 <210> 134 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 134 Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 <210> 135 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 135 Leu Ser Arg Phe Ser Trp Gly Ala Glu Gly Gln Arg Pro Gly 1 5 10 <210> 136 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Homo sapiens MBP <400> 136 Met Ala Ser Gln Lys Arg Pro Ser Gln Arg His Gly Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu Pro Arg 20 25 30 His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly Arg Phe Phe Gly Gly 35 40 45 Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys Asp Ser His His Pro 50 55 60 Ala Arg Thr Ala His Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Lys Ser His Gly Arg 65 70 75 80 Thr Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr 85 90 95 Pro Arg Thr Pro Pro Pro Ser Gln Gly Lys Gly Arg Gly Leu Ser Leu 100 105 110 Ser Arg Phe Ser Trp Gly Ala Glu Gly Gln Arg Pro Gly Phe Gly Tyr 115 120 125 Gly Gly Arg Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly 130 135 140 Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly Gly Arg 145 150 155 160 Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Met Ala Arg Arg 165 170 <210> 137 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 137 Cys Xaa Xaa Cys 1 <210> 138 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 138 Ser Xaa Xaa Cys 1 <210> 139 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 139 Thr Xaa Xaa Cys 1 <210> 140 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 140 Cys Xaa Xaa Ser 1 <210> 141 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 141 Cys Xaa Xaa Thr 1 <210> 142 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 142 Lys Lys Cys Cys 1 <210> 143 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 143 Arg Lys Cys Cys 1 <210> 144 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 144 Lys Arg Cys Cys 1 <210> 145 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 145 Arg Arg Cys Cys 1 <210> 146 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 146 Lys Cys Xaa Cys 1 <210> 147 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 147 Lys Lys Cys Xaa Cys 1 5 <210> 148 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 148 Arg Cys Xaa Cys 1 <210> 149 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 149 Arg Arg Cys Xaa Cys 1 5 <210> 150 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 150 Arg Lys Cys Xaa Cys 1 5 <210> 151 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 151 Lys Arg Cys Xaa Cys 1 5 <210> 152 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 152 Lys Cys Lys Cys 1 <210> 153 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 153 Lys Lys Cys Lys Cys 1 5 <210> 154 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 154 Lys Cys Arg Cys 1 <210> 155 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 155 Lys Lys Cys Arg Cys 1 5 <210> 156 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 156 Arg Cys Arg Cys 1 <210> 157 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 157 Arg Arg Cys Arg Cys 1 5 <210> 158 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 158 Arg Lys Cys Lys Cys 1 5 <210> 159 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 159 Lys Arg Cys Lys Cys 1 5 <210> 160 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 160 His Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 161 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 161 Lys Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 162 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 162 Arg Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 163 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 163 His Cys Gly His Cys 1 5 <210> 164 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 164 Lys Cys Gly His Cys 1 5 <210> 165 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 165 Arg Cys Gly His Cys 1 5 <210> 166 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 166 Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 167 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 167 Lys Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 168 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 168 Lys His Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 169 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 169 Arg Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 170 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 170 His Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 171 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 171 Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 172 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 172 Lys Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 173 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 173 Arg Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 174 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 174 His Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 175 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 175 Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 176 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 176 Lys Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 177 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 177 Arg Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 178 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 178 His Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 179 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 179 Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 180 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 180 Lys Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 181 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 181 Arg Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 182 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 182 His Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 183 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 183 Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 184 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 184 Lys Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 185 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 185 Arg Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 186 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 186 His Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 187 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 187 Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 188 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 188 Lys Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 189 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 189 Arg Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 190 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 190 His Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 191 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 191 Leu Ala Val Leu 1 <210> 192 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 192 Thr Val Gln Ala 1 <210> 193 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 193 Gly Ala Val His 1 <210> 194 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 194 Xaa Ala Val Leu 1 <210> 195 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 195 Leu Xaa Val Leu 1 <210> 196 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 196 Leu Ala Xaa Leu 1 <210> 197 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 197 Leu Ala Val Xaa 1 <210> 198 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 198 Xaa Val Gln Ala 1 <210> 199 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 199 Thr Xaa Gln Ala 1 <210> 200 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 200 Thr Val Xaa Ala 1 <210> 201 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 201 Thr Val Gln Xaa 1 <210> 202 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 202 Xaa Ala Val His 1 <210> 203 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 203 Gly Xaa Val His 1 <210> 204 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X is any amino acid <400> 204 Gly Ala Xaa His 1 <210> 205 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X is any amino acid <400> 205 Gly Ala Val Xaa 1 <210> 206 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 206 Pro Ala Phe Pro Leu 1 5 <210> 207 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 207 Asp Gln Gly Gly Glu 1 5 <210> 208 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 208 Xaa Ala Phe Pro Leu 1 5 <210> 209 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 209 Pro Xaa Phe Pro Leu 1 5 <210> 210 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 210 Pro Ala Xaa Pro Leu 1 5 <210> 211 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 211 Pro Ala Phe Xaa Leu 1 5 <210> 212 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAFPX <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 212 Pro Ala Phe Pro Xaa 1 5 <210> 213 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 213 Xaa Gln Gly Gly Glu 1 5 <210> 214 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 214 Asp Xaa Gly Gly Glu 1 5 <210> 215 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 215 Asp Gln Xaa Gly Glu 1 5 <210> 216 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 216 Asp Gln Gly Xaa Glu 1 5 <210> 217 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 217 Asp Gln Gly Gly Xaa 1 5 <210> 218 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 218 Asp Ile Ala Asp Lys Tyr 1 5 <210> 219 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(1) <223> X can be any amino acid <400> 219 Xaa Ile Ala Asp Lys Tyr 1 5 <210> 220 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (2)..(2) <223> X can be any amino acid <400> 220 Asp Xaa Ala Asp Lys Tyr 1 5 <210> 221 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (3)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 221 Asp Ile Xaa Asp Lys Tyr 1 5 <210> 222 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (4)..(4) <223> X can be any amino acid <400> 222 Asp Ile Ala Xaa Lys Tyr 1 5 <210> 223 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (5)..(5) <223> X can be any amino acid <400> 223 Asp Ile Ala Asp Xaa Tyr 1 5 <210> 224 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (6)..(6) <223> X can be any amino acid <400> 224 Asp Ile Ala Asp Lys Xaa 1 5 <210> 225 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 225 Lys Cys His Cys 1 <210> 226 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 226 Arg Cys Lys Cys 1 <210> 227 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthethic peptide <400> 227 Cys Pro Tyr Cys 1 <210> 228 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 228 His Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 229 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 229 Lys Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 230 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 230 Arg Cys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 231 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 231 Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 232 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 232 Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 233 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 233 Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 234 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 234 Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 235 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 235 Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 236 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 236 Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 237 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 237 Arg Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 238 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 238 Arg Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 239 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 239 Arg Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 240 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 240 Arg Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 241 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 241 Arg Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 242 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 242 Arg Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5 <210> 243 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 243 Lys Cys Arg Pro Tyr Cys 1 5 <210> 244 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 244 Lys Cys Pro Arg Tyr Cys 1 5 <210> 245 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 245 Lys Cys Pro Tyr Arg Cys 1 5 <210> 246 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 246 Lys Cys Lys Pro Tyr Cys 1 5 <210> 247 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 247 Lys Cys Pro Lys Tyr Cys 1 5 <210> 248 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 248 Lys Cys Pro Tyr Lys Cys 1 5

Claims (32)

  1. 대상체에서 자가면역 장애, 탈수초 장애(demyelinating disorder), 동종이식(allograft) 또는 이식 거부반응(transplant rejection), 종양 또는 암, 세포내 병원체로의 감염, 가용성 동종인자(soluble allofactor)에 대한 면역 반응, 알레르겐(allergen) 노출에 대한 면역 반응 또는 유전자 치료 또는 유전자 예방접종에 사용되는 바이러스 벡터에 대한 면역 반응으로부터 선택되는 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는데 사용하기 위한 9 내지 50개 아미노산 길이의 면역원성 펩티드로서, 상기 펩티드는 산화환원효소 모티프 및 이 모티프로부터 0 내지 7개의 아미노산으로 분리된, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원의 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 서열을 포함하고, 여기서 상기 산화환원효소 모티프는 다음 모티프를 포함하고:
    Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
    여기서 n은 2, 1, 0, 3, 4, 5, 또는 6, 바람직하게는 2, 1, 0, 또는 3으로부터 선택되는 정수이고,
    m은 0 내지 2의 정수이고,
    C는 시스테인, S는 세린, T는 트레오닌, X는 임의의 아미노산, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 염기성 아미노산을 나타내고,
    상기 면역원성 펩티드는 두 용량 사이에 약 12일 내지 약 28일의 간격을 두고 300 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드가 적어도 5회 용량으로 투여되는 면역원성 펩티.
  2. 제1항에 있어서, 상기 투여는 근육내 또는 피하 주사를 통해 수행되는 면역원성 펩티드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 면역원성 펩티드는 300 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드가 2회 용량 사이에 약 2 내지 3주의 간격을 두고 6회 용량의 근육내 또는 피하 주사를 통해 투여되는 면역원성 펩티드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 FLRVPCWKI (서열 번호 4), 및 FLRVPSWKI (서열 번호 5), 또는 NKT 세포 에피토프 FLRVPCW (서열 번호 10), 및 FLRVPSW (서열 번호 11)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열이 아니거나 이를 포함하지 않는 면역원성 펩티드.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 MOG 항원 아미노산 서열로부터 유래된 서열이 아닌 면역원성 펩티드.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 MS가 아닌 면역원성 펩티드.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 푸마레이트에 의해 치료되는 것으로 알려진 질환이 아니거나, 푸마레이트 관련 질환 또는 장애가 아닌 면역원성 펩티드.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 MS이고, 상기 치료는 본원에 정의된 바와 같은 푸마레이트 화합물의 투여를 포함하지 않는 면역원성 펩티드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 펩티드 300 내지 1500 μg의 각각의 용량이 약 12 내지 약 16일, 또는 약 2주의 간격으로 2회 용량으로 투여되는 면역원성 펩티드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 각 용량은 다음을 포함하는 면역원성 펩티드:
    300 내지 600 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    600 내지 800 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    800 내지 1000 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    1000 내지 1200 μg의 상기 면역원성 펩티드; 또는
    1200 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량은 450 또는 1350 μg의 상기 면역원성 펩티드를 함유하는 면역원성 펩티드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량은 용량 사이에 약 12 내지 약 16일 또는 약 2주의 간격을 두고 6회 투여되는 면역원성 펩티드.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 시작으로부터 계산하여 약 22주 내지 30주차에 상기 면역원성 펩티드 300 내지 1500 μg의 용량으로 부스트 투여(boost administration)가 수행되는 면역원성 펩티드.
  14. 제13항항에 있어서, 상기 부스트 투여는 치료 시작으로부터 계산하여 약 22주 내지 26주차에 수행되는 면역원성 펩티드.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 부스트는 다음을 포함하는 면역원성 펩티드:
    300 내지 600 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    600 내지 800 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    800 내지 1000 μg의 상기 면역원성 펩티드;
    1000 내지 1200 μg의 상기 면역원성 펩티드; 또는
    1200 내지 1500 μg의 상기 면역원성 펩티드.
  16. 제15항에 있어서, 상기 부스트는 450 또는 1350 μg의 상기 면역원성 펩티드를 함유하는 면역원성 펩티드.
  17. 제15항에 있어서, 상기 부스트는 치료 약 23주차 내지 25주차, 보다 바람직하게는 치료 약 24주차에 투여되는 면역원성 펩티드.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 용량의 절반이 두 부위(양 상박, 바람직하게는 팔의 측면부 영역, 보다 바람직하게는 팔꿈치와 어깨 사이 중간)에 동시에 투여되는 면역원성 펩티드.
  19. 9 내지 50개 아미노산 길이의 면역원성 펩티드를 사용하여 대상체에서 자가면역 장애, 탈수초 장애, 동종이식 또는 이식 거부반응, 종양 또는 암, 세포내 병원체로의 감염, 가용성 동종인자에 대한 면역 반응, 알레르겐 노출에 대한 면역 반응 또는 유전자 치료 또는 유전자 예방접종에 사용되는 바이러스 벡터에 대한 면역 반응으로부터 선택되는 질환 또는 장애의 치료에 대한 환자의 반응을 분석하기 위한 시험관내 방법으로서, 상기 펩티드는 산화환원효소 모티프 및 이 모티프로부터 0 내지 7개의 아미노산으로 분리된, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원의 MHC 클래스 II T 세포 에피토프 서열을 포함하며,
    여기서 상기 산화환원효소 모티프는 다음 모티프를 포함하고:
    Zm-[CST]-Xn-C- 또는 Zm-C-Xn-[CST]-,
    여기서 n은 0 내지 6의 정수, 바람직하게는 2, 1, 0 또는 3이고,
    m은 0 내지 2의 정수이고,
    C는 시스테인, S는 세린, T는 트레오닌, X는 임의의 아미노산, Z는 임의의 아미노산, 바람직하게는 염기성 아미노산을 나타내고,
    상기 방법은 다음 시점에 상기 면역원성 펩티드로 치료받는 환자로부터 채취한 샘플을 분석하는 것을 포함하는 방법:
    - 치료 0일째,
    - 치료 약 11 내지 13주차, 예컨대 12주차,
    - 치료 약 23 내지 25주차, 예컨대 24주차,
    - 치료 약 47 내지 49주차, 예컨대 48주차.
  20. 제19항에 있어서, 상기 환자의 샘플을 치료 시작 약 8 내지 10주 전, 바람직하게는 치료 시작 약 9주 전에 분석하는 시험관내 방법.
  21. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 또는 제20항에 따른 방법으로서, 상기 자가면역 질환은 제1형 당뇨병(T1D) 또는 류마티스 관절염(RA)인 면역원성 펩티드 또는 방법.
  22. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 T1D이고, 상기 펩티드 내 T 세포 에피토프는 (프로-)인슐린으로부터의 MHC 클래스 II T 세포 에피토프이고, 바람직하게는 상기 에피토프의 아미노산 서열은 아미노산 서열 LALEGSLQK [서열 번호 3]에 의해 정의되는 면역원성 펩티드 또는 방법.
  23. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 상기 환자는 동형접합성(homozygous) 또는 이형접합성(heterozygous) HLA 유형 DR3 또는 DR4 양성인 면역원성 펩티드.
  24. 제1항 내지 제3항 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 상기 펩티드는 Cxx[CST]SLQPLALEGSLQK [서열 번호 67], [CST]xxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호68], CxxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호 69], HCxx[CST]SLQPLALEGSLQK [서열 번호70], H[CST]xxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호71], HCxxCSLQPLALEGSLQK [서열 번호 72], 및 HCPYCSLQPLALEGSLQKRG [서열 번호 73]로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 면역원성 펩티드 또는 방법.
  25. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 RA이고 상기 펩티드 내 T 세포 에피토프는 GRP78, HSP60, 60 kDa 샤페로닌 2, 겔솔린, 치티나제-3-유사 단백질 1, 카텝신 S, 혈청 알부민, 빈쿨린 및 카텝신 D로 이루어진 군으로부터 선택된 항원성 단백질로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프인, 면역원성 펩티드 또는 방법.
  26. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 건선이고, 상기 항원성 단백질은 ADAMTSL5, PLA2G4D, 케라틴(Keratin), 예컨대 케라틴 14 또는 케라틴 17, Triticum aestivum 유래 항원, Pso p27, 카텔리시딘(cathelicidin) 항균 펩티드, ceutrophil defensin 1 및 LL37, 바람직하게는 LL37로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역원성 펩티드 또는 방법.
  27. 제1항 내지 제3항 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 면역원성 펩티드 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 방법으로서, 자가면역 질환은 MS이고, 상기 펩티드 내 T-세포 에피토프는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG), 미엘린 염기성 단백질(MBP), 프로테오리피드(Proteolipid) 단백질(PLP), 미엘린 관련 항원(MAG), 희소돌기아교세포 특이적 단백질(OSP), 미엘린 관련 희돌기아교세포 염기성 단백질(MOBP), 2',3'-사이클릭 뉴클레오티드 3'-포스포디에스테라제(CNPase), S100β 단백질 및 트랜스알돌라제 H, 바람직하게는 MOG를 포함하는 군으로부터 선택된 항원성 단백질로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프이거나; 또는
    자가면역 질환은 NMO이고, 상기 펩티드 중의 T 세포 에피토프는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)로부터의 MHC 클래스 II T 세포 또는 NKT 세포 에피토프이고,
    바람직하게는 상기 에피토프의 아미노산 서열은 아미노산 서열 FLRVPSWKI (서열 번호 4)에 의해 정의되거나, 또는
    상기 면역원성 펩티드는 다음 서열 중 어느 하나를 갖는 면역원성 펩티드 또는 방법:
    HCPYCVRYFLRVPSWKITLF (서열 번호 85),
    HCPYCVRYFLRVPCWKITLF (서열 번호 86),
    KHCPYCVRYFLRVPSWKITLFKK (서열 번호 87), 또는
    KHCPYCVRYFLRVPCWKITLFKK (서열 번호 88).
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 상기 각각의 펩티드를 인코딩하는 핵산으로 투여되는 면역원성 펩티드.
  29. 제28항에 있어서, 면역원성 펩티드를 인코딩하는 상기 핵산은 단리된 데옥시리보핵산(DNA), 플라스미드 DNA(pDNA), 코딩 DNA(cDNA), 리보핵산(RNA), 메신저 RNA(mRNA) 또는 N(1)-메틸-슈도우리딘(m1ψ)을 포함하는 비면역원성 mRNA와 같은 이의 변형된 버전으로부터 선택되는 면역원성 펩티드.
  30. 제29항에 있어서, 상기 핵산은 선택적으로 유전자 치료에 사용될 수 있거나 캡슐화 또는 네이키드(naked) DNA 또는 RNA의 형태로 존재할 수 있는 (바이러스) 벡터 또는 플라스미드에 통합된 발현 카세트의 일부일 수 있는 면역원성 펩티드.
  31. 자가면역 장애, 탈수초 장애, 이식 거부 또는 암을 예방하거나 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 정의된 면역원성 펩티드 또는 이를 인코딩하는 핵산의 용도로서, 상기 면역원성 펩티드 또는 핵산은 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 투여 계획에 따라 투여되는 용도.
  32. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 정의된 면역원성 펩티드 또는 이를 인코딩하는 핵산을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 자가면역 장애, 탈수초 장애, 이식 거부 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 상기 면역원성 펩티드 또는 핵산은 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 투여 계획에 따라 투여되는 방법.
KR1020237044841A 2021-06-01 2022-06-01 면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법 KR20240015672A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP21177145.6 2021-06-01
EP21177145 2021-06-01
PCT/EP2022/064848 WO2022253870A1 (en) 2021-06-01 2022-06-01 Improved methods of treatment using immunogenic peptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240015672A true KR20240015672A (ko) 2024-02-05

Family

ID=76502662

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237044841A KR20240015672A (ko) 2021-06-01 2022-06-01 면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP4347020A1 (ko)
KR (1) KR20240015672A (ko)
CN (1) CN117651711A (ko)
AU (1) AU2022286630A1 (ko)
BR (1) BR112023024546A2 (ko)
CA (1) CA3220752A1 (ko)
IL (1) IL308677A (ko)
WO (1) WO2022253870A1 (ko)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2476435T (pt) 2006-08-11 2018-03-05 Life Sciences Res Partners Vzw Péptidos imunogénicos e a sua utilização em distúrbios imunitários
US20110111395A1 (en) 2008-02-14 2011-05-12 Jean-Marie Saint-Remy Cd4+cells with cytolytic properties
GB201300683D0 (en) 2013-01-15 2013-02-27 Apitope Int Nv Peptide
GB201418433D0 (en) 2014-10-17 2014-12-03 Imcyse Sa Novel immunogenic peptides
KR20190126798A (ko) 2017-03-09 2019-11-12 임시스 에스에이 당뇨병 치료를 위한 펩티드 및 방법

Also Published As

Publication number Publication date
IL308677A (en) 2024-01-01
AU2022286630A9 (en) 2023-12-14
EP4347020A1 (en) 2024-04-10
BR112023024546A2 (pt) 2024-02-15
AU2022286630A1 (en) 2023-12-07
WO2022253870A1 (en) 2022-12-08
CN117651711A (zh) 2024-03-05
CA3220752A1 (en) 2022-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7090335B2 (ja) 治療剤に対する免疫応答を除去するための改善された方法及び化合物
RU2761653C2 (ru) Пептиды и способы для лечения диабета
JP2022513021A (ja) 向上した酸化還元酵素モチーフを有する免疫原性ペプチド
US20230340061A1 (en) Peptides and methods for the treatment of multiple sclerosis
US20230136112A1 (en) Methods for stratifying diabetes patients
US20230181638A1 (en) Immunogenic peptides with new oxidoreductase motifs
JP2023525276A (ja) 延長された酸化還元酵素モチーフを有する免疫原性ペプチド
KR20240015672A (ko) 면역원성 펩티드를 사용한 개선된 치료 방법
JP2023525079A (ja) フマレート関連疾患の併用療法
JP5189593B2 (ja) 無差別ＨＥＲ−２／ＮｅｕＣＤ４Ｔ細胞エピトープ
TW202306971A (zh) 用於治療視神經脊髓炎之肽及方法
AU2022282551A1 (en) Methods of treating or preventing autoimmune diseases