JP2024515630A - ５－［（１，１－ジオキシド－４－チオモルホリニル）メチル］－２－フェニル－ｎ－（テトラヒドロ－２ｈ－ピラン－４－イル）－１ｈ－インドール－７－アミンの新規結晶形 - Google Patents

Abstract

本発明は、化学式１の化合物の無定形および他の結晶形に比べて物理化学的に優れた特性を有する化学式１の化合物の結晶形Ａに関する。本発明による化学式１の化合物の結晶形Ａは、無定形または他の結晶形に比べて長期間の過酷な条件でも変性せず、収着性が低く、圧力や粉砕にも結晶形が変わらないため、製剤化に有利であり、結晶形自体の安定性も非常に優れていて、長期間の保管に有用である。

Description

本発明は、下記化学式１の化合物、５－［（１，１－ジオキシド－４－チオモルホリニル）メチル］－２－フェニル－Ｎ－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－インドール－７－アミンの新規結晶形に関する。

様々な結晶形または無定形は、収着性、圧着に対する挙動、保管途中の安定性およびミーリングされた固体の流動性のような様々な固体状態の物理的特性を示すことができる。このような性質は、さらに、特定固体状態の商業的生産のための活性製薬物質としての適合性に影響を与える。例えば、流動性は、物質が製薬製品への加工途中の取り扱いの容易性に影響を与える。粉末化した化合物の粒子が容易に流動しない場合、製剤専門家は、当該事実を錠剤またはカプセルの製剤を開発するのに考慮しなければならず、これは、コロイド性二酸化ケイ素、タルク、デンプンまたは三塩基性リン酸カルシウムのような滑剤の使用を必要とし得る。

また、同じ薬物の異なる結晶形態または無定形は、溶解速度および生体利用率のような製薬上重要な性質において実質的な差異を有することができる。溶解速度は、シロップ、エリキシルおよびその他液体医薬を調製するのに考慮されるだけでなく、治療の結果を変えることができる。例えば、患者の胃液で活性成分の溶出速度の差異によって経口投与された活性成分が患者の血流に到達する時間に影響を与えて、治療の結果が変わり得る。

なお、化学式１の化合物、５－［（１，１－ジオキシド－４－チオモルホリニル）メチル］－２－フェニル－Ｎ－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－インドール－７－アミンは、国際特許公開ＷＯ２００９－０２５４７８公報を通じて開示された化合物であり、細胞壊死および関連疾患に対する予防または治療および改善効果を示すと知られた物質である。

本発明者らは、化学式１の化合物の製品開発過程で、製造が便利であり、優れた安定性を有する化学式１の化合物の結晶形に対する研究を持続的に行った。その結果、本発明者らは、化学式１の化合物の結晶形のうち結晶形Ａが無定形および他の結晶形と比較して、物理化学的に最も優れた特性を有するという点を確認した。

国際特許公開ＷＯ２００９－０２５４７８公報

本発明の目的は、化学式１の化合物の無定形および他の結晶形に比べて物理化学的に優れた特性を有する化学式１の化合物の結晶形Ａを提供することにある。

本発明は、また、前記化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法を提供しようとする。

本発明は、また、化学式１の化合物の結晶形Ａを有効成分として含む薬学的組成物を提供しようとする。

本発明は、化学式１の化合物の無定形および他の結晶形に比べて物理化学的に優れた特性を有する化学式１の化合物の結晶形Ａを提供する。「結晶形Ａ」は、化学式１の化合物の結晶形スクリーニング過程で結晶形ＸＩＩと命名された物質であり、以後、「パターンＡ」または「結晶形Ａ」と再命名された。本明細書において「結晶形Ａ」、「パターンＡ」または「結晶形ＸＩＩ」は、相互交換的に使用される。「結晶形」と「パターン」も、相互交換的に使用される。粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）分析によれば、結晶形Ａは、他の結晶形とは異なる結晶構造を有する。

本発明の一具体例によれば、化学式１の化合物の結晶形Ａは、７．６４±０．２、１２．３２±０．２、１２．６２±０．２、１５．２６±０．２、１７．３２±０．２、１９．１８±０．２、１９．６１±０．２、１９．９５±０．２、２０．６０±０．２、２１．１２±０．２、２２．９４±０．２、２４．１１±０．２および２８．１５±０．２から選択される２［θ］値で４個以上、例えば、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする。

特に、前記Ｘ線粉末回折パターンは、７．６４±０．２、１５．２６±０．２、１７．３２±０．２、１９．１８±０．２、２１．１２±０．２、および２２．９４±０．２から選択される２［θ］値で回折ピークを有することを特徴とする。

より具体的には、化学式１の化合物の結晶形Ａは、下記表１に列挙されたピーク位置とピーク位置が一致するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする。

他の具体例において、本発明によって提供される化学式１の化合物の結晶形Ａは、示差走査熱量計で測定するとき、２７２．７℃（±２．５）から始まり、２７３．４℃（±２．５）で最大融点を有することが特徴である。

本発明は、化学式１の化合物およびＤＭＳＯ、ＤＭＦまたはＮＭＰから選択される溶媒を含む溶液を加温下で１～２４時間撹拌する段階と、前記溶液を撹拌しつつ、１～７２時間にわたって０～２５℃に冷却させて結晶を成長させる段階と、を含む化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法を提供する。

ここで、開始物質に使用される化学式１の化合物は、無定形または任意の形態の結晶形であっても構わない。

なお、前記加温は、５０～１２０℃の範囲まで温度を高めて行うことができる。

また、前記冷却は、５～２０℃／ｈの速度で行われ得る。

本発明の他の具体例は、化学式１の化合物を溶媒中に溶解させて得た溶液に貧溶媒を添加し、結晶化する段階と、前記溶液を撹拌しつつ、６～４８時間にわたって０～２５℃まで冷却させて結晶を成長させる段階と、を含む化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法を提供する。

同様に、ここで、開始物質に使用される化学式１の化合物は、無定形または任意の形態の結晶形であっても構わない。

本発明の一具体例において、前記化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法は、前記貧溶媒の添加過程で化学式１の化合物の結晶形Ａを種結晶（ｓｅｅｄ）として添加することをさらに含んでもよい。

前記溶媒は、化学式１の化合物を溶解させることができる溶媒であれば、制限なく使用可能である。これに制限されるものではないが、前記溶媒は、例えば、ＤＭＳＯ、ＤＭＦまたはＮＭＰから選択されるものであってもよい。

前記「貧溶媒（ａｎｔｉｓｏｌｖｅｎｔ）」は、標的化合物に対して低い溶解度を示すまたは不溶性の溶媒であり、当該化合物が溶解した溶液に貧溶媒を添加することによって、標的化合物を析出させるために使用することができる。したがって、本発明による結晶形Ａの製造方法では、化学式１の化合物が溶解している溶媒の種類、これに対する化合物の溶解度などを考慮して、適切な貧溶媒を選択し、添加することによって、化合物を結晶化することができ、この際、生成される結晶は、Ｘ線粉末回折パターンおよび吸熱ピークを有することができる。

本発明の一具体例において、前記貧溶媒は、エタノールまたはＭＴＢＥを使用することができるが、これに制限されない。

本発明の一具体例において、前記化学式１の化合物の重量に対する溶媒の重量は、２倍以上であってもよい。化学式１の化合物を溶解させることができれば良いので、溶媒の最大使用量は制限されないが、反応経済性を考慮して、化学式１の化合物に対する溶媒の重量比は、２～１０倍の範囲で使用することが好ましい。

なお、結晶化のために使用される貧溶媒は、溶媒の使用量によって当該使用量が決定される。本発明の一具体例において、前記溶媒の重量に対する貧溶媒の重量は、２倍以上であってもよい。貧溶媒の使用量も、その上限は制限がないが、溶媒に対する貧溶媒の重量比は、２倍～１５倍の範囲で使用することが好ましい。

前記化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法において、異物、余分の溶媒などを除去することによって、高純度で生成物を収得するために、ろ過または乾燥する段階をさらに行うことができる。

本発明は、また、前記化学式１の化合物の結晶形Ａおよび薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物を提供する。

本発明による化学式１の化合物の結晶形Ａを含む薬学的組成物と関連して、化学式１の化合物の用途として明らかになった事項は、次の通りである。

ＷＯ２００９－０２５４７８によれば、前記化学式１の化合物は、細胞壊死および関連疾患に対する予防または治療および改善効果を示すことが知られている。ＷＯ２００９－０２５４７８によれば、前記細胞壊死および関連疾患は、急性・慢性肝疾患（例えば、肝炎、肝線維化、肝硬変）、神経退行性疾患（例えば、認知症、パーキンソン病、ハンチントン病）、虚血性心臓疾患、再灌流障害（韓国登録特許１０－１３２５２７２号）、虚血性脳卒中または虚血性損傷、膵臓炎、バクテリア性／ウイルス性敗血症、糖尿病または糖尿病性合併症、糖尿病性血管疾患［これらの糖尿病は、特に、膵臓細胞破壊物質に起因し、ウイルス、高血糖、脂肪酸、ダイエット、毒素、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）などによって媒介される］、壊死性直腸炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ）、嚢胞性線維症、関節リウマチ、退行性関節炎、腎症、バクテリア感染、ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ）、多発性硬化症、白血病、リンパ腫、新生児性呼吸促迫症候群、窒息、結核、子宮内膜症、血管衰弱症、乾癬、凍瘡、ステロイド治療合併症、壊疽、圧痛、血色素尿症、火傷、異常高熱、クローン病、セリアック病、筋区画症候群、脊髄損傷、糸球体腎炎、筋ジストロフィー、遺伝性代謝性疾患、マイコプラズマ病、炭疽病、アンデルセン病、先天性ミトコンドリア病、フェニールケトン尿症、胎盤梗塞、梅毒、無菌性壊死などを含む。また、薬物および毒性物質による細胞壊死および関連疾患としては、アルコール中毒およびコカイン、薬物（例えば、パラセタモール（ｐａｒａｃｅｔａｍｏｌ）、抗生剤、抗がん剤、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、ＮＳＡＩＤ、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、化学毒素（例えば、四塩化炭素、シアニド、メタノール、エチレングリコール）、毒ガス、農薬、重金属（例えば、鉛、水銀、カドミウム）への露出および／またはこれらの投与および／または自己投与と関連した壊死、放射能／ＵＶへの露出による損傷およびこれと関連した細胞壊死からなるグループから選択される。

また、前記化学式１の化合物は、細胞壊死および関連疾患のうち、さらに、急性・慢性腎疾患、外傷性脳損傷、神経退行性疾患であるルーゲリック病、壊死性大腸炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｃｏｌｉｔｉｓ）、ウイルス感染（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、乾癬およびアレルギー性皮膚炎を含む皮膚疾患、臓器保存／臓器移植（韓国登録特許１０－１０９８５８３，１０－１９４１００４参照）などにおいても予防または治療および改善効果を示すことが予想される。

また、化学式１の化合物を含む薬学的組成物は、細胞内カルシウム調節の機能を有し、異常細胞内カルシウムレベルによる小胞体（Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ Ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ，ＥＲ）ストレスおよびミトコンドリア機能異常を改善することができる。したがって、化学式１の化合物を含む薬学的組成物は、これと関連した関連疾患に対する予防または治療および改善効果を示すことが予想される。関連疾患は、次の通りである。

急性肺障害症候群／急性肺疾患、肺炎、結核、喘息、肺動脈高血圧、慢性閉塞性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）および嚢胞性肺線維症（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）を含む炎症性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓｃｏｖ．２０２０ Ｓｅｐ ５；６：８０．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｖ．２０２０ Ｏｃｔ １５；２９（１５７）：２００１６５．参照、韓国登録特許１０－１６３６５６３号参照）

脱髄（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ）と筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）を含む脱髄疾患、肺動脈高血圧を含む高血圧、脳卒中、プリオン病（ｐｒｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん、運動失調（ａｔａｘｉａ）、偏頭痛、認知力減退、発作、震え、精神疾患（例えば、うつ病）（Ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｎｄ ｇｌｉａｌ ｃａｌｃｉｕｍ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ．Ｏｃｔ－Ｎｏｖ ２００３；３４（４－５）：３８５－９７．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ＆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ．２０１５ Ｊａｎ；１４１（１）：１３－２６．参照）

インスリン抵抗性、高脂血症、粥状動脈硬化症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、クローン病と潰瘍性結腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、各種がんおよびがんの転移（ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｄｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｔｉｏｘｉｄ Ｒｅｄｏｘ Ｓｉｇｎａｌ．２０１４ Ｊｕｌ ２０；２１（３）：３９６－４１３．参照）

視覚障害関連病気（例えば、網膜色素変性症、視神経症、白内障、緑内障）、貧血、胆汁鬱滞（ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ）、副甲状腺機能低下症、汎血球減少症、膵臓障害、乳酸アシドーシス（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄｏｓｉｓ）、乳酸血症（ｌａｃｔａｃｉｄｅｍｉａ）、聴力障害、低身長、腸閉塞症、心臓前渡欠陥（ｃａｒｄｉａｃ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｄｅｆｅｃｔ）、心筋ミオパチー（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、子宮内膜症、不妊、早期閉経（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｅｌｌｅ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１８ Ｆｅｂ；１９（２）：７７－９２．Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｏｓｔｏｎ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．１９９５ Ｓｅｐ ７；３３３（１０）：６３８－４４．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｄａｍａｇｅ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ．２０１４ Ｄｅｃ ７；３５（４６）：３２５８－３２６６．参照）

肢帯／ベッカー型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ／ＢＭＤ；ｌｉｍｂ ｇｉｒｄｌｅ／Ｂｅｃｋｅｒ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）とデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ；Ｄｕｃｈｅｎｎｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）を含む筋ジストロフィー疾患（Ｄｕｃｈｅｎｎｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｕｎｉｐｏｒｔ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｅｌｌｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃａｌｃｉｕｍ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ Ｍｏｌ Ｂａｓｉｓ Ｄｉｓ．２０２０ Ｍａｙ １；１８６６（５）：１６５６７４．参照）

老化および老化関連疾患（Ｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＲＯＳ ａｎｄ Ｃａ２＋ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｒｅｄｏｘ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０２０；６：１０１６７８．参照）

ＷＯ２００９－０２５４７８によれば、化学式１の化合物を含む薬学的組成物は、肝保護および肝機能改善効果を示すだけでなく、脂肪肝、肝線維化および肝硬変などの慢性肝疾患、ウイルスまたは薬物による肝炎などのような急性・慢性肝疾患の予防または治療効果を示す。また、その結果として、門脈圧亢進症（ｐｏｒｔａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）などの肝疾患合併症を予防または治療できるが、これに限定されるものではない。特に、本発明による医薬組成物は、また、肝移植、アルコール性または非アルコール性脂肪肝（韓国登録特許１０－２００６２４７号参照）、肝線維症、肝硬変、ウイルスまたは薬物による肝炎の中から選択された肝疾患の治療または予防に効果的であり、アルコール性急性・慢性肝疾患に効果的である。また、本発明による組成物は、脂肪酸に由来する脂肪肝または脂肪肝に由来する急性・慢性肝疾患の治療または予防に効果的である。

韓国登録特許１０－１８５２３０４号によれば、化学式１の化合物は、幹細胞を培養する段階を含み、幹細胞由来心筋細胞の分化効率および成熟度を向上させることができる。

したがって、本発明は、また、化学式１の化合物の結晶形Ａを含む幹細胞から心筋細胞への分化誘導用組成物を提供する。

また、ＷＯ２０１６－０７２６９２によれば、化学式１の化合物は、また、粘膜炎の予防および治療用途に使用可能である。

したがって、本発明は、前記羅列された疾患の治療のための化学式１の化合物の結晶形Ａおよび薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物の用途、および前記薬学的組成物をこれを必要とする対象体に投与することを含む前記羅列された疾患の予防または治療方法を提供する。本明細書において、「治療」とは、発病症状を示すオブジェクトに使用されるとき、病気の進行を中断または遅延させることを意味し、「予防」とは、発病症状を示さないが、危険性が高いオブジェクトに使用されるとき、発病兆候を中断または遅延させることを意味する。

本発明において、前記「薬学的組成物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」は、本発明の化合物と共に必要に応じて薬学的に許容される担体を含んでもよい。

本発明による化学式１の化合物は、臨床投与時に経口および非経口の様々な剤形で投与することができ、製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて製造される。

経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤などが含まれ、このような固形製剤は、一つ以上の本発明の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）またはゼラチンなどを混ぜて製造される。また、単純な賦形剤の他に、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内容液剤、乳剤またはシロップ剤などが該当するが、頻繁に使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてもよい。

非経口投与のための製剤には、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁溶剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤などが含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチンなどを使用することができる。

また、本発明の化学式１の化合物の人体に対する効果的な投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態および疾患程度によって変わり得、一般的に約０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは、０．０１～３５ｍｇ／ｋｇ／日である。体重が７０ｋｇの成人患者を基準として、一般的に、０．０７～７０００ｍｇ／ｄａｙであり、好ましくは、０．７～２５００ｍｇ／ｄａｙであり、医師または薬剤師の判断によって一定の時間間隔で１日に１回～数回に分割投与することもできる。

本発明による化学式１の化合物の結晶形Ａは、無定形や他の結晶形に比べて、長期間の過酷な条件でも変性せず、収着性が低く、圧力や粉砕にも結晶形が変わらないため、製剤化に有利であり、結晶形自体の安定性にも非常に優れていて、長期間の保管に有用である。

図１は、精製前Ｐ９のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図２は、精製前Ｐ９の示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，ＤＳＣ）結果を示す。 図３は、精製前Ｐ９の熱重量測定（Ｔｈｅｒｍａｌ ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＴＧＡ）結果を示す。 図４は、結晶形ＩＶのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図５は、結晶形ＩＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図６は、結晶形ＩＶのＴＧＡテスト後に測定したＸＲＰＤ結果を示す。 図７は、結晶形ＩＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図８は、結晶形ＶのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図９は、結晶形ＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図１０は、結晶形ＶのＴＧＡテスト後に測定したＸＲＰＤ結果を示す。 図１１は、結晶形ＶＩＩＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図１２は、結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図１３は、結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡテスト後に測定したＸＲＰＤ結果を示す。 図１４は、結晶形ＸＩＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図１５は、結晶形ＸＩＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図１６は、結晶形ＸＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図１７は、結晶形ＸＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。 図１８は、結晶形ＸＩのＴＧＡテスト後に測定したＸＲＰＤ結果を示す。 図１９は、化学式１の化合物の小規模再結晶テストの模式図（Ｔｅｓｔ １～３）を示す。 図２０は、結晶形Ｖから結晶形Ａへの変換過程の中間に該当する中間型ＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す（ｔｅｓｔ ４）。 図２１は、結晶形Ｖから結晶形Ａへの変換過程の中間に該当する中間型ＩＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す（ｔｅｓｔ ５）。 図２２は、異なるＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの割合で再結晶した化学式１の化合物のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図２３は、５０℃の異なるＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの割合（１：２、１：３、１：４、１：５、１：７）で再結晶した化学式１の化合物のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。 図２４は、様々な温度のＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒でスラリー化した化学式１の化合物のＸＲＰＤ分析結果を示す。 図２５は、化学式１の化合物の再結晶段階別ＸＲＰＤ結果を示し、 図２６は、化学式１の化合物の再結晶産物のＨＰＬＣ分析結果を示し、 図２７は、化学式１の化合物の再結晶前および再結晶産物の写真を示す。 図２８は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの写真を示し、 図２９は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＸＲＰＤ分析結果を示し、 図３０は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＨＰＬＣクロマトグラム結果を示し、 図３１は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの偏光顕微鏡イメージを示し、 図３２は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＴＧＡ／ＤＳＣ結果を示し、 図３３は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの粒子サイズ分布を示す。 図３４は、最終製造方法で生成された結晶形ＡのＸＲＰＤ分析結果を示し、 図３５は、最終製造方法で生成された結晶形Ａの偏光顕微鏡（ＰＬＭ）イメージを示し、 図３６は、最終製造方法で生成された結晶形ＡのＴＧＡ／ＤＳＣ結果を示し、 図３７は、最終製造方法で生成された結晶形Ａの粒子サイズ分布（ＰＳＤ）を示す。 図３８は、結晶形Ａに対する等温水分収着／脱着分析の結果を示す。 図３９は、ｔＢＨＰ処理条件での化学式１の化合物のカルシウム濃度の調節効果を示す。 図４０は、ｔＢＨＰおよびｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎとＣａＣｌ_２をさらに処理した条件における化学式１の化合物のミトコンドリア内カルシウム濃度の調節効果と関連したイメージング結果を示す。 図４１は、ｔＢＨＰ処理条件で化学式１の化合物のミトコンドリア内活性酸素除去効果を示す。 図４２は、ｔＢＨＰ処理条件で化学式１の化合物のミトコンドリア内超酸化物の除去効果と関連したイメージング結果を示す。 図４３は、ＳＩＮ－１処理条件で化学式１の化合物の細胞内過酸化窒素除去効果を示す。 図４４は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時にＴｏｔａｌ ｔｉｍｅの向上効果を示す。 図４５は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時にＴ－ｔｕｒｎの向上効果を示す。 図４６は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時に握力の向上効果を示す。 図４７は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時に線条体におけるＴＨレベル回復効果を示す。 図４８は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時に黒質におけるＴＨレベル回復効果を示す。

本発明の利点および特徴、およびそれらを達成する方法は、詳細に後述されている実施例を参照すると明確になる。しかしながら、本発明は、以下に開始される実施例に限定されるものではなく、互いに異なる様々な形態で具現されるものであり、ただ本実施例は、本発明の開始を完全にし、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に発明の範疇を完全に知らせるために提供されるものであり、本発明は、請求項の範疇によって定義されるだけである。

略語
下記の略語が本出願に使用される。

使用された機器、標準、方法論
１．粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ，ＸＲＰＤ）
Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。Ｘ線回折パターンは、Ｃｕ Ｋ－ａｌｐｈａ Ｘ線（ｌ＝１．５４１７９Å）放射線（４０ｋＶ／４０ｍＡ）を用いて試料を３°～４０°で回転しつつ記録した。
試料の回転速度＝１５ＲＰＭ
ｓｃａｎｎｉｎｇ ｒａｔｅ＝１８．５°／ｍｉｎ
２．示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，ＤＳＣ）
ＴＡ ＤＳＣ Ｑ２０００とＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＤＳＣ－２５００を用いて略１ｍｇの試料をｐｉｎｈｏｌｅ付きｈｅｒｍｅｔｉｃ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｐａｎに入れ、２５℃から３００℃まで１０℃／ｍｉｎの速度で加熱して測定した。
３．熱重量測定（Ｔｈｅｒｍａｌ ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＴＧＡ）
ＴＧＡ Ｑ５０やＴＡ Ｑ５０００を使用し、略４ｍｇの試料をｏｐｅｎ ｐｌａｔｉｎｕｍ ｐａｎに入れ、３０℃から３００℃まで１０℃／ｍｉｎの速度で加熱して測定した。
４．粒子サイズ分析（Ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ，ＰＳＤ）
０．５ｂａｒの圧力下でＲＯＤＯＳを用いたｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍでＳｙｍｐａｔｅｃ ＨＥＬＯＳ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒで測定した。
５．偏光顕微鏡（Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＰＬＭ）
２０倍率ｐｈｙｓｉｃａｌ ｌｅｎｓを備えた５ ｍｅｇａｐｉｘｅｌ ＣＣＤ Ｎｉｋｏｎ ＬＶ１００ＰＯＬ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用した。
６．等温水分収着／脱着分析（Ｗａｔｅｒ ｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ，ＤＶＳ ｃｙｃｌｅ）

ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ １を用いてサンプル１０ｍｇをメッシュステンレススチールバスケット内に入れた。全体実験サイクルは、一定の温度（２５℃および４０～９０％の範囲で１０％ＲＨ間隔で（各湿度レベルに対して６０～３６０分）２回スキャン（収着および脱着）で構成される。

実施例１：５－［（１，１－ジオキシド－４－チオモルホリニル）メチル］－２－フェニル－Ｎ－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－インドール－７－アミンの製造

［反応式１］

ＷＯ２００９－０２５４７８に開示された化学式１の化合物の製造方法は、前記反応式１の通りである。

反応式１によって製造されたＰ９は、不純物と異物が多量含まれた状態である。化学式１の化合物は、溶解度が非常に低く、精製が非常に重要な過程になった。初期に研究用に得たＰ９の異物と色を除去するために、ＤＭＳＯに溶かしてろ過し、貧溶媒としてＥｔＯＨを加えて得た精製された化合物を化学式１の化合物と称した。

図１および表２は、精製前Ｐ９のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。図２は、精製前Ｐ９の示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，ＤＳＣ）結果を示し、図３は、精製前Ｐ９の熱重量測定（Ｔｈｅｒｍａｌ ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＴＧＡ）結果を示すものである。

Ｐ９は、後続研究結果から見れば、結晶形Ｖであることが確認された。１６０℃以下で１１．４％の質量減少、２７１℃の融点を示した。

一次精製した物質（Ｐ９）のＤＭＳＯ残存含有量と色、不純物などを低減したり除去するために、ＥｔＯＨで加温／スラリー化過程の二次精製で得た固体を化学式１の化合物と命名し、この過程中の温度や濃度、時間によってＩＶ、Ｖ、ＶＩＩＩ、ＸＩ、ＸＩＩあるいは他の結晶形もさらに確認された。

高純度の安定した臨床物質をＧＭＰ施設で大量生産するには、標準化された最適な精製と最も安定した結晶形生産条件を確立することが非常に重要である。これより、研究用に製造した化学式１の化合物を用いて精製研究と多結晶形研究を始めることになった。

実施例２：精製のための溶媒スクリーニング
異物除去、脱色と最も安定した結晶形を有する高純度の化学式１の化合物を得るための好適な溶媒を探すために、化学式１の化合物の溶解度をスクリーニングした。具体的には、２５℃と５０℃で上澄み液を用いて様々な溶媒に対する化学式１の化合物の溶解度および純度を分析した。

表３から分かるように、化学式１の化合物の溶解度は、多くの溶媒で非常に低く、４０ｍｇ／ｍＬ以上の溶解度を示す溶媒は、ＤＭＦ、ＮＭＰとＤＭＳＯ程度であった。しかしながら、ＤＭＦ、ＮＭＰとＤＭＳＯは、不純物に対する溶解度も高く、貧溶媒を用いた再結晶研究が精製研究に適していると考えた。貧溶媒としては、総類縁物質（Ｔｏｔａｌ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＴＲＳ）の量が少ないＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、ＩＰＡやＥｔＯＡｃを優先的に考慮した。

前記結果に基づいて精製と多結晶形研究を進行しつつ、化学式１の化合物が様々な結晶構造を有することを知見し、この過程を実施例３に記述した。

実施例３：結晶形の製造
３－１：結晶形ＩＶ－スラリー方法（ＤＭＦ溶媒和物）
ＤＭＦ ４ｍＬに６００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、２５℃で１日間撹拌した。Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで上澄み液を除去し、残った固体を真空乾燥し、結晶を収得した。これを化学式１の化合物の結晶形ＩＶと命名し、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡおよび^１Ｈ ＮＭＲを測定した。

図４および表４は、結晶形ＩＶのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。

結晶形ＩＶの形態は、８．５２±０．２、１７．０６±０．２、２１．１２±０．２、２１．７６±０．２、２４．１８±０．２、２４．３５±０．２および２８．２７±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンで特定されることを特徴とする。

図５は、結晶形ＩＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。

なお、^１Ｈ ＮＭＲ結果は、次の通りである。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δｐｐｍ １．４１－１．５４（ｍ、１Ｈ）、２．０６（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．２９Ｈｚ、２Ｈ）、２．７４（ｓ、３Ｈ、ＤＭＦ）、２．８９（ｓ、７Ｈ）、３．０９（ｂｒｄ、Ｊ＝４．７７Ｈｚ、４Ｈ）、３．４６－３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．５９－３．７１（ｍ、３Ｈ）、３．９０－４．００（ｍ、２Ｈ）、５．３５（ｄ、Ｊ＝７．７８Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）、６．７６（ｓ、２Ｈ）、７．２７－７．３５（ｍ、１Ｈ）、７．４８（ｔ、Ｊ＝７．６５Ｈｚ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝７．２８Ｈｚ、２Ｈ）、７．９６（ｓ、１Ｈ、ＤＭＦ）、１０．９４（ｓ、１Ｈ）。

ＸＲＰＤとＤＳＣ／ＴＧＡ、^１Ｈ ＮＭＲ測定結果を総合してみれば、結晶形ＩＶは、ＤＭＦ溶媒和物（化学式１の化合物：ＤＭＳＯ＝１：１）である。

なお、図６は、結晶形ＩＶのＴＧＡテスト後（２００℃まで加熱後に冷却）に測定したＸＲＰＤ結果を示す。図６のＸＲＰＤ結果を見れば、結晶形ＩＶを２００℃まで加熱後に冷却時にＤＭＦが除去されて他の結晶形が観察され、これを結晶形ＸＩＩ（以後、「パターンＡ」または「結晶形Ａ」と再命名する）と命名した。

３－２：結晶形ＩＶ（ＤＭＦ溶媒和物）－再結晶
ＤＭＦ０．４ｍＬに２００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、５０℃で加熱して得られた懸濁液を５０℃でフィルターした後に得た溶液を０．５℃／ｍｉｎの速度で０℃まで冷却した後、得た固体を真空乾燥し、結晶形を収得した。得られた結晶形に対してＴＧＡおよびＤＳＣ分析を行った結果、図７から分かるように、図５と同じ結晶形ＩＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果が観察され、前記結晶形は、結晶形ＩＶ（化学式１の化合物：ＤＭＳＯ＝１：１）であることを確認した。

３－３：結晶形Ｖ（準安定）－溶媒／貧溶媒
ＤＭＳＯ２ｍＬに６００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、得た懸濁液を遠心分離機を用いて得た上澄み液（１．５ｍＬ）にＤＭＳＯ対比７倍のＥｔＯＨ（１０．５ｍＬ）を１時間常温でゆっくり加えた（７００ＲＰＭで撹拌）。遠心分離機を用いて得た固体を真空乾燥し、結晶を収得した。これを化学式１の化合物の結晶形Ｖと命名し、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡおよび^１Ｈ ＮＭＲを測定した。

図８および表５は、結晶形ＶのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。

結晶形Ｖの形態は、６．８２±０．２、１３．８４±０．２、１９．０８±０．２、１９．６６±０．２、２０．５１±０．２、２２．８４±０．２、２３．７８±０．２、３８．６９±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンで特定されることを特徴とする。

図９は、結晶形ＶのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。

なお、^１Ｈ ＮＭＲ結果は、次の通りである。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δｐｐｍ １．２２－１．３４（ｍ、１Ｈ）、１．５６－１．７２（ｍ、４Ｈ）、２．１６（ｂｒｄ、Ｊ＝１２．８８Ｈｚ、２Ｈ）、２．６４（ｓ、３Ｈ）、３．０５（ｂｒｄ、Ｊ＝９．２６Ｈｚ、８Ｈ）、３．５５－３．８１（ｍ、６Ｈ）、４．１０（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．６３Ｈｚ、２Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、６．７７（ｄ、Ｊ＝１．５０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、７．３２－７．３９（ｍ、１Ｈ）、７．４７（ｔ、Ｊ＝７．６３Ｈｚ、２Ｈ）、７．７３（ｂｒｄ、Ｊ＝７．３８Ｈｚ、２Ｈ）、８．６８（ｂｒｓ、１Ｈ）

結晶形Ｖは、^１Ｈ ＮＭＲとＴＧＡ／ＤＳＣ資料を見て、ＤＭＳＯが存在すると見られたが、２００℃まで加熱してＤＭＳＯを除去、冷却後にも、結晶形Ｖを続いて維持することから見て、ＤＭＳＯ溶媒和物ではない結晶形と見られる（図１０）。図１０は、結晶形ＶのＴＧＡテスト後（２００℃まで加熱後に冷却）に測定したＸＲＰＤ結果を示す。

３－４：結晶形ＶＩＩＩ（ＤＭＳＯ溶媒和物）－スラリー方法
化学式１の化合物５０ｍｇを１ｍＬのＤＭＳＯで常温でスラリー状態で４週間撹拌した。遠心分離機を用いて得た固体を真空乾燥し、結晶を収得した。これを化学式１の化合物の結晶形ＶＩＩＩと命名し、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡおよび^１Ｈ ＮＭＲを測定した。

図１１および表６は、結晶形ＶＩＩＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。

結晶形ＶＩＩＩの形態は、６．８８±０．２、１３．７５±０．２、１６．１７±０．２、１７．９３±０．２、２０．１８±０．２、２２．８２±０．２、２５．８４±０．２、２６．４１±０．２および２９．６８±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンで特定されることを特徴とする。

図１２は、結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。

なお、^１Ｈ ＮＭＲ結果は、次の通りである。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δｐｐｍ １．５８－１．７７（ｍ、４Ｈ）、２．１６（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．５４Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８－２．７０（ｍ、７Ｈ、ＤＭＳＯ ｐｅａｋ）、２．９３－３．１４（ｍ、８Ｈ）、３．５５－３．７８（ｍ、５Ｈ）、４．１０（ｄｔ、Ｊ＝１１．８０，３．２６Ｈｚ、２Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、６．７６（ｄ、Ｊ＝２．０１Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、７．３１－７．３８（ｍ、１Ｈ）、７．４６（ｔ、Ｊ＝７．６５Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０－７．８２（ｍ、２Ｈ）、８．９９（ｂｒｓ、１Ｈ）。

結晶形ＶＩＩＩは、^１Ｈ ＮＭＲとＴＧＡ／ＤＳＣ資料を見て、ＤＭＳＯ溶媒和物（化学式１の化合物：ＤＭＳＯ＝１：１）と見られ、ＴＧＡ／ＸＲＰＤで２００℃まで加熱後に冷却時にＤＭＳＯ溶媒和物からＤＭＳＯが除去され、他の結晶形が観察され、これは、結晶形ＸＩＩであることが確認された（図１３）。図１３は、結晶形ＶＩＩＩのＴＧＡテスト後（２００℃まで加熱後に冷却）に測定したＸＲＰＤ結果を示す。

３－５：結晶形ＸＩＩ－スラリー方法
実施例３－３で得た結晶形Ｖの化学式１の化合物１００ｍｇに１ｍＬのＥｔＯＨを入れ、常温で３日間撹拌した。０．４５μｍ ＰＴＦＥ（Ｐｏｌｙｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ）ｆｉｌｔｅｒを用いてろ過した固体を５０℃で乾燥し、結晶を収得した。これを化学式１の化合物の結晶形ＸＩＩと命名し（以後、「パターンＡ」または「結晶形Ａ」と再命名する）、ＸＲＰＤとＤＳＣを測定した。

図１４および表７は、結晶形ＸＩＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。

結晶形ＸＩＩの形態は、７．６４±０．２、１２．３２±０．２、１２．６２±０．２、１５．２６±０．２、１７．３２±０．２、１９．１８±０．２、１９．６１±０．２、１９．９５±０．２、２０．６０±０．２、２１．１２±０．２、２２．９４±０．２、２４．１１±０．２および２８．１５±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする。

図１５は、結晶形ＸＩＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。

前記結果から見れば、準結晶形Ｖは、スラリー化でさらに安定した結晶形ＸＩＩに変換されることが分かった。

３－６：結晶形ＸＩ（ＮＭＰ溶媒和物）－スラリー方法
ＮＭＰ １ｍＬに５００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、２５℃で３時間撹拌した。Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで上澄み液を除去し、残った固体を真空乾燥し、結晶を収得した。これを化学式１の化合物の結晶形ＸＩと命名し、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡおよび^１Ｈ ＮＭＲを測定した。

図１６および表８は、結晶形ＸＩのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）分析結果を示す。

結晶形ＸＩの形態は、１６．８９±０．２、１７．３０±０．２、２０．３７±０．２、２０．９５±０．２、２１．１８±０．２、２１．３４±０．２、２３．１６±０．２、２４．０４±０．２および２７．８５±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンで特定されることを特徴とする。

図１７は、結晶形ＸＩのＴＧＡ／ＤＳＣオーバーレイ結果を示す。

なお、^１Ｈ ＮＭＲ結果は、次の通りである。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δｐｐｍ １．４０－１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．８４－１．９６（ｍ、２Ｈ）、２．０６（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．５４Ｈｚ、２Ｈ）、２．１３－２．２３（ｍ、２Ｈ）、２．７０（ｓ、３Ｈ、ＮＭＰ－Ｍｅ）、２．８９（ｂｒｓ、４Ｈ）、３．０８（ｂｒｄ、Ｊ＝４．５２Ｈｚ、４Ｈ）、３．４６－３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．５９－３．７２（ｍ、３Ｈ）、３．８９－３．９９（ｍ、２Ｈ）、５．３５（ｄ、Ｊ＝７．５３Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）、６．７６（ｓ、２Ｈ）、７．２８－７．３５（ｍ、１Ｈ）、７．４８（ｔ、Ｊ＝７．７８Ｈｚ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝７．５３Ｈｚ、２Ｈ）、１０．９４（ｓ、１Ｈ）。

ＸＲＰＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡおよび^１Ｈ ＮＭＲ測定結果を総合すれば、結晶形ＸＩは、ＮＭＰ溶媒和物（化学式１の化合物：ＮＭＰ＝１：１）であった。

なお、ＴＧＡ／ＸＲＰＤの結果、２００℃まで加熱後に再冷却時にＮＭＰが除去されて、結晶形ＸＩＩに変換されたことを確認した（図１８）。図１８は、結晶形ＸＩのＴＧＡテスト後（２００℃まで加熱後に冷却）に測定したＸＲＰＤ結果を示す。

実施例３の要約

実施例４：５種の結晶形の安定性試験
実施例３で得た５種の結晶形に対して過酷な条件（４０℃、相対湿度７５％）下で８週間安定性試験を行った。

下記表１０は、５種の結晶形の安定性試験結果を示すものである。

表１０から分かるように、５種の結晶形は、いずれも、過酷な条件で純度変化が殆どなかった。結晶形ＩＶ、ＶＩＩＩおよびＸＩは、^１Ｈ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙとＤＳＣ／ＴＧＡ測定結果、それぞれ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯおよびＮＭＰ溶媒和物であることが確認され、過酷な条件（４０℃、相対湿度７５％）下で８週間追跡観察した結果、結晶形ＸＩＩに変換され、結晶形Ｖは、溶媒和物ではないが、準安定の形態で結晶形ＸＩＩに変換されることを知見した。これより、結晶形ＸＩＩが最も安定した結晶形構造と判断され、結晶形ＸＩＩを結晶形ＡまたはパターンＡと命名した（結晶形ＸＩＩ＝結晶形ＡまたはパターンＡ）。

実施例５：最適化過程I
５－１．化学式１の化合物の初期濃度の決定
図１９は、化学式１の化合物の小規模再結晶テストの模式図（Ｔｅｓｔ １～３）を示す。図１９に示されたように、ＤＭＳＯ溶媒に対する化学式１の化合物の初期濃度を決定するために、１００、１５０、２００ｍｇ／ｍＬの濃度で溶かした後、５０℃で７倍のＥｔＯＨを２時間にわたって加えた後、常温で１９時間撹拌した。ＥｔＯＨ投与直後に生成された固体（ＸＲＰＤ－１）、常温で１日撹拌後に生成された固体（ＸＲＰＤ－２）、および５０℃で真空乾燥した固体（ＸＲＰＤ－３）の段階別ＸＲＰＤを測定し、収率を求めた。

表１１から分かるように、１５０と２００ｍｇ／ｍＬの濃度で初期結晶形Ｖが生成されることが分かり、また、時間が経過するにつれて結晶形Ａに変換されることを観察された。当該試験結果に基づいて収率が最も高い２００ｍｇ／ｍＬを結晶化初期濃度に選定した。

５－２．ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ貧溶媒の割合の決定
化学式１の化合物２００ｍｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ溶液に対する貧溶媒であるＥｔＯＨの割合を決定するために、５０℃でそれぞれの５倍と７倍のＥｔＯＨを２時間にわたって加えた後、常温で１６時間撹拌した。ろ過して得られた固体を５０℃で真空状態で乾燥した。乾燥前後それぞれの試料に対してＸＲＰＤを測定し、乾燥過程中の変化も一緒に確認し、収率を求めた（表１２）。７倍のＥｔＯＨで得た固体は、８４．１５％の収率で乾燥前には結晶形Ｖ、乾燥後には結晶形Ｖから結晶形Ａへの変換過程の中間に該当する特徴的なピークが現れるＸＲＰＤ ｓｐｅｃｔｒｕｍ（ｔｅｓｔ ４、中間型Ｉ）を示した（図２０）。これとは異なって、５倍で得た固体は、７６．５５％の収率で乾燥前には結晶形Ｖ、乾燥後には結晶形Ｖから結晶形Ａへの変換過程パターンとは異なる新しい特徴的な中間結晶形（ｔｅｓｔ ５、中間型ＩＩ）を示した（図２１）。このような結果に基づいて、ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ＝１：７が、１：５より、結晶形Ａにさらにい収率と再結晶条件であると考慮された。

図２０および表１３は、中間型ＩのＸＲＰＤ分析結果を示す。

図２１および表１４は、中間型ＩＩのＸＲＰＤ分析結果を示す。

上記で得た中間型Ｉの１００ｍｇを１ｍＬのＥｔＯＨに入れ、常温で３日間撹拌した。０．４５μｍ ＰＴＦＥフィルターを用いて生成された固体を５０℃、真空で乾燥した。乾燥完了した試料のＸＲＰＤ分析結果、結晶形Ａであることを確認した（表１５）。この結果から見れば、結晶形Ｖは、準安定結晶形であり、十分な時間と条件になると、さらに安定した結晶形Ａに変換されることが分かった。

また、ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒を使用した場合、結晶化過程で条件によって中間に変換中の他のパターンの結晶形も出ることができ、最初に再結晶が始まる時点から最も安定した結晶形が生成される生産工程の確立が必要になった。

５－３．ＤＭＳＯ溶液に貧溶媒（ＥｔＯＨ）滴加時間の最適化
実施例５－２で使用した結晶化方法を用いてＤＭＳＯ対比７倍のＥｔＯＨの滴加時間を２４時間と３５時間（ｔｅｓｔ ７で６．７％ＥｔＯＨを滴加した後、２０％の結晶形Ａを種結晶に追加）さらにゆっくり加えたとき、それぞれ段階で得られた結晶形のＸＲＰＤを分析した。実施例５－１（滴加時間１９時間）の結果を含んで総合的に見れば、滴加時間の変化と種結晶の使用では、初期結晶形Ｖの生成を回避しにくかったが、乾燥完了後には、他の結晶形がない純粋な結晶形Ａを得ることができるという事実を明らかにした。

実施例６：ＤＭＳＯ／ＭＴＢＥ溶媒で化学式１の化合物の再結晶
５０℃の化学式１の化合物１５０ｍｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ溶液に貧溶媒である５倍と７倍のＭＴＢＥを３時間にわたって加えた後、常温で１８時間撹拌した。ろ過して得られた固体を５０℃で１８時間真空乾燥した。ここで、それぞれのＸＲＰＤを真空乾燥前と乾燥後に測定し、乾燥過程の変化も一緒に確認した。７倍のＭＴＢＥで得た固体６４．７３％の収率で乾燥前後に、いずれも、結晶形ＶのＸＲＰＤを示し、５倍でも５９．２７％の収率で乾燥前後に、いずれも同じ結晶形Ｖを示した。

実施例７：ＮＭＰ／ＥｔＯＨ溶媒で化学式１の化合物の再結晶
２５℃で化学式１の化合物１５０ｍｇ／ｍＬ ＮＭＰ溶液に対する貧溶媒である７倍のＥｔＯＨを２４～３５時間にわたって加えた後、常温で２２～３３時間撹拌した。ろ過して得られた固体を５０℃で２時間真空乾燥した。ここで、それぞれのＸＲＰＤを真空乾燥前と後に測定し、乾燥過程中の変化も一緒に確認した。６５～７４％の収率で得られ、ＮＭＰ／ＥｔＯＨの組み合わせでも初期に結晶形ＸＩの生成が観察された。

実施例５～７の結果分析
実施例５、６、７の結果を見れば、可能な様々な混合溶媒の条件で色がある結晶形が出たり、安定性が確保されないそれぞれの中間型結晶形もあることを確認した。形状、収率と残存溶媒毒性などを考慮してみれば、ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの組み合わせが最も良い候補と見られ、次の最適化を進めた。

実施例８：ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ溶媒の割合の最適化
８－１：ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ貧溶媒の割合の最適化実験
ＤＭＳＯ １ｍＬに２００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、６０℃で熱を加えた後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅを用いてろ過した後に得た溶液を５０℃で３５時間ＤＭＳＯ対比１０倍のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）をゆっくり加えた。ＥｔＯＨがＤＭＳＯ対比１．５倍、２倍、３倍、５倍、７倍、１０倍入った時点で得た初期固体の結晶形を測定し、分析した。図２２は、異なるＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの割合で再結晶した化学式１の化合物のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）の分析結果を示す。図２２から分かるように、１：３以下の場合には、溶媒和物である結晶形ＶＩＩＩが生成され、ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ＝１：５以上の場合に結晶形Ａが生成されることを確認した。さらに正確な割合を探すために、次の段階でスラリー化最適条件を進めた。

８－２：５０℃ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒の割合の最適化実験
５個の容器にＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒（１：２、１：３、１：４、１：５、１：７）をそれぞれ１ｍＬと２００ｍｇの化学式１の化合物を入れ、５０℃で１日間撹拌した。遠心分離機を用いて得た固体の結晶形をＸＲＰＤで測定し、分析した。図２３は、５０℃の異なるＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの割合（１：２、１：３、１：４、１：５、１：７）でスラリー化した化学式１の化合物のＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）の分析結果を示す。図２３から分かるように、結晶形Ａが５０℃でＤＭＳＯ／ＥｔＯＨの割合が１：４、１：５および１：７である場合に、安定に生成され、最適な割合をＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ＝１：４に決定した。

実施例９：ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒における温度別平衡溶解度と過飽和
２００ｍｇの化学式１の化合物を２種のＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ（１：４，１：５）混合溶液１ｍＬにそれぞれ入れ、２００ｍｇ／ｍＬの混濁液を作成した後、５０℃、６０℃、７５℃でそれぞれ加温、維持しつつ、６時間撹拌した。６時間後の混濁液で上澄み液は、ＨＰＬＣで分析して平衡溶解度を求め、同時に固体のＸＲＰＤ分析結果を表２０および図２４に示した。図２４は、様々な温度のＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ混合溶媒でスラリー化した化学式１の化合物のＸＲＰＤ分析結果を示す。様々な温度（５０℃、６０℃、７５℃）と混合溶媒（１：４、１：５）のすべての条件で存在する固体は、結晶形Ａを有することを確認した。ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ １：４混合溶液における溶解度は、７５℃で３１ｍｇ／ｍＬで、最初からＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ １：４混合溶媒を用いた再結晶方法は適当でないため、過飽和方法を考慮してみることとした。

２００ｍｇの化学式１の化合物をＤＭＳＯ１ｍＬに溶かした後、７５℃で加熱した後、４倍のＥｔＯＨを加えて、透明な過飽和溶液状態で存在し、この際、濃度は、４０ｍｇ／ｍＬであり、過飽和度は、混合溶媒に対して１．３倍（４０／３１）である。実施例５－１の結果に基づいて、２００ｍｇ化学式１の化合物／１ｍＬ ＤＭＳＯを目標とすると、少なくとも４０ｍｇ／ｍＬの溶解度になる場合、高収率を維持できると見られ、過飽和方法で進めることとした。

実施例１０：種結晶を使用する過飽和／再結晶方法による結晶形Ａの製造方法
１５ｍＬのＤＭＳＯに３ｇの化学式１の化合物を７５℃で溶かした後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて異物を除去した。７５℃に維持しつつ、６０ｍＬのＥｔＯＨを加え（この状態でｃｌｅａｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎが維持されることが確認される）、２％の種結晶（結晶形Ａ）を入れ、ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎが観察され始めた。７５℃を続いて維持しつつ、さらに４５ｍＬのＥｔＯＨを１５時間ゆっくり加えた。すべての結晶化過程は、２５０ＲＰＭ撹拌下に進めた。ＥｔＯＨを全部加えた後、１０℃／ｈの速度で５℃まで冷却し、生成された固体を０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて得た後に５０℃で２１時間真空乾燥した。表２１に示されたように、種結晶を使用した化学式１の化合物の再結晶化の結果、収率７４．５８％、純度９９．９５％であった。

図２５は、化学式１の化合物の再結晶段階別ＸＲＰＤ結果を示し、図２６は、化学式１の化合物の再結晶産物のＨＰＬＣ分析結果を示し、図２７は、化学式１の化合物の再結晶前および再結晶産物の写真を示す。図２７を参照すると、再結晶後に化学式１の化合物は、ｏｆｆ－ｗｈｉｔｅからｗｈｉｔｅに色を帯びた不純物が除去されたことが分かった。

実施例１１：種結晶を使用しない過飽和／再結晶方法による結晶形Ａの製造方法
１０ｍＬのＤＭＳＯに２ｇの化学式１の化合物を６０℃で溶かした後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて異物を除去した。６０℃に維持しつつ、４０ｍＬのＥｔＯＨを加え、３０分間さらに撹拌した（懸濁液に変わる）。［ここで、一部の懸濁液をすぐに常温で冷却させて得た固体のＸＲＰＤを測定してみた結果、結晶形Ｖであることを確認した－図２９（急冷却）ｓｏｌｉｄ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｕｔ ａｔ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ］さらに温度を７５℃で１２分間ゆっくり上げて１０分間維持した（継続して懸濁液）。５０℃まで１．５時間ゆっくり温度を下げながら、中間に６０℃で生成された固体のＸＲＰＤ－１を測定した。５０℃の温度を維持しつつ、３０ｍＬのＥｔＯＨを１５時間ゆっくり加えた。すべての結晶化過程は、２５０ＲＰＭで撹拌下に進めた。１０℃／ｈｒの速度で５℃まで冷却して生成された固体を０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて分離してＸＲＰＤ－２を測定し、５０℃で真空下で１７時間乾燥した後、ＸＲＰＤ－３を測定した（収率７０．３５％、純度９９．９５％）。図２９に示された結果から見れば、各段階別ＸＲＰＤは、いずれも、結晶形Ａである。

表２２は、化学式１の化合物（２ｇ）の再結晶結果を要約して示すものである。それぞれの段階で結晶形のＸＲＰＤを分析した結果、種結晶を使用しない場合、実施例１０に比べて５％程度低い収率を示し、若干緑色を帯びるｌａｍｉｎａｔｅｄ ｔｙｐｅの結晶形Ａを得た。図２８は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの写真を示し、図２９は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＸＲＰＤ分析結果を示し、図３０は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＨＰＬＣクロマトグラム結果を示し、図３１は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの偏光顕微鏡イメージを示し、図３２は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形ＡのＴＧＡ／ＤＳＣ結果を示し、図３３は、種結晶を使用しない方法で生成された結晶形Ａの粒子サイズ分布を示す。

また、再結晶過程中に温度が急激に下降する場合、形成された結晶形Ｖが結晶化過程で核として作用し、所望しない結晶形が形成され得るので、温度調節に対するモニタリングも非常に重要であることを確認した（図２９－急冷却）。

実施例１０と１１を比較してみた結果、ｓｅｅｄを使用する場合、さらに高い収率を示し、貧溶媒に使用されるＥｔＯＨの総溶媒量を調節してみることとした。

実施例１２：実施例１０の貧溶媒使用量の調節（総ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ＝１：５）
５ｍＬのＤＭＳＯに１ｇの化学式１の化合物を６０℃で溶かした後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて異物を除去した。７５℃に温度を上げ、３０分間維持した後、２０ｍＬのＥｔＯＨを加え、２％の種結晶（結晶形Ａ）を入れ、ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎが観察され始めた。１．５時間５０℃に温度をゆっくり下げ、続いて維持しつつ、さらに５ｍＬのＥｔＯＨを５時間ゆっくり加え、同じ温度で５時間さらに撹拌した。すべての結晶化過程は、３００ＲＰＭ撹拌下に進めた。１０℃／ｈｒの速度で５℃まで冷却し、さらに同じ温度で５時間さらに撹拌した。生成された固体を０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて得た後、５０℃で２０時間真空乾燥し、結晶形Ａを収率７２．１２％で得た。

実施例１３：実施例１０の貧溶媒使用量の調節（総ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ＝１：６）
５ｍＬのＤＭＳＯに１ｇの化学式１の化合物を６０℃で溶かした後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて異物を除去した。７５℃に温度を上げ、３０分間維持した後、２０ｍＬのＥｔＯＨを加え、２％の種結晶（結晶形Ａ）を入れ、ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎが観察され始めた。１．５時間５０℃で温度をゆっくり降ろし、続いて維持しつつ、さらに１０ｍＬのＥｔＯＨを５時間ゆっくり加え、同じ温度で５時間さらに撹拌した。すべての結晶化過程は、３００ＲＰＭ撹拌下に進めた。１０℃／ｈｒの速度で５℃まで冷却し、さらに同じ温度で５時間さらに撹拌した。生成された固体を０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて得た後、５０℃で２０時間真空乾燥し、結晶形Ａを収率７３．２８％で得た。

実施例１０、１２おわび１３の結果を総合してみれば、総ＤＭＳＯ：ＥｔＯＨ＝１：７を使用した実施例１０が最も良好であると見られ、再現性を確認するために、最終工程は、種結晶を使用する実施例１０の方法で３０ｇの化学式１の化合物を用いて進めた。

実施例１４：結晶形Ａの最終製造方法（３０ｇ ｓｃａｌｅ）
１５０ｍＬのＤＭＳＯに３０ｇの化学式１の化合物を７５℃で溶かした後、０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて異物を除去した。７５℃に維持しつつ、６００ｍＬのＥｔＯＨを加え（この状態で溶液が維持されることが確認される）、２％の種結晶（結晶形Ａ）を入れ、ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎが観察され始めた。７５℃に続いて維持しつつ、さらに４５０ｍＬのＥｔＯＨを１５時間ゆっくり加えた。すべての結晶化過程は、２５０ＲＰＭ撹拌下に進めた。ＥｔＯＨを全部加えた後、１０℃／ｈの速度で５℃まで冷却して生成された固体を０．４５μｍ ＰＴＦＥ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒを用いて得た後、５０℃で１５時間真空乾燥した。表２２に示したように、種結晶を使用した化学式１の化合物の再結晶化結果、収率７０．３５％、純度９９．９６％で得た。

ここで得た結晶形Ａを用いてＸＲＰＤ、ＴＳＡ／ＤＳＣ、ＰＬＭ、ＨＰＬＣ、ＰＳＭと残留溶媒などの様々な分析を行い、その結果を表２３～表２４および図３４～図３８に示した。図３４は、最終製造方法で生成された結晶形ＡのＸＲＰＤ分析結果を示し、図３５は、最終製造方法で生成された結晶形Ａの偏光顕微鏡（ＰＬＭ）イメージを示し、図３６は、最終製造方法で生成された結晶形ＡのＴＧＡ／ＤＳＣ結果を示し、図３７は、最終製造方法で生成された結晶形Ａの粒子サイズ分布（ＰＳＤ）を示す。

結晶型Ａの形態は、２５±５℃の温度で７．６４、１２．３２、１２．６２、１５．２６、１７．３２、１９．１８、１９．６１、１９．９５、２０．６０、２１．１２、２２．９４、２４．１１、２８．１５から選択された４個以上の２θ値（±０．２）を含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。

ＮＭＲ ｄａｔａ ｏｆ ｐａｔｔｅｒｎ Ａ
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δｐｐｍ １．４０－１．５４（ｍ、２Ｈ）、２．０６（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．０４Ｈｚ、２Ｈ）、２．８８（ｂｒｓ、４Ｈ）、３．０９（ｂｒｄ、Ｊ＝４．５２Ｈｚ、４Ｈ）、３．４４－３．５５（ｍ、２Ｈ）、３．６０－３．７０（ｍ、３Ｈ）、３．９５（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．２９Ｈｚ、２Ｈ）、５．３５（ｄ、Ｊ＝７．７８Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）６．７６（ｓ、２Ｈ）、７．２４－７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．４８（ｔ、Ｊ＝７．７８Ｈｚ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝７．２８Ｈｚ、２Ｈ）、１０．９３（ｓ、１Ｈ）。

等温水分収着／脱着分析（Ｗａｔｅｒ ｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ，ＤＶＳ ｃｙｃｌｅ）
ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ １を用いて結晶形Ａ １０ｍｇをメッシュステンレススチールバスケット内に入れた。全体実験サイクルは、一定の温度（２５℃および４０～９０％の範囲で１０％ＲＨ間隔で（各湿度レベルに対して６０～３６０分）２回スキャン（収着および脱着）で構成される。約０．７％の重量増加と湿度レベルと比較した吸収および消失は、非収着性サンプルであることを意味する。図３８は、結晶形Ａに対する等温曲線であり（重量変化％対ＲＨ％）と重量変化％対時間および相対湿度％のキネティック曲線である。ＤＶＳ進行後、ＸＲＰＤ分析結果、結晶形の変化がなく、最も安定した結晶形と見られる。

実施例１５：結晶形Ａの製剤化適合性の評価
１５－１．結晶形Ａの加圧テスト
１００ｍｇの結晶形Ａ粉末をダイキャビティ（ｄｉｅ ｃａｖｉｔｙ）に充填し、上部パンチで２、３および４ＭＰａの圧力でそれぞれ３分間加圧して打錠した。それぞれのタブレットを粉砕した後、ＸＲＰＤ分析結果、変化がなく、最も安定した結晶形と見られる。

１５－２．結晶形Ａのグラインディングテスト
１）乾式粉砕
３０ｍｇの結晶形Ａを乳鉢で５分間手動で粉砕した。ＸＲＰＤ分析結果、変化がなかった。
２）ＥｔＯＨで湿式粉砕
３０ｍｇの結晶形Ａと４０ｍＬのＥｔＯＨを乳鉢に入れ、５分間手動で粉砕した。ＸＲＰＤ分析結果、変化がなかった。
３）Ｈ_２Ｏで湿式粉砕
３０ｍｇの結晶形Ａと４０ｍＬのＨ_２Ｏを乳鉢に入れ、５分間手動で粉砕した。ＸＲＰＤ分析結果、変化がなかった。

実施例１６：心筋細胞で細胞質およびミトコンドリアのカルシウム濃度の恒常性維持効果
心筋細胞でカルシウム濃度の維持効果を確認するために、Ｈ９Ｃ２細胞を９６孔プレートに１．５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、２４時間培養した。細胞質のカルシウム濃度の測定は、ＦＬＩＰＲ Ｃａｌｃｉｕｍ ６ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ；＃Ｒ８１９０）を用いた。製造社の実験方法によって細胞にｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄとカルシウム特異的染色剤を処理し、１．７５時間経過後、化学式１の化合物の最終濃度が０．１、０．０３、０．０１、０．００３、０．００１μＭとなるように細胞に０．２５時間処理した。細胞の刺激のために、ｔＢＨＰを最終濃度が１５０μＭとなるように、細胞に処理後、リアルタイムで３０秒ごとに細胞質のカルシウム濃度を測定した。図３９は、ｔＢＨＰ処理条件での化学式１の化合物のカルシウム濃度の調節効果を示す。縦軸のΔＦ／Ｆ（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）値は、ｔＢＨＰ処理後に発生したカルシウム特異的染色剤の蛍光値の最大値から最小値を抜いた値であり、細胞質のカルシウム濃度が多く増加するほど大きい値を有する。横軸は、化学式１の化合物の濃度を示し、Ｖ．Ｃは、運搬体のみを処理した対照群であり、ｔＢＨＰ処理時に細胞のカルシウム濃度が最も多く増加する。化学式１の化合物が０．０１μＭ処理された場合、ｔＢＨＰ処理による異常に増加した細胞質のカルシウム濃度が減少し、０．１μＭ処理条件では、正常レベルの細胞質カルシウム濃度を示した。

また、心筋細胞でミトコンドリアのカルシウム濃度の増加を抑制する効果を細胞イメージングで確認するために、Ｈ９Ｃ２細胞を３５ｍｍ培養皿に１．５×１０^４ｃｅｌｌｓで分注し、２４時間培養した。ミトコンドリア内カルシウム濃度のイメージングは、Ｒｈｏｄ－２を用いた。Ｒｈｏｄ－２とＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ（２００ｎＭ）、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（２ｄｒｏｐｓ／ｍｌ）を５０分間処理し、ＫＲＢ緩衝溶液で２回洗浄した後、緩衝溶液を入れ、３０分間さらに培養した。化学式１の化合物の最終濃度が１０μＭとなるように細胞に０．２５時間処理後、ｔＢＨＰの最終濃度が１５０μＭとなるように細胞に３０分間処理し、ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ １．２μＭを１０分，続いてＣａＣｌ_２を２ｍＭ処理後、生きている細胞のミトコンドリアに存在するカルシウムで発色する蛍光をイメージングを通じて観察した。図４０は、ｔＢＨＰおよびｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎとＣａＣｌ_２をさらに処理した条件で化学式１の化合物のミトコンドリア内カルシウム増加を抑制する効果と関連したイメージング結果を示す。実験結果、化学式１の化合物がｔＢＨＰおよびｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎとＣａＣｌ_２をさらに処理した条件で発生したミトコンドリア内カルシウム濃度の増加を効果的に抑制することをＲｈｏｄ－２蛍光の減少を通じて観察し、これを通じて、化学式１の化合物がミトコンドリア内増加するカルシウムを強力に抑制することを確認した。

この実験結果は、細胞内カルシウム調節の機能を通したＥＲストレスおよびミトコンドリア機能異常を改善する機序と関連した関連疾患に対する予防または治療および改善効果を示すことが予想される。

実施例１７：心筋細胞のミトコンドリア内活性酸素除去効果
心筋細胞でミトコンドリア内発生する活性酸素除去効果を確認するために、Ｈ９Ｃ２細胞を９６孔プレートに１．５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、２４時間培養した。ミトコンドリア特異活性酸素の測定は、ｄｉｈｙｄｒｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ－１２３（ＤＨＲ－１２３）を通した蛍光測定法を用いた。細胞にＤＨＲ－１２３を０．５時間処理した後，続いて化学式１の化合物の最終濃度が０．０００１、０．００１、０．００３、０．０３、０．１、０．３、１、１０、３０μＭとなるように細胞に０．２５時間処理した。ｔＢＨＰを最終濃度が４００μＭとなるように細胞に添加した後、リアルタイムで３分ごとに細胞内活性酸素を蛍光強度を用いて測定した。図４１は、ｔＢＨＰ処理条件で化学式１の化合物のミトコンドリア内活性酸素除去効果を示す。横軸は、化学式１の化合物の濃度をログスケールで示し、縦軸は、ｔＢＨＰ処理後に２時間発生したミトコンドリア内活性酸素の総量を示すものである。ｔＢＨＰによってミトコンドリア内活性酸素が急激に増加したが、化学式１の化合物を処理することによって、濃度依存的に活性酸素の発生が抑制される効果を示した。

化学式１の化合物の活性酸素除去効果を細胞イメージングで確認するために、Ｈ９Ｃ２細胞を３５ｍｍ共焦点顕微鏡専用培養皿に１．５×１０^４ｃｅｌｌｓで分注し、２４時間培養した。活性酸素のうちミトコンドリアで発生する超酸化物の測定のために、ＭｉｔｏＳＯＸ^ＴＭ（Ｒｅｄ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ）を用いた細胞内蛍光イメージングを行った。化学式１の化合物の濃度が１μＭとなるように細胞に０．２５時間前処理し、ｔＢＨＰを最終濃度が５０μＭとなるように細胞に添加し、１時間処理した。細胞をフェノールレッドのない培地に交換し、ＨＯＥＣＨＳＴ（０．５ｄｒｏｐ／ｍｌ）、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ（１５０ｎＭ）、ＭｉｔｏＳＯＸ（２μＭ）を３０分間処理した後、細胞内蛍光をイメージングを用いて観察した。図４２は、ｔＢＨＰ処理条件で化学式１の化合物のミトコンドリア内超酸化物の除去効果と関連したイメージング結果を示す。実験結果、化学式１の化合物がミトコンドリア内超酸化物を含む活性酸素を効果的に除去することをＭｉｔｏＳＯＸ蛍光の減少を用いて観察し、これを通じて、化学式１の化合物がミトコンドリア内発生した活性酸素を強力に除去する抗酸化剤として作用することを確認した。

この実験結果から分かるミトコンドリア内活性酸素を除去する効果は、細胞壊死と関連しているので、細胞損傷および壊死と関連した疾患に対して予防または治療および改善効果を示すことが予想される。

実施例１８：マクロファージと星状膠細胞で生成される過酸化窒素除去効果
マクロファージで発生する過酸化窒素除去効果を確認するために、ＲＡＷ２６４．７細胞を９６孔プレートに１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、２４時間培養した。過酸化窒素の測定は、ＤＡＸ－Ｊ２^ＴＭＰＯＮ Ｇｒｅｅｎ ｄｙｅを通した蛍光測定法を用いた。細胞にＤＡＸ－Ｊ２^ＴＭＰＯＮ Ｇｒｅｅｎ ｄｙｅを１時間前に処理した後、化学式１の化合物と陽性対照群であるａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄをそれぞれ最終濃度が１０，３０μＭとなるように細胞に５分間処理した。その後、ＳＩＮ－１を最終濃度が２００μＭとなるように処理し、リアルタイムで２分ごとに細胞内生成される過酸化窒素の量を蛍光強度を用いて測定した。星状膠細胞における過酸化窒素除去効果を確認するために、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞を９６孔プレートに６×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、２４時間培養し、同じ条件で実験を進めた。図４３は、ＳＩＮ－１処理条件で化学式１の化合物の細胞内過酸化窒素除去効果を示す。左側は、マクロファージ、右側は、星状膠細胞における結果を示した。横軸は、化学式１の化合物とａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄの濃度を示し、Ｖ．Ｃは、運搬体のみを処理した対照群であり、ＳＩＮ－１処理時に細胞内過酸化窒素の濃度が最も多く増加する。縦軸は、ＳＩＮ－１処理後に１時間が経過して発生した過酸化窒素の総量を示すものである。ＳＩＮ－１によって細胞内過酸化窒素が急激に増加したが、化学式１の化合物を処理することによって、濃度依存的に過酸化窒素発生が抑制され、陽性対照群であるａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄよりもさらに優れた抑制効果を示した。

この実験結果は、炎症に関与するマクロファージと星状膠細胞の過酸化窒素除去効果を確認することによって、膵臓炎、関節リウマチ、退行性関節炎、バクテリアおよびウイルス感染、糸球体腎炎、急性・慢性腎疾患、壊死性大腸炎、肺炎、肝炎、粘膜炎などの各種炎症基盤疾患と、アルツハイマー病、パーキンソン病、ルーゲリック病、肢帯／ベッカー型筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィーなど老化および老化関連脳疾患に対する予防または治療および改善効果を示すことが予想される。

実施例１９：ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで行動能力向上効果
ＭＰＴＰ（１－Ｍｅｔｈｙ－４－ｐｈｅｎｙ－１，２，３，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）は、神経毒素であるＭＰＰ^＋（１－ｍｅｔｈｙ－４－ｐｈｅｎｙｌｐｙｒｉｄｉｕｍ）のｐｒｏ－ｄｒｕｇであり、投与時にドーパミン性ニューロンを破壊し、パーキンソン病の症状を誘発する物質である。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２時間間隔で２０ｍｇ／ｋｇ ＭＰＴＰを全４回投与し、行動障害を誘導した。ＭＰＴＰ投与２日後から６日間化学式１の化合物を低、中および高用量で１日１回腹腔投与した。化学式１の化合物の行動能力向上効果を確認するために、ポールテスト（ｐｏｌｅ ｔｅｓｔ）を行った。図４４は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物を処理するとき、Ｔｏｔａｌ ｔｉｍｅの向上効果を示し、図４５は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物を処理するとき、Ｔ－ｔｕｒｎの向上効果を示す。ＭＰＴＰ投与群のＴｏｔａｌ ｔｉｍｅとＴ－ｔｕｒｎ値は、対照群に比べて有意に増加した。この際、化学式１の化合物を投与したグループでＴｏｔａｌ ｔｉｍｅとＴ－ｔｕｒｎ値が濃度依存的に回復することを確認した。

また、化学式１の化合物の行動能力向上効果を確認するために、握力試験（Ｇｒｉｐ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｔｅｓｔ）を行った。図４６は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物処理時に握力向上効果を示す。ＭＰＴＰ投与群の握力値は、対照群に比べて有意に減少した。この際、化学式１の化合物を投与したグループで握力値が濃度依存的に回復することを確認した。

実施例２０：ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルでドーパミン性ニューロン保護効果
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２時間間隔で２０ｍｇ／ｋｇ ＭＰＴＰを全４回投与し、行動障害を誘導した。ＭＰＴＰ投与２日後から６日間化学式１の化合物を低、中および高用量で１日１回腹腔投与した。化学式１の化合物の投与６日目にマウスを犠牲にして、脳組織の凍結切片を製造し、ＴＨ（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）染色を行った。図４７は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物を処理するとき、線条体におけるＴＨレベル回復効果を示す。線条体においてＭＰＴＰ投与群のＴＨレベルは、対照群に比べて有意に減少した。この際、化学式１の化合物を投与したグループでＴＨレベルが濃度依存的に回復し、中および高用量で有意に増加した。図４８は、ＭＰＴＰ誘導パーキンソン病マウスモデルで化学式１の化合物を処理するとき、黒質におけるＴＨレベル回復効果を示す。黒質においてＭＰＴＰ投与群のＴＨレベルは、対照群に比べて有意に減少した。この際、化学式１の化合物を投与したグループでＴＨレベルが濃度依存的に回復し、高用量で有意差を示した。

Claims (15)

1. 下記化学式１の化合物の結晶形Ａであって、
   

   

   前記結晶形が７．６４±０．２、１２．３２±０．２、１２．６２±０．２、１５．２６±０．２、１７．３２±０．２、１９．１８±０．２、１９．６１±０．２、１９．９５±０．２、２０．６０±０．２、２１．１２±０．２、２２．９４±０．２、２４．１１±０．２および２８．１５±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする結晶形。
2. 前記Ｘ線粉末回折パターンは、７．６４±０．２、１５．２６±０．２、１７．３２±０．２、１９．１８±０．２、２１．１２±０．２および２２．９４±０．２から選択される２［θ］値で４個以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする請求項１に記載の結晶形。
3. 下記表に列挙されたピーク位置とピーク位置が一致するＸ線粉末回折パターンで特定されることを特徴とする請求項１に記載の結晶形：
   

   
4. 下記化学式１の化合物およびＤＭＳＯ、ＤＭＦまたはＮＭＰから選択される溶媒を含む溶液を加温下で１～２４時間撹拌する段階と、
   前記溶液を撹拌しつつ、１～７２時間にわたって０～２５℃に冷却させて結晶を成長させる段階と、を含む、請求項１に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
   

   
5. 前記加温は、５０～１２０℃の範囲まで温度を高めて行われる、請求項４に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
6. 前記冷却は、５～２０℃／ｈの速度で行われる、請求項４に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
7. 下記化学式１の化合物を溶媒中に溶解させて得た溶液に貧溶媒を添加し、結晶化する段階と、
   前記溶液を撹拌しつつ、６～４８時間にわたって０～２５℃まで冷却させて結晶を成長させる段階と、を含む、請求項１に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
   

   
8. 前記貧溶媒の添加過程で化学式１の化合物の結晶形Ａを種結晶として添加することを含む、請求項７に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
9. 前記溶媒は、ＤＭＳＯ、ＤＭＦまたはＮＭＰから選択される、請求項７に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
10. 前記貧溶媒は、エタノールまたはＭＴＢＥである、請求項７に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
11. 前記化学式１の化合物の重量に対する溶媒の重量は、２倍以上である、請求項７に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
12. 前記溶媒の重量に対する貧溶媒の重量は、２倍以上である、請求項７に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａの製造方法。
13. 請求項１から３のいずれか一項に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａと、薬学的に許容可能な担体と、を含む薬学的組成物。
14. 請求項１から３のいずれか一項に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａと、薬学的に許容可能な担体と、を含む、下記グループから選択される細胞壊死および関連疾患に対する予防または治療用薬学的組成物：急性または慢性肝疾患、認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血性疾患、糖尿病、膵臓炎、バクテリア性またはウイルス性敗血症、壊死性直腸炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ）、嚢胞性線維症、関節リウマチ、退行性関節炎、腎症、バクテリア感染、ウイルス感染、多発性硬化症、白血病、リンパ腫、新生児性呼吸促迫症候群、窒息、結核、子宮内膜症、血管衰弱症、乾癬、凍瘡、ステロイド治療合併症、壊疽、圧痛、血色素尿症、火傷、異常高熱、クローン病、セリアック病、筋区画症候群、脊髄損傷、糸球体腎炎、筋ジストロフィー、マイコプラズマ病、炭疽病、アンデルセン病、先天性ミトコンドリア病、フェニールケトン尿症、胎盤梗塞、梅毒および無菌性壊死；およびアルコール中毒およびコカイン、抗生剤、抗がん剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、化学毒素、毒ガス、農薬、重金属への露出またはこれらの投与または自己投与と関連した壊死、放射能またはＵＶへの露出による損傷およびこれと関連した細胞壊死、急性・慢性腎疾患、外傷性脳損傷、ルーゲリック病、壊死性大腸炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｃｏｌｉｔｉｓ）、ウイルス感染、乾癬およびアレルギー性皮膚炎を含む皮膚疾患、臓器保存／臓器移植、急性肺障害症候群／急性肺疾患、肺炎、結核、喘息、肺動脈高血圧、慢性閉塞性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）および嚢胞性肺線維症（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）を含む炎症性肺疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、脱髄（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ）と筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）を含む脱髄疾患、肺動脈高血圧を含む高血圧、脳卒中、プリオン病（ｐｒｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん、運動失調（ａｔａｘｉａ）、偏頭痛、認知力減退、発作、震え、精神疾患、インスリン抵抗性、高脂血症、粥状動脈硬化症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、クローン病と潰瘍性結腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、がんおよびがんの転移、網膜色素変性症、視神経症、白内障および緑内障を含む視覚障害関連病気、貧血、胆汁鬱滞（ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ）、副甲状腺機能低下症、汎血球減少症、膵臓障害、乳酸アシドーシス（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄｏｓｉｓ）、乳酸血症（ｌａｃｔａｃｉｄｅｍｉａ）、聴力障害、低身長、腸閉塞症、心臓前渡欠陥（ｃａｒｄｉａｃ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｄｅｆｅｃｔ）、心筋ミオパチー（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、子宮内膜症、不妊、早期閉経、肢帯／ベッカー型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ／ＢＭＤ；ｌｉｍｂ ｇｉｒｄｌｅ／Ｂｅｃｋｅｒ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）とデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ；Ｄｕｃｈｅｎｎｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）を含む筋ジストロフィー疾患、老化および老化関連疾患、および粘膜炎。
15. 請求項１から３のいずれか一項に記載の化学式１の化合物の結晶形Ａを含む幹細胞から心筋細胞への分化誘導用組成物。

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