JP2024512751A

JP2024512751A - Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓワクチン組成物

Info

Publication number: JP2024512751A
Application number: JP2023560756A
Authority: JP
Inventors: モロウ，ブライアン; コンスタンチノフ，セルゲイ; フールトセン，ジェローン; ルオ，ジンクアン; ソマニ，サンディープ; ティー．バックレー，ピーター; ジェイ．トレス，ビクター; プールマン，ジャン，トゥニス
Original assignee: ヤンセンファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド; ニューヨークユニバーシティ
Priority date: 2021-04-02
Filing date: 2022-03-31
Publication date: 2024-03-19
Also published as: EP4313303A1; TW202241496A; AU2022246874A9; AU2022246874A1; UY39714A; CA3215751A1; KR20230165808A; IL307178A; BR112023019605A2; WO2022212667A1

Abstract

本開示は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ感染症の治療及び／又は予防のための、対象における免疫応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。本明細書に開示される免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド並びにＳ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）及び／又はロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）バリアントポリペプチドを含む。本開示は更に、開示された免疫原性組成物の投与を含む、対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を生成する方法に関する。【選択図】なし

Description

本出願は、２０２１年４月２日に出願された米国仮特許出願第６３／１７０，０８９号及び２０２１年９月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／２４９，４５２号の優先権の利益を主張するものであり、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

本開示は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ免疫原性組成物、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症の治療及び／又は予防のための、対象における免疫応答を誘導するための記載される組成物の使用に関する。

Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓは、敗血症、感染性心内膜炎、及び毒素ショックを含む広範な侵襲的疾患、並びに重症度の低い皮膚及び軟部組織感染症を引き起こす（Ｔｏｎｇｅｔａｌ．，“ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＣｌｉｎｉｃａｌＭａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ，ａｎｄＭａｎａｇｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．２８（３）：６０３－６６１（２０１５））。現在、Ｓ．ａｕｒｅｕｓと闘うための承認されているワクチンはなく、抗生物質耐性出現によって治療の選択肢が更に制限されている（Ｓａｕｓｅｅｔａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＢａｓｅｄＢｉｏｌｏｇｉｃｓａｎｄＴｈｅｉｒＰｒｏｍｉｓｅｔｏＣｏｍｂａｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，”ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３７（３）：２３１－２４１（２０１６））。多様な臨床症候群を引き起こすＳ．ａｕｒｅｕｓの能力は、多くの場合、ゲノム量の大きな変化に関連している（Ｃｏｐｉｎｅｔａｌ．，“ＡｆｔｅｒｔｈｅＤｅｌｕｇｅ：ＭｉｎｉｎｇＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＧｅｎｏｍｉｃＤａｔａｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓａｎｄＨｏｓｔ－ＰａｔｈｏｇｅｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４１：４３－５０（２０１８）及びＲｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，“ＣｌｏｎａｌＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＢａｃｔｅｒａｅｍｉａ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＭｏｒｔａｌｉｔｙ，”Ｎａｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２（１０）：１３８１－１３８８（２０１７））。特に、ゲノムのおよそ４０％は、全てのＳ．ａｕｒｅｕｓ分離株によって共有されるわけではない（Ｂｏｓｉｅｔａｌ．，“ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｅ－ＳｃａｌｅＭｏｄｅｌｌｉｎｇｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＳｔｒａｉｎｓＩｄｅｎｔｉｆｉｅｓＳｔｒａｉｎ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＭｅｔａｂｏｌｉｃＣａｐａｂｉｌｉｔｉｅｓＬｉｎｋｅｄｔｏＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１１３（２６）：Ｅ３８０１－３８０９（２０１６））ので、ワクチン及び生物製剤の生成のための保存された標的の特定を更に複雑にする。

本開示は、当技術分野におけるこれら及び他の制限を克服することを対象とする。

本開示の第１の態様は、（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、（ｉｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）バリアントポリペプチドとを含む、免疫原性組成物に関する。代替の態様では、本発明は、（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、（ｉｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）バリアントポリペプチドとを一緒に含む、２つ以上の組成物の組み合わせを提供する。

一態様では、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。

本開示の追加の態様は、上記のものに対する１つ以上の追加のアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含む、免疫原性組成物又は２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせに関する。

本開示の別の態様は、（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、（ｉｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）バリアントポリペプチドと、（ｉｉｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントとを一緒に含む、免疫原性組成物又は２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせに関する。

本開示の追加の態様は、本明細書に記載される免疫原性組成物のＳ．ａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアント、ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＬｕｋＢポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子を含む、免疫原性組成物又は２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせに関する。

本開示の別の態様は、本明細書に記載される免疫原性組成物のＳ．ａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアント、ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＬｕｋＢポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子を含む１つ以上のベクターを含む、免疫原性組成物又は２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせを対象とする。

本開示の別の態様は、宿主細胞を含む免疫原性組成物を対象とし、宿主細胞は、本明細書に記載される１つ以上の核酸分子又はベクターを含む。

本開示の別の態様は、ブドウ球菌感染症の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行う方法に関する。方法は、有効量の本明細書に記載される免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを対象に、当該対象においてブドウ球菌感染症を治療又は予防するのに有効な条件下で投与することを含む。

本開示の別の態様は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓに対する免疫応答の誘発を必要とする対象においてそれを行う方法に関する。方法は、有効量の本明細書に記載される免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを対象に、当該対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する当該免疫応答を誘発するのに有効な条件下で投与することを含む。

本開示の別の態様は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌の脱コロニー形成、又はコロニー形成若しくは再コロニー形成の予防を必要とする対象においてそれを行う方法に関する。方法は、有効量の本明細書に記載される免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを対象に、当該対象においてＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌を脱コロニー形成するか、又はコロニー形成若しくは再コロニー形成を予防するのに有効な条件下で投与することを含む。

本開示の別の態様は、対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を生成する方法における、本明細書に記載される免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせの使用に関する。

Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、多数の院内感染及び市中感染の原因となっている。免疫系によるクリアランスを回避するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、幅広い戦略を採用する。表面タンパク質であるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）は、感染症の促進に関連する少なくとも２つの機能を示すＳ．ａｕｒｅｕｓの１つの主要な毒性因子である。第一に、細菌表面上の細胞壁固定ＳｐＡは、ＩｇＧのＦｃγドメインに結合し、抗体のエフェクター機能を無効にする。抗体は、非特異的に「上下逆さま」に結合し、それによって宿主免疫細胞による食作用殺傷（ＯＰＫ）からｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉを保護し、適切なクリアランスを防止する。第二に、ＳｐＡは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓコロニー形成及び感染中の保護免疫の発生を防止する主要な免疫回避決定因子として機能する。コロニー形成及び侵襲性疾患中、放出されたＳｐＡは、ＶＨ３クローンＢ細胞受容体を架橋し、ブドウ球菌決定基を抗原として認識することができないＳ．ａｕｒｅｕｓに特異的ではない抗体の分泌を誘発する。このＢ細胞超抗原活性（すなわち、放出されたＳｐＡのＶＨ３結合活性）は、コロニー形成又は侵襲性疾患中のＳ．ａｕｒｅｕｓに対する保護免疫の発生の防止に関与する。その免疫グロブリン結合活性を失ったワクチン抗原としてのＳｐＡバリアントの使用は、（１）Ｆｃγを介してＩｇＧに結合するその能力を中和し、（２）ＶＨ３イディオタイプ重鎖を介してＩｇＧに結合するその能力を中和し、抗ブドウ球菌免疫が発生することを可能にし、かつ（３）表面結合したＳｐＡを介してオプソニン食作用クリアランスを誘導する、ＳｐＡ特異的抗体を誘導する。

ブドウ球菌ロイコシジンＡ及びＢは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症の促進において異なる作用機序を有する二成分毒素（ＬｕｋＡＢ）を形成する。ＬｕｋＡＢは、食細胞に結合すると、集合して細孔になり、膜に入り、宿主細胞を溶解する分泌毒素である。これにより、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは好中球からの攻撃を回避し、宿主によるクリアランスを回避することができる。ＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、又はＬｕｋＡＢトキソイドを用いた免疫化によって誘導される抗体は、ＬｕｋＡＢ毒素活性を中和し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓを除去することができる生存食細胞をもたらす。

これらの抗原、すなわち、ＳｐＡ、ＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、及びＬｕｋＡＢの組み合わせを含む免疫原性組成物は、２つのＳ．ａｕｒｅｕｓ毒性因子を中和し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの２つの独立した主要な回避機構を防止して、抗体介在性オプソニン食作用が有効になることを可能にする抗体を誘導する。

１５個の異なるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＬｕｋＡアミノ酸配列のアライメントであり、クローン複合体（ＣＣ）８（配列番号１）、ＣＣ４５（配列番号２）、ＣＣ３０のＨＭＰＲＥＦ０７７２＿０４４（ＴＣＨ６０）（配列番号２７）、ＣＣ３０のＳＡＲ２１０８（ＭＲＳＡ２５２）（配列番号３６）、ＣＣ４５のＳＡＬＧ＿０２３２９（Ａ９６３５）（配列番号３４）、ＣＣ３９８のＳＡＰＩＧ２０６１（ＳＴ３９８）（配列番号３５）、ＣＣ１０のＳＡＴＧ＿０１９３０（Ｄ１３９）（配列番号３７）、ＣＣ８のＮＥＷＭＡＮ（配列番号２６）、ＣＣ１５１のＳＡＢ１８７６Ｃ（ＲＦ１２２）（配列番号３２）、ＣＣ５のＳＡＶ２００５（Ｍｕ５０）（配列番号３８）、ＣＣ５のＳＡ１８１３（Ｎ３１５）（配列番号３１）、ＣＣ８のＳＡＣＯＬ２００６（配列番号３３）、ＣＣ７のＨＭＰＲＥ０７７６＿０１７３ＵＳＡ３００（ＴＣＨ９５９）（配列番号２９）、ＣＣ７２のＨＭＰＲＥＦ０７７４＿２３５６ＴＣＨ１３０（配列番号２８）、及びＣＣ１のＭＷ１９４２（ＭＷ２）（配列番号３０）が含まれる。アライメントされた配列の比較から生成された大部分のＬｕｋＡ配列のアミノ酸配列は、配列番号２５として提供される。本明細書に記載されるアミノ酸置換の位置も、ＬｕｋＡ配列の各々内で特定される。図１－１の続きである。図１－１の続きである。１４個の異なるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＬｕｋＢアミノ酸配列のアライメントであり、ＬｕｋＢＣＣ８（配列番号１５）、ＣＣ４５（配列番号１６）、ＣＣ４５のＡ９６３５（配列番号４０）、ＣＣ３０のＥ１４１０（配列番号４３）、ＣＣ３０のＭＲＳＡ２５２（配列番号４５）、ＣＣ１０のＤ１３９（配列番号４２）、ＣＣ５のＭｕ．５０（配列番号４６）、ＣＣ２３９のＪＫＤ６００８（配列番号４４）、ＣＣ８のＣＯＬ（配列番号４１）、ＣＣ８のＵＳＡ３００＿ＦＰＲ３７５７（配列番号１１５）、ＣＣ８のＮＥＷＭＡＮ（配列番号１１６）、ＣＣ１５１のＲＦ１２２（配列番号９８）、ＣＣ１のＭＷ２（配列番号４７）、及びＣＣ７２のＴＣＨ１３０（配列番号９９）が含まれる。アライメントされた配列の比較から生成された大部分のＬｕｋＢ配列のアミノ酸配列は、配列番号３９として提供される。本明細書に記載されるアミノ酸置換の位置も、ＬｕｋＢ配列の各々内で特定される。図２－１の続きである。図２－１の続きである。免疫化に使用される異なるＬｕｋＡＢバリアントの細胞傷害性を示す。異なるＬｕｋＡＢバリアントの滴定による初代ヒト多形核白血球（「ＰＭＮ」（ｎ＝４）の中毒を１時間行った。細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒで評価した。データは、２つの別個の実験で得られ、４人のドナーからの平均±ＳＥＭである。異なるＬｕｋＡＢバリアントで免疫化されたマウスにおける、ＬｕｋＡＢＣＣ８又はＣＣ４５に対する抗体力価を示す。ＥｎｖｉｇｏＨｓｄ：ＮＤ４（４週齢）マウス（ｎ＝５／抗原）に、５０μｌのアジュバントであるＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄと混合した５０μｌの１０％グリセロール１ＸＴＢＳ中の、２０μｇのＬｕｋＡＢを皮下投与した。５匹のマウスのコホートはまた、同体積の１０％グリセロール１ＸＴＢＳ及びＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄからなるモック免疫も受けた。同じ抗原アジュバントカクテルの２回のブースト（ブースト間は２週間間隔）の後、心臓穿刺を介してマウスから採血し、血清を得た。指示された免疫抗原で免疫化されたマウス由来の血清をプールし、段階希釈して、ＣＣ８ＬｕｋＡＢ（図４Ａ）又はＣＣ４５ＬｕｋＡＢ（図４Ｂ）に対する抗体力価を決定した。プレートを、２μｇ／ｍｌのＣＣ８又はＣＣ４５ＬｕｋＡＢでコーティングした。ヒートマップは、二重測定値からの平均吸光度値を示す。異なるＬｕｋＡＢバリアントで免疫化されたマウスにおける、ＬｕｋＡＢＣＣ８又はＣＣ４５に対する抗体力価を示す。ＥｎｖｉｇｏＨｓｄ：ＮＤ４（４週齢）マウス（ｎ＝５／抗原）に、５０μｌのアジュバントであるＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄと混合した５０μｌの１０％グリセロール１ＸＴＢＳ中の、２０μｇのＬｕｋＡＢを皮下投与した。５匹のマウスのコホートはまた、同体積の１０％グリセロール１ＸＴＢＳ及びＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄからなるモック免疫も受けた。同じ抗原アジュバントカクテルの２回のブースト（ブースト間は２週間間隔）の後、心臓穿刺を介してマウスから採血し、血清を得た。指示された免疫抗原で免疫化されたマウス由来の血清をプールし、段階希釈して、ＣＣ８ＬｕｋＡＢ（図４Ａ）又はＣＣ４５ＬｕｋＡＢ（図４Ｂ）に対する抗体力価を決定した。プレートを、２μｇ／ｍｌのＣＣ８又はＣＣ４５ＬｕｋＡＢでコーティングした。ヒートマップは、二重測定値からの平均吸光度値を示す。様々なＬｕｋＡＢ毒素に対して、異なるＬｕｋＡＢバリアントで免疫化されたマウス由来の血清に対する中和プロファイルを提供する。指示された抗原で免疫化されたマウス由来の４～０．０３１％の血清の存在下で、０．１５６μｇ／ｍｌ（ＬＤ９０）の指示されたＬｕｋＡＢバリアントによる１時間のヒトＰＭＮ（ｎ＝４）の中毒。指示された免疫抗原で免疫化されたマウス由来の血清をプールし、使用前に熱不活化した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒで細胞生存率を決定した。ヒートマップは、４人のドナーの死細胞の平均パーセンテージを表示し、黒は細胞死なしを、及び白は１００％の細胞死を表す。指示された抗原で免疫されたマウス由来の２％（図６Ａ）、１％（図６Ｂ）、及び０．５％（図６Ｃ）のマウス血清の非存在下又は存在下でのＬＤ_９０のＬｕｋＡＢ毒素配列バリアントによる中毒後の、死んだヒト多形核白血球のパーセンテージを示す表である。データは、死細胞のパーセンテージとして提示される。陰影のない細胞は、最も低い細胞死を示し、最も暗い灰色の陰影のある細胞は、最も高い細胞死を示す。指示された抗原で免疫されたマウス由来の２％（図６Ａ）、１％（図６Ｂ）、及び０．５％（図６Ｃ）のマウス血清の非存在下又は存在下でのＬＤ_９０のＬｕｋＡＢ毒素配列バリアントによる中毒後の、死んだヒト多形核白血球のパーセンテージを示す表である。データは、死細胞のパーセンテージとして提示される。陰影のない細胞は、最も低い細胞死を示し、最も暗い灰色の陰影のある細胞は、最も高い細胞死を示す。指示された抗原で免疫されたマウス由来の２％（図６Ａ）、１％（図６Ｂ）、及び０．５％（図６Ｃ）のマウス血清の非存在下又は存在下でのＬＤ_９０のＬｕｋＡＢ毒素配列バリアントによる中毒後の、死んだヒト多形核白血球のパーセンテージを示す表である。データは、死細胞のパーセンテージとして提示される。陰影のない細胞は、最も低い細胞死を示し、最も暗い灰色の陰影のある細胞は、最も高い細胞死を示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３の中毒が細胞傷害性ではないことを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに１時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図７Ａ及び７Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された。（図７Ｃ及び７Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３の中毒が細胞傷害性ではないことを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに１時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図７Ａ及び７Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された。（図７Ｃ及び７Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３の中毒が細胞傷害性ではないことを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに１時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図７Ａ及び７Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された。（図７Ｃ及び７Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３の中毒が細胞傷害性ではないことを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに１時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図７Ａ及び７Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝４～６）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された。（図７Ｃ及び７Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの中毒を示す。健康なドナー（ｎ＝５）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図８Ａ及び８Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝５）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された（図８Ｃ及び８Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの中毒を示す。健康なドナー（ｎ＝５）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図８Ａ及び８Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝５）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された（図８Ｃ及び８Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの中毒を示す。健康なドナー（ｎ＝５）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図８Ａ及び８Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝５）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された（図８Ｃ及び８Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。高濃度でのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの中毒を示す。健康なドナー（ｎ＝５）からの新たに単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒの吸光度によって決定された（図８Ａ及び８Ｂ）。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。平均±ＳＥＭを示す。健康なドナー（ｎ＝５）から単離されたヒトＰＭＮを、異なる濃度のＬｕｋＡＢバリアントとともに２時間インキュベートした。細胞生存率は、ＬＤＨ放出によって決定された（図８Ｃ及び８Ｄ）。平均±ＳＥＭを示す。様々なＬｕｋＡＢ毒素に対して２つの異なるＬｕｋＡＢトキソイドで免疫されたマウス由来の血清の中和プロファイルを示す。２つの異なる抗原で免疫されたマウス由来の０．１２５％血清の存在下で、０．１５６μｇ／ｍｌ（ＬＤ_９０）の指示されたＬｕｋＡＢ毒素バリアントによる１時間のヒトＰＭＮ（ｎ＝４）の中毒。両方の指示された免疫抗原で免疫化されたマウス由来の血清をプールし、使用前に熱不活化した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒで細胞生存率を決定した。棒グラフは、４人の異なるドナーの平均＋ＳＥＭを示す。統計的有意性は、対応のないｔ検定を使用して決定され、Ｐ＜０．０５は有意であるとみなされた。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊Ｐ＜０．０００１。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタの免疫化スケジュールの概略図である。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。図１４Ｂの表は、試験した実験群の概要を提供する。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊＋／－ＧＬＡ－ＳＥの有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１５Ａ）及び深部筋肉（図１５Ｂ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊＋／－ＧＬＡ－ＳＥの有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１５Ａ）及び深部筋肉（図１５Ｂ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタの免疫化スケジュールの概略図である。ミニブタは、３週間の間隔で３回の筋肉内免疫化を受けた。３回目の免疫化の３週間後、手術部位感染モデルにおいて、動物に１０^６ＣＦＵのＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。攻撃接種の８日後（７１日目）、細菌負荷を手術部位及び脾臓で決定した。いくつかの時点で、採血し、血清を採取した。表は、３つの実験群の詳細を示す。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示すグラフである。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。ＬｕｋＡＢＣＣ８（図１３Ａ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１３Ｂ）、又はＳｐＡ＊（図１３Ｃ）に対する特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。ＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。多重比較を補正するためにボンフェローニ補正を用いた一元配置トービットモデルを使用して、ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化された動物と緩衝液対照群との間の統計的有意性を、３回の免疫化後に決定した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示すグラフである。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。ＬｕｋＡＢＣＣ８（図１３Ａ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１３Ｂ）、又はＳｐＡ＊（図１３Ｃ）に対する特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。ＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。多重比較を補正するためにボンフェローニ補正を用いた一元配置トービットモデルを使用して、ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化された動物と緩衝液対照群との間の統計的有意性を、３回の免疫化後に決定した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示すグラフである。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。ＬｕｋＡＢＣＣ８（図１３Ａ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１３Ｂ）、又はＳｐＡ＊（図１３Ｃ）に対する特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。ＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。多重比較を補正するためにボンフェローニ補正を用いた一元配置トービットモデルを使用して、ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化された動物と緩衝液対照群との間の統計的有意性を、３回の免疫化後に決定した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。ワクチン誘導抗体によるＬｕｋＡＢの交差中和を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。免疫化の前及び後のミニブタ由来の段階希釈した血清の存在下で、ＴＨＰ－１細胞を、ＬｕｋＡＢ毒素の異なる配列バリアント（ＣＣ８（図１４Ａ）、ＣＣ４５（図１４Ｂ）、ＣＣ２２ａ（図１４Ｃ）、ＣＣ３９８（図１４Ｄ））とインキュベートした。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊での３回の免疫化後の動物由来の試料について、統計的有意性を決定し、緩衝液対照群と比較した。多重比較を補正するためにダネット事後検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ワクチン誘導抗体によるＬｕｋＡＢの交差中和を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。免疫化の前及び後のミニブタ由来の段階希釈した血清の存在下で、ＴＨＰ－１細胞を、ＬｕｋＡＢ毒素の異なる配列バリアント（ＣＣ８（図１４Ａ）、ＣＣ４５（図１４Ｂ）、ＣＣ２２ａ（図１４Ｃ）、ＣＣ３９８（図１４Ｄ））とインキュベートした。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊での３回の免疫化後の動物由来の試料について、統計的有意性を決定し、緩衝液対照群と比較した。多重比較を補正するためにダネット事後検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ワクチン誘導抗体によるＬｕｋＡＢの交差中和を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。免疫化の前及び後のミニブタ由来の段階希釈した血清の存在下で、ＴＨＰ－１細胞を、ＬｕｋＡＢ毒素の異なる配列バリアント（ＣＣ８（図１４Ａ）、ＣＣ４５（図１４Ｂ）、ＣＣ２２ａ（図１４Ｃ）、ＣＣ３９８（図１４Ｄ））とインキュベートした。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊での３回の免疫化後の動物由来の試料について、統計的有意性を決定し、緩衝液対照群と比較した。多重比較を補正するためにダネット事後検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。ワクチン誘導抗体によるＬｕｋＡＢの交差中和を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥと組み合わせた１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、抗原製剤緩衝液を受けた。各免疫化の前、及び３回目の免疫化の３週間後に血清を採取した。免疫化の前及び後のミニブタ由来の段階希釈した血清の存在下で、ＴＨＰ－１細胞を、ＬｕｋＡＢ毒素の異なる配列バリアント（ＣＣ８（図１４Ａ）、ＣＣ４５（図１４Ｂ）、ＣＣ２２ａ（図１４Ｃ）、ＣＣ３９８（図１４Ｄ））とインキュベートした。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊での３回の免疫化後の動物由来の試料について、統計的有意性を決定し、緩衝液対照群と比較した。多重比較を補正するためにダネット事後検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓで攻撃接種した動物における、手術部位及び脾臓での免疫応答の有効性を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥでアジュバント添加された１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及び１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、緩衝液のみを受けた。３回目の免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいて、動物に１０^６ＣＦＵのＳ．ａｕｒｅｕｓＣＣ３９８を攻撃接種した。攻撃接種の８日後、細菌負荷（Ｌｏｇ１０ＣＦＵ／組織のグラム）を、中間筋肉（図１５Ａ）、深部筋肉（図１５Ｂ）、及び脾臓（図１５Ｃ）の手術部位で決定した。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均が示される。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓで攻撃接種した動物における、手術部位及び脾臓での免疫応答の有効性を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥでアジュバント添加された１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及び１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、緩衝液のみを受けた。３回目の免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいて、動物に１０^６ＣＦＵのＳ．ａｕｒｅｕｓＣＣ３９８を攻撃接種した。攻撃接種の８日後、細菌負荷（Ｌｏｇ１０ＣＦＵ／組織のグラム）を、中間筋肉（図１５Ａ）、深部筋肉（図１５Ｂ）、及び脾臓（図１５Ｃ）の手術部位で決定した。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均が示される。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓで攻撃接種した動物における、手術部位及び脾臓での免疫応答の有効性を示す。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ＝３）を、ＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又は１０μｇのＧＬＡ－ＳＥでアジュバント添加された１００μｇのＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及び１００μｇのＳｐＡ＊で免疫化した。対照群は、緩衝液のみを受けた。３回目の免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいて、動物に１０^６ＣＦＵのＳ．ａｕｒｅｕｓＣＣ３９８を攻撃接種した。攻撃接種の８日後、細菌負荷（Ｌｏｇ１０ＣＦＵ／組織のグラム）を、中間筋肉（図１５Ａ）、深部筋肉（図１５Ｂ）、及び脾臓（図１５Ｃ）の手術部位で決定した。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均が示される。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタの免疫化スケジュールの概略図である。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。表は、試験した実験群の概要を提供する。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１６Ｃ）及び深部筋肉（図１６Ｄ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１６Ｃ）及び深部筋肉（図１６Ｄ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊Ｐ＜０．０５。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタの免疫化スケジュールの概略図である。Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。表は、試験した実験群の概要を提供する。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１７Ｃ）及び深部筋肉（図１７Ｄ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。ミニブタのＳＳＩモデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の有効性を示す。ミニブタを、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。最終免疫化の３週間後、ＳＳＩモデルにおいてミニブタにＳ．ａｕｒｅｕｓを攻撃接種した。８日後、細菌負荷を決定した。中間筋肉（図１７Ｃ）及び深部筋肉（図１７Ｄ）における細菌負荷は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでの攻撃接種の８日後に示される。各点は、１匹のミニブタを表し、幾何平均が示される。点線は、検出限界を表す。統計的有意性を、ダネット事後検定を用いたＡＮＯＶＡを使用して決定して、多重比較を補正した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示す。実験設定が図１８Ａに示され、ＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウスを、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化し、次いで、指示された時点で採血した。図１８Ｂは、含まれた群の概要である。血清中のＬｕｋＡＢＣＣ８（図１８Ｃ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１８Ｄ）又はＳｐＡ＊（図１８Ｅ）に対する抗体特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。のＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示す。実験設定が図１８Ａに示され、ＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウスを、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化し、次いで、指示された時点で採血した。図１８Ｂは、含まれた群の概要である。血清中のＬｕｋＡＢＣＣ８（図１８Ｃ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１８Ｄ）又はＳｐＡ＊（図１８Ｅ）に対する抗体特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。のＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示す。実験設定が図１８Ａに示され、ＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウスを、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化し、次いで、指示された時点で採血した。図１８Ｂは、含まれた群の概要である。血清中のＬｕｋＡＢＣＣ８（図１８Ｃ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１８Ｄ）又はＳｐＡ＊（図１８Ｅ）に対する抗体特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。のＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示す。実験設定が図１８Ａに示され、ＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウスを、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化し、次いで、指示された時点で採血した。図１８Ｂは、含まれた群の概要である。血清中のＬｕｋＡＢＣＣ８（図１８Ｃ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１８Ｄ）又はＳｐＡ＊（図１８Ｅ）に対する抗体特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。のＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を示す。実験設定が図１８Ａに示され、ＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウスを、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化し、次いで、指示された時点で採血した。図１８Ｂは、含まれた群の概要である。血清中のＬｕｋＡＢＣＣ８（図１８Ｃ）、ＬｕｋＡＢＣＣ４５（図１８Ｄ）又はＳｐＡ＊（図１８Ｅ）に対する抗体特異性をＥＬＩＳＡによって決定した。のＥＣ_５０力価が示される。各点は、単一の動物を表す。各群の幾何平均±幾何標準偏差が示される。点線は、検出限界を示し、３０に設定される。この値を下回る試料は、３０に打ち切られる。それぞれ、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５毒素中和アッセイの結果を示し、これらは、最終免疫化の２週間後に単離された、群１～５（図１８Ｂに列挙される）からの５匹のマウス由来の血清試料を用いて実施された。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。それぞれ、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５毒素中和アッセイの結果を示し、これらは、最終免疫化の２週間後に単離された、群１～５（図１８Ｂに列挙される）からの５匹のマウス由来の血清試料を用いて実施された。血清試料と参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価（細胞傷害性の５０％が観察された血清希釈）の差を表す相対力価が示される。グラフは、幾何平均±幾何標準偏差を示す。各点は、１匹の動物を表す。

定義
本組成物及び方法が説明される前に、本発明は、記載される特定の組成物又は方法論に限定されず、これらは変化し得ることが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定のバージョン又は実施形態のみを記述するためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ制限される本明細書の実施形態の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、本明細書の実施形態の実施形態の実践又は試験に使用することができるが、好ましい方法、デバイス、及び材料をここで説明する。本明細書で言及された全ての刊行物は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本明細書の実施形態が、先行発明によってそのような開示に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されるべきではない。

本明細書で使用される場合、及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の言及を含むことに留意されたい。

別段の記載がない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などの任意の数値は、どの場合においても用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、数値は通常、列挙された値の±１０％が含まれる。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度が、０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は、０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用される場合、数値範囲の使用には、文脈が別途明確に示さない限り、全ての可能性のある部分範囲、その範囲内の整数、及び値の端数を含む、その範囲内の全ての個々の数値が明示的に含まれる。

別段の示唆がない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、一連の要素の中の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者は、単に通常の実験のみを使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を認識するか、又は確認することができるであろう。このような同等物は、本発明によって包含されることが意図される。

本明細書で使用される場合、用語「含む」、「含んでいる」、「含まれる」、「含まれている」、「有する」、「有している」、「含有する」、「含有している」、又はそれらの任意の他の変形は、指定された整数若しくは整数の群を含めるが、任意の他の整数若しくは整数の群を除外しないことを暗示するものと理解され、非排他的又は無制限なものとして意図される。例えば、要素のリストを含む、組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されず、明示的に列挙されていない、又はこのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置に固有の他の要素を含むことができる。更に、反対の趣旨に明示的に言及されない限り、「又は」は、排他的又は、ではなく、包括的又は、を指す。例えば、条件Ａ又は条件Ｂは、以下のいずれか１つによって満たされる：Ａが真（又は存在）であり、Ｂが偽（又は存在せず）であり、Ａが偽（又は存在せず）であり、Ｂが真（又は存在）であり、かつＡ及びＢの両方が真（又は存在）である。本明細書で使用される場合、複数の列挙された要素の間の結合用語「及び／又は」は、個々の選択肢及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって結合される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素の適用可能性を指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素の適用可能性を指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素を併せた適用可能性を指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つが、その意味の範囲内にあると理解され、したがって、本明細書で使用される場合、用語「及び／又は」の要件を満たす。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味のうちに含まれ、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たすと理解される。

本明細書で使用される場合、本明細書及び特許請求の範囲全体を通して使用される、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆ）」、又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｏｆ）」若しくは「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」などの変形は、任意の列挙された整数又は整数の群を含むことを示すが、指定された方法、構造、又は組成物に、追加の整数又は整数の群を追加することはできないことを示す。

本明細書で使用される場合、本明細書及び特許請求の範囲全体を通して使用される、用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」、又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」若しくは「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」などの変形は、任意の列挙された整数又は整数の群を含むことを示し、かつ任意選択的に、指定された方法、構造、又は組成物の基本特性又は新規な特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数の群を含むことを示す。

本明細書で使用される場合、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用される場合、用語「哺乳動物」は任意の哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、以下に限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなどが挙げられ、より好ましくはヒトが挙げられる。

また、好ましい発明の構成要素の寸法又は特性を指す際に、本明細書で使用される用語「約」、「およそ」、「概して」、「実質的に」などの用語は、当業者によって理解されるように、記載される寸法／特性が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似の軽微な変動を排除しないことを示すことも理解されるべきである。少なくとも、数値パラメータを含むこのような参照は、当技術分野で受け入れられている数学的及び産業的原理（例えば、丸め、測定、又は他の系統的誤差、製造公差など）を使用して、最小の有効桁を変化させない変動が含まれる。

２つ以上の核酸又はポリペプチド配列（例えば、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、ＳｐＡポリペプチド並びにそれらをコードするポリヌクレオチド）との関連での用語「同一の」又は「同一性」パーセントは、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、又は目視検査によって測定されるように、最大の一致が得られるように比較し整列された場合、同一であるか、又は同一であるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドの指定されたパーセンテージを有する、２つ以上の配列又は部分配列を指す。

配列比較については、典型的には、１つの配列が参照配列としての役割を果たし、これに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じて部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。

比較のための配列の最適なアライメントを、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法により、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ、５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）により、又は目視検査により（一般的には、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，（１９９５Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照）、行うことができる。

配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するのに適したアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２にそれぞれ記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて公開されている。

配列同一性パーセントの計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計解析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小の総和確率（ｓｕｍｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列又はアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小の総和確率が約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は参照配列と類似しているとみなされる。

２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であるという更なる指標は、以下に記載されるように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが第２の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、例えば、保存的置換によってのみ２つのペプチドが異なる場合など、第２のポリペプチドに対し、実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であるという別の指標は、２つの分子が、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。

本明細書で使用される場合、同義で「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と呼称される用語である「ポリヌクレオチド」は、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであり得る、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」には、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域との混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、及び一本鎖と二本鎖領域との混合物であるＲＮＡ、一本鎖若しくは、より典型的には二本鎖又は、一本鎖と二本鎖領域との混合物であり得るＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が含まれるが、これらに限定されない。更に、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ、又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語は、１つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、並びに安定性のために、又は他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含む。「修飾された塩基」には、例えば、トリチル化塩基及びイノシンなどの異常な塩基が含まれる。ＤＮＡ及びＲＮＡに様々な修飾がなされることができ、したがって、「ポリヌクレオチド」は、自然界で典型的に見られるように、ポリヌクレオチドの化学的、酵素的、又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞に特徴的なＤＮＡ及びＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、オリゴヌクレオチドと呼ばれることが多い比較的短い核酸鎖を包含する。

本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、例えば、遺伝子環境間の輸送又は宿主細胞における発現のために、所望される配列が挿入可能な、例えば制限及びライゲーション可能な任意の数の核酸を指す。核酸ベクターは、ＤＮＡ又はＲＮＡであってもよい。ベクターには、プラスミド、ファージ、ファージミド、細菌ゲノム、ウイルスゲノム、自己増幅ＲＮＡ、レプリコンが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本発明の核酸分子でトランスフェクト又は形質導入された細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」はこのようなトランスフェクト細胞又は形質導入細胞の子孫又は潜在的な子孫である。細胞の子孫は、例えば、後続する世代において、又は核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組み込みにおいて発生し得る変異又は環境的影響に起因して、親細胞と同一であってもなくてもよい。

本明細書で使用される場合、用語「発現」は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、ＲＮＡへの遺伝子の転写を包含する。この用語はまた、１つ以上のポリペプチドへのＲＮＡの翻訳を包含し、全ての天然に存在する転写後及び翻訳後修飾を更に包含する。発現されたポリペプチドは、宿主細胞の細胞質内、例えば細胞培養物の成長培地などの細胞外環境内、又は細胞膜に固定され得る。

本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」は、アミノ酸から構成される分子を指してもよく、当業者によってタンパク質として認識され得る。本明細書では、アミノ酸残基に対する従来の１文字又は３文字のコードが使用される。本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」を互換的に使用することができる。ポリマーは、直鎖状又は分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。用語はまた、自然に又は介入により修飾されたアミノ酸ポリマーを包含し、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作又は修飾である。また、定義内には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含有するポリペプチド、並びに当技術分野で公知の他の修飾も含まれる。

本明細書に記載されるポリペプチド配列は、ペプチドのＮ末端領域が左側にあり、Ｃ末端領域が右側にあるという通常の慣例に従って記述される。アミノ酸の異性体型は既知であるが、別段の明示的な示唆がない限り、表されるのはアミノ酸のＬ型である。

用語「単離された」は、その起源の源の細胞材料、細菌材料、ウイルス材料、又は培養培地（組換えＤＮＡ技術によって作製された場合）、又は化学前駆体若しくは他の化学物質（化学的に合成された場合）を実質的に含まない核酸又はポリペプチドを指すことができる。更に、単離されたポリペプチドは、単離されたポリペプチドとして対象に投与され得るポリペプチドを指し、言い換えれば、ポリペプチドがカラムに付着されているか、又はゲルに埋め込まれている場合、ポリペプチドは単に「単離された」とみなされない場合がある。更に、「単離核酸断片」又は「単離ペプチド」は、断片として天然に存在しない、及び／又は典型的には機能状態ではない核酸又はタンパク質断片である。

本明細書で使用される場合、語句「免疫応答」又はその等価な「免疫学的応答」は、レシピエント対象における本開示のタンパク質、ペプチド、炭水化物、又はポリペプチドに対して向けられる、体液性（抗体介在性）、細胞性（抗原特異的Ｔ細胞又はその分泌産物によって媒介される）、又は体液性及び細胞性応答の両方の発生を指す。そのような応答は、免疫原の投与によって誘導される能動的応答、又は抗体、抗体含有物質、又は初回抗原刺激を受けたＴ細胞の投与によって誘導される受動的応答であり得る。細胞免疫応答は、クラスＩ又はクラスＩＩのＭＨＣ分子と関連したポリペプチドエピトープの提示によって誘発され、抗原特異的ＣＤ４（＋）Ｔヘルパー細胞及び／又はＣＤ８（＋）細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。応答はまた、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球、又は自然免疫の他の構成要素の活性化も含まれる。本明細書で使用される場合、「能動免疫」は、抗原の投与によって対象に付与される任意の免疫を指す。

本開示は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を誘発するのに適した免疫原性組成物を対象とする。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド及びＳ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）バリアントポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＳｐＡタンパク質及びＳ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。本開示は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症の治療及び／又は予防における免疫原性組成物の使用及び使用方法を更に対象とする。

したがって、一般的な態様では、本発明は、
（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を含む、組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、組成物は、（ｉｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントポリペプチドを更に含む。ある特定の実施形態では、組成物は、（ｉｖ）アジュバントを更に含む。

組成物の成分（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、及び（ｉｖ）は、単一生成物として、すなわち、単一組成物として製剤化され得る。あるいは、成分（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、及び（ｉｖ）は各々、単一の組成物で、又は成分のうちの２つ以上の組み合わせを一緒に含む組成物中で製剤化され得る。したがって、更なる態様では、本発明は、
（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を一緒に含む、２つ以上の組成物の組み合わせを提供する。

ある特定の実施形態では、２つ以上の組成物の組み合わせは、（ｉｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントを更に含む。ある特定の実施形態では、２つ以上の組成物の組み合わせは、（ｉｖ）アジュバントを更に含む。

ある特定の実施形態では、組成物の組み合わせは、使用前に組み合わされて単一の組成物になることができる。他の実施形態では、組成物の組み合わせは、互いに組み合わせて投与される別個の組成物として使用される。

免疫原性組成物のＳ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）ポリペプチド
一態様では、本開示の免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含む。好適なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、こうしたＬｕｋＡバリアントを含有するＬｕｋＡＢ二成分複合体を非細胞毒性の状態にする１つ以上のアミノ酸残基挿入、置換、及び／又は欠失を含む。ＬｕｋＡバリアントポリペプチドはまた、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体を安定化し、融解温度を上昇させ、かつ／又はヘテロ二量体の溶解性を高める。

全ての実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、完全長成熟ＬｕｋＡタンパク質配列に対応するアミノ酸残基の全てを含む、完全長ＬｕｋＡタンパク質のバリアントであり得る。本明細書で言及されるように、「成熟」ロイコシジンタンパク質配列は、アミノ末端分泌シグナルを欠くロイコシジンタンパク質の配列であり、典型的には、アミノ末端上に最初の２７～２８アミノ酸残基を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、完全長成熟ＬｕｋＡタンパク質よりも短いバリアントであり得る。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＡポリペプチドは、長さが少なくとも１００アミノ酸残基である。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＡポリペプチドは、長さが少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、少なくとも２３０、少なくとも２４０、少なくとも２５０、少なくとも２６０、少なくとも２７０、少なくとも２８０、少なくとも２９０、少なくとも３００アミノ酸残基である。

本明細書に記載される免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントタンパク質及びポリペプチドは、クローン複合体ＣＣ８（配列番号１）及びＣＣ４５（配列番号２）のＬｕｋＡバリアントタンパク質であり（以下の表１を参照）、当業者であれば、配列番号１及び配列番号２との関連で同定されたＬｕｋＡのアミノ酸置換及び／又は欠失が、様々なクローン複合体にわたって、又は様々なクローン複合体にわたって高度に保存されているＬｕｋＡの領域内で、保存されるアミノ酸残基であることを容易に理解するであろう。実際に、１５個の異なる株のＳ．ａｕｒｅｕｓ由来のＬｕｋＡタンパク質配列のアライメント（図１を参照）は、変異を受ける残基として本明細書で同定されるアミノ酸残基が、アライメントされたＬｕｋＡアミノ酸配列の１５個全てにわたって保存されている残基であることを示している。同定された変異の残基の位置は、個々のＬｕｋＡ配列間で異なる場合があるが、配列アライメントは、これらの位置間の対応を示している。明確にするために、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬｕｋＡコンセンサス配列を配列アライメントから生成し、特定のアミノ酸変異の場所を割り当てる目的で利用した。例えば、配列番号２５のリジン残基８３のアミノ酸置換は、配列番号１のＬｕｋＡ配列の８０位のリジン残基、配列番号２のＬｕｋＡ配列の８１位のリジン残基、及び配列番号２６～３８のＬｕｋＡ配列の８３位のリジン残基に対応する。したがって、本明細書に記載される同定されたアミノ酸変異は、現在又は将来知られる任意のＬｕｋＡアミノ酸配列の対応するアミノ酸残基に、普遍的に適用することができる。

本開示のこの態様によれば、任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、上記の１つ以上のアミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失に加えて、配列番号２５のＧｌｕ３２３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換又は欠失を更に含む。任意の実施形態では、Ｇｌｕ３２３でのアミノ酸置換又は欠失は、配列番号２５の３２３位（Ｇｌｕ３２３Ａｌａ）でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む。

任意の実施形態では、ＬｕｋＡ（及び本明細書に記載される他のＳ．ａｕｒｅｕｓタンパク質）の１つ以上の同定された位置でのアミノ酸置換は、保存的置換である。こうした保存的置換は、あるアミノ酸残基を、機能的同等物として作用する同じクラスのメンバーである別のアミノ酸残基に置換することを含み、結果としてサイレントな改変をもたらす。すなわち、天然配列に対する変更は、ＬｕｋＡの基本的な特性を顕著に減少させないであろう。これらのアミノ酸残基のクラスには、非極性（疎水性）アミノ酸（例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニン）、極性中性アミノ酸（例えば、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミン）、正に荷電した（塩基性）アミノ酸、（例えば、アルギニン、リジン、ヒスチジン、及び負に荷電した（酸性）アミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）が挙げられる。

他の実施形態では、本明細書に記載されるバリアントロイコシジン又はＳｐＡポリペプチドの１つ以上の同定された位置でのアミノ酸置換は、非保存的改変（すなわち、同定された領域の配列、構造、機能、又は活性を破壊する置換）である。このような置換は、タンパク質の細胞傷害性を低減又は緩和する目的で望ましい場合がある。非保存的置換は、ある特定のクラスのアミノ酸残基を異なるクラスのアミノ酸残基で置換することを含む。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸残基の極性中性アミノ酸での置換、又はその逆である。別の実施形態では、非保存的置換は、正に荷電した（塩基性）アミノ酸残基の、アスパラギン酸及びグルタミン酸などの負に荷電した（酸性）アミノ酸残基との置換、又はその逆の置換を含む。こうした分子改変は、一本鎖鋳型（Ｋｕｎｋｅｌｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ８２：４８８－４９２（１９８５）、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、二本鎖ＤＮＡ鋳型（Ｐａｐｗｏｒｔｈ，ｅｔａｌ．，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ９（３）：３－４（１９９６）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用するプラスミド鋳型でのプライマー伸長法を含む、当技術分野で周知の方法によって、及びＰＣＲクローニング（Ｂｒａｍａｎ，Ｊ．（ｅｄ．），ＩＮＶＩＴＲＯＭＵＴＡＧＥＮＥＳＩＳＰＲＯＴＯＣＯＬＳ，２ｎｄｅｄ．ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．（２００２）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって達成することができる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５の８３位でのリジンに対応する残基でのリジンからメチオニンへの置換（Ｌｙｓ８３Ｍｅｔ）を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５の１４１位でのセリンに対応する残基でのセリンからアラニンへの置換（Ｓｅｒ１４１Ａｌａ）を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５の１１３位でのバリンに対応する残基でのバリンからイソロイシンへの置換（Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ）を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５の１９３位でのバリンに対応する残基でのバリンからイソロイシンへの置換（Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ）を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３に対応する残基での任意の１つ以上の置換に加えて、配列番号２５の３２３位グルタミン酸残基に対応する残基でのグルタミン酸からアラニンへの置換（Ｇｌｕ３２３Ａｌａ）を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する前述のアミノ酸残基のうちの２つでのアミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を有するタンパク質又はそのポリペプチドを含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、前述のアミノ酸残基のうちの３つでの、アミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、前述のアミノ酸残基のうちの４つ全てでの、アミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を含む。任意の実施形態では、本開示のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、及びＶａｌ１９３Ｉｌｅに対応する前述のアミノ酸残基での、リジンからメチオニンへの、セリンからアラニンへの、及びバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＡタンパク質又はそのポリペプチドは、配列番号２５のＧｌｕ３２３Ａｌａに対応するアミノ酸置換を更に含み、すなわち、バリアントＬｕｋＡは、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａに対応する置換を含む。

本明細書に記載される免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａに対応するアミノ酸置換を有する。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２０Ａｌａから選択される任意の１つ以上のアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントである。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２０Ａｌａの各々に対応するアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントである。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２１Ａｌａに対応する任意の１つ以上のアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２１Ａｌａの各々に対応するアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。いくつかの実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。他の例示的なバリアントＬｕｋＡタンパク質は、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａの置換に対応するアミノ酸置換を含む、配列番号２６～３８のＬｕｋＡタンパク質のうちのいずれか１つを含む。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応するアミノ酸残基のうちの１つ以上でのアミノ酸置換を含む。一実施形態では、前述の１つ以上の残基でのアミノ酸置換は、ジスルフィド結合を形成してＬｕｋＡＢヘテロ二量体構造の立体構造を安定化することができるシステイン残基を導入する。例えば、一実施形態では、本明細書に記載されるＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＴｙｒ７４に対応するアミノ酸残基でのチロシンからシステインへの置換（Ｔｙｒ７４Ｃｙｓ）を含み、配列番号２５のＡｓｐ１４０に対応するアミノ酸残基でのアスパラギンからシステインへの置換（Ａｓｐ１４０Ｃｙｓ）を含む。７４位及び１４０位でのこれらのシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、それによって、野生型ＬｕｋＡと比較して、又はジスルフィド結合を形成することができる対のシステイン残基を含有しない本明細書に記載される他のバリアントＬｕｋＡタンパク質若しくはポリペプチドと比較して、バリアントＬｕｋＡの熱安定性を高める。

別の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＧｌｙ１４９に対応するアミノ酸残基でのグリシンからシステインへの置換（Ｇｌｙ１４９Ｃｙｓ）を含み、配列番号２５のＧｌｙ１５６に対応するアミノ酸残基でのグリシンからシステインへの置換（Ｇｌｙ１５６Ｃｙｓ）を含む。１４９位及び１５６位で導入されたこれらのシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、それによって、野生型ＬｕｋＡと比較して、又はジスルフィド結合を形成することができる対のシステイン残基を含有しない本明細書に記載される他のバリアントＬｕｋＡポリペプチドと比較して、バリアントＬｕｋＡの熱安定性を増加させる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＡポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。任意の実施形態では、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＡポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基Ｔｙｒ７１、Ａｓｐ１３７、Ｇｌｙ１４６、及びＧｌｙ１５３に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。任意の実施形態では、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＡポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基Ｔｙｒ７２、Ａｓｐ１３８、Ｇｌｙ１４７、及びＧｌｙ１５４に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換と組み合わせて、Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＡポリペプチドは、配列番号２５の残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３並びに残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０、Ｓｅｒ１３８、Ｖａｌ１１０、Ｖａｌ１９０、Ｇｌｕ３２０、Ｔｙｒ７１、Ａｓｐ１３７、Ｇｌｙ１４６、及びＧｌｙ１５３の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｔｙｒ７１Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４６Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５３Ｃｙｓの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、このＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１、Ｓｅｒ１３９、Ｖａｌ１１１、Ｖａｌ１９１、Ｇｌｕ３２１、Ｔｙｒ７２、Ａｓｐ１３８、Ｇｌｙ１４７、及びＧｌｙ１５４の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｔｙｒ７２Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３８Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４７Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５４Ｃｙｓの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。いくつかの実施形態では、このＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

免疫原性組成物の他の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２３Ａｌａ、Ｔｙｒ７４Ｃｙｓ、Ａｓｐ１４０Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４９Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５６Ｃｙｓに対応するアミノ酸置換を含む、配列番号２６～３８のＬｕｋＡタンパク質のうちのいずれか１つを含む。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換又は欠失を含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＡバリアントは、Ｔｈｒ２４９に対応する残基での置換を含み、置換は、この残基でのトレオニンからバリンへの置換（Ｔｈｒ２４９Ｖａｌ）である。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントタンパク質又はポリペプチドは、本明細書に記載される他のアミノ酸残基置換のいずれか１つ、すなわち、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する残基での置換と組み合わせて、配列番号２５のＴｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、本明細書に記載されるＬｕｋＡバリアントタンパク質又はポリペプチドは、本明細書に記載される他のアミノ酸残基置換のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、又は９つ全てと組み合わせた、配列番号２５のＴｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、及びＴｈｒ２４９に対応する各々の残基でのアミノ酸置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、残基Ｔｈｒ２４６でのアミノ酸置換を単独で、又は配列番号１のＬｙｓ８０、Ｓｅｒ１３８、Ｖａｌ１１０、Ｖａｌ１９０、及びＧｌｕ３２０の各々に対応する任意の１つ以上のアミノ酸置換と組み合わせて有する、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０、Ｓｅｒ１３８、Ｖａｌ１１０、Ｖａｌ１９０、Ｇｌｕ３２０、及びＴｈｒ２４６の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、及びＴｈｒ２４６Ｖａｌの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。一実施形態では、前述の位置の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有する例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、残基Ｔｈｒ２４７でのアミノ酸置換を単独で、又は配列番号２のＬｙｓ８１、Ｓｅｒ１３９、Ｖａｌ１１１、Ｖａｌ１９１、及びＧｌｕ３２１の各々に対応する任意の１つ以上のアミノ酸置換と組み合わせて有する、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１、Ｓｅｒ１３９、Ｖａｌ１１１、Ｖａｌ１９１、Ｇｌｕ３２１、及びＴｈｒ２４７の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、及びＴｈｒ２４７Ｖａｌの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。一実施形態では、前述の位置の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有する例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。

免疫原性組成物の他の例示的なバリアントＬｕｋＡタンパク質は、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、及びＴｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基での記載されたアミノ酸置換を含む、配列番号２６～３８のＬｕｋＡタンパク質のうちのいずれか１つを含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、Ｔｈｒ２４９、Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する各々の残基でのアミノ酸置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０、Ｓｅｒ１３８、Ｖａｌ１１０、Ｖａｌ１９０、Ｇｌｕ３２０、Ｔｙｒ７１、Ａｓｐ１３７、Ｇｌｙ１４６、Ｇｌｙ１５３、及びＴｈｒ２４６の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｔｙｒ７１Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４６Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１５３Ｃｙｓ、及びＴｈｒ２４６Ｖａｌの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。一実施形態では、前述の位置の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有する例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１、Ｓｅｒ１３９、Ｖａｌ１１１、Ｖａｌ１９１、Ｇｌｕ３２１、Ｔｙｒ７２、Ａｓｐ１３８、Ｇｌｙ１４７、Ｇｌｙ１５４、及びＴｈｒ２４７の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｔｙｒ７２Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３８Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１５４Ｃｙｓ、及びＴｈｒ２４７Ａｌａの各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドである。一実施形態では、前述の位置の各々に対応する残基でのアミノ酸置換を有する例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列、又は配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。

免疫原性組成物の他の例示的なバリアントＬｕｋＡタンパク質は、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、Ｔｈｒ２４９、Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する残基での記載されたアミノ酸置換を含む、配列番号２６～３８のＬｕｋＡタンパク質のうちのいずれか１つを含む。

以下の表１は、本明細書に開示される免疫原性組成物の例示的なバリアントＬｕｋＡアミノ酸配列を提供する。

免疫原性組成物のＳ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド
いくつかの態様では、本開示の免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）タンパク質又はポリペプチドを含む。任意の実施形態では、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドは、野生型タンパク質又はポリペプチドである。好適なＬｕｋＢポリペプチドは、本明細書に開示されるＬｕｋＢポリペプチド、例えば、配列番号１５、１６、及び３９～５１から選択される任意のアミノ酸配列を有するポリペプチドのうちのいずれか１つを含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＢポリペプチドは、ＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチドである。好適なＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＢポリペプチドは、ＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチドである。好適なＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のＬｕｋＢポリペプチドは、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。好適なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、ＬｕｋＢの安定性を改善し、それによってＬｕｋＡＢのトキソイド安定性に寄与する、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を含む。本明細書に記載されるように、これらのバリアントＬｕｋＢタンパク質及びポリペプチドは、理想的なワクチン抗原候補であり、これらは、ＳｐＡポリペプチドを単独で、又はロイコシジンＡ（ＬｕｋＡ）バリアントタンパク質若しくはポリペプチドと組み合わせて含む免疫原性組成物に含まれ得る。免疫原性組成物がＬｕｋＢ及びＬｕｋＡポリペプチドの組み合わせを含む場合、結果として生じるトキソイドは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡＢ毒素の構造を模倣し、それによって、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの最も強力な毒素のうちの１つに対する堅牢な免疫応答の生成を促進する。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、完全長成熟ＬｕｋＢタンパク質配列に対応するアミノ酸残基の全てを含む、完全長ＬｕｋＢタンパク質のバリアントである。任意の実施形態では、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、完全長成熟ＬｕｋＢタンパク質よりも短いバリアントである。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＢポリペプチドは、長さが少なくとも１００アミノ酸残基である。任意の実施形態では、バリアントＬｕｋＢポリペプチドは、長さが少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、少なくとも２３０、少なくとも２４０、少なくとも２５０、少なくとも２６０、少なくとも２７０、少なくとも２８０、少なくとも２９０、少なくとも３００アミノ酸残基である。

本明細書に記載される例示的なＬｕｋＢバリアントタンパク質及びポリペプチドは、クローン複合体ＣＣ８（配列番号１５）及びＣＣ４５（配列番号１６）のバリアントＬｕｋＢであるか（以下の表２を参照）、当業者であれば、配列番号１５及び配列番号１６との関連で同定されたＬｕｋＢのアミノ酸置換及び／又は欠失が、様々なクローン複合体にわたって、又は様々なクローン複合体にわたって高度に保存されているＬｕｋＢの領域内で、保存されるアミノ酸残基であることを容易に理解するであろう。１４個の異なる株のＳ．ａｕｒｅｕｓ由来のＬｕｋＢタンパク質配列のアライメント（図２を参照）は、変異を受ける残基として本明細書で同定されるアミノ酸残基が、アライメントされたＬｕｋＢアミノ酸配列の１４個全てにわたって保存されている残基であることを示している。同定された変異の残基の位置は、個々のＬｕｋＢ－配列間で異なる場合があるが、配列アライメントは、これらの位置間の対応を示している。明確にするために、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＬｕｋＢコンセンサス配列を配列アライメントから生成し、特定のアミノ酸変異の場所を割り当てる目的で利用した。例えば、配列番号３９のグルタミン酸残基１０９のアミノ酸置換は、配列番号１５、４２、４４、及び４６～５１のＬｕｋＢ配列の１０９位のグルタミン酸残基、配列番号１６、４０、４３、及び４５のＬｕｋＢ配列の１１０位のグルタミン酸残基、並びに配列番号４１のＬｕｋＢ配列の６０位のグルタミン酸残基に対応する。したがって、本明細書に記載される同定されたアミノ酸変異を、現在又は将来知られる任意のＬｕｋＢアミノ酸配列の対応するアミノ酸残基に、普遍的に適用することができる。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物の好適なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号３９のアミノ酸残基Ｖａｌ５３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換又は欠失を含む。任意の実施形態では、Ｖａｌ５３でのアミノ酸置換は、バリンからロイシンへの（Ｖａｌ５３Ｌｅｕ）置換を含む。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号３９のＶａｌ５３Ｌｅｕに対応する置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５の５３位に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を有する、ＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５の５３位に対応する位置でのバリンからロイシンへのアミノ酸置換を有する、ＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、５３位のバリンからロイシンへの置換を有する例示的なＣＣ８ＬｕｋＢ配列は、配列番号１７のアミノ酸配列、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を有する、ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６の５３位に対応する位置でのバリンからロイシンへのアミノ酸置換を有する、ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。バリンからロイシンへの置換を含む例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

他の例示的なバリアントＬｕｋＢタンパク質は、Ｖａｌ５３Ｌｅｕに対応するアミノ酸置換を含む配列番号４０～５１のＬｕｋＢタンパク質のいずれか１つを含む。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号３９のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、前述の１つ以上の残基でのアミノ酸置換は、ジスルフィド結合を形成してＬｕｋＡＢヘテロ二量体構造の立体構造を安定化することができるシステイン残基を導入する。例えば、一実施形態では、本明細書に記載されるＬｕｋＢバリアントタンパク質又はポリペプチドは、配列番号３９のＧｌｕ４５に対応するアミノ酸残基でのグルタミン酸からシステインへの置換（Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ）を含み、配列番号３９のＴｈｒ１２１に対応するアミノ酸残基でのトレオニンからシステインへの置換（Ｔｈｒ１２１Ｃｙｓ）を含む。４５位及び１２１位で導入されたこれらのシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、それによって、野生型ＬｕｋＢと比較して、又はジスルフィド結合を形成することができる対のシステイン残基を含有しない本明細書に記載される他のバリアントＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドと比較して、バリアントＬｕｋＢの熱安定性を増加させる。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントタンパク質又はポリペプチドは、配列番号３９のＧｌｕ１０９に対応するアミノ酸残基でのグルタミン酸からシステインへの置換（Ｇｌｕ１０９Ｃｙｓ）を含み、配列番号３９のＡｒｇ１５４に対応するアミノ酸残基でのアルギニンからシステインへの置換（Ａｒｇ１５４Ｃｙｓ）を含む。１０９位及び１５４位で導入されたこれらのシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、それによって、野生型ＬｕｋＢと比較して、又はジスルフィド結合を形成することができる対のシステイン残基を含有しない本明細書に記載される他のバリアントＬｕｋＢタンパク質及びポリペプチドと比較して、バリアントＬｕｋＢの熱安定性を高める。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。任意の実施形態では、Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する残基でのシステインアミノ酸置換を含む例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列、又は配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。任意の実施形態では、Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する残基でのシステインアミノ酸置換を含む例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列、又は配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号３９のＧｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換と組み合わせて、配列番号３９のＶａｌ５３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む。任意の実施形態では、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸残基Ｖａｌ５３、Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸残基Ｖａｌ５３Ｌｅｕ、Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１０９Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２１Ｃｙｓ、及びＡｒｇ１５４Ｃｙｓに対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列、又は配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸残基Ｖａｌ５３、Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸残基Ｖａｌ５３Ｌｅｕ、Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１１０Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２３Ｃｙｓ、及びＡｒｇ１５５Ｃｙｓに対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである。任意の実施形態では、例示的なＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列、又は配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

免疫原性組成物の他の例示的なＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号３９の配列番号３９のＶａｌ５３、Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する残基の記載されたアミノ酸置換を含む、配列番号４０～５１のＬｕｋＢタンパク質のうちのいずれか１つを含む。

以下の表２は、本明細書に開示される免疫原性組成物の例示的なバリアントＬｕｋＢアミノ酸配列を提供する。

免疫原性組成物のブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド
本明細書に記載される免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓプロテインＡポリペプチドを含有する。「プロテインＡ」又は「ＳｐＡ」は、本明細書において互換的に使用され、感染される宿主の自然免疫応答及び適応免疫応答からの細菌回避を提供するように機能する、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの細胞壁固定表面タンパク質を指す。プロテインＡは、それらのＦｃ部分で免疫グロブリンに結合することができ、Ｂ細胞増殖及びアポトーシスを適切に刺激する際に、Ｂ細胞受容体のＶ_Ｈ３ドメインと相互作用することができ、フォン・ヴィレブランド因子Ａ１ドメインに結合して、細胞内凝固を活性化することができ、かつＴＮＦ受容体－１に結合して、ブドウ球菌性肺炎の病因に寄与し得る。

Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株の大部分は、プロテインＡ（ＳｐＡ）の構造遺伝子を発現し、その細胞壁固定表面タンパク質産物（ＳｐＡ）が、Ｅ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣと指定される５つの高度に相同な免疫グロブリン結合ドメインを包含する、十分に特徴付けられた毒性因子である。アミノ酸レベルで約８０％の同一性を示す免疫グロブリンドメインは、長さが５６～６１残基であり、タンデムリピートとして組織化されている。免疫グロブリン結合ドメインの各々は、集合して３ヘリックスバンドルになり、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃドメイン、ＩｇＭのＶ_Ｈ３重鎖（Ｆａｂ）、そのＡ１ドメインでのフォン・ヴィレブランド因子、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）受容体１（ＴＮＦＲ１）に結合する、抗平行α－ヘリックスから構成される。

ＳｐＡは、ＩｇＧのＦｃ成分に結合することによってｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉの好中球食作用を妨げる。更に、ＳｐＡは、フォン・ヴィレブランド因子Ａ１ドメインへの結合を介して血管内凝固を活性化することができる。フィブリノゲン及びフィブロネクチンなどの血漿タンパク質は、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ（ＣｌｆＡ及びＣｌｆＢ）と血小板インテグリンＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａとの間の架橋として作用し、これは、ｖＷＦＡ１とのＳｐＡ会合を介して補完される活性であり、これは、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉがＧＰＩｂ－α血小板受容体を介して血小板を捕捉することを可能にする。ＳｐＡはまた、ＴＮＦＲ１に結合し、この相互作用は、ブドウ球菌性肺炎の病因に寄与する。ＳｐＡは、ＴＲＡＦ２、ｐ３８／ｃ－Ｊｕｎキナーゼ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、及びＲｅｌ－転写因子ＮＦ－κＢのＴＮＦＲ１媒介活性化を通して、炎症促進性シグナル伝達を活性化する。ＳｐＡ結合は、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）を必要とすると思われる活性であるＴＮＦＲ１放出を更に誘導する。開示された活性の各々は、５つのＩｇＧ結合ドメインを通して媒介され、最初にプロテインＡとヒトＩｇＧ１との間の相互作用に対するそれらの要件によって定義される同じアミノ酸置換によって乱される可能性がある（Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎｅｔａｌ．，（１９９３））。

ＳｐＡはまた、Ｂ細胞受容体であるＶ_Ｈ３含有ＩｇＭのＦａｂ領域を捕捉することによって、Ｂ細胞超抗原として機能する。静脈内攻撃接種の後、ブドウ球菌ＳｐＡ変異は、器官組織におけるブドウ球菌負荷の低減、及び膿瘍を形成する能力の劇的な減少を示す。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡポリペプチドは、野生型（非バリアント）ＳｐＡポリペプチドである。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥＩｇＧドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくともＳｐＡＡドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡＡドメインは、配列番号５５又は４８のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくともＳｐＡＢドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡＢドメインは、配列番号５６又は４９のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくともＳｐＡＣドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡＣドメインは、配列番号５７又は５０のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくともＳｐＡＤドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡＤドメインは、配列番号５８又は５１のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、少なくともＳｐＡＥドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡＥドメインは、配列番号５９又は５２のアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも２つ、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも３つ、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも４つ、又はＳｐＡＩｇＧドメインのうちの５つ全てを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡポリペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列、又は配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。例示的なＳｐＡドメイン及び完全長配列が、以下の表３に提供される。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡポリペプチドは、ＳｐＡバリアントポリペプチドである。本明細書で言及されるように、「プロテインＡバリアント」、「ＳｐＡバリアント」、「プロテインＡバリアントポリペプチド」、及び「ＳｐＡバリアントポリペプチド」という用語は、Ｆｃ及びＶ_Ｈ３への結合を破壊する少なくとも１つのアミノ酸置換を有するＳｐＡＩｇＧドメインを含むポリペプチドを指す。ある特定の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＡドメイン、バリアントＢドメイン、バリアントＣドメイン、バリアントＤドメイン、及び／又はバリアントＥドメインを含む。好適なＳｐＡバリアントポリペプチドには、非毒性であり、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌プロテインＡ及びプロテインＡ様タンパク質並びに／又はそれを発現する細菌に対する免疫応答を刺激する、それらのバリアント及びそれらの断片が含まれる。

本明細書において、免疫グロブリンに結合せず、したがって、野生型ＳｐＡポリペプチドの非細胞傷害性バリアントである、ＳｐＡバリアントポリペプチドが記載される。ＳｐＡバリアントポリペプチドは、非毒性であり、ブドウ球菌感染症及び疾患から保護するために液性免疫応答を刺激する。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、少なくとも１つのバリアントＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、又はＣドメインを含む完全長ＳｐＡバリアントである。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０又は６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、完全長ＳｐＡポリペプチドの断片を含む。ＳｐＡバリアントポリペプチド断片は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のＩｇＧ結合ドメインを含み得る。ＩｇＧ結合ドメインは、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び／又はＥドメインであり得る。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＡドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＢドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＣドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＤドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のバリアントＥドメインを含む。

任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドのバリアントＡドメインは、例えば、配列番号５５又は４８のアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。バリアントＢドメインは、例えば、配列番号５６又は４９のアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。バリアントＣドメインは、例えば、配列番号５７又は５０のアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。バリアントＤドメインは、例えば、配列番号５８又は５１のアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。バリアントＥドメインは、例えば、配列番号５９又は５２のアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸置換を含む。

ある特定の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及び／又はＣドメインを含み、これらはそれぞれ、配列番号５９若しくは５２、配列番号５８若しくは５１、配列番号５５若しくは４８、配列番号５６若しくは４９、及び配列番号５７若しくは５０に対して７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５９のアミノ酸位置６、７、３３、及び／又は３４での置換を含むバリアントＥドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５８のアミノ酸位置９、１０、３６、及び／又は３７での置換を含むバリアントＤドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５５のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＡドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５６のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＢドメインを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５７のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＣドメインを含む。バリアントＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及び／又はＣドメインにおけるアミノ酸置換は、ＷＯ２０１１／００５３４１及びＷＯ２０２０／２３２４７１に記載されており、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡドメインＤのＩｇＧＦｃ結合サブドメインにおける、及び／又は他のＩｇＧドメインの対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換を含む。１つ以上のアミノ酸置換は、ＳｐＡバリアントポリペプチドのＩｇＧＦｃへの結合を破壊し得るか、又は減少させ得る。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡドメインＤのＶ_Ｈ３結合サブドメインにおける、及び／又は他のＩｇＧドメインの対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換を更に含む。１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ_Ｈ３への結合を破壊し得るか、又は減少させ得る。

ＳｐＡドメインＤにおける前述のアミノ酸置換（すなわち、ＩｇＧＦｃサブドメイン結合領域又はＶ_Ｈ３結合サブドメイン領域における置換）は、各ドメインの対応する位置でＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥドメインに組み込まれ得る。対応する位置は、ＳｐＡドメインＤのＳｐＡドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥとアライメントして、ＳｐＡドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥのどの残基がバリアントＳｐＡＤ残基に対応するかを決定することによって定義される。例えば、ＳｐＡドメインＤの配列番号５８における９位のグルタミン残基でのアミノ酸置換は、ＳｐＡドメインＡの配列番号５５における７位のグルタミン残基、ＳｐＡドメインＢの配列番号５６における７位のグルタミン残基、ＳｐＡドメインＣの配列番号５７における７位のグルタミン残基、及びＳｐＡドメインＥの配列番号５９における６位のグルタミン残基に対応する。したがって、本明細書に記載される同定されたアミノ酸変異を、現在又は将来知られる任意のＳｐＡドメインアミノ酸配列の対応するアミノ酸残基に、普遍的に適用され得る。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、（ａ）ＳｐＡドメインＤのＩｇＧＦｃ結合サブドメインにおける、及び／又は他のＩｇＧドメインにおける対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換、並びに（ｂ）ＳｐＡドメインＤのＶ_Ｈ３結合サブドメインにおける、及び／又は他のＩｇＧドメインにおける対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換を含む。１つ以上のアミノ酸置換は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが宿主生物において低減又は排除された毒性を有するように、ＳｐＡバリアントポリペプチドのＩｇＧＦｃ及びＶ_Ｈ３への結合を低減する。

任意の実施形態では、配列番号５８のＳｐＡＤドメインのＩｇＧＦｃ結合サブドメインのアミノ酸残基Ｆ５、Ｑ９、Ｑ１０、Ｓ１１、Ｆ１３、Ｙ１４、Ｌ１７、Ｎ２８、Ｉ３１、及び／又はＫ３５は、ＩｇＧＦｃへの結合が低減又は排除されるように修飾又は置換される。任意の実施形態では、対応する修飾は、ＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥドメインに組み込まれる。対応する位置は、ＳｐＡドメインＤのＳｐＡドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥとアライメントして、ＳｐＡドメインＤにおける目的の残基に対応するＳｐＡドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥにおける残基を決定することによって定義される。

任意の実施形態では、配列番号５８のＳｐＡＤドメインのＶＨ３結合サブドメインのアミノ酸残基Ｑ２６、Ｇ２９、Ｆ３０、Ｓ３３、Ｄ３６、Ｄ３７、Ｑ４０、Ｎ４３、及び／又はＥ４７は、Ｖ_Ｈ３への結合が低減又は排除されるように修飾又は置換される。対応する修飾は、ＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＥドメインに組み込まれ得る。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のバリアントＤドメインを含む。バリアントＤドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のアミノ酸残基置換又は修飾を含み得る。アミノ酸残基の置換又は修飾は、例えば、ＳｐＡドメインＤ（配列番号５８）のＩｇＧＦｃ結合サブドメインのアミノ酸残基Ｆ５、Ｑ９、Ｑ１０、Ｓ１１、Ｆ１３、Ｙ１４、Ｌ１７、Ｎ２８、Ｉ３１、及び／又はＫ３５、並びに／又はＳｐＡドメインＤ（配列番号５８）のＶＨ３結合サブドメインのアミノ酸残基Ｑ２６、Ｇ２９、Ｆ３０、Ｓ３３、Ｄ３６、Ｄ３７、Ｑ４０、Ｎ４３、及び／又はＥ４７で発生し得る。任意の実施形態では、アミノ酸残基の置換又は修飾は、配列番号５８のアミノ酸残基Ｑ９及びＱ１０にある。任意の実施形態では、アミノ酸残基の置換又は修飾は、配列番号５８のアミノ酸残基Ｄ３６及びＤ３７にある。バリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び／又はＥドメインにおけるアミノ酸置換は、ＷＯ２０１１／００５３４１に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５３又は７２に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％（であるが１００％ではない）配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５３若しくは７２、又は配列番号５３若しくは７２の少なくともｎ個の連続するアミノ酸の断片に対して９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｎは、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、又は少なくとも４２５個のアミノ酸を含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７２のカルボキシ（Ｃ）末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、若しくは３５個のアミノ酸）、及び／又はアミノ（Ｎ）末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、若しくは３５個のアミノ酸）を含み得る。任意の実施形態では、最後の３５個のＣ末端アミノ酸が欠失している。ある特定の実施形態では、最初の３６個のＮ末端アミノ酸が欠失している。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７２のアミノ酸残基３７～３２７を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、５つ全てのＳｐＡＩｇＧ結合ドメインを含み、これらは、Ｎ末端からＣ末端に配置され、Ｅドメイン、Ｄドメイン、Ａドメイン、Ｂドメイン、及びＣドメインを順に含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡのＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを連続して含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、天然Ｅ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及び／又はＣドメインのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つを含む。天然ドメインのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つが欠失している実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡがＢ細胞超抗原として機能する場合に発生し得る過剰なＢ細胞増殖及びアポトーシスを防止することができる。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＥドメインのみを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＤドメインのみを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＡドメインのみを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＢドメインのみを含む。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＣドメインのみを含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７２と比較して、１１個のジペプチド配列リピートのうちの少なくとも１つの変異を含む（例えば、ＱＱジペプチドリピート及び／又はＤＤジペプチドリピート）。一例として、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置７及び８、３４及び３５、６０及び６１、６８及び６９、９５及び９６、１２６及び１２７、１５３及び１５４、１８４及び１８５、２１１及び２１２、２４２及び２４３、並びに２６９及び２７０でのＸＸジペプチドリピートは、免疫グロブリンに対するＳｐＡバリアントポリペプチドの親和性を低減するように置換される。Ｇｌｎ－Ｇｌｎ（ＱＱ）ジペプチドの有用なジペプチド置換には、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ（ＫＫ）、Ａｒｇ－Ａｒｇ（ＲＲ）、Ａｒｇ－Ｌｙｓ（ＲＫ）、Ｌｙｓ－Ａｒｇ（ＫＲ）、Ａｌａ－Ａｌａ（ＡＡ）、Ｓｅｒ－Ｓｅｒ（ＳＳ）、Ｓｅｒ－Ｔｈｒ（ＳＴ）、及びＴｈｒ－Ｔｈｒ（ＴＴ）ジペプチドが含まれ得るが、これらに限定されない。ＱＱジペプチドは、ＫＲジペプチドで置換されることが好ましい。Ａｓｐ－Ａｓｐ（ＤＤ）ジペプチドの有用なジペプチド置換には、Ａｌａ－Ａｌａ（ＡＡ）、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ（ＫＫ）、Ａｒｇ－Ａｒｇ（ＲＲ）、Ｌｙｓ－Ａｒｇ（ＫＲ）、Ｈｉｓ－Ｈｉｓ（ＨＨ）、及びＶａｌ－Ｖａｌ（ＶＶ）ジペプチドが含まれ得るが、これらに限定されない。ジペプチド置換は、例えば、ヒトＩｇＧのＦｃ部分及びＶＨ３含有ヒトＢ細胞受容体のＦａｂ部分に対するＳｐＡバリアントポリペプチドの親和性を減少させ得る。

したがって、任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７８を含むことができ、ＸＸジペプチドリピートのうちの１つ以上、好ましくは１１個全てが、配列番号７２の対応するジペプチドとは異なるアミノ酸で置換される。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７９を含み、６０位及び６１位のアミノ酸ダブレットは、それぞれＬｙｓ及びＡｒｇ（Ｋ及びＲ）である。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号８０又は配列番号８１を含む。ある特定の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７５を含み、配列番号７５の好ましい例は、配列番号７６又は配列番号７７である（配列番号７７は、Ｎ末端メチオニンを有する配列番号７６である）。

任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドＮ末端は、配列番号７２の最初の３６個のアミノ酸の欠失を含み、Ｃ末端は、配列番号７２の最後の３５個のアミノ酸の欠失を含む。配列番号７２の３６個のアミノ酸のＮ末端欠失及び配列番号７２の３５個のアミノ酸のＣ末端欠失を含むＳｐＡバリアントポリペプチドは、第５のＩｇ結合ドメインの欠失（すなわち、配列番号７２のＬｙｓ－３２７の下流）を更に含み得る。このＳｐＡバリアントは、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、ＸＸジペプチドは、アミノ酸が配列番号７２の対応するジペプチド配列とは異なるように、アミノ酸で置換され得る。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７４を含む。

任意の実施形態では、上述のように、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、天然Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び／又はＥドメインのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含む。例えば、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、Ｄ、Ａ、Ｂ、又はＣドメインではなく、ＳｐＡＥドメインのみを含み得る。したがって、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＳｐＡＥドメインを含むことができ、ＳｐＡＥドメインは、配列番号８３の少なくとも１つのアミノ酸残基における置換を含む。置換は、例えば、配列番号８３のアミノ酸位置６０及び６１にあり得る。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、又は配列番号８２を含むことができる。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、又は配列番号８２を含むことができる。ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＷＯ２０１５／１４４６５３に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号８４のアミノ酸４３Ｑ、４４Ｑ、９６Ｑ、９７Ｑ、１６２Ｑ、１６３Ｑ、２２０Ｑ、２２１Ｑ、２７８Ｑ、及び２７９Ｑでのアミノ酸置換を含む。配列番号８４のアミノ酸４３Ｑ、４４Ｑ、９６Ｑ、９７Ｑ、１６２Ｑ、１６３Ｑ、２２０Ｑ、２２１Ｑ、２７８Ｑ、及び２７９Ｑでのアミノ酸置換は、例えば、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）置換であり得る。ある特定の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号８４のアミノ酸７０Ｄ、７１Ｄ、１３１Ｄ、１３２Ｄ、１８９Ｄ、１９０Ｄ、２４７Ｄ、２４８Ｄ、３０５Ｄ、及び３０６Ｄでのアミノ酸置換を含む。配列番号８４のアミノ酸７０Ｄ、７１Ｄ、１３１Ｄ、１３２Ｄ、１８９Ｄ、１９０Ｄ、２４７Ｄ、２４８Ｄ、３０５Ｄ、及び３０６Ｄでのアミノ酸置換は、例えば、アラニン（Ａ）又はバリン（Ｖ）置換であり得る。ある特定の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、及び配列番号１００から選択され得る。ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＵＳ２０１６／０３０４５６６に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＡドメイン、例えば、配列番号６２、６７、８８、若しくは９３のアミノ酸配列、又は配列番号６２、６７、８８、若しくは９３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＡドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＢドメイン、例えば、配列番号６３、６８、８９、若しくは９４のアミノ酸配列、又は配列番号６３、６８、８９、若しくは９４のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＢドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＣドメイン、例えば、配列番号６４、６９、９０、若しくは９５のアミノ酸配列、又は配列番号６４、６９、９０、若しくは９５のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＣドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＤドメイン、例えば、配列番号６６、７１、９１、若しくは９６のアミノ酸配列、又は配列番号６６、７１、９１、若しくは９６のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＤドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＥドメイン、例えば、配列番号６５、７０、９２、若しくは９７のアミノ酸配列、又は配列番号６５、７０、９２、若しくは９７のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＥドメインを含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドのバリアントＡドメインは、例えば、配列番号６２のアミノ酸配列を含むことができる。バリアントＢドメインは、例えば、配列番号６３のアミノ酸配列を含むことができる。バリアントＣドメインは、例えば、配列番号６４のアミノ酸配列を含むことができる。バリアントＤドメインは、例えば、配列番号６６のアミノ酸配列を含むことができる。バリアントＥドメインは、例えば、配列番号６５のアミノ酸配列を含むことができる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、それぞれ、配列番号６２又は６７、配列番号６３又は６８、配列番号６４又は６９、配列番号６６又は７１、及び配列番号６５又は７０に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる、バリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥドメインを含むことができる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥドメインを含むことができ、これらは、それぞれ、配列番号８８又は９３、配列番号８９又は９４、配列番号９０又は９５、配列番号９１又は９６、及び配列番号９２又は９７に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、バリアントＤドメインを含み、バリアントＤドメインは、配列番号５８の９位、１０位、及び／又は３３位に対応するアミノ酸位置での置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、（ｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミンアミノ酸残基のリジン置換、並びに（ｉｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３３位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるセリンアミノ酸残基のグルタミン酸置換を含む。ＳｐＡバリアントポリペプチドは、陰性対照と比較して、血中のＩｇＧ及びＩｇＥを検出できるほどに架橋せず、かつ／又は好塩基球を活性化しない。血中のＩｇＧ及びＩｇＥを検出できるほどに架橋しないこと、並びに／又は好塩基球を活性化しないことによって、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ヒト患者にとって重大な安全性若しくは毒性の問題を引き起こさず、かつ／又はヒト患者においてアナフィラキシー性ショックの重大なリスクを引き起こさない。

任意の実施形態では、ヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対する本明細書に記載されるＳｐＡバリアントポリペプチドのＫ_Ａ結合親和性は、ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応するＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミン残基のリジン置換、並びにＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３６位及び３７位に対応するＳｐＡＡ～Ｅドメインにおけるアスパラギン酸のアラニン置換からなるＳｐＡバリアントポリペプチド（ＳｐＡ_ＫＫＡＡ）と比較して低減される。ドメインＤ（配列番号５８）の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのドメインＡ～Ｅの各々におけるグルタミンからリジンへの置換、並びにドメインＤの３６位及び３７位に対応するアミノ酸位置でのドメインＡ～Ｅの各々におけるアスパラギン酸からアラニンへの置換からなるＳｐＡバリアントポリペプチドは、比較基準として使用され、ＳｐＡ_ＫＫＡＡと名付けられる。ＳｐＡ_ＫＫＡＡバリアントポリペプチドは、配列番号５４のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡ_ＫＫＡＡと比較して少なくとも２倍低減されたヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対するＫ_Ａ結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡ_ＫＫＡＡと比較して、少なくとも１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３倍以上、又はそれらの間の任意の値低減されたヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対するＫ_Ａ結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡ_ＫＫＡＡと比較して、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００％以上、又はそれらの間の任意の値低減されたヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対するＫ_Ａ結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、約１×１０^５Ｍ^－１未満であるヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対するＫ_Ａ結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、約３、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、若しくは０．１×１０^５Ｍ^－１未満、又はそれらの間の任意の値であるヒトＩｇＧからのＶ_Ｈ３に対するＫ_Ａ結合親和性を有する。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３６位及び３７位に対応するＳｐＡＡ～Ｅドメインのいずれにおける置換も有しない。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、（ｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応する位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミンアミノ酸残基のリジン置換、並びに（ｉｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３３位に対応する位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるセリンアミノ酸残基のグルタミン酸置換を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６５のアミノ酸配列、又は配列番号６５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＥドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＤドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６２のアミノ酸配列、又は配列番号６２に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＡドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６３のアミノ酸配列、又は配列番号６３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＢドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸配列、又は配列番号６４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＣドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、（ｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応する位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミンアミノ酸残基のリジン置換、並びに（ｉｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３３位に対応する位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるセリンアミノ酸残基のトレオニン置換を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７０のアミノ酸配列、又は配列番号７０に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＥドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列、又は配列番号７１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＤドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６７のアミノ酸配列、又は配列番号６７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＡドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６８のアミノ酸配列、又は配列番号６８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＢドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６９のアミノ酸配列、又は配列番号６９に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＳｐＡＣドメインを含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６１のアミノ酸配列、又は配列番号６１に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。任意の実施形態では、免疫原性組成物のＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。

ＳｐＡバリアントポリペプチドは、陰性対照と比較して、血中のＩｇＧ及びＩｇＥを検出できるほどに架橋せず、かつ／又は好塩基球を活性化しない。血中のＩｇＧ及びＩｇＥを検出できるほどに架橋しないこと、並びに／又は好塩基球を活性化しないことによって、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、ヒト患者にとって重大な安全性若しくは毒性の問題を引き起こさないか、又はヒト患者においてアナフィラキシー性ショックの重大なリスクを引き起こさない。本明細書に開示される組成物及び方法における使用に適したＳｐＡバリアントポリペプチドは、ＷＯ２０２０／２３２４７１に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

以下の表３は、本明細書に開示される免疫原性組成物の例示的なＳｐＡポリペプチドアミノ酸配列を提供する。

本明細書の開示の全ての態様によれば、本明細書に開示される免疫原性組成物のＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＬｕｋＢポリペプチド、及びＳｐＡポリペプチドは、１つ以上の異種アミノ酸配列を更に含み得る。好適な異種アミノ酸配列には、限定されないが、タグ配列、免疫原、シグナル配列などが含まれる。好適なタグ配列としては、限定されないが、ポリヒスチジンタグ、ポリアルギニンタグ、ＦＬＡＧタグ、ステップタグＩＩ、ユビキチンタグ、ＮｕｓＡタグ、キチン結合ドメイン、カルモジュリン結合ペプチド、セルロース結合ドメイン、Ｈａｔ－タグ、Ｓ－タグ、ＳＢＰ、マルトース結合タンパク質、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼが挙げられる（参照により本明細書に組み込まれる、ＴｅｒｐｅＫ．，“ＯｖｅｒｖｉｅｗｏｆＴａｇＰｒｏｔｅｉｎＦｕｓｉｏｎｓ：ＦｒｏｍＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓｔｏＣｏｍｍｅｒｃｉａｌＳｙｓｔｅｍｓ，”Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：５２３－３３（２００３）を参照）。好適な免疫原としては、限定されないが、Ｔ細胞エピトープ、Ｂ細胞エピトープが挙げられる。好適なシグナル配列としては、限定されないが、ＰｅｌＢシグナル配列、Ｓｅｃシグナル配列、Ｔａｔシグナル配列、ＡｍｙＥシグナル配列（参照により本明細書に組み込まれる、ＦｒｅｕｄｌＲ．，“ＳｉｇｎａｌＰｅｐｔｉｄｅｓｆｏｒＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰｒｏｔｅｉｎＳｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎＢａｃｔｅｒｉａｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍｓ”，ＭｉｃｒｏｂｉａｌＣｅｌｌＦａｃｔｏｒｉｅｓ１７：５２（２０１８）を参照）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、及びＳｐＡポリペプチドは、ＰｅｌＢ配列（ＭＫＹＬＬＰＴＡＡＡＧＬＬＬＬＡＡＱＰＡＭＡ、配列番号２３）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、及びＳｐＡポリペプチドは、Ｈｉｓ－タグ（例えば、ＮＳＡＨＨＨＨＨＨＧＳ、配列番号２４）を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及び／又はＬｕｋＢポリペプチドは、前述のＰｅｌＢ配列及びＨｉｓ－タグの両方を含む。

Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、及びＳｐＡポリヌクレオチド及び構築物
本開示の別の態様は、本明細書に記載されるＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＬｕｋＢポリペプチド、及びＳｐＡポリペプチドをコードする核酸分子、並びにこれらの核酸分子のうちの１つ以上を含む免疫原性組成物を対象とする。本明細書に記載される核酸分子には、単離ポリヌクレオチド、組換えポリヌクレオチド配列、発現ベクターの一部、又はインビトロ又はインビボ転写／翻訳に使用される線状ＤＮＡ配列を含む線状ＤＮＡ配列の一部、並びに本明細書に記載されるバリアントＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、及びＳｐＡポリペプチドの原核細胞及び真核細胞の発現及び分泌に適合するベクターが挙げられる。本開示のポリヌクレオチドは、核酸自動合成装置での固相ポリヌクレオチド合成などの化学合成によって生成され得、完全な一本鎖又は二本鎖分子に組み立てられ得る。あるいは、本開示のポリヌクレオチドは、ＰＣＲ、それに続く通常のクローニングなどの他の技術によって生成され得る。所与の配列のポリヌクレオチドを生成又は取得するための技術は、当技術分野で周知である。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５の８３位のリジンに対応する残基でのリジンからメチオニンへの置換（Ｌｙｓ８３Ｍｅｔ）を含むＬｕｋＡバリアントをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号２５の１４１位でのセリンに対応する残基でのセリンからアラニンへの置換（Ｓｅｒ１４１Ａｌａ）を含むバリアントＬｕｋＡポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号２５の１１３位のバリンに対応する残基でのバリンからイソロイシンへの置換（Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ）を含むバリアントＬｕｋＡポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号２５の１９３位のバリンに対応する残基でのバリンからイソロイシンへの置換（Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ）を含むＬｕｋＡポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、前述のアミノ酸残基に対応する残基、すなわち、配列番号２５のＬｙｓ８０３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、及びＶａｌ１９３Ｉｌｅでの、リジンからメチオニンへの、セリンからアラニンへの、及びバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換を含むそのバリアントＬｕｋＡポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、Ｇｌｕ３２３Ａｌａに対応するアミノ酸置換を更に含むそのバリアントＬｕｋＡポリペプチドをコードし、すなわち、ポリヌクレオチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａ置換に対応する置換を含むバリアントＬｕｋＡをコードする。

一実施形態では、例示的な核酸分子は、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアント配列をコードする核酸分子であり、例えば、配列番号１のＬｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ及びＧｌｕ３２０Ａｌａに対応するアミノ酸置換を含む配列番号１のバリアントをコードする核酸分子である。ＣＣ８ＬｕｋＡをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０１として本明細書に提供される。したがって、任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号１０１のバリアントであり、当該バリアントは、配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的な核酸分子は、配列番号３（ＬｕｋＡＣＣ８Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｌｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０３に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む。

別の実施形態では、例示的な核酸分子は、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント配列をコードする核酸分子であり、例えば、配列番号２のＬｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２１Ａｌａに対応するアミノ酸置換を含む、配列番号２のバリアントをコードする核酸分子である。ＣＣ４５ＬｕｋＡをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０２として本明細書に提供される。したがって、任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号１０２のバリアントであり、当該バリアントは、配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。

別の実施形態では、免疫原性組成物の例示的な核酸分子は、配列番号４（ＬｕｋＡＣＣ４５Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｌｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。このＬｕｋＡＣＣ４５バリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０４に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の１つ以上のポリヌクレオチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むＬｕｋＡバリアントタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５のＴｙｒ７４に対応するアミノ酸残基でのチロシンからシステインへの置換（Ｔｙｒ７４Ｃｙｓ）を含み、配列番号２５のＡｓｐ１４０に対応するアミノ酸残基でのアスパラギンからシステインへの置換（Ａｓｐ１４０Ｃｙｓ）を含む、ＬｕｋＡバリアントタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５のＧｌｙ１４９に対応するアミノ酸残基でのグリシンからシステインへの置換（Ｇｌｙ１４９Ｃｙｓ）を含み、配列番号２５のＧｌｙ１５６に対応するアミノ酸残基でのグリシンからシステインへの置換（Ｇｌｙ１５６Ｃｙｓ）を含むＬｕｋＡバリアントタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むバリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基である。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換と組み合わせて、Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、バリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５の残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３並びに残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むバリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号５（ＬｕｋＡＣＣ８Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｌｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、Ｔｙｒ７１Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４６Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１５３Ｃｙｓ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。任意の実施形態では、本開示の例示的な核酸分子は、配列番号６（ＬｕｋＡＣＣ４５Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｌｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｔｙｒ７２Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３８Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１５４Ｃｙｓ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の１つ以上のポリヌクレオチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換又は欠失を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５の２４９位に対応するこの残基でのトレオニンからバリンへの置換を含むＬｕｋＡバリアントをコードする。任意の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号２５のＬｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、Ｇｌｕ３２３、Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する残基でのアミノ酸置換のうちのいずれか１つ又は全てと組み合わせて、Ｔｈｒ２４９に対応する位置でのアミノ酸置換を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号７（ＬｕｋＡＣＣ８Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｌｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、及びＴｈｒ２４６Ｖａｌ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号８（ＬｕｋＡＣＣ４５Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｌｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２４７Ｖａｌ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。

任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号９（ＬｕｋＡＣＣ８Ｇｌｕ３２０Ａｌａ、Ｌｙｓ８０Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３８Ａｌａ、Ｖａｌ１１０Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９０Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２４６Ｖａｌ、Ｔｙｒ７１Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３７Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４６Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５３Ｃｙｓ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。任意の実施形態では、配列番号９のこのＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０５に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１０５のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号１０（ＬｕｋＡＣＣ４５Ｇｌｕ３２１Ａｌａ、Ｌｙｓ８１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１３９Ａｌａ、Ｖａｌ１１１Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９１Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２４７Ｖａｌ、Ｔｙｒ７２Ｃｙｓ、Ａｓｐ１３８Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４７Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５４Ｃｙｓ）のＬｕｋＡバリアント配列、又は配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする核酸分子である。任意の実施形態では、配列番号１０のこのＬｕｋＡＣＣ４５バリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０６に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１０６のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物の１つ以上のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるＬｕｋＢポリペプチドを更にコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドをコードする。ＣＣ８ＬｕｋＢをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０７として本明細書に提供される。したがって、任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号１０７のバリアントであり、当該バリアントは、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドをコードする。ＣＣ４５ＬｕｋＢをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０８として本明細書に提供される。したがって、任意の実施形態では、例示的な核酸分子は、配列番号１０８のバリアントであり、当該バリアントは、配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号３９のアミノ酸残基Ｖａｌ５３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換又は欠失を含むバリアントＬｕｋＢポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、Ｖａｌ５３でのアミノ酸置換は、バリンからロイシンへの（Ｖａｌ５３Ｌｅｕ）置換を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的なポリヌクレオチドは、配列番号１７（ＬｕｋＢＣＣ８Ｖ５３Ｌ）のバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。このＬｕｋＢＣＣ８Ｖ５３Ｌバリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０９に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ８バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１０９のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的なポリヌクレオチドは、配列番号１８（ＬｕｋＢＣＣ４５Ｖ５３Ｌ）のバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。このＬｕｋＢＣＣ４５Ｖ５３Ｌバリアントをコードする例示的な核酸分子は、配列番号１１０に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡＣＣ４５バリアントをコードする核酸分子は、配列番号１１０のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号３９のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むバリアントＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、前述の１つ以上の残基でのアミノ酸置換は、ジスルフィド結合を形成してＬｕｋＡＢヘテロ二量体構造の立体構造を安定化することができる１つ以上のシステイン残基を導入する。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号３９のＧｌｕ４５に対応するアミノ酸残基でのグルタミン酸からシステインへの置換（Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ）、及び配列番号３９のＴｈｒ１２１に対応するアミノ酸残基でのトレオニンからシステインへの置換（Ｔｈｒ１２１Ｃｙｓ）を含むＬｕｋＢバリアントタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号３９のＧｌｕ１０９に対応するアミノ酸残基でのグルタミン酸からシステインへの置換（Ｇｌｕ１０９Ｃｙｓ）、及び配列番号３９のＡｒｇ１５４に対応するアミノ酸残基でのアルギニンからシステインへの置換（Ａｒｇ１５４Ｃｙｓ）を含むＬｕｋＢバリアントタンパク質又はポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号３９のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むバリアントＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、これらのアミノ酸残基の各々でのアミノ酸置換は、上記のようなシステイン残基の導入を伴う。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２１（ＬｕｋＢＣＣ８Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１０９Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２１Ｃｙｓ、及びＡｒｇ１５４Ｃｙｓ）のアミノ酸配列を含むバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２（ＬｕｋＢＣＣ４５Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２２Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１１０Ｃｙｓ、Ａｒｇ１５５Ｃｙｓ）のアミノ酸配列を含むバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。

任意の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９のＧｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換と組み合わせて、配列番号３９のＶａｌ５３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含むバリアントＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１９（ＬｕｋＢＣＣ８Ｖａｌ５３Ｌｅｕ、Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１０９Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２１Ｃｙｓ、及びＡｒｇ１５４Ｃｙｓ）のアミノ酸配列を有するバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２０（ＬｕｋＢＣＣ４５Ｖａｌ５３Ｌｅｕ、Ｇｌｕ４５Ｃｙｓ、Ｔｈｒ１２２Ｃｙｓ、Ｇｌｕ１１０Ｃｙｓ、Ａｒｇ１５５Ｃｙｓ）のアミノ酸配列を有するバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチド、又は配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列をコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物の例示的な核酸分子は、配列番号４のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント配列及び配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列をコードする。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－１５）をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０８（ＣＣ４５ＬｕｋＢ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された、配列番号１０４（ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０８のヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的な核酸分子は、配列番号４のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント配列及び配列番号１８のＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列をコードする。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３０）をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１１０（ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された、配列番号１０４（ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１１０のヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０４のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的な核酸分子は、配列番号３のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント配列及び配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列をコードする。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３２）をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０７（ＣＣ８ＬｕｋＢ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された、配列番号１０３（ＣＣ８ＬｕｋＡバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０７のヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的な核酸分子は、配列番号３のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント配列及び配列番号１８のＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列をコードする。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３３）をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１１０（ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された、配列番号１０３（ＣＣ８ＬｕｋＡバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１１０のヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む。

任意の実施形態では、本開示の例示的な核酸分子は、配列番号３のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント配列及び配列番号１７のＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列をコードする。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３４）をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０９（ＣＣ８ＬｕｋＢバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された、配列番号１０３（ＣＣ８ＬｕｋＡバリアント）のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む。このＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする例示的な核酸分子は、配列番号１０９のヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列を含む。

本開示の例示的なＬｕｋＡ及びＬｕｋＢ核酸分子配列が、以下の表４に提供される。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＳｐＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、野生型又は非バリアントＳｐＡポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５５又は４８のアミノ酸配列を含むＳｐＡＡドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５６又は４９のアミノ酸配列を含むＳｐＡＢドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５７又は５０のアミノ酸配列を含むＳｐＡＣドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５８又は５１のアミノ酸配列を含むＳｐＡＤドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５９又は５２のアミノ酸配列を含むＳｐＡＥドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＳｐＡポリペプチドをコードし、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも２つ、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも３つ、ＳｐＡＩｇＧドメインのうちの少なくとも４つ、又はＳｐＡＩｇＧドメインの５つ全てを含む。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５３のアミノ酸配列、又は配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、バリアントＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及び／又はＣドメインをコードし、これらはそれぞれ、配列番号５５又は４８、配列番号５６又は４９、配列番号５７又は５０、配列番号５８又は５１、及び配列番号５９又は５２に対して７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的なバリアントＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣＳｐＡドメインは、上記に記載される。

任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５９のアミノ酸位置６、７、３３、及び／又は３４での置換を含むバリアントＥドメインを有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５８のアミノ酸位置９、１０、３６、及び／又は３７での置換を含むバリアントＤドメインを有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５５のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＡドメインを有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５６のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＢドメインを有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５７のアミノ酸位置７、８、３４、及び／又は３５での置換を含むバリアントＣドメインを有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号５３又は７２に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％（であるが１００％ではない）配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号５３若しくは７２又はその断片に対して９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、ＳｐＡドメインＤにおける、又は他のＳｐＡＩｇＧドメインにおける対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換を含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードし、１つ以上のアミノ酸置換は、ＩｇＧＦｃへのＳｐＡバリアントポリペプチドの結合を破壊するか、又は減少させる。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｖ_Ｈ３への結合を破壊するか、又は減少させる、ＤドメインのＶ_Ｈ３結合サブドメインにおける、又は他のＩｇＧドメインにおける対応するアミノ酸位置での１つ以上のアミノ酸置換を更に含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、バリアントＡドメイン、例えば、配列番号６２、６７、８８、又は９３のアミノ酸配列を含むバリアントＡドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、バリアントＢドメイン、例えば、配列番号６３、６８、８９、又は９４のアミノ酸配列を含むバリアントＢドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、バリアントＣドメイン、例えば、配列番号６４、６９、９０、又は９５のアミノ酸配列を含むバリアントＣドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、バリアントＤドメイン、例えば、配列番号６６、７１、９１、又は９６のアミノ酸配列を含むバリアントＤドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、バリアントＥドメイン、例えば、配列番号６５、７０、９２、又は９７のアミノ酸配列を含むバリアントＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、それぞれ、配列番号６２又は６７、配列番号６３又は６８、配列番号６４又は６９、配列番号６６又は７１、及び配列番号６５又は７０に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、それぞれ、配列番号８８又は９３、配列番号８９又は９４、配列番号９０又は９５、配列番号９１又は９６、及び配列番号９２又は９７に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、バリアントＤドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードし、バリアントＤドメインは、配列番号５８の９位、１０位、及び／又は３３位に対応するアミノ酸位置での置換を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、（ｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミンアミノ酸残基のリジン置換、並びに（ｉｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３３位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるセリンアミノ酸残基のグルタミン酸置換を含む、ＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６５のアミノ酸配列を有するＳｐＡＥドメインをコードする。任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号６６のアミノ酸配列を有するＳｐＡＤドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６２のアミノ酸配列を有するＳｐＡＡドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６３のアミノ酸配列を有するＳｐＡＢドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６４のアミノ酸配列を有するＳｐＡＣドメインをコードする。任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号６０のアミノ酸配列を有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、（ｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるグルタミンアミノ酸残基のリジン置換、並びに（ｉｉ）ＳｐＡＤドメイン（配列番号５８）の３３位に対応するアミノ酸位置でのＳｐＡＡ～Ｅドメインの各々におけるセリンアミノ酸残基のトレオニン置換を含む、ＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号７０のアミノ酸配列を有するＳｐＡＥドメインをコードする。任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を有するＳｐＡＤドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６７のアミノ酸配列を有するＳｐＡＡドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６８のアミノ酸配列を有するＳｐＡＢドメインをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６９のアミノ酸配列を有するＳｐＡＣドメインをコードする。任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、配列番号６１のアミノ酸配列を有するＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

任意の実施形態では、免疫原性組成物のポリヌクレオチドは、バリアントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び／又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６０又は６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。任意の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチドをコードする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳ．ａｕｒｅｕｓポリペプチドをコードする核酸分子は、哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。コドン最適化の方法は既知であり、以前に記載されている（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｅｅｄの国際特許出願公開第１９９６／０９３７８号）。野生型配列と比較して、少なくとも１つの好ましくないコドンがより好ましいコドンで置換される場合、配列は、コドン最適化されたとみなされる。本明細書では、好ましくないコドンは、同じアミノ酸をコードする別のコドンよりも生物体で使用される頻度低いコドンであり、より好ましいコドンは、好ましくないコドンよりも生物体でより頻繁に使用されるコドンである。特定の生物体に対するコドン使用の頻度は、当技術分野で周知であり利用可能なコドン頻度表に見出すことができる。好ましくは、２つ以上の好ましくないコドン、例えば、１０％、４０％、６０％＞、８０％＞を超える好ましくないコドン、好ましくは、ほとんどの（例えば、少なくとも９０％）又は全ての好ましくないコドンが、より好ましいコドンによって置換される。好ましくは、生物において最も頻繁に使用されるコドンが、コドン最適化配列で使用される。好ましいコドンによる置換は、一般により高い発現をもたらす。

本開示のポリヌクレオチドは、通常の分子生物学技術を使用してクローニングされてもよく、又はＤＮＡ合成及び／若しくは分子クローニングの分野で事業を有するサービス会社（例えば、ＧｅｎｅＡｒｔ、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ）による日常的な手順を使用して実施することができるＤＮＡ合成によってデノボで作製されてもよい。

いくつかの実施形態では、前述の核酸分子は、ベクター、例えば、本明細書に記載される免疫原性組成物で使用するための発現ベクターに挿入される。あるいは、これらの核酸分子は、本明細書に開示されるコードされたＳｐＡポリペプチド、ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＬｕｋＢタンパク質、又はＬｕｋＡＢ複合体（安定的なヘテロ二量体として）の発現及び単離のために、適切な宿主細胞に形質転換又はトランスフェクトされる発現ベクターに挿入されてもよい。

本開示のこの態様によれば、本明細書に記載されるＳ．ａｕｒｅｕｓポリペプチドをコードする核酸分子は、核酸配列構築物によってコードされるポリペプチドを発現することができる任意の発現ベクターに組み込まれ得る。好適な発現ベクターは、こうしたベクターによってコードされるポリペプチドの発現を制御する、調節する、引き起こす、又は可能にする核酸配列要素を含む。こうした要素は、転写エンハンサー結合部位、ＲＮＡポリメラーゼ開始部位、リボソーム結合部位、及び所与の発現系においてコードされたポリペプチドの発現を促進する他の部位を含んでもよい。好適なベクターには、ＤＮＡベクター、プラスミドベクター、線状核酸、及びウイルスベクター、例えばアデノウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態では、発現ベクターは、環状プラスミドである（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍｕｔｈｕｍａｎｉｅｔａｌ．，“ＯｐｔｉｍｉｚｅｄａｎｄＥｎｈａｎｃｅｄＤＮＡＰｌａｓｍｉｄＶｅｃｔｏｒＢａｓｅｄＩｎｖｉｖｏＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉ－ＨＩＶ－１ＥｎｖｅｌｏｐｅＧｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＦａｂ，”Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．９：２２５３－２２６２（２０１３）を参照）。プラスミドは、細胞ゲノムへの組み込みによって標的細胞を形質転換するか、又は染色体外に存在することができる（例えば、複製起源を有する自律複製プラスミド）。例示的なプラスミドベクターとしては、限定されないが、ｐＣＥＰ４、ｐＲＥＰ４、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、ｐｒｏｖａｘ、又は組換え核酸配列構築物によってコードされるバリアントＬｕｋＡ及び／又はバリアントＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドを発現することができる任意の他のプラスミド発現ベクターが挙げられる。

別の実施形態では、発現ベクターは線状発現カセット（「ＬＥＣ」）である。ＬＥＣは、本明細書に記載される組換え核酸分子によってコードされるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及び／又はＬｕｋＢポリペプチドを発現するために電気穿孔を介して対象に効率的に送達することができる。ＬＥＣは、リン酸骨格を欠いた任意の線状ＤＮＡであってもよい。一実施形態では、ＬＥＣは、いかなる抗生物質耐性遺伝子及び／又はリン酸骨格も含有しない。別の実施形態では、ＬＥＣは、所望の遺伝子発現とは関係のない他の核酸配列を含有しない。

ＬＥＣは、線状化することができる任意のプラスミドに誘導されてもよい。プラスミドは、本明細書に記載される組換え核酸分子によってコードされるポリペプチドを発現することが可能であり得る。例示的なプラスミドとしては、限定されないが、ｐＮＰ（ＰｕｅｒｔｏＲｉｃｏ／３４）、ｐＭ２（ＮｅｗＣａｌｅｄｏｎｉａ／９９）、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、若しくはｐｒｏｖａｘ、又は組換え核酸配列構築物によってコードされるポリペプチドを発現することができる任意の他の発現ベクターが挙げられる。

別の実施形態では、発現ベクターはウイルスベクターである。ポリペプチドを発現することができる好適なウイルスベクターには、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｒａｕｓｅｅｔａｌ．，“ＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆＡｎｔｉｇｅｎｓｂｙＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，”Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２（１）：５１－７０（２０１１）、Ｕｒａｅｔａｌ．，“ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒ－ＢａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅｓ，”Ｖａｃｃｉｎｅｓ２：６２４－６４１（２０１４）、Ｂｕｎｉｎｇｅｔａｌ，”ＲｅｃｅｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＡｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，”Ｊ．ＧｅｎｅＭｅｄ．１０：７１７－７３３（２００８）を参照）、レンチウイルスベクター（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｕｒａｅｔａｌ．，“ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒ－ＢａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅｓ，”Ｖａｃｃｉｎｅｓ２：６２４－６４１（２０１４）、及びＨｕｅｔａｌ．，“ＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎＤｅｌｉｖｅｒｅｄｂｙＬｅｎｔｉｖｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒＣａｎｃｅｒａｎｄＩｎｆｅｃｔｉｏｎＤｉｓｅａｓｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２３９：４５－６１（２０１１）を参照）、レトロウイルスベクター（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｕｒａｅｔａｌ．，“ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒ－ＢａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅｓ，”Ｖａｃｃｉｎｅｓ２：６２４－６４１（２０１４）を参照）、ワクシニアウイルス、複製欠損アデノウイルスベクター、及びガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウイルスベクター（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８７２，００５号を参照）が含まれる。ベクターとしての使用に適したアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を生成及び単離する方法は、当該技術分野で公知である（例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｉｅｇｅｒ＆Ｓａｍｕｌｓｋｉ，”Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓａｓａＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙＶｅｃｔｏｒ：ＶｅｃｔｏｒＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇｉｎ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９９：１１９－１４５（２００５）、Ｂｕｎｉｎｇｅｔａｌ，”ＲｅｃｅｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＡｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，”Ｊ．ＧｅｎｅＭｅｄ．１０：７１７－７３３（２００８）を参照）。

本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及び／又はＬｕｋＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、典型的には、最大発現を達成するために、発現ベクター構築物において、プロモーター、翻訳開始、３’非翻訳領域、ポリアデニル化、及び転写終結の配列と組み合わされる。本明細書に記載されるポリペプチドの発現を駆動するのに好適なプロモーター配列には、限定されないが、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルス前初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ）、キメラ肝臓特異的プロモーター（ＬＳＰ）、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＡＧ）、テトラサイクリン応答性プロモーター（ＴＲＥ）、トランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、シミアンウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）及びＣＫ６プロモーターが含まれる。当技術分野で公知の宿主細胞における遺伝子発現を駆動するのに好適な他のプロモーターも、本明細書に開示される発現構築物への組み込みに適している。

本開示の別の態様は、本明細書に記載されるＳ．ａｕｒｅｕｓポリペプチドをコードする核酸分子、又はこれらのポリヌクレオチドを含有するベクターを含む宿主細胞を対象とする。本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＢタンパク質又はポリペプチドをコードする発現構築物は、宿主細胞内に同時トランスフェクトされてもよく、連続的にトランスフェクトされてもよく、又は別々にトランスフェクトされてもよい。好適な宿主細胞には、限定されないが、当技術分野で周知のように、初代細胞、細胞株、混合細胞株、不死化細胞集団、又は不死化細胞のクローン集団の細胞が含まれ得る（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ｅｄ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．（１９８７－２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２^ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、Ｃｏｌｌｉｇａｎｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４－２００１）、Ｃｏｌｌｉｇａｎｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７－２００１）を参照）。このような宿主細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞、又は古細菌細胞であってもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳ．ａｕｒｅｕｓポリヌクレオチドに好適な宿主細胞は、細菌細胞である。好適な細菌宿主細胞としては、限定されないが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ宿主細胞、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ宿主細胞、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ宿主細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ宿主細胞、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ宿主細胞、及びＢａｃｉｌｌｕｓ宿主細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ宿主細胞である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳ．ａｕｒｅｕｓポリヌクレオチドに好適な宿主細胞は、真核細胞である。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物の起源であってもよい。哺乳動物真核細胞には、例えばハイブリドーマ又は骨髄腫細胞株などの不死化細胞株、例えばＳＰ２／０（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．，ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳＯ（ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｏｆＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ第８５１１０５０３号）、ＦＯ（ＡＴＣＣＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣＣＲＬ－１５８０）マウス細胞株などが挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（ＬｏｎｚａＢｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣＣＲＬ－６１）、又はＤＧ４４などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。

本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＢポリペプチドは、上記に記載される単離されたポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞を使用する様々な技術のいずれかによって調製され得る。一般に、タンパク質は、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地からタンパク質又はポリペプチドを回収するために一般的に使用される標準的なクローニング及び細胞培養技術によって産生される。宿主細胞へのトランスフェクションは、外因性ＤＮＡの原核性又は真核性宿主細胞への導入に一般的に使用される様々な技術を使用して、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどによって実施することができる。

本明細書に記載されるポリペプチドは、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分の追加（ペグ化）及び脂質付加などの非天然共有結合性修飾などのプロセスによって、翻訳後修飾され得る。そのような修飾は、インビボ又はインビトロで起こり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＢのポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドは、好ましくは「単離された」ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドである。本明細書に開示されるポリヌクレオチド及びポリペプチドを記載するために使用される場合、「単離された」とは、ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、その生産環境の構成要素から同定、分離、及び／又は回収されたことを意味する。好ましくは、単離されたポリヌクレオチド又はポリペプチドは、その生産環境から他の構成要素との会合がない。組換え形質導入細胞から生じるものなどのその生産環境の汚染構成要素は、典型的には医薬品の使用を妨げる可能性のある物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を含む可能性がある。ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、リン酸セルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含むがこれに限定されない公知の方法によって、組換え細胞培養物から回収及び精製される。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた精製に使用され得る。

免疫原性組成物のアジュバント
本明細書で使用される場合、用語「アジュバント」は、本明細書に記載される免疫原性組成物と併せて、又はその一部として投与された場合に、ＳｐＡポリポリペプチド、ＬｕｋＡポリペプチド、ＬｕｋＢポリペプチド、及び／又はそれらをコードするポリヌクレオチドに対する免疫応答を増強、強化、及び／又は促進する化合物を指す。しかしながら、アジュバント化合物が単独で投与される場合、アジュバント化合物は、前述のポリペプチド又はポリヌクレオチドに対する免疫応答を生成しない。アジュバントは、例えば、リンパ球動員、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞の刺激、並びに抗原提示細胞の刺激を含む、いくつかの機構によって免疫応答を強化することができる。

ＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＢポリペプチド、並びに／又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む本明細書に記載される免疫原性組成物は、アジュバントを含むか、又はアジュバントと組み合わせて投与される。本発明の免疫原性組成物と組み合わせた投与のためのアジュバントは、免疫原性組成物の投与の前に、それに併用して、又はその後に投与され得る。

アジュバントの具体的な例には、アルミニウム塩（ミョウバン）（ミョウバン又はナノミョウバン製剤（ｎａｎｏａｌｕｍｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を含むナノ粒子を含む、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、及び酸化アルミニウムなど）、リン酸カルシウム（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｓｓｏｎＪＤｅｔａｌ，ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１６：２８９－２９９（２０１７））、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）又は３－デ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ－ＭＰＬ）（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる英国特許第ＧＢ２２２０２１１号、ＥＰ０９７１７３９、ＥＰ１１９４１６６、ＵＳ６４９１９１９を参照）、ＡＳ０１、ＡＳ０２、ＡＳ０３及びＡＳ０４（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＥＰ１１２６８７６、ＡＳ０４に関してＵＳ７３５７９３６ＥＰ０６７１９４８、ＥＰ０７６１２３１、ＡＳ０２に関してＵＳ５７５０１１０を参照）、イミダゾピリジン化合物（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／１０９８１２を参照）、イミダゾキノキサリン化合物（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／１０９８１３を参照）、デルタ－イヌリン（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰｅｔｒｏｖｓｋｙＮａｎｄＰＤＣｏｏｐｅｒ，Ｖａｃｃｉｎｅ３３：５９２０－５９２６（２０１５））、ＳＴＩＮＧ－活性化合成環状ジヌクレオチド（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１５／００５６２２４）、レシチン及びカルボマーホモポリマーの組み合わせ（例えば、ＵＳ６６７６９５８）、並びにサポニン、例えばＱｕｉｌＡ及びＱＳ２１（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＺｈｕＤａｎｄＷＴｕｏ，２０１６，ＮａｔＰｒｏｄＣｈｅｍＲｅｓ３：ｅ１１３（ｄｏｉ：１０．４１７２／２３２９－６８３６．１０００ｅ１１３））が、任意選択的にＱＳ７と組み合わせて（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｅｎｓｉｌｅｔａｌ．，ｉｎＶａｃｃｉｎｅＤｅｓｉｇｎ：ＴｈｅＳｕｂｕｎｉｔａｎｄＡｄｊｕｖａｎｔＡｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）、ＵＳ５，０５７，５４０を参照）含まれるが、これらに限定されない。任意の実施形態では、アジュバントは、フロイントアジュバント（完全又は不完全）である。任意の実施形態では、アジュバントは、例えば、Ｂｒｅｎｎｔａｇ（現Ｃｒｏｄａ）又はＩｎｖｉｖｏｇｅｎから商業的に入手可能な、Ｑｕｉｌ－Ａを含む。ＱｕｉｌＡは、ＱｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａＭｏｌｉｎａｔｒｅｅ由来のサポニンの水抽出可能な画分を含有する。これらのサポニンは、共通のトリテルペノイド骨格構造を有するトリテルペノイドサポニンのグループに属する。サポニンは、Ｔ依存性抗原及びＴ非依存性抗原に対する強力なアジュバント応答、並びに強力な細胞傷害性ＣＤ８＋リンパ球応答を誘導し、粘膜抗原に対する応答を増強することが知られている。サポニンは、コレステロール及びリン脂質と組み合わされて免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）を形成することができ、ＱｕｉｌＡアジュバントは、異なる起源の幅広い抗原に対する抗体介在性及び細胞介在性の免疫応答の両方を活性化することができる。特定の実施形態では、アジュバントはＡＳ０１、例えばＡＳ０１Ｂである。ＡＳ０１は、ＭＰＬ（３－Ｏ－デスアシル－４’－モノホスホリルリピドＡ）、ＱＳ２１（ＱｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａＭｏｌｉｎａ、画分２１）、及びリポソームを含有するアジュバント系である。特定の実施形態において、ＡＳ０１は、市販されているか、又はＷＯ９６／３３７３９に記載されるように作製することができ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定のアジュバントは、エマルジョンを含み、これは、例えば、油及び水などの２つの不混和流体の混合物であり、そのうちの一方は、他方の内部に小液滴として懸濁され、それらは表面活性剤によって安定化される。水中油型エマルジョンは、油の小さな液滴を囲む連続相を形成する水を有し、油中水型エマルジョンは、連続相を形成する油を有する。特定の水中油型エマルジョンは、スクアレン（代謝可能な油）を含む。特定のアジュバントは、ブロック共重合体を含み、これは、２つの単量体が一緒にクラスターを形成して、反復単位のブロックを形成するときに形成される共重合体である。ブロック共重合体、スクアレン、及び微粒子安定剤を含む油中水型エマルジョンの例は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから商業的に取得できるＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）である。

任意選択的に、エマルジョンは、ＴＬＲ４アゴニストなどの更なる免疫刺激成分と組み合わされ得るか、又はこれを含み得る。本明細書に開示される組成物で使用するためのアジュバントの組み合わせの好適であるが非限定的な例には、任意選択的にモノホスホリルリピドＡなどの免疫刺激剤及び／又はＡＳ０２などのＱＳ２１と組み合わせて（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳｔｏｕｔｅｅｔａｌ．，１９９７，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１を参照）、ＭＦ５９及びＡＳ０３（例えば、ＥＰ０３９９８４３、ＵＳ６２９９８８４、ＵＳ６４５１３２５を参照）でも使用される、水中油型エマルジョン（スクアレン又はピーナッツオイルなど）が含まれる。アジュバントの更なる例は、ＡＳ０１Ｅ及びＡＳ０１Ｂなどの、ＭＰＬ及びＱＳ２１などの免疫刺激剤を含有するリポソームである（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１１／０２０６７５８）。アジュバントの他の例は、ＣｐＧ及びイミダゾキノリン（イミキモド及びＲ８４８など）である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＲｅｅｄＧ，ｅｔａｌ．，２０１３，ＮａｔｕｒｅＭｅｄ，１９：１５９７－１６０８を参照）。本発明によるある特定の好ましい実施形態では、アジュバントは、Ｔｈ１アジュバントである。

任意の実施形態では、アジュバントは、サポニン、好ましくは、Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａから得られたサポニンの水抽出可能画分を含む。ある特定の実施形態では、アジュバントは、ＱＳ－２１を含む。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のアジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストを単独で又は別のアジュバントと組み合わせて含有する。ＴＬＲ４アゴニストは、当技術分野で周知であり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＩｒｅｔｏｎＧＣａｎｄＳＧＲｅｅｄ，２０１３，ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１２：７９３－８０７を参照されたい。任意の実施形態では、アジュバントは、リピドＡ、又はその類似体若しくは誘導体を含むＴＬＲ４アゴニストである。

本明細書で使用される場合、用語「リピドＡ」は、グルコサミンを含み、グラム陰性細菌の外膜の外葉にＬＰＳ分子を固定するケトシド結合を介してＬＰＳ分子の内核においてケト－デオキシオクツロソネートに連結されるＬＰＳ分子の疎水性脂質部分を指す。本明細書で使用される場合、リピドＡには、天然に存在するリピドＡ、その混合物、類似体、誘導体、及び前駆体が含まれる。用語は、単糖類、例えば、リピドＸと称されるリピドＡの前駆体、二糖リピドＡ、ヘプタアシルリピドＡ、ヘキサアシルリピドＡ、ペンタアシルリピドＡ、テトラアシルリピドＡ、例えば、リピドＩＶＡと称されるリピドＡのテトラアシル前駆体、脱リン酸化リピドＡ、モノホスホリルリピドＡ、ジホスホリルリピドＡ、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ及びＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ由来のリピドＡなどを含む。いくつかの免疫活性化リピドＡ構造には、６つのアシル鎖が含有されている。グルコサミン糖に直接結合している４つの一次アシル鎖は、通常１０～１６炭素の長さの３－ヒドロキシアシル鎖である。２つの追加のアシル鎖は、多くの場合、一次アシル鎖の３－ヒドロキシ基に結合される。Ｅ．ｃｏｌｉリピドＡは、一例として、典型的には、糖に結合した４つのＣ１４３－ヒドロキシアシル鎖と、それぞれ２’位及び３’位で一次アシル鎖の３－ヒドロキシ基に結合した１つのＣ１２及び１つのＣ１４とを有する。

本明細書で使用される場合、用語「リピドＡ類似体又は誘導体」は、リピドＡの構造及び免疫活性に類似するが、自然界では必ずしも自然に存在しない分子を指す。リピドＡ類似体又は誘導体は、短縮又は縮合されるように、及び／又はそれらのグルコサミン残基を別のアミン糖残基、例えばガラクトサミン残基で置換するように、還元末端のグルコサミン－１－リン酸の代わりに２－デオキシ－２－アミノグルコン酸を含有するように、４’位のリン酸の代わりにガラクツロン酸部分を有するように、修飾され得る。リピドＡ類似体又は誘導体は、細菌から単離されたリピドＡから、例えば、化学的誘導によって、又は化学合成されることによって、例えば、好ましいリピドＡの構造を最初に決定し、その類似体又はその誘導体を合成することによって調製されてもよい。リピドＡ類似体又は誘導体は、ＴＬＲ４アゴニストアジュバントとしても有用である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＧｒｅｇｇＫＡｅｔａｌ，２０１７，ＭＢｉｏ８，ｅＤＤ４９２－１７，ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００４９２－１７を参照）。

例えば、リピドＡ類似体又は誘導体は、野生型リピドＡ分子の脱アシル化によって、例えば、アルカリ処理によって得られ得る。リピドＡ類似体又は誘導体は、例えば、細菌から単離されたリピドＡから調製され得る。こうした分子はまた、化学的に合成され得る。リピドＡ類似体又は誘導体の別の例は、リピドＡ生合成及び／又はリピドＡ修飾に関与する酵素の変異、又は欠失若しくは挿入を保有する細菌細胞から単離されたリピドＡ分子である。

ＭＰＬ及び３Ｄ－ＭＰＬは、リピドＡ毒性を弱毒化するように修飾されたリピドＡ類似体又は誘導体である。リピドＡ、ＭＰＬ、及び３Ｄ－ＭＰＬは、長い脂肪酸鎖が付着した糖骨格を有し、骨格は、グリコシド結合内に２つの６－炭素糖、及び４位にホスホリル部分を含有する。典型的には、５～８個の長鎖脂肪酸（通常１２～１４個の炭素原子）が糖骨格に付着される。天然源由来のため、ＭＰＬ又は３Ｄ－ＭＰＬは、例えばヘプタアシル、ヘキサアシル、ペンタアシルなどの、様々な脂肪酸の長さを有する多くの脂肪酸置換パターンの複合又は混合物として存在し得る。これは、本明細書に記載される他のリピドＡ類似体又は誘導体のいくつかにも当てはまるが、合成リピドＡバリアントも定義され、均質であり得る。ＭＰＬ及びその製造は、例えば、ＵＳ４，４３６，７２７に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。３Ｄ－ＭＰＬは、例えば、ＵＳ４，９１２，０９４Ｂ１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、３位で還元末端グルコサミンと結合したエステルである３－ヒドロキシミリスチン酸アシル残基の選択的な除去によってＭＰＬとは異なる。本明細書に記載される免疫原性組成物への含有に好適なリピドＡ（類似体、誘導体）の例には、ＭＰＬ、３Ｄ－ＭＰＬ、ＲＣ５２９（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＥＰ１３８５５４１）、ＰＥＴ－リピドＡ、ＧＬＡ（グリコピラノシル脂質アジュバント、合成二糖糖脂質（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ）、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１０／０３１０６０２及びＵＳ８７２２０６４を参照）、ＳＬＡ（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、ヒトワクチン用にＴＬＲ４リガンドを最適化するための構造－機能アプローチが記載される、ＣａｒｔｅｒＤｅｔａｌ，２０１６，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．５：ｅ１０８（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１６．６３））、ＰＨＡＤ（リン酸化ヘキサアシル二糖、その構造はＧＬＡの構造と同じである）、３Ｄ－ＰＨＡＤ、３Ｄ－（６－アシル）－ＰＨＡＤ（３Ｄ（６Ａ）－ＰＨＡＤ）（ＰＨＡＤ、３Ｄ－ＰＨＡＤ、及び３Ｄ（６Ａ）ＰＨＡＤは、合成リピドＡバリアントであり、これらも、これらの分子の構造を提供する）、Ｅ６０２０（ＣＡＳ番号２８７１８０－６３－６）、ＯＮＯ４００７、ＯＭ－１７４などが挙げられる。ある特定の好ましい実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストアジュバントは、３Ｄ－ＭＰＬ、ＧＬＡ、又はＳＬＡから選択されるリピドＡ類似体又は誘導体を含む。ある特定の実施形態では、リピドＡ類似体又は誘導体は、リポソーム中で製剤化される。

好ましくは、ＴＬＲ４アゴニストを含むアジュバントは、アジュバント中の免疫調節分子及び／又は免疫原のための様々な送達系を表す、様々な手法で、例えば、エマルジョンで、例えば、油中水型（ｗ／ｏ）エマルジョン又は水中油型（ｏ／ｗ）エマルジョン（例は、ＭＦ５９、ＡＳ０３である）、安定（ナノ－）エマルジョン（ＳＥ）、脂質懸濁液、リポソーム、（高分子）ナノ粒子、ビロソーム、吸着ミョウバン（ａｌｕｍａｄｓｏｒｂｅｄ）、水性製剤（ＡＦ）などで、製剤化され得る（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる上記のＲｅｅｄｅｔａｌ，２０１３、及びＡｌｖｉｎｇＣＲｅｔａｌ，２０１２，ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ２４：３１０－３１５を参照）。

任意の実施形態では、免疫刺激性ＴＬＲ４アゴニストは、任意選択的に、他の免疫調節成分、例えば、スクアレン水中油型エマルジョン（例えば、ＭＦ５９、ＡＳ０３）、サポニン（例えば、ＱｕｉｌＡ、ＱＳ７、ＱＳ２１、ＭａｔｒｉｘＭ、Ｉｓｃｏｍ、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘなど）、アルミニウム塩、他のＴＬＲのための活性化因子（例えば、イミダゾキノリン、フラゲリン、ｄｓＲＮＡ類似体、ＴＬＲ９アゴニスト、例えばＣｐＧ、など）などと組み合わせることができる（例えば、上記のＲｅｅｄｅｔａｌ，２０１３を参照）。

任意の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のアジュバントは、安定的なエマルジョンとして製剤化されるＴＬＲ４アゴニストの組み合わせ、例えば、ＧＬＡ（すなわち、ＧＬＡ－ＳＥ）である。ＧＬＡ－ＳＥで使用される安定的なエマルジョンは、水中油型エマルジョンであり、油は、スクアレンである（例えば、ＷＯ２０１３／１１９８５６を参照）。任意の実施形態では、ＴＬＲ４アゴニストと組み合わせた本明細書に開示される免疫原性組成物のアジュバント、例えば、サポニンと組み合わせたＧＬＡ（例えば、ＧＬＡ－ＱＳ２１）。任意の実施形態では、前述のアジュバントはリポソームとして製剤化され得る。したがって、例示的なアジュバントは、合成ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、ＭＰＬ［ＧＬＡ］）及びサポニン（例えば、ＱＳ２１）を含み、リポソームとして製剤化されたＧＬＡ－ＬＳＱも含む。

リピドＡ類似体又は誘導体を含む本明細書に記載される免疫原性組成物で使用するための追加の例示的なアジュバントには、ＳＬＡ－ＳＥ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、スクアレンオイル／水エマルジョン）、ＳＬＡ－Ｎａｎｏａｌｕｍ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、アルミニウム塩）、ＧＬＡ－Ｎａｎｏａｌｕｍ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、アルミニウム塩）、ＳＬＡ－ＡＦ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、水性懸濁液）、ＧＬＡ－ＡＦ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、水性懸濁液）、ＳＬＡ－ａｌｕｍ（合成ＭＰＬ［ＳＬＡ］、アルミニウム塩）、ＧＬＡ－ａｌｕｍ（合成ＭＰＬ［ＧＬＡ］、アルミニウム塩）、ＡＳ０１（ＭＰＬ、ＱＳ２１、リポソーム）、ＡＳ０２（ＭＰＬ、ＱＳ２１、油／水エマルジョン）、ＡＳ２５（ＭＰＬ、油／水エマルジョン）、ＡＳ０４（ＭＰＬ、アルミニウム塩）、及びＡＳ１５（ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ、リポソーム）が含まれる。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００８／１５３５４１、ＷＯ２０１０／１４１８６１、ＷＯ２０１３／１１９８５６、ＷＯ２０１９／０５１１４９、ＷＯ２０１３／１１９８５６、ＷＯ２００６／１１６４２３、米国特許第４，９８７，２３７号、米国特許第４，４３６，７２７号、米国特許第４，８７７，６１１号、米国特許第４，８６６，０３４号、米国特許第４，９１２，０９４号、米国特許第４，９８７，２３７号、米国特許第５，１９１，０７２号、米国特許第５，５９３，９６９号、米国特許第６，７５９，２４１号、米国特許第９，０１７，６９８号、米国特許第９，１４９，５２１号、米国特許第９，１４９，５２２号、米国特許第９，４１５，０９７号、米国特許第９，４１５，１０１号、米国特許第９，５０４，７４３号、上記のＲｅｅｄＧ．ｅｔａｌ．，２０１３、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｔａｌ．，１９９９，ＪＭｅｄＣｈｅｍ，４２：４６４０－４６４９、及びＵｌｒｉｃｈａｎｄＭｙｅｒｓ，１９９５，ＶａｃｃｉｎｅＤｅｓｉｇｎ：ＴｈｅＳｕｂｕｎｉｔａｎｄＡｄｊｕｖａｎｔＡｐｐｒｏａｃｈ；ＰｏｗｅｌｌａｎｄＮｅｗｍａｎ，Ｅｄｓ．；Ｐｌｅｎｕｍ：ＮｅｗＹｏｒｋ，４９５－５２４を参照されたい。

Ｓ．ａｕｒｅｕｓ免疫原性組成物及び使用方法
一態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド及びＬｕｋＡバリアントポリペプチドのうちのいずれか１つ以上、又は本明細書に記載されるポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む。別の態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド及びＬｕｋＢバリアントポリペプチドのうちのいずれか１つ以上、又は本明細書に記載されるポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む。別の態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド、ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＬｕｋＢバリアントポリペプチドのうちのいずれか１つ以上、又は本明細書に記載されるポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物は、１つ以上のＳｐＡポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、本開示の免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＢ非バリアントポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。本実施形態による例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号２の８１位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号２の１３９位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号２の１１１位及び１９１位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号２の３２１位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。この組成物は、配列番号１６のポリペプチドなどのＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチド、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を更に含む。

前述の実施形態による別の例示的な免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号２の８１位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号２の１３９位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号２の１１１位及び１９１位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号２の３２１位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。この組成物は、配列番号１６のＶａｌ５３Ｌｅｕに対応するアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、このＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

本実施形態による他の免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント、又は配列番号１６に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号２のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列は、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号４のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号６のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号８のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１０のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１１のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１２のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントと組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。

別の実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書に開示されるＳｐＡポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、又はポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例示的な組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１５のポリペプチドなどのＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチド、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を更に含む。

本実施形態による別の免疫原性組成物は、本明細書に開示されるＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１５の５３位に対応するアミノ酸位置でのバリンからロイシンアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

本実施形態による他の免疫原性組成物は、配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢバリアント、又は配列番号１５に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１のＣＣ８ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＣ８ＬｕｋＢ配列バリアント配列は、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号３のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢに対して８５％以上の配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のＣＣ８ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号７のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号９のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列を含む。

別の実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、組成物は、ＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。本実施形態による例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１６のポリペプチドなどのＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチド、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を更に含む。

この実施形態による別の免疫原性組成物は、本明細書に開示されるＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチド、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。本実施形態による例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号１６のＶａｌ５３Ｌｅｕに対応するアミノ酸置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、このＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

本実施形態による他の免疫原性組成物は、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント、又は配列番号１６に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列は、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号３のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号７のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号９のＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１６のＣＣ４５ＬｕｋＢに対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１８、２０、及び２２から選択されるＣＣ４５ＬｕｋＢバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、及び配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＣ８ＬｕｋＡバリアント、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントを含む。

別の実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチド（バリアント若しくは非バリアント）、又はそれらをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、本開示の免疫原性組成物は、ＳｐＡバリアントポリペプチド、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチドを含んでもよい。例示的な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含むＳｐＡバリアントポリペプチドを含み、少なくとも１つのドメインは、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する。例示的なＳｐＡバリアントポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。この組成物は、配列番号２の８１位に対応するアミノ酸位置でのリジンからメチオニンへの置換、配列番号２の１３９位に対応するアミノ酸位置でのセリンからアラニンへの置換、配列番号２の１１１位及び１９１位に対応するアミノ酸位置でのバリンからイソロイシンへの置換、並びに配列番号２の３２１位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸からアラニンへの置換を含む、ＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、このＬｕｋＡバリアントポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する。この組成物は、ＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチド、例えば、配列番号１５のＬｕｋＢポリペプチド、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を更に含む。あるいは、組成物は、配列番号１５の５３位に対応するアミノ酸位置でのバリンからロイシンアミノ酸置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドを更に含む。任意の実施形態では、このＬｕｋＢバリアントポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、若しくは少なくとも９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む。

本実施形態による他の免疫原性組成物は、配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列と組み合わせて、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号２のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＣＣ８ＬｕｋＢバリアント配列は、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号４のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号６のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号８のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号９のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１０のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１１のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号６０のＳｐＡバリアントポリペプチド、配列番号１２のＣＣ４５ＬｕｋＡバリアント、並びに配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列、又は配列番号１５のＣＣ８ＬｕｋＢ配列に対して８５％を超える配列同一性を有するそのバリアント、例えば、配列番号１７、１９、及び２１から選択されるバリアント配列を含む。

本開示の別の態様は、本明細書に記載されるＳｐＡポリペプチド、及び本明細書に記載されるバリアントＬｕｋＢタンパク質若しくはポリペプチドのいずれか、又は本明細書に記載されるＳｐＡ及びＬｕｋＢバリアントをコードする核酸分子を含む、免疫原性組成物を対象とする。具体的には、免疫原性組成物のバリアントＬｕｋＢポリペプチドは、本明細書に記載される１つ以上のアミノ酸残基の挿入、置換、及び／又は欠失を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、並びに配列番号１５のＬｕｋＢバリアント（ＣＣ８）を含む。例示的なＣＣ８ＬｕｋＢバリアントには、配列番号１７、１９、及び２１のＬｕｋＢバリアントが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号６０の配列、又は配列番号６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＳｐＡバリアントポリペプチド、並びに配列番号１６のＬｕｋＢバリアント（ＣＣ４５）を含む。例示的なＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントには、配列番号１８、２０、及び２２のＬｕｋＢバリアントが含まれるが、これらに限定されない。

この実施形態による免疫原性組成物は、ＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドを更に含むことができる。例えば、前の段落に記載されるＳｐＡバリアント及びＬｕｋＢバリアントを含む組成物は、配列番号１のＣＣ８ＬｕｋＡ配列、又は配列番号１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列を更に含む。あるいは、前の段落に記載されるＳｐＡバリアント及びＬｕｋＢバリアントを含む免疫原性組成物は、配列番号２のＣＣ４５ＬｕｋＡ配列、又は配列番号２に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するバリアント配列を更に含む。

本明細書に記載される免疫原性組成物は、１つ以上の追加のＳ．ａｕｒｅｕｓ抗原を更に含んでもよい。好適なＳ．ａｕｒｅｕｓ抗原には、限定されないが、血清型３３６多糖抗原、クランピング因子Ａ、クランピング因子Ｂ、フィブリノゲン結合タンパク質、コラーゲン結合タンパク質、エラスチン結合タンパク質と、ＭＨＣ類似タンパク質、多糖類細胞内接着性（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎ）、ベータ溶血素、デルタ溶血素、パントン－バレンタインロイコシジン、ロイコシジンＭ、表皮剥脱毒素Ａ、表皮剥脱性毒素Ｂ、Ｖ８プロテアーゼ、ヒアルロン酸リアーゼ、リパーゼ、スタフィロキナーゼ、エンテロトキシン、エンテロトキシンスーパー抗原ＳＥＡ、エンテロトキシンスーパー抗原ＳＡＢ、毒素性ショック症候群毒素－１、ポリ－Ｎ－スクシニルベータ－１→６グルコサミン、カタラーゼ、ベータラクタマーゼ、テイコ酸、ペプチドグリカン、ペニシリン結合タンパク質、走化性阻害タンパク質、補体阻害剤、Ｓｂｉ、タイプ５抗原、タイプ８抗原、及びリポテイコ酸が含まれる。免疫原性組成物に含むのに適した他のＳ．ａｕｒｅｕｓ抗原には、限定されないが、ＣＰ５、ＣＰ８、Ｅａｐ、Ｅｂｈ、Ｅｍｐ、ＥｓａＢ、ＥｓａＣ、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓｘＡＢ（融合）、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣ、ＭｎｔＣ、ｒＴＳＳＴ－１、ｒＴＳＳＴ－１ｖ、ＴＳＳＴ－１、ＳａｓＦ、ｖＷｂｐ、ｖＷｈビトロネクチン結合タンパク質、Ａａａ、Ａａｐ、Ａｎｔ、オートリシングルコサミニダーゼ、オートリシンアミダーゼ、Ｃａｎ、コラーゲン結合タンパク質、Ｃｓａ１Ａ、ＥＦＢ、エラスチン結合タンパク質、ＥＰＢ、ＦｂｐＡ、フィブリノゲン結合タンパク質、フィブロネクチン結合タンパク質、ＦｈｕＤ、ＦｈｕＤ２、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、ＧｅｈＤ、ＨａｒＡ、ＨＢＰ、免疫優性ＡＢＣトランスポーター、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ラミニン受容体、リパーゼＧｅｈＤ、ＭＡＰ、Ｍｇ２＋トランスポーター、ＭＨＣＩＩ類似体、ＭＲＰＩＩ、ＮＰａｓｅ、ＲＮＡＩＩＩ活性化タンパク質（ＲＡＰ）、ＳａｓＡ、ＳａｓＢ、ＳａｓＣ、ＳａｓＤ、ＳａｓＫ、ＳＢＩ、ＳＥＡエキソトキシン、ＳＥＢエキソトキシン、ｍＳＥＢ、ＳｉｔＣ、ＮｉＡＢＣトランスポーター、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＳｓａＡ、ＳＳＰ－１、ＳＳＰ－２、Ｓｐａ５、ＳｐＡＫＫＡＡ、ＳｐＡｋＲ、Ｓｔａ００６、及びＳｔａ０１１が含まれる。

本開示の免疫原性組成物は、本明細書に記載されるＳｐＡ、ＬｕｋＡポリペプチド、及び／又はＬｕｋＢポリペプチドを、薬学的に許容可能な担体及び任意選択的に薬学的に許容可能な賦形剤とともに製剤化することによって調製される。本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容可能な担体」及び「薬学的に許容可能な賦形剤」（例えば、希釈剤、免疫刺激剤、アジュバント、抗酸化剤、保存剤、及び可溶化剤などの添加剤）は、使用される投与量及び濃度で組成物を投与された対象に対して非毒性である。薬学的に許容可能な担体の例としては、水、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び別の有機酸で緩衝された水が含まれる。本開示で有用であり得る薬学的に許容可能な賦形剤の代表例には、アスコルビン酸などの抗酸化物質；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭化水素；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール若しくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；並びに／又は非イオン性界面活性剤が含まれる。

薬学的に許容可能な担体を含む薬学的に活性な成分の製剤化は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（例えば、２１ｓｔｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）、及びそれ以降の版）。追加の原料の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、等張化調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇａｇｅｎｔ）、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。本発明の医薬組成物を製剤化する際に、１つ以上の薬学的に許容可能な担体を使用することができる。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物は、液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含み得る。水性製剤は、典型的には、少なくとも５０％ｗ／ｗの水、又は少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は少なくとも９５％ｗ／ｗの水を含む。

任意の実施形態では、免疫原性組成物は、例えば、注射装置（例えば、シリンジ又は注入ポンプ）を介して注射され得る注射剤として製剤化され得る。注射は、例えば、筋肉内、腹腔内、硝子体内、又は静脈内に送達され得る。

本開示の免疫原性組成物は、非経口投与のために製剤化されてもよい。組成物の溶液、懸濁液、又はエマルジョンは、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合された水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及び油中のそれらの混合物中で調製されてもよい。例示的な油は、石油、動物、植物、又は合成起源のものであり、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、又は鉱油である。一般的に、水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連する糖溶液、並びにプロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどのグリコールは、特に注射可能な溶液に好ましい液体担体である。保存及び使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含有する。

注射可能な使用に適した薬学的免疫原性組成物は、滅菌水溶液又は分散液、並びに滅菌注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。全ての場合において、形態は、滅菌されなければならず、容易な注射可能性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性でなければならない。製造及び保管の条件下で安定しなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、これらの好適な混合物、及び植物油を含有する溶媒又は分散媒であり得る。

任意の実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物は、固体製剤、例えば、そのまま使用できる、又は医師若しくは患者が使用する前に溶媒及び／又は希釈剤を添加する、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。固体剤形は、錠剤、例えば、圧縮錠剤、及び／又はコーティング錠、並びにカプセル（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）を含み得る。免疫原性組成物はまた、例えば、サシェ、糖剤、粉末、顆粒、トローチ、又は再構成のための粉末の形態であってもよい。

免疫原性組成物の剤形は、水溶性又は分散性の担体を含み得る場合、即時放出であってもよく、又は消化管内又は皮膚下での剤形の溶解速度を調節する水不溶性ポリマーを含み得る場合、遅延放出、徐放、又は調節放出であってもよい。

他の実施形態では、免疫原性組成物は、鼻腔内、頬側内、又は舌下に送達され得る。

免疫原性組成物の水性製剤中のｐＨは、ｐＨ３～ｐＨ１０であり得る。一実施形態では、免疫原性組成物のｐＨは、約７．０～約９．５である。別の実施形態では、免疫原性組成物のｐＨは、約３．０～約７．０である。

本開示の別の態様は、本明細書に記載される免疫原性組成物を使用する方法に関する。したがって、一態様は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行うための方法を対象とし、この方法は、本明細書に開示される有効量の免疫原性組成物を投与することを含む。別の態様は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌に対する免疫応答の誘発を必要とする対象においてそれを行うための方法を対象とし、この方法は、本明細書に開示される有効量の免疫原性組成物を投与することを含む。別の態様は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌の脱コロニー形成又はコロニー形成若しくは再コロニー形成の予防を必要とする対象においてそれを行うための方法を対象とし、この方法は、本明細書に開示される有効量の免疫原性組成物を投与することを含む。この態様によれば、本明細書に記載される方法は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌の短期的かつ持続的なコロニー形成又は再コロニー形成の予防を必要とする対象においてそれを行うのに好適である。

本開示の方法は、上記の免疫原性組成物のうちのいずれか１つを投与することを含む。本開示のこれらの態様による治療に好適な対象は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症を発症するリスクがある対象、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ菌への曝露のリスクがある対象、及び／又はＳ．ａｕｒｅｕｓ菌に曝露された対象である。

本開示のこの態様によれば、予防有効量の免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症に対する免疫応答を生成するために対象に投与される。予防有効量は、体液性（すなわち、抗体介在性）及び細胞性（Ｔ細胞）の免疫応答を生成又は誘発するために必要な量である。誘発された体液性応答は、そのような応答の非存在下でそうでなければ発症するであろうＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症を予防するか又はその程度を少なくとも低減するのに十分である。好ましくは、本明細書に記載される予防有効量の免疫原性組成物の投与は、対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する中和免疫応答を誘導する。対象において効果的な免疫応答を果たすために、組成物は、上記に記載される１つ以上の追加のＳ．ａｕｒｅｕｓ抗原又はアジュバントを更に含有してもよい。代替的な実施形態では、アジュバントは、本開示の組成物の投与前、投与後、又は投与と同時のいずれかで、組成物とは別に対象に投与される。

本開示のこの態様の目的のために、標的の「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを包含する。対象におけるＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症及びＳ．ａｕｒｅｕｓコロニー形成を予防する、阻害する、又はその重症度を低減する目的で免疫原性組成物を投与することに関連して、標的対象は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに感染されるリスクがある任意の対象を包含する。特に感受性の高い対象には、免疫不全の幼児、若年者、成人、及び高齢者が含まれる。しかしながら、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症のリスクがある任意の幼児、若年者、成人、又は高齢者は、本明細書に記載される方法及び免疫原性組成物に従って治療され得る。特に好適な対象には、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）又はメチシリン感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）による感染のリスクがある対象が含まれる。他の好適な対象としては、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染に起因する状態、すなわちＳ．ａｕｒｅｕｓ関連状態、例えば、皮膚創傷及び感染症、組織膿瘍、毛包炎、骨髄炎、肺炎、熱傷様皮膚症候群、敗血症、敗血症、敗血症性関節炎、心筋炎、心内膜炎、及び毒素性ショック症候群など、を有し得るか、又は発症するリスクを有し得る対象が挙げられる。

いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも、又は最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８５、又は９０歳（又はそこから導き出せる任意の範囲）である。特定の実施形態では、ヒト対象などの本明細書に記述される対象又は患者は、小児対象である。小児対象は、１８歳未満と定義される対象である。いくつかの実施形態では、小児対象ｔは、２歳以下である。いくつかの実施形態では、小児対象は、１歳未満である。いくつかの実施形態では、小児対象は、６ヵ月未満である。いくつかの実施形態では、小児対象は、２ヵ月以下である。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、６５歳以上である。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、医療従事者である。いくつかの実施形態では、患者は、外科的処置を受ける患者である。

免疫原性組成物を、堅牢な免疫応答を誘導するのに有効な条件下で投与する場合、多数の他の因子も考慮され得る。これらの因子には、例えば、限定されないが、組成物中の活性薬剤の濃度、投与の様式及び投与頻度、並びに年齢、体重、並びに全体的な健康及び免疫状態などの対象の詳細が含まれる。一般的なガイダンスは、例えば、医薬品規制調和国際会議（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅｏｎＨａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の刊行物及びＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ１９９０）に見出すことができ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。臨床医は、所望の又は必要な予防効果、例えば、所望の抗体力価を提供する投与量に達するまで、本明細書に記載される免疫原性組成物を投与し得る。予防的応答の進行は、従来のアッセイによって容易にモニターすることができる。

本開示の一実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに感染するリスクがある、又は関連する状態を発症するリスクがある対象において、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症の発症を予防する、遅延させる、又は阻害するために予防的に投与される。本開示のいくつかの実施形態では、免疫原性組成物の予防的投与は、個体におけるＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症を完全に予防するのに有効である。他の実施形態では、予防的投与は、このような投与がなければ発症するであろう感染の全範囲を予防し、すなわち、個体におけるＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症を実質的に予防又は阻害するのに有効である。

Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症を予防するための予防的組成物の使用に関連して、組成物の投与量は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡＢ介在性細胞傷害性及びＳｐＡ介在性毒性活性を中和することができる抗体力価を生成するのに十分であり、多くの症状の低減、少なくとも１つの症状の重症度の減少、又は少なくとも１つの症状の更なる進行の遅延、又は感染症の完全な緩和さえ達成することができるものである。

本明細書に記載される免疫原性組成物の予防有効量は、アジュバントが共投与されるかどうかに依存し、アジュバントの非存在下ではより高い投与量が必要となる。ＳｐＡ、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＢポリペプチド、並びに／又はそれらをコードするポリヌクレオチドの量は、患者当たり１μｇ～５００μｇで変動し得る。いくつかの実施形態では、５、１０、２０、２５、５０、又は１００μｇが、各ヒト注射に使用される。場合によっては、１回の注射当たり１～５０ｍｇの高用量が使用される。いくつかの実施形態では、約１０、２０、３０、４０、又は５０ｍｇが、各ヒト注射に使用される。注射のタイミングは、年に１回から１０年に１回まで大きく変動し得る。一般に、有効投与量は、対象から体液試料、一般には血清試料を得て、当技術分野で周知であり、測定される特定の抗原に容易に適合できる方法を使用して、ＳｐＡ、ＬｕｋＡ、ＬｕｋＢ、又はＬｕｋＡＢに対して開発された抗体の力価を決定することによってモニターされ得る。理想的には、最初の投与前に試料を採取し、各免疫化後にその後の試料を採取して力価を決定する。一般に、１：１００の血清希釈で、対照又は「バックグラウンド」レベルよりも少なくとも４倍高い検出可能な力価を提供する用量又は投与スケジュールが望ましいが、ここで、バックグラウンドは、対照血清に対して又はＥＬＩＳＡアッセイのプレートバックグラウンドに対して定義される。

本開示の免疫原性組成物は、予防的処置のための非経口、局所的、静脈内、経口、腹腔内、鼻腔内、又は筋肉内手段によって投与され得る。

実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態も提供する。
実施形態１は、
（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を含む、免疫原性組成物である。
実施形態２は、
（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を一緒に含む、２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３は、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のＧｌｕ３２３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、実施形態１に記載の免疫原性組成物又は実施形態２に記載の免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４は、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５は、アミノ酸置換が、Ｌｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａを含む、実施形態４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６は、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７は、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９及びＧｌｙ１５６に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を更に含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態８は、アミノ酸置換が、Ｔｙｒ７４Ｃｙｓ、Ａｓｐ１４０Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４９Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５６Ｃｙｓを含む、実施形態７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態９は、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７又は８に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１０は、当該バリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を更に含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１１は、当該ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１２は、ＳｐＡポリペプチドが、ＳｐＡバリアントポリペプチドである、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１３は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、Ｆｃ結合を破壊する少なくとも１つのアミノ酸置換、及びＶＨ３結合を破壊する少なくとも第２のアミノ酸置換を有する、実施形態１２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１４は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＤドメインを含み、当該ＳｐＡＤドメインが、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２又は１３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１５は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ａ、Ｂ、及び／又はＣドメインを更に含む、実施形態１４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１６は、ＳｐＡＥドメインが、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１７は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、又はＣドメインを含み、ＳｐＡＥドメインが、配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＤドメインが、配列番号５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２又は１３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１８は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを連続して含む、実施形態１２～１７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態１９は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを含み、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１８に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２０は、各ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインが、配列番号５８のアミノ酸位置９及び１０に対応するアミノ酸位置のうちの一方又は両方でのアミノ酸置換を有する、実施形態１２～１７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２１は、配列番号５８の９位及び１０位に対応する一方又は両方のアミノ酸位置でのアミノ酸置換が、グルタミン残基のリジン残基である、実施形態２０に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２２は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを含み、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２３は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する、実施形態１２～２２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２４は、ＳｐＡＥドメインが、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＤドメインが、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２５は、ＳｐＡＥドメインが、配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＤドメインが、配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２６は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２７は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのトレオニン置換を有する、実施形態１２～２２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２８は、ＳｐＡＥドメインが、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＤドメインが、配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態２９は、ＳｐＡＥドメインが、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＤドメインが、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＡドメインが、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＢドメインが、配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳｐＡＣドメインが、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３０は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６１のアミノ酸配列、又は配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３１は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の２９位に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を有する、実施形態１２～２２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３２は、当該組成物が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントを更に含む、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３３は、ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１５のＬｕｋＢポリペプチド又は配列番号配列番号１６のＬｕｋＢポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３４は、ＬｕｋＢポリペプチドが、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３５は、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列類似性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態３４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３６は、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５及び配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含む、実施形態３５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３７は、アミノ酸置換が、バリンからロイシンへの置換である、実施形態３６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３８は、当該ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、実施形態３４～３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態３８は、当該ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１６のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、実施形態３４～３７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４０は、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１７～２２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態３４～３９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４１は、当該組成物が、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列、又は配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４２は、当該組成物が、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸配列、又は配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４３は、当該組成物が、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４４は、ＳｐＡポリペプチドが、ＳｐＡバリアントポリペプチドである、実施形態４１～４３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４５は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する、実施形態４４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４６は、（ｉ）ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのロイシン置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４７は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４８は、（ｉ）ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１５の５３位に対応するアミノ酸位置でのロイシン置換を含むＣＣ８ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態４９は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１７のアミノ酸配列、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４８に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５０は、（ｉ）ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＣ８ＬｕｋＢポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５１は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸配列、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５０に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５２は、（ｉ）ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２の８１位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号２の１３９位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号２の１１１位及び１９１位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号２の３２１位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのロイシン置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５３は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５４は、（ｉ）ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２の８１位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号２の１３９位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号２の１１１位及び１９１位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号２の３２１位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＣ４５ＬｕｋＢポリペプチドである、実施形態３２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５５は、ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号６０のアミノ酸配列、又は配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１６のアミノ酸配列、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５６は、アジュバントを更に含む、実施形態１～５５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５７は、アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、及び酸化アルミニウムなどのアルミニウム塩を含む、実施形態５６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５８は、アジュバントが、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムを含む、実施形態５６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態５９は、アジュバントが、安定的な水中油型エマルジョンを含む、実施形態５６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６０は、アジュバントが、サポニンを含む、実施形態５６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６１は、サポニンが、ＱＳ２１である、実施形態６０に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６２は、アジュバントが、ＴＬＲ４アゴニストを含む、実施形態５６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６３は、ＴＬＲ４アゴニストが、リピドＡ又はその類似体若しくは誘導体である、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６４は、ＴＬＲ４アゴニストが、ＭＰＬ、３Ｄ－ＭＰＬ、ＲＣ５２９、ＧＬＡ、ＳＬＡ、Ｅ６０２０、ＰＥＴ－リピドＡ、ＰＨＡＤ、３Ｄ－ＰＨＡＤ、３Ｄ－（６－アシル）－ＰＨＡＤ、ＯＮＯ４００７、又はＯＭ－１７４を含む、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６５は、ＴＬＲ４アゴニストが、グリコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）である、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６６は、アジュバントが、安定的な水中油型エマルジョンと組み合わせてＴＬＲ４アゴニストを含む、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６７は、アジュバントが、安定的な水中油型エマルジョン中で製剤化されたＴＬＲ４アゴニストを含む、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６８は、アジュバントが、ＧＬＡ－ＳＥを含む、実施形態６５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態６９は、アジュバントが、サポニンと組み合わせてＴＬＲ－４アゴニストを含む、実施形態６２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７０は、アジュバントが、ＧＬＡ－ＬＳＱを含む、実施形態６５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７１は、免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせであって、当該組成物が、実施形態１～５５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアント、ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及びＬｕｋＢポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の単離された核酸分子を含む、免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７２は、当該組成物が、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子、及びＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－１５）をコードする核酸分子を含み、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする核酸分子が、配列番号１０８のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７３は、当該組成物が、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子、及びＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３０）をコードする核酸分子を含み、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする核酸分子が、配列番号１１０のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７４は、当該組成物が、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子、及びＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３２）をコードする核酸分子を含み、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする核酸分子が、配列番号１０７のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７５は、当該組成物が、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子、及びＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３３）をコードする核酸分子を含み、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする核酸分子が、配列番号１１０のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７６は、当該組成物が、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子、及びＬｕｋＡＢヘテロ二量体（ＲＡＲＰＲ－３４）をコードする核酸分子を含み、ＬｕｋＡＢヘテロ二量体をコードする核酸分子が、配列番号１０９のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列に作動可能に連結された配列番号１０３のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列類似性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７７は、１つ以上の核酸分子が、１つ以上のベクター中に含有される、実施形態７１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態７８は、当該組成物が、宿主細胞を含み、当該宿主細胞が、当該１つ以上の核酸分子又は当該１つ以上のベクターを含む、実施形態７１又は７７に記載の免疫原性組成物である。
実施形態７９は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～７８のいずれか１つに記載の有効量の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法である。
実施形態８０は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌に対する免疫応答の誘発を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～７８のいずれか１つに記載の有効量の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法である。
実施形態８１は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌の脱コロニー形成、又はコロニー形成若しくは再コロニー形成の予防を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～７８のいずれか１つに記載の有効量の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法である。
実施形態８２は、対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を生成する方法で使用するための、実施形態１～７８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。
実施形態８３は、薬剤として使用するための、実施形態１～７８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせである。

以下の実施例は、本開示の実施形態を説明するために提供されるが、その範囲を限定することを決して意図するものではない。

実施例１：例示的なＬｕｋＡバリアントポリペプチド、ＬｕｋＢバリアントポリペプチド、及び安定的なＬｕｋＡＢヘテロ二量体複合体
ＬｕｋＡＢヘテロ二量体タンパク質の発現については、Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を、ｐＣＤＦＤｕｅｔ－１にクローニングされたｌｕｋＡ構築物、及びｐＥＴＤｕｅｔ－１にクローニングされたｌｕｋＢ構築物と同時形質転換した。形質転換体を、５０μｇ／ｍＬのアンピシリン及び５０μｇ／ｍＬのスペクチノマイシンで、それぞれｐＥＴＤｕｅｔ－１及びｐＣＤＦＤｕｅｔ－１を選択するために、Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉブロス中、３７℃、１９０ｒｐｍで振とうしながら一晩培養した。発現のため、培養物がＯＤ_６００＝２に達するまで１９０ｒｐｍで振とうしながら、３７℃で一晩培養した培養液の１：５０希釈液を新鮮なＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ培地に接種した。次いで、イソプロピルβ－ｄ－１－チオガラクトピラノシドの最終濃度１ｍＭまでの添加を介して発現を誘導し、誘導を３７℃で更に５時間継続した。ＬｕｋＡ及び／又はＬｕｋＢにおけるシステイン置換の対を含むＬｕｋＡＢヘテロ二量体の発現は、ジスルフィド結合形成を支持するために、Ｅ．ｃｏｌｉＯｒｉｇａｍｉ２（ＤＥ３）細胞の細胞質で発現された。Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）の周辺質でのＬｕｋＡ単量体の発現は、ｐＤ８６１－ＣＨでのｌｕｋＡ構築物の形質転換を介して行われ、ＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ（３０μｇ／ｍＬのカナマイシンを添加）で最終濃度の４ｍＭのラムノースを使用して、３７℃で４時間誘導された。細胞質及び周辺質発現構築物の両方を誘導した後、細胞を４℃、４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して採取し、次いで溶解緩衝液（９４％のＢｕｇｂｕｓｔｅｒ［ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ］＋６％の５ＭＮａＣｌ＋０．４％の４Ｍイミダゾール＋プロテアーゼ阻害剤カクテル［ＰｒｏｔｅａｓｅＡｒｒｅｓｔ、Ｇ－Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ］）中に再懸濁した。室温で２０分間溶解した後、可溶化液を氷上で４５分間インキュベートし、次いで１６１００×ｇ、４℃で３５分間遠心分離した。タンパク質を、ＡＫＴＡＰｕｒｅ２５ＭＦＰＬＣ及びＨｉｓＴｒａｐカラムを使用して、ＬｕｋＡのＮ末端で６ｘＨｉｓ－ｔａｇを介して精製し、イミダゾール勾配（５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４、２００ｍＭのＮａＣｌ中、５０～５００ｍＭのイミダゾール）を使用して溶出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより決定された精製タンパク質を含有する画分をプールし、５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４、２００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール中、４℃で一晩透析した。精製されたタンパク質は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を介して定量化された。

実施例２：野生型、ＬｕｋＡ、及びＬｕｋＡＢトキソイドの細胞傷害性
ＬｕｋＡＢトキソイドタンパク質の細胞傷害性（表５に定義）を、前単球細胞株ＴＨＰ－１又は新たに単離された初代ヒト多形核白血球（ｈＰＭＮ）のいずれかを使用して、野生型ＬｕｋＡＢ毒素と比較して評価した。

ＴＨＰ－１細胞は、細胞傷害性を試験する前に、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテートの存在下で分化させた。ＴＨＰ－１細胞傷害性アッセイについては、５０μＬＲＰＭＩ中の合計１×１０^５個の細胞を、９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。ＬｕｋＡＢ毒素及びトキソイドタンパク質を、タンパク質の標準濃度に調整し、氷冷ＲＰＭＩ培地中で段階希釈し、各々５０μＬの体積を適切なウェルに添加した。ＲＰＭＩのみの陰性対照に加えて、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を陽性対照として０．１％の最終濃度に加えた。プレートを、３７℃、５％のＣＯ_２で２時間インキュベートし、その後、ＣｙｔｏＴｏｘ－ＯＮＥアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、膜完全性のマーカーとして機能する細胞質酵素乳酸デヒドロゲナーゼの放出を評価した。

分化ＴＨＰ－１細胞に対するＬｕｋＡ及びＬｕｋＡＢトキソイドの細胞傷害性を、以下の表６に提供する。ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡＢ野生型毒素の両方が、０．３１３μｇ／ｍＬと低い毒素濃度で細胞集団の３０％以上を殺傷したため、分化ＴＨＰ－１細胞は、野生型毒素に対して感受性があった。ＬｕｋＡ（デルタ１０）のＣ末端における最終１０アミノ酸残基の欠失は、ＣＣ８デルタ１０毒素の細胞傷害性が４０μｇ／ｍＬで５％未満の細胞死に低減したが、分化ＴＨＰ－１細胞に対するＣＣ４５デルタ１０毒素の細胞傷害性は低減しなかった。ＬｕｋＡ単量体のいずれも、分化ＴＨＰ－１細胞に対して細胞傷害を示さなかった。ＬｕｋＡが、ＬｕｋＢの非存在下では活性な細孔複合体を形成しないはずであるため、この結果は予想されたものであった。ＲＡＲＰＲ－３３、ＲＡＲＰＲ－３４、及びＲＡＲＰＲ－１５を含むＬｕｋＡＢ二量体トキソイドの各々は、分化したＴＨＰ－１細胞に対する細胞傷害性の顕著な低下を示し、最高試験濃度４０μｇ／ｍＬで試験されたトキソイドの各々について、１％以下の細胞死を示した。

ｈＰＭＮについては、中毒前に、全ての毒素を２．５μｇ／ｍＬ（サブユニット当たり）に正規化し、次いで、２０μＬの毒素を９６ウェルプレートの上部ウェルにピペット注入し、１０μＬの１ＸＰＢＳ中で２倍に段階希釈した。ＰＭＮを単離し、９０μＬのＲＰＭＩ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。次いで、９０μＬのＰＭＮを各ウェルにピペット注入し、毒素－ＰＭＮ混合物を３７℃＋５％ＣＯ_２のインキュベーターで１時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。

ヒト初代ＰＭＮ細胞に対するＬｕｋＡ単量体及びＬｕｋＡＢ二量体トキソイドの細胞傷害性を、以下の表７に提供する。野生型ＣＣ８及びＣＣ４５毒素は、それぞれ０．３１３μｇ／ｍＬ及び１．２５μｇ／ｍＬの毒素濃度で、初代ヒトＰＭＮの９０％超の殺傷を示した。比較すると、ＬｕｋＡＢトキソイド及びＬｕｋＡ単量体の各々は、これらの細胞に対する細胞傷害性が大幅に低下した。ＣＣ８ＬｕｋＡ中の１０個のＣ末端残基の欠失は、分化ＴＨＰ－１細胞に対する細胞傷害性を本質的に排除したが、この毒素は、ｈＰＭＮに対する細胞傷害性を保持し、５μｇ／ｍＬ以上の濃度で２０％超の殺傷が観察された。ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体は、活性細孔複合体の形成に重要なＬｕｋＢ構成要素を欠くトキソイドに予想されるように、ｈＰＭＮに対する細胞傷害性をほとんど示されなかった。ＬｕｋＡＢ二量体トキソイドの各々は、ＣＣ８及びＣＣ４５野生型ＬｕｋＡＢ毒素と比較して、ｈＰＭＮ細胞に対する細胞傷害性が顕著に低下した。ＲＡＲＰＲ－３３ＬｕｋＡＢトキソイド、並びに関連するトキソイドＲＡＲＰＲ－３２及び－３４は、ＣＣ８デルタ１０よりも少ない細胞傷害性を示し、ＲＡＲＰＲ－３３は、最高試験濃度２０μｇ／ｍＬで細胞集団の１５％しか殺傷しなかった。

実施例３：ＲＡＲＰＲ－３３ＬｕｋＡＢ毒素及びＷＴＬｕｋＡＢ毒素の他のバリアントの細胞傷害性
ＲＡＲＰＲ－３３並びにＷＴＬｕｋＡＢ毒素及びＬｕｋＡ単量体の異なるバリアントの細胞傷害性及び免疫原性を評価するために、追加の実験を実施した。免疫原性試験にマウスを使用した。

ＬｕｋＡＢ毒素、トキソイド、及び単量体の細胞傷害性を、ヒトＰＭＮで評価した。中毒の前に、全ての毒素を１００μｇ／ｍＬ（サブユニット当たり）に正規化し、次いで２０μＬの毒素を９６ウェルプレートの上部ウェルにピペット注入し、１０μＬの１ＸＰＢＳ中で２倍に段階希釈した。ＰＭＮを異なるドナーから単離し、９０μＬのＲＰＭＩ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。９０μＬのＰＭＮを各ウェルにピペット注入し、毒素－ＰＭＮ混合物を３７℃＋５％ＣＯ２のインキュベーターで１時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引きし、１００％死に設定されるＴｒｉｔｏｎＸ１００処理細胞に対して正規化することによって計算された。

ヒト初代ＰＭＮ細胞に対するＬｕｋＡ単量体及びＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害性を図３に提供する。野生型ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５毒素は、それぞれ２．５μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの毒素濃度で、初代ヒトＰＭＮの９０％超の殺傷を示した。また、２．５μｇ／ｍＬでのＬｕｋＡＢハイブリッド毒素ＣＣ８／ＣＣ４５及びＣＣ４５／ＣＣ８についても、最大殺傷が観察された。比較すると、ＬｕｋＡＢトキソイド及びＬｕｋＡ単量体は、これらの細胞に対する細胞傷害性が大幅に低下した。ＣＣ８ＬｕｋＡ中の１０個のＣ末端残基の欠失は、ｈＰＭＮに対する細胞傷害性を保持し、５μｇ／ｍＬ以上の濃度で２０％超の殺傷が観察された。ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体、並びにこれらの単量体の組み合わせは、ｈＰＭＮに対する細胞傷害性をほとんど示さなかった。ＲＡＲＰＲ－３３のＬｕｋＡＢトキソイドは、ＣＣ８Δ１０Ｃよりも少ない細胞傷害性を示し、ＲＡＲＰＲ－３３は、最高試験濃度２０μｇ／ｍＬで細胞集団の１５％しか殺傷しなかった。

実施例４：マウスにおけるＬｕｋＡＢバリアントの免疫原性
異なるＬｕｋＡＢバリアントの免疫原性を決定するため、ＥｎｖｉｇｏＨｓｄ：ＮＤ４（４週齢）マウス（ｎ＝５／抗原）に、５０μｌのアジュバントであるＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄと混合した５０μｌの１０％グリセロール１ＸＴＢＳ中の２０μｇのＬｕｋＡＢを皮下投与した。５匹のマウスのコホートはまた、同体積の１０％グリセロール１ＸＴＢＳ及びＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄからなるモック免疫も受けた。同じ抗原－アジュバントカクテルを２週間間隔で２回ブーストした後、心臓穿刺を介してマウスから採血し、血清を得た。

抗ＬｕｋＡＢ抗体力価を決定するために、ＥＬＩＳＡを実施した。ＷＴＬｕｋＡＢＣＣ８又はＣＣ４５を、１ＸＰＢＳ中２μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ２ＨＢプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４５５）において１００μｌでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。次いで、プレートを、洗浄緩衝液（１ＸＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄し、次いで２００μｌのブロッキング緩衝液（１ＸＰＢＳ中２．５％の乳状液）で１時間ブロックした。血清のブロッキング緩衝液への１：５００から始まる５倍段階希釈液を生成し、ロッカー上で１時間インキュベートさせた。次いで、プレートを再び３回洗浄し、ブロッキング緩衝液で１：５，０００に希釈したマウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｂｉｏｒａｄ）抗体を加え、室温で１時間インキュベートさせた。結合していない二次抗体を、洗浄緩衝液での３回連続洗浄で洗い流した。室温に戻したＴＭＢ（１００μｌ）を各ウェルに加え、蓋をして２５分間インキュベートした。反応の完了後、等量の２Ｎ硫酸を各反応ウェルに添加して、反応を停止させた。次いで、４５０ｎｍの吸光度についてＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでプレートを読み取った。図４Ａ及び４Ｂに図示されるヒートマップは、二重測定の平均吸光度値を示し、黒は高い吸光度及びコーティング抗原に結合している抗体を表し、白は低い吸光度及び結合している抗体がないことを表す。

ＲＡＲＰＲ－３３は、堅牢な抗ＣＣ８及び抗ＣＣ４５ＬｕｋＡＢＩｇＧ抗体力価を誘発した（図４Ａ及び図４Ｂ）。ＲＡＲＰＲ－３３免疫化は、ＣＣ８ＷＴ毒素、ＣＣ８／ＣＣ４５ハイブリッド毒素及びＣＣ８Δ１０Ｃトキソイドによる免疫と同等の抗ＣＣ８ＩｇＧ応答を誘発した。個々のＣＣ８ＬｕｋＡ単量体によって誘導された抗ＣＣ８ＬｕｋＡＢＩｇＧ力価は、ＣＣ８ＬｕｋＡＢ毒素又はＣＣ８／ＣＣ４５ハイブリッド毒素、ＣＣ４５／ＣＣ８ハイブリッド毒素、及びＲＡＲＰＲ３３ハイブリッド抗原によって誘導されたものほど高くはなかった（図４Ａ）。

ＲＡＲＰＲ－３３免疫マウスにおける抗ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ力価は、ＣＣ８／ＣＣ４５ＷＴハイブリッド抗原によって誘発された力価よりも高く、ＣＣ４５ＷＴ抗原によって誘発された力価と同等であった。ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体を組み合わせることにより、ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡＢの両方に対する抗体力価が誘発された（図４Ｂ）。しかしながら、ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体を組み合わせることにより誘発されたこれらの抗ＣＣ８及び抗ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ力価は、ＲＡＲＰＲ３３によって誘発されたものほど高くはなかった。個々のＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体は、非常に高い抗ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ力価を誘発する。これは、ＣＣ４５／ＣＣ８ハイブリッドによって誘発されるレベルと類似しており、ＲＡＲＰＲ－３３又はＣＣ４５ＷＴ毒素によって誘発されるレベルよりもわずかに低いに過ぎない。これらの結果は、ＲＡＲＰＲ－３３免疫化によりＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５の両方に対する抗体応答が高い大きさで誘導されることを示している。

実施例５：毒素細胞傷害性の抗体介在性中和
毒素細胞傷害性の抗体介在性中和を、実施例４で上述したように免疫したマウスから得られた血清で評価した。熱不活性化プール血清をＰＢＳ中４０％血清に正規化し、次いで、２０μＬの血清を９６ウェルプレートの上部ウェルにピペット注入し、１０μＬの１ＸＰＢＳで２倍に段階希釈した。ＬＤ_９０のＬｕｋＡＢ毒素クローン複合体配列バリアントの各々を、室温で１５分間、プレートに添加した（１０μＬ／ウェル）。次いで、８０μＬのＲＰＭＩ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化された新たに単離されたヒト初代多形核白血球（ｈＰＭＮ）を、血清－毒素混合物に添加し、３７℃＋５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。抗体中和データを図５に提示する。

ＲＡＲＰＲ－３３免疫化マウス由来の血清は、全ての抗原の中で最も強力で広くＬｕｋＡＢ中和能力を示した（図５）。ＲＡＲＰＲ３３免疫化マウス由来の血清は、０．２５％という低い血清で試験された全ての１１のＬｕｋＡＢバリアントの細胞傷害効果を強く中和し、ほとんどのＬｕｋＡＢバリアントはまた、０．０６３～０．１２５％という低い血清でも保護を提供した（図５）。個々のＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体による免疫化は、抗原骨格に高度に偏ったＬｕｋＡＢ中和能力を有する血清をもたらした（図５）。ＣＣ８ＬｕｋＡ単量体とＣＣ４５ＬｕｋＡの組み合わせが、各免疫化に対して各単量体２０μｇ（総タンパク質４０μｇ）で投与されると、広範で強力なＬｕｋＡＢ中和能力有する血清が得られ、０．５％という低い血清で試験した１１個のＬｕｋＡＢバリアント全てを中和した（図５）が、これはＲＡＲＰＲ－３３免疫化マウスからの血清で観察されたものよりも低い。

組み合わせて、実施例３～５に提示されたデータは、ＲＡＲＰＲ－３３のＣＣ８／ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ骨格に組み込まれる減弱及び安定化変異により、ＣＣ８／ＣＣ４５ＷＴＬｕｋＡＢハイブリッドの広範な免疫原性効果を改善する（図４及び図５）と同時に、ＣＣ８／ＣＣ４５ＷＴＬｕｋＡＢ毒素と比較してＲＡＲＰＲ－３３を高度に減弱させる（図３）ことを示す。

実施例６：抗血清毒素中和
毒素細胞傷害性の抗体介在性中和を、野生型ＬｕｋＡＢ、野生型ＬｕｋＡＢハイブリッド（すなわち、ＣＣ８ＬｕｋＡ／ＣＣ４５ＬｕｋＢ及びＣＣ４５ＬｕｋＡ／ＣＣ８ＬｕｋＢ）、ＬｕｋＡ単量体、又はＬｕｋＡＢトキソイドで免疫したマウスから得られた血清で評価した。熱不活化されたプール血清をＰＢＳ中４０％の血清に正規化し、次いで、２０μＬの血清を９６ウェルプレートの上部ウェルにピペット注入し、１０μＬの１ＸＰＢＳで２倍に段階希釈した。次いで、ＬＤ_９０のＬｕｋＡＢ毒素クローン複合体配列バリアントの各々を、２％、１％、又は０．５％の血清のいずれかを含有するプレート（１０μＬ／ウェル）のウェルに室温で１５分間添加した。次いで、８０μＬのＲＰＭＩ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した、異なるドナーからの新たに単離されたヒト初代多形核白血球（ｈＰＭＮ）を、血清－毒素混合物に添加し、３７℃＋５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ_２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。抗体中和データを、図６Ａ（２％抗体血清）、図６Ｂ（１％抗体血清）、及び図６Ｃ（０．５％抗体血清）の表に提示する。

野生型ＣＣ８及びＣＣ４５ＬｕｋＡＢによる免疫化は、免疫化抗原の配列組成を反映するパターンで、ＬｕｋＡＢ毒素の天然に存在する配列バリアントを中和した抗体を誘発した。ＣＣ８ＬｕｋＡＢ毒素によって誘導される抗体は、ＣＣ８、ＣＣ１、ＣＣ５、及び他のＳ．ａｕｒｅｕｓ系統に由来する毒素を強力に中和したが、ＣＣ３０、ＣＣ４５又はＳＴ２２ＡＳ．ａｕｒｅｕｓに由来する毒素の完全な中和は提供しなかった。同様に、ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ毒素を用いた免疫化は、ＣＣ３０、ＣＣ４５又はＳＴ２２ＡＳ．ａｕｒｅｕｓ系統に由来する毒素を強力に中和する抗体を誘発したが、他の系統に由来する毒素は誘発しなかった。

非天然ハイブリッドＬｕｋＡＢである、ＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせたＣＣ８ＬｕｋＡ又はＣＣ８ＬｕｋＢと組み合わせたＣＣ４５ＬｕｋＡのいずれかでのマウスの免疫化は、天然に存在する二量体の組み合わせと比較して、ＬｕｋＡＢ配列バリアントのより広範な中和を示した抗体を誘発した。非天然のハイブリッド二量体のうち、ＣＣ８ＬｕｋＡ及びＣＣ４５ＬｕｋＢは、反対の組み合わせよりもわずかに良好な中和プロファイルを示し、このパターンは、ＬｕｋＡの最後から２番目の残基にＧｌｕからＡｌａへの置換を保有するタンパク質中に保持されていた（Ｅ３２３Ａ）。野生型毒素に対して誘発された抗体について観察されたように、ＬｕｋＡ単量体は、その配列組成を示す中和パターンを示した抗体を誘発した。ＣＣ８ＬｕｋＡ及びＣＣ４５ＬｕｋＡ単量体の組み合わせ（ＲＡＲＰＲ－３１＋ＣＣ４５ＬｕｋＡＷ９７）は、広範な中和パターンを示した抗体を誘発したが、１％又は０．５％の血清での中和レベルの低下によって明らかなように、二量体抗原と比較して中和の効力が低下した。

二量体トキソイドのうち、ＲＡＲＰＲ－１５、ＲＡＲＰＲ－３３、及びＲＡＲＰＲ－３４は、試験された全てのＬｕｋＡＢ配列バリアントに対して広範な中和抗体応答を示した。非天然の野生型二量体の組み合わせも、広範な中和プロファイルを示したが、中和応答の効力は、いくつかのトキソイドについて観察されたものよりも劣っていた。ハイブリッド野生型及びトキソイド抗原の両方は、２％（図６Ａ）及び１％（図６Ｂ）血清で試験したときに広範な中和プロファイルを示したが、０．５％血清で試験した場合、トキソイドに対する応答の効力の改善が明らかであった（図６Ｃ）。この最低試験濃度では、ＲＡＲＰＲ－１５、ＲＡＲＰＲ－３２、ＲＡＲＰＲ－３３、及びＲＡＲＰＲ－３４はそれぞれ広範な中和応答を示した。ＲＡＲＰＲ－３３は特に、広範な中和応答を保持する血清を誘発したが、ハイブリッド野生型抗原及びＥ３２３Ａトキソイドは、０．５％の血清で広範な保護応答を誘発できなかった。また、ＣＣ３０、ＣＣ４５、及びＳＴ２２ＡＬｕｋＡＢ毒素でのみ高いレベルの中和が観察されたため、最低試験濃度のＣＣ４５トキソイドＲＡＲＰＲ－１５によって誘発された中和パターンは、その配列組成を反映していた。ハイブリッド二量体トキソイドＲＡＲＰＲ－３３は、強力で広範な中和免疫応答を誘発した。

実施例７：高濃度でのＲＡＲＰＲ－３３の細胞傷害性。
方法：
細胞傷害性アッセイ：各それぞれのＬｕｋＡＢタンパク質複合体の細胞傷害性を評価するために、新たに単離した初代ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ毒素で中毒させた。ＰＭＮを異なるドナーから単離し、５０μｌのＲＰＭＩ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。ＰＢＳ中の５０μｌの毒素を細胞に添加し、毒素－ＰＭＮ混合物を３７℃＋５％ＣＯ２のインキュベーターで１時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。死細胞％は、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引いて、１００％死に設定されるＴｒｉｔｏｎＸ処理細胞に対して正規化することによって計算される。

ＬＤＨアッセイ：各それぞれのＬｕｋＡＢタンパク質複合体が細胞溶解を引き起こす可能性があるかどうかを評価するために、異なるドナーからの新たに単離された初代ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡＢ毒素で中毒させ及びＬＤＨ放出を測定した。ＷＴ毒素をＰＢＳで２倍に段階希釈し、５～０．００２４μｇ／ｍｌの範囲の濃度で試験した。ＬｕｋＡＢトキソイドをＰＢＳで希釈し、２．５、２、１、１．５、及び０．５ｍｇ／ｍｌで試験した。ＰＭＮを単離し、５０μｌのＲＰＭＩ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。次いで、５０μｌのＰＭＮを各ウェルにピペット注入し、ウェル当たり５０μｌの希釈毒素を添加した。毒素－ＰＭＮ混合物を、３７℃＋５％ＣＯ２のインキュベーターで２時間インキュベートした。ＬＤＨ放出を評価するために、プレートを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いで、２５μｌの上清を各ウェルから取り出し、９６ウェルブラッククリアボトムプレートに移した。２５μｌのＣｙｔｏＴｏｘ－ＯＮＥ均質膜完全性試薬（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｍｅｍｂｒａｎｅｉｎｔｅｇｒｉｔｙｒｅａｇｅｎｔ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）をブラッククリアボトム９６ウェルプレートに添加し、混合物を暗所で１０分間室温においてインキュベートした。細胞溶解を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して５６０ｎｍの励起波長及び５９０ｎｍの発光波長で蛍光を記録することによって評価した。死細胞％は、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引いて、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ処理細胞に対して正規化することによって計算された。

結果：
以前の実施例では、ｈＰＭＮに対するＬｕｋＡＢトキソイドＲＡＲＰＲ－３３の細胞傷害性を、最大２０μｇ／ｍｌの濃度まで決定した。次に、高濃度（最大２．５ｍｇ／ｍｌ）のＲＡＲＰＲ－３３の存在下で、ヒトＰＭＮの細胞傷害性をモニターした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ測定に基づくヒトＰＭＮ（４～６ドナー）の最大細胞傷害性は、約０．１５６μｇ／ｍｌ毒素による１時間の中毒時に、ＷＴＬｕｋＡＢＣＣ８、ＣＣ４５及びＣＣ８／ＣＣ４５毒素について観察された（図７Ａ）。ＲＡＲＰＲ－３３及びＣＣ８ＬｕｋＡ単量体について、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒで測定された死細胞のパーセンテージは、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で約１０％であった（図７Ｂ）。最大２．５ｍｇ／ｍｌのＲＡＲＰＲ－３３又はＣＣ８ＬｕｋＡ単量体の濃度でＰＭＮをインキュベーションしても、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ測定によって決定された死細胞のパーセンテージは、更に増加しなかった。

ＬＤ_１５値は、１５％の細胞死を誘導する抗原の濃度を示す。Ｌ_Ｄ１５を、線形回帰を使用して決定した。ＣＣ８ＷＴＬｕｋＡＢについては、ＬＤ_１５は０．０１３μｇ／ｍｌであり、ＣＣ４５ＷＴＬｕｋＡＢについては、ＬＤ_１５は０．００４μｇ／ｍｌであり、ＣＣ８／ＣＣ４５ＬｕｋＡＢハイブリッドについては、ＬＤ_１５は０．００２μｇ／ｍｌであった。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３のＬＤ_１５は２．５ｍｇ／ｍｌであった。ＲＡＲＰＲ－３３のＬＤ_１５濃度をＷＴ抗原のＬＤ_１５濃度で割ることによって、ＬＤ_１５の値を比較した。これらの観察結果に基づくと、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３毒性は、ＬｕｋＡＢＣＣ８ＷＴよりも＞１９２，３０８倍低く、ＬｕｋＡＢＣＣ４５ＷＴよりも＞６２５，０００倍低く、及びＬｕｋＡＢＣＣ８／ＣＣ４５ハイブリッドよりも＞１，２５０，０００倍低い。

更に、ＬＤＨアッセイを実施して、異なるＷＴ毒素、ＣＣ８ＬｕｋＡ単量体、又はＲＡＲＰＲ－３３との２時間のインキュベーション後の形質膜損傷を評価した。ヒトＰＭＮの細胞傷害性は、ＷＴ毒素、ＣＣ８ＷＴ、ＣＣ４５ＷＴ、又はＣＣ８／ＣＣ４５毒素ハイブリッドへの２時間の曝露後に誘導された（図７Ｃ）。ＬＤＨによって決定された最大の細胞死は、０．６２５μｇ／ｍｌ毒素の濃度で観察された。対照的に、最大２．５ｍｇ／ｍｌの濃度のＲＡＲＰＲ－３３又はＣＣ８ＬｕｋＡ単量体への２時間の曝露後に、ヒトＰＭＮの形質膜損傷は観察されなかった（図７Ｄ）。これらのデータは、ＲＡＲＰＲ－３３が解毒され、最大２．５ｍｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＭＮの細胞死を誘発できないことを示す。ＲＡＲＰＲ－３３のＣＣ８／ＣＣ４５ＬｕｋＡＢ骨格に組み込まれた変異は、ＣＣ８／ＣＣ４５ＷＴＬｕｋＡＢ毒素と比較して、細胞傷害性を大幅に減弱した。

実施例８：ＲＡＲＰＲ－３３とＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドとの比較
ＬｕｋＡがＤ３９Ａ変異を有し、ＬｕｋＢがＲ２３Ｅ点変異を有する、ＣＣ８骨格に基づくＬｕｋＡＢトキソイドが生成された。この「Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイド」は、Ｋａｉｌａｓａｎ，Ｓ．ｅｔａｌ，“ＲａｔｉｏｎａｌＤｅｓｉｇｎｏｆＴｏｘｏｉｄＶａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＬｅｕｋｏｃｉｄｉｎＡＢ（ＬｕｋＡＢ），”Ｔｏｘｉｎｓ１１（６）：（２０１９）に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このトキソイドは、ＬｕｋＡＢＣＣ８骨格上で生成され、ＷＴＣＣ８ＬｕｋＡＢ毒素と比較して、毒性が＞３６，０００倍減弱されていると記載されていた。細胞傷害性を、ＰＭＮ様であるように分化したＨＬ－６０細胞株を使用して決定した。本実験では、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３ＥトキソイドとＲＡＲＰＲ－３３との間で比較を行った。ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）に対する細胞傷害性を決定し、免疫化時に広範囲に毒素中和抗体を誘導する能力を評価した。

方法：
細胞傷害性アッセイ：各それぞれのＬｕｋＡＢタンパク質複合体の細胞傷害性を評価するために、異なるドナーからの新たに単離された初代ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ毒素で中毒させた。ＰＭＮを単離し、５０μｌのＲＰＭＩ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。細胞に、ＰＢＳ中の５０μｌの毒素を添加し、毒素－ＰＭＮ混合物を３７℃＋５％ＣＯ_２のインキュベーターで２時間インキュベートした。毒性を評価するために、１０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を９６ウェルプレートに加え、混合物を３７℃、５％ＣＯ_２で１．５時間インキュベートした。ＰＭＮ生存率を、４９２ｎｍの吸光度でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して評価した。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引いて、１００％死に設定されるＴｒｉｔｏｎＸ処理細胞に対して正規化することによって計算される。

ＬＤＨアッセイ：各それぞれのＬｕｋＡＢタンパク質複合体が細胞溶解を引き起こすかどうかを評価するために、異なるドナーからの新たに単離された初代ヒト多形核白血球（ＰＭＮ）を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡＢ毒素で中毒させ及びＬＤＨ放出を測定した。ＷＴ毒素をＰＢＳで２倍に段階希釈し、０．５μｇ／ｍｌ～０．０００２４μｇ／ｍｌの範囲の濃度で試験した。ＬｕｋＡＢトキソイドをＰＢＳで１ｍｇ／ｍｌ～０．０３１２５ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度に希釈し、試験した。ＰＭＮを単離し、５０μｌのＲＰＭＩ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．１％ＨＳＡ）当たり２００，０００個の細胞に正規化した。次に、ＰＭＮ（５０μｌ）を各ウェルにピペット注入し、ウェル当たり５０μｌの希釈毒素を添加した。毒素－ＰＭＮ混合物を、３７℃＋５％ＣＯ_２のインキュベーターで２時間インキュベートした。ＬＤＨ放出を評価するために、プレートを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いで、２５μｌの上清を各ウェルから取り出し、９６ウェルブラッククリアボトムプレートに移した。２５μｌのＣｙｔｏＴｏｘ－ＯＮＥ均質膜完全性試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）をブラッククリアボトム９６ウェルプレートに添加し、混合物を暗所で１０分間室温においてインキュベートした。細胞溶解を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３ＭｕｌｔｉｌａｂｅｌＲｅａｄｅｒを使用して５６０ｎｍの励起波長及び５９０ｎｍの発光波長で蛍光を記録することによって評価した。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引いて、１００％死に設定されたＴｒｉｔｏｎＸ処理細胞に対して正規化することによって計算された。

マウスの免疫化。ＥｎｖｉｇｏＨｓｄ：ＮＤ４（４週齢）マウス（ｎ＝５／抗原）に、５０μｌのアジュバントであるＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄと混合した５０μｌの１０％グリセロール１ＸＴＢＳ中の、２０μｇのＬｕｋＡＢを皮下投与した。同じ抗原／アジュバントカクテルを２回ブーストした後、心臓穿刺を介してマウスから採血し、毒素中和試験用に血清を得た。

毒素中和アッセイ。免疫したマウスの血清を各群からプールし、５５℃の水浴中で３０分間、熱不活化した。次に、プールした熱不活化血清をＰＢＳで４０％に希釈した。次いで、４０％のストックを、９６ウェルプレート中の１０μｌのＰＢＳで２倍に段階希釈することによって、血清の更なる希釈を達成した。毒素（１０μｌ）を、０．１５６μｇ／ｍｌ毒素（ＬＤ９０）の最終濃度で血清ウェルに添加した。ＲＰＭＩ＋０．１％のＨＳＡ＋１０ｍＭのＨＥＰＥＳ中の２００，０００個の細胞の濃度で８０μｌのｈＰＭＮを各ウェルに添加した。次いで、プレートを３７℃＋５％ＣＯ２のインキュベーターで１時間インキュベートした。インキュベーション後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒをこの中毒体に添加し、１．５時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを４９２ｎｍの吸光度でプレートリーダーで読み取った。死細胞のパーセンテージは、バックグラウンド（健康な細胞＋ＰＢＳ）を差し引いて、１００％死に設定されるＴｒｉｔｏｎＸ処理細胞に対して正規化することによって計算された。

結果：
Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの細胞傷害性は、最大約１２μｇ／ｍｌまで試験されることが報告されている。ここでは、ＲＡＲＰＲ－３３及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの細胞傷害性を、１ｍｇ／ｍｌの濃度までヒトＰＭＮで決定した。更に、ＷＴＬｕｋＡＢＣＣ８、ＣＣ４５、及びＣＣ８／ＣＣ４５を比較のために試験した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ測定値に基づくヒトＰＭＮの最大細胞傷害性は、約０．０２μｇ／ｍｌのＷＴＬｕｋＡＢＣＣ８／ＣＣ４５、約０．０３μｇ／ｍｌのＬｕｋＡＢＣＣ８、及び０．１２５μｇ／ｍｌのＬｕｋＡＢＣＣ４５による、１時間の中毒時に観察された（図８Ａ）。５ドナーの平均を示す。Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドでは、１ｍｇ／ｍｌでのインキュベーション時に約２２％の細胞傷害性が観察された。ＲＡＲＰＲ－３３の場合、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒで測定した死細胞のパーセンテージは、１ｍｇ／ｍｌの濃度で約３％であった（図８Ｂ）。

更に、ＬＤＨアッセイを実施して、異なるＷＴ毒素、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイド及びＲＡＲＰＲ－３３との２時間のインキュベーション後の血漿膜損傷を評価した。ヒトＰＭＮの細胞傷害性は、ＷＴ毒素、ＣＣ８ＷＴ、ＣＣ４５ＷＴ、及びＣＣ８／ＣＣ４５毒素ハイブリッドの組み合わせへの曝露の２時間後に誘導された（図８Ｃ）。ＬＤＨによって決定された最大の細胞死は、０．２５μｇ／ｍｌ毒素の濃度で観察された。最大１ｍｇ／ｍｌのＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドの濃度でのヒトＰＭＮの２時間の曝露では、約８％の細胞死が観察された。同様の濃度のＲＡＲＰＲ－３３とともにヒトＰＭＮをインキュベートした場合、形質膜損傷は観察されず、細胞死がないことが示された（図８Ｄ）。これらの結果は、ＲＡＲＰＲ－３３がアッセイにおける検出限界未満まで減弱化され、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドよりも減弱化されていることを示す。

ＲＡＲＰＲ－３３又はＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドで免疫化したマウス由来の血清を、毒素中和アッセイで試験し、ヒトＰＭＮの毒素誘導性細胞死を防ぐ血清の能力を評価した。１６の異なるＬｕｋＡＢ毒素に対する中和を、４ドナーから単離されたＰＭＮで試験した。

ＲＡＲＰＲ３３免疫化マウスからの０．１２５％の血清の存在下で、試験された１６のＬｕｋＡＢバリアント全ての細胞傷害性効果を中和した（図９）。類似の血清濃度では、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイド免疫化マウス由来の血清は、ＲＡＲＰＲ－３３免疫化マウス由来の血清と同程度に、ＬｕｋＡＢＣＣ８の細胞傷害性効果に対して保護するのみあった。他の全ての毒素に対して、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイド免疫化マウス由来の血清では、保護が観察されないか又ははるかに低い保護が観察された。これらの結果は、ＲＡＲＰＲ－３３免疫化が、Ｄ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドでの免疫化よりもはるかに広範な毒素中和応答を誘導したことを示す。

実施例９：ＬｕｋＡＢトキソイドの熱安定化
野生型タンパク質と比較したＬｕｋＡＢトキソイドの安定性を、固有のトリプトファン又はチロシン蛍光を使用した熱変性実験により評価し、フォールドした状態からアンフォールドした状態へのタンパク質の移行の中間点に対応する融解温度（Ｔｍ）を推定した。ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒのＰｒｏｍｅｔｈｉｕｓＮＴ．Ｐｌｅｘ装置（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒＩｎｃ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して熱安定性を評価した。熱変性測定を、０．３～１ｍｇ／ｍＬのタンパク質試料（２０μＬ、緩衝液：５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４、１０％グリセロール）に対して行い、各試料に対して２回の繰り返しで実行する。ＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓＮａｎｏＤＳＦユーザーインターフェース（ＭｅｌｔｉｎｇＳｃａｎタブ）を使用して、実行の実験パラメータを設定した。典型的な試料の熱走査は、１．０℃／分の速度で２０℃～９５℃の範囲で行われる。試料に使用されたのと同じ緩衝液中の標準ｍＡｂ（ＣＮＴＯ５８２５又はＮＩＳＴ）を対照として含め、実行を２回繰り返した。熱融解プロファイルを、ベンダーソフトウェアＰＲ．ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌを用いて分析し、タンパク質の５０％がアンフォールドする温度（Ｔｍ）を決定した。

表８Ａ及び８Ｂは、ｎａｎｏＤＳＦによって評価されたＬｕｋＡ及びＬｕｋＡＢトキソイドタンパク質の熱安定性を示す。タンパク質アンフォールディングの開始温度（Ｔｏｎｓｅｔ）及びタンパク質アンフォールディングの遷移の中間点の温度（Ｔｍ１）を、安定化置換（ΔＴｍ）あり及びなしで同等の構築物間のＴｍの差とともに提示する

結果：熱安定性解析（表８Ａ）により、ＣＣ４５ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢタンパク質が、ＣＣ８ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢハイブリッドタンパク質のＴｍよりも３℃高いＴｍ値を示したことが明らかになった。ＣＣ４５ＬｕｋＢ^ｗｔと組み合わせて、ＣＣ４５ＬｕｋＡにおける個々の置換は、０～０．４℃のＴｍの控えめな増加をもたらした。ＬｕｋＢにおけるＶａｌ５３Ｌｅｕ置換は、Ｔｍの０．５℃の増加をもたらした。ハイブリッドＬｕｋＡＢトキソイドはＣＣ８ＬｕｋＡバックグラウンドを含んでいたため、個々のアミノ酸置換を、野生型ＣＣ４５ＬｕｋＢと組み合わせたＣＣ８ＬｕｋＡで試験した（表８Ｂ）。ＣＣ４５ＬｕｋＡで見られるように、ＣＣ８ＬｕｋＡにおける個々の置換もまた、野生型ＬｕｋＡＢよりもＴｍ値を増加させた。ＬｕｋＡ（ＲＡＲＰＲ－１５）における置換の組み合わせは、ＣＣ４５ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢタンパク質よりも１．６℃高いＴｍ値を生成し、ＬｕｋＢ^{Ｖａｌ５３Ｌｅｕ}とのＣＣ８ＬｕｋＡ置換の組み合わせ（ＲＡＲＰＲ－３３）は、ＣＣ８ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢハイブリッドよりも４℃高いＴｍ値をもたらした。ＲＡＲＰＲ－３３の熱安定性の増加は、両方のデータセットで観察された（表８Ａ及び表８Ｂ）。ｎａｎｏＤＳＦは、５０℃未満でアンフォールディングするタンパク質に対してある程度のばらつきを生じ得るが、各セット内で実行された対照を使用して決定されたΔＴｍは、それぞれ４．０℃及び４．１℃でデータセットにわたって一貫していた。ＬｕｋＡ単量体は、置換の組み合わせ及びシステイン置換の対の両方を含み、≧５８℃の高いＴｍ値を示し、ジスルフィド結合が熱安定性の増加に更に寄与していることを示す。

実施例１～９の考察：
本明細書に記載される安定的なＬｕｋＡＢバリアントヘテロ二量体トキソイドは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓワクチン抗原候補として非常に適したものにするいくつかの特徴を有する。

第一に、ＲＡＲＰＲ－３０、ＲＡＲＰＲ－３１、ＲＡＲＰＲ－３２、ＲＡＲＰＲ－３３、ＲＡＲＰＲ－３４、及びＲＡＲＰＲ－１５を含む、ＬｕｋＡ単量体及びＬｕｋＡＢ二量体トキソイドは、野生型毒素及び他の既知のトキソイド（すなわち、ＣＣ８デルタ１０及びＣＣ４５デルタ１０トキソイド）と比較して、分化ヒトＴＨＰ－１及びヒトＰＭＮに対する細胞傷害性の顕著な低下を示した。最大２．５ｍｇ／ｍｌの濃度でさえ、ＲＡＲＰＲ－３３は非細胞傷害性のままであり、その完全な弱毒化を示した。

第二に、ＬｕｋＡ及びＬｕｋＢバリアントタンパク質に導入された置換の組み合わせは、単一の置換のみを含有する対応するトキソイドと比較して、ヘテロ二量体ＲＡＲＰＲ複合体の熱安定性を大幅に強化した。具体的には、ＬｕｋＡ（ＲＡＲＰＲ－１５）における置換の組み合わせは、ＣＣ４５ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢタンパク質よりも１．６℃高いＴｍ値を生成し、ＬｕｋＢ^{Ｖａｌ５３Ｌｅｕ}とのＣＣ８ＬｕｋＡ置換の組み合わせ（ＲＡＲＰＲ－３３）は、ＣＣ８ＬｕｋＡ^{Ｅ３２１Ａ}／ＣＣ４５ＬｕｋＢハイブリッドよりも４℃高いＴｍ値をもたらした。

弱毒化された細胞傷害性及び強化された熱安定性に加えて、本明細書に記載されるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲトキソイド、特にＲＡＲＰＲ－１５、ＲＡＲＰＲ－３３、及びＲＡＲＰＲ－３４は、野生型ＣＣ４５及びＣＣ８毒素、野生型ハイブリッド毒素、並びにＥ３２３Ａトキソイド及びＤ３９Ａ／Ｒ２３Ｅトキソイドを含むトキソイドよりも同等の又はより広範な毒素中和応答及びより高い力価の中和抗体を誘導した。

要約すると、減弱された細胞傷害性、改善された熱安定性、堅牢な免疫原性、及び広く中和された抗体プロファイルにより、本明細書に記載されるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲトキソイドは理想的なワクチン抗原候補となる。

実施例１０：手術創ミニブタ感染モデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊、及びＧＬＡ－ＳＥの有効性
実験の目的は、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ）アゴニストであるグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）を含むか又は含まない、Ｓｐａバリアント抗原及びＲＡＲＰＲＬｕｋＡＢ二量体の組み合わせが、ＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタにおけるＳ．ａｕｒｅｕｓ手術創感染モデルにおいて保護を提供することができるかどうかを評価することであった。試験したＳｐａバリアント抗原（Ｓｐａ＊）は、配列番号６０のアミノ酸配列を有した。試験した変異ＬｕｋＡＢ二量体ＲＡＲＰＲ－３３は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。ＧＬＡアジュバントは、安定的なエマルジョン（ＳＥ）中で製剤化され、１０μｇのＧＬＡ及び２％ＳＥを含有した。

インビボ実験。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（１群当たり３匹のブタ）を、以下の組成物又は組成物の組み合わせを用いて、図１０に示されるスケジュールに従って、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。
１．緩衝液対照（アジュバントなし、ＬｕｋＡｂＲＡＲＰＲ－３３なし、Ｓｐａ＊なし）
２．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋Ｓｐａ＊（１００μｇ）＋アジュバントＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇ）
３．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋Ｓｐａ＊（１００μｇ）、アジュバントなし
４．アジュバントのみＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇ）

ワクチン接種後、ブタに臨床的に関連するＳ．ａｕｒｅｕｓ株、すなわち、クローン複合体（ＣＣ）３９８を攻撃接種した。感染後８日目に、ブタを安楽死させ、手術部位での細菌負荷を決定した。

研究の主要評価項目は、アジュバントを含むか又は含まないＬｕｋＡＢ＋Ｓｐａバリアントをワクチン接種した動物の手術部位での細菌負荷（ｃｆｕ）の低減であった。アジュバント単独又は製剤（ｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）緩衝液単独を用いたワクチン接種を対照として使用した。

材料及び方法：
ミニブタ手術創感染方法：５～８ヵ月齢の雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ＭａｒｓｈａｌｌＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮｏｒｔｈＲｏｓｅ，ＮＹ）を群飼育し、水への自由なアクセスを伴い１２時間の明／暗サイクルで維持した。手術の朝、絶食ミニブタを鎮静させ、挿管し、手術期間中イソフルラン麻酔にかけた。左大腿に手術を行い、それによって筋層を露出させ、５ｍｍのブレードレストロカール（Ｅｎｄｏｐａｔｈ（登録商標）Ｘｃｅｌ、ＥｔｈｉｃｏｎＥｎｄｏ－Ｓｕｒｇｅｒｙ、Ｇｕａｙｎａｂｏ，ＰｕｅｒｔｏＲｉｃｏ）を大腿骨の深さまで進めた。２０μｌの接種材料（約６ｌｏｇ１０ＣＦＵ／ｍｌのＳ．ａｕｒｅｕｓ）からなる細菌攻撃接種を、トロカールを通して６インチのＭＩＬＡ脊髄針（ＭｉｌａＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｆｌｏｒｅｎｃｅ，ＫＹ）を介して創傷（大腿骨上部）に注入し、次いでこれを除去した。細菌攻撃接種を行った後、筋肉を単一の絹縫合糸で閉じ、皮膚を吸収性ＰＤＳ縫合糸で閉じた。８日後、鎮静状態にある間に、ミニブタをバルビツール酸塩で安楽死させた。死亡が確認されると、微生物学のために器官を別々に処理した。試料を、ＢｅａｄＲｕｐｔｏｒＥｌｉｔｅ（ＯｍｎｉＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ，ＵＳＡ）を使用して生理食塩水中で均質化し、次いで希釈し、Ａｕｔｏｐｌａｔｅ５０００ＳｐｉｒａｌＰｌａｔｅｒ（ＳｐｉｒａｌＢｉｏｔｅｃｈ、Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用してＴＳＡプレート上に播種した。プレートを３７°で１８～２４時間インキュベートし、次いで、ＱＣｏｕｎｔコロニーカウンター（ＳｐｉｒａｌＢｉｏｔｅｃｈ、Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）で読み取った。

ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを実施して、複数の群間の統計的有意性を試験した。ＡＮＯＶＡモデルは、説明因子として群及び手術日を含有した。全ての動物研究は、ＪａｎｓｓｅｎＳｐｒｉｎｇＨｏｕｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅによって審査及び承認され、ＡＡＡＬＡＣ認定施設で飼育された。

結果：
ミニブタ手術創感染モデルにおける有効性。アジュバントを含む及び含まないワクチンの有効性を試験するために、３回の免疫化及びクローン複合体ＣＣ３９８に属するＳ．ａｕｒｅｕｓ株を用いた攻撃接種の後、中間筋肉及び深部筋肉においてコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を決定した。

中間筋肉では、ＬｕｋＡＢ、Ｓｐａ＊＋アジュバントの組み合わせを用いた免疫化（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝１．６１）は、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢ及びＳｐａ＊で免疫化した群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝６．０３、Ｐ＝０．００１８）と比較して、又はアジュバントのみを受けた群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝６．０８、Ｐ＝０．００１７）と比較して、ｃｆｕの有意な減少をもたらした（図１１Ａ）。緩衝液対照群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝５．７７）をアジュバントのみの群（Ｐ＝０．８７１１）又はＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊群（Ｐ＝０．９３９２）と比較した場合、ｃｆｕに有意差は見られなかった。しかしながら、緩衝液対照群と、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊＋アジュバントを受けた動物との間で、ｃｆｕの有意な減少が見られた（Ｐ＝０．０００６）。これらの結果は、アジュバント自体が保護効果を提供しないことを示す。

深部筋肉では、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢ及びＳｐａ＊の組み合わせを用いた免疫化は、ｃｆｕの減少をもたらした（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝４．１８、Ｐ＝０．１３８９）。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊＋アジュバントの組み合わせを用いた免疫化は、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢ及びＳｐａ＊で免疫化した群と比較して、ｃｆｕの更に大きい減少をもたらし（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝１．５８）、アジュバントのみを受けた群と比較して、有意な減少をもたらした（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝６．３７、Ｐ＝０．０３６０）（図１１Ｂ）。緩衝液対照群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋＝６．１４）をアジュバントのみの群（Ｐ＝０．９９３１）又はＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊群（Ｐ＝０．３９５３）と比較した場合、ｃｆｕに有意差は見られなかった。しかしながら、緩衝液対照群と、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊＋アジュバントを受けた動物との間で、ｃｆｕの有意な減少が見られた（Ｐ＝０．０１３７）。

これらの結果は、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の組み合わせが、ミニブタ手術部位感染モデルにおける細菌負荷の低減に有効であったこと、並びにＧＬＡ－ＳＥアジュバントの添加が、手術部位における細菌負荷の低減を更に強化したことを示す。

結論：ワクチン組成物の有効性を試験するために、ワクチンがミニブタ手術創感染モデルにおける細菌負荷を低減する能力を、関連するＳ．ａｕｒｅｕｓ株を使用して決定した。ワクチン組成物のＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊の組み合わせを用いたミニブタの免疫化は、関連する臨床的なＳ．ａｕｒｅｕｓ株での攻撃接種後の筋肉内のコロニー形成単位の数の低減をもたらした。ワクチンの組み合わせへのＧＬＡ－ＳＥアジュバントの添加は、細菌負荷を更に低減した。したがって、ＬｕｋＡＢトキソイド及びＳｐａ＊変異体を含有するＳ．ａｕｒｅｕｓワクチン候補は、ＧＬＡ－ＳＥアジュバントとともに、ミニブタ手術部位感染モデルにおける深在性のＳ．ａｕｒｅｕｓ感染に対して効果的に保護される。

実施例１１：手術創ミニブタ感染モデルにおける免疫原性組成物によって誘導される免疫応答
実験の目的は、Ｓｐａバリアント抗原及びＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３二量体と組み合わせが、２つの異なるアジュバントと更に組み合わされて、ＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタのＳ．ａｕｒｅｕｓの手術創感染モデルにおいて保護を提供するかどうかを評価することであった。試験したＳｐａバリアント抗原（ＳｐＡ＊）は、配列番号６０のアミノ酸配列を有した。試験したＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ二量体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＬｕｋＡポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む。この実験の一群において、認可されたＳｈｉｎｇｒｉｘワクチンの一部であり（Ｌｅｒｏｕｘｅｔａｌ．２０１６）、ＴＬＲ４アゴニストＭＰＬ及びＱＳ－２１を含有するＡＳ０１ｂアジュバントを試験した。実験の別の群において、安定的なエマルジョン中で製剤化されたＴＬＲ４アゴニストＧＬＡを含有するＧＬＡ－ＳＥアジュバントを試験した。安定的なエマルジョンは、水中油型エマルジョンであり、油は、スクアレンであった。

ミニブタモデルを使用して、ワクチン候補の免疫原性（抗原特異的ＩｇＧの生成に関して）及び有効性の両方を評価した。ミニブタは、それらの免疫系並びに器官及び皮膚構造がヒトのものと大部分類似しているため、感染性疾患研究で広く使用されている。このモデルでは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ菌による創傷の感染後、手術部位での筋肉及び皮膚の層全体にわたって局所感染が生じる。他の内臓への感染の播種も観察され、疾患の進行は、ヒトにおけるものと非常に類似している。

ミニブタ多形核好中球（ＰＭＮ）に対するＬｕｋＡＢ毒性は、ヒトＰＭＮで観察されたものと類似している。これは、毒素の標的の種特異性に起因して、マウス及びウサギのＰＭＮで観察されるＬｕｋＡＢ毒性の高度な低減とは対照的である。更に、ブタによるブドウ球菌種の頻繁な保菌のため、（実験用齧歯類ではないが）成体ヒトに類似しているミニブタは、多くの場合、ブドウ球菌抗原（ＬｕｋＡＢ及び他のＳ．ａｕｒｅｕｓタンパク質を含む）に対する既存の抗体のレベルが高い。したがって、このモデルは、特にＬｕｋＡＢ及びＳｐａバリアントを含有するワクチンに対して、以前に利用可能な齧歯類モデルよりも、ヒトにおいて潜在的なワクチン保護のより信頼できる指標である可能性が高い。

インビボ実験。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（１群当たり３匹のブタ）を、以下の組成物又は組成物の組み合わせを用いて、図１２に示されるスケジュールに従って、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。
１．緩衝液対照（アジュバントなし、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲなし、Ｓｐａバリアントなし）
２．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋ＳｐＡ＊（１００μｇ）＋アジュバントＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ＋２５μｇのＱＳ－２１）
３．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋ＳｐＡ＊（１００μｇ）＋アジュバントＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇのＧＬＡ）

ワクチン接種後、ブタに臨床的に関連するＳ．ａｕｒｅｕｓ株であるクローン複合体（ＣＣ）３９８を攻撃接種した。感染後８日目に、ブタを安楽死させ、手術部位及び内臓での細菌負荷を決定した。

図１２に示されるように、研究の開始前、及びワクチン接種期間中に規則的な間隔で、血液試料を採取した。血清免疫グロブリンの量及び機能を評価するために、血清解析を実施した。

研究の主要評価項目は、ＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊及び異なるアジュバントをワクチン接種した動物の手術部位／器官での細菌負荷（ＣＦＵ）の低減であった。緩衝液のみを用いたワクチン接種を対照として使用した。

材料及び方法：
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定したＬｕｋＡＢ及びＳｐＡに対する抗体応答：ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＬｕｋＡＢＣＣ４５に対するＩｇＧ抗体レベルを測定するために、３８４ウェルＮｕｎｃプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＰＢＳ中１．０μｇ／ｍｌのＬｕｋＡＢＣＣ８又はＬｕｋＡＢＣＣ４５でコーティングし、２～８℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートを２．５％スキムミルクでブロッキングし、洗浄し、１：１０で開始する希釈剤緩衝液（１ｘＰＢＳ中２．５％（ｗ／ｖ）スキムミルク粉末）中で調製した血清の段階３倍希釈液をウェルに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、洗浄し、１：１０，０００に希釈した抗ブタＩｇＧ－ＨＲＰ二次抗体（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を添加した。室温で１時間インキュベーションした後、ＴＭＢ基質（ＬｅｉｎｃｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてプレートを現像した。１Ｍの硫酸を添加することによって反応を停止した。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。最大有効濃度の半分として定義されるＥＣ_５０力価を、４パラメータロジスティック（ＰＬ）非線形回帰モデルで解析した二重の１２段階滴定曲線に基づいて計算した。３０未満のＥＣ５０力価を有する試料を、３０に打ち切った。潜在的に打ち切られる値のトービットモデルを使用して、３回の免疫化後のワクチン＋アジュバント群と緩衝液のみの群との間の統計的有意性を試験した。ボンフェローニ補正を使用して多重比較を補正した。ＳｐＡ＊に対する抗体を測定するために、９６ウェルマキシソーププレートをＰＢＳ中０．２５μｇ／ｍｌのＳｐＡ＊でコーティングし、２～８℃で一晩インキュベートした。二次抗体は、ブロッキング緩衝液中の抗ブタＩｇＧ－ＨＲＰの１：１０，０００希釈液であった。他の工程は、抗ＬｕｋＡＢ抗体応答の測定について上述されたものと類似していた。潜在的に打ち切られる値のトービットモデルを使用して、３回の免疫化後のワクチン＋アジュバント群と緩衝液のみの群との間の統計的有意性を試験した。ボンフェローニ補正を使用して多重比較を補正した。

ＬｕｋＡＢ毒素中和アッセイ。Ｃｙｔｏ－Ｔｏｘ－Ｏｎｅキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、損傷した膜を有する細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を測定した。ＴＨＰ－１細胞を遠心分離し、ＲＰＭＩで２×１０^６個の細胞／ｍＬの密度に再懸濁した。細胞（５０μＬ）を、血清の段階３倍希釈液又は２，５００ｎｇ／ｍＬの開始濃度を有する参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体の３倍段階希釈液を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。ＬｕｋＡＢ毒素ＣＣ８、ＣＣ４５、ＣＣ２２ａ、又はＣＣ３９８を、４０ｎｇ／ｍＬ（ＣＣ８、ＣＣ２２ａ、ＣＣ３９８）又は２０ｎｇ／ｍＬ（ＣＣ４５）の最終濃度まで試験ウェルに添加した。溶解溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を溶解対照ウェルに添加した。プレートを、５％ＣＯ_２の存在下で、３７℃において２時間インキュベートした。プレートを遠心分離し、２５μＬの上清を新しいプレートに移し、２５μＬのＣｙｔｏＴｏｘ－ＯＮＥ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。プレートを室温で１５分間インキュベートし、停止溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）をウェルに添加した。プレートを、５６０の励起波長及び５ｎｍの帯域幅、並びに５９０の発光波長及び１０ｎｍの帯域幅を有する単色において、ＢｉｏｔｅｋＳｙｎｅｒｇｙＮｅｏ２リーダーで読み取った。ゲインは、１２０～１３０に設定される。全ての血清試料及びＬｕｋＡＢモノクローナル抗体について、５０％細胞傷害性が観察された濃度を表す_ＩＣ５０力価を決定した。血清試料と参照モノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価の差を表す相対力価を出力値として使用した。ワクチン群の相対力価を、３回の免疫化後に緩衝液群と比較した。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを実施して、ワクチン群と緩衝液群との間の統計的有意性を試験した。

ミニブタ手術創感染方法：５～８ヵ月齢の雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ＭａｒｓｈａｌｌＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮｏｒｔｈＲｏｓｅ，ＮＹ）を群飼育し、水への自由なアクセスを伴い１２時間の明／暗サイクルで維持した。手術の朝、絶食ミニブタを鎮静させ、挿管し、手術期間中イソフルラン麻酔にかけた。左大腿に手術を行い、それによって筋層を露出させ、５ｍｍのブレードレストロカール（Ｅｎｄｏｐａｔｈ（登録商標）Ｘｃｅｌ、ＥｔｈｉｃｏｎＥｎｄｏ－Ｓｕｒｇｅｒｙ、Ｇｕａｙｎａｂｏ，ＰｕｅｒｔｏＲｉｃｏ）を大腿骨の深さまで進めた。２０μＬの接種材料（約６ｌｏｇ_１０ＣＦＵ／ｍｌのＳ．ａｕｒｅｕｓ）からなる細菌攻撃接種を、トロカールを通して６インチのＭＩＬＡ脊髄針（ＭｉｌａＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｆｌｏｒｅｎｃｅ，ＫＹ）を介して創傷（大腿骨上部）に注入し、次いでこれを除去した。細菌攻撃接種を行った後、筋肉を単一の絹縫合糸で閉じ、皮膚を吸収性ＰＤＳ縫合糸で閉じた。８日後、鎮静状態にある間に、ミニブタをバルビツール酸塩で安楽死させた。死亡が確認されると、微生物学のために器官を別々に処理した。試料を、ＢｅａｄＲｕｐｔｏｒＥｌｉｔｅ（ＯｍｎｉＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ，ＵＳＡ）を使用して生理食塩水中で均質化し、次いで希釈し、Ａｕｔｏｐｌａｔｅ５０００ＳｐｉｒａｌＰｌａｔｅｒ（ＳｐｉｒａｌＢｉｏｔｅｃｈ、Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用してＴＳＡプレート上に播種した。プレートを３７℃で１８～２４時間インキュベートし、次いで、ＱＣｏｕｎｔコロニーカウンター（ＳｐｉｒａｌＢｉｏｔｅｃｈ、Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）で読み取った。

ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを実施して、緩衝液群とＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋異なるアジュバントで免疫化した群との間のｃｆｕの統計的有意性を試験した。ＡＮＯＶＡモデルは、説明因子として群及び手術日を含有する。全ての動物研究は、ＪａｎｓｓｅｎＳｐｒｉｎｇＨｏｕｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅによって審査及び承認され、ＡＡＡＬＡＣ認定施設で飼育された。

結果：
ＬｕｋＡＢ及びＳｐＡ＊に対して誘導された抗体応答。上述のミニブタの群を、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）及びＳｐＡ＊（１００μｇ）＋アジュバントＡＳ０１ｂ（２５μｇのＭＰＬ及び２５μｇのＱＳ－２１）又はＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇのＧＬＡ、安定的なエマルジョン）の組み合わせを用いて、３週間の間隔で３回免疫化した。緩衝液のみを受けた動物の対照群を含んだ。動物を、３回目の免疫化の３週間後にＳ．ａｕｒｅｕｓで攻撃接種した。血液試料を、各免疫化の前及び攻撃接種の前に採取し（図１２）、ＬｕｋＡＢ及びＳｐＡ＊に対する抗体応答についてＥＬＩＳＡによって解析した。緩衝液のみで免疫化した動物において、低レベルの抗ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５ＩｇＧ抗体が測定され、ＬｕｋＡＢに対する既存の抗体の存在を示している（図１３Ａ及び１３Ｂ）。血清中の抗体レベルは、実験の過程全体を通して時間的に増加しなかった。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥでアジュバント添加されたＳｐＡ＊を用いた免疫化は、３回の免疫化後の対照群と比較して、より高い幾何平均（Ｇｅｏｍｅａｎ）抗ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＬｕｋＡＢＣＣ４５ＩｇＧ力価をもたらした（図１３Ａ及び１３Ｂ、３回の免疫化後のＧｅｏｍｅａｎＩｇＧ力価ＬｕｋＡＢＣＣ８：ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：６４６３７；Ｐ＝０．００３４ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：１１６３５７、Ｐ＝０．０００３；緩衝液対照群：２９３１。３回の免疫化後のＧｅｏｍｅａｎＩｇＧ力価ＬｕｋＡＢＣＣ４５：ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：１９７６４、Ｐ＜０．０００１；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：１１６２０、Ｐ＜０．０００１；緩衝液対照群：１２９）。

緩衝液でのみ免疫化したミニブタは、いずれの時点でもＳｐＡ＊に対する測定可能な抗体を有しなかった（図１３Ｃ）。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥでアジュバント添加されたＳｐＡ＊を用いた免疫化は、３回の免疫化後の対照群と比較して、より高い幾何平均（Ｇｅｏｍｅａｎ）抗ＳｐＡ＊ＩｇＧ力価をもたらした。（図１３Ｃ、３回の免疫化後のＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐＡ＊：ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：７０１３、Ｐ＜０．０００１；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：１７７０、Ｐ＜０．０００１；緩衝液対照群：３０）。これらの結果は、ＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊＋アジュバントワクチンによるＳｐＡ＊特異的抗体の誘導を示す。

ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性の中和。ＬｕｋＡＢは、好中球上の受容体に結合する毒素であり、膜に細孔を形成し、細胞の溶解をもたらす。試験ワクチンによって誘導される抗体の機能性を評価するために、ワクチン接種したミニブタからの血清が、ＴＨＰ－１細胞のＬｕｋＡＢ毒素誘導性溶解を阻害する能力を測定した。アッセイ中の野生型ＬｕｋＡＢ毒素は、クローン複合体ＣＣ８又はＣＣ４５由来であった。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３中のＬｕｋＡは、クローン複合体ＣＣ８に由来し、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３中のＬｕｋＢは、クローン複合体ＣＣ４５に由来する。参照モノクローナルＬｕｋＡＢ特異的抗体もアッセイで使用された。血清試料と参照抗体との間の細胞傷害性の５０％が測定される希釈液を表すＩＣ５０力価の差を決定し、相対力価（ＲＰ力価）としてプロットした。ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＬｕｋＡＢＣＣ４５に対する中和抗体は、実験開始時にミニブタの血清中で検出された（ＬｕｋＡＢＣＣ８ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価免疫化前緩衝液対照群：１１２６；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：１４８３；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：８９６。ＬｕｋＡＢＣＣ４５ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価免疫前緩衝液対照群：６１６；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：９５４；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：６３７）。緩衝液のみをワクチン接種した動物において、ＲＰ力価は、実験の過程で変化しなかった（３回の免疫化後、ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＣＣ８：１４９７；ＬｕｋＡＢＣＣ４５：８８４）。ＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊＋アジュバントをワクチン接種した動物において、３回の免疫化後に血清中で有意に高いＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価が測定された（ＬｕｋＡＢＣＣ８ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：１７０９５、Ｐ＝０．０００７；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：１０２８５、Ｐ＝０．０１１６。ＬｕｋＡＢＣＣ４５ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：２００１９、Ｐ＝０．００２２；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：１６６１２、Ｐ＝０．００４７）。図１４Ａ及び１４Ｂに示されるこれらの結果は、ワクチン中のＬｕｋＡＢ（ＲＡＲＰＲ－３３）が、ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性を遮断する機能性抗体を誘導することを示す。

ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性の交差中和。次に、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊及び異なるアジュバントを用いた免疫化後にミニブタにおいて誘導された抗体が、ＲＡＲＰＲ－３３の骨格には存在しなかったＬｕｋＡＢ配列バリアントの細胞傷害性を交差中和することができたかどうかを評価した。この目的のために、ＬｕｋＡＢ配列バリアントＣＣ２２ａ及びＣＣ３９８を使用した。血清がＴＨＰ－１細胞のＬｕｋＡＢ毒素誘導性溶解を阻害する能力を評価することによって、交差中和を測定した。参照モノクローナルＬｕｋＡＢ特異的抗体もアッセイで使用し、相対力価を上述のように決定した。ＬｕｋＡＢＣＣ２２ａ及びＬｕｋＡＢＣＣ３９８に対する交差中和抗体は、実験開始時にミニブタ血清中で検出可能であった（ＣＣ２２ａＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価免疫前緩衝液対照群：５４１；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：８４６；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：４３６。ＬｕｋＡＢＣＣ３９８ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価免疫前緩衝液対照群：１０６１；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：１０９０；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：６０８）。緩衝液のみをワクチン接種した動物において、ＲＰ力価は、実験の過程で変化しなかった（３回の免疫化後、ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＣＣ２２ａ：７６１；ＬｕｋＡＢＣＣ３９８：１２７０）。ＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊＋アジュバント（ＡＳ０１ｂ又はＧＬＡ－ＳＥ）をワクチン接種した動物において、３回の免疫化後に血清中で有意に高いＧｅｏＭｅａｎＲＰ力価が測定された（ＬｕｋＡＢＣＣ２２ａＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：７５２４、Ｐ＝０．００４０；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：５０２５、Ｐ＝０．０３１２。ＬｕｋＡＢＣＣ３９８ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ：１４３９６、Ｐ＝０．０００５；ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ：８０５１、Ｐ＝０．０１４６）。図１４Ｃ及び１４Ｄに示されるこれらの結果は、ワクチン中のＬｕｋＡＢ（ＲＡＲＰＲ－３３）が、様々なＬｕｋＡＢ毒素配列バリアントの細胞傷害活性を遮断する交差中和抗体を誘導することを示す。

ミニブタ手術創感染モデルにおける有効性。ワクチン有効性を試験するために、３回の免疫化及びクローン複合体ＣＣ３９８由来のＳ．ａｕｒｅｕｓを用いた攻撃接種後、筋肉の２つの部位（中間及び深部）並びに脾臓でのコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を決定した。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂアジュバント（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（中間）＝０．９８、Ｐ＝０．００５７）又はＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（中間）＝０．８３、Ｐ＝０．００４６）を用いた免疫化は、アジュバントのみの群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（中間）＝５．９９）と比較して、中間筋肉におけるｃｆｕの有意な減少をもたらした（図１５Ａ）。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂアジュバント（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（深部）＝０．５８、Ｐ＝０．００２４）又はＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（深部）＝０．７６、Ｐ＝０．００３１）を用いた免疫化は、アジュバントのみの群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ筋肉（深部）＝６．１０）と比較して、深部筋肉におけるｃｆｕの有意な減少もたらした（図１５Ｂ）。脾臓において、ＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊＋ＡＳ０１ｂ又はＬｕｋＡＢ＋ＳｐＡ＊＋ＧＬＡ－ＳＥ（それぞれ、ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ脾臓＝０．５１、Ｐ＝０．０１３８及び０．４５、Ｐ＝０．０１２０）を用いた免疫化と比較して、アジュバントのみで免疫化した対照群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ脾臓＝２．２０）においてより高いレベルのｃｆｕが観察された（図１５Ｃ）。図１５Ａ～１５Ｃに示されるこれらの結果は、試験したワクチンの組み合わせが、ミニブタ手術部位感染モデルにおいて有効であることを示す。ワクチンはまた、脾臓のような器官への細菌の拡散を低減する。

結論：ＬｕｋＡＢＣＣ８、ＬｕｋＡＢＣＣ４５、及びＳｐＡ＊に対するＩｇＧ抗体が誘導されたため、抗原ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊をアジュバントとともに含有するワクチン組成物がミニブタにおいて免疫原性であることが示された。抗ＬｕｋＡＢＩｇＧ抗体の増加は、ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性の交差中和の増加に関連し、誘導されたＩｇＧ抗体が機能的であることを示している。ワクチン組成物の有効性を試験するために、ワクチンがミニブタ手術創感染モデルにおける細菌負荷を低減する能力を、関連するＳ．ａｕｒｅｕｓ株を使用して決定した。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊＋アジュバントワクチン組成物を用いたミニブタの免疫化は、試験株を用いた攻撃接種後の筋肉内のコロニー形成単位の数の有意な低減をもたらした。ワクチン組成物はまた、脾臓におけるｃｆｕの有意な低減をもたらした。したがって、ＬｕｋＡＢ及びＳｐＡトキソイド変異体を含有する試験したＳ．ａｕｒｅｕｓワクチン候補は、ミニブタ手術部位感染モデルにおける深在性のＳ．ａｕｒｅｕｓ感染及び播種に対して効果的に保護した。

実施例１２：Ｓ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株に対する手術創ミニブタ感染モデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の有効性
実施例１０では、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の組み合わせが、ミニブタの手術部位感染モデルにおいてＣＣ３９８株を用いたＳ．ａｕｒｅｕｓ攻撃接種に対してある程度の保護を提供したことが示された。この実験の目的は、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３と組み合わせたＳｐａ＊が、アジュバントの非存在下で、異なる攻撃接種株に対する、ＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタのＳ．ａｕｒｅｕｓ手術創感染モデルにおける保護を提供することができたかどうかを評価することであった。臨床的に関連するＵＳＡ３００Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株を使用した。

試験したＳｐａバリアント抗原（Ｓｐａ＊）は、配列番号６０のアミノ酸配列を有した。試験した変異ＬｕｋＡＢ二量体ＲＡＲＰＲ－３３は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。

インビボ実験。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（１群当たり３匹のブタ）を、以下の組成物又は組成物の組み合わせ（図１６Ｂ）を用いて、図１６Ａに示されるスケジュールに従って、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。
１．緩衝液対照
２．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋Ｓｐａ＊（１００μｇ）
ワクチン接種後、ブタに臨床的に関連するＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株を攻撃接種した。感染後８日目に、ブタを安楽死させ、手術部位での細菌負荷を決定した。研究の主要評価項目は、ＬｕｋＡＢ及びＳｐａバリアントをワクチン接種した動物の手術部位での細菌負荷（ｃｆｕ）の低減であった。製剤緩衝液を用いたワクチン接種を対照として使用した。

材料及び方法：
ミニブタ手術創感染方法：Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、ミニブタ手術創感染モデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株で攻撃接種した。攻撃接種及び手術部位での細菌負荷の決定を、実施例１０及び１１の説明に従って実施した。

結果：
ミニブタ手術創感染モデルにおける有効性。ワクチン抗原の組み合わせの有効性を試験するために、３回の免疫化及びＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株での攻撃接種後、中間筋肉及び深部筋肉におけるコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を決定した。

中間筋肉において、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の組み合わせを用いた免疫化（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝２．１５）は、緩衝液のみを受けた群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝５．７３、Ｐ＝０．２７９０）と比較して、ｃｆｕの減少をもたらした（図１６Ｃ）。

深部筋肉では、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝３．６５）の組み合わせを用いた免疫化は、緩衝液対照群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝６．２１、Ｐ＝０．０２４５）と比較して、ｃｆｕの有意な減少をもたらした（図１６Ｄ）。これらの結果は、アジュバントの非存在下で、試験したワクチンの組み合わせが、ミニブタ手術部位感染モデルにおいてＵＳＡ３００株に対して有効であることを示す。

結論：ワクチン抗原の組み合わせの有効性を試験するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株を使用して、ワクチンの組み合わせがミニブタ手術創感染モデルにおける細菌負荷を低減する能力を決定した。この研究ではアジュバントを使用しなかった。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊を用いたミニブタの免疫化は、緩衝液対照群と比較して、試験株を用いた攻撃接種後の筋肉におけるコロニー形成単位の数の低減をもたらした。これらの結果は、アジュバントの非存在下で、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の組み合わせが、ミニブタのＳＳＩモデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ３００株に対するある程度の保護を提供することを示す。

実施例１３：ＵＳＡ１００Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株に対する手術創ミニブタ感染モデルにおけるＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊、及びＧＬＡ－ＳＥの有効性
実験の目的は、Ｓｐａバリアント抗原及びＲＡＲＰＲＬｕｋＡＢ二量体の組み合わせが、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ）アゴニストであるグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）とともに、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ＵＳＡ１００株を用いた攻撃接種に対する、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタにおける手術創感染モデルにおける保護を提供することができるかどうかを評価することであった。ＵＳＡ１００単離株は、医療関連ＭＲＳＡ感染の大部分に関与する。試験したＳｐａバリアント抗原（Ｓｐａ＊）は、配列番号６０のアミノ酸配列を有した。試験した変異ＬｕｋＡＢ二量体ＲＡＲＰＲ－３３は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。ＧＬＡアジュバントは、安定的なエマルジョン（ＳＥ）中で製剤化され、１０μｇのＧＬＡ及び２％ＳＥを含有した。

インビボ実験。雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（１群当たり３匹のブタ）を、以下の組成物又は組成物の組み合わせ（図１７Ｂ）を用いて、図１７Ａに示されるスケジュールに従って、３週間の間隔で別個に３回、筋肉内免疫化した。
１．アジュバントＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇ、２％ＳＥ）（ＬｕｋＡｂＲＡＲＰＲ－３３なし、Ｓｐａなし＊）
２．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（１００μｇ）＋Ｓｐａ＊（１００μｇ）＋アジュバントＧＬＡ－ＳＥ（１０μｇ、２％ＳＥ）

ワクチン接種後、ブタに臨床的に関連するＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ１００株（ＳＴ５）を攻撃接種した。感染後８日目に、ブタを安楽死させ、手術部位での細菌負荷を決定した。研究の主要評価項目は、ＧＬＡ－ＳＥ単独をワクチン接種した動物と比較した、ＧＬＡ－ＳＥとともにＬｕｋＡＢ＋Ｓｐａバリアントの組み合わせをワクチン接種した動物における手術部位での細菌負荷（ｃｆｕ）の低減であった。

材料及び方法：
ミニブタ手術創感染方法：Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、ミニブタ手術創感染モデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ１００株で攻撃接種した。攻撃接種及び手術部位での細菌負荷の決定を、実施例１０及び１１の説明に従って実施した。２つの群間の統計的有意性を試験するために、ＡＮＯＶＡモデルを使用した。

結果：
ミニブタ手術創感染モデルにおける有効性。ワクチンの組み合わせの有効性を試験するために、３回の免疫化及びＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ１００を用いた攻撃接種後、中間筋肉及び深部筋肉におけるコロニー形成単位（ｃｆｕ）の数を決定した。

中間筋肉において、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊＋ＧＬＡ－ＳＥの組み合わせを用いた免疫化（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝０．８８）は、ＧＬＡ－ＳＥ単独で免疫化した群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ中間筋肉＝５．２７、Ｐ＝０．００１３）と比較して、ｃｆｕの有意な減少をもたらした（図１７Ｃ）。また、深部筋肉では、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊＋ＧＬＡ－ＳＥの組み合わせを用いた免疫化（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝０．３０）は、ＧＬＡ－ＳＥ単独で免疫化した群（ＧｅｏＭｅａｎｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｇ深部筋肉＝５．３７、Ｐ＜０．０００１）と比較して、ｃｆｕの有意な減少をもたらした（図１７Ｄ）。これらの結果は、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊、及びＧＬＡ－ＳＥの組み合わせが、ＳＳＩモデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ１００株からの保護を提供することを示し、試験ワクチンがミニブタにおいて有効であることを示す。

結論：ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊、及びＧＬＡ－ＳＥの組み合わせの有効性を試験するために、関連するＳ．ａｕｒｅｕｓＵＳＡ１００株を使用して、ワクチンがミニブタ手術創感染モデルにおける細菌負荷を低減する能力を決定した。ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊＋ＧＬＡ－ＳＥアジュバントワクチン組成物を用いたミニブタの免疫化は、試験株を用いた攻撃接種後の筋肉におけるコロニー形成単位の数の低減をもたらした。前の実施例からの結果と組み合わせて、ＬｕｋＡＢトキソイド及びＳｐａ変異体を含有するＳ．ａｕｒｅｕｓワクチンの組み合わせが、ミニブタ手術部位感染モデルにおいて、様々な臨床的に関連するＳ．ａｕｒｅｕｓ株によって引き起こされる深在性の感染に対して効果的に保護することができることを示す。

実施例１４：異なるアジュバントと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の免疫原性
実験の目的は、異なるアジュバントが、Ｓｐａバリアント抗原及びＲＡＲＰＲＬｕｋＡＢ二量体の組み合わせの免疫原性を改善するかどうかを評価することであった。試験したＳｐａバリアント抗原（Ｓｐａ＊）は、配列番号６０のアミノ酸配列を有した。試験した変異ＬｕｋＡＢ二量体ＲＡＲＰＲ－３３は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬｕｋＢバリアントポリペプチドを含む。ＴＬＲ４アゴニストを含有する２つのアジュバント、ＡＳ０１ｂ（５μｇのＭＰＬ及び５μｇのＱＳ－２１を含有する）、並びに安定的なエマルジョン中で製剤化されたＧＬＡ（ＧＬＡ－ＳＥ、１μｇのＧＬＡ、２％ＳＥを含有する）を試験した。更に、２つのミョウバンベースのアジュバントを含んだ：Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバント２％（水酸化アルミニウムゲル）及びＡｄｊｕ－ｐｈｏｓ（リン酸アルミニウムゲル）。

インビボ実験。雌のＳｗｉｓｓＷｅｂｓｔｅｒマウス（１群当たり５～１０匹のマウス）を、組成物又は組成物の組み合わせ（図１８Ｂ）を用いて、図１８Ａに示されるスケジュールに従って、２週間の間隔で別個に３回、皮下免疫化した。
１．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）＋ＳｐＡ＊（５μｇ）＋ＡＳ０１ｂ（５μｇのＭＰＬ＋５μｇのＱＳ－２１）
２．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）＋ＳｐＡ＊（５μｇ）＋ＧＬＡ－ＳＥ（１μｇのＧＬＡ、２％ＳＥ）
３．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）＋ＳｐＡ＊（５μｇ）＋Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバント（５０μｌ）
４．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）＋ＳｐＡ＊（５μｇ）＋Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓアジュバント（５０μｌ）
５．ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）＋ＳｐＡ＊（５μｇ）
６．緩衝液＋ＡＳ０１ｂ（５μｇのＭＰＬ及び５μｇのＱＳ－２１）
７．緩衝液＋ＧＬＡ－ＳＥ（１μｇのＧＬＡ、２％ＳＥ）
８．緩衝液＋Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバント（５０μｌ）
９．緩衝液＋Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓアジュバント（５０μｌ）
１０．緩衝液

図１８Ａに示されるように、研究の開始前及び３回の免疫化の２週間後に血液試料を採取した。血清免疫グロブリンの量及び機能を評価するために、血清解析を実施した。ワクチン抗原を含まないアジュバント又は製剤緩衝液を用いたワクチン接種を対照として使用した。

材料及び方法：
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定したＬｕｋＡＢ及びＳｐＡに対する抗体応答：ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＬｕｋＡＢＣＣ４５に対するＩｇＧ抗体レベルを測定するために、３８４ウェルＮｕｎｃプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＰＢＳ中１．０μｇ／ｍｌのＬｕｋＡＢＣＣ８又はＬｕｋＡＢＣＣ４５でコーティングし、２～８℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートを２．５％スキムミルクでブロッキングし、洗浄し、１：９０の希釈で開始する希釈剤緩衝液（１ｘＰＢＳ中２．５％（ｗ／ｖ）スキムミルク粉末）中で調製した血清の段階３倍希釈液をウェルに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、洗浄し、１：２，０００に希釈した抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ二次抗体（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を添加した。室温で１時間インキュベーションした後、ＴＭＢ基質（ＬｅｉｎｃｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてプレートを現像した。１Ｍの硫酸を添加することによって反応を停止した。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。最大有効濃度の半分として定義されるＥＣ_５０力価を、４パラメータロジスティック（ＰＬ）非線形回帰モデルで解析した二重の１２段階滴定曲線に基づいて計算した。ＥＣ５０力価が３０未満の試料を、３０に打ち切った。

ＳｐＡ＊に対する抗体を測定するために、３８４ウェルマキシソーププレートをＰＢＳ中０．２５μｇ／ｍｌのＳｐＡ＊でコーティングし、２～８℃で一晩インキュベートした。二次抗体は、ブロッキング緩衝液中の抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰの１：２，０００希釈液であった。他の工程は、抗ＬｕｋＡＢ抗体応答の測定について上述されたものと類似していた。

ＬｕｋＡＢ毒素中和アッセイ。Ｃｙｔｏ－Ｔｏｘ－Ｏｎｅキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、損傷した膜を有する細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を測定した。ＴＨＰ－１細胞を遠心分離し、ＲＰＭＩで２×１０^６個の細胞／ｍＬの密度に再懸濁した。細胞（５０μＬ）を、血清の段階３倍希釈液又は２，５００ｎｇ／ｍＬの開始濃度を有する参照ＬｕｋＡＢモノクローナル抗体の３倍段階希釈液を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。ＬｕｋＡＢ毒素ＣＣ８及びＣＣ４５を、それぞれ４０ｎｇ／ｍＬ又は２０ｎｇ／ｍｌの最終濃度まで試験ウェルに添加した。溶解溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を溶解対照ウェルに添加した。プレートを、５％ＣＯ_２の存在下で、３７℃において２時間インキュベートした。プレートを遠心分離し、２５μＬの上清を新しいプレートに移し、２５μＬのＣｙｔｏＴｏｘ－ＯＮＥ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。プレートを室温で１５分間インキュベートし、停止溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）をウェルに添加した。プレートを、５６０の励起波長及び５ｎｍの帯域幅、並びに５９０の発光波長及び１０ｎｍの帯域幅を有する単色において、ＢｉｏｔｅｋＳｙｎｅｒｇｙＮｅｏ２リーダーで読み取った。ゲインは、１２０～１３０に設定される。全ての血清試料及びＬｕｋＡＢモノクローナル抗体について、５０％細胞傷害性が観察された濃度を表す_ＩＣ５０力価を決定した。血清試料と参照モノクローナル抗体との間のＩＣ_５０力価の差を表す相対力価を出力値として使用した。

結果：
ＬｕｋＡＢ及びＳｐＡ＊に対して誘導された抗体応答。上述のマウスの群を、アジュバントを含むか又は含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３（５μｇ）及びＳｐＡ＊（５μｇ）の組み合わせで、２週間の間隔で３回免疫化した。対照として、動物を、アジュバント及び製剤緩衝液で、又は製剤緩衝液のみで、両方の場合において抗原なしで免疫化した。図１８Ｂを参照されたい。

図１８Ａに従って血液試料を採取し、ＥＬＩＳＡによって、ＬｕｋＡＢ配列バリアントＣＣ８及びＣＣ４５並びにＳｐＡ＊に対する抗体応答について血清を解析した。ＬｕｋＡＢ又はＳｐＡ＊特異的な既存の抗体は、免疫化前に全ての群で検出されなかった（図１８Ｃ～Ｅ）。アジュバント及び／又は製剤緩衝液のみで免疫化した動物において、血清中の抗体レベルは、実験の過程全体を通して時間的に増加せず（図１８Ｃ～Ｅを参照）、アジュバント自体が特異的抗体応答を誘導しないこと、及び抗原が必要とされることを示している。

アジュバントがＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を強化することができたかどうかを評価するために、これらの抗原に対する抗体ＩｇＧ力価を、アジュバントを含むか又は含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋Ｓｐａ＊で免疫化した動物間で比較した。

ＡＳ０１ｂと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊を用いた免疫化は、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：３１５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：１４１；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：２８２）で免疫化した動物と比較して、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５並びにＳｐａ＊（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：８０７９；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：５０１２；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：３１４９６）に対して、より高い幾何平均ＩｇＧ力価をもたらした。

ＧＬＡ－ＳＥと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊を用いた免疫化も、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：３１５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：１４１；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：２８２）で免疫化した動物と比較して、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５並びにＳｐａ＊（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：１４０１；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：３７５７；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：９０１２）に対して、より高い幾何平均ＩｇＧ力価をもたらした。これらの結果は、ＴＬＲ４アゴニストを含有するアジュバントが、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊の免疫原性を改善することを示す。

Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊を用いた免疫化は、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊で免疫化した動物（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：３１５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：１４１）と比較して、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：５９５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：２６３）に対して、より高い幾何平均ＩｇＧ力価をもたらした。ＳｐＡ＊特異的抗体応答について、最も高い幾何平均ＩｇＧ力価が、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、ＳｐＡ＊で免疫化した動物の群において観察された（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：９３３１８）。

Ａｄｊｕ－ｐｈｏｓと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊を用いた免疫化は、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：３１５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：１４１）で免疫化した動物と比較して、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ８：６４５；ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＬｕｋＡＢＣＣ４５：５９３）に対して、より高い幾何平均力価をもたらした。Ｓｐａ＊について、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊で免疫化した群（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：２８２）と比較して、Ａｄｊｕ－ｐｈｏｓと組み合わせたＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３、Ｓｐａ＊で免疫化した動物の群（ＧｅｏｍｅａｎＩｇＧＳｐａ＊：１１６１４）において、幾何平均ＩｇＧ力価がより高かった。

これらの結果は、ミョウバンベースのアジュバントが、ＬｕｋＡＢ特異的抗体応答よりも、Ｓｐａ特異的抗体応答に対してより大きい効果を有することを示す。ＴＬＲ４アゴニスト又はミョウバンベースのアジュバントのいずれかを含有する、ここで試験した全てのアジュバントの組み合わせが、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐａ＊の組み合わせワクチンの免疫原性を改善した。

ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性の中和。免疫化マウス由来の血清が、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５の細胞傷害性用量によって生じた細胞死からＴＨＰ－１細胞を保護する能力を、毒素中和において評価した。４２日目に単離されたアジュバントを含むか又は含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化した動物（１群当たり５匹のマウス）からの血清試料のみを含み、これは、これらの群において、ＬｕｋＡＢＣＣ８及びＣＣ４５特異的抗体がＥＬＩＳＡによって検出されたためである（図１８Ｃ～Ｄ）。

参照モノクローナルＬｕｋＡＢ特異的抗体をアッセイに含んだ。血清試料と参照抗体との間の細胞傷害性の５０％が測定される希釈液を表すＩＣ５０力価の差を決定し、相対力価（ＲＰ力価）としてプロットした。

ＬｕｋＡＢＣＣ８について、アジュバントを含むＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化した群（ＡＳ０１ｂ：１２８１；ＧＬＡ－ＳＥ：１５０２；Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ：４７６；Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓ：４２５）では、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化された群（ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価：１２２）と比較して、３回の免疫化後の血清中でより高いＧｅｏＭｅａｎＲＰ力価が測定された（図１９Ａ）。

ＬｕｋＡＢＣＣ４５について、アジュバントを含むＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化した群（ＡＳ０１ｂ：３３９２；ＧＬＡ－ＳＥ：３４７０；Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ：３６５；Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓ：２９８）では、アジュバントを含まないＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３＋ＳｐＡ＊で免疫化された群（ＧｅｏｍｅａｎＲＰ力価：１３１）と比較して、３回の免疫化後の血清中でより高いＧｅｏＭｅａｎＲＰ力価が測定された（図１９Ｂ）。

図１９Ａ～Ｂに示されるこれらの結果は、ワクチン中のＬｕｋＡＢ（ＲＡＲＰＲ－３３）が、ＬｕｋＡＢ毒素の細胞傷害活性を遮断する機能性抗体を誘導すること、及びアジュバントの添加が、ＬｕｋＡＢ毒性を中和する抗体の機能性を改善することを示す。

結論：異なるタイプのアジュバントが、ＬｕｋＡＢＲＡＲＰＲ－３３及びＳｐＡ＊からなる試験したワクチンの組み合わせの免疫原性を改善することができたかどうかの試験、抗体力価及び機能性を、ミョウバンベースのアジュバント（水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム）又はＴＬＲ４アゴニストを含有するアジュバント（ＡＳ０１ｂ若しくはＧＬＡ－ＳＥ）とともにワクチンの組み合わせで免疫化したマウスの血清中で決定した。組み合わせワクチンへの両方のタイプのアジュバントの添加は、アジュバントを含まない免疫化と比較して、ワクチン特異的抗体力価を改善した。更に、アジュバントの存在下では、ＬｕｋＡＢ特異的抗体は、より良好なＬｕｋＡＢ毒素中和能力を有した。これらの結果は、異なるアジュバントを使用して組み合わせワクチンの免疫原性を改善することができることを示す。

参考文献
以下の参考文献は、本明細書に記載されるものに対して補足的な、例示的な手順又は他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
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６．Ｌｅｒｏｕｘ－Ｒｏｅｌｓｅｔａｌ．，ＩｍｐａｃｔｏｆａｄｊｕｖａｎｔｓｏｎＣＤ４＋ＴｃｅｌｌａｎｄＢｃｅｌｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏａｐｒｏｔｅｉｎａｎｔｉｇｅｎｖａｃｃｉｎｅ：ＲｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍａｐｈａｓｅＩＩ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｔｒｉａｌ．ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６９（２０１６）１６－２７．

本明細書では好ましい実施形態が詳細に示され、記載されているが、本開示の趣旨から逸脱することなく、様々な修正、追加、置換などを行うことができ、したがって、これらは、以下の特許請求の範囲に定義される本開示の範囲内にあるとみなされることが、当業者には明らかである。

Claims

（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を含む、免疫原性組成物。
（ｉ）ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドであって、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、及びＶａｌ１９３に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＬｕｋＡバリアントポリペプチドと、を一緒に含む、２つ以上の免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のＧｌｕ３２３に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物又は請求項２に記載の免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸残基Ｌｙｓ８３、Ｓｅｒ１４１、Ｖａｌ１１３、Ｖａｌ１９３、及びＧｌｕ３２３に対応する各アミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アミノ酸置換が、Ｌｙｓ８３Ｍｅｔ、Ｓｅｒ１４１Ａｌａ、Ｖａｌ１１３Ｉｌｅ、Ｖａｌ１９３Ｉｌｅ、及びＧｌｕ３２３Ａｌａを含む、請求項４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、
配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｙｒ７４、Ａｓｐ１４０、Ｇｌｙ１４９、及びＧｌｙ１５６に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を更に含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アミノ酸置換が、Ｔｙｒ７４Ｃｙｓ、Ａｓｐ１４０Ｃｙｓ、Ｇｌｙ１４９Ｃｙｓ、及びＧｌｙ１５６Ｃｙｓを含む、請求項７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７又は８に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記バリアントＬｕｋＡタンパク質又はポリペプチドが、
配列番号２５のアミノ酸残基Ｔｈｒ２４９に対応するアミノ酸残基でのアミノ酸置換を更に含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡポリペプチドが、ＳｐＡバリアントポリペプチドである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、Ｆｃ結合を破壊する少なくとも１つのアミノ酸置換、及びＶＨ３結合を破壊する少なくとも第２のアミノ酸置換を有する、請求項１２に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＤドメインを含み、前記ＳｐＡＤドメインが、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１２又は１３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置のうちの一方又は両方でのアミノ酸置換を有する、請求項１４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ａ、Ｂ、又はＣドメインを更に含む、請求項１４又は１５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを含み、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１６に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
各ＳｐＡＥ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインが、配列番号５８のアミノ酸位置９及び１０に対応する一方又は両方のアミノ酸位置でのアミノ酸置換を有する、請求項１６又は１７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
配列番号５８の９位及び１０位に対応する一方又は両方のアミノ酸位置でのアミノ酸置換が、グルタミン残基のリジン残基である、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、前記少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する、請求項１２～１９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記組成物が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓロイコシジンＢ（ＬｕｋＢ）ポリペプチド又はそのバリアントを更に含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１５のＬｕｋＢポリペプチド又は配列番号１６のＬｕｋＢポリペプチドである、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢポリペプチドが、ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列類似性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５及び配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含む、請求項２４に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アミノ酸置換が、バリンからロイシンへの置換である、請求項２５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１０９、Ｔｈｒ１２１、及びＡｒｇ１５４に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１６のアミノ酸残基Ｇｌｕ４５、Ｇｌｕ１１０、Ｔｈｒ１２２、及びＡｒｇ１５５に対応する１つ以上のアミノ酸残基でのアミノ酸置換を含む、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＬｕｋＢバリアントポリペプチドが、配列番号１７～２２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記組成物が、配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列、又は配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記組成物が、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸配列、又は配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記組成物が、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列、又は配列番号１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬｕｋＢポリペプチドを含む、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡポリペプチドが、ＳｐＡバリアントポリペプチドである、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、前記少なくとも１つのドメインが、（ｉ）配列番号５８の９位及び１０位に対応するグルタミン残基でのリジン置換、並びに（ｉｉ）配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する、請求項３３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
（ｉ）前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、少なくとも１つのＳｐＡＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はＥドメインを含み、前記少なくとも１つのドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、及び配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有し、（ｉｉ）前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチドが、配列番号１の８０位に対応するアミノ酸位置でのメチオニン置換、配列番号１の１３８位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換、配列番号１の１１０位及び１９０位に対応するアミノ酸位置でのイソロイシン置換、並びに配列番号１の３２０位に対応するアミノ酸位置でのアラニン置換を含むＣＣ８ＬｕｋＡバリアントポリペプチドを含み、かつ（ｉｉｉ）前記ＬｕｋＢポリペプチドが、配列番号１６の５３位に対応するアミノ酸位置でのロイシン置換を含むＣＣ４５ＬｕｋＢバリアントポリペプチドである、請求項２１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＳｐＡバリアントポリペプチドが、ＳｐＡＥ、Ｄ、Ａ、Ｂ、及びＣドメインを連続して含み、各ドメインが、配列番号５８の９位及び１０位に対応するアミノ酸位置でのリジン置換、並びに配列番号５８の３３位に対応するアミノ酸位置でのグルタミン酸置換を有する、請求項３５に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
アジュバントを更に含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、安定的な水中油型エマルジョンである、請求項３７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、サポニンを含む、請求項３７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記サポニンが、ＱＳ２１である、請求項３９に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、ＴＬＲ４アゴニストを含む、請求項３７に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＴＬＲ４アゴニストが、リピドＡ又はその類似体若しくは誘導体である、請求項４１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記ＴＬＲ４アゴニストが、グリコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）である、請求項４１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、安定的な水中油型エマルジョンと組み合わせてＴＬＲ－４アゴニストを含む、請求項４１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、ＧＬＡ－ＳＥを含む、請求項４３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、サポニンと組み合わせてＴＬＲ－４アゴニストを含む、請求項４１に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記アジュバントが、ＧＬＡ－ＬＳＱを含む、請求項４３に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせであって、前記組成物が、請求項１～３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓプロテインＡ（ＳｐＡ）ポリペプチド又はそのバリアント、前記ＬｕｋＡバリアントポリペプチド、及び前記ＬｕｋＢポリペプチド又はそのバリアントをコードする１つ以上の核酸分子を含む、免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記１つ以上の核酸分子が、１つ以上のベクター中に含有される、請求項４８に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
前記組成物が、宿主細胞を含み、前記宿主細胞が、前記１つ以上の核酸分子又は前記１つ以上のベクターを含む、請求項４８又は４９に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、
それを必要とする前記対象に、有効量の請求項１～５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌に対する免疫応答の誘発を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、
それを必要とする前記対象に、有効量の請求項１～５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌の脱コロニー形成、又はコロニー形成若しくは再コロニー形成の予防を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、
それを必要とする前記対象に、有効量の請求項１～５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせを投与することを含む、方法。
対象においてＳ．ａｕｒｅｕｓに対する免疫応答を生成する方法で使用するための、請求項１～５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。
薬剤として使用するための、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の免疫原性組成物又は免疫原性組成物の組み合わせ。