JP2024512392A - がんの治療のためのａｄａｍ９を標的とする免疫抱合体の有効性を増加させるための方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を有する対象におけるがんを治療する方法を提供する。この方法は、対象に治療有効量の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することを含む。また、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を有する対象における抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体によるがん治療の有効性を増加させる方法も提供される。【選択図】なし

Description

関連出願
本願は、２０２１年３月８日に出願された米国仮特許出願第６３／１５７，９５４号の利益を主張するものであり、この内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、概して、少なくとも１つの薬理学的薬剤に抱合された「ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質９」（「ＡＤＡＭ９」）に特異的に結合することができる抗体またはその断片を含むＡＤＡＭ９免疫抱合体によるがんの治療の有効性を増加させる方法に関する。より具体的には、本発明は、腫瘍細胞が、ＩＨＣアッセイによって決定されるように、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を用いて、ＡＤＡＭ９を過剰発現する、がんに罹患しやすい、またはがんと診断された患者のより効果的な治療に関する。

ＡＤＡＭ９は、分子のＡＤＡＭファミリーのメンバーである。ＡＤＡＭ９の発現は、疾患、特にがんに関連することが見出されている。ＡＤＡＭ９は、腫瘍発生及び血管新生において重要な役割を有するいくつかの分子、例えば、ＴＥＫ、ＫＤＲ、ＥＰＨＢ４、ＣＤ４０、ＶＣＡＭ１及びＣＤＨ５を切断して放出することが見出されている。ＡＤＡＭ９は、乳癌、結腸癌、胃癌、神経膠腫、肝臓癌、非小細胞肺癌、黒色腫、骨髄腫、膵臓癌、及び前立腺癌の腫瘍細胞を含む多くのタイプの腫瘍細胞によって発現される（Ｙｏｓｈｉｍａｓｕ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００４）“Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｆ ＡＤＡＭ９ Ｉｎ Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ Ｗｉｔｈ Ｂｒａｉｎ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：４１９０－４１９６、Ｐｅｄｕｔｏ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００５）“Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｆｏｒ ＡＤＡＭ９ Ｉｎ Ｍｏｕｓｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５：９３１２－９３１９、Ｚｉｇｒｉｎｏ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００５）“ＡＤＡＭ－９ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ａｎｄ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１６：８５３－８５９、Ｆｒｉｔｚｓｃｈｅ，Ｆ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“ＡＤＡＭ９ Ｉｓ Ｈｉｇｈｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ｉｎ Ｒｅｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｎｃｅｒ Ａｎｄ Ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｗｉｔｈ Ｔｕｍｏｕｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，”ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ８：１７９：１－９、Ｆｒｙ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ａｎｄ Ｍｅｍｂｒａｎｅ－Ｂｏｕｎｄ Ｉｓｏｆｏｒｍｓ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ ＡＤＡＭ９ Ｈａｖｅ Ｏｐｐｏｓｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０，８１８７－８１９８、Ｃｈａｎｇ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）“Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｒｎａｉ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ｓｔａｔ３ Ａｎｄ ＡＤＡＭ９ Ａｓ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｆｏｒ Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，”Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １１：１２４２－１２５０、Ｆａｎ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）“ＡＤＡＭ９ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ Ｇｌｉｏｍａ Ｔｕｍｏｒ Ｇｒａｄｅ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｙｐｅ，ａｎｄ Ａｃｔｓ ａｓ ａ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ｌｏｗｅｒ－Ｇｒａｄｅ Ｇｌｉｏｍａｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１７：１２７６：１－１１）。

重要なことに、ＡＤＡＭ９発現の増加は、腫瘍悪性腫瘍及び転移可能性と正相関することが見出されている（Ａｍｅｎｄｏｌａ，Ｒ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）“ＡＤＡＭ９ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ａｃｔｉｖａｔｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ａｎ Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ Ｃｉｒｃｕｉｔ Ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ Ａｎｄ ＣＸＣＲ２，”Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．９７（５）：９５１－９６２、Ｆａｎ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）“ＡＤＡＭ９ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ Ｇｌｉｏｍａ Ｔｕｍｏｒ Ｇｒａｄｅ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｙｐｅ，ａｎｄ Ａｃｔｓ ａｓ ａ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ｌｏｗｅｒ－Ｇｒａｄｅ Ｇｌｉｏｍａｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１７：１２７６：１－１１、Ｌｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）“Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＤＡＭ９ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｖａｓｉｏｎ，”Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｓｕｒｇ．２６（３）：１２７－１３３）。さらに、ＡＤＡＭ９及びその分泌可溶性アイソフォームは、がん細胞が播種するのに不可欠であると思われる（Ａｍｅｎｄｏｌａ，Ｒ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）“ＡＤＡＭ９ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ａｃｔｉｖａｔｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ａｎ Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ Ｃｉｒｃｕｉｔ Ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ Ａｎｄ ＣＸＣＲ２，”Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．９７（５）：９５１－９６２、Ｆｒｙ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ａｎｄ Ｍｅｍｂｒａｎｅ－Ｂｏｕｎｄ Ｉｓｏｆｏｒｍｓ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ ＡＤＡＭ９ Ｈａｖｅ Ｏｐｐｏｓｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０，８１８７－８１９８、Ｍａｚｚｏｃｃａ，Ａ．（２００５）“Ａ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｆｏｒｍ Ｏｆ ＡＤＡＭ９ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｉｎｖａｓｉｏｎ Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｔｕｍｏｒ－Ｓｔｒｏｍａｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５：４７２８－４７３８、米国特許第９，１５０，６５６号、同第７，５８５，６３４号、同第７，８２９，２７７号、同第８，１０１，３６１号、及び同第８，４４５，１９８号、ならびに米国特許公開第２００９／００２３１４９号も参照されたい）。

したがって、いくつかの研究は、ＡＤＡＭ９を抗がん療法のための潜在的標的として特定している（Ｐｅｄｕｔｏ，Ｌ．（２００９）“ＡＤＡＭ９ Ａｓ Ａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔａｒｇｅｔ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．１５：２２８２－２２８７、Ｄｕｆｆｙ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ｒｏｌｅ Ｏｆ ＡＤＡＭｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：１１４０－１１４４、Ｄｕｆｆｙ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）“Ｔｈｅ ＡＤＡＭｓ Ｆａｍｉｌｙ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ：Ｎｅｗ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ？，”Ｃｌｉｎ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ８：９：１－１３、Ｊｏｓｓｏｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡＤＡＭ９ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，”Ｐｒｏｓｔａｔｅ ７１（３）：２３２－２４０、米国特許公開第２０１６／０１３８１１３、同第２０１６／００６８９０９、同第２０１６／００２４５８２、同第２０１５／０３６８３５２、同第２０１５／０３３７３５６、同第２０１５／０３３７０４８、同第２０１５／００１０５７５、同第２０１４／０３４２９４６、同第２０１２／００７７６９４、同第２０１１／０１５１５３６、同第２０１１／０１２９４５０、同第２０１０／０２９１０６３、同第２０１０／０２３３０７９、同第２０１０／０１１２７１３、同第２００９／０２８５８４０、同第２００９／０２０３０５１、同第２００４／００９２４６６、同第２００３／００９１５６８、及び同第２００２／００６８０６２、ならびにＷＯ２０１６／０７７５０５、ＷＯ２０１４／２０５２９３、ＷＯ２０１４／１８６３６４、ＷＯ２０１４／１２４３２６、ＷＯ２０１４／１０８４８０、ＷＯ２０１３／１１９９６０、ＷＯ２０１３／０９８７９７、ＷＯ２０１３／０４９７０４、及びＷＯ２０１１／１００３６２も参照されたい）。加えて、ＡＤＡＭ９の発現はまた、肺疾患及び炎症に関連することが見出されている（例えば、米国特許公開第２０１６／００６８９０９号、同第２０１２／０１４９５９５号、同第２００９／０２３３３００号、同第２００６／０２７０６１８号、及び同第２００９／０１４２３０１号を参照されたい）。抗ＡＤＡＭ９標的化抗体－薬物抱合体（ＡＤＣ）、ＩＭＧＣ９３６は、現在、がん患者における安全性及び薬物動態を評価する第Ｉ相用量漸増試験中である。

しかしながら、以前の全ての進歩にもかかわらず、がんの治療のための治療及び方法を標的とするより効果的なＡＤＡＭ９の必要性は、依然として高い。

本発明は、腫瘍組織におけるＡＤＡＭ９の発現のダイナミックレンジの発見、及びＡＤＡＭ９発現のレベルが増加した腫瘍が、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療により応答性が高いことの発見に基づいている。本発明は、ＡＤＡＭ９の増加した発現レベルを有することが見出された患者に、治療薬、すなわち、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することによって、治療に応答する高い可能性を有する患者の治療を有利に可能にする。

本発明は、がんを治療する方法またはがん治療の有効性の可能性を増加させる方法をさらに提供し、この方法は、治療上有効な用量の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を対象に投与することを含み、該対象からの組織試料中のＡＤＡＭ９発現が上昇していることが見出されている。

一実施形態では、ＡＤＡＭ９発現の程度及び均一性は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって検出される。別の実施形態では、ＡＤＡＭ９発現のレベルは、較正されたＩＨＣによって検出される。ＩＨＣの非限定的な例としては、様々なレベルのＡＤＡＭ９と、本明細書に記載されるような較正されたＩＨＣ方法とを区別するＩＨＣ方法が挙げられる。ＡＤＡＭ９発現は、本明細書に記載のスコアリング方法を含むがこれらに限定されない、適切なスコアリングシステムを使用してスコアリングすることができる。例えば、ＡＤＡＭ９発現は、染色強度について０、１、２、または３の範囲を含み、０が最低レベルの染色強度であり、３が最高レベルの染色強度である、較正されたＩＨＣ法を使用してスコアリングすることができる。ある特定の実施形態では、２または３の染色強度スコアは、ＡＤＡＭ９発現レベルの上昇を示す。いくつかの実施形態では、１の染色強度スコアは、「弱い」染色とみなされ、２の染色強度スコアは、「中程度の」染色とみなされ、３の染色強度スコアは、「強い」染色とみなされる。

代替的または追加的に、ＡＤＡＭ９発現は、０、１、２、または３の染色強度を有する細胞の割合として表される染色均一性を含む較正されたＩＨＣ法を使用してスコアリングすることができる。例えば、試料中のＡＤＡＭ９発現レベルは、染色強度及び染色均一性、例えば、ＰＳ１、ＰＳ２またはＰＳ３を組み合わせることによってスコアリングすることができる。ある特定の実施形態では、２５％以上、５０％以上、または７５％以上のＰＳ１の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。特定の実施形態では、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ１の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。いくつかの実施形態では、２５％以上、５０％以上、または７５％以上のＰＳ２の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。いくつかの実施形態では、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ２の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。いくつかの実施形態では、２５％以上、５０％以上、または７５％以上のＰＳ３の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。いくつかの実施形態では、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ３の染色は、ＡＤＡＭ９発現レベルの増加を示す。

いくつかの実施形態では、試料中のＡＤＡＭ９発現のレベルは、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）に割り当てられる。特定の実施形態では、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のＴＰＳを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。特定の実施形態では、２５％以上のＴＰＳを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。特定の実施形態では、５０％以上のＴＰＳを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。特定の実施形態では、７５％以上のＴＰＳを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。

いくつかの実施形態では、試料中のＡＤＡＭ９発現のレベルは、染色強度の成分と試料中の陽性細胞のパーセンテージとを組み合わせたＨスコアに割り当てられる。特定の実施形態では、５０～３００のＨスコアを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。特定の実施形態では、１００～３００のＨスコアを有する腫瘍試料は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。特定の実施形態では、腫瘍試料は、２０１～３００のＨスコアを有する高いＡＤＡＭ９発現レベルを有する。特定の実施形態では、腫瘍試料は、１０１～２００のＨスコアを有する中程度のＡＤＡＭ９発現レベルを有する。特定の実施形態では、腫瘍試料は、１～１００のＨスコアを有する低いＡＤＡＭ９発現レベルを有する。

さらなる実施形態では、試料（例えば、腫瘍組織試料）中のＡＤＡＭ９発現を測定し、１個以上の参照試料と比較する。一実施形態では、試料中のＡＤＡＭ９発現は、検出可能なＡＤＡＭ９発現がない、または低いことを示す陰性対照試料と比較される。別の実施形態では、試料中のＡＤＡＭ９発現は、ＡＤＡＭ９発現の増加（レベル１、２、または３）を有する陽性対照試料と比較される。

特定の実施形態では、本発明の方法で使用することができる抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体は、抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片、リンカー、及び細胞毒素を含む。一実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー、非切断可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸ベースのリンカーからなる群から選択することができる。別の実施形態では、リンカーは、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタン酸（ＳＰＰ）またはＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホペンタノエート（スルホ－ＳＰＰ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）またはＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（スルホ－ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ－スルホスクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ｓｕｌｆｏＳＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（ヨードアセチル）－アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、及びＮ－スクシンイミジル－［（Ｎ－マレイミドプロピオンアミド）－テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ－ＰＥＧ４－マレイミド）からなる群から選択することができる。別の実施形態では、リンカーは、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（スルホ－ＳＰＤＢ）である。別の実施形態では、細胞毒性薬剤は、メイタンシノイド、メイタンシノイドアナログ、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ－１０６５、ＣＣ－１０６５アナログ、デュオカルマイシン、デュオカルマイシンアナログ、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチンアナログ、オーリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体、または薬剤のプロドラッグからなる群から選択される。別の実施形態では、細胞毒性薬剤は、メイタンシノイドである。別の実施形態では、細胞毒性薬剤は、Ｎ（２’）－デアセチル－Ｎ（２’）－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－メイタンシンまたはＮ（２’）－デアセチル－Ｎ２－（４－メルカプト－４－メチル－１－オキソペンチル）－メイタンシンである。別の実施形態では、細胞毒性薬剤は、Ｎ（２’）－デアセチル－Ｎ２－（４－メルカプト－４－メチル－ｌ－オキソペンチル）－メイタンシン（ＤＭ４）である。

特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表されるか、
またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ＣＢが、抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
Ｌ_２が、以下の式のうちのいずれか１つで表され、
式中、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｘ’及びＲ^ｙ’が、各々独立して、Ｈ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋、または－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ_３ＨもしくはＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋で任意に置換されたＣ_１－４アルキルであり、Ｒ_４０、Ｒ_４１及びＲ_４２が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－４アルキルであり、
ｌ及びｋが、各々独立して、１～１０の整数であり、
Ｌ_１が、以下の式で表され、
－ＣＲ^３Ｒ^４－（ＣＨ_２）_１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
式中、Ｒ^３及びＲ^４が、各々独立して、ＨまたはＭｅであり、Ｌ_１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分が、Ｄに接続されており、
Ｄが、以下の式で表され、
ｑが、１～２０の整数である。

特定の実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式によって表され、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
ｑが、１または２であり、
Ｄ_１が、以下の式で表される。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、それぞれ配列番号３３及び配列番号３５の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４２及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４５及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４２または配列番号４５のＸはリジンである。いくつかの実施形態では、配列番号４２または配列番号４５のＸは存在しない。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４９及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、免疫抱合体を含む組成物（例えば、医薬組成物）のＤＡＲ値は、１．０～２．５、１．５～２．５、１．８～２．２、または１．９～２．１の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは１．８、１．９、２．０または２．１である。

また、本発明で提供されるのは、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法、またはがんの治療を必要とする対象におけるがん治療の有効性を増加させる方法における本明細書に記載の本発明の免疫抱合体または医薬組成物の使用であり、対象からの腫瘍試料は、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を示す。本発明はまた、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための、またはがんの治療を必要とする対象におけるがん治療の有効性を増加させるための医薬品の製造のための、本明細書に記載の本発明の免疫抱合体または医薬組成物の使用を提供し、対象からの腫瘍試料は、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を示す。

特定の実施形態では、がんは、肺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、腎細胞癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、頭頚部癌、子宮癌、卵巣癌、肝臓癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣癌、骨髄癌、黒色腫、及びリンパ系癌からなる群から選択される。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、または膵臓癌である。特定の実施形態では、がんは、腺癌ＮＳＣＬＣ、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、胃癌、または結腸直腸癌（ＣＲＣ）である。

様々ながんのＰＤＸモデルにおけるＡＤＡＭ９発現及び応答を示すグラフである。 がん型ごとのＡＤＡＭ９有病率データを示す。 トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、胃癌、及び腺癌非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の各ＰＤＸモデルのＡＤＡＭ９染色強度及びＨスコアを示す。 内部研究ＡＤＡＭ９アッセイを使用した、胃癌、膵臓癌、腺癌非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、及び食道癌におけるＡＤＡＭ９罹患率データを示す。 Ｒｏｃｈｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ＲＴＤ）ＡＤＡＭ９ ｒｏｂｕｓｔ ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ ａｓｓａｙ（ＲＰＡ）を使用した、胃癌、膵臓癌、腺癌非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、及び食道癌におけるＡＤＡＭ９の有病率データを示す。 胃癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９ Ｈスコアを示す。 胃癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色についてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 胃癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 膵臓癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９ Ｈスコアを示す。 膵臓癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 膵臓癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 腺癌ＮＳＣＬＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＨスコアを示す。 腺癌ＮＳＣＬＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 腺癌ＮＳＣＬＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 ＴＮＢＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＨスコアを示す。 ＴＮＢＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 ＴＮＢＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 ＣＲＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＨスコアを示す。 ＣＲＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 ＣＲＣ組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 食道癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＨスコアを示す。 食道癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性膜及び細胞質染色のＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。 食道癌組織試料中のＡＤＡＭ９発現を示すグラフである。陽性の膜染色のみについてのＡＤＡＭ９腫瘍割合スコアを示す。

本開示は、ＡＤＡＭ９の過剰発現を特徴とするがんの治療に対する応答の有効性または可能性を増加させる方法を提供する。本開示は、正常組織と比較した腫瘍組織におけるＡＤＡＭ９の発現のダイナミックレンジの発見、及びＡＤＡＭ９発現のレベルが上昇した腫瘍が抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体の治療により応答性が高いことの発見に基づいている。

抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体に応答する可能性が高いがんを有する患者は、（ａ）上記がんからの細胞を含む生体試料を、（例えば、細胞表面上及び／または細胞内部の）生体試料のＡＤＡＭ９タンパク質に結合する薬剤と接触させることと、
（ｂ）（ａ）の上記生体試料のＡＤＡＭ９タンパク質に結合する上記薬剤の結合を検出することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の上記結合にスコアを割り当てることであって、上記スコアが、１つ以上の参照試料との比較に基づいて割り当てられる、上記割り当てることと、
（ｄ）ステップ（ｃ）の上記スコアを参照組織または細胞のスコアと比較することであって、正常もしくは低ＡＤＡＭ９発現参照試料のスコアよりも大きい上記がんＡＤＡＭ９レベルのスコア、または高ＡＤＡＭ９発現参照試料のスコア以上である上記がんＡＤＡＭ９レベルのスコアが、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体に応答する可能性が高い上記がんを同定する、上記比較することと、によって同定することができる。

抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療に感受性のある腫瘍は、（ａ）上記腫瘍から得られた腫瘍組織試料におけるＡＤＡＭ９発現のレベルを測定することであって、上記測定することが、１つ以上の参照試料における染色強度または染色均一性と比較して、ＡＤＡＭ９発現がん試料における染色強度または染色均一性を区別する検出方法の使用を含む、上記測定することと、
（ｂ）上記腫瘍組織試料のＡＤＡＭ９染色強度スコアを決定することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）で決定された上記ＡＤＡＭ９染色強度スコアを、少なくとも１つの参照試料中のＡＤＡＭ９タンパク質発現を測定することによって決定された相対値と比較することであって、上記少なくとも１つの参照試料が、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療に感受性ではない組織、細胞、または細胞ペレット試料であり、上記相対値よりも高い、ステップ（ｂ）で決定された上記試料のＡＤＡＭ９染色強度スコアが、上記腫瘍を、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療に感受性であると同定する、上記比較することと、によって同定することができる。特定の実施形態では、検出方法は、手動で、または自動化されたシステムを使用して実行される。一実施形態では、検出方法はＩＨＣである。別の実施形態では、ＩＨＣは、異なるレベルのＡＤＡＭ９発現を区別することができる、較正されたＩＨＣである。

Ｉ．定義
本明細書で使用される「ＡＤＡＭ９」または「ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質９」という用語は、別段の指示がない限り、任意の天然ヒトＡＤＡＭ９を指す。「ＡＤＡＭ９」という用語は、「全長の」未処理のＡＤＡＭ（及び細胞内で処理された結果生じるＡＤＡＭ９の任意の形態）を包含する。この用語は、ＡＤＡＭ９の自然発生変異体、例えば、スプライス変異体、対立遺伝子変異体、及びアイソフォームも包含する。本明細書に記載されるＡＤＡＭ９ポリペプチドは、ヒト組織型から、もしくは別の源から等、多様な源から単離され得るか、または組換え法または合成法によって調製され得る。ＡＤＡＭ９配列の例としては、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００３８０７、及び参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１１９１６６、ＷＯ２０１８／１１９１９６、及びＷＯ２０２０／００５９４５に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

「過剰発現」、「増加した発現」または「上昇した発現」という用語は、交換可能に使用される。ＡＤＡＭ９の増加した発現は、ＡＤＡＭ９発現の上昇したレベルを含有する試料を指す。一例では、ＡＤＡＭ９発現は、ＩＨＣによって測定され、定義されたスコアを示す対照（例えば、較正された対照）と比較して、染色強度スコア及び／または染色均一性スコアを与えられる（例えば、強度がレベル３の較正された対照に匹敵する場合、強度スコア３が試験試料に与えられ、強度がレベル２の較正された対照に匹敵する場合、強度スコア２が試験試料に与えられる）。いくつかの実施形態では、染色強度スコアは、較正された対照なしで病理医の病理学的訓練及び経験に基づいて、該病理医によって決定される。例えば、免疫組織化学による１、２、または３のスコアは、ＡＤＡＭ９の増加した発現を示す。特定の実施形態では、スコア２または３は、ＡＤＡＭ９の増加した発現を示す。いくつかの実施形態では、３の染色強度を有する試料中の細胞の存在は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。染色均一性はまた、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。染色均一性スコアは、同じ染色強度を有する試料中の細胞の割合であり得る。

染色強度及び染色均一性スコアは、単独で、または組み合わせて使用することができる（例えば、ＰＳ１、ＰＳ２、ＰＳ３など）。ＰＳ１（ＰＳ１＋としても知られる）は、染色強度が１以上（例えば、２または３）の試料中の腫瘍細胞の割合を表す。ＰＳ２（ＰＳ２＋としても知られる）は、染色強度が２以上（例えば、３）の試料中の腫瘍細胞の割合を表す。ＰＳ３（ＰＳ３＋としても知られる）は、染色強度が３の試料中の腫瘍細胞の割合を表す。いくつかの実施形態では、１％～２４％、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ１の染色は、ＡＤＡＭ９発現の増加を示す。いくつかの実施形態では、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のＰＳ１の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、２５％以上のＰＳ１の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％以上のＰＳ１の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ１の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、１％～２４％、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、２５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、１％～２４％、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ３の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のＰＳ３の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、２５％以上のＰＳ３の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％以上のＰＳ３の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ３の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％以上のＰＳ１及び２５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ１及び２５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％以上のＰＳ１及び５０％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ１及び５０％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、７５％以上のＰＳ１及び７５％以上のＰＳ２の染色は、増加したＡＤＡＭ９発現を示す。いくつかの実施形態では、５０％ＰＳ１以上の染色を有する試料は、「ＡＤＡＭ９陽性」とみなされる。本明細書に記載の方法は、対象に治療有効量の本明細書に記載の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することによって、腫瘍試料がＡＤＡＭ９陽性である対象の治療に使用することができる。

いくつかの実施形態では、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を使用して、陽性のＡＤＡＭ９発現または「増加したＡＤＡＭ発現」を示すことができる。ＴＰＳは、任意の強度での試料染色における生存腫瘍細胞の割合として計算される。いくつかの実施形態では、ＴＰＳは、膜及び細胞質染色のためのものである。いくつかの実施形態では、ＴＰＳは、膜染色のみのためのものである。膜染色のために、ＴＰＳは、完全染色または部分染色の両方を含む。本明細書で使用する場合、「完全な」膜染色は、膜全体の周りを染色することを意味し、「部分的な」膜染色は、膜の頂端染色を意味する。いくつかの実施形態において、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のＴＰＳは、「ＡＤＡＭ陽性」または「増加したＡＤＡＭ９発現」とみなされる。いくつかの実施形態では、２５％以上のＴＰＳは、「ＡＤＡＭ陽性」または「増加したＡＤＡＭ９発現」とみなされる。いくつかの実施形態では、５０％以上のＴＰＳは、「ＡＤＡＭ陽性」または「増加したＡＤＡＭ９発現」とみなされる。いくつかの実施形態では、７５％以上のＴＰＳは、「ＡＤＡＭ陽性」または「増加したＡＤＡＭ９発現」とみなされる。

別の実施例では、ＩＨＣ染色結果は、染色強度の成分と陽性細胞の割合とを組み合わせたＨスコアによって分析される。値は０～３００であり、次のように定義される。
１＊（強度カテゴリー１で染色された細胞の割合）
＋２＊（強度カテゴリー２で染色された細胞の割合）
＋３＊（強度カテゴリー３で染色された細胞の割合）
＝Ｈスコア

いくつかの実施形態では、上昇したＡＤＡＭ９発現を有する腫瘍は、例えば、がんを有しない対象、または上昇したＡＤＡＭ９発現を有しないがんを有する対象から得られた参照試料のＨスコアと比較した場合、より高いＨスコアを有する。

いくつかの実施形態では、患者試料中のＡＤＡＭ９発現レベルは高い。いくつかの実施形態では、患者試料中のＡＤＡＭ９発現レベルは、中程度である。いくつかの実施形態では、患者試料中のＡＤＡＭ９発現レベルは低い。本明細書で使用される場合、２０１～３００のＨスコアを有する試料は、「高い」ＡＤＡＭ９発現レベルを有するとみなされる。１０１～２００のＨスコアを有する試料は、「中程度の」ＡＤＡＭ９発現レベルを有するとみなされる。１～１００のＨスコアを有する試料は、「低い」ＡＤＡＭ９発現レベルを有するとみなされる。

別の例では、ＡＤＡＭ９発現の増加は、対照値に対して少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍の増加（例えば、がんを有しない対象または上昇したＡＤＡＭ９値を有しないがんを有する対象からの組織または細胞における発現レベル）の検出によって決定することができる。

いくつかの実施形態では、上記の染色強度、染色均一性、及び染色スコアは、膜染色のみのためのものである。いくつかの実施形態では、上記の染色強度、染色均一性、及び染色スコアは、細胞質染色のためのものである。いくつかの実施形態において、上記の染色強度、染色均一性、及び染色スコアは、膜染色及び細胞質染色（細胞膜染色）の組み合わせのためのものである。

「参照試料」を使用して、試験試料から本発明の方法で得られた結果を相関させ、比較することができる。参照試料は、細胞（例えば、細胞株、細胞ペレット）または組織であり得る。「参照試料」中のＡＤＡＭ９レベルは、ＡＤＡＭ９の絶対的または相対的な量、量の範囲、最小及び／または最大量、平均量、及び／または中央値量であってもよい。本開示の診断方法は、試験試料中のＡＤＡＭ９の発現レベルと「参照値」との間の比較を伴う。いくつかの実施形態では、参照値は、参照試料中のＡＤＡＭ９の発現レベルである。参照値は、所定の値であってもよく、試験試料と並行して試験された参照試料（例えば、対照生体試料または対照生体試料なしの病理学者の病理学的訓練及び経験に基づいて該病理学者によって決定された）から決定され得る。参照値は、中央値もしくは平均などの単一のカットオフ値、または信頼区間などの値の範囲であってもよい。参照値は、がんの素因を有する個体、早期または後期がんを有する個体、男性及び／または女性の個体、またはがん療法を受けている個体などの個体の様々なサブグループについて確立することができる。通常の参照試料または値及び陽性参照試料または値の例は、本明細書に記載されている。

いくつかの実施形態では、参照試料は、健康な組織、特にがんの影響を受けていない対応する組織からの試料である。これらのタイプの参照試料は、陰性対照試料と称される。他の実施形態では、参照試料は、ＡＤＡＭ９を発現する腫瘍組織からの試料である。これらのタイプの参照試料は、陽性対照試料と称される。陽性対照試料はまた、ＡＤＡＭ９発現のレベルと相関する染色強度の均一性（同じ染色強度を有する細胞の細胞割合）及び／または染色強度の程度（１、２、３）の比較指標として使用することもできる。陽性対照比較試料は、染色強度または均一性のダイナミックレンジを示す較正された参照試料とも称される。特定のがんについてのＡＤＡＭ９の適切な陽性及び陰性参照レベルは、１人以上の適切な対象においてＡＤＡＭ９のレベルを測定することにより決定され得、そのような参照レベルは、特定の対象の集団に対して調整され得る（例えば、参照レベルは、ある年齢の対象からの試料中のＡＤＡＭ９レベルと、ある年齢群の特定の疾患状態、表現型、または欠失の参照レベルとの間で比較が行われ得るように、年齢適合され得る）。このような参照レベルは、生体試料中のＡＤＡＭ９のレベルを測定するために用いられる特定の技術（例えば、イムノアッセイ）に対して調整されてよく、ＡＤＡＭ９のレベルは、用いられる特定の技術に基づいて異なってもよい。

本明細書における「一次抗体」という用語は、組織試料中の標的タンパク質抗原に特異的に結合する抗体を指す。一次抗体は、概して、免疫組織化学的（ＩＨＣ）手順で使用される最初の抗体である。一実施形態では、一次抗体は、ＩＨＣ手順において使用される唯一の抗体である。本明細書における「二次抗体」という用語は、一次抗体に特異的に結合し、それによって一次抗体と、存在する場合、後続の試薬との間に架橋を形成する抗体を指す。二次抗体は、概して、免疫組織化学的手順で使用される第二の抗体である。

本発明の「試料」または「生体試料」は、特定の実施形態では、真核生物などからの生物学的起源である。好ましい実施形態では、試料はヒト試料であるが、動物試料も本発明の実施に使用され得る。本発明は、一般に固形組織試料を含むがん試料に特に有用である。本方法は、異なる種類の細胞または組織を比較すること、異なる発達段階を比較すること、ならびに疾患または異常の存在及び／または種類を検出または決定することを含むが、これらに限定されない、ＡＤＡＭ９の発現の一態様または試料の状態を調べるために使用することができる。

本明細書における目的では、組織試料の「切片」は、組織試料の単一部分または単一片、例えば、組織試料から切断された組織または細胞の薄片を指す。組織試料の複数の切片が採取され、本発明に従って分析に供され得ることが理解される。ある場合には、組織の選択された部分または切片は、均質な細胞の集団を含む。他の場合には、選択された部分は、非限定的な例として組織の領域、例えば内腔を含む。選択された部分は、例えば、１つの細胞または２つの細胞ほど小さくてもよく、または何千もの細胞を表してもよい。

「相関する」または「相関」という用語は、任意の方法で、第１の分析の性能及び／または結果を、第２の分析の性能及び／または結果と比較することを意味する。例えば、第１の分析の結果を第２の分析の実行に使用してもよく、及び／または第１の分析の結果を使用して、第２の分析を実行すべきかどうかを決定してもよく、及び／または第１の分析の結果を第２の分析の結果と比較してもよい。一実施形態では、ＡＤＡＭ９の増加した発現は、ＡＤＡＭ９標的化抗がん療法の有効性の増加した可能性と相関する。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変ドメインに位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用する場合、「抗体」及び「抗体（複数）」という用語は、上記のうちのいずれかのモノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、ラクダ化抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、イントラボディ、及びエピトープ結合断片を指す。特に、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、エピトープ結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、またはサブクラスであり得る。抗体は、裸にすることができるし、他の分子、例えば毒素、放射性同位体に抱合され得る。

抗体は、特定のドメインまたは部分またはコンフォメーション（「エピトープ」）がそのような分子上に存在するために、ポリペプチドもしくはタンパク質または非タンパク質分子に「免疫特異的に結合する」ことができる。エピトープ含有分子は、動物における抗体産生応答を誘発するような免疫原性活性を有してもよく、そのような分子は「抗原」と呼ばれる。本明細書で使用される場合、抗体は、別のエピトープと比較して、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、及び／またはより高い親和性で反応または会合する場合、別の分子の領域（すなわち、エピトープ）に「免疫特異的に」結合すると言われる。例えば、ウイルスエピトープに免疫特異的に結合する抗体は、他のウイルスエピトープまたは非ウイルスエピトープに免疫特異的に結合するよりも高い親和性、アビディティ、より容易に、及び／またはより長い持続時間でそのウイルスエピトープに結合する抗体である。また、この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に免疫特異的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）は、第２の標的に特異的または優先的に結合してもよく、またはしなくてもよいことが理解される。したがって、特定のエピトープへの「免疫特異的結合」は、必ずしも（それが含み得るが）そのエピトープへの排他的結合を必要としない。一般に、必ずしもではないが、結合への言及は、「免疫特異的」結合を意味する。２つの分子は、そのような結合が、受容体がそれらのそれぞれのリガンドに結合する特異性を示す場合、「生理特異的」な方法で互いに結合することができると言われる。

用語「モノクローナル抗体」は、モノクローナル抗体が、抗原の選択的結合に関与するアミノ酸（自然発生または非自然発生）からなる均質な抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。「モノクローナル抗体」という用語は、インタクトなモノクローナル抗体及び完全長モノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモクローナル抗体、及び必要な特異性の抗原認識部位及び抗原に結合する能力を含む免疫グロブリン分子の他の修飾された構成も包含する。この用語は、抗体の供給源またはそれが作製される方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物など）に関して限定されることを意図していない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに「抗体」の定義の下で上記に記載される断片等を含む。モノクローナル抗体を作製する方法は当該技術分野において既知である。用いられ得る１つの方法は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９７５）“ Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ Ｏｆ Ｆｕｓｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｏｆ Ｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，”Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７、またはその改変の方法である。典型的には、モノクローナル抗体は、マウス、ラット、またはウサギにおいて開発される。抗体は、所望のエピトープを含有する免疫原性量の細胞、細胞抽出物、またはタンパク質調製物で動物を免疫化することによって生成される。免疫原は、一次細胞、培養細胞株、がん細胞、タンパク質、ペプチド、核酸、または組織であり得るが、これらに限定されない。免疫化に使用される細胞は、免疫原として使用される前に、一定期間（例えば、少なくとも２４時間）培養され得る。細胞は、それ自体として、またはＲｉｂｉ等の非変性アジュバントと組み合わせて、免疫原として使用され得る（例えば、Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｖ．Ｍ． （１９９５）“Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＩＬＡＲ Ｊ．３７（３）：１１９－１２５を参照されたい）。一般に、細胞は、免疫原として使用されるとき、インタクトで維持されるべきであり、好ましくは生存可能とされるべきである。インタクトな細胞は、免疫された動物によって破裂した細胞よりも抗原をよりよく検出することを可能にし得る。変性または過酷なアジュバント、例えば、フロイントアジュバントの使用は、細胞を破裂させる可能性があり、したがって、阻害される。免疫原は、定期的な間隔（例えば、隔週、または毎週）で複数回投与され得るか、または動物において（例えば、組織組換え体において）生存率を維持するような方法で投与され得る。あるいは、所望の病原性エピトープに対して免疫特異性である既存のモノクローナル抗体及び任意の他の等価抗体は、当該技術分野で知られている任意の手段によって配列決定され、組換え的に生成され得る。一実施形態では、そのような抗体を配列決定し、次いで、ポリヌクレオチド配列を、発現または増殖のためのベクターにクローニングする。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞中のベクターに維持されてもよく、宿主細胞は次いで、将来の使用のために拡大及び凍結されてもよい。かかる抗体のポリヌクレオチド配列は、抗体の親和性または他の特性、ならびに本発明の免疫抱合体を改善するために、親和性最適化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び／またはイヌ化抗体を生成するために遺伝子操作のために使用され得る。抗体をヒト化する一般原理は、抗体の抗原結合部分の基本配列を保持する一方で、抗体の非ヒト残部をヒト抗体配列と交換することを伴う。

天然抗体（天然ＩｇＧ抗体など）は、２つの「重鎖」と複合体を形成した２つの「軽鎖」で構成される。各軽鎖は、可変ドメイン（「ＶＬ」）及び定常ドメイン（「ＣＬ」）を含む。各重鎖は、可変ドメイン（「ＶＨ」）、３つの定常ドメイン（「ＣＨ１」、「ＣＨ２」、及び「ＣＨ３」）、及びＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に位置する「ヒンジ」領域（「Ｈ」）を含む。対照的に、ｓｃＦｖは、短い連結ペプチドを介して軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを一緒に連結することによって作製される一本鎖分子である。

したがって、自然発生の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）の基本的な構造単位は、通常、約１５０，０００Ｄａの糖タンパク質として発現される、２つの軽鎖及び２つの重鎖を有する四量体である。各鎖のアミノ末端（「Ｎ末端」）部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０以上のアミノ酸長の可変ドメインを含む。各鎖のカルボキシ末端（「Ｃ末端」）部分は、定常領域を画定し、軽鎖は、単一の定常ドメインを有し、重鎖は、通常、３つの定常ドメイン及びヒンジ領域を有する。したがって、ＩｇＧ分子の軽鎖の構造はｎ－ＶＬ－ＣＬ－ｃであり、ＩｇＧ重鎖の構造はｎ－ＶＨ－ＣＨ１－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３－ｃである（ここで、ｎ及びｃはそれぞれポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を表す）。

「抗ＡＤＡＭ９抗体」または「ＡＤＡＭ９に結合する抗体」という用語は、抗体がＡＤＡＭ９を標的とする際に診断薬及び／または治療薬ｉとして有用であるように、ＡＤＡＭ９に十分な親和性で結合可能である抗体を指す。無関係の非ＡＤＡＭ９タンパク質への抗ＡＤＡＭ９抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるとき、ＡＤＡＭ９への抗体への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ＡＤＡＭ９に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。抗ＡＤＡＭ９抗体の例は、当該技術分野で知られており、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１１９１６６、ＷＯ２０１８／１１９１９６、及びＷＯ２０２０／００５９４５に開示されている。ＡＤＡＭ９に結合する他の例示的な抗体は、Ａｂｃａｍ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、及び他の企業から市販されている。市販の抗ＡＤＡＭ９抗体の例としては、以下の企業からの抗ＡＤＡＭ９抗体が挙げられる：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製品番号２０９９及び４１５１、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製品番号ＰＡ５－１４３３８、ＰＡ５－１７０８０、及びＰＡ５－７６７３２、Ａｂｃａｍ ａｂ１８６８３３、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号ＨＰＡ００４０００、ＧｅｎｅＴｅｘカタログ番号ＧＴＸ１３００２５、ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳ－Ｃ１００６３８、ＬＳ－Ｃ５０２６７０及びＬＳ－Ｃ１２４８５６、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓカタログ番号２７１２０００２、Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号ＡＦ７５５９、ＣｕｓａＢｉｏ ＣＳＢ－ＰＡ６１８７７４ＥＳＲ２ＨＵ、ＰｒｏＳｃｉカタログ番号１９－６３３及び６２－９０９、Ｂｉｏｒｂｙｔカタログ番号ｏｒｂ２２９４４５及びｏｒｂ１９２７３５、Ｂｉｏｓｓカタログ番号ｂｓ－４２０４Ｒ及びｂｓ－４３０４Ｒ－Ｂｉｏｔｉｎ、Ｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号ＩＴＡ７３７９、Ａｂｂｅｘカタログ番号ａｂｘ１０３７９３、ならびにＳｐｒｉｎｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ抗ＡＤＡＭ９抗体（Ｊ１２Ｈ２Ｌ３）。

「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、及びＦｖ断片、直鎖状抗体、一本鎖抗体、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、本明細書では互換的に使用され、特定の抗体によって認識され特異的に結合されることが可能な抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドの場合、エピトープは、隣接アミノ酸、及びタンパク質の第３次折り畳みによって並列した非隣接アミノ酸の両方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、通常、タンパク質変性時に保持されるが、第３次折り畳みによって形成されたエピトープは、通常、タンパク質変性時に失われる。エピトープは、通常、少なくとも３個、より通常は少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を固有の空間構造に含む。

「結合親和性」は、概して、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合ペア（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法により測定され得る。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により早く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性の種々の測定方法が当該技術分野で知られており、これらのいずれも、本発明において使用することができる。具体的な例証的実施形態が以下に記載される。

本明細書で使用される「免疫抱合体」または「抱合体」という用語は、細胞結合剤（すなわち、抗ＡＤＡＭ９抗体またはその断片）に連結し、一般式：Ｃ－Ｌ－Ａ（式中、Ｃ＝細胞毒素、Ｌ＝リンカー、及びＡ＝細胞結合剤または抗ＡＤＡＭ９抗体もしくは抗体断片である）によって画定される化合物またはその誘導体を指す。免疫抱合体は、一般的な式によって、逆の順序Ａ－Ｌ－Ｃで画定することもできる。

「リンカー」は、化合物、通常はメイタンシノイドなどの薬物を、抗ＡＤＡＭ９抗体またはその断片などの細胞結合剤に安定した共有結合的な方法で連結することができる任意の化学的部分である。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件下で、酸誘導性の開裂、光誘導性の開裂、ペプチダーゼ誘導性の開裂、エステラーゼ誘導性の開裂、及びジスルフィド結合の開裂をしやすい、またはそれらに実質的に抵抗性であり得る。好適なリンカーは当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチダーゼ不安定性基、及びエステラーゼ不安定性基が挙げられるが、これらに限定されない。リンカーには、本明細書に記載され、当該技術分野で知られている荷電リンカー、及びその親水性形態も含まれる。

「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が無秩序な細胞成長を特徴とする、哺乳動物の生理的状態を指し、または記述する。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。かかるがんのさらに特定の例としては、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頚部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、ならびに種々の種類の頭頚部癌が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、がんの例としては、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、または膵臓癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、がんの例としては、腺癌ＮＳＣＬＣ、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、胃癌、または結腸直腸癌が挙げられる。

「腫瘍」及び「新生物」は、前がん性病変を含む良性（非がん性）または悪性（がん性）のいずれかの過剰な細胞成長または増殖に起因する任意の組織塊を指す。

「がん細胞」、「腫瘍細胞」、及び文法的に等価なものは、腫瘍細胞集団の大部分を含む非腫瘍細胞及び腫瘍性幹細胞（がん幹細胞）の両方を含む、腫瘍または前がん性病変に由来する細胞の合計集団を指す。本明細書で使用される場合、「腫瘍細胞」という用語は、それらの腫瘍細胞をがん幹細胞から区別するために再生及び分化する能力を欠く腫瘍細胞のみを指す場合、「非腫瘍性」という用語によって修飾される。

「対象」という用語は、特定の治療のレシピエントであるヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを含むが、これらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。典型的には、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では、ヒト対象を指して互換的に使用される。

「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象に許容できない程度に毒性のさらなる成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は、無菌であり得る。

本明細書に開示される抗体または抗体免疫抱合体の「有効量」は、具体的に記載される目的を実行するのに十分な量である。

「治療有効量」という用語は、対象または哺乳動物の疾患または障害を「治療する」のに有効な抗体、抗体免疫抱合体、または他の薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍成長をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。「治療する」の本明細書の定義を参照されたい。薬物が既存のがん細胞の成長の予防及び／またはそれらの殺滅を行うことができる限り、この薬物は細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。

「好ましく応答する」という用語は、一般に、対象において有益な状態を引き起こすことを指す。がん治療に関して、この用語は、対象に治療効果を提供することを指す。がんにおける肯定的な治療効果は、いくつかの方法で測定することができる（Ｗ．Ａ．Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５０：１ Ｓ－１０Ｓ（２００９）を参照されたい）。例えば、腫瘍成長阻害、分子マーカー発現、血清マーカー発現、及び分子イメージング技術は全て、抗がん治療薬の治療有効性を評価するために使用することができる。腫瘍成長阻害に関して、ＮＣＩ基準によれば、Ｔ／Ｃ＜４２％は、抗腫瘍活性の最小レベルである。Ａ Ｔ／Ｃ ＜１０％は高い抗腫瘍活性レベルとみなされ、Ｔ／Ｃ（％）＝治療された腫瘍体積の中央値／対照の腫瘍体積の中央値ｘ １００である。がん治療に対する他の好ましい応答としては、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または場合によっては、安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患の減少（ＰＤ）、進行までの時間の短縮（ＴＴＰ）が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、「標識」という語は、「標識」抗体を生成するように、抗体へ直接的に、または間接的に抱合される、検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能（例えば、放射性同位標識または蛍光標識）であってもよいし、または酵素標識の場合、検出可能である基質化合物もしくは組成物の化学変化を触媒してもよい。

「治療すること」または「治療」または「治療する」または「緩和すること」または「緩和する」などの用語は、１）診断された病理学的状態または障害の治癒、減速、症状の軽減、及び／または進行の停止を行う治療的手段、ならびに２）標的病理学的状態または障害の発症を防止及び／または減速させる予防または予防手段の両方を指す。従って、治療を必要とする者には、既に障害がある者、障害にかかりやすい者、及び障害を予防する必要がある者が含まれ、特定の実施形態では、患者が、悪液質の減少、生存時間の増加、腫瘍進行までの時間の延長、腫瘍量の減少、腫瘍負荷の減少及び／または腫瘍転移までの時間の延長、腫瘍再発までの時間、腫瘍奏効、完全奏効、部分奏効、安定した疾患、進行性疾患、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存（ＯＳ）のうちの１つ以上を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんのために正常に「治療」される。それぞれは、新薬の承認のためにＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（国立癌研究所）及びＵ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（米国食品医薬品局）によって設定された基準によって測定される。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ，（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１（７）：１４０４－１４１１を参照されたい。

「腫瘍進行までの時間」（ＹＩＰ）とも称される「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）は、がんが成長しない治療中及び治療後の時間の長さを示す。無憎悪生存期間は、患者が完全奏効または部分奏効を経験した時間量、ならびに患者が安定した疾患を経験した時間量を含む。

「完全奏効」または「完全寛解」または「ＣＲ」は、治療に応答して腫瘍またはがんの全ての徴候が消失したことを示す。これは、必ずしもがんが治癒されたことを意味しない。

「部分奏効」または「ＰＲ」は、治療に応答した、１つ以上の腫瘍もしくは病変の体積もしくはサイズ、または身体内のがんの範囲の減少を指す。

「安定した疾患」は、進行または再発のない疾患を指す。安定した疾患では、部分奏効の資格を得るのに十分な腫瘍縮小も、進行性疾患の資格を得るのに十分な腫瘍増大もない。

「進行性疾患」は、１つの新たな病変または腫瘍の出現、及び／または既存の非標的病変の明確な進行を指す。進行性疾患はまた、質量の増加または腫瘍の広がりのいずれかに起因して、治療が開始されてから２０％を超える腫瘍成長を指し得る。

「無病生存期間」（ＤＦＳ）は、患者が疾患を有しないままである治療中及び治療後の時間の長さを指す。

「全生存期間」（ＯＳ）は、投薬を受けていない、または未治療の個人または患者と比較した平均余命の延長を指す。

本明細書で使用される「アルキル」は、１～２０個の炭素原子の飽和直鎖または分岐鎖の一価の炭化水素ラジカルを指す。アルキルの例としては、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、１－ブチル、２－メチル－１－プロピル、ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－ブチル、２－メチル－２－プロピル、１－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、２－メチル－２－ブチル、３－メチル－２－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、１－へキシル）、２－へキシル、３－へキシル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、３－メチル－３－ペンチル、２－メチル－３－ペンチル、２，３－ジメチル－２－ブチル、３，３－ジメチル－２－ブチル、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、アルキルは、１～１０個の炭素原子を有する。より好ましくは、アルキルは、１～４個の炭素原子を有する。

基中の炭素原子の数は、本明細書では、接頭辞「Ｃ_ｘ－ｘｘ」によって指定することができ、式中、ｘ及びｘｘは整数である。例えば、「Ｃ_１－４アルキル」は、１～４個の炭素原子を有するアルキル基である。

「化合物」または「細胞毒性化合物」、または「細胞毒性薬剤」という用語は、互換的に使用される。これらは、構造もしくは式またはその任意の誘導体が本発明に開示されている化合物、または参照により組み込まれている構造もしくは式またはその任意の誘導体を含むことが意図されている。この用語はまた、本発明に開示される全ての式の化合物の立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、及び塩（例えば、医薬的に許容される塩）も含む。この用語はまた、上記のいずれかの任意の溶媒和物、水和物、及び多形を含む。本出願に記載される本発明の特定の態様における「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒和物」、「代謝産物」、「塩」、「抱合体」、「抱合塩」、「溶媒和物」、「水和物」、または「多形」の具体的な記載は、「化合物」という用語がこれらの他の形態を記載せずに使用される、本発明の他の態様におけるこれらの形態の意図された省略として解釈されない。

「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせできない（ｎｏｎ－ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合わせできる（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｌｅ）分子を指す。

「立体異性体」という用語は、同一の化学組成及び結合性を有するが、単結合の周りの回転によって相互変換することができない空間におけるそれらの原子の異なる配向を有する化合物を指す。

「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、結晶化、電気泳動法及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順の下で分離され得る。

「光学異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。

本明細書で使用される立体化学的な定義及び慣例は、一般的に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉またはキラル中心を含有し得、したがって、異なる立体異性体形態で存在する。ジアステレオマー、鏡像異性体及びアトロプ異性体を含むが、これらに限定されない本発明の化合物の全ての立体異性体形態、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物は、本発明の一部を形成することが意図される。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（－）は、化合物による平面偏光の回転の兆候を指定するために採用され、（－）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造に関して、これらの立体異性体は、互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、光学異性体とも呼ばれ得、そのような異性体の混合物は、しばしば光学異性体混合物と呼ばれる。光学異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、これらは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、光学的活性を欠く２つの光学異性体種の等モル混合物を指す。

本明細書で使用されるとき、「互変異性体」または「互変異性体形態」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互転換性である、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られる）は、ケト－エノール及びイミン－エナミン異性化など、プロトンの転位を介した相互転換を含む。原子価互変異性体は、結合電子のいくつかの再編成による相互転換を含む。

用語「カチオン」は、正電荷を有するイオンを指す。該カチオンは、１価（例えば、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４ ^＋等）でも、２価（例えば、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋等）でも、多価（例えば、Ａｌ^３＋等）でもよい。好ましくは、カチオンは、１価である。

本明細書で使用される、「医薬的に許容される塩」という句は、本発明の化合物の医薬的に許容される有機または無機塩を指す。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が挙げられるがこれらに限定されない。医薬的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオン等の別の分子の含有を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機部分または無機部分であってよい。さらに、医薬的に許容される塩は、１つを超える荷電原子をその構造内に有してもよい。複数の荷電原子が医薬的に許容される塩の一部である事例は、複数の対イオンを有することができる。よって、医薬的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有することができる。

本発明の化合物が塩基である場合、所望の医薬的に許容される塩は、当該技術分野で利用可能な任意の好適な方法、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸等の無機酸と、または、酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、例えばグルクロン酸もしくはガラクツロン酸等のピラノシジル酸、例えばクエン酸もしくは酒石酸等のアルファヒドロキシ酸、例えばアスパラギン酸もしくはグルタミン酸等のアミノ酸、例えば安息香酸もしくは桂皮酸等の芳香族酸、例えばｐ－トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸等のスルホン酸等の有機酸と遊離塩基の反応によって調製され得る。

本発明の化合物が酸である場合、所望の医薬的に許容される塩は、任意の好適な方法、例えば、アミン（一級、二級、または三級）、アルカリ金属水酸化物、もしくはアルカリ土類金属水酸化物等の無機塩基または有機塩基と遊離酸の処理によって調製され得る。好適な塩の具体例としては、グリシン及びアルギニン等のアミノ酸、アンモニア、一級、二級、及び三級アミン、ならびにピペリジン、モルホリン、及びピペラジン等の環状アミンから誘導される有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、及びリチウムから誘導される無機塩が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「溶媒和物」という用語は、非共有結合分子間力によって結合される、水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンジクロロメタン、２－プロパノールなどの化学量論的または非化学量論的な量の溶媒をさらに含む化合物を意味する。化合物の溶媒和物または水和物は、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールまたは水などのヒドロキシル溶媒の少なくとも１モル当量を化合物に添加することによって容易に調製され、イミン部分の溶媒和または水和をもたらす。

「アミノ酸」という用語は、自然発生アミノ酸または非自然発生アミノ酸を指す。一実施形態では、アミノ酸は、ＮＨ_２－Ｃ（Ｒ^ａａ’Ｒ^ａａ）－Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで表され、式中、Ｒ^ａａ及びＲ^ａａ’は、各々独立して、Ｈ、１～１０個の炭素原子を有する任意選択で置換された直鎖、分岐鎖または環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリル、またはＲ^ａａであり、Ｎ末端窒素原子は、一緒に複素環（例えば、プロリンのように）を形成することができる。「アミノ酸残基」という用語は、１つの水素原子がアミノ酸のアミン末端から除去されるとき及び／またはヒドロキシル基が－ＮＨ－Ｃ（Ｒ^ａａ’Ｒ^ａａ）－Ｃ（＝Ｏ）－などのアミノ酸のカルボキシ末端から除去されるときに対応する残基を指す。アミノ酸またはアミノ酸残基が、α炭素の特異的立体化学を示すことなく参照される場合、Ｌ－異性体及びＲ－異性体の両方を含むことを意味する。例えば、「Ａｌａ」には、Ｌ－アラニンとＲ－アラニンの両方が含まれる。

「ペプチド」という用語は、ペプチド（アミド）結合によって連結されたアミノ酸モノマーの短鎖を指す。いくつかの実施形態では、ペプチドは、２～２０個のアミノ酸残基を含有する。他の実施形態では、ペプチドは、２～１０個のアミノ酸残基を含有する。さらに他の実施形態では、ペプチドは、２～５個のアミノ酸残基を含有する。本明細書で使用される場合、ペプチドが、アミノ酸の特定の配列によって表される細胞毒性薬剤または本明細書に記載されるリンカーの一部である場合、ペプチドは、細胞毒性薬剤またはリンカーの残りと両方向に接続され得る。例えば、ジペプチドＸ１－Ｘ２は、Ｘ１－Ｘ２及びＸ２－Ｘ１を含む。同様に、トリペプチドＸ１－Ｘ２－Ｘ３は、Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３及びＸ３－Ｘ２－Ｘ１を含み、テトラペプチドＸ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４は、Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４及びＸ４－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ１を含む。Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、アミノ酸残基を表す。ペプチドまたはペプチド残基が、各アミノ酸またはアミノ酸残基の立体化学を示すことなく参照される場合、それは、Ｌ－異性体及びＲ－異性体の両方を含むことを意味する。しかしながら、ペプチドまたはペプチド残基中の１つ以上のアミノ酸またはアミノ酸残基の立体化学がＤ－異性体として指定される場合、指定された立体化学なしのペプチドまたはペプチド残基中の他のアミノ酸またはアミノ酸残基は、天然Ｌ－異性体のみを含むことを意味する。例えば、「Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ」は、ペプチドまたはペプチド残基を含むことを意味し、Ａｌａの各々は、Ｌ－またはＲ－異性体のいずれかであり得る。一方、「Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ」は、Ｌ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ｌ－Ａｌａを含むことを意味する。

本明細書で使用する場合、薬物－抗体比（ＤＡＲ）は、１つの抗体分子に共有結合した細胞毒性薬剤の平均数（すなわち、ｑの平均値）である。

本開示及び特許請求の範囲において使用される際、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、別段文脈が明確に規定しない限り、複数形を含む。

本明細書では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語で実施形態が説明されている場合はいつでも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で説明されている他の類似の実施形態も提供されることが理解される。

本明細書の「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」の両方を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の実施形態の各々を包含することが意図される。
Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独で）；Ｂ（単独で）；ならびにＣ（単独で）である。

ＩＩ．生物学的試料
生物学的試料は、固定剤で固定されることが多い。ホルマリン（ホルムアルデヒド）及びグルタルアルデヒドなどのアルデヒド固定剤が典型的に使用される。アルコール浸漬などの他の固定技術を使用して固定された組織試料（Ｂａｔｔｉｆｏｒａ ａｎｄ Ｋｏｐｉｎｓｋｉ，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ，（１９８６）３４：１０９５）が好適である。使用される試料はまた、パラフィンに埋め込まれてもよい。一実施形態では、組織サンプルは、ホルマリン固定及びパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）の両方である。別の実施形態では、ＦＦＰＥブロックを、ＦＦＰＥコア試料のための特定の領域（複数可）を選択するために、分析のための１つ以上の部分を選択する前に、ヘマトキシリン・エオジン染色する。これらの微粒子検体から組織ブロックを調製する方法は、様々な予後因子の以前のＩＨＣ研究で使用されており、及び／または当業者によく知られている。（例えば、Ａｂｂｏｎｄａｎｚｏ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，１．９９０ Ｍａｙ；９３（５）：６９８－７０２、Ａｆｌｒｅｄ ｅｔ ａｌ，Ａｒｃｈ Ｓｕｒｇ．１９９０ Ｊａｎ；１２５（１）：１０７－１３を参照されたい）。

手短に言えば、任意のインタクトな臓器または組織をかなり小さい片に切断し、組織が「固定」されるまでの様々な期間にわたって様々な固定剤（例えば、ホルマリン、アルコールなど）でインキュベートされてもよい。試料は、外科的に身体から取り出された実質的に任意のインタクトの組織であり得る。試料は、組織病理学検査室で日常的に使用される装置に適合する合理的に小さい片（複数可）に切断され得る。切断片のサイズは、典型的には、数ミリメートルから数センチメートルの範囲である。

ＩＩＩ．抗体抱合体の検出
いくつかの実施形態では、一般にモノクローナル型のＡＤＡＭ９に対する抗体は、少なくとも１つの薬剤に連結されて、検出抗体抱合体を形成する。診断薬としての抗体分子の有効性を増加させるために、少なくとも１つの所望の分子または部分と連結するか、共有結合するか、または複合体を形成することが慣習的である。こうした分子または部分としては、限定されないが、少なくとも１つのレポーター分子であり得る。レポーター分子は、アッセイを用いて検出され得る任意の部分として定義される。抗体に抱合されたレポーター分子の非限定的な例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光標識、燐光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、着色粒子、及び／またはビオチンなどのリガンドが含まれる。

十分な選択性、特異性、または親和性を有する任意の細胞結合剤（例えば、抗体またはポリペプチド）が、ＡＤＡＭ９ポリペプチドの検出の基礎として使用され得る。そのような特性は、当業者に既知の従来の免疫学的スクリーニング方法を使用して評価され得る。抗体分子内の生体活性分子に結合するための部位は、標準的な抗原結合部位に加えて、抗原に結合することができる可変ドメインに存在する部位を含む。加えて、可変ドメインは、抗体自己結合に関与し（Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８８）、抗抗体によって認識されるエピトープ（イディオトープ）を含有する（Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９）。

タンパク質結合（例えば、抗体）抱合体の特定の例は、タンパク質結合剤（例えば、抗体）が検出可能な標識に連結しているこれらの抱合体である。「検出可能な標識」は、それらの特定の機能特性及び／または化学特性により検出可能な化合物及び／または要素であり、その使用により、それらが取り付けられる抗体を検出すること、及び／または必要に応じてさらに定量化することが可能になる。

抗体へのそれらの取り付け方法と同様に、多くの適切な撮像剤が当該技術分野で既知である（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，０２１，２３６号、同第４，９３８，９４８号、及び同第４，４７２，５０９を参照されたい）。使用される撮像部分は、例えば、常磁性イオン、放射性同位体、蛍光色素、ＮＭＲ検出可能物質、及び／またはＸ線撮像法であり得る。

タンパク質結合（例えば、抗体）抱合体として使用するために企図される例示的な蛍光標識には、例えば、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、Ａｌｅｘａ ４８８、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ－Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲＸ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃｙ３、Ｃｙ５，６－ＦＡＭ、Ｄｙｌｉｇｈｔ ４８８、フルオレセインイソチオシアネート（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ５００、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ５１４、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ、ＲＥＧ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｒｅｄ、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、Ｒｅｎｏｇｒａｐｈｉｎ、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、及びこれらの標識の誘導体（すなわち、ハロゲン化類似体、抱合体のためのイソチオシアネートまたは他のリンカーで修飾される）が含まれる。例示的な放射標識は、トリチウムである。

本発明で使用され得るタンパク質結合（例えば、抗体）検出抱合体には、インビトロで使用するためのものが含まれ、抗体は、発色基質と接触すると着色生成物を生成する二次結合リガンド及び／または酵素（酵素タグ）に連結される。好適な酵素の例としては、ウレアーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、（西洋ワサビ）水素ペルオキシダーゼ、及び／またはグルコースオキシダーゼが挙げられる。好ましい二次結合リガンドは、ビオチン及び／またはアビジン及びストレプトアビジン化合物である。そのような標識の使用は、当業者によく知られており、例えば、米国特許第３，８１７，８３７号、同第３，８５０，７５２号、同第３，９３９，３５０号、同第３，９９６，３４５号、同第４，２７７，４３７号、同第４，２７５，１４９号、及び同第４，３６６，２４１号に記載されており、各々が参照により本明細書に組み込まれる。

アジド基を含有する分子は、低強度紫外線によって生成される反応性ニトレン中間体を介してタンパク質への共有結合を形成するためにも使用し得る（Ｐｏｔｔｅｒ ＆ Ｈａｌｅｙ，１９８３）。特に、プリンヌクレオチドの２－及び８－アジド類似体は、粗細胞抽出物中のヌクレオチド結合タンパク質を識別するための部位指向性光プローブとして使用されている（Ｏｗｅｎｓ ＆ Ｈａｌｅｙ，１９８７、Ａｔｈｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。２－アジドヌクレオチド及び８－アジドヌクレオチドもまた、精製タンパク質のヌクレオチド結合ドメインをマッピングするために使用されており（Ｋｈａｔｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９、及びＤｈｏｌａｋｉａ ｅｔ ａｌ，１９８９）、抗体結合剤として使用され得る。

抗体のその抱合体部分への取り付けまたは抱合のためのいくつかの方法が当該技術分野において既知である。一部の取り付け方法は、抗体に取り付けられる有機キレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸無水物（ＤＴＰ Ａ）、エチレントリアミン四酢酸、Ｎ－クロロ－ｐ－トルエンスルホンアミド、及び／またはテトラクロロ－３ａ－６ａ－ジフェニルグリコウリル－３を使用する金属キレート錯体の使用を伴う（米国特許第４，４７２，５０９号及び同第４，９３８，９４８号、各々は参照により本明細書に組み込まれる）。モノクローナル抗体はまた、グルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩などのカップリング剤の存在下で酵素と反応させてもよい。フルオレセインマーカーとタンパク質結合体（例えば、抗体）は、これらのカップリング剤の存在下、またはイソチオシアネートとの反応によって調製される。米国特許第４，９３８，９４８号では、例えば、乳房腫瘍の撮像は、モノクローナル抗体を使用して達成され、検出可能な撮像部分は、メチル－ｐ－ヒドロキシベンズイミデートまたはＮ－スクシンイミジル－３－（４－ヒドロキシフェニル）－プロピオン酸などのリンカーを使用して抗体に結合される。

他の実施形態では、抗体結合部位を改変しない反応条件を使用して、免疫グロブリンのＦｃ領域にスルフヒドリル基を選択的に導入することによる免疫グロブリンの誘導体化が企図される。この方法論に従って生成される抗体抱合体は、改善された長寿命、特異性、及び感受性を示すように開示される（米国特許第５，１９６，０６６号、参照により本明細書に組み込まれる）。レポーターまたはエフェクター分子がＦｃ領域内の炭水化物残基に抱合されるエフェクターまたはレポーター分子の部位特異的取り付けもまた、文献に開示されている（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙ ｅｔ ａｌ．，１９８７）。

他の実施形態では、免疫グロブリンは、トリチウムなどの核種で放射性標識される。追加の実施形態では、ナノゴールド粒子（例えば、約０．５ｎｍ～４０ｎｍのサイズ）及び／または量子ドット（Ｈａｙｗａｒｄ，Ｃａｌｉｆ．）が用いられる。

ＩＶ．酵素及び基質（クロマゲン）
基質及び指標は、以下に提供される例示的な実施形態等のＡＤＡＭ９の検出に使用され得る。

西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）は、最初に過酸化水素と複合体を形成し、次にそれを分解させ、水及び原子状酸素をもたらす酵素である。他の多くの酵素と同様に、ＨＲＰ及びいくつかのＨＲＰ様活性は、過剰な基質によって阻害され得る。ＨＲＰと過剰な過酸化水素との間に形成される複合体は、触媒的に不活性であり、電子ドナー（例えば、発色物質）の不在下で可逆的に阻害される。内因性ＨＲＰ活性のクエンチングをもたらすのは、過酸化水素の過剰及び電子ドナーの不在である。

アッセイシステムで使用する場合、ＨＲＰはまた、画定された基質をその活性化クロマゲンに変換するために使用することができ、したがって、色の変化を引き起こす。ＨＲＰ酵素は、いくつかの方法によって抗体、タンパク質、ペプチド、ポリマー、または他の分子に抱合され得る。かかる方法は当該技術分野において既知である。ＨＲＰ及び抗体の混合物を含有する溶液にグルタルアルデヒドを添加すると、酵素よりも多くの抗体分子が互いに抱合される。２段階手順において、ＨＲＰは、最初に二官能性試薬と反応する。第２の段階では、活性化されたＨＲＰのみが抗体と混合され、はるかに効率的な標識が得られ、重合が行われない。ＨＲＰはまた、２段階グルタルアルデヒド手順を使用して（ストレプト）アビジンに抱合される。この形態は、例えば、ＬＡＢ及びＬＳＡＢが基質である手順で使用される。ビオチンとの抱合はまた、ビオチンがＨＲＰ酵素のεアミノ基と反応する前に、まずビオチニル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルまたはビオチンヒドラジドに誘導体化されなければならないため、２段階を伴う。

３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）は、アルコール及び他の有機溶媒に非常に不溶性である褐色の最終生成物を生成するＨＲＰなどの酵素の基質である。ＤＡＢの酸化はまた、重合を引き起こし、四酸化オスミウムと反応する能力をもたらし、したがって、その染色強度及び電子密度を増加させる。重合ＤＡＢの光学密度を高めるために使用されるいくつかの金属及び方法のうち、硫化銀と組み合わせた塩化金が最も成功しているようである。

３－アミノ－９－エチルカルバゾール（ＡＥＣ）は、ＨＲＰなどの酵素の基質である。酸化すると、アルコール可溶性のバラ色の最終生成物を形成する。したがって、ＡＥＣで処理された検体は、アルコールまたはアルコール溶液（例えば、Ｈａｒｒｉｓ’ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）に浸漬してはならない。代わりに、水性カウンターステイン及び取り付け媒体を使用する必要がある。残念ながら、ＡＥＣはさらなる酸化の影響を受けやすく、過度の光に曝露されると、強度が低下する。したがって、暗所での保管が推奨される。

４－クロロ－１－ナフトール（ＣＮ）は、ＨＲＰなどの酵素の基質であり、青色の最終生成物として沈殿する。ＣＮはアルコール及び他の有機溶媒に可溶性であるため、検体を脱水したり、アルコール性カウンターステインに曝露したり、有機溶媒を含有する取り付け媒体でカバースリップしてはならない。ＤＡＢとは異なり、ＣＮは沈殿部位から拡散する傾向がある。

ｐ－フェニレンジアミン二塩酸塩／ピロカテコール（Ｈａｎｋｅｒ－Ｙａｔｅｓ試薬）は、ＨＲＰなどの酵素のための電子ドナー基質であり、アルコール及び他の有機溶媒に不溶である青黒色の反応生成物をもたらす。重合ＤＡＢと同様に、この反応生成物を浸透させることができる。免疫ペルオキシダーゼ技術では、Ｈａｎｋｅｒ－Ｙａｔｅｓ試薬で様々な結果が得られている。

子牛腸アルカリホスファターゼ（ＡＰ）（分子量１００ｋＤ）は、Ｐ－０結合を破壊することによって（加水分解によって）有機エステルからリン酸基を除去し、移動させる酵素であり、中間酵素－基質結合が短時間形成される。ＡＰの主な金属活性化剤は、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、及びＣａ^２＋である。

ＡＰは、標識されていないアルカリホスファターゼアンチアルカリホスファターゼ（ＡＰＡＡＰ）手順が公開されるまで、免疫組織化学において広く使用されていなかった。この手順で利用される可溶性免疫複合体は、約５６０ｋＤの分子量を有する。ＰＡＰ技術と比較したＡＰＡＡＰ手順の主な利点は、内因性ペルオキシダーゼ活性によってもたらされる干渉の欠如である。ＰＡＰ染色では内因性ペルオキシダーゼ活性が妨げられる可能性があるため、ＡＰＡＡＰ技術は、血液及び骨髄の塗抹標本に使用することが推奨される。骨、腎臓、肝臓及び一部の白血球からの内因性アルカリホスファターゼ活性は、基質溶液に１ｍＭのレバミゾールを添加することによって阻害され得るが、５ｍＭの方がより効果的であることが見出されている。腸アルカリホスファターゼは、レバミゾールによって十分に阻害されない。

免疫アルカリホスファターゼ染色法では、酵素はナフトールリン酸エステル（基質）をフェノール化合物とリン酸塩に加水分解する。フェノールは、無色のジアゾニウム塩（色素原）に結合して、不溶性の有色のアゾ染料を生成する。基質及び色素原のいくつかの異なる組み合わせが成功裏に使用されている。

ナフトールＡＳ－ＭＸリン酸塩は、その酸の形態で、またはナトリウム塩として使用することができる。色素原であるＦａｓｔ Ｒｅｄ ＴＲ及びＦａｓｔ Ｂｌｕｅ ＢＢは、それぞれ、鮮やかな赤色または青色の最終生成物を生成する。両方ともアルコール及び他の有機溶媒に可溶性であるため、水性取り付け媒体を使用する必要がある。細胞塗抹標本を染色する場合は、Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＴＲが好ましい。

さらなる例示的な基質としては、ナフトールＡＳ－ＢＩリン酸塩、ナフトールＡＳ－ＴＲリン酸塩、及び５－ブロモ－４－クロロ－３－インドキシルリン酸塩（ＢＣＩＰ）が挙げられる。他の可能な色素原としては、例えば、Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＬＢ、Ｆａｓｔ Ｇａｒｎｅｔ ＧＢＣ、Ｎｉｔｒｏ Ｂｌｕｅ Ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ（ＮＢＴ）ヨードニトロテトラゾリウムバイオレット（ＩＮＴ）、及びそれらの構造の誘導体が挙げられる。

Ｖ．免疫検出方法
なおさらなる実施形態では、抗体を用いて、野生型及び／または変異型リガンドタンパク質、ポリペプチド及び／またはペプチドを検出してもよい。野生型及び／または変異型リガンド特異的抗体は、本発明の方法で使用することができる。いくつかの免疫検出方法には、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ、生物発光アッセイ、及びウェスタンブロットなどが含まれる。様々な有用な免疫検出方法のステップは、例えば、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ Ｍ Ｈ ａｎｄ Ｂｅｎ－Ｚｅｅｖ Ｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９９９；１０９：２１５－３７、Ｇｕｌｂｉｓ Ｂ ａｎｄ Ｇａｌａｎｄ Ｐ，Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ．１９９３ Ｄｅｃ；２４（１２）：１２７１－８５、及びＤｅ Ｊａｇｅｒ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．１９９３ Ａｐｒ；２３（２）：１６５－７９などの科学文献に記載されており、各々は参照により本明細書に組み込まれる。

概して、免疫結合方法は、リガンドタンパク質、ポリペプチド及び／またはペプチドを含むことが疑われる試料を得ることと、場合によって、免疫複合体の形成を可能にするのに有効な条件下で、本発明による第１のリガンド結合ペプチド（例えば、抗リガンド抗体）と試料を接触させることとを含む。

抗原検出の観点から、分析される生体試料は、組織切片または標本、均質化された組織抽出物、生検吸引物、細胞、上記の野生型または変異型ＡＤＡＭ９含有組成物のいずれかの分離及び／または精製された形態、または組織試料または抽出物が好ましいが、血液及び／または血清を含む組織と接触する任意の生体流体など、野生型または変異型リガンドタンパク質特異的抗原を含むことが疑われる任意の試料であってもよい。

有効条件及び免疫複合体（一次免疫複合体）の形成を可能にするのに十分な期間にわたって、選択された生体試料を抗体と接触させることは、一般に、抗体組成物を試料に単純に添加し、抗体が存在する任意のリガンドタンパク質抗原と免疫複合体を形成する、すなわち、任意のリガンドタンパク質抗原に結合するのに十分な期間にわたって混合物をインキュベートすることである。この時間後、組織切片、ＥＬＩＳＡプレート、ドットブロットまたはウェスタンブロット等の試料抗体組成物を一般的に洗浄して、任意の非特異的に結合した抗体種を除去し、一次免疫複合体内で特異的に結合した抗体のみを検出することを可能にする。

一般に、免疫複合体形成の検出は当該技術分野で周知であり、多数のアプローチの適用によって達成され得る。これらの方法は、一般に、それらの放射性、蛍光性、生物学的及び酵素的タグのいずれかなどの標識またはマーカーの検出に基づいている。かかる標識の使用に関する米国特許は、各々参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第３，８１７，８３７号、同第３，８５０，７５２号、同第３，９３９，３５０号、同第３，９９６，３４５号、同第４，２７７，４３７号、同第４，２７５，１４９号及び同第４，３６６，２４１号を含む。もちろん、当該技術分野で既知であるように、第２の抗体及び／またはビオチン／アビジンリガンド結合配置などの二次結合リガンドの使用を通じて、追加の利点を見出すことができる。

検出に使用される抗リガンド抗体は、それ自体が検出可能な標識に連結されてもよく、次いで、この標識を単純に検出し、それによって、組成物中の一次免疫複合体の量を決定することができる。代替的に、一次免疫複合体内で結合される第１の抗体は、抗体に対する結合親和性を有する第２の結合剤によって検出され得る。これらの場合、第２の結合剤は、検出可能な標識に結合され得る。第２の結合剤自体は、多くの場合、抗体であり、したがって、「二次」抗体、またはポリマー検出システムと呼ばれ得る。一次免疫複合体を、有効な条件下で、二次免疫複合体の形成を可能にするのに十分な期間にわたって、標識された二次結合剤または抗体／ポリマー検出システムと接触させる。次いで、二次免疫複合体を一般的に洗浄して、任意の非特異的に結合した標識された二次抗体またはリガンドを除去し、次いで、二次免疫複合体中の残りの標識を検出する。

さらなる方法は、２段階のアプローチによる一次免疫複合体の検出を含む。上記のように、抗体に結合親和性を有する抗体などの第２の結合剤を使用して、二次免疫複合体を形成する。洗浄後、二次免疫複合体を、再び有効な条件下で、免疫複合体（三次免疫複合体）の形成を可能にするのに十分な期間の間、第２の抗体に対する結合親和性を有する第３の結合剤または抗体と接触させる。第３のリガンドまたは抗体は、検出可能な標識に連結され、このようにして形成された三次免疫複合体の検出を可能にする。このシステムは、これが望ましい場合、信号増幅を提供し得る。

別の実施形態では、ビオチン化モノクローナルまたはポリクローナル抗体を使用して、標的抗原（複数可）を検出し、第２のステップ抗体を使用して、複合体化ビオチンに取り付けられたビオチンを検出する。その方法において、試験される試料は、最初に、第１のステップ抗体を含む溶液中でインキュベートされる。標的抗原が存在する場合、抗体のいくつかは、抗原に結合して、ビオチン化抗体／抗原複合体を形成する。次いで、抗体／抗原複合体は、ストレプトアビジン（またはアビジン）、ビオチン化ＤＮＡ、及び／または相補的ビオチン化ＤＮＡの連続した溶液中でインキュベートすることによって増幅され、各ステップは、抗体／抗原複合体に追加のビオチン部位を付加する。増幅ステップは、適切な増幅レベルが達成されるまで繰り返され、その時点で試料は、ビオチンに対する第２のステップ抗体を含む溶液中でインキュベートされる。この第２のステップ抗体は、例えば、色素源基質を使用する組織酵素学によって抗体／抗原複合体の存在を検出するために使用することができる酵素で標識される。適切な増幅により、肉眼的に見えるタンパク質結合（例えば、抗体）抱合体を生成することができる。

免疫検出の別の既知の方法は、免疫ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）方法論を利用する。ＰＣＲ方法は、抗体を放出する低ｐＨまたは高塩濃度緩衝液で洗い流されるＤＮＡ／ビオチン／ストレプトアビジン／抗体複合体を使用する。次いで、得られた洗浄液を使用して、適切な対照を有する適切なプライマーとのＰＣＲ反応を行う。特定の実施形態では、ＰＣＲの膨大な増幅能力及び特異性を利用して、単一の抗原分子を検出することができる。そのような検出は、リアルタイムで行われ得る。例えば、定量的リアルタイムＰＣＲの使用が企図される。

様々な形態の疾患を有する患者の臨床診断及び／またはモニタリングにおいて、正常な対象からの対応する生体試料中のレベルと比較して、ＡＤＡＭ９変異体の検出、及び／またはＡＤＡＭ９のレベルの変化は、疾患を有する患者を示す。しかしながら、当業者に既知のように、そのような臨床診断は、必ずしもこの方法に基づいて単独で行われるわけではない。当業者は、バイオマーカーのタイプ及び／または量の有意差の区別に非常に精通しており、これは、バイオマーカーの陽性同定、及び／または低レベル及び／またはバックグラウンドの変化を表す。実際、バックグラウンド発現レベルは、「カットオフ」を形成するためにしばしば使用され、それを超えると、増加した検出は、有意かつ／または陽性としてスコアリングされる。

一実施形態では、ＡＤＡＭ９の免疫学的検出（免疫組織化学による）は、強度及び均一性（染色細胞の割合－膜のみ、細胞質のみ、または膜と細胞質との組み合わせ）の両方についてスコアリングされる。強度のＡＤＡＭ９発現の比較尺度は、０－陰性、０～１－非常に弱い、１－弱い、１～２－弱い～中程度、２－中程度、２～３－中程度～強い、３－強いと相関する。定量的には、スコア０は、腫瘍細胞において染色（例えば、膜のみ、細胞質のみ、または膜と細胞質の組み合わせ）が観察されないことを表す。スコア１は、腫瘍細胞におけるかすかな／ほとんど知覚できない染色（例えば、膜のみ、細胞質のみ、または膜と細胞質の組み合わせ）を表す。スコア２について、中等度の染色（例えば、膜のみ、細胞質のみ、または膜及び細胞質の組み合わせ）が腫瘍細胞において観察される。最後に、スコア３は、腫瘍細胞における強い染色（例えば、膜のみ、細胞質のみ、または膜と細胞質の組み合わせ）を表す。

ＶＩ．ＡＤＡＭ９結合剤
ＡＤＡＭ９に結合する任意の抗体は、本発明の検出方法において使用され得る。治療上有効な抗ＡＤＡＭ９抗体の例は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８／１１９１９６及びＷＯ２０２０／００５９４５に見出すことができる。ＡＤＡＭ９に結合する抗体はまた、Ａｂｃａｍ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、及び他の企業から市販されている。ＡＤＡＭ９の全長アミノ酸（ａａ）及びヌクレオチド（ｎｔ）配列は当該技術分野で既知であり、本明細書にも提供される。ＡＤＡＭ９の検出に特に有用な抗体は、ウサギモノクローナル抗体である（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ番号４１５１５）。

ＶＩＩ．抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体
本発明はまた、細胞毒素（薬物）またはプロドラッグに連結または抱合された、本明細書に開示される抗ＡＤＡＭ９抗体、抗体断片、機能的等価物、改善された抗体及びそれらの態様を含む抱合体（本明細書では免疫抱合体とも称される）の有効性を増加させるための方法も含む。例示的なＡＤＡＭ９免疫抱合体は、ＷＯ２０１８／１１９１９６及びＷＯ２０２０／００５９４５に見出すことができ、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

好適な薬物またはプロドラッグは当該技術分野において既知である。特定の実施形態では、薬物またはプロドラッグは、細胞毒性薬剤である。本発明の細胞毒性コンジュゲートで使用される細胞毒性剤は、細胞の死をもたらす、または細胞死を誘発する、または何らかの方法で細胞生存率を低下させる任意の化合物であり得、例えば、メイタンシノイド及びメイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ－１０６５及びＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、エンジイン、例えば、カリケアマイシン、ドラスタチン、オーリスタチンを含むドラスタチン類似体、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、及びモルホリノドキソルビシンを含む。特定の実施形態では、細胞毒性薬剤は、メイタンシノイド及びメイタンシノイド類似体である。

いくつかの実施形態では、本開示の方法において使用することができるＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表される免疫抱合体であるか、
またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ＣＢが、抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
Ｌ_２が、以下の式のうちのいずれか１つで表され、
式中、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｘ’及びＲ^ｙ’が、各々独立して、Ｈ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋、または－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ_３ＨもしくはＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋で任意に置換されたＣ_１－４アルキルであり、Ｒ_４０、Ｒ_４１及びＲ_４２が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－４アルキルであり、
ｌ及びｋが、各々独立して、１～１０の整数であり、
Ｌ_１が、以下の式で表され、
－ＣＲ^３Ｒ^４－（ＣＨ_２）_１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
式中、Ｒ^３及びＲ^４が、各々独立して、ＨまたはＭｅであり、Ｌ_１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分が、Ｄに接続されており、
Ｄが、以下の式で表され、
ｑが、１～２０の整数である。

いくつかの実施形態では、上記の式（Ｉ）の免疫抱合体について、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’及びＲｙ’が、全てＨであり、ｌ及びｋが、各々独立して、２～６の整数であり、残りの変数は、式（Ｉ）について上述したとおりである。

いくつかの実施形態では、上記の式（Ｉ）の免疫抱合体について、Ａは、２～５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの変数は、式（Ｉ）について、または第１の特定の実施形態で上述したとおりである。いくつかの実施形態では、Ａは、プロテアーゼによって切断可能なペプチドである。いくつかの実施形態では、腫瘍組織において発現されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドである。いくつかの実施形態では、Ａは、ＬまたはＤ異性体として各々独立して、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、ｓｅｌｉｎｏ－Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される－ＮＨ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｓ－Ｌ_１－Ｄと共有結合したアミノ酸を有するペプチドである。いくつかの実施形態では、－ＮＨ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｓ－Ｌ_１－Ｄに接続されるアミノ酸は、Ｌアミノ酸である。いくつかの実施形態において、Ａが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号５３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、及びＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙからなる群から選択され、各ペプチドの第１のアミノ酸が、Ｌ_２基に接続されており、各ペプチドの最後のアミノ酸が、－ＮＨ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｓ－Ｌ_１－Ｄに接続されており、残りの変数が、式（Ｉ）について上述したとおりである。

いくつかの実施形態では、上述の式（Ｉ）の免疫抱合体について、Ｒ^１及びＲ^２が両方ともＨであり、残りの変数が、式（Ｉ）について上述したとおりである。

いくつかの実施形態では、上述の式（Ｉ）の免疫抱合体について、Ｌ_１が、－（ＣＨ_２）_４－６－Ｃ（＝Ｏ）であり、残りの変数が、式（Ｉ）について上述したとおりである。

いくつかの実施形態では、上述の式（Ｉ）の免疫抱合体について、Ｄが、以下の式で表され、
残りの変数は、式（Ｉ）で説明したとおりである。

特定の実施形態では、式（Ｉ）の免疫抱合体について、抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片である。

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、表１及び表２に列挙されたものから選択される、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３を含む。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む：
（ａ）それぞれ配列番号１、３、及び５ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｂ）それぞれ配列番号１、３、及び５ならびに配列番号１７、１９、２０、
（ｃ）それぞれ配列番号１、４、及び５ならびに配列番号１７、１９、２０、ならびに
（ｄ）それぞれ配列番号２、４、及び５ならびに配列番号１８、１９、２１。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む：
（ａ）それぞれ配列番号１、３、及び６ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｂ）それぞれ配列番号１、３、及び７ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｃ）それぞれ配列番号１、３、及び８ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｄ）それぞれ配列番号１、３、及び９ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｅ）それぞれ配列番号１、３、及び１０ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｆ）それぞれ配列番号１、３、及び１１ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｇ）それぞれ配列番号１、３、及び１２ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｈ）それぞれ配列番号１、３、及び１３ならびに配列番号１６、１９、２０、
（ｉ）それぞれ配列番号１、３、及び１４ならびに配列番号１６、１９、２０、ならびに
（ｊ）それぞれ配列番号１、３、及び１５ならびに配列番号１６、１９、２０。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、配列番号１の配列を有するＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、配列番号３の配列を有するＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及び配列番号５の配列を有するＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびに配列番号１６の配列を有するＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、配列番号１９の配列を有するＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、配列番号１の配列を有するＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、配列番号３の配列を有するＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及び配列番号１４の配列を有するＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびに配列番号１６の配列を有するＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、配列番号１９の配列を有するＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む：
（ａ）それぞれ配列番号２２及び配列番号３５
（ｂ）それぞれ配列番号２２及び配列番号３６
（ｃ）それぞれ配列番号２３及び配列番号３６、ならびに
（ｄ）それぞれ配列番号２４及び配列番号３７。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む：
（ａ）それぞれ配列番号２２及び配列番号３５
（ｂ）それぞれ配列番号２２及び配列番号３６
（ｃ）それぞれ配列番号２３及び配列番号３６、及び
（ｄ）それぞれ配列番号２４及び配列番号３７。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む：
（ａ）それぞれ配列番号２５及び配列番号３５、
（ｂ）それぞれ配列番号２６及び配列番号３５、
（ｃ）それぞれ配列番号２７及び配列番号３５、
（ｄ）それぞれ配列番号２８及び配列番号３５、
（ｅ）それぞれ配列番号２９及び配列番号３５、
（ｆ）それぞれ配列番号３０及び配列番号３５、
（ｇ）それぞれ配列番号３１及び配列番号３５、
（ｈ）それぞれ配列番号３２及び配列番号３５、
（ｉ）それぞれ配列番号３３及び配列番号３５、ならびに
（ｊ）それぞれ配列番号３４及び配列番号３５。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、以下からなる群から選択される配列を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む：
（ａ）それぞれ配列番号２５及び配列番号３５、
（ｂ）それぞれ配列番号２６及び配列番号３５、
（ｃ）それぞれ配列番号２７及び配列番号３５、
（ｄ）それぞれ配列番号２８及び配列番号３５、
（ｅ）それぞれ配列番号２９及び配列番号３５、
（ｆ）それぞれ配列番号３０及び配列番号３５、
（ｇ）それぞれ配列番号３１及び配列番号３５、
（ｈ）それぞれ配列番号３２及び配列番号３５、
（ｉ）それぞれ配列番号３３及び配列番号３５、ならびに
（ｊ）それぞれ配列番号３４及び配列番号３５。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、配列番号２２の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号３５の配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、配列番号３３の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号３５の配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、Ｆｃ領域を含む完全長抗体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、
（ａ）以下からなる群から選択されるＦｃγＲに対する変異体Ｆｃ領域の親和性を低減する１つ以上のアミノ酸修飾（複数可）：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、及び／または
（ｂ）Ｓ４４２でシステイン残基を導入するアミノ酸修飾であって、上記付番が、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスの付番である、アミノ酸修飾、及び／または
（ｃ）以下からなる群から選択されるＦｃＲｎに対する変異体Ｆｃ領域の半減期を延長する１つ以上のアミノ酸置換（複数可）：Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、以下からなる群から選択される配列を有する重鎖及び軽鎖を含む：
（ａ）それぞれ配列番号３８及び配列番号５０、
（ｂ）それぞれ配列番号３９及び配列番号５０、ならびに
（ｃ）それぞれ配列番号４０及び配列番号５０。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、以下からなる群から選択される配列を有する重鎖及び軽鎖を含む：
（ａ）それぞれ配列番号４１及び配列番号５０、
（ｂ）それぞれ配列番号４２及び配列番号５０、
（ｃ）それぞれ配列番号４３及び配列番号５０、
（ｄ）それぞれ配列番号４４及び配列番号５０、
（ｅ）それぞれ配列番号４５及び配列番号５０、
（ｆ）それぞれ配列番号４６及び配列番号５０、ならびに
（ｇ）それぞれ配列番号４７及び配列番号５０。

特定の実施形態では、ヒト化／最適化抗ＡＤＡＭ９抗体は、配列番号４０の配列を有する重鎖、及び配列番号５０の配列を有する軽鎖を含む。

特定の実施形態では、ヒト化／最適化抗ＡＤＡＭ９抗体は、配列番号４５の配列を有する重鎖、及び配列番号５０の配列を有する軽鎖を含む。

特定の実施形態では、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、または配列番号４７のＸは、リジンである。

特定の実施形態では、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、または配列番号４７のＸは存在しない。

いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４９及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４８及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。

特定の実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表され、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
ｑが、１または２であり、
Ｄが、以下の式で表される。

特定の実施形態では、本発明の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体は、以下の式で表され、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
ｑが、１または２であり、
Ｄ_１が、以下の式で表される。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、それぞれ配列番号３３及び配列番号３５の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４２及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４５及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４２または配列番号４５のＸはリジンである。いくつかの実施形態では、配列番号４２または配列番号４５のＸは存在しない。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４９及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、免疫抱合体を含む組成物（例えば、医薬組成物）のＤＡＲ値は、１．０～２．５、１．５～２．５、１．８～２．２、または１．９～２．１の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは１．８、１．９、２．０または２．１である。

特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表され、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
ｑが、１～１０の整数であり、
Ｄが、以下の式で表される。

特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表され、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
ｑが、１～１０の整数であり、
Ｄ_１が、以下の式で表される。

特定の実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片は、それぞれ配列番号３３及び配列番号３５の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４０及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４４及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４０または配列番号４４のＸはリジンである。いくつかの実施形態では、配列番号４０または配列番号４４のＸは存在しない。いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４８及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、免疫抱合体を含む組成物（例えば、医薬組成物）のＤＡＲ値は、１．０～５．０、１．０～４．０、１．５～４．０、２．０～４．０、２．５～４．０、２．９～３．３、３．３～３．８、１．５～２．５、または１．８～２．２の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、４．０未満、３．８未満、３．６未満、３．５未満、３．０未満、または２．５未満である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、３．０～３．２の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、３．５～３．７の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６または３．７である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．９～２．１の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．９、２．０または２．１である。

特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表されるメイタンシノイド化合物ＤＭ２１－Ｃに共有結合したヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体を含み、
式中、Ｄ_１が以下の構造を有する。
ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体は、それぞれ配列番号４５及び配列番号５０の配列を有する、重鎖及び軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の構造で表されるＩＭＧＣ９３６であり、
式中、
ＣＢＡが、それぞれ配列番号４５及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体であり、
ｑが、２であり、
Ｄ_１が、以下の式で表される。

ＶＩＩＩ．医薬組成物及び治療方法
本明細書で提供するように、本明細書で提供するヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片を含む本発明の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体は、細胞の表面に存在するＡＤＡＭ９に結合し、細胞殺傷を媒介する能力を有する。特に、薬理剤を含む本発明の免疫抱合体は、内在化され、薬理剤の活性を介して細胞殺傷を媒介する。かかる細胞殺傷活性は、免疫抱合体誘導抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）によって増強され得る。

したがって、本発明の免疫抱合体は、ＡＤＡＭ９の発現に関連するまたはそれを特徴とする任意の疾患または状態を治療する能力を有する。上で考察したように、ＡＤＡＭ９は、分化の少ない形態を示す高悪性度腫瘍に関連する、多数の血液及び固形悪性腫瘍で発現される腫瘍胚性抗原であり、不良な臨床転帰と相関する。したがって、限定されないが、本発明の免疫抱合体は、がん、特にＡＤＡＭ９の発現を特徴とするがんの治療に用いられ得る。

他の特定の実施形態では、本発明の免疫抱合体は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、結腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、腎細胞癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、頭頚部癌、子宮癌、卵巣癌、肝臓癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣癌、骨髄癌、黒色腫、及びリンパ系癌の治療に有用であり得る。他の特定の実施形態では、本発明の免疫抱合体は、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、胃癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））、または膵臓癌の治療に有用であり得る。

さらなる実施形態では、本発明の免疫抱合体は、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞、非扁平上皮細胞、腺癌、または大細胞未分化癌）、結腸直腸癌（腺癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、原発性結腸直腸リンパ腫、平滑筋肉腫、または扁平上皮癌）または乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））の治療に有用であり得る。

治療におけるそれらの有用性に加えて、本発明の免疫抱合体は、検出可能に標識され得、がんの診断または腫瘍及び腫瘍細胞の撮像に使用され得る。

本発明の組成物は、単位剤形の調製に使用することができる医薬組成物（例えば、不純物または非滅菌組成物）及び医薬組成物（すなわち、対象または患者への投与に好適な組成物）の製造に有用なバルク薬物組成物を含む。そのような組成物は、予防的または治療有効量の本発明の免疫抱合体、またはそのような薬剤と医薬的に許容される担体との組み合わせを含む。好ましくは、本発明の組成物は、予防的または治療有効量の本発明の免疫抱合体と、医薬的に許容される担体とを含む。

特定の実施形態では、「医薬的に許容される」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または動物、より具体的にはヒトでの使用のために米国薬局方もしくは一般に認められている他の薬局方に記載されていることを意味する。「担体」という用語は、治療剤とともに投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全及び不完全）、賦形剤、またはビヒクルを指す。一般に、本発明の組成物の成分は、例えば、液体、乾燥した凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、活性剤の量を示すバイアル、アンプルまたは小袋のような密閉容器に、単位剤形で別々にまたは一緒に混合して供給される。組成物は、点滴によって投与される場合、例えば、無菌の医薬品グレードの水または生理食塩水を含有する点滴ボトルで分注され得る。組成物は、点滴によって投与される場合、投与の前に成分を混合することができるように、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。

本発明はまた、単独で、またはそのような医薬的に許容される担体とともに、本発明の免疫抱合体で充填された１つ以上の容器を含む、医薬パックまたはキットを提供する。さらに、疾患の治療に有用な１つ以上の他の予防薬または治療薬も、医薬パックまたはキットに含めることができる。本発明はまた、医薬組成物の成分の１つ以上を充填した１つ以上の容器を備える、医薬パックまたはキットをさらに提供する。医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、かかる容器（複数可）に任意に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、販売の使用の政府機関による承認を表す。

本発明は、上記の方法で使用することができるキットを提供する。キットは、本発明の免疫抱合体のうちのいずれをも含むことができる。キットは、１つ以上の容器に、がんの治療に有用な１つ以上の他の予防薬及び／または治療薬をさらに含むことができる。

本発明の組成物は、対象に有効量の本発明の免疫抱合体を投与することによって、疾患、障害に関連する１つ以上の症状の治療、予防、及び改善のために提供され得る。好ましい態様では、そのような組成物は、実質的に精製される（すなわち、その効果を制限するか、または望ましくない副作用を生じる物質を実質的に含まない）。特定の実施形態では、対象は、動物、好ましくは、非霊長類（例えば、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類など）または霊長類（例えば、カニクイザル、ヒトなどのサル）などの哺乳類である。好ましい実施形態では、対象は、ヒトである。

様々な送達系が既知であり、本発明の組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル化、抗体または融合タンパク質を発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）“Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｂｙ Ａ Ｓｏｌｕｂｌｅ ＤＮＡ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などが挙げられる。

本発明の免疫抱合体を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与及び皮下投与）、硬膜外投与及び粘膜内投与（例えば、鼻腔内経路及び経口経路）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本発明の免疫抱合体は、筋肉内、静脈内、または皮下に投与される。組成物は、例えば、点滴またはボーラス注射によって、任意の好都合な経路によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。

本発明はまた、本発明の免疫抱合体の調製物が、分子の量を示すバイアル、アンプルまたは小袋などの密閉容器に包装されることを規定している。一実施形態では、そのような分子は、密閉容器内の液体、乾燥した滅菌された凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給され、例えば、水または生理食塩水で対象への投与のための適切な濃度に再構成され得る。好ましくは、本発明の免疫抱合体は、密閉容器内に乾燥した滅菌凍結乾燥粉末として供給される。好ましくは、本発明の免疫抱合体は、密閉容器内に液体として供給される。

本発明の免疫抱合体の凍結乾燥調製物は、それらの元の容器内で２℃～８℃で保管されるべきであり、分子は、再構成された後１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与されるべきである。代替の実施形態では、そのような分子は、分子、融合タンパク質、または抱合分子の量及び濃度を示す密閉容器内で液体形態で供給される。好ましくは、液体形態で提供される場合、そのような免疫抱合体は、密閉容器内に供給される。

本発明の医薬組成物は、治療を必要とする領域に局所的に投与されてもよく、これは、例えば、限定的ではなく、局所点滴、注射、またはインプラントの手段によって達成されてもよく、上記インプラントは、多孔性、非多孔性、またはゲル状物質であり、膜、例えば、シラスティック膜、または繊維を含む。好ましくは、本発明の免疫抱合体を投与するとき、分子が吸収しない材料を使用するように注意しなければならない。

本発明の組成物は、小胞、特にリポソームで送達することができる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）“Ｎｅｗ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３）、Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）、Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．, ｐｐ．３ １７－３２７を参照されたい）。

ここで、本発明を一般的に説明したが、以下の実施例を参照することによって、同じことがより容易に理解されるであろう。以下の実施例は、本発明の診断または治療方法における組成物のための様々な方法を例示する。これらの実施例は、本発明の範囲を例示することを意図するが、決して限定するものではない。

ＰＤＸ材料及び方法
動物モデル：患者由来の腫瘍試料を、６～８週齢の無胸腺ヌード－Ｆｏｘｎ１ｎｕマウスに移植した。腫瘍が１００～３００ｍｍ^３の平均腫瘍体積に達したとき、動物を、投薬のために使用される治療群または対照群に腫瘍体積によって適合させた。マウスに、ビヒクル、非標的化ＡＤＣ（０．１ｍｇ／ｋｇのメイタンシノイドＤＭペイロード）、またはＩＭＧＣ９３６（抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体、８．６ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ、または０．１ｍｇ／ｋｇのメイタンシノイドＤＭペイロード）のいずれかを静脈内注射によって投与した。腫瘍測定及び体重を、週に２回、実施した。

有効性：抗腫瘍活性は、ＮＣＩ基準：対照マウスに対する処置マウスの平均腫瘍体積（％）＞４２％（不活性）、≦４２％（活性）、及び＜１０％（活性）によって画定された。

ＩＨＣ材料及び方法
組織試料：使用される全ての組織試料は、食道癌について記載されている場合を除き、ＦＦＰＥ（ホルマリン固定及びパラフィン包埋）全組織試料であり、いくつかは組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）からの組織コアであった。

免疫組織化学

ＡＤＡＭ９の免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイのみを使用する研究を、Ｖｅｎｔａｎａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｕｌｔｒａ ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒを使用して実施した。ＡＤＡＭ９の一次抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カタログ番号４１５１Ｓ）から購入したウサギモノクローナル抗体であった。このアッセイを、ＰＤＸ研究に使用した。ＩＨＣプロトコルについて簡単に説明する。抗原回収は、ＣＣ１緩衝液（ＶＭＳＩ、カタログ番号９５０－２２４）を用いた３２分間のインキュベーション条件を使用して実施した。一滴の阻害剤ＣＭを加え、８分間インキュベートした。スライドを、希釈剤（ＶＭＳＩ、７６０－２１９）中の一次ＡＤＡＭ９抗体（０．２５ｍｇ／ｍＬ）のストック濃度の１：１００希釈（２．５μｇ／ｍＬ）で、３７℃で３２分間インキュベートした。陰性対照として、検体を、同じ条件下でＩｇＧウサギ抗体（ベクターカタログ番号Ｉ－１０００）とインキュベートした。抗ＡＤＡＭ９抗体の酵素検出は、ＨＱに抱合された抗ウサギＩｇＧ（ＶＭＳＩ、カタログ番号７６０－４８１５）、続いて、１２分間インキュベートしたＨＲＰに抱合された抗ＨＱ（ＶＭＳＩ、カタログ番号７６０－２０２０）で達成した。ＣｈｒｏｍｏＭａｐ ＤＡＢ検出キット（ＶＭＳＩ、カタログ番号７６０－１５９）を用いて抗ＡＤＡＭ９抗体を検出した。色素源は、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）及び硫酸銅の存在下で過酸化水素との反応によって沈着する。

ＦＦＰＥ試料中のＡＤＡＭ９の検出のための免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイを開発し、Ｒｏｃｈｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ＲＴＤ）で検証した。Ｒｏｂｕｓｔ Ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ Ａｓｓａｙ（ＲＰＡ）は、Ｖｅｎｔａｎａ Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ ＵＬＴＲＡ染色プラットフォーム上でＶｅｎｔａｎａ ＯｐｔｉＶｉｅｗ ＤＡＢ検出を有するＳｐｒｉｎｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ抗ＡＤＡＭ９（Ｊ１２Ｈ２Ｌ３）抗体を使用する。公開された所見に従って、膜及び細胞質パターンにおいて高品質の染色が観察された。ＲＰＡアッセイは、開発プロセスを通して様々なアッセイパラメータにわたって一貫した染色を示し、特異性、精度、及び分析精度の基準を満たした。

ＩＨＣプロトコルについて簡単に説明する。抗原回収は、ＣＣ１緩衝液（ＶＭＳＩ、カタログ番号９５０－２２４）を用いた９２分間のインキュベーション条件を使用して実施した。スライドを、希釈剤９０１０３（ＶＭＳＩ）中の一次抗体のストック濃度の１：２８２希釈で、３６℃で１６分間インキュベートした。ストック抗体濃度は、製造業者によって抗体がＶｅｎｔａｎａに提供された濃度を指す。陰性対照として、検体を同じ条件下でＩｇＧウサギモノクローナル抗体とインキュベートした。ＯｐｔｉＶｉｅｗ（商標）検出キット（ＶＭＳＩ、カタログ番号７６０－７００）を用いて抗ＡＤＡＭ９抗体を検出した。抗ＡＤＡＭ９抗体の酵素検出は、ＨＱに抱合された二次ヤギ抗マウス及び抗ウサギＩｇＧ、続いてＨＲＰに抱合された抗ＨＱで達成された。色素源は、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）及び硫酸銅の存在下で過酸化水素との反応によって沈着する。二次抗体、ＨＲＰマルチマー、及び全ての発色試薬を、装置のデフォルト時間で適用した。

スコアリング及びデータ分析：染色強度は、認定解剖学的病理学者によって、０（陰性）から３までの半定量的整数尺度でスコアリングされた。各強度レベルでの細胞質、膜、ならびに細胞質及び／または膜（細胞膜）について陽性に染色した細胞の割合を記録した。スコアリングは、細胞膜及び細胞質に対するＡＤＡＭ９の局在化に基づいていた。腫瘍試料において、生存する悪性細胞をスコアリングした。

Ｈスコアを算出した。Ｈスコアは、染色強度の構成要素を陽性細胞のパーセンテージと組み合わせる。値は０～３００で、次のように定義される：
１＊（強度カテゴリー１で染色された細胞の割合）
＋２＊（強度カテゴリー２で染色された細胞の割合）
＋３＊（強度カテゴリー３で染色された細胞の割合）
＝Ｈスコア

実施例１．ＰＤＸ研究
ＩＭＧＣ９３６の活性を、腺癌非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、及び胃癌腫瘍に由来するＰＤＸモデルにおいて分析した。ＡＤＡＭ９発現の範囲は、Ｈスコアによって２７～２２６であり、試料の８０％が１０１を超えるＨスコアを有する（表５）。０．１ｍｇ／ｋｇ（抗体による８．６ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＧＣ９３６の単回用量は、良好な耐容性であった。試験した腫瘍型にわたって、ＩＭＧＣ９３６は、３５モデルのうち２４モデル（６９％）で活性または高活性であり、６モデル（４ＮＳＣＬＣ、２ＴＮＢＣ）で完全な退縮があった。２４のＩＭＧＣ９３６感受性モデルのＨスコアは６５～２２４であった。１１の非感受性モデルは、２７から２２６の間のＨスコアを有していた。５０を超えるＨスコアを有するこの研究における全てのＰＤＸモデルは、ＩＭＧＣ９３６に応答した（図１Ａ）。がん型ごとのＡＤＡＭ９有病率データを図１Ｂに示す。ＰＤＸモデルごとのＨスコア及び染色強度を図１Ｃに示す。

実施例２．ＡＤＡＭ９の有病率
ＡＤＡＭ９は、複数の腫瘍型において高発現であった。腫瘍試料の大部分は、中程度～高レベルのＡＤＡＭ９を有し、腺癌ＮＳＣＬＣ６２％、ＴＮＢＣ６５％、胃癌７３％、及び膵臓癌８５％の試料が１０１～３００のＨスコアを有していた（図２）。結腸直腸癌（ＣＲＣ）及び食道癌におけるＡＤＡＭ９発現も調べた。ＡＤＡＭ９発現は、ＣＲＣ及び食道癌において低く、Ｈスコアが１００を超える試料では、それぞれ４０％及び３２％であった。残りの腫瘍試料は、より低いレベルのＡＤＡＭ９発現（Ｈスコア１～１００）を有し、ＮＳＣＬＣの１．２％及びＣＲＣ試料の２０％がＡＤＡＭ９陰性であった。

ＡＤＡＭ９は、ＴＮＢＣ、ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ、胃癌、膵臓癌、及び食道癌において高発現であった。腫瘍試料の大部分が高レベルのＡＤＡＭ９を発現し、胃癌の８５％、膵臓癌１００％、ＴＮＢＣ６３％、ＮＳＣＬＣ腺癌９６％、ＣＲＣ９０％、食道癌５４％の試料が、１００を超えるＨスコアを有していた（図３）。加えて、適応症にわたって評価された症例の２１８／２２０（９９％）は、膜または細胞質のいずれかでＡＤＡＭ９を発現する。

ａ．胃癌
３９の全組織胃癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で３９／３９症例（１００％）が、平均Ｈスコア１７０で陽性の細胞質または膜染色を示し（図４Ａ及び４Ｂ）、試料の７２％が膜ＡＤＡＭ９染色を示す（図４Ｃ）。陽性染色は、バックグラウンド上の任意の染色として定義される。

ｂ．膵臓癌
４２の全組織膵臓癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で４２／４２（１００％）が、陽性の細胞質または膜染色を示し、平均Ｈスコアは１９５であり（図５Ａ及び５Ｂ）、試料の９３％が膜ＡＤＡＭ９染色を示す（図５Ｃ）。

ｃ．腺癌ＮＳＣＬＣ
２５の全組織ＮＳＣＬＣ腺癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で２５／２５症例（１００％）が、陽性の細胞質または膜染色を示し、平均Ｈスコアは１６９であり（図６Ａ及び６Ｂ）、試料の９６％が膜ＡＤＡＭ９染色を示す（図６Ｃ）。

ｄ．ＴＮＢＣ
２７の全組織トリプルネガティブ乳癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で２６／２７（９６．３％）の試料が、陽性の細胞質または膜染色を示し、平均Ｈスコアは１２３であり（図７Ａ及び７Ｂ）、試料の８５％が膜ＡＤＡＭ９染色を示す（図７Ｃ）。

ｅ．ＣＲＣ
４１の全組織トリプルＣＲＣ癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で４１／４１（１００％）の試料が、陽性の細胞質または膜染色を示し、平均Ｈスコアは１４４であり（図８Ａ及び８Ｂ）、試料の９５％が膜ＡＤＡＭ９染色を示す（図８Ｃ）。

ｆ．食道癌
４６の全組織トリプル食道癌症例は、バイオマーカー評価のために評価可能であった。合計で４５／４６（９７．８％）の試料が、陽性の細胞質または膜染色を示し、平均Ｈスコアは１０５であり（図９Ａ及び９Ｂ）、試料の７６％は、ＡＤＡＭ９膜のみの染色が陽性であることを示した（図９Ｃ）。

実施例３．第Ｉ相臨床研究におけるＡＤＡＭ９発現レベル評価
進行性固形腫瘍を有する患者におけるＩＭＧＣ９３６の第１相、最初のヒト、非盲検、用量漸増試験を実施し、点滴静注によるＩＭＧＣ９３６の安全性、耐容性、ＰＫ、薬力学、免疫原性、及び予備的抗腫瘍活性を特徴付ける。切除不能、再発または難治性、局所進行性または転移性の非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、ＴＮＢＣ、ＣＲＣ、胃食道癌、または膵臓癌を有する参加者が登録される。ＩＨＣ染色によるＡＤＡＭ９発現の決定のための腫瘍検体は、全ての参加者から収集され、アッセイされる。

アーカイブ及び／または新鮮な処置前に採取した腫瘍検体上のＡＤＡＭ９エクスペルションの分析を実施する。参加者は、ＡＤＡＭ９発現の評価のために、同定されたアーカイブ腫瘍検体ブロック（例えば、ＦＦＰＥ）、またはアーカイブ腫瘍検体からの染色されていないスライド、または同時期の腫瘍生検を有する。参加者は、好適な試料が同定できない場合、試験のための試料を得るために新鮮な腫瘍生検を受けることができる。

参加者のＡＤＡＭ９発現を分析して、ＩＭＧＣ９３６の抗腫瘍活性とＡＤＡＭ９発現との間の相関を決定する。腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を使用して、患者試料中のＡＤＡＭ９の陽性または陰性の染色を示すことができる。ＴＰＳは、任意の強度での部分的または完全な膜染色及び細胞質染色を示す生存腫瘍細胞の割合として計算される。ＴＰＳスコアは、膜染色のみ、すなわち、任意の強度での部分的または完全な膜染色のみを示す生存腫瘍細胞の割合について計算することもできる。健康な対象からの参照試料を、ベースライン対照または陰性対照として使用することができる。参照試料は、参加者の腫瘍試料が収集される組織に対応する、健康な対象における組織に由来し得る。参照試料はまた、参加者からの対応する健康な組織からのものであり得る。加えて、または代替的に、ＡＤＡＭ９を発現する腫瘍組織由来の参照試料を、陽性対照として使用することができる。

Claims (83)

1. がんの治療を必要とする対象における前記がんを治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することを含み、前記対象からの腫瘍試料が、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を示す、前記方法。
2. がんの治療を必要とする対象における前記がん治療の有効性を増加させる方法であって、前記対象に、治療有効量の抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することを含み、前記対象からの腫瘍試料が、増加したレベルのＡＤＡＭ９発現を示す、前記方法。
3. 前記増加したレベルのＡＤＡＭ９発現が、１つ以上の参照試料における染色強度及び／または染色均一性と比較して、ＡＤＡＭ９発現腫瘍試料における染色強度及び／または染色均一性を区別する検出方法を使用して決定される、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記検出方法が、免疫組織化学（ＩＨＣ）である、請求項３に記載の方法。
5. 前記腫瘍試料が、ホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記染色強度及び／または染色均一性が、前記腫瘍細胞の細胞質のみ、膜のみ、または細胞質と膜（細胞膜）との組み合わせにおけるＡＤＡＭ９発現について決定される、請求項３～５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記染色強度及び／または染色均一性が、前記腫瘍細胞の膜についてのみ決定される、請求項６に記載の方法。
8. 前記腫瘍試料が、５０～３００のＨスコアを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記腫瘍試料が、１００～３００のＨスコアを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記腫瘍試料が、２０１～３００のＨスコアを有する、高いＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記腫瘍試料が、１０１～２００のＨスコアを有する、中程度のＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記腫瘍試料が、１～１００のＨスコアを有する、低いＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記腫瘍試料が、ＡＤＡＭ９発現レベルについて２以上のＩＨＣ染色強度スコアを有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記腫瘍試料が、ＡＤＡＭ９発現レベルについて３以上のＩＨＣ染色強度スコアを有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項１５に記載の方法。
17. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項１５に記載の方法。
18. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ１の染色を有する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
20. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項１９に記載の方法。
21. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項１９に記載の方法。
22. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ２の染色を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
23. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
24. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項２３に記載の方法。
25. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項２３に記載の方法。
26. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ３の染色を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記がんが、肺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、腎細胞癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、頭頚部癌、子宮癌、卵巣癌、肝臓癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣癌、骨髄癌、黒色腫、及びリンパ系癌からなる群から選択される、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記がんが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、または膵臓癌である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記がんが、腺癌ＮＳＣＬＣ、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、胃癌、または結腸直腸癌である、請求項２８に記載の方法。
30. 前記１つ以上の参照試料が、組織、細胞、または細胞ペレットを含む、請求項３～２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記１つ以上の参照試料が、陰性参照試料である、請求項３０に記載の方法。
32. 前記抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、以下の式で表されるか、
    またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
    ＣＢが、抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
    Ｌ_２が、以下の式のうちのいずれか１つで表され、
    式中、
    Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｘ’及びＲ^ｙ’が、各々独立して、Ｈ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－ＳＯ_３Ｈ、－ＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋、または－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ_３ＨもしくはＮＲ_４０Ｒ_４１Ｒ_４２ ^＋で任意に置換されたＣ_１－４アルキルであり、Ｒ_４０、Ｒ_４１及びＲ_４２が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－４アルキルであり、
    ｌ及びｋが、各々独立して、１～１０の整数であり、
    Ｌ_１が、以下の式で表され、
    －ＣＲ^３Ｒ^４－（ＣＨ_２）_１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
    式中、Ｒ^３及びＲ^４が、各々独立して、ＨまたはＭｅであり、Ｌ_１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分が、Ｄに接続されており、
    Ｄが、以下の式で表され、
    ｑが、１～２０の整数である、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
33. Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’及びＲｙ’が、全てＨであり、ｌ及びｋが、各々独立して、２～６の整数である、請求項３２に記載の方法。
34. Ａが、２～５個のアミノ酸残基を含有するペプチドである、請求項３２または３３に記載の方法。
35. Ａが、プロテアーゼによって切断可能なペプチドである、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
36. Ａが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号５３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、及びＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙからなる群から選択され、各ペプチドの第１のアミノ酸が、Ｌ_２基に接続されており、各ペプチドの最後のアミノ酸が、－ＮＨ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｓ－Ｌ_１－Ｄに接続されている、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
37. Ｒ^１及びＲ^２が、両方ともＨである、請求項３２～３６のいずれか１項に記載の方法。
38. Ｌ_１が、－（ＣＨ_２）_４－６－Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項３２～３７のいずれか１項に記載の方法。
39. Ｄが、以下の式で表される、請求項３２～３８のいずれか１項に記載の方法
    
40. 前記抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片が、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片である、請求項３２～３９のいずれか１項に記載の方法。
41. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片が、配列番号１の配列を有するＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、配列番号３の配列を有するＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及び配列番号１４の配列を有するＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびに配列番号１６の配列を有するＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、配列番号１９の配列を有するＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、請求項４０に記載の方法。
42. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片が、配列番号３３の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び配列番号３５の配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、請求項４１に記載の方法。
43. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体が、配列番号４５の配列を有する重鎖、及び配列番号５０の配列を有する軽鎖を含む、請求項４１に記載の方法。
44. 前記抗ＡＤＡＭ９免疫抱合が、以下の式で表され、
    式中、
    ＣＢＡが、それぞれ配列番号１、３、及び１４、ならびに配列番号１６、１９、２０の配列を有する、ＣＤＲ_Ｈ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｈ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｈ３ドメイン、ならびにＣＤＲ_Ｌ１ドメイン、ＣＤＲ_Ｌ２ドメイン、及びＣＤＲ_Ｌ３ドメインを含む、ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片であり、
    ｑが、１または２であり、
    Ｄ_１が、以下の式で表される、請求項３２に記載の方法
    
45. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体またはそのＡＤＡＭ９結合断片が、それぞれ配列番号３３及び配列番号３５の配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、請求項４４に記載の方法。
46. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体が、それぞれ配列番号４５及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む、請求項４４に記載の方法。
47. 前記ヒト化抗ＡＤＡＭ９抗体が、それぞれ配列番号４９及び配列番号５０の配列を有する重鎖及び軽鎖を含む、請求項４４に記載の方法。
48. 前記抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、ＩＭＧＣ９３６である、請求項４４に記載の方法。
49. 抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体治療に応答する可能性が高いがんを同定する方法であって、
    （ａ）前記がんからの細胞を含む生体試料を、前記生体試料のＡＤＡＭ９タンパク質に結合する薬剤と接触させることと、
    （ｂ）（ａ）の前記生体試料のＡＤＡＭ９タンパク質に結合する前記薬剤の結合を検出することと、
    （ｃ）ステップ（ｂ）の前記結合にスコアを割り当てることであって、前記スコアが、１つ以上の参照試料との比較に基づいて割り当てられる、前記割り当てることと、
    （ｄ）ステップ（ｃ）の前記スコアを参照組織または細胞のスコアと比較することであって、正常もしくは低ＡＤＡＭ９発現参照試料のスコアよりも大きい前記がんＡＤＡＭ９レベルのスコア、または高ＡＤＡＭ９発現参照試料のスコア以上である前記がんＡＤＡＭ９レベルのスコアが、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体に応答する可能性が高い前記がんを同定する、前記比較することと、を含む、前記方法。
50. 前記がんが、肺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、腎細胞癌、前立腺癌、食道癌、乳癌、頭頚部癌、子宮癌、卵巣癌、肝臓癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣癌、骨髄癌、黒色腫、及びリンパ系癌からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
51. 前記がんが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、または膵臓癌である、請求項５０に記載の方法。
52. 前記がんが、腺癌ＮＳＣＬＣ、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌、胃癌、または結腸直腸癌である、請求項５０に記載の方法。
53. 抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療に感受性のある腫瘍を同定する方法であって、
    （ａ）前記腫瘍から得られた腫瘍組織試料におけるＡＤＡＭ９発現のレベルを測定することであって、前記測定することが、１つ以上の参照試料における染色強度または染色均一性と比較して、ＡＤＡＭ９発現がん試料における染色強度または染色均一性を区別する検出方法の使用を含む、前記測定することと、
    （ｂ）前記腫瘍組織試料のＡＤＡＭ９染色強度スコアを決定することと、
    （ｃ）ステップ（ｂ）で決定された前記ＡＤＡＭ９染色強度スコアを、少なくとも１つの参照試料中のＡＤＡＭ９タンパク質発現を測定することによって決定された相対値と比較することであって、前記少なくとも１つの参照試料が、抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体による治療に感受性ではない組織、細胞、または細胞ペレット試料であり、前記相対値よりも高い、ステップ（ｂ）で決定された前記試料のＡＤＡＭ９染色強度スコアが、前記腫瘍を前記治療に感受性であると同定する、前記比較することと、を含む、前記方法。
54. 前記検出方法が、手動で、または自動化システムを使用して実行される、請求項４９～５３のいずれか１項に記載の方法。
55. 前記検出方法が、ＩＨＣである、請求項４９～５４のいずれか１項に記載の方法。
56. 前記試料が、ホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項４９～５５のいずれか１項に記載の方法。
57. 前記染色強度及び／または染色均一性が、前記腫瘍細胞またはがん細胞の細胞質のみ、膜のみ、または細胞質と膜（細胞膜）との組み合わせにおけるＡＤＡＭ９発現について決定される、請求項５５または５６に記載の方法。
58. 前記染色強度及び／または染色均一性が、前記腫瘍細胞またはがん細胞の膜についてのみ決定される、請求項５７に記載の方法。
59. 前記試料が、５０～３００のＨスコアを有する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
60. 前記試料が、１００～３００のＨスコアを有する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
61. 前記試料が、２０１～３００のＨスコアを有する、高いＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
62. 前記試料が、１０１～２００のＨスコアを有する、中程度のＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
63. 前記試料が、１～１００のＨスコアを有する、低いＡＤＡＭ９発現レベルを有する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
64. 前記試料が、ＡＤＡＭ９発現レベルについて２以上のＩＨＣ染色強度スコアを有する、請求項５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
65. 前記試料が、ＡＤＡＭ９発現レベルについて３以上のＩＨＣ染色強度スコアを有する、請求項５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
66. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項５５～６５のいずれか１項に記載の方法。
67. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項６６に記載の方法。
68. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ１の染色を有する、請求項６６に記載の方法。
69. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％または７５％～１００％のＰＳ１の染色を有する、請求項５５～６５のいずれか１項に記載の方法。
70. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項５５～６９のいずれか１項に記載の方法。
71. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項７０に記載の方法。
72. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ２の染色を有する、請求項７０に記載の方法。
73. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％、または７５％～１００％のＰＳ２の染色を有する、請求項７０に記載の方法。
74. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項５５～７３のいずれか１項に記載の方法。
75. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項７４に記載の方法。
76. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＰＳ３の染色を有する、請求項７４に記載の方法。
77. 前記腫瘍試料が、２５％～４９％、５０％～７４％、または７５％～１００％のＰＳ３の染色を有する、請求項７４に記載の方法。
78. 前記がんまたは腫瘍を有する対象に、治療有効量の前記抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体を投与することをさらに含む、請求項４９～７７のいずれか１項に記載の方法。
79. 前記抗ＡＤＡＭ９免疫抱合体が、請求項３２～４８のいずれか１項に定義されるとおりである、請求項４９～７８のいずれか１項に記載の方法。
80. 前記腫瘍試料が、１％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を有する、請求項１～７、２７～５８、７８及び７９のいずれか１項に記載の方法。
81. 前記腫瘍試料が、２５％以上のＴＰＳを有する、請求項８０に記載の方法。
82. 前記腫瘍試料が、５０％以上のＴＰＳを有する、請求項８０に記載の方法。
83. 前記腫瘍試料が、７５％以上のＴＰＳを有する、請求項８０に記載の方法。