JP2024508949A - Ｐｄ－１標的化ｉｌ－２変異体イムノコンジュゲートとｆａｐ／４－１ｂｂ結合分子との併用療法 - Google Patents

Ｐｄ－１標的化ｉｌ－２変異体イムノコンジュゲートとｆａｐ／４－１ｂｂ結合分子との併用療法 Download PDF

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サラ コロンベッティ，
クリスティアン クライン，
ヴァレリア ジー． ニコリーニ，
マリオ ペロ，
ヨハネス サム，
クリスティーン トランプフェラー，
パブロ ウマーニャ，
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Abstract

本発明は、特異的ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、ヒトＦＡＰおよび４－１ＢＢに結合する特異的抗体との、および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との、併用療法に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとヒトＦＡＰおよび４－１ＢＢに結合する抗原結合分子との併用療法に関する。併用には、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体、好ましくはシビサタマブが追加されてもよい。
がんは先進国において死因の第１位であり、発展途上国において死因の第２位である。最近の化学療法の進歩、ならびに分子レベルでがん細胞における増殖シグナルの伝達および調節を妨害することを目標とした薬剤の開発にもかかわらず、進行がん患者の予後は一般に不良なままである。その結果、許容できない毒性を引き起こさずに生存率を高めるために既存の治療法に追加できる新しい治療法を開発するという持続的かつ緊急の医療ニーズがある。
インターロイキン２（ＩＬ－２）は、リンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するサイトカインである。ＩＬ－２は抗腫瘍活性を有することが示されているが、ＩＬ－２の高いレベルは肺毒性を引き起こし、ＩＬ－２の抗腫瘍活性は、多数の阻害性フィードバックループによって制限される。
その抗腫瘍有効性に基づいて、高用量のＩＬ－２（アルデスロイキン、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で販売）治療法は、米国では転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）および悪性メラノーマの患者で、欧州連合では転移性ＲＣＣ患者で使用するために承認されている。しかしながら、ＩＬ－２の作用機序の結果として、ＩＬ－２の全身および非標的適用は、Ｔｒｅｇ細胞およびＡＩＣＤの誘導を介して抗腫瘍免疫にかなり悪影響を及ぼし得る。ＩＬ－２の全身治療のさらなる懸念は、静脈内投与の際の重篤な副作用に関するものであり、これらには、重篤な心血管、肺水腫、肝臓、胃腸（ＧＩ）、神経学的、および血液学的事象が挙げられる（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）製品特性概要［ＳｍＰＣ］：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｅｍｃ／ｍｅｄｉｃｉｎｅ／１９３２２／ＳＰＣ／（ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｙ ２７，２０１３））。低用量のＩＬ－２レジメンは、患者で試験されているが、治療結果は最適には及ばない。まとめると、ＩＬ－２を利用する治療的アプローチは、その適用に関連する短所を克服できるならば、がん療法に有用であり得る。ＰＤ－１標的化抗原結合部分およびＩＬ－２ベースのエフェクター部分を含むイムノコンジュゲートが、例えば、国際公開第２０１８／１８４９６４Ａ１号に記載されている。
プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１またはＣＤ２７９）は、受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害メンバーであり、これには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含まれる。ＰＤ－１は、細胞表面受容体であり、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、および骨髄細胞上で発現される（Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３９１７７９－８２；Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：７１１－８）。ＰＤ－１の構造は、１つの免疫グロブリン可変様細胞外ドメインと、免疫受容体チロシン－ベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシン－ベーススイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する細胞質ドメインとからなる単量体型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－１に対する２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２が同定されており、これらはＰＤ－１への結合時にＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の両方ともＰＤ－１に結合するが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーには結合しないＢ７ホモログである。ＰＤ－１に対する１つのリガンドのＰＤ－Ｌ１は、さまざまなヒトのがんにおいて豊富にある（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ ８：７８７－９）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介増殖の減少、およびがん細胞による免疫回避をもたらす（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４－１００）。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との局所相互作用を阻害することによって逆転させることができ、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２の相互作用も同様にブロックされると、効果は相加的である（Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ ７．Ａｃａｄ．Ｓｃｌ ＵＳＡ ９９：１２２９３－７；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７－６６）。ＰＤ－１に結合する抗体は、例えば、国際公開第２０１７／０５５４４３号に記載されている。
ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）は、Ｔ細胞による活性化によって発現される誘導性分子として最初に同定された（Ｋｗｏｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｓｍａｎ，１９８９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６，１９６３－１９６７）。その後の研究により、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、好中球、マスト細胞、樹状細胞（ＤＣ）ならびに内皮および平滑筋細胞などの非造血起源の細胞を含む多くの他の免疫細胞も４－１ＢＢを発現することが実証された（Ｖｉｎａｙ ａｎｄ Ｋｗｏｎ，２０１１，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８，２８１－２８４）。異なる細胞型における４－１ＢＢの発現は、主に誘導性であり、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＢ細胞受容体トリガーなどのさまざまな刺激性シグナル、ならびに共刺激分子または炎症誘発性サイトカインの受容体を介して誘発されるシグナル伝達によって駆動される（Ｄｉｅｈｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８，３７５５－３７６２；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３，２７５８－２７６７）。
４－１ＢＢのリガンド（４－１ＢＢＬまたはＣＤ１３７Ｌ）は、１９９３年に同定された（Ｇｏｏｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３，２６３１－２６４１）。４－１ＢＢＬの発現は、Ｂ細胞、ＤＣおよびマクロファージなどのプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって制限されることが示されている。４－１ＢＢＬの誘導性発現は、 Ｔ細胞および Ｔ細胞サブセットの両方を含むＴ細胞に、ならびに内皮細胞に特徴的である（Ｓｈａｏ ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚ，２０１１，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８９，２１－２９）。
４－１ＢＢ受容体を通しての共刺激（例えば、４－１ＢＢＬによるライゲーション）は、Ｔ細胞内の多数のシグナル伝達カスケード（ＣＤ４＋およびＣＤ８＋サブセットの両方）を活性化し、Ｔ細胞の活性化を強力に増加させる（Ｂａｒｔｋｏｗｉａｋ ａｎｄ Ｃｕｒｒａｎ，２０１５）。ＴＣＲをトリガーし、アゴニストな４－１ＢＢ特異的抗体との併用は、Ｔ細胞の増殖を増強し、リンホカイン分泌を刺激し、活性化誘導細胞死に対するＴリンパ球の感度を減少させる（Ｓｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２４４，１９７－２１７）。このメカニズムは、がん免疫療法における最初の概念実証としてさらに進歩した。前臨床モデルにおいて、腫瘍担持マウスにおける４－１ＢＢに対するアゴニスト抗体の投与は、強力な抗腫瘍効果をもたらした（Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ Ｍｅｄ ３，６８２－６８５）。その後の累積証拠は、４－１ＢＢは、通常、他の免疫調節化合物、化学療法薬剤、腫瘍特異的ワクチン接種または放射線治療と併用して投与される場合だけ抗腫瘍剤としてその効力を発揮することを示した。
ＴＮＦＲスーパーファミリーのシグナル伝達は、受容体と連結するために三量体化リガンドの架橋結合が必要であるため、４－１ＢＢアゴニスト抗体は、野生型Ｆｃ結合が必須となる（Ｌｉ ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃｈ，２０１１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３，１０３０－１０３４）。しかしながら、機能的に活性なＦｃドメインを有する４－１ＢＢ特異的アゴニスト抗体の全身投与は、肝臓毒性に関連するＣＤ８＋Ｔ細胞の流入をもたらす（Ｄｕｂｒｏｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５９，１２２３－１２３３）が、これは、マウスにおいて機能的Ｆｃ受容体の非存在下では、減少するか、大幅に改善される。臨床試験では、Ｆｃコンピテント４－１ＢＢアゴニストＡｂ（ＢＭＳ－６６３５１３）（ＮＣＴ００６１２６６４）はグレード４の肝炎を引き起こし、治験の中止をもたらした（Ｓｉｍｅｏｎｅ ａｎｄ Ａｓｃｉｅｒｔｏ，２０１２，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ ９，２４１－２４７）。したがって、効果的かつより安全な４－１ＢＢアゴニストが必要である。
４－１ＢＢリガンドの１つの細胞外ドメインと単鎖抗体断片とから構成される融合タンパク質（Ｈｏｒｎｉｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３５，４１８－４２９；Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３１，７１４－７２２）または重鎖のＣ末端に融合した単一の４－１ＢＢリガンドから構成される融合タンパク質（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３，２７５８－２７６７）が作製されている。国際公開第２０１０／０１００５１号は、互いに結合し、抗体部分に融合された３つのＴＮＦリガンドエクトドメインからなる融合タンパク質の生成を開示している。国際公開第２０１６／０７５２７８号および国際公開第２０１６／１５６２９１号は、４－１ＢＢに特異的な抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原ＦＡＰに特異的な抗原結合ドメインと、特に安定かつロバストであることが示されているＦｃ不活性ドメインから構成される抗原結合分子を開示している。４－１ＢＢ特異的結合ドメインは、三量体であり、従って生物学的に活性なヒト４－１ＢＢリガンドを含むが、三量体化４－１ＢＢＬエクトドメインのうちの１つは、分子の他の２つの４－１ＢＢＬエクトドメインとは別のポリペプチド上に位置している。ＦＡＰ抗原結合ドメインは、ＦＡＰを標的とする特異的架橋によってＦｃを介した毒性の原因となる非特異的なＦｃ Ｒを介した架橋に置き換わる。
Ｔ細胞二重特異性抗体のシビサタマブ（ＲＧ７８０２、ＲＯ６９５８６８８、ＣＥＡ－ＴＣＢ）は、腫瘍細胞上のがん胎児性抗原（ＣＥＡ）およびＴ細胞上のＣＤ３を標的化する新規なＴ細胞活性化二重特異性抗体であり、Ｔ細胞を、それらのＴ細胞受容体特異性とは独立して細胞表面でＣＥＡ糖タンパク質を発現する腫瘍細胞にリダイレクトする（Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１６；５（８）：１－３０）。Ｔ細胞リダイレクト二重特異性抗体の主な利点は、それらがネオアンチゲンのロードとは独立してＴ細胞によるがん細胞認識を媒介することである。ＣＥＡは、多くの結腸直腸がん（ＣＲＣ）の細胞表面上で過剰発現されるので、シビサタマブは、非超突然変異したマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）ＣＲＣに対する有望な免疫療法剤である。
シビサタマブは、Ｔ細胞上のＣＤ３イプシロン鎖に対する単一の結合部位と、中程度から高いＣＥＦ細胞表面発現を有するがん細胞に対する結合親和性（ａｖｉｄｉｔｙ）を調整する２つのＣＥＡ結合部位を有する（Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６２２（１３）：３２８６－９７）。これは、一部の組織に生理学的に存在する低いＣＥＡ発現レベルを有する健康な上皮細胞を標的化することを回避する。シビサタマブのがん細胞の表面上のＣＥＡへの結合およびＴ細胞上のＣＤ３への結合は、Ｔ細胞活性化、サイトカイン分泌および細胞傷害性顆粒放出を誘発する。少なくとも２つの以前の化学療法レジメンが無効であったＣＥＡ発現転移性ＣＲＣを有する患者におけるシビサタマブの第Ｉ相治験は、単剤療法で処置した患者またはＰＤ－Ｌ１阻害抗体との併用で処置した患者の、それぞれ１１％（４／３６）および５０％（５／１０）で放射線による収縮を伴う抗腫瘍活性を示した（Ａｒｇｉｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１７ Ｊｕｎ １；２８（ｓｕｐｐｌ＿３）：ｍｄｘ３０２．００３－ｍｄｘ３０２．００３；Ｔａｂｅｒｎｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１７ Ｍａｙ ２０；３５（１５＿ｓｕｐｐｌ）：３００２）。これらの結果に基づくと、ＣＥＡは、ＭＳＳ ＣＲＣにおける免疫療法に最も有望な標的抗原のうちの１つである。この用量漸増治験における一部の患者は、最終推奨用量を下回る用量で処置されたが、それでも奏功率は、腫瘍のサブグループが治療に耐性があることを示している。
本発明は、がんの治療において併用療法として使用するための、転移の予防もしくは治療において併用療法として使用するための、またはＴ細胞活性などの免疫応答もしくは機能の刺激において併用療法として使用するための、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との併用療法であって、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との併用療法を含む。
本発明の一態様では、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療で使用するためのものであり得る。
本発明の一態様では、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子の抗体成分が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする。
一態様では、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、抗体成分が低減したまたは最小限のエフェクター機能を有することを特徴とする。一態様では、最小限のエフェクター機能は、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する。さらなる態様では、エフェクターレスＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。
一態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド、またはｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
別の態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド、またはｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、ｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、またはｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含む、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／またはｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上において使用するためのＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、ＰＤ－１が、免疫細胞、特にＴ細胞上に、または腫瘍細胞環境中に存在し、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、ｉｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、ｉ）配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列、ｉｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３のポリペプチド配列を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
さらなる態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、組み合わせが、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の投与をさらに含む、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
好ましいさらなる態様では、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、シビサタマブである。
一態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、患者が、免疫療法で治療されているか、または前治療されている、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。別の態様では、前記免疫療法は、養子細胞移植、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞エンゲージング療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
さらなる態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、養子細胞移植が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との併用治療は、抗腫瘍有効性を推進する。ビヒクル、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢまたはｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢで処置した４３日までの腫瘍体積中央値（ｍｍ３＋／－ＣＩ ９５％）を示している。 ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との併用治療は、抗腫瘍有効性を推進する。各動物についての２１日目での処置の開始時と比較した４３日目での腫瘍体積における変化を（％で）示している。 ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との併用治療は、抗腫瘍有効性を推進する。低腫瘍サイズのバイナリ読み出しを提供する、５０ｍｍ３を下回る（腫瘍＜５０ｍｍ３）および５０ｍｍ３を上回る（腫瘍＞５０ｍｍ３）の最後に観察された腫瘍体積を有する動物の割合を示している。 生存グラフとして表されたイベント（６００ｍｍ３の腫瘍サイズ）までの時間を示す、ビヒクル、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢおよびｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢで処置した動物の治療奏功率である。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との組み合わせは、２９日目でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる。図３Ａおよび図３Ｂは、それぞれ、２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での腫瘍組織の１ミリグラム当たりの総ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均（＋／－ＳＥＭ）を示している。統計：一元配置分散分析多重比較、補正なしフィッシャーのＬＳＤ検定＊ｐ＜０．０５。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との組み合わせは、２９日目でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる。図３Ｃおよび図３Ｄは、それぞれ、２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での腫瘍組織の１ミリグラム当たりの総ＦｏｘＰ３＋Ｔ制御性細胞の平均（＋／－ＳＥＭ）を示している。統計：一元配置分散分析多重比較、補正なしフィッシャーのＬＳＤ検定＊ｐ＜０．０５。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－／４－１ＢＢ結合分子との組み合わせは、２９日目でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる。図３Ｅおよび図３Ｆは、それぞれ、２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での各処置群のＣＤ８＋Ｔ細胞対Ｔｒｅｇ比の平均（＋／－ＳＥＭ）を示している。統計：一元配置分散分析多重比較、補正なしフィッシャーのＬＳＤ検定＊ｐ＜０．０５。 ＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子とＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、ＣＥＡ－ＴＣＢ単独での治療と比較して腫瘍防御を改善する。腫瘍細胞の接種後４３日目までの腫瘍体積中央値（ｍｍ３＋／－ＣＩ９５％）を示している。動物を、ビヒクル、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢまたはｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４１－ＢＢで処置した。 ＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子とＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、ＣＥＡ－ＴＣＢ単独での治療と比較して腫瘍防御を改善する。腫瘍体積曲線を、図４Ｂのビヒクル群、図４ＣのｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ群、図４ＤのｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ群、図４ＥのｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢおよび図４ＦのｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１－ＢＢ群の動物について示している。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ結合分子とｍｕＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞対Ｔｒｅｇ比を増加させる。各処置群の２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での腫瘍組織の１ミリグラム当たりの総ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均（＋／－ＳＥＭ）を示している。動物を、ビヒクル、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢまたはｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢで処置した処置群間の一元配置ＡＮＯＶＡ多重比較を補正なしで実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊＊ｐ＜０．００００１）。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ結合分子とｍｕＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞対Ｔｒｅｇ比を増加させる。２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での腫瘍組織の１ミリグラム当たりの総ＦｏｘＰ３＋Ｔ制御性細胞の平均（＋／－ＳＥＭ）を示している。処置群間の一元配置ＡＮＯＶＡ多重比較を補正なしで実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊＊ｐ＜０．００００１）。 ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ結合分子とｍｕＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞対Ｔｒｅｇ比を増加させる。２９日目（スカウト）および４３日目（終了時）での各群のＣＤ８＋対Ｔｒｅｇ細胞比（＋／－ＳＥＭ）を示している。処置群間の一元配置ＡＮＯＶＡ多重比較を補正なしで実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊＊ｐ＜０．００００１）。 腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積である。２次元空間で示される腫瘍塊の３Ｄ多重化共焦点画像からのＣＤ８＋Ｔ細胞の位置データを示している。 腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積である。腫瘍の端までの距離によるＣＤ８＋Ｔ細胞の数の頻度グラフを示している。各分割された腫瘍の端までのＣＤ８ Ｔ細胞をＩＭＡＲＩＳで計算し、細胞を１０マイクロメートルごとにビニングした。 腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積である。図６Ｃは、各処置群について（群当たり２つの試料）４３日目での腫瘍の端から０～２５０μｍおよび２５０～１０００μｍの範囲内のＣＤ８ Ｔ細胞の平均数を示している。ダネットの多重比較検定による一元配置ＡＮＯＶＡを実施した（＊＊ｐ＜０．０１）。 腫瘍細胞注射後５８日目までのビヒクル、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＦＡＰ－ＣＤ４０およびｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－ＣＤ４０で処置した動物の平均腫瘍体積（ｍｍ３＋／－ＳＥＭ）を示している。 腫瘍体積曲線を、図７Ｂのビヒクル群、図７ＣのｍｕＦＡＰ－ＣＤ４０群、図７ＤのｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ群、および図７ＥのｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－ＣＤ４０群の動物について示している。テューキーの多重比較補正による一元配置ＡＮＯＶＡを実施した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
ＩＬ－２経路
ＩＬ－２のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでリンパ球とＮＫ細胞集団の両方を増殖および活性化させる能力は、ＩＬ－２の抗腫瘍効果を説明している。しかしながら、過度の免疫応答および潜在的な自己免疫を防ぐための調節機構として、ＩＬ－２は活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）をもたらし、活性化Ｔ細胞をＦａｓ媒介アポトーシスの影響を受け易くする。
さらに、ＩＬ－２は、末梢ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の維持および増大に関与している（Ｆｏｎｔｅｎｏｔ ＪＤ，Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ＪＰ，Ｇａｖｉｎ ＭＡ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｉｎ Ｆｏｘｐ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；６：１１４２－１１５１；Ｄ’Ｃｒｕｚ ＬＭ，Ｋｌｅｉｎ Ｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｏｎｉｓｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＣＤ２５＋ Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；６：１１５２ １１５９；Ｍａｌｏｙ ＫＪ，Ｐｏｗｒｉｅ Ｆ．Ｆｕｅｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：Ｌ－２ ｋｅｅｐｓ ＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ ｃｅｌｌｓ ｆｉｔ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；６：１０７１－１０７２）。これらの細胞は、細胞間接触を通してまたはＩＬ－１０などの免疫抑制サイトカインもしくはトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）－βの放出を通して、エフェクターＴ細胞が自己または標的を破壊するのを抑制する。Ｔｒｅｇ細胞の枯渇は、ＩＬ－２誘導抗腫瘍免疫を向上させることが示された（Ｉｍａｉ Ｈ，Ｓａｉｏ Ｍ，Ｎｏｎａｋａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．２００７；９８：４１６－４２３）。
ＩＬ－２はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞の一次および二次増大中のメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の分化において重要な役割を果たす。ＩＬ－２は、一次抗原チャレンジ後のエフェクター機能の最適な増大および生成に関与すると思われる。アポトーシスによって大部分の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が消失する免疫応答の収縮期中に、ＩＬ－２シグナルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を細胞死から救済し、メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の持続的な増加を提供することができる。記憶期において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度は、外因性ＩＬ－２の投与によって上昇させることができる。さらに、初期プライミング中にＩＬ－２シグナルを受信したＣＤ８＋Ｔ細胞だけが、新たな抗原チャレンジ後の効率的な二次増大を媒介することができる。したがって、免疫応答のさまざまな段階中のＩＬ－２シグナルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞機能を最適化する上で重要であり、それによって、これらのＴ細胞の一次および二次応答の両方に影響を与える（Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ．２０１０；６８４：２８－４１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｉｎ ｍｅｍｏｒｙ ＣＤ８ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｂｏｙｍａｎ Ｏ１，Ｃｈｏ ＪＨ，Ｓｐｒｅｎｔ Ｊ）。
その抗腫瘍有効性に基づいて、高用量のＩＬ－２（アルデスロイキン、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で販売）治療法は、米国では転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）および悪性メラノーマの患者で、欧州連合では転移性ＲＣＣ患者で使用するために承認されている。しかしながら、ＩＬ－２の作用機序の結果として、ＩＬ－２の全身および非標的適用は、Ｔｒｅｇ細胞およびＡＩＣＤの誘導を介して抗腫瘍免疫にかなり悪影響を及ぼし得る。ＩＬ－２の全身治療のさらなる懸念は、静脈内投与の際の重篤な副作用に関するものであり、これらには、重篤な心血管、肺水腫、肝臓、胃腸（ＧＩ）、神経学的、および血液学的事象が挙げられる（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ［ＳｍＰＣ］：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｅｍｃ／ｍｅｄｉｃｉｎｅ／１９３２２／ＳＰＣ／（ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｙ ２７，２０１３））。低用量のＩＬ－２レジメンは、患者で試験されているが、治療結果は最適には及ばない。まとめると、ＩＬ－２を利用する治療的アプローチは、その適用に関連する短所を克服できるならば、がん療法に有用であり得る。
ＰＤ－１標的化抗原結合部分および例えば、突然変異体ＩＬ－２を含むＩＬ－２ベースのエフェクター部分を含むイムノコンジュゲートが、例えば、国際公開第２０１８／１８４９６４Ａ１号に記載されている。
特に、突然変異体ＩＬ－２（例えば、ＩＬ－２ｑｍとして知られる四重突然変異体）は、ＩＬ－２Ｒαサブユニット（ＣＤ２５）への結合を排除することによって、野生型ＩＬ－２（例えば、アルデスロイキン）または第１世代ＩＬ－２ベースのイムノコンジュゲートの限界を克服するように設計されている。この突然変異体ＩＬ－２ｑｍは、国際公開第２０１２／１４６６２８号および国際公開第２０１２／１０７４１７号に記載される、ＣＥＡに対するヒト化抗体およびＦＡＰに対する抗体などのさまざまな腫瘍標的化抗体に連結されている。加えて、抗体のＦｃ領域は、Ｆｃγ受容体およびＣ１ｑ複合体への結合を妨害するように改変されている。得られた腫瘍標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート（例えば、ＣＥＡ標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート）は、腫瘍細胞を排除することができることが、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ実験で非臨床的に示されている。
したがって、得られたイムノコンジュゲートは、ＩＬ－２Ｒαサブユニット（ＣＤ２５）への結合を排除することによって、ＩＬ－２の短所に対処する標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートのクラスに相当する：
野生型ＩＬ－２およびＩＬ－２変異体の特性
Figure 2024508949000001
「ＩＬ－２」または「ヒトＩＬ－２」という用語は、野生型および、例えば、ジスルフィド架橋されたＩＬ－２二量体の形成を回避するためにＣ１２５Ａ置換を有する配列番号３に示されるような、野生型ＩＬ－２のアミノ酸配列中に１つ以上の突然変異を含む変異体が含まれるヒトＩＬ－２タンパク質を指す。ＩＬ－２はまた、Ｎ－および／またはＯ－グリコシル化部位を除去するために変異されてもよい。
ＰＤ－１経路
重要な負の共刺激シグナル調節Ｔ細胞活性化は、プログラム細胞死－１受容体（ＰＤ－１）（ＣＤ２７９）、およびそのリガンド結合パートナーＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、ＣＤ２７４）ならびにＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ、ＣＤ２７３）によって提供される。ＰＤ－１の負の調節の役割は、自己免疫を起こしやすいＰＤ－１ノックアウト（Ｐｄｃｄ１－１／－）によって明らかになった。Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １１：１４１－５１（１９９９）；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９１：３１９－２２（２００１）。ＰＤ－１はＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４に関連しているが、ホモ二量体化を可能にする膜近接システインは欠いている。ＰＤ－１の細胞質ドメインは、免疫受容体チロシン－ベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ、Ｖ／ＩｘＹｘｘＬ／Ｖ）を含有する。ＰＤ－１はＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２だけに結合する。Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１－９（２０００）；Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．５：１３６５－１３６９（１９９９）；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６１－２６８（２００１）；Ｔｓｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３：８３９－８４６（２００１）。
ＰＤ－１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、活性化単球および樹状細胞（ＤＣ）上で発現され得る。ＰＤ－１は、活性化されているが、非刺激のヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋のＴ細胞、Ｂ細胞および骨髄性細胞によって発現される。これは、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４のより制限された発現とは対照的である（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７７３－８０（１９９６）；Ｂｏｅｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８０：３５３２－４０（２００６））。（ｉ）エクソン２、（ｉｉ）エクソン３、（ｉｉｉ）エクソン２と３、または（ｉｖ）エクソン２～４を欠いている転写物を含む、活性化ヒトＴ細胞からクローニングされたＰＤ－１の少なくとも４つの変異体がある（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ．２３５：１０９－１６（２００５））。ＰＤ－１ Δｅｘ３を除いて、全ての変異体は、休止末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中で完全長ＰＤ－１として同様なレベルで発現される。全ての変異体の発現は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８によるヒトＴ細胞の活性化の際に大幅に誘導される。ＰＤ－１ Δｅｘ３変異体は、膜貫通ドメインを欠如し、可溶型ＣＴＬＡ－４に似ており、自己免疫において重要な役割を果たす（Ｕｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４２３：５０６－１１（２００３））。この変異体は、関節リウマチの患者の滑液および血清中に豊富に含まれている。Ｗａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：８８４４－５０（２００６）。
２つのＰＤ－１リガンドは、それらの発現パターンが異なる。ＰＤ－Ｌ１は、マウスＴおよびＢ細胞、ＣＤ、マクロファージ、間葉系幹細胞、ならびに骨髄由来マスト細胞上で構成的に発現される（Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５５３８－４５（２００２））。ＰＤ－Ｌ１は、広範囲の非造血細胞（例えば、角膜、肺、血管上皮、肝臓非実質細胞、間葉系幹細胞、膵島、胎盤合胞体栄養細胞、ケラチノサイトなど）上で発現され（Ｋｅｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７－７０４（２００８））、活性化後に多数の細胞型で上方制御される。Ｉ型およびＩＩ型インターフェロンＩＦＮの両方とも、ＰＤ－Ｌ１を上方制御する（Ｅｐｐｉｈｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９：１３３－４５（２００２）；Ｓｃｈｒｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１７２－８２（２００４））。細胞株中のＰＤ－Ｌ１の発現は、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ６およびＭＥＫが阻害される場合に減少される（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１０：２９６－３０４（２００７））。ＪＡＫ２はまた、ＰＤ－Ｌ１誘導に関与していた（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５８０：７５５－６２（２００６）；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１０：２９６－３０４（２００７））。ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）およびＡｋｔシグナル伝達を変更する細胞内ホスファターゼであるホスファターゼ・テンシン・ホモログ（ＰＴＥＮ）の喪失または阻害は、がんにおける転写後ＰＤ－Ｌ１発現を増加させた（Ｐａｒｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１３：８４－８８（２００７））。
ＰＤ－Ｌ２の発現は、ＰＤ－Ｌ１よりも制限されている。ＰＤ－Ｌ２は、ＤＣ、マクロファージ、および骨髄由来マスト細胞上で誘導的に発現される。ＰＤ－Ｌ２はまた、休止腹膜Ｂ１細胞のおよそ半分から３分の２で発現されるが、従来のＢ２細胞出は発現されない（Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２４０５－１０（２００７）。ＰＤ－Ｌ２＋Ｂ１細胞はホスファチジルコリンに結合し、細菌抗原に対する自然免疫応答に重要であり得る。ＩＦＮ－ガンマによるＰＤ－Ｌ２の誘導は、ＮＦ－κＢに部分的に依存する（Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：２７０６－１６（２００３））。ＰＤ－Ｌ２はまた、ＧＭ－ＣＦ、ＩＬ－４およびＩＦＮ－ガンマによって単球およびマクロファージ上で誘導され得る（Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５５３８－４５（２００２）；Ｌｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １００：５３３６－４１（２００３））。
ＰＤ－１シグナル伝達は、典型的には、細胞増殖に対してよりもサイトカイン産生に対してより大きな影響を有し、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファおよびＩＬ－２の産生に対して大きな影響を有する。ＰＤ－１媒介阻害性シグナル伝達はまた、ＴＣＲシグナル伝達の強さにも依存し、低レベルのＴＣＲ刺激でより大きな阻害がもたらされる。この低減は、ＣＤ２８による共刺激（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７－３４ （２０００））またはＩＬ－２の存在（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４－４３（２００２））によって克服することができる。
ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２を介したシグナル伝達が双方向性であり得るという証拠が増えつつある。すなわち、ＴＣＲまたはＢＣＲシグナル伝達を変更することに加えて、シグナル伝達は、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２を発現する細胞に再び返送することもできる。ヴァルデンストレームマクログロブリン血症の患者から分離された天然のヒト抗ＰＤ－Ｌ２抗体による樹状細胞の処置は、ＭＨＣ ＩＩまたはＢ７の共刺激分子を上方制御することは見出されなかったが、そのような細胞は、より多くの量の炎症誘発性サイトカイン、特にＴＮＦ－アルファとＩＬ－６を生成し、Ｔ細胞の増殖を刺激した（Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９６：１３９３－９８（２００２））。この抗体によるマウスの処置はまた、（１）移植されたｂ１６メラノーマに対する抵抗性を増強させ、腫瘍特異的ＣＴＬを急速に誘発させ（Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１８３０－３８（２００３）；Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：４９６５－７２（２００４）；Ｈｅｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：１８２７－３５（２００７））、（２）アレルギー喘息のマウスモデルにおける気道炎症性疾患の発症をブロックした（Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：１３６０－６５（２００４）；Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：６６８－７４（２００５））。
樹状細胞（「ＤＣ」）への逆シグナル伝達のさらなる証拠は、可溶型ＰＤ－１（Ｉｇ定常領域に融合されたＰＤ－１ ＥＣドメイン－「ｓ－ＰＤ－１」）と共に培養した骨髄由来ＤＣの研究から得られている（Ｋｕｉｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：２４７２－８２（２００６））。このｓＰＤ－１は、抗ＰＤ－１の投与を通して可逆的な方法で、ＤＣ活性化を阻害し、ＩＬ－１０産生を増加させた。
さらに、いくつかの研究は、ＰＤ－１から独立したＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する受容体を示している。Ｂ７．１は、ＰＤ－Ｌ１に対する結合パートナーとして既に特定されている（Ｂｕｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２７：１１１－２２（２００７））。化学架橋の研究は、ＰＤ－Ｌ１とＢ７．１とが、それらのＩｇＶドメインを通して相互作用することができることを示唆している。Ｂ７．１：ＰＤ－Ｌ１相互作用は、Ｔ細胞に阻害性シグナルを誘発させることができる。Ｂ７．１によるＣＤ４＋Ｔ細胞上のＰＤ－Ｌ１のライゲーションまたはＰＤ－Ｌ１によるＣＤ４＋Ｔ細胞上のＢ７．１のライゲーションは、阻害性シグナルを送達する。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４を欠いている細胞は、抗ＣＤ３プラスＢ７．１でコーティングされたビーズによって刺激されると、増殖およびサイトカイン産生の減少を示す。Ｂ７．１に対する全ての受容体（すなわち、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１）を欠いているＴ細胞において、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生は、抗ＣＤ３プラスＢ７．１でコーティングされたビーズによってはもはや阻害されなかった。このことにより、Ｂ７．１は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４の非存在下でＴ細胞上のＰＤ－Ｌ１を通して特異的に作用することが示されている。同様に、ＰＤ－１を欠いているＴ細胞は、抗ＣＤ３プラスＰＤ－Ｌ１でコーティングされたビーズの存在下で刺激されると、増殖およびサイトカイン産生の減少を示しており、Ｔ細胞上のＢ７．１に対するＰＤ－Ｌ１ライゲーションの阻害効果を実証している。ＰＤ－Ｌ１に対する全ての既知の受容体を欠いている（すなわち、ＰＤ－１およびＢ７．１がない）Ｔ細胞において、Ｔ細胞増殖は、抗ＣＤ３プラスＰＤ－Ｌ１でコーティングされたビーズによってはもはや損なわれなかった。したがって、ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ７．１またはＰＤ－１のいずれかを通してＴ細胞に対する阻害効果を発揮し得る。
Ｂ７．１とＰＤ－Ｌ１との間の直接相互作用は、共刺激の現時点での理解が不完全であり、これらの分子のＴ細胞上での発現の重要性を強調している。ＰＤ－Ｌ１－／－Ｔ細胞の研究は、Ｔ細胞上のＰＤ－Ｌ１が、Ｔ細胞サイトカインの産生を下方制御することができることを示している（Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１：１０６９１－９６（２００４））。ＰＤ－Ｌ１とＢ７．１の両方ともＴ細胞、Ｂ細胞、ＤＣおよびマクロファージ上で発現されるので、これらの細胞型では、Ｂ７．１とＰＤ－Ｌ１との間の指向性を有する相互作用の可能性がある。さらに、非造血細胞上のＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞上のＢ７．１ならびにＰＤ－１と相互作用する場合があり、ＰＤ－Ｌ１がそれらの調節に関与しているかどうかという問題を提起する。Ｂ７．１：ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害効果についての１つの考えられる説明は、Ｔ細胞ＰＤ－Ｌ１が、ＡＰＣ Ｂ７．１を捕捉するか、またはＣＤ２８との相互作用から隔離することができるということである。
その結果、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１、Ｂ７．１のいずれか、またはその両方との相互作用からのブロッキング、それによるＰＤ－Ｌ１のＴ細胞および他の抗原提示細胞への負の共刺激シグナルを送ることの妨害を含む、ＰＤ－Ｌ１を通してのシグナル伝達の拮抗作用は、感染症（例えば、急性および慢性）に応答する免疫ならびに腫瘍免疫を高める可能性が高い。加えて、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－１：ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の他の成分のアンタゴニスト、例えば、抗ＰＤ－１および抗ＰＤ－Ｌ２抗体のアンタゴニストと組み合わせてもよい。
ＩＬ－２のリンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を増大させ活性化させる能力は、ＩＬ－２の抗腫瘍活性が根底にある。ＩＬ－２のＩＬ－２αサブユニット（ＣＤ２５）への結合を排除するように設計されたＩＬ－２突然変異体は、腫瘍標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートの一部として、例えば、ＣＥＡ標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートまたはＦＡＰ標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートの一部として、腫瘍細胞を排除することができることが示されている。
イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子
本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ＰＤ－１発現免疫細胞、特にＴ細胞上の、または腫瘍細胞環境においてＰＤ－１に結合する抗体、またはその抗原結合断片と、ＩＬ－２突然変異体、特にＩＬ－２受容体のα－サブユニットに対して低減した結合親和性を有する（野生型ＩＬ－２、例えば、配列番号４として示されるヒトＩＬ－２と比較して）ヒトＩＬ－２の突然変異体、例えば、ｉ）配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基４２、４５および７２に対応する位置から選択される１つ、２つまたは３つの位置で、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換、例えば、特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むＩＬ－２、またはｉｉ）ｉ）に記載された特徴に加えて、配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基３に対応する位置でアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａを含むＩＬ－２、またはｉｉｉ）配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基３、４２、４５および７２に対応する位置で４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むＩＬ－２と、を含む。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、免疫細胞、特にＴ細胞上の、または腫瘍細胞環境においてＰＤ－１に結合する抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン、および２つのサブユニットからなり、かつ２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾を含むＦｃドメインと、ＩＬ－２突然変異体、特にＩＬ－２受容体のα－サブユニットに対して低減した結合親和性を有する（野生型ＩＬ－２、例えば、配列番号４として示されるヒトＩＬ－２と比較して）ヒトＩＬ－２の突然変異体、例えば、ｉ）配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基４２、４５および７２に対応する位置から選択される１つ、２つまたは３つの位置で、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換、例えば、特定のアミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むＩＬ－２、またはｉｉ）ｉ）に記載された特徴に加えて、配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基３に対応する位置でアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａを含むＩＬ－２、またはｉｉｉ）配列番号４として示されるヒトＩＬ－２の残基３、４２、４５および７２に対応する位置で４つのアミノ酸置換、例えば特定のアミノ酸置換Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むＩＬ－２と、を含む。
併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ａ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、またはｂ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、またはｃ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、またはｄ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含む。
これらのＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとともに、抗原結合部分のそれらの成分部分、Ｆｃドメインおよびエフェクター部分は、国際公開第２０１８／１８４９６４号にイムノコンジュゲートの例として記載されている。例えば、特定のイムノコンジュゲートの抗ＣＥＡ抗体ＣＨ１Ａ１Ａ９８／９９ ２Ｆ１およびＩＬ－２四重突然変異体（ｑｍ）に基づく「ＰＤ－１標的化ＩｇＧ－ＩＬ－２ｑｍ融合タンパク質」が、例えば、国際公開第２０１８／１８４９６４号の実施例１および２に記載されている。
国際公開第２０１８／１８４９６４号に記載される特定のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、本明細書に記載されるように以下のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。
Figure 2024508949000002
Figure 2024508949000003
Figure 2024508949000004
国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、ＩＬ－２突然変異体は、ＩＬ－２受容体のα－サブユニットに対する低減された結合親和性を有する。β－およびγ－サブユニット（それぞれ、ＣＤ１２２およびＣＤ１３２としても知られる）とともに、α－サブユニット（ＣＤ２５としても知られる）は、ヘテロ二量体の高親和性ＩＬ－２受容体を形成し、一方β－およびγ－サブユニットのみからなる二量体受容体は、中間親和性ＩＬ－２受容体と呼ばれる。国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、ＩＬ－２受容体のα－サブユニットに対する低減した結合親和性を有するＩＬ－２突然変異体のポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、制御性Ｔ細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を誘導する低減された能力を有し、Ｔ細胞においてより少ない活性化誘導細胞死を誘導し、ｉｎ ｖｉｖｏで低減した毒性プロファイルを有する。そのような毒性が低減されたＩＬ－２突然変異体の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有するＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートにおいて特に有利である。ＩＬ－２突然変異体は、野生型ＩＬ－２と比較して、ＩＬ－２突然変異体のＩＬ－２受容体のα－サブユニット（ＣＤ２５）に対する親和性を低減もしくは排除するが、中親和性ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２受容体のβ－およびγ－サブユニットからなる）に対する親和性は保存する少なくとも１つのアミノ酸突然変異を含み得る。１つ以上のアミノ酸突然変異は、アミノ酸置換であり得る。ＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２（配列番号４として示される）の残基４２、４５、および７２に対応する位置から選択される１つ、２つ、または３つの位置で１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換を含んでもよい。ＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５、および７２に対応する位置でアミノ酸置換を含んでもよい。ＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２の突然変異体であり得る。ＩＬ－２突然変異体は、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むヒトＩＬ－２であり得る。ＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２の３位に対応する位置でアミノ酸突然変異を含み、これはＩＬ－２のＯ－グリコシル化部位を除去する。特に、前記追加のアミノ酸突然変異は、スレオニン残基をアラニン残基で置き換えるアミノ酸置換である。本発明で有用な特定のＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２（配列番号４として示される）の残基３、４２、４５、および７２に対応する位置で４つのアミノ酸置換を含む。特定のアミノ酸置換は、Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇである。国際公開第２０１２／１４６６２８号の実施例に例証されるように、前記四重突然変異体ＩＬ－２ポリペプチド（ＩＬ－２ｑｍ）は、ＣＤ２５への検出可能な結合を示さず、Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導する低減された能力、Ｔｒｅｇ細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を誘導する低減された能力、およびｉｎ ｖｉｖｏでの低減された毒性プロファイルを示す。しかしながら、それは、エフェクター細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を活性化する能力を保持し、エフェクター細胞を除く増殖を誘導し、ＮＫ細胞によって二次サイトカインとしてＩＦＮ－γを生成する。上記説明のいずれかによるＩＬ－２突然変異体は、発現または安定性の増加などのさらなる利点を提供する追加の突然変異を含んでもよい。例えば、１２５位でのシステインは、アラニンなどの中性アミノ酸で置き換えられ、ジスルフィド架橋ＩＬ－２二量体の形成を回避してもよい。したがって、ＩＬ－２突然変異体は、ヒトＩＬ－２の残基１２５に対応する位置で追加のアミノ酸置換を含んでもよい。前記追加のアミノ酸突然変異は、アミノ酸置換Ｃ１２５Ａであり得る。ＩＬ－２突然変異体は、配列番号３のポリペプチド配列を含み得る。
好ましい実施形態では、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートのＰＤ－１の標的化は、国際公開第２０１８／１１８４９６４号に記載されるように、ＰＤ－１を標的化することによって達成することができる。ＰＤ－１の標的化は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片で達成することができる。抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体を含み得る。抗ＰＤ－１抗体は、配列番号２の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体を含み得る。抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体と、配列番号２の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体と、を含み得る。抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１の重鎖可変領域と、配列番号２の軽鎖可変領域と、を含み得る。
ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、配列番号６および配列番号７からなる群から選択されるポリペプチド配列、または機能性を保持するその変異体を含み得る。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ＰＤ－１に特異的なＦａｂ重鎖が、ホール改変を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含み得る。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５もしくは配列番号６のポリペプチド配列、または機能性を保持するその変異体を含み得る。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ＰＤ－１に特異的なＦａｂ軽鎖を含み得る。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号７のポリペプチド配列、または機能性を保持するその変異体を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ジスルフィド結合によって、共有結合され得る。Ｆｃドメインのポリペプチド鎖は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇとも称されてもよい）を含み得る。
国際公開第２０１８／１８４９６４号に記載されるように、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、６、７として示される配列を有するＰＤ－１標的化ＩｇＧ－ＩＬ－２ｑｍ融合タンパク質（国際公開第２０１８／１８４９６４号の実施例１に記載されるような）であり得る。配列番号５、６、７として示される配列を有するＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、本明細書で「ＰＤ１－ＩＬ２ｖ」と称される。配列番号８、９、１０として示される配列を有するＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、本明細書で「ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ」と称され、これはマウスサロゲートである。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、免疫細胞上、特にＴ細胞上で、または腫瘍細胞環境内で提示される抗原に結合する抗体と、ＩＬ－２受容体のサブユニットに低減された結合親和性を有するＩＬ－２突然変異体と、を含むことができる。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、免疫細胞上、特にＴ細胞上で、または腫瘍細胞環境内で提示されるＰＤ－１に結合する抗体と、ＩＬ－２受容体のサブユニットに低減された結合親和性を有するＩＬ－２突然変異体と、から本質的になることができる。抗体はＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり得る。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ＩＬ－２受容体のサブユニットに低減された結合親和性を有する単一のＩＬ－２突然変異体を含むことができる（すなわち、多くても１つのＩＬ－２突然変異体が存在する）。
ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、国際公開第２０１６／０７５２７８号および国際公開第２０１６／１５６２９１号に記載されている。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、ＦＡＰに結合することができる第１の抗原結合部分と、４－１ＢＢに結合することができる第２の結合部分と、を含む。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１１の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体と、配列番号１２の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体を含む第１の抗原結合部分を含み得る。本明細書に記載の併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨと、配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬと、を含む第１の抗原結合部分を含み得る。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、４－１ＢＢに結合することができる第２の抗原結合部分を含む。第２の抗原結合部分は、４－１ＢＢアゴニストであってもよい。第２の抗原結合部分は、４－１ＢＢＬを含む分子を含んでもよい。特に、第２の抗原結合部分は、４－１ＢＢＬの３つのエクトドメインまたはその断片を含んでもよい。第２の抗原結合部分は、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含んでもよく、抗原結合分子は、第１のポリペプチドがペプチドリンカーによって互いに連結された４－１ＢＢＬの２つのエクトドメインまたはその断片を含むこと、および第２のポリペプチドが４－１ＢＢＬの１つのエクトドメインまたはその断片を含むことを特徴とする（本明細書では４－１ＢＢＬ三量体と呼ばれる）。
第２の抗原結合部分は、４－１ＢＢＬの３つのエクトドメインまたはその断片を含んでもよく、４－１ＢＢＬのエクトドメインは、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、特に配列番号４７または配列番号５１のアミノ酸配列を含む。
第２の抗原結合部分は、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含んでもよく、抗原結合分子は、第１のポリペプチドが、配列番号１３の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むこと、および第２のポリペプチドが、配列番号１４の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むことを特徴とする。第２の抗原結合部分は、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含み、抗原結合分子は、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨと、配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、ｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、またはｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のアミノ酸配列を含み得る。
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、ｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８ポリペプチド配列または機能性を保持するその変異体を含み得る。配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のポリペプチド配列を含む併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、本明細書では「ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ」または「ｍｕＦＡＰ－４１ＢＢ」と称され、これはマウスサロゲートである。
ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む本明細書に開示される併用療法は、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体をさらに含んでもよい。抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、国際公開第２０１４／１３１７１２号に記載されている。併用療法に使用されるような抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部分と、ＣＥＡに結合する第２の抗原結合部分と、を含み得る。本明細書で使用されるような抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む第１の抗原結合部分と、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む第２の抗原結合部分と、を含み得る。
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２３の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体、および配列番号２４の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体を含む第１の抗原結合部分と、配列番号２５の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体、および配列番号２６の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域、または機能性を保持するその変異体を含む第２の抗原結合部分と、を含み得る。本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２４の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号２５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分と、を含み得る。
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の抗原結合部分と同一である第３の抗原結合部分を含んでもよい。一実施形態では、ＣＥＡに結合する第１の抗原結合部分および第３の抗原結合部分は、従来のＦａｂ分子である。そのような実施形態では、ＣＤ３に結合する第２の抗原結合部分は、クロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖および軽鎖の可変ドメインまたは定常ドメインが互いに交換／置き換えられているＦａｂ分子である。
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２７の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列、配列番号２８の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列、配列番号２９の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列、および配列番号３０の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のアミノ酸配列または機能性を保持するその変異体を含み得る。本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、シビサタマブであってもよい。
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４のアミノ酸配列または機能性を保持するその変異体を含み得る。配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４のポリペプチド配列を含む併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、本明細書で「ｍｕＣＥＡ ＴＣＢ」と称され、これはマウスサロゲートである。
本明細書で記載されるように、本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子は、２つのサブユニットからなり、かつ２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾を含むＦｃドメインを含み得る。本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子は、ノブ突然変異を含むＦｃドメインサブユニットおよびホール突然変異を含むＦｃドメインサブユニットを含み得る。
「ヘテロ二量体化を促進する修飾」は、ポリペプチドが同一のポリペプチドと会合してホモ二量体を形成することを低減または妨害するペプチド骨格の操作またはポリペプチドの翻訳後修飾である。本明細書で使用されるヘテロ二量体化を促進する修飾は、特に、二量体を形成することが望ましい２つのポリペプチドの各々に対してなされる別個の修飾を含み、修飾は、２つのポリペプチドの会合を促進するように互いに相補的である。例えば、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、それらの会合をそれぞれ立体的または静電的に好ましいものにするように、二量体を形成することが望ましいポリペプチドの一方または両方の構造または電荷を変更してもよい。ヘテロ二量体化は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットなどの２つの非同一ポリペプチド間で起こり、ここでは、サブユニットの各々に融合したさらなるイムノコンジュゲート成分（例えば、抗原結合部分、エフェクター部分）は同じではない。本発明によるイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体において、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、Ｆｃドメインにある。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、アミノ酸突然変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々における別個のアミノ酸突然変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのポリペプチド鎖間の最も広範囲のタンパク質間相互作用の部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。したがって、一実施形態では、前記修飾は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。具体的な実施形態では、前記修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの１つにおけるノブ修飾および、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの他の１つにおけるホール修飾を含むノブ・イントゥー・ホール修飾である。
ノブ・イントゥー・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号；米国特許第７，６９５，９３６号；Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）およびＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載されている。一般に、この方法は、突起部（「ノブ」）を第１のポリペプチドの界面に導入し、対応する空洞部）「ホール」）を第２のポリペプチドの界面に導入し、これによって、突起部が空洞部内に位置付けられ、それによりヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げることを伴う。突起部は、第１のポリペプチドの界面からの小型アミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突起部に対して同一もしくは同様なサイズの補償的な空洞部は、大型アミノ酸側鎖をより小型のアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面で作製される。突起部および空洞部は、ポリペプチドをコードする核酸を変更することによって、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、またはペプチド合成によって作製することができる。具体的な実施形態では、ノブ修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの１つにアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、ホール修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの他の１つにアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む。さらに具体的な実施形態では、ノブ修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃをさらに含み、ホール修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃをさらに含む。これらの２つのシステイン残基の導入は、Ｆｃ領域の２つのサブユニットの間のジスルフィド架橋の形成をもたらし、これが二量体をさらに安定化させる（Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８，７－１５（２００１））。Ｆｃ領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けに従う。本明細書で使用されるＦｃドメインの「サブユニット」）は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定な自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２およびＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
代替実施形態では、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾は、例えば、国際公開第２００９／０８９００４号に記載される静電的ステアリング効果を媒介する修飾を含む。一般に、この方法は、ホモ二量体の形成が静電的に好ましくないものであるが、ヘテロ二量体の形成が静電的に好ましいものになるように、２つのポリペプチド鎖の界面での１つ以上のアミノ酸残基の荷電アミノ酸残基による置き換えを伴う。
ＩＬ－２受容体のサブユニットに対して低減した結合親和性を有するＩＬ－２突然変異体は、ノブ修飾を含むＦｃドメインのサブユニットのカルボキシ末端アミノ酸に融合されてもよい。理論に束縛されるものではないが、ＩＬ－２突然変異体のＦｃドメインのノブ含有サブユニットへの融合は、２つのＩＬ－２突然変異体ポリペプチドを含むホモ二量体イムノコンジュゲートの生成をさらに最小限に抑えることになる（２つのノブ含有ポリペプチドの立体的衝突（ｓｔｅｒｉｃ ｃｌａｓｈ））。
イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子のＦｃドメインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、Ｆｃ受容体に対する変更された結合親和性を有するように、具体的には、非操作のＦｃドメインと比較して、Ｆｃγ受容体に対して変更された結合親和性を有するように操作されてもよい。Ｆｃドメインの補体成分に対する、具体的にはＣ１ｑに対する結合は、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように変更され得る。Ｆｃドメインは、標的組織における良好な蓄積および好ましい組織－血液分布比に寄与する長い血清半減期を含む、好ましい薬物動態特性をイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体に付与する。しかしながら、それは同時に、好ましい抗原担持細胞ではなくＦｃ受容体を発現する細胞の望ましくない標的化につながる場合がある。さらに、Ｆｃ受容体シグナル伝達経路の同時活性化は、サイトカイン放出につながる場合があり、これは、エフェクター部分およびイムノコンジュゲートの長い半減期と組み合わさり、全身投与の際のサイトカイン受容体の過剰な活性化および重篤な副作用をもたらす。これと一致して、従来のＩｇＧ－ＩＬ－２イムノコンジュゲートは、注入反応と関連することが記載されている（Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２，４４６３－４４７３（２００４）を参照されたい）。
したがって、イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子のＦｃドメインは、Ｆｃ受容体に対して低減した結合親和性を有するように操作され得る。そのような一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を低減させる１つ以上のアミノ酸突然変異を含む。典型的には、同じ１つ以上のアミノ酸突然変異が、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々に存在する。一実施形態では、前記アミノ酸突然変異は、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を、少なくとも２倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍低減させる。ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減させる２つ以上のアミノ酸突然変異がある実施形態では、これらのアミノ酸突然変異の組み合わせは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、またはさらには少なくとも５０倍低減させる。一実施形態では、操作されたＦｃドメインを含むイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体は、非操作のＦｃドメインを含むイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体と比較して、２０％少ない、特に１０％少ない、より特に５％少ないＦｃ受容体に対する結合親和性を示す。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体であり、より具体的には、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａ受容体である。好ましくは、これらの受容体の各々の結合が低減される。いくつかの実施形態では、補体成分に対する結合親和性、具体的にはＣ１ｑに対する結合親和性も低減される。一実施形態では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性は低減されない。ＦｃＲｎに対する実質的に同様な結合、すなわち、Ｆｃドメインの前記受容体に対する結合親和性の維持は、Ｆｃドメイン（または前記Ｆｃドメインを含むイムノコンジュゲート）が、非操作形態のＦｃドメイン（または前記非操作形態のＦｃドメインを含むイムノコンジュゲート）のＦｃＲｎに対する結合親和性の７０％を超える場合に達成される。Ｆｃドメイン、または前記Ｆｃドメインを含む本発明のイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体は、約８０％を超える、およびさらには約９０％を超えるそのような親和性を示してもよい。一実施形態では、アミノ酸突然変異は、アミノ酸置換である。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置でアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇであり、特にＰ３２９Ｇである。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置でさらなるアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置でアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）を含む。このアミノ酸置換の組み合わせは、その全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されるように、Ｆｃγ受容体のヒトＩｇＧ Ｆｃドメインへの結合をほぼ完全に排除する。国際公開第２０１２／１３０８３１号は、そのような突然変異体Ｆｃドメインを調製する方法およびＦｃ受容体結合またはエフェクター機能などのその特性を決定するための方法も記載する。Ｆｃ領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けに従う。
突然変異体Ｆｃドメインは、当該技術分野において公知であり、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載される遺伝的または化学的方法を使用する、アミノ酸の欠失、置換、挿入または修飾によって調製することができる。遺伝的な方法には、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などが含まれ得る。正確なヌクレオチド変化は、例えばシーケンシングによって確認することができる。
一実施形態では、Ｆｃドメインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、非操作のＦｃドメインと比較して、減少したエフェクター機能を有するように操作される。エフェクター機能の減少としては、以下の：補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の減少、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の減少、サイトカイン分泌の減少、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込みの減少、ＮＫ細胞への結合の減少、マクロファージへの結合の減少、単球への結合の減少、多形核細胞への結合の減少、アポトーシスを誘導する直接的シグナル伝達の減少、標的結合抗体の架橋の減少、樹状細胞成熟の減少、またはＴ細胞プライミングの減少のうちの１つ以上を挙げることができるが、これらに限定されない。
ＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１抗体と比較して、Ｆｃ受容体に対する低減した結合親和性および低減したエフェクター機能を示す。したがって、いくつかの実施形態では、抗原結合分子のＦｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｓ２２８の位置でアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む。Ｆｃ受容体に対するその結合親和性および／またはそのエフェクター機能をさらに低減させるために、一実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｌ２３５の位置でのアミノ酸置換、具体的には、アミノ酸置換Ｌ２３５Ｅを含む。別の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置でアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｐ３２９Ｇを含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｓ２２８、Ｌ２３５およびＰ３２９の位置でアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ｇを含む。そのようなＩｇＧ４ Ｆｃドメイン突然変異体およびそれらのＦｃγ受容体結合特性は、その全体が参照により本明細書に援用される、欧州特許出願（国際公開第２０１２／１３０８３１号）に記載されている。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ａ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、またはｂ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、またはｃ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、またはｄ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、ａ）配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、第２の抗原結合部分、ｂ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、ｃ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列、またはｄ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。本発明の実施形態では、本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。
本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、ａ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、またはｂ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、またはｃ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、またはｄ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、ａ）配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、第２の抗原結合部分、ｂ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、ｃ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列、またはｄ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のポリペプチド、またはｂ）配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。本発明の実施形態では、本明細書に記載の併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、シビサタマブである。
定義
以下で別途定義されない限り、用語は当該技術分野で一般的に使用されるように本明細書で使用される。
本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」という用語は、最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、抗体、抗体断片および足場抗原結合タンパク質である。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない、さまざまな抗体構造を包含する。「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ、およびｓｃＦａｂ）；シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片のレビューについては、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。
「抗原結合部分」、「抗原結合ドメイン」または「抗体の抗原結合部分」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原の一部もしくは全てに特異的に結合し、それらに相補的である領域を含む抗体の一部を指す。したがって、この用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１つ以上の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）によって提供されてもよい。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」領域は、それらの、本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与し、抗体の特性を規定する領域である。ＣＤＲおよびＦＲ領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓ．５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）の標準定義および／または「超可変ループ」からのそれらの残基に従って決定される。「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。自然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。自然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することができる、ＣＥＡまたはヒトＰＤ－Ｌ１などの抗原のタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、エピトープは、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特徴を有する。コンフォメーショナルおよび非コンフォメーショナルエピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われるのに対して後者への結合が失われないという点で識別される。
本明細書の「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域および変異Ｆｃ領域が含まれる。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで伸びることが定義される。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しても存在しなくてもよい。本明細書に別途指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けに従う。抗体のＦｃドメインは、抗体の抗原への結合において直接的に関与していないが、さまざまなエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃドメインＡ」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンは、クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに分類され、これらのいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ならびにＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分類することができる。重鎖定常領域に従って、免疫グロブリンの異なるクラスは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。抗体のＦｃドメインは、補体活性化、Ｃ１ｑ結合およびＦｃ受容体結合に基づくＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与している。補体活性化（ＣＤＣ）は、補体因子Ｃ１ｑの大部分のＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃドメインへの結合によって開始される。抗体の補体系に対する影響はある特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃドメインの規定された結合部位によって引き起こされる。そのような結合部位は、最先端技術において既知であり、例えば、Ｂｏａｃｋｌｅ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２８２（１９７９）７４２－７４３； Ｌｕｋａｓ，Ｔ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（１９８１）２５５５－２５６０；Ｂｒｕｎｈｏｕｓｅ，Ｒ．，ａｎｄ Ｃｅｂｒａ，Ｊ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（１９７９）９０７－９１７；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２８８（１９８０）３３８－３４４；Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（２０００）９９５－１００４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，Ｅ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（２０００）４１７８－４１８４；Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５（２００１）１２１６１－１２１６８；Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６（１９９５）３１９－３２４；欧州特許第０３０７４３４号に記載されている。そのような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１およびＰ３２９（上記のＫａｂａｔのＥＵインデックス，Ｅ．Ａ．、を参照）である。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３の抗体は、通常、補体活性化ならびにＣ１ｑおよびＣ３への結合を示すが、一方ＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃ１ｑおよびＣ３に結合しない。
本明細書で使用される場合、「イムノコンジュゲート」という用語は、少なくとも１つのＩＬ－２分子と、少なくとも１つの抗体とを含むポリペプチド分子を指す。ＩＬ－２分子は、本明細書に記載されるようなさまざまな相互作用によって、かつさまざまな配置で結合することができる。特定の実施形態では、ＩＬ－２分子は、ペプチドリンカーを介して抗体に融合される。本発明による特定のイムノコンジュゲートは、１つ以上のリンカー配列によって結合された１つのＩＬ－２分子および抗体から本質的になる。
「融合している」とは、成分（例えば、抗体およびＩＬ－２分子）が、ペプチド結合によって直接的に、または１つ以上のペプチドリンカーを介して間接的に、のいずれかで結合されていることを意味する。
本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインサブユニット（Ｆｅ ｄｏｍａｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔｓ）などに関する「第１の」および「第２の」という用語は、部分の２つ以上の各タイプがある場合に区別の便宜のために使用される。これらの用語の使用は、明示的に述べられていない限り、イムノコンジュゲートの特定の順序または方向を付与することを意図しない。
一実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートの抗体成分は、ヒト起源由来のＦｃドメインおよび好ましくは、ヒト定常領域の他の全ての部分を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト起源由来のＦｃドメイン」は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のヒト抗体Ｆｃドメイン、好ましくはヒトＩｇＧ１サブクラスからのＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ１サブクラスからの変異型Ｆｃドメイン（一実施形態では、Ｌ２３４Ａ＋Ｌ２３５Ａに突然変異を有する）、ヒトＩｇＧ４サブクラスからのＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４サブクラスからの変異型Ｆｃドメイン（一実施形態では、Ｓ２２８Ｐに突然変異を有する）のいずれかである。一実施形態では、前記抗体は、低減されたまたは最小限のエフェクター機能を有する。一実施形態では、最小限のエフェクター機能は、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する。一実施形態では、エフェクターレスＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。一実施形態では、エフェクターレスＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７ＡおよびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）を含む（からなる）群とは互いに独立する抗体の各々について選択される。
一実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは抗体の抗体成分は、ヒトＩｇＧクラスのもの（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブクラスのもの）である。
好ましい実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは抗体の抗体成分は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものまたはヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。一実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは抗体の抗体成分は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。一実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは抗体の抗体成分は、ヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
一実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは抗体の抗体成分は、定常鎖がヒト起源由来のものであることを特徴とする。そのような定常鎖は、最先端技術において既知であり、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．に記載されている（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．ａｎｄ Ｗｕ， Ｔ．Ｔ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８（２０００）２１４－２１８を参照）。
「ＴＮＦリガンドファミリーメンバー」または「ＴＮＦファミリーリガンド」という用語は、炎症誘発性サイトカインを指す。サイトカインは、一般に、特にＴＮＦリガンドファミリーのメンバーは、免疫系の刺激および調整において重要な役割を果たす。現在のところ、配列、機能、および構造的類似性に基づいて、１９個のサイトカインがＴＮＦ（腫瘍壊死因子）リガンドスーパーファミリーのメンバーとして同定されている。これら全てのリガンドは、Ｃ末端細胞外ドメイン（エクトドメイン）、Ｎ末端細胞内ドメインおよびシングル膜貫通ドメインを有するＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＮＦホモロジードメインとして知られるＣ末端細胞外ドメインは、スーパーファミリーメンバー間の２０～３０％のアミノ酸同一性を有し、受容体への結合を担う。ＴＮＦエクトドメインもまた、ＴＮＦリガンドが、それらの特異的受容体によって認識される三量体複合体を形成することを担う。ＴＮＦリガンドファミリーのメンバーは、リンホトキシンα（ＬＴＡまたはＴＮＦＳＦ１としても知られる）、ＴＮＦ（ＴＮＦＳＦ２としても知られる）、ＬＴβ（ＴＮＦＳＦ３としても知られる）、ＯＸ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ４としても知られる）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４またはＴＮＦＳＦ５としても知られる）、ＦａｓＬ（ＣＤ９５Ｌ、ＣＤ１７８またはＴＮＦＳＦ６としても知られる）、ＣＤ２７Ｌ（ＣＤ７０またはＴＮＦＳＦ７としても知られる）、ＣＤ３０Ｌ（ＣＤ１５３またはＴＮＦＳＦ８としても知られる）、４－１ＢＢＬ（ＴＮＦＳＦ９としても知られる）、ＴＲＡＩＬ（ＡＰＯ２Ｌ、ＣＤ２５３またはＴＮＦＳＦ１０としても知られる）、ＲＡＮＫＬ（ＣＤ２５４またはＴＮＦＳＦ１１としても知られる）、ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦＳＦ１２としても知られる）、ＡＰＲＩＬ（ＣＤ２５６またはＴＮＦＳＦ１３としても知られる）、ＢＡＦＦ（ＣＤ２５７またはＴＮＦＳＦ１３Ｂとしても知られる）、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８またはＴＮＦＳＦ１４としても知られる）、ＴＬ１Ａ（ＶＥＧＩまたはＴＮＦＳＦ１５としても知られる）、ＧＩＴＲＬ（ＴＮＦＳＦ１８としても知られる）、ＥＤＡ－Ａ１（エクトジスプラシンＡ１としても知られる）ならびにＥＤＡ－Ａ２（エクトジスプラシンＡ２としても知られる）からなる群から選択される。この用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、ならびにげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然ＴＮＦファミリーリガンドを指す。「共刺激性ＴＮＦリガンドファミリーメンバー」または「共刺激性ＴＮＦファミリーリガンド」という用語は、Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン産生を共刺激することができる、ＴＮＦリガンドファミリーメンバーのサブグループを指す。これらのＴＮＦファミリーリガンドは、それらの対応するＴＮＦ受容体との相互作用の際にＴＣＲシグナルを共刺激することができ、それらの受容体との相互作用は、ＴＮＦＲ関連因子（ＴＲＡＦ）の動員につながり、これが、Ｔ細胞活性化をもたらすシグナル伝達カスケードを開始させる。共刺激性ＴＮＦファミリーリガンドは、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ３０ＬおよびＬＩＧＨＴからなる群から選択され、より特定には、共刺激性ＴＮＦリガンドファミリーメンバーは、４－１ＢＢＬである。
本明細書で前に記載されたように、４－１ＢＢＬは、ＩＩ型膜貫通タンパク質であり、ＴＮＦリガンドファミリーの一員である。配列番号６９のアミノ酸配列を有する完全なまたは完全長の４－１ＢＢＬは、細胞の表面上で三量体を形成と記載された。三量体の形成は、４－１ＢＢＬのエクトドメインの特異的なモチーフによって可能となる。前記モチーフは、本明細書では「三量体化領域」と表示される。ヒト４－１ＢＢＬ配列（配列番号７０）のアミノ酸５０～２５４は、４－１ＢＢＬの細胞外ドメインを形成するが、そのさらなる断片は、三量体を形成することができる。具体的な実施形態では、「４－１ＢＢＬのエクトドメインまたはその断片」という用語は、配列番号４（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２～２５４）、配列番号１（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１～２５４）、配列番号３（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０～２５４）および配列番号２（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５～２５４）から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、または配列番号５（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１～２４８）、配列番号８（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２～２４８）、配列番号７（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０～２４８）および配列番号６（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５～２４８）から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指すが、三量体化が可能なエクトドメインの他の断片も本明細書に含まれる。
「エクトドメイン」は、細胞外間隙（すなわち、標的細胞の外側の空間）まで伸びる膜タンパク質のドメインである。エクトドメインは、通常、表面との接触を開始させ、シグナル伝達をもたらすタンパク質の一部である。したがって、本明細子に定義されるようなＴＮＦリガンドファミリーメンバーのエクトドメインは、細胞外空間（細胞外ドメイン）まで伸びるＴＮＦリガンドタンパク質の一部を指すが、これはまた、三量体化および対応するＴＮＦ受容体への結合を担うそのより短い部分または断片も含む。したがって、「ＴＮＦリガンドファミリーメンバーのエクトドメインまたはその断片」という用語は、細胞外ドメインを形成するＴＮＦリガンドファミリーメンバーの細胞外ドメインを指すか、または受容体に依然として結合することができるその一部（受容体結合ドメイン）を指す。
「核酸」または「核酸分子」という用語は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むよう意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよいが、二本鎖ＤＮＡであることが好ましい。
本出願の範囲内で使用される「アミノ酸」という用語は、アラニン（三文字コード：ａｌａ、一文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、およびバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に存在するカルボキシα－アミノ酸のグループを意味する。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列アライメントを行い、必要であれば、最大の配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一であり、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない、候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技能範囲内であるさまざまな方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列アラインメントを行うための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９にユーザドキュメントと共に提出され、ここで米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルする必要がある。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２ プログラムによって設定され、変化しない。ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ａ対所与のアミノ酸配列Ｂ、所与のアミノ酸配列Ａの所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ａの所与のアミノ酸配列Ｂに対してアミノ酸配列同一性％（あるいは、対所与のアミノ酸配列Ｂ、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対してある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含む所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算され：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によってＡとＢのプログラムのアラインメントで完全な一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解されたい。別段の明確な記載がない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落で説明したように得られる。本発明の参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば、９５％「同一」のヌクレオチド配列を有する核酸またはポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり最大５個の点突然変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることが意図される。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中のヌクレオチドの最大５％が欠失されてもよく、もしくは別のヌクレオチドで置換されてもよく、または参照配列中の総ヌクレオチドの最大５％のヌクレオチド数が、参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこれらの変更は、参照配列中の残基の間で個別に、もしくは参照配列内の１つ以上の近接する基のいずれかで散在して、参照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置で起こってもよく、または参照配列中の残基それらの末端位置の間のどこかで起こってもよい。実際には、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて上述したもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）などの既知のコンピュータプログラムを使用して便利に判定することができる。
本明細書に記載のイムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体を産生する方法が提供され、本方法は、本明細書に提供されるようなイムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体をコードする宿主細胞を、イムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体の発現に好適な条件下で培養することと、イムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。
イムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体の成分は、互いに遺伝子融合されている。イムノコンジュゲートまたは二重特異性抗体は、その成分が直接融合されるか、またはリンカー配列を通して間接的に融合されるように設計することができる。リンカーの組成および長さは、当該技術分野において周知の方法に従って決定されてもよく、有効性について試験されてもよい。必要に応じて融合体の個々の成分を分離するために切断部位を組み込むために、追加の配列、例えば、エンドヌクレアーゼ認識配列が含まれてもよい。
イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子は、抗原決定基に結合することができる少なくとも抗体可変領域を含む。可変領域は、天然に存在するもしくは天然に存在しない抗体およびそれらの断片の一部形成し得るか、またはそれらに由来し得る。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を産生する方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ”，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい）。天然に存在しない抗体は、ペプチド固相合成法を使用して構築することができ、組換え的に産生することができるか（例えば、米国特許第４，１８６，５６７号に記載されるように）、または、例えば、可変重鎖および可変軽鎖を含むコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって得ることができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙの米国特許第５，９６９，１０８号を参照されたい）。抗原結合部分およびそれを産生するための方法も、その内容全体が参照により本明細書に援用される、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０２０７８３号に詳細に記載されている。
あらゆる動物種の抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変領域を、本明細書に記載のイムノコンジュゲートおよび二重特異性抗体で使用することができる。本発明で有用な非限定的な抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変領域は、マウス、霊長類、またはヒト起源のものである。イムノコンジュゲートがヒトでの使用を意図される場合、抗体の定常領域がヒトに由来する抗体のキメラ形態が使用されてもよい。抗体のヒト化または完全ヒト形態もまた、当該技術分野において周知の方法に従って調製することができる（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい）。ヒト化は、限定されないが、（ａ）非ヒト（例えば、ドナー抗体）ＣＤＲをヒト（例えば、レシピエント抗体）フレームワークおよび定常領域に、重要なフレームワーク残基の保持（例えば、良好な抗原結合親和性または抗体機能を保持するために重要であるもの）を伴うか、または伴わずにグラフトすること、（ｂ）非ヒト特異性決定領域（ＳＤＲまたはａ－ＣＤＲ；抗体－抗原相互作用に重要な残基）のみをヒトフレームワークおよび定常領域にグラフトすること、または（ｃ）非ヒト可変ドメインを移植するが、それらを表面残基の置き換えによるヒト様セクションで「覆うこと（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」が挙げられるさまざまな方法によって達成することができる。ヒト化抗体およびそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ １３，１６１９－１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６，１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１，５２２－５２５（１９８６）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８１，６８５１－６８５５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４４，６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎ ３１（３），１６９－２１７（１９９４）；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフティングを記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８，４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６， ４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；およびＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，６１－６８（２００５）ならびにＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８３，２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングのための「ガイディッド・セレクション（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載している）にさらに記載されている。ヒト抗体およびヒト可変領域は、当該技術分野において既知のさまざまな技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５，３６８－７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０，４５０－４５９（２００８）に記載されている。ヒト可変領域は、ハイブリドーマ法によって作製されるヒトモノクローナル抗体の一部を形成し、かつそれに由来し得る（例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。ヒト抗体およびヒト可変領域はまた、免疫原を、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に投与することによって調製されてもよい（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２３，１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい）。ヒト抗体およびヒト可変領域はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変領域配列を単離することによって生成されてもよい（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．のＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８，１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８，５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４－６２８（１９９１）を参照されたい）。ファージは、典型的には、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで抗体断片を表示する。ファージディスプレイによるイムノコンジュゲートの抗原結合部分の調製の詳細な説明は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０２０７８３号に添付の実施例で見ることができる。
ある特定の実施形態では、抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０２０７８３号（親和性成熟に関する実施例を参照）または米国特許出願公開第２００４／０１３２０６６号（これらの内容全体が、参照により本明細書に援用される）に開示される方法に従って、向上された結合親和性を有するように操作される。イムノコンジュゲートおよび抗原結合分子の特異的抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）または当業者に良く知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴法（ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ１００システムで分析される）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、および伝統的な結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかを通して測定することができる。競合アッセイを用いて、特定の抗原への結合に関して参照抗体と競合する、抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変ドメイン、例えば、ＣＥＡへの結合に関してＣＨ１Ａ１Ａ９８／９９ ２Ｆ１抗体と競合する抗体を同定することができる。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、参照抗体によって結合される同じエピトープ（例えば、線状またはコンフォメーショナルエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）のＭｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ”に提供されている。例示的な競合アッセイにおいて、固定化されている抗原（例えば、ＣＥＡ）は、抗原（例えば、ＣＨ１Ａ１Ａ ９８／９９ ２Ｆ１抗体）に結合する第１の標識化抗体および抗原への結合に関して第１の抗体と競合するその能力を試験される第２の非標識化抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されている抗原が、第１の標識化抗体を含むが第２の非標識化抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体の抗原への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化されている抗原と関連付けられた標識の量が測定される。固定化されている抗原と関連付けられた標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減される場合に、第２の抗体が抗原への結合に関して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
本明細書に記載のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、国際公開第２０１８／１８４９６４号の実施例に記載されるように調製することができる。本明細書に記載の抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ二重特異性抗体は、国際公開第２０１６／０７５２７８号の実施例に記載されるように調製することができる。
本明細書に記載の抗体は、組換え手段によって産生されることが好ましい。そのような方法は、最先端技術において広く知られており、原核生物および真核生物細胞におけるタンパク質発現と、その後の抗体ポリペプチドの分離、および通常は薬学的に許容される純度への精製を含む。タンパク質発現については、軽鎖および重鎖またはその断片をコードする核酸が標準的方法によって発現ベクター中に挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞などの適切な原核生物および真核生物宿主細胞において実施され、抗体は細胞から回収される（上清から、または細胞溶解後に）。
抗体の組換え産生は最先端技術において周知であり、例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｓ．Ｃ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１７（１９９９）１８３－２０２；Ｇｅｉｓｓｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．８（１９９６）２７１－２８２；Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２０００）１５１－１６１；Ｗｅｒｎｅｒ，Ｒ．Ｇ．，Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．４８（１９９８）８７０－８８０の総説論文に記載されている。
抗体は、細胞全体に、細胞溶解物で、または部分的に精製されるか、もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野において周知の他のものが含まれる標準的技術によって、他の細胞成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質を排除するために精製が実施される。Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい。
ＮＳ０細胞における発現は、例えば、Ｂａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．らによってＣｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２（２０００）１０９－１２３に；Ｂａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．，らによって、ＢｉｏｔｅｃｈＢｉｏｅｎｇ．７３（２００１）２６１－２７０に記載されている。一過性発現は、例えば、Ｄｕｒｏｃｈｅｒ，Ｙ．らによって、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．３０（２００２）Ｅ９に記載されている。可変ドメインのクローニングは、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ，Ｒ．らによってＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６（１９８９）３８３３－３８３７に；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．らによってＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９（１９９２）４２８５－４２８９に；Ｎｏｒｄｅｒｈａｕｇ，Ｌ．らによって、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０４（１９９７）７７－８７に記載されている。好ましい一過性発現系（ＨＥＫ２９３）は、Ｓｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．－Ｊ．ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｋ．によってＣｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３０（１９９９）７１－８３に、およびＳｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．－Ｊ．によってＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １９４（１９９６）１９１－１９９に記載されている。
本発明による重鎖および軽鎖可変領域は、プロモーター、翻訳開始、定常領域、３’非翻訳領域、ポリアデニル化、および転写終止の配列と組み合わされて、発現ベクターコンストラクトを形成する。重鎖および軽鎖コンストラクトは、単一のベクター中に組み合わされ、宿主細胞にコトランスフェクトされるか、連続的にトランスフェクトされるか、または別個にトランスフェクトされ、次いでそれらは融合されて、両方の鎖を発現する単一の宿主細胞を形成する。
例えば、原核生物に好適である制御配列には、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が挙げられる。真核生物細胞は、プロモーター、エンハンサーおよびポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
核酸は、それが他の核酸配列と機能的な関係で配置されている場合、「作用可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダー用のＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチド用のＤＮＡと作用可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合、コーディング配列と作用可能に連結され、またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置付けられる場合、コーディング配列と作用可能に連結される。一般に、「作用可能に連結されている」は、連結されているＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には、近接してリーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、近接している必要はない。連結は、便利な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の実例に従って使用される。
モノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地から好適に分離される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡおよびＲＮＡは、容易に単離され、従来の手順を使用して配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡおよびＲＮＡの供給源として機能することができる。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクター中に挿入されることができ、次いで、発現ベクターが、免疫グロブリンタンパク質を別途産生しないＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、宿主細胞中の組換えモノクローナル抗体の合成を得る。
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養物」という表現は互換的に使用され、全てのそのような表記には、子孫が含まれる。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」という語は、初代対象細胞および細胞の移入回数に関係なくそれらに由来する培養物を含む。また、意図的なまたは意図しない突然変異により、全ての子孫がＤＮＡコンテントで正確に同一ではない可能性があることも理解されている。最初に形質転換された細胞でスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が含まれる。
治療方法および組成物
本発明は、治療的有効量のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との併用療法を患者に投与することを特徴とする、療法を必要とする患者の治療のための方法を含む。本発明は、治療的有効量のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法を患者に投与することを特徴とする、療法を必要とする患者の治療のための方法を含む。
本発明は、本発明によるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との、記載された併用療法のための使用を含む。本発明は、本発明によるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との、記載された併用療法のための使用を含む。
本発明の好ましい一実施形態は、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本発明のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との併用療法である。本発明の好ましい一実施形態は、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本発明のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法である。
したがって、本発明の一実施形態は、本明細書に記載される抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ抗体と組み合わせた、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本明細書に記載のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートである。本発明の一実施形態は、本明細書に記載される抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ抗体および抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本明細書に記載のＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートである。
本発明の一実施形態は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと組み合わせた、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本明細書に記載の抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ抗体である。本発明の一実施形態は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本明細書に記載の抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ抗体である。
本発明のさらなる実施形態は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ抗体と組み合わせた、がんまたは腫瘍の治療で使用するための、本明細書に記載の抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体である。
がんまたは腫瘍は、腫瘍細胞環境中に、例えば、ＰＤ－１＋Ｔ細胞上に抗原を提示し得る。併用療法の標的としてのＰＤ－１は、腫瘍細胞環境中に、例えば、ＰＤ－１＋Ｔ細胞中に提示され得る。治療は、固形腫瘍の治療であり得る。治療は癌の治療であり得る。がんは、結腸直腸がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、乳がん、膵臓がん、肝臓がん、および胃がんからなる群から選択されてもよい。がんは、肺がん、結腸がん、胃がん、乳がん、頭頸部がん、皮膚がん、肝臓がん、腎臓がん、前立腺がん、膵臓がん、脳がん、および骨格筋のがんからなる群から選択されてもよい。
本明細書で使用される「がん」という用語は、例えば、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ）、細気管支肺胞上皮細胞肺がん、骨のがん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内メラノーマ、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、乳がん、子宮がん、ファローピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、上皮小体がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓または尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞がん、胆管がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病であり得、上記がんのいずれかの難治性型、または上記がんのうちの１つ以上の組み合わせが含まれる。好ましい一実施形態では、そのようながんは、乳がん、結腸直腸がん、メラノーマ、頭頸部がん、肺がん、または前立腺がんである。好ましい一実施形態では、そのようながんは、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、または前立腺がんである。別の好ましい実施形態では、そのようながんは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫である。好ましい実施形態では、そのようながんは、ＦＡＰ発現がんおよび／またはＣＥＡ発現がんである。
本発明の実施形態は、上述したがんまたは腫瘍のいずれかの治療で使用するための、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートである。本発明の別の実施形態は、上述したがんまたは腫瘍のいずれかの治療で使用するための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子である。
本発明は、がんの治療のための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法を含む。
本発明は、転移の予防または治療のための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法を含む。
本発明は、Ｔ細胞活性などの免疫応答または機能の刺激で使用するための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法を含む。
本発明は、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療するための方法であって、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体とを投与することを特徴とする、方法を含む。
本発明は、転移の予防または治療を必要とする患者において転移を予防または治療するための方法であって、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、本明細書に記載されているＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体とを投与することを特徴とする、方法を含む。
本発明は、免疫応答または機能の刺激を必要とする患者においてＴ細胞活性などの免疫応答または機能を刺激するための方法であって、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体とを投与することを特徴とする、方法を含む。
本発明は、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんの治療で使用するための本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんの治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む。
本発明は、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、転移の予防または治療で使用するための本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、転移の予防または治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む。
本発明は、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、Ｔ細胞活性などの免疫応答または機能の刺激で使用するための本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、Ｔ細胞活性などの免疫応答または機能の刺激で使用するための医薬の製造のための、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む。
本発明は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんの治療で使用するための本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子、あるいは本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた、がんの治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子を含む。
本発明は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび任意選択でＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせた、がんの治療で使用するための本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体、あるいは本明細書に記載されているＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせた、がんの治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む。
本発明の好ましい実施形態では、上述した併用治療および異なる疾患の医学的用途で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含むことを特徴とするＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであり、そのような併用治療で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。
本発明の好ましい実施形態では、上述した併用治療および異なる疾患の医学的用途で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、配列番号５、配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含むことを特徴とするＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであり、そのような併用治療で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、そのような併用治療で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。
別の態様では、本発明は、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と、を含有する組成物、例えば、薬学的組成物を提供する。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合するありとあらゆる抗体、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収／再吸収遅延剤などが挙げられる。好ましくは、担体は、注射または注入に好適である。
本発明の組成物は、当該技術分野において既知のさまざまな方法によって投与され得る。当業者に理解されるように、投与の経路および様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。
薬学的に許容される担体には、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射用溶液または分散液の調製のための滅菌粉末が含まれる。そのような媒体および薬剤の薬学的に活性な物質のための使用は、当該技術分野において既知である。水に加えて、担体は、例えば、等張性緩衝生理食塩水であり得る。
選択される投与の経路とは関係なく、好適な水和形態で使用され得る本発明の化合物、および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に既知の従来の方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対して毒性を示すことなく、特定の患者、組成物、および投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有功な有効成分の量（有効量）を得るために変化し得る。選択される投与量レベルは、使用される本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与様式、投与の時間、使用される特定の化合物の排出速度、使用される特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康および既往歴、ならびに医学分野において周知の同様な因子を含むさまざまな薬物動態因子に依存するであろう。
一態様では、本発明は、同じか別々の容器内に、（ａ）本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート、および（ｂ）本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で（ｃ）本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含み、任意選択で、（ｄ）疾患を治療するための方法として併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書をさらに含む、疾患の治療を意図したキットを提供する。さらに、キットは、（ａ）組成物がその中に入った第１の容器であって、組成物が、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子を含む、第１の容器と、（ｂ）組成物がその中に入った第２の容器であって、組成物が、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む、第２の容器と、任意選択で（ｃ）組成物がその中に入った第３の容器であって、組成物が、本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む、第３の容器と、任意選択で（ｄ）組成物がその中に入った第４の容器であって、組成物が、さらなる細胞傷害性治療剤または別の治療剤を含む、第４の容器とを含んでもよい。この実施形態におけるキットは、組成物を使用して特定の状態を治療することがで切ることを示す添付文書をさらに含んでもよい。あるいは、またはさらに、キットは、薬学的に許容されるバッファー（例えば静菌された注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液またはデキストロース溶液を含む第３の（または、第４の）容器をさらに含んでもよい。それは商業的およびユーザ観点上望ましいその他の材料をさらに含んでもよく、例えば他のバッファー、希釈剤、フィルター、ニードルおよびシリンジが挙げられる。
一態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む容器と、（ｂ）疾患を治療するための方法としてＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートの、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法での使用を指示する説明書を含む添付文書と、を含む、疾患を治療するよう意図したキットを提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子を含む容器と、（ｂ）疾患を治療するための方法としてＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子の、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法での使用を指示する説明書を含む添付文書と、を含む、疾患を治療するよう意図したキットを提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む容器と、（ｂ）疾患を治療するための方法として抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との併用療法での使用を指示する説明書を含む添付文書と、を含む、疾患を治療するよう意図したキットを提供する。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを含む、疾患の治療を意図する医薬であって、前記医薬は、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との併用療法で使用するためのものであり、任意選択で、疾患を治療するための方法として併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含む、医薬を提供する。
「治療する方法」という用語またはその同等物は、例えば、がんに適用される場合、患者においてがん細胞の数を低減もしくは排除するように設計された、またはがんの症状を緩和するように設計された処置また一連の措置を指す。がんまたは別の増殖性疾患を「治療する方法」は、がん細胞もしくは他の障害が実際に排除されること、細胞もしくは障害の数が実際に低減されること、またはがんもしくは他の障害の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味するものではない。多くの場合、がんを治療する方法は、成功の可能性が低い場合でも実行されるが、患者の病歴および推定生存能力を考えれば、それでも全体的に有益な一連の措置を誘導すると見なされる。
「～と組み合わせて投与される」、「共投与」、「共投与すること」、「併用療法」または「併用治療」という用語は、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートと、本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体との、例えば、別々の製剤／適用として（または単一の製剤／適用としての）投与を指す。共投与は、同時にまたはいずれかの順序で連続的であってもよく、両方の活性剤（または全ての）活性剤が同時に生物活性を発揮する期間があることが望ましい。前記活性剤は、連続的注入を通して同時にまたは連続的のいずれかで共投与（例えば、静脈内（ｉ，ｖ．））される。両方の治療剤が連続的に共投与される場合、用量は、２つの別々の投与で同日に投与されるか、または薬剤の一方が１日目に投与され、２番目の薬剤が２日目から７日目まで、好ましくは２日目から４日目まで共投与される。したがって、一実施形態では、「連続的に」という用語は、第１の成分の投与後７日以内、好ましくは第１の成分の投与後４日以内を意味し、「同時に」という用語は、同じ時間の投与を意味する。ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび／またはＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに／または抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の維持量に関する「共投与」という用語は、全ての薬物に対する治療サイクル、例えば、毎週が適切である場合、維持量が同時に共投与され得る。または維持量は、連続的に共投与され、例えば、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の用量が、隔週で供与される。
抗体が「治療的有効量」（または簡単に「有効量」）で患者に投与されることは明白であり、これは、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって探求されている組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的奏功を誘発するそれぞれの化合物または組み合わせの量である。
共投与の量および共投与のタイミングは、タイプ（種、性別、年齢、体重など）および治療される患者の状態ならびに治療される疾患または状態の重症度に依存するであろう。前記ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび／またはＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに／または抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、好適には、患者に一度に共投与されるか、または一連の治療にわたって、例えば、同日にもしくは翌日に、または１週間間隔で共投与される。
ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子および任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートに加えて、化学療法剤もまた投与することができる。
一実施形態では、本明細書に記載されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび本明細書に記載されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体と共に投与することができるそのような追加の化学療法剤としては、アルキル化剤：ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシルを含む抗新生物薬；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル－ＣＣＮＵ）；Ｔｅｍｏｄａｌ（商標）（テモゾロミド）、エチレンイミン／メチルメラミン、例えば、トリエチレンメラミン（ｔｈｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）（ＴＥＭ）、トリエチレン、チオホスホルアミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン；トリアジン、例えばダカルバジン（ＤＴＩＣ）；葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピリミジン類似体、例えば５－フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５－アザシチジン、２，２’－ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、６－メルカプトプリン、６－チオグアムネ（６－ｔｈｉｏｇｕａｍｎｅ）、アザチオプリン、Ｔ－デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、フルダラビンリン酸エステル、および２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、ｃ－ＣｄＡ）を含む代謝拮抗薬；有糸分裂阻害剤、例えばパクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含むビンカアルカロイド、タキソテール、エストラムスチン、エストラムスチンリン酸エステルを含む天然物；ピポドフィロトキシン（ｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｏｔｏｘｉｎｓ）、例えば、エトポシドおよびテニポシド；抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、アクチノマイシン；酵素、例えばＬ－アスパラギナーゼ；生物学的応答修飾、例えば、インターフェロン－アルファ、ＩＬ－２、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＳＣＦ；白金配位錯体、例えば、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えばミトキサントロン、置換ウレア、例えばヒドロキシウレア、Ｎ－メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、例えばミトタン（ｏ，ｐ－ＤＤＤ）およびアミノグルテチミドを含むその他の薬剤；アデノコルチコステロイドアンタゴニスト、例えば、プレドニゾンならびに等価物、デキサメタゾンおよびアミノグルテチミドを含むホルモンおよびアンタゴニスト；Ｇｅｍｚａｒ（商標）（ゲムシタビン）、プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、および酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン、例えばタモキシフェン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／等価物を含むアンドロゲン；抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体、およびロイプロリド；ならびに非ステロイド性抗アンドロゲン、例えばフルタミドが挙げられるが、これらに限定されない。後成的機構を標的とする療法としては、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、脱メチル化剤（例えば、Ｖｉｄａｚａ）が挙げられるが、これらに限定されず、転写抑制の解除（ＡＴＲＡ）療法も、抗原結合タンパク質と組み合わせることができる。一実施形態では、化学療法剤は、タキサン（例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンおよびオパキシオ）のような）、ドキソルビシン、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）、ならびに他のマルチキナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、およびビンブラスチンからなる群から選択される。一実施形態では、化学療法剤は、タキサン（例えば、タキソール（パクリタキセル）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンおよびオパキシオ）のような）からなる群から選択される。一実施形態では、追加の化学療法剤は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、またはオキサリプラチンから選択される。一実施形態では、化学療法剤は、５－フルオロウラシル、ロイコボリンおよびイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）である。一実施形態では、化学療法剤は、５－フルオロウラシルおよびオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）である。
追加の化学療法剤との併用療法の具体的な例としては、例えば、乳癌がんの治療のための、タキサン（例えば、ドセタキセルまたはパクリタキセル）または修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンもしくはオパキシオ）、ドキソルビシン）、カペシタビンおよび／もしくはベバシズマブ（アバスチン）を用いた療法；卵巣がんの治療のためのカルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（もしくは修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘもしくはドキシル））、またはトポテカン（ハイカムチン）を用いた療法；腎臓がんの治療のためのマルチキナーゼ阻害剤、ＭＫＩ、（スーテント、Ｎｅｘａｖａｒ、もしくは７０６）および／またはドキソルビシンを用いた療法；扁平上皮細胞癌の治療のためのオキサリプラチン、シスプラチンおよび／または放射線を用いた療法；肺がんの治療のためのタキソールおよび／またはカルボプラチンを用いた療法が挙げられる。
したがって、一実施形態では、追加の化学療法剤は、乳がんの治療のための、タキサン（ドセタキセルもしくはパクリタキセルもしくは修飾パクリタキセル（アブラキサンもしくはオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビンおよび／またはベバシズマブの群から選択される。
一実施形態では、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体による併用療法は、化学療法剤が投与されない併用療法である。
本発明はまた、本明細書に記載されるそのような疾患を患う患者の治療のための方法も含む。
本方法は、有効量の本明細書に記載される本発明によるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび本明細書に記載される本発明によるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で本明細書に記載される本発明による抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体とともに、薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物の製造、および本明細書に記載される本発明によるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で本明細書に記載される本発明による抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体のそのような方法のための使用をさらに提供する。
本発明は、本明細書に記載される本発明によるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよび本明細書に記載される本発明によるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子ならびに任意選択で本明細書に記載される本発明による抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の有効量での、好ましくは、薬学的に許容される担体とともに、がんを患う患者の治療のための医薬製剤の製造のための使用をさらに提供する。
細胞療法
いくつかの実施形態では、免疫療法は、活性化免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、がんの治療として提供される。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞移植を含む。
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与を含む。当業者は、ＣＡＲが細胞外腫瘍結合部分と融合した細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインから構成される抗原標的化受容体の一種であり、最も一般的には、モノクローナル抗体からの単鎖可変断片（ｓｃＦｃ）であることを理解するであろう。
ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介提示とは独立して細胞表面抗原を直接認識し、全ての患者における任意の所与の抗原に特異的な単一の受容体コンストラクトの使用を可能にする。初期のＣＡＲは、抗原認識ドメインをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３活性化鎖に融合させた。これらの第１世代のＣＡＲは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞エフェクター機能を誘発させたが、それらは、主にｉｎ ｖｉｖｏでの不十分な抗腫瘍有効性によって制限された。その後のＣＡＲの繰り返しには、ＣＤ３と並行して二次共刺激シグナルが含まれており、これらにはＣＤ２８に由来する細胞内ドメイン、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４）などのさまざまなＴＮＦ受容体ファミリー分子が含まれた。さらに、第３世代受容体は、ＣＤ３に加えて２つの共刺激シグナル、最も一般的には、ＣＤ２８および４－１ＢＢに由来するものを含む。第２世代および第３世代のＣＡＲは、抗腫瘍有効性を劇的に改善し、いくつかの場合では、進行がんを有する患者における完全寛解を引き起こす。一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するように改変された免疫応答性細胞であり、これはＣＡＲがその抗原に結合すると活性化される。
一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗原受容体を含む免疫応答性細胞であり、これはその受容体がその抗原に結合すると活性化される。一実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第１世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第３世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第４世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞を投与することを含む。当業者は、ＴＣＲ改変Ｔ細胞が、腫瘍組織からＴ細胞を単離し、それらのＴＣＲａおよびＴＣＲβ鎖を単離することによって製造されることを理解するであろう。これらのＴＣＲａおよびＴＣＲβは、その後クローニングされ、末梢血から単離されたＴ細胞にトランスフェクトされ、次いで、腫瘍を認識するＴ細胞からＴＣＲａおよびＴＣＲβを発現する。
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ＮＫ細胞を投与することを含む。当業者は、ＣＡＲ改変ＮＫ細胞が、患者から単離されたＮＫ細胞または腫瘍特異的タンパク質を認識するＣＡＲを発現するように操作された市販のＮＫ細胞を含むことを理解されるであろう。
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、樹状細胞を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、がんワクチンを投与することを含む。当業者は、がんワクチンが免疫系をがん特異的抗原およびアジュバントに曝露することを理解されるであろう。いくつかの実施形態では、がんワクチンは、シプリューセル－Ｔ（ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ）、ＧＶＡＸ、ＡＤＸＳ１１－００１、ＡＤＸＳ３１－００１、ＡＤＸＳ３１－１６４、ＡＬＶＡＣ－ＣＥＡワクチン、ＡＣワクチン、タリモジーン・ラハーパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、ＢｉｏｖａｘＩＤ、Ｐｒｏｓｔｖａｃ、ＣＤＸ１１０、ＣＤＸ１３０７、ＣＤＸ１４０１、ＣｉｍａＶａｘ－ＥＧＦ、ＣＶ９１０４、ＤＮＤＮ、ＮｅｕＶａｘ、Ａｅ－３７、ＧＲＮＶＡＣ、ｔａｒｍｏｇｅｎｓ、ＧＩ－４０００、ＧＩ－６２０７、ＧＩ－６３０１、ＩｍＰＡＣＴ Ｔｈｅｒａｐｙ、ＩＭＡ９０１、ｈｅｐｃｏｒｔｅｓｐｅｎｌｉｓｉｍｕｔ－Ｌ、Ｓｔｉｍｕｖａｘ、ＤＣＶａｘ－Ｌ、ＤＣＶａｘ－Ｄｉｒｅｃｔ、ＤＣＶａｘ Ｐｒｏｓｔａｔｅ、ＣＢＬＩ、Ｃｖａｃ、ＲＧＳＨ４Ｋ、ＳＣＩＢ１、ＮＣＴ０１７５８３２８、およびＰＶＸ－４１０からなる群から選択される。
以下の実施例、配列表および図面は、本発明の理解を助けるために提供され、その真の範囲は、添付の特許請求の範囲において示される。本発明の本旨から逸脱することなく、示された手法に修飾を施し得ることが理解される。
以下のステートメントでは、本発明の実施形態が記載される。
１． がんの治療において併用療法として使用するための、転移の予防もしくは治療において併用療法として使用するための、またはＴ細胞活性などの免疫応答もしくは機能の刺激において併用療法として使用するための、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、第２の抗原結合部分と、を含む、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
２． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療で使用するための、実施形態１に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
３． イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子の抗体成分が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施形態１または実施形態２に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
４． 前記抗体成分が、低減したまたは最小限のエフェクター機能を有することを特徴とする、請求項１～３のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
５． 最小限のエフェクター機能が、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
６． エフェクターレスＦｃ突然変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
７． ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列を含み
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする第２の抗原結合部分と、を含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
８． ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列を含み、
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、
ｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のポリペプチド配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
９． ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／または
ｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上で使用するためのＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
ＰＤ－１が、免疫細胞、特にＴ細胞上に、または腫瘍細胞環境中に存在し、
併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、
ｉｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｖ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、
併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、
ｉ）配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、第２の抗原結合部分、
ｉｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、
ｉｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列、または
ｉｖ）配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１０． 併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のポリペプチド配列を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、実施形態１～９のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１１． 組み合わせが、シビサタマブの投与をさらに含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１２． 組み合わせが、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の投与をさらに含む、実施形態１～１１のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１３． 併用療法で使用される抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ｉ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のポリペプチド配列、または
ｉｉ）配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１４． 併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１５． 患者が、免疫療法で治療されているか、または前治療されていた、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１６． 前記免疫療法が、養子細胞移植、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞エンゲージング療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１５に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１７． 養子細胞移植が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、実施形態１６に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
本開示のさらなる態様は、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ１－ＩＬ２ｖの併用治療に関する。ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子は、例えば、国際公開第Ｏ２０１８１８５０４５号および国際公開第２０２００７００４１号に記載されている。
本発明は、がんの治療において併用療法として使用するための、転移の予防もしくは治療において併用療法として使用するための、またはＴ細胞活性などの免疫応答もしくは機能の刺激において併用療法として使用するための、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子との併用療法であって、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分と、を含む、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートとＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子との併用療法を含む。
本発明の一態様では、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療で使用するためのものであり得る。
本発明の一態様では、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートは、イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子の抗体成分が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする。
一態様では、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子は、抗体成分が低減したまたは最小限のエフェクター機能を有することを特徴とする。一態様では、最小限のエフェクター機能は、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する。さらなる態様では、エフェクターレスＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。
一態様では、本発明は、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド、またはｉｉ）配列番号５、および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分と、を含む、先行する態様のいずれか１つによるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
別の態様では、本発明は、ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド、またはｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含み、併用療法に使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３９もしくは配列番号４０もしくは配列番号４１もしくは配列番号４２のポリペプチド配列、またはｉｉ）配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列を含む、先行する態様のいずれか１つによるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／またはｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上において使用するためのＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、ＰＤ－１が、免疫細胞、特にＴ細胞上に、または腫瘍細胞環境中に存在し、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、ｉｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、ｉ）配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分、ｉｉ）配列番号３９もしくは配列番号４０もしくは配列番号４１もしくは配列番号４２のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、本発明は、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、併用療法に使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、ｉ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、本発明は、患者が、免疫療法で治療されているか、または前治療されていた、先行する態様のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。別の態様では、前記免疫療法は、養子細胞移植、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞エンゲージング療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
さらなる態様では、本発明は、養子細胞移植が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートを提供する。
以下のステートメントでは、本発明の実施形態が記載される。
１． がんの治療において併用療法として使用するための、転移の予防もしくは治療において併用療法として使用するための、またはＴ細胞活性などの免疫応答もしくは機能の刺激において併用療法として使用するための、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、を含み、
併用療法で使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分と、を含む、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
２． 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療で使用するための、実施形態１に記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
３． イムノコンジュゲートおよび結合分子の抗体成分が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、実施形態１または実施形態２に記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
４． 前記抗体成分が、低減したまたは最小限のエフェクター機能を有することを特徴とする、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
５． 最小限のエフェクター機能が、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
６． エフェクターレスＦｃ突然変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
７． ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列、
併用療法で使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分と、を含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート
８． ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列、
併用療法で使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、
ｉ）配列番号３９もしくは配列番号４０もしくは配列番号４１もしくは配列番号４２のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６のアミノ酸配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
９． ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／または
ｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上で使用するためのＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
ＰＤ－１が、免疫細胞、特にＴ細胞上に、または腫瘍細胞環境中に存在し、
併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
ｉ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、
ｉｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、または
ｉｖ）配列番号８および配列番号９および配列番号１０のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、
併用療法で使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、
ｉ）配列番号３７の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３８の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３５の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号３６の軽鎖可変ドメインＶＬ、
ｉｉ）配列番号３９もしくは配列番号４０もしくは配列番号４１もしくは配列番号４２のポリペプチド配列、
ｉｉｉ）配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列、または
ｉｖ）配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１０． 併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１、配列番号２および配列番号３のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子が、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１１． 患者が、免疫療法で治療されているか、または前治療されていた、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１２． 前記免疫療法が、養子細胞移植、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞エンゲージング療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１１に記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
１３． 養子細胞移植が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、実施形態１２に記載のＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
実施例１：ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との組み合わせは、ビヒクルおよび単剤治療と比較して抗腫瘍有効性を改善する。
ＫＰＣ－４６６２細胞（マウス膵臓腫瘍細胞）を、ペンシルベニア大学から入手した。細胞株を、ヒトＣＥＡＣＡＭ５を発現するように操作した（ＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ）。ヒトＣＥＡＣＡＭ５をコードする完全長ｃＤＮＡを、哺乳動物発現ベクター中にサブクローニングした。リポフェクタミンＬＴＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１５３３８１００）を使用し、製造元のプロトコルに従って、プラスミドをＫＰＣ－４６６２細胞にトラスフェクトした。安定的にトランスフェクトされたＣＥＡＣＡＭ５陽性ＫＰＣ－４６６２細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、＃１６１４００６３）および２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、＃２５０３００８１）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、＃４１９６５１２０）中で維持した。トランスフェクションから２日後に、ヒグロマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ａｎｔ－ｈｇ－１）を５００μｇ／ｍＬで添加した。最初の選択後に、ＣＥＡＣＡＭ５の最高の細胞表面発現を有する細胞を、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩセルソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって選別し、培養して、安定な細胞クローンを確立した。発現レベルおよび安定性を、抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体（Ａｂｃａｍ、＃１５９８７）および二次抗体としてのＦＩＴＣ－コンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆ０３８２）を使用するＦＡＣＳ分析によって、８週間の期間にわたって確認した（データは示さず）。
ＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ）＋５００μｇ／ｍＬのヒグロマイシン中、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中、３７℃で培養した。０日目に、細胞を、９８％の生存率でのｉｎ ｖｉｔｒｏでの継代数８で、ヒトＣＥＡトランスジェニックマウス（ヒトＣＥＡＣＡＭ５を発現するＣ５７ＢＬ－６ベースのマウス；ｈｕＣＥＡ Ｔｇ）に注射した。合計で３×１０５個のＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ腫瘍細胞を、１：１のＲＰＭＩ：マトリゲル溶液中の細胞懸濁液１００μｌで皮下注射した。２１日目（約２００～３００ｍｍ３の腫瘍平均サイズ）で、動物を、ビヒクル（ヒスチジンバッファー）、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ（Ｐ１ＡＡ６９２３、配列番号８、９および１０）、ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ（Ｐ１ＡＥ５３２５、配列番号１９、２０、２１および２２）、またはｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせのいずれかで処置した。ビヒクル群中の動物は、週に２回、合計６回の注射で処置し、一方処置群中の動物は、週に１回、合計３回の注射で処置した。腫瘍増殖を、ノギスを用いて週に２～３回測定し、腫瘍体積を以下のように算出した：
Ｔｖ：（Ｗ２／２）×Ｌ（Ｗ：幅；Ｌ；長さ）
図１Ａは、腫瘍細胞の接種後４３日目までの異なる処置群の腫瘍体積中央値（ｍｍ３＋／－ＣＩ ９５％）を示している。処置期間にわたる各動物についての腫瘍体積における変化を、図１Ｂに示す。４３日目の腫瘍体積中央値の統計的比較を、表１に示す（Ｄｕｎｎ検定）。ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせで処置した動物は、ビヒクルまたはｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ単独で処置した動物よりも有意に低減した腫瘍体積を示した。４３日目の処置群の腫瘍体積中央値の処置対対照比（ＴＣＲ）を、表１に示す。１に等しいＴＣＲは、抗腫瘍効果がないことを示し、一方０に等しいＴＣＲは、完全な腫瘍縮小を示す。図１Ｃは、低腫瘍サイズのバイナリ読み出しを提供する、５０ｍｍ３を下回る（腫瘍＜５０ｍｍ３）か、または５０ｍｍ３を上回る（腫瘍＞５０ｍｍ３）最後に観察された腫瘍体積を有する動物の割合を示している。
これらのデータは、ＦＡＰ－４－１ＢＢのＰＤ１－ＩＬ２ｖとの併用治療が、腫瘍阻害だけではなく、０．０５５のＴＣＲを示して（表２）、腫瘍縮小も誘発させることができることを示している。統計的有意性が分析される場合、二重併用だけがビヒクルおよびｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ処置よりも有意に良好であり（表１）、ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＭｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの間の強い相乗効果を実証している。寛解に目を向けると、二重併用群は、５０ｍｍ３を下回るサイズを有する腫瘍を示し（４６％）、そのような併用のさらなる治癒可能性を実証している（図１Ｃ）。
表1: 43日目の腫瘍体積中央値の統計的比較
Figure 2024508949000005
表2:43日目の腫瘍体積中央値の処置対対照比(TCR)
Figure 2024508949000006
図２は、腫瘍細胞の注射後４３日目までの処置群のイベント（６００ｍｍ３の腫瘍サイズ）までの時間の概説するカプラン・マイヤープロットを示す。異なる処置群のイベントまでの時間曲線を比較するログランク検定を実施した（表３）。ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせで処置された動物は、ビヒクルまたはｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢで処置された動物と比較して、統計的により高い生存率を示した。
表3:カプラン・マイヤープロットのログランク検定
Figure 2024508949000007
実施例２：ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子との組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８＋Ｔ細胞数を増加させる。
フローサイトメトリーによる免疫薬力学的（ＩｍｍｕｎｏＰＤ）分析を、各処置群（４匹のマウス／群）；ビヒクル、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ、およびｍｕＰＤ１－ＩＬ２とｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせの腫瘍に対して実施した。動物を実施例１に記載されるように処置した。腫瘍を２つの時点；２９日目（スカウト）または４３日目（終了時）で採取した。腫瘍を細かく切断し、単一細胞懸濁液を得るために、Ｌｉｂｅｒａｓｅ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号０５４０１０２０００１）およびＤＮＡｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号１０１０４１５９００１）を用いて３７℃で３０分間消化させた。腫瘍の単一細胞懸濁液を、標識抗体（全てＬｕｚｅｒｎａＣｈｅｍＡＧから入手：ＣＤ４５－ＡＦ７００（カタログ番号１０３１２８）、ＴＣＲｂ ＰＥ－Ｃｙ５（カタログ番号１０９２１０）、ＣＤ８ａ－ＢＶ７１１（カタログ番号１００７４８）、ＦｏｘＰ３－ＦＩＴＣ（カタログ番号１２６４０６）、ＣＤ４－Ｂ５１０（カタログ番号１００４４９））で直接染色した。試料を、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して取得した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＤ４５、ＴＣＲｂおよびＣＤ８に対してゲートオンし、一方ＴｒｅｇＴ細胞を、ＣＤ４５、ＴＣＲｂ、ＣＤ４およびＦｏｘＰ３に対してゲートオンした。ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．１を用いた分析後に、結果をＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍで視覚化した。
ｈｕＣＥＡ ＴｇマウスにおけるＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ腫瘍は、Ｔ細胞排除の表現型を有する。ｍｕＰＤ１－ＩＬ２とｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせによる処置は、２９日目での腫瘍中の増加したＣＤ８＋Ｔ細胞数をもたらした（図３Ａ）が、一方Ｔｒｅｇ Ｔ細胞数は変化しないままであった（図３Ｃ）。したがって、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２とｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせは、２９日目でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比をもたらし（図３Ｅ）、これは強い抗腫瘍応答と相関する。
実施例３：ＰＤ１－ＩＬ２およびＦＡＰ－４－１ＢＢ結合分子のＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、抗腫瘍有効性を改善し、ＴＣＢ単独による処置と比較して腫瘍エスケープを防止する。
ｈｕＣＥＡ ＴｇマウスにおけるＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ腫瘍（ｐ５３－ＫＯ、ＫＲＡＳ発現）は、線維芽細胞上のＦＡＰの強い発現レベルおよび腫瘍細胞上のヒトＣＥＡＣＡＭ５の強い発現を伴うＴ細胞排除表現型を有する。ｈｕＣＥＡ Ｔｇマウスは、腫瘍細胞上のｈｕＣＥＡＣＡＭ５の発現に対して寛容性があり、免疫応答を誘発せずに腫瘍増殖を可能にする。これは、増殖性サイトカインに結合したチェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）、ＦＡＰ標的化共刺激アゴニストおよびＣＥＡ標的化エンゲージャー（ＴＣＢ）の組み合わせを研究することを可能にする。
ＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ）＋５００μｇ／ｍＬのヒグロマイシン中、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中、３７℃で培養した。細胞を、９７％の生存率でのｉｎ ｖｉｔｒｏでの継代数６で、ｈｕＣＥＡ Ｔｇマウスに注射した。合計で３×１０５個のＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ腫瘍細胞を、１：１のＲＰＭＩ：マトリゲル溶液中の細胞懸濁液１００μｌで皮下注射した。２１日目（約３００ｍｍ３の腫瘍平均サイズ）から、動物を、ビヒクル（ヒスチジンバッファー）、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ（Ｐ１ＡＡ９６０４、配列番号３１、３２、３３および３４）、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ（Ｐ１ＡＡ６９２３）、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ（Ｐ１ＡＥ５３２５）、またはｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢで処置した。ヒスチジンバッファーおよびｍｕＣＥＡ－ＴＣＢは、週に２回注射し、一方ＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢは週に１回注射した。
腫瘍増殖を、ノギスを用いて週に２～３回測定し、腫瘍体積を以下のように算出した：
Ｔｖ：（Ｗ２／２）×Ｌ（Ｗ：幅；Ｌ；長さ）
図４Ａは、４３日目までの処置群の腫瘍体積中央値を示す。図４Ｂ～４Ｆには、各動物についての腫瘍増殖曲線が示されており、処置群の抗腫瘍応答の均質性を示している。表４は、ノンパラメトリックＳｔｅｅｌ－Ｄｗａｓｓ法によって算出された、４３日目での異なる処置群の腫瘍体積中央値の統計的比較を示す。処置群の処置対対照比（ＴＣＲ）および腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を表５に示す。１に等しいＴＣＲは、抗腫瘍効果がないことを示し、一方０に等しいＴＣＲは、完全な腫瘍縮小を示す。１００を上回るＴＧＩは、腫瘍縮小を示し、一方１００に等しいＴＧＩは、腫瘍静止を示す。
表4:43日目での異なる処置群の腫瘍体積中央値の統計的比較
Figure 2024508949000008
表5:43日目での処置群の処置対対照比(TCR)および腫瘍増殖阻害(TGI)
Figure 2024508949000009
ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ単独による処置は、Ｔ細胞排除の膵臓がんに関して腫瘍増殖を制御することができない。しかしながら、そのｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖまたはｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの組み合わせは、ビヒクルと比較する場合、腫瘍増殖の制御における統計的有意差をもたらす。ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢとｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢとの三重組み合わせは、さらに強い抗腫瘍応答を誘発させる。三重組合せは、全ての動物において腫瘍縮小を示す唯一の群であり、すなわち、全ての動物は、療法が開始された時よりも小さい腫瘍体積を４３日後に示した。
実施例４：ＰＤ１－ＩＬ２およびＦＡＰ－４－１ＢＢ結合分子のＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８＋細胞対Ｔｒｅｇ比の増加をもたらす。
フローサイトメトリーによる免疫薬力学的（ＩｍｍｕｎｏＰＤ）分析を、各処置群（４匹のマウス／群）；ビヒクル、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢに対して実施した。動物を実施例３に記載されるように処置した。腫瘍を２つの時点；２９日目（スカウト）または４３日目（終了時）で採取した。腫瘍を細かく切断し、単一細胞懸濁液を得るために、Ｌｉｂｅｒａｓｅ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号０５４０１０２０００１）およびＤＮＡｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号１０１０４１５９００１）を用いて３７℃で３０分間消化させた。腫瘍の単一細胞懸濁液を、標識抗体（全てＬｕｚｅｒｎａＣｈｅｍＡＧから入手：ＣＤ４５－ＡＦ７００（カタログ番号１０３１２８）、ＴＣＲｂ ＰＥ－Ｃｙ５（カタログ番号１０９２１０）、ＣＤ８ａ－ＢＶ７１１（カタログ番号１００７４８）、ＦｏｘＰ３－ＦＩＴＣ（カタログ番号１２６４０６）、ＣＤ４－Ｂ５１０（カタログ番号１００４４９））で直接染色した。試料を、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して取得した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＤ４５、ＴＣＲｂおよびＣＤ８に対してゲートオンし、一方ＴｒｅｇＴ細胞を、ＣＤ４５、ＴＣＲｂ、ＣＤ４およびＦｏｘＰ３に対してゲートオンした。ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．１を用いた分析後に、結果をＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍで視覚化した。
腫瘍内Ｔ細胞の数の分析は、全ての処置条件が、腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積を増加させることを示した（図５Ａ）。ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢの組み合わせは、実験の終了時（４３日目）に腫瘍内ＣＤ８＋Ｔ細胞の最も大幅な増加をもたらした。対照的に、４３日目には、制御性Ｔ細胞の増加は、ビヒクル処置群と比較して三重併用群では見られなかった（図５Ｂ）。これは、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢ＋ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢ処置群では、実験の終了時に最も高いＣＤ８／Ｔｒｅｇ比をもたらす（図５Ｃ）。腫瘍内のエフェクターＣＤ８細胞数の増加は、腫瘍制御と強く相関する。この作用様式は、ＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組み合わせの機能と一致しており、それらの相乗効果を裏付けている。
実施例５：ＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子とＣＥＡ－ＴＣＢとの組み合わせは、腫瘍塊中のＣＤ８ Ｔ細胞蓄積を増加させる。
動物を実施例３に記載されるように処置した。４３日目に腫瘍を切除し、１％ＰＦＡ中で４℃にて１８時間固定した。ＰＦＡからＰＢＳに移した後に、腫瘍を４％低ゲル化温度アガロース中に埋め込んだ。一般的なカミソリ刃を備えたＬｅｉｃａ ＶＴ１２００ｓビブラトームを使用して、これらのブロックから７０μｍの腫瘍切片を切断した。続いて、切片を透過処理し（ＴＢＳ＋０．２％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ）、ＢＳＡおよびマウス血清（各１％）を使用して２時間ブロックした後、以下の抗体：ＣＤ８ａ（クローン：ＢＶ４２１にコンジュゲートした５３－６．７；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ カタログ番号１００７３８）を使用して、２３℃にて１５時間染色した。ＬＥＩＣＡ ＳＰ８共焦点顕微鏡を使用して、画像を取得した。３Ｄ画像を、初期画像セグメンテーション用のＩＭＡＲＩＳ、ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．１、ＭａｔｌａｂおよびＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて分析した。
図６Ａに示したＣＤ８＋Ｔ細胞の位置のローカリゼーションおよび図６Ｂに示したグラフ表示は、ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢによる非炎症性腫瘍の処置が、大部分が腫瘍の端にある微量のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積を誘発させることを実証している。ｍｕＣＥＡ－ＴＣＢのｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢまたはｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖのいずれかとの組み合わせは、腫瘍中のＣＤ８ Ｔ細胞の蓄積をさらに増加させる。ｍｕＦＡＰ－４－１ＢＢおよびｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖのｍｕＣＥＡ－ＴＣＢとの相乗効果は、腫瘍の端での（０～２５０μｍ、図６Ｃ）およびコアへの（２５０～１０００μｍ、図６Ｄ）両方の最高のＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積の促進によって明らかである。
実施例６：ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ／ＣＤ４０結合分子との組み合わせは、単剤療法治療と比較して抗腫瘍有効性を改善する。
ＫＰＣ－４６６２－ｈｕＣＥＡ細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ）＋５００μｇ／ｍＬのヒグロマイシン中、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中、３７℃で培養した。細胞を、９７％の生存率でのｉｎ ｖｉｔｒｏでの継代数６で、ヒトＣＤ４０を発現するマウス（ｈｕＣＥＡ Ｔｇマウス）に注射した。合計で３×１０５個の腫瘍細胞を、１：１のＲＰＭＩ：マトリゲル溶液中の細胞懸濁液１００μｌで皮下注射した。
２８日目（約２００ｍｍ３の腫瘍平均サイズ）で、動物を、ビヒクル（ヒスチジンバッファー）、ＦＡＰ－ＣＤ４０（Ｐ１ＡＥ２３０２－０３９、配列番号４３、４４、４５、４６）、ｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖ（Ｐ１ＡＡ６９２３）またはｍｕＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－ＣＤ４０との組み合わせで処置した。ＦＡＰ－ＣＤ４０は、２８日目に１回投与し、一方、ＰＤ１－ＩＬ２ｖおよびビヒクルは、週に１回で３回投与した。腫瘍増殖を、ノギスを用いて週に２～３回測定し、腫瘍体積を以下のように算出した：
Ｔｖ：（Ｗ２／２）×Ｌ（Ｗ：幅；Ｌ；長さ）
ｈｕＣＤ４０ Ｔｇマウスは、注射された腫瘍細胞上で発現されるｈｕＣＥＡに対して寛容性ではない。したがって、ＣＥＡは、腫瘍抗原として機能し、炎症性／免疫原性の設定におけるＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－ＣＤ４０との組み合わせをプロファイルすることを可能にする。
図７Ａは、腫瘍細胞注射後５８日目までのビヒクル、ＰＤ１－ＩＬ２ｖ、ＦＡＰ－ＣＤ４０、およびＰＤ１－ＩＬ２ｖ＋ＦＡＰ－ＣＤ４０で処置した動物の平均腫瘍体積（ｍｍ３＋／－ＳＥＭ）を示している。図７Ｂ～７Ｅは、群の抗腫瘍応答の均質性を示す、各動物についての腫瘍体積を示している。ＰＤ１－ＩＬ２ｖの単剤療法は、腫瘍増殖阻害を誘発させることができるが、一方ＦＡＰ－ＣＤ４０は、単一の薬剤として注射されるとき、腫瘍増殖に対する効果をほとんど誘発させないか、または軽微な効果のみを誘発させる。しかしながら、両方の分子の組み合わせは、処置動物の大部分において、ＫＰＣ－４６６２－ＣＥＡ腫瘍の完全な根絶をもたらすため、ＰＤ１－ＩＬ２ｖとＦＡＰ－ＣＤ４０との組み合わせを炎症性／免疫原性のタイプの腫瘍における強力な組み合わせとして提案する。
配列
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Claims (15)

  1. がんの治療において併用療法として使用するための、転移の予防もしくは治療において併用療法として使用するための、またはＴ細胞活性などの免疫応答もしくは機能の刺激において併用療法として使用するための、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
    併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチドを含み、
    併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、
    ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  2. 乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、メラノーマ、膵臓がん、胃癌、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の治療で使用するための、請求項１に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  3. イムノコンジュゲートおよびＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子の抗体成分が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものであることを特徴とする、請求項１に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  4. 前記抗体成分が、低減したまたは最小限のエフェクター機能を有することを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  5. 最小限のエフェクター機能が、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  6. エフェクターレスＦｃ突然変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである、請求項１～５のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  7. ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
    ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、または
    ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含み、
    併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分と、を含み、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、
    請求項１～６のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  8. ＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
    ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、または
    ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチドを含み、
    併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、
    ｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、または
    ｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含む、
    請求項１～７のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  9. ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／または
    ｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上
    で使用するためのＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートであって、
    ＰＤ－１が、免疫細胞、特にＴ細胞上に、または腫瘍細胞環境中に存在し、
    併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、
    ｉ）配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬおよび配列番号３のポリペプチド配列、
    ｉｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７のポリペプチド配列、または
    ｉｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７のポリペプチド配列、を含むことを特徴とし、
    併用療法で使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、
    ｉ）配列番号１１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号１２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、ジスルフィド結合によって互いに結合された第１および第２のポリペプチドを含む第２の抗原結合部分であって、第１のポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、第２の抗原結合部分、
    ｉｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６もしくは配列番号１７もしくは配列番号１８のポリペプチド配列、または
    ｉｉｉ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列
    を含むことを特徴とする、ＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  10. 併用療法で使用されるＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲートが、配列番号１、配列番号２および配列番号３のポリペプチド配列を含むことを特徴とし、併用療法に使用されるＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子が、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、請求項１～９のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  11. 組み合わせが、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体の投与をさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  12. 抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、シビサタマブである、請求項１１に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  13. 患者が、免疫療法で治療されているか、または前治療されていた、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  14. 前記免疫療法が、養子細胞移植、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞エンゲージング療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
  15. 養子細胞移植が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、請求項１４に記載のＦＡＰ／４－１ＢＢ結合分子と組み合わせたＰＤ－１標的化ＩＬ－２変異体イムノコンジュゲート。
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