JP2024505000A - 複数のタンパク質の送達のための血小板アルファ顆粒 - Google Patents

複数のタンパク質の送達のための血小板アルファ顆粒 Download PDF

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Abstract

本開示は、少なくとも２つの薬剤を担持した血小板であって、各薬剤が血小板の異なるα顆粒タイプに担持されている血小板を含む、組成物及び方法を提供する。血小板に担持された薬剤は、一般に分解から保護され、対象は、薬剤の毒性（存在する場合）から保護される。これらの利点は、損傷、炎症、及び／または血管新生の部位へ向かう血小板の生来の能力と相まって、治療有効量の薬剤を標的部位に確実に送達させるのに役立つ。【選択図】図２５Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月２７日に出願されたＵＳ６３／１４２，４０２（その内容全体が参照により組み込まれる）に対する優先権を主張する。
配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含み、この配列表は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年１月２６日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、５８５３３－７０２．６０１＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、サイズは３，１５５バイトである。
全身投与される治療用化合物は、その標的部位に到達する前に分解する可能性がある。したがって、それらが少しでも到達したとしても、それらの用量は治療効果を達成するには少なすぎる場合がある。血小板は、損傷、炎症、及び／または血管新生の部位へ自然に向かい、天然のカーゴをこれらの部位へ輸送することが知られている。仮に外来性治療剤を血小板に担持させることができれば、薬剤は、薬剤の全身投与後に生じるであろう分解から保護されるはずである。しかしながら、血小板のアルファ顆粒に外来性治療剤を担持させるための機構については説明がなされていない。したがって、損傷、炎症、及び／または血管新生の部位に外来性治療剤を送達することができる担持血小板に対するアンメットニーズが存在する。
本開示の一態様は、例えば疾患または障害を治療するための、組成物である。本組成物は、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物と、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物と、を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）には好ましくは結合しない。
いくつかの実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプは、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、第２のアルファ顆粒タイプは、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）関連顆粒である。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、第２のアルファ顆粒タイプの内容物は、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る。
種々の実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される。
いくつかの実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に放出される。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸を含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸からなる。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなっていてもよく、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列からなっていてもよい。
種々の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、第２のポリペプチドは、第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのＮ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＮ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１のポリペプチドのＣ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＣ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
種々の実施形態では、第１の薬剤は、第１のリンカーを介して第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は、第２のリンカーを介して第２のポリペプチドに間接的に連結されている。場合によっては、第１のリンカー及び／または第２は、１つ以上の原子をそれぞれ含む。第１のリンカー及び／または第２は、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含み得る。第１のリンカー及び／または第２のリンカーは、アミノ酸鎖をそれぞれ含み得る。
いくつかの実施形態では、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接連結されている。
実施形態では、マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている。
種々の実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む。場合によっては、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、抗体または蛍光部分を含む。
いくつかの実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい。
実施形態では、第１の化合物及び／または第２の化合物は、蛍光部分をさらに含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する。
いくつかの実施形態では、組成物は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物をさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
本開示の別の態様は、単離血小板である。単離血小板は、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物の少なくとも１つのコピーと、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物の少なくとも１つのコピーと、を含む。
実施形態では、血小板は、合成血小板、同種血小板、自家血小板、または修飾された異種血小板である。
種々の実施形態では、血小板は、自家血小板である。
いくつかの実施形態では、血小板は、同種血小板である。
実施形態では、血小板は、多血小板血漿から得られる。
種々の実施形態では、血小板は、１～１０００コピーの第１の化合物及び１～１０００コピーの第２の化合物を含む。場合によっては、１～１０００コピーの第１の化合物が、血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持され、１～１０００コピーの第２の化合物が、血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持される。第１の化合物の最小の１つのコピーが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持され得、第２の化合物の少なくとも１つのコピーが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持され得る。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合する。種々の実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプは、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、第２のアルファ顆粒タイプは、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）関連顆粒である。
いくつかの実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、第２のアルファ顆粒タイプの内容物は、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される。
種々の実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に放出される。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である。場合によっては、または第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含み得る。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸を含む。
６ いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸からなる。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列からなる。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなり、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列からなる。
種々の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、第２のポリペプチドは、第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのＮ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＮ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１のポリペプチドのＣ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＣ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
種々の実施形態では、第１の薬剤は、第１のリンカーを介して第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は、第２のリンカーを介して第２のポリペプチドに間接的に連結されている。場合によっては、第１のリンカー及び／または第２は、１つ以上の原子をそれぞれ含む。第１のリンカー及び／または第２は、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含み得る。第１のリンカー及び／または第２は、アミノ酸鎖をそれぞれ含み得る。
いくつかの実施形態では、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接連結されている。
実施形態では、マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている。
種々の実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む。場合によっては、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、抗体を含む、及び／または蛍光部分を含む。
いくつかの実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい。
実施形態では、第１の化合物及び／または第２の化合物は、蛍光部分をさらに含む。
種々の実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する。
いくつかの実施形態では、単離血小板は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーをさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される態様または実施形態のいずれかの単離血小板と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である。
実施形態では、医薬組成物は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
種々の実施形態では、医薬組成物は、第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含むか、または第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、かつ第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む。
一態様では、本開示は、疾患または障害を治療するための本明細書に開示される医薬組成物のいずれかの使用を提供する。実施形態では、疾患または障害は、がんである。
別の態様では、本開示は、疾患または障害を治療するための薬物の製造における、任意のまたは本明細書に開示される医薬組成物のいずれかの、本明細書に開示される単離血小板のいずれかの使用を提供する。種々の実施形態では、疾患または障害は、がんである。
さらに別の態様では、本開示は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療するための方法を提供する。この方法は、治療有効量の本明細書に開示される医薬組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む。
本開示の一態様は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療するための方法である。この方法は、治療有効量の本明細書に開示される組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む。
上記方法のいくつかの実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に標的部位で放出される。
上記方法の実施形態では、この方法は、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物を対象に投与するステップをさらに含む。場合によっては、第２の医薬組成物は、第１のアルファ顆粒タイプからの第１の化合物の放出を促進し、第３の医薬組成物は、第２のアルファ顆粒タイプからの第２の化合物の放出を促進する。第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物は、医薬組成物が投与された後に投与され得る。医薬組成物は、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与され得る。
上記方法の種々の実施形態では、疾患または障害は、がんである。
上記方法のいくつかの実施形態では、疾患または障害は、炎症である。
上記方法の種々の実施形態では、疾患または障害は、埋植物、移植片、ステント、または補装具の副作用である。
上記方法の実施形態では、疾患または障害は、欠陥遺伝子に起因する。
上記方法のいくつかの実施形態では、疾患または障害は、損傷である。
本開示の別の態様は、担持血小板を製造するための方法である。この方法は、血小板を得るステップと；血小板を本明細書に開示される組成物のいずれかとｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと；血小板と組成物との間の接触を、第１の化合物が血小板の第１のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで、かつ第２の化合物が血小板の第２のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで進行させて、これにより担持血小板を生成するステップと、を含む。
本開示のさらに別の態様は、担持血小板を製造するための方法である。この方法は、血小板を得るステップと；血小板を、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと；血小板を、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと、を含む。
実施形態では、血小板を第１の化合物と接触させることと、血小板を第２の化合物と接触させることは、同時的である。
種々の実施形態では、血小板を第１の化合物と接触させることと、血小板を第２の化合物と接触させることは、逐次的である。
いくつかの実施形態では、この方法は、血小板を第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させることをさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
一態様では、本開示は、疾患または障害を治療するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される単離血小板のいずれか及び使用説明書が含まれる。
別の態様では、本開示は、疾患または障害を治療するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される医薬組成物のいずれか及び使用説明書が含まれる。
実施形態では、キットは、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物をさらに含む。
さらに別の態様では、本開示は、担持血小板を製造するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される組成物のいずれか及び使用説明書が含まれる。
本明細書に開示される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
本発明の新規特徴を、添付の特許請求の範囲に具体的に記載する。本開示の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理を利用した例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明及び添付図面（本明細書ではまた「図（ｆｉｇｕｒｅ）」及び「図（ＦＩＧ．）」でもある）を参照することによって得られる。
Ａ及びＢは、付着したカーゴを血小板中に捕捉させる例示的なグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドの能力を示すグラフである。 Ａは、付着したカーゴを血小板のアルファ顆粒中に捕捉させる例示的なグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドの能力を示す免疫蛍光画像である。Ｂは、付着したカーゴを血小板のアルファ顆粒中に捕捉させる例示的なグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドの能力を示すグラフである。 等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）実験を示す模式図である。 配列番号１のＧＡＧ結合ペプチドに関する、例示的なＧＡＧ結合ペプチドを保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。 配列番号２のＧＡＧ結合ペプチドに関する、例示的なＧＡＧ結合ペプチドを保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。 電荷を持たないリガンドに関する、例示的なＧＡＧ結合ペプチドを保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。 図３Ｂのデータを表で示す。 図３Ｃのデータを表で示す。 対照ペプチド（ＣＦＬ；ＥＧＧＩＷＦＰＹＧＧＦ；配列番号１４）ならびに２つのＰＡＬ（ＰＡＬ１；ＥＲＲＩＷＦＰＹＲＲＦ；配列番号１及びＰＡＬ２；ＲＦＲＷＰＹＲＩＲＥＦ；配列番号２）を含むペプチドアミノ酸配列を示す。 前の図の３つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドのアフィニティークロマトグラフィーデータ（但し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に結合する場合である）を示す。 前の図の３つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドのアフィニティークロマトグラフィーデータ（但し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に結合する場合である）を示す。 Ｆａｍ－ＰＡＬ－ルシタニブのコンジュゲーションの図を示す。 種々のコンジュゲートのＦＧＦＲ活性％を示す。ＰｒｏｍｅｇａのＡＤＰ－Ｇｌｏキットを使用して試験した場合、コンジュゲートしたルシタニブはＦＧＦＲ１阻害機能を維持している。ＥＣ５０のわずかな下落は、コンジュゲートの溶解性の低下に起因し得る。この図及び他所に含まれる略語は、必要に応じて以下の通りである：Ａ－ＰＡＬ１ －－ Ａｌｅｘａ６４７標識－ＰＡＬ１；Ａ－ＰＡＬ２ －－ Ａｌｅｘａ６４７標識－ＰＡＬ２；Ｆａｍ－ＰＡＬ１ －－ Ｆａｍ標識－ＰＡＬ１；Ｆａｍ－ＰＡＬ２ －－ Ｆａｍ標識－ＰＡＬ２；Ｆａｍ－ＰＡＬ１－Ｌｕｃｉ －－ Ｆａｍ－ＰＡＬ１コンジュゲートルシタニブ；Ｆａｍ－ＰＡＬ２－Ｌｕｃｉ －－ Ｆａｍ－ＰＡＬ２コンジュゲートルシタニブ；Ｆａｍ－ＣＦＬ－Ｌｕｃｉ －－ Ｆａｍ－ＣＦＬコンジュゲートルシタニブ；及びＦａｍ－Ｌ－Ｌｕｃｉ －－ Ｆａｍ－リンカーコンジュゲートルシタニブ。 グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物の血小板への担持を示すグラフである。 グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持される能力を示す免疫蛍光画像である。 グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持される能力を示すグラフである。 ＰＡＬ１を含む例示的な化合物を保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を含む。 ＰＡＬ２を含む例示的な化合物を保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を含む。 ＣＦＬを含む対照化合物を保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を含む。 図７Ａのデータを表で示す。 図７Ｂのデータを表で示す。 図７Ｃのデータを表で示す。 前の図の３つの例示的な化合物のアフィニティークロマトグラフィーデータ（但し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に結合する場合である）を示す。 追加の例示的な化合物を保持するセルに滴定したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）のＩＴＣ解離動態のグラフ表示を含む。これらの追加の例示的な化合物は、ＰＡＬ１Ａ～ＰＡＬ１１Ａとして識別され、配列番号３～配列番号１３のアミノ酸配列を有するＧＡＧ結合ペプチドをそれぞれ含む。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 図９Ａのデータを表で示す。 追加の例示的な化合物及び陰性対照化合物の平均解離定数を示すグラフである。 本開示の化合物を形成するときにＧＡＧ結合ペプチドを薬剤にコンジュゲートさせる際の例示的なステップを示す図である。 グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持される能力を示す免疫蛍光画像である。 グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持される能力を示すグラフである。 ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、及びエンドスタチンの血小板レベルが、腫瘍が休止状態から脱出する直前に変化し、その均衡が腫瘍増殖の刺激物質の方へ向かうことを示す図である。 血小板ががん特異的タンパク質を能動的に捕捉し、アルブミンなどの非特異的タンパク質を能動的に捕捉しないことを示すＭＳ発現マップである。 血小板が血管新生の刺激物質（ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ）及び阻害物質（ＰＦ４、エンドスタチン）の両方を含有することを示す表である。 生活様式の積極的介入を受けている限局性前立腺癌を有する対象（青色）、及び生活様式を変化させずに経過観察中の限局性前立腺癌を有する対象の血小板の介入後６ヶ月時点でのＳＥＬＤＩ－ＴｏＦ分析を示す。 Ａは、それぞれの受容体の阻害が血小板による捕捉を阻害しないことを示すグラフである。Ｂは、但し、スルフェン（Ｓｕｒｆｅｎ）によるヘパリン結合の阻害は血小板α顆粒によるタンパク質捕捉の著しい阻害をもたらすことを示すグラフである。 ＶＥＧＦ及びエンドスタチンが別個の血小板α顆粒に存在することを示す免疫蛍光画像である。 血管新生の刺激物質（例えば、ＶＥＧＦ）がα顆粒中のＰ－セレクチンと局在することを示す免疫蛍光画像である。 エンドスタチンが別個の異なるα顆粒区画に存在し、Ｐ－セレクチンではなくフォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）と共局在することを示す免疫蛍光画像である。 創傷治癒におけるタンパク質の連続放出とプロテイナーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）及びＰＡＲ４の局所濃度勾配をまとめた模式図を含む。 血管内皮腫細胞（ＥＯＭＡ）の表面上のＧＡＧによる増殖因子の捕捉を示すグラフであり、捕捉がヘパリン依存性であり、トロンビンの存在下で増加することが確認される。 血小板により形成された一時的マトリックスから放出された増殖因子に応答したマウス血管内皮腫細胞（ＥＯＭＡ）の増殖を示すグラフである。 血小板が腫瘍活性化時に内皮細胞とタンパク質を交換することができる一時的マトリックスを形成することを示す免疫蛍光画像である。 ＰＡＬ１またはＰＡＬ２コンジュゲートが血小板に担持されることを示す免疫蛍光画像である。 Ｆａｍ－ＰＡＬ１またはＦａｍ－ＰＡＬ２（上部）及びＦａｍ－ＰＡＬ１－ルシタニブまたはＦａｍ－ＰＡＬ２－ルシタニブ（下部）の血小板への用量反応性担持を示すグラフである。担持血小板は、完全に機能する休止血小板の形態を保持しているように思われる。 ＰＡＬ１及びＰＡＬ２が異なる細胞内局在性を有する、すなわち異なるアルファ顆粒に対する優先性を有することを示す免疫蛍光画像である。 ＰＡＬ１（図中の紫色）及びＰＡＬ２（図中の淡青色）がコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に異なって結合し得ることを示す構造図である。 ＰＡＬ１（図中の紫色）及びＰＡＬ２（図中の淡青色）がヘパラン硫酸（ＨＳ）に異なって結合し得ることを示す構造図である。 Ａ及びＢは、ＰＡＬ１が小分子上にコンジュゲートされたとき、ＰＡＬ１がそれぞれの分子を血小板α顆粒へと導くことができることを示す。 血小板顆粒を分画するステップを示すフローチャートである。 血小板顆粒を分離するためのスクロース勾配（上部は絵図であり、下部は写真である）を示す画像である。 顆粒画分のウエスタンブロットである。 ＦＡＭ、ＰＦ４、ＭＲＰ４、またはＶＥＧＦについて標識された顆粒画分の免疫蛍光画像を含む。 顆粒画分の各々におけるマーカーＰＦ４、ＶＥＧＦ、及びＭＲＰ４を定量化するグラフである。 ある特定の顆粒画分におけるＰＡＬコンジュゲートの局在化を示すグラフである。 図２７Ｅに示す画像のピアソン相関分析（ＰＣＡ）を示す。
本開示は、複数の化合物を担持した単離血小板に関する。第１の化合物は、第１の薬剤及び第１のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む。第２の化合物は、第２の薬剤及び第２のポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のＧＡＧと結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む。第１のアルファ顆粒タイプ及び第２のアルファ顆粒タイプは、異なるＧＡＧの優位性によって特徴づけられる。
注目すべきことに、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、好ましくは、第１のアルファ顆粒タイプ（すなわち、Ｐ－セレクチンタイプの顆粒）上に主に見出されるＧＡＧタイプに結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、好ましくは、第２のアルファ顆粒タイプ（すなわち、ｖＷＦタイプの顆粒）上に主に見出されるＧＡＧタイプに結合する。第１の化合物を第１のＧＡＧ結合ペプチドで操作し、第２の化合物を第２のＧＡＧ結合ペプチドで操作することにより、血小板には、２つの活性剤を２つの異なる顆粒タイプに担持させることができる。重要なことは、各顆粒タイプが、顆粒タイプに関連するトロンビン受容体（すなわち、プロテイナーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）及びＰＡＲ４）の固有性に部分的に基づいて、別個の放出プロファイルを有していることである。ＰＡＲ１が高親和性トロンビン受容体であり、最初に（低トロンビン条件で）誘発されてＰ－セレクチンタイプのα顆粒（ここでは第１のα顆粒タイプと称される）を放出するのに対し、ＰＡＲ４は低親和性受容体であり、ｖＷＦ α顆粒（ここでは第２のα顆粒タイプと称される）を放出するのに十分な量のトロンビンが蓄積された場合にのみ誘発される。任意選択で、アルファ顆粒の内容物の放出は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して誘導することができ、これらの放出誘導物質は、治療応答を促進するために、必要に応じて薬剤の放出を促進する医薬組成物で対象に一度に投与することができる。
本開示の担持血小板は、異なるα顆粒タイプを介して、時間的及び空間的に制御された形でその内容物を放出することができる。トロンビン及びその誘導体の酵素活性に加えて、他の組織常在性プロテアーゼ、例えば、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））もまた、時間的及び空間的に制御された形で血小板アルファ顆粒の内容物を選択的に放出する。
したがって、血小板には、少なくとも、早期放出プロファイルを有する第１のα顆粒タイプに第１の薬物が、及びより遅い放出プロファイルを有する第２のα顆粒タイプに第２の薬物が、担持される。結果として、治療の初期の間に必要な第１の薬剤を放出し、治療の後期の間に必要な第２の薬剤を放出する治療薬を設計することができる。さらに、異なるα顆粒タイプの放出のタイミングは、放出を刺激する医薬組成物（例えば、トロンビン、メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））を対象に投与することによって制御することができる。
本発明は、複数の薬剤を異なるα顆粒タイプが担持する血小板の創出に部分的に基づく。損傷、病理学的炎症、及び／または血管新生の部位に指向性治療薬を提供する担持血小板。血小板、例えば血小板アルファ顆粒内に捕捉されたそのような薬剤は、一般に、全身投与時に起こり得る分解から保護される。この利点は、損傷、炎症、及び／または血管新生の部位に向かう血小板の生来の能力と相まって、治療有効量の薬剤を標的部位に確実に送達させるのに役立つ。さらに、本発明において有用な血小板は、複数の異なる薬剤を異なるα顆粒タイプが担持することから、異なる薬剤は、空間的及び時間的に制御された方法で血小板から放出される。したがって、本発明は、指向性がありかつ制御された治療薬を、損傷部位（例えば、慢性創傷を治療するため）、病理学的炎症部位（例えば、関節または肺への損傷を治療するため）、及び／または血管新生部位（例えば、がんを治療するため）に提供する。
本発明以前は、薬剤をアルファ顆粒中の特定のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に固定することによって血小板に内在化させることができること、及び特定のＧＡＧ結合ペプチドを使用して内在化プロセスを促進することができることは直感に反するものであり、異なる化合物を異なるα顆粒タイプに特異的に担持させることについては言うまでもなかった。実際、以前は、血小板アルファ顆粒に薬剤を担持させるための既知の方法は存在せず、アルファ顆粒タイプの亜集団に異なる薬剤を担持させることができ、それにより異なる薬剤の空間的及び／または時間的に制御された放出が可能となることは知られていなかった。そのような制御放出は、異なる薬剤の逐次送達を可能にし、これにより、異なる薬剤を同時に投与する場合には観察され得ない相乗的な治療効果がもたらされる可能性がある。
本発明は、以下を含むがこれらに限定されない多くの利点を提供する。
（１）原発腫瘍または転移性増殖の部位への薬剤の標的送達により、高用量の薬剤の全身投与の必要性が回避される。したがって、標的部位での治療有効濃度の薬剤を実現するのに必要な薬剤の用量が、より低くなる。
（２）血小板アルファ顆粒中に捕捉された薬剤は、標的外の受容体と結合することができない。したがって、薬剤単独の全身投与に関連する副作用（例えば、毒性）が回避される。
（３）血小板アルファ顆粒中に捕捉された薬剤は、天然のプロセス（例えば、組織プロテアーゼ）による分解から保護される。したがって、この薬剤の半減期は、単独で全身投与された場合の薬剤と比較して延長される。
（４）異なるα顆粒タイプ（それぞれが別個の放出プロファイルを有する）への薬剤の選択的担持により、空間的及び時間的に制御された方法での血小板からの異なる薬剤の放出が可能になる。また、
（５）アルファ顆粒の担持血小板の内容物の放出を、放出誘導物質との接触に応答して誘導することができ、この放出誘導物質は、治療応答を促進するために、必要に応じて薬剤の放出を促進する医薬組成物で対象に一度に投与することができる。
注目すべきことに、本開示の担持血小板は、血小板を凝固促進性にする担持プロセスによって活性化されるのではなく、完全に機能する休止血小板のままである。
血小板、血小板顆粒、及びグリコサミノグリカン
本発明は、疾患、障害、または損傷を治療するための化合物、医薬組成物、及び方法であって、血小板が天然の最初の応答するものであり、かつ血小板が少なくともその疾患、障害、または損傷の初期症状を改善する、化合物、医薬組成物、及び方法を提供する。例示的な疾患、障害、または損傷としては、がん、関節リウマチ、糖尿病網膜症、肥満、アテローム性動脈硬化、虚血性心疾患及び虚血性四肢疾患、潰瘍性大腸炎、脳卒中、火傷、及び他の創傷が挙げられるが、これらに限定されない。生理学的条件下において、循環血小板は組織の健康状態及び安定性を維持する。
創傷及び腫瘍微小環境における血小板の役割に関する新たな情報が明らかとなった（例えば、Ｋｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ａｃｔｉｖｅｌｙ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ”，Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１３：２８３５－４２及びＫｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎ：Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ Ａ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．Ｔｈｉｒｄ ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｍｏｓｂｙ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；２０１３．ｐ．４８７－５０３を参照されたい）。しかしながら、血小板／組織の相互作用の複雑性、ならびに組織増殖及び血管新生の調節における血小板の役割についての理解は遅れている。血小板には、アルファ顆粒、濃染顆粒、及びリソソームを含む、異なる機能を果たす異なるタイプの顆粒が含まれていることが知られている。増殖因子を通常含むアルファ顆粒は、最も主なタイプの顆粒である。Ｂｌａｉｒ ａｎｄ Ｆｌａｕｍｅｎｈａｆｔ，“Ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｌｐｈａ－ｇｒａｎｕｌｅｓ：ｂａｓｉｃ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ”．Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖｉｅｗｓ．２００９，２３（４）：１７７－８９及びＨａｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｃｒａｍｅｒ，“Ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｌｐｈａ－ｇｒａｎｕｌｅｓ”．Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖｉｅｗｓ．１９９３，７（１）：５２－６２を参照されたい。通常、アルファ顆粒のカーゴは血管新生の阻害物質を主に含む（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｒｍａｌ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅ－ｌｅｔｓ．”Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１０；８５：４８７－９３を参照されたい）。しかしながら、対象ががんを有する場合、血小板のカーゴが変化し、アルファ顆粒は主に刺激物質を担持するようになる（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１０；８５：４８７－９３及びＰｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“ＶＥＧＦ，ＰＦ４ ａｎｄ ＰＤＧＦ ａｒｅ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．”Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１２；１５：２６５－７３を参照されたい）。
本発明は、カーゴを異なるアルファ顆粒タイプに担持させることができ、この担持が受容体媒介性ではないという発見に部分的に基づく。代わりに、血小板、特にそのアルファ顆粒へのカーゴの担持は、血小板のアルファ顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）への結合に依存しており、あるタイプのアルファ顆粒はあるＧＡＧ及び他のマーカーにより特徴づけられ、別のタイプのアルファ顆粒は第２のＧＡＧ及び他のマーカーにより特徴づけられる。血小板が非特異的ＧＡＧ阻害剤（すなわち、スルフェン）と接触すると、量が減少したカーゴが血小板に担持される。
本発明はさらに、血小板のカーゴが機能別に組織化され、血管新生の刺激物質及び阻害物質が血小板アルファ顆粒の別個のサブセットに取り込まれるという発見に部分的に基づいており、この区別は、少なくともコンドロイチン硫酸またはヘパラン硫酸、さらにセルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに対するカーゴの結合親和性に基づいている。さらに、Ｐセレクチンにより規定されるアルファ顆粒のサブセットは、ＧＡＧに対する親和性が比較的弱い（すなわち、Ｋｄが比較的高い）ＧＡＧ結合化合物を引き寄せ、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）により規定されるアルファ顆粒のサブセットは、コンドロイチン硫酸と強い親和性（すなわち、比較的高いＫｄ）で相互作用するタンパク質を収容する。
さらに、本発明は、アルファ顆粒のカーゴが凝集及び凝固の際に一緒に放出されないという驚くべき発見に部分的に基づく。代わりに、血管新生増殖刺激物質または阻害物質は、トロンビン（及び／またはマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、もしくはプラスミン（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）））の局所レベルなどの特定の刺激に応答して、空間的及び時間的に制御された形で放出される。トロンビンを例として用いると、Ｐ－セレクチンで標識されたアルファ顆粒の初期応答型サブセットは、血管損傷の直後（例えば、低トロンビン状態）、及びＰＡＲ１（高親和性トロンビン受容体）が結合されたときにその内容物を放出する。対照的に、ｖＷＦ因子で標識されたアルファ顆粒の後期応答型サブセットは、ＰＡＲ４（すなわち、低親和性トロンビン受容体）が結合したときにその内容物を放出する。
したがって、本発明は、血管の内皮層の裂け目を標的とする血小板の生来の能力を利用する。がんという状況では、これにより血小板のカーゴを腫瘍部位に送達することが可能となる。重要なことに、本開示によれば、血小板の異なるアルファ顆粒には事前に２つ以上の薬剤が担持されており、これらの薬剤は、腫瘍部位で形成された一時的マトリックスに特異的に送達される。重要なことに、本発明では、異なるアルファ顆粒タイプに担持された２つのさらなる薬剤は、綿密な（すなわち時間的及び空間的に制御された）酵素作用により、組織プロテアーゼによって一時的マトリックスから放出される。
血小板には、ヘパラン硫酸及びコンドロイチン硫酸の２つの主要なＧＡＧが存在する。
ヘパラン硫酸（ＨＳ）は、グルコサミンに１→４結合したウロン酸の直鎖状コポリマーであるが、可変性の高い構造を有する。ＨＳには相当量のｌ－イズロン酸が存在し得るが、ｄ－グルクロン酸が優勢である。ヘパリンと比較して、ＨＳはスルホ基における置換がはるかに少ない。
ヘパリンは、１→４結合ピラノシルウロン酸及び２－アミノ－２－デオキシグルコピラノース（グルコサミン）残基の繰り返し単位からなる、極めて不均一な直鎖状の多分散多糖である。ウロン酸残基は、通常、９０％のｌ－イドピラノシルウロン酸（ｌ－イズロン酸）及び１０％のｄ－グルコピラノシルウロン酸（ｄ－グルクロン酸）からなる。グルコサミン残基のアミノ基は、アセチル基もしくはスルホ基で置換されてもよく、または非置換であってもよい。グルコサミン残基の３位及び６位は、Ｏ－スルホ基で置換されてもよく、または非置換であってもよい。ｌ－イズロン酸またはｄ－グルクロン酸のいずれかであり得るウロン酸は、２－Ｏ－スルホ基も含有し得る。
大部分のヘパリン結合タンパク質は、ヘパリンとヘパラン硫酸の両方と結合する。両方とも、多数のタンパク質を幅広い可能な結合部位に結合させる不均一な糖配列を有する多分散多糖である。ヘパリンは主に細胞内に存在するが、ＨＳプロテオグリカン（ＨＳＰＧ）は多くの細胞表面に局在し、例えば、増殖因子及びタンパク質リガンドの安定化により、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の機能に寄与する。
コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、以下の二糖の反復単位のランダム配列の直鎖状ポリマーである：２－アセチルアミノ－２－デオキシ－４－０－サルフェート－３－０－～－Ｄ－グルコピラヌロシル－Ｄ－ガラクトース、２－アセチルアミノ－２－デオキシ－６－０－サルフェート－３－０－～－Ｄ－グルコピラヌロシル－Ｄ－ガラクトース、２－アセチルアミノ－２－デオキシ－４，６－０－ジサルフェート－３－０－～－Ｄ－グルコピラヌロシル－Ｄ－ガラクトース、及び２－アセチルアミノ－２－デオキシ－６－０－サルフェート－３－０－～－２’－０－サルフェート－Ｄ－グルコピラヌロシル－Ｄ－ガラクトース。各一硫酸化二糖単位の分子量は５００～６００ｇ／ｍｏｌであり、総質量は５～５０ｋＤａである。コンドロイチン硫酸の分子の体積は、多数の負電荷を有するため、脱水固体中よりも溶液中ではるかに大きい。溶液中では、可変分岐部の負電荷が互いに反発し、このことが分子を伸長したコンフォメーションにさせる。そのため、ＣＳ分子には多数のリガンド結合部位が存在する。
新規の非天然ＧＡＧ結合ペプチドは、血小板のアルファ顆粒へのカーゴの担持に不可欠であるため、本開示の化合物及び方法において有用である。本開示のＧＡＧ結合ペプチドは、化学的もしくは酵素的に（直接もしくは間接的に）薬剤に連結されるか、または薬剤及び当該結合ペプチドを含有する融合タンパク質を産生するように遺伝的に発現される。ＧＡＧ結合ペプチド及びカップリングされた薬剤は、当該新規化合物または融合産物中でそれらの機能を保持する。したがって、新規化合物または融合産物を、血小板の特定のアルファ顆粒タイプに選択的に担持させることができる。
注目すべきことに、本開示の担持血小板は、血小板を凝固促進性にする担持プロセスによって活性化されるのではなく、完全に機能する休止血小板のままである。
グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチド
本開示のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドは、ＧＡＧ鎖上に空間的に画定された負に帯電したスルホ基またはカルボキシル基とイオン対を形成する、正に帯電した塩基性アミノ酸の存在を特徴とする。例えば、ヘパラン硫酸（ＨＳ）は、スルホ基及びカルボキシル基により提供される二糖１つ当たり平均２つの負電荷を有する。したがって、水素結合及び疎水性相互作用などの一部の他の非静電相互作用も複合体の安定性に寄与し得るが、ＨＳとタンパク質間の最も一般的なタイプの相互作用はイオン性である。ＧＡＧの高度に陰イオン性の性質は、非特異的結合をもたらすと考えられていた。しかしながら、血小板のアルファ顆粒では、特定のアルファ顆粒サブセットにおけるＨＳまたはコンドロイチン硫酸（ＣＳ）へのＧＡＧ結合ペプチドの結合は、高い特異性で生じる。この相互作用は、ＧＡＧ結合親和性とＧＡＧ結合ペプチドとを適合させることによって促進される。ＧＡＧ－ペプチド相互作用は、ポリマーの多糖配列に沿ったスルホ基及びカルボキシル基の規定されたパターン及び方向と、複合体の適切な親和性及び特異性を確保するためのＧＡＧ結合ペプチドの塩基性アミノ酸の正確なパターンとに部分的に依存する。
静電相互作用は、ＧＡＧ－ペプチド相互作用において主要な役割を果たしており、ＧＡＧ結合ペプチドの結合配列内のアルギニン及びリジンなどの塩基性アミノ酸の位置が関係している。ＧＡＧ結合部位に特定の方法で配置された塩基性アミノ酸のコンセンサス配列があるか否かを判定するために、多数の研究が行われてきた。例えば、４つのタンパク質、すなわちアポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、ビトロネクチン、及び血小板第４因子のヘパリン結合部位の比較により、これらの領域は、アミノ酸の２つのコンセンサス配列、すなわちＸＢＢＸＢＸ及びＸＢＢＢＸＸＢＸ（ここで、Ｂは塩基性残基であり、Ｘはハイドロパシー（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ）残基である）を特徴とすることが示された。分子モデリング研究により、βストランドコンフォメーションでモデル化された配列ＸＢＢＸＢＸが、塩基性アミノ酸をβストランドの片面に配向させ、ハイドロパシー残基をタンパク質コアへと向け戻させることが示された。同様に、配列ＸＢＢＢＸＸＢＸがα－ヘリックスへとフォールディングされている場合、塩基性アミノ酸はヘリックスの片側に表れる。一部のヘパリン結合タンパク質にはこのコンセンサス配列が含まれているが、含まれていないものもある。このように、塩基性残基が空間的に近接しているが、必ずしも一次アミノ酸配列中で近接しているとは限らない構造モチーフもまた、ヘパリンと結合し得る。
ヘパリン結合部位には、１つ、２つ、または３つの塩基性アミノ酸のクラスター（ＸＢｎＸ（式中、ｎ＝１、２、または３））が含まれることが多い。このようなクラスターと１つまたは２つの非塩基性残基との間隔を空けた配置（ＢＸｍＢ（式中、ｍ＝１または２））は、天然タンパク質で観察される。これは、ヘパリン結合タンパク質が通常、生体系でＨＳと結合するという観察結果と一致する。ＨＳの電荷密度が低いため、最適なタンパク質結合には、間隔を空けた塩基性アミノ酸のクラスターが関与し得る。アルギニン及びリジンは、ヘパリン結合タンパク質及びＨＳ結合タンパク質中で最も多い残基である。両方のアミノ酸は生理的ｐＨで正電荷を有するが、アルギニンはヘパリンと約２．５倍密接に結合する。アルギニンは、スルホ基とのより安定した水素結合及びより強力な静電相互作用を形成する。非塩基性残基もまた、ヘパリン－タンパク質相互作用に重要な役割を果たす可能性がある。それらの中で、セリン及びグリシンは、ヘパリン結合ペプチド中で最も多い非塩基性残基であることが判明している。両方とも小さな側鎖を有しており、ＧＡＧとのペプチド相互作用に最小限の立体的制約及び良好な柔軟性をもたらす。
本発明は、新規の非天然グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドに部分的に基づく。本開示のＧＡＧ結合ペプチドは、血小板のアルファ顆粒中のＧＡＧと結合することができる。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、静電相互作用を通じてＧＡＧと結合する。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）及び／またはヘパラン硫酸（ＨＳ）に結合する。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、ＣＳに優先的に結合する。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合する。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）には好ましくは結合しない。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに結合する。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合しない。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、ＨＳ、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに結合しないか、検出可能に結合しないか、実質的に結合しないか、または低い親和性で結合する。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、約１ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＣＳ含有カラムに結合されたままである。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、約２ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＣＳ含有カラムに結合されたままである。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、約３ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＣＳ含有カラムに結合されない。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、約０．００１Ｎ～約０．０１ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＨＳ含有カラム、セルグリシン含有カラム、パールカン含有カラム、デルマタン硫酸含有カラム、ケラタン硫酸含有カラム、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ含有カラムに結合されない。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、少なくとも約０．１ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＨＳ含有カラム、セルグリシン含有カラム、パールカン含有カラム、デルマタン硫酸含有カラム、ケラタン硫酸含有カラム、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ含有カラムに結合されない。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、少なくとも約１ＮのＮａＣｌに曝露された場合、ＨＳ含有カラム、セルグリシン含有カラム、パールカン含有カラム、デルマタン硫酸含有カラム、ケラタン硫酸含有カラム、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ含有カラムに結合されない。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
例示的なＧＡＧ結合ペプチドは、以下のアミノ酸配列のうちの１つを含む：ＥＲＲＩＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号１）、ＲＦＲＷＰＹＲＩＲＥＦ（配列番号２）、ＡＲＲＩＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号３）、ＥＡＲＩＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号４）、ＥＲＡＩＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号５）、ＥＲＲＡＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号６）、ＥＲＲＩＡＦＰＹＲＲＦ（配列番号７）、ＥＲＲＩＷＡＰＹＲＲＦ（配列番号８）、ＥＲＲＩＷＦＡＹＲＲＦ（配列番号９）、ＥＲＲＩＷＦＰＡＲＲＦ（配列番号１０）、ＥＲＲＩＷＦＰＹＡＲＦ（配列番号１１）、ＥＲＲＩＷＦＰＹＲＡＦ（配列番号１２）、及びＥＲＲＩＷＦＰＹＲＲＡ（配列番号１３）。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるか、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるか、または配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
理論に束縛されることを望まないが、塩基性残基（例えば、アルギニン）は、ＧＡＧ結合ペプチドの特性を規定するのに重要であり、ハイドロパシー残基は安定化を提供するように思われる。
ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含み得る。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。例として、ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び４位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、及び７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び７位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び４位及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ならびにこれらの間の任意の組み合わせを含む。ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にアルギニンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にイソロイシンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位、７位、及び９位にアルギニンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位及び７位にアルギニン、ならびに９位にイソロイシンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位にアルギニン、及び９位にイソロイシンを含み得るか；またはＧＡＧ結合ペプチドは、４位にアルギニン及び９位にプロリンを含み得る。１位、４位、７位、及び／または９位のプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンの任意の組み合わせが、本開示によって包含される。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、少なくとも１０個のアミノ酸を含む。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、１１個のアミノ酸を含む。実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、１１個のアミノ酸からなる。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１または配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列を含む。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含む。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列からなる。
本発明は、本明細書に開示されるＧＡＧ結合ペプチドのアミノ酸配列に、例えば、欠失、変異、挿入、または翻訳後修飾を含めることによりバリアントＧＡＧ結合ペプチドを生成することによって、ＧＡＧ結合ペプチドを最適化するための方法を提供する。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、１つのアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、２つのアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、３つのアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、４つのアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、５つのアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
バリアントは、バリアントＧＡＧ結合ペプチドがその機能を保持している限り、５つを超えるアミノ酸位置で配列番号１～配列番号１３のＧＡＧ結合ペプチドとは異なり得る。
実施形態では、アミノ酸差異は、保存的置換及び／または非保存的置換を含み得る。「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解性、疎水性、親水性、及び／または両親媒性の性質の類似性に基づいてなされ得る。２０個の天然に存在するアミノ酸は、次の６つの標準アミノ酸グループ、すなわち（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅに分類され得る。本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記の６つの標準アミノ酸グループの同じグループに記載された別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＧｌｕによるＡｓｐの交換は、そのように修飾されたポリペプチドにおいて１つの負電荷を保持する。さらに、グリシン及びプロリンは、α－ヘリックスを破壊するそれらの能力に基づいて互いに置換され得る。本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記の６つの標準アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載された別のアミノ酸による交換として定義される。ＧＡＧ結合ペプチドは、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化などの化学的変化を含めることにより修飾され得る。
したがって、本開示は、種々のグリコサミノグリカンに対するＧＡＧ結合ペプチドを特徴づけ、最適化する（例えば、親和性を増加させる）ための方法を提供する。本開示により提供される最適化されたＧＡＧ結合ペプチドは、血小板のアルファ顆粒に存在するグリコサミノグリカンを対象とし得る。血小板のアルファ顆粒に存在する例示的なグリコサミノグリカンとしては、コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及びＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａが挙げられる。最適化されたＧＡＧ結合ペプチドのいずれをも本開示の組成物に含めることができ、組成物のいずれをも、例えば、医薬組成物に含めるために、及び／または疾患または障害を治療するために、血小板に担持させることができる。
化合物及び薬剤
本明細書に開示されるように、異なるアルファ顆粒タイプの血小板は、選択的かつ能動的に（すなわち、濃度勾配に対抗して）、血管新生調節タンパク質、増殖調節タンパク質、及び炎症調節タンパク質を捕捉することができる。本開示は、タンパク質が血小板によって取り込まれ、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）（主にヘパラン硫酸（ＨＳ）及びコンドロイチン硫酸（ＣＳ））に対する親和性に基づいてアルファ顆粒のサブセットに分離されるという発見に基づく。これらのＧＡＧの長い直鎖状で負に帯電した鎖は、アルファ顆粒に構造上の支持を与えるのみならず、アルファ顆粒の機能的なサブセットも説明する。血小板に存在する２つの主要なＧＡＧ（すなわち、ＨＳ及びＣＳ）は、個々の鎖に見られる二糖の数が主に異なる。ヘパラン硫酸は小型（１５～３０個の二糖／側鎖）であるのに対し、コンドロイチン硫酸は多くの結合部位を有し、側鎖あたり最大２５０個の二糖を有する。両方とも、軟骨及び骨の構造及び完全性を維持するように機能するヒアルロン酸（最大５０，０００個の二糖／ＧＡＧ側鎖）などの大型で剛性のＧＡＧとは異なる。血小板中のＧＡＧの多様性はそれらの機能にとって極めて重要であり、ヘパラン硫酸の比較的短い側鎖及び比較的弱い結合によりＰ－セレクチン顆粒が早期に放出される一方で、比較的緻密で長い鎖結合によりｖＷＦ顆粒が遅く放出される。これらの特徴は、化合物の連続放出のために本発明において利用される。
本発明は、少なくとも、また非常に高い親和性でＣＳと結合し、かつ少なくとも中程度の親和性でＨＳと結合する、天然に存在しない新規の血小板固定型グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドを含む。ＧＡＧ結合ペプチドは、本開示の化合物中の薬剤に連結される場合、血小板のアルファ顆粒への薬剤の「担持」を促進する。血小板は絶えず循環し、異常な内皮部位に接着することから、本開示の化合物は様々な病態に広く適用可能である。
本開示の一態様は、例えば疾患または障害を治療するための、組成物である。本組成物は、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物と、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物と、を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）には好ましくは結合しない。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプは、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、第２のアルファ顆粒タイプは、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）関連顆粒である。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、第２のアルファ顆粒タイプの内容物は、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に放出される。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸からなる。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなっていてもよく、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列からなっていてもよい。
実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、第２のポリペプチドは、第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる。
実施形態では、第１のポリペプチドのＮ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＮ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１のポリペプチドのＣ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＣ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
本明細書に開示される任意の態様または実施形態では、薬剤（第１、第２、または第３の）及びＧＡＧ結合ペプチド（第１、第２、または第３の）は、直接連結され得るか、またはそれらは、リンカーと呼ばれる部分を介して連結され得る。リンカーは、共有結合、または薬剤をＧＡＧ結合ペプチドに共有結合させる原子の鎖を含む、化学的部分を指す。リンカーには、アルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレンなどの二価基、－（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ－などの部分、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の繰り返し単位のポリマー、ならびにコハク酸エステル、スクシンアミド、ジグリコール酸エステル、マロン酸エステル、及びカプロアミドを含む二酸エステル及びアミドが含まれる。実施形態では、リンカーは、アミノ酸鎖を含む。実施形態では、アミノ酸鎖のリンカーは、約５００アミノ酸長未満、約４５０アミノ酸長未満、約４００アミノ酸長未満、約３５０アミノ酸長未満、約３００アミノ酸長未満、約２５０アミノ酸長未満、約２００アミノ酸長未満、約１５０アミノ酸長未満、または約１００アミノ酸長未満である。例えば、アミノ酸鎖のリンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。実施形態では、アミノ酸鎖のリンカーは、約１５アミノ酸～約３アミノ酸、例えば、約１０～５アミノ酸である。
実施形態では、第１の薬剤は、第１のリンカーを介して第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は、第２のリンカーを介して第２のポリペプチドに間接的に連結されている。場合によっては、第１のリンカー及び／または第２は、１つ以上の原子をそれぞれ含む。第１のリンカー及び／または第２は、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含み得る。第１のリンカー及び／または第２のリンカーは、アミノ酸鎖をそれぞれ含み得る。
実施形態では、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接連結されている。
実施形態では、マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む。場合によっては、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、抗体または蛍光部分を含む。
本発明において有用な例示的な抗体（またはその断片）としては、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブレゼキマブ（Ａｂｒｅｚｅｋｉｍａｂ）、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アファセビクマブ、アフェリモマブ、アラシズマブペゴル、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス、アンデカリキシマブ、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、アンルキンズマブ（ＩＭＡ－６３８）、アポリズマブ、アプルツマブイクサドチン（Ａｐｒｕｔｕｍａｂ ｉｘａｄｏｔｉｎ）、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチドルトクスマブ（Ａｔｉｄｏｒｔｏｘｕｍａｂ）、アチヌマブ、アトロリムマブ、アベルマブ、アジンツキシズマブベドチン（Ａｚｉｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ＢＣＤ－１００、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベランタマブマフォドチン、ベリムマブ、ベマリツズマブ、ベンラリズマブ、ベルリマトクスマブ（Ｂｅｒｌｉｍａｔｏｘｕｍａｂ）、ベルメキマブ、ベルサンリマブ（Ｂｅｒｓａｎｌｉｍａｂ）、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビルタミマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブレセルマブ、ブリナツモマブ、ブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブロソズマブ、ＢＭＳ ９３６５５９、ボコシズマブ、ブラジクマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、ブロスマブ、カビラリズマブ、カミダンルマブテシリン、カムレリズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カロツキシマブ、カツマキソマブ、ｃＢＲ９６－ドキソルビシンイムノコンジュゲート、セデリズマブ、セミプリマブ、セルグツズマブアムナロイキン、セルトリズマブペゴル、セトレリマブ、セツキシマブ、シビサタマブ、サームツズマブ（Ｃｉｒｍｔｕｚｕｍａｂ）、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コドリツズマブ、コフェツズマブペリドチン、コルツキシマブラブタンシン、コナツムマブ、コンシズマブ、コスフロビキシマブ、ＣＲ６２６１、クレネズマブ、クリザンリズマブ、クロテデュマブ、クサツズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブマフォドチン、デノスマブ、デパツキシズマブマフォドチン、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、デザミズマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ（Ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ドマグロズマブ、ドルリモマブアリトックス、ドスタルリマブ、ドロジツマブ、ＤＳ－８２０１、デュリゴツズマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、ドゥシギツマブ、ドゥボルツキシズマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エレザヌマブ、エルゲムツマブ（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エマパルマブ、エミベツズマブ、エミシズマブ、エナポタマブベドチン、エナバツズマブ、エンホルツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エプチネズマブ、エレヌマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エチギリマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファリシマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィバツズマブ（Ｆｉｂａｔｕｚｕｍａｂ）、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ（Ｆｉｒｉｖｕｍａｂ）、フランボツマブ、フレチクマブ、フロテツズマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレマネズマブ、フレソリムマブ、フロボキマブ、フルネベトマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガルカネズマブ、ガリキシマブ、ガンコタマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガチポツズマブ、ガビリモマブ、ゲジブマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギルベトマブ（Ｇｉｌｖｅｔｍａｂ）、ジムシルマブ、ジレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ゴスラネマブ、グセルクマブ、イアナルマブ、イバリズマブ、ＩＢＩ３０８、イブリツモマブチウキセタン及び９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、イファボツズマブ、イゴボマブ、イラダツズマブベドチン（Ｉｌａｄａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ、イマプレリマブ（Ｉｍａｐｒｅｌｉｍａｂ）、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インデュサツマブベドチン、イネビリズマブ、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イオマブ－Ｂ（Ｉｏｍａｂ－Ｂ）、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イスカリマブ、イスチラツマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラクノツズマブ（Ｌａｃｎｏｔｕｚｕｍａｂ）、ラジラツズマブベドチン、ランパリズマブ、ラナデルマブ、ランドグロズマブ、ラプリツキシマブエムタンシン（Ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ラルカビキシマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンダリズマブ（Ｌｅｎｄａｌｉｚｕｍａｂ）、レンベルビマブ（Ｌｅｎｖｅｒｖｉｍａｂ）、レンジルマブ、レルデリムマブ、レロンリマブ、レソファブマブ、レトリズマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロンカスツキシマブテシリン、ロルボツズマブメルタンシン、ロサツキシズマブベドチン（Ｌｏｓａｔｕｘｉｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、ルパルツマブアマドチン（Ｌｕｐａｒｔｕｍａｂ ａｍａｄｏｔｉｎ）、ルチキズマブ（Ｌｕｔｉｋｉｚｕｍａｂ）、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マルスタシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミリキズマブ、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミツモマブ、ＭＫ－３４７５、モドツキシマブ、モガムリズマブ、モナリズマブ、モロリムマブ、モスネツズマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス（Ｎａｃｏｌｏｍａｂ ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナラツキシマブエムタンシン、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ナビシキシズマブ、ナビブマブ（Ｎａｖｉｖｕｍａｂ）、ナキシタマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ＮＥＯＤ００１、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ネタキマブ、ニモツズマブ、ニルセビマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オレクルマブ、オレンダリズマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オムブルタマブ、ＯＭＳ７２１、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オンバチリマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ（Ｏｒｔｉｃｕｍａｂ）、オテリキシズマブ、オチリマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パムレブルマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ（Ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ、パトリツマブ、ＰＤＲ００１、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、プロザリズマブ、ポガリズマブ（Ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、ポルガビキシマブ、プラシネズマブ、プレザリズマブ（Ｐｒｅｚａｌｉｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ（Ｐｒｉｔｏｘａｘｉｍａｂ）、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラネベトマブ、ラニビズマブ、ラバガリマブ、ラブリズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レラトリマブ、レムトルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リヌクマブ、リサンキズマブ、リツキシマブ、リババズマブペゴル（Ｒｉｖａｂａｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、Ｒｍａｂ、ロバツムマブ、ロレデュマブ（Ｒｏｌｅｄｕｍａｂ）、ロミルキマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロスマンツズマブ、ロバルピツズマブテシリン、ロベリズマブ、ロザノリキシズマブ、ルプリズマブ、ＳＡ２３７、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、サムロタマブベドチン（Ｓａｍｒｏｔａｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、サリルマブ、サトラリズマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリクレルマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ（Ｓｅｔｏｘａｘｉｍａｂ）、セトルスマブ、セビルマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＨＰ６４７、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルトラツマブベドチン（Ｓｉｒｔｒａｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スパルタリズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スプタブマブ、スチムリマブ、スビズマブ、スブラトクスマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タラコツズマブ、タリズマブ、タムツベトマブ（Ｔａｍｔｕｖｅｔｍａｂ）、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、タレクツマブ、タボリマブ、テフィバズマブ、テリモマブアリトックス、テリソツズマブベドチン、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テポジタマブ（Ｔｅｐｏｄｉｔａｍａｂ）、テプロツムマブ、テシドルマブ、テツロマブ（Ｔｅｔｕｌｏｍａｂ）、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、チブリズマブ、チガツズマブ、チルドラキズマブ、チミグツズマブ、チモルマブ、チラゴツマブ（Ｔｉｒａｇｏｔｕｍａｂ）、チスレリズマブ、チソツマブベドチン、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トムゾツキシマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ（Ｔｏｓａｔｏｘｕｍａｂ）、トシツモマブ及び１３１Ｉ－トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ウトミルマブ、バダスツキシマブタリリン、バナリマブ（Ｖａｎａｌｉｍａｂ）、バンドルツズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バリサクマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボバリリズマブ、ボロシキシマブ、ボンレロリズマブ、ボプラテリマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ブナキズマブ（Ｖｕｎａｋｉｚｕｍａｂ）、キセンツズマブ、ＸＭＡＢ－５５７４、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ（Ｚａｔｕｘｉｍａｂ）、ゼノクツズマブ、ジラリムマブ、ゾルベツキシマブ（ＩＭＡＢ３６２、クローディキシマブ）、ならびにゾリモマブアリトックスが挙げられる。
規制当局の承認を満たしているかまたは承認待ちであり、本発明において有用な例示的な抗体（またはその断片）としては、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ ＯＫＴ３）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ）、トシツモマブ－Ｉ１３１（ＢＥＸＸＡＲ）、ネバクマブ（ＣＥＮＴＯＸＩＮ）、エドレコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ）、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ）、ダクリズマブ（ＺＩＮＢＲＹＴＡ；ＺＥＮＡＰＡＸ）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ）、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ、ＲＩＴＵＸＡＮ）、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ）、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ）、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ）、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ）、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ）、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ）、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ）、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ）、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ）、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＡＲＡ）、カナキヌマブ（ＩＬＡＲＩＳ）、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ）、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ）、トシリズマブ（ＲＯＡＣＴＥＭＲＡ、ＡＣＴＥＭＲＡ）、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ）、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ）、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ）、ブレンツキシマブベドチン（ＡＤＣＥＴＲＩＳ）、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ）、アドトラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ）、ラキシバクマブ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ、ＧＡＺＹＶＡＲＯ）、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ）、ラムシルマブ（ＣＹＲＡＭＺＡ）、ベドリズマブ（ＥＮＴＹＶＩＯ）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ）、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ；ＭＡＢＣＡＭＰＡＴＨ、ＣＡＭＰＡＴＨ－１Ｈ）、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ）、イダルシズマブ（ＰＲＡＸＢＩＮＤ）、ネシツムマブ（ＰＯＲＴＲＡＺＺＡ）、ジヌツキシマブ（ＵＮＩＴＵＸＩＮ）、セクキヌマブ（ＣＯＳＥＮＴＹＸ）、メポリズマブ（ＮＵＣＡＬＡ）、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ）、ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ）、エロツズマブ（ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ）、イキセキズマブ（ＴＡＬＴＺ）、レスリズマブ（ＣＩＮＱＡＥＲＯ、ＣＩＮＱＡＩＲ）、オララツマブ（ＬＡＲＴＲＵＶＯ）、ベズロトクスマブ（ＺＩＮＰＬＡＶＡ）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ）、オビルトキサキシマブ（ＡＮＴＨＩＭ）、ブロダルマブ（ＳＩＬＩＱ、ＬＵＭＩＣＥＦ）、デュピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ）、イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、グセルクマブ（ＴＲＥＭＦＹＡ）、サリルマブ（ＫＥＶＺＡＲＡ）、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ）、エミシズマブ（ＨＥＭＬＩＢＲＡ）、オクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ）、ベンラリズマブ（ＦＡＳＥＮＲＡ）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ）、エレヌマブ、エレヌマブ－ａｏｏｅ（ＡＩＭＯＶＩＧ）、ガルカネズマブ、ガルカネズマブ－ｇｎｌｍ（ＥＭＧＡＬＩＴＹ）、ブロスマブ、ブロスマブ－ｔｗｚａ（ＣＲＹＳＶＩＴＡ）、ラナデルマブ、ラナデルマブ－ｆｌｙｏ（ＴＡＫＨＺＹＲＯ）、モガムリズマブ、モガムリズマブ－ｋｐｋｃ（ＰＯＴＥＬＩＧＥＯ）、チルドラキズマブ；チルドラキズマブ－ａｓｍｎ（ＩＬＵＭＹＡ）、フレマネズマブ、フレマネズマブ－ｖｆｒｍ（ＡＪＯＶＹ）、ラブリズマブ、ラブリズマブ－ｃｗｖｚ（ＵＬＴＯＭＩＲＩＳ）、セミプリマブ、セミプリマブ－ｒｗｌｃ（ＬＩＢＴＡＹＯ）、イバリズマブ、イバリズマブ－ｕｉｙｋ（ＴＲＯＧＡＲＺＯ）、エマパルマブ、エマパルマブ－ｌｚｓｇ（ＧＡＭＩＦＡＮＴ）、モキセツモマブパスドトクス、モキセツモマブパスドトクス－ｔｄｆｋ（ＬＵＭＯＸＩＴＩ）、カプラシズマブ、カプラシズマブ－ｙｈｄｐ（ＣＡＢＬＩＶＩ）、リサンキズマブ、リサンキズマブ－ｒｚａａ（ＳＫＹＲＩＺＩ）、ポラツズマブベドチン、ポラツズマブベドチン－ｐｉｉｑ（ＰＯＬＩＶＹ）、ロモソズマブ、ロモソズマブ－ａｑｑｇ（ＥＶＥＮＩＴＹ）、ブロルシズマブ、ブロルシズマブ－ｄｂｌｌ（ＢＥＯＶＵ）、クリザンリズマブ；クリザンリズマブ－ｔｍｃａ（ＡＤＡＫＶＥＯ）、エンホルツマブベドチン、エンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖ（ＰＡＤＣＥＶ）、［ｆａｍ－］トラスツズマブデルクステカン、ｆａｍ－トラスツズマブデルクステカン－ｎｘｋｉ（ＥＮＨＥＲＴＵ）、テプロツムマブ、テプロツムマブ－ｔｒｂｗ（ＴＥＰＥＺＺＡ）、エプチネズマブ、エプチネズマブ－ｊｊｍｒ（ＶＹＥＰＴＩ）、イサツキシマブ、イサツキシマブ－ｉｒｆｃ（ＳＡＲＣＬＩＳＡ）、サシツズマブゴビテカン；サシツズマブゴビテカン－ｈｚｉｙ（ＴＲＯＤＥＬＶＹ）、イネビリズマブ；イネビリズマブ－ｃｄｏｎ（ＵＰＬＩＺＮＡ）、サトラリズマブ（ＥＮＳＰＲＹＮＧ）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、スチムリマブ（ＢＩＶＶ００９）、レロンリマブ、ナルソプリマブ、タファシタマブ、ＲＥＧＮＥＢ３、ナキシタマブ、オポルツズマブモナトクス、ベランタマブマフォドチン、マルゲツキシマブ、タネズマブ、テプリズマブ、アデュカヌマブ、エビナクマブ、トラロキヌマブ、及びオムブルタマブが挙げられる。
抗体の断片は、少なくとも、上記の抗体の抗原結合ドメインを含む。実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨもしくはＶＬドメイン、またはラクダＶＨＨドメイン、例えば、ヒトｓｃＦｖ、ヒトＦｖ、ヒトＦａｂ、ヒト（Ｆａｂ’）２、ヒト単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、またはヒトＶＨもしくはＶＬドメイン、あるいはヒト化ｓｃＦｖ、ヒト化Ｆｖ、ヒト化Ｆａｂ、ヒト化（Ｆａｂ’）２、ヒト化単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、またはヒト化ＶＨもしくはＶＬドメインである。
本発明において有用である例示的な化学療法剤としては、２，３，４，５，６－ペンタフルオロ－Ｎ－（３－フルオロ－４－メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、３’、４’－ジデヒドロ－４’－デオキシ－８’－ノルビン－カロイコブラスチン、５－ＦＵ（フルオロウラシル）、アベマシクリブ、酢酸アビラテロン、アビトレキサート（Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ）（メトトレキサート）、アブラキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ－Ｔ、ＡＤＥ、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、アファチニブジマレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、アフィニトールジフスペルツ（Ａｆｉｎｉｔｏｒ Ｄｉｆｓｐｅｒｚ）（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタント及びパロノセトロン）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレセンサ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アリムタ（ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ）、アリコパ（コパンリシブ塩酸塩）、アルケラン（メルファラン）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アルトレタミン、アルンブリグ（ブリガチニブ）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アミホスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、無水ビンブラスチン、アプレピタント、アレディア（パミドロン酸）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼエルウィニアクリサンテミ、アウリスタチン、アキシカブタゲンシロルユーセル、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセヌム（Ｂｅｃｅｎｕｍ）（カルムスチン）、ベレオダク（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレノキサン（ブレオマイシン）、ＢＭＳ１８４４７６、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブリガチニブ、ＢｕＭｅｌ、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボメティクス（カボザンチニブ）、カボザンチニブ－Ｓ－リンゴ酸塩、ＣＡＦ、カルケンス（アカラブルチニブ）、カンプトサール（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カプレルサ（バンデタニブ）、カラック（外用フルオロウラシル）、カルボプラチン、カルボプラチン－タキソール、カルフィルゾミブ、カルムブリス（Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ）（カルムスチン）、カルムスチン、カソデックス（ビカルタミド）、カケクチン、ＣｅｅＮＵ（ロムスチン）、ＣＥＭ、セマドチン、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン）、サーバリックス（組換えＨＰＶ２価ワクチン）、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル－プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、クラフェン（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（クロファラビン）、クロラール（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ、コメトリック（カボザンチニブ）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、コテリック（コビメチニブ）、クリプトフィシン、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、サイフォス（Ｃｙｆｏｓ）（イホスファミド）、シタラビン、シタラビンリポソーム、シトサール－Ｕ（シタラビン）、サイトキサン（シクロホスファミド）、サイトキサン（サイトキサン）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンリポソーム、ダウノゾーム（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ）（ダウノルビシン脂質複合体）、デカドロン（デキサメタゾン）、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、デファイテリオ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デポサイト（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デキサメタゾンインテンソール（デキサメタゾン）、デクスパックテーパーパック（Ｄｅｘｐａｋ Ｔａｐｅｒｐａｋ）（デキサメタゾン）、デクスラゾキサン塩酸塩、ドセフレツ（Ｄｏｃｅｆｒｅｚ）（ドセタキセル）、ドセタキセル、ドセタキソール、ドラスタチン、ドキセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ－ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドロキシア（ヒドロキシウレア）、ＤＴＩＣ（ダカルバジン）、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、エフデックス（外用フルオロウラシル）、エリガード（ロイプロリド）、エリテック（ラスブリカーゼ）、エレンス（エレンス（エピルビシン））、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルスパー（アスパラギナーゼ）、エルトロンボパグオラミン、エムシット（Ｅｍｃｙｔ）（エストラムスチン）、イメンド（アプレピタント）、エナシデニブメシル酸塩、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、エリブリンメシル酸塩、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼエルウィニアクリサンテミ）、エチオール（アミホスチン）、エトポホス（エトポシドリン酸塩）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、ユーレクシン（フルタミド）、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エボメラ（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタン、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、フェソロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、ファーマゴン（デガレリクス）、フィナステリド、フロプレド（ＦｌｏＰｒｅｄ）（プレドニゾロン）、フルダラ（フルダラビン）、フルダラビンリン酸塩、フルオロプレックス（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、フルタミド、フォレックス（メトトレキサート）、フォレックスＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、フォロチン（プララトレキサート）、ＦＵＤＲ（ＦＵＤＲ（フロクスウリジン））、ＦＵ－ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（組換えＨＰＶ４価ワクチン）、ガーダシル９（組換えＨＰＶ９価ワクチン）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ－ＣＩＳＰＬＡＴＩＮ、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ－ＯＸＡＬＩＰＬＡＴＩＮ、ジェムザール（ゲムシタビン）、ジオトリフ（アファチニブジマレイン酸塩）、ジオトリフ（アファチニブ）、グリベック（イマチニブメシル酸塩）、ギリアデル（カルムスチン）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、ハラヴェン（エリブリンメシル酸塩）、ヘマンジオル（プロプラノロール塩酸塩）、ヘキサレン（アルトレタミン）、組換えＨＰＶ２価ワクチン、組換えＨＰＶ９価ワクチン、組換えＨＰＶ４価ワクチン、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、ハイカムチン（トポテカン）、ハイドレア（ヒドロキシウレア）、ヒドロキシウレア、ヒドロキシウレアタキサン、ハイパーＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ）、イダマイシンＰＦＳ（イダルビシン）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、アイディハイファ（エナシデニブ）、イフェックス（Ｉｆｅｘ）（イホスファミド）、イホスファミド、イフォスファミダム（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ）（イホスファミド）、イマチニブメシル酸塩、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミキモド、イムリジック（タリモジンラヘルパレプベク）、インライタ（アキシチニブ）、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イリノテカン塩酸塩リポソーム、イストダックス（ロミデプシン）、イクサベピロン、イキサゾミブクエン酸エステル、イグゼンプラ（イクサベピロン）、ジャカフィ（ルキソリチニブリン酸塩）、ジャカフィ（ルキソリチニブ）、ＪＥＢ、ジェブタナ（カバジタキセル）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キスカリ（リボシクリブ）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、レンビマ（レンバチニブ）、二トシル酸ラパチニブ、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、リューカイン（サルグラモスチム）、ロイプロリド酢酸塩、ロイスタチン（クラドリビン）、レブラン（アミノレブリン酸）、リアロゾール、リンフォリジン（Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ）（クロラムブシル）、リポドックス（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ロムスチン、ロニダミン、ロンサーフ（トリフルリジン及びチピラシル）、リュープロン（ロイプロリド）、リムパーザ（オラパリブ）、リソドレン（ミトタン）、マルキボ（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム）、マルキボキット（ビンクリスチン脂質複合体）、マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（プロカルバジン）、メクロレタミン塩酸塩、メゲース（メゲストロール）、メゲストロール酢酸塩、メキニスト（トラメチニブ）、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスネックス（メスナ）、メタストロン（塩化ストロンチウム－８９）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メチルナルトレキソン臭化物、メキサート（メトトレキサート）、メキサート－ＡＱ（メトトレキサート）、ミドスタウリン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトザイトレックス（Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ）（マイトマイシンＣ）、イセチオン酸ミボブリン、ＭＯＰＰ、モスタリナ（Ｍｏｓｔａｒｉｎａ）（プレドニムスチン）、モゾビル（プレリキサホル）、ムスタルゲン（メクロレタミン）、ムタマイシン（マイトマイシン）、ミレラン（ブスルファン）、マイロサール（Ｍｙｌｏｓａｒ）（アザシチジン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（ビノレルビン）、ネララビン、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（シクロホスファミド）、ネラチニブマレイン酸塩、ネリンクス（ネラチニブ）、ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩、ニューラスタ（フィルグラスチム）、ニューラスタ（ペグフィルグラスチム）、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブ）、ニランドロン（ニルタミド）、ニロチニブ、ニルタミド、ニンラーロ（イキサゾミブ）、ニペント（ペントスタチン）、ニラパリブトシル酸塩水和物、Ｎ，ｎ－ジメチル－ｌ－バリル－ｌ－バリル－ｎ－メチル－ｌ－バリル－ｌ－プロリ－１－ｌプロリン－ｔ－ブチルアミド、ノルバデックス（タモキシフェン）、ノバントロン（ミトキサントロン）、Ｎプレート（ロミプロスチム）、オドムゾ（ソニデジブ）、ＯＥＰＡ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペスクシナート、オナプリストン、オンカスパー（ペガスパルガーゼ）、オンコビン（ビンクリスチン）、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイド（イリノテカン塩酸塩リポソーム）、オンタック（デニロイキンジフチトクス）、オンキソール（パクリタキセル）、ＯＰＰＡ、オラプレド（Ｏｒａｐｒｅｄ）（プレドニゾロン）、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩及びネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パノビノスタット、パンレチン（アリトレチノイン）、パラプラット（Ｐａｒａｐｌａｔ）（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペディアプレッド（Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ）（プレドニゾロン）、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、プラチノール（シスプラチン）、プラチノールＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、プララトレキサート、プレドニムスチン、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（アルデスロイキン）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロプラノロール塩酸塩、プリントール（メルカ
プトプリン）、プリキサン（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラスブリカーゼ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、リクラスト（ゾレドロン酸）、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）２価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）９価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）４価ワクチン、レゴラフェニブ、レリストール（メチルナルトレキソン臭化物）、Ｒ－ＥＰＯＣＨ、レブリミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リゾキシン、リボシクリブ、Ｒ－ＩＣＥ、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、Ｒｐｒ１０９８８１、ルベックス（ドキソルビシン）、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルブラカ（ルカパリブ）、ルカパリブカンシル酸塩、ルキソリチニブリン酸塩、ライダプト（ミドスタウリン）、サンドスタチン（オクトレオチド）、サンドスタチンＬＡＲデポー剤（オクトレオチド）、スクレロソル胸膜内エアロゾル（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ Ｉｎｔｒａｐｌｅｕｒａｌ Ａｅｒｏｓｏｌ）（タルク）、セルテネフ（Ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、ソルタモックス（タモキシフェン）、ソマチュリンデポー剤（ランレオチド酢酸塩）、ソニデジブ、ソラフェニブトシル酸塩、スプリセル（ダサチニブ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ Ｖ、ステラプレド（プレドニゾン）、ステラプレドＤＳ（プレドニゾン）、滅菌タルクパウダー（タルク）、ステリタルク（タルク）、ステレシスト（Ｓｔｅｒｅｃｙｓｔ）（プレドニムスチン）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、ストラムスチンリン酸塩（Ｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ストレプトゾシン、スニチニブリンゴ酸塩、スプレリンＬＡ（ヒストレリン）、スーテント（スニチニブリンゴ酸塩）、スーテント（スニチニブ）、シンリボ（オマセタキシンメペスクシナート）、タブロイド（チオグアニン）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タグリッソ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジンラヘルパレプベク、タモキシフェンクエン酸塩、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ダカルバジン）、タシグナ（ニロチニブ）、タソネルミン、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、テパディナ（チオテパ）、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、ＴｈｅｒａＣｙｓ ＢＣＧ（ＢＣＧ）、チオグアニン、チオプレックス（チオテパ）、チオテパ、ＴＩＣＥ ＢＣＧ（ＢＣＧ）、チサゲンレクルユーセル、トラク（Ｔｏｌａｋ）、（外用フルオロウラシル）、トポサール（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トーリセル（テムシロリムス）、トテクト（Ｔｏｔｅｃｔ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トレルスター（トリプトレリン）、トレチノイン、トレキサル（Ｔｒｅｘａｌｌ）（メトトレキサート）、トリフルリジン・チピラシル塩酸塩、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイケルブ（ラパチニブ）、ウリジントリアセテート、ＶＡＣ、バルルビシン、バルスター（Ｖａｌｓｔａｒ）（膀胱内バルルビシン）、バルスター（バルルビシン）、ＶＡＭＰ、バンデタニブ、バンタス（Ｖａｎｔａｓ）（ヒストレリン）、バルビ（Ｖａｒｕｂｉ）（ロラピタント）、ＶｅＩＰ、ベルバン（ビンブラスチン）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（Ｖｅｌｓａｒ）（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベンクレクスタ（ベネトクラクス）、ベプシド（エトポシド）、ベージニオ（アベマシクリブ）、ベサノイド（トレチノイン）、ビアデュール（Ｖｉａｄｕｒ）（ロイプロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン、ビンカサールＰＦＳ（ビンクリスチン）、ビンクレックス（Ｖｉｎｃｒｅｘ）（ビンクリスチン）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビンデシン硫酸塩、ビンフルニン、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ビストガード（Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ）（ウリジントリアセテート）、ボラキサーゼ（Ｖｏｒａｘａｚｅ）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ）、ブモン（テニポシド）、ヴィキセオス（ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンリポソーム）、Ｗ、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、ウェルコボリンＩＶ（ロイコボリン）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ＸＥＬＩＲＩ、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＥＬＯＸ、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム２２３）、イクスタンジ（エンザルタミド）、イエスカルタ（アキシカブタゲンシロルユーセル）、ヨンデリス（トラベクテジン）、ザルトラップ（Ｚｉｖ－アフリベルセプト）、ザノサー（ストレプトゾシン）、ザルジオ（フィルグラスチム）、ゼジューラ（ニラパリブ）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ザインカード（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ－アフリベルセプト、ゾフラン（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（ゴセレリン）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ゾルトレス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ）（エベロリムス）、ザイデリグ（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、ザイティガ（アビラテロン酢酸塩）、ならびにザイティガ（アビラテロン）が挙げられる。化学療法剤の他の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｖ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ ａｎｄ Ｓ．Ｈｅｌｌｍａｎ（ｅｄｉｔｏｒｓ），６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｆｅｂ．１５，２００１），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に見ることができる。
実施形態では、化学療法剤（例えば、上記のリストのもの）は、本開示の化合物に薬剤として含まれ得る。その代わりに、またはそれに加えて、例えば、化学療法剤（例えば、上記のリストのもの）は、本開示の化合物と併せて（すなわち併用療法において）使用され得る。例として、対象に、薬剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物及び薬剤としてフマギリンを含む化合物の一方または両方が担持された血小板を投与することができ、また化学療法剤も投与することができる。この組み合わせは、膵癌、肺癌、または結腸癌の治療に使用することができる。対象に、薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）を含む化合物及び活性剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物の一方または両方が担持された血小板を投与することができ、また化学療法剤も投与することができる。これは、肺癌の治療に使用することができる。また、対象に、薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）を含む化合物、薬剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物、及び薬剤としてＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）を含む化合物のうちの１つもしくは両方、または３つ全てが担持された血小板を投与することができ、また化学療法剤も投与することができる。これは、非小細胞肺癌の治療に使用することができる。
本発明において有用な例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＮＯＸ２、ＯＸ４０、ＰＤ－１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡのリガンドまたは受容体の完全長または断片が挙げられる。
本発明において有用な例示的な増殖因子としては、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、及び血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、ならびにアンジオポエチンが挙げられる。
本発明において有用な例示的な増殖阻害剤としては、アンギオスタチン、エンドスタチン、タムスタチン、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ１）、血小板第４因子（ＰＦ４、ＣＸＣＬ４）、及びメタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）が挙げられる。
本発明において有用な例示的なプロテアーゼ／プロテイナーゼとしては、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、トロンビン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、及びストレプトキナーゼが挙げられる。
本発明において有用な例示的な凝固因子としては、第ＩＩ因子（トロンビン）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、カリクレイン、組織因子（ＴＦ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、及び第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノゲン、プロテインＳ、プロテインＣ、トロンボモジュリン、プラスミノーゲン、ならびに組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）が挙げられる。
本発明において有用な例示的な脂質またはリン脂質としては、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）、血小板リン脂質、及びスフィンゴシン－１－リン酸（ＳＩＰ）が挙げられる。
本発明において有用な例示的な細胞外マトリックスタンパク質としては、インテグリン、フィブロネクチン、ラミニン、接着斑タンパク質（ＦＡＫ）、ビンキュリン、タリン、アクチンフィラメント、及びコラーゲンが挙げられる。
本発明において有用な例示的なホルモンとしては、インスリン、ステロイド（例えば、エストロゲン、プロゲステロン、及びテストステロン、ならびにそれらのバリアント）、エリスロポエチン、トロンボポエチン、及び甲状腺ホルモンが挙げられる。
本発明において有用な例示的な酵素としては、ヘパラナーゼまたはマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）が挙げられる。
本発明において有用な例示的なケモカイン／走化性因子としては、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、間質細胞由来因子－１（ＳＤＦ－１）（ＣＸＣＬ１２）、インターロイキン（ＩＬ１、２、６、８）、及びＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１５４）が挙げられる。
本発明において有用な例示的なニューロトロフィンとしては、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）、及びニューロトロフィン４／５（ＮＴ－４／５）が挙げられる。
実施形態では、薬剤は、種々の分類の有用な薬剤を含む以下の非網羅的なリストから選択される：３－４－（１－ホルミルピペラジン－４－イル）－ベンジリデニル－２－インドリノン、アバタセプト、ＡＢＴ－８６９、アカラブルチニブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アレクチニブ、アレファセプト、ＡＭＧ １０８、抗リンパ球免疫グロブリン（ウマ）、抗胸腺細胞免疫グロブリン（ウサギ）、アポマブ（Ａｐｏｍａｂ）、アスホターゼアルファ、アスネルセプト（Ａｓｕｎｅｒｃｅｐｔ）、ＡＶＥ９６３３、アキシチニブ、ベラタセプト、ベバシズマブジルコニウムＺｒ－８９、ＢＩＩＢ０１５、ビバツズマブ、ボスチニブ、ブリガチニブ、カボザンチニブ、カネルチニブ、カプマチニブ、セジラニブ、セリチニブ、ＣＲ００２、クレノラニブ、クリゾチニブ、ＣＴ－０１１、ダコミチニブ、ダサチニブ、デパツキシズマブ、ドビチニブ、エドラチド、エヌトレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、エタネルセプト、ファミチニブ、フェドラチニブ、フィラテグラスト、フルマチニブ、フォレチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、ゲルダナマイシン、ゲニステイン、ギルテリチニブ、グレサチニブ、ＧＭＡ－１６１、グレムバマブ、ＧＳ－５７４５、ヒトサイトメガロウイルス免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンＧ、ヒト水痘・帯状疱疹免疫グロブリン、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、イコチニブ、ＩＧＮ３１１、イマチニブ、インジウムＩｎ－１１１サツモマブペンデチド、ＩＰＨ ２１０１、ラベツズマブゴビテカン、ラパチニブ、ラロトレクチニブ、レカネマブ、レンバチニブ、レスタウルチニブ、ロルカフスプアルファ（Ｌｏｒｕｋａｆｕｓｐ ａｌｆａ）、ミドスタウリン、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミタザリマブ（Ｍｉｔａｚａｌｉｍａｂ）、モテサニブ、ムロモナブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ＮＡＶ １８００、ネラチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、オシメルチニブ、パクリチニブ、パゾパニブ、ＰＤ１７３９５５、ペキシダルチニブ、ピセタノール、ポナチニブ、ラディシコール、ラドチニブ、レゴラフェニブ、ＲＩ ６２４、ロバルピツズマブテシリン、ロズロリムパブ、ルキソリチニブ、サラカチニブ、サボリチニブ、ＳＢ－１５７８、セルペルカチニブ、セルメチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、タファシタマブ、タンズチニブ、ＴＢ－４０２、テクネチウムＴｃ－９９ｍアルシツモマブ、テセバチニブ、ＴＮＸ－９０１、トマラリマブ、トシツモマブ、トラスツズマブデルクステカン、ツカチニブ、バダスツキシマブタリリン、バラナフスプアルファ（Ｖａｌａｎａｆｕｓｐ ａｌｆａ）、バンデタニブ、バタラニブ、ベムラフェニブ、ＶＳ－４７１８、ＸｍＡｂ２５１３、ＸＴＬ－００１、及びゾルベツキシマブ。
実施形態では、薬剤は、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）である。
実施形態では、薬剤は、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）である。
実施形態では、薬剤は、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）である。
実施形態では、薬剤は、ＦＮ１阻害剤（例えば、オクリプラスミン）である。
実施形態では、薬剤は、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）である。
実施形態では、薬剤は、ＦＧＦＲ２アンタゴニスト（例えば、サリドマイド）である。
実施形態では、薬剤は、トロンビン及びその類似体である。
実施形態では、薬剤は、ＣＳＦ３Ｒアゴニスト（例えば、フィルグラスチム）である。
実施形態では、薬剤は、ＰＳＭＢ５阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）である。
実施形態では、薬剤は、フマギリンである。
実施形態では、薬剤は、ＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）である。
実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい。
実施形態では、第１の化合物及び／または第２の化合物は、蛍光部分をさらに含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する。
実施形態では、組成物は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物をさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
単離血小板
疾患または障害の治療に有用な薬剤は、多くの場合、ヒト細胞に有害である可能性があり、及び／または対象に対して毒性であり、特に対象に全身投与された場合にそうである。有害な薬剤を含む化合物を血小板に担持させることにより、対象における意図しない及び望ましくない細胞、組織、及び／または器官の損傷が回避される。さらに、特定の薬剤は、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい。分解性薬剤を含む化合物を血小板に担持させることにより、対象の血流に直接投与された場合に生じるであろう薬剤の濃度の低減が回避される。したがって、担持血小板は、対象に投与されたときに用量の低減（例えば、有効用量未満）を回避する。総合すると、担持血小板は、望ましい用量で、かつより少ない悪影響で、標的部位に局在化された薬剤の濃縮をもたらす。
血小板促進型の薬剤送達の技法は、他の標的送達系に比べて多くの利点を有する。ナノ粒子促進型送達とは異なり、対象に異物がもたらされない。同様に、リポソーム調製物は、細網内皮系（ＲＥＳ）による食作用に起因して有効期間が短く、安定性が低く、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が短いが、本開示の血小板送達系は、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長させ、元の化合物の安定性及び調製を変化させない。また、異常な血管系を標的とするＲＧＤペプチドなどのほとんどの合成ホーミング機構は、天然血小板の特異性を実現していない。最後に、本発明における自家血小板の使用は、他の者が有する感染性物質のリスクをなくす。これにより、手順の安全性が向上し、提供及び保管された血小板を解凍及び／または調製する必要なしに、血小板への担持速度（数秒間から数分間）が向上する。総合すると、本開示の薬剤の血小板促進型送達を、直ちにかつ容易に臨床現場へと転換することができる。
本開示の別の態様は、単離血小板である。単離血小板は、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物の少なくとも１つのコピーと、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物の少なくとも１つのコピーと、を含む。
実施形態では、血小板は、合成血小板、同種血小板、自家血小板、または修飾された異種血小板である。
実施形態では、血小板は、自家血小板である。
実施形態では、血小板は、同種血小板である。
実施形態では、血小板は、多血小板血漿から得られる。
実施形態では、血小板は、１～１０００コピーの第１の化合物及び１～１０００コピーの第２の化合物を含む。場合によっては、１～１０００コピーの第１の化合物が、血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持され、１～１０００コピーの第２の化合物が、血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持される。第１の化合物の最小の１つのコピーが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持され得、第２の化合物の少なくとも１つのコピーが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持され得る。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合する。実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプは、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、第２のアルファ顆粒タイプは、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）関連顆粒である。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、第２のアルファ顆粒タイプの内容物は、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される。
実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に放出される。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である。場合によっては、または第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む。第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含み得る。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方は、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。場合によっては、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。例として、ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び４位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、及び７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び７位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び４位及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位及び９位にプロリン、アルギニン及び／またはイソロイシンを含み；ならびにこれらの間の任意の組み合わせを含む。ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にプロリンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にアルギニンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位、４位、７位、及び９位にイソロイシンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位、７位、及び９位にアルギニンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位及び７位にアルギニン、ならびに９位にイソロイシンを含み得るか；ＧＡＧ結合ペプチドは、１位にプロリン、４位にアルギニン、及び９位にイソロイシンを含み得るか；またはＧＡＧ結合ペプチドは、４位にアルギニン及び９位にプロリンを含み得る。１位、４位、７位、及び／または９位のプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンの任意の組み合わせが、本開示によって包含される。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び第２のＧＡＧ結合ペプチドは、独立して、１１個のアミノ酸からなる。
実施形態では、ＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列からなる。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなり、第２のＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列からなる。
実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、第２のポリペプチドは、第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる。
実施形態では、第１のポリペプチドのＮ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＮ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１のポリペプチドのＣ末端は、第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２のポリペプチドのＣ末端は、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１の薬剤は、第１のリンカーを介して第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は、第２のリンカーを介して第２のポリペプチドに間接的に連結されている。場合によっては、第１のリンカー及び／または第２は、１つ以上の原子をそれぞれ含む。第１のリンカー及び／または第２は、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含み得る。第１のリンカー及び／または第２は、アミノ酸鎖をそれぞれ含み得る。
実施形態では、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接連結されている。
実施形態では、マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、第１の薬剤は第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または第２の薬剤は第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている。
実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む。場合によっては、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、抗体を含む、及び／または蛍光部分を含む。
実施形態では、第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または第１の薬剤及び／または第２の薬剤は、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい。
実施形態では、第１の化合物及び／または第２の化合物は、蛍光部分をさらに含む。
実施形態では、第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または第２のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する。
実施形態では、単離血小板は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーをさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
注目すべきことに、本開示の担持血小板は、血小板を凝固促進性にする担持プロセスによって活性化されるのではなく、完全に機能する休止血小板のままである。
医薬組成物
本開示の担持血小板は、少なくとも一度対象に投与されると血小板の安定性及び有効性を高める、医薬組成物に製剤化することができる。さらに、そのような医薬組成物は、対象への投与前に血小板の安定性を高める。
本開示のさらに別の態様は、本明細書に開示される態様または実施形態のいずれかの単離血小板と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である。
実施形態では、医薬組成物は、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
実施形態では、医薬組成物は、第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含むか、または第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む。
実施形態では、医薬組成物は、第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、かつ第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む。
医薬組成物は、薬学的に許容される担体または溶媒を含む。そのような医薬組成物は、適切な投与のための形態を提供するように、好適な量の薬学的に許容される賦形剤を任意選択で含み得る。医薬賦形剤は、水、及びピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物または合成由来のものを含む油、などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、生理食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、デンプン糊、タルク、ケラチン、コロイダルシリカ、尿素などであり得る。加えて、助剤、安定剤、増粘剤、滑沢剤、及び着色剤を使用することができる。実施形態では、対象に投与されるとき、薬学的に許容される賦形剤は無菌である。本明細書に開示される任意の薬剤が静脈内投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水溶液ならびにデキストロース及びグリセロールの水溶液もまた、特に注射溶液のために液体賦形剤として用いられ得る。好適な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース（すなわち、デキストロース）、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども含まれる。本明細書に開示される任意の薬剤は、所望により、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することもできる。好適な医薬賦形剤の例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。
本明細書に開示される医薬組成物は、生理食塩水緩衝液（ＮａＣｌ溶液、ＴＢＳ、ＰＢＳ、リンゲル液などを含むがこれらに限定されない）を含み得る。
実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、血液とおよそ等張であり、約７．３～７．５のｐＨ（すなわち、血液のｐＨ）を有する、無菌注射に適した形態である。
実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、日常的な手順に従って、本明細書に開示される投与様式に適合した医薬組成物として製剤化される。
一態様では、本開示は、疾患または障害を治療するための本明細書に開示される医薬組成物のいずれかの使用を提供する。実施形態では、疾患または障害は、がんである。
別の態様では、本開示は、疾患または障害を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される単離血小板のいずれかまたは本明細書に開示される医薬組成物のいずれかの使用を提供する。実施形態では、疾患または障害は、がんである。
治療方法
既に開示されたように、２つ以上の薬剤を含む２つ以上の化合物が担持された血小板は、薬剤が血小板に担持されずに対象に投与された場合に生じる薬剤の濃度の低減（例えば、有効用量未満）を回避する。さらに、有害な（例えば、毒性の）薬剤を含む化合物が担持された血小板により、対象における意図しない及び望ましくない細胞、組織、及び／または器官の損傷が回避される。血小板は、損傷、炎症、及び／または血管新生の部位へ自然に向かう。本開示の血小板は、２つ以上の薬剤を異なるα顆粒タイプが選択的に担持し、α顆粒タイプのそれぞれが別個の放出プロファイルを有しているため、空間的及び時間的に制御された方法での異なる薬剤の血小板からの放出が可能となる。最後に、アルファ顆粒の担持血小板の内容物の放出を、放出誘導物質との接触に応答して誘導することができ、この放出誘導物質は、治療応答を促進するために、必要に応じて薬剤の放出を促進する医薬組成物で対象に一度に投与することができる。総合すると、担持血小板は、治療有効量の２つ以上の薬剤を、より少ない悪影響で標的部位に確実に送達させるのに役立つ。
組織炎症または組織損傷を特徴とし、血小板が最初の応答するものであることを特徴とする疾患及び障害は全て、本開示の方法に従って治療することができる。これらの疾患及び障害には、新生物形成、血液悪性腫瘍、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、脳卒中、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化、火傷、及び移植片上皮化が含まれるが、これらに限定されない。
本発明によって提供される利点は、血流に直接投与される薬剤と比較して、血小板に担持された場合の薬剤の（対象の血流における）半減期が延長されることである。本発明は、薬剤の自然な排出を遅延させ、薬剤を著しく低減させる。通常、薬剤は、腎濾過、酵素分解、細網内皮系（ＲＥＳ）による取り込み、ならびに非標的器官及び組織における蓄積によって循環から排出される。しかしながら、本発明では、薬剤は、血小板の寿命の間（通常は４～７日）、または標的部位に送達されるまで、血小板内で保護される。さらに、本発明は、非標的部位（例えば、組織及び器官）への薬剤の広範な分布を回避することにより、薬剤の全身的曝露を制限する。この利点により、（血小板に担持されていない薬剤の投与と比較して）より低い投与量の薬剤の使用が可能となる。そのような低用量の使用は、少なくとも、望ましくない副作用を減らし経済的コストを低減させるのに役立つ。
また、本発明において有用な血小板は、複数の異なる薬剤を担持し、異なる薬剤は、空間的及び時間的に制御された方法で異なるアルファ顆粒タイプから放出され得る。したがって、本発明は、指向性がありかつ制御された治療薬を、損傷部位（例えば、慢性創傷を治療するため）、病理学的炎症部位（例えば、関節または肺への損傷を治療するため）、及び／または血管新生部位（例えば、がんを治療するため）に提供する。
さらに別の態様では、本開示は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療するための方法を提供する。この方法は、治療有効量の本明細書に開示される医薬組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む。
本開示の一態様は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療するための方法である。この方法は、治療有効量の本明細書に開示される組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む。
上記方法の実施形態では、第１のアルファ顆粒タイプの内容物は、第２のアルファ顆粒タイプの内容物が放出される前に標的部位で放出される。
上記方法の実施形態では、この方法は、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物を対象に投与するステップをさらに含む。場合によっては、第２の医薬組成物は、第１のアルファ顆粒タイプからの第１の化合物の放出を促進し、第３の医薬組成物は、第２のアルファ顆粒タイプからの第２の化合物の放出を促進する。第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物は、医薬組成物が投与された後に投与され得る。医薬組成物は、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与され得る。
実施形態では、疾患または障害は、がんである。がんは一般に、不適切に高い増殖速度及び／または不適切に低いアポトーシス速度に起因する疾患である。
実施形態では、がんは、聴神経腫、急性赤白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性単球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、血管肉腫、星状細胞腫、基底細胞癌、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫を含む）、胆道癌、膀胱癌、骨肉腫、脳及び中枢神経系の癌、乳癌、気管支原性癌、非ホジキンリンパ腫の巨大病変、消化器系癌、頭頸部癌、腹膜癌、呼吸器系癌、泌尿器系癌、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、慢性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌及び直腸癌、結合組織癌、頭蓋咽頭腫、嚢胞腺癌、胎児性癌、子宮内膜癌、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、上衣腫、上皮癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、線維肉腫、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、神経膠腫、有毛細胞白血病、重鎖疾患、血管芽腫、肝細胞癌、肝癌、高悪性度の免疫芽球性非ホジキンリンパ腫、高悪性度のリンパ芽球性非ホジキンリンパ腫、高悪性度の小型非切れ込み核細胞性非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、中等度のびまん性非ホジキンリンパ腫、中等度／濾胞性非ホジキンリンパ腫、上皮内新生物、腎臓癌または腎癌、喉頭癌、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌（ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、肺癌（ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、マントル細胞リンパ腫、髄様癌、髄芽腫、メイグス症候群、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、骨髄腫、粘液肉腫、神経芽細胞腫、胆管癌、乏突起膠腫（ｏｌｉｇｏｄｅｎｒｏｇｌｉｏｍａ）、口腔癌（口唇、舌、口、及び咽頭）、骨原性肉腫、卵巣癌、膵癌、乳頭腺癌、乳頭癌、松果体腫、真性赤血球増加症、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、及び母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、前立腺癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、神経鞘腫、脂腺癌、精上皮腫、皮膚癌、小リンパ球性（ＳＬ）非ホジキンリンパ腫、扁平上皮癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、汗腺癌、滑膜腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌または子宮内膜癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍から選択される。
実施形態では、がんの疾患または障害は、増殖性障害、例えば、リンパ増殖性疾患である。
実施形態では、疾患または障害は、損傷、例えば、火傷、脊髄損傷、整形外科的損傷、及び創傷である。
実施形態では、疾患または障害は、血友病性関節出血である。
実施形態では、疾患または障害は、炎症、例えば、関節炎症及び肺炎症を含む急性または慢性の炎症である。
実施形態では、疾患または障害は、糖尿病性潰瘍である。
実施形態では、疾患または障害は、埋植物、移植片、ステント、または補装具の副作用である。
実施形態では、本開示の方法により治療される疾患または障害は、欠陥遺伝子に起因する。これらの実施形態では、薬剤は、欠損したまたは機能不全のタンパク質を代替する組換えポリペプチドであり得る。その代わりに、またはそれに加えて、組換えタンパク質は、本明細書に開示されるポリペプチドベースの薬剤、すなわち、抗体（もしくはその抗原結合断片）、化学療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、またはニューロトロフィンのうちのいずれか１つであり得る。
遺伝子の欠陥に起因するいくつかの疾患は、ＧＡＧの合成に影響を与え得る。例として、第３染色体の長腕のコンドロイチン硫酸プロテオグリカン５（ＣＳＰＧ５）の欠陥は、脳の異常形態発生を引き起こす可能性があり、ＤＢＱＤ１遺伝子の欠陥は、「手の異常を伴うＤｅｓｂｕｑｕｏｉｓ異形成」とも呼ばれる小肢性小人症を引き起こし、遺伝子異常は、血小板におけるＧＡＧの合成に影響を与える可能性がある。
本明細書に開示される医薬組成物の投与により、静脈内または動脈内注射または注入を介して、担持血小板が血流に送達されることになる。あるいは、本明細書に開示される医薬組成物は、活動性疾患の部位に直接再投与される。他の投与経路としては、例えば、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、または皮内注射が挙げられる。
本明細書に開示される担持血小板を含む医薬組成物の投与量及び投与スケジュールは、治療される疾患、対象の全般的な健康状態、及び投与する医師の判断を含むがこれらに限定されない種々のパラメータに依存し得る。
投与量は、状態の重症度、状態が治療されるのかそれとも予防されるのか、ならびに治療される対象の年齢、体重、及び健康状態を含むいくつかの要因に依存し得る。加えて、特定の対象に関する薬理ゲノミクス（治療薬の薬物動態、薬力学、または有効性プロファイルに対する遺伝子型の影響）情報は、使用される投与量に影響を与え得る。さらに、正確な個々の投与量は、投与される薬剤の特定の組み合わせ、投与時間、投与経路、製剤の性質、排出速度、治療中の特定の疾患、障害の重症度、及び障害の解剖学的位置を含む種々の要因に応じてある程度調整することができる。投与量のある程度の変動が予期され得る。
一般に、血小板に担持された特定の量の薬剤を含む医薬組成物の投与量は、薬剤が血小板に担持されずに投与された場合の投与量の範囲内である。実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物中の薬剤の投与量は、血小板に担持されていない薬剤の投与量よりも少ないが、これは、本発明が対象における薬剤の標的特異性の増加及び分解に対する耐性の増加をもたらすためである。
本明細書に開示される担持血小板を含むいずれの医薬組成物も、１日１回の用量で投与することができ、または１日総投与量は、１日２回、３回、または４回の分割用量で投与することができる。さらに、本明細書に開示される担持血小板を含む任意の医薬組成物は、投与レジメン全体を通して、断続的ではなく連続的に投与することができる。
血小板の半減期が４～７日であるため、担持血小板は、患者に繰り返し（例えば、週に１回）注入することができる。
組換えポリペプチドの発現
本発明はさらに、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドを含むポリペプチドに（直接または間接的に）カップリングされた組換えポリペプチド剤のアミノ酸配列を含む融合タンパク質を提供する。
ＧＡＧ結合ペプチドを含む組換えポリペプチドは、別々のペプチドとして発現させて一緒にライゲーションすることができる。あるいは、ＧＡＧ結合ペプチドを含む組換えポリペプチドは、ＧＡＧ結合ペプチドに作動可能に連結されたポリペプチド剤を含む単一の融合タンパク質として発現される。
本発明の組換えポリペプチドは、当業者に公知である実質的にあらゆる方法を使用して生成される。典型的には、組換えポリペプチドは、適切な発現媒体において、ポリペプチドをコードする核酸分子またはその断片の全部または一部を用いて適切な宿主細胞を形質転換することにより生成される。
分子生物学の分野の当業者は、多種多様な発現系のいずれを使用しても組換えポリペプチドを発現させることができることを理解するであろう。使用される正確な宿主細胞は、本発明にとって重要ではない。本発明の組換えポリペプチドは、原核生物宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ２１細胞）、または哺乳動物細胞（例えば、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨｅＬａ、もしくは好ましくはＣＯＳ細胞））中で生成され得る。そのような細胞は、広範な供給源から入手可能である（例えば、ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｍｄ．、また例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９７も参照されたい）。形質転換またはトランスフェクションの方法及び発現媒体の選択は、選択した宿主系に依存する。形質転換及びトランスフェクションの方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．に記載されており、発現媒体は、例えば、Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｐ．Ｈ．Ｐｏｕｗｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｕｐｐ．１９８７）に提供されているものから選択することができる。
本発明の組換えポリペプチドは、発現させた後、単離、濃縮、及び／または精製することができる。
一例として、組換えポリペプチドは、アフィニティークロマトグラフィーを使用して単離することができる。一例では、組換えポリペプチドに対して産生された抗体をカラムに付着させ、これを組換えポリペプチドを単離するために使用することができる。ポリペプチドを保有する細胞のアフィニティークロマトグラフィー前の溶解及び分画は、標準的方法によって実施することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）。あるいは、組換えポリペプチドは、ニッケルカラムに結合するヘキサヒスチジンタグなどの配列タグを使用して単離される。
単離したら、組換えタンパク質を所望により、例えば高速液体クロマトグラフィーによってさらに精製することができる（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．，Ｗｏｒｋ ａｎｄ Ｂｕｒｄｏｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８０を参照されたい）。
本発明のポリペプチド、特に短いペプチド断片はまた、化学合成によって（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８４ Ｔｈｅ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌに記載されている方法によって）生成することができる。
ポリペプチドの発現及び精製のこれらの一般的技法を使用して、有用なペプチド断片または類似体（本明細書に記載）を生成及び単離することもできる。
併用療法
実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物または治療方法のいずれも、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドに連結されていない、及び／または血小板に担持されていない追加の薬剤をさらに含み得る。併用療法の一例では、医薬組成物は、担持血小板及び追加の薬剤を含む。併用療法の別の例では、対象は、担持血小板を含む第１の医薬組成物と、追加の薬剤を含む第２の医薬組成物とを投与される。併用療法はまた、担持血小板と第１の追加の薬剤とを含む第１の医薬組成物、及び第２の追加の薬剤を含む第２の医薬組成物を含み得る。ここで、第１の追加の薬剤及び第２の追加の薬剤は、同じ薬剤であっても、または異なる薬剤であってもよい。本明細書に開示される任意の薬剤が、追加の薬剤として機能し得る。
複数の医薬組成物を含む併用療法の実施形態では、第１の医薬組成物は、第２の医薬組成物の前に投与され得るか、第１の医薬組成物は、第２の医薬組成物の後に投与され得るか、または第１の医薬組成物は、第２の医薬組成物と同時に投与され得る。
さらに、併用療法は、本開示の医薬組成物を別の治療レジメンと組み合わせることができる。他の治療レジメンとしては、放射線療法、ホルモン療法、外科手術、及び凍結外科手術が挙げられる。治療療法は、本明細書に記載の薬剤のいずれをも含み得る。
実施形態では、併用療法のうち、化学療法剤が本開示の化合物と併せて使用される。例として、併用療法は、薬剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物及び薬剤としてフマギリンを含む化合物の一方または両方が担持された血小板と、化学療法剤とを含み得る。この組み合わせは、膵癌、肺癌、または結腸癌の治療に使用することができる。併用療法は、薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）を含む化合物及び活性剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物の一方または両方が担持された血小板と、化学療法剤とを含み得る。これは、肺癌の治療に使用することができる。併用療法は、薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）を含む化合物、薬剤としてマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）を含む化合物、及び薬剤としてＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）を含む化合物のうちの１つもしくは両方、または３つ全てが担持された血小板と、化学療法剤とを含み得る。これは、非小細胞肺癌の治療に使用することができる。
追加の実施形態では、併用療法は、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）が担持された血小板及び薬物レムデシビルを含む。これは、ＣＯＶＩＤに関連するであろう急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療に使用することができる。
併用療法の実施形態では、医薬組成物は、別の治療レジメンの前に投与され得るか、医薬組成物は、別の治療レジメンの後に投与され得るか、または医薬組成物は、別の治療レジメンと同時に投与され得る。
製造方法
本開示の別の態様は、担持血小板を製造するための方法である。この方法は、血小板を得るステップと；血小板を本明細書に開示される組成物のいずれかとｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと；血小板と組成物との間の接触を、第１の化合物が血小板の第１のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで、かつ第２の化合物が血小板の第２のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで進行させて、これにより担持血小板を生成するステップと、を含む。
本開示のさらに別の態様は、担持血小板を製造するための方法である。この方法は、血小板を得るステップと；血小板を、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第１の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと；血小板を、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、第２のポリペプチドが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、第２の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと、を含む。
実施形態では、血小板を第１の化合物と接触させることと、血小板を第２の化合物と接触させることは、同時的である。
実施形態では、血小板を第１の化合物と接触させることと、血小板を第２の化合物と接触させることは、逐次的である。
実施形態では、この方法は、血小板を第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させることをさらに含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
血小板と組成物（または第１の化合物及び第２の化合物）との間の接触は、３７℃で少なくとも約１５分間、及び／または第１の化合物が血小板の第１のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで、かつ第２の化合物が血小板の第２のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで、行われ得る。薬剤が著しい全身毒性を有している場合、適切な緩衝液を使用して血小板を洗浄し、血小板に担持されていない薬剤の注入を防止する。
キット
一態様では、本開示は、疾患または障害を治療するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される単離血小板のいずれか及び使用説明書が含まれる。
別の態様では、本開示は、疾患または障害を治療するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される医薬組成物のいずれか及び使用説明書が含まれる。
実施形態では、キットは、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物をさらに含む。
さらに別の態様では、本開示は、担持血小板を製造するためのキットを提供する。キットには、本明細書に開示される組成物のいずれか及び使用説明書が含まれる。本発明は、損傷、炎症、または腫瘍血管新生の部位を伴う疾患または障害の治療または予防のためのキットを提供する。一実施形態では、キットには、単位剤形の２つ以上の薬剤が担持された有効量の血小板を含む治療的または予防的組成物が含まれる。いくつかの実施形態では、キットは、治療的または予防的組成物を含有する滅菌容器を含む。そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック、または当該技術分野で公知の他の適切な容器形態であり得る。そのような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート加工紙、金属箔、または薬物を保持するのに適した他の材料で作製され得る。
所望により、本開示の単離血小板を含む医薬組成物は、疾患または障害を有するかまたは発症するリスクのある対象に医薬組成物を投与するための説明書とともに提供される。説明書は、疾患の治療または予防のための、または単離血小板を必要とする組織へ送達させるための医薬組成物の使用に関する情報を含み得る。他の実施形態では、説明書は、以下のうちの少なくとも１つを含む：薬剤の説明、疾患もしくはその症状の治療もしくは予防のための投与スケジュール及び投与、注意事項、警告、適応症、禁忌、過量服用に関する情報、副作用、動物薬理学、臨床試験、及び／または参照文献。説明書は、容器に直接印刷されてもよく（存在する場合）、容器に貼付されたラベルとしてであってもよく、または容器内もしくは容器に付属する別個のシート、パンフレット、カード、もしくはフォルダーとしてであってもよい。
本明細書に開示される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
等価物
本発明を、その特定の実施形態に関連して説明してきたが、さらなる修正ができ、本出願は、一般に、本発明の原理に従って、本発明の任意の変形、使用、または適応を網羅することを意図するものであり、本発明が属する技術分野において公知の範囲内であるかまたは慣行の範囲内であるような本開示からの逸脱、ならびに前述の本質的な特徴に適用され得るような、及び添付の特許請求の範囲に従うような本開示からの逸脱を含むことを理解されたい。
当業者であれば、単なる日常的な実験を使用して、本明細書に具体的に記載される特定の実施形態の多数の等価物を認識するか、または確認することができるであろう。このような等価物は、以下の特許請求の範囲内に包含されることが意図される。
定義
本明細書で使用される専門用語は、特定の事例を説明することのみを目的としており、限定することを意図したものではない。
本明細書で使用される場合、別途示さない限り、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という用語には、文脈上別途明確に示されない限り、単数形に加えて複数形も含まれることが意図される。
本開示及び／または特許請求の範囲のいずれかで使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「伴う」という用語、またはこれらの変形は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の形で包括的であることが意図される。
「約」または「およそ」という用語は、当業者により決定される特定の値についての許容可能な誤差範囲内であることを意味し、これは、値を測定または決定する方法、例えば、測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、記載された値より１０％多いかまたはそれより１０％少ないことを意味し得る。別の例では、「約」は、所与の値の慣例に従って、１以内または１を超える標準偏差を意味し得る。別途記載のない限り、本出願及び特許請求の範囲に特定の値が記載される場合、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲を意味するとみなされるべきである。
「実質的に」という用語は、概して著しい程度であることを意味するか、または本質的に、を意味する。換言すれば、この用語は、所望の特質に対してほぼ正確であるか、または正確な特質とわずかに異なることを実質的に意味し得る。「実質的に」は、所望の特質と区別不能である場合がある。「実質的に」は、所望の特質と区別できる場合があるが、その違いは重要ではないかまたは無視できるものである。
「少なくとも第２の」という用語は、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第２０の、第３０の、第１４の、第５０の、第６０の、第７０の、第８０の、第９０の、第１００の、またはそれ以上、及びそれらの間の任意の反復を意味する。「１つ以上」という用語には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上、及びそれらの間の任意の数が含まれる。
「カーゴ」という用語は、血小板、例えば血小板のアルファ顆粒に担持させることができる化合物または薬剤を意味する。このような担持は、化合物のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドを介して生じる。いくつかの実施形態では、「薬剤」及び「カーゴ」という用語は同義語であり得る。
参照文献
以下の参照文献の内容は、その全体が参照により組み込まれる。
Ｇａｓｉｃ ＧＪ，Ｇａｓｉｃ ＴＢ，Ｇａｌａｎｔｉ Ｎ，Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｔ，Ｍｕｒｐｈｙ Ｓ．Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｔｕｍｏｒ－ｃｅｌｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｒｅａｄ ｏｆ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｕ ｃａｎｃｅｒ １９７３；１１（３）：７０４－１８．
Ｇａｓｉｃ ＧＪ，Ｇａｓｉｃ ＴＢ，Ｓｔｅｗａｒｔ ＣＣ． Ａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １９６８；６１（１）：４６－５２．
Ｇｉｍｂｒｏｎｅ ＭＡ，Ｊｒ．，Ａｓｔｅｒ ＲＨ，Ｃｏｔｒａｎ ＲＳ，Ｃｏｒｋｅｒｙ Ｊ，Ｊａｎｄｌ ＪＨ，Ｆｏｌｋｍａｎ Ｊ．Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｉｎ ｏｒｇａｎｓ ｐｅｒｆｕｓｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｉｔｈ ａ ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈ ｍｅｄｉｕｍ． Ｎａｔｕｒｅ １９６９；２２２（５１８８）：３３－６．
Ｒｙｂａｋ ＭＥ，Ｇｉｍｂｒｏｎｅ ＭＡ，Ｊｒ．，Ｄａｖｉｅｓ ＰＦ，Ｈａｎｄｉｎ ＲＩ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｕｒ ｗｉｔｈ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｂｌｏｏｄ １９８９；７３（６）：１５３４－９．
Ｈｉｌｇａｒｄ Ｐ，Ｈｅｌｌｅｒ Ｈ，Ｓｃｈｍｉｄｔ ＣＧ． Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｎ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ（３ＬＬ）． Ｚ Ｋｒｅｂｓｆｏｒｓｃｈ Ｋｌｉｎ Ｏｎｋｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９７６；８６（３）：２４３－５０．
Ｇａｓｉｃ ＧＪ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ，ｐｌａｔｅｌｅｔｓ，ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｒｅｖｉｅｗｓ １９８４；３（２）：９９－１１４．
Ｋａｒｐａｔｋｉｎ Ｓ，Ｐｅａｒｌｓｔｅｉｎ Ｅ，Ａｍｂｒｏｇｉｏ Ｃ，Ｃｏｌｌｅｒ ＢＳ． Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｕｍｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １９８８；８１（４）：１０１２－９．
Ｋａｒｐａｔｋｉｎ Ｓ，Ａｍｂｒｏｇｉｏ Ｃ，Ｐｅａｒｌｓｔｅｉｎ Ｅ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． Ｐｒｏｇ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ １９８８；２８３：５８５－６０６．
Ｋａｒｐａｔｋｉｎ Ｓ，Ｐｅａｒｌｓｔｅｉｎ Ｅ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９８１；９５（５）：６３６－４１．
Ｋｌｅｍｅｎｔ ＧＬ，Ｙｉｐ ＴＴ，Ｃａｓｓｉｏｌａ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ａｃｔｉｖｅｌｙ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ． Ｂｌｏｏｄ ２００９；１１３（１２）：２８３５－４２．
Ｃｅｒｖｉ Ｄ，Ｙｉｐ ＴＴ，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＰＦ－４ ａｓ ａ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ． Ｂｌｏｏｄ ２００８；１１１（３）：１２０１－７．
Ｋｌｅｍｅｎｔ Ｇ，Ｓｈａｉ Ｅ，Ｖａｒｏｎ Ｄ．Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｉｎ：Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ Ａ，ｅｄ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ． Ｔｈｉｒｄ ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｍｏｓｂｙ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；２０１３：４８７－５０３．
Ｋｌｅｍｅｎｔ ＧＬ． Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｇｒｏｗｔｈ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ２０１１；８（３）：１６９－８０．
Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＪＥ，Ｚｕｒａｋｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｉｔａｌｉａｎｏ ＪＥ，Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｎｏｒｍａｌ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ． Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ２０１０；８５（７）：４８７－９３．
Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＪＥ，Ｚｕｒａｋｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｉｔａｌｉａｎｏ ＪＥ，Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．ＶＥＧＦ，ＰＦ４ ａｎｄ ＰＤＧＦ ａｒｅ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ２０１２；１５（２）：２６５－７３．
Ｓａｖｏｒｅ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，Ｍｕｉｒ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｌｅｃａｎ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｈｅｐａｒｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２００５；２２（５）：３７７－９０．
Ｋａｒｅｖａ Ｉ，Ａｂｏｕ－Ｓｌａｙｂｉ Ａ，Ｄｏｄｄ Ｏ，Ｄａｓｈｅｖｓｋｙ Ｏ，Ｋｌｅｍｅｎｔ ＧＬ． Ｎｏｒｍａｌ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｔｕｍｏｒ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｓ ａ Ｇａｍｅ ｏｆ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ． ＰｌｏＳ ｏｎｅ ２０１６；１１（１２）：ｅ０１６６６５５．
Ｉｔａｌｉａｎｏ ＪＥ，Ｊｒ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ＪＬ，Ｐａｔｅｌ－Ｈｅｔｔ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ：ｐｒｏ－ ａｎｄ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｏｒｇａｎｉｚｅｄ ｉｎｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｌｐｈａ ｇｒａｎｕｌｅｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｌｅａｓｅｄ． Ｂｌｏｏｄ ２００８；１１１（３）：１２２７－３３．
Ｍａ Ｌ，Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ ＭＤ，Ｗａｌｌａｃｅ ＪＬ． Ｔｈｒｏｍｂｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｓ ｂｌｏｃｋｅｄ ｂｙ ａ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－４（ＰＡＲ４）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ． Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００１；１３４（４）：７０１－４．
Ｍａ Ｌ，Ｐｅｒｉｎｉ Ｒ，ＭｃＫｎｉｇｈｔ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ １ ａｎｄ ４ ｃｏｕｎｔｅｒ－ｒｅｇｕｌａｔｅ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ＶＥＧＦ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ． ＰＮＡＳ ２００５；１０２（１）：２１６－２０．
参照による組み込み
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
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本明細書で使用される場合、全ての表題は単に組織化のためのものであり、いかなる形でも本開示を制限することを意図するものではない。いかなる個々のセクションの内容も、全てのセクションに等しく適用可能であり得る。
実施例１：グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドは、付着したカーゴを血小板のアルファ顆粒中に捕捉させる
本実施例では、例示的なグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドが血小板のアルファ顆粒へのカーゴの担持を導く能力を判定した。
図１Ａ及び図１Ｂ中でＰＡＬ１及びＰＡＬ２として識別したＡｌｅｘａ６４７標識ＧＡＧ結合ペプチド、ならびにＡｌｅｘａ６４７標識対照ペプチド（陰性対照として機能する電荷を持たないリガンド（ＣＦＬ））を、コンドロイチン硫酸などのグリコサミノグリカンに対する結合親和性及び血小板に進入する能力について試験した。ＰＡＬ１は配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＰＡＬ２は配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＦＬは配列番号１４のアミノ酸配列を有していた。
Ａｌｅｘａ６４７標識ペプチド（または陰性対照としてのＡｌｅｘａ６４７単独）の用量反応曲線を図１Ａに示す。Ａｌｅｘａ６４７標識ペプチドまたはＡｌｅｘａ６４７単独を、単離血小板と３７℃で１時間共インキュベートして血小板へ担持させた。血小板への担持能力をそれぞれ、インキュベーション後の上清中の蛍光の減少により示した。対照については、インキュベーション期間なしで同一の実験を実施した（図では「完全」と表記）。次に、共インキュベーション後の血小板を８００ｇで１０分間遠心分離して、血小板を上清から分離した（図では「担持済み」と表記）。
図１Ａに示すように、ＰＡＬ１及びＰＡＬ２の吸光度が、完全の測定値と担持済みの測定値との間で減少した。上清からの吸光度のこの低減は、これらのペプチドが上清から捕捉され、血小板に担持されたことを示す。対照的に、Ａｌｅｘａ６４７で標識したＣＦＬ条件の吸光度は、血小板とのＣＦＬ共インキュベーション後に変化しなかった。したがって、ＣＦＬペプチドは上清に残留し、血小板に担持されなかった。
図１Ｂは、各ペプチド実験に対して正規化した図１Ａのデータ（すなわち、完全の条件に対する担持済みの条件の正規化）を表す。図１Ｂは、例示的なＧＡＧ結合ペプチドであるＰＡＬ１及びＰＡＬ２が、付着したカーゴの血小板への担持を促進するのに対し、電荷を持たないリガンドに付着したカーゴは、カーゴの血小板への担持を導くことができないことを示す。
Ａｌｅｘａ６４７標識ＧＡＧ結合ペプチドが血小板のアルファ顆粒に担持されたことを確認するために、共焦点顕微鏡を使用した。図１Ａ及び図１Ｂの実験で遠心分離した血小板を、２％パラホルムアルデヒドで固定し、ガラスカバースリップに載置した。透過処理後、血小板のアルファ顆粒のマーカーであるＰＦ４に対して免疫蛍光染色を実施した。血小板をＡｌｅｘａ５６８－二次抗体で染色した。６０倍のオイル対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１レーザー走査型顕微鏡により、画像を収集した。
図２Ａは、ＰＦ４染色を赤（左列）で示し、Ａｌｅｘａ６４７シグナル（遊離のＡｌｅｘａ６４７、Ａｌｅｘａ６４７標識ＧＡＧ結合ペプチド、またはＡｌｅｘａ６４７標識ＣＦＬからのもの、中央列）を紫で示している代表的な画像である。画像は、表示用に輝度及びコントラストのみを調整した。各実験につきｎ＞５の画像を取得し、ＰＦ４の強度に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を選択した。
統合した画像（右列）は、Ａｌｅｘａ６４７がＧＡＧ結合ペプチドのカーゴである場合にのみ、アルファ顆粒マーカーＰＦ４とＡｌｅｘａ６４７シグナルとの共局在を示す。共局在化は、遊離のＡｌｅｘａ６４７については、またはＡｌｅｘａ６４７がＣＦＬのカーゴであった場合には観察されなかった。
各ＲＯＩのＡｌｅｘａ６４７強度を、ＩｍａｇｅＪを使用して測定し、Ｐｒｉｓｍ８を使用して箱ひげ図にプロットした。図２Ｂは、例示的なＧＡＧ結合ペプチドであるＰＡＬ１及びＰＡＬ２が、血小板のアルファ顆粒への付着したカーゴの担持を促進するのに対し、電荷を持たないリガンドに付着したカーゴは、血小板へ担持されず、言うまでもなく血小板のアルファ顆粒には担持されないことを示す。
これらのデータは、本開示のＧＡＧ結合ペプチドが、血小板のアルファ顆粒へのあらゆる付着したカーゴの担持を促進することを実証する。
実施例２：グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドは、グリコサミノグリカンと高い親和性で結合する
本実施例では、例示的なグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドの種々のグリコサミノグリカンへの結合親和性を判定した。
図３Ａは、本実施例で実施した等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）実験を示す模式図である。ここでは、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）を使用して、グリコサミノグリカンに対する例示的なＧＡＧ結合ペプチドの親和性を試験した。３ｍＭ ＣＳＡをシリンジに充填し、ＧＡＧ結合ペプチドまたは電荷を持たないリガンド（ＣＦＬ）（陰性対照として機能した）の０．２５ｍＭ溶液を保持する試料セルにＣＳＡを滴定した。温度を２２℃に設定し、緩衝液は５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．３５）及び１％ＤＭＳＯであった。ＣＳＡの注入を２６回行い、初回の体積は０．１μｌであり、後続の２５回の体積はそれぞれ１．５μｌであった。これらの実験では、例示的なＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列をそれぞれ有するＰＡＬ１及びＰＡＬ２であり、ＣＦＬは、配列番号１４のアミノ酸配列を有していた。
図３Ｂ～図３Ｄは、ＰＡＬ１（図３Ｂ）、ＰＡＬ２（図３Ｃ）、及びＣＦＬ（図３Ｄ）を保持するセルに滴定したＣＳＡのＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。
図３Ｂ及び図３Ｃの実験中に得られたデータを使用して、ＣＳＡとＧＡＧ結合ペプチドとの相互作用の解離定数を決定した。逐次結合モデルを使用した滴定カーブフィッティングによりこれらを決定した。これらのデータを図３Ｅ（ＰＡＬ１に関して）及び図３Ｆ（ＰＡＬ２に関して）に示す。これらのデータは、２つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドがグリコサミノグリカンであるコンドロイチン硫酸Ａに対して高い親和性を有していることを示す。
さらに、ヘパラン硫酸（ＨＳ）及びコンドロイチン硫酸（ＣＳＡ）に対する２つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドであるＰＡＬ１及びＰＡＬ２の結合親和性を、アフィニティークロマトグラフィーを使用して判定した。図４Ｂに示すように、ＰＡＬ１はＰＡＬ２よりも密接にＣＳＡに結合することが示される。ＩＴＣを使用して解離定数を測定した。解離定数が高いほど結合が緩くなる。図４Ｃに、ＰＡＬ２はＰＡＬ１よりも密接にＨＳに結合することを示す。結合は、ＦＰＬＣシステムに取り付けたＨｉ－Ｔｒａｐヘパリンカラムの溶出量によって測定した。ピークが遅く生じるほど、結合はより密接になる。図４Ａに、対照ペプチド（ＣＦＬ）ならびに２つのＰＡＬ（ＰＡＬ１及びＰＡＬ２）を含むペプチドアミノ酸配列を示す。
これらのデータは、本開示の２つのＰＡＬ配列が、血小板のアルファ顆粒に存在するグリコサミノグリカンに対して高い親和性を有すること、またこれらが２つの主要なグリコサミノグリカンに対して異なる結合優先性を示し、ＰＡＬ１はＰＡＬ１よりもＣＳＡに密接に結合し、ＰＡＬ２はＰＡＬ１よりもＨＳに密接に結合することを実証する。
実施例３：グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと血小板のアルファ顆粒に担持された薬剤とを含む化合物
本実施例では、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む例示的な化合物が血小板のアルファ顆粒に担持される能力を判定した。
本開示の２つの例示的な化合物及び２つの対照化合物を構築した。例示的な化合物には、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドに間接的に（９アミノ酸リンカーを介して）連結させた薬剤（例えば、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎ）を含めた。これらの実験では、例示的なＧＡＧ結合ペプチドは、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列をそれぞれ有するＰＡＬ１及びＰＡＬ２であった。陰性対照化合物には、配列番号１４のアミノ酸配列を有し、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎに間接的に（９アミノ酸リンカーを介して）連結させた、電荷を持たないリガンド（ＣＦＬ）を含めた。陽性対照化合物には、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎに間接的に（９アミノ酸リンカーを介して）連結させたＰＦ４（天然血小板因子）を含めた。使用前に、精製目的のＨｉｓタグ、及びＨｉｓタグの除去を容易にするＴＥＶプロテアーゼ切断部位も化合物に含めた。化合物を、ｍＮｅｏｎ－Ｌ９－ＣＦＬはｍＣＦＬ、ｍＮｅｏｎ－Ｌ９－ＰＡＬ１はｍＰＡＬ１、ｍＮｅｏｎ－Ｌ９－ＰＡＬ２はｍＰＡＬ２、ＰＦ４－Ｌ９－ｍＮｅｏｎはＰＦ４ｍとして識別した。
血小板を、４つの化合物のうちの１つと３７℃で１時間共インキュベートした。インキュベーション期間後、血小板を８００ｇで１０分間遠心分離した。次に、「担持済み」上清の（５０５ｎｍでの）蛍光吸光度を測定し、「完全」担持対照（血小板を化合物と混合し、次いでインキュベーション期間なしで直ちに遠心分離した各条件の上清）と比較した。データをさらに正規化し、実験の各群の担持率を図５に示すようにプロットした。
図５は、２つの例示的な化合物が、陰性対照よりも高い血小板への担持能力、及び陽性対照ＰＦ４よりもわずかに高い担持能力を有していたことを示す。
ＧＡＧ結合ペプチドを含む化合物が血小板のアルファ顆粒に担持されたことを確認するために、共焦点顕微鏡を使用した。図５の実験で遠心分離した血小板を、２％パラホルムアルデヒドで固定し、ガラスカバースリップに載置した。透過処理後、血小板のアルファ顆粒のマーカーであるＰＦ４に対して免疫蛍光染色を実施した。血小板をＡｌｅｘａ５６８－二次抗体で染色した。６０倍のオイル対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１レーザー走査型顕微鏡により、画像を収集した。
図６Ａは、ＰＦ４染色を赤で示し（左列）、ｍＮｅｏｎシグナルを緑で標識した（中央列）代表的な画像である。画像は、表示用に輝度及びコントラストのみを調整した。各実験につきｎ＞５の画像を取得し、ＰＦ４の強度に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を選択した。
統合した画像（右列）は、ＧＡＧ結合ペプチドを含む２つの例示的な化合物のアルファ顆粒マーカーＰＦ４とｍＮｅｏｎシグナルとの共局在を示す。ＣＦＬを含む化合物では共局在は観察されなかった。
各ＲＯＩのｍＮｅｏｎ強度を、ＩｍａｇｅＪを使用して測定し、Ｐｒｉｓｍ８を使用して箱ひげ図にプロットした。図６Ｂは、ＧＡＧ結合ペプチドを含む例示的な化合物が血小板のアルファ顆粒へ担持されるのに対し、電荷を持たないリガンドを含む化合物は、血小板へ担持されず、言うまでもなく血小板のアルファ顆粒には担持されないことを示す。
これらのデータは、ＧＡＧ結合ペプチドと薬剤とを含む本開示の化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持されることを実証する。
実施例４：グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む化合物は、グリコサミノグリカンと高い親和性で結合する
本実施例では、本開示の例示的な化合物（グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチド及び薬剤を含む）の種々のグリコサミノグリカンへの結合親和性を判定した。
図３Ａに示す通りの、また実施例２に記載の通りの等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）実験を、本実施例において実施した（但し、本開示の例示的な化合物及び陰性対照化合物を用いた）。実施例２の実験と同様に、ここでは、滴定緩衝液は５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．３５）であり、温度は２２℃に設定した。但し、実施例２の実験とは異なり、緩衝液はＤＭＳＯを欠いていた。
図７Ａ～図７Ｃは、ＰＡＬ１を含む例示的な化合物（図７Ａ）、ＰＡＬ２を含む例示的な化合物（図７Ｂ）、及びＣＦＬを含む陰性対照化合物（図７Ｃ）を保持するセルに滴定したＣＳＡのＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。これらの化合物には、その薬剤としてｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎを含めた。
図７Ｂ～図７Ｃの実験中に得られたデータを使用して、ＣＳＡと化合物との相互作用の解離定数を決定した。連続結合モデルを使用した滴定カーブフィッティングによりこれらを決定した。これらのデータを図７Ｃ（ＰＡＬ１を含む例示的な化合物に関して）、図７Ｄ（ＰＡＬ２を含む例示的な化合物に関して）、及び図７Ｅ（ＣＦＬを含む陰性対照化合物に関して）に示す。これらのデータは、２つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドがグリコサミノグリカンであるコンドロイチン硫酸Ａに対して高い親和性を有していることを示す。
さらに、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に対する、化合物を含有する２つの例示的なＧＡＧ結合ペプチド及びＣＦＬの結合親和性を、アフィニティークロマトグラフィーを使用して判定した。図８に示すように、いずれかのＧＡＧ結合ペプチドを含む化合物は、ＨＳと高い親和性で結合する。とりわけ、ＨＳに対する２つの例示的なＧＡＧ結合ペプチドの相対結合親和性は、ＰＡＬ２がＰＡＬ１よりもＨＳと密接に結合するため、ｍＰＡＬ２がｍＰＡＬ１よりもＨＳと密接に結合するという点で先の実験で観察されたものと類似していた。対照ペプチドを含む化合物（ｍＣＦＬ）は、ある程度の残存結合能を有しており、ＨＳカラムに保持され、比較的低濃度の塩で溶出したが、これはおそらく化合物の薬剤（例えば、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎ）の荷電特性に起因する。
これらのデータは、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドと薬剤とを含む本開示の例示的な化合物が、血小板のアルファ顆粒に存在するグリコサミノグリカンに対して高い親和性を有することを実証する。
実施例５：グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドのグリコサミノグリカンと結合する能力に重要な配列特異性の同定
本実施例では、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドを含む追加の例示的な化合物の種々のグリコサミノグリカンへの結合親和性を判定した。より具体的には、（配列番号１の）ＧＡＧ結合ペプチドのアラニンスキャニング変異誘発により、１つのアミノ酸が異なる追加の例示的なＧＡＧ結合ペプチドを生成し、次いで、これらを実施例３に記載の通りに薬剤（例えば、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎ）に間接的に連結させた。
図３Ａに示す通りの、また実施例４に記載の通りの等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）実験を、本実施例において実施した（但し、本開示の追加の例示的な化合物を用いた）。
図９Ａでは、化合物をＰＡＬ１Ａ～ＰＡＬ１１Ａとして識別する。これらの例示的な化合物は、配列番号３～配列番号１３のアミノ酸配列を有するＧＡＧ結合ペプチドを有する。特に、ＰＡＬ１ＡのＧＡＧ結合ペプチドは、１位にアラニンを有することにより配列番号１とは異なっており、ＰＡＬ２ＡのＧＡＧ結合ペプチドは、２位にアラニンを有することにより配列番号１とは異なっており、ＰＡＬ３ＡのＧＡＧ結合ペプチドは、３位にアラニンを有することにより配列番号１とは異なっていた。
図９Ａは、ＰＡＬ１Ａ～ＰＡＬ１１Ａとして識別した例示的な化合物のうちの１つを保持するセルに滴定したＣＳＡのＩＴＣ解離動態のグラフ表示を示す。記載した各化合物を含有する試料セルへのＣＳＡ滴定によって生成された各ＩＴＣ曲線に見られるように、電荷及び配列の両方がコンドロイチン硫酸Ａとの相互作用に重要である。
図９Ａの実験中に得られたデータを使用して、ＣＳＡと追加の例示的な化合物との相互作用の解離定数を決定した。逐次結合モデルを使用した滴定カーブフィッティングによりこれらを決定した。これらのデータを図９Ｂ～図９Ｌ（それぞれＰＡＬ１Ａ～ＰＡＬ１１Ａに関する）に示す。これらのデータは、追加の例示的な化合物がグリコサミノグリカンであるコンドロイチン硫酸Ａに対して様々な親和性を有していることを示す。
図９Ｍは、例示的な化合物及び対照化合物の平均解離定数を示すグラフである。このグラフは、化合物間のＣＳＡへの結合親和性の様々な程度を示している。グラフ中で、「１Ａ」と識別したデータは「ＰＡＬ１Ａ」化合物を表し、「２Ａ」と識別したデータは「ＰＡＬ２Ａ」化合物を表しており、以下も同様である。
とりわけ、１位、４位、７位、または９位にアラニンを有するこれらの例示的な化合物は、親和性が最も低く、最も劣っていた。このことにより、ＧＡＧ結合ペプチドがそれらの位置にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを有する場合に、結合能の改善が示される。
位置にあるプロリン、アルギニン、イソロイシンなどの極めて重要なアミノ酸は、結合の親和性に影響を与える。興味深いことに、これらのアミノ酸は、予想どおり正に荷電したアルギニンを含み、また特殊なコンフォメーションを維持することにより寄与し得る非荷電のプロリン及びイソロイシンも含む。
これらのデータは、荷電アミノ酸の位置が異なるＧＡＧ結合ペプチドを有する追加の化合物が、グリコサミノグリカンに対して様々な親和性を有することを実証する。また、極めて重要な残基（配列番号１に関しては１位、４位、７位、及び９位）及び特定のアミノ酸（プロリン、アルギニン、及びイソロイシンなど）は、例えば、血小板のアルファ顆粒中のグリコサミノグリカンへのＧＡＧ結合ペプチドの結合親和性に影響を及ぼす。
実施例６：本開示の化合物を形成するときにグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドを薬剤にコンジュゲートさせるための例示的な方法
本実施例では、薬剤をグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ペプチドにコンジュゲートさせて、本開示の例示的な化合物を形成する。
図１０Ａに示すように、マレイミド反応を使用して薬剤をＧＡＧ結合ペプチドにコンジュゲートさせ、それにより本開示の化合物を形成する。当該技術分野で公知の他のコンジュゲーション反応、例えば、スクシンイミジルエステル反応または酵素反応を使用することができる。図１０Ａでは、ＧＡＧ結合ペプチド（図１０Ａには「ＧＡＧ－ｐｅｐ」として示す）は、蛍光部分を含む。本開示のある特定の実施形態では、蛍光部分は化合物に含まれない。
（上記の実施例に記載されるような）本開示の化合物のそのカーゴを血小板に担持させる能力をさらに実証するために、ここでは、ＧＡＧ結合ペプチドと治療用抗体（ＶＥＧＦＲ２阻害剤であるＤＣ１０１）を含む例示的な化合物を生成した。同様の方法を使用して、抗体以外の薬剤を使用して本開示の化合物を生成することができる。例として、薬剤は、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子であり得る。
血小板のアルファ顆粒に担持される蛍光部分をさらに含む例示的な化合物（薬剤として抗体を含む）の能力を判定した。
４つの化合物、すなわち、陰性対照としてのＡｌｅｘａ６４７標識ＤＣ１０１（図１０ＢではＡ－ＤＣ１０１として識別する）、配列番号１４の電荷を持たないリガンド（ＣＦＬ）とＤＣ１０１抗体とを含むＡｌｅｘａ６４７標識化合物（図１０ＢではＡ－ＣＬＦ－ＤＣ１０１として識別する）、配列番号１のＧＡＧ結合ペプチドとＤＣ１０１抗体とを含むＡｌｅｘａ６４７標識化合物（図１０ＢではＡ－ＰＡＬ１－ＤＣ１０１として識別する）、及び配列番号２のＧＡＧ結合ペプチドとＤＣ１０１抗体とを含むＡｌｅｘａ６４７標識化合物（図１０ＢではＡ－ＰＡＬ２－ＤＣ１０１として識別する）を調製した。
血小板を各化合物と３７℃で１時間共インキュベートした。次に、血小板を８００ｇで１０分間遠心分離し、２％パラホルムアルデヒドで固定し、ガラスカバースリップに載置した。透過処理後、血小板中のＰＦ４に対して免疫蛍光染色を実施し、さらにＡｌｅｘａ５６８－二次抗体で染色した。６０倍のオイル対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１レーザー走査型顕微鏡により、画像を収集した。
図１０Ｂの代表的な画像では、ＰＦ４染色は赤で表示し（左列）、Ａｌｅｘａ６４７シグナルは紫で示した（中央列）。画像は、表示用に輝度及びコントラストのみを調整した。各実験につきｎ＞５の画像を取得し、ＰＦ４の強度に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を選択した。
統合した画像（右列）は、Ａｌｅｘａ６４７がＧＡＧ結合ペプチドに会合している場合にのみアルファ顆粒マーカーＰＦ４とＡｌｅｘａ６４７シグナルとの共局在を示し、Ａｌｅｘａ６４７がＣＦＬまたはＤＣ１０１抗体のみに会合している場合には示されない。不都合なことに、Ａ－ＰＡＬ２－ＤＣ１０１化合物と共インキュベートした血小板については、ＰＦ４免疫染色反応に失敗した。したがって、この群に関してはＡｌｅｘａ６４７強度に基づいてＲＯＩを選択した。
各ＲＯＩのＡｌｅｘａ６４７強度を、ＩｍａｇｅＪを使用して測定し、Ｐｒｉｓｍ８を使用して箱ひげ図にプロットした。図１０Ｃに示すように、本開示の２つの例示的な化合物は血小板のアルファ顆粒へ担持されるのに対し、電荷を持たないリガンドを含む化合物または抗体を含む化合物（ＧＡＧ結合ペプチドを含まない）は、血小板へ担持されず、言うまでもなく血小板のアルファ顆粒には担持されない。
これらのデータは、ＧＡＧ結合ペプチドと薬剤とを含む本開示の化合物が、血小板のアルファ顆粒に担持されることを実証する。
実施例７：疾患関連タンパク質は濃度勾配に対抗して血小板アルファ顆粒に能動的に取り込まれる
本実施例では、血小板によるタンパク質の捕捉を分析し、疾患関連タンパク質は濃度勾配に対抗して血小板アルファ顆粒に能動的に取り込まれるのに対し、アルブミンなどの腫瘍に無関係なタンパク質はそうではないことを見出した。
血栓症、創傷治癒、及びアテローム性動脈硬化における血小板の役割は十分に確立されているが、腫瘍の増殖及び転移における血小板の役割はそれほど明確になっていない。１９６０年代に遡る刊行物では、血小板が腫瘍内で凝集し、腫瘍及び内皮細胞の増殖を支持し、腫瘍の転移を亢進させ、がん特異的タンパク質を捕捉することが示唆されている。
表面増強レーザー脱離／イオン化－飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ－ＴｏＦＭＳ）をヒト脂肪肉腫のマウスモデルで使用して、血小板及び血漿タンパク質のプロファイルを評価した。非血管新生（休止状態）のヒト腫瘍異種移植片及び血管新生（迅速に増殖中）のヒト腫瘍異種移植片を保有するマウスの血小板は、正常な偽手術マウスよりもはるかに高いレベルの腫瘍特異的タンパク質（すなわち、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ）を有することが判明した（図１１を参照されたい）。
図１１は、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、及びエンドスタチンの血小板レベルが、腫瘍が休止状態から脱出する直前に変化し、その均衡が腫瘍増殖の刺激物質の方へ向かうことを示す図である。ヒト脂肪肉腫の休止状態の異種移植片を保有するマウスの血小板（青色、中央列）または血管新生の異種移植片を保有するマウスの血小板（赤色、右列）を、表面増強レーザー脱離／イオン化（ＳＥＬＤＩ）飛行時間型（ＴｏＦ）質量分析（ＭＳ）を使用して分析した。腫瘍保有マウスの平均ＭＳピーク強度を、健常偽手術マウスの血小板の平均ＭＳピーク強度（黒色、左列）と比較した。明らかであるように、休止状態の腫瘍及び血管新生の腫瘍では、がん関連性のｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、及びＰＤＧＦが著しく上昇するが、がん阻害物質であるエンドスタチンはがんの進行とともに減少する。一方、休眠状態からの脱出（血管新生の増殖、赤色）は阻害物質（エンドスタチン）の減少と関連していた。
さらに、血小板は選択したがん特異的タンパク質を能動的に捕捉するのに対し、アルブミンなどの非特異的タンパク質は捕捉されないことが判明した（図１２を参照されたい）。
図１２は、血小板ががん特異的タンパク質を能動的に捕捉し、アルブミンなどの非特異的タンパク質を能動的に捕捉しないことを示すＭＳ発現マップである。ヒト脂肪肉腫の休止状態の異種移植片を保有するマウスの血小板（青色で表示、中央段）及び血管新生の異種移植片を保有するマウスの血小板（赤色、下段）を、ＳＥＬＤＩ ＴｏＦ ＭＳを使用して分析した。左側のパネルに示されているように、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は腫瘍保持マウスの血小板中に捕捉されているが、正常な健常マウスの血小板／血漿中には捕捉されていない（灰色で表示、対照、上段）。対照的に、右側のパネルは、アルブミンなどの非特異的タンパク質が捕捉されていないことを示している。
次に、健常ヒト個体の血小板には主に血管新生の阻害物質が含まれていることが判明した。健常ヒト対象５０名（女性２９名、男性２１名）（年齢２６～８９歳、中央値５５±１３歳）から血小板を得て、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用して特定のタンパク質について分析した。血漿と比較して著しく上昇していたが（ＶＥＧＦ ２１５倍）、ＰＦ－４（５１６倍）、ＰＤＧＦ（９１４倍）、ＴＳＰ－１（８１３倍）、ｂＦＧＦ（１７倍）、及びエンドスタチン（０．７倍））、より重要なのは、刺激物質と阻害物質とが均衡していたことである（血小板が血管新生の刺激物質（ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ）及び阻害物質（ＰＦ４、エンドスタチン）の両方を含有することを示す表である図１３を参照されたい）。この均衡は極めて動的であり、がん進行の初期に変化する。例えば、結腸直腸癌を有するヒト対象の初回切除時の血小板（ｎ＝３５）では、多変量ロジスティック回帰モデリングにより、ＰＤＧＦ（Ｐ＝０．０２４）、ＰＦ４（Ｐ＜０．０００１）、及びＶＥＧＦ（Ｐ＝０．０１２）がＣＲＣ１５の独立予測因子であることが確認された。正常ヒト対象の血小板は血管新生阻害物質が優勢であることが示されるのに対し、がん患者の血小板には血管新生刺激物質が主に含まれている。
血小板に捕捉される刺激物質と阻害物質との均衡は、ヒト対象の生理機能における変化に対する感受性が高いことが判明した。がん関連タンパク質の血小板による捕捉は、良好な転帰に関連する生活様式の変化を示し得る。限局性前立腺癌患者において、ベースライン時（赤色の群は生活様式の変化なし、青色は生活様式の変化あり）及び６ヶ月の介入（運動、健康的食事、及び規則的睡眠などの生活様式の変化）後に、血小板に捕捉されたタンパク質の特徴づけを行った。
図１４は、生活様式の積極的介入を受けている限局性前立腺癌を有する対象、及び生活様式を変化させずに経過観察中の限局性前立腺癌を有する対象の血小板の介入後６ヶ月時点でのＳＥＬＤＩ－ＴｏＦ分析を示す。ベースラインでは、血小板タンパク質プロファイルに差異はなかった。生活様式の介入を受けた対象（青色）は、ＶＥＧＦなどのがん増殖刺激物質の減退（４７及び２９ｋＤでピーク）、ならびにＰＦ４及びＣＴＡＰＩＩＩなどのがん増殖阻害物質の増加（７．４及び９．３ｋＤでピーク）を示した。生活様式介入群では、明らかに阻害物質が上方制御され、かつ刺激物質が減少した。対照的に、生活様式を変化させなかった患者（赤色）は、６ヶ月時点で逆の傾向を示した。
実施例８：タンパク質が血小板中に捕捉されるか否かの主要決定因子は、タンパク質がグリコサミノグリカンに結合する能力である
本実施例では、タンパク質の血小板中に捕捉される能力について判定した。
通常の生理学的条件下では、血小板はグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を切断する酵素を極めて高レベルで発現する。例えば、ヘパラン硫酸（ＨＳ）及びヘパリン多糖を優先的に切断するエンドグルクロニダーゼ（ヘパラナーゼ）は、正常組織では極めて低レベルで発現するが、損傷、がん、または炎症などの病態では過剰発現となる。最もよく研究されている血小板タンパク質である血小板第４因子（ＰＦ４）は、セルグリシンのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖に結合した血小板α顆粒に保存されている。血小板のセルグリシンは、ＰＦ４が結合するコンドロイチン／デルマタン硫酸で装飾されている。より重要なことに、特定のＧＡＧサブタイプに対するＰＦ４の親和性が、腫瘍関連血管新生の局所的制御を調節することが示されている。ＰＦ４は血小板由来のセルグリシンＧＡＧ鎖よりも内皮細胞由来のパールカンのヘパラン硫酸鎖に対して高い親和性を有しているため、ＰＦ４は内皮細胞のＧＡＧに結合し、ＦＧＦ２などの血管新生刺激物質の結合を防止する。過去に、創傷治癒中または腫瘍増殖中の細胞間相互作用を決定付けるのは、ＧＡＧに対する増殖因子の親和性であることが示されていた。
図１５Ａ及び図１５Ｂは、それぞれの受容体の阻害は血小板による捕捉を阻害しないが、スルフェンによるヘパリン結合の阻害は血小板α顆粒によるタンパク質捕捉の著しい阻害をもたらすことを示すグラフである。ＦＧＦ、ＰＦ４、ＶＥＧＦ、及びＴＰＯのＦＡＣＳ分析を示す図１５Ａは、透過処理した血小板（黒色、各対の左列）及びそれぞれの受容体の阻害物質に曝露させた血小板（灰色、各対の右列）における増殖因子の同一の血小板取り込みを示している。これに対し、図１５Ｂに示すように、非特異的グリコサミノグリカン阻害剤であるスルフェンによる多血小板血漿の前処理（青色、各ペアの右列）は、ヘパラン硫酸に結合しない唯一の試験した増殖因子であるトロンボポエチンを除いて、全ての血小板による増殖因子の取り込みを著しく阻害する（Ｉｎｈ＝阻害剤添加、ＰＦ４受容体、ＣＸＣＲ３Ｂとして知られるケモカイン受容体ＣＸＣＲ３のスプライスバリアント）。
タンパク質が血小板中に捕捉されるか否かの主要決定因子は、タンパク質がヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、セルグリシン、またはパールカンなどのグリコサミノグリカンに結合する能力であるように見受けられる。
増殖因子及び血管新生調節タンパク質は、受容体の活性化または分解を伴わずにＧＡＧに結合した血小板α顆粒によって輸送可能であることから、新規の血小板固定型リガンド（ＰＡＬ）が開発された。様々なＰＡＬが本開示の他所で開示されている。例えば、ＰＡＬ１は、ＥＲＲＩＷＦＰＹＲＲＦ（配列番号１）の配列を有している。これは、血小板α顆粒中の主要なＧＡＧであるコンドロイチン硫酸（ＣＳ）に結合することが示されており、開発された。
実施例９：血小板は時間的及び空間的に制御された形で内容物を放出する異なるタイプのα顆粒を有する
本実施例では、異なるα顆粒区画の特徴づけについて記載する。
ＶＥＧＦ（血管新生の刺激物質）及びエンドスタチン（血管新生の阻害物質）を同時に担持した血小板は、別個のα顆粒を占有している。免疫蛍光顕微鏡法を使用して、血小板及び巨核球における血管新生阻害物質及び刺激物質の両方の局在化を視覚化した。図１６に示すように、二重免疫蛍光顕微鏡法により、血管新生の阻害物質であるエンドスタチン（赤色、左パネル及びオーバーレイ）、ならびに血管新生刺激物質であるＶＥＧＦ（緑色、中央パネル及びオーバーレイ）が、別個のα顆粒に局在していることが明らかになった（オーバーレイ、右パネルに示す通り）。
さらなる実験により、これらの別個の顆粒が、Ｐ－セレクチン関連（高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１によって早期に放出される）またはフォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）関連（低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４によって放出される）のいずれかであることを同定した。図１７は、血管新生の刺激物質がＰ－セレクチンと局在することを示す免疫蛍光画像である。ＶＥＧＦ及びエンドスタチンが別個の細胞小器官内にあることを立証した後、α顆粒をサブタイプ分類した。抗Ｐ－セレクチン及び抗フォン・ヴィレブランド因子などの特定の血小板顆粒を認識する抗体を使用してα顆粒を標識し、抗セロトニン抗体を使用して濃染顆粒を標識した。ＶＥＧＦに対する抗体（緑色、左パネル）及びα顆粒マーカーＰ－セレクチンに対する抗体（赤色、中央パネル）を用いた二重免疫蛍光顕微鏡法により、ＶＥＧＦがＰ－セレクチンα顆粒に局在していることが確認される（右パネル、統合）。
対照的に、エンドスタチンはＰ－セレクチンα顆粒とは共局在せず、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）α顆粒と共局在した。図１８は、エンドスタチンが別個の異なるα顆粒区画に存在し、Ｐ－セレクチン（下段）ではなくｖＷＦ（上段）と共局在することを示す免疫蛍光画像である。α顆粒中の確立されたタンパク質であるフォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）に対する抗体を用いた二重免疫蛍光染色により、エンドスタチンもα顆粒中に含まれるが、Ｐ－セレクチンと共局在しないことが実証され、エンドスタチンが明らかに異なるα顆粒区画中に存在することが確認される。
２つのタイプのα顆粒の役割は、創傷治癒の状況において理解され得る。創傷治癒においては、損傷直後に炎症性サイトカイン及び血管新生刺激増殖因子が必要となる。しかしながら、組織が治癒するにつれて、より多くの血管新生阻害物質が放出される。図１９は、創傷治癒におけるタンパク質の連続放出ならびにプロテイナーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）及びＰＡＲ４の局所濃度勾配をまとめた模式図を含む。示すように、損傷直後に血管発芽に関する最初の一過性シグナルがＶＥＧＦにより誘導され、続いて伸長及び管形成（ｂＦＧＦによる）、周皮細胞の動員を通じた血管安定化（ＰＤＧＦによる）、最後に血管剪定（エンドスタチン、タムスタチン、ならびに他のコラーゲン及びプラスミン切断産物による）が行われる。通常の創傷治癒プロセスはおよそ７～１０日を要する。注目すべきことに、このプロセスは、時間的及び空間的に制御された連続的なタンパク質放出を通じて、慎重に全体として調整された血管形成の胎生期の一連の流れを再現する。
理論に束縛されることを望まないが、異なるα顆粒タイプを介して、時間的及び空間的に制御され連続的にその内容物を放出する血小板の能力は、血小板に、第１の薬物を早期放出プロファイルを有する第１のα顆粒タイプに担持させ、第２の薬物をより遅い放出プロファイルを有する第２のα顆粒タイプに担持させる、治療分野で利用することができる。このためには、異なるα顆粒タイプの特徴を知る必要があり、あるα顆粒タイプを他のα顆粒タイプに対して選択的に担持させる手段を確立する必要がある。
血小板及び内皮細胞は、ヘパリン硫酸（ＨＳ）またはコンドロイチン硫酸（ＣＳ）などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合する増殖因子の能力により、増殖因子（ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、及びＰＤＧＦなど）を内在化することができるように見受けられる。
図２０は、マウス血管内皮腫細胞（ＥＯＭＡ）の表面上のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）による増殖因子の捕捉を示すグラフである。ここでは、標準培地条件下または腫瘍条件培地を使用した代替腫瘍環境中のいずれかの単層組織培養条件で増殖中の細胞は、血小板及び内皮細胞上のＧＡＧ上にｂＦＧＦを捕捉することにより、これを上清から除去する。ヘパリン及びヘパリナーゼはこの現象をさらに強化する。しかしながら、トロンビンに富む腫瘍条件培地によってここでシミュレートした腫瘍微小環境（右端のデータ列）では、ｂＦＧＦ及びその誘導体はＧＡＧから上清に放出され、さらには腫瘍微小環境にまで放出される。値は５つのウェルの平均値及びＳＥを表す。これらのデータにより、捕捉がヘパリン依存性であり、トロンビンの存在下で増加することが確認される。
増殖因子が血小板凝塊により形成された一時的マトリックスから放出されるという確証は、図２１によって裏付けられる。
図２１は、血小板により形成された一時的マトリックスから放出された増殖因子に応答したマウス血管内皮腫細胞（ＥＯＭＡ）の増殖を示すグラフである。標準培地または腫瘍条件培地を使用した単層組織培養で増殖中のＥＯＭＡ細胞は、ｂＦＧＦ及び他のヘパリン硫酸（ＨＳ）結合増殖因子を、ＥＯＭＡ細胞の膜上及び血小板一時的マトリックス上のＧＡＧに固定することによって捕捉する。ヘパリナーゼによる増殖因子の遊離は、例えば腫瘍微小環境における、内皮細胞の増殖能を増加させる。値は５つのウェルの平均値及びＳＥを表す。
血小板第４因子（ＰＦ４）は、自然界に存在するＨＳに対して最も高い親和性のうちの１つを有しており、ＧＡＧ部位を占有して他のＨＳ結合増殖因子と置き換わることができる。そのため、ＰＦ４は腫瘍増殖の阻害物質として機能する。図２２は、血小板が腫瘍活性化時に内皮細胞とタンパク質を交換することができる一時的マトリックスを形成することを示す免疫蛍光画像である。マウス血管内皮腫細胞（ＥＯＭＡ）細胞を標準培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）で増殖させ、正常血小板を加えた。通常条件下（最上段）では、血小板が細胞膜に沿って凝集するため、ＰＦ４（血小板α顆粒の主要内容物、緑色及び左列）はＥＯＭＡ細胞の周辺部に（すなわち、膜に沿って）見られる。ヘパラン硫酸（赤色、左から２列目）は内皮細胞の膜表面全体に分布しており、ＤＡＰＩ（青色、右から２列目）は核対比染色である。腫瘍条件培地、トロンビン、または内皮細胞の他の活性化因子が存在しない場合、血小板のクランピング及び凝集は生じない。ＰＦ４の大部分は血小板に残留し、内皮細胞ＧＡＧと共局在しない（最上段の右端の画像を参照されたい）。しかしながら、腫瘍条件培地の存在下でＥＯＭＡ細胞及び血小板をインキュベートすると（２段目）、ＨＳの発現が増大し、ＨＳが豊富な表面ＥＯＭＡ細胞上のＰＦ４の凝集によって示されるように、厚い血小板一時的マトリックスが形成される。この血小板一時的マトリックスは、ＥＯＭＡ細胞が増殖のために使用する。細胞内での血小板ＰＦ４の凝集及びその後の内皮細胞増殖の刺激は、コンドロイチナーゼ及びヘパリチナーゼ（３段目）、ヘパリン（４段目）によって阻害される。一方、ＨＳが豊富な表面ＥＯＭＡ細胞上の血小板ＰＦ４の凝集は、トロンビンによって再現される（最下段）。
一時的マトリックス内のα顆粒の蓄積を利用して、α顆粒の異なる区画に異なる薬剤を担持させることができる。これらは、腫瘍部位で血小板により形成された一時的マトリックスに捉えられ、例えば腫瘍部位に存在するトロンビン及びその断片によって、時間的及び空間的に制御された形で局所的に放出される。
実施例１０：ＰＡＬコンジュゲートを血小板へ担持させる
本実施例では、種々のコンジュゲート（蛍光マーカーのみとの、または蛍光マーカー及び例示的な活性剤（ここではルシタニブ）との）を血小板に担持させた。
図２３Ａに示すように、Ｆａｍ－ＰＡＬ１、Ｆａｍ－ＰＡＬ２、Ｆａｍ－ＰＡＬ１－ルシタニブ、及びＦａｍ－ＰＡＬ２－ルシタニブの各々は、血小板に担持され、担持血小板に目に見える害を及ぼさない。ＤＭＳＯ対照と比較した場合、Ｆａｍ－ＰＡＬ１、Ｆａｍ－ＰＡＬ２、Ｆａｍ－ＰＡＬ１－ルシタニブ、及びＦａｍ－ＰＡＬ２－ルシタニブは、血小板を凝固促進性にする担持プロセスによって血小板を活性化させるのではなく、その形態を変化させず、完全に機能する休止状態（紫色チャネル）に維持させながら、血小板に内在化された（緑色チャネル）。
図２３Ｂは、Ｆａｍ－ＰＡＬ１またはＦａｍ－ＰＡＬ２（上部）、ならびにＦａｍ－ＰＡＬ１－ルシタニブ及びＦａｍ－ＰＡＬ２－ルシタニブ（下部）の血小板への用量反応性担持を示す。示すように、コンジュゲートの用量は０．００４ｍＭ～０．２２ｍＭの範囲であった。
本実施例では、ＰＢＳ中の新鮮な血小板懸濁液を、３７℃で１時間、濃度が異なる示した化合物と共インキュベートし、次いで８００ｇで１０分間回転させることにより分離した。次に、担持血小板を２％パラホルムアルデヒドで３０分間室温にて固定し、ＰＢＳ中の０．２％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １％ＢＳＡで３０分間室温にて透過処理し、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで３０分間室温にてブロッキングした（各ステップの間にＰＢＳで３回洗浄した）。最後に、血小板をポリ－リジンでコーティングしたガラス底３８４ウェルプレートに播種し、ウサギ抗ヒトチューブリン及びＡ６４７－ロバ抗ウサギで免疫染色した。６０倍の油浸対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１共焦点顕微鏡を使用して画像を取得し、ＩｍａｇｅＪを使用して処理し、ＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒを使用して分析した。図２３Ｂのグラフは、各群につき１，５００個超の血小板を分析し、Ｒを使用してプロットした。
実施例１１：異なるタイプのα顆粒に選択的に担持させることができる
本実施例では、α顆粒の異なるサブ区画に特異的に担持させるための特定の血小板固定型配列（ＰＡＬ）の相違及び親和性。
図２４は、ＰＡＬ１及びＰＡＬ２が異なる細胞内局在性を有する、すなわち異なるアルファ顆粒に対する優先性を有することを示す免疫蛍光画像である。ＶＥＧＦを一方のアルファ顆粒セット（緑色）のマーカーとして、ＰＦ４を第２のアルファ顆粒セット（赤色）のマーカーとして使用し、Ａｌｅｘａ６４７標識ＰＡＬ１及びＰＡＬ２（青色）の細胞内局在性をＮｉｋｏｎ－Ａ１共焦点顕微鏡で記録した。ＰＡＬ１及びＰＡＬ２は、アルファ顆粒のサブセットの両方に担持された。但し、ＰＡＬ１はＶＥＧＦ／ＰＡＬ統合列に青緑色で示すＶＥＧＦサブセットにより多く共局在したのに対し、ＰＡＬ２はＰＦ４／ＰＡＬ統合列に紫色で示すＰＦ４チャネルにより多く共局在した。これらのデータは、図４Ｂに示すデータ（ＰＡＬ１がＰＡＬ２よりも密接にＣＳＡに結合することを示す）及び図４Ｃに示すデータ（ＰＡＬ２がＰＡＬ１よりも密接にＨＳに結合することを示す）と併せて、２つのタイプのα顆粒が、異なるＧＡＧタイプの優位性によって特徴づけられることを示唆している。
理論に束縛されることを望まないが、ＰＡＬ－コンジュゲートは、まず血小板内に内在化され、次いで特定のＰＡＬ配列に基づいて好ましい顆粒タイプに局在すると思われる。
図２４の画像は、６０倍の油浸対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１共焦点顕微鏡を使用して取得した。ＰＡＬ１及びＰＡＬ２は、統合画像内の青緑色及び紫色のピクセルで示すように、アルファ顆粒の両方のサブセットと部分的に共局在する。ＰＡＬ１及びＰＡＬ２の相違を定量化するために、担持血小板の分画を実施した。
Ｆａｍ－ＰＡＬ１（図２５Ａ及び図２５Ｂの紫色）とＦａｍ－ＰＡＬ２（図２５Ａ及び図２５Ｂの淡青色）との間の異なる細胞内局在性をもたらす機構をさらに理解するために、これらの２つのペプチドをＣＳＡ構造上（図２５Ａの緑色）またはＨＳ構造上（図２５Ｂの黄色）に別個にドッキングした。点線は、相互作用の鍵となる分子間接触を示す。全体として、ＰＡＬ１及びＰＡＬ２は両方ともそれらのアルギニンを使用してＧＡＧと接触する。ＣＳＡに結合するとき、ＰＡＬ１及びＰＡＬ２は両方とも分子の片側に結合したままで、分子と塩橋及び水素結合を形成する。これは、ＣＳＡに対するこれらの同程度の結合親和性と一致する。図２５Ｂに示すように、ＰＡＬ２はＨＳの側にあるのに対し、ＰＡＬ１はＨＳの溝に沿っている。これらの異なる関連性により、ＨＳに対する２つのＰＡＬの異なる親和性が生じる可能性がある。これらの構造モデルは、等温熱量測定、ＦＰＬＣ、及び顕微鏡法を含む卓上実験で行われた観察と一致する。実験データを考慮すると、これらのモデルはまた、ＰＡＬ１及びＰＡＬ２の異なる特徴を利用して複数の治療試薬を血小板に担持させる能力を解明する。
異なるＧＡＧタイプの優位性によってα顆粒タイプが特徴づけられるという知見を用いて、特定のタイプのα顆粒に薬物を選択的に担持させることができる。
図２６Ａ及び図２６Ｂは、ＰＡＬ１（配列番号１）が小分子にコンジュゲートされたとき、ＰＡＬ１がそれぞれの分子を血小板α顆粒へと導くことができることを示す。血小板をＡｌｅｘａ６４７標識ルシタニブまたはＡｌｅｘａ６４７－ＰＡＬ１コンジュゲートルシタニブと３７℃で１時間共インキュベートした。次に、血小板を８００ｇで１０分間回転させ、２％パラホルムアルデヒドで固定し、ガラスカバースリップに載置した。透過処理後、血小板中のＰＦ４に対して免疫蛍光染色を実施し、さらにＡｌｅｘａ５６８－二次抗体で染色した。６０倍のオイル対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ－Ａ１レーザー走査型顕微鏡により、画像を収集した。図２６Ａは、ＰＦ４の免疫蛍光を赤色で示し、Ａｌｅｘａ６４７を青色で示した代表的な画像を含む。統合したＰＦ４／Ａｌｅｘａ６４７チャネルは、ＰＦ４とＡｌｅｘａ６４７標識ＰＡＬ１コンジュゲートルシタニブの共局在を示した。図２６Ｂは、各群の８００超のＲＯＩに関するＡｌｅｘａ６４７チャネルの平均強度をＩｍａｇｅＪを使用して分析したことを示すグラフであり、エラーバーは平均値の標準偏差である。
これらのデータは、ＰＡＬ１薬物生成物をα顆粒、特にＣＳ、Ｐ－セレクチンタイプの顆粒に担持させることができることを示している。
図２７Ａ～図２７Ｃは、血小板顆粒を分画するための方法を実証しており、タンパク質マーカーによって異なる顆粒を区別することができることを示している。図２７Ａは、血小板顆粒を分画するステップを示すフローチャートである。最終ステップは、分離した血小板顆粒を用いた層状スクロース勾配であり、これを図２７Ｂに、定量化した勾配を示す絵図である上部画像、及び図２７Ｃに示すゲル上に別個に担持させた異なる階調を示す下部画像で示す。図２７Ｃは、対照としてＤＭＳＯを使用して担持させた血小板からの顆粒画分のウエスタンブロットである。ＰＦ４及びＶＥＧＦはアルファ顆粒のマーカーであり、ＭＲＰ４及びＬＡＭＰ２はリソソーム及び濃染顆粒を含む他の貯蔵顆粒のマーカーである。結果は、大部分の顆粒は画分Ｂ、Ｃ、及びＤに濃縮されていることを示している。
ＰＡＬ１及びＰＡＬ２ならびにそれらのコンジュゲートの細胞内局在性をさらに調査するために、様々な化合物を担持させた血小板からの顆粒画分を固定し、ポリ－リジンでコーティングしたガラス底３８４ウェルプレートに播種した。図２７Ｄに示すように、免疫染色を２つのセットで行った。１つはＰＦ４（黄色）及びＭＲＰ４（赤色）を用いたものであり、他方はＰＦ４（黄色）及びＶＥＧＦ（赤色）を用いたものである。６０倍の水浸対物レンズを備えたハイスループット共焦点顕微鏡Ｐｈｅｎｉｘを使用して画像を取得した。このメタグラフは、示すように、様々なウェル及び様々なチャネルからの代表的な画像を示している。図２７Ｅに示すように、ＤＭＳＯ処理血小板から収集した全ての画分（図２７Ｄに示す）で取得した画像の粒子分析により、マーカーＰＦ４、ＶＥＧＦ、及びＭＲＰ４が画分Ｂ、Ｃ、及びＤに濃縮されているというウエスタンブロットの観察結果が確認された。また、図２７Ｆに示すように、画像の緑色チャネルの粒子分析（これは、様々な化合物（示す通り）を担持させた血小板から収集した全ての画分で取得したＦａｍ－ＰＡＬ１及びＦａｍ－ＰＡＬ１－ルシタニブコンジュゲート、またはＦａｍ－ＰＡＬ２ Ｆａｍ－ＰＡＬ２ルシタニブコンジュゲートの局在化を実証する）により、Ｆａｍ－ＰＡＬ１及びＦａｍ－ＰＡＬ２ならびにそれらのコンジュゲートもまた画分Ｂ、Ｃ、及びＤ中で豊富であることを実証した。最後に、Ｆａｍ－ＰＡＬ１またはＦａｍ－ＰＬＡ２及びそれらのコンジュゲートの細胞内局在性を定量化するために、ＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒを使用して、画分Ｂ、Ｃ、及びＤの画像全てに対してピアソン相関分析（ＰＣＡ）を実施した。図２７Ｇを参照されたい。簡潔に述べると、比較する対ごとに２つのチャネルからの画像を統合し、個々の顆粒をセグメント化した。次に、選択した関心領域（ＲＯＩ）に対してＰＣＡ分析を行った。Ｒを使用して箱ひげ図をグラフ化した。各群には５，０００超のＲＯＩが含まれる。既に観察されたように、画分Ｃから最も多くの局在化情報が得られる。ファセット化箱ひげ図は、Ｆａｍ－ＰＡＬ１及びＦａｍ－ＰＡＬ２ならびにそれらのコンジュゲートが主にＰＦ４に富むアルファ顆粒のサブセットを標的とすることを示唆している。Ｆａｍ－ＰＡＬ２及びとそのコンジュゲートは、ＶＥＧＦまたはＭＲＰ４に富む他の顆粒も標的とする。注目すべきことに、Ｆａｍ－ＰＡＬ２はＦａｍの励起及び発光をシフトさせた可能性がある。したがって、緑色チャネルから赤色チャネルへのにじみ（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）の可能性を回避するために、抗ＰＦ４なしの条件（白色ボックス）を陰性対照として用いた。
これらの結果はＰＡＬ１及びＰＡＬ２を同時に使用して複数の試薬を血小板に担持させることに対する可能性を示している。
実施例１２：２つの化合物を担持した単離血小板（各化合物は異なるα顆粒タイプに担持されている）を製造するための例示的な方法
本実施例では、単離血小板に本開示の２つの化合物を担持させる（各化合物は異なるα顆粒タイプに担持されている）。
単離血小板を得る。血小板は、合成血小板、同種血小板、自家血小板、または修飾された異種血小板であり得る。実施形態では、血小板は、多血小板血漿から得られる。
血小板を、本開示の第１の化合物とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させる。第１の化合物は、第１の薬剤及び第１のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ１（配列番号１）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ１は、少なくとも、第１のタイプのα顆粒、例えば、Ｐ－セレクチンタイプのα顆粒上のコンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合する。
血小板を、本開示の第２の化合物ともｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させる。第２の化合物は、第２の薬剤及び第２のポリペプチドを含む。第２のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ２（配列番号２）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ２は、少なくとも、第２のタイプのα顆粒、例えば、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）タイプのα顆粒上のヘパリン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
実施形態では、第１の化合物及び第２の化合物は、逐次的に担持される。代替の実施形態では、化合物及び第２の化合物は、同時に担持される。
接触を、適切な温度、培地組成（塩濃度、ｐＨ、栄養素を含む）で、及び化合物が血小板のそれぞれのα顆粒タイプによって内在化されるまでの期間で継続させる。このようにして担持血小板を得る。多くの場合、温度は血小板を得るかまたは投与する体温、例えば３７℃である。同様に、組成物のｐＨは、血小板を得るかまたは投与する血液／血漿のｐＨ付近、例えば約７．４のｐＨである。
本実施例では、本開示に記載されているかまたは当該技術分野で公知の任意の薬剤を使用することができる。薬剤は、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子であり得る。
いくつかの実施形態では、第１の薬剤及び第２の薬剤は、独立して、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）、ＦＮ１阻害剤（例えば、オクリプラスミン）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、ＦＧＦＲ２アンタゴニスト（例えば、サリドマイド）、トロンビン及びその類似体、ＣＳＦ３Ｒアゴニスト（例えば、フィルグラスチム）、ＰＳＭＢ５阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、フマギリン、またはＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）のうちの１つであり得る。
第１の薬剤及び第２の薬剤は、同じであってもまたは異なっていてもよい。
例として、第１の薬剤及び第２の薬剤は、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）及びＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）、またはＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、またはフマギリン及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）であり得る。
好ましくは、単離血小板は、１～１０００コピーの第１の化合物を含み、かつ１～１０００コピーの第２の化合物を含む。
このように製造した担持血小板を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を生成することができる。
いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドと第３の薬剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、及びＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ））とを含む第３の化合物を組み合わせることができる。
さらに、医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、複数の血小板（各々が異なる第１及び第２の化合物を含む）を組み合わせることにより生成することができる。上記の任意の第１の薬剤及び／または第２の薬剤ならびにそれらの任意の組み合わせを使用することができる。
実施例１３：２つ以上の化合物を担持した単離血小板（各化合物は異なるα顆粒タイプに担持されている）を対象に投与することにより疾患または障害を治療するための例示的な方法
本実施例では、本開示の化合物を２つ以上担持した単離血小板（各化合物は異なるα顆粒タイプに担持されている）を、必要とする対象に（例えば、疾患または障害を有する者に）投与する。
ここでは、本開示の化合物を２つ以上担持した血小板（各化合物は異なるα顆粒タイプに担持されている）をそれぞれ含む治療有効量の１つ以上の医薬組成物を、必要とする対象に（例えば、注入または注射により）投与する。
組成物中の血小板は、少なくとも本開示の第１の化合物及び第２の化合物を含む。第１の化合物は、第１の薬剤及び第１のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ１（配列番号１）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ１は、少なくとも、第１のタイプのα顆粒、例えば、Ｐ－セレクチンタイプのα顆粒上のコンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合する。第２の化合物は、第２の薬剤及び第２のポリペプチドを含む。第２のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ２（配列番号２）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ２は、少なくとも、第２のタイプのα顆粒、例えば、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）タイプのα顆粒上のヘパリン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
いくつかの実施形態では、組成物中の血小板は、第３の化合物を含む。第３の化合物は、第３の薬剤及び第３のポリペプチドを含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含む。第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
本実施例では、本開示に記載されているかまたは当該技術分野で公知の任意の薬剤を使用することができる。第１、第２、または第３の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子であり得る。
いくつかの実施形態では、２つの化合物は、独立して、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）、ＦＮ１阻害剤（例えば、オクリプラスミン）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、ＦＧＦＲ２アンタゴニスト（例えば、サリドマイド）、トロンビン及びその類似体、ＣＳＦ３Ｒアゴニスト（例えば、フィルグラスチム）、ＰＳＭＢ５阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、フマギリン、ならびにＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）から選択される薬剤を含み得る。実施形態では、第３の化合物を用いる場合、第３の薬剤は再びこのリストから選択され得る。
実施形態では、少なくとも３つの化合物を使用する場合、第１、第２、及び第３の薬剤は、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、及びＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）であり得、これは非小細胞肺癌の治療に使用することができる。
血小板は、本開示の組み合わせ化合物を担持することができる。例として、第１の薬剤及び第２の薬剤は、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）及びＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）であり得、これは膵癌の治療に使用することができる。また、第１の薬剤及び第２の薬剤は、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）であり得、これは肺癌の治療に使用することができる。第１の薬剤及び第２の薬剤は、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）及びフマギリンであり得、これは、膵癌、肺癌、または結腸癌の治療に使用することができる。
ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、及び／またはメタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を含む第２の医薬組成物を、対象にさらに投与することができる。第２の医薬組成物は、血小板からの化合物の放出を促進する。第２の医薬組成物は、医薬組成物が例えば、第２の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与された後、投与することができる。
代わりに、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、及び／またはメタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上をそれぞれ含む第２の医薬組成物及び／または第３の組成物を、対象に投与することができる。第２の医薬組成物は、第１のタイプのα顆粒からの第１の化合物の放出を促進し、第３の医薬組成物は、第２のタイプのα顆粒からの第２の化合物の放出を促進する。第２及び第３の医薬組成物は、医薬組成物が例えば、第２の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与された後、投与することができる。第２の組成物は、第３の医薬組成物が投与された後に投与することができ、逆もまた同様である。
担持血小板を含む医薬組成物と併せて、追加の治療剤を対象に投与することができる。一例として、対象に、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）が担持された血小板を投与することができ、さらにレムデシビルを投与することができる。これは、ＣＯＶＩＤに関連するであろう急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療に使用することができる。対象に、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）及びフマギリンの一方または両方が担持された血小板を投与することができ、また低用量の化学療法剤も投与することができる。これは、膵癌、肺癌、または結腸癌の治療に使用することができる。対象に、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）の一方または両方が担持された血小板を投与することができ、また低用量の化学療法剤も投与することができる。これは、肺癌の治療に使用することができる。対象に、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、及びＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）のうちの１つもしくは両方、または３つ全てが担持された血小板を投与することができ、また低用量の化学療法剤も投与することができる。これは、非小細胞肺癌の治療に使用することができる。
必要とする対象は、がんまたは損傷から選択される疾患または障害を有し得る。炎症は、疾患または障害の症状であり得る。疾患または障害は、埋植物、移植片、ステント、または補装具の副作用であり得る。疾患または障害は、欠陥遺伝子に起因し得る。
実施例１４：２つ以上の本開示の化合物を対象に投与することにより疾患または障害を治療するための例示的な方法
本実施例では、２つ以上の本開示の化合物を、必要とする対象に（例えば、疾患または障害を有する者に）投与する。
ここでは、本開示の化合物を２つ以上含む治療有効量の医薬組成物を、必要とする対象に（例えば、注入または注射により）投与する。この方法では、２つ以上の化合物をｉｎ ｖｉｖｏで血小板に担持させる。
第１の化合物は、第１の薬剤及び第１のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ１（配列番号１）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ１は、少なくとも、第１のタイプのα顆粒、例えば、Ｐ－セレクチンタイプのα顆粒上のコンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合する。第２の化合物は、第２の薬剤及び第２のポリペプチドを含む。第２のポリペプチドは、血小板のα顆粒中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができるＰＡＬ２（配列番号２）ＧＡＧ結合ペプチドを含む。ＰＡＬ２は、少なくとも、第２のタイプのα顆粒、例えば、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）タイプのα顆粒上のヘパリン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する。
いくつかの実施形態では、第３の化合物を血小板に担持させる。第３の化合物は、第３の薬剤及び第３のポリペプチドを含み、第３のポリペプチドは、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含む。第３のＧＡＧ結合ペプチドは、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する。
本実施例では、本開示に記載されているかまたは当該技術分野で公知の任意の薬剤を使用することができる。第１、第２、または第３の薬剤は、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子であり得る。
いくつかの実施形態では、２つの化合物は、独立して、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ）、ＦＮ１阻害剤（例えば、オクリプラスミン）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、ＦＧＦＲ２アンタゴニスト（例えば、サリドマイド）、トロンビン及びその類似体、ＣＳＦ３Ｒアゴニスト（例えば、フィルグラスチム）、ＰＳＭＢ５阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、フマギリン、またはＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）から選択される薬剤を含み得る。
３つ以上の化合物を対象に投与することができ、追加の化合物は、すぐ上のリストまたは当該技術分野で公知の任意の薬剤から選択される薬剤、例えば、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を有し得る。
実施形態では、少なくとも３つの化合物を使用する場合、第１、第２、及び第３の薬剤は、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）及びマルチキナーゼ阻害剤（例えば、レゴラフェニブ）、及びＡＬＫ／ＲＯＳ１／ＮＴＲＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ）であり得、これは非小細胞肺癌の治療に使用することができる。
ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、及び／またはメタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を含む第２の医薬組成物を、対象にさらに投与することができる。第２の医薬組成物は、血小板からの化合物の放出を促進する。第２の医薬組成物は、医薬組成物が例えば、第２の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与された後、投与することができる。
代わりに、ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、及び／またはメタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上をそれぞれ含む第２の医薬組成物及び／または第３の組成物を、対象に投与することができる。第２の医薬組成物は、第１のタイプのα顆粒からの第１の化合物の放出を促進し、第３の医薬組成物は、第２のタイプのα顆粒からの第２の化合物の放出を促進する。第２及び第３の医薬組成物は、医薬組成物が例えば、第２の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与された後、投与することができる。第２の組成物は、第３の医薬組成物が投与された後に投与することができ、逆もまた同様である。
本開示の化合物を含む医薬組成物と併せて、追加の治療剤を対象に投与することができる。追加の治療剤は、レムデシビル及び／または低用量の化学療法であり得る。
必要とする対象は、がんまたは損傷から選択される疾患または障害を有し得る。炎症は、疾患または障害の症状であり得る。疾患または障害は、埋植物、移植片、ステント、または補装具の副作用であり得る。疾患または障害は、欠陥遺伝子に起因し得る。

Claims (114)

  1. 第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、前記第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第１の化合物と、
    第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、前記第２のポリペプチドが、前記血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第２の化合物と、
    を含む、組成物。
  2. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）には好ましくは結合しない、請求項２に記載の組成物。
  4. 前記第１のアルファ顆粒タイプが、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、前記第２のアルファ顆粒タイプが、フォン・ヴィレブランド因子関連顆粒である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
  5. 前記第１のアルファ顆粒タイプの内容物が、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、前記第２のアルファ顆粒タイプの内容物が、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物が、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン誘導体（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
  6. 前記第１のアルファ顆粒タイプの前記内容物が、前記第２のアルファ顆粒タイプの前記内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
  7. 前記第１のアルファ顆粒タイプの前記内容物が、前記第２のアルファ顆粒タイプの前記内容物が放出される前に放出される、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。
  8. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
  9. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
  10. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
  11. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
  12. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。
  14. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
  15. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。
  16. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組成物。
  17. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組成物。
  18. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
  19. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、１１個のアミノ酸を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の組成物。
  20. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、１１個のアミノ酸からなる、請求項１～１９のいずれか１項に記載の組成物。
  21. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組成物。
  22. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組成物。
  23. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の組成物。
  24. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項２２または請求項２３に記載の組成物。
  25. 前記第１のポリペプチドが、前記第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、前記第２のポリペプチドが、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる、請求項１～２４のいずれか１項に記載の組成物。
  26. 前記第１のポリペプチドのＮ末端が、前記第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２のポリペプチドのＮ末端が、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている、請求項１～２５のいずれか１項に記載の組成物。
  27. 前記第１のポリペプチドのＣ末端が、前記第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２のポリペプチドのＣ末端が、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている、請求項１～２６のいずれか１項に記載の組成物。
  28. 前記第１の薬剤が、第１のリンカーを介して前記第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または前記第２の薬剤が、第２のリンカーを介して前記第２のポリペプチドに間接的に連結されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の組成物。
  29. 前記第１のリンカー及び／または前記第２が、１つ以上の原子をそれぞれ含む、請求項２８に記載の組成物。
  30. 前記第１のリンカー及び／または前記第２が、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
  31. 前記第１のリンカー及び／または前記第２のリンカーが、アミノ酸鎖をそれぞれ含む、請求項２８～３０のいずれか１項に記載の組成物。
  32. 前記第１の薬剤が前記第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または前記第２の薬剤が前記第２のポリペプチドに直接連結されている、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組成物。
  33. マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、前記第１の薬剤が前記第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２の薬剤が前記第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組成物。
  34. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の組成物。
  35. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、抗体または蛍光部分を含む、請求項３４に記載の組成物。
  36. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または
    前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい、請求項１～３５のいずれか１項に記載の組成物。
  37. 前記第１の化合物及び／または前記第２の化合物が、蛍光部分をさらに含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の組成物。
  38. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する、請求項１～３７のいずれか１項に記載の組成物。
  39. 第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物をさらに含み、前記第３のポリペプチドが、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、前記第３のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する、請求項１～３８のいずれか１項に記載の組成物。
  40. 第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、前記第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第１の化合物の少なくとも１つのコピーと、
    第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、前記第２のポリペプチドが、前記血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第２の化合物の少なくとも１つのコピーと、
    を含む、単離血小板。
  41. 前記血小板が、合成血小板、同種血小板、自家血小板、または修飾された異種血小板である、請求項４０に記載の単離血小板。
  42. 前記血小板が、自家血小板である、請求項４１に記載の単離血小板。
  43. 前記血小板が、同種血小板である、請求項４１に記載の単離血小板。
  44. 前記血小板が、多血小板血漿から得られる、請求項４２または請求項４３に記載の単離血小板。
  45. 前記血小板が、１～１０００コピーの前記第１の化合物及び１～１０００コピーの前記第２の化合物を含む、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の単離血小板。
  46. 前記１～１０００コピーの前記第１の化合物が、血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持され、前記１～１０００コピーの前記第２の化合物が、前記血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持される、請求項４５に記載の単離血小板。
  47. 前記第１の化合物の少なくとも１つのコピーが、血小板の第２のアルファ顆粒タイプに担持され、前記第２の化合物の少なくとも１つのコピーが、前記血小板の第１のアルファ顆粒タイプに担持される、請求項４６に記載の単離血小板。
  48. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）に優先的に結合し、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、ヘパラン硫酸（ＨＳ）に優先的に結合する、請求項４０～４７のいずれか１項に記載の単離血小板。
  49. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）に優先的に結合し、ヘパラン硫酸（ＨＳ）には好ましくは結合しない、請求項４０～４８のいずれか１項に記載の単離血小板。
  50. 前記第１のアルファ顆粒タイプが、Ｐ－セレクチン関連顆粒であり、前記第２のアルファ顆粒タイプが、フォン・ヴィレブランド因子関連顆粒である、請求項４０～４９のいずれか１項に記載の単離血小板。
  51. 前記第１のアルファ顆粒タイプの内容物が、高親和性トロンビン受容体ＰＡＲ１を介して放出され、前記第２のアルファ顆粒タイプの内容物が、低親和性トロンビン受容体ＰＡＲ４を介して放出され、任意選択で、アルファ顆粒の内容物が、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ペルオキシダーゼ、ホスホヒドロラーゼ、プラスミン、またはプラスミン（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ））との接触に応答して放出され得る、請求項４０～５０のいずれか１項に記載の単離血小板。
  52. 前記第１のアルファ顆粒タイプの前記内容物が、前記第２のアルファ顆粒タイプの前記内容物の放出をもたらすのに必要なトロンビン濃度よりも低いトロンビン濃度で放出される、請求項４０～５１のいずれか１項に記載の単離血小板。
  53. 前記第１のアルファ顆粒タイプの前記内容物が、前記第２のアルファ顆粒タイプの前記内容物が放出される前に放出される、請求項４０～５２のいずれか１項に記載の単離血小板。
  54. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、各々約８アミノ酸長～約１４アミノ酸長である、請求項４０～５３のいずれか１項に記載の単離血小板。
  55. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む、請求項５４に記載の単離血小板。
  56. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つの荷電アミノ酸を含む、請求項５５に記載の単離血小板。
  57. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項５４～５６のいずれか１項に記載の単離血小板。
  58. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドの両方が、少なくとも１つのプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項５７に記載の単離血小板。
  59. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５４～５８のいずれか１項に記載の単離血小板。
  60. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５４～５９のいずれか１項に記載の単離血小板。
  61. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のうちの１つと少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５４～６０のいずれか１項に記載の単離血小板。
  62. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、または９位に荷電アミノ酸を含む、請求項５４～６１のいずれか１項に記載の単離血小板。
  63. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、配列番号１～配列番号１３のいずれか１つに関して、１位、４位、７位、及び／または９位にプロリン、アルギニン、及び／またはイソロイシンを含む、請求項５４～６２のいずれか１項に記載の単離血小板。
  64. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、少なくとも１０個のアミノ酸を含む、請求項５４～６３のいずれか１項に記載の単離血小板。
  65. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、１１個のアミノ酸を含む、請求項５４～６４のいずれか１項に記載の単離血小板。
  66. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、独立して、１１個のアミノ酸からなる、請求項５４～６５のいずれか１項に記載の単離血小板。
  67. 前記ＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１～配列番号１３のうちの１つのアミノ酸配列からなる、請求項５４～６６のいずれか１項に記載の単離血小板。
  68. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５４～６６のいずれか１項に記載の単離血小板。
  69. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の単離血小板。
  70. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列からなり、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項６８または請求項６９に記載の単離血小板。
  71. 前記第１のポリペプチドが、前記第１のＧＡＧ結合ペプチドからなり、前記第２のポリペプチドが、前記第２のＧＡＧ結合ペプチドからなる、請求項４０～７０のいずれか１項に記載の単離血小板。
  72. 前記第１のポリペプチドのＮ末端が、前記第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２のポリペプチドのＮ末端が、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている、請求項４０～７１のいずれか１項に記載の単離血小板。
  73. 前記第１のポリペプチドのＣ末端が、前記第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２のポリペプチドのＣ末端が、第２の第１の薬剤に直接もしくは間接的に連結されている、請求項４０～７２のいずれか１項に記載の単離血小板。
  74. 前記第１の薬剤が、第１のリンカーを介して前記第１のポリペプチドに間接的に連結されており、及び／または前記第２の薬剤が、第２のリンカーを介して前記第２のポリペプチドに間接的に連結されている、請求項４０～７３のいずれか１項に記載の単離血小板。
  75. 前記第１のリンカー及び／または前記第２が、１つ以上の原子をそれぞれ含む、請求項７４に記載の単離血小板。
  76. 前記第１のリンカー及び／または前記第２が、繰り返し単位のポリマーをそれぞれ含む、請求項７４または７５に記載の単離血小板。
  77. 前記第１のリンカー及び／または前記第２が、アミノ酸鎖をそれぞれ含む、請求項７４～７６のいずれか１項に記載の単離血小板。
  78. 前記第１の薬剤が前記第１のポリペプチドに直接連結されており、及び／または前記第２の薬剤が前記第２のポリペプチドに直接連結されている、請求項４０～７７のいずれか１項に記載の単離血小板。
  79. マレイミド反応、スクシンイミジルエステル反応、酵素反応、またはタンパク質の構造もしくは活性に影響を及ぼさない別のコンジュゲーション系を使用して、前記第１の薬剤が前記第１のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されており、及び／または前記第２の薬剤が前記第２のポリペプチドに直接もしくは間接的に連結されている、請求項４０～７８のいずれか１項に記載の単離血小板。
  80. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、独立して、抗体、化学療法剤、細胞毒性化合物、小分子、蛍光部分、放射性元素、免疫チェックポイント阻害剤、増殖因子、増殖阻害剤、プロテアーゼ／プロテイナーゼ、凝固因子、脂質もしくはリン脂質、細胞外マトリックスタンパク質、ホルモン、酵素、ケモカイン／走化性因子、ニューロトロフィン、チロシンキナーゼ（アゴニストもしくは阻害剤）、または細胞増殖、血管新生、炎症、免疫、もしくは血小板により媒介されるか、もしくは血小板に関連する別の生理的プロセスを阻害する因子を含む、請求項４０～７９のいずれか１項に記載の単離血小板。
  81. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、抗体を含む、及び／または蛍光部分を含む、請求項８０に記載の単離血小板。
  82. 前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、哺乳動物細胞に対して有害であり、及び／または対象に対して毒性であり、及び／または
    前記第１の薬剤及び／または前記第２の薬剤が、対象の血流に直接投与された場合、分解を受けやすい、請求項４０～８１のいずれか１項に記載の単離血小板。
  83. 前記第１の化合物及び／または前記第２の化合物が、蛍光部分をさらに含む、請求項４０～８２のいずれか１項に記載の単離血小板。
  84. 前記第１のＧＡＧ結合ペプチド及び／または前記第２のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａにも優先的に結合する、請求項４０～８３のいずれか１項に記載の単離血小板であって、
    任意選択で、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーをさらに含み、前記第３のポリペプチドが、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、前記第３のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する、前記単離血小板。
  85. 前記単離血小板が、担持プロセスによって活性化されるのではなく、完全に機能する休止血小板のままである、請求項４０～８４のいずれか１項に記載の単離血小板。
  86. 請求項４０～８５のいずれか１項に記載の単離血小板と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
  87. 第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、前記第３のポリペプチドが、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、前記第３のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する、請求項８６に記載の医薬組成物。
  88. 前記第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含むか、または第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む、請求項８６に記載の医薬組成物。
  89. 前記第１の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第２の単離血小板をさらに含み、かつ第２の化合物の少なくとも１つのコピーを含む第３の単離血小板をさらに含む、請求項８８に記載の医薬組成物。
  90. 疾患または障害を治療するための、請求項８６～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
  91. 疾患または障害を治療するための薬物の製造における、請求項４０～８５のいずれか１項に記載の単離血小板または請求項８６～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
  92. 前記疾患または障害が、がんである、請求項９０または請求項９１に記載の使用。
  93. 疾患または障害の治療を必要とする対象において前記疾患または前記障害を治療するための方法であって、治療有効量の請求項８６～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
  94. 疾患または障害の治療を必要とする対象において前記疾患または前記障害を治療するための方法であって、治療有効量の請求項１～３９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
  95. 前記第１のアルファ顆粒タイプの前記内容物が、前記第２のアルファ顆粒タイプの前記内容物が放出される前に標的部位で放出される、請求項９３または請求項９４に記載の方法。
  96. ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項９３～９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 前記第２の医薬組成物が、第１のアルファ顆粒タイプからの第１の化合物の放出を促進し、前記第３の医薬組成物が、第２のアルファ顆粒タイプからの第２の化合物の放出を促進する、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記第２の医薬組成物及び／または前記第３の医薬組成物が、前記医薬組成物が投与された後に投与される、請求項９６または請求項９７に記載の方法。
  99. 前記医薬組成物が、前記第２の医薬組成物及び／または前記第３の医薬組成物が投与される前に少なくとも２回投与される、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記疾患または障害が、がんである、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
  101. 前記疾患または障害が、炎症である、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記疾患または障害が、埋植物、移植片、ステント、または補装具の副作用である、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記疾患もしくは障害が、欠陥遺伝子に起因するか、または前記疾患もしくは障害が、損傷である、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
  104. 前記組成物が、完全に機能する休止血小板のままである単離血小板を含む、請求項９３～１００のいずれか１項に記載の方法。
  105. 担持血小板を製造するための方法であって、
    血小板を得るステップと、
    前記血小板を請求項１～３９のいずれか１項に記載の組成物とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと、
    前記血小板と前記組成物との間の接触を、前記第１の化合物が前記血小板の第１のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで、かつ前記第２の化合物が前記血小板の第２のアルファ顆粒タイプにより内在化されるまで進行させて、これにより担持血小板を生成するステップと、
    を含む、前記方法。
  106. 担持血小板を製造するための方法であって、
    血小板を得るステップと、
    前記血小板を、第１の薬剤と第１のポリペプチドとを含む第１の化合物であって、前記第１のポリペプチドが、血小板の第１のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第１のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第１の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと、
    前記血小板を、第２の薬剤と第２のポリペプチドとを含む第２の化合物であって、前記第２のポリペプチドが、前記血小板の第２のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第２のＧＡＧ結合ペプチドを含む、前記第２の化合物と、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させるステップと、
    を含む、前記方法。
  107. 前記血小板を前記第１の化合物と接触させることと、前記血小板を前記第２の化合物と接触させることが、同時的である、請求項１０６に記載の方法。
  108. 前記血小板を前記第１の化合物と接触させることと、前記血小板を前記第２の化合物と接触させることが、逐次的である、請求項１０６に記載の方法。
  109. 前記血小板を、第３の薬剤と第３のポリペプチドとを含む第３の化合物とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させることをさらに含み、前記第３のポリペプチドが、血小板の第３のアルファ顆粒タイプ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と結合することができる第３のＧＡＧ結合ペプチドを含み、前記第３のＧＡＧ結合ペプチドが、セルグリシン、パールカン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、及び／またはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに優先的に結合する、請求項１０６～１０８のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記血小板を前記第１の化合物及びまたは前記第２の化合物と接触させることが、前記血小板を活性化させず、代わりに前記血小板が完全に機能する休止血小板のままである、請求項１０６～１０９のいずれか１項に記載の方法。
  111. 請求項４０～８５のいずれか１項に記載の単離血小板と、使用説明書と、を含む、疾患または障害を治療するためのキット。
  112. 請求項８６～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物と、使用説明書と、を含む、疾患または障害を治療するためのキット。
  113. ヘパラナーゼ、トロンビン及びその断片ペプチド、プロテアーゼ活性化受容体１（ＰＡＲ１）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プロテアーゼ活性化受容体４（ＰＡＲ４）アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド、プラスミン及びその断片、メタロプロテイナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／またはホスホヒドロラーゼのうちの１つ以上を独立して含む、第２の医薬組成物及び／または第３の医薬組成物をさらに含む、請求項１１１または請求項１１２に記載のキット。
  114. 請求項１～３９のいずれか１項に記載の組成物と、使用説明書と、を含む、担持血小板を製造するためのキット。
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