JP2024503617A - 抗ｇｐｒｃ５ｄモノクローナル抗体及びその用途 - Google Patents

Abstract

ヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質に対する結合特異性を有する抗体又はその断片を提供する。抗体又はその断片は、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する癌細胞を標的とすることができるので、癌、特に血液癌を処置するのに用いることができる。

Description

Ｇタンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）は、Ｇタンパク質結合受容体ファミリーのメンバーである。ＧＰＲＣ５Ｄは、膜貫通タンパク質である。ＧＰＲＣ５Ｄの過剰発現が、多発性骨髄腫患者において観察された。特に、その高い発現は、疾患及び処置の悪い転帰と有意な相関があった。

悪性細胞上でのその高い特異的発現を考えると、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体が、例えば二重特異性Ｔ細胞リダイレクト抗体を介して、又は抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）により、悪性腫瘍を処置するのに有用であり得ることが提唱されている。

ヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質に対する親和性が高い抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体（そのヒト化誘導体を含む）が、本明細書中で発見される。当該抗体又はその断片は、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する癌細胞を標的とすることができるので、癌、特に血液癌を処置するのに用いることができる。

本開示の一実施形態は、ヒトＧタンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体又はその抗原結合断片を提供し、抗体又はその断片は、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ：（ａ）配列番号２９～３４のアミノ酸配列；（ｂ）配列番号４２～４７のアミノ酸配列；（ｃ）配列番号５４～５９のアミノ酸配列；又は（ｄ）配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号２９～３４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号７及び３５～３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８及び３８～４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号４２～４７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号９及び４８～５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０及び５１～５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号５４～５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号６１～６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１６及び６５～６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号１及び７４～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２及び８０～８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、抗体又はその断片は、ヒト化されている。一部の実施形態において、抗体又はその断片は、ＡＤＣＣコンピテントである。

また、提供される抗体又はその断片は、一部の実施形態において、抗体又はその断片にコンジュゲートした細胞毒性薬物をさらに含む。

また、提供されるのは、本開示の抗原結合断片、及び第２の標的タンパク質に対する特異性を有する第２の抗原結合断片を含む二重特異性抗体である。一部の実施形態において、第２の標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ６４、及び４－１ＢＢからなる群から選択される。一部の実施形態において、第２の標的タンパク質は、ＣＤ３である。一部の実施形態において、第２の標的タンパク質は、４－１ＢＢである。

また、提供されるのは、癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、患者に、本開示の抗体又はその断片を投与することを含む方法である。また、提供されるのは、癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はマクロファージを、本開示の抗体又はその断片によりインビトロ処理することと、（ｂ）処理した細胞を患者に投与することとを含む方法である。

一部の実施形態において、癌は、血液癌、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞癌（例えば多発性骨髄腫）である。

ハイブリドーマ上清から収集したマウス抗体の、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄへの結合を示す。 キメラ抗体の、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄへの結合を示す。 抗体結合誘導エンドサイトーシスを示す。 抗体がＡＤＣＣコンピテントであったことを示す。 ６Ｇ１０Ｄ９に由来するヒト化抗体の親和性試験結果を示す。 ５８Ｆ９Ｇ１０に由来するヒト化抗体の親和性試験結果を示す。 ３４Ｄ３Ｈ１に由来するヒト化抗体の親和性試験結果を示す。 ３７Ｂ９Ｃ４に由来するヒト化抗体の親和性試験結果を示す。 選択したヒト化抗体の、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄへの結合を確認する。 選択したヒト化抗体の、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄへの結合を確認する。 試験したヒト化抗体のＡＤＣＣ有効性を示す。 試験したヒト化抗体のインターナリゼーション誘導活性を示す。 試験した抗体－薬物コンジュゲートの細胞死滅活性を示す。 試験した抗体の腫瘍阻害活性を示す。

定義
用語「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」実体は、その実体の１つ以上を指すことが認められるべきであり、例えば、「抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つ以上の抗体を表すことが理解される。したがって、用語「１つの（ａ）」（又は「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書中で互換的に用いることができる。

本明細書中で用いられる用語「ポリペプチド」は、単数形「ポリペプチド」及び複数形「ポリペプチド」を包含することが意図され、アミド結合（ペプチド結合としても知られている）によって線状に連結されている単量体（アミノ酸）で構成される分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つ以上のアミノ酸のあらゆる鎖を指し、特定の長さの生成物を指すものではない。ゆえに、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は２つ以上のアミノ酸の１つ若しくは複数の鎖を指すのに用いられる他のあらゆる用語は、「ポリペプチド」の定義に含まれ、用語「ポリペプチド」は、これらの用語のいずれに対しても、代わりに、又は互換的に用いることができる。また、用語「ポリペプチド」は、限定はされないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、知られている保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は天然に存在しないアミノ酸による修飾が挙げられるポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことが意図される。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来してもよいし、組換え技術によって生成されてもよいが、必ずしも指定の核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは、化学合成によるものが挙げられる、あらゆる方法で生成され得る。

「相同性」又は「同一性」又は「類似性」は、２つのペプチド間、又は２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的でアラインされ得る各配列内の位置を比較することによって決定することができる。比較される配列内の位置が、同じ塩基又はアミノ酸によって占められている場合、分子は、当該位置にて相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有されるマッチ位置数又は相同位置数の関数である。「関連のない」配列又は「非相同」配列は、本開示の配列の１つと、４０％未満の同一性、好ましくは２５％未満の同一性を共有する。

ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド領域（又はポリペプチド若しくはポリペプチド領域）は、もう一方の配列に対する特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％）の「配列同一性」（アラインされた場合に、塩基（又はアミノ酸）のパーセンテージが、２つの配列を比較した際に同じであることを意味する）を有する。

用語「等しい核酸又はポリヌクレオチド」は、核酸又はその相補体のヌクレオチド配列との、特定の程度の相同性又は配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸の相同体は、その相補体との特定の程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を含むことが意図される。一態様において、核酸の相同体は、核酸又はその相補体にハイブリダイズすることができる。同様に、「等しいポリペプチド」は、参照ポリペプチドのアミノ酸配列との特定の程度の相同性又は配列同一性を有するポリペプチドを指す。一部の態様において、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％である。一部の態様において、等価のポリペプチド又はポリヌクレオチドは、参照ポリペプチド又はポリヌクレオチドと比較して、１、２、３、４、又は５つの追加、欠失、置換、及びそれらの組合せを有する。一部の態様において、等価の配列は、参照配列の活性（例えばエピトープ結合）又は構造（例えば塩架橋）を保持する。

本明細書中で用いられる「抗体」又は「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識してこれに結合するポリペプチド又はポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体、及びそのあらゆる抗原結合断片又は単鎖であり得る。ゆえに、用語「抗体」は、抗原に結合する生物活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含むあらゆるタンパク質又はペプチド含有分子を含む。そのようなものの例として、以下に限定されないが、重鎖若しくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はそのリガンド結合部分、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、又はそれらのあらゆる部分、或いは結合タンパク質の少なくとも１つの部分が挙げられる。

本明細書中で用いられる用語「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ等の抗体の部分である。構造に拘らず、抗体断片は、インタクト抗体によって認識される同じ抗原と結合する。用語「抗体断片」は、アプタマー、ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、及びダイアボディを含む。また、用語「抗体断片」は、特異性抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用するあらゆる合成タンパク質又は遺伝子操作されたタンパク質を含む。

「単鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。一部の態様において、当該領域は、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドと連結されている。リンカーは、フレキシビリティについてグリシンが、そして可溶性についてセリン又はトレオニンが豊富であり得、Ｖ_ＨのＮ末端を、Ｖ_ＬのＣ末端と連結することができ、逆もまた同じである。このキメラ分子は、定常領域が除去され、且つリンカーペプチドが導入されているにも拘わらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。ＳｃＦｖ分子は、当該技術において知られており、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号明細書に記載されている。

用語抗体は、生化学的に区別され得る種々の広範なクラスのポリペプチドを包含する。当業者であれば、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）と分類され、それらの中でいくつかのサブクラスがある（例えば、γ１～γ４）ことを理解するであろう。これは、この鎖の、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、又はＩｇＥとしての抗体の「クラス」を決定する性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５等は、十分に特徴付けられており、機能上の特殊化を付与することが知られている。これらのクラス及びアイソタイプの各々の修飾バージョンが、当業者にとって、本開示に鑑みて容易に識別可能であり、したがって本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスが、明らかに本開示の範囲内であり、以下の考察は、通常、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関する。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量およそ２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、分子量５３，０００～７０，０００の２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。当該４本の鎖は、典型的に、ジスルフィド結合によって「Ｙ字型」の配置で結合されており、ここでは軽鎖が、「Ｙ字型」の開口部から始まって可変領域を通じて続く重鎖を囲っている。

本開示の抗体、又はその抗原結合ポリペプチド、変異体、若しくは誘導体として、以下に限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化、又はキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫ又はＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって生成される断片、並びに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書中に開示されるＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）が挙げられる。本開示の免疫グロブリン又は抗体分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。

軽鎖は、カッパ又はラムダ（Κ、λ）のいずれかと分類される。各重鎖クラスにはカッパ軽鎖又はラムダ軽鎖のいずれかが結合している。一般に、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、又は遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成される場合、軽鎖と重鎖とは互いに共有結合しており、２本の重鎖の「テール」部分は、共有結合性のジスルフィド結合又は非共有結合によって互いに結合している。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置の分岐末端におけるＮ末端から、各鎖の底部におけるＣ末端まで延びている。

軽鎖及び重鎖は双方とも、構造的相同性及び機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」及び「可変」は、機能に関して用いられる。この点に関して、軽鎖部分の可変（ＶＫ）ドメイン及び重鎖部分の可変（ＶＨ）ドメインの双方が、抗原の認識及び特異性を決定することが認識されるであろう。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＫ）及び重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）は、分泌、経胎盤移動度、Ｆｃ受容体結合、補体結合等の重要な生物学的特性を付与する。慣例により、定常領域ドメインの番号付けは、抗原結合部位又は抗体のアミノ末端からより離れるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域である；実際には、ＣＨ３ドメイン及びＣＫドメインは、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を含む。

上記に指摘した通り、抗体は、可変領域によって抗原上のエピトープを選択的に認識してこれに特異的に結合することが可能となる。すなわち、抗体のＶＫドメイン及びＶＨドメイン、又は相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わさって、三次元抗原結合部位を定義する可変領域が形成される。この４つ一組の抗体構造は、Ｙ字型の各アームの先に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ及びＶＫ鎖の各々の上の３つのＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３）によって定義される。場合によっては、例えば、ラクダ科動物種に由来するか、又はラクダ科動物免疫グロブリンをベースとして操作された特定の免疫グロブリン分子では、完全な免疫グロブリン分子が、軽鎖なしで重鎖のみからなり得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）参照。

天然に存在する抗体では、各抗原結合ドメイン内に存在する６つの「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境中でその三次元配置をとることに伴い抗原結合ドメインを形成するように特異的に位置するアミノ酸の短い不連続な配列である。「フレームワーク」領域と称される、抗原結合ドメイン内の残りのアミノ酸は、分子間の変異性をそれ程示さない。フレームワーク領域は概してβシートコンホメーションをとり、ＣＤＲは、そのβシート構造をつなぎ合わせ、且つ場合によってはβシート構造の一部を形成するループを形成する。ゆえに、フレームワーク領域は、鎖間非共有結合性相互作用によってＣＤＲの正しい向きでの配置をもたらす足場を形成するように作用する。ＣＤＲの配置によって形成された抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を定義する。この相補的な表面は、抗体とそのコグネイトエピトープとの非共有結合性の結合を促進する。ＣＤＲ及びフレームワーク領域をそれぞれ構成するアミノ酸は、正確に定義されているので、所与のあらゆる重鎖又は軽鎖の可変領域について当業者によって容易に特定することができる（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）参照）。

当該技術において用いられ、且つ／又は認められている用語に２つ以上の定義がある場合、本明細書中で用いられる用語の定義は、反する旨が明記されない限り、かかる意味の全てを含むことが意図される。具体的な例として、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの双方の可変領域内に見出される非隣接抗原結合部位を説明する用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）の使用がある。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）によって説明されている。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａに従うＣＤＲ定義は、互いに比較した場合に、アミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにも拘わらず、抗体又はその変異型のＣＤＲに言及するのにいずれかの定義を使用するのは、本明細書中で定義され、且つ用いられる用語の範囲内にあることが意図される。先で引用された各参考文献によって定義されるＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基が、以下の表に比較として記載されている。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列及びサイズに応じて変動することとなる。当業者であれば、どの残基が、抗体の可変領域アミノ酸配列が与えられる特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定することができる。

また、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．は、あらゆる抗体に適用可能な可変ドメイン配列についての番号付与体系を定義した。当業者であれば、配列自体以外のいかなる実験データにも依存することなく、この「Ｋａｂａｔ番号付与」体系をあらゆる可変ドメイン配列に明白に割り当てることができる。本明細書中で用いられる「Ｋａｂａｔ付番」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）によって示される付番方式を指す。

上述の表に加えて、Ｋａｂａｔ付番方式は、ＣＤＲ領域を以下で説明する：ＣＤＲ－Ｈ１は、およそアミノ酸３１（すなわち、最初のシステイン残基の後ろのおよそ９残基）から始まり、およそ５～７個のアミノ酸を含み、そして次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端の後ろの１５番目の残基から始まり、およそ１６～１９個のアミノ酸を含み、そして次のアルギニン又はリジン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端の後ろのおよそ３３番目のアミノ酸残基から始まり、３～２５個のアミノ酸を含み、そして配列Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）で終わる。ＣＤＲ－Ｌ１は、およそ残基２４（すなわち、システイン残基の後ろ）から始まり、およそ１０～１７個の残基を含み、そして次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端の後ろのおよそ１６番目の残基から始まり、そしておよそ７個の残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端の後ろのおよそ３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後ろ）から始まり；およそ７～１１個の残基を含み、そして配列Ｆ又はＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）で終わる。

本明細書中に開示される抗体は、あらゆる動物起源のものであり得、鳥類及び哺乳動物由来のものが挙げられる。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、又はニワトリ抗体である。別の実施形態において、可変領域は、軟骨魚（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）起源（例えばサメ由来）であり得る。

本明細書中で用いられる用語「重鎖定常領域」には、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列が含まれる。重鎖定常領域を含むポリペプチドは：ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央、及び／又は下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はそれらの変異体若しくは断片の少なくとも１つを含む。例えば、本開示に用いられる抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、及びＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、又はＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含み得る。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示に用いられる抗体は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全て又は一部）を欠いていてもよい。上記の通り、天然に存在する免疫グロブリン分子とアミノ酸配列が異なるように重鎖定常領域を修飾し得ることは、当業者によって理解されるであろう。

本明細書中で開示される抗体の重鎖定常領域は、様々な免疫グロブリン分子に由来してもよい。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ_ｌ分子に由来するＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域とを含み得る。別の例において、重鎖定常領域は、一部がＩｇＧ_ｌ分子に由来し、且つ一部がＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例において、重鎖部分は、一部がＩｇＧ_ｌ分子に由来し、且つ一部がＩｇＧ_４分子に由来するキメラヒンジを含むことができる。

本明細書中で用いられる用語「軽鎖定常領域」は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメイン又は定常ラムダドメインの少なくとも１つを含む。

「軽鎖－重鎖対」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合により二量体を形成することができる軽鎖及び重鎖のコレクションを指す。

前述されるように、種々の免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造及び三次元配置は周知である。本明細書中で用いられる用語「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の最初（最もアミノ末端）の定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接しており、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域よりもアミノ末端側にある。

本明細書中で用いられる用語「ＣＨ２ドメイン」は、従来の付番スキームを用いて、例えば抗体の約残基２４４～残基３６０に延在する重鎖分子の部分を含む（残基２４４～３６０、Ｋａｂａｔ付番方式；及び残基２３１～３４０、ＥＵ付番方式；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）参照）。ＣＨ２ドメインは、もう一方のドメインと緊密な対をなさない点でユニークである。むしろ、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間には２つのＮ結合型分岐炭水化物鎖が介在する。また、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで延在し、且つおよそ１０８個の残基を含むことも十分に実証されている。

本明細書中で用いられる用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５個の残基を含み、且つフレキシブルであるので、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くのを可能にする。ヒンジ領域は、３つの異なるドメイン：上部、中央、及び下部ヒンジドメインにさらに分割することができる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。

本明細書中で用いられる用語「ジスルフィド結合」は、２個の硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とのジスルフィド結合又は架橋を形成し得るチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域とＣＫ領域とがジスルフィド結合によって連結され、且つ２つの重鎖が、Ｋａｂａｔ付番方式を用いて２３９及び２４２に対応する位置（位置２２６又は２２９、ＥＵ付番方式）にて２つのジスルフィド結合によって連結されている。

本明細書中で用いられる用語「キメラ抗体」は、免疫反応性の領域又は部位が第１の種から得られるか、又はこれに由来し、且つ定常領域（本開示に従えば、インタクトであっても、部分的であっても、修飾されていてもよい）が第２の種から得られる、あらゆる抗体を意味すると見なされるものとする。特定の実施形態において、標的結合領域又は部位は、非ヒト源（例えば、マウス又は霊長類）に由来し、定常領域はヒト由来である。

本明細書中で用いられる「ヒト化パーセント」は、ヒト化ドメインと生殖細胞系ドメインとの間のフレームワークアミノ酸差（すなわち、非ＣＤＲ差）の数を求めて、当該数をアミノ酸の総数から引いてから、これをアミノ酸の総数で割って、１００を乗算することによって算出される。

「特異的に結合する」又は「に対する特異性を有する」とは、概して、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、そして当該結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間で多少の相補性を伴うことを意味する。この定義に従えば、抗体が、ランダムな、関係のないエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合、抗体は、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。用語「特異性」は、本明細書中で、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的親和性を評価するのに用いられる。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープに対して特異性が高いと見なされる場合もあるし、抗体「Ａ」は、関連エピトープ「Ｄ」に対するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われる場合もある。

本明細書中で用いられる用語「処置する」又は「処置」は、療法的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の双方を指し、ここでその目的は、癌の進行等の、望ましくない生理的変化又は障害を予防するか、又は減速させる（軽減する）ことである。有益であるか、又は所望される臨床結果として、検出可能か検出不能かに拘わらず、症状の緩和、疾患の程度の減少、安定化した（すなわち増悪していない）疾患状態、疾患進行の遅延又は緩徐化、病態の寛解又は緩和、及び緩解（部分的又は全体的のいずれか）が挙げられるが、これらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延ばすことも意味し得る。処置を必要とする者は、その症状若しくは障害を既に有する者、並びにその症状若しくは障害を有する傾向がある者、又はその症状若しくは障害が予防されるべき者を含む。

「対象」、又は「個体」、又は「動物」、又は「患者」、又は「哺乳動物」が意味するのは、診断、予後、又は治療が所望されるあらゆる対象、特に哺乳動物対象である。哺乳動物対象として、ヒト、家畜、農業動物、及び動物園、競技、又は愛玩動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、乳牛等が挙げられる。

本明細書中で用いられるフレーズ、例えば「処置が必要な患者に」又は「処置が必要な対象」は、例えば、検出に、診断手順に、且つ／又は処置に用いられる、本開示の抗体又は組成物の投与から利益を得ることとなる対象、例えば哺乳動物対象を含む。

抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体
ハイブリドーマ技術を用いて、添付の実験例は、いくつかのマウス抗体が得られることを示した。マウス抗体のうちの１４個を配列決定して、ヒト化抗体を製造した。これらのヒト化抗体は、強力なＧＰＲＣ５Ｄ結合活性を示して、受容体媒介エンドサイトーシスを誘導することができた。インビボ試験は、これらの抗体が、ＡＤＣＣを誘導して、腫瘍発生を阻害する活性があることを示した。

マウス抗体のうちの４つ、３４Ｄ３Ｈ１、３７Ｂ９Ｃ４、５８Ｆ９Ｇ１０、及び６Ｇ１０Ｄ９が、ヒト化プロセスを受けた。６－Ｈ３Ｌ３、６－Ｈ４Ｌ３（双方とも６Ｇ１０Ｄ９由来）、５８－Ｈ１Ｌ１、５８－Ｈ３Ｌ１（双方とも５８Ｆ９Ｇ１０由来）、３４－Ｈ１Ｌ１（３４Ｄ３Ｈ１由来）、及び３７－Ｈ１Ｌ１（３７Ｂ９Ｃ４由来）が挙げられるヒト化抗体のいくつかはさらに、継続的な臨床開発への見込みを示した。

したがって、本開示の一実施形態に従えば、提供されるのは、ヒトＧタンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）タンパク質への結合特異性を有する抗体又はその抗原結合断片である。抗体又はその断片は、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、（ａ）配列番号２９～３４のアミノ酸配列；（ｂ）配列番号４２～４７のアミノ酸配列；（ｃ）配列番号５４～５９若しくは配列番号５４、６０、及び５６～５９のアミノ酸配列；又は（ｄ）配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む。

一実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号２９～３４のアミノ酸配列を含む。ＶＨについての例となる配列として、配列番号７及び３５～３７、又は配列番号７及び３５～３７のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。ＶＬについての例となる配列として、配列番号８及び３８～４１、又は配列番号８及び３８～４１のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号３５のアミノ酸配列、又は配列番号３５と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号３８のアミノ酸配列、又は配列番号３８と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号４２～４７のアミノ酸配列を含む。ＶＨについての例となる配列として、配列番号９及び４８～５０、又は配列番号９及び４８～５０のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。ＶＬについての例となる配列として、配列番号１０及び５１～５３、又は配列番号１０及び５１～５３のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号４８のアミノ酸配列、又は配列番号４８と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号５１のアミノ酸配列、又は配列番号５１と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号５４～５９のアミノ酸配列を含む。ＶＨについての例となる配列として、配列番号６１～６４、又は配列番号６１～６４のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。ＶＬについての例となる配列として、配列番号１６及び６５～６７、又は配列番号１６及び６５～６７のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列、又は配列番号６１と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列、又は配列番号６５と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号６３のアミノ酸配列、又は配列番号６３と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列、又は配列番号６５と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号５４、６０、及び５６～５９のアミノ酸配列を含む。ＶＨについての例となる配列として、配列番号１５、又は配列番号１５のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。ＶＬについての例となる配列として、配列番号１６及び６５～６７、又は配列番号１６及び６５～６７のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。

一実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む。ＶＨについての例となる配列として、配列番号１及び７４～７９、又は配列番号１及び７４～７９のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。ＶＬについての例となる配列として、配列番号２及び８０～８６、又は配列番号２及び８０～８６のいずれかと少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列が挙げられる。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号７６のアミノ酸配列、又は配列番号７６と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列、又は配列番号８２と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一実施形態において、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、又は配列番号７７と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列、又は配列番号８２と少なくとも８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有する配列を含む。

また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰα上の、これらの抗体のいずれか１つと同じエピトープに結合する抗体及びその抗原結合断片である。また、提供されるのは、一部の実施形態において、ＦＡＰαに結合する際にこれらの抗体のいずれか１つと競合する抗体及びその抗原結合断片、例えば、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬを有するものである。

一部の実施形態において、抗体又はその断片は、ＡＤＣＣコンピテントである。抗体ＡＤＣＣコンピテントを製造するのに適した方法及び材料が、当該技術において知られており、例えば、適切なＦｃ断片を用いるか、又はフコシル化を低下させる／除去することによる。

一部の実施形態において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、（ａ）配列番号２９～３４のアミノ酸配列；（ｂ）配列番号４２～４７のアミノ酸配列；（ｃ）配列番号５４～５９若しくは配列番号５４、６０、及び５６～５９のアミノ酸配列；又は（ｄ）配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含み、記載されるＣＤＲ配列は各々、１、２、又は３つの保存的アミノ酸置換を含む。

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術において定義されている。ゆえに、免疫グロブリンポリペプチド内の非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、一連のアミノ酸は、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／又は組成が異なる構造的に類似の連なりで置換され得る。

保存的アミノ酸置換の非限定的な例が、以下の表に記載されており、０以上の類似性スコアが、２つのアミノ酸間の保存的置換を示す。

また、本明細書中で開示される抗体は、これが由来する天然に存在する結合ポリペプチド由来のアミノ酸配列が変わるように修飾され得ることが当業者によって理解されるであろう。例えば、指定のタンパク質に由来するポリペプチド配列又はアミノ酸配列は、類似し得、例えば、出発配列に対して特定の同一性パーセントを有し得、例えば、出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％同一であり得る。

一部の実施形態において、抗ＣＣＲ８抗体は、非修飾ｍＡｂと比較して、より高い親和性で活性化Ｆｃγ受容体に結合して、増強したＡＤＣＣを媒介する、脱フコシル化重鎖等の修飾重鎖定常領域を含む修飾ｍＡｂである。一部の実施形態において、抗ＣＣＲ８抗体は、ＡＤＣＣ機能を増強するＬ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｄ／Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｌ／Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｋ３３４Ａ／Ｅ、Ｐ３９６Ｌの１つ又は組合せを含むヒトＩｇＧ１変異型のものである重鎖を含む（全てＥＵ付番）。

特定の実施形態において、抗体は、抗体と通常関連しないアミノ酸配列又は１つ以上の部分を含む。例示的な修飾を、以下でより詳細に説明する。例えば、本開示の抗体は、フレキシブルリンカー配列を含んでもよいし、官能性部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、又は標識）が加わるように修飾されていてもよい。

本開示の抗体、その変異型又は誘導体として、すなわち、抗体がエピトープに結合するのを共有結合が妨げないような、あらゆる種類の分子の、抗体への共有結合によって修飾されている誘導体が挙げられる。例えば、限定するためではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、知られている保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への結合、その他によって修飾することができる。多数の化学修飾はいずれも、以下に限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、その他が挙げられる、知られている技術によって実行され得る。加えて、抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。

抗体－薬物コンジュゲート
ＧＰＲＣ５Ｄは、特定の悪性血液細胞、例えば多発性骨髄腫細胞上で過剰発現される。したがって、本開示の抗体及び断片は、破壊の阻害、不活化のために、悪性細胞を標的とするのに用いることができる。一例において、抗体又は断片は、悪性細胞の阻害、不活化、又は破壊の一助となる剤にコンジュゲートされている。抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄ媒介エンドサイトーシスを誘導することができることが、本明細書中で示されている。

一部の実施形態において、抗体又は断片は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生体応答修飾物質、医薬品、又はＰＥＧにコンジュゲートされていてよい。一部の実施形態において、コンジュゲートされる剤は、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）又は固有のモジュレータ、例えば、インターフェロン遺伝子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストの刺激因子又はＴＬＲ７／８アゴニストであり得る。

一実施形態において、本開示の抗体又は断片は、薬物部分に共有結合されている。薬物部分は、抗体上のコンジュゲーション点と反応する基であってもよいし、これを含むように修飾されていてもよい。例えば、薬物部分は、（例えば、イプシロン－アミノ基リシン、又は抗体のＮ－末端での）アルキル化、酸化された炭水化物の還元的アミノ化、ヒドロキシル基とカルボキシル基との間のエステル転移、アミノ基又はカルボキシル基でのアミド化、及びチオールへのコンジュゲーションによって取り付けることができる。

一部の実施形態において、抗体分子あたりのコンジュゲートする薬物部分数ｐは、平均１～８；１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、又は１～２に及ぶ。一部の実施形態において、ｐは、平均２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、又は２～３に及ぶ。他の実施形態において、ｐは、平均１、２、３、４、５、６、７、又は８である。一部の実施形態において、ｐは、平均約１～約２０、約１～約１０、約２～約１０、約２～約９、約１～約８、約１～約７、約１～約６、約１～約５、約１～約４、約１～約３、又は約１～約２に及ぶ。一部の実施形態において、ｐは、約２～約８、約２～約７、約２～約６、約２～約５、約２～約４，又は約２～約３に及ぶ。

例えば、タンパク質の化学活性化が遊離チオール基の形成をもたらす場合、タンパク質は、スルフヒドリル反応剤とコンジュゲートされていてもよい。一態様において、剤は、遊離チオール基に対して実質的に特異的であるものである。そのような剤の例として、マレイミド、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ化、臭化、又は塩化）、ビニルスルホン、及びピリジルチオが挙げられる。

薬物は、リンカーによって抗体又は断片に連結することができる。適切なリンカーの例として、切断型リンカー及び非切断型リンカーが挙げられる。切断型リンカーは典型的に、細胞内条件下で切断を受け易い。適切な切断型リンカーの例として、細胞内プロテアーゼ、例えばリソソームプロテアーゼ又はエンドソームプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーが挙げられる。例示的な実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）、フェニルアラニン－リシン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカー、又はマレイミドカプロン－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ）リンカーであり得る。別のリンカーとして、スルホスクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシラート（ｓｍｃｃ）がある。Ｓｕｌｆｏ－ｓｍｃｃコンジュゲーションは、スルフヒドリル（チオール、－ＳＨ）と反応するマレイミド基を介して起こる一方、そのＳｕｌｆｏ－ＮＨＳエステルは、一次アミン（リシン、及びタンパク質又はペプチドＮ末端において見出される）に対して反応性である。さらに別のリンカーとして、マレイミドカプロイル（ｍｃ）がある。他の適切なリンカーとして、特定のｐＨ又はｐＨ範囲にて加水分解性のリンカー、例えばヒドラゾンリンカーが挙げられる。追加の適切な切断型リンカーとして、ジスルフィドリンカーが挙げられる。例えばｍｃリンカー等のリンカーは、抗体が細胞内で分解されて薬物が放出されなければならない程度に、抗体に共有結合され得る。

リンカーは、抗体への結合用の基を含み得る。例えば、リンカーは、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシル、又はスルフヒドリル反応基（例えば、マレイミド、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモ、又はクロロ）、ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ化、臭化、又は塩化）、ビニルスルホン、及びピリジルチオ）を含み得る。

一部の実施形態において、薬物部分は、細胞毒性剤又は細胞増殖抑制剤、免疫抑制剤、放射性同位体、毒素等である。コンジュゲートは、腫瘍細胞又は癌細胞の増殖を阻害して、腫瘍若しくは癌細胞内でアポトーシスを引き起こすのに、又は患者において癌を処置するのに用いることができる。コンジュゲートは、それに応じて、動物癌の処置のために種々の設定で用いることができる。コンジュゲートは、薬物を腫瘍細胞又は癌細胞に送達するのに用いることができる。理論によって拘束されるものではないが、一部の実施形態において、コンジュゲートは、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する癌細胞に結合するか、又はこれと関連し、そしてコンジュゲート及び／又は薬物は、受容体媒介エンドサイトーシスにより腫瘍細胞又は癌細胞の内側に取り込まれ得る。

一旦細胞の内側に入ると、コンジュゲート内（例えば、リンカー内）の１つ以上の特定のペプチド配列が、１つ以上の腫瘍細胞又は癌細胞関連プロテアーゼによって加水分解的に切断されて、薬物が放出される。続いて、放出された薬物は、細胞内で自由に移動して、細胞毒性若しくは細胞増殖抑制、又は他の活性を誘導する。一部の実施形態において、薬物は、腫瘍細胞又は癌細胞の外側で抗体から切断されて、薬物はその後、細胞に侵入するか、又は細胞表面にて作用する。

薬物部分又はペイロードの例が、ＤＭ１（マイタンシン、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－又はＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－マイタンシン）、ｍｃ－ＭＭＡＤ（６－マレイミドカプロイル－モノメチルオーリスタチン－Ｄ又はＮ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－メトキシ－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－［［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（２－チアゾリル）エチル］アミノ］プロピル］－１－ピロリジニル］－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－（９Ｃｌ）－Ｌバリンアミド）、ｍｃ－ＭＭＡＦ（マレイミドカプロイル－モノメチルオーリスタチンＦ又はＮ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１オキソヘキシル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－５－メチル－４－（メチルアミノ）ヘプタノイル－（αＲ，βＲ，２Ｓ）－β－メトキシ－α－メチル－２－ピロリジンプロパノイル－Ｌ－フェニルアラニン）、及びｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥ（６－マレイミドカプロイル－ＶａｌｃＣｉｔ－（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）－モノメチルオーリスタチンＥ又はＮ－［［［４－［［Ｎ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－（アミノカルボニル）－Ｌ－オルニチル］アミノ］フェニル］メトキシ］カルボニル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニルエチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］－１－ピロリジニル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－Ｌバリンアミド）からなる群から選択される。ＤＭ１は、チューブリン阻害剤マイタンシンの誘導体である一方、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ、及びＭＭＡＦは、オーリスタチン誘導体である。一部の実施形態において、薬物部分は、ｍｃ－ＭＭＡＦ及びｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥからなる群から選択される。一部の実施形態において、薬物部分は、マイタンシノイド又はオーリスタチンである。

抗体又は断片は、検出可能な標識、例えば、放射性の標識、免疫調節物質、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤又は診断剤、細胞毒性剤（薬物であっても毒素であってもよい）、超音波増強剤、非放射性の標識、それらの組合せ、及び当該技術において知られている他のそのような剤が挙げられ得る治療剤にコンジュゲートしていても融合していてもよい。

抗体は、これを化学発光化合物に結合させることによって、検出可能的に標識することができる。次に、化学反応の過程で生じる発光の存在を検出することによって、化学発光タグが付けられた抗原結合ポリペプチドの存在が判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例として、ルミノール、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルがある。

また、抗体は、蛍光発光金属、例えば^１５２Ｅｕ、又はランタニド系列の他のものを用いて検出可能的に標識することができる。当該金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて抗体に取り付けることができる。種々の部分を抗体にコンジュゲートさせるための技術が周知である。例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－ ５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６ （１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ， Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））参照。

二官能性分子及び併用療法
ＧＰＲＣ５Ｄは、特定の悪性血液細胞、例えば多発性骨髄腫細胞上で過剰発現される。したがって、本開示の抗体及び断片は、破壊の阻害、不活化のために、悪性細胞を標的とするのに用いることができる。一部の実施形態において、ＧＰＲＣ５Ｄタンパク質及び免疫細胞の双方を標的とする二官能性又は二重特異性分子／抗体が提供される。

一部の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、及び肥満細胞からなる群から選択される。標的とされ得る免疫細胞上の分子の例として、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ６４、及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）が挙げられる。他の例として、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても知られている）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０又はＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０又はＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ又はＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても知られている）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、及びＣＤ４７が挙げられる。二重特異性の具体例として、限定されないが、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＣＤ３が挙げられる。

また、二重特異性抗体の様々なフォーマットが提供される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１断片及び第２の断片が各々、独立して、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体から選択される。一部の実施形態において、二重特異性抗体はさらに、Ｆｃ断片を含む。

抗体をコードするポリヌクレオチド及び抗体を調製する方法
また、本開示は、本開示の抗体、その変異型又は誘導体をコードする単離ポリヌクレオチド又は核酸分子を提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上で、又は別々のポリヌクレオチド分子上で抗原結合ポリペプチド、その変異型又は誘導体の重鎖及び軽鎖可変領域全体をコードしていてもよい。加えて、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上で、又は別々のポリヌクレオチド分子上で抗原結合ポリペプチド、その変異型又は誘導体の重鎖及び軽鎖可変領域の部分をコードしていてもよい。

抗体を製造する方法は、当該技術において周知であり、本明細書中に記載されている。特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域及び定常領域は双方とも、完全ヒトである。完全ヒト抗体は、当該技術において記載されており、そして本明細書中に記載されている技術を用いて製造することができる。例えば、特異性抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原を、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、内因性遺伝子座が無効にされているトランスジェニック動物に投与することによって、調製することができる。そのような抗体を製造するのに用いることができる例示的な技術が、米国特許第：６，１５０，５８４号明細書；６，４５８，５９２号明細書：６，４２０，１４０号明細書（それらの全体が参照により組み込まれる）に記載されている。

処置方法
本明細書中に記載される本開示の抗体、変異型又は誘導体は、特定の処置及び診断法に用いられ得る。

本開示はさらに、本明細書中に記載される障害又は症状の１つ以上を処置するための、動物、哺乳動物、及びヒト等の患者に本開示の抗体を投与することを含む抗体ベースの治療法に関する。本開示の治療化合物として、以下に限定されないが、本開示の抗体（本明細書中に記載されるその変異型及び誘導体が挙げられる）及び本開示の抗体をコードする核酸又はポリヌクレオチド（本明細書中に記載されるその変異型及び誘導体が挙げられる）が挙げられる。

また、本開示の抗体は、癌を処置又は阻害するのに用いることができる。先で提供されるＧＰＲＣ５Ｄは、癌細胞、特に多発性骨髄腫において過剰発現され得る。ＧＰＲＣ５Ｄの阻害は、癌を処置するのに有用であることが示されている。

したがって、一部の実施形態において、提供されるのは、癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法である。当該方法は、一実施形態において、患者に、本開示の抗体の有効な量を投与することを伴う。一部の実施形態において、患者における癌細胞の少なくとも１つが、ＧＰＲＣ５Ｄを過剰発現する。一部の実施形態において、抗体又は断片は、ＡＤＣＣコンピテントである。一部の実施形態において、抗体又は断片はさらに、細胞毒性剤を含む。一部の実施形態において、免疫細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞をさらに標的とする抗体は、二重特異性である。

また、細胞療法、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞（又はＮＫ細胞、マクロファージ）療法が、本開示において提供される。本開示の抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体と接触する（又はこれ以外にも、本開示の抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体を発現するように操作されている）適切な細胞を用いることができる。そのような接触又は操作により、細胞をその後、処置が必要な癌患者に導入することができる。癌患者は、本明細書中で開示されるあらゆるタイプの癌を有し得る。細胞（例えばＴ細胞）は、限定されないが、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、又はそれらの組合せであり得る。

一部の実施形態において、細胞を、癌患者自身から単離した。一部の実施形態において、細胞を、ドナーによって、又は細胞バンクから用意した。細胞が癌患者から単離される場合、不所望の免疫反応を最小にすることができる。

癌の非限定的な例として、血液癌、例えば多発性骨髄腫が挙げられる。他の例として、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球、及び赤白血病が挙げられる））、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球）白血病及び慢性リンパ球性白血病））、リンパ腫（例えば、ホジキン病及び非ホジキン病）、及び多発性骨髄腫が挙げられる。

特定のあらゆる患者のための具体的な投与量及び処置レジメンが、用いられる特定の抗体、その変異型又は誘導体、患者の年齢、体重、健康状態、性別、及び食事、投与の時間、排泄率、薬物組合せ、並びに処置されることとなる特定の疾患の重症度が挙げられる種々の要因によって決まることとなる。医療介護者によるそのような要因の判断は、当該技術において通常の技術の範囲内である。また、量は、処置されることとなる個々の患者、投与経路、製剤のタイプ、用いられる化合物の特徴、疾患の重症度、及び所望される効果によって決まることとなる。用いる量は、当該技術において周知の薬理学的原理及び薬物動態学的原理によって決定することができる。

抗体の投与方法として、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。抗原結合ポリペプチド又は組成物は、例えば、点滴又はボーラス注射、上皮又は皮膚粘膜（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を通じた吸収といった好都合なあらゆる経路によって投与され得、そして他の生物活性剤と共に投与され得る。ゆえに、本開示の抗原結合ポリペプチドを含有する医薬組成物は、経口投与、経直腸投与、非経口投与、大槽内投与、膣内投与、腹膜内投与、局所投与（粉末、軟膏、点滴薬、又は経皮パッチによる）、頬内投与、又は経口薬若しくは点鼻薬として投与され得る。

本明細書中で用いられる用語「非経口的に」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、並びに関節内注射及び点滴が挙げられる投与方法を指す。

投与は、全身性又は局所性であり得る。加えて、本開示の抗体を、脳室内注射及びクモ膜下腔内注射が挙げられる適切なあらゆる経路によって中枢神経系中に導入することが所望されてもよい；脳室内注射は、例えば、リザーバー、例えばＯｍｍａｙａリザーバーに取り付けられた、脳室内カテーテルによって容易にされてもよい。また、例えば、吸入器又はネブライザーの使用、及びエアロゾル化剤との製剤化により、肺投与を使用することができる。

処置が必要な領域に本開示の抗原結合ポリペプチド又は組成物を局所的に投与することが所望されてよい；これは、例えば、限定するためではないが、外科手術中の局所点滴、例えば手術後の創傷包帯と併せた、局所塗布によって、注射によって、カテーテルによって、坐薬によって、又は移植片によって達成され得、前記移植片は、多孔性、非多孔性、又はゼラチン状の材料のものであり、膜、例えばｓｉａｌａｓｔｉｃ膜、又は繊維が挙げられる。好ましくは、本開示の、抗体が挙げられるタンパク質を投与する場合、タンパク質が吸収されない材料を用いることに配慮すべきである。

炎症性、免疫、又は悪性の疾患、障害、又は症状の処置、阻害、及び予防に有効である本開示の抗体の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、インビトロアッセイを任意選択的に使用して、最適投与量範囲を特定する一助とすることができる。また、製剤に使用されることとなる正確な用量は、投与経路、及び疾患、障害、又は症状の重篤度によって決まることとなり、実施者の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効な用量が、インビトロ又は動物モデル試験系から誘導された用量応答曲線から外挿され得る。

一般的な提案として、本開示の抗原結合ポリペプチドの、患者に投与される投与量は、典型的に、０．１ｍｇ／患者の体重ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／患者の体重ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、又は１ｍｇ／患者の体重ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。一般的には、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答に起因して、他の種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期を有する。ゆえに、多くの場合、より低投与量のヒト抗体且つより低頻度の投与が可能である。さらに、本開示の抗体の投与量及び投与頻度は、例えば脂質化等の修飾によって、抗体の（例えば脳中への）取込み及び組織浸透を増強することによって引き下げられ得る。

追加の実施形態において、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインとして、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、及びＴＮＦ－αが挙げられるが、これらに限定されない。

追加の実施形態において、本開示の組成物は、他の治療レジメン又は予防レジメン、例えば放射線療法と組み合わせて投与される。

診断方法
ＧＰＲＣ５Ｄの過剰発現が、特定の腫瘍試料内で観察され、そしてＧＰＲＣ５Ｄ過剰発現細胞を有する患者はおそらく、本開示の抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体による処置に応答する。したがって、本開示の抗体はまた、診断目的及び予測目的に用いることができる。

好ましくは細胞を含む試料を、癌患者又は診断を所望する患者であり得る患者から得ることができる。細胞は、患者由来の腫瘍組織若しくは腫瘍ブロック、血液試料、尿試料、又はあらゆる試料の細胞である。試料の任意選択的な前処置により、抗体を、試料中に潜在的に存在するＧＰＲＣ５Ｄタンパク質と相互作用させるのを可能にする条件の下で、試料を本開示の抗体とインキュベートさせることができる。抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体を活用するＥＬＩＳＡ等の方法を用いて、試料中のＧＰＲＣ５Ｄタンパク質の存在を検出することができる。

試料中のＧＰＲＣ５Ｄタンパク質の存在（任意選択で量又は濃度による）は、患者が、抗体による処置に適している指標として、又は患者が癌処置に応答した（又はしなかった）という指標として、癌の診断に用いることができる。予測方法について、処置の進捗を示すために、癌処置の開始と同時に、特定の病期にて、１回、２回、又はそれを超えて検出を行うことができる。

組成物
本発明はまた、医薬組成物を提供する。そのような組成物は、有効量の抗体及び許容可能な担体を含む。一部の実施形態において、組成物はさらに、第２の抗癌剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を含む。

特定の実施形態において、用語「薬学的に許容される」は、動物、より詳細にはヒトに用いられる、連邦又は州政府の監督官庁によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められている薬局方に収載されていることを意味する。さらに、「薬学的に許容される担体」は、通常、非毒性の固体、半固体、又は液体の、あらゆるタイプの充填剤、希釈剤、カプセル化材料、又は製剤助剤である。

用語「担体」は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのような薬学的担体として、滅菌液、例えば水及び油があり得、石油、動物、植物、又は合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等が挙げられる。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合に好ましい担体である。また、生理食塩水及び水性デキストロース及びグリセロール溶液を、特に注射溶液用の液体担体として使用することができる。適切な薬学的賦形剤として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。また、組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤、例えばアセタート、シトラート、又はホスファートを含有し得る。また、抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；及び張度の調整用の剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロースが想定される。当該組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、タブレット、ピル、カプセル、粉末、持続性製剤等の形態をとることができる。組成物は、坐剤として、従来型の結合剤、及びトリグリセリド等の担体と製剤化することができる。経口製剤として、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体が挙げられ得る。適切な薬学的担体の例が、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによってＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。そのような組成物は、患者に適切な投与形態を提供するように、適した量の担体と共に、治療有効量の抗原結合ポリペプチドを、好ましくは精製された形態で含有する。製剤は、投与様式に適する必要がある。親調製物は、ガラス若しくはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、又は多用量バイアル内に封入することができる。

一実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適応した医薬組成物として、ルーチンの手技に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性バッファ中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤、及び注射部位での疼痛を緩和させるためのリグノカイン等の局所麻酔薬を含み得る。一般的には、成分は、別々に、又はユニット剤型に混合一体化されて、例えば、活性剤の量を表示するアンプル又はサシェ等の密閉容器内に凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として、供給される。組成物は、点滴によって投与されることとなる場合、滅菌医薬品グレード水又は生理食塩水を含有する点滴ボトルによって、分注され得る。組成物が注射によって投与される場合、成分を投与前に混合することができるように、滅菌注射用水又は生理食塩水のアンプルが提供され得る。

本開示の化合物は、中性又は塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩として、アニオンと形成されるもの、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等に由来するもの、及びカチオンと形成されるもの、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、第二鉄水酸化物、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等に由来するものが挙げられる。

実施例１：ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対するマウスモノクローナル抗体の生成
ヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質を用いて、マウスの様々な株を免疫化して、それに応じてハイブリドーマが生成した。２０種を超えるハイブリドーマクローンを、更なる分析のために収集した。

ハイブリドーマの上清から収集した抗体を、ＣＨＯ Ｋ１細胞上に発現されるヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質への結合について試験した。安定してヒトＧＰＲＣ５Ｄが発現されるＣＨＯ－Ｋ１細胞を、フラスコから収集した。１×１０^６個の細胞／ｍｌの１００μｌを、３倍段階希釈液中のマウス抗体と、氷上で３０分間インキュベートした。２００μｌのＦＡＣＳバッファで２回洗浄した後に、細胞を第２の抗体と、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を、２００μｌのＦＡＣＳバッファで２回洗浄して、ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ ５ｍｌチューブに移して、ＦＡＣＳによって分析した。研究の結果は、マウス抗体がヒトＧＰＲＣ５Ｄに高いＥＣ５０で結合することができることを示した（図１）。結果を以下の表に示す。それらは全て、良好な結合活性を示した。

１４種のハイブリドーマをサブクローニングして、ＶＨ／ＶＬ配列を決定した（表１参照）。

実施例２．ＧＰＲＣ５Ｄへのキメラ抗体の結合
マウスＶＨ及びＶＫ遺伝子を合成的に生成してから、それぞれ、ヒトガンマ１及びヒトカッパ定常ドメインを含有するベクター中にクローニングした。精製キメラ抗体を、形質移入したＣＨＯ細胞から生成した。

ヒトＧＰＲＣ５Ｄを安定して発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、フラスコから収集した。１×１０^６個の細胞／ｍｌの１００μｌを、３００ｎＭから始まって０．００１ｎＭまでの３倍段階希釈液中の一次キメラ抗体と、氷上で３０分間インキュベートした。２００μｌのＦＡＣＳバッファで２回洗浄した後に、細胞を二次抗体と、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を、２００μｌのＦＡＣＳバッファで２回洗浄して、ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ ５ｍｌチューブに移して、ＦＡＣＳによって分析した。研究の結果は、キメラ抗体がヒトＧＰＲＣ５Ｄに高いＥＣ５０で結合することができることを示した（図２）。

結果を以下の表に示す。

実施例３．ＣＨＯ－ＧＰＲＣ５Ｄ細胞上でのキメラＧＰＲＣ５Ｄ抗体のインターナリゼーションのＥＣ５０
ｐＨＡｂ色素は、ｐＨ＞７にて蛍光が非常に低くて、溶液のｐＨが酸性になるにつれて、蛍光の増大が劇的になるｐＨセンサー色素である。ｐＨＡｂ色素は、５３２ｎｍにて励起最大（Ｅｘ）を、そして５６０ｎｍにて放射最大（Ｅｍ）を有する。ｐＨＡｂ色素コンジュゲート抗体を、受容体媒介抗体インターナリゼーションを監視するのに用いることができる。抗体－ｐＨＡｂ色素コンジュゲートは、細胞膜上のその受容体に結合する場合、最小蛍光を示す。しかしながら、受容体媒介インターナリゼーションにより、抗体－ｐＨＡｂ色素コンジュゲートが、エンドソーム及びリソソームベシクルに移り、そこではｐＨが酸性であり、ｐＨＡｂ色素が蛍光を発する。この蛍光を、適切なフィルタによる細胞イメージング、フローサイトメトリ、及び蛍光プレートベースのリーダーが挙げられる種々の技術を用いて検出することができる。

安定して形質移入されたヒトＧＰＲＣ５Ｄ ＣＨＯ細胞を、０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ、２５３００－０５４）により収集して、９６ウェル黒色プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃１６５３０５）内に、ウェルあたり９０μｌあたり１０Ｋの密度にてプレーティングした。プレートを、ｐＨＡｂ標識抗体による処理前に、２０～２４時間インキュベートした。

インターナリゼーションについて、ｐＨＡｂコンジュゲートキメラＧＰＲＣ５Ｄ抗体を、異なって（ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ）細胞に加えて、プレートミキサーにより１～２分間穏やかに混合してから、一晩インキュベートして、インターナリゼーションを可能にした（インターナリゼーションは、数時間で検出することができる）。プレートを、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｍ１０００ Ｐｒｏ上の蛍光プレートリーダーにより、Ｅｘ／Ｅｍ：５３２ｎｍ／５６０ｎｍにて読んだ。より高い感受性を達成するために、プレートを読む前に、培地をＰＢＳによって置換した。

ＤＡＲにより正規化した結果を図３に示す。図３に示すように、試験したキメラ抗体は、強力なインターナリゼーション活性を有する。

実施例４．抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）の試験
ＡＤＣＣリポーターバイオアッセイは、ＡＤＣＣ ＭＯＡ経路活性化：エフェクタ細胞におけるＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）経路を介した遺伝子転写の活性化におけるより早期の点での代わりのリードアウトを用いる。加えて、ＡＤＣＣリポーターバイオアッセイは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高親和性）変異型、及びホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答要素を安定して発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクタ細胞として用いる。ＡＤＣＣ ＭＯＡにおける抗体生物活性が、ＮＦＡＴ経路活性化の結果として生成されるルシフェラーゼを介して定量化される；エフェクタ細胞におけるルシフェラーゼ活性が、発光リードアウトにより定量化される。シグナルは高く、アッセイバックグラウンドは低い。

ＧＰＲＣ５Ｄキメラモノクローナル抗体の段階希釈液を、ＡＤＣＣバイオアッセイ標的細胞（ＧＰＲＣ５Ｄ）あり、又はなしで、操作したＪｕｒｋａｔエフェクタ細胞（ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｃｅｌｌ）と、３７℃にて６時間の誘導のためにインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬を用いて定量化した（図４）。試験した抗体は全て、ＡＤＣＣを誘導する強力な能力を示した。

実施例５．マウスｍＡｂのヒト化
マウス抗体可変領域遺伝子を使用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。このプロセスの第１の工程において、ｍＡｂのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースに対して比較して、最もマッチするヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子配列全体を見出した。

ヒト化抗体のアミノ酸配列を、以下に記載する。

ヒト化配列
Ａ．３４Ｄ３Ｈ１

Ｂ．３７Ｂ９Ｃ４

Ｃ．５８Ｆ９Ｇ１０

Ｄ．６Ｇ１０Ｄ９

実施例６．ヒト化抗体の試験
本実施例は、ヒト化抗体の一部を、ＣＨＯ－Ｋ１細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄに結合する能力について試験した。

試験したもののうち、６Ｇ１０Ｄ９、６－Ｈ２Ｌ１、及び６－Ｈ３Ｌ３に由来するヒト化抗体が、他のものよりも優れていた（図５、表６）。

図６及び表７に示すように、５８Ｆ９Ｇ１０のヒト化バージョンは全て、良好なパフォーマンスを有するようであった。

同様に、図７及び表８に示すように、３４Ｄ３Ｈ１のヒト化バージョンは全て、キメラ抗体に匹敵する良好なパフォーマンスを有するようであった。

また、図８及び表９に示すように、３７Ｂ９Ｃ４のヒト化バージョンは全て、キメラ対応物に匹敵する良好なパフォーマンスを有するようであった。

上述のデータに基づいて、ヒト化抗体６－Ｈ３Ｌ３、６－Ｈ４Ｌ３、５８－Ｈ１Ｌ１、５８－Ｈ３Ｌ１、３４－Ｈ１Ｌ１、及び３７－Ｈ１Ｌ１を、更なる確証試験のために選択した。

実施例７．選択したヒト化抗体の確証試験
本実施例は、ヒト化抗体の一部（６－Ｈ３Ｌ３、６－Ｈ４Ｌ３、５８－Ｈ１Ｌ１、５８－Ｈ３Ｌ１、３４－Ｈ１Ｌ１、及び３７－Ｈ１Ｌ１）を、ＣＨＯ－Ｋ１細胞及びＮＣＩ－Ｈ９２９細胞上で発現されるヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質に結合する能力について試験した。

ＣＨＯ－Ｋ１への結合データを、図９に作図し、そして以下の表１０に要約する。

したがって、これらのデータは、これらの選択されたヒト化抗体が、更なる臨床開発に適していることを確認する。

実施例８．ヒト化抗体のＡＤＣＣ
ＡＤＣＣリポーターバイオアッセイは、ＡＤＣＣ ＭＯＡ経路活性化：エフェクタ細胞におけるＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）経路を介した遺伝子転写の活性化におけるより早期の点での代わりのリードアウトを用いる。加えて、ＡＤＣＣリポーターバイオアッセイは、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高親和性）変異型、及びホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答要素を安定して発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクタ細胞として用いる。ＡＤＣＣ ＭＯＡにおける抗体生物活性が、ＮＦＡＴ経路活性化の結果として生成されるルシフェラーゼを介して定量化される；エフェクタ細胞におけるルシフェラーゼ活性が、発光リードアウトにより定量化される。シグナルは高く、アッセイバックグラウンドは低い。

ＧＰＲＣ５Ｄ ｈｕ Ａｂの段階希釈液を、ＡＤＣＣバイオアッセイ標的細胞（ＧＰＲＣ５Ｄを発現）ありで、操作したＪｕｒｋａｔエフェクタ細胞（ＡＤＣＣ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｃｅｌｌ）と、３７℃にて６時間の誘導のためにインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬を用いて定量化した。

結果を図１１に示しており、これは、これらのヒト化抗体が、ＧＰＲＣ５Ｄ過剰発現細胞株及び内因性ＭＭ（多発性骨髄腫）細胞株に対して強いＡＤＣＣ活性を誘導したことを示している。

実施例９．ヒト化抗体のインターナリゼーション
本実施例は、ヒト化抗体を、国際化誘導活性について試験した。実施例は、新しい親水性の、明るいｐＨセンサー色素（ｐＨＡｂ色素）を用いた。これは、インターナリゼーションにより、中性ｐＨにて蛍光性ではないが、酸性ｐＨにて高度に蛍光性である。これを、インターナリゼーションのプロセスを検出するのに用いることができる。ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞及びＭＭ．１Ｒ細胞は、標的細胞として、ヒトＧＰＲＣ５Ｄを内生的に発現した。ｐＨＡｂ色素により標識された検出抗体を加えて、ＧＰＲＣ５Ｄ ｈｕ抗体のインターナリゼーションをインビトロ評価した。

ＧＰＲＣ５Ｄ ｈｕ抗体の段階希釈液を、３７℃にて２４時間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を検出した。結果は、図１２において、これらのヒト化抗体が、ＧＰＲＣ５Ｄ過剰発現細胞株及び内因性ＭＭ細胞株の双方に対する非常に強いインターナリゼーション活性を有することを示している。

実施例１０．ＧＰＲＣ５Ｄ ＡＤＣの死滅活性
本実施例は、２つの抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、標的細胞の死滅活性について試験した。これらのＡＤＣは、毒性薬物モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にコンジュゲートしたそれぞれ３７Ｂ９Ｃ４及び５８Ｆ９Ｇ１０を含んだ。

ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現ＨＥＫ２９３及びＮＣＩ－Ｈ９２９操作細胞（ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＧＰＲＣ５Ｄ及びＮＣＩ－Ｈ９２９／Ｈ＿ＧＰＲＣ５Ｄ）、ＧＰＲＣ５Ｄ内生的発現ＮＣＩ－Ｈ９２９及びＭＭ．１Ｒ細胞を、１ウェルあたり３０００～４０００個の細胞にて、９６ウェルプレートに播種した。細胞を、３７Ｂ９Ｃ４－ＭＭＡＥ及び５８Ｆ９Ｇ１０－ＭＭＡＥにより、それぞれの濃度にて５日間処理した。細胞生存度を、９６ウェルプレートに、ｒ－Ｇｌｏ試薬と共に１ウェルあたり３０００～４０００個の細胞にて播種したＣｅｌｌＴｉｔｅによって測定した。ルシフェラーゼ活性を、Ｅｎｖｉｓｏｎによって検出した。結果は、図１３及び表１２において、これらのヒト化抗体が非常に強い死滅活性を有することを示している。

実施例１１．インビボ抗腫瘍活性
本実施例は、ＣＤＸ動物モデルを用いて、抗体３７Ｂ９Ｃ４（Ｈ１Ｌ１）の抗腫瘍活性を試験した。

本研究において、６～８週齢の雌ＮＣＧマウス（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｊｉｃｕｉ Ｙａｏｋａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を用いた。各マウスに、腫瘍成長のために、マトリゲル入りＰＢＳ（Ｖ：Ｖ＝１：１）の０．１ｍｌ中ＭＭ．１Ｒ腫瘍細胞（２×１０６個）を、右腋窩（外側）にて皮下接種した。動物を、腫瘍容積がおよそ６０ｍｍ^３に達したときにランダムにグループ化してから、有効性研究のための処置を始めた。１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量での３７Ｂ９Ｃ４を、０日目、７日目、１４日目に、静脈（ｉ．ｖ．）を介して管理した。ビヒクル群における平均腫瘍容積が２０００ｍｍ^３を超えた１９日目に、実験を終了した。ＰＢＳ群、３７Ｂ９Ｃ４（１ｍｇ／ｋｇ）群、３７Ｂ９Ｃ４（３ｍｇ／ｋｇ）群、及び３７Ｂ９Ｃ４（１０ｍｇ／ｋｇ）群の平均腫瘍容積は、それぞれ２４９８．５８ｍｍ^３、１１９６．１５ｍｍ^３、０．００ｍｍ^３（６／６ＣＲ）、及び０．００ｍｍ^３（６／６ＣＲ）であった。腫瘍サイズを、ノギスを用いて二次元で週３回測定して、容積を式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２（式中、「ａ」及び「ｂ」はそれぞれ、腫瘍の長径及び短径である）を用いてｍｍ３で表した。データポイントは群（ｎ＝６）平均を表し、誤差棒は平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。

ＭＭ．１Ｒ腫瘍を有するマウスの体重を、毒性の間接的な尺度として、定期的に監視した。図１４Ａは、３７Ｂ９Ｃ４の投与後の、ＭＭ．１Ｒ腫瘍を有するマウスの腫瘍増殖曲線を示す。抗体は、この腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を用量依存的に阻害し、そして３ｍｇ／ｋｇ以上で完全な腫瘍阻害を達成した。

投与後のＭＭ．１Ｒ腫瘍を有するマウスの体重の詳細な変化及び体重の相対変化を図１４Ｂに示す。投与期間の間に、マウスの全ての群に、有意な体重ロスがなく、投与群におけるマウスは、寛容性が良好であり、処置の安全性を実証した。

本開示は、本開示の個々の態様の１つの例示として意図される、記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるものではなく、機能的に均等であるあらゆる組成物又は方法が、本開示の範囲内である。種々の修正及び変更が、本開示の精神又は範囲を逸脱しない範囲で、本開示の方法及び組成物になされ得ることが、当業者に明らかであろう。ゆえに、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内にあるならば、本開示は、本開示の修正及び変更をカバーすることが意図される。

本明細書中で述べた全ての刊行物及び特許出願は、あたかも各刊行物又は特許出願が、具体的且つ個別に参照により組み込まれると示されているかの如く、参照により本明細書に組み込まれるものとする。

薬物部分又はペイロードの例が、ＤＭ１（マイタンシン、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－又はＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－マイタンシン）、ｍｃ－ＭＭＡＤ（６－マレイミドカプロイル－モノメチルオーリスタチン－Ｄ又はＮ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－メトキシ－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－［［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（２－チアゾリル）エチル］アミノ］プロピル］－１－ピロリジニル］－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－（９Ｃｌ）－Ｌバリンアミド）、ｍｃ－ＭＭＡＦ（マレイミドカプロイル－モノメチルオーリスタチンＦ又はＮ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１オキソヘキシル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－５－メチル－４－（メチルアミノ）ヘプタノイル－（αＲ，βＲ，２Ｓ）－β－メトキシ－α－メチル－２－ピロリジンプロパノイル－Ｌ－フェニルアラニン）、及びｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥ（６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）－モノメチルオーリスタチンＥ又はＮ－［［［４－［［Ｎ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－（アミノカルボニル）－Ｌ－オルニチル］アミノ］フェニル］メトキシ］カルボニル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニルエチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］－１－ピロリジニル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－Ｌバリンアミド）からなる群から選択される。ＤＭ１は、チューブリン阻害剤マイタンシンの誘導体である一方、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ、及びＭＭＡＦは、オーリスタチン誘導体である。一部の実施形態において、薬物部分は、ｍｃ－ＭＭＡＦ及びｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥからなる群から選択される。一部の実施形態において、薬物部分は、マイタンシノイド又はオーリスタチンである。

本開示の化合物は、中性又は塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩として、アニオンと形成されるもの、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等に由来するもの、及びカチオンと形成されるもの、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、第二鉄水酸化物、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等に由来するものが挙げられる。
本開示は、例えば、以下に関する。
［１］
ヒトＧタンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその断片は、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ：
（ａ）配列番号４２～４７のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２９～３４のアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号５４～５９のアミノ酸配列；又は
（ｄ）配列番号６８～７３のアミノ酸配列
を含む、抗体又はその抗原結合断片。
［２］
前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号４２～４７のアミノ酸配列を含む、前記［１］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［３］
前記ＶＨは、配列番号９及び４８～５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号１０及び５１～５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記［２］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［４］
前記ＶＨは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、前記［２］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［５］
前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号２９～３４のアミノ酸配列を含む、前記［１］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［６］
前記ＶＨは、配列番号７及び３５～３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８及び３８～４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記［５］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［７］
前記ＶＨは、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、前記［５］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［８］
前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号５４～５９のアミノ酸配列を含む、前記［１］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［９］
前記ＶＨは、配列番号６１～６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号１６及び６５～６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記［８］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１０］
前記ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、前記［８］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１１］
前記ＶＨは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、前記［８］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１２］
前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む、前記［１］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１３］
前記ＶＨは、配列番号１及び７４～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号２及び８０～８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記［１２］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１４］
前記ＶＨは、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、前記［１２］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１５］
前記ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、前記［１２］に記載の抗体又はその抗原結合断片。
［１６］
ヒト化されている、前記［１］～［１５］のいずれか一つに記載の抗体又はその断片。
［１７］
ＡＤＣＣコンピテントである、前記［１］～［１６］のいずれか一つに記載の抗体又はその断片。
［１８］
前記抗体又はその断片にコンジュゲートした細胞毒性薬物をさらに含む、前記［１］～［１６］のいずれか一つに記載の抗体又はその断片。
［１９］
前記［１］～［１６］のいずれか一つに記載の抗原結合断片、及び第２の標的タンパク質に対する特異性を有する第２の抗原結合断片を含む二重特異性抗体。
［２０］
前記第２の標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ６４、及び４－１ＢＢからなる群から選択される、前記［１９］に記載の二重特異性抗体。
［２１］
前記第２の標的タンパク質はＣＤ３である、前記［１９］に記載の二重特異性抗体。
［２２］
癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、前記患者に、前記［１］～［２１］のいずれか一つに記載の抗体又はその断片を投与することを含む方法。
［２３］
癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はマクロファージを、前記［１］～［２１］のいずれか一つに記載の抗体又はその断片によりインビトロ処理することと、（ｂ）処理した前記細胞を前記患者に投与することとを含む方法
［２４］
工程（ａ）の前に、前記Ｔ細胞、前記ＮＫ細胞、又は前記マクロファージを個体から単離することをさらに含む、前記［２３］に記載の方法。
［２５］
前記Ｔ細胞、前記ＮＫ細胞、又は前記マクロファージは、前記患者から単離されている、前記［２４］に記載の方法。
［２６］
前記Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はそれらの組合せである、前記［２３］に記載の方法。
［２７］
前記癌は血液癌である、前記［２２］～［２６］のいずれか一つに記載の方法。
［２８］
前記血液癌はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞癌である、前記［２７］に記載の方法。
［２９］
前記ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞癌は多発性骨髄腫である、前記［２８］に記載の方法。

Claims (29)

1. ヒトＧタンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその断片は、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ：
   （ａ）配列番号４２～４７のアミノ酸配列；
   （ｂ）配列番号２９～３４のアミノ酸配列；
   （ｃ）配列番号５４～５９のアミノ酸配列；又は
   （ｄ）配列番号６８～７３のアミノ酸配列
   を含む、抗体又はその抗原結合断片。
2. 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号４２～４７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
3. 前記ＶＨは、配列番号９及び４８～５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号１０及び５１～５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
4. 前記ＶＨは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
5. 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号２９～３４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
6. 前記ＶＨは、配列番号７及び３５～３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８及び３８～４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
7. 前記ＶＨは、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
8. 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号５４～５９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
9. 前記ＶＨは、配列番号６１～６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号１６及び６５～６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
10. 前記ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
11. 前記ＶＨは、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
12. 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号６８～７３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
13. 前記ＶＨは、配列番号１及び７４～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号２及び８０～８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
14. 前記ＶＨは、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
15. 前記ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
16. ヒト化されている、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
17. ＡＤＣＣコンピテントである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
18. 前記抗体又はその断片にコンジュゲートした細胞毒性薬物をさらに含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
19. 請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗原結合断片、及び第２の標的タンパク質に対する特異性を有する第２の抗原結合断片を含む二重特異性抗体。
20. 前記第２の標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ６４、及び４－１ＢＢからなる群から選択される、請求項１９に記載の二重特異性抗体。
21. 前記第２の標的タンパク質はＣＤ３である、請求項１９に記載の二重特異性抗体。
22. 癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、前記患者に、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を投与することを含む方法。
23. 癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、（ａ）Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はマクロファージを、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片によりインビトロ処理することと、（ｂ）処理した前記細胞を前記患者に投与することとを含む方法
24. 工程（ａ）の前に、前記Ｔ細胞、前記ＮＫ細胞、又は前記マクロファージを個体から単離することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
25. 前記Ｔ細胞、前記ＮＫ細胞、又は前記マクロファージは、前記患者から単離されている、請求項２４に記載の方法。
26. 前記Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はそれらの組合せである、請求項２３に記載の方法。
27. 前記癌は血液癌である、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記血液癌はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞癌である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞癌は多発性骨髄腫である、請求項２８に記載の方法。