JP7410141B2 - 抗クローディン－１８．２と抗４－１ｂｂとの二重特異性抗体およびその使用 - Google Patents

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１９年８月１２日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１９／１００１６２号、２０１９年９月５日に出願された第ＰＣＴ／ＣＮ２０１９／１０４５０８号、２０２０年１月１４日に出願された第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／０７１９５４号、２０２０年４月３０日に出願された第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／０８７９６８号の利益を主張し、それぞれの内容はここで、その全体が参照により引用される。

クローディンは、細胞間密着結合の重要な成分を形成するタンパク質のファミリである。クローディン－１８スプライスバリアント２（ＣＬＤＮ１８．２）は、胃特異的な膜タンパク質である。健康な組織において、ＣＬＤＮ１８．２は、抗体処置の到達性が限られている密着結合の成分として、胃粘膜の短命な分化した細胞において限定的に発現される。しかしながら、ＣＬＤＮ１８．２は、胃、膵臓、食道および肺の腺癌細胞を含む、上皮性腫瘍エンティティの様々な原発性病変および転移において有意なレベルで異所的に発現された。

４－１ＢＢ（ＣＤ１３７、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリ９）は、ＴＮＦ－受容体スーパーファミリ（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバであり、自然および適応免疫細胞の両方において、免疫細胞の活性化に続いて発現される共刺激分子である。４－１ＢＢは、様々な免疫細胞の活性を調節する際に重要な役割を果たす。４－１ＢＢアゴニストは、免疫細胞の増殖、生存期間、サイトカインの分泌、および細胞溶解活性ＣＤ８ Ｔ細胞を増強する。多くの他の検討によって、４－１ＢＢの活性化が、免疫応答を増強してマウスの腫瘍を排除することが示された。したがって、４－１ＢＢはがん免疫学において有望な標的分子であることが示唆された。

提供されるのは、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）および４－１ＢＢの両方を標的とする二重特異性抗体および多重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、本技術の抗体は、細胞上に発現されたＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２部分なしでは、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化できない「条件的アゴニスト（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ａｇｏｎｉｓｔ）」抗４－１ＢＢ部分を含む。

４－１ＢＢシグナル伝達の活性化は、ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）およびウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）などのアゴニスト抗体に関して予期される機構である。しかしながら、本発明で開示される抗体の抗４－１ＢＢ部分は、そのような活性を必要としない。実際には、本発明の抗体の抗４－１ＢＢ部分は、ＣＬＤＮ１８．２結合の非存在下で、独立して４－１ＢＢを活性化することができないことが好ましい。実証された実験例としては、興味深いことに、抗ＣＬＤＮ１８．２部分が細胞上のＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合するとき、そのようなＣＬＤＮ１８．２結合は４－１ＢＢシグナル伝達活性化を誘発し得る。

通常、オンターゲット用量制限毒性に関連付けられる公知の抗４－１ＢＢアゴニスト抗体と比較して、本開示の抗体ははるかに安全であることが企図される。ＣＬＤＮ１８．２が発現されていない肝臓などの組織において、本発明の抗体は、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができないために、細胞傷害性の免疫応答を誘発することは予期されない。それに対して、ＣＬＤＮ１８．２が発現されている、かつ／または到達可能である腫瘍組織においては、本発明の抗体は腫瘍細胞に対して強力な免疫応答を開始し得る。したがって、現在臨床的に開発されており、オンターゲット／固有の毒性を起こす抗４－１ＢＢ抗体とは違い、本発明で開示される抗体は、がん処置において、強力であり同時に安全であり得る。

Ａ～Ｃ 本開示において試験された３つの異なる二重特異性型を示す。

Ａ～Ｄ ４－１ＢＢおよびＣＬＤＮ１８．２結合に関するＥＬＩＳＡの結果を提示する。

細胞ベースの４－１ＢＢ結合を示す。

Ａ～Ｃ ＣＬＤＮ１８．２に関する結合の結果を示す。

Ａ～Ｄ ＣＬＤＮ１８．２依存的４－１ＢＢシグナル伝達活性化を示す。

Ａ～Ｅ ＣＬＤＮ１８．２発現細胞の存在下でのＰＢＭＣ応答を示す。

Ａ～Ｄ ＣＬＤＮ１８．２発現細胞の存在下でのＣＤ８＋Ｔ応答を示す。

Ａ～Ｂ 同系マウスモデルにおける抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体のインビボ効力、および腫瘍浸潤リンパ球に対するその影響のエクスビボ分析を示す。

Ａ～Ｃ 同系マウスモデルにおけるＣ－１Ａ１０二重特異性抗体のインビボ効力を示す。

同系マウスモデルにおける、Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０の用量依存的抗腫瘍効力を示す。

Ａ～Ｄ 同系マウスモデルにおける、Ｄ－１Ａ１０の薬物動態学的および薬力学的な関係を示す。

定義
用語「ａ（１つの）」または「ａｎ（１つの）」エンティティは、そのエンティティの１つまたは複数を指し、例えば、「ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（１つの抗体）」は、１つまたは複数の抗体を指すと理解されることに留意されるべきである。したがって、本明細書において、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたは複数の」、および「少なくとも１つ」という用語は、交換可能に使用することができる。

本明細書で用いられるように、「ポリペプチド」という用語は、単数形の「ポリペプチド」および複数形の「ポリペプチド」を包含することが意図され、アミド結合（ペプチド結合としても公知である）によって線状に連結されたモノマー（アミノ酸）で構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖または鎖（複数）を指し、生成物の特定の長さを指すものではない。したがって、「ペプチド」、「ジペプチド」、「トリペプチド」、「オリゴペプチド」、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖または鎖（複数）を指すために用いられる任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のうちのいずれかの代わりに、またはそれと交換可能に用いられてもよい。「ポリペプチド」という用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことが意図され、発現後修飾には、限定することなく、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾が含まれる。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来してもよく、または組換え技術によって生成されてもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは、化学合成による仕方を含む、任意の仕方で生成されてもよい。

細胞、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸に関して本明細書で用いられる「単離された」という用語はそれぞれ、巨大分子の天然供給源に存在する他のＤＮＡまたはＲＮＡから分離された分子を指す。本明細書で用いられる「単離された」という用語は、組換えＤＮＡ手法によって生成される場合、細胞物質、ウイルス性物質、もしくは培養培地を実質的に含まない、または化学的に合成される場合、化学的前駆体、もしくは他の化学物質を実質的に含まない、核酸またはペプチドを指す。さらに、「単離核酸」は、断片として天然に存在せず、天然状態で見出されることはない核酸断片を含むことが意図される。「単離された」という用語はまた、他の細胞タンパク質または組織から単離された細胞またはポリペプチドを指すために本明細書で使用される。単離されたポリペプチドは、精製されたポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含することが意図される。

本明細書で用いられるように、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに関係する「組換え」という用語は、天然に存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意味し、その非限定的な例は、通常一緒に生ずることのないポリヌクレオチドまたはポリペプチドを組み合わせることによって作製され得る。

「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチド間、または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的でアラインメントされていてもよい各配列における位置を比較することによって決定され得る。比較される配列における位置が同じ塩基またはアミノ酸によって占められている場合、分子はその位置において相同的である。配列間の相同性の度合いは、配列によって共有される一致するまたは相同的な位置の数の関数である。「関係のない」または「非相同」配列は、本開示の配列のうちの１つと、４０％より小さい同一性を共有するが、２５％より小さい同一性が好ましい。

ポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドもしくはポリペプチド領域）は、別の配列に対してある特定の割合（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）の配列同一性を有し、アラインメントされた場合、塩基（またはアミノ酸）の割合は２つの配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよび百分率相同性または配列同一性は、当技術分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．（２００７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙに記載のものを用いて決定され得る。好ましくは、アラインメントのためにデフォルトパラメータが使用される。１つのアラインメントプログラムは、デフォルトパラメータを使用する、ＢＬＡＳＴである。具体的には、プログラムは、以下のデフォルトパラメータ、Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ；ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ；ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ；ｃｕｔｏｆｆ＝６０；ｅｘｐｅｃｔ＝１０；Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；ｓｏｒｔ ｂｙ＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ，ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。生物学的に同等のポリヌクレオチドは、上に言及した特定された百分率相同性を有し、同じかまたは類似の生物学的活性を有するポリペプチドをコードするものである。

本明細書で用いられるように、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識し、その抗原に結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体、および任意の抗原結合断片、またはその単鎖であり得る。したがって、「抗体」という用語は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのようなものの例としては、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはそれらの任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも１つの部分が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で用いられる「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、例えばＦ（ａｂ'）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの、抗体の一部である。構造に関わらず、抗体断片は、無傷の抗体によって認識されるものと同じ抗原と結合する。「抗体断片」という用語は、アプタマ、シュピーゲルマ（Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）、および二特異性抗体を含む。「抗体断片」という用語はまた、特異的な抗原に結合し複合体を形成することによって抗体のように作用する、任意の合成された、または遺伝子操作されたタンパク質を含む。

「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、領域は、１０から約２５アミノ酸の短いリンカペプチドで接続されている。リンカは、柔軟性のためにグリシンが、可溶性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり得、Ｖ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端に、その逆も同様に、接続し得る。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカの導入にも関わらず、元の免疫グロブリンの特異性を維持する。ｓｃＦｖ分子は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号明細書において説明されている。

抗体という用語は、生化学的に区別することができる、様々で広範なクラスのポリペプチドを包含する。当業者には、重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）、およびそれらのうちのいくつかのサブクラス（例えば、γｌ～γ４）に分類されることが理解されるであろう。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥに決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５などは、十分に特徴付けられており、機能的な特殊化を付与することが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾型は、本開示を考慮すると当業者には容易に認識可能であり、したがって、本開示の範囲内である。すべての免疫グロブリンクラスは、明らかに本開示の範囲内であり、以下の議論は一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスを対象とする。ＩｇＧに関しては、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量が約２３，０００ダルトンである２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量が５３，０００～７０，０００である２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。これらの４つの鎖は典型的に、ジスルフィド結合によって「Ｙ」形状に結合されており、ここで、軽鎖は重鎖とひとまとめになり、「Ｙ」の入口から始まり可変領域を通して伸びる。

本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはその誘導体としては、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化、またはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'およびＦ（ａｂ'）_２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって産生される断片、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書で開示されるＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の免疫グロブリン分子または抗体分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ、およびＩｇＡ２）、または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。

軽鎖は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）いずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかと結合していてもよい。一般に、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成される場合、軽鎖および重鎖は、互いに対して共有結合しており、２つの重鎖の「尾」部分は、共有結合であるジスルフィド結合または非共有結合によって互いに対して結合している。重鎖においては、アミノ酸配列は、Ｙ形状の分岐した終端のＮ末端から各鎖の下部のＣ末端へ伸びている。

軽鎖および重鎖の両方は、構造的および機能的相同性の領域に分割されている。「定常」および「可変」という用語は、機能に関して用いられる。この関連で、軽鎖および重鎖部分両方の可変ドメイン（ＶＫ、ＶＨ）は、抗原認識および特異性を決定することが理解されるであろう。その反対に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＫ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）は、例えば、分泌、経胎盤性移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣例により、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端からより遠位になるにしたがって増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域である。ＣＨ３ドメインおよびＣＫドメインはそれぞれ実際に、重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。

上記に示したように、可変領域により、抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識し、それに特異的に結合することができる。換言すれば、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは、組み合わさって、３次元の抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この４次抗体構造は、Ｙの各アームの終端に存在している抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＫ鎖（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）のそれぞれ上の３つのＣＤＲによって画定されている。いくつかの事例、例えば、ラクダ科動物種由来の、またはラクダ科動物免疫グロブリンに基づいて操作された、ある特定の免疫グロブリン分子において、完全免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず重鎖のみからなっていてもよい。たとえば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）を参照されたい。

天然に存在する抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、短い非隣接のアミノ酸配列であり、これらは、抗体が水性環境においてその３次元構成をとる際、抗原結合ドメインを形成するように特異的に位置付けられる。抗原結合ドメインのアミノ酸の残りの部分は、「フレームワーク」領域と呼ばれ、分子間可変性をそれほど示さない。フレームワーク領域は、大部分はβシートコンフォメーションを採用し、ＣＤＲは、βシート構造に接続し、場合によってはβシート構造の一部を形成する、ループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合相互作用によってＣＤＲを正しい配向に位置付けすることを可能にする足場を形成するように働く。位置付けされたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに対して相補的な表面を画定する。この相補的表面は、抗体のその同族エピトープに対する非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域それぞれを含むアミノ酸は、正確に定義されているため、任意の重鎖または軽鎖可変領域に関して、当業者によって容易に同定され得る（"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，"Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照されたい）。

当技術分野内で用いられる、かつ／または許容される用語に２つ以上の定義がある場合、本明細書で用いられるその用語の定義は、すべてのそのような意味を含むことが意図されるが、その逆が明示的に述べられる場合はこの限りではない。具体的な例は、重鎖および軽鎖のポリペプチド両方の可変領域内に見出される非隣接の抗原結合部位を説明する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"（１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）によって説明されており、これらはその全体を参照により本明細書に引用される。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義は、互いに対して比較される際の、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含んでいる。しかしながら、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためにどちらの定義を適用しても、本明細書において定義され用いられる用語の範囲内であることが意図される。上記に引用した参考文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含する、適切なアミノ酸残基を、比較として以下の表に記載する。特定のＣＤＲを包含する正確な残基の数は、ＣＤＲの配列および大きさに依存して異なる。当業者は、抗体の可変領域のアミノ酸配列を考慮して、どの残基が特定のＣＤＲを含むのか、慣例的に決定することができる。

Ｋａｂａｔらはまた、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列のためのナンバリングシステムを定義した。当業者は、疑いの余地なく、配列そのもの以上の実験データに頼ることなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」のシステムを任意の可変ドメイン配列に割り当てることができる。本明細書で用いられるように、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、ＫａｂａｔらのＵ．Ｓ．Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"（１９８３）によって説明されているナンバリングシステムを指す。

上記の表に加えて、ＫａｂａｔナンバーシステムはＣＤＲ領域を以下のとおり説明する。ＣＤＲ－Ｈ１は、約３１番目のアミノ酸（すなわち、最初のシステイン残基から約９残基）で始まり、約５～７個のアミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端から１５番目の残基で始まり、約１６～１９個のアミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリジン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端から約３３番目のアミノ酸残基で始まり、３～２５個のアミノ酸を含み、配列Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇで終わり、式中、Ｘは任意のアミノ酸である。ＣＤＲ－Ｌ１は、約２４番目の残基（すなわち、システイン残基の後）で始まり、約１０～１７個の残基を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端から約１６番目の残基で始まり、約７個の残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端から約３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後）で始まり、約７～１１個の残基を含み、配列ＦまたはＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇで終わり、式中、Ｘは任意のアミノ酸である。

本明細書で開示される抗体は、鳥類および哺乳類を含む任意の動物の起源由来であってもよい。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの抗体である。別の実施形態において、可変領域がコンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）起源（例えば、サメ由来）であってもよい。

本明細書で用いられる「重鎖定常領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中間、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアントもしくは断片のうちの少なくとも１つを含む。例えば、本開示で使用される抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを有するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ２ドメインを有するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとＣＨ３ドメインとを有するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ３ドメインを有するポリペプチド鎖；またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを有するポリペプチド鎖を備えてもよい。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを有するポリペプチド鎖を備える。さらに、本開示で使用する抗体は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠いてもよい。上述したように、重鎖定常領域は、アミノ酸配列が天然に存在する免疫グロブリン分子とは異なるように修飾されてもよいことが当業者には理解されるであろう。

本明細書で開示される抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来してもよい。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ_ｌ分子に由来するＣＨ１ドメインおよびＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含んでもよい。別の例において、重鎖定常領域は、部分的にＩｇＧ_ｌ分子に由来し、かつ部分的にＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ_ｌ分子に由来し、かつ部分的にＩｇＧ_４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。

本明細書で用いられるように、「軽鎖定常領域」という用語は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうちの少なくとも１つを含む。

「軽鎖－重鎖対」は軽鎖と重鎖の集合を指し、これらは軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合によって二量体を形成することができる。

先に示したように、様々な免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および３次元構成は周知である。本明細書で用いられるように、「ＶＨドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端の可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖の第１の（最もアミノ末端の）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接しており、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端である。

本明細書で用いられるように、「ＣＨ２ドメイン」という用語は、従来のナンバリングスキームを用いて、例えば、抗体の約残基２４４から残基３６０まで延在する重鎖分子の部分を含む（残基２４４～３６０、Ｋａｂａｔナンバリングシステム；および残基２３１～３４０、ＥＵナンバリングシステム；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"（１９８３）を参照されたい）。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対になっていないという点で独特である。むしろ、２つのＮ連結分岐炭水化物鎖が、無傷の天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に挿入される。ＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで延在し、約１０８個の残基を含むことも文書で十分に立証されている。

本明細書で用いられるように、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、約２５個の残基を含み、かつ可動性があり、したがって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン：上部、中間、および下部のヒンジドメインにさらに分割することができる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。

「特異的に結合する」または「特異性を有する」によって、一般に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合することを意味し、結合が、抗原結合ドメインとエピトープとのある程度の相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、抗体は、ランダムな関係のないエピトープに結合するより容易に、抗体の抗原結合ドメインを介してエピトープに結合するときに、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、それによってある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を有するとみなすために、本明細書において用いられる。例えば、抗体「Ａ」は、任意のエピトープに対して抗体「Ｂ」より高い特異性を有すると見なされてもよく、または抗体「Ａ」は、関係のあるエピトープ「Ｄ」に対して有するより高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われてもよい。

本明細書で用いられるように、「処置する」または「処置」という用語は、治療的処置および予防的または防止的処置の両方を指し、ここで、その目的は、がんの進行などの、望ましくない生理学的な変化または障害を阻止するか、または遅らせる（弱める）ことである。有利なまたは望ましい臨床結果としては、検出可能であっても検出不可能であっても、症状の軽減、疾患の程度の減弱、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延または鈍化、疾患状態の回復または緩和、および寛解（部分または完全を問わず）が挙げられるが、これらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けていない場合の予測生存期間と比較して生存期間を延長することも意味し得る。処置を必要とする者には、病態もしくは障害を既に有している者、および病態もしくは障害を有する傾向のある者、または病態もしくは障害を予防する必要がある者が含まれる。

「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」によって、診断、予後、または治療が所望される任意の対象、特に、哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象としては、ヒト、飼育動物、農場動物、動物園動物、競技動物、またはペットの動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、乳牛などが挙げられる。

本明細書で用いられるように、「処置を必要とする患者」または「処置を必要とする対象」などの語句は、例えば検出のため、診断手順のため、および／または処置のために使用される、本開示の抗体または組成物の投与から恩恵を受けるであろう哺乳動物対象などの対象を含む。
抗クローディン－１８．２抗４－１ＢＢ抗体

４－１ＢＢは、活性化されたＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に発現された誘導性共刺激受容体である。Ｔ細胞上の４－１ＢＢリガンド（４１ＢＢＬ）三量体による４－１ＢＢ三量体のクラスタ形成は、抗アポトーシス性分子のアップレギュレーション、サイトカイン分泌、および増強されたエフェクタ機能をもたらすシグナル伝達カスケードを誘発する。ＮＫ細胞上では、４－１ＢＢシグナル伝達により抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を増加し得る。４－１ＢＢを標的とするアゴニストモノクローナル抗体は、がん免疫療法のために４－１ＢＢシグナル伝達を利用するために開発されてきた。様々な誘導性および自発性腫瘍モデルにおける前臨床結果において、アゴニスト抗体を用いて４－１ＢＢを標的とすることにより、腫瘍クリアランスおよび耐久性抗腫瘍免疫に至り得ることが示唆される。

２つのアゴニスト抗体、ウレルマブおよびウトミルマブは、現在、臨床試験されている。ウレルマブは強い効力を有するが、炎症性肝臓毒性を示した。肝臓毒性はオンターゲットであるように思われ、このことにより効力から分離されることが困難となる。ウトミルマブは、ウレルマブより比較的安全であるが、有効性がより低くもある。

本発明の実験例において、４－１ＢＢシグナル伝達を独立して活性化する能力がないことを理由に特に選択された２、３の抗４－１ＢＢ抗体を試験した。抗４－１ＢＢ抗体は、その単一特異性の形態において、４－１ＢＢ単独または細胞表面上の４－１ＢＢに結合し得る。しかしながら、細胞表面上の４－１ＢＢの結合によっては、４－１ＢＢシグナル伝達活性化に至らない（例えば、実施例３および図５を参照されたい）。

興味深いことに、これらの条件的アゴニスト４－１ＢＢ抗体、１Ａ１０のうちの１つの結合断片が、抗ＣＬＤＮ１８．２部分をさらに有する二重特異性抗体に組み込まれる場合、得られた二重特異性抗体は、ＣＬＤＮ１８．２結合依存的な仕方で、効率的に４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができた（実施例３および図５を参照されたい）。これらの試験された二重特異性抗体が、Ｎ２９７Ａ ＩｇＧ１ Ｆｃを用いてＦｃγＲ媒介４－１ＢＢアゴニズムを無効にすることは留意するに値する。したがって、４－１ＢＢシグナル伝達活性化は、ＣＬＤＮ１８．２結合にのみ帰することができる。

抗４－１ＢＢアゴニスト抗体、ウレルマブのオンターゲット毒性は、４－１ＢＢアゴニズムにおいて抗体が選択性を欠いていることに帰する。しかしながら、本技術の抗体は、この限定を克服する能力が容易に認識され得る。ＣＬＤＮ１８．２が発現されていない、または到達可能でない肝臓などの組織において、抗体は、４－１ＢＢ媒介細胞傷害を活性化することができないため、安全である。それに対して、ＣＬＤＮ１８．２が過剰発現されている、または到達可能な腫瘍組織において、抗体は、ＣＬＤＮ１８．２結合依存性４－１ＢＢシグナル伝達を活性化し、４－１ＢＢ媒介免疫細胞活性化に至り、それによって腫瘍が処置される。

したがって、本開示の一実施形態によれば、提供されるのは、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に対する結合特異性を有する抗クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）単位、および４－１ＢＢタンパク質に対する結合特異性を有する抗４－１ＢＢ単位を含む、抗体である。好ましい実施形態において、抗４－１ＢＢ単位は、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２単位の非存在下で４－１ＢＢタンパク質に結合したときに、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができない。

抗４－１ＢＢ部分の４－１ＢＢアゴニズムの欠如は、多くの異なる手段によって達成され得る。その活性化には細胞表面上の４－１ＢＢクラスタ形成が必要とされることが示唆されている。したがって、いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ単位の細胞上の４－１ＢＢタンパク質への結合は、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２単位の非存在下で、４－１ＢＢタンパク質のクラスタ形成をもたらさない。

４－１ＢＢタンパク質は、４つの細胞外システイン豊富偽反復ドメイン（ＣＲＤ）、ＣＲＤ１、ＣＲＤ２、ＣＲＤ３、およびＣＲＤ４を有する（以下の表のアミノ酸配列およびＣＲＤ領域を参照されたい）。ウレルマブは、Ｎ末端ＣＤＲ１に結合し、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）依存的な仕方で、４－１ＢＢクラスタ形成を活性化する。いくつかの実施形態において、本発明で開示される抗体の抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲ１に結合しない。いくつかの実施形態において、本発明で開示される抗体の抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲ２に結合する。いくつかの実施形態において、本発明で開示される抗体の抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲ３に結合する。いくつかの実施形態において、本発明で開示される抗体の抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲ４に結合する。

いくつかの事例において、４－１ＢＢクラスタ形成は、抗４－１ＢＢ抗体のエフェクタ機能によって媒介される場合がある。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、エフェクタ機能が低減されているか、またはエフェクタ機能を有しないＦｃ断片を有する。いくつかの実施形態において、そのようなエフェクタ機能、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）。

抗体のエフェクタ機能は、当技術分野で公知の手法を用いて改変することができる。いくつかの実施形態において、抗体のＦｃ断片は、ＦｃγＲへのその結合を低減または排除する仕方で、変異されるか、または製造される。いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）への結合が低減しているか、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）への結合を有しない、いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）への結合が低減しているか、またはＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）への結合を有しない、いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）への結合が低減しているか、またはＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）への結合を有しない、いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合が低減しているか、またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合を有しない、いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への結合が低減しているか、またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への結合を有しない。いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、Ｃ１ｑ（Ｃ１複合体の第１のサブコンポーネント）への結合が低減しているか、またはＣ１ｑへの結合を有しない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、Ｆｃ断片のＦｃγＲまたはＣ１ｑ結合を低減または排除する１つまたは複数の変異を含む。そのような変異の非限定的な例としては、ＩｇＧ１ Ｆｃ断片におけるＬ２３５Ｅ変異、ＩｇＧ１ Ｆｃ断片におけるＬ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異、ＩｇＧ１ Ｆｃ断片におけるＰ３２９Ｇ変異またはＰ３２９Ａ変異、ＩｇＧ４ Ｆｃ断片におけるＦ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異もしくはＬ２３５Ｅ変異、ＩｇＧ２ Ｆｃ断片におけるＨ２６８Ｑ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異、ならびにＩｇＧ２ Ｆｃ断片におけるＶ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異（ＥＵナンバリング）が挙げられる。

抗体のエフェクタ機能はまた、Ｆｃ断片のグリコシル化を減少させるか、または抑制することによって、低減され得る（例えば、非グリコシル化Ｆｃ断片）。いくつかの実施形態において、そのような減少または抑制は、抗体をグリコシル化することができない細胞株を使用することによって達成することができる。いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、変異されている。

そのような変異の非限定的な例としては、Ｎ２９７（Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、およびＮ２９７Ｑなど）（ＥＵナンバリング）での変異が挙げられる。いくつかの実施形態において、変異はＮ２９７Ａである。
抗体型および例となる配列

実験例において、３つの異なる二重特異性抗体型を試験した。それらの中で、図１のＡの型は、図１のＢおよび図１のＣのものより高い活性を示した。これらのデータは、本開示の抗体に適切な型が、抗ＣＬＤＮ１８．２部分のためにＦａｂ断片を用いてもよいことを示唆する。いくつかの実施形態において、型は、抗４－１ＢＢ部分のために単鎖断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ部分はＦａｂとＦｃ断片との間に位置しない。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、Ｆａｂ断片を、好ましくはＦａｂ断片の対を含む。いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ単位は、Ｆａｂ断片を、好ましくはＦａｂ断片の対を含む。いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ単位は、ｓｃＦｖを、好ましくはｓｃＦｖ断片の対を含む。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、抗４－１ＢＢ単位のＮ末端側に位置される。いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、抗ＣＬＤＮ１８．２単位と抗４－１ＢＢ単位との間に配置される。

例となるＣＤＲ配列およびＶＨ／ＶＬ配列も、抗ＣＬＤＮ１８．２単位および抗４－１ＢＢ単位に提供される。いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３、５６、５７、５８、もしくは５９のアミノ酸配列、または配列番号３、５６、５７、５８、もしくは５９からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４もしくは６０のアミノ酸配列、または配列番号４もしくは６０からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号５もしくは６１のアミノ酸配列、または配列番号５もしくは６１からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３は、配列番号６もしくは６２のアミノ酸配列、または配列番号６もしくは６２からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３、５６、５７、５８または５９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４または６０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号５または６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３は、配列番号６または６２のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗４－１ＢＢ単位は、配列番号２４、４６～５１および６３～６９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号２５、５２～５３および７０～７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を備える。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、（ｂ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、（ｃ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２単位のＶＨは、配列番号２６、２８、および３０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、抗ＣＬＤＮ１８．２単位のＶＬは、配列番号２７、２９、および３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、提供されるのは、図１のＡに例示されるような型を採用する二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、提供されるのは、２つの第１のポリペプチドおよび２つの第２のポリペプチドを備える抗体であり、各第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、重鎖可変領域（ＶＨ）、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および４－１ＢＢタンパク質に対して特異性を有する単鎖断片（ｓｃＦｖ）を有し、各第２のポリペプチドは、軽鎖可変領域（ＶＬ）、およびＣＬを有し、各ＶＨは、ＶＬのうちの１つと対になり、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）タンパク質に対して特異性を有し、ｓｃＦｖは、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合するＶＨ／ＶＬ対の非存在下で４－１ＢＢタンパク質に結合したときに、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができない。

ＶＨ／ＶＬ対はここで抗ＣＬＤＮ１８．２単位を構成し、ｓｃＦｖは抗４－１ＢＢ単位を構成する。ＣＨ２－ＣＨ３／ＣＨ２－ＣＨ３対は、Ｆｃ断片を構成する。抗ＣＬＤＮ１８．２単位、抗４－１ＢＢ単位、およびＦｃ断片に関する上述の様々な実施形態は、ここでも適用可能であってもよい。

以下の表は、第１のポリペプチド（重い成分）および第２のポリペプチド（軽い成分）の非限定的な例を提供する。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４１のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４３のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４５のアミノ酸配列を含む。

本明細書で開示される抗体は、抗体が由来した天然に存在する結合ポリペプチドとアミノ酸配列が異なるように修飾されてもよいことも当業者には理解されるであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は類似であってもよく、例えば、出発配列に対してある特定のパーセントの同一性を有し、例えば、出発配列に対して６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であってもよい。

特定の実施形態において、抗体は、通常は抗体と関連付けられていないアミノ酸配列または１つまたは複数の部分構造を含む。例示的な修飾は、より詳細に以下で説明される。例えば、本開示の抗体は、フレキシブルリンカ配列を含んでもよく、または機能性の部分構造（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒物、または標識）を追加するように修飾されてもよい。

本開示の抗体、バリアント、またはその誘導体は、修飾された誘導体、すなわち、共有結合が抗体がエピトープに結合することを阻止しないような、任意の種類の分子の抗体への共有結合によって、修飾された誘導体を含む。例えば、限定する目的ではないが、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって、抗体を修飾することができる。多数の化学修飾のうち任意のものは、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれらに限定されない公知の手法によって実行されてもよい。さらに、抗体は１つまたは複数の非古典的アミノ酸を含有してもよい。

いくつかの実施形態において、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬剤、またはＰＥＧに結合していてもよい。

抗体は、放射性標識、免疫調節物質、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、光活性診断剤、薬物または毒物であってもよい細胞傷害性薬剤、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当技術分野で公知のそのような他の薬剤などの検出可能な標識を含んでもよい治療剤に結合または融合していてもよい。

抗体は、それを化学発光化合物にカップリングすることによって検出可能に標識され得る。次いで、化学発光タグを付けた抗原結合ポリペプチドの存在は、化学反応の過程中に生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ塩エステルである。

抗体はまた、^１５２Ｅｕ、またはランタニド系列の他のものなどの蛍光発光金属を使用して検出可能に標識され得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート基を使用して抗体に結合され得る。様々な部分構造を抗体に結合させる手法は、周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ"，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，"Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ"，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，"Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ"，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ '８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；"Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ"，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５），ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，"Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ"，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照されたい。
抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体を調製する方法

本開示はまた、本開示の抗体、バリアント、またはその誘導体をコードする単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上の、または別々のポリヌクレオチド分子上の、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはその誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域全体をコードしてもよい。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上の、または別々のポリヌクレオチド分子上の、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはその誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の部分をコードしてもよい。

抗体を作製する方法は当技術分野で周知であり、本明細書で説明される。特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域および定常領域の両方は、完全にヒトである。完全にヒトである抗体は、当技術分野で説明される手法を用いて、および本明細書で説明されるように作製することができる。例えば、特異的な抗原に対する完全にヒトである抗体は、抗原投与に応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが内因性遺伝子座は無効にされたトランスジェニック動物に抗原を投与することによって調製することができる。そのような抗体を作製するために用いられ得る例示的な手法は、米国特許第６，１５０，５８４号明細書、同第６，４５８，５９２号明細書、同第６，４２０，１４０号明細書に説明されており、その全体を参照により引用される。
処置方法

本明細書で説明されるように、本開示の抗体、バリアント、または誘導体は、ある特定の処置および診断方法において用いられてもよい。

本開示はさらに、本明細書に記載される障害または病態のうち１つまたは複数を処置するために、動物、哺乳動物、およびヒトなどの患者に本開示の抗体を投与する段階を包含する抗体ベースの治療法を対象とする。本開示の治療用化合物としては、本開示の抗体（本明細書で説明されるバリアントおよびその誘導体を含む）、および本開示の抗体をコードする核酸またはポリヌクレオチド（本明細書で説明されるバリアントおよびその誘導体を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、提供されるのは、それを必要とする患者においてがんを処置するための方法である。一実施形態において、方法は、本開示の抗体の有効量を患者に投与する段階を伴う。いくつかの実施形態において、患者のがん細胞（例えば、間質細胞）のうちの少なくとも１つはクローディン１８．２を過剰発現する。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法などの細胞療法も本開示において提供される。本開示の抗体に接触される（または代替的に、本開示の抗体を発現するように操作された）適切な細胞が使用され得る。そのような接触または操作がされると、次いで、細胞は処置を必要とするがん患者に導入され得る。がん患者は本明細書で開示される種類のうちのいずれかのがんを有してもよい。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、限定されることなく、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。

いくつかの実施形態において、細胞は、がん患者自身から単離された。いくつかの実施形態において、細胞は、ドナーによって、または細胞バンクから提供された。細胞ががん患者から単離される場合、望ましくない免疫反応は最小限にされ得る。

がんの非限定的な例としては、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、および甲状腺癌が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは、胃癌、膵臓癌、食道癌、卵巣癌、および肺癌のうちの１つまたは複数である。

細胞生存の増加に関連付けられる、本開示の抗体もしくはバリアント、またはその誘導体で処置されても、予防されても、診断されても、かつ／または予測されてもよい追加の疾患または病態としては、白血病（急性白血病（例えば急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病を含む））および慢性白血病（例えば慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えばホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、ならびに線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽腫などの肉腫および癌腫を含むがこれらに限定されない固形腫瘍などの、悪性腫瘍および関連する障害の進行および／または転移が挙げられるが、これらに限定されない。

任意の特定の患者のための具体的な投与量および処置レジメンは、使用される特定の抗体、バリアントまたはその誘導体、患者の年齢、体重、総体的な健康、性別、および食習慣、ならびに投与時間、排出率、薬物の組み合わせ、および処置される特定の疾患の重症度を含む様々な因子に依存する。医療介護者がそのような因子を判断することは、当技術分野の通常の技術の範囲内である。量も、処置される個々の患者、投与経路、製剤の種類、用いられる化合物の特性、疾患の重症度、および所望の効果に依存する。使用量は、当技術分野で周知である薬理学的および薬物動態学的原理よって決定され得る。

抗体、バリアントの投与の方法としては、真皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、任意の簡便な経路、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚の内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜、腸管粘膜など）を介した吸収によって投与されてもよく、他の生物学的活性剤と一緒に投与されてもよい。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含有する医薬組成物は、経口的に、経直腸的に、非経口的に、大槽内に、腟内に、腹腔内に、局所的に（粉剤、軟膏剤、点滴剤、または経皮パッチによってのように）、頬側に、または経口もしくは鼻腔用噴霧剤として投与されてもよい。

本明細書で用いられるように、「非経口」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨下、皮下、および関節内注射および注入を含む投与の様式を指す。

投与は、全身性または局所的であり得る。さらに、脳室内および髄腔内注射を含む任意の適切な経路で中枢神経系へと本開示の抗体を導入することは望ましく、脳室内注射を、例えばオマヤレザバなどのレザバに取り付けられた脳室内カテーテルによって容易にしてもよい。経肺投与を、例えば吸入器または噴霧器、およびエアロゾル化剤を有する製剤を使用することによって用いることもできる。

本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、処置が必要な領域に局所的に投与することが望ましい場合があり、これは、限定する目的ではないが、例えば、外科手術中の局所的注入、局所適用（例えば外科手術後の創傷被覆材と併せて）、注射によって、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、または留置用剤を用いて達成されてもよく、上記留置用剤は、シラスティック膜などの膜、もしくは繊維を含む、多孔性、非多孔性、もしくはゼラチン状の物質である。好ましくは、本開示の抗体を含むタンパク質を投与する場合、タンパク質が吸収していかない材料を使用するように注意しなければならない。

炎症性、免疫性、または悪性の疾患、障害、または病態の処置、抑制、および予防において有効となる本開示の抗体の量は、標準的な臨床手法によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイを任意選択で用いて、最適な投与量範囲の同定を容易にしてもよい。製剤に用いられる厳密な用量はまた、投与経路、疾患、障害、または病態の重症度に依存し、施術者の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。有効量はインビトロまたは動物モデル試験システムに由来する用量反応曲線から推定されてもよい。

一般的な提案として、患者に投与される、本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、患者の体重に対して、０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、または、患者の体重に対して１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。一般的に、外来ポリペプチドに対する免疫応答に起因して、ヒト抗体は、他の種に由来する抗体よりヒトの体内での半減期が長い。したがって、ヒト抗体の投与量を少なくすること、および投与の頻度を少なくすることが、しばしば可能である。さらに、本開示の抗体の投与量および投与の頻度は、例えば脂質化などの修飾によって、抗体の（例えば脳への）摂取および組織透過性を増強することによって、低減されてもよい。

追加の実施形態において、本開示の組成物はサイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と組み合わせて投与されてもよいサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αであるが、これらに限定されない。

追加の実施形態において、本開示の組成物は、例えば、放射線照射療法などの他の治療または予防レジメンと組み合わせて投与される。
組成物

本開示はまた、医薬組成物を提供する。そのような組成物は、有効量の抗体、および許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。

特定の実施形態において、「薬学的に許容可能な」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されている、または動物およびより詳細にはヒトにおける使用に関して、米国薬局方もしくは一般に認識されている他の薬局方に収載されていることを意味する。さらに、「薬学的に許容可能な担体」は、一般に、非毒性の固体、半固体、もしくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、または任意の種類の製剤補助剤である。

「担体」という用語は、治療効果のあるものが共に投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または溶媒を指す。そのような医薬担体は、水、および石油、動物、野菜または合成起源のものを含む油、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油などの、滅菌液であり得る。医薬組成物が静脈内に投与される場合、水は好ましい担体である。生理食塩水およびデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液はまた、特に、注射用溶液のために、液体担体として用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、およびエタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤または乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩、もしくはリン酸塩などのｐＨ緩衝剤を含有することができる。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節のための剤も、想定される。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、および徐放性製剤などの形態をとることができる。組成物は、トリグリセリドなどの伝統的な結合剤および担体と共に坐剤として処方することができる。経口製剤は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。適切な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されており、当文献は参照により本明細書に引用される。そのような組成物は、患者に適切に投与するための形態を提供するために、好ましくは精製した形態で、適切な量の担体と一緒に、治療有効量の抗原結合ポリペプチドを含有する。製剤は、投与の様式に適ったものであるべきである。非経口調製物は、ガラスもしくは合成樹脂製のアンプル、使い捨て注射器、または複数回用量バイアルに密封され得る。

ある実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合させた医薬組成物として慣例的手順に従って処方される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張緩衝液水溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤、および注射部位における痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔剤を含んでもよい。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたは小袋などの密封された容器中の凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、個別にまたは単位剤形中に一緒に混合されて供給される。組成物が注入によって投与されることになる場合、医薬品グレードの滅菌水または生理食塩水を含有する注入瓶を用いて調剤することができる。組成物が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルは、成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。

本開示の化合物は、中性または塩の形態として処方され得る。薬学的に許容可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどの陰イオンを有して形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの陽イオンを有して形成されるものが挙げられる。

実施例１： 抗ＣＬＤＮ１８．２／４－１ＢＢ二重特異性抗体の生成
３つの先に同定された抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、４Ｆ１１Ｅ２、７２Ｃ１Ｂ６Ａ３、および１２０Ｂ７Ｂ２、ならびに抗４－１ＢＢ抗体、１Ａ１０（配列は以下の表に示される）を選択して、完全長ＩｇＧ×ｓｃＦｖ形態で、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体を生成した（図１のＡに例示される構造）。抗クローディン－１８．２部分を完全ＩｇＧ部位に配置し、一方で抗４－１ＢＢは、Ｆｃ断片のＣ末端側に配置されたｓｃＦｖであった。二重特異性抗体は、Ｆｃγ機能を無効にするためのＮ２９７Ａ変異を有するＩｇＧ１骨格を含んだ。

４Ｆ１１Ｅ２および１Ａ１０の配列も使用して、図１のＢおよび図１のＣにおいてそれぞれ例示されるように、２つの異なる型の二重特異性抗体を生成した。図１のＢの型において、抗クローディン－１８．２部分もＦａｂ型を取り、一方で抗４－１ＢＢ部分は、抗クローディン－１８．２ ＦａｂとＦｃ断片との間に挿入されたｓｃＦａｂ断片として提示された。ここでもＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ）を使用した。

図１のＣの型において、抗クローディン－１８．２部分は完全ＩｇＧ１に提示され、一方で抗４－１ＢＢ部分は、ＦｃのＣ末端側に配置されたｓｃＦａｂ断片であった。

予備試験において、図１のＢおよび図１のＣにおける型の二重特異性抗体は、４－１ＢＢ結合に関して図１のＡにおける型のものによって上回られた。したがって、型図１のＡのもののみに、以下に示すように追加の試験を行った。さらに、Ｅ－１Ａ１０は、Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０より強力さがわずかに劣り、したがって、これらもさらなる検討に含まなかった。
実施例２。抗ＣＬＤＮ１８．２／４－１ＢＢ二重特異性抗体の抗原結合

この実施例では、タンパク質ベースおよび細胞ベースのアッセイを使用して、実施例１の二重特異性抗体の、ＣＬＤＮ１８．２および４－１ＢＢに対する結合活性を評価した。
２．１ ４－１ＢＢに対するＥＬＩＳＡ結合

簡潔に説明すると、マイクロタイタプレートを、ＰＢＳに０．５μｇ／ｍｌで希釈された１００μｌのヒト４－１ＢＢ－Ｈｉｓタンパク質で一晩４℃でコーティングし、次いで、１００μｌ／ウェルの１％ＢＳＡでブロッキングした。１００ｎＭから始まる３倍希釈の抗体を、各ウェルに加え、室温で２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で結合されたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と共に室温で３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で現像し、プレートリーダによってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図２のＡに示すように、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体（Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０）は、抗４－１ＢＢモノクローナル抗体（１Ａ１０およびウレルマブ（ＢＭＵＲ））と匹敵する結合を示した。
２．２ ＣＬＤＮ１８．２に対するＥＬＩＳＡ結合

ＣＬＤＮ１８．２結合を試験するために、天然のコンフォメーションを模倣するウイルス様粒子（ＶＬＰ）においてＣＬＤＮ１８．２タンパク質を発現させた。同様に、マイクロタイタプレートを、ＰＢＳに３μｇ／ｍｌで希釈された１００μｌのＣＬＤＮ１８．２ ＶＬＰで一晩４℃でコーティングし、次いで、３００μｌ／ウェルの３％ＢＳＡでブロッキングした。１００ｎＭから始まる３倍希釈の抗体を、各ウェルに加え、３７℃で２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で結合されたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と共に室温で３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で現像し、プレートリーダによってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図２のＢに示すように、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体（Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０）は、抗ＣＬＤＮ１８．２モノクローナル抗体（Ｉ－ＭＡＢ３６２）より強い結合を示した。一方では、同じ実験設定において、ＣＬＤＮ１８．１タンパク質に対する結合も試験した。図２のＣに示すように、ＣＬＤＮ１８．１に対して交差反応性を示す抗体はなかった。
２．３ 二重抗原に対するＥＬＩＳＡ結合

抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体がＣＬＤＮ１８．２および４－１ＢＢに同時に結合することができることをさらに実証するために、ＤＡＣＥ（二重抗原捕獲ＥＬＩＳＡ（Ｄｕａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃａｐｔｕｒｅｄ ＥＬＩＳＡ））試験を実施した。簡潔に説明すると、マイクロタイタプレートを、ＰＢＳに３μｇ／ｍｌで希釈された１００μｌのＣＬＤＮ１８．２ ＶＬＰで一晩４℃でコーティングした。次いで、１００ｎＭから始まる３倍希釈の抗体を、各ウェルに加え、３７℃で２時間インキュベートした。洗浄後、次いでプレートを１μｇ／ｍｌの濃度の１００μｌのヒト４－１ＢＢビオチンタンパク質と共に３７℃で１時間、続いてストレプトアビジンＨＲＰと共に室温でさらに３０分間インキュベートした。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で現像し、プレートリーダによってＯＤ４５０ｎｍで分析した。図２のＤに示すように、Ｄ－１Ａ１０は、ｈＣＬＤＮ１８．２および４－１ＢＢに同時に結合することができる。それに対して、ＣＬＤＮ１８．２ ｍＡｂ ７２Ｃ１Ｂ６Ａ３は、このアッセイにおいてはシグナルを示さなかった。
２．４ ４－１ＢＢに対する細胞ベース結合

抗原結合特性を評価するために、４－１ＢＢが発現されたＨＥＫ２９３に対する結合に関して、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体をＦＡＣＳによって分析した。各ウェル中１×１０^５個のＨＥＫ２９３－４－１ＢＢ細胞の総数を、連続希釈した抗体と共に、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳに２％ＦＢＳ）中、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液によって洗浄した後、ＰＥ共役抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに加え、４℃で３０分間インキュベートした。洗浄後、ＦＡＣＳ ＣａｌｉｂｅｒによってＰＥのＭＦＩを評価した。図３に示すように、試験した抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体（Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０）は、モノクローナル抗体（１Ａ１０およびＢＭＵＲ）と匹敵する４－１ＢＢに対する濃度依存的な結合能を示した。
２．５ ＣＬＤＮ１８．２に対する細胞ベース結合

ＣＬＤＮ１８．２への結合能を評価するために、ヒトＣＬＤＮ１８．２を安定的に発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株を作製した。次いで、フローサイトメトリを用いて、ＣＨＯ－Ｃ１８．２細胞株を、高発現するもの（ＣＨＯ－Ｋ１Ｃ１８．２高）および低発現するもの（ＣＨＯ－Ｋ１Ｃ１８．２低）に関して選別した。ＣＨＯ－Ｋ１－Ｃ１８．２細胞を、連続希釈した抗体と共に、ＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液によって洗浄した後、ＰＥ共役抗ヒトＩｇＧ抗体を加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳによってＰＥのＭＦＩを評価した。図４のＡおよび図４のＢに示すように、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体は、ＣＬＤＮ１８．２が発現された細胞に濃度依存的な仕方で結合し、一方では、二重特異性抗体の両方は、現在臨床試験中の参照モノクローナル抗ＣＬＤＮ１８．２抗体であるＩＭＡＢ３６２より強い結合を示した。

ＳＮＵ６２０は内在性ＣＬＤＮ１８．２発現を有する胃癌細胞株である。図４のＣに示すように、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体は、ＳＮＵ６２０も結合することができた。
実施例３。抗ＣＬＤＮ１８．２／４－１ＢＢ二重特異性抗体の機能活性
３．１ ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体の細胞株ベースの機能特徴付け

二重特異性抗体が４－１ＢＢシグナルを促進する能力を試験するために、市販の４－１ＢＢアッセイを使用した。このアッセイにおいて、ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ（商標）ＮＦκＢ－ｌｕｃ２／４－１ＢＢ Ｊｕｒｋａｔ細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ＃ＣＳ１９６００４）をエフェクタ細胞として、およびＣＬＤＮ１８．２またはＳＮＵ６２０を発現するまたは発現しないＣＨＯ－Ｋ１を標的細胞として使用した。ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ（商標）ＮＦκＢ－ｌｕｃ２／４－１ＢＢ Ｊｕｒｋａｔ細胞株は、４－１ＢＢおよび応答エレメントの下流でルシフェラーゼを安定的に発現するように遺伝子修飾されている。ルシフェラーゼ発現は、抗体が４－１ＢＢ受容体に結合されると誘導される。簡潔には、ウェル当たり２．５×１０^４個の細胞の密度であるエフェクタ細胞を、白色９６ウェルプレートにおいて、２．５×１０^４個の標的細胞と混合した。６倍連続希釈した抗体を、１６．７ｎＭから０．２８ｆｍまでの範囲の最終濃度で白色９６ウェルアッセイプレートに加えた。３７℃で６時間インキュベーションしたあと、ルシフェラーゼの基質を加えることによって発光を得、マイクロプレートリーダ（ＰＨＥＲＡｓｔａｒ）によって測定した。４つのパラメータロジスティクス曲線分析を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて実施した。

図５に示すように、ＢＭＵＲモノクローナル抗体は、４１ＢＢシグナル伝達を用量依存的に高めることができ、一方で、１Ａ１０モノクローナル抗体は、同じ実験設定において、アゴニスト活性を有さなかった。抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体Ｄ－１Ａ１０およびＣ－１Ａ１０の活性は、ＣＬＤＮ１８．２の発現に依存的であった。
３．２ ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）免疫応答を促進するための二重特異性抗体の活性

二重特異性抗体がヒトＰＢＭＣ応答を刺激する能力を試験するために、サイトカイン産生アッセイを使用した。０．５μｇ／ｍｌのヒト抗ＣＤ３抗体で刺激したヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として使用した。ＣＬＤＮ１８．２発現ＣＨＯ－Ｋ１を標的細胞として使用した。ヒトＰＢＭＣ（１×１０^５個）を、ヒト抗ＣＤ３抗体の存在下、ＣＨＯ－Ｋ１－ＣＬＤＮ１８．２または対照ＣＨＯ－Ｋ１細胞（２．５×１０^４個）と共培養した。混合培養物に、連続希釈した二重特異性抗体を２０ｎＭから始まる最終濃度で加えた。４８時間後、ＩＬ－２（ヒト）ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キットおよびＩＦＮ－γ（ヒト）ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、培養培地中のＩＬ２およびＩＦＮ－γのレベルを測定した。図６に示すように、二重特異性抗体のみが、ＣＬＤＮ１８．２発現細胞の存在下でＰＢＭＣ応答を活性化することができる。

二重特異性抗体の活性がＣＬＤＮ１８．２レベルと相関していることをさらに実証するために、１ドナー由来のヒトＰＢＭＣを異なる胃腺癌（ＧＡ）ＰＤＸ由来細胞と共培養し、これが異なるレベルのＣ１８．２を発現することが証明された。混合培養物に、連続希釈した二重特異性抗体を２０ｎＭから始まる最終濃度で加えた。４８時間後、ＩＬ－２（ヒト）ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、培養培地中のＩＬ２のレベルを測定した。図６のＤおよび図６のＥに示すように、二重特異性抗体Ｄ－１Ａ１０の活性は、ＣＬＤＮ１８．２レベルと相関した。Ｄ－１Ａ１０は、ＣＬＤＮ１８．２が低発現から中発現された腫瘍においてさえＴ細胞を有効に活性化した。
３．３ ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞応答を促進するための二重特異性抗体の活性

二重特異性抗体がヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化における能力をさらに試験するために、ＰＢＭＣから単離されたヒトＣＤ８＋Ｔ細胞をエフェクタ細胞として使用した。ＣＬＤＮ１８．２を発現したＣＨＯ－Ｋ１またはＳＮＵ６２０を標的細胞として使用した。単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞（７．５×１０^４個）を、ヒト抗ＣＤ３抗体の存在下、標的細胞（２．５×１０^４個）と共培養した。混合培養物に、連続希釈した二重特異性抗体を２０ｎＭから始まる最終濃度で加えた。共培養の４８時間後、ＩＬ－２（ヒト）ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キットおよびＩＦＮ－γ（ヒト）ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、培養培地中のＩＬ２およびＩＦＮ－γのレベルを測定した。図７に示すように、二重特異性抗体Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０は、ＣＨＯ－Ｋ１を過剰発現しているＣ１８．２（図７のＡ～図７のＢ）、または内在的にＣ１８．２を発現するＳＮＵ６２０（図７のＣ～図７のＤ）の存在下、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ２およびＩＦＮ－γ両方の産生を増加させることができる。
実施例４。抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体による腫瘍増殖抑制

ヒト４－１ＢＢの細胞外ドメインを発現したヒト化マウスを使用した。マウス結腸腺癌細胞（ＭＣ３８）を操作してヒトＣＬＤＮ１８．２．を発現させた。ヒト化マウス（ｈ４－１ＢＢ）にＭＣ３８－ｈＣＬＤＮ１８．２細胞を皮下的に移植した。３日毎に５回、以下の抗体、アイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗４－１ＢＢ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＬＤＮ１８．２（１０ｍｇ／ｋｇ）と抗４－１ＢＢ（１０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、ならびに抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体（１３．３ｍｇ／ｋｇ）をマウスに腹腔内投与した。キャリパ測定法によって、実験の期間中週２回、腫瘍体積をモニタリングした。二重特異性抗体によって誘導された腫瘍増殖抑制は、各標的モノクローナル抗体の組み合わせより著しく大きく、図８に示される。抗体の機構をさらに理解するために、腫瘍浸潤リンパ球および末梢リンパ球を回収し、フローサイトメトリによってＣＤ３＋Ｔ細胞の割合を得るために分析した。結果は、二重特異性抗体が、腫瘍微小環境においてＣＤ３＋Ｔ細胞の数を特異的に増加させ得る一方で、末梢血には影響を与えないことを示した。

同じ動物モデルを使用する別の繰り返し実験において、インビボ効力をさらに証明した。図９のＡに、各群における各動物の腫瘍増殖曲線を示した。抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体（Ｃ－１Ａ１０）の腫瘍増殖抑制は、検討の終わりにおいて１０５％に達した。二重特異性の群の７匹のマウスのうち６匹は、１回目の処置後２５日目までに腫瘍なしとなった。

さらに、この実施例では、１回目の腫瘍接種の３５日後、反対側の側腹部にＭＣ３８－ｈＣＬＤＮ１８．２腫瘍細胞の２回目の用量を用いて、すべての抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ抗体（Ｃ－１Ａ１０）処置済み動物を再暴露させ、追加の処置をせずに腫瘍増殖をモニタリングした。結果は、ナイーブマウスにおいて腫瘍細胞は増殖し続けるが、すべてのＢｓＡｂ処置済みマウスは腫瘍再暴露に対して耐性があり、検討の終わりまで腫瘍なしと見なされることを示し（図９のＢ）、本発明の二重特異性抗体が、ＭＣ３８腫瘍に対して長期保護的免疫記憶を誘導し得ることを示唆した。同様に、マウスが同じ処置を受けたサテライト群（Ｎ＝３／群）において、抗体の２回目の用量の３日後、腫瘍を抽出して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を定量化した。ＣＤ４５^＋ＴＩＬおよびＣＤ８^＋ＴＩＬの割合は、ＢｓＡｂ処置群において、著しく高かった。それに対して、末梢リンパ球への効果はなかった（図９のＣ）。

抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢ二重特異性抗体の抗腫瘍効力をさらに評価するために、二重特異性抗体を異なる濃度で、ＭＣ３８－ｈＣＬＤＮ１８．２抗体を移植された４－１ＢＢヒト化マウスに与えた。３日毎に４回、以下の抗体、アイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ－１Ａ１０（１３．３ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ－１Ａ１０（２．６ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ－１Ａ１０（０．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ－１Ａ１０（１３．３ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ－１Ａ１０（２．６ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ－１Ａ１０（０．５ｍｇ／ｋｇ）をマウスに腹腔内投与した。キャリパ測定法によって、実験の期間中週２回、腫瘍体積をモニタリングした。図１０に示すように、Ｃ－１Ａ１０およびＤ－１Ａ１０両方は、用量依存的な仕方で腫瘍増殖を抑制することができた。

ヒト化マウス様式において、抗ＣＬＤＮ１８．２－４－１ＢＢの薬物動態学的（ＰＫ）および薬力学的関係を理解するために、３つの異なる濃度でＤ－１Ａ１０の単回投与を担腫瘍ヒト化マウスに与えた。血清濃度を様々な時間点で測定した。図１１に示すように、全体として、用量依存的なＰＫプロファイルを示した。そして、インビボ効力は用量レベルと相関した。エクスビボＴＩＬ分析は、ＣＤ８＋細胞およびＣＤ４５＋細胞の用量依存的な増加を示唆した。
実施例５。追加の条件的アゴニスト完全ヒト抗４－１ＢＢ抗体の試験

以下の抗４－１ＢＢ抗体を、高親和性で４－１ＢＢに結合し、結合したとき４－１ＢＢシグナル伝達を活性化しない能力に関して同定した。

５．１ ＥＬＩＳＡによって測定された抗原結合

抗原結合活性を評価するために、抗体に対してＥＬＩＳＡ試験を行った。簡潔に説明すると、マイクロタイタプレートを、０．１μｇ／ｍｌのヒト４－１ＢＢ－Ｆｃタンパク質のＰＢＳ溶液で１００μｌ／ウェルで一晩４℃でコーティングし、次いで、１００μｌ／ウェルの５％ＢＳＡでブロッキングした。１０μｇ／ｍｌから始まる５倍希釈の抗体を、各ウェルに加え、室温で１～２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で結合されたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体と共に室温で１時間インキュベートする。洗浄後、プレートをＴＭＢ基質で現像し、分光光度計によってＯＤ４５０～６３０ｎｍで分析した。試験された抗４－１ＢＢ抗体は、４－１ＢＢ結合能を示した。
５．２ ＦＡＣＳによって測定された細胞結合

抗原結合特性を評価するために、４－１ＢＢが発現された哺乳動物に対する結合に関して、候補抗体をＦＡＣＳによって分析した。簡潔に説明すると、４－１ＢＢ－Ｊｕｒｋａｔ細胞を抗体と共にインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳに１％ＢＳＡ）によって洗浄した後、ＦＩＴＣ抗ヒトＩｇＧ抗体を各ウェルに加え、４℃で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ ＣａｌｉｂｅｒによってＦＩＴＣのＭＦＩを評価した。試験された抗４－１ＢＢ抗体は、細胞表面上で発現する４－１ＢＢに対する結合能を示したし、哺乳動物細胞上で発現された４－１ＢＢに効率的に結合し得る。
５．３ ４－１ＢＢに関するタンパク質動態

抗体の結合動態を調べるために、この実施例では、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６を使用して、親和性ランキングを実施した。表５に示すように、試験された抗４－１ＢＢ抗体は、高い４－１ＢＢ結合親和性を有した。

本開示は、本開示の個々の態様の単一の例示として意図される、説明される特定の実施形態によって範囲を限定されるものではなく、機能的に同等であるいかなる組成物または方法も本開示の範囲内にある。本開示の方法および組成物において、様々な修正および変形が、本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく行われ得ることは、当業者に明らかとなろう。したがって、本開示は、修正および変形が添付の特許請求の範囲およびその同等物の範囲内にあることを条件として、本開示の修正および変形を包含することが意図される。

本明細書において言及されるすべての公報および特許出願は、各個別の公報または特許
出願が具体的にかつ個別に参照により引用されることを示された場合と同じ程度に、本明
細書において参照により引用される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に対する結合特異性を有する抗クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）単位と、
４－１ＢＢタンパク質に対する結合特異性を有する抗４－１ＢＢ単位とを含み、
前記抗４－１ＢＢ単位は、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の非存在下で４－１ＢＢタンパク質に結合したときに、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができない、
抗体。
（項目２）
前記抗４－１ＢＢ単位の細胞上の４－１ＢＢタンパク質への前記結合は、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する抗ＣＬＤＮ１８．２単位の非存在下で、前記４－１ＢＢタンパク質のクラスタ形成をもたらさない、項目１に記載の抗体。
（項目３）
低減されたエフェクタ機能を有するＦｃ断片をさらに含む、項目１または２に記載の抗体。
（項目４）
前記エフェクタ機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）である、項目３に記載の抗体。
（項目５）
前記Ｆｃ断片は、ＦｃγＲもしくはＣ１ｑへの結合が低減しているか、またはＦｃγＲもしくはＣ１ｑへの結合を有しない、項目４に記載の抗体。
（項目６）
前記Ｆｃ断片は、ＦｃγＲもしくはＣ１ｑ結合を低減するか、または排除する１つまたは複数の変異を有する、項目５に記載の抗体。
（項目７）
前記Ｆｃ断片は、
Ｌ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｐ３２９Ｇ変異またはＰ３２９Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｆ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異もしくはＬ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ４ Ｆｃ断片、
Ｈ２６８Ｑ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片、ならびに
Ｖ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片
からなる群より選択される、項目６に記載の抗体。
（項目８）
前記Ｆｃ断片は非グリコシル化されている、項目３に記載の抗体。
（項目９）
前記Ｆｃ断片は、グリコシル化を排除する変異を含む、項目８に記載の抗体。
（項目１０）
前記変異は、Ｎ２９７、任意選択でＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、またはＮ２９７Ｑにある、項目９に記載の抗体。
（項目１１）
前記Ｆｃ断片は、Ｎ２９７Ａの変異、またはＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの変異の組み合わせを含む、項目３に記載の抗体。
（項目１２）
前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位はＦａｂ断片を含む、項目１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１３）
前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位はＦａｂ断片の対を含む、項目１２に記載の抗体。
（項目１４）
前記抗４－１ＢＢ単位はＦａｂ断片または単鎖断片（ｓｃＦｖ）を含む、項目１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１５）
前記抗４－１ＢＢ単位はｓｃＦｖ断片の対を含む、項目１４に記載の抗体。
（項目１６）
前記ｓｃＦｖは、抗ＣＬＤＮ１８．２単位のＦｃ断片のＣ末端側にある、項目１４または１５に記載の抗体。
（項目１７）
前記抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３、５６、５７、５８、もしくは５９のアミノ酸配列、または配列番号３、５６、５７、５８、もしくは５９からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４もしくは６０のアミノ酸配列、または配列番号４もしくは６０からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号５もしくは６１のアミノ酸配列、または配列番号５もしくは６１からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号６もしくは６２のアミノ酸配列、または配列番号６もしくは６２からの１個または２個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
項目１～１６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１８）
前記抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３、５６、５７、５８または５９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４または６０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号５または６１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号６または６２のアミノ酸配列を含む、
項目１～１６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１９）
前記抗４－１ＢＢ単位は、配列番号２４、４６～５１および６３～６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号２５、５２～５３および６９～７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を備える、項目１～１８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２０）
前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、または
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、
項目１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２１）
前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＨは、配列番号２６、２８、および３０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＬは、配列番号２７、２９、および３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２０に記載の抗体。
（項目２２）
２つの第１のポリペプチドおよび２つの第２のポリペプチドを備える抗体であって、
各前記第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、重鎖可変領域（ＶＨ）、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および４－１ＢＢタンパク質に対して特異性を有する単鎖断片（ｓｃＦｖ）を有し、
各前記第２のポリペプチドは、軽鎖可変領域（ＶＬ）、およびＣＬを有し、
各前記ＶＨは、前記ＶＬのうちの１つと対になり、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）タンパク質に対して特異性を有し、
前記ｓｃＦｖは、ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に結合する前記ＶＨ／ＶＬ対の非存在下で４－１ＢＢタンパク質に結合したときに、４－１ＢＢシグナル伝達を活性化することができない、
抗体。
（項目２３）
前記ＣＨ２および前記ＣＨ３は、低減されたエフェクタ機能を有するＦｃ断片を構成する、項目２２に記載の抗体。
（項目２４）
前記Ｆｃ断片は、
Ｌ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｐ３２９Ｇ変異またはＰ３２９Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
Ｆ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異もしくはＬ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ４ Ｆｃ断片、
Ｈ２６８Ｑ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片、ならびに
Ｖ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片からなる群より選択される、
項目２３に記載の抗体。
（項目２５）
前記Ｆｃ断片は、Ｎ２９７、任意選択でＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、またはＮ２９７Ｑに変異を含む、項目２３に記載の抗体。
（項目２６）
前記ｓｃＦｖは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３、５６、５７、５８または５９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４または６０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号５または６１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号６または６２のアミノ酸配列を含む、
項目２２～２５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２７）
前記ｓｃＦｖは、配列番号２４、４６～５１および６３～６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号２５、５２～５３および６９～７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を備える、項目２２～２６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２８）
前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＨは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＬは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、または
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、
項目２２～２７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２９）
前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＨは、配列番号２６、２８、および３０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＬは、配列番号２７、２９、および３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２７に記載の抗体。
（項目３０）
前記第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４１のアミノ酸配列を含む、項目２２に記載の抗体。
（項目３１）
前記第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４２のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４３のアミノ酸配列を含む、項目２２に記載の抗体。
（項目３２）
前記第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４４のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４５のアミノ酸配列を含む、項目２２に記載の抗体。
（項目３３）
項目１～３２のいずれか一項に記載の抗体をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチド。
（項目３４）
項目１～３２のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
（項目３５）
がんを処置するための薬剤の調製のための、項目１～３２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
（項目３６）
それを必要とする患者においてがんを処置するための方法であって、項目１～３２のいずれか一項に記載の抗体を前記患者に投与する段階を含む方法。
（項目３７）
前記がんは、対応する正常細胞と比較してＣＬＤＮ１８．２を過剰発現するがん細胞によって特徴付けられる、項目３５に記載の使用または項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記がんは上皮性腫瘍である、または前記がんは、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、および甲状腺癌からなる群より選択される、項目３５または項目３７に記載の使用、または項目３６または項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記がんは、胃癌、膵臓癌、食道癌、肺癌、および卵巣癌からなる群より選択される、項目３５または項目３７に記載の使用、または項目３６または項目３７に記載の方法。

Claims (37)

1. ＣＬＤＮ１８．２タンパク質に対する結合特異性を有する抗クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）単位と、
   ４－１ＢＢタンパク質に対する結合特異性を有する抗４－１ＢＢ単位と
   を含む抗体であって、
   前記抗４－１ＢＢ単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
   前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、
   抗体であって、ここで、
   抗ＣＬＤＮ１８．２単位は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有するＶＨと、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有するＶＬとを備え、ここで、
   （ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、そして
   前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
   （ｂ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、
   前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、そして、
   前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、
   抗体。
2. 低減されたエフェクタ機能を有するＦｃ断片をさらに含む、請求項１に記載の抗体。
3. 前記エフェクタ機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）である、請求項２に記載の抗体。
4. 前記Ｆｃ断片は、ＦｃγＲもしくはＣ１ｑへの結合が低減しているか、またはＦｃγＲもしくはＣ１ｑへの結合を有しない、請求項３に記載の抗体。
5. 前記Ｆｃ断片は、ＦｃγＲもしくはＣ１ｑ結合を低減するか、または排除する１つまたは複数の変異を有する、請求項４に記載の抗体。
6. 前記Ｆｃ断片は、
   Ｌ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
   Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
   Ｐ３２９Ｇ変異またはＰ３２９Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
   Ｆ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異もしくはＬ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ４ Ｆｃ断片、
   Ｈ２６８Ｑ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片、ならびに
   Ｖ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片
   からなる群より選択される、請求項５に記載の抗体。
7. 前記Ｆｃ断片は非グリコシル化されている、請求項２に記載の抗体。
8. 前記Ｆｃ断片は、グリコシル化を排除する変異を含む、請求項７に記載の抗体。
9. 前記変異は、Ｎ２９７、任意選択でＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、またはＮ２９７Ｑにある、請求項８に記載の抗体。
10. 前記Ｆｃ断片は、Ｎ２９７Ａの変異、またはＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの変異の組み合わせを含む、請求項２に記載の抗体。
11. 前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位はＦａｂ断片を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
12. 前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位はＦａｂ断片の対を含む、請求項１１に記載の抗体。
13. 前記抗４－１ＢＢ単位はＦａｂ断片または単鎖断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
14. 前記抗４－１ＢＢ単位はｓｃＦｖ断片の対を含む、請求項１３に記載の抗体。
15. 前記ｓｃＦｖは、抗ＣＬＤＮ１８．２単位のＦｃ断片のＣ末端側にある、請求項１３または１４に記載の抗体。
16. 前記抗４－１ＢＢ単位は、配列番号２４、４７、および６４～６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号２５、５２～５３および６９～７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を備える、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
17. 前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＨは、配列番号２６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＬは、配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の抗体。
18. 前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＨは、配列番号２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＬＤＮ１８．２単位の前記ＶＬは、配列番号２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の抗体。
19. ２つの第１のポリペプチドおよび２つの第２のポリペプチドを備える抗体であって、
    各前記第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、重鎖可変領域（ＶＨ）、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および４－１ＢＢタンパク質に対して特異性を有する単鎖断片（ｓｃＦｖ）を有し、
    各前記第２のポリペプチドは、軽鎖可変領域（ＶＬ）、およびＣＬを有し、
    各前記ＶＨは、前記ＶＬのうちの１つと対になり、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）タンパク質に対して特異性を有し、
    前記ｓｃＦｖは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを備え、
    前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、
    抗体であって、ここで、前記ＶＨは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有し、ＶＬは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有し、ここで、
    （ａ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、そして
    前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または
    （ｂ）前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、そして、
    前記ＣＤＲＬ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、
    抗体。
20. 前記ＣＨ２および前記ＣＨ３は、低減されたエフェクタ機能を有するＦｃ断片を構成する、請求項１９に記載の抗体。
21. 前記Ｆｃ断片は、
    Ｌ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
    Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
    Ｐ３２９Ｇ変異またはＰ３２９Ａ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃ断片、
    Ｆ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異もしくはＬ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ４ Ｆｃ断片、
    Ｈ２６８Ｑ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片、ならびに
    Ｖ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、および／またはＰ３３１Ｓ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ２ Ｆｃ断片からなる群より選択される、
    請求項２０に記載の抗体。
22. 前記Ｆｃ断片は、Ｎ２９７、任意選択でＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、またはＮ２９７Ｑに変異を含む、請求項２０に記載の抗体。
23. 前記ｓｃＦｖは、配列番号２４、４７、および６４～６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号２５、５２～５３および６９～７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を備える、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の抗体。
24. 前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＨは、配列番号２６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＬは、配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の抗体。
25. 前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＨは、配列番号２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ／ＶＬ対の前記ＶＬは、配列番号２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の抗体。
26. 前記第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の抗体。
27. 前記第１のポリペプチドのそれぞれは配列番号４２のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドのそれぞれは配列番号４３のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の抗体。
28. 請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチド。
29. 請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
30. がんを処置するための薬剤の調製のための、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体の使用。
31. それを必要とする患者においてがんを処置するための組成物であって、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体を含む、組成物。
32. 前記がんは、対応する正常細胞と比較してＣＬＤＮ１８．２を過剰発現するがん細胞によって特徴付けられる、請求項３０に記載の使用。
33. 前記がんは上皮性腫瘍である、または前記がんは、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、および甲状腺癌からなる群より選択される、請求項３０または請求項３２に記載の使用。
34. 前記がんは、胃癌、膵臓癌、食道癌、肺癌、および卵巣癌からなる群より選択される、請求項３０または請求項３２に記載の使用。
35. 前記がんは、対応する正常細胞と比較してＣＬＤＮ１８．２を過剰発現するがん細胞によって特徴付けられる、請求項３１に記載の組成物。
36. 前記がんは上皮性腫瘍である、または前記がんは、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、頭頚部癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、および甲状腺癌からなる群より選択される、請求項３１または請求項３５に記載の組成物。
37. 前記がんは、胃癌、膵臓癌、食道癌、肺癌、および卵巣癌からなる群より選択される、請求項３１または請求項３５に記載の組成物。

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