JP2024500103A

JP2024500103A - ヒトａｐｐまたはヒト化ａｐｐと変異型ヒトｐｓｅｎ１とを発現する遺伝子改変免疫不全マウス

Info

Publication number: JP2024500103A
Application number: JP2023536431A
Authority: JP
Inventors: ガレスハウエル，; クリステンオノス，
Original assignee: Jackson Laboratory
Current assignee: Jackson Laboratory
Priority date: 2020-12-16
Filing date: 2021-12-14
Publication date: 2024-01-04
Also published as: WO2022132768A1; CA3205386A1; EP4262372A1; AU2021402944A1; US20240065237A1

Abstract

本開示は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸を含み、一部のモデルにおいては、変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）をコードする核酸をさらに含む、免疫不全マウスモデルを提供する。これらのマウスモデルは、例えば、アルツハイマー病研究のために有用である。したがって、本開示の一部の局面は、マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異と、マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異と、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸とをそのゲノム中に含む、免疫無防備状態マウスを提供する。

Description

（関連出願）
本出願は、２０２０年１２月１６日に出願された米国仮出願番号６３／１２６，４５７の米国特許法第１１９条（ｅ）のもとでの利益を主張し、この仮出願は、本明細書においてその全体が参照によって援用される。

（背景）
ヒトプレセニリン１（ＰＳＥＮ１）の発現を伴うかまたは伴わない、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を発現するトランスジェニックマウスモデルが、インビボでアルツハイマー病（ＡＤ）を研究するために広範に使用されており、ヒト患者におけるこの疾患の病因のより良い理解が得られている。それにも関わらず、そのようなモデルは、ＡＤにおいて生じる広範囲の神経変性および局所的脳萎縮を、しばしば不十分にしか再現しない（Ｄｒｕｍｍｏｎｄら、ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、２０１７Ｆｅｂ；１３３（２）：１５５～１７５）。さらに、そのようなモデルは、バックグラウンドを越えて神経炎症の劇的な差を示す。例えば、ある１つのマウスモデルにおけるミクログリアの反応は鈍くなり、そのマウスは疾患に関連するミクログリアを欠いており、一方、別のマウスモデルは、強固なミクログリアの反応を示す。ＡＰＰを発現するなお他のトランスジェニック免疫不全マウスモデルは、ＡＤ研究のためには不十分である。その理由は、それらは、大きな腫瘍負荷を発生し、８か月齢を超えるまで年をとることができないからである（Ｅｓｐｕｎｙ－Ｃａｍａｃｈｏら、Ｎｅｕｒｏｎ、２０１７；９３（５）：１０６６～８１）。

Ｄｒｕｍｍｏｎｄら、ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．（２０１７）１３３（２）：１５５～１７５Ｅｓｐｕｎｙ－Ｃａｍａｃｈｏら、Ｎｅｕｒｏｎ（２０１７）９３（５）：１０６６～８１

（概要）
本開示は、一部の局面において、アルツハイマー病（ＡＤ）の改善された免疫不全マウスモデルを提供する。一部の実施形態において、ＡＤの免疫不全マウスモデルは、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を発現する。他の実施形態において、ＡＤの免疫不全マウスモデルはまた、変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１、これはまたＰＳＥＮ１とも略される）も発現する。他のＡＤマウスモデルとは異なり、本明細書において提供されるモデルは、大きな腫瘍負荷（しばしば、約７～８か月での死亡と関連する）を発生せず、したがって、それらは、ＡＤの発症および進行に関する特定の機構を研究するためにより適切な時点まで年をとり得る。免疫不全バックグラウンドでのＡＤのモデル化は、アミロイドとの免疫相互作用を研究するためのプラットフォームを可能にし、例えば、免疫低下が短期記憶にどのように影響を与えるか、ならびに／または免疫低下が海馬プラーク沈着物および皮質プラーク沈着物の発生にどのように影響を与えるかに対する洞察を提供する。

本明細書において提供されるマウスモデルは、適応免疫が、アミロイドに反応して脳における神経炎症を調節することによって、ＡＤの病因においてある役割を有するという理論に、少なくとも部分的に基づく。２段階アプローチを使用して適応免疫を破壊することによって、この理論を試験した。ヒト化ＡＰＰと変異型ＰＳＥＮ１とを発現する非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスを、まず作製した（「ＮＯＤ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１」モデル）。その後、このＮＯＤ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１モデルをＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ（商標））マウスモデルと交雑させて、ヒト化ＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する新規な免疫不全マウスモデル（「ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１」モデル）を作製した。

したがって、本開示の一部の局面は、マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異と、マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異と、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸とをそのゲノム中に含む、免疫無防備状態マウスを提供する。

一部の実施形態において、そのマウスは、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）遺伝的バックグラウンドを有する。一部の実施形態において、そのマウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異はヌル変異である。例えば、そのヌル変異は、Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異であり得る。一部の実施形態において、そのマウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異はヌル変異である。例えば、そのヌル変異は、Ｉｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異であり得る。一部の実施形態において、そのマウスは、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ遺伝的バックグラウンドを有する。別の例として、そのヌル変異は、Ｉｌ２ｒｇ^{ｅｍ２６Ｃｄ２２}変異であり得る。一部の実施形態において、そのマウスは、ＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃ^{ｅｍ２６Ｃｄ５２}Ｉｌ２ｒｇ^{ｅｍ２６Ｃｄ２２}／ＮｊｕＣｒｌ遺伝的バックグラウンドを有する。

一部の実施形態において、そのマウスは、ヒト化ＡＰＰをコードする核酸を含む。例えば、そのヒト化ＡＰＰをコードする核酸は、マウスコード配列とヒトコード配列とを含むキメラ核酸であり得る。一部の実施形態において、そのキメラ核酸は、マウスＡＰＰコード配列のＡ－βドメイン中にヒトコード配列を含む。一部の実施形態において、そのキメラ核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＡＰＰと比較して、ヒト変異Ｋ５９５Ｎおよびヒト変異Ｍ５９６Ｌをコードする。一部の実施形態において、そのマウスは、ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子をそのゲノム中に含む。

一部の実施形態において、そのマウスは、変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）をコードする核酸をそのゲノム中にさらに含む。変異型ＰＳＥＮ１をコードする核酸は、例えば、エクソン９における欠失を含むヒトＰＳＥＮ１コード配列を含み得る。一部の実施形態において、そのマウスは、ＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子をそのゲノム中に含む。一部の実施形態において、そのマウスは、Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄｅ９）８５Ｄｂｏ導入遺伝子挿入をそのゲノム中に含む。

一部の実施形態において、そのマウスは、早期発症型アルツハイマー病の特徴を有する。例えば、その早期発症型アルツハイマー病の特徴は、対照と比較した認知欠損、対照と比較して増加した海馬プラーク沈着物、および対照と比較して増加した脳における神経炎症から選択され得る。

一部の実施形態において、そのマウスは、腫瘍を発生しない（測定可能な腫瘍負荷を有しない）。

本開示の一部の局面は、測定可能な腫瘍負荷を有しない、ヒトＡＰＰをコードする核酸またはヒト化ＡＰＰをコードする核酸を含む免疫無防備状態マウスを提供する。

本開示の他の局面は、少なくとも１歳（例えば、少なくとも１２か月齢、１８か月齢、または２４か月齢）である、ヒトＡＰＰをコードする核酸またはヒト化ＡＰＰをコードする核酸を含む免疫無防備状態マウスを提供する。

本開示のさらに他の局面は、Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異とＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子とＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子とをそのゲノム中に含む、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスを提供する。

一部の局面において、上記段落のいずれか一つに記載のマウスに由来する細胞もまた、本明細書において提供される。

一部の局面において、上記段落のいずれか一つに記載のマウスに由来する細胞と同じ遺伝子型を有する細胞を含む、マウスが、本明細書においてさらに提供される。

上記段落のいずれか一つに記載のマウスの子孫マウスもまた、一部の局面において、本明細書において提供される。

本開示の一部の局面は、上記段落のいずれか一つに記載のマウスを作製する工程を含む、方法を提供する。

本開示の他の局面は、マウスＰｒｋｄｃ遺伝子におけるヌル変異、マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子におけるヌル変異、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸、および変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）をコードする核酸を、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスに導入する工程を含む、方法を提供する。

本開示のなお他の局面は、Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異、Ｉｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異、ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子、およびＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子を、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスに導入する工程を含む、方法を提供する。

本開示のさらなる局面は、（ａ）（ｉ）マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異と（ｉｉ）マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異とを含むＮＯＤマウスを、（ｂ）（ｉ）ヒトＡＰＰをコードする核酸またはヒト化ＡＰＰをコードする核酸と（ｉｉ）変異型ヒトＰＳＥＮ１をコードする核酸とを含むＮＯＤマウスに交配させて、早期発症型アルツハイマー病の特徴を有する免疫無防備状態子孫マウスを作製する工程を含む、方法を提供する。

さらになお、本開示は、一部の局面において、（ａ）Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異とを含む非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスを、（ｂ）ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子とＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子とを含むＮＯＤマウスに交配させる工程を含む、方法を提供する。

図１は、短期記憶のＹ迷路課題である新規空間認識に関する７か月齢の雄ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスおよび雌ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの両方の認知評価の結果を描くグラフを示す。インタクトな短期記憶は、その動物が新規アームにおいてより高い割合の時間を費やす場合に示される。

図２は、１％チオフラビンＳ染色（１：１の水：エタノール比で希釈した）を使用したアミロイド沈着評価の結果を描く免疫蛍光画像を示す。これらの画像は、ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスにおいてプラークが主に海馬に限定され、皮質沈着物が最小限であったことを示した。

図３は、神経炎症（例えば、ミクログリア活性化およびアストロサイト反応性）のマーカーによる染色の結果を描く免疫蛍光画像を示し、これは、適応免疫障害にも関わらず、ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１が依然としてアミロイドに反応して脳における強固な神経炎症を示すことを実証する。

（詳細な説明）
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な原因である。ＡＤは、現在３，５００万人を冒しており、その世界的蔓延は、人口の加齢が原因で２０５０年までに１億１，５００万人に到達すると予想される。ＡＤは、症状発現前、軽度認知障害（ＭＣＩ）、および認知症という、３つの段階を通って進行する。ＭＣＩを有するヒトが認知欠損を有するが機能障害は有しない一方で、認知症を有するヒトは、２つ以上の認知領域の衰えを示し、この衰えは、仕事または日常の活動での機能が損なわれる程度へと徐々に進行した。病理学的には、ヒトにおけるＡＤ診断は、脳におけるタンパク質凝集物（アミロイドβ（Ａβ）ペプチドから構成されるアミロイドプラークおよび過剰リン酸化タウから構成される神経原線維変化（ＮＦＴ）を含む）に基づく。ヒトにおいて、プラーク病態の初期空間分布（最初に海馬で生じるプラーク病態を含む）は、認知症の診断と強く相関する。

ＡＤのマウスモデルは、既存の方法はいずれもＡＤの全範囲の臨床的特徴および病理的特徴（認知欠損および行動欠損、アミロイドプラーク、神経原線維変化、神経膠症、シナプス喪失、軸索障害、ニューロン喪失、および神経変性を含む）を示していない（Ｈａｌｌら、２０１２）という点で、制限されている。重要なことに、種々のマウスモデルが、種々の程度のＡＤ表現型を提供する。例えば、認知欠損およびアミロイドプラークなどの表現型は、ＡＤのマウスモデルのほぼすべてにおいて観察されるが、しかし、ＡＤのヒト病態はまだ再現されていない。Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルにおいて、例えば、海馬および強固な皮質でのプラーク沈着が早期の時点で観察され、これは、プラークが主に海馬に限定されるヒト病態とは対照的である。Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルとは異なり、本開示のマウスモデル（免疫不全バックグラウンドでのＡＤのモデル）は、海馬における同様のアミロイドプラーク沈着と最小限の皮質沈着物を示し、これは、ヒトのＡＤ病態とより密接に似ている。さらに、本開示のマウスモデルは、アミロイドとの免疫相互作用を研究するためのプラットフォームを可能にし、免疫低下が短期記憶にどのように影響を与えるか、および／または免疫低下が認知欠損にどのように影響を与えるかに対する洞察を提供する。

一部の実施形態において、本開示は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を含み、一部の実施形態においては、変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）を含む、免疫不全マウスモデル（例えば、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）（例えば、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ（商標）））マウスモデル）を提供する。

（アミロイド前駆体タンパク質）
アミロイド前駆体タンパク質は、アミロイドβ（Ａβ）（アミロイドプラークの主要成分）へと切断される１回（Ｉ型）膜貫通前駆体タンパク質であり、早期発症型アルツハイマー病と関連がある。キメラマウス／ヒトアミロイド前駆体タンパク質をノックインすると、ヒトアミロイドβ（Ａβ）ペプチドの分泌をもたらし得る。一部の実施形態において、マウスモデルは、マウスＡＰＰコード配列のＡ－βドメイン中にヒトコード配列を含むキメラ核酸を含む。一部の実施形態において、そのキメラ核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＡＰＰに対して、ヒトスウェーデン変異であるＫ５９５ＮおよびＭ５９６Ｌをコードする。含まれたスウェーデン変異（Ｋ５９５ＮおよびＭ５９６Ｌ）は、βセクレターゼ経路を介するプロセシングを支持することによって、導入遺伝子から生成されるＡβの量を増加する（Ｓｈｉｎら、２０１０）。一部の実施形態において、そのキメラ核酸はＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子であり、それは、スウェーデン変異であるＫ５９５ＮおよびＭ５９６Ｌを含むキメラアミロイドβ（Ａ４）前駆体タンパク質をコードする（ＪＡＸストック番号０２５９７０）。

（プレセニリン１）
プレセニリン１（ＰＳＥＮ１）は、アミロイドβペプチドを生じるＡＰＰの切断に関与するガンマ（γ－）セクレターゼ複合体のサブユニットである。変異型ヒトプレセニリン１と、ヒトＡＰＰ導入遺伝子またはヒト化ＡＰＰ導入遺伝子とを発現するマウスモデルは、早期発症型アルツハイマー病に関連がある。一部の実施形態において、変異型ＰＳＥＮ１をコードする核酸は、エクソン９における欠失（ΔＥ９）を含むヒトＰＳＥＮ１コード配列を含む（ＪＡＸストック番号０２５９７０）。一部の実施形態において、その核酸は、ＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子である。一部の実施形態において、そのＰＳＥＮ１ｄｅ９導入遺伝子は、Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄｅ９）８５Ｄｂｏ導入遺伝子挿入（ＪＡＸストック番号０２５９７０）である。

（神経炎症および他のＡＤ症状の評価）
本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、適応免疫障害を有する。驚くべきことに、一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、インタクトな自然免疫シグナル伝達を有し、したがって、異なる系統バックグラウンドに由来するかまたはヒト起源を有する物質の導入を通じて、アミロイドとの免疫相互作用を評価するために使用され得る。一部の実施形態において、異なる系統バックグラウンドに由来するかまたはヒト起源を有する物質としては、第１の対象から第２の対象における移植のために単離されたグリア細胞が挙げられ得る。本明細書において使用される場合、グリア細胞とは、希突起膠細胞、アストロサイト、上衣細胞および／またはミクログリアを指し得る。

一部の実施形態において、異なる系統バックグラウンドに由来する物質としては、インタクトな適応免疫を有する他のバックグラウンドのマウスモデルから単離されたグリア細胞が挙げられ得る。例えば、物質は、他のバックグラウンドのモデル（例えば、ＷＳＢ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス（ＪＡＸ系統番号０２５９７０）またはＰＷＫ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス（ＪＡＸ系統番号０２５９７１）（これらは非免疫不全マウスモデルである））に由来し得る。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、は、ＷＳＢ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルから単離されたグリア細胞の移植を支持するために使用される。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、ＰＷＫ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルから単離されたグリア細胞の移植を支持するために使用される。他の実施形態において、物質は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系統、１２９／Ｓ１系統、Ａ／Ｊ系統、ＣＡＳＴ／ＥｉＪ系統、もしくは共同系統（ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅｌｉｎｅ）、または多様性非近交系（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｕｔｂｒｅｄ）マウスに由来し得る。

一部の実施形態において、ヒト起源に由来する物質としては、ヒトミクログリアから単離されたグリア細胞が挙げられ得る。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、ヒトミクログリアから単離されたグリア細胞の移植を支持するために使用される。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して短期記憶障害を有する（例えば、図１を参照のこと）。本明細書において使用される場合、短期記憶障害とは、種々の脳領域におけるニューロンの機能および構造に対する変化を指す。マウスにおける短期記憶障害は、以下であるがそれらに限定されない行動アッセイのうちのいずれかにしたがって測定され得る：遅延交替、新規空間認識、見本合わせおよび場所合わせ、または文脈的恐怖条件付け。

遅延交替とは、マウスがその課題に再曝露された後に選択的迷路アームを探索し選択する自然の傾向を利用する課題を指す。最も一般的な遅延交替課題は、Ｙ迷路またはＴ経路であり、それらにおいて動物は、「Ｙ」字または「Ｔ」字の幹でその課題を始め、２つのアームの間で選択しなければならず、それらのアームのうちの一方は食物報酬を有する。短期記憶が欠損しているマウスは、この課題に関して自発交替の減少を示す。遅延交替のサブタイプである新規空間認識とは、マウスが新規環境を探索する自然の傾向を利用する課題を指す。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、対照マウスと比較してこの課題に関して自発交替の減少および／または新規空間認識の低下を示し得る。

見本合わせ課題および場所合わせ（ｍａｔｃｈ－ｔｏｐｌａｃｅ）課題は、２～３秒よりも長い刺激の正体または位置をマウスが思い出すことを必要とする。マウスにとって、この課題概念は、迷路環境に適合される（例えば、Ｔ迷路または水迷路における遅延非場所合わせ）。これらの課題において、マウスは、逃避プラットフォームの位置または食物報酬を得るために過去の再現に基づいて選択反応を行うように合図を与えられる。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、対照マウスと比較して遅延した見本合わせまたは場所合わせを有し得る。

文脈的恐怖条件付けとは、マウスが嫌悪事象で条件付けられた後に想起について試験される課題を指す。マウスは通常、特定の環境（条件付けられた中立刺激）内で食物ショック（条件付けられていない嫌悪刺激）を与えられて、訓練後にそのマウスがその環境に配置し戻された場合にすくみ行動をとるようになる。短期記憶を試験するために、マウスは、訓練の１時間後までショック環境に配置される。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、対照マウスと比較してすくみ行動発生率の減少を示し得る。

齧歯類において短期記憶障害を測定するために公知である他のアッセイもまた、本明細書において企図される。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、同齢の対照マウスマウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して大きな認知欠損を有する。本明細書において使用される場合、認知欠損とは、種々の認知領域の障害を記載するために使用され、認知障害という用語と交換可能に使用される。本開示のマウスにおける認知欠損は、以下であるがそれらに限定されない行動アッセイのうちのいずれかにしたがって測定され得る：新規物体認識（ＮＯＲ）、受動的抑制回避またはモリス水迷路試験。

新規物体認識（ＮＯＲ）課題は、ＣＮＳ障害のマウスモデルにおいて認知、特に認識記憶を評価するために使用される。この試験は、慣れている物体よりも長い時間を新規物体の探索に費やすマウスの自発的傾向に基づく。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、対照マウスと比較した場合に、慣れた物体と比較して等しいかまたはそれより短い時間を新規物体の探索に費やし得る。

受動的回避課題は、ＣＮＳ障害のマウスモデルにおいて学習および記憶を評価するために使用される、恐怖により悪化される（ｆｅａｒ－ａｇｇｒａｖａｔｅｄ）試験である。この試験において、マウスは、嫌悪刺激（例えば、食物ショック）が以前に与えられた環境を回避することを学習する。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、嫌悪環境が自身に以前に与えられた環境を回避する対照マウスと比較して、嫌悪刺激がそのマウスに以前に与えられた環境を回避しないかもしれない。

モリス水迷路は、空間学習および空間記憶の心理的プロセスおよび神経機構を研究するための行動神経科学において最も広範に使用される課題のうちの一つである。マウスは、大きな円形の水プールに配置され、通常は空間記憶を使用するだけで位置が同定され得る隠れたプラットフォームへと水から逃避することを要求される。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、隠れたプラットフォームを見つけないかもしれず、または対照マウスと比較して長い時間を隠れたプラットフォームを見つけるのに費やすかもしれない。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、脳の皮質領域と比較して増加したアミロイドプラーク沈着を脳の海馬領域において有する。本明細書において使用される場合、アミロイドプラーク沈着とは、Ａβタンパク質沈着を指し、これは、徐々に蓄積して、マウスの全長にわたってプラーク様病変を形成する。アミロイドプラーク沈着は、マウス脳の皮質領域および／または海馬領域におけるアミロイド前駆体タンパク質の免疫蛍光染色を使用して測定され得る。免疫蛍光染色法（これらは当該分野において周知である）が、本明細書において企図される。アミロイドプラーク沈着を示すアミロイド前駆体タンパク質に関する陽性染色は、本開示のマウス脳の皮質領域もしくは海馬領域、または皮質領域と海馬領域との両方に存在し得る。皮質領域におけるアミロイドプラーク沈着の全免疫蛍光染色が、同じマウスの海馬領域における全免疫蛍光染色に対して比較され得る。マウス脳におけるアミロイドプラーク沈着の全免疫蛍光染色はまた、対照マウス脳におけるアミロイドプラーク沈着の全免疫蛍光染色に対して比較され得る。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスにおいて、海馬領域におけるアミロイドプラーク沈着は、皮質領域におけるアミロイドプラーク沈着と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加され得る。

一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）の皮質プラーク沈着と比較して少ない皮質プラーク沈着を有する。本明細書において使用される場合、皮質プラーク沈着とは、脳の皮質領域におけるプラーク沈着を指す。皮質プラーク沈着は、マウス脳の皮質領域におけるアミロイド前駆体タンパク質の免疫蛍光染色を使用して測定され得る。免疫蛍光染色法（これらは当該分野において周知である）が、本明細書において企図される。皮質プラーク沈着を示すアミロイド前駆体タンパク質に関する陽性染色は、本開示のマウス脳の皮質領域に存在し得る。マウス脳における皮質プラーク沈着の全免疫蛍光染色は、対照マウス脳における皮質プラーク沈着の全免疫蛍光染色に対して比較される。

一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスにおいて、皮質プラーク沈着は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）の皮質プラーク沈着と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％減少され得る。

一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスのプラーク領域特異性は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して異なる（例えば、図２を参照のこと）。本明細書において使用される場合、プラーク領域特異性とは、アミロイドプラーク沈着が生じ得るマウス脳領域（例えば、皮質領域もしくは海馬領域、または皮質領域もしくは海馬領域の両方）を指す。ヒトにおいて、プラーク病態は、最初に海馬において生じる（すなわち、ヒトにおけるプラーク領域特異性は、最初に海馬領域において生じる）。Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、マウス脳の皮質領域と海馬領域との両方でプラーク領域特異性を示す。一部の実施形態において、本開示のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスのプラーク領域特異性は、ヒトにおいて報告されたプラーク領域特異性（例えば、プラーク病態が最初に海馬において生じる）と同様の様式で発生する。さらに、ＮＳＧ（登録商標）マウスモデルは、プラーク病態を示さない。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの神経炎症は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して異なる（例えば、図３を参照のこと）。本明細書において使用される場合、神経炎症は、脳におけるミクログリア活性化およびアストロサイト反応性の陽性免疫蛍光染色によって示される。ミクログリア活性化は、ミクログリアのマーカーで脳組織を染色することによって測定され得る。アストロサイト反応性は、アストロサイトのマーカーで脳組織を染色することによって測定され得る。マウス脳におけるミクログリア活性化および／またはアストロサイト反応性の全免疫蛍光染色は、対照マウス脳におけるミクログリア活性化および／またはアストロサイト反応性の全免疫蛍光染色に対して比較され得る。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの神経炎症（例えば、アストロサイト反応性の免疫蛍光染色によって示される）は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して高い。一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの神経炎症（例えば、アストロサイト反応性の免疫蛍光染色によって示される）は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加され得る。

一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの神経炎症（例えば、ミクログリア活性化の免疫蛍光染色によって示される）は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して高い。一部の実施形態において、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスの神経炎症（例えば、ミクログリア活性化の免疫蛍光染色によって示される）は、同齢の対照マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウスおよび／またはＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウス）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％増加され得る。

（使用の方法）
本明細書において提供されるマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、多くの適用のために使用され得る。一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、適応免疫障害を有するにも関わらずアミロイドに反応して脳において強固な神経炎症を示し、これは、このマウスモデルがインタクトな自然免疫シグナル伝達を有することを示す。したがって、本開示のマウスモデルは、上記のとおり異なる系統バックグラウンドまたはヒト起源に由来する物質の導入を通じて、アミロイドとの免疫相互作用の評価のためのプラットフォームとして使用され得る。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、アルツハイマー病（ＡＤ）の状況でアミロイドとの免疫相互作用を評価するために使用され得る。一部の実施形態において、そのＡＤは、早期発症型ＡＤであり得る。一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、早期発症型ＡＤの状況で、上記のとおりアミロイドプラーク沈着、皮質プラーク沈着、プラーク領域特異性、および／または神経炎症を評価するために使用され得る。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、特定の薬剤（例えば、治療薬）または医学手順（例えば、細胞移植もしくは組織移植）がアミロイドに反応してどのように神経炎症（例えば、ミクログリア活性化およびアストロサイト反応性）に影響を与えるかを試験するために、使用され得る。一部の実施形態において、特定の薬剤（例えば、治療薬）が、本開示のマウスモデルに送達され得、その薬剤の結果としての神経炎症の変化が、その薬剤を受容しなかった本開示のマウスモデルと比較して、上記のとおり測定され得る。薬剤での処置の結果としての神経炎症の変化は、上記のとおりミクログリア活性化およびアストロサイト反応性の増加または減少によって示され得る。

薬剤の非限定的例としては、治療薬（例えば、抗がん薬および抗炎症薬）、ならびに予防薬（例えば、免疫原性組成物（例えば、ワクチン））が挙げられる。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、医学手順（例えば、細胞移植または組織移植）を受容し得、その医学手順の結果としての神経炎症の変化が、その医学手順を受容しなかった本開示のマウスモデルと比較して、上記のとおり測定され得る。医学手順（例えば、細胞移植または組織移植）の結果としての神経炎症の変化は、上記のとおりミクログリア活性化およびアストロサイト反応性の増加または減少によって示され得る。

医学手順の非限定的例としては、上記のとおり他のマウスバックグラウンド系統に由来するかまたはヒト起源に由来する細胞（例えば、ミクログリア）の移植が挙げられる。一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、上記のとおり異なる遺伝的バックグラウンドに由来する細胞（例えば、ＷＳＢ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１および／またはＰＷＫ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１から単離されたミクログリア細胞）の移植の効果を評価するために、使用され得る。一部の実施形態において、本開示のマウスモデルは、上記のとおりヒトミクログリアに由来する細胞の移植の効果を評価するために、使用され得る。一部の実施形態において、他のマウスバックグラウンド系統からの移植としては、マウスバックグラウンド系統Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、１２９／Ｓ１、Ａ／Ｊ、ＣＡＳＴ／ＥｉＪ、および多様性非近交系（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｕｔｂｒｅｄ）（ＤＯ）マウスが挙げられるが、それらに限定はされない。他のマウスバックグラウンド系統およびヒト起源の他の細胞からの移植もまた、企図される。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、アミロイドに反応した神経炎症に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。したがって、薬剤または医学手順をマウスモデルに投与する工程、およびそのマウスにおけるアミロイドに反応した神経炎症に対するその薬剤または医学手順を評価する工程を含む方法が、本明細書において提供される。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）におけるアミロイドに反応した神経炎症に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、アミロイドプラーク沈着に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。したがって、薬剤または医学手順をマウスモデルに投与する工程、およびそのマウスにおけるアミロイドプラーク沈着に対するその薬剤または医学手順の効果を評価する工程を含む方法が、本明細書において提供される。その薬剤または医学手順の結果としてのアミロイドプラーク沈着の変化が、上記のとおりマウス脳の皮質領域および／または海馬領域におけるアミロイド染色の増加もしくは減少によって示され得る。一部の実施形態において、その薬剤または医学手順の結果としてのアミロイドプラーク沈着の減少は、そのマウスにおけるＡＤ表現型の進行の低下を示し得る。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）におけるアミロイドプラーク沈着に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、皮質プラーク沈着に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。その薬剤または医学手順の結果としての皮質プラーク沈着の変化が、上記のとおりマウス脳の皮質領域におけるアミロイド染色の増加もしくは減少によって示され得る。一部の実施形態において、その薬剤または医学手順の結果としてのアミロイドプラーク沈着の減少は、そのマウスにおけるＡＤ表現型の進行の低下を示し得る。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）における皮質プラーク沈着に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、プラーク領域特異性に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。その薬剤または医学手順の結果としてのプラーク領域特異性の変化が、上記のとおりマウス脳の皮質領域および／または海馬領域におけるアミロイド染色の増加もしくは減少によって示され得る。一部の実施形態において、その薬剤または医学手順の結果としてのマウス脳の皮質領域および／または海馬領域におけるアミロイドプラーク沈着の減少は、そのマウスにおけるＡＤ表現型の進行の低下を示し得る。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）におけるプラーク領域特異性に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、短期記憶に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。その薬剤または医学手順の結果としての短期記憶の変化は、上記のとおり短期記憶を測定するために使用される行動アッセイのうちのいずれか１つにおける改善した成績によって示され得る。一部の実施形態において、短期記憶を測定するために使用される行動アッセイのうちのいずれか１つにおける改善した成績は、そのマウスにおけるＡＤ表現型の進行の低下を示し得る。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）における短期記憶に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

一部の実施形態において、本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）は、認知欠損に対する薬剤または医学手順の効果を評価するために、使用され得る。その薬剤または医学手順の結果としての認知欠損の変化は、上記のとおり認知欠損を測定するために使用される行動アッセイのうちのいずれか１つにおける改善した成績によって示され得る。一部の実施形態において、認知欠損を測定するために使用される行動アッセイのうちのいずれか１つにおける改善した成績は、そのマウスにおけるＡＤ表現型の進行の低下を示し得る。

本開示のマウスモデル（例えば、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデル）における認知欠損に対する薬剤または医学手順の効果を評価することは、例えば、その評価の結果を適切な対照（例えば、対照マウス（例えば、ヒトＡＰＰと変異型ヒトＰＳＥＮ１とを発現する非免疫不全マウス（例えば、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）、または野生型マウス（例えば、ヒトＡＰＰおよび変異型ヒトＰＳＥＮ１を発現しないマウス）に対するその化合物の効果）であるが、それらに限定はされない）と比較することを含む。

（マウスモデル）
本明細書において、簡潔にするために、「マウス」および「マウスモデル」（例えば、ヒト状態に対する代替物）に対する言及がなされる。これらの用語は、別途示されない限りは、マウス、ラットおよび他の齧歯類の種を含む、「齧歯類」ならびに「齧歯類モデル」を含むために本明細書全体を通じて交換可能に使用され得ることが、理解されるべきである。

本明細書において使用される標準的な遺伝学的命名法は、種々の齧歯類系統に対する独特な識別を提供し、その系統記号は、使用される系統またはストックの型、およびその系統の遺伝的内容に関する基本的情報を伝えることもまた、理解されるべきである。系統およびストックを記号化するための規則は、マウスの遺伝学的命名法の標準化に関する国際委員会（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎＳｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄＧｅｎｅｔｉｃＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｆｏｒＭｉｃｅ）によって公表されている。これらの規則は、ＭｏｕｓｅＧｅｎｏｍｅＤａｔａｂａｓｅ（ＭＧＤ；ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｊａｘ．ｏｒｇ）からオンラインで入手可能であり、印刷版で公開された（Ｌｙｏｎら、１９９６）。系統記号は、代表的には、施設登録コード（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＲｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎＣｏｄｅ）（ラボコード（ＬａｂＣｏｄｅ））を含む。その登録簿は、米国科学アカデミー（ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）にある実験動物研究協会（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）（ＩＬＡＲ）で維持される。ラボコード（ＬａｂＣｏｄｅ）は、ＩＬＡＲのウェブサイト（ｎａｔｉｏｎａｌａｃａｄｅｍｉｅｓ．ｏｒｇ／ｉｌａｒ／ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ－ｆｏｒ－ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ－ａｎｉｍａｌ－ｒｅｓｅａｒｃｈ）にて電子的に入手され得る。ＤａｖｉｓｓｏｎＭＴ、ＧｅｎｅｔｉｃａｎｄＰｈｅｎｏｔｙｐｉｃＤｅｆｉｎｉｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｉｃｅａｎｄＲａｔｓ／ＷｈａｔＣｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓａｎＡｃｃｅｐｔａｂｌｅＧｅｎｅｔｉｃ－ＰｈｅｎｏｔｙｐｉｃＤｅｆｉｎｉｔｉｏｎ、ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｕｎｃｉｌ（ＵＳ）ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｆｔｈｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ（ＤＣ）：ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｉｅｓＰｒｅｓｓ（ＵＳ）；１９９９もまた参照のこと。

本明細書において提供されるマウスモデルは、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を発現する、トランスジェニックマウスモデルである。一部の実施形態において、そのトランスジェニックマウスモデルはまた、ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）も発現する。トランスジェニックマウスは、そのゲノム中に（組み込まれている）外因性核酸（例えば、導入遺伝子）を有するマウスである。トランスジェニックマウスを作製するための方法は、周知である。

トランスジェニックマウスの作製のために使用される３種の従来法としては、ＤＮＡマイクロインジェクション（ＧｏｒｄｏｎおよびＲｕｄｄｌｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８１：２１４：１２４４～１２４（本明細書において参照によって援用される））、胚性幹細胞媒介性遺伝子移入（Ｇｏｓｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９８６、８３：９０６５～９０６９（本明細書において参照によって援用される））およびレトロウイルス媒介性遺伝子移入（Ｊａｅｎｉｓｃｈ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、１９７６、７３：１２６０～１２６４（本明細書において参照によって援用される））が挙げられ、これらのうちのいずれもが、本明細書において提供されるとおり使用され得る。例えば、クラスター化された規則的に間隔を空けたパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）ヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用するゲノム編集法が、本明細書中の他の場所で記載される。

受精した胚（例えば、１細胞胚（例えば、接合子）または多細胞胚（例えば、接合子後の発生段階（例えば、胚盤胞））への核酸の送達の後、その受精した胚は、偽妊娠雌に導入され、この偽妊娠雌は、その後、子孫を出産する。ヒトＦｃＲｎおよび／またはキメラＩｇＧ抗体をコードする核酸の存在もしくは不在は、例えば、多くの遺伝子型決定法（例えば、配列決定および／またはゲノムＰＣＲ）を使用して、確認され得る。

新規マウスモデルはまた、本明細書中の実施例において記載されるとおり、親系統を交配させることによって、作製され得る。種々の利用可能な変異体、ノックアウト、ノックイン、トランスジェニック、Ｃｒｅ－ｌｏｘ、Ｔｅｔ誘導システム、および他のマウス系統を用いて、複数の変異および導入遺伝子が、新規マウスモデルを作製するために組み合わされ得る。複数のマウス系統が、二重、三重、またはさらには四重もしくはそれを超える多重変異体／トランスジェニックマウスを作製するために一緒に交配され得る。

一部の実施形態において、親マウスが、Ｆ１マウスを作製するために交配される。親マウスは、例えば、特定のアレルにてホモ接合型、ヘテロ接合型、ヘミ接合型、またはホモ接合型ヌルであり得る。ホモ接合型とは、所定の遺伝子座における２つの同一のアレルという遺伝子型を記載し、ヘテロ接合型とは、ある遺伝子座における２つの異なるアレルという遺伝子型を記載し、ヘミ接合型とは、その他の点では二倍体である生物における１コピーだけの特定の遺伝子からなる遺伝子型を記載し、ホモ接合型ヌルとは、その遺伝子の両方のコピーが欠失している、他の点では二倍体である生物を指す。

一部の実施形態において、マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異とマウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異とを含むＮＯＤマウスが、ヒトアミロイド前駆体タンパク質をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質をコードする核酸と変異型ヒトプレセニリン１タンパク質をコードする核酸とを含むＮＯＤマウスに交配されて、早期発症型アルツハイマー病の特徴を有する免疫無防備状態子孫マウスが作製される。その子孫マウスを繁殖させる工程を含む方法もまた、企図される。

一部の実施形態において、Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異とを含む非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスが、ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子とＰＳＥＮｄｅ９導入遺伝子とを含むＮＯＤマウスに交配される。その子孫マウスを繁殖させる工程を含む方法もまた、企図される。

一部の実施形態において、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄＥ９）８５Ｄｂｏ／Ｈｏｗのバックグラウンドを含む雄マウス（ＪＡＸストック番号２５９６７）が、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪのバックグラウンドを含む雌マウス（ＪＡＸストック番号００５５５７）に交配され、その後、ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１導入遺伝子およびガンマ変異の存在について遺伝子型決定された生じた雄子孫が、雌ＮＳＧ（登録商標）マウスに続いて交雑される。その子孫マウスを繁殖させる工程を含む方法もまた、企図される。

Ｆ１ハイブリッドマウスが、２種の異なる近交系のマウスを交雑させることによって、作製される。それらのＦ１ハイブリッドマウスは、その親が異なるアレルを有する全ての遺伝子座においてヘテロ接合型であるが、それらは、遺伝的および表現型的に均一であるという点で、近交系と類似している。その親系統が存在する限り、Ｆ１ハイブリッドは作製され得る。しかし、その親系統とは異なり、Ｆ１ハイブリッドは、純粋種（ｂｒｅｅｄｔｒｕｅ）ではない。Ｆ１マウスを交配（ｍａｔｅ）することによって作製されるＦ２子孫はすべて、両方の親系統に由来するアレルの独特なランダム混合物を有する。

本開示の一部の実施形態において、１個または複数個の細胞が、本開示によって記載されるマウスから単離され得る。一部の実施形態において、本開示のマウスから単離された１個または複数個の細胞は、そのマウスに由来する細胞と同じ遺伝子型を含む。

（免疫不全マウスモデル）
一部の実施形態において、免疫不全マウスモデルが本明細書において提供される。当該分野において公知であるとおり、免疫不全マウスは、損なわれたかまたは破壊された免疫系（例えば、ＭＨＣクラスＩにおける特定の欠損、ＭＨＣクラスＩＩにおける特定の欠損もしくはその両方、Ｂ細胞欠損もしくはＴ細胞欠損、またはその両方における欠損）、ならびにサイトカイン、サイトカインレセプター、ＴＬＲレセプター、ならびにシグナル伝達経路の種々のトランスデューサーおよび転写因子に関する遺伝子のノックダウンに起因する免疫不全を有する。免疫不全マウスモデルとしては、一遺伝子変異モデル、例えば、ヌードマウス（ｎｕ）系統および重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）系統、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）系統、標的化遺伝子欠失を有するＲＡＧ（組換え活性化遺伝子）系統、ならびに自然免疫および適応免疫におけるさらなる欠損を有する二重変異マウス系統および三重変異マウス系統を交雑させることによって作製された種々のハイブリッドが挙げられる。

自然発生型免疫不全マウスモデルおよびトランスジェニック免疫不全マウスモデルの非限定的例としては、以下のマウス系統が挙げられる：
・ヌード（ｎｕ）［ＦｌａｎａｇａｎＳＰ、ＧｅｎｅｔＲｅｓ、１９６６；８：２９５～３０９；およびＮｅｈｌｓＭら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９４；３７２：１０３～７］；
・Ｓｃｉｄ（ｓｃｉｄ）［ＢｏｓｍａＧＣら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８３；３０１：５２７～３０；ＭｏｓｉｅｒＤＥら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８８；３３５：２５６～９；およびＧｒｅｉｎｅｒＤＬら、ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ、１９９８；１６：１６６～７７］；
・ＮＯＤ［ＫｉｋｕｔａｎｉＨら、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ、１９９２；５１：２８５～３２２；およびＡｎｄｅｒｓｏｎＭＳら、ＡｎｎＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ、２００５；２３：４４７～８５］；
・ＲＡＧ１およびＲＡＧ２（ｒａｇ）［ＭｏｍｂａｅｒｔｓＰら、Ｃｅｌｌ、１９９２；６８：８６９～７７；ＳｈｉｎｋａｉＵら、Ｃｅｌｌ、１９９２；６８：８５５～６７］；
・ＮＯＤ－ｓｃｉｄ［ＧｒｅｉｎｅｒＤＬら、１９９８；ＳｈｕｌｔｚＬＤら、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、１９９５；１５４：１８０～９１；ＭｅｌｋｕｓＭＷら、ＮａｔｕｒｅＭｅｄ、２００６；１２：１３１６～２２；およびＤｅｎｔｏｎＰＷら、ＰＬｏＳＭｅｄ、２００８；４（１２）：ｅ３５７］；
・ＩＬ２ｒｇｎｕｌｌ［ＤｉＳａｎｔｏＪＰら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、１９９５；９２：３７７～８１］；
・Ｂ２ｍｎｕｌｌ［ＣｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎＳＷら、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、１９９７；１５８：３５７８～８６］；
・ＮＯＤ－ｓｃｉｄＩＬ２ｒγｎｕｌｌ［ＳｈｕｌｔｚＬＤら、ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ、２００７；７：１１８～３０；ＩｔｏＭら、Ｂｌｏｏｄ、２００２；１００：３１７５～８２；ＩｓｈｉｋａｗａＩら、Ｂｌｏｏｄ、２００５；１０６：１５６５～７３；およびＭａｃｃｈｉａｒｉｎｉＦら、ＪＥｘｐＭｅｄ、２００５；２０２：１３０７～１１］；
・ＮＯＤ－ｓｃｉｄＢ２ｍｎｕｌｌ［Ｓｈｕｌｔｚら、２００７；ＳｈｕｌｔｚＬＤら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００３；７６：１０３６～４２；Ｉｓｌａｓ－ＯｈｌｍａｙｅｒＭＡら、ＪＶｉｒｏｌ、２００４；７８：１３８９１～９００；およびＭａｃｃｈｉａｒｉｎｉら、２００５］；ならびに
・ＨＬＡトランスジェニックマウス［ＧｒｕｓｂｙＭＪら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、１９９３；９０（９）：３９１３～７；およびＲｏｙＣＪら、ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ、２００５；７３（４）：２４５２～６０］。例えば、ＢｅｌｉｚａｒｉｏＪＥ、ＴｈｅＯｐｅｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＪｏｕｒｎａｌ、２００９；２：７９～８５を参照のこと。

一部の実施形態において、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウス遺伝子型を有する免疫不全マウスモデルが、本明細書において提供される。ＮＯＤマウス（例えば、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓストック番号００１９７６、ＮＯＤ－Ｓｈｉ^ＬｔＪ）は、高血糖症および膵島炎（膵島細胞の白血球浸潤）によって特徴付けられる、自己免疫（例えば、１型）糖尿病の多遺伝子性マウスモデルである。このＮＯＤマウスは、低インスリン血症および高グルカゴン血症であり、これは、膵島β細胞の選択的破壊を示す。ＮＯＤマウスにおける糖尿病感受性の主要な成分は、独特なＭＨＣハロタイプである。ＮＯＤマウスはまた、複数の異常な免疫表現型（欠損性抗原提示細胞免疫調節機能、Ｔリンパ球レパートリーの調節の欠損、欠損性ＮＫ細胞機能、マクロファーンからの欠損性サイトカイン産生（Ｆａｎら、２００４）および創傷治癒障害を含む）を示す。ＮＯＤマウスはまた、溶血性補体Ｃ５を欠いている。ＮＯＤマウスはまた、重度の聴力低下である。免疫不全を引き起こす種々の変異、サイトカイン遺伝子における標的化変異、ならびに免疫機能に影響を与える導入遺伝子が、ＮＯＤ近交系バックグラウンドに戻し交雑（ｂａｃｋｃｒｏｓｓ）された。

本開示の一部の局面において、ＮＯＤバックグラウンドに基づいて本明細書において提供される免疫不全マウスは、ＮＯＤ－Ｃｇ．－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩＬ２ｒｇ^{ｔｍ１ｗＪｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ（登録商標））、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｒａｇ１^{ｔｍ１Ｍｏｍ} Ｉｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＲＧ）、およびＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｓｕｇ}／ＳｈｉＪｉｃ（ＮＯＧ）から選択される遺伝子型を有し得る。他の免疫不全マウス系統が、本明細書において企図される。

一部の実施形態において、免疫不全マウスモデルは、ＮＳＧ（商標）遺伝子型を有する。ＮＳＧ（登録商標）マウス（例えば、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓストック番号：＃００５５５７）は、マウスＴ細胞、マウスＢ細胞、およびマウスＮＫ細胞を欠く免疫不全マウスであり、複数のサイトカインシグナル伝達経路が欠損しており、自然免疫において多くの欠損を有する（例えば、Ｓｈｕｌｔｚ、Ｉｓｈｉｋａｗａ、およびＧｒｅｉｎｅｒ、２００７；Ｓｈｕｌｔｚら、２００５；ならびにＳｈｕｌｔｚら、１９９５（これらの各々は、本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）。ＮＯＤマウス系統ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ（例えば、Ｍａｋｉｎｏら、１９８０（これは本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）に由来するＮＳＧ（登録商標）マウスは、Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異（「重症複合免疫不全」変異または「ｓｃｉｄ」変異とも呼ばれる）とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}標的化変異とを含む。このＰｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異は、ヒトＰＲＫＤＣ遺伝子のマウスホモログにおける機能喪失型（ヌル）変異である－この変異は、適応免疫を本質的に除去する（例えば、（Ｂｌｕｎｔら、１９９５；Ｇｒｅｉｎｅｒ、ＨｅｓｓｅｌｔｏｎおよびＳｈｕｌｔｚ、１９９８）（これらの各々は、本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）。このＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異は、インターロイキン２レセプターγ鎖（ＩＬ２Ｒγ、ヒトにおけるＩＬ２ＲＧと相同）をコードする遺伝子におけるヌル変異であり、これは、ＮＫ細胞分化を遮断し、それにより初代ヒト細胞の効率的移植を妨げる障害を除去する（Ｃａｏら、１９９５；Ｇｒｅｉｎｅｒら、１９９８；およびＳｈｕｌｔｚら、２００５（これらの各々は、本明細書において参照によって援用される））。

一部の実施形態において、免疫不全マウスモデルは、ＮＲＧ遺伝子型を有する。ＮＲＧマウス（例えば、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓストック番号００７７９９）は、極度に免疫不全である。このマウスは、組換え活性化遺伝子１（Ｒａｇ１）における標的化ノックアウト変異およびＩＬ２レセプター共通γ鎖の完全ヌルアレル（ＩＬ２ｒｇ^ｎｕｌｌ）という、ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ遺伝的バックグラウンドにおける２つの変異を含む。このＲａｇ１^ｎｕｌｌ変異は、マウスＢ細胞およびマウスＴ細胞を欠損させ、このＩＬ２ｒｇ^ｎｕｌｌ変異は、複数のレセプターを介するサイトカインシグナル伝達を妨げて、機能的ＮＫ細胞の欠損をもたらす。ＮＲＧの極度の免疫不全は、ヒトＣＤ３４^＋造血幹細胞（ＨＳＣ）および患者由来異種移植片（ＰＤＸ）の移植によってそのマウスを高効率でヒト化することを可能にする。免疫不全ＮＲＧマウスは、ＤＮＡ修復酵素Ｐｒｋｄｃにおけるｓｃｉｄ変異を有するマウスよりも、照射および遺伝毒性薬物に対して耐性である。

一部の実施形態において、免疫不全マウスモデルはＮＯＧマウスである。ＮＯＧマウス（ＩｔｏＭら、Ｂｌｏｏｄ、２００２）は、ＮＯＤ／ｓｃｉｄマウスとＩＬ－２レセプター－γ鎖ノックアウト（ＩＬ２ｒγＫＯ）マウス（ＯｈｂｏＫ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１９９６）とを組み合わせることによって樹立された、極度の重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）マウスである。ＮＯＧマウスは、Ｔ細胞およびＢ細胞を欠き、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を欠き、低下した樹状細胞機能および低下したマクロファージ機能を示し、補体活性を欠く。

一部の実施形態において、免疫不全マウスモデルはＮＣＧ遺伝子型を有する。ＮＣＧマウス（例えば、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒストック番号５７２）は、ＮＯＤ／ＮｊｕマウスにおけるＰｒｋｄｃ遺伝子座およびＩｌ２ｒｇ遺伝子座の逐次的なＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９編集でそのＮＯＤ／Ｎｊｕに対してコアイソジェニック（ｃｏｉｓｏｇｅｎｉｃ）なマウスを作製することによって、作製された。このＮＯＤ／Ｎｊｕは、Ｓｉｒｐａ（ＳＩＲＰα）遺伝子において、外来造血幹細胞の移植を可能にする変異を保有する。このＰｒｋｄｃノックアウトは、適切なＴ細胞およびＢ細胞の形成を欠くＳＣＩＤ様表現型を生じる。Ｉｌ２ｒｇ遺伝子のノックアウトは、このＳＣＩＤ様表現型をさらに悪化させ、同時にＮＫ細胞産生の低下をさらに生じる。

一部の実施形態において、ＭＨＣクラスＩが欠損している免疫不全マウス、ＭＨＣクラスＩＩが欠損している免疫不全マウス、またはＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩが欠損している免疫不全マウスが、本明細書において提供される。ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩが欠損しているマウスは、非免疫不全（例えば、ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ野生型）マウスと同じレベルのＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、α－ミクログロブリンおよびβ２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ））ならびに／またはＭＨＣクラスＩＩタンパク質（例えば、α鎖およびβ鎖）を発現せず、非免疫不全（例えば、ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ野生型）マウスと同じレベルのＭＨＣクラスＩタンパク質活性および／またはＭＨＣクラスＩＩタンパク質活性も有しない。一部の実施形態において、ＭＨＣクラスＩタンパク質および／またはＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現もしくは活性は、非免疫不全マウスと比較して（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％またはそれを超えて）減少される。

ＭＨＣクラスＩが欠損している免疫不全マウス、ＭＨＣクラスＩＩが欠損している免疫不全マウス、ならびにＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩが欠損している免疫不全マウスは、国際公開番号ＷＯ２０１８／２０９３４４（この内容は、本明細書において参照によって援用される）に記載されている。

（ヒト化マウスモデル）
一部の実施形態において、ヒト化免疫不全マウスモデルおよびそのモデルを作製する方法が、本明細書において提供される。機能的ヒト細胞および／または機能的ヒト組織を移植された免疫不全マウスは、「ヒト化マウス」と呼ばれる。本明細書において使用される場合、用語「ヒト化マウス」、「ヒト化免疫不全（ｉｍｍｕｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）マウス」、「ヒト化免疫不全（ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）マウス」、およびそれらの複数形バージョンは、機能的ヒト細胞および／または機能的ヒト組織の移植によってヒト化された免疫不全マウスを指すために、交換可能に使用される。例えば、マウスモデルは、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および／またはヒト末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）を移植され得る。一部の実施形態において、マウスモデルは、ヒト組織（例えば、島、肝臓、皮膚、および／または固形がんもしくは血液がん）を移植される。他の実施形態において、マウスモデルは、内因性マウス遺伝子がヒトホモログに変換されるように遺伝子改変され得る（例えば、Ｐｅａｒｓｏｎら、ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＩｍｍｕｎｏｌ．、２００８、Ｃｈａｐｔｅｒ：Ｕｎｉｔ－１５．２１）を参照のこと。

ヒト化マウスは、免疫不全マウスから始めて、必要な場合には、あらゆる残りのマウス免疫細胞を（例えば、化学的にもしくは照射によって）枯渇させることおよび／または抑制することによって、作製される。すなわち、免疫不全マウスにおけるヒト免疫系の首尾良い生存には、ＧＶＨＤ（移植片対宿主病）拒絶を防ぐためにそのマウスの免疫系の抑制を必要とし得る。その免疫不全マウスの免疫系が首尾良く抑制された後、そのマウスにヒト細胞（例えば、ＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣ）が移植される。本明細書において使用される場合、「移植する」とは、目的とする既存組織にインビボで移動して組み込むヒト細胞のプロセスを指す。ヒト化免疫不全マウスに関して、移植されたヒト細胞は、機能的な成熟ヒト細胞（例えば、免疫細胞）を提供する。そのモデルは、ＧＶＨＤが始まる前に移植後約４週間～５週間という特定の時間枠を有する。そのモデルの寿命を増加するために、上記のとおり機能的ＭＨＣＩおよびＭＨＣＩＩを欠くダブルノックアウトマウスが、使用され得る。

ヒト化のために移植されるヒト細胞（例えば、ＨＳＣまたはＰＭＢＣ）は、一部の実施形態において、そのマウスモデルのヒトがん細胞に対してヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合性である。ＨＬＡ適合性とは、同じ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）遺伝子を発現する細胞を指す。マウスにＨＬＡ適合性ヒト異種移植片およびヒト免疫細胞を移植することは、例えば、そのヒト免疫細胞の免疫原性を減少または妨害する。一部の実施形態において、本開示において提供されるヒト化マウスは、ＰＤＸまたはヒトがん細胞株に対してＨＬＡ適合性であるヒトＰＭＢＣもしくはヒトＨＳＣを移植される。

（照射）
上記のとおり、一部の実施形態において、免疫不全マウスは、ヒト細胞（例えば、ヒトＨＳＣおよび／またはＰＭＢＣ）の移植前に照射される。免疫不全マウスの照射は、末梢血、脾臓、および骨髄におけるマウス免疫細胞を破壊し、これは、（例えば、ヒト細胞生存因子を増加することによって）ヒト細胞（例えば、ヒトＨＳＣおよび／またはＰＭＢＣ）の移植、ならびに他の免疫細胞の増殖を促進すると、考えられる。照射はまた、マウスモデルを「ヒト化」するために必要とされるヒト免疫細胞の数を蓄積するためにかかる時間を短縮する。

免疫不全マウス（例えば、ＮＳＧ（登録商標）マウス）について、この準備は、全身γ線照射を通じて一般的には達成される。照射器は、その意図される使用に依存して大きさが変化し得る。動物は、一般的には、短時間（１５分未満）照射される。照射器内で費やされる時間量は、放射性同位体の崩壊チャート、必要とされる照射量、およびイオン化エネルギー源（すなわち、Ｘ線対γ線、このためにセシウム源またはコバルト源が必要とされる）に依存して変化する。

骨髄破壊的照射線量は通常は７００ｃＧｙ～１３００ｃＧｙであるが、一部の実施形態において、より低線量、例えば、１ｃＧｙ～１００ｃＧｙ（例えば、約２ｃＧｙ、５ｃＧｙ、もしくは１０ｃＧｙ）、または３００ｃＧｙ～７００ｃＧｙが使用され得る。

例として、マウスは、１００ｃＧｙのＸ線（または７５ｃＧｙ～１２５ｃＧｙのＸ線）が照射され得る。一部の実施形態において、その線量は、約１ｃＧｙ、２ｃＧｙ、３ｃＧｙ、４ｃＧｙ、５ｃＧｙ、１０ｃＧｙ、２０ｃＧｙ、１００ｃＧｙ、２００ｃＧｙ、３００ｃＧｙ、４００ｃＧｙ、５００ｃＧｙ、６００ｃＧｙ、７００ｃＧｙ、８００ｃＧｙ、９００ｃＧｙ、１０００ｃＧｙ、１１００ｃＧｙ、１２００ｃＧｙ、もしくは１３００ｃＧｙ、または本明細書において記載されるあらゆる２つの線量の間（例えば、１００ｃＧｙ～３００ｃＧｙ、２００ｃＧｙ～５００ｃＧｙ、６００ｃＧｙ～１０００ｃＧｙ、もしくは７００ｃＧｙ～１３００ｃＧｙ）である。一部の実施形態において、免疫不全マウスは、ヒトＨＳＣおよび／もしくはヒトＰＭＢＣの移植の約１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、またはそれ以上前に照射される。一部の実施形態において、免疫不全マウスは、照射の１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、または１８日後に、ヒトＨＳＣおよび／もしくはヒトＰＭＢＣを移植される。

（移植）
上記のとおり，一部の実施形態において、照射された免疫不全マウスがＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植され、そのマウスはヒト化される。移植とは、目的とする既存組織にインビボで移動して組み込むヒト細胞のプロセスを指す。そのＰＢＭＣは、照射後でヒトがん細胞移植前にか、照射後でヒトがん細胞移植と同時にか、または照射後でヒトがん細胞移植後に、移植され得る。

末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、丸い核を有する末梢血細胞である。これらの単核血液細胞は、組織と血液との間を再循環し、感染と戦い侵入者に適合する免疫系中の重要成分である。２種の主要な型の単核細胞であるリンパ球および単球が存在する。ＰＢＭＣのリンパ球集団は、代表的には、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を含む。

ＰＢＭＣは、例えば全血サンプル（例えば、フィコール勾配）から単離され得る。一部の実施形態において、病原体または病原性疾患に関する現在もしくは以前の診断を有する対象（例えば、ヒト対象）由来のＰＢＭＣが、使用され得る。

造血幹細胞（ＨＳＣ）は、造血と呼ばれるプロセス中に他の血液細胞を生じる、幹細胞である。造血幹細胞は、骨髄系およびリンパ系と呼ばれる系統の種々の型の血液細胞を生じる。骨髄系列およびリンパ系列は、両方とも、樹状細胞形成に関与する。骨髄系細胞は、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、および巨核球～血小板を含む。リンパ系細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、および自然リンパ球を含む。

免疫不全マウスにＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植してヒト化マウスモデルを生じる方法としては、腹腔内注射または静脈内注射（Ｓｈｕｌｔｚら、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、２００５、１７４：６４７７～６４８９；Ｐｅａｒｓｏｎら、ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＩｍｍｕｎｏｌ．、２００８；１５～２１；Ｋｉｍら、ＡＩＤＳＲｅｓＨｕｍＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓ、２０１６、３２（２）：１９４～２０２；Ｙａｇｕｃｈｉら、Ｃｅｌｌ＆ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ、２０１８、１５：９５３～９６２）が挙げられるが、それらに限定はされない。一部の実施形態において、マウスは、１．０×１０^６個～３．０×１０^７個のＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植される。

例えば、マウスは、１．０×１０^６個、１．１×１０^６個、１．２×１０^６個、１．３×１０^６個、１．４×１０^６個、１．５×１０^６個、１．６×１０^６個、１．７×１０^６個、１．８×１０^６個、１．９×１０^６個、２．０×１０^６個、２．５×１０^６個、３．０×１０^６個またはそれより多いＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植され得る。一部の実施形態において、マウスは、１．０×１０^６個～１．１×１０^６個、１．０×１０^６個～１．２×１０^６個、１．０×１０^６個～１．３×１０^６個、１．０×１０^６個～１．４×１０^６個、１．０×１０^６個～１．５×１０^６個、１．０×１０^６個～１．６×１０^６個、１．０×１０^６個～１．７×１０^６個、１．０×１０^６個～１．８×１０^６個、１．０×１０^６個～１．９×１０^６個、１．０×１０^６個～２．０×１０^６個、１．０×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．０×１０^６個～２．５×１０^６個、１．０×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．０×１０^６個～３．０×１０^６個、１．１×１０^６個～１．２×１０^６個、１．１×１０^６個～１．３×１０^６個、１．１×１０^６個～１．４×１０^６個、１．１×１０^６個～１．５×１０^６個、１．１×１０^６個～１．６×１０^６個、１．１×１０^６個～１．７×１０^６個、１．１×１０^６個～１．８×１０^６個、１．１×１０^６個～１．９×１０^６個、１．１×１０^６個～２．０×１０^６個、１．１×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．１×１０^６個～２．５×１０^６個、１．１×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．１×１０^６個～３．０×１０^６個、１．２×１０^６個～１．３×１０^６個、１．２×１０^６個～１．４×１０^６個、１．２×１０^６個～１．５×１０^６個、１．２×１０^６個～１．６×１０^６個、１．２×１０^６個～１．７×１０^６個、１．２×１０^６個～１．８×１０^６個、１．２×１０^６個～１．９×１０^６個、１．２×１０^６個～２．０×１０^６個、１．２×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．２×１０^６個～２．５×１０^６個、１．２×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．２×１０^６個～３．０×１０^６個、１．３×１０^６個～１．４×１０^６個、１．３×１０^６個～１．５×１０^６個、１．３×１０^６個～１．６×１０^６個、１．３×１０^６個～１．７×１０^６個、１．３×１０^６個～１．８×１０^６個、１．３×１０^６個～１．９×１０^６個、１．３×１０^６個～２．０×１０^６個、１．３×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．３×１０^６個～２．５×１０^６個、１．３×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．３×１０^６個～３．０×１０^６個、１．４×１０^６個～１．５×１０^６個、１．４×１０^６個～１．６×１０^６個、１．４×１０^６個～１．７×１０^６個、１．４×１０^６個～１．８×１０^６個、１．４×１０^６個～１．９×１０^６個、１．４×１０^６個～２．０×１０^６個、１．４×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．４×１０^６個～２．５×１０^６個、１．４×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．４×１０^６個～３．０×１０^６個、１．５×１０^６個～１．６×１０^６個、１．５×１０^６個～１．７×１０^６個、１．５×１０^６個～１．８×１０^６個、１．５×１０^６個～１．９×１０^６個、１．５×１０^６個～２．０×１０^６個、１．５×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．５×１０^６個～２．５×１０^６個、１．５×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．５×１０^６個～３．０×１０^６個、１．６×１０^６個～１．７×１０^６個、１．６×１０^６個～１．８×１０^６個、１．６×１０^６個～１．９×１０^６個、１．６×１０^６個～２．０×１０^６個、１．６×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．６×１０^６個～２．５×１０^６個、１．６×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．６×１０^６個～３．０×１０^６個、１．７×１０^６個～１．８×１０^６個、１．７×１０^６個～１．９×１０^６個、１．７×１０^６個～２．０×１０^６個、１．７×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．７×１０^６個～２．５×１０^６個、１．７×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．７×１０^６個～３．０×１０^６個、１．８×１０^６個～１．９×１０^６個、１．８×１０^６個～２．０×１０^６個、１．８×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．８×１０^６個～２．５×１０^６個、１．８×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．８×１０^６個～３．０×１０^６個、１．９×１０^６個～２．０×１０^６個、１．９×１０^６個～２．２５×１０^６個、１．９×１０^６個～２．５×１０^６個、１．９×１０^６個～２．７５×１０^６個、１．９×１０^６個～３．０×１０^６個、２．０×１０^６個～２．２５×１０^６個、２．０×１０^６個～２．５×１０^６個、２．０×１０^６個～２．７５×１０^６個、２．０×１０^６個～３．０×１０^６個、２．２５×１０^６個～２．５×１０^６個、２．２５×１０^６個～２．７５×１０^６個、２．２５×１０^６個～３．０×１０^６個、２．５×１０^６個～２．７５×１０^６個、２．５×１０^６個～３．０×１０^６個、もしくは２．７５×１０^６個～３．０×１０^６個のＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植される。

一部の実施形態において、マウスは、１．０×１０^７個、１．１×１０^７個、１．２×１０^７個、１．３×１０^７個、１．４×１０^７個、１．５×１０^７個、１．６×１０^７個、１．７×１０^７個、１．８×１０^７個、１．９×１０^７個、２．０×１０^７個、２．５×１０^７個、３．０×１０^７個またはそれより多いＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植され得る。一部の実施形態において、マウスは、１．０×１０^７個～１．１×１０^７個、１．０×１０^７個～１．２×１０^７個、１．０×１０^７個～１．３×１０^７個、１．０×１０^７個～１．４×１０^７個、１．０×１０^７個～１．５×１０^７個、１．０×１０^７個～１．６×１０^７個、１．０×１０^７個～１．７×１０^７個、１．０×１０^７個～１．８×１０^７個、１．０×１０^７個～１．９×１０^７個、１．０×１０^７個～２．０×１０^７個、１．０×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．０×１０^７個～２．５×１０^７個、１．０×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．０×１０^７個～３．０×１０^７個、１．１×１０^７個～×１０^７個～１．２×１０^７個、１．１×１０^７個～１．３×１０^７個、１．１×１０^７個～１．４×１０^７個、１．１×１０^７個～１．５×１０^７個、１．１×１０^７個～１．６×１０^７個、１．１×１０^７個～１．７×１０^７個、１．１×１０^７個～１．８×１０^７個、１．１×１０^７個～１．９×１０^７個、１．１×１０^７個～２．０×１０^７個、１．１×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．１×１０^７個～２．５×１０^７個、１．１×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．１×１０^７個～３．０×１０^７個、１．２×１０^７個～１．３×１０^７個、１．２×１０^７個～１．４×１０^７個、１．２×１０^７個～１．５×１０^７個、１．２×１０^７個～１．６×１０^７個、１．２×１０^７個～１．７×１０^７個、１．２×１０^７個～１．８×１０^７個、１．２×１０^７個～１．９×１０^７個、１．２×１０^７個～２．０×１０^７個、１．２×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．２×１０^７個～２．５×１０^７個、１．２×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．２×１０^７個～３．０×１０^７個、１．３×１０^７個～１．４×１０^７個、１．３×１０^７個～１．５×１０^７個、１．３×１０^７個～１．６×１０^７個、１．３×１０^７個～１．７×１０^７個、１．３×１０^７個～１．８×１０^７個、１．３×１０^７個～１．９×１０^７個、１．３×１０^７個～２．０×１０^７個、１．３×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．３×１０^７個～２．５×１０^７個、１．３×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．３×１０^７個～３．０×１０^７個、１．４×１０^７個～１．５×１０^７個、１．４×１０^７個～１．６×１０^７個、１．４×１０^７個～１．７×１０^７個、１．４×１０^７個～１．８×１０^７個、１．４×１０^７個～１．９×１０^７個、１．４×１０^７個～２．０×１０^７個、１．４×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．４×１０^７個～２．５×１０^７個、１．４×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．４×１０^７個～３．０×１０^７個、１．５×１０^７個～１．６×１０^７個、１．５×１０^７個～１．７×１０^７個、１．５×１０^７個～１．８×１０^７個、１．５×１０^７個～１．９×１０^７個、１．５×１０^７個～２．０×１０^７個、１．５×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．５×１０^７個～２．５×１０^７個、１．５×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．５×１０^７個～３．０×１０^７個、１．６×１０^７個～１．７×１０^７個、１．６×１０^７個～１．８×１０^７個、１．６×１０^７個～１．９×１０^７個、１．６×１０^７個～２．０×１０^７個、１．６×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．６×１０^７個～２．５×１０^７個、１．６×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．６×１０^７個～３．０×１０^７個、１．７×１０^７個～１．８×１０^７個、１．７×１０^７個～１．９×１０^７個、１．７×１０^７個～２．０×１０^７個、１．７×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．７×１０^７個～２．５×１０^７個、１．７×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．７×１０^７個～３．０×１０^７個、１．８×１０^７個～１．９×１０^７個、１．８×１０^７個～２．０×１０^７個、１．８×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．８×１０^７個～２．５×１０^７個、１．８×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．８×１０^７個～３．０×１０^７個、１．９×１０^７個～２．０×１０^７個、１．９×１０^７個～２．２５×１０^７個、１．９×１０^７個～２．５×１０^７個、１．９×１０^７個～２．７５×１０^７個、１．９×１０^７個～３．０×１０^７個、２．０×１０^７個～２．２５×１０^７個、２．０×１０^７個～２．５×１０^７個、２．０×１０^７個～２．７５×１０^７個、２．０×１０^７個～３．０×１０^７個、２．２５×１０^７個～２．５×１０^７個、２．２５×１０^７個～２．７５×１０^７個、２．２５×１０^７個～３．０×１０^７個、２．５×１０^７個～２．７５×１０^７個、２．５×１０^７個～３．０×１０^７、もしくは２．７５×１０^７個～３．０×１０^７個のＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植され得る。一部の実施形態において、マウスは、２×１０^７個のＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植される。一部の実施形態にしたがって、マウスは、４．５×１０^７個～５．５×１０^７個（４．５×１０^７個～５．０×１０^７個、５．０×１０^７個～５．５×１０^７個）のＨＳＣおよび／またはＰＢＭＣを移植される。

（核酸：操作および送達）
本明細書において記載されるマウスモデルは、ヒトＡＰＰをコードする核酸またはヒト化ＡＰＰをコードする核酸を含み、一部の実施形態においては、変異型ヒトＰＳＥＮ１をコードする核酸を含む。一部の実施形態において、本明細書において記載されるマウスモデルはまた、マウスＡｐｐアレルおよび／またはマウスＰｓｅｎ１アレルも含む。一部の実施形態において、そのマウスモデルは、ヒトＡＰＰ導入遺伝子またはヒト化ＡＰＰ導入遺伝子と、変異型ヒトＰＳＥＮ１導入遺伝子とを含む。一部の実施形態において、導入遺伝子（例えば、ヒトＡＰＰ導入遺伝子および／または変異型ヒトＰＳＥＮ１導入遺伝子）は、マウスゲノムに組み込まれる。ヒトＡＰＰまたはヒト化ＡＰＰ、および変異型ヒトＰＳＥＮ１導入遺伝子は記載されており（ＪＡＸストック番号０２５９７０）、本明細書において参照によって援用される。

本明細書において提供される核酸は、一部の実施形態において、操作される。操作された核酸は、天然には存在しない核酸（例えば、一緒に共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドであり、一部の場合には、ホスホジエステル骨格と呼ばれるホスホジエステル結合を含む）である。操作された核酸としては、組換え核酸および合成核酸が挙げられる。組換え核酸は、２種の異なる生物（例えば、ヒトおよびマウス）に由来する核酸（例えば、単離された核酸、合成核酸、またはそれらの組合せ）を連結することによって構築された、分子である。合成核酸は、増幅されたか、または化学的もしくは他の手段によって合成された、分子である。合成核酸は、化学的に改変されたかまたは他の方法により改変されているが、天然に存在する核酸分子と塩基対形成（結合）し得るものを含む。組換え核酸および合成核酸はまた、上記のいずれかの複製から生じる分子を含む。

操作された核酸は、ＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡとｃＤＮＡとの組合せ）、ＲＮＡまたはハイブリッド分子（例えば、その核酸はデオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチド（例えば、人工もしくは天然）との任意の組合せ、ならびに２種以上の塩基（ウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシンおよびイソグアニンが挙げられる）の任意の組合せを含む）を含み得る。

一部の実施形態において、核酸は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）である。ｃＤＮＡは、一本鎖ＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ））テンプレートから、逆転写酵素によって触媒される反応において合成される。

本開示の操作された核酸は、標準的な分子生物学の方法（例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、２０１２、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓを参照のこと）を使用して作製され得る。一部の実施形態において、核酸は、ＧＩＢＳＯＮＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）Ｃｌｏｎｉｎｇ（例えば、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ら、ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓ、３４３～３４５、２００９；およびＧｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ら、ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓ、９０１～９０３、２０１０（それらの各々は本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）を使用して作製される。ＧＩＢＳＯＮＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）は、代表的には、単一試験管反応において、５’エキソヌクレアーゼ、ＤＮＡポリメラーゼの３’伸長活性およびＤＮＡリガーゼ活性という、３種の酵素活性を使用する。その５’エキソヌクレアーゼ活性は、５’末端配列をチューバック（ｃｈｅｗｓｂａｃｋ）し、その相補配列をアニーリングのために露出させる。その後、そのポリメラーゼ活性は、アニールされたドメインにある間隙を満たす。その後、ＤＮＡリガーゼが、そのニックを塞ぎ、ＤＮＡフラグメントを一緒に共有結合する。隣接するフラグメントの重複配列は、ＧｏｌｄｅｎＧａｔｅＡｓｓｅｍｂｌｙにおいて使用されるものよりもはるかに長く、したがって、より高い割合の正確なアセンブリを生じる。操作された核酸を作製する他の方法が、本開示にしたがって使用され得る。

遺伝子は別個のヌクレオチド配列であり、その順序は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド中のモノマーの順序を決定する。遺伝子は、代表的にはタンパク質をコードする。遺伝子は、内因性（宿主生物に天然で存在する）であってもよく、外因性（宿主生物に天然で移入されるかもしくは遺伝子操作を通じて移入される）であってもよい。アレルは、変異によって生じ染色体上の同じ遺伝子座において見出される、遺伝子の２種またはそれより多い代替的形態のうちの一つである。遺伝子は、一部の実施形態において、プロモーター配列、コード領域（例えば、エクソン）、非コード領域（例えば、イントロン）、および調節領域（調節配列とも呼ばれる）を含む。

ヒト遺伝子を含むマウスは、ヒト導入遺伝子を含むと考えられる。導入遺伝子は、宿主生物にとって外因性である遺伝子である。すなわち、導入遺伝子は、宿主生物に天然で移入されたかまたは遺伝子操作を通じて移入された、遺伝子である。導入遺伝子は、その宿主生物（その導入遺伝子を含む生物（例えば、マウス））に天然では存在しない。

プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼが結合して転写を開始するヌクレオチド配列（例えば、ＡＴＧ）である。プロモーターは、代表的には、転写開始部位からすぐ上流（その５’末端）に位置する。一部の実施形態において、プロモーターは内因性プロモーターである。内因性プロモーターは、その宿主動物に天然で存在するプロモーターである。

オープンリーディングフレームは、開始コドン（例えば、ＡＴＧ）で始まり終止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）で終わる連続する一続きのコドンであり、ポリペプチド（例えば、タンパク質）をコードする。オープンリーディングフレームは、あるプロモーターに、そのプロモーターがそのオープンリーディングフレームの転写を調節する場合には、作動可能に連結されている。

エクソンは、遺伝子のうちのアミノ酸をコードする領域である。イントロン（および他の非コードＤＮＡ）は、遺伝子のうちのアミノ酸をコードしない領域である。

生成物（例えば、タンパク質）をコードするヌクレオチド配列は、一部の実施形態において、長さ２００塩基対（ｂｐ）～１００キロベース（ｋｂ）を有する。そのヌクレオチド配列は、一部の実施形態において、長さ少なくとも１０ｋｂを有する。例えば、そのヌクレオチド配列は、長さ少なくとも１５ｋｂ、少なくとも２０ｋｂ、少なくとも２５ｋｂ、少なくとも３０ｋｂ、または少なくとも３５ｋｂを有し得る。一部の実施形態において、そのヌクレオチド配列は、長さ１０ｋｂ～１００ｋｂ、１０ｋｂ～７５ｋｂ、１０ｋｂ～５０ｋｂ、１０ｋｂ～３０ｋｂ、２０ｋｂ～１００ｋｂ、２０ｋｂ～７５ｋｂ、２０ｋｂ～５０ｋｂ、２０ｋｂ～３０ｋｂ、３０ｋｂ～１００ｋｂ、３０ｋｂ～７５ｋｂ、または３０ｋｂ～５０ｋｂを有する。

本明細書において提供される核酸のうちのいずれか１つは、長さ２００ｂｐ～５００ｋｂ、２００ｂｐ～２５０ｋｂ、または２００ｂｐ～１００ｋｂを有し得る。核酸は、一部の実施形態において、長さ少なくとも１０ｋｂを有する。例えば、核酸は、長さ少なくとも１５ｋｂ、少なくとも２０ｋｂ、少なくとも２５ｋｂ、少なくとも３０ｋｂ、少なくとも３５ｋｂ、少なくとも５０ｋｂ、少なくとも１００ｋｂ、少なくとも２００ｋｂ、少なくとも３００ｋｂ、少なくとも４００ｋｂ、または少なくとも５００ｋｂを有し得る。一部の実施形態において、核酸は、長さ１０ｋｂ～５００ｋｂ、２０ｋｂ～４００ｋｂ、１０ｋｂ～３００ｋｂ、１０ｋｂ～２００ｋｂ、または１０ｋｂ～１００ｋｂを有する。一部の実施形態において、核酸は、長さ１０ｋｂ～１００ｋｂ、１０ｋｂ～７５ｋｂ、１０ｋｂ～５０ｋｂ、１０ｋｂ～３０ｋｂ、２０ｋｂ～１００ｋｂ、２０ｋｂ～７５ｋｂ、２０ｋｂ～５０ｋｂ、２０ｋｂ～３０ｋｂ、３０ｋｂ～１００ｋｂ、３０ｋｂ～７５ｋｂ、または３０ｋｂ～５０ｋｂを有する。核酸は、環状であっても、直鎖状であってもよい。

本明細書において記載される核酸は、一部の実施形態において、改変を含む。改変とは、核酸に関して言えば、対応する野生型核酸（例えば、天然に存在する核酸）と比較したその核酸のあらゆる操作である。したがって、ゲノム改変とは、ゲノムにおいて対応する野生型核酸（例えば、天然に存在する（改変されていない）核酸）と比較したゲノムにおける（例えば、コード領域中、非コード領域中、および／または調節領域中の）核酸のあらゆる操作である。核酸（例えば、ゲノム）改変の非限定的例としては、欠失、挿入、「インデル」（欠失および挿入）、ならびに置換（例えば、点変異）が挙げられる。一部の実施形態において、遺伝子における欠失、挿入、インデル、または他の改変は、その遺伝子が機能的生成物（例えば、タンパク質）をもはやコードしないように、フレームシフト変異を生じる。改変はまた、化学的改変、例えば、少なくとも１核酸塩基の化学的改変を含む。核酸改変の方法（例えば、遺伝子不活性化を生じる方法）は、公知であり、その方法としては、ＲＮＡ干渉、化学的改変、および遺伝子編集（例えば、リコンビナーゼまたは他のプログラム可能なヌクレアーゼシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、および／もしくはＺＦＮ）を使用する）が挙げられるが、それらに限定はされない。

機能喪失型変異は、当該分野において公知であるとおり、機能がほとんどないかまたは全くない遺伝子生成物を生じる。ヌル変異（これは、１種の機能喪失型変異である）は、機能が全くない遺伝子生成物を生じる。一部の実施形態において、不活性化アレルは、ヌルアレルである。機能喪失型変異の他の例としては、ミスセンス変異およびフレームシフト変異が挙げられる。

核酸（例えば、遺伝子のアレルまたはアレル（複数））は、検出可能なレベルの機能的遺伝子生成物（例えば、機能的タンパク質）をその核酸が生成しないように、改変され得る。したがって、不活性化アレルは、検出可能なレベルの機能的遺伝子生成物（例えば、機能的タンパク質）を生成しないアレルである。検出可能なレベルのタンパク質は、標準的な検出アッセイ（例えば、フローサイトメトリーおよび／またはＥＬＩＳＡ）を使用して検出されるあらゆるレベルのタンパク質である。一部の実施形態において、不活性化アレルは、転写されない。一部の実施形態において、不活性化アレルは、機能的タンパク質をコードしない。

核酸の送達のために使用されるベクターとしては、ミニサークル、プラスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、および酵母人工染色体が挙げられる。しかし、ベクターは必要ではないかもしれないことが、理解されるべきである。例えば、環状化核酸または直鎖状核酸が、そのベクター骨格を用いずに胚に送達され得る。ベクター骨格は小さい（約４ｋｂ）が、環状化され得るドナーＤＮＡは、例えば、＞１００ｂｐ～５０ｋｂの範囲であり得る。

トランスジェニックマウスの作製のためにマウス胚に核酸を送達するための方法としては、エレクトロポレーション（例えば、ＷａｎｇＷら、ＪＧｅｎｅｔＧｅｎｏｍｉｃｓ、２０１６；４３（５）：３１９～２７；ＷＯ２０１６／０５４０３２；およびＷＯ２０１７／１２４０８６（これらの各々は、本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）、ＤＮＡマイクロインジェクション（例えば、ＧｏｒｄｏｎおよびＲｕｄｄｌｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８１：２１４：１２４４～１２４（本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）、胚性幹細胞媒介性遺伝子移入（例えば、Ｇｏｓｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、１９８６；８３：９０６５～９０６９（本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）、ならびにレトロウイルス媒介性遺伝子移入（例えば、Ｊａｅｎｉｓｃｈ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、１９７６；７３：１２６０～１２６４（本明細書において参照によって援用される）を参照のこと）が挙げられるがそれらに限定はされず、これらのうちのいずれもが、本明細書において提供されるとおり使用され得る。

（ゲノム編集法）
操作された核酸（例えば、ガイドＲＮＡ、ドナーポリヌクレオチド、および他の核酸コード配列など）は、任意の適切な方法を使用して、胚または細胞（例えば、幹細胞）のゲノムに導入され得る。本出願は、例えば、トランスジェニック齧歯類を作製するために胚または細胞のゲノムに核酸を導入するための、種々の遺伝子編集技術の使用を企図する。非限定的例としては、プログラム可能なヌクレアーゼベースのシステム、例えば、クラスター化された規則的に間隔を空けた短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）システム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、および転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）が挙げられる。例えば、ＣａｒｒｏｌｌＤ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．、２０１１；１８８（４）：７７３～７８２；ＪｏｕｎｇＪＫら、ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ．、２０１３；１４（１）：４９～５５；およびＧａｊＴら、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１３Ｊｕｌ；３１（７）：３９７～４０５（それらの各々は本明細書において参照によって援用される）を参照のこと。

一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲシステムが、本明細書において提供されるマウス胚のゲノムを編集するために使用される。例えば、ＨａｒｍｓＤＷら、ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＨｕｍＧｅｎｅｔ．、２０１４；８３：１５．７．１～１５．７．２７；およびＩｎｕｉＭら、ＳｃｉＲｅｐ．、２０１４；４：５３９６（それらの各々が、本明細書において参照によって援用される）を参照のこと。例えば、Ｃａｓ９ｍＲＮＡもしくはＣａｓ９タンパク質、１種もしくは複数種のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、および／またはドナー核酸が、１細胞（接合子）期もしくはより後期のマウス胚に直接送達（例えば、注射もしくはエレクトロポレーション）され得、相同組換え修復（ＨＤＲ）が促進され得、例えば、操作された核酸（例えば、ドナー核酸）がゲノム中に導入され得る。

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、遺伝子編集のためのＲＮＡ誘導型ＤＮＡ標的化プラットフォームとして別目的で再利用されている原核生物中の天然に存在する防御機構である。操作されたＣＲＩＳＰＲシステムは、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）およびＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓタンパク質）という２種の主要成分を含む。このｇＲＮＡは、ヌクレアーゼ結合のための足場配列と、改変されるべきゲノム標的（例えば、遺伝子）を規定するユーザーが規定したヌクレオチドスペーサー（例えば、約１５～２５ヌクレオチド、または約２０ヌクレオチド）とから構成された、短い合成ＲＮＡである。したがって、そのｇＲＮＡ中に存在する標的配列を単に変更することによって、そのＣａｓタンパク質のゲノム標的を変更し得る。一部の実施形態において、そのＣａｓ９エンドヌクレアーゼは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ（ＮＧＧＰＡＭ）またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＮＮＧＲＲＴもしくはＮＮＧＲＲ（Ｎ）ＰＡＭ）に由来するが、他のＣａｓ９ホモログ、Ｃａｓ９オルソログ、および／またはＣａｓ９バリアント（例えば、Ｃａｓ９の進化したバージョン）が、本明細書において提供されるとおり、使用され得る。本明細書において提供されるとおり使用され得るＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼのさらなる非限定的例としては、Ｃｐｆ１（ＴＴＮＰＡＭ）；ＳｐＣａｓ９Ｄ１１３５Ｅバリアント（ＮＧＧ（減少したＮＡＧ結合）ＰＡＭ）；ＳｐＣａｓ９ＶＲＥＲバリアント（ＮＧＣＧＰＡＭ）；ＳｐＣａｓ９ＥＱＲバリアント（ＮＧＡＧＰＡＭ）；ＳｐＣａｓ９ＶＱＲバリアント（ＮＧＡＮまたはＮＧＮＧＰＡＭ）；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（ＮＭ）のＣａｓ９（ＮＮＮＮＧＡＴＴＰＡＭ）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）のＣａｓ９（ＮＮＡＧＡＡＷＰＡＭ）；およびＴｒｅｐｏｎｅｍａｄｅｎｔｉｃｏｌａ（ＴＤ）のＣａｓ９（ＮＡＡＡＡＣ）が挙げられる。一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、Ｃａｓ９、Ｃｐｆ１、Ｃ２ｃ１、およびＣ２ｃ３から選択される。一部の実施形態において、ＣａｓヌクレアーゼはＣａｓ９である。

ガイドＲＮＡは、標的核酸配列にハイブリダイズ（結合）するスペーサー配列と、そのエンドヌクレアーゼに結合してそのエンドヌクレアーゼをその標的核酸配列へと誘導するＣＲＩＳＰＲ反復配列とを、少なくとも含む。当業者によって理解されるとおり、各ｇＲＮＡは、そのゲノム標的配列に対して相補的なスペーサー配列を含むように設計される。例えば、Ｊｉｎｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１２；３３７：８１６～８２１およびＤｅｌｔｃｈｅｖａら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１；４７１：６０２～６０７（それらの各々は本明細書において参照によって援用される）を参照のこと。

一部の実施形態において、そのＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼとそのｇＲＮＡとは、胚への送達の前に、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）を形成するように複合体化される。

ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼまたはそのＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼをコードする核酸の濃度は、変化し得る。一部の実施形態において、その濃度は、１００ｎｇ／μｌ～１０００ｎｇ／μｌである。例えば、その濃度は、１００ｎｇ／μｌ、１５０ｎｇ／μｌ、２００ｎｇ／μｌ、２５０ｎｇ／μｌ、３００ｎｇ／μｌ、３５０ｎｇ／μｌ、４００ｎｇ／μｌ、４５０ｎｇ／μｌ、５００ｎｇ／μｌ、５５０ｎｇ／μｌ、６００ｎｇ／μｌ、６５０ｎｇ／μｌ、７００ｎｇ／μｌ、７５０ｎｇ／μｌ、８００ｎｇ／μｌ、８５０ｎｇ／μｌ、９００ｎｇ／μｌ、９５０ｎｇ／μｌ、または１０００ｎｇ／μｌであり得る。一部の実施形態において、その濃度は、１００ｎｇ／μｌ～５００ｎｇ／μｌ、または２００ｎｇ／μｌ～５００ｎｇ／μｌである。

ｇＲＮＡの濃度もまた、変化し得る。一部の実施形態において、その濃度は、２００ｎｇ／μｌ～２０００ｎｇ／μｌである。例えば、その濃度は、２００ｎｇ／μｌ、３００ｎｇ／μｌ、４００ｎｇ／μｌ、５００ｎｇ／μｌ、６００ｎｇ／μｌ、７００ｎｇ／μｌ、８００ｎｇ／μｌ、９００ｎｇ／μｌ、１０００ｎｇ／μｌ、１１００ｎｇ／μｌ、１２００ｎｇ／μｌ、１３００ｎｇ／μｌ、１４００ｎｇ／μｌ、１５００ｎｇ／μｌ、１６００ｎｇ／μｌ、１７００ｎｇ／μｌ、１７００ｎｇ／μｌ、１９００ｎｇ／μｌ、または２０００ｎｇ／μｌであり得る。一部の実施形態において、その濃度は５００ｎｇ／μｌ～１０００ｎｇ／μｌである。一部の実施形態において、その濃度は１００ｎｇ／μｌ～１０００ｎｇ／μｌである。例えば、その濃度は、１００ｎｇ／μｌ、１５０ｎｇ／μｌ、２００ｎｇ／μｌ、２５０ｎｇ／μｌ、３００ｎｇ／μｌ、３５０ｎｇ／μｌ、４００ｎｇ／μｌ、４５０ｎｇ／μｌ、５００ｎｇ／μｌ、５５０ｎｇ／μｌ、６００ｎｇ／μｌ、６５０ｎｇ／μｌ、７００ｎｇ／μｌ、７５０ｎｇ／μｌ、８００ｎｇ／μｌ、８５０ｎｇ／μｌ、９００ｎｇ／μｌ、９５０ｎｇ／μｌ、または１０００ｎｇ／μｌであり得る。

一部の実施形態において、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼまたはそのＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼをコードする核酸の濃度とｇＲＮＡの濃度との比は、２：１である。他の実施形態において、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼまたはそのＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼをコードする核酸の濃度とｇＲＮＡの濃度との比は、１：１である。

ドナー核酸は、代表的には、相同性アームによって挟まれた目的の配列を含む。相同性アームは、ゲノム遺伝子座中に位置するゲノムＤＮＡ領域と相同なｓｓＤＮＡ領域である。一方の相同性アームは（目的の配列が挿入される）目的のゲノム領域の左（５’）側に位置し（左相同性アーム）、別の相同性アームが目的のゲノム領域の右（３’）側に位置する（右相同性アーム）。これらの相同性アームは、そのｓｓＤＮＡドナーとゲノム遺伝子座との間での相同組換えを可能にして、（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性相同組換え修復（ＨＤＲ）を介して）目的のゲノム遺伝子座への目的の配列の挿入をもたらす。

その相同性アームは、長さが変化し得る。例えば、各相同性アーム（左アームおよび右相同性アーム）は、長さ２０ヌクレオチド塩基～１０００ヌクレオチド塩基を有し得る。一部の実施形態において、各相同性アームは、長さ２０ヌクレオチド塩基～２００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～３００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～４００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～５００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～６００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～７００ヌクレオチド塩基、２０ヌクレオチド塩基～８００ヌクレオチド塩基、または２０ヌクレオチド塩基～９００ヌクレオチド塩基を有する。一部の実施形態において、各相同性アームは、長さ２０ヌクレオチド塩基、３０ヌクレオチド塩基、４０ヌクレオチド塩基、５０ヌクレオチド塩基、６０ヌクレオチド塩基、７０ヌクレオチド塩基、８０ヌクレオチド塩基、９０ヌクレオチド塩基、１００ヌクレオチド塩基、１５０ヌクレオチド塩基、２００ヌクレオチド塩基、２５０ヌクレオチド塩基、３００ヌクレオチド塩基、３５０ヌクレオチド塩基、４００ヌクレオチド塩基、４５０ヌクレオチド塩基、５００ヌクレオチド塩基、５５０ヌクレオチド塩基、６００ヌクレオチド塩基、６５０ヌクレオチド塩基、７００ヌクレオチド塩基、７５０ヌクレオチド塩基、８００ヌクレオチド塩基、８５０ヌクレオチド塩基、９００ヌクレオチド塩基、９５０ヌクレオチド塩基、または１０００ヌクレオチド塩基を有する。一部の実施形態において、一方の相同性アームの長さは、もう一方の相同性アームの長さとは異なる。例えば、一方の相同性アームは長さ２０ヌクレオチド塩基を有し得、もう一方の相同性アームは長さ５０ヌクレオチド塩基を有し得る。一部の実施形態において、そのドナーＤＮＡは一本鎖である。一部の実施形態において、そのドナーＤＮＡは二本鎖である。一部の実施形態において、そのドナーＤＮＡは、例えば、ホスホロチオール化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｉｏｎ）を介して、改変される。他の改変が、なされ得る。

（実施例１．ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルの作製）
ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄＥ９）８５Ｄｂｏ／Ｈｏｗ（ＪＲ＃２９５１３）（ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１）を、雄ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄＥ９）８５Ｄｂｏ／Ｈｏｗ（ＪＲ＃２５９６７）を雌ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＪＲ＃００５５５７）に交雑させることによって作製した。雄子孫をＡＰＰ／ＰＳＥＮ１導入遺伝子およびガンマ変異の存在について遺伝子型決定し、その後に続けて、雌ＮＳＧマウスに交雑させた。雄ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１および雌ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１のコホートを、評価のためにＮ１１で作製した。すべてのマウスをスルファトリム（Ｓｕｌｆａｔｒｉｍ）抗生物質水にて維持した。これらのマウスは、異なる系統バックグラウンドまたはヒト起源に由来する物質の導入を通じたアミロイドとの免疫相互作用の評価のための独特なプラットフォームを表す。

（行動表現型）
ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルの認知を、以前に記載された（ＳｕｋｏｆｆＲｉｚｚｏ、２０１８）とおり短期記憶のＹ迷路課題である新規空間認識に関して７か月齢で評価した。動物を、視覚的合図が各アームの端に配置されたＹ迷路中に配置した。それらのアームのうちの一方（新規アーム）は遮断した状態で、動物は、その迷路を１０分間探索した。３０分の遅延の後、すべてのアームを利用可能にした状態で動物をその迷路に５分間再導入した。それらの結果を図１に示す。インタクトな短期記憶は、その動物が新規アームにおいてより高い割合の時間を費やす場合に示される。雄ＮＳＧ動物および雌ＮＳＧ動物の両方がインタクトな短期記憶を示したが、トランスジェニックＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１同腹仔は、この課題に失敗し、すべてのアームを探索するのに等しい割合の時間を費やした。これらの知見は、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルとは対照的である。このＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、７か月齢でこの課題において認知欠損を示さない。さらに、このＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスは、１０か月齢までモリス水迷路などの他の認知課題において欠損を示すとは報告されていない（ＡｌｚＦｏｒｕｍ）。これらの結果は、認知欠損を予防し得る免疫関連介入の評価のためのＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１系統の有用性を強調する。

（プラーク沈着）
動物を、１×ＰＢＳによる心臓灌流を介して８か月齢で屠殺し、脳を４％パラホルムアルデヒドで一晩固定し、１５％スクロース中の後３０％スクロース中に２４時間配置し、ＯＣＴ中でブロックし、神経病態の評価のために２５ミクロン毎に凍結切片化した。アミロイド沈着を、１％チオフラビンＳ染色（１：１の水：エタノール比で希釈した）を使用して評価し、これは、プラークが主に海馬に限定され、皮質沈着物が最小限であったことを示した（図２を参照のこと）。この行動課題は海馬を必要とするので、これらの結果は短期記憶欠損への直接的関連を示唆する。このプラーク領域特異性は、Ｂ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルにおいて観察されるプラーク領域特異性とは全く対照的であり、このＢ６．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルはこの時点で海馬プラーク沈着および強固な皮質プラーク沈着を示す（Ｊａｃｋｓｏｎら、２０１３；Ｏｎｏｓら、２０１９）。これらの結果はまた、ヒト患者において見られるものと一致し、ヒト患者において、プラーク病態は最初に海馬において生じる。予想されたとおり、非トランスジェニックＮＳＧ同腹仔は、プラーク病態を示さなかった。

（グリア神経炎症）
アストロサイトのマーカー（抗ニワトリＧＦＡＰ、ＡＣＲＩＳ／Ｏｒｉｇｅｎｅ、ＡＰ３１８０６ＰＵ－Ｎ、１：３００）およびミクログリアのマーカー（抗ウサギＩＢＡ１、Ｗａｋｏ、０１９－１９７４１、１：３００）での免疫蛍光染色は、適応免疫障害にも関わらず、ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスが依然としてアミロイドに反応して脳における強固な神経炎症を示すことを示す（図３を参照のこと）。これらの結果は、ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスがインタクトな自然免疫シグナル伝達を保持することを示唆する。これらの知見を考慮すれば、ＮＳＧ．ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルは、認知欠損に対する他の系統バックグラウンド由来またはヒト起源の移植されたグリアの効果を分析するために有用であり得る。

本明細書において開示されるすべての参考文献、特許および特許出願は、各々が引用され場合によってはその文書の全体を含み得る主題に関して、参照によって援用される。

不定冠詞「１つの（ある）（ａ）」および「１つの（ある）（ａｎ）」は、本明細書および特許請求の範囲において本文書で使用される場合、反対であるように明確に示されない限りは、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

反対であるように明確に示されない限りは、１よりも多いステップ（工程）またはアクト（行為）を含む本文書において特許請求されるあらゆる方法において、その方法のステップ（工程）またはアクト（行為）の順序は、その方法のステップ（工程）またはアクト（行為）が記載された順序に必ずしも限定されないこともまた、理解されるべきである。

特許請求の範囲および上記の本明細書において、すべての移行句、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「保有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「有する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「から構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆ）」などは、非限定型（ｏｐｅｎ－ｅｎｄｅｄ）であり、すなわち、含むがそれらに限定はされないことを意味すると、理解されるべきである。移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」および「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」のみは、アメリカ合衆国特許審査便覧（ｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰａｔｅｎｔＯｆｆｉｃｅＭａｎｕａｌｏｆＰａｔｅｎｔＥｘａｍｉｎｉｎｇＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）セクション２１１１．０３において示されるとおり、それぞれ限定型（ｃｌｏｓｅｄ）または半限定型（ｓｅｍｉ－ｃｌｏｓｅｄ）の移行句である。

数値の前にある用語「約」および「実質的に」は、記載された数値の±１０％を意味する。

一定範囲の値が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の各値が、本明細書において具体的に企図され記載されている。

（参考文献）

Claims

マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異と、マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異と、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸とをそのゲノム中に含む、免疫無防備状態マウス。
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）遺伝的バックグラウンドを有する、請求項１に記載の免疫無防備状態マウス。
前記マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異がマウスＰｒｋｄｃ遺伝子におけるヌル変異である、請求項１または２に記載の免疫無防備状態マウス。
前記マウスＰｒｋｄｃ遺伝子におけるヌル変異がＰｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異である、請求項３に記載の免疫無防備状態マウス。
前記マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異がマウスＩｌ２ｒｇ遺伝子におけるヌル変異である、請求項１～４のいずれか一項に記載の免疫無防備状態マウス。
前記マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子におけるヌル変異がＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異である、請求項５に記載の免疫無防備状態マウス。
ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ遺伝的バックグラウンドを有する、請求項６に記載の免疫無防備状態マウス。
前記ヌル変異がＩｌ２ｒｇ^{ｅｍ２６Ｃｄ２２}変異である、請求項５に記載の免疫無防備状態マウス。
ＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃ^{ｅｍ２６Ｃｄ５２}Ｉｌ２ｒｇ^{ｅｍ２６Ｃｄ２２}／ＮｊｕＣｒｌ遺伝的バックグラウンドを有する、請求項７に記載の免疫無防備状態マウス。
ヒト化ＡＰＰをコードする核酸を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の免疫無防備状態マウス。
前記ヒト化ＡＰＰをコードする核酸が、マウスコード配列とヒトコード配列とを含むキメラ核酸である、請求項１０に記載の免疫無防備状態マウス。
前記キメラ核酸がマウスＡＰＰコード配列のＡ－βドメイン中にヒトコード配列を含む、請求項１１に記載の免疫無防備状態マウス。
前記キメラ核酸が、配列番号１のアミノ酸配列を含むヒトＡＰＰと比較して、ヒト変異Ｋ５９５Ｎおよびヒト変異Ｍ５９６Ｌをコードする、請求項１１または１２に記載の免疫無防備状態マウス。
ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子をそのゲノム中に含む、請求項１３に記載の免疫無防備状態マウス。
変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）をコードする核酸をそのゲノム中にさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の免疫無防備状態マウス。
前記変異型ＰＳＥＮ１をコードする核酸が、エクソン９における欠失を含むヒトＰＳＥＮコード配列を含む、請求項１５に記載の免疫無防備状態マウス。
ＰＳＥＮｄｅ９導入遺伝子をそのゲノム中に含む、請求項１６に記載の免疫無防備状態マウス。
Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ，ＰＳＥＮ１ｄｅ９）８５Ｄｂｏ導入遺伝子挿入をそのゲノム中に含む、請求項１７に記載の免疫無防備状態マウス。
早期発症型アルツハイマー病の少なくとも１つの特徴を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫無防備状態マウス。
対照と比較した認知欠損、対照と比較して増加した海馬プラーク沈着物、および対照と比較して増加した脳における神経炎症から選択される早期発症型アルツハイマー病の少なくとも１つの特徴を有する、請求項１９に記載の免疫無防備状態マウス。
腫瘍を発生しない、請求項１～２０のいずれか一項に記載の免疫無防備状態マウス。
測定可能な腫瘍負荷を有しない、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸を含む免疫無防備状態マウス。
少なくとも１歳である、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸を含む免疫無防備状態マウス。
Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異とＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子とＰＳＥＮｄｅ９導入遺伝子とをそのゲノム中に含む、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウス。
請求項１～２４のいずれか一項に記載のマウスに由来する細胞。
請求項１～２５のいずれか一項に記載のマウスに由来する細胞と同じ遺伝子型を有する細胞を含む、マウス。
請求項１～２６のいずれか一項に記載のマウスの子孫マウス。
請求項１～２７のいずれか一項に記載のマウスを作製する工程を含む、方法。
マウスＰｒｋｄｃ遺伝子におけるヌル変異、マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子におけるヌル変異、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をコードする核酸、および変異型ヒトプレセニリン１タンパク質（ＰＳＥＮ１）をコードする核酸を、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスに導入する工程を含む、方法。
Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異、Ｉｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異、ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子、およびＰＳＥＮｄｅ９導入遺伝子を、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスに導入する工程を含む、方法。
（ａ）（ｉ）マウスＰｒｋｄｃ遺伝子における機能喪失型変異と（ｉｉ）マウスＩｌ２ｒｇ遺伝子における機能喪失型変異とを含むＮＯＤマウスを、（ｂ）（ｉ）ヒトアミロイド前駆体タンパク質をコードする核酸またはヒト化アミロイド前駆体タンパク質をコードする核酸と（ｉｉ）変異型ヒトプレセニリン１タンパク質をコードする核酸とを含むＮＯＤマウスに交配させて、早期発症型アルツハイマー病の特徴を有する免疫無防備状態子孫マウスを作製する工程を含む、方法。
（ａ）Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄ変異とＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}変異とを含む非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスを、（ｂ）ＡＰＰｓｗｅ導入遺伝子とＰＳＥＮｄｅ９導入遺伝子とを含むＮＯＤマウスに交配させる工程を含む、方法。
請求項３１または３２に記載の子孫マウスを繁殖させる工程を含む、方法。
請求項３３に記載の子孫マウスからの子孫マウスを繁殖させる工程を含む、方法。