JP2024052378A - A cosmetic method including a step of increasing the amount of Staphylococcus hominis - Google Patents
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Abstract
【課題】新規な美容方法を提供すること。【解決手段】スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させる菌量増加工程を含む、美容方法（ただし、医療行為を除く）。【選択図】なしThe present invention provides a novel cosmetic method. The present invention relates to a cosmetic method (excluding medical procedures) that includes a step of increasing the amount of Staphylococcus hominis.
Description
本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させる菌量増加工程を含む、美容方法に関する。 The present invention relates to a cosmetic method that includes a step of increasing the amount of Staphylococcus hominis.
近年、人体に有用な作用を有する菌体を有効成分として含む化粧料が提案されている（特許文献１）。
例えば、特許文献２には、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とした、アトピー性皮膚炎の治療用途が開示されている。
In recent years, cosmetic compositions containing, as active ingredients, bacterial cells having beneficial effects on the human body have been proposed (Patent Document 1).
For example, Patent Document 2 discloses the use of Staphylococcus hominis as an active ingredient in the treatment of atopic dermatitis.
そして、肌状態に良い効果を示す特定の菌体を、特異的にコントロールする技術も注目を集めている。 Furthermore, technology that specifically controls certain bacteria that have a positive effect on skin conditions is also attracting attention.
ここで、バリア機能の指標としては、ＴＥＲ値（Ｔｒａｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）が用いられており、ＴＥＲ値を向上させることにより、バリア機能を向上・改善する技術が提案されている（非特許文献１）。 Here, the TER value (transepithelial electrical resistance) is used as an index of barrier function, and a technology has been proposed to improve and enhance barrier function by increasing the TER value (Non-Patent Document 1).
また、ＴＥＲ値に関与する接着タンパク質には、ＴＪＰ１（Ｔｉｇｈｔ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）、ＣＬＤ１（Ｃｌａｕｄｉｎ １）、ＯＣＬ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）、ＺＯ１（Ｚｏｎｕｌａ Ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）などがある（非特許文献２）。 Adhesion proteins involved in TER values include TJP1 (Tight Junction Protein 1), CLD1 (Claudin 1), OCL (Occludin), and ZO1 (Zonula Occludens Protein 1) (Non-Patent Document 2).
また、従来技術として、例えば、特許文献３には、コラーゲン等を含有する化粧料を、顔面に塗布しながらマッサージを行うステップを含む、肌のハリを改善する美容方法（医療行為を除く）が開示されている。
さらに、特許文献４にはニキビ予防効果を発揮し得る、ニキビ予防とクレンジングを同時に行う美容方法が開示されている。
Furthermore, as an example of prior art, Patent Document 3 discloses a cosmetic method (excluding medical procedures) for improving skin firmness, which includes a step of massaging the face while applying a cosmetic preparation containing collagen or the like to the face.
Furthermore, Patent Document 4 discloses a beauty method that can exert an acne prevention effect by simultaneously preventing acne and cleansing the skin.
上記先行技術のあるところ、本発明者らは、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させることによる美容効果を発見し、本発明を完成させた。 In light of the above prior art, the present inventors discovered the cosmetic effects of increasing Staphylococcus hominis, and completed the present invention.
すなわち、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させることによる美容方法（医療行為を除く）を提供することを目的とする。 In other words, the present invention aims to provide a cosmetic method (excluding medical procedures) that increases Staphylococcus hominis.
本発明に係る美容方法（医療行為を除く）は、
スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させる菌量増加工程を含むことを特徴とする。
The cosmetic method according to the present invention (excluding medical procedures) is as follows:
The method is characterized by including a step of increasing the amount of bacteria of Staphylococcus hominis.
また、本発明の好ましい実施の形態では、肌における乳酸量の減少、短鎖脂肪酸量の増加及びマロン酸量の増加から選ばれる１又は２以上を促進する。 In a preferred embodiment of the present invention, the present invention promotes one or more of the following: a decrease in the amount of lactic acid, an increase in the amount of short chain fatty acids, and an increase in the amount of malonic acid in the skin.
また、本発明の好ましい実施の形態では、前記の短鎖脂肪酸がプロピオン酸及び／又は酢酸である。 In a preferred embodiment of the present invention, the short-chain fatty acid is propionic acid and/or acetic acid.
また、本発明の好ましい実施の形態では、表皮のＴＥＲ値の向上及び／又はタイトジャンクション構造形成促進をする。 In addition, in a preferred embodiment of the present invention, the TER value of the epidermis is improved and/or the formation of tight junction structures is promoted.
また、本発明の好ましい実施の形態では、前記のタイトジャンクション構造形成促進は、ＣＬＤ１（Ｃｌａｕｄｉｎ １）及び／又はＯＣＬ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）発現量を増加させることによるものである。 In a preferred embodiment of the present invention, the promotion of tight junction structure formation is achieved by increasing the expression levels of CLD1 (Claudin 1) and/or OCL (Occludin).
また、本発明の好ましい実施の形態では、前記菌量増加工程は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）菌量促進剤を肌に適用する工程を含む。 In a preferred embodiment of the present invention, the bacterial amount increasing step includes a step of applying a Staphylococcus hominis bacterial amount promoter to the skin.
また、本発明の好ましい実施の形態では、前記スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）菌量促進剤が、キウイ抽出物及び／又はユズ抽出物である。 In a preferred embodiment of the present invention, the Staphylococcus hominis bacterial quantity promoter is a kiwi extract and/or a yuzu extract.
また、本発明の好ましい実施の形態では、前記菌量増加工程は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を肌に適用することを含む。 In a preferred embodiment of the present invention, the bacterial amount increasing step includes applying Staphylococcus hominis to the skin.
また、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、肌における乳酸量の減少剤でもある。
また、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、肌における短鎖脂肪酸量の増加剤でもある。
また、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、肌におけるマロン酸量の増加剤でもある。
また、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、表皮のＴＥＲ値の向上剤でもある。
また、本発明は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、肌のタイトジャンクション構造形成促進剤でもある。
The present invention also relates to an agent for reducing the amount of lactic acid in the skin, which comprises Staphylococcus hominis as an active ingredient.
The present invention also relates to an agent for increasing the amount of short-chain fatty acids in the skin, which comprises Staphylococcus hominis as an active ingredient.
The present invention also relates to an agent for increasing the amount of malonic acid in the skin, which comprises Staphylococcus hominis as an active ingredient.
The present invention also relates to an agent for improving the TER value of the epidermis, which comprises Staphylococcus hominis as an active ingredient.
The present invention also relates to a skin tight junction structure formation promoter containing Staphylococcus hominis as an active ingredient.
本発明によれば、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させることによる美容方法（医療行為を除く）を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a cosmetic method (excluding medical procedures) by increasing Staphylococcus hominis.
以下、本発明について詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の説明に限定されないことはいうまでもない。 The present invention will be described in detail below, but it goes without saying that the technical scope of the present invention is not limited to the following description.
＜１＞ 美容方法
本実施形態にかかる美容方法は、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ；以下、単にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ）を増加させる菌量増加工程を含むことを特徴とする。
ここで、本実施形態にかかる美容方法は、医療行為を含まない。
また、本発明にかかる美容方法は、非治療的方法である。
上記の菌量増加工程を行うことで、美容効果を得ることができる。
<1> Cosmetic Method The cosmetic method according to the present embodiment is characterized by including a bacterial amount increasing step of increasing Staphylococcus hominis (hereinafter simply referred to as S. hominis).
Here, the cosmetic method according to the present embodiment does not include medical treatment.
Furthermore, the cosmetic method according to the present invention is a non-therapeutic method.
By carrying out the above-mentioned step of increasing the amount of bacteria, a cosmetic effect can be obtained.
本発明において、菌量増加工程とは、菌量増加工程にかかる手段を行う前のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量よりも、菌量増加工程にかかる手段を行った後のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量を多くする工程をいう。 In the present invention, the bacterial amount increasing process refers to a process for increasing the bacterial amount of S. hominis after carrying out the means for increasing the bacterial amount compared to the bacterial amount of S. hominis before carrying out the means for increasing the bacterial amount.
ここで、本発明の好ましい実施の形態では、菌量増加工程は、菌量増加工程にかかる手段を行った後のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を、菌量増加工程にかかる手段を行う前のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量よりも、好ましくは１．２倍、より好ましくは１．５倍、より好ましくは２倍、より好ましくは５倍、さらに好ましくは１０倍、さらに好ましくは５０倍、特に好ましくは１００倍に増やす工程である。 In a preferred embodiment of the present invention, the bacterial amount increasing step is a step of increasing the amount of S. hominis after carrying out the steps for increasing the bacterial amount by preferably 1.2 times, more preferably 1.5 times, more preferably 2 times, more preferably 5 times, even more preferably 10 times, even more preferably 50 times, and particularly preferably 100 times, compared to the amount of S. hominis before carrying out the steps for increasing the bacterial amount.
以下、本発明の美容方法による効果に関し、より詳細を説明する。 The effects of the cosmetic method of the present invention will be explained in more detail below.
後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌における乳酸量減少を促進することができる。 As shown in the examples below, increasing the amount of S. hominis on the skin can promote a reduction in the amount of lactic acid in the skin.
本発明の美容方法によれば、肌における乳酸量を減少させることで、敏感肌を予防又は改善することができる。
なお、本明細書において、敏感肌とは、弱い刺激によっても、かゆみや赤み、ピリピリ感を感じる症状を有する肌状態をいう。
また、本発明の美容方法によれば、肌における乳酸量を減少させることで、肌の赤み、刺激による痛み、ひりひり感を抑制及び／又は低減させることができる。
According to the cosmetic method of the present invention, the amount of lactic acid in the skin is reduced, thereby making it possible to prevent or improve sensitive skin.
In this specification, sensitive skin refers to a skin condition in which even mild stimuli cause itching, redness, and a tingling sensation.
Furthermore, according to the cosmetic method of the present invention, the amount of lactic acid in the skin can be reduced, thereby suppressing and/or reducing redness of the skin, pain due to irritation, and a tingling sensation.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌における短鎖脂肪酸量を増加することができる。 In addition, as shown in the examples below, by increasing the amount of S. hominis on the skin, the amount of short-chain fatty acids in the skin can be increased.
そして、肌における短鎖脂肪酸量増加を促進することで、肌の炎症の抑制をすることができる。また、肌の赤み、乾燥、シミ、シワ、毛穴の開大等の抑制をすることができる。 By promoting an increase in the amount of short-chain fatty acids in the skin, it is possible to suppress inflammation of the skin. It is also possible to suppress redness, dryness, age spots, wrinkles, enlarged pores, etc.
ここで、本発明の好ましい実施の形態では、前記の短鎖脂肪酸は、プロピオン酸及び／又は酢酸である。 In a preferred embodiment of the present invention, the short chain fatty acid is propionic acid and/or acetic acid.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌におけるマロン酸の量を増加させることができる。 In addition, as shown in the examples below, the amount of malonic acid in the skin can be increased by increasing the amount of S. hominis on the skin.
マロン酸は、線維芽細胞の増殖を促進することが知られている（Tsitologiia. 1993;35(2):68-70.）。
さらに、マロン酸は、ＵＶＢを照射した表皮のケラチノサイトにおいて、抗酸化酵素等の遺伝子発現の促進、炎症性サイトカインの減少、ＵＶＢ照射によるコラーゲン分解酵素の活性化抑制・コラーゲン産生促進等の作用を有することが知られている（Polymers (Basel). 2021 Mar 7;13(5):816.）。
すなわち、肌におけるマロン酸量の増加を促進することで、線維芽細胞の増殖促進による抗老化作用の促進、抗酸化作用の促進、肌の炎症の抑制、並びに、コラーゲンの分解抑制及び産生促進等の効果を得ることができる。
Malonic acid is known to promote the proliferation of fibroblasts (Tsitologiia. 1993;35(2):68-70.).
In addition, malonic acid is known to promote gene expression of antioxidant enzymes, reduce inflammatory cytokines, inhibit the activation of collagen-degrading enzymes caused by UVB irradiation, and promote collagen production in epidermal keratinocytes exposed to UVB (Polymers (Basel). 2021 Mar 7;13(5):816.).
In other words, by promoting an increase in the amount of malonic acid in the skin, it is possible to obtain effects such as promoting anti-aging effects by promoting the proliferation of fibroblasts, promoting antioxidant effects, suppressing inflammation of the skin, and inhibiting the decomposition of collagen and promoting its production.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、表皮のＴＥＲ値の向上及び／又はタイトジャンクション構造形成促進をすることができる。なお、本発明において「ＴＥＲ値」とは、経上皮細胞電気抵抗値（Ｔｒａｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉｃａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）のことをいう。
ここで、本発明の好ましい実施の形態では、ＣＬＤ１（Ｃｌａｕｄｉｎ １）及び／又はＯＣＬ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）発現量を増加させることによるものである。
In addition, as shown in the examples described later, by increasing the amount of S. hominis on the skin, the TER value of the epidermis can be improved and/or the formation of tight junction structures can be promoted. In the present invention, the "TER value" refers to the transepithelial electrical resistance.
Here, in a preferred embodiment of the present invention, this is achieved by increasing the expression levels of CLD1 (Claudin 1) and/or OCL (Occludin).
そして、本発明の美容方法によれば、表皮のＴＥＲ値の向上及び／又はタイトジャンクション構造形成促進をすることで、皮膚のバリア機能を向上させることができる。 The cosmetic method of the present invention can improve the barrier function of the skin by improving the TER value of the epidermis and/or promoting the formation of tight junction structures.
すなわち、本発明の美容方法は、皮膚のバリア機能の低下により引き起こされる皮膚の状態の予防又は改善に特に有用である。
ここで、バリア機能の低下により引き起こされる皮膚の状態としては、乾燥肌、肌荒れ、シワ、色素沈着、タルミなどを挙げることができる。
In other words, the cosmetic method of the present invention is particularly useful for preventing or improving skin conditions caused by a decrease in the barrier function of the skin.
Here, examples of skin conditions caused by a decrease in barrier function include dry skin, rough skin, wrinkles, pigmentation, and sagging.
以下、本発明の美容方法における菌量増加工程について、詳細を説明する。 The bacterial amount increasing step in the cosmetic method of the present invention will be described in detail below.
菌量増加工程は、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用する工程、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用する工程の何れであってもよい。 The bacterial amount increasing step may be either a step of applying S. hominis to the skin or a step of applying a S. hominis bacterial amount promoter to the skin.
（i）Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用する工程である形態について
以下、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用する工程である形態について、より詳細を説明する。
(i) Regarding the embodiment in which S. hominis is applied to the skin Hereinafter, the embodiment in which S. hominis is applied to the skin will be described in more detail.
本発明においてＳ．ｈｏｍｉｎｉｓは、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの生息環境として報告されている種々の環境より採取された試料から分離して用いることもできるし、市販菌株や寄託菌株を用いることもできる。 In the present invention, S. hominis can be isolated from samples collected from various environments reported as habitats of S. hominis, or a commercially available strain or a deposited strain can be used.
寄託菌株としては、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）ＧＴＣ４８５株（以下、単にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓＧＴＣ４８５株とも表記する）を使用することができる。 As the deposited strain, Staphylococcus hominis GTC485 strain (hereinafter also simply referred to as S. hominis GTC485 strain) can be used.
Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓＧＴＣ４８５株は、岐阜大学医学部 岐阜大学研究推進・社会連携機構 微生物遺伝資源保存センター（GCMR、郵便番号：501-1194、住所：岐阜市柳戸1-1）に寄託がなされており、一般に入手することができる。 The S. hominis GTC485 strain has been deposited at the Center for Microbial Genetic Resources (GCMR, Gifu University Research and Social Collaboration Organization, Gifu University School of Medicine, Postal Code: 501-1194, Address: 1-1 Yanagido, Gifu City, Gifu Prefecture) and is publicly available.
ここで、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓＧＴＣ４８５株は、日本細菌学会（郵便番号：170-0003、住所：東京都豊島区駒込1-43-9 駒込TSビル （一財）口腔保健協会内）においてList No238が付与されており、日本細菌学会を通じても入手することができる（「別表1 細菌学教育用菌株機関別リスト - 日本細菌学会」、［ｐｄｆ］、日本細菌学会、インターネット〈ＵＲＬ：http://jsbac.org/material/strain_kikan.pdf〉 参照）。 The S. hominis GTC485 strain has been assigned List No. 238 by the Japanese Society for Bacteriology (Postal Code: 170-0003, Address: Komagome TS Building, 1-43-9 Komagome, Toshima-ku, Tokyo, Japan, Oral Health Association, Japan) and can also be obtained through the Japanese Society for Bacteriology (see Appendix 1: List of Bacteriological Educational Strains by Institution - Japanese Society for Bacteriology, [pdf], Japanese Society for Bacteriology, Internet URL: http://jsbac.org/material/strain_kikan.pdf).
また、同菌株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection; ATCC）から、受託番号ATCC 27844の下で入手することもできる。 The strain is also available from the American Type Culture Collection (ATCC) under accession number ATCC 27844.
Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓＧＴＣ４８５株は、常法により培養することができる。例えば、ＳＣＤや８０２寒天培地を用いて、温度３０～３７℃（好ましくは３７℃）、ｐＨ５～９（好ましくはｐＨ７．０）、好気条件で培養することが可能である。 The S. hominis GTC485 strain can be cultured by conventional methods. For example, it can be cultured using SCD or 802 agar medium at a temperature of 30 to 37°C (preferably 37°C), pH of 5 to 9 (preferably pH 7.0) under aerobic conditions.
適用形態としては、患者の症状等に応じて皮膚外用組成物としての適用（皮膚への塗布）とすることができる。 The application form can be as a skin topical composition (applied to the skin) depending on the patient's symptoms, etc.
皮膚外用組成物としては、例えば、化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等を挙げることができる。ここで、皮膚外用組成物は、継続的に使用可能である、化粧料の形態とすることが好ましい。
中でも、本発明は、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品とすることが好ましい。
Examples of the composition for external use on the skin include cosmetics, quasi-drugs, medicines for external use on the skin, etc. Here, the composition for external use on the skin is preferably in the form of a cosmetic, which can be used continuously.
Among others, the present invention is preferably applied to lotions, beauty essences, milky lotions, creams, gels and sun care products.
皮膚外用組成物におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌体の配合量は、皮膚外用組成物の剤形によって異なるが、１回あたりの塗布により、好ましくは０．５×１０９ＣＦＵ個以上、より好ましくは０．８×１０９ＣＦＵ個以上の肌への適用量となるよう設計することができる。
また、本発明の皮膚外用組成物におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌体の配合量は、好ましくは２．０×１０９ＣＦＵ個以下、より好ましくは１．５×１０９ＣＦＵ個以下の肌への適用量となるよう設計することができる。
The amount of S. hominis cells in the composition for topical skin application varies depending on the formulation of the composition for topical skin application, but can be designed so that the amount applied to the skin per application is preferably 0.5 × 10 9 CFU or more, more preferably 0.8 × 10 9 CFU or more.
The amount of S. hominis cells in the composition for external use on skin of the present invention can be designed so that the amount applied to the skin is preferably 2.0×10 9 CFU or less, more preferably 1.5×10 9 CFU or less.
皮膚外用組成物におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌体の配合量は、皮膚外用組成物の剤形によって異なるが、好ましくは３×１０９ＣＦＵ／ｍＬ以上、より好ましくは４×１０９ＣＦＵ／ｍＬ以上を目安とすることができる。
また、皮膚外用組成物におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌体の配合量は、好ましくは８×１０９ＣＦＵ／ｍＬ以下、より好ましくは６×１０９ＣＦＵ／ｍＬ以下を目安とすることができる。
The amount of S. hominis cells in a composition for external use on the skin varies depending on the formulation of the composition for external use on the skin, but is preferably 3×10 9 CFU/mL or more, more preferably 4×10 9 CFU/mL or more.
Furthermore, the amount of S. hominis cells to be incorporated in the composition for external use on skin can be set as a guideline of preferably 8×10 9 CFU/mL or less, more preferably 6×10 9 CFU/mL or less.
皮膚外用組成物のヒトを含む哺乳動物への適用（菌量増加工程に相当）は１週間に１回又は数回に分けて行うことができる。
また、皮膚外用組成物のヒトを含む哺乳動物への適用（菌量増加工程に相当）は継続する形態とすることが好ましい。
The application of the composition for external use on the skin to mammals, including humans (corresponding to the step of increasing the amount of bacteria) can be carried out once a week or in several divided sessions.
In addition, it is preferable that the application of the composition for external use on skin to mammals, including humans (corresponding to the step of increasing the amount of bacteria) be in a continuous form.
皮膚外用組成物を継続して適用する場合の、皮膚外用組成物の適用期間は、好ましくは２週間以上、より好ましくは３週間以上、さらに好ましくは４週間以上である。
また、皮膚外用組成物を上記期間継続して適用する場合の、適用頻度は、１週間あたり１回以上、好ましくは２回以上とすることができる。
When the composition for external use on the skin is applied continuously, the application period of the composition for external use on the skin is preferably 2 weeks or more, more preferably 3 weeks or more, and even more preferably 4 weeks or more.
Furthermore, when the skin topical composition is applied continuously for the above-mentioned period, the frequency of application can be once or more, preferably twice or more, per week.
皮膚外用組成物の形態として提供する場合、その組成も特に限定されず、本発明の効果を損ねない限度において、通常使用される任意成分を含有することもできる。
かかる任意成分は、後述の（ii）Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用する工程である形態の内容を援用することができる。
When provided in the form of a composition for external use on the skin, the composition is not particularly limited, and may contain any optional ingredient that is commonly used, provided that the effect of the present invention is not impaired.
Regarding such optional components, the content of the embodiment of the step of applying an S. hominis fungus quantity promoter to the skin described below (ii) can be cited.
（ii）Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用する工程である形態について
以下、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用する工程である形態について、より詳細を説明する。
(ii) Regarding the embodiment in which the S. hominis bacterial quantity promoter is applied to the skin, the embodiment in which the S. hominis bacterial quantity promoter is applied to the skin will be described in more detail below.
本発明の美容方法において、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤を肌に適用することで、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる形態とすることもできる。 In the cosmetic method of the present invention, the amount of S. hominis can be increased by applying a bacterial quantity promoter for S. hominis to the skin.
ここで、「Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤」に関し、候補物質を添加した試料におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量が、候補物質を添加しない比較群におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量の１倍より大きい場合に、前記候補物質がＳ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤であるといえる。 Here, regarding the "S. hominis bacterial quantity promoter," if the amount of S. hominis bacteria in a sample to which a candidate substance has been added is greater than one-fold the amount of S. hominis bacteria in a comparison group to which no candidate substance has been added, the candidate substance can be said to be an S. hominis bacterial quantity promoter.
ここで、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤は、上記の効果を奏するものであればよく、たとえば、市販の化合物（ペプチドを含む）、公知化合物（ペプチドを含む）、コンビナトリアル・ケミストリー技術によって得られた化合物群、植物や海洋生物由来の天然成分、動物組織抽出物などを有効成分とすることができる。 The S. hominis bacterial quantity promoter may be any agent that exhibits the above-mentioned effects, and may contain, as its active ingredient, for example, a commercially available compound (including peptides), a known compound (including peptides), a group of compounds obtained by combinatorial chemistry techniques, natural ingredients derived from plants or marine organisms, or animal tissue extracts.
ここで、動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味する。
また、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等を挙げることができる。
Here, the extract derived from an animal or plant is a general term not only for the extract itself derived from an animal or plant, but also for a fraction of the extract, a purified fraction, and a product obtained by removing the solvent from the extract, fraction, or purified product.
Examples of plant-derived extracts include extracts using wild-growing or cultivated plants, extracts using plants sold as raw materials for herbal medicines, and commercially available extracts.
Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤の有効成分としては、植物由来の抽出物を好ましく挙げることができる。
中でも、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤の有効成分として、キウイ抽出物及び／又はユズ抽出物を挙げることができる。
As an active ingredient of the agent for promoting the bacterial count of S. hominis, a plant-derived extract can be preferably used.
Among them, kiwi extract and/or yuzu extract can be mentioned as an active ingredient of the S. hominis fungus quantity promoter.
以下、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤の有効成分として、キウイ抽出物及び／又はユズ抽出物を用いる場合の、より好ましい実施の形態を説明する。 Below, we will explain a more preferred embodiment in which kiwi extract and/or yuzu extract is used as the active ingredient of the S. hominis bacterial quantity promoter.
キウイ抽出物は、植物原料を扱う会社より販売されている市販のキウイ抽出物を購入し、使用することもできる。また、キウイ抽出物は、日本において自生又は生育されたキウイの果実を抽出することで、作製することができる。 Kiwi extract can be purchased and used from a commercially available company that handles plant raw materials. Kiwi extract can also be produced by extracting kiwi fruit that grows wild or is grown in Japan.
キウイ抽出物の抽出に際し、キウイの果実は予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。 When extracting kiwi extract, it is preferable to process the kiwi fruit in advance by crushing or shredding it to improve the extraction efficiency.
抽出物は、以下の方法で得ることができる。キウイの果実又はその乾燥物１質量部に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬する。浸漬後は、室温まで冷却し、所望により不溶物を除去した後、溶媒を減圧濃縮するなどにより除去する。しかる後、シリカゲルやイオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィ－などで分画精製し、所望の抽出物を得ることができる。 The extract can be obtained by the following method. 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to 1 part by mass of kiwi fruit or its dried matter, and the fruit is soaked for several days at room temperature, or for several hours at a temperature close to the boiling point. After soaking, the fruit is cooled to room temperature, and insoluble matter is removed if desired, and the solvent is then removed by concentrating under reduced pressure, for example. The fruit is then fractionated and purified using column chromatography packed with silica gel or ion exchange resin, to obtain the desired extract.
抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましく、水、エタノ－ル、イソプロピルアルコ－ル、ブタノ－ルなどのアルコ－ル類、１，３－ブタンジオ－ル、ポリプロピレングリコ－ル、１，３－ブチレングリコールなどの多価アルコ－ル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエ－テル、テトラヒドロフランなどのエ－テル類から選択される１種乃至は２種以上が好適に例示できる。
中でも、抽出溶媒として１，３－ブチレングリコールを好ましく挙げることができる。
The extraction solvent is preferably a polar solvent, and suitable examples thereof include one or more selected from water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol, and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol, polypropylene glycol, and 1,3-butylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran.
Among these, 1,3-butylene glycol is preferred as the extraction solvent.
ユズ抽出物は、植物原料を扱う会社より販売されている市販のユズ抽出物を購入し、使用することもできる。また、ユズ抽出物は、日本において自生又は生育されたユズの果実又はその乾燥物を抽出することで、作製することができる。 Yuzu extract can be purchased and used from a commercially available company that handles plant raw materials. Yuzu extract can also be produced by extracting yuzu fruit or its dried product that grows wild or is grown in Japan.
また、ユズ抽出物の抽出に際し、ユズの果実又はその乾燥物は、予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。 When extracting yuzu extract, it is preferable to process the yuzu fruit or its dried product in advance by crushing or shredding it to improve the extraction efficiency.
抽出物は、以下の方法で得ることができる。ユズの果実又はその乾燥物又はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬する。浸漬後は、室温まで冷却し、所望により不溶物を除去した後、溶媒を減圧濃縮するなどにより除去する。しかる後、シリカゲルやイオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィ－などで分画精製し、所望の抽出物を得ることができる。 The extract can be obtained by the following method. 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to 1 mass of yuzu fruit or its dried product or its dried product, and the mixture is immersed for several days at room temperature or for several hours at a temperature close to the boiling point. After immersion, the mixture is cooled to room temperature, and insoluble matter is removed if desired, and the solvent is then removed by concentrating under reduced pressure or the like. The mixture is then fractionated and purified using column chromatography packed with silica gel or ion exchange resin to obtain the desired extract.
抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましく、水、エタノ－ル、イソプロピルアルコ－ル、ブタノ－ルなどのアルコ－ル類、１，３－ブタンジオ－ル、ポリプロピレングリコ－ル、１，３－ブチレングリコールなどの多価アルコ－ル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエ－テル、テトラヒドロフランなどのエ－テル類から選択される１種乃至は２種以上が好適に例示できる。
中でも、抽出溶媒として１，３－ブチレングリコールを好ましく挙げることができる。
The extraction solvent is preferably a polar solvent, and suitable examples thereof include one or more selected from water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol, and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol, polypropylene glycol, and 1,3-butylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran.
Among these, 1,3-butylene glycol is preferred as the extraction solvent.
ここで、菌量促進剤は、皮膚外用組成物又は経口用組成物の形態とすることができる。
中でも、菌量促進剤は、皮膚外用組成物の形態とすることが好ましい。
Here, the bacterial quantity promoter may be in the form of a composition for external application to the skin or a composition for oral administration.
In particular, the bacterial quantity promoter is preferably in the form of a composition for external application to the skin.
皮膚外用組成物としては化粧料、医薬品などが好適に例示できる。
中でも、継続的に使用できる化粧料の形態とすることが好ましく、例えば化粧水、乳液、美容液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態とすることができる。
Suitable examples of skin external compositions include cosmetics and pharmaceuticals.
Among these, it is preferable that the composition is in the form of a cosmetic preparation that can be used continuously, for example, a lotion, milky lotion, beauty essence, cream, gel, sun care product, or the like.
皮膚外用組成物におけるキウイ抽出物及び／又はユズ抽出物の含有量は、０．０５質量％以上、好ましくは０．０８質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上である。
また、皮膚外用組成物におけるキウイ抽出物及び／又はユズ抽出物の含有量は、好ましくは２質量％以下、好ましくは１．５質量％以下、より好ましくは１．２質量％以下である。
The content of kiwi extract and/or yuzu extract in the composition for external use on skin is 0.05% by mass or more, preferably 0.08% by mass or more, and more preferably 0.1% by mass or more.
In addition, the content of kiwi extract and/or yuzu extract in the composition for external use on skin is preferably 2% by mass or less, preferably 1.5% by mass or less, and more preferably 1.2% by mass or less.
皮膚外用組成物のヒトを含む哺乳動物への適用は１週間に１回又は数回に分けて行うことができ、本発明の菌量促進剤を継続して適用する形態とすることが好ましい。 The skin topical composition can be applied to mammals, including humans, once a week or several times a week, and it is preferable to apply the bacterial quantity promoter of the present invention continuously.
皮膚外用組成物を継続して適用する場合の、皮膚外用組成物の適用期間は、好ましくは２週間以上、より好ましくは３週間以上、さらに好ましくは４週間以上である。
また、皮膚外用組成物を上記期間継続して適用する場合の、適用頻度は、１週間あたり１回以上、好ましくは２回以上とすることができる。
When the composition for external use on the skin is applied continuously, the application period of the composition for external use on the skin is preferably 2 weeks or more, more preferably 3 weeks or more, and even more preferably 4 weeks or more.
Furthermore, when the skin topical composition is applied continuously for the above-mentioned period, the frequency of application can be once or more, preferably twice or more, per week.
皮膚外用組成物の形態として提供する場合、その組成も特に限定されず、本発明の効果を損ねない限度において、通常使用される任意成分を含有することもできる。 When provided in the form of a skin topical composition, the composition is not particularly limited, and may contain any optional ingredient that is commonly used, provided that it does not impair the effects of the present invention.
このような任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボカド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類；流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等；イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ－２－エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ－２－エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ－２－ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ－２－エチルヘキサン酸グリセリン、トリ－２－エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ－２－エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類等の油剤類；脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類；イミダゾリン系両性界面活性剤（２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類；ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック（登録商標）型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２－デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類；ポリエチレングリコール、グリセリン、エリスリトール、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、２，４－ヘキサンジオール等の多価アルコール類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤；アントラニル酸系紫外線吸収剤；サリチル酸系紫外線吸収剤；桂皮酸系紫外線吸収剤；ベンゾフェノン系紫外線吸収剤；糖系紫外線吸収剤；２－（２'－ヒドロキシ－５'－ｔ－オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４－メトキシ－４'－ｔ－ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類などが好ましく例示できる。 Such optional ingredients include, for example, oils and waxes such as macadamia nut oil, avocado oil, corn oil, olive oil, rapeseed oil, sesame oil, castor oil, safflower oil, cottonseed oil, jojoba oil, coconut oil, palm oil, liquid lanolin, hydrogenated coconut oil, hydrogenated oil, Japan wax, hydrogenated castor oil, beeswax, candelilla wax, carnauba wax, Ibota wax, lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, and jojoba wax; liquid paraffin, squalane, pristane, ozokerite, and paraffin. Hydrocarbons such as oleic acid, isostearic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, undecylenic acid, etc.; higher fatty acids such as cetyl alcohol, stearyl alcohol, isostearyl alcohol, behenyl alcohol, octyldodecanol, myristyl alcohol, cetostearyl alcohol, etc.; cetyl isooctanoate, isopropyl myristate, isopropyl alcohol, etc. Synthetic ester oils such as hexyldecyl sostearate, diisopropyl adipate, di-2-ethylhexyl sebacate, cetyl lactate, diisostearyl malate, ethylene glycol di-2-ethylhexanoate, neopentyl glycol dicaprate, glycerin di-2-heptylundecanoate, glycerin tri-2-ethylhexanoate, trimethylolpropane tri-2-ethylhexanoate, trimethylolpropane triisostearate, and pentane erythritol tetra-2-ethylhexanoate; anionic surfactants such as fatty acid soaps (sodium laurate, sodium palmitate, etc.), potassium lauryl sulfate, and alkyl sulfate triethanolamine ether; cationic surfactants such as stearyltrimethylammonium chloride, benzalkonium chloride, and laurylamine oxide; imidazoline-based amphoteric surfactants (2-cocoyl-2-imidazolinium hydroxide-1-carboxyethyloxy disodium salt, etc. ), betaine surfactants (alkyl betaine, amido betaine, sulfobetaine, etc.), amphoteric surfactants such as acyl methyl taurine; sorbitan fatty acid esters (sorbitan monostearate, sorbitan sesquioleate, etc.), glycerin fatty acids (glycerin monostearate, etc.), propylene glycol fatty acid esters (propylene glycol monostearate, etc.), hydrogenated castor oil derivatives, glycerin alkyl ethers, POE sorbitan fatty acid esters (POE sorbitan monooleate, polyoxyethylene sorbitan monostearate, etc.), POE sorbitan fatty acid esters (POE-sorbitan monolaurate, etc.), POE glycerin fatty acid esters (POE-glycerin monoisostearate, etc.), POE fatty acid esters (polyethylene glycol monooleate, POE distearate, etc.), POE alkyl ethers (POE 2-octyldodecyl ether, etc.), POE alkyl phenyl ethers (POE nonionic surfactants such as POE/POP alkyl ethers (POE/POP 2-decyltetradecyl ether, etc.), Pluronic (registered trademark) types, POE/POP alkyl ethers (POE/POP 2-decyltetradecyl ether, etc.), Tetronics, POE castor oil/hydrogenated castor oil derivatives (POE castor oil, POE hydrogenated castor oil, etc.), sucrose fatty acid esters, and alkyl glucosides; polyethylene glycol, glycerin, erythritol, sorbitol, maltitol, propylene glycol, 2,4-hexanediol, Preferred examples include polyhydric alcohols such as ol; moisturizing ingredients such as sodium pyrrolidone carboxylate, lactic acid, and sodium lactate; para-aminobenzoic acid-based UV absorbers; anthranilic acid-based UV absorbers; salicylic acid-based UV absorbers; cinnamic acid-based UV absorbers; benzophenone-based UV absorbers; sugar-based UV absorbers; and UV absorbers such as 2-(2'-hydroxy-5'-t-octylphenyl)benzotriazole and 4-methoxy-4'-t-butyldibenzoylmethane.
経口組成物とする場合、有効成分を含む食品用組成物とすることが好ましい。
具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることができる。
When the composition is to be administered orally, it is preferable that the composition be a food composition containing the active ingredient.
Specifically, the composition may be in the form of a supplement having a dosage form such as a general food, tablet, granule, or drink.
ここで、経口組成物におけるキウイ抽出物及び／又はユズ抽出物の含有量、及び含有量比については、前述の皮膚外用組成物の好ましい実施の形態の記載を準用することができる。 Here, the contents and content ratios of kiwi extract and/or yuzu extract in the oral composition can be determined mutatis mutandis from the description of the preferred embodiment of the topical skin composition described above.
また、経口組成物とする場合、本発明の効果を損なわない範囲において、任意成分を適宜配合してもよい。 When preparing an oral composition, optional ingredients may be added as appropriate within the scope that does not impair the effects of the present invention.
＜２＞ スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、肌状態改善剤
後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌における乳酸量の減少を促進することができる。
すなわち、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、肌における乳酸量減少用途として用いることができる。
また、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、肌の赤み、刺激による痛み、ひりひり感を抑制及び／又は低減させるために用いることができる。
<2> Skin condition improving agent containing Staphylococcus hominis as an active ingredient As shown in the examples described later, by increasing the amount of S. hominis on the skin, it is possible to promote a decrease in the amount of lactic acid in the skin.
That is, S. hominis can be used to reduce the amount of lactic acid in the skin.
S. hominis can also be used to inhibit and/or reduce redness, stinging, and burning of the skin.
そして、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを有効成分とする、肌における乳酸量の減少剤の形態とすることができる。 And it can be made into an agent for reducing the amount of lactic acid in the skin, with S. hominis as the active ingredient.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌における短鎖脂肪酸量を増加することができる。
すなわち、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、肌における短鎖脂肪酸量増加用途として用いることができる。
また、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、肌の赤み、乾燥、シミ、シワ、毛穴の開大等の抑制のために用いることができる。
Furthermore, as shown in the Examples below, the amount of short-chain fatty acids in the skin can be increased by increasing the amount of S. hominis on the skin.
That is, S. hominis can be used to increase the amount of short-chain fatty acids in the skin.
In addition, S. hominis can be used to inhibit redness, dryness, age spots, wrinkles, enlarged pores, and the like of the skin.
そして、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを有効成分とする、肌における短鎖脂肪酸量の増加剤の形態とすることができる。 And it can be in the form of an agent that increases the amount of short-chain fatty acids in the skin, with S. hominis as the active ingredient.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、肌におけるマロン酸量を増加することができる。
すなわち、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、肌におけるマロン酸量増加用途として用いることができる。
また、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、線維芽細胞の増殖促進による抗老化作用の促進、抗酸化作用の促進、肌の炎症の抑制、並びに、コラーゲンの分解抑制及び産生促進等のために用いることができる。
Furthermore, as shown in the Examples below, the amount of malonic acid in the skin can be increased by increasing the amount of S. hominis on the skin.
That is, S. hominis can be used to increase the amount of malonic acid in the skin.
In addition, S. hominis can be used to promote anti-aging effects by promoting the proliferation of fibroblasts, promote antioxidant effects, suppress skin inflammation, and inhibit collagen decomposition and promote collagen production.
そして、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを有効成分とする、肌におけるマロン酸量の増加剤の形態とすることができる。 And it can be in the form of an agent for increasing the amount of malonic acid in the skin, with S. hominis as the active ingredient.
また、後述する実施例に示す通り、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増やすことで、表皮のＴＥＲ値の向上及び／又はタイトジャンクション構造形成促進をすることができる。
ここで、本発明の好ましい実施の形態では、ＣＬＤ１（Ｃｌａｕｄｉｎ １）及び／又はＯＣＬ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）発現量を増加させることによるものである。
Furthermore, as shown in the Examples below, increasing the amount of S. hominis on the skin can improve the TER value of the epidermis and/or promote the formation of tight junction structures.
Here, in a preferred embodiment of the present invention, this is achieved by increasing the expression levels of CLD1 (Claudin 1) and/or OCL (Occludin).
そして、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓは、表皮のＴＥＲ値の向上及び／又はタイトジャンクション構造形成促進用途として用いることができる。
すなわち、本発明は、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ）を有効成分とする、表皮のＴＥＲ値の向上剤の形態とすることができる。また、本発明は、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを有効成分とする、肌のタイトジャンクション構造形成促進剤の形態とすることができる。
S. hominis can be used to improve the TER value of the epidermis and/or promote the formation of tight junction structures.
That is, the present invention can be in the form of an agent for improving the TER value of the epidermis, which contains S. hominis as an active ingredient. Also, the present invention can be in the form of an agent for promoting the formation of skin tight junction structures, which contains S. hominis as an active ingredient.
なお、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを有効成分とする肌状態改善剤における好ましい実施の形態には、前述した内容を適用することができる。 The above-mentioned contents can be applied to preferred embodiments of the skin condition improving agent containing S. hominis as an active ingredient.
＜菌株の培養＞
後述する試験例に使用したスタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）ＧＴＣ４８５株（以下、単にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓとも表記する）は、日本細菌学会（郵便番号：170-0003、住所：東京都豊島区駒込1-43-9 駒込TSビル （一財）口腔保健協会内）から購入した。また、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構から購入した。
<Cultivation of strains>
The Staphylococcus hominis GTC485 strain (hereinafter, simply referred to as S. hominis) used in the test examples described below was purchased from the Japanese Society for Bacteriology (Postal Code: 170-0003, Address: Komagome TS Building, 1-43-9 Komagome, Toshima-ku, Tokyo (Oral Health Association)). Staphylococcus epidermidis was purchased from the National Institute of Technology and Evaluation.
購入した細菌は、それぞれに適した寒天培地又は液体培地を用いて培養し、続く試験において使用する菌株とした。 The purchased bacteria were cultured using appropriate agar or liquid media to obtain the strains used in subsequent tests.
＜試験例１：バリア機能向上効果の評価＞
以下の方法により、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓのバリア機能向上効果を評価した。
<Test Example 1: Evaluation of Barrier Function Improvement Effect>
The barrier function improving effect of S. hominis was evaluated by the following method.
（１）ＴＥＲ値測定試験
まず、正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）（クラボウ社製）を１２穴トランズウェルプレートに播種（７０，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）した。その後、播種したＮＨＥＫを３７℃、５％ＣＯ２環境下で３日間培養した。３日間の培養後、培養液を高カルシウム培地（１．４５ｍＭ）に置換した。ここへ、最終的に７，５００ＣＦＵ／ｗｅｌｌとなるように培地で濃度を調整したＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌株の懸濁液を添加した。
なお、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）菌株の懸濁液を添加した試料、菌株を含まない試料を比較例として用意した。
(1) TER value measurement test First, normal human epidermal keratinocytes (NHEK) (Kurabo) were seeded (70,000 cells/well) on a 12-well Transwell plate. The seeded NHEK were then cultured for 3 days at 37°C in a 5% CO2 environment. After 3 days of culture, the culture medium was replaced with a high calcium medium (1.45 mM). A suspension of S. hominis strain, the concentration of which was adjusted with the medium, was added thereto so that the final concentration was 7,500 CFU/well.
As comparative examples, a sample containing a suspension of Staphylococcus epidermidis and a sample containing no strain were prepared.
６時間の培養後、Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ ＥＲＳ２（ミリポア社製）を用いてＴＥＲ値を測定した。結果を図１に示す。
図１において、縦軸は、ＴＥＲ値（Ω・ｃｍ２）の初期値との差を表す。
After 6 hours of incubation, the TER value was measured using Millicell ERS2 (Millipore Corp.) The results are shown in FIG.
In FIG. 1, the vertical axis represents the difference from the initial value of the TER value (Ω·cm 2 ).
図１の結果より、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌株の懸濁液を添加したＮＨＥＫは、比較例に比して有意なＴＥＲ値の上昇を示した。
この結果は、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓが、優れたバリア機能向上作用を発揮することを示す。
1, the NHEK to which the suspension of S. hominis strain was added showed a significant increase in TER value compared to the comparative example.
This result indicates that S. hominis exerts an excellent barrier function improving effect.
（２）タイトジャンクション構造形成促進効果の評価
以下の方法で、タイトジャンクション構造の形成を可視化し、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓのタイトジャンクション構造形成促進効果を評価した。
(2) Evaluation of the Effect of Promoting the Formation of Tight Junction Structure The formation of tight junction structures was visualized by the following method, and the effect of promoting the formation of tight junction structures by S. hominis was evaluated.
まず、正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）（クラボウ社製）を４穴チャンバープレートに播種（３０，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）した。その後、播種したＮＨＥＫを３７℃、５％ＣＯ２環境下で３日間培養した。３日間の培養後、培養液を高カルシウム培地（１．４５ｍＭ）に置換した。ここへ、最終的に２，３００ＣＦＵ／ｗｅｌｌとなるように培地で濃度を調整した各菌株の懸濁液を添加した。なお、菌株を含まない試料を比較対照として用意した。 First, normal human epidermal keratinocytes (NHEK) (Kurabo) were seeded (30,000 cells/well) in a 4-well chamber plate. The seeded NHEK were then cultured for 3 days at 37°C in a 5% CO2 environment. After 3 days of culture, the culture medium was replaced with a high calcium medium (1.45 mM). A suspension of each strain, the concentration of which was adjusted with the medium, was added to the medium so that the final concentration was 2,300 CFU/well. A sample not containing the strain was prepared as a control for comparison.
６時間の培養後、培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）により一度洗浄した。次に、細胞を固定するため、４℃、１５分間のエタノール処理、その後室温で１分間のアセトン処理を行った。その後、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ溶液を用いて５分間処理し、さらに０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００／ＰＢＳ溶液を用いて２０分間処理した。そして、非特異的反応を阻止するため、１０％ブロックエース／ＰＢＳ溶液を用いて室温で３０分間処理した。 After 6 hours of incubation, the medium was removed and the cells were washed once with phosphate-buffered saline (PBS). Next, to fix the cells, they were treated with ethanol at 4°C for 15 minutes, and then with acetone at room temperature for 1 minute. After that, they were treated with 0.1% Tween 20/PBS solution for 5 minutes, and then with 0.5% Triton X100/PBS solution for 20 minutes. Then, to prevent non-specific reactions, they were treated with 10% Block Ace/PBS solution at room temperature for 30 minutes.
その後、１００倍希釈したマウス抗Ｏｃｃｌｕｄｉｎ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、及び２００倍希釈したウサギ抗Ｃｌａｕｄｉｎ－１抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を一次抗体として４穴チャンバープレート内に添加し、４℃で一晩反応させた。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ溶液を用いて洗浄した後、２５０倍希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、及び２５０倍希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を二次抗体として４穴チャンバープレート内に添加し、室温で４５分間反応させた。洗浄後、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ－Ｇ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて封入した。調製した試料は、共焦点顕微鏡（ＬＳＭ５１０：Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ社製）を用いて観察した。 Then, 100-fold diluted mouse anti-Occludin antibody (Invitrogen) and 200-fold diluted rabbit anti-Claudin-1 antibody (Invitrogen) were added as primary antibodies to the 4-well chamber plate and reacted overnight at 4°C. After washing with 0.1% Tween 20/PBS solution, 250-fold diluted goat anti-mouse IgG antibody Alexa Fluor 488 (Invitrogen) and 250-fold diluted goat anti-rabbit IgG antibody Alexa Fluor 555 (Invitrogen) were added as secondary antibodies to the 4-well chamber plate and reacted at room temperature for 45 minutes. After washing, the plate was sealed using Fluoromount-G (Diagnostic BioSystems). The prepared samples were observed using a confocal microscope (LSM510: Carl Zeiss).
図２は、共焦点顕微鏡によるＮＨＥＫの免疫染色画像を示す。画像中、白矢頭はＯｃｃｌｕｄｉｎ及びＣｌａｕｄｉｎ－１が連続的に共染色されている箇所を示す（図２）。 Figure 2 shows an immunostained image of NHEK taken by a confocal microscope. In the image, the white arrowhead indicates the area where Occludin and Claudin-1 are consecutively co-stained (Figure 2).
図２に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを添加したＮＨＥＫは細胞間隙の強い発色を示した。
また、図２に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを添加したＮＨＥＫでは、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ及びＣｌａｕｄｉｎ－１が細胞間隙に多く局在していることを確認することができた。
また、図２に示すように、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ及びＣｌａｕｄｉｎ－１を統合した画像において、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ及びＣｌａｕｄｉｎ－１が連続的に共染色された箇所を多く確認することができた。これらの結果は、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓが、優れたタイトジャンクション構造形成促進効果を有することを示している。
As shown in Figure 2, NHEKs to which S. hominis had been added showed strong color development in the intercellular spaces.
Furthermore, as shown in Figure 2, it was confirmed that Occludin and Claudin-1 were abundantly localized in the intercellular space in NHEKs to which S. hominis had been added.
In addition, as shown in Figure 2, in the combined image of Occludin and Claudin-1, many areas were confirmed to be continuously co-stained with Occludin and Claudin-1. These results indicate that S. hominis has an excellent effect of promoting the formation of tight junction structures.
（３）まとめ
以上の結果より、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、表皮のＴＥＲ値の向上をできることがわかった。
また、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、タイトジャンクション構造の形成を促進できることがわかった。
(3) Summary From the above results, it was found that the TER value of the epidermis can be improved by using a cosmetic method including a bacterial mass increasing step for increasing the amount of S. hominis on the skin.
In addition, it was found that the formation of tight junction structures can be promoted by using a cosmetic method that includes a step of increasing the amount of S. hominis on the skin.
＜試験例２：乳酸量減少、短鎖脂肪酸量増加、及びマロン酸量増加の評価＞
以下の方法により、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの物質消費、及び、物質生産能を評価した。
<Test Example 2: Evaluation of decrease in lactic acid amount, increase in short chain fatty acid amount, and increase in malonic acid amount>
The substance consumption and substance production ability of S. hominis were evaluated by the following method.
（１）細菌懸濁液の用意
まず、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓＧＴＣ４８５株を３７℃の好気条件で、ｐＨ７．０の８０２培地（下記表１参照）を用いて培養した。
なお、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）菌株の懸濁液を添加した試料及び／又は菌株を含まない試料を比較例として用意した。
(1) Preparation of Bacterial Suspension First, S. hominis GTC485 strain was cultured under aerobic conditions at 37° C. using 802 medium (see Table 1 below) at pH 7.0.
As comparative examples, samples containing a suspension of Staphylococcus epidermidis strain and/or samples containing no strain were prepared.
（２）測定
（２－１）乳酸について
８時間培養後の培養液中の乳酸量をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより解析した。結果を図３に示す。
図３に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓにより、乳酸が消費されることがわかった。
ここで、乳酸は、敏感肌をもたらす因子として知られている。
すなわち、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、敏感肌の予防又は改善をすることができる。
(2) Measurement (2-1) Lactic Acid The amount of lactic acid in the culture medium after 8 hours of culture was analyzed by LC-MS/MS. The results are shown in FIG.
As shown in Figure 3, it was found that lactate was consumed by S. hominis.
Lactic acid is known to be a factor that causes sensitive skin.
That is, sensitive skin can be prevented or improved by forming a cosmetic method that includes a bacterial amount increasing step of increasing the amount of S. hominis on the skin.
（２－２）プロピオン酸について
８時間培養した後培養液中のプロピオン酸量をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより解析した。結果を図４に示す。
図４に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓにより、プロピオン酸が生産されることがわかった。
ここで、プロピオン酸は、炎症抑制作用を有することが知られている。
すなわち、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、肌の炎症抑制をすることができる。
(2-2) Propionic Acid After culturing for 8 hours, the amount of propionic acid in the culture medium was analyzed by LC-MS/MS. The results are shown in FIG.
As shown in Figure 4, it was found that propionic acid was produced by S. hominis.
Here, propionic acid is known to have an anti-inflammatory effect.
That is, by providing a cosmetic method including a bacterial amount increasing step of increasing the amount of S. hominis on the skin, inflammation of the skin can be suppressed.
（２－３）酢酸について
８時間培養した後培養液中の酢酸量をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより解析した。結果を図５に示す。
図５に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓにより、酢酸が生産されることがわかった。
ここで、酢酸は、炎症抑制作用を有することが知られている。
すなわち、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、肌の炎症抑制をすることができる。
(2-3) Acetic acid After culturing for 8 hours, the amount of acetic acid in the culture medium was analyzed by LC-MS/MS. The results are shown in FIG.
As shown in Figure 5, it was found that acetate was produced by S. hominis.
Acetic acid is known to have an anti-inflammatory effect.
That is, by providing a cosmetic method including a bacterial amount increasing step of increasing the amount of S. hominis on the skin, inflammation of the skin can be suppressed.
（２－４）マロン酸について
８時間培養した後培養液中のマロン酸量をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより解析した。結果を図６に示す。
図６に示すように、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓにより、マロン酸が生産されることがわかった。
ここで、マロン酸は、線維芽細胞の増殖促進による抗老化作用の促進、抗酸化作用の促進、肌の炎症の抑制、並びに、コラーゲンの分解抑制及び産生促進等に寄与することが知られている。
すなわち、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、肌の抗老化作用の促進、抗酸化作用の促進、肌の炎症の抑制、並びに、コラーゲンの分解抑制及び産生促進を誘導することができる。
(2-4) Malonic Acid After culturing for 8 hours, the amount of malonic acid in the culture medium was analyzed by LC-MS/MS. The results are shown in FIG.
As shown in Figure 6, it was found that malonic acid was produced by S. hominis.
Malonic acid is known to contribute to the promotion of anti-aging effects by promoting the proliferation of fibroblasts, the promotion of antioxidant effects, the suppression of skin inflammation, and the inhibition of collagen decomposition and the promotion of collagen production.
That is, by using a cosmetic method including a bacterial amount increasing step for increasing the amount of S. hominis on the skin, it is possible to promote the anti-aging effect of the skin, promote the antioxidant effect, suppress inflammation of the skin, and suppress the decomposition of collagen and promote its production.
（３）まとめ
以上の結果より、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させる菌量増加工程を含む美容方法とすることで、乳酸量減少、短鎖脂肪酸量増加、マロン酸量増加を促進できることがわかった。
(3) Summary From the above results, it was found that a cosmetic method including a bacterial amount increasing step for increasing the amount of S. hominis on the skin can promote a decrease in the amount of lactic acid, an increase in the amount of short-chain fatty acids, and an increase in the amount of malonic acid.
＜試験例３：肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量増加試験＞
以下の方法により、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量の増加試験を行った。
<Test Example 3: Test for increase in amount of S. hominis on skin>
A test for increasing the amount of S. hominis on the skin was carried out by the following method.
＜３－１＞Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用する工程の検証
以下、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用することによる、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の増加を確認した。
<3-1> Verification of the step of applying S. hominis to the skin The increase in the amount of S. hominis on the skin by applying S. hominis to the skin was confirmed below.
（１）被験者
被験者となる女性は３０代のアトピーなどの疾患を有しない健常日本人女性１１名である。
(1) Subjects The subjects were 11 healthy Japanese women in their 30s who had no diseases such as atopy.
（２）試験方法
（２－１）Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有化粧料（実施例）及びＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ非含有化粧料（比較例、プラセボ化粧料）の製造
前述のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ凍結乾燥物を１０ｍＬ蒸留水に懸濁させ懸濁液（Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有量：約１０１０ＣＦＵ／ｍＬ）を調製した。
調製した懸濁液１ｍＬと、化粧水（ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、水酸化カリウム、水を含む）１ｍＬを混和し、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有化粧料（実施例、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有量：約５×１０９ＣＦＵ／ｍＬ）を製造した。
併せて、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ非含有スキムミルク凍結乾燥品をＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ凍結乾燥物の代わりに用い、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有化粧料と同様の方法により、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ非含有化粧料（比較例、プラセボ化粧料）を製造した。
(2) Test Method (2-1) Production of S. hominis-containing Cosmetics (Examples) and S. hominis-free Cosmetics (Comparative Examples, Placebo Cosmetics) The above-mentioned freeze-dried S. hominis was suspended in 10 mL of distilled water to prepare a suspension (S. hominis content: about 10 10 CFU/mL).
1 mL of the prepared suspension was mixed with 1 mL of a lotion (containing polyethylene glycol, dipropylene glycol, glycerin, diglycerin, potassium hydroxide, and water) to produce a cosmetic containing S. hominis (Example, S. hominis content: about 5×10 9 CFU/mL).
In addition, a S. hominis-free cosmetic (comparative example, placebo cosmetic) was produced in the same manner as the S. hominis-containing cosmetic, except that a freeze-dried product of skim milk not containing S. hominis was used instead of the freeze-dried product of S. hominis.
（２－２）化粧料の塗布
被験者の左右頬部の一方にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有化粧料（実施例）を、他方にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ非含有化粧料（比較例、プラセボ化粧料）を、一回あたり０．２ｍＬ（一回あたりのＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ適用量：１０９ＣＦＵ個）、週２回、１ヶ月間塗布した。
化粧料の塗布開始から１ヶ月後に、以下の方法により、頬部における肌状態及びＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の測定を行った。
(2-2) Application of Cosmetics The S. hominis-containing cosmetic (Example) was applied to one of the left or right cheeks of each subject, and the S. hominis-free cosmetic (Comparative Example, placebo cosmetic) was applied to the other cheek, at 0.2 mL per application (amount of S. hominis applied per application: 10 9 CFU), twice a week for one month.
One month after the start of application of the cosmetic preparation, the skin condition and the amount of S. hominis on the cheeks were measured by the following methods.
（３） Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ量及び肌状態の測定
（３－１） 頬部におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の測定及び評価
化粧料塗布開始前及び、化粧料塗布期間中、化粧料塗布試験終了時（化粧料の塗布開始から１ヶ月後）に、以下の方法により、各頬部におけるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を測定した。
(3) Measurement of S. hominis amount and skin condition (3-1) Measurement and evaluation of S. hominis amount on cheeks Before the start of cosmetic application, during the cosmetic application period, and at the end of the cosmetic application test (one month after the start of cosmetic application), the amount of S. hominis on each cheek was measured by the following method.
被験者の女性頬部から菌採取用のシール又は綿棒（Ｓｗａｂ法）にて、細菌叢を採取した。次に、採取した細菌叢よりＤＮＡの抽出を行い、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓについて、ＯＴＵ（Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ Ｕｎｉｔ）解析を行い、各ＯＴＵに属するリード数を計測することにより、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の測定を行った。 Bacterial flora was collected from the female subject's cheek using a sticker or cotton swab (Swab method). Next, DNA was extracted from the collected bacterial flora, and S. hominis was subjected to OTU (Operational Taxonomic Unit) analysis. The amount of S. hominis was measured by counting the number of reads belonging to each OTU.
そして、各被験者の、「各化粧料塗布試験時点のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量は、化粧料の塗布前のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓのリード数を１とし、各塗布１週目、塗布２週目、塗布３週目、塗布１ヶ月後のリードの比率を算出した。
なお、結果は各被験者（Ｎ＝１１）の平均±標準誤差（ｓ．ｅ：ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ）で表した。また、統計処理は二元配置分散分析に基づいて行った（*Ｐ＜０．０５）。
The amount of S. hominis for each subject at the time of each cosmetic application test was calculated by setting the number of leads of S. hominis before application of the cosmetic as 1, and calculating the ratio of leads one week, two weeks, three weeks, and one month after application.
The results were expressed as the mean ± standard error (s.e.) for each subject (N=11). Statistical analysis was performed based on two-way analysis of variance (*P<0.05).
（４）結果
結果を、表２及び図７に示す。
(4) Results The results are shown in Table 2 and FIG.
表２及び図７に示す通り、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ含有化粧料を継続使用した被験者には、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ量が多くなることが分かった。
すなわち、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓを肌に適用することで、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させることができる。
As shown in Table 2 and FIG. 7, it was found that the amount of S. hominis increased in subjects who continuously used the cosmetic preparation containing S. hominis.
That is, by applying S. hominis to the skin, the amount of S. hominis on the skin can be increased.
＜３－２＞Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用する形態の検討
以下、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌量促進剤を肌に適用することによる、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の増加を検証した。
具体的には、キウイ抽出物、ユズ抽出物によるＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量の推移の検討を行った。
<3-2> Study on the form of applying the S. hominis bacterial quantity promoter to the skin Hereinafter, an increase in the amount of S. hominis caused by applying the S. hominis bacterial quantity promoter to the skin was examined.
Specifically, the change in the amount of S. hominis due to the kiwi extract and yuzu extract was examined.
（１）細菌懸濁液の用意
まず、Ｓ． ｈｏｍｉｎｉｓ ＧＴＣ４８５株（以下、単にＳ．ｈｏｍｉｎｉｓとも表記する）を３７℃の好気条件で、ｐＨ７．０の８０２培地（上記表１ 参照）を用いて培養した。
(1) Preparation of Bacterial Suspension First, S. hominis strain GTC485 (hereinafter, also simply referred to as S. hominis) was cultured under aerobic conditions at 37° C. using 802 medium (see Table 1 above) at pH 7.0.
培養した細菌懸濁液のＯＤ６６０を、濁度測定器（NovaspecII（Amercham Pharmacia Biotech社製））を用いて測定し、細菌濃度を算出した。 The OD660 of the cultured bacterial suspension was measured using a turbidity meter (NovaspecII (Amersham Pharmacia Biotech)) and the bacterial concentration was calculated.
（２）試験の方法及び結果
前述の方法で用意した細菌懸濁液を下記表３に示す測定用培地（実施例用培地（表３ 実施例）及び比較例用培地（表３ 比較例））に、その全体量が５ｍＬとなるよう、添加した。
細菌添加後の培地における、菌体の量は５×１０７cellsであった。
(2) Test Method and Results The bacterial suspension prepared by the above-mentioned method was added to the measurement media shown in Table 3 below (medium for the example (Table 3, Example) and medium for the comparative example (Table 3, Comparative Example)) so that the total volume was 5 mL.
The amount of bacteria in the medium after the addition of the bacteria was 5×10 7 cells.
ここで、実施例として、以下の３種を用意した。
・１％キウイ抽出物含有８０２培地
・０．１％キウイ抽出物含有８０２培地
・１％ユズ抽出物含有８０２培地
ここで、キウイ抽出物としては、ファルコレックス（登録商標）キウイＢ（キウイ１，３－ブチレングリコール抽出物、一丸ファルコス）を用いた。
また、ユズ抽出物としては、ユズセラミドＢ（ユズ１，３－ブチレングリコール抽出物、一丸ファルコス）を用いた。
Here, the following three types were prepared as examples.
802 medium containing 1% kiwi extract; 802 medium containing 0.1% kiwi extract; 802 medium containing 1% yuzu extract. Here, Falcorex (registered trademark) Kiwi B (kiwi 1,3-butylene glycol extract, Ichimaru Falcos) was used as the kiwi extract.
As the yuzu extract, yuzu ceramide B (yuzu 1,3-butylene glycol extract, Ichimaru Pharcos) was used.
添加後、３７℃の好気条件下、振とう培養を行った。 After addition, shaking culture was carried out under aerobic conditions at 37°C.
振とう培養開始から、１時間ごとに濁度測定器（NovaspecII（Amercham Pharmacia Biotech社製））を用いてＯＤ６６０を測定した。
計測した時間のＯＤ６６０の測定値を、振とう培養開始時のＯＤ６６０の測定値で引くことにより、ＯＤ６６０の測定値の変化量（ＯＤ６６０Δ初期値）を算出した。
結果を、図８～図１０、表４に示す。
From the start of the shaking culture, OD660 was measured every hour using a turbidity meter (NovaspecII (Amersham Pharmacia Biotech)).
The change in the OD660 measurement value (OD660Δinitial value) was calculated by subtracting the OD660 measurement value at the measured time from the OD660 measurement value at the start of shaking culture.
The results are shown in FIGS.
（３） 考察
実施例の結果から、キウイ抽出物には、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進作用があることがわかった。また、実施例の結果から、ユズ抽出物を用いることで、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進ができることがわかった。
(3) Discussion From the results of the Examples, it was found that the kiwi extract has an effect of promoting the amount of S. hominis bacteria. In addition, from the results of the Examples, it was found that the amount of S. hominis bacteria can be promoted by using the yuzu extract.
（４）まとめ
以上の結果より、Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓの菌量促進剤を肌に適用することで、肌上のＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ量を増加させることができる。
(4) Summary From the above results, it is possible to increase the amount of S. hominis on the skin by applying a bacterial quantity promoter for S. hominis to the skin.
本発明は、美容方法に応用できる。 The present invention can be applied to beauty treatments.
Claims (13)
An agent that promotes the formation of tight junction structures in the skin, containing Staphylococcus hominis as its active ingredient.
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