JP2024026167A - マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット - Google Patents

マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット Download PDF

Info

Publication number
JP2024026167A
JP2024026167A JP2023199130A JP2023199130A JP2024026167A JP 2024026167 A JP2024026167 A JP 2024026167A JP 2023199130 A JP2023199130 A JP 2023199130A JP 2023199130 A JP2023199130 A JP 2023199130A JP 2024026167 A JP2024026167 A JP 2024026167A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
skin
rna
subject
analysis
equipment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023199130A
Other languages
English (en)
Inventor
ホン リ，クワン
Kwang Hoon Lee
ヒョン チョン，ト
Do Hyeon Jeong
ヒョン キム，ソ
Seo Hyeong Kim
ヘ キム，チ
Ji Hye Kim
チェ リ，スン
Sung Jae Lee
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Cutis Biomedical Research Center
Original Assignee
Cutis Biomedical Research Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020200100165A external-priority patent/KR102216913B1/ko
Priority claimed from KR1020200100151A external-priority patent/KR102216910B1/ko
Priority claimed from KR1020200100168A external-priority patent/KR102216923B1/ko
Priority claimed from KR1020200100561A external-priority patent/KR102216927B1/ko
Priority claimed from KR1020200100579A external-priority patent/KR102216937B1/ko
Priority claimed from KR1020200101124A external-priority patent/KR102216945B1/ko
Priority claimed from KR1020200101117A external-priority patent/KR102216941B1/ko
Application filed by Cutis Biomedical Research Center filed Critical Cutis Biomedical Research Center
Publication of JP2024026167A publication Critical patent/JP2024026167A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B10/00—Other methods or instruments for diagnosis, e.g. instruments for taking a cell sample, for biopsy, for vaccination diagnosis; Sex determination; Ovulation-period determination; Throat striking implements
    • A61B10/02—Instruments for taking cell samples or for biopsy
    • A61B10/0233—Pointed or sharp biopsy instruments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B2560/00—Constructional details of operational features of apparatus; Accessories for medical measuring apparatus
    • A61B2560/04—Constructional details of apparatus
    • A61B2560/0406—Constructional details of apparatus specially shaped apparatus housings
    • A61B2560/0412—Low-profile patch shaped housings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M37/00—Other apparatus for introducing media into the body; Percutany, i.e. introducing medicines into the body by diffusion through the skin
    • A61M37/0015—Other apparatus for introducing media into the body; Percutany, i.e. introducing medicines into the body by diffusion through the skin by using microneedles
    • A61M2037/0046—Solid microneedles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

【課題】患者の使用便宜性を高め得るとともに、分析結果の信頼性を高めることができる最小侵襲的皮膚状態の診断キットを提供する。【解決手段】キットは、対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装備と；生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含むマイクロニードルパッチを含む。マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状態で、マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査対象物またはこれからの抽出物が装備によって定量分析され、装備は前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査対象物またはこれからの抽出物から診断しようとする各皮膚状態関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発現程度を定量化し、定量化値に基づいて各皮膚状態の診断がなされる。【選択図】なし

Description

本発明はマイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キットに関する。
本発明は以下で特定する７個の韓国特許出願から優先権を主張するところである。以下
で特定された７個の韓国特許出願の発明の詳細な説明、特許請求の範囲および図面に記載
されたすべての技術的内容は本発明の明細書に含まれたものと見なされるべきである。
韓国特許出願第１０－２０２０－０１００１５１号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的皮膚のシワまたは皮膚弾力診断キット）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１００１６５号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的皮膚保湿程度評価キットおよび皮膚保湿程度の評価のためのバイオ
マーカー）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１００１６８号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的皮膚色素沈着程度評価キットおよび皮膚色素沈着程度評価のための
バイオマーカー）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１００５７９号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的皮膚油分程度評価キットおよび皮膚油分程度評価のためのバイオマ
ーカー）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１０１１１７号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的紅潮性敏感皮膚評価キットおよび紅潮性敏感皮膚評価のためのバイ
オマーカー）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１０１１２４号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的主観的刺激性敏感皮膚程度評価キットおよび主観的刺激性敏感皮膚
程度評価のためのバイオマーカー）
韓国特許出願第１０－２０２０－０１００５６１号（発明の名称：マイクロニードルパ
ッチを含む最小侵襲的化粧品ニキビの予測キットおよび化粧品ニキビの予測用バイオマー
カー）
本発明は多様な皮膚状態の正確な診断、測定または評価のためのものである。本発明が
扱う皮膚の状態は次の総７つである。
－皮膚老化（皮膚のシワまたは皮膚弾力関連）
－皮膚保湿
－皮膚色素沈着
－皮膚油分
－紅潮性敏感皮膚
－刺激性敏感皮膚
－化粧品ニキビ
以下では、前述した７つの皮膚状態それぞれの診断、測定または評価のためにどのよう
な技術が用いられているか、現在使用中のこのような技術に対して本発明者（ら）が認識
した問題は何であるかについて詳細に記述することにする。
＜皮膚老化＞
すべての生命体は生まれてから老化が始まり、皮膚も老化が進行される。皮膚老化の原
因としては、年を取るにつれて進行される内因性要因と、太陽の光、寒さ、風、スモッグ
などの環境的要因に長期間露出して進行される外因性要因と、に分けることができる。
皮膚が老化するにつれて、真皮層細胞外基質の主な成分であるコラーゲン、エラスチン
とヒアルロン酸の含量と繊維芽細胞の数が減少し、このような結果としてシワが発生し弾
力が低下して肌がたるむようになる。真皮層内の細胞外基質の減少はｍａｔｒｉｘ ｍｅ
ｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＭＭＰ）酵素であるｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ（ＭＭＰ
－１）およびｇｅｌａｔｉｎａｓｅ（ＭＭＰ－２、ＭＭＰ９）等によるものであり、実際
に老化した皮膚でこれら酵素の活性および発現が顕著に増加している。
皮膚障壁は「Ｂｒｉｃｋ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｒ」で要約される表皮層の分化の最後の
形態である角質層のことである。Ｂｒｉｃｋは核が消滅した角質細胞と多様な細胞内蛋白
質、天然保湿因子を含んだ分解産物、そしてこれに連結された膜（ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ
ｅｎｖｅｌｏｐｅ）で構成される。Ｍｏｒｔａｒは主にセラマイド、コレステロール、脂
肪酸で構成された角質細胞間脂質を指称し、多層板の構造である。老化が進行すると略７
５％の割合で乾燥した皮膚が観察され、これは年を取るにつれて皮膚障壁の維持および基
本的な機能の発揮に重要な要素（角質層脂質含量、表皮ｐＨ）に障害が発生するためであ
る。老化した皮膚障壁ではラメラ層板の数が少なく、層板小体の分泌が減少し、角質層で
の脂質減少など、脂質代謝の異常が発生する。また、セラマイド、コレステロール、脂肪
酸などの生成速度制限酵素の機能が低下し、特にコレステロールの合成が非常に低下して
全体の脂質含量が減少する。また、ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ ｅｎｖｅｌｏｐｅおよび天然保
湿因子の発現が減少する。
このような皮膚老化状態を測定したり皮膚老化の新しいメカニズムを発掘し治療に対す
る効果判定、予後に対する予測検査、新しい治療剤の開発などのためには、適切な有効性
評価が必要である。動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造さ
れた化粧品、また、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化
粧品の流通および販売が全面禁止されることにより、現在は、皮膚老化のメカニズムの研
究や化粧品の有効性評価は、人体適用機器を利用した効能評価やテープストリッピング、
皮膚組織の生検または３Ｄ ｓｋｉｎを利用したｅｘ ｖｉｖｏ効能評価に依存している
。
人体適用機器を利用した皮膚老化の測定方法として後述する多様な技術が本発明の出願
日現在使用されている。
－ ＰＲＩＭＯＳ装備を利用した皮膚の形態学的な部分のみを映像で測定する方法
－ Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ装備で負圧を利用して皮膚の反復的な収縮と弛緩作用の平均値
を測定する方法
－ Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚障壁機能の異常に関連した経皮水分消失度
（ＴＥＷＬ）の変化を測定する方法
－ Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ装備を利用して水の伝導度などを利用した水分量の変化を
測定する方法
－ Ｓｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚表面の酸性度を測定する方法
しかし、前述した方法は皮膚老化の具体的なメカニズムの研究に使われ難く、特定因子
の変化を科学的に説明するための根拠を提供できない。特に皮膚老化の最も重要なターゲ
ットである真皮内コラーゲンをはじめとする細胞外基質の変化に対する具体的なデータを
提供できない。
最近病変部位にテープを着脱してテープに付着された皮膚検査対象物を分析するテープ
を利用した非侵襲的ストリッピング方法が提示された。しかし、皮膚老化の主な原因はコ
ラーゲンや弾力繊維の変性など、真皮の変化にある反面、テープに付着された物質は角質
層に限定されるため真皮の変化を反映することができない。
このような短所を補完するために皮膚の生検が使われるが、これは執刀医の熟練した技
術が必要であり、非常に侵襲的な方法であるため、患者に苦痛が伴われて拒否感が発生し
、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。このような理由で、実際の人体で有効性評
価のための試験において一々試験薬剤の使用前後に皮膚の生検を施行するには困難があり
、患者の順応度が非常に落ちる。
３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は、実際の人体の表皮層と真皮層の細胞を
すべて含んで皮膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が高いだけ
でなく実際の皮膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造を含まないなめ、実際の
皮膚の変化を反映するとは見ることができず、皮膚生検を完璧に代替することはできない
。
したがって、現在は皮膚老化のメカニズムの研究や抗皮膚老化剤の有効性評価の研究に
おいて動物実験や皮膚生検を代替する方法がないのが実情であり、このため、非侵襲的で
真皮のコラーゲンをはじめとする細胞外基質の変化を実際に測定できる方法の開発が切に
要請されている。
＜皮膚保湿＞
皮膚は外部の物理および化学的刺激からの保護障壁の役割と水分維持の役割を担当する
。皮膚障壁は多様な層で構成された皮膚のうち表皮の角質層に存在し、外部刺激から一次
的に物理的防御の役割を担当する。これは角質細胞と角質細胞間脂質の堅固な結合で形成
されている多層板の構造である。皮膚障壁は「Ｂｒｉｃｋ ａｎｄ ｍｏｒｔａｒ」で要
約され、角質細胞が主となるＢｒｉｃｋは核が消滅した角質細胞と多様な細胞内蛋白質、
天然保湿因子を含んだ分解産物、そしてこれに連結された膜（ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ ｅｎ
ｖｅｌｏｐｅ）で構成される。Ｍｏｒｔａｒは主にセラマイド、コレステロール、脂肪酸
で構成された角質細胞間脂質を指称する。これによって水分損失防止と水分維持機能を担
当する。角質層は角質形成細胞の増殖と分化を通じて形成され、多様な蛋白質加水分解
酵素の作用により周期的に脱落して恒常性を維持する。
乾燥した皮膚は角質が増加して皮膚表面がかさつき、突っ張り感やかゆみなどの症状を
伴う皮膚状態を意味する。アトピー皮膚炎や乾癬などの皮膚疾患による内因性要因と乾燥
した環境、風のような気候条件、洗剤、有機溶剤などの化学物質、過度な入浴や洗顔、紫
外線、物理的刺激などの外因性要因により天然保湿因子、角質層脂質、皮脂などの減少と
角質層の異常な脱落のように多様な原因によって誘発されるため、原因に応じた適切な保
湿剤の使用と生活習慣の管理が必要である。
したがって、皮膚保湿状態を把握し、皮膚保湿障害に対するメカニズムの研究やそのよ
うな障害を矯正または治療できる保湿剤や皮膚管理の開発のための適切な有効性評価が必
要である。動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造された化粧
品、また、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化粧品の流
通および販売が全面禁止されたことにより、現在は皮膚保湿のメカニズムの研究や化粧品
の有効性評価は人体適用機器を利用した効能評価やテープストリッピング、皮膚組織の生
検または３Ｄ ｓｋｉｎを利用したｅｘ ｖｉｖｏ効能評価などの方法が利用されている
。
皮膚保湿測定のための人体適用機器としてはＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｔｅｗａｍｅｔ
ｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒがある。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒは電気電荷を貯蔵
する電気量である静電負荷容量（ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ）が水分量と比例する傾向を利
用して皮膚保湿度を測定するものであり、角質層の下方３０－４０μｍ深さ以内の水分含
量を測定する。水分が高いほど数値も高くなる。Ｔｅｗａｍｅｔｅｒは皮膚障壁の損傷と
密接な関連があるが、経表皮水分損失量（ＴＥＷＬ；Ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｗ
ａｔｅｒ ｌｏｓｓ）を測定する装備である。皮膚障壁が損傷すると表皮で損失する水分
の蒸発が多くなるが、機器で皮膚表皮から蒸発する水分を感知して数値を提供するもので
あり、数値が大きいほど損失量が多いことを意味する。Ｓｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒは皮膚
酸度を測定する機器であり、皮膚表面の水素イオン濃度を測定して正常な皮膚の酸度であ
る弱酸性（ｐＨ４．５－５．５）から外れるかを確認することができる。
このような人体適用機器は非常に敏感であるため測定する環境と測定者による影響を多
く受ける。したがって、一定時間恒温除湿条件に露出した状態で、高価の装備で熟練した
測定者が測定しないと信頼性のある結果を得ることができない。また、この方法は単純に
皮膚水分含量、経皮水分損失量、皮膚ｐＨのみを測定するため皮膚の乾燥度を把握するこ
とはできるものの、多様な原因によって皮膚保湿程度が異常である場合、その原因のメカ
ニズムやそれに対する治療法あるいは管理法を開発することは難しい。
病変部位にテープを着脱してテープに付着された皮膚検査対象物を分析するテープを利
用した非侵襲的ストリッピング方法も単に皮膚表皮の最上部である角質層を測定するため
、角質層の下方の顆粒層から基底細胞層と真皮層に存在する保湿に関連した変化に対する
具体的な資料を得ることはできない。
このような短所を補完するために皮膚の生検が使われるが、これは執刀医の熟練した技
術が必要であり、非常に侵襲的な方法であるため、患者に苦痛が伴われて拒否感が発生し
、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。このような理由で、実際に人体で有効性評
価のために一々試験薬剤の使用前、後に皮膚の生検を施行するには困難があり、患者の順
応度が非常に落ちる。
３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は人体の表皮層と真皮層の細胞を含んで皮
膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が高いだけでなく実際の皮
膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造や表皮および真皮に存在する多様な免疫
細胞を含んではおらず、実際の皮膚の変化とは異なり得るため皮膚生検を完璧に代替する
ことはできない。
したがって、現在は皮膚保湿のメカニズムの研究や保湿剤の有効性評価の研究において
動物実験や皮膚生検を代替する方法がないのが実情であり、このため、非侵襲的であり、
皮膚表皮の全層と真皮の変化を測定できる方法が必要である。
＜皮膚色素沈着＞
メラニンは自然系に分布するフェノール類の高分子物質であり、黒い色素と蛋白質の複
合体である。メラニンは一定量以上の紫外線を遮断する機能があるため、皮膚の体温を維
持し紫外線から皮膚を保護してくれる。また、メラニンは人の皮膚色を決定する重要な要
素である。皮膚のメラニンはメラニン細胞によって生成されるが、人種によってメラニン
発現遺伝子が異なり、これによってメラニン細胞の量が調節されて皮膚色が決定される。
皮膚が紫外線に露出すると、角質形成細胞はメラニン細胞刺激ホルモンを分泌すること
になり、メラニン細胞刺激ホルモンはメラニン細胞のメラノコルチン１受容体（ＭＣ１Ｒ
）と結合してメラニン細胞の核に作用して、チロシナーゼとＴＹＲＰ１、ＴＹＲＰ２等の
酵素を発現させメラニンの生成を始めることになる。
メラニンの生成過程は次の通りである。まず、メラニン細胞内小器官であるメラノソー
ムが生成され、メラノソームからチロシンというアミノ酸から始まってＤＯＰＡに酸化し
、チロシナーゼという酸化酵素が関与してＤＯＰＡ－ｑｕｉｎｏｎｅに酸化する。以後か
らは自動酸化反応が起きて５，６－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｉｎｄｏｌ、ｉｎｄｏｌ－５，６
－ｑｕｉｎｏｎｅが形成され、最終的に黒褐色のメラニンが生成される。その後、メラニ
ン細胞の樹状突起を通じて周囲の角質形成細胞に大量のメラノソームが移動して分解され
、角質形成細胞にメラニンが蓄積されて皮膚色を表すことになる。
皮膚色による皮膚類型分類は、１９７５年アメリカのＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋが乾癬の
初期治療量を決定するために白人の皮膚を４つのタイプではじめて分類することにより始
まった。その後、二つのタイプを追加して白人はＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、茶色皮膚であ
る東洋人はＶタイプ、黒人はＶＩタイプであると定義した。しかし、多くの研究者によっ
て東洋人においても多様な皮膚タイプが存在することが明らかになり、多様な誤差が発生
して、現在は太陽紫外線による皮膚反応を基準として、常に太陽による火傷をするＩタイ
プから火傷なしにタンニングのみされるＶＩタイプまでに分類している。
皮膚色素沈着状態を評価または測定したり、多様な皮膚の色素性疾患から皮膚の色素変
化の新しい原因、メカニズムを発掘し皮膚の色素変化治療に対する効果判定、予後に対す
る予測検査、新しい皮膚の色素治療剤の開発などのためには適切な有効性評価が必要であ
る。ところが、動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造された
化粧品、また、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化粧品
の流通および販売が全面禁止されたことにより、現在は皮膚色素沈着のメカニズムの研究
や化粧品の有効性評価は人体適用機器を利用した効能評価やテープストリッピング、皮膚
組織の生検または３Ｄ ｓｋｉｎを利用したｅｘ ｖｉｖｏ効能評価で進行している。
人体適用機器を利用した皮膚の色素の測定方法としては、皮膚色を決定する主な要因で
あるメラニンとヘモグロビン量の皮膚吸収率を吸光原理を利用して測定するＭｅｘａｍｅ
ｔｅｒ装備を利用した方法や、皮膚色の分光反射率を測定して三色刺激値（ｔｒｉｓｔｉ
ｍｕｌｕｓ ｖａｌｕｅ）で皮膚の明るさおよび彩度を計算するＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔ
ｏｍｅｔｅｒ装備を利用した方法などが使われている。しかし、これらの方法は単に皮膚
の色や紅潮の程度のみを測定するだけであるので、皮膚色素沈着の具体的なメカニズムの
研究には使用し難いのが実情である。また、特定因子の変化を科学的に説明できず、特に
色素沈着の最も重要なターゲットであるｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓの変化に対する具体
的な資料を提供しない。
病変部位にテープを着脱してテープに付着された皮膚検査対象物を分析するテープを利
用した非侵襲的ストリッピング方法が提示された。しかし、皮膚色素沈着の主なメカニズ
ムはｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓなどの基底層に存在するメラニン細胞の変化が主なもの
であるのに反して、テープに付着された物質は角質層に限定されるためその下の表皮層（
顆粒層、上皮細胞層、基底細胞など）や真皮層内の変化までは反映し難いという限界点が
ある。
このような短所を補完するために皮膚の生検が使われるが、これは執刀医の熟練した技
術が必要であり、非常に侵襲的な方法であるため、患者に苦痛が伴われて拒否感が発生し
、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。このような理由で、実際に人体で有効性評
価のために一々試験薬剤の使用前、後に皮膚の生検を施行するには困難があり、患者の順
応度が非常に落ちる。
３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は人体の表皮層と真皮層の細胞を含んで皮
膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が高いだけでなく実際の皮
膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造や表皮および真皮に存在する多様な免疫
細胞を含んではおらず、実際の皮膚の変化とは異なり得るため皮膚生検を完璧に代替する
ことはできない。
したがって、現在は皮膚色素沈着のメカニズムの研究や色素治療剤の有効性評価の研究
において動物実験や皮膚生検を代替する方法がないのが実情であり、このため、非侵襲的
であり、皮膚の表皮全層の変化を測定できる方法が必要である。
＜皮膚油分＞
皮膚油分に関与する皮脂は皮脂腺で分泌される物質であり、トリグリセライド、ワック
スエステル、スクアレンが主成分である。皮脂腺は毛の付属分泌腺であって真皮層に存在
し、分泌された皮脂は皮膚表面を覆って水分が外に放出されることを防ぐ役割をする。ま
た、アルカリを中和し殺菌力があり、皮膚の乾燥を防止して皮膚の老化を遅延させる重要
な要素である。
したがって、適正な水準の皮脂の分泌が維持されないと健康な皮膚とは言えないが、男
性ホルモンによる皮脂の分泌の増加、毛包壁過角化、アクネ菌による炎症、ストレスなど
の環境的要因と遺伝的要因によって皮脂の分泌が過度に増加すると、毛穴を防いで皮膚ト
ラブルが生じ得、これに関連した疾患としてはニキビ、脂漏性皮膚炎などがある。
皮脂の分泌は年齢と性別により異なるが、幼児期には少なく分泌されて青少年期に分泌
が増加し、その後、年を取るにつれ減少する様相を見せる。また、女性よりは男性でホル
モンによる皮脂の分泌が増加する。一般的に乾性の反対を皮脂の分泌が多い脂性という。
皮脂腺が主に分布する額、眉間および鼻部位をＴゾーン部位という。両頬から顎につなが
る部位をＵゾーン部位といい、一般的にこの部位では皮脂腺の分布の程度が低い。Ｕゾー
ンは乾性であり、Ｔゾーンは脂性である皮膚を複合性に分類したりもする。脂性皮膚の場
合、これに応じた洗顔剤と保湿剤の選択が重要である。
皮膚油分の状態を把握し、皮膚油分の分泌障害や分泌過多に対するメカニズムの研究に
おいて適切な有効性評価方法が必要である。皮膚油分障害を矯正したり治療できる洗浄剤
および治療剤の開発や皮膚管理方法の開発においても同様である。
一方、動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造された化粧品
、また、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化粧品の流通
および販売が全面禁止されたことにより、現在の皮膚油分障害や過多分泌のメカニズムの
研究やこれに関連した機能性化粧品の有効性評価は人体適用機器を利用した効能評価やテ
ープストリッピング、皮膚組織の生検または３Ｄ ｓｋｉｎを利用したｅｘ ｖｉｖｏ効
能評価で進行している。
皮膚油分測定のための人体適用機器としてはＣｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ Ｅｌｅ
ｃｔｒｏｎｉｃ社のＳｅｂｕｍｅｔｅｒがある。厚さ０．１ｍｍの皮脂収集用テープを皮
膚に接触した後に吸収された皮脂を測定するが、皮脂によってテープが透明になると光透
過度が高くなる原理で油分量を測定する。
このような人体適用機器は敏感であるため測定する環境と測定者による影響を多く受け
、一定時間恒温除湿条件に露出した状態で熟練した測定者が測定しないと信頼性のある結
果を得ることができない。また、この方法は単純に皮膚表面の分泌された皮脂のみを測定
するため皮膚油分分泌の具体的なメカニズムの研究に使われるには適していない。また、
特定因子の変化を科学的に説明できず、真皮に存在する皮脂腺の変化に対する具体的なデ
ータを提供しない。
病変部位にテープを着脱してテープに付着された皮膚検査対象物を分析するテープを利
用した非侵襲的ストリッピング方法も検査対象物の採取領域が角質層に限定されるため、
皮膚油分に関連した真皮層の変化まで反映することはできない。
このような短所を補完するために皮膚の生検が使われるが、これは執刀医の熟練した技
術が必要であり、非常に侵襲的な方法であるため、患者に苦痛が伴われて拒否感が発生し
、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。このような理由で、実際に人体で有効性評
価のために一々試験薬剤の使用前、後に皮膚の生検を施行するには困難があり、患者の順
応度が非常に落ちる。
３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は人体の表皮層と真皮層の細胞を含んで皮
膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が高いだけでなく実際の皮
膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造や表皮および真皮に存在する多様な免疫
細胞を含んではおらず、実際の皮膚の変化とは異なり得るため皮膚生検を完璧に代替する
ことはできない。
したがって、現在は皮膚油分の分泌状態および皮膚油分分泌のメカニズムの研究や皮膚
油分に対する有効性評価の研究において動物実験や皮膚生検を代替する方法がないのが実
情であり、このため、非侵襲的であり、皮膚真皮層の変化を測定できる方法が必要である
。
＜紅潮性敏感皮膚＞
バウマンの皮膚タイプの４つのカテゴリーの中の一つである敏感性は、さらに４つのタ
イプに分類できるが、これはニキビ性敏感皮膚（ａｃｎｅ ｔｙｐｅ）、主観的刺激性敏
感皮膚（ｓｔｉｎｇｉｎｇ ｔｙｐｅ）、アレルギー性敏感皮膚（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｔ
ｙｐｅ）、そして紅潮（酒▲さ▼）性敏感皮膚（ｒｏｓａｃｅａ ｔｙｐｅ）である。こ
のうち一つに対する敏感性のみを有することもあれば、複合的な敏感性を有することもあ
る。アメリカ人２７，４８５人を対象としたバウマンの皮膚タイプのアンケート研究で、
回答者のうち７３％が敏感性皮膚であったし、４９％が紅潮性敏感皮膚タイプに観察され
た（Ｂａｕｍａｎｎ Ｌ．、Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｃｌｉｎ．２００８：２６（３）：３５
９－３７３）。
紅潮とは、皮膚色が赤く変わるもので、主に顔の中央部位に発生し、毛細血管の拡張に
よって現れる症状であって、更年期のホルモンの不均衡、皮膚障壁の弱化による敏感、ス
テロイド副作用など、多様な原因によって発生する。外部刺激によって一時的に発生する
が慢性化される場合、酒▲さ▼（Ｒｏｓａｃｅａ）と呼ばれる慢性炎症性疾患が発生する
可能性がある。
紅潮性敏感皮膚とは、特定の成分が含まれた化粧品を塗った時に皮膚が赤くなって火照
り、時々炎症性丘疹と毛細血管の拡張を伴う皮膚をいう。紅潮性敏感皮膚である場合、顔
の温度の急激な変化を最小化した方が良く、抗炎症効能がある成分が入っている洗顔剤や
保湿剤、紫外線遮断剤を使った方が良く、例としてはアロエ、アルガンオイル、ビサボロ
ール 、カフェイン、カモミール、キュウリ、緑茶、マンサク、ナイアシンアミド、サリ
チル酸などがある。
したがって、紅潮性敏感皮膚の新しいメカニズムを発掘し各種化粧品成分に対する紅潮
性敏感皮膚発生の予測、新しい治療剤の開発などのためには適切な有効性評価が必要であ
る。動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造された化粧品、ま
た、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化粧品の流通およ
び販売が全面禁止されたことにより、現在の紅潮性敏感皮膚のメカニズムの研究や化粧品
の有効性評価は人体適用機器を利用した効能評価や３Ｄ ｓｋｉｎを利用したｅｘ ｖｉ
ｖｏ効能評価で進行している。
紅潮性敏感皮膚測定のための人体適用機器としてはＭｅｘａｍｅｔｅｒ（Ｃｏｕｒａｇ
ｅ＋Ｋｈａｚａｋａ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ社）とＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ
がある。Ｍｅｘａｍｅｔｅｒはメラニン値と紅斑を示すヘモグロビン（ｈｅｍｏｇｌｏｂ
ｉｎ）値を同時に測定するが、メラニンと紅斑に対応する互いに異なる３種の波長帯（５
６８ｎｍ、６６０ｎｍ、８８０ｎｍ）を利用してｐｒｏｂｅから放出する光の反射度を測
定する分光学的方式の機器であり、紅斑量を紅斑指数（Ｅｒｙｔｈｅｍａ ｉｎｄｅｘ、
ＥＩ）で提供する。Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒは物体色の分光反射率を測定す
る装備であって、ＣＩＥ表色系であるＬ＊、ａ＊、ｂ＊で色を計算する。Ｌ＊は明度を意
味し、ａ＊は赤色度、ｂ＊は黄色度を意味するが、０に近いほど無彩色を示し、反対にな
ると色度が高くなることを意味する。
このような人体適用機器は敏感であるので測定する環境と測定者による影響を多く受け
るため、熟練した測定者と恒温および除湿条件で測定しないと信頼性のある結果を得るこ
とができない。また、単純に皮膚表面の色を測定するので紅潮性敏感皮膚の具体的なメカ
ニズムの研究に活用されるには不十分であり、特定因子の変化を科学的に説明することが
できない。また、紅潮で重要な真皮に存在する毛細血管に対する具体的な資料を提供しな
い。
３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は人体の表皮層と真皮層の細胞を含んで皮
膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が高いだけでなく実際の皮
膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造や表皮および真皮に存在する多様な免疫
細胞を含んではおらず、実際の皮膚の変化とは異なり得る。
したがって、紅潮性敏感皮膚に適合した治療剤や化粧品を使うための紅潮性敏感皮膚を
予測できる新しい検査が必要である。
＜刺激性敏感皮膚＞
敏感皮膚は、刺激物質、ストレス、環境的要因などに対して敏感に反応して刺激感と刺
激反応が現れる皮膚をいう。敏感皮膚は主観的観点と客観的観点で定義され得る。主観的
刺激に敏感な皮膚では、客観的な炎症症状なしに灼熱感、掻痒感などの本人が感じる主観
的な症状が発生する。客観的反応の敏感な皮膚では、専門医によって観察される紅斑、膨
疹、水泡などの皮膚病変を伴った客観的な症状が発生する。
敏感皮膚の発生メカニズムは神経感覚の信号伝達の増加、免疫反応の増加、皮膚障壁の
弱化などの多様なメカニズムが関与すると知られているが、非常に複合的である。敏感皮
膚発生の原因因子のうち、内因性因子としては遺伝、過労、ストレス、睡眠不足などがあ
り、外因性因子としては化粧品、洗浄剤、紫外線、化学物質、環境などがある。アメリカ
の２７，４８５人の患者を対象に進行したバウマンの皮膚タイプアンケート調査で７３％
の患者が敏感性と観察されたし、そのうちの主観的刺激性敏感皮膚は１５％と観察された
。
主観的刺激性敏感皮膚の程度を測定したり、主観的刺激性敏感皮膚の新しいメカニズム
を発掘し、予後に対する予測検査、主観的刺激性敏感皮膚を予防できる局所塗布剤や化粧
品の開発などのためには適切な有効性評価が必要である。動物実験を実施した化粧品、動
物実験を実施した原料を使って製造された化粧品、また、動物実験を実施したり動物実験
を実施した原料を使って作った輸入化粧品の流通および販売が全面禁止されたことにより
、現在の主観的刺激性敏感皮膚のメカニズムの研究や個人の敏感度評価方法では試験対象
者の意見により皮膚刺激程度を決定する主観的測定法と専門医の視診を通じて観察する客
観的測定法または皮膚組織生検などで効能評価を施行することができる。
試験対象者の意見により皮膚の刺激程度を決定する主観的測定法としてはｌａｃｔｉｃ
ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ（乳酸刺し傷検査）、クロロホルムとメタノール混合
溶液を利用した灼熱感あるいは痛み誘発検査などがあり、客観的測定法としてはＳＬＳ、
ＤＭＳＯ、ａｍｍｏｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ
などを皮膚に塗布して紅斑、水泡などの皮膚の変化を観察する方法などがある。しかし、
主観的刺激性敏感皮膚の診断のための標準化された検査方法は未だなく、多数の研究に引
用されているｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔもｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ
塗布後に試験対象者の主観的な感じに依存するので、実験の再現性と正確性が落ちて客観
的に定量化することができないという限界点があり、完全な検査法とは言え難いため、主
観的な評価を排除した再現可能な客観的な刺激診断方法が必要であるのが実情である。
このような短所を補完するために皮膚の生検が使われるが、これは執刀医の熟練した技
術が必要であり、非常に侵襲的な方法であるため、患者に苦痛が伴われて拒否感が発生し
、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。このような理由で、実際に人体で有効性評
価のために一々試験薬剤の使用前、後に皮膚の生検を施行するには困難があり、患者の順
応度が非常に落ちる。
したがって、現在は主観的刺激性敏感皮膚のメカニズムの研究や主観的刺激性敏感皮膚
の予防のための局所塗布剤や化粧品の開発のために乳酸刺し傷試験の他に敏感皮膚の程度
を客観的に評価する方法がないのが実情である。主観的刺激性敏感皮膚で特異的に発現す
るバイオマーカーを発掘し、これを利用して非侵襲的に主観的刺激性敏感皮膚の程度を評
価する方法またはこれを実行するキットの開発が必要である。
＜化粧品ニキビ＞
敏感性皮膚には丘疹および膿疱のようなニキビ性病変が発生するニキビ類型、反復的な
紅潮および火照り症状が現れる酒▲さ▼類型、ひりひりする感じが現れる刺激性類型とア
レルゲン接触時に紅斑およびかゆみ症などの症状が現れるアレルギー類型の４つの類型が
ある。
ニキビは毛包脂腺単位に発生する炎症性皮膚疾患であり、思春期の青少年と若い成人で
８０％の有病率を見せるほど頻繁に発生する疾患である。ニキビの発生要因は毛包の過多
角質化、炎症反応、皮脂分泌の増加、Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅ
ｓ菌の集落形成などがある。この他にも環境的要因などの複合的な要因によって多様な臨
床症状が発生する。ニキビはブラックヘッドとして知られている開放面皰とホワイトヘッ
ドとして知られている閉鎖面皰で現れる非炎症性病変および丘疹、膿疱、結節などの炎症
性病変の様相で現れる。軽症ニキビでは面皰が主な病変であるが、もう少しひどくなると
丘疹と膿疱が主となり、重症ニキビ以上では結節と偽嚢胞が主な病変である。
思春期後に発生するニキビに化粧品が重要な影響を及ぼす。すなわち、化粧品使用後、
一部の患者においてはニキビ状の発疹がしばしば発生するが、このような病変をいわゆる
化粧品ニキビと呼んでいる。アメリカの２７，４８５人の患者を対象に進行したバウマン
の皮膚タイプアンケート調査で７３％の患者が敏感性と観察されたし、そのうちの化粧品
ニキビは５８％と観察された。化粧品使用後のニキビ誘発能力は毛包角栓で誘発される面
皰誘発能力と丘疹膿汁水疱の形成による。
検査する技術によって多様な結果が示され得るが、イソプロピルミリステートの濃度や
ワセリンの濃度が１０％未満である場合には、ウサギの耳では早期に面皰を誘発するが人
体では丘疹膿汁物質を誘発する。ソディウムラウリルスルフェートのような乳化剤は容量
に比例して膿汁物質を発生させる。Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ｍｙｒｉｓｔａｔｅ、ｉｓｏｐ
ｒｏｐｙｌ ｐａｌｍｉｔａｔｅ、ｃｏｃｏｎｕｔ ｏｉｌのような面皰生成成分は化粧
品ニキビを誘発するため、化粧品ニキビを見せる敏感性皮膚にはこのような成分が含まれ
ないものを使わなければならない。しかし、未だこのような化粧品ニキビの正確な発生メ
カニズムは明確に知られておらず、多様な類型の皮膚の中で敏感性で化粧品ニキビが発生
するかを予測できる検査法は確立されていない。
したがって、化粧品ニキビ発生の新しいメカニズムを発掘し、各種化粧品成分に対する
化粧品ニキビ発生の予測、新しい治療剤の開発などのためには、適切な新しい評価法が必
要である。動物実験を実施した化粧品、動物実験を実施した原料を使って製造された化粧
品、また、動物実験を実施したり動物実験を実施した原料を使って作った輸入化粧品の流
通および販売が全面禁止されたことにより、現在のニキビの発生メカニズムの研究や個人
の化粧品ニキビ評価方法では皮膚科専門医の視診を通じて観察する方法と食品医薬安全処
ガイドラインのニキビに対する有効性評価変数にともなう試験方法がある。最近では化粧
品で動物実験を中止した後、使用検査をしたり化粧品を４週の間背中に密閉塗布した後に
強力接着剤や陽イオン重合体表面生検で微細面皰生成を確認する方法で人体検査をしたり
もする。
食品医薬安全処のガイドラインのニキビに対する有効性評価変数による試験方法として
は、試験物質の作用前と後に試験対象者の顔で病変の種類とその数を測定して１～５等級
のうち基準に合う等級を記録する方法と、病変の数を測定してＭｉｃｈａｅｌｓｏｎ「ｓ
Ａｃｎｅ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ（ＡＳＩ）数値を計算する方法と、がある。
しかし、これは試験者の主観的な基準によって判定されるため客観的に定量化できないと
いう限界点があり、現在肉眼で見えるニキビの現状のみを記録するため化粧品ニキビ発生
の具体的なメカニズムの研究や特定因子の変化を科学的に説明できず、完全な検査法とは
言い難い。３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は、実際の人体の表皮層と真皮層
の細胞をすべて含んで皮膚を模倣した最も発展した構造体を見せてくれるものの、価格が
高いだけでなく実際の皮膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造を含まないなめ
、実際の皮膚の変化とは異なり得る。したがって、思春期後に化粧品の使用などによって
ニキビ状の発疹の発生が頻繁な皮膚で適合した治療剤や化粧品を選択するためには、適切
な化粧品ニキビ発生予測検査が必要である。
以上、７つの皮膚状態測定および評価のために本出願日現在に使用中の技術の問題点に
ついて詳察した。本発明者（ら）は本発明の皮膚状態の診断、測定または評価においてマ
イクロニードルを使うことにする。マイクロニードルは１ｍｍ以下の長さを有する微細な
針であり、最小限の侵襲で角質層を突き抜けて皮膚に微細な穴を生成して薬物を効果的に
伝達する薬物伝達技術であり、最近では薬物および生理活性物質の伝達にのみ使われず、
体内の検査対象物を獲得し病気を予測および診断するのにもその使用範囲が広くなってい
る。特にマイクロニードルで形成された微細穴を通じて体液または血液などの人体検査対
象物を採取してバイオマーカーの検出および病気の予測などに使うことができる。一例と
して、中空型（ｈｏｌｌｏｗ）マイクロニードルはニードルの内部に毛細管があるため、
皮膚に付着後毛細管を通じて血液を抽出する目的で使われている。患者の苦痛を最小化し
つつ、比較的安全に血液を抽出して血液内グルコースとコレステロールを検出したりバイ
オマーカーを検出できるという長所があるが、ニードルが皮膚の中で折れると副作用が発
生する可能性が高く、出血などの副作用が発生する可能性がある。
膨潤型（ｓｗｅｌｌａｂｌｅ）マイクロニードルは皮膚に付着後皮膚内組織液を吸収し
て膨らみ、穿孔部位を密閉して皮膚に接着剤なしに付着される原理であり、吸収された体
液を分離してバイオマーカーの検出、モニタリングおよび病気の予測に使われている。し
かし、分析に必要な体液を吸収するために長時間パッチを付着しなければならないため、
多様な環境的な要因によって安定的にパッチを付着し難いという限界点がある。
本発明に使われる溶解性（ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ）マイクロニードルは、生体内で溶解
する高分子素材と有効性分を混合した後、マイクロニードルで固形化して製造される。こ
のような溶解性マイクロニードルが皮膚に付着されると、効率的に体液によって溶けるこ
とになり、皮膚の内部で薬物を容易に伝達可能である。また、溶解性マイクロニードルは
金属やプラスチックで製作されないため、皮膚の中で折れる危険がなく安全である。本出
願人は本発明に至って溶解性マイクロニードルを新しい用途で活用しようとする。これは
溶解性マイクロニードルを利用した最初の皮膚検査対象物（ＲＮＡ、ＤＮＡ、蛋白質）の
採取；前記検査対象物を利用したＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析；前記分析結果に基
づいた化粧品ニキビバイオマーカーの発掘；前記バイオマーカーを利用した化粧品ニキビ
の予測および治療剤や化粧品の有効性評価などである。
最近、ＤＴＣ（Ｄｉｒｅｃｔ－Ｔｏ－Ｃｏｎｓｕｍｅｒ）サービスの提供で皮膚の類型
を分析する研究が活発に進行されているが、これは皮膚に関連した遺伝子ＤＮＡの一塩基
多型（ＳＮＰ）を分析した情報を提供するサービスである。主に口腔上皮を採取してＤＮ
Ａ塩基配列を分析するが、特定遺伝子の塩基配列が正常な人と異なるかを比較して危険度
を提示する。非侵襲的方法で皮膚遺伝子を検査できるものの、限界点も存在する。ＤＮＡ
はすべての細胞に同一に存在し不変であるため、多様な環境的要因によって変化する実際
の皮膚状態を反映できない。特定ＳＮＰを有して生まれたとしても、後天的な管理や治療
を通じて回生した場合に、ＳＮＰ分析では該当結果を反映できない。このような特徴のた
め、ＳＮＰ分析は新しい有効物質の発掘やメカニズムの研究、効能評価などに適用し難い
。それだけでなく、現在の口腔上皮を利用したＳＮＰ分析は、検査対象物採取部位が皮膚
ではなく口腔上皮という点で実際の皮膚状態を反映できない。反面、ＲＮＡは実際の細胞
で作用する蛋白質に翻訳可能な物質であり、細胞ごとに特異的な発現程度を示すため多様
な要因によって変化する実際の皮膚の特性を反映することができる。したがって、実際の
皮膚細胞でＲＮＡおよび蛋白質水準での発現を観察することが正確な皮膚状態の分析に必
須と言える。
ＤＮＡ遺伝体の分析とは異なり、ＲＮＡ転写体の分析は皮膚細胞でのみ特異的に発現し
たり薬物露出などの環境的条件により発現が変わる遺伝子の検出が可能であり、試験群と
対照群間の遺伝子発現量の差を確認することができるため、試験前後の比較が必要な有効
性評価やメカニズムの研究および候補物質の発掘に適用することができる。また、ｍｉｃ
ｒｏａｒｒａｙ技術を通じて一つのサンプルで４万個以上の遺伝子に対して発現を比較で
きるため、病気の予測や治療バイオマーカーの発掘において非常に有用である。しかし、
前述した通り、ＲＮＡと蛋白質を非侵襲的方式で収集する方法に限界が存在した。本発明
者（ら）は本発明に至って前述した限界を克服できる方式を提案しようとする。
本発明は前述したような従来の皮膚状態の診断、測定または評価方法の問題を解決する
ことを目的とする。従来の方式のうち例えば、組織生検は執刀医の熟練した技術が必要で
あり、患者の苦痛が伴われるため拒否感が発生し、試験後に生検部位の傷跡が残る短所が
ある。もう一つの従来の方式であるテープストリッピングはテープに付着された物質が角
質層に限定されるため、単に補助的な検査方法として使われ得るだけであり、完全な結果
を提供できないという短所がある。また、従来のＳＮＰ ａｒｒａｙは人体検査対象物の
ＤＮＡを利用するが、生まれる時から決定されて変わらないＤＮＡは多様な環境的要因に
よって変化する実際の皮膚状態を反映し難いという短所がある。
本発明の目的は、既存の組織生検対比苦痛が殆どなく、傷跡も残らず、患者の使用便宜
性を高め得るとともに、角質層内部の皮膚因子を採取することによって既存のテープスト
リッピング対比分析結果の信頼性を高めることができ、多様な環境的要因によって変化す
る実際の皮膚状態を反映できる新しい最小侵襲的皮膚状態の診断キットを提供することで
ある。
また、本発明の目的は、生物学的試料として皮膚検査対象物を使う皮膚状態測定のため
のバイオマーカーを提供することである。
また、本発明の目的は、前述した目的の達成に伴って、次のようなものなどを併せて提
供することにある。
－皮膚状態予測用組成物
－皮膚状態予測用検査方法および皮膚タイプ分類方法
－各皮膚状態に対する誘導または抑制の候補物質をスクリーニングし治療剤の有効性を評
価する方法
－皮膚状態の改善のための一般化粧品、機能性化粧品、医療機器、医薬品などの動物実験
代替人体適用効能評価方法。
本発明の一実施例に係る最小侵襲的皮膚状態の診断キットは、対象体の皮膚から抽出さ
れた検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装備と；生分解性高分子ヒア
ルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含むマイクロニードルパッ
チを含む。前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離
された状態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体
の皮膚からの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記
装備は前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
らの検査対象物またはこれからの抽出物から診断しようとする各皮膚状態関連ＲＮＡバイ
オマーカー遺伝子の発現程度を定量化し、前記定量化値に基づいて各皮膚状態の診断がな
される。
診断しようとする皮膚状態が皮膚老化である場合、大きくコラーゲン／弾力関連ＲＮＡ
バイオマーカー遺伝子と皮膚障壁機能／水分合成関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の二種
のバイオマーカー遺伝子を使う。前記コラーゲン／弾力関連バイオマーカーはＣＯＬ１Ａ
１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１、ＰＩＮＫ１、ＣＯＬ４Ａ４およびＭ
ＭＰ８のうちいずれか一つまたは二つ以上を含み、皮膚障壁機能／水分合成関連バイオマ
ーカーはＩＶＬ、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ
１、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ
２Ａ、ＢＧＮおよびＡＺＧＰ１のうちいずれか一つまたは二つ以上を含む。
診断しようとする皮膚状態が皮膚保湿である場合、皮膚保湿関連バイオマーカーとして
、ＣＤＳＮ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、ＫＬＦ４、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ２
Ａ、ＬＣＥ２Ｂ、ＬＣＥ２Ｃ、ＳＭＰＤ３、ＣＤＨ１、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ、ＳＰＩＮＫ
５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＢＧＮ、ＨＡＳ３、ＴＧＭ１、ＣＬＤＮ７、ＣＥＲＳ３、Ｃ
ＬＤＮ４およびＫＲＴ１のうちいずれか一つまたは二つ以上を使うことができる。
診断しようとする皮膚状態が皮膚色素沈着である場合、皮膚色素沈着関連バイオマーカ
ーとして、ＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１
、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１、ＭＣ１Ｒ、
Ｆ２ＲＬ１およびＣＬＤＮ１のうちいずれか一つまたは二つ以上を使うことができる。
診断しようとする皮膚状態が皮膚油分である場合、皮膚油分関連バイオマーカーとして
、ＭＦＡＰ２、ＩＧＦ１、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＧＰＡＭ、ＣＰＴ１Ｃ、ＡＲ、ＭＰＺＬ３、
ＡＱＰ３、ＳＲＥＢＦ２およびＨＳＤ１７Ｂ２のうちいずれか一つまたは二つ以上を使う
ことができる。
診断しようとする皮膚状態が紅潮性敏感皮膚である場合、紅潮性敏感皮膚関連バイオマ
ーカーとして、ＣＯＬ３Ａ１、ＴＡＣ１、ＫＬＫ５、ＣＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＴＲＰＡ１、
ＩＬ１３ＲＡ１、ＨＳＤ３Ｂ１、ＣＸＣＲ４、ＡＮＧＰＴ２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＲ５お
よびＰＳＭＢ９のうちいずれか一つまたは二つ以上を使うことができる。
診断しようとする皮膚状態が主観的刺激性敏感皮膚である場合、主観的刺激性敏感皮膚
関連バイオマーカーとして、ＩＶＬ、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＰＧＦ、ＣＹＲ６１、
ＨＬＡ－Ｂ、ＩＧＨＡ１、ＭＭＰ３、ＲＢＰ４およびＧ０Ｓ２のうちいずれか一つまたは
二つ以上を使うことができる。
診断しようとする皮膚状態が化粧品ニキビである場合、化粧品ニキビ関連バイオマーカ
ーとして、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣＲ１、ＡＫＲ１Ｂ１０、ＴＨＹ１およびＩＬ－６
のうちいずれか一つまたは二つ以上を使うことができる。
また、本発明の一実施例に係る皮膚状態の診断キットは対象体の皮膚からの検査対象物
からＲＮＡを抽出する装備をさらに含むことができる。前記ＲＮＡ抽出装備によって獲得
したＲＮＡが増幅過程を経て前記定量化装備に提供され得る。
その他にも、追加的な構成が本発明に係る最小侵襲的皮膚状態の診断キットにさらに提
供され得る。
本発明特有の最小侵襲的皮膚検査対象物獲得方式により各皮膚状態の診断用バイオマー
カーの有用性が明かされた。各皮膚状態の診断、評価または測定に有用なバイオマーカー
については後述する実施例で詳しく明かすことにする。
これらのバイオマーカーでいずれか一つ以上の遺伝子のｍＲＮＡまたはこの蛋白質水準
を測定することができる。前記遺伝子またはこの蛋白質水準が各皮膚状態測定対象者で増
加または減少することを確認したので、この水準を測定することによって皮膚状態の測定
および評価に有用に使われ得る。
本発明によると、従来の人体検査対象物のＤＮＡを利用したＳＮＰ ａｒｒａｙ方式の
皮膚類型診断方法の問題点が解決され得る。従来のＳＮＰ ａｒｒａｙは人体検査対象物
のＤＮＡを利用するが、生まれる時から決定されて変わらないＤＮＡは多様な環境的要因
によって変化する実際の皮膚状態を反映し難いという短所がある。また、本発明によると
、従来の人体適用機器測定、テープストリッピング、組織生検および３Ｄ人工皮膚ｅｘ
ｖｉｖｏ試験方式の皮膚老化診断方法の問題点が解決され得る。
従来の人体適用機器測定は皮膚の表面を断層的に測定する方法であるので、具体的なメ
カニズムの研究に活用されたり特定因子の変化を科学的に説明し難いという短所がある。
従来のテープストリッピングはテープに付着された物質が角質層に限定されるため単に
補助的な検査方法として使われ得るだけであり、完全な結果を提供できないという短所が
ある。
従来の組織生検は執刀医の熟練した技術が必要であり、患者の苦痛が伴われるため拒否
感が発生し、試験後に生検部位の傷跡が残る短所がある。
従来の３Ｄ人工皮膚を利用したｅｘ ｖｉｖｏ試験は価格が高いだけでなく、実際の皮
膚内に存在する血管、毛包、皮下脂肪などの構造を含まないなめ、実際の皮膚の変化を反
映するとは見ることができず、皮膚生検を完璧に代替することはできない。
本発明によると、既存組織生検対比苦痛が殆どなく、傷跡も残らず、患者の使用便宜性
を高め得るとともに、角質層内部の皮膚因子を採取することによって既存のテープストリ
ッピング対比分析結果の信頼性を高めることができる新しい最小侵襲的皮膚状態測定キッ
トおよび皮膚状態測定のためのバイオマーカーが提供され得る。
本発明により提供される前記キットまたはバイオマーカーを活用すると、従来技術対比
一層効率的に特定皮膚状態の誘導または抑制物質および治療剤を開発およびスクリーニン
グすることができ、一人一人に対する正確な皮膚類型に対する情報を提供することができ
、これを通じて個人の皮膚類型を科学的に分類してオーダーメード型化粧品の開発に利用
することができる。
また、本発明によると、各皮膚状態の改善のための一般化粧品、機能性化粧品、医療機
器、医薬品の開発において動物実験を代替可能な新しい人体適用効能評価方法が提供され
得る。
従来技術の皮膚生体検査方法を図示する図面である。 本発明に係る皮膚生体検査方法を概念的に図示する図面である。 目尻のシワの測定に関連して撮影した高解像度写真である。 図４と図５は、ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きを図示する図面である。 図４と図５は、ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きを図示する図面である。 Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した結果を図示する図面である。 皮膚老化原因のうちコラーゲンや弾力に関連した遺伝子を選別して列挙した表である。 皮膚老化原因のうち障壁機能や水分合成に関連した遺伝子を選別して列挙した表である。 図９～図１２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図９～図１２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図９～図１２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図９～図１２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図１３～図２０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 ＰＲＩＭＯＳ装備を利用して撮影した高解像度写真である。 ＰＲＩＭＯＳ装備を利用して目尻のシワの粗さを測定した結果を図示する。 Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚弾力を測定した結果を図示する。 Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ装備を利用して水分含量を測定した結果を図示する。 コラーゲン／弾力関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補を表示した表である。 皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補を表示した表である。 皮膚老化有効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を利用したコラーゲン／弾力関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐを図示する。 皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐを図示する。 図２９～図３２は、皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、ＣｕｔｏｍｅｔｅｒおよびＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図２９～図３２は、皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、ＣｕｔｏｍｅｔｅｒおよびＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図２９～図３２は、皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、ＣｕｔｏｍｅｔｅｒおよびＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図２９～図３２は、皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、ＣｕｔｏｍｅｔｅｒおよびＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 遺伝子整列結果を図示する図面である。 文献調査を通じて皮膚保湿に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果確認された遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 図３５～図３８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿関連バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図３５～図３８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿関連バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図３５～図３８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿関連バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図３５～図３８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿関連バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図３９～図４５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 皮膚保湿有効性評価を施行した結果を図示する。 皮膚保湿有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて図３５～図３８の皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカーと同一の傾向性が確認される遺伝子を選定して遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 皮膚保湿有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚保湿有効性評価バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにグラフ化した図面である。 遺伝子整列結果を図示する図面である。 文献調査を通じて皮膚色素沈着に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果である遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 図５１と図５２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図５１と図５２は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５３～図５８は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図５９と図６０は、皮膚美白有効性評価において、それぞれＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚色を測定し、Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ装備を利用して目尻のメラニンを測定した結果を図示する。 図５９と図６０は、皮膚美白有効性評価において、それぞれＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚色を測定し、Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ装備を利用して目尻のメラニンを測定した結果を図示する。 皮膚美白有効性バイオマーカーの候補を羅列した表である。 皮膚美白有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別された皮膚美白有効性評価バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図６３と図６４は、皮膚美白有効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚美白有効性バイオマーカーの候補と人体適用機器測定結果との相関関係を分析した結果を図示する。 図６３と図６４は、皮膚美白有効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚美白有効性バイオマーカーの候補と人体適用機器測定結果との相関関係を分析した結果を図示する。 遺伝子整列結果を図示する図面である。 文献調査を通じて皮膚油分に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果である遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚油分バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図６８および図６９は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚油分関連バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図６８および図６９は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚油分関連バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 遺伝子整列結果を図示する図面である。 文献調査を通じて紅潮性敏感皮膚に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果である遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮性敏感皮膚バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図７３～図７５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器（Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図７３～図７５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器（Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図７３～図７５は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器（Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 乳酸刺し傷検査方法を図示する図面である。 遺伝子整列結果を図示する図面である。 文献調査を通じて主観的刺激性敏感皮膚に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果である遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 図７９と図８０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚のバイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図７９と図８０は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚のバイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。 図８１～図８４は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子とＬａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図８１～図８４は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子とＬａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図８１～図８４は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子とＬａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 図８１～図８４は、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーの候補遺伝子とＬａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した結果を図示する。 Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した結果を図示する図面である。 文献調査を通じてニキビに関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果確認された遺伝子発現に関する数値を整理した表である。 皮膚科専門医の理学的所見を通じて化粧品ニキビの活性度が高い試験群５人と化粧品ニキビの活性度が低くｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０．５点以下である対照群５人、総１０人の試験対象者を選定した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を通じて選定された化粧品ニキビバイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図８８～図９４は、遺伝子別発現程度と理学的所見との相関関係分析結果を示す図面である。 図９５～図９８は、遺伝子別発現程度と肉眼評価を通じての脂性点数との相関関係分析結果を示す図面である。 図９５～図９８は、遺伝子別発現程度と肉眼評価を通じての脂性点数との相関関係分析結果を示す図面である。 図９５～図９８は、遺伝子別発現程度と肉眼評価を通じての脂性点数との相関関係分析結果を示す図面である。 図９５～図９８は、遺伝子別発現程度と肉眼評価を通じての脂性点数との相関関係分析結果を示す図面である。 図９９～図１０１は、遺伝子別発現程度と人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係分析結果を示す図面である。 図９９～図１０１は、遺伝子別発現程度と人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係分析結果を示す図面である。 図９９～図１０１は、遺伝子別発現程度と人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係分析結果を示す図面である。
後述する本発明に対する詳細な説明は、本発明が実施され得る特定の実施例を例示とし
て図示する添付図面を参照する。このような実施例は当業者が本発明を十分に実施できる
ように詳細に説明される。本発明の多様な実施例は互いに異なるが、互いに排他的である
必要はないということが理解されるべきである。後述する詳細な説明は限定的な意味とし
て行われるものではなく、本発明の範囲は特許請求の範囲の請求項が請求する範囲および
それと均等なすべての範囲を包括するものと理解されるべきである。
以下では、本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が本発明を容易に実施でき
るようにするために、本発明の多様な好ましい実施例に関して添付された図面を参照して
詳細に説明することにする。
図１は従来技術の皮膚生体検査方法を図示する図面であり、図２は本発明に係る皮膚生
体検査方法を概念的に図示する図面である。
図２は、本発明に係る皮膚生体検査方法を概念的に図示する図面である。
図２の左側上段には、本出願日当時当業界で知られているマイクロニードルパッチが図
示されている。図２の左側下端には、このようなマイクロニードルパッチが皮膚に適用さ
れた様子が図示されており、より具体的には、パッチのマイクロニードルが皮膚の真皮層
まで浸透した様子を図示する。図２の右側部分には対象者にマイクロニードルパッチが適
用された後、パッチのマイクロニードルについてきた皮膚内蛋白質を活用して生体検査を
実施する本発明の代表的な技術的思想が概念的に図示されている。ここに表示された用語
であるバイオマイニング（Ｂｉｏ－Ｍｉｎｉｎｇ）は、生体検査のために対象体の皮膚内
蛋白質を掘り出すという意味で使われた。
本発明で皮膚検査対象物の採取手段として使われた生分解性高分子ヒアルロン酸マイク
ロニードルパッチは中実（ｓｏｌｉｄ）構造であり、送風引張工程（Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｅ
ｘｔｅｎｓｉｏｎ、ＤＥＮ）で製造されたが、本発明の範疇がこれと異なる方式、例えば
モールディング方式で製造されたマイクロニードルパッチの使用を排除するものと解釈さ
れてはならない。製造方式を問わず同一材質、同一構造のマイクロニードルパッチは皮膚
検査対象物の採取性能において大同小異なものと評価される。
本発明者（ら）は各皮膚状態測定および評価に有用なバイオマーカーの発掘のために臨
床試験を実施した。臨床試験対象者は次のように選定した。
臨床試験対象者の選定
本発明者らは各皮膚状態に関連したバイオマーカーを発掘しこれを利用して各皮膚状態
の診断方法と診断キットを開発するために、３３人の２０～７０才の健康な試験対象者を
対象に実験を遂行した。下記の表１には試験対象者の臨床特性が整理される。
この時、１（丸付き数字１）ＩＲＢ承認後に自発的に本研究に同意していないため同意
書を作成していない者、２（丸付き数字２）人体由来物の提供に同意していない者、３（
丸付き数字３）妊娠または授乳中の女性とプロトコルで定めた避妊方法に同意しない妊娠
可能期の女性、４（丸付き数字４）皮膚疾患の治療のためにステロイドが含まれた皮膚外
形剤を１か月以上使う人、５（丸付き数字５）最近１か月の間経口ステロイド剤、経口抗
生剤、免疫抑制剤使用者、６（丸付き数字６）対象病変部位に感染（真菌、細菌およびウ
イルス感染）の所見がある患者、７（丸付き数字７）紫外線治療を受けている者、８（丸
付き数字８）深刻な全身疾患がある者、９（丸付き数字９）同意書を読んで理解できない
試験対象者（文盲など）、および１０（丸付き数字１０）その他試験責任者の判断で試験
に不向きなものと考えられる人は試験対象者から除外した。
それ以降の臨床試験の進行に対する内容は、本発明により診断、評価または測定される
各皮膚状態別に以下に記述することにする。
＜皮膚老化＞
皮膚老化の程度による試験対象者の分類、専門医の問診、人体適用機器の評価、ｌａｃ
ｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔおよび皮膚検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、平常時の表情の時の目尻のシワ、皮膚弾力、
水分含量、経皮水分蒸発量および皮膚酸性度を測定した。具体的には、目尻のシワはＰＲ
ＩＭＯＳＣＲ、皮膚弾力はＣｕｔｏｍｅｔｅｒ Ｄｕａｌ ＭＰＡ ５８０、水分含量は
Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、経皮水分蒸発量はＴｅｗａｍｅｔｅｒ、皮膚酸性度はＳｋｉｎ
－ｐＨｍｅｔｅｒ装備を利用して測定した。このうち目尻のシワの測定に関連しては図３
の高解像度写真を参照可能である。目尻のシワはｒｏｕｇｈｎｅｓｓ（Ｒａ）値、皮膚弾
力はＲ２値、水分含量はＡ．Ｕ．値、経皮水分蒸発量はｇ／ｈ／ｍ２値、皮膚酸性度はｐ
Ｈ値で定量化した。
試験対象者の目尻のシワに対する理学的所見は化粧品表示・広告実証のための試験方法
ガイドライン改正（案）の肉眼評価基準に基づいて、皮膚科専門医によって肉眼判定を進
行した。
表２は全体の試験対象者のうち２０代（対照群）５人と５０代以上（試験群）５人を選
定して人体適用機器を通じて皮膚老化を評価した結果である。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは、少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅す
る方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。増幅されたＲＮＡは
ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔ
ｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行した。増幅過
程についてより具体的に説明すると次の通りである。
分離したＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使って増幅したし、メーカーの同封された試験方法にしたがって進
行した。ｍＲＮＡを鋳型でＴ７プロモーター配列とｆｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ
を合成したし、ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅとＲＮａｓｅ Ｈを使ってＲＮＡを同時に
分解して３’ Ａｄａｐｔｏｒで一本鎖ｃＤＮＡを合成したし、Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌ
ｙｍｅｒａｓｅとアダプタ別プライマーを使って鋳型の役割をする２本鎖ｃＤＮＡを合成
した。その後、ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ（ｃＲＮＡ）はＴ７ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅ
ｒａｓｅを使ってｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ（ＩＶＴ）によって合
成されて増幅されたし、収得されたａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｃＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ ｂｅａｄｓを使って精製したし、逆転写のための鋳型として使ってｓｅｎｓｅ方
向に一本鎖ｃＤＮＡを生成した。その後、ｓｅｎｓｅ ｃＤＮＡを断片化し、ＧｅｎｅＣ
ｈｉｐ ＷＴ Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）
を使ってＴｄＴ（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ ｔｒａｎｓｆ
ｅｒａｓｅ）でビオチンラベリングをした。約５．５μｇのラベリングされたＤＮＡター
ゲットはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒ
ｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行した。
図４と図５は、前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手
続きを図示している。下記の表３は、前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａ
ｙ分析プロトコルを整理したものである。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての皮膚老化バイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図６は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図６の遺伝子整列はｈｅａｔｍａｐ分
析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意味す
るマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ上に
熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析では、
赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現
値が小さくなることを意味する。図６では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と対照
群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて皮膚老化原因のうちコラーゲンや弾力に関連し
た遺伝子を選別したし（図７）、皮膚老化原因のうち障壁機能や水分合成に関連した遺伝
子を選別した（図８）。本発明者らは前記文献調査を通じて皮膚老化に関連したものと確
認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果確認された遺伝子発現に関する数値を前
記図面の表に整理した。
皮膚老化が進行された試験群とそうでない対照群において、ｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実
施することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在してこそ皮膚老
化に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断するために本発明者らはｆｏ
ｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群での測
定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなったかを示す値であり、ｐ－
ｖａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な差を示すかに
対する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得た各サンプルのｎｏｒｍ
ａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図７および図８の表に表示したし、ｆｏｌｄ
ｃｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使って１
：１発現差を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程度を０
から１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を棄却す
ることを意味する。
結果として、コラーゲン／弾力関連皮膚老化遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１
．２倍あるいは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＣ
ＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３およびＰＩＮＫ１であり、皮膚障壁機能／水分合成関連
皮膚老化遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍以上である
かｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＩＶＬ、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ
６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、ＢＧＮ、ＬＣＥ１
Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１ＦおよびＬＣＥ２Ａと確認された。
図９～図１２は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定され
た皮膚老化バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａ
ｐ分析を進行した図面である。図９は５０代以上の試験群５人と２０代の対照群５人を、
図１０は２０代、３０代、４０代および５０代以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の
試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を利用した弾力／コラーゲン関連皮
膚老化バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。図１１は５０代以
上の試験群５人と２０代の対照群５人を、図１２は２０代、３０代、４０代および５０代
以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分
析結果を利用した皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化バイオマーカーの候補の発現を示
すｈｅａｔｍａｐ図面である。
図６の場合と同一に、図９～図１２のｈｅａｔｍａｐ分析も赤色で示すほど遺伝子の発
現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値が小さくなることを意味
する。図９～図１２の実験結果からは、対照群に比べて試験群で文献調査を通じて選別し
た特定遺伝子の発現が赤色で高く示されることを視覚的に確認した。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚老化バイオマーカーの
候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｔ
ｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するた
めに二変量相関分析を施行した。その結果が図１３～図２０に図示される。
図１３と図１４は５０代以上の試験群５人と２０代の対照群５人の、図１５と図１６は
２０代、３０代、４０代および５０代以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の試験対象
者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定されたコラーゲン／弾力関連皮膚老
化バイオマーカーの候補と年齢および人体適用機器測定結果との相関関係を分析した図面
である。
その結果、５０代以上の試験群５人と２０代の対照群５人、総１０人試験対象者のＲＮ
Ａ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＦＮ１、ＧＳＴＡ３およびＰＩＮＫ１遺伝子は、試
験対象者の年齢と統計的に有意義な負の相関関係を示すことを確認したし、ＣＯＬ１Ａ１
、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１およびＰＩＮＫ１遺伝子は目尻のシワを
測定したＰＲＩＭＯＳ装備の測定結果と統計的に有意義な負の相関関係を示し、ＰＩＮＫ
１遺伝子は皮膚弾力を測定したＣｕｔｏｍｅｔｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正
の相関関係を示すことを確認した。図１４には各遺伝子に対する表記が省略されているが
、図１４に関する前記説明は図１４の上段左側から順になされた。すなわち、試験対象者
の年齢と統計的に負の相関関係を示したＦＮ１、ＧＳＴＡ３およびＰＩＮＫ１遺伝子に対
する結果は図１４の最初の列左側から順に、目尻のシワを測定したＰＲＩＭＯＳ装備の測
定結果と統計的に有意義な負の相関関係を示したＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、
ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１およびＰＩＮＫ１遺伝子に対する結果は図１４の中間の列左側から
順に、皮膚弾力を測定したＣｕｔｏｍｅｔｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正の相
関関係を示したＰＩＮＫ１遺伝子は図１４の最後の列に表示された。以下、図１４でのよ
うに、複数個の遺伝子の相関関係を示す散布図で遺伝子表記がグラフから省略されたもの
などについてもこの内容が同一に適用される。すなわち、散布図の左側上段から順に相関
関係を記述することにする。
また、２０代、３０代、４０代および５０代以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の
試験対象者ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＣＯＬ１Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３
およびＰＩＮＫ１遺伝子は、試験対象者の年齢と統計的に有意義な負の相関関係を示すこ
とを確認したし、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３およびＰＩＮＫ１遺伝子は目尻のシワを測定したＰ
ＲＲＭＯＳ装備の測定結果と統計的に有意義な負の相関関係を示し、ＧＳＴＡ３およびＰ
ＩＮＫ１遺伝子は皮膚弾力を測定するＣｕｔｏｍｅｔｅｒ装備の測定結果と正の相関関係
を示すことを確認した。
したがって、試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果と人体適用機器測定
結果を総合的に分析した時、コラーゲン／弾力関連皮膚老化バイオマーカーはＣＯＬ１Ａ
１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１およびＰＩＮＫ１、総６通りの遺伝子
に選定した。
図１７と図１８は５０代以上の試験群５人と２０代の対照群５人の、図１９と図２０は
２０代、３０代、４０代および５０代以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の試験対象
者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚障壁機能／水分含量関連
皮膚老化バイオマーカーの候補と年齢および人体適用機器測定結果との相関関係を分析し
た図面である。
その結果、５０代以上の試験群５人と２０代の対照群５人、総１０人試験対象者のＲＮ
Ａ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＩＶＬ、ＣＥＲＳ６、ＳＰＩＮＫ５およびＫＬＦ４
遺伝子は試験対象者の年齢と有意義な負の相関関係を示すことを確認したし、ＩＶＬ、Ｈ
ＡＳ２およびＨＡＳ３遺伝子は目尻のシワを測定したＰＲＩＭＯＳ装備の測定結果と統計
的に有意義な負の相関関係を示し、ＩＶＬ、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５およびＫＬＦ４遺伝
子は皮膚弾力を測定したＣｕｔｏｍｅｔｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正の相関
関係を示すことを確認した。併せて、ＫＬＦ４遺伝子は水分含量を測定するＣｏｒｎｅｏ
ｍｅｔｅｒ装備の測定結果と正の相関関係を示すことを確認した。
また、２０代、３０代、４０代および５０代以上の各年齢代別に５人ずつ、総２０人の
試験対象者ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＩＶＬ、ＣＥＲＳ６およびＴＧＭ１
遺伝子は試験対象者の年齢と有意義な負の相関関係を示すことを確認したし、ＢＧＮ遺伝
子は目尻のシワを測定したＰＲＩＭＯＳ装備の測定結果と統計的に有意義な負の相関関係
を示し、ＩＶＬ、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５およびＫＬＦ４遺伝子は皮膚弾力を測定するＣ
ｕｔｏｍｅｔｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正の相関関係を示すことを確認した
。併せて、ＣＥＲＳ６およびＫＬＦ４遺伝子は水分含量を測定するＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅ
ｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正の相関関係を示し、ＫＬＦ４遺伝子は経皮水分損
失量を測定するＴｅｗａｍｅｔｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な負の相関関係を示
すことを確認した。
したがって、試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果と人体適用機器測定
結果を総合的に分析した時、皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化バイオマーカーはＩＶ
Ｌ、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧＭ１
、ＳＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２ＡおよびＢ
ＧＮ、総１５通りの遺伝子に選定した。
皮膚老化有効性評価を通じてのコラーゲン／弾力および皮膚障壁機能／水分合成関連皮
膚老化バイオマーカーの選定
前記で選定されたコラーゲン／弾力および皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化バイオ
マーカーが皮膚老化の程度を測定して診断することとともに、実際の皮膚老化と関連する
有効性分または抗老化剤をスクリーニングするか、一般化粧品、機能性化粧品、医療機器
、医薬品などの使用前と後の皮膚老化を評価し、ひいては動物代替実験として使用され得
るかを検証するために皮膚老化有効性評価を施行した。
具体的には、６０代以上の試験対象者２人を対象に４週間トレチノインクリーム（ステ
ィーバＡＲ（丸つき文字Ｒ）クリーム、０．０２５％）を目尻に塗布したし、０週目と４
週目にＰＲＩＭＯＳ装備を利用して高解像度写真撮影（図２１）および目尻のシワの粗さ
を測定したし（表４、図２２）、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ装備を利用して皮膚弾力を測定した
し（表５、図２３）、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ装備を利用して水分含量を測定したし（表
６、図２４）、目尻にマイクロニードルパッチを１５分間付着後皮膚検査対象物を獲得し
てＲＮＡを抽出してＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙを遂行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後皮膚老化有効性評価による遺伝子発現差を
確認するためにＲ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した。その後、文
献調査を通じて選別したコラーゲン／弾力と関連遺伝子と前記で選定されたコラーゲン／
弾力に関連した皮膚老化バイオマーカー（ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴ
Ａ３、ＰＯＮ１およびＰＩＮＫ１）のうち同一の傾向性が確認される遺伝子を選定して図
２５の表に分類したし、文献調査を通じて選別した皮膚障壁機能／水分合成関連遺伝子と
前記で選定された皮膚障壁機能／水分合成に関連した皮膚老化バイオマーカー（ＩＶＬ、
ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧＭ１、Ｓ
ＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２ＡおよびＢＧＮ
）のうち同じパターンを示す遺伝子を選定して図２６の表に分類した。
図２５の表に表示された前記コラーゲン／弾力関連皮膚老化遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃ
ｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下で
ある遺伝子はＧＳＴＡ３であり、図２６の表に表示された皮膚障壁機能／水分合成関連皮
膚老化遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍以上であるか
ｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＬＥＣ１Ａ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２Ａ、Ｌ
ＯＲ、ＡＱＰ３、ＡＱＰ１０、ＢＧＮ、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３と確認された。
図２７と図２８は、前記皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じ
て選別された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析す
るためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する図面である。図２７は皮膚老化有
効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を利用したコラ
ーゲン／弾力関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ
図面であり、図２８は皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーの
候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。
本発明者らは前記皮膚老化有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別
された皮膚老化有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（ＰＲＩＭＯＳ、Ｃｕｔ
ｏｍｅｔｅｒおよびＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二
変量相関分析を施行した。その結果が図２９～図３２に図示される。図２９と図３０は皮
膚老化有効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選
定されたコラーゲン／弾力関連皮膚老化有効性バイオマーカーの候補と人体適用機器測定
結果との相関関係を分析した図面である。その結果、０週目に比べてトレチノインクリー
ムを４週間塗布した後、コラーゲン／弾力関連皮膚老化バイオマーカーであるＣＯＬ４Ａ
４、ＦＮ１およびＰＩＮＫ１遺伝子は目尻のシワを測定したＰＲＩＭＯＳ測定結果と統計
的に有意義な負の相関関係を確認したし、ＣＯＬ４Ａ４およびＭＭＰ８遺伝子は水分含量
を測定したＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ測定結果と正のあるいは負の相関関係を示すことを確
認した。したがって、前記皮膚老化および皮膚老化有効性評価を総合的に分析した時、コ
ラーゲン／弾力関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーは前記皮膚老化バイオマーカー（
ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１およびＰＩＮＫ１）ととも
にＣＯＬ４Ａ４およびＭＭＰ８、総８通りの遺伝子に選定した。また、正確かつ効果的な
皮膚状態の診断の観点で、本発明者（ら）はこれら遺伝子のうちＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３
Ａ１ ＦＮ１およびＰＩＮＫ１をバイオマーカー群に含むように実施することが有利であ
ることを発見した。
図３１と図３２は、皮膚老化有効性評価を進行した試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化有効性バイオマー
カーの候補と人体適用機器測定結果との相関関係を分析した図面である。その結果、０週
目に比べてトレチノインクリームを４週間塗布した後、皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚
老化バイオマーカーであるＡＱＰ３およびＨＡＳ３遺伝子は目尻のシワを測定したＰＲＩ
ＭＯＳ測定結果と統計的に有意義な負の相関関係を確認したし、ＬＣＥ１Ａ、ＡＺＧＰ１
およびＢＧＮ遺伝子は皮膚弾力を測定したＣｕｔｏｍｅｔｅｒ測定結果と正の相関関係を
示し、ＬＣＥ１Ｂ、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３遺伝子は水分含量を測定したＣｏｒｎｅｏｍ
ｅｔｅｒ測定結果と正の相関関係を示すことを確認した。
したがって、前記皮膚老化および皮膚老化有効性評価を総合的に分析した時、皮膚障壁
機能／水分合成関連皮膚老化有効性評価バイオマーカーは前記皮膚老化バイオマーカー（
ＩＶＬ、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧ
Ｍ１、ＳＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２Ａおよ
びＢＧＮ）とＡＺＧＰ１、総１６通りの遺伝子に選定した。また、正確かつ効果的な皮膚
状態の診断の観点で、本発明者（ら）はこれら遺伝子のうちＩＶＬ、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３
、ＢＧＮおよびＡＺＧＰ１をバイオマーカー群に含むように実施することが有利であるこ
とを発見した。
整理すると、コラーゲン／弾力関連皮膚老化バイオマーカーはＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３
Ａ１、ＦＮ１、ＧＳＴＡ３、ＰＯＮ１、ＰＩＮＫ１、ＣＯＬ４Ａ４およびＭＭＰ８に￥、
皮膚障壁機能／水分合成関連皮膚老化バイオマーカーＩＶＬ、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＡＱ
Ｐ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５、ＫＬＦ４、Ｌ
ＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２Ａ、ＢＧＮおよびＡＺＧＰ１に最終選定さ
れた。これを利用して皮膚老化診断方法または診断キット；皮膚老化誘導または抑制物質
および抗老化剤開発とスクリーニング；一人一人に対する皮膚類型情報提供；オーダーメ
ード型化粧品の開発；および動物代替皮膚老化有効性評価に利用され得る。
＜皮膚保湿＞
皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）による試験対象者の分類、専門医の問診、
人体適用機器の評価および皮膚検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価と皮膚科専門医の問診を施行した。また、試験対象者を対象に両頬部位の水分含量、経
皮水分損失量、および皮膚ｐＨを測定した。具体的には、水分含量はＣｏｒｎｅｏｍｅｔ
ｅｒ ＣＭ８２５装備を、経皮水分損失量はＴｅｗａｍｅｔｅｒ ＴＭ３００装備を、皮
膚ｐＨはＳｋｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ ＰＨ９０５装備を利用して測定したし、水分含量は
ａｒｂｉｔａｒｙ ｕｎｉｔ（Ａ．Ｕ．）値を、経皮水分損失量はｇ／ｈ／ｍ２値を、皮
膚ｐＨはｐＨ値を分析した。
試験対象者の皮膚保湿に対する理学的所見は関連文献（Ｉｎｔ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ
．２０１７ Ｙｏｓｈｉｄａ－Ａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ）に基づいて、皮膚科専門医が肉
眼判定を施行した結果である。
表７は全体の試験対象者のうち前記３つの人体適用機器測定結果に基づいて乾燥してい
ない対照群５人、乾燥した試験群５人を分類して皮膚保湿程度を評価した結果を表示する
。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方式で増幅さ
れたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａ
ｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行
した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは図４
および図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実
行した。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３に整
理したものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカーの候補
選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図３３は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図３３の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図３３では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）関
連遺伝子を選別した（図３４）。本発明者らは前記文献調査を通じて皮膚保湿に関連した
ものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験結果確認された遺伝子発現に関する
数値を前記図面の表に整理した。
皮膚保湿程度が良好な対照群とそうでない乾燥した試験群において、ｍｉｃｒｏａｒｒ
ａｙを実施することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在してこ
そ皮膚保湿程度に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断するために本発
明者らはｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは
試験群での測定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなったかを示す値
であり、ｐ－ｖａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な
差を示すかに対する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得た各サンプ
ルのｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図３４の表に表示したし、ｆｏ
ｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使っ
て１：１発現差を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程度
を０から１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を棄
却することを意味する。
結果として、皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）関連遺伝子のうちｆｏｌｄ
ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下
である遺伝子はＣＤＳＮ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、ＫＬＦ４、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１
Ａ、ＬＣＥ２Ａ、ＬＣＥ２Ｂ、ＬＣＥ２Ｃ、ＳＭＰＤ３、ＣＤＨ１、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ
、ＳＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＢＧＮ、ＨＡＳ３、ＴＧＭ１、ＣＬＤＮ７、Ｃ
ＥＲＳ３、ＣＬＤＮ４およびＫＲＴ１と確認された。
図３５～図３８は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定さ
れた皮膚保湿関連バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａ
ｔｍａｐ分析を進行した図面である。図３５は、前記乾燥した対象者試験群５人と乾燥し
ていない対照群５人、総１０人を分析した結果皮膚保湿バイオマーカーの候補の発現を示
すｈｅａｔｍａｐ図面である。図３６はＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ測定結果のみに基づいて
水分含量結果値を区間別に分けて総１５人を分析した結果、皮膚保湿バイオマーカーの候
補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。図３７はＴｅｗａｍｅｔｅｒ測定結果のみに
基づいて経皮水分損失量結果値を区間別に分けて総１５人を分析した結果、皮膚保湿バイ
オマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。図３８はＳｋｉｎ－ｐＨｍｅ
ｔｅｒ測定結果のみに基づいて皮膚ｐＨ結果値を区間別に総１３人を分析した結果、皮膚
保湿バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。
図３３の場合と同一に、図３５～図３８のｈｅａｔｍａｐ分析も赤色で示すほど遺伝子
の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値が小さくなることを
意味する。図３５～図３８の実験結果からは、皮膚保湿が良好な対照群に比べて乾燥した
試験群で文献調査を通じて選別した特定遺伝子の発現が青色で低く示されることを視覚的
に確認した。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚保湿バイオマーカーの
候補と人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、ＴｅｗａｍｅｔｅｒおよびＳｋｉｎ－ｐ
Ｈｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した。その
結果が図３９～図４３に図示される。
図３９は、皮膚保湿バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器との相関関係分析数値
を表示する表である。図４０は、図３９の分析数値を要約した表である。図４１はＣｏｒ
ｎｅｏｍｅｔｅｒ測定値と有意義な相関関係を有する遺伝子の散布図を示す。これから、
ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、ＫＬＦ４、ＣＤＨ１、ＩＴＧＢ４、ＳＰＩＮＫ５、ＴＧＭ１
、ＣＬＤＮ７およびＣＬＤＮ４遺伝子が水分含量（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）と統計的に
有意義な正の相関関係を示すことを確認した。図４２は、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ測定値と有
意義な相関関係を有する遺伝子の散布図を示す。これから、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、
ＫＬＦ４、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＣＤＨ１、ＩＴＧＢ４、ＳＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１
、ＢＧＮ、ＴＧＭ１およびＣＬＤＮ７遺伝子が経皮水分損失量（Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ）と
統計的に有意義な負の相関関係を示すことを確認した。図４３は、Ｓｋｉｎ－ｐＨｍｅｔ
ｅｒ測定値と有意義な相関関係を有する遺伝子の散布図を示す。これから、ＣＤＳＮ、Ｋ
ＬＦ４、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３およびＣＬＤＮ７遺伝子が皮膚ｐＨ（Ｓｋｉｎ
－ｐＨｍｅｔｅｒ）と統計的に有意義な負の相関関係を示すことを確認した。図４４と図
４５は、図３６、図３７および図３８に表示された結果に基づいて皮膚保湿バイオマーカ
ーの候補遺伝子と各人体適用機器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ、Ｓｋ
ｉｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）との相関関係を分析した図面である。その結果、ＳＭＰＤ３、Ｃ
ＤＳＮ、ＫＬＦ４、ＦＬＧ、ＫＲＴ１０、ＣＤＨ１、ＦＬＧ２、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ、Ｓ
ＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＴＧＭ１、ＣＬＤＮ７、ＣＬＤＮ４およびＫＲＴ１
遺伝子が水分含量（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）と統計的に有意義な正の相関関係を示した
し、ＳＭＰＤ３、ＣＤＳＮ、ＫＬＦ４、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＣＤ
Ｈ１、ＦＬＧ２、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ、ＳＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＢＧＮ、
ＴＧＭ１、ＣＬＤＮ７、ＣＥＲＳ３およびＣＬＤＮ４遺伝子が経皮水分損失量（Ｔｅｗａ
ｍｅｔｅｒ）と統計的に有意義な負の相関関係を示したし、ＳＭＰＤ３、ＣＤＳＮ、ＫＬ
Ｆ４、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ２Ｂ、ＬＣＥ１Ａ、ＣＤＨ１、ＦＬＧ２、Ｓ
ＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＴＧＭ１およびＫＲＴ１遺伝子が皮膚ｐＨ（Ｓｋｉ
ｎ－ｐＨｍｅｔｅｒ）と統計的に有意義な負の相関関係を示した。
皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカーの有効性検証およびバイオ
マーカーの候補選別
前述した方式で選定された皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカー
が皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）の程度を評価することとともに、実際の皮
膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）と関連する有効性分あるいは保湿剤をスクリー
ニングするか、一般化粧品、機能性化粧品、医療機器、医薬品などの使用前と後の皮膚保
湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）チョンドを評価し、ひいては動物実験を代替するよ
うに使われ得るかを検証するために皮膚保湿有効性評価を施行した。
具体的には、皮膚保湿剤を１か月以上使用していない皮膚が乾燥した試験対象者（試験
群）１人を対象にｍ２週間ゼロイドインテンシブクリームエムディを顔面に塗布したし、
０週目と２週目にそれぞれ水分含量、経皮水分損失量、皮膚ｐＨを測定したし、測定部位
にマイクロニードルパッチを１５分間付着後皮膚検査対象物を獲得してＲＮＡを採取して
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙを遂行した。試験対象者で０週目に比べてゼロイドインテ
ンシブクリームエムディを２週間塗布した後に皮膚乾燥程度が緩和された。すなわち、水
分含量が増加したし、経皮水分損失量が減少したし、皮膚ｐＨ値が減少した。具体的な測
定結果は下記の表８～表１０および図４６に整理した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後皮膚保湿有効性評価による遺伝子発現差を
確認するためにＲ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した。その後、前
記で選定された皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカーのうち同一の
傾向性が確認される遺伝子を選定して図４７の表に分類した。
図４７の表に表示された皮膚保湿バイオマーカー遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ
が１．２倍あるいは－１．２倍以上である遺伝子はＣＤＳＮ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ
、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ２Ａ、ＬＣＥ２Ｂ、ＬＣＥ２ＣおよびＳＭＰＤ３の１
０通りの遺伝子と確認された。
図４８は、前記皮膚保湿有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別さ
れた皮膚保湿有効性評価バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するために
グラフ化した図面である。
最終的に、皮膚保湿（水分含有／水分損失／皮膚ｐＨ）バイオマーカーはＣＤＳＮ、Ｆ
ＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、ＫＬＦ４、ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ２Ａ、ＬＣＥ２Ｂ
、ＬＣＥ２Ｃ、ＳＭＰＤ３、ＣＤＨ１、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ、ＳＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１
、ＡＱＰ３、ＢＧＮ、ＨＡＳ３、ＴＧＭ１、ＣＬＤＮ７、ＣＥＲＳ３、ＣＬＤＮ４および
ＫＲＴ１に選定された。また、正確かつ効果的な皮膚状態の診断の観点で、本発明者（ら
）はこれら遺伝子のうちＦＬＧ、ＡＱＰ３およびＬＯＲをバイオマーカー群に含むように
実施することが有利であることを発見した。
以上の本発明者らの研究結果は、皮膚保湿程度評価方法または評価キットの開発、皮膚
保湿誘導または抑制物質の開発とスクリーニング、一人一人に対する皮膚類型情報提供、
オーダーメード型化粧品の開発および動物実験代替皮膚保湿有効性評価において非常に有
用なツールを提供できるものと期待される。
＜皮膚色素沈着＞
皮膚色素沈着による試験対象者の分類、専門医の問診、人体適用機器の評価および皮膚
検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、人体適用機器を利用して皮膚色とメラニンを
測定した。具体的には、皮膚色はＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ装備を、メラニン
はＭｅｘａｍｅｔｅｒ装備を利用して測定したし、皮膚色はＩＴＡ°値を、メラニンはｍ
ｅｌａｎｉｎ ｉｎｄｅｘ値を分析した。
試験対象者の皮膚色に対する理学的所見はＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ ｓｃａｌｅに基づ
いて皮膚科専門医が肉眼判定を進行した。
表１１は全体の試験対象者試験群と対照群を分けた基準を整理している。試験群は全体
の試験対象者のうちＩＴＡ°値が２８以下であるＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ ｔｙｐｅ Ｖ
であり皮膚色が暗い人々で構成された。対照群は全体の試験対象者のうちＩＴＡ°値が４
１以上であるＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ ｔｙｐｅ ＩＩであり皮膚色が明るい人々で構成
された。このような試験群／対照群選定後に人体適用機器を通じて皮膚色素沈着を評価し
た。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方法により増
幅されたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ
（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを
実行した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは
図４および図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙ
を実行した。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３
に整理したものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての皮膚色素沈着バイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図４９は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図４９の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図４９では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて皮膚色素沈着およびｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉ
ｓメカニズムに関連した遺伝子を選別した（図５０）。本発明者らは前記文献調査を通じ
て皮膚色素沈着に関連したものと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を実施し
た。その結果確認された遺伝子発現に関する数値を図５０の表に整理した。
皮膚色素沈着程度が激しい試験群とそうでない対照群において、ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ
を実施することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在してこそ皮
膚色素沈着程度に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断するために本発
明者らはｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは
試験群での測定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなったかを示す値
であり、ｐ－ｖａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な
差を示すかに対する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得た各サンプ
ルのｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図５０の表に表示したし、ｆｏ
ｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使っ
て１：１発現差を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程度
を０から１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を棄
却することを意味する。
結果として、皮膚色素沈着関連遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるい
は－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＣＡＴ、ＣＬＵ
、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、
ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１と確認された。
図５１と図５２は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定さ
れた皮膚色素沈着バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａ
ｔｍａｐ分析を進行した結果を示す。図５１は、ＩＴＡ°値が２８以下である試験群５人
とＩＴＡ°値が４１以上である対照群５人、総１０人に対するｈｅａｔｍａｐ分析結果図
面である。図５２は、ＩＴＡ°２８以下５人、ＩＴＡ°２９～４０ ７人、ＩＴＡ°４１
以上７人、総１９人の試験対象者選定後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を利用
した皮膚色素沈着バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。
図４９の場合と同一に、図５１および図５２のｈｅａｔｍａｐ分析も赤色で示すほど遺
伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値が小さくなるこ
とを意味する。図５１および図５２の実験結果からは、対照群に比べて試験群で文献調査
を通じて選別した特定遺伝子の発現が赤色で高く示されることを視覚的に確認した。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着関連バイオマ
ーカーの候補であるＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、Ｇ
ＳＴＰ１、ＭＣ２Ｒ、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよび
ＴＹＲＰ１遺伝子と人体適用機器（ＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａ
ｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した。その結
果が図５３～図５８に図示される。
図５３～図５５は、ＩＴＡ°値が２８以下である試験群５人とＩＴＡ°値が４１以上で
ある対照群５人の総１０人の試験対象者選定後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通
じて選定された皮膚色素沈着バイオマーカーの候補と人体適用機器測定結果との相関関係
を分析した結果を図示する。図５６～図５８は、ＩＴＡ°２８以下５人、ＩＴＡ°２９～
４０ ７人、ＩＴＡ°４１以上７人、総１９人の試験対象者選定後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏ
ａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚色素沈着バイオマーカーの候補と人体適用機器測
定結果との相関関係を分析した結果を図示する。
その結果、ＩＴＡ°値が２８以下である試験群５人とＩＴＡ°値が４１以上である対照
群５人、総１０人試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＣＡＴ、ＣＬＵ
、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＳＯＸ１０
、ＴＦＡＰ２ＡおよびＴＹＲ遺伝子は皮膚色を測定したＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔ
ｅｒ装備の測定結果と統計的に有意義な正のあるいは負の相関関係を示し、ＣＡＴ、ＣＬ
Ｕ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３
およびＳＯＸ１０遺伝子は目尻のメラニンを測定したＭｅｘａｍｅｔｅｒ装備と統計的に
有意義な負のあるいは正の相関関係を示すことを確認した。
また、ＩＴＡ°２８以下５人、ＩＴＡ°２９～４０ ７人、ＩＴＡ°４１以上７人、総
１９人の試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ
１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１
０およびＴＹＲ遺伝子は皮膚色を測定したＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ装備の測
定結果と統計的に有意義な正のあるいは負の相関関係を示し、ＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１
、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０
およびＴＹＲＰ１遺伝子は目尻のメラニンを測定したＭｅｘａｍｅｔｅｒ装備と統計的に
有意義な負のあるいは正の相関関係を示すことを確認した。
したがって、試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果と人体適用機器測定
結果を総合的に分析した時、皮膚色素沈着バイオマーカーはＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、
ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、
ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１、総１３通りの遺伝子に選定した。
皮膚美白有効性評価を通じての皮膚色素沈着バイオマーカーの選定
前述した方式で選定された皮膚色素沈着バイオマーカーが皮膚の色素の程度を測定して
診断することとともに、実際の皮膚色素沈着または美白と関連する有効性分あるいは美白
剤をスクリーニングするか、一般化粧品、機能性化粧品、医療機器、医薬品などの使用前
と後の皮膚色素沈着あるいは美白を評価し、ひいては動物代替実験として使用され得るか
を検証するために皮膚美白有効性評価を施行した。
具体的には、目尻に兆しがある試験対象者２人を対象に２週間トリルストラクリーム（
韓国コルマー）を目尻に塗布したし、０週目と２週目にＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔ
ｅｒ装備を利用して皮膚色を測定し（表１２、図５９）、Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ装備を利用
して目尻のメラニンを測定したし（表１３、図６０）、目尻にマイクロニードルパッチを
１５分間付着後皮膚検査対象物を獲得し、ＲＮＡを採取してＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａ
ｙを遂行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後皮膚美白有効性評価による遺伝子発現差を
確認するためにＲ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した。その後、文
献調査を通じて選別した皮膚色素沈着またはｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ関連遺伝子と前
述した方式で選定された皮膚色素沈着関連バイオマーカー（ＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、
ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、
ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１）のうち同一の傾向性が確認される遺伝子を選定
して分類した。図６１はその分類結果に対する表であり、皮膚美白有効性バイオマーカー
の候補を羅列している。
文献調査を通じて選別した皮膚色素沈着またはｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ関連遺伝子
と前記皮膚色素沈着遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍
以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＭＣ１Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、ＣＬ
ＤＮ１、ＤＳＧ１およびＧＳＴＰ１と確認された。
図６２は、前記皮膚美白有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選別さ
れた皮膚美白有効性評価バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するために
ｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する。
本発明者らは前述したような皮膚美白有効性評価ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を
通じて選別された皮膚美白有効性評価バイオマーカーの候補と人体適用機器（Ｓｐｅｃｔ
ｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒおよびＭｅｘａｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認する
ために二変量相関分析を施行した。図６３と図６４は、皮膚美白有効性評価を進行した試
験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚美白有効性バイオ
マーカーの候補と人体適用機器測定結果との相関関係を分析した結果を図示する。図６３
と図６４の実験結果を参照すると、０週目に比べてトリルストラクリーム（トレチノイン
、ハイドロキノン、ステロイド複合剤）を２週間塗布した後、ＴＦＡＰ２ＡおよびＴＹＲ
Ｐ１遺伝子は皮膚色を測定したＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ測定結果と統計的に
有意義な負の相関関係があることが分かる。また、ＴＦＡＰ２Ａ遺伝子は目尻のメラニン
を測定するＭｅｘａｍｅｔｅｒ測定結果と正の相関関係があることが分かる。
前述したような本発明者らが遂行した皮膚色素沈着および皮膚美白有効性評価実験結果
を総合的に分析した時、皮膚色素沈着バイオマーカーを最も広い範囲で取る場合、ＣＡＴ
、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＸ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、Ｐ
ＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１、ＭＣ１Ｒ、Ｆ２ＲＬ１および
ＣＬＤＮ１、総１６通りの遺伝子を選定することができる。また、正確かつ効果的な皮膚
状態の診断の観点で、本発明者（ら）はこれら遺伝子のうちＭＬＡＮＡ、ＴＹＲＰ１およ
びＧＰＮＭＢをバイオマーカー群に含むように実施することが有利であることを発見した
。
このような選定結果を活用すると、前記１６通りのＲＮＡ遺伝子のうちいずれか一つま
たは二つ以上の遺伝子をバイオマーカーにして皮膚色素沈着または皮膚美白程度の評価を
定量的に遂行できるであろう。ひいては、以上の本発明者らの研究結果は、皮膚色素沈着
程度評価方法または評価キットの開発、皮膚色素沈着誘導または抑制物質の開発とスクリ
ーニング、一人一人に対する皮膚類型情報提供、オーダーメード型化粧品の開発および動
物実験代替皮膚色素沈着有効性評価において非常に有用なツールを提供できるものと期待
される。
＜皮膚油分＞
皮膚油分による試験対象者の分類、専門医の問診、人体適用機器の評価および皮膚検査
対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、両鼻翼部位の皮膚油分を測定した。具体的に
は、Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ ＳＭ８１５装備を利用して測定したし、μｇ／ｃｍ２値を分析
した。
試験対象者の皮膚油分に対する理学的所見は関連文献（Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｌ Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１７ Ｈｏｍｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ）に基づいて、皮膚科専門医
の肉眼判定によって提供された。
表１４は全体の試験対象者のうち皮膚油分が少ない対照群５人、皮膚油分が多い試験群
５人を分類して皮膚油分を評価した結果を整理したのである。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方法で増幅さ
れたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａ
ｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行
した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは図４
と図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行し
た。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３に整理し
たものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての皮膚油分バイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図６５は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図６５の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図６５では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて皮膚油分に関連した遺伝子を選別した（図６６
）。本発明者らは前記文献調査を通じて皮膚油分に関連したものと確認された遺伝子のｍ
ｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を実施した。その結果確認された遺伝子発現に関する数値を図６
６の表に整理した。
皮膚油分程度が高い試験群とそうでない対照群において、ｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実施
することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在してこそ皮膚油分
に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断するために本発明者らはｆｏｌ
ｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群での測定
数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなったかを示す値であり、ｐ－ｖ
ａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な差を示すかに対
する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得た各サンプルのｎｏｒｍａ
ｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図６６の表に表示したし、ｆｏｌｄ ｃｈａｎ
ｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使って１：１発現差
を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程度を０から１の間
の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を棄却することを意
味する。
結果として、皮膚油分関連遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍あるいは－
１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＭＦＡＰ２、ＩＧＦ
１、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＧＰＡＭ、ＣＰＴ１Ｃ、ＡＲ、ＭＰＺＬ３、ＡＱＰ３、ＳＲＥＢＦ
２およびＨＳＤ１７Ｂ２と確認された。
図６７は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚
油分バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析
を進行した結果を示す。図６５の場合と同一に、図６７のｈｅａｔｍａｐ分析結果でも赤
色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値
が小さくなることを意味する。図６７の結果からは対照群に比べて試験群で文献調査を通
じて選別した特定遺伝子の発現が赤色で高く示されるか青色で低く示されることを視覚的
に確認した。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された皮膚油分関連バイオマーカ
ーの候補であるＭＦＡＰ２、ＩＧＦ１、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＧＰＡＭ、ＣＰＴ１Ｃ、ＡＲ、
ＭＰＺＬ３、ＡＱＰ３、ＳＲＥＢＦ２およびＨＳＤ１７Ｂ２遺伝子と人体適用機器（Ｓｅ
ｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した。そ
の結果が図６８および図６９に図示される。
本発明者らは図６８および図６９に関連した二変量相関分析実験結果、ＭＦＡＰ２、Ｇ
ＰＡＭおよびＩＧＦ１遺伝子が皮膚油分量（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒによる測定値）と統計的
に有意義な正の相関関係を示し、ＭＰＺＬ３およびＡＱＰ３遺伝子が皮膚油分量（（Ｓｅ
ｂｕｍｅｔｅｒによる測定値）と統計的に有意義な負の相関関係を示すことを確認した。
前述したような本発明者らが遂行した皮膚油分評価実験結果を総合的に分析した時、皮
膚油分バイオマーカーを最も広い範囲で取る場合、ＭＦＡＰ２、ＡＱＰ３、ＳＲＥＢＦ２
、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＧＰＡＭ、ＣＰＴ１Ｃ、ＡＲ、ＩＧＦ１、ＨＳＤ１１Ｂ１およびＭＰ
ＺＬ３、総１０通りの遺伝子を選定することができる。また、正確かつ効果的な皮膚状態
の診断の観点で、本発明者（ら）はこれら遺伝子のうちＭＰＺＬ３、ＧＰＡＭおよびＩＧ
Ｆ１をバイオマーカー群に含むように実施することが有利であることを発見した。
このような選定結果を活用すると、前記１０通りのＲＮＡ遺伝子のうちいずれか一つま
たは二つ以上の遺伝子をバイオマーカーにして皮膚油分程度の評価を定量的に遂行できる
であろう。ひいては、以上の本発明者らの研究結果は、皮膚油分評価方法または評価キッ
トの開発、皮膚油分誘導または抑制物質の開発とスクリーニング、一人一人に対する皮膚
類型情報提供、オーダーメード型化粧品の開発および動物実験代替皮膚油分有効性評価に
おいて非常に有用なツールを提供できるものと期待される。
＜紅潮性敏感皮膚＞
紅潮性敏感皮膚による試験対象者の分類、専門医の問診、人体適用機器の評価、ｌａｃ
ｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔおよび皮膚検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、両頬部位を人体適用機器で測定したし、ｌａ
ｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔを通じて主観的刺激敏感を評価した。
具体的にＭｅｘａｍｅｔｅｒ ＭＸ１８装備を利用して紅斑量を測定したし、ＥＩ（Ｅ
ｒｙｔｈｅｍａ ｉｎｄｅｘ）値を分析した。また、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅ
ｒ（ＣＭ－７００ｄ）装備を利用して皮膚赤色配る測定したし、ａ＊ ｖａｌｕｅ値を分
析した。また、Ｆｒｏｓｃｈ ＆ Ｋｌｉｇｍａｎ ｍｅｔｈｏｄ（１９７７）による「
５％ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ」を通じて主観的刺激敏感を評価
した。Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ（５％）とＤＷをそれぞれ５０μｌずつ両側の鼻唇溝（ｎ
ａｓｏｌａｂｉａｌ ｆｏｌｄ）に分注して０分、２．５分、５分、８分ごとにヒリヒリ
感、火照り、かゆみをその強度により４ ｐｏｉｎｔ ｓｃａｌｅ（０；ｎｏ ｓｔｉｎ
ｇ、１；ｓｌｉｇｈｔ ｓｔｉｎｇ、２；ｍｏｄｅｒａｔｅ ｓｔｉｎｇ、３；ｓｅｖｅ
ｒｅ ｓｔｉｎｇ）で試験対象者が直接評価するようにした。刺激感の強度を数値化した
値が高いほど敏感であることを意味し、本試験ではＬａｃｔｉｃ ａｃｉｄ（５％）とＤ
Ｗの差値を取って分析したし、計算式は次の通りである。
Ｓｃｏｒｅ＝（総Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ値－総ＤＷ値）／１２（４区間＊３項目）
表１５には全体の試験対象者のうち紅斑量と赤色度が低く主観的刺激敏感がない対照群
５人、紅斑量と赤色度が高く主観的刺激敏感がない試験群５人を分類した結果が整理され
る。
また、マイクロ構造体パッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方法で増幅さ
れたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａ
ｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行
した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは図４
および図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実
行した。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３に整
理したものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての紅潮性敏感皮膚バイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図７０は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図７０の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図７０では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて紅潮性敏感皮膚に関連した遺伝子を選別した（
図７１）。本発明者らは前記文献調査を通じて紅潮性敏感皮膚に関連したものと確認され
た遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を実施した。その結果確認された遺伝子発現に関す
る数値を図７１の表に整理した。
紅潮性敏感度が高い試験群とそうでない対照群において、ｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実施
することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在してこそ紅潮性敏
感皮膚に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断するために本発明者らは
ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群で
の測定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなったかを示す値であり、
ｐ－ｖａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な差を示す
かに対する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得た各サンプルのｎｏ
ｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図７１の表に表示したし、ｆｏｌｄ ｃ
ｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使って１：１
発現差を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程度を０から
１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を棄却するこ
とを意味する。
結果として、紅潮性敏感皮膚関連遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２倍ある
いは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＣＯＬ３Ａ１
、ＴＡＣ１、ＫＬＫ５、ＣＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＴＲＰＡ１、ＩＬ１３ＲＡ１、ＨＳＤ３Ｂ
１、ＣＸＣＲ４、ＡＮＧＰＴ２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＲ５およびＰＳＭＢ９と確認された
。
図７２は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮
性敏感皮膚バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａ
ｐ分析を進行した結果を示す。図７０の場合と同一に、図７２のｈｅａｔｍａｐ分析結果
でも赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の
発現値が小さくなることを意味する。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された紅潮性敏感皮膚関連バイオ
マーカーの候補であるＣＯＬ３Ａ１、ＴＡＣ１、ＫＬＫ５、ＣＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＴＲＰ
Ａ１、ＩＬ１３ＲＡ１、ＨＳＤ３Ｂ１、ＣＸＣＲ４、ＡＮＧＰＴ２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣ
Ｒ５およびＰＳＭＢ９遺伝子と人体適用機器（Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈ
ｏｔｏｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を確認するために二変量相関分析を施行した。
その結果が図７３～図７５に図示される。
図７３は、紅潮性敏感皮膚バイオマーカーの候補遺伝子と人体適用機器との相関関係数
値を整理した表である。
図７４は、Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ測定値と有意義な相関関係を有する遺伝子の散布図を図
示する。図７４の結果から分かるように、ＴＡＣ１、ＣＡＭＰおよびＭＭＰ９遺伝子が皮
膚紅斑量（Ｍｅｘａｍｅｔｅｒ）と統計的に有意義な正の相関関係を示すことを確認した
。
図７５は、Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ測定値と有意義な相関関係を有する遺
伝子の散布図を図示する。図７５の結果から分かるように、ＴＡＣ１、ＭＭＰ９およびＡ
ＮＧＰＴ２遺伝子が皮膚赤色度（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ、ａ＊ ｖａｌｕ
ｅ）と統計的に有意義な正の相関関係を示すことを確認した。
前述したような本発明者らが遂行した紅潮性敏感皮膚評価実験結果を総合的に分析した
時、紅潮性敏感皮膚バイオマーカーを最も広い範囲で取る場合、ＣＯＬ３Ａ１、ＴＡＣ１
、ＫＬＫ５、ＣＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＴＲＰＡ１、ＩＬ１３ＲＡ１、ＨＳＤ３Ｂ１、ＣＸＣ
Ｒ４、ＡＮＧＰＴ２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＲ５およびＰＳＭＢ９、総１３通りの遺伝子を
選定することができる。また、正確かつ効果的な皮膚状態の診断の観点で、本発明者（ら
）はこれら遺伝子のうちＭＭＰ９、ＴＡＣ１およびＣＡＭＰをバイオマーカー群に含むよ
うに実施することが有利であることを発見した。
このような選定結果を活用すると、前記１３通りのＲＮＡ遺伝子のうちいずれか一つま
たは二つ以上の遺伝子をバイオマーカーにして紅潮性敏感皮膚の評価を定量的に遂行でき
るであろう。ひいては、以上の本発明者らの研究結果は、紅潮性敏感皮膚評価方法または
評価キットの開発、紅潮性敏感皮膚誘導または抑制物質の開発とスクリーニング、一人一
人に対する皮膚類型情報提供、オーダーメード型化粧品の開発および動物実験代替紅潮性
敏感皮膚有効性評価において非常に有用なツールを提供できるものと期待される。
＜刺激性敏感皮膚＞
主観的刺激性敏感皮膚による試験対象者の分類、専門医の問診、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉ
ｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔおよび皮膚検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄを利用した主観的刺
激性敏感皮膚の程度評価を施行した。
具体的には、敏感度はＦｒｏｓｃｈ ＆ Ｋｌｉｇｍａｎ ｍｅｔｈｏｄ（１９７７）
による「５％ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ（乳酸刺し傷検査）」を
通じて評価した。図７６は、乳酸刺し傷検査を図示した図面である。Ｌａｃｔｉｃ ａｃ
ｉｄ（５％）とＤＷをそれぞれ５０μｌずつ両側の鼻唇溝（ｎａｓｏｌａｂｉａｌ ｆｏ
ｌｄ）に分注して０分、２．５分、５分、８分ごとにヒリヒリ感、火照り、かゆみをその
強度により４ ｐｏｉｎｔ ｓｃａｌｅ（０；ｎｏ ｓｔｉｎｇ、１；ｓｌｉｇｈｔ ｓ
ｔｉｎｇ、２；ｍｏｄｅｒａｔｅ ｓｔｉｎｇ、３；ｓｅｖｅｒｅ ｓｔｉｎｇ）で試験
対象者が直接評価するようにした。刺激感の強度を数値化した値が高いほど敏感であるこ
とを意味し、本試験ではｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ（５％）とＤＷの差値を取って分析した
し、計算式は次の通りである。
Ｓｃｏｒｅ＝（総Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ値－総ＤＷ値）／１２（４区間＊３項目）
表１６には全体の試験対象者のうちｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点
数が０．５以上である主観的刺激性敏感皮膚がある試験対象者（試験群）と点数が０点で
ある主観的刺激性敏感皮膚がない試験対象者（対照群）を選定した結果を整理した。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方法で増幅さ
れたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａ
ｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行
した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは図４
および図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実
行した。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３に整
理したものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じての主観的刺激性敏感皮膚バイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図７７は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図７７の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図７７では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて主観的刺激性敏感皮膚に関連した遺伝子を選別
した（図７８）。本発明者らは前記文献調査を通じて主観的刺激性敏感皮膚に関連したも
のと確認された遺伝子のｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を実施した。その結果確認された遺伝
子発現に関する数値を図７８の表に整理した。
主観的刺激性敏感皮膚程度が高い試験群とそうでない対照群において、ｍｉｃｒｏａｒ
ｒａｙを実施することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別性が存在して
こそ主観的刺激性敏感皮膚に関するバイオマーカーとして有用であろう。これを判断する
ために本発明者らはｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏｌｄ ｃｈ
ａｎｇｅは試験群での測定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高くまたは低くなった
かを示す値であり、ｐ－ｖａｌｕｅは統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的
に有意義な差を示すかに対する値である。ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験を通じて得
た各サンプルのｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値（発現値）を図８の表に表示した
し、ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ
値を使って１：１発現差を計算した値である。ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立
する程度を０から１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無
仮説を棄却することを意味する。
結果として、主観的刺激性敏感皮膚関連遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅが１．２
倍あるいは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である遺伝子はＩＶＬ
、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＰＧＦ、ＣＹＲ６１、ＨＬＡ－Ｂ、ＩＧＨＡ１、ＭＭＰ３
、ＲＢＰ４およびＧ０Ｓ２と確認された。
図７９と図８０は、前述したようなＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定さ
れた主観的刺激性敏感皮膚バイオマーカーの候補の発現程度を視覚的に比較分析するため
にｈｅａｔｍａｐ分析を進行した図面である。図７９は、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔ
ｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０．５点以上である試験群５人と０点である対照群５人、総１０
人の試験対象者を選定した後ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果を利用した主観的刺
激性敏感皮膚バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。図８０は、
全体の試験対象者３３人をｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数別に分類
した後、各点数別ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ平均値を利用した主観的刺激性敏感皮膚
バイオマーカーの候補の発現を示すｈｅａｔｍａｐ図面である。図７７の場合と同一に、
図７９および図８０のｈｅａｔｍａｐ分析結果でも赤色で示すほど遺伝子の発現値が大き
くなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値が小さくなることを意味する。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された主観的刺激性敏感皮膚関連
バイオマーカーの候補であるＩＶＬ、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＰＧＦ、ＣＹＲ６１、
ＨＬＡ－Ｂ、ＩＧＨＡ１、ＭＭＰ３、ＲＢＰ４およびＧ０Ｓ２遺伝子とそれぞれのｌａｃ
ｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数との相関関係を確認するために二変量相関
分析を施行した。その結果が図８１～図８４に図示される。
その結果、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０．５点以上である
主観的刺激がある試験群５人と点数が０点である主観的刺激がない対照群５人、総１０人
試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析結果のＣＹＲ６１、ＲＢＰ４およびＰＧ
Ｆ遺伝子はｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ ｓｃｏｒｅと統計的に有意
義な正のあるいは負の相関関係を示し、全体３３人試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒ
ｒａｙ分析結果のＬＯＲ、ＰＴＧＳ２、ＰＧＦおよびＨＬＡ－Ｂ遺伝子はｌａｃｔｉｃ
ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ ｓｃｏｒｅと統計的に有意義な負のあるいは正の相関
関係を示すことを確認した。したがって、試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分
析結果とｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔを総合的に分析した時、本発明
者らは主観的刺激性敏感皮膚バイオマーカーとしてＩＶＬ、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、
ＰＧＦ、ＣＹＲ６１、ＨＬＡ－Ｂ、ＩＧＨＡ１、ＭＭＰ３、ＲＢＰ４およびＧ０Ｓ２、総
１１通りの遺伝子を選定した。また、正確かつ効果的な皮膚状態の診断の観点で、本発明
者（ら）はこれら遺伝子のうちＰＧＦ、ＲＢＰ４およびＣＹＲ６１をバイオマーカー群に
含むように実施することが有利であることを発見した。
このような選定結果を活用すると、前記１１通りのＲＮＡ遺伝子のうちいずれか一つま
たは二つ以上の遺伝子をバイオマーカーにして主観的刺激性敏感皮膚程度の評価を定量的
に遂行できるであろう。ひいては、以上の本発明者らの研究結果は、主観的刺激性敏感皮
膚評価方法または評価キットの開発、主観的刺激性敏感皮膚誘導または抑制物質の開発と
スクリーニング、一人一人に対する皮膚類型情報提供、オーダーメード型化粧品の開発お
よび動物実験代替主観的刺激性敏感皮膚有効性評価において非常に有用なツールを提供で
きるものと期待される。
＜化粧品ニキビ＞
化粧品ニキビ程度による試験対象者の分類、専門医の問診、人体適用機器の評価、ｌａ
ｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔおよび皮膚検査対象物の採取
洗顔後３０分の間恒温および除湿条件で待機した後、試験対象者を対象にアンケート評
価および皮膚科専門医の問診を施行したし、人体適用機器を利用して皮膚油分量を測定し
たし、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔを通じて皮膚刺激敏感度を評価し
た。
具体的には、皮膚油分量は両鼻翼部位に対してＳｅｂｕｍｅｔｅｒ ＳＭ８１５装備を
利用して測定したし、μｇ／ｃｍ２値を分析した。敏感度はＦｒｏｓｃｈ ＆ Ｋｌｉｇ
ｍａｎ ｍｅｔｈｏｄ（１９７７）による「５％ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ
ｔｅｓｔ」を通じて評価した。Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ（５％）とＤＷをそれぞれ５０
μｌずつ両側の鼻唇溝（ｎａｓｏｌａｂｉａｌ ｆｏｌｄ）に分注して０分、２．５分、
５分、８分ごとにヒリヒリ感、火照り、かゆみをその強度により４ ｐｏｉｎｔ ｓｃａ
ｌｅ（０；ｎｏ ｓｔｉｎｇ、１；ｓｌｉｇｈｔ ｓｔｉｎｇ、２；ｍｏｄｅｒａｔｅ
ｓｔｉｎｇ、３；ｓｅｖｅｒｅ ｓｔｉｎｇ）で試験対象者が直接評価するようにした。
刺激感の強度を数値化した値が高いほど敏感であることを意味し、本試験ではＬａｃｔｉ
ｃ ａｃｉｄ（５％）とＤＷの差値を取って分析したし、計算式は次の通りである。
Ｓｃｏｒｅ＝（総Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ値－総ＤＷ値）／１２（４区間＊３項目）
試験対象者の化粧品ニキビに対する理学的所見は関連文献（韓国型ニキビ重症度システム
、大韓民国皮膚科学会誌：第２４冊第１０号２００４年）に基づいて、皮膚油分に対する
理学的所見は関連文献（Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１７ Ｈ
ｏｍｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ）に基づいて、皮膚科専門医が肉眼判定施行後提供した。
全体の試験対象者のうち専門の肉眼判定を通じて化粧品ニキビがある試験対象者（試験
群）と化粧品ニキビがなくｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０．５
点以下である試験対象者（対照群）を選定したし、このような試験群および対照群関連具
体的な事項は下記の表１７に整理した。
また、マイクロニードルパッチを顔面に１５分の間付着後皮膚検査対象物を採取した。
皮膚検査対象物からＲＮＡ採取
試験対象者から獲得した皮膚検査対象物をＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ
（Ｑｉａｇｅｎ）に提供したし、前記Ｋｉｔを利用して高純度のＲＮＡを抽出した。その
後、ＮａｎｏＤｒｏｐ装備と２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装備を利用してＲＮＡサ
ンプルのＱＣ（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ）を確認した後、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａ
ｒｒａｙ分析を施行した。
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析
前述した方法で分離したＲＮＡは少量（１００ｐｇ）の全ＲＮＡをｃＲＮＡで増幅する
方法であるＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｉｃｏ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）を使って、試料に柔軟で感度の高い前処理を施行した。前述した方法で増幅さ
れたＲＮＡはＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙ（Ａ
ｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）プラットホームのマニュアルに沿ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実行
した。前記プラットホームのマニュアルに紹介されたｍｉｃｒｏａｒｒａｙ手続きは図４
および図５に図示したことがある。本発明者らは同一手続きでｍｉｃｒｏａｒｒａｙを実
行した。前記プラットホームのＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析プロトコルは表３に整
理したものと同一である。
その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｐｏｗｅｒ Ｔｏｏｌｓ（ＡＰＴ）のＲｏｂｕｓｔ
Ｍｕｌｔｉ－Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）方法を通じて全体のデータを要約および正規化し
たし、遺伝子水準で結果を整理してＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
Ｇｅｎｅ（ＤＥＧ）分析を遂行した。データの統計的有意性は独立的ｔ－ｔｅｓｔとｆ
ｏｌｄ ｃｈａｎｇｅの変化を利用して分析したし、Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（ＦＤＲ）はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇアルゴリズムを使ってｐ値
を調整したし、ＤＥＧセットはｌｉｎｋａｇｅとＥｕｃｌｉｄｅａｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ
を使ってＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ分析を遂行した。また、遺伝子発現
の差を確認するためのすべてのデータ分析と視角化作業はＲ ４．０．０プログラムを使
って遂行した。
生物情報学分析（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ）および有意的相
関関係分析を通じてのニキビバイオマーカーの候補選別
ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ試験の進行後、試験群と対照群の約４万通り余りの遺伝
子発現差を確認するために、Ｒ ４．０．０プログラムを利用して遺伝子整列を実施した
。図８５は、遺伝子整列結果を図示する図面である。図８５の遺伝子整列はｈｅａｔｍａ
ｐ分析とも呼ばれる。Ｈｅａｔｍａｐ分析は熱を意味するヒート（ｈｅａｔ）と地図を意
味するマップ（ｍａｐ）を結合させた用語であり、色で表現できる多様な情報をイメージ
上に熱分布形態の図面で示す分析方法である。本明細書に記載したｈｅａｔｍａｐ分析で
は赤色で示すほど遺伝子の発現値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発
現値が小さくなることを意味する。図８５では数百通りの遺伝子を分析した時、試験群と
対照群で多数の遺伝子の発現値が特異的に差があることを確認した。
その後、本発明者らは文献調査を通じて化粧品ニキビに関連した遺伝子を選別した。本
発明者らは前記文献調査を通じて化粧品ニキビに関連したものと確認された遺伝子のｍｉ
ｃｒｏａｒｒａｙ試験結果確認された遺伝子発現に関する数値を図８６の表に整理した。
化粧品ニキビの活性度が高い試験群と化粧品ニキビの活性度が低い対照群において、ｍ
ｉｃｒｏａｒｒａｙを実施することによって得られた遺伝子発現に関する数値の値に差別
性が存在してこそ化粧品ニキビの予測に関するバイオマーカーとして有用であろう。これ
を判断するために本発明者らはｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅとｐ－ｖａｌｕｅを使った。Ｆｏ
ｌｄ ｃｈａｎｇｅは試験群と対照群間のｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌ値を使っ
て１：１発現差を計算した値で試験群での測定数値が対照群での測定数値に比べて何倍高
くまたは低くなったかを示す値であり、ｐ－ｖａｌｕｅはデータが帰無仮説と両立する程
度を０から１の間の値で表現したものであり、大体０．０５より小さい場合に帰無仮説を
棄却することを意味し、統計処理において試験群と対照群の間の値が統計的に有意義な差
を示すかに対する値である。
結果として、図８６の表に表示された化粧品ニキビ関連遺伝子のうちｆｏｌｄ ｃｈａ
ｎｇｅが１．２倍あるいは－１．２倍以上であるかｐ－ｖａｌｕｅが０．０５以下である
遺伝子はＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣＲ１、ＡＫＲ１Ｂ１０、ＴＨＹ１およびＩＬ－６と
確認された。
図８７は、皮膚科専門医の理学的所見を通じて化粧品ニキビの活性度が高い試験群５人
と化粧品ニキビの活性度が低くｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０
．５点以下である対照群５人、総１０人の試験対象者を選定した後、前記ＲＮＡ ｍｉｃ
ｒｏａｒｒａｙ分析結果を通じて選定された化粧品ニキビバイオマーカーの候補の発現程
度を視覚的に比較分析するためにｈｅａｔｍａｐ分析を進行した結果を図示する図面であ
る。図８４の場合と同一に、図８７のｈｅａｔｍａｐ分析も赤色で示すほど遺伝子の発現
値が大きくなることを意味し、青色で示すほど遺伝子の発現値が小さくなることを意味す
る。図８７の実験結果からは、対照群に比べて試験群で文献調査を通じて選別した特定遺
伝子の発現が赤色で高く示されることを視覚的に確認した。
前記ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定された化粧品ニキビバイオマーカ
ーの候補であるＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣＲ１、ＡＫＲ１Ｂ１０、ＴＨＹ１およびＩＬ
－６遺伝子と皮膚科専門医の理学的所見を通じてのニキビの有／無および脂性肉眼評価、
そして人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）との相関関係を確認するために二変量相関分
析を施行した。その結果が図８８～図１０１に図示される。
本発明者らは理学的所見を通じて確認された化粧品ニキビがある試験群５人と化粧品ニ
キビがなくｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｎｇ ｔｅｓｔ点数が０．５点以下である対
照群５人、総１０人の試験対象者のＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて選定され
た化粧品ニキビバイオマーカーの候補と理学的所見のニキビの有／無による点数（有：＋
１点、無：０点）、肉眼評価を通じての脂性点数（０～５点）および人体適用機器（Ｓｅ
ｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係を分析した。
その結果、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣＲ１、ＴＨＹ１およびＩＬ６遺伝子は理学的所
見の化粧品ニキビの有／無による点数と統計的に有意義な正の相関関係を示すことを確認
した（図８８～図９４参照）。図８８および図８９は、理学的所見との相関関係分析結果
を示す表である。図９０～図９４は、前記有意義な正の相関関係を示す５個の遺伝子の散
布図である。
また、ＭＭＰ１２およびＣＣＲ１遺伝子は肉眼評価を通じての脂性点数と統計的に有意
義な正の相関関係を示すことを確認した（図９５～図９８参照）。図９５と図９６は、肉
眼評価を通じての脂性点数との相関関係分析結果を示す表である。図９７と図９８は、前
記有意義な正の相関関係を示す２個の遺伝子の散布図である。
また、ＣＣＲ１遺伝子は人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果と統計的に有意
義な正の相関関係を示すことを確認した（図９９～図１０１参照）。図９９と図１００は
、人体適用機器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ）測定結果との相関関係分析結果を示す表である。
図１０１は、前記有意義な正の相関関係を示す１個の遺伝子の散布図である。
前述したような本発明者らが遂行した化粧品ニキビ評価実験結果を総合的に分析した時
、化粧品ニキビバイオマーカーを最も広い範囲で取る場合、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣ
Ｒ１、ＡＫＲ１Ｂ１０、ＴＨＹ１およびＩＬ－６、総６通りの遺伝子を選定することがで
きる。また、正確かつ効果的な皮膚状態の診断の観点で、本発明者（ら）はこれら遺伝子
のうちＭＭＰ３、ＭＭＰ１２およびＣＣＲ１をバイオマーカー群に含むように実施するこ
とが有利であることを発見した。
このような選定結果を活用すると、前記６種類のＲＮＡ遺伝子のうちいずれか一つまた
は二つ以上の遺伝子をバイオマーカーにして化粧品ニキビの予測を定量的に遂行できるで
あろう。ひいては、以上の本発明者らの研究結果は、化粧品ニキビの予測方法または予測
キットの開発、化粧品ニキビ誘導または抑制物質および治療剤の開発とスクリーニング、
一人一人に対する皮膚類型情報提供、オーダーメード型化粧品の開発および動物実験代替
化粧品ニキビ有効性評価において非常に有用なツールを提供できるものと期待される。
以上の実施例で対象体の皮膚からマイクロニードルを使って抽出した皮膚検査対象物か
らＲＮＡを抽出し、これをＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ定量分析装備に提供してＲＮＡ
遺伝子別発現程度を定量化する方式について説明した。ところが、本発明はこのような特
定定量化方式に限定されるものと制限解釈されてはならない。対象体の皮膚検査対象物を
使ってＲＮＡ発現程度を定量化できる方式であればすべて本発明の範疇に属するものと理
解されるべきである。例えば、ＥＬＩＳＡ方式などの蛋白質水準での測定方式が適用され
得る。該当ＲＮＡバイオマーカーが発現して生成されるもので蛋白質の種類を特定し、こ
の蛋白質の定量化によってＲＮＡ遺伝子別発現程度が定量化され得るであろう。すなわち
、本発明の実行において使われる定量化装備またはキットは、ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ
キット、ＲＮＡチップ、ＤＮＡチップまたは蛋白質チップキットであり得る。前記蛋白質
水準の測定はＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、磁石ビーズ－抗体免疫沈降法、免
疫化学組織染色および質量分析器の中から選択された一つ以上の方式によってもよい。ま
た、前記ｍＲＮＡ水準の測定はＲＴ－ＰＣＲ、競争的ＲＴ－ＰＣＲ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉ
ｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ
）、ＲＮａｓｅ保護分析法（ＲＰＡ：ＲＮａｓｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ）
、ノーザンブロッティング（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）およびＤＮＡチップ
の中から選択された一つ以上の方式によってもよい。
本発明は各皮膚状態の測定および評価のためにマイクロニードルを活用した非侵襲的方
式で特定ＲＮＡバイオマーカーを活用することに特徴があり、特定ＲＮＡバイオマーカー
の検出のためにＲＮＡ水準の検査法と蛋白質水準の検査法をすべて使用可能であるが、Ｒ
ＮＡ水準の検査法を活用する場合、蛋白質水準の検査法を活用することに比べて後述する
長所を得ることができる。蛋白質対比検出量が少ないＲＮＡサンプルを増幅する技術を適
用することによって、少量のサンプルからもはるかに多い数のバイオマーカーを効率的か
つ正確に検出できるということがＲＮＡ水準検査法の長所として要約され得る。
特定バイオマーカーの発現を観察したり定量化するにおいて、蛋白質水準の検査法とＲ
ＮＡ水準の検査法の最も大きい実用上の差のうち一つは、蛋白質検査対比非常に少量で非
常に多数のバイオマーカーを観察または定量化可能であるという点である。蛋白質水準で
多様なバイオマーカーの変化を同時に見るためにはｐｒｏｔｅｏｍｅ分析が適合であるが
、このためには多量のサンプルが必要であり、特に皮膚組織から蛋白質を抽出する場合は
収率が１０％以下であるため、必要量の１０倍程度のサンプルが必要である。具体的には
、ｐｒｏｔｅｏｍｅ分析に少なくとも１－２ｍｇの蛋白質試料が必要であるが、３ｍｍパ
ンチの皮膚組織の生検では約０．１５ｍｇの蛋白質が抽出される。すなわち、３ｍｍパン
チの皮膚組織の生検を約１０個施行しないとｐｒｏｔｅｏｍｅ分析ができないという計算
が出る。
ところが、組織生検の多様な限界点に照らしてみる時、３ｍｍパンチを１０回も実施す
るのは実際に試みられ難い。マイクロニードルパッチで蛋白質を抽出する方法も、マイク
ロニードルパッチ１枚では約０．０６ｍｇの蛋白質が抽出されるので２０枚以上のマイク
ロニードルパッチを付着しないとｐｒｏｔｅｏｍｅ分析が不可能であるため、皮膚に実用
的に適用することは困難である。また、このようにサンプルで蛋白質を抽出したとしても
、ｐｒｏｔｅｏｍｅ分析を通じて検出されるバイオマーカーは約６５０個程度であり、Ｒ
ＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を通じて検出されるバイオマーカー（４万個以上）の１
－２％程度水準であるので効率性が落ちる。
他の分析法で遂行しても限界が存在する。蛋白質分析法のうち最も鋭敏な検査方法であ
るＥＬＩＳＡ方法で比較してみても、マイクロニードルパッチ１枚から抽出される０．０
６ｍｇの蛋白質は３回反復分析時に１個のバイオマーカーの発現変化のみを確認できる量
に過ぎない。併せてＥＬＩＳＡ方式の特性上、一つのｋｉｔ当たり１個のバイオマーカー
のみの検出が可能であり、溶媒により干渉現象が起こり得、実験者が遂行しなければなら
ない段階が多いため測定時ごとにｖａｒｉａｔｉｏｎが大きいという短所が存在する。Ｒ
ＮＡとは異なって蛋白質はその構造が３次元であり増幅ができないため、検査対象物の採
取量の限界を克服することができず、皮膚類型や皮膚疾患の予後判定および診断、新素材
治療の有効性評価などのための多数のバイオマーカーの変化を同時に分析するのに適用す
るには困難がある。
このような問題点を解決するために、本発明ではＲＮＡを分析に適用した。特定蛋白質
が合成されるためには細胞核に存在するＤＮＡから該当蛋白質の合成に関与する遺伝子部
位をＲＮＡ形態で複製し（転写）、このＲＮＡが細胞質に移動してこれを鋳型で各塩基配
列に該当するアミノ酸を連結して最終的に蛋白質が合成（翻訳）される過程を経るが、蛋
白質合成の前駆体であり多様な環境的要因によって変化する実際の皮膚蛋白質の発現量を
反映する遺伝物質であるＲＮＡを分析に活用すると、さらに効率性の高い分析が可能であ
るためである。
ただし、ＲＮＡは蛋白質よりその収率がさらに低く不安定性は高いため、分析に活用す
るために最適な条件を設定するための研究が必要であった。本発明に至ってはじめてマイ
クロニードルパッチを利用して獲得した微量の皮膚検査対象物からＲＮＡバイオマーカー
を信頼性があるように確認加能であるという点が確認された。本発明に至る前には前述し
た通り、ＲＮＡが蛋白質より収率が低く不安定性は高いという当業界の認識によって、マ
イクロニードルパッチで得られた微量の検査対象物からＲＮＡバイオマーカーを確認して
特定皮膚状態または疾患を診断することには至っていなかった。
本発明者（ら）は微量のＲＮＡを分析の施行に適合な量で確保するためにＲＮＡを増幅
する過程を経ることによって、前述した実施例に詳しく記載した通り、マイクロニードル
パッチで得られた微量の検査対象物からＲＮＡバイオマーカーを効率的にかつ正確に検出
できるという点を最初に確認した。
同一単位で換算した時、マイクロニードルパッチ１枚当たり抽出される蛋白質の量は約
６０ｎｇ／μＬである反面、ＲＮＡは約１０ｎｇ／μＬであって、１／６水準で抽出する
ことができた。蛋白質量よりも微量であるが、これを克服するためにＲＮＡを増幅する技
術を適用したし、ＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ分析を可能にした。ＲＮＡ増幅技術は重
合酵素反応原理を通じて１０ｎｇのＲＮＡを約５５０倍である５５００ｎｇに増幅するこ
とができる。このような方式でマイクロニードルパッチ１枚から抽出される皮膚検査対象
物から約４万通り余りのバイオマーカーの発現変化を確認できるのであり、前述した実施
例で各皮膚状態を測定、評価または診断するために選定された複数個のＲＮＡバイオマー
カーは非常に容易かつ正確に検出することができる。
反面、マイクロニードルパッチで皮膚検査対象物を獲得する方式で複数個、例えば９個
の蛋白質バイオマーカーの発現を正確に検出するには、１枚のマイクロニードルパッチか
ら得られる量では不可能である。複数個のマイクロニードルパッチが使われなければなら
ず、１個のマイクロニードルパッチから検査のための検査対象物獲得過程が複数回実行さ
れなければならない。前述した通り、ＥＬＩＳＡ方式を使うのであれば、ｋｉｔ当たり１
個のバイオマーカーのみ検出可能な特徴により、複数個のｋｉｔを動員しなければならな
いのであろうし、それさえも溶媒により干渉現象が発生し得、実験者が遂行しなければな
らない段階が多いため測定時ごとにｖａｒｉａｔｉｏｎが大きいという短所を甘受しなけ
ればならない。
以上で本発明が具体的な構成要素などのような特定事項が限定された実施例および図面
によって説明されたが、これは本発明のより全般的な理解を助けるために提供されたもの
に過ぎず、本発明は前記実施例に限定されるものではなく、本発明が属する技術分野で通
常の知識を有する者であれば、このような記載から多様な修正および変形を試みることが
できる。
したがって、本発明の思想は前記説明された実施例に限定されて定められてはならず、
後述する特許請求の範囲だけでなくこの特許請求の範囲と均等にまたは等価的に変形され
た全てのものは本発明の思想の範疇に属するものと言える。

Claims (15)

  1. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物からコラーゲン／弾力関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の
    発現程度または皮膚障壁機能／水分合成関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発現程度を定
    量化し、前記定量化値に基づいて皮膚老化の診断がなされ、
    前記コラーゲン／弾力関連バイオマーカーはＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１、Ｇ
    ＳＴＡ３、ＰＯＮ１、ＰＩＮＫ１、ＣＯＬ４Ａ４およびＭＭＰ８のうちいずれか一つまた
    は二つ以上を含み、皮膚障壁機能／水分合成関連バイオマーカーはＩＶＬ、ＨＡＳ２、Ｈ
    ＡＳ３、ＡＱＰ３、ＣＥＲＳ６、ＣＬＤＮ１、ＳＬＣ９Ａ１、ＴＧＭ１、ＳＰＩＮＫ５、
    ＫＬＦ４、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ１Ｂ、ＬＣＥ１Ｆ、ＬＣＥ２Ａ、ＢＧＮおよびＡＺＧＰ１
    のうちいずれか一つまたは二つ以上を含む、最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  2. 前記コラーゲン／弾力関連バイオマーカーはＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＮ１およ
    びＰＩＮＫ１を含み、
    皮膚障壁機能／水分合成関連バイオマーカーはＩＶＬ、ＨＡＳ３、ＡＱＰ３、ＢＧＮお
    よびＡＺＧＰ１を含む、請求項１に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  3. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から皮膚保湿関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発現程度
    を定量化し、前記定量化値に基づいて皮膚保湿程度の評価がなされ、
    前記皮膚保湿関連バイオマーカーはＣＤＳＮ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、ＬＯＲ、ＫＬＦ４、
    ＫＲＴ１０、ＬＣＥ１Ａ、ＬＣＥ２Ａ、ＬＣＥ２Ｂ、ＬＣＥ２Ｃ、ＳＭＰＤ３、ＣＤＨ１
    、ＩＴＧＢ４、ＩＶＬ、ＳＰＩＮＫ５、ＣＬＤＮ１、ＡＱＰ３、ＢＧＮ、ＨＡＳ３、ＴＧ
    Ｍ１、ＣＬＤＮ７、ＣＥＲＳ３、ＣＬＤＮ４およびＫＲＴ１のうちいずれか一つまたは二
    つ以上を含む、最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  4. 前記皮膚保湿関連バイオマーカーはＦＬＧ、ＡＱＰ３およびＬＯＲを含む、請求項３に
    記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  5. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から皮膚色素沈着関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発現
    程度を定量化し、前記定量化値に基づいて皮膚色素沈着程度の評価がなされ、
    前記皮膚色素沈着関連バイオマーカーはＣＡＴ、ＣＬＵ、ＤＳＧ１、ＧＰＮＭＢ、ＧＰ
    Ｘ４、ＧＳＴＭ２、ＧＳＴＰ１、ＭＬＡＮＡ、ＰＡＸ３、ＳＯＸ１０、ＴＦＡＰ２Ａ、Ｔ
    ＹＲ、ＴＹＲＰ１、ＭＣ１Ｒ、Ｆ２ＲＬ１およびＣＬＤＮ１のうちいずれか一つまたは二
    つ以上を含む、最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  6. 前記皮膚色素沈着関連バイオマーカーはＭＬＡＮＡ、ＴＹＲＰ１およびＧＰＮＭＢを含
    む、請求項５に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  7. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から皮膚油分関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発現程度
    を定量化し、前記定量化値に基づいて皮膚油分程度の評価がなされ、
    前記皮膚油分関連バイオマーカーはＭＦＡＰ２、ＩＧＦ１、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＧＰＡＭ
    、ＣＰＴ１Ｃ、ＡＲ、ＭＰＺＬ３、ＡＱＰ３、ＳＲＥＢＦ２およびＨＳＤ１７Ｂ２のうち
    いずれか一つまたは二つ以上を含む、最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  8. 前記皮膚油分関連バイオマーカーはＭＰＺＬ３、ＧＰＡＭ、およびＩＧＦ１を含む、請
    求項７に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  9. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から紅潮性敏感皮膚関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝子の発
    現程度を定量化し、前記定量化値に基づいて紅潮性敏感皮膚の評価がなされ、
    前記紅潮性敏感皮膚関連バイオマーカーはＣＯＬ３Ａ１、ＴＡＣ１、ＫＬＫ５、ＣＡＭ
    Ｐ、ＭＭＰ９、ＴＲＰＡ１、ＩＬ１３ＲＡ１、ＨＳＤ３Ｂ１、ＣＸＣＲ４、ＡＮＧＰＴ２
    、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＲ５およびＰＳＭＢ９のうちいずれか一つまたは二つ以上を含む、
    最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  10. 前記紅潮性敏感皮膚関連バイオマーカーはＭＭＰ９、ＴＡＣ１およびＣＡＭＰを含む、
    請求項９に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  11. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から主観的刺激性敏感皮膚関連ＲＮＡバイオマーカー遺伝
    子の発現程度を定量化し、前記定量化値に基づいて主観的刺激性敏感皮膚程度の評価がな
    され、
    前記主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーはＩＶＬ、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＦＬＧ２、
    ＰＧＦ、ＣＹＲ６１、ＨＬＡ－Ｂ、ＩＧＨＡ１、ＭＭＰ３、ＲＢＰ４およびＧ０Ｓ２のう
    ちいずれか一つまたは二つ以上を含む、最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  12. 前記主観的刺激性敏感皮膚関連バイオマーカーはＰＧＦ、ＲＢＰ４およびＣＹＲ６１を
    含む、請求項１１に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  13. 対象体の皮膚から抽出された検査対象物からＲＮＡ遺伝子の発現程度を定量化できる装
    備と、
    生分解性高分子ヒアルロン酸からなり中実構造である複数個のマイクロニードルを含む
    マイクロニードルパッチを含み、
    前記マイクロニードルパッチが対象体の皮膚に適用され、所定時間維持後分離された状
    態で、前記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚か
    らの検査対象物またはこれからの抽出物が前記装備によって定量分析され、前記装備は前
    記マイクロニードルパッチのマイクロニードル表面に吸着された対象体の皮膚からの検査
    対象物またはこれからの抽出物から化粧品ニキビ関連ＲＮＡ遺伝子バイオマーカーの発現
    程度を定量化し、前記定量化値に基づいて化粧品ニキビの予測がなされ、
    前記化粧品ニキビ関連バイオマーカーはＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、ＣＣＲ１、ＡＫＲ１Ｂ
    １０、ＴＨＹ１およびＩＬ－６のうちいずれか一つまたは二つ以上を含む、最小侵襲的皮
    膚状態の診断キット。
  14. 前記化粧品ニキビ関連バイオマーカーはＭＭＰ３、ＭＭＰ１２およびＣＣＲ１を含む、
    請求項１３に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
  15. 対象体の皮膚からの検査対象物からＲＮＡを抽出する装備をさらに含み、前記ＲＮＡ抽
    出装備によって獲得したＲＮＡが増幅過程を経て前記定量化装備に提供される、請求項１
    ～請求項１４のいずれか一項に記載の最小侵襲的皮膚状態の診断キット。
JP2023199130A 2020-08-10 2023-11-24 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット Pending JP2024026167A (ja)

Applications Claiming Priority (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200100165A KR102216913B1 (ko) 2020-08-10 2020-08-10 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부보습 정도 평가 키트 및 피부보습 정도 평가를 위한 바이오마커
KR10-2020-0100165 2020-08-10
KR1020200100151A KR102216910B1 (ko) 2020-08-10 2020-08-10 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부주름 또는 피부탄력 진단 키트
KR10-2020-0100151 2020-08-10
KR1020200100168A KR102216923B1 (ko) 2020-08-10 2020-08-10 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부 색소침착 정도 평가 키트 및 피부 색소침착 정도 평가를 위한 바이오마커
KR10-2020-0100168 2020-08-10
KR10-2020-0100579 2020-08-11
KR10-2020-0100561 2020-08-11
KR1020200100561A KR102216927B1 (ko) 2020-08-11 2020-08-11 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 화장품여드름 예측 키트 및 화장품여드름 예측용 바이오마커
KR1020200100579A KR102216937B1 (ko) 2020-08-11 2020-08-11 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부유분 정도 평가 키트 및 피부유분 정도 평가를 위한 바이오마커
KR10-2020-0101117 2020-08-12
KR1020200101124A KR102216945B1 (ko) 2020-08-12 2020-08-12 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 주관적 자극성 민감피부 정도 평가 키트 및 주관적 자극성 민감피부 정도 평가를 위한 바이오마커
KR10-2020-0101124 2020-08-12
KR1020200101117A KR102216941B1 (ko) 2020-08-12 2020-08-12 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 홍조성 민감피부 평가 키트 및 홍조성 민감피부 평가를 위한 바이오마커
JP2022504568A JP2022554046A (ja) 2020-08-10 2021-07-20 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット
PCT/KR2021/009297 WO2022035075A1 (ko) 2020-08-10 2021-07-20 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부 상태 진단 키트

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022504568A Division JP2022554046A (ja) 2020-08-10 2021-07-20 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024026167A true JP2024026167A (ja) 2024-02-28

Family

ID=80246798

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022504568A Pending JP2022554046A (ja) 2020-08-10 2021-07-20 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット
JP2023199130A Pending JP2024026167A (ja) 2020-08-10 2023-11-24 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022504568A Pending JP2022554046A (ja) 2020-08-10 2021-07-20 マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20230304091A1 (ja)
EP (1) EP4194565A4 (ja)
JP (2) JP2022554046A (ja)
CN (1) CN116209397A (ja)
WO (1) WO2022035075A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023243732A1 (ja) * 2022-06-17 2023-12-21 ロート製薬株式会社 皮膚老化のバイオマーカー、皮膚老化の判定方法、皮膚老化改善物質のスクリーニング方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1399184A2 (en) * 2000-12-01 2004-03-24 Schering Corporation Uses of mammalian genes and related reagents
JP2007209208A (ja) * 2006-02-07 2007-08-23 Naris Cosmetics Co Ltd ＭＣ１ＲのｍＲＮＡ量によるメラニン産生抑制剤の評価法
KR101267430B1 (ko) * 2006-10-04 2013-05-30 문우철 핵산을 안정적으로 보관하는 새로운 피부 유전자 카드와이를 이용한 유전자 분석방법, 그리고 이의 응용 방법
CN102089444A (zh) * 2008-05-14 2011-06-08 德玛泰克国际公司 利用核酸分析方法来诊断黑素瘤和太阳能雀斑
KR101587869B1 (ko) * 2008-05-27 2016-02-03 (주)아모레퍼시픽 민감성 피부 진단용 바이오 마커 및 이를 이용한 진단 키트
EP2513328A1 (en) * 2009-12-17 2012-10-24 Galderma Research & Development Markers and method for the diagnosis of rosacea
KR101886342B1 (ko) * 2010-11-30 2018-08-10 (주)아모레퍼시픽 피부 노화와 관련된 유전자 및 피부 노화를 방지하는 물질을 스크리닝하는 방법
JP5653783B2 (ja) * 2011-02-07 2015-01-14 日本メナード化粧品株式会社 皮膚表皮内水分保持能評価法
US20140235475A1 (en) * 2011-06-27 2014-08-21 Isabelle Carlavan Th17 differentiation markers for acne and uses thereof
JP2016509471A (ja) * 2012-12-14 2016-03-31 マインデラ コーポレイション バイオマーカーの検出および収集のための方法およびデバイス
KR20190069291A (ko) * 2017-12-10 2019-06-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물
US11422707B2 (en) 2017-12-21 2022-08-23 Advanced Micro Devices, Inc. Scheduling memory requests for a ganged memory device
JP6590324B2 (ja) 2017-12-28 2019-10-16 株式会社コナミデジタルエンタテインメント 情報処理装置、情報処理装置のプログラム、情報処理システム、及び、表示方法
JP6493941B1 (ja) 2017-12-28 2019-04-03 株式会社ノルミー 個人認証方法及び個人認証装置
KR102350230B1 (ko) 2018-10-05 2022-01-11 아주대학교산학협력단 페퍼민트 발효 추출물을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20200101117A (ko) 2019-02-19 2020-08-27 주식회사 케이티 노드장애를 감지할 수 있는 네트워크 시스템 및 노드장애 감지방법
KR102564140B1 (ko) 2019-02-19 2023-08-09 동우 화인켐 주식회사 플렉시블 윈도우 적층체 및 이를 포함하는 화상 표시 장치
KR102122208B1 (ko) * 2020-04-07 2020-06-12 주식회사 라파스 마이크로니들 패치를 이용한 최소 침습적 아토피 피부염 검사 방법 및 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 아토피 검사 키트
KR20200100561A (ko) 2020-07-02 2020-08-26 주식회사 바디프랜드 독립적으로 구동하는 복수개의 다리 마사지부를 포함하는 마사지 장치
KR102216937B1 (ko) * 2020-08-11 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부유분 정도 평가 키트 및 피부유분 정도 평가를 위한 바이오마커
KR102216913B1 (ko) * 2020-08-10 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부보습 정도 평가 키트 및 피부보습 정도 평가를 위한 바이오마커
KR102216923B1 (ko) * 2020-08-10 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부 색소침착 정도 평가 키트 및 피부 색소침착 정도 평가를 위한 바이오마커
KR102216945B1 (ko) * 2020-08-12 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 주관적 자극성 민감피부 정도 평가 키트 및 주관적 자극성 민감피부 정도 평가를 위한 바이오마커
KR102216941B1 (ko) * 2020-08-12 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 홍조성 민감피부 평가 키트 및 홍조성 민감피부 평가를 위한 바이오마커
KR102216927B1 (ko) * 2020-08-11 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 화장품여드름 예측 키트 및 화장품여드름 예측용 바이오마커
KR102216910B1 (ko) * 2020-08-10 2021-02-18 주식회사 큐티스의생명연구센터 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부주름 또는 피부탄력 진단 키트

Also Published As

Publication number Publication date
EP4194565A4 (en) 2024-05-22
WO2022035075A1 (ko) 2022-02-17
JP2022554046A (ja) 2022-12-28
EP4194565A1 (en) 2023-06-14
US20230304091A1 (en) 2023-09-28
CN116209397A (zh) 2023-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Darlenski et al. Non-invasive in vivo methods for investigation of the skin barrier physical properties
Wesley et al. Racial (ethnic) differences in skin properties: the objective data
Kikuchi et al. Improvement of Mild Inflammatory Changes of the Facial Skin Induced by Winter Environment with Daily Applications of a Moisturizing CreamA Half-Side Test of Biophysical Skin Parameters, Cytokine Expression Pattern and the Formation of Cornified Envelope
Ardigo et al. Characterization and evaluation of pigment distribution and response to therapy in melasma using in vivo reflectance confocal microscopy: a preliminary study
Antonov et al. Methods for the assessment of barrier function
Raj et al. A fundamental investigation into aspects of the physiology and biochemistry of the stratum corneum in subjects with sensitive skin
Haenssle et al. When all you have is a dermatoscope—start looking at the nails
US20080131902A1 (en) Personalized skin care composition and method for production thereof
Binder et al. Confocal Raman spectroscopy: In vivo measurement of physiological skin parameters–A pilot study
Astner et al. Irritant contact dermatitis induced by a common household irritant: a noninvasive evaluation of ethnic variability in skin response
JP2024026167A (ja) マイクロニードルパッチを含む最小侵襲的皮膚状態の診断キット
Bunyaratavej et al. Skin scrapings versus standardized skin surface biopsy to detect Demodex mites in patients with facial erythema of uncertain cause–a comparative study
Kim et al. Minimally invasive skin sampling and transcriptome analysis using microneedles for skin type biomarker research
Gao et al. Melanocyte activation and skin barrier disruption induced in melasma patients after 1064 nm Nd: YAG laser treatment
Oliveira et al. An Overview of Methods to Characterize Skin Type: Focus on Visual Rating Scales and Self-Report Instruments
KR102216913B1 (ko) 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부보습 정도 평가 키트 및 피부보습 정도 평가를 위한 바이오마커
KR102216927B1 (ko) 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 화장품여드름 예측 키트 및 화장품여드름 예측용 바이오마커
Darlenski et al. Anti-aging and Anti-wrinkle Products
KR102216937B1 (ko) 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 피부유분 정도 평가 키트 및 피부유분 정도 평가를 위한 바이오마커
Blaak et al. Irritability of the skin barrier: a comparison of chronologically aged and photo-aged skin in elderly and young adults
Ye et al. Skin barrier damaging and repairing process: a new application field of dermoscopy
TWI612307B (zh) 對紫外線損傷的抵抗性的評價方法
Khatami et al. Biophysical and ultrasonographic changes of acute Old World cutaneous leishmaniasis skin lesions in comparison with uninvolved skin: A possible tool for non‐invasive early detection and treatment outcome assessment
Fluhr et al. Ethnic groups and sensitive skin: two examples of special populations in dermatology
KR102216941B1 (ko) 마이크로니들 패치를 포함하는 최소 침습적 홍조성 민감피부 평가 키트 및 홍조성 민감피부 평가를 위한 바이오마커