JP2023553710A - プログラニュリンを標的とするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド - Google Patents

プログラニュリンを標的とするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド Download PDF

Info

Publication number
JP2023553710A
JP2023553710A JP2023536915A JP2023536915A JP2023553710A JP 2023553710 A JP2023553710 A JP 2023553710A JP 2023536915 A JP2023536915 A JP 2023536915A JP 2023536915 A JP2023536915 A JP 2023536915A JP 2023553710 A JP2023553710 A JP 2023553710A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
progranulin
antisense oligonucleotide
oligonucleotide
exon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023536915A
Other languages
English (en)
Inventor
ヤーガジア，ラヴィ
ジェンソン，ラルス
ラスムセン，セーレン
ラウン，ヤコプ
テーラー，ディーサ
ヴァング，ドルテ
ヴォーム，イェスペル
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of JP2023553710A publication Critical patent/JP2023553710A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Abstract

本発明は、細胞においてプログラニュリンのスプライシングパターンを変更するオリゴヌクレオチド、および神経障害の処置におけるその使用に関する。

Description

本発明は、プログラニュリンのスプライシングパターンを変更するアンチセンスオリゴヌクレオチド、および神経障害の処置におけるそれらの使用に関する。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞においてエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの発現を上方調節または回復させ得る。
プログラニュリン（ＰＧＲＮ）は、ＣＮＳおよび末梢組織の両方において、複数の細胞型で発現される高度に保存された分泌タンパク質である。
中枢神経系における分泌タンパク質プログラニュリンの欠損は、神経変性疾患前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を引き起こす。病原性プログラニュリン変異は、ハプロ不全を介してプログラニュリンレベルの約５０％の喪失およびＴＤＰ－４３タンパク質のニューロン内凝集をもたらす。プログラニュリンは、神経突起伸長、シナプス生物学、外因性ストレスに対する応答、リソソーム機能、神経炎症、および細胞自律的および非自律的様式の両方における血管新生を含む、脳内の多数の過程において支持的および保護的役割を果たす。
直接およびグラニュリンへのその変換の両方を介して、プログラニュリンはリソソーム機能、細胞増殖、生存、修復および炎症を調節する。プログラニュリンは、ＣＮＳにおけるリソソーム機能関連ミクログリア応答の調節において主要な役割を有する。タンパク質ハプロ不全をもたらすプログラニュリン遺伝子の常染色体優性突然変異は、４３ｋＤＡのＴＡＲ－ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ－４３）封入体の蓄積と関連付けられる神経病理学的前頭側頭葉変性症を伴う家族性前頭側頭型認知症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）に関連している。ホモ接合性ＧＲＮ変異は、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）に関連している（Ｔｏｗｎｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１８ Ｊｕｎｅ １２；９０（２４）：１１２７）。
プログラニュリン遺伝子の変異は、近年、一部の散発性症例を含めて、全ＦＴＤの約５％の原因として同定された。マウスモデルを使用した最近の研究では、脳におけるプログラニュリンの発現が定義されている（Ｐｅｔｋａｕ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。プログラニュリンは神経発生の後期に発現され、成熟ニューロンのマーカーと共に局在する。プログラニュリンは、ほとんどの脳領域のニューロンで発現され、視床、海馬、および皮質で最も高い発現を示す。ミクログリア細胞はまた、プログラニュリンを発現し、発現レベルはミクログリア活性化によって上方制御される。約７０の異なるプログラニュリン遺伝子変異がＦＴＤにおいて同定されており、すべてがプログラニュリンレベルを低下させるかまたはプログラニュリン機能の喪失をもたらす。
したがって、プログラニュリンの発現および／または活性を増加させることができる治療薬が緊急に必要とされている。
イントロン１の５’部分を保持するプログラニュリンのスプライスバリアントは、脳、例えばニューロンまたはミクログリア細胞において発現される（Ｃａｐｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，２８９（３７），２５８７９－２５８８９）。このスプライスバリアントは、全部で３８２３ヌクレオチドのイントロン１の最も５’の２７１ヌクレオチドを含む。イントロン１の２７１ヌクレオチド断片は、エクソン２におけるカノニカルな下流ＡＵＧ（オープンリーディングフレーム）の上流の２つのＡＵＧ部位を含む。これらの２つの上流ＡＵＧ部位からの翻訳はプログラニュリンタンパク質をコードせず、未熟な終止コドンに起因して転写物はナンセンス媒介性ｍＲＮＡ分解（ＮＭＤ）を起こし得る。
国際公開第２０２０／１９１２１２号は、プログラニュリンｍＲＮＡを標的とすることができる特異的なオリゴヌクレオチドを記載する。ここで、発明者らは、イントロン１の５’部分を保持するスプライスバリアントの低減はエクソン１およびエクソン２スプライスバリアントを増加させ、さらにプログラニュリンタンパク質発現を増加させることを決定した。
本発明は、プログラニュリンのアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、プログラニュリンのスプライシングパターンを変更する能力を有する。特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの発現を上方調節して、イントロン１の５’部分を保持するプログラニュリンイントロン１－エクソン２スプライスバリアントの産生を低減させ、プログラニュリンタンパク質の発現を増加させ得る。これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、プログラニュリンスプライシングのモジュレーター、またはプログラニュリンエクソン１－エクソン２のアゴニストとして記載され得る。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞においてプログラニュリンエクソン１－エクソン２スプライスバリアントの発現を回復させるかまたは増強するために使用され得る。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列のスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列（配列番号２７６）を含むヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
プログラニュリンエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列は、以下において配列番号２７６として示される。プログラニュリンエクソン１配列（大文字）は、ｇｅｎｏｍｅ Ｅｎｓｅｍｂｌｅ（ｗｗｗ．ｅｎｓｅｍｂｌｅ．ｏｒｇ）、第１７染色体、位置４４，３４５，１２３～位置４４，３４５，３３４に対応する。イントロン１はｇｅｎｏｍｅ Ｅｎｓｅｍｂｌｅ、第１７染色体、位置４４，３４５，３３５～４４，３４９，１５７に対応し、エクソン２配列（大文字）はｇｅｎｏｍｅ Ｅｎｓｅｍｂｌｅ、第１７染色体、位置４４，３４９，１５８～位置４４，３４９，３０２に対応する。
ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列（配列番号２７６）：
ＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＧＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＣＡＴＴＣＣＡＧＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＣＴＣＴＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＧＴＡＧＣＣＡＡＴＧＧＧＡＧＣＧＧＧＴＡＧＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＧＧＴＡＧＧＣＧＧＧＴＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＡＧＴＣＴＧＡＧＣＧＣＴＡＣＣＣＧＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡＧＴＣＧＧＡＣＧＣＡＧｇｔａｇｇａｇａｇｃｇｇｃｃｇｃｇｃａｇａｃｃｔｃｔｃｇｃｃｔｇｃｔｃｃｔｇｃｃｃａｇｇｇｇｃｃｃｇｃｃａｇｇｇｃｃａｔｇｔｇａｇｃｔｔｇａｇｇｔｔｃｃｃｃｔｇｇａｇｔｃｔｃａｇｃｃｇｇａｇａｃａａｃａｇａａｇａａｃｃｇｃｔｔａｃｔｇａａａｃｔｃｃｔｔｇｇｇｇｇｔｔｃｔｇａｔａｃａｃｔａｇｇｇｇｇａｇｔｔｔｔａｔｇｇｇａａａｇａｇｇａａｇｃａｇｔａａｔｔｇｃａｇｔｇａｃｇｃｃｃｃｇｔｔａｇａａｇｇｇｇｃｔｔｔｃｔａｃｃｔｃｃｃｃａｇｃａｔｔｃｃｃｃｃａａａｇｃａｇｇｇａｃｃａｃａｃｃａｔｔｃｔｔｇａｃｃｃａｇｃｔｃｃａｃｃｃｃｔｇｔｃｇｇｔａｇｇｔｇｃｔｇｇｃｔｔｃｔｔｃｃｃｃｔｃｔｃｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇｇｔｇｇｔｔｃｃｃｇｃｇｇｃｇｇｃｃｔｇｇａｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃｇｃｇｃｇａｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｇｇａｇｃｔｃｃｇａｇｇｇｃｃｔｇｇｇａａｃｇａｇａｃｃｔｇａｇａｃｃｔｔｇｇｃｔｔｃｔｃｇａａｇｇｔａｇｔａｇｇｇａｃｔｔｇｇｇａｇｔｇｇｔｇａｃｔｇａａｃｃｔｇｇｔｃｔｇｇｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｔｔｃｃｔｃｔｔｇｔｔｇｃｇｇｇｔｇｇｇａｃｇａｇｃｔａｇｃｔｔｃｃｇｃｃｔｃｔｃｃｃａｇｃｃａｃｔｔｔｔｔｃｃｔｇｃｔｃａｔｔｔｇｃａｇｃｔａｇｇｔｔｇｇｃｔｃｃｃｃｔｔｔｔｇｇｇａａｔｔｔｃｃｔｃｔｃｃｃｃｔｔｇｇｃａｃｔｃｇｇａｇｔｔｇｇｇｇｇｇｔｇｃｃａｃｃｔａｇｔｇｇａａｇａｔａａｃｇｇａｇｃｔａｇｇｇｔｃｔｔｇａａｇａｇｇｃｔｇｃｔｇｔｃｃｃｃｔｃｔｇｇｃｔｇｔｔｔｔｇｇｃｇｇｔｇｔａｇｇｇｔｇｇｃａｔｇａｇａｇａｃｔｇｃｇａｃｔｃｇｃｃｔｃｃｔｃａｔｃｃｃｔｇｔｔｔｃｔｇｔａｔｇｃｇａｇｔｇｃｔｔｇｔａｔｔｃａｇｔａｇａａｇｃａｔａｃａｃｔａｔａｃｔｃｃｃｔｃａａｔｔｔａｇｇｇｔａａａｃａｇｇａｇｇｇｇｃｃａｃａｔｇｃａｃａｇｇｔａａｔｔｃａｃｃａｇｇｇａｇｃｃｇａａｃａｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇａｃａｇａｃｔｃｃｃｃｔｔｃｃｃａｇｃａａｇｃｃａｔｇｇｃａｇｃｇｇａｃａｇｃｃｔｇｃｔｇａｇａａｃａｃｃｃａｇｇａａｇｃａｇｇｃｇｇｔｇｃｃａｇｃｔｇｃａｇｇｔｇｃｔｔｔｇｃｃｔｇｇｇａｇｃｔｇｔｇｇｇｇｃｔｇａｇｇａｇａｇｇｇｔｃｃａｃｔｇｔｃｃａｇｇａｃｃａｇｔｇａａｃｔｔｃａｔｃｃｔｔａｔｃｔｇｔｃｃａｇｇａｇｇｔｇｇｃｃｔｃｔｔｇｇｇｇａｔｇｃｔｇａｇｔｔａｇｇｇｇａｇｇｇｇｃａｃｔｔｇａｇｇａａａｇｃｃａｇｇｔｇｇａｇｃａｇａｇａｇｇａｔｇｔｇａｇｔｇａｃｔｇｇｇｔｇｇｇｔｇａｇａｔｔｔｃｃｔｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃｃｃｇｃａｇｔｇｇｔａｔｃｃａｃａｃｃｔａｇａｃｔｃｇｔｇｇｇｇｔａａｃｔｇａｇｇｃａｃａｇａｃａｇａｇａｇｃａａｃｔｔｃｔｃａｇｇｃｃｃｔｃａｃａｇｔｔｇｇｃａａｔｔｃｔａｇｇａｔｔａｇｇａｃｃｃａａｇｔｇｃｇａｔｔｔｔｃａｇｇｃａｇｔｃｃｃｔｇｔａｃｃｃｔｇｔｔｔｃｔｇｔｔｇｔａｃｃｔｇｔｔｇｃａｃｃａｔｔｃｃｃａｇｇｃａｃｔｇｃｃｃａｔｃｇｔｇｃｃａｃｔａｇｔｇａｔａｔｇａａｃｃｃａｇｇｔｃｃａａｔａｃｇｃｔｃｔｇｇｇｇｃｃａｔｃａａａｇｃｃｔｇａｃｇｔｃａｃｃａｔｇａｃｃｔｇａｔｇｔｇｔｇａｃｇｔｇｔｔａｔａｇｇｔｇｔｃｃｃｔｔｇｇｔａｔｃｔｔｃａｃｇｇａａｃｔｇｇｔｔｃｃａｇｇａｃｃｃｃａａａａｔｃｔｇｔｇｇｇｔｇｃｔｃａａｇｃｃｃｃｔｇａｇａｔａａａａｔｇｇｔｇｔａａｔａｔｔｔｇｃａｔａｔａａｃｃｔａｔａｃａｔａｃｔｔｔａａａｔｃａｔｔｔｃｔａｇａｔｔａｃｔｔａｔａｃｃｔａａｔａｃａａｔｇｇａａａｔｇａｃａｔｇｔｃｇｇｃｔｇｇｇｃｇｔｇｇｔｇｇｃｔｃａｔｇｃｃｔｇｔａａｔｃｃｃａｃｃａｃｔｔｔｇｇｇａｇｇｃｃｇｔｇｇｃａｇｇｔｇｇａｔｃａｃｃｔｇａｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｔｔｇａｇａｃｃａｇｃｃｔｇａｃｃａａｃａｔｇｇｔｇａａａｃｃｃｃｃａｔｃｔｃｔａｃｔａａａａａｔａｃａａａａａｔｔａｇｃｃａｇｇｔｇｔｇｇｔａｇｃｇｃａｃａｃｃｔａｔａａｔｃｃｃａｃｃｔａｃｔｔｇｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇｃａｇｇａｇａａｔｔｇｃｔｔｇａａｃｃｔｇｇｇａｇｇｃｇｇａｇｔｔｃｇｃａｇｔａａｇｃｔｇａｇａｔｃｇｃｇｃｃａｃｔｇｔａｃｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｔｇａｃａｇａｇｃａｇｇａｃｔｃｃａｔｃｔｃａａａａａａａａａａｇａｇａａａａａｇａａａａａｇａａａｔｇｃｃａｔｇｔａａａｔａｇｔｔｇｔｇａｔｃｃｔｇａａｔｔｇｔｔｔａｇｇｇａａｔａａｔａａｇａａａｇａａｃｔａｔｃｔｇｔａｇａｔｇｔｔｃａｇｔａｔａｇａｔｇｃａｃｃｃａｔｃｇｔａａｇｃｃｔａａｃｔａｃａｔｔｇｔａｔａａｃｔｃａｇｃａａｃｇａｔｇｔａａｃａｔｔｔｔｃａｇｇｇｇｔｔｔｔｔｔｔｇｔｔｔｔｇｔｔｔｔｔｔｇａｇａｃａｇａａｔｃｔｃａｇｔｃｔｃａｃｔｃｔｇｔｃａｃｃｃａｇｇｃｔｇｇａｇｔａｔｇｔｔｇｇｃｇｔｇａｔｃｔｃｔｇｃｔｃａｃｔｇｃａａｃｃｔｃｃａｃｃｔｃｃｔｇｇｇｃｔｃａａｇｃｇａｔｔｃｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｔｔｇａｇｔａｇｃｔｇｇｇａｔｔｇｃａｇｇｔｇｔｇｃｇｃｔａｃｃａｃｇｃａｔｇｇｃｔａａｔｔｔｔｔｇｔａｔｔｔｔｔａａｔａｇａｇａｔｇｇｇｇｔｔｔｔａｃｃａｃｇｔｔｇｇｔｃａｇｇｃｔｇｇｔｃｔｔｇａａｃｔｃｃｔｇａｃｃｔｔｇｇｇａｔｃｃｇｃｃｃａｃｃｔｇｇｇｃｃｔｃｃｃａａａｇｔｇｃｔｇｇｇａｔｔａｃａｇｇｃｇｔｔａｇｃｃａｃｃｇｃｇｃｃｃａａｔａｔａｔｔｔｔｇａｔｃｃｃｔｇｇｔｔｇｇａｔａｔｇｇａｇｇｇｃｔｇａｃｔｇｔａｃｔｔａａｃａｔｃｔｃｔａａｇｃｔｔｃａｇｔｔｔｃｃｔｃｃｔｔｔａａａａｔａａａｇｇｔｇｔｇｇｃｔｇｇｇｔｇｔｇｇｔｇｇｔｔｃａａｇｃｃｔｇｔａａｔｃｃｃａｇｃａｃｔｔａｇｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇｔｇｇｇｔｇｇａｔｃａｇｃｔｇａｇｇｔｃａｇｇａｇｔｔｃａａｇａｃｃａｇｃｃｔｇａｃｃａａｔａｔｇｇｔｇａａａｃｃｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｔａａａａａｔａｃａａａａａｔｔａｇｃｃａｇｇｃｇｔｇｇｔｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｔｇｔａｇｔｃｃｃａｇｃｔａｃｔｔｇｃｔｔｇａａｃｔｔｇｇｇａｇｇｃａｇａｇｇｔｔｇｃａｇｔｇａｇｃｔｇａｇａｔｃｇｔｇｃｃａｃｔｇａａｃｔｃｇａｇｃａｔｇｇｇｃａａｃａｇａｇｃａａｇａｃｔｇｔｃｔｃａａａａａａａａａａａａａａａａａｇｇｇｇｇｔｇａｇｃａｇａｃｇｔｇｇｔｇｇｃａｃｇｃｔｃｃｃａｃａｇｔｃｃｃａｇｃｔａｃｔｔａｇｔａｇｇａｇｇｃｃａａｇｇｔｔｇｇａｇｇａｔｔｇｃｔｔｇａｔｃｃｃａｇｇａｇｔｃｔｇａｇｔｃｃａｇｃｃｔｇｇｇｃａａｃａｔｇｇｃａａｔａｃｃｔｃａｔｃｔｃｔａａａａａｔａａａａｔａａａａｇｔａａａｇｇｔａｔｔａａｔｔａｃｔａｃｔｔｔｇｇａｔｇｇｔｔｇｔｔｇｃａａａｇａａａｔａｔａｔａｔａａａａｔａａｔｇｇａｇａｇｔｃｔｔｇｔａａｃｔｇｇｃｔｃｃｃａａｇａｇｇｃｔｃａａｃａｇａｃａｔｔａｃｔｇｔｔｔｔｔｇｃｔｔｃｔｔｃａｔｔａｔｇａｇｔｔａｃｃｔｃｔｃｔｇｇｃｃａｃｃｃｃａｃｔｇａａｃｔａｇｃｔｇｇｇｃｔａｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｇｇａｇａａｇａｇｔｔｇｔｔｔａｇｇａａｇｔｇａｇａｇｇｃｔｇｃｔｃｔｃｃａｃａｇａｇａｃｔｃａａｇｇｃｔｃａｇｔｔｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇａｃｔｃａｇａｔｇｇｇｃａｇｃｃｃａｇｔｇｇｇｃａｃａｃｇｔｇｇｔｃｔｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｔｇｇｃｔｇａｇｔｔｔｃａｃｔｔｃｃａｇａａｔａｇａｔｇｇａｇａｇｇｃａａｇｇｇｃａｇｇｇｔｔｔａｇｃａｔｇｃｔｔｇａｇｇａａｔｃｔｃａｇａｇｇｇｃｃｃｔｇｇｔｇｇｔｇｔｇｇｇｇｇａｃｃｃｔｃａｇａａｃａｃａｇｇｔｇｔｃｔｃａａｇｇｇｃｔｇａｃｃｃａｇｃｔｔｃｔｇｔｇｔｃｃｔｔｔｔｃｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｇｇｇａｃａｔｔｃａｔｇｇｇｃａｇａｔｇｇｔｇａｃｃｔｃｔｇｇｇｇａａｇｇｃａｇｃｃｃａｇａｃｔｃｃａｃｔｇｇｃｃａｃｃａｔａｔｔｔｃｃｔｔｔｔｔｃａｃａａｃｔｔｔｃｔｃａｃｃｃｃｔｇｔｇｇｔｔｔｃｃｃａｔｇｔｃａｔｃａｔｇｔｇｇｃｃｇｃｔｔｃｃｃｇｃａａｇｇｃｃｔｔａｇｃｇｇｇｇｔｇｃａｇｇｔａｔｇａａｃａｔａｇｔｇｔｃａｇｇｃａａｇｇａｇｇｃａｔｃｔｇｇａｇｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｃｔｔｔｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｔｃｃｃｔｃｃｃｔｇｃａｃｃｃｔａｇｃｃｃｔｇｔｃｃｔｃｔｃｃｃａｔｇｇｃｔａｃｔｇａｔｇｃｃｔｔｃｃｃｃｔｃａｃｃｃｃａｇａｇｇｔｇｇｃｃｃａｃａｔｃｔｇｃａｃａｇａｔｃａｇａｃｃｃａｃａａａａａｔｃａｃｇｔｃｔｔｃｃｔｇａｃｔｃｔｃａｔａａｇｃｃｔｇｃｃｃａｇｔｇａｇｇｃｃｃａｇｇｃａｔｔａｇｇｃｃａｔｇｔｇｃｔｇｇｇｇａｃｔｃａｇａｃｃｃａｃａｃａｔａｔａｃｇｃａｔｇｔｃａｇｃａｔｔｃａｔｇｃｔｔａｃａｇｇｔｃｃｇｃａｃａｔｇｃｔｇｇｇｇｃａａｇｔｇｔｃａｃａｃａｃｇｇｇｇｃｇｃｔｇｔａｇｇａａｇｃｔｇａｃｔｃｔｃａｇｃｃｃｃｔｇｃａｇａｔｔｔｃｔｇｃｃｔｇｃｃｔｇｇａｃａｇｇｇａｇｇｔｇｔｔｇａｇａａｇｇｃｔｃａｇｇｃａｇｔｃｃｔｇｇｇｃｃａｇｇａｃｃｔｔｇｇｃｃｔｇｇｇｇｃｔａｇｇｇｔａｃｔｇａｇｔｇａｃｃｃｔａｇａａｔｃａａｇｇｇｔｇｇｃｇｔｇｇｇｃｔｔａａｇｃａｇｔｔｇｃｃａｇａｃｇｔｔｃｃｔｔｇｇｔａｃｔｔｔｇｃａｇＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＧ
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な少なくとも１２ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な１２～１６ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１２～１６ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な１２～１６ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な１２～１８ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１２～１８ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な１２～１８ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡのスプライス調節部位に相補的、例えば完全に相補的な１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２７６内に含まれるヌクレオチド配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６８内に含まれるヌクレオチド配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６２内に含まれるヌクレオチド配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９および配列番号２８０からなる群から選択される配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
配列番号７１の標的部位（配列番号２７７）
ＡＴＴＣＴＴＧＡＣＣＣＡＧＣＴＣ
配列番号７３の標的部位（配列番号２７８）
ＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴＧＡＣＣ
配列番号７４の標的部位（配列番号２７９）
ＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴＧ
配列番号７５の標的部位（配列番号２８０）
ＡＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣ
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２７６のヌクレオチド２６８～２８３内に含まれるヌクレオチド配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２８１に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
配列番号１３４の標的部位（配列番号２８１）
ＧＣＣＡＴＧＴＧＡＧＣＴＴＧＡＧ
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、配列番号２９１および配列番号２９２からなる群から選択される配列に相補的、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、８～４０、１２～４０、１２～２０、１０～２０、１４～１８、１２～１８または１６～１８ヌクレオチド長である。
連続ヌクレオチド配列は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１２ヌクレオチド長、例えば１２～１６または１２～１８ヌクレオチド長の長さである。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ長さである。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列からなる。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列である。
いくつかの実施態様では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７６内に含まれるヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。
いくつかの実施態様では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６８内に含まれるヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。
いくつかの実施態様では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６２内に含まれるヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。
いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９および配列番号２８０からなる群から選択される配列に対して完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７７に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７８に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７９に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２８０に完全に相補的である。
いくつかの実施態様では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７６のヌクレオチド２５６～２８３内に含まれるヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２８１に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも８個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも９個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１１個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１２個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１３個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１４個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２、またはその少なくとも１５個の連続ヌクレオチドからなる群から選択される配列である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７１である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７３である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７４である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７５である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１３４である。
本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、連続ヌクレオチド配列が、配列番号２８９および配列番号２９０からなる群から選択される、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、単離、精製または製造されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドのミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）又はトータルマー（ｔｏｔａｌｍｅｒ）であるか、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドのミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）又はトータルマー（ｔｏｔａｌｍｅｒ）を含む。いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、ミックスマーまたはトータルマーである。
本発明は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合した少なくとも１つのコンジュゲート部分を含むコンジュゲートを提供する。
本発明は、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合したアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明によるコンジュゲートの薬学的に許容され得る塩を提供する。
本発明は、薬学的に許容され得る塩の形態である、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、薬学的に許容され得る塩は、ナトリウム塩、カリウム塩またはアンモニウム塩であり得る。
本発明は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明によるコンジュゲートの薬学的に許容され得るナトリウム塩を提供する。
本発明は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明によるコンジュゲートの薬学的に許容され得るカリウム塩を提供する。
本発明は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明によるコンジュゲートの薬学的に許容され得るアンモニウム塩を提供する。
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートと、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩、および／またはアジュバントとを含む、医薬組成物を提供する。
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートと、薬学的に許容され得る塩とを含む、医薬組成物を提供する。例えば、塩は、ナトリウム塩、カリウム塩またはアンモニウム塩などの金属カチオンを含み得る。
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートまたは本発明の薬学的に許容され得る塩と、水性希釈剤または溶媒とを含む、本発明による医薬組成物を提供する。
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドプまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の薬学的に許容され得る塩のリン酸緩衝生理食塩水等の溶液を提供する。適切には、本発明のリン酸緩衝生理食塩水等の溶液は滅菌溶液である。
本発明は、プログラニュリンを発現している細胞においてエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの発現を増強するための方法であって、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、方法はインビトロ法である。いくつかの実施形態において、方法はインビボ法である。
いくつかの実施形態において、細胞はヒト細胞または哺乳動物細胞のいずれかである。
本発明は、プログラニュリンハプロ不全または関連障害を処置または予防する方法であって、治療または予防有効量の本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を、プログラニュリンハプロ不全または関連障害に苦しむまたは罹り易い対象に投与することを含む、方法を提供する。
本発明は、神経疾患を処置または予防する方法であって、治療または予防有効量の本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を、神経疾患に苦しむまたは罹り易い対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、神経疾患はＴＤＰ－４３病態であり得る。
本発明は、医薬として使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、治療において使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、医薬として使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を提供する。
本発明は、治療において使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を提供する。
本発明は、神経疾患の処置において使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を提供する。一実施形態において、神経疾患はＴＤＰ－４３病態であり得る。
本発明は、プログラニュリンハプロ不全または関連障害の処置または予防において使用するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物を提供する。
本発明は、神経疾患の処置または予防用の医薬の調製のための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物の使用を提供する。一実施形態において、神経疾患はＴＤＰ－４３病態であり得る。
本発明は、プログラニュリンハプロ不全または関連障害の処置または予防用の医薬の調製のための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲート、または本発明の塩、または本発明の医薬組成物の使用を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の方法、使用、または使用のためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、神経病理学的前頭側頭葉変性症または神経炎症を処置するためのものである。他の実施形態において、本発明の方法、使用、または使用のためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、自閉症、海馬硬化性認知症、ダウン症候群、ハンチントン病、ポリグルタミン病、脊髄小脳失調症３、ミオパチーまたは慢性外傷性脳症の処置のためのものである。
一局面において、本発明は、配列番号７１に対応する構造を有するオリゴヌクレオチドプログラニュリンアゴニストを含む：
別の局面において、本発明は、配列番号７３に対応する構造を有するオリゴヌクレオチドプログラニュリンアゴニストを含む：
別の局面において、本発明は、配列番号７４に対応する構造を有するオリゴヌクレオチドプログラニュリンアゴニストを含む：
別の局面において、本発明は、配列番号７５に対応する構造を有するオリゴヌクレオチドプログラニュリンアゴニストを含む：
別の局面において、本発明は、配列番号１３４に対応する構造を有するオリゴヌクレオチドプログラニュリンアゴニストを含む：
別の局面において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧａＧｃｔＧｇｇＴｃＡａｇＡＡＴ（配列番号７１）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
別の局面において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧｇｔＣａａＧａＡｔｇＧｔｇＴＧ（配列番号７３）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
別の局面において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＣａＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴＣ（配列番号７４）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
別の局面において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴｃｃＣ（配列番号７５）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
別の局面において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＣｔｃＡａｇＣｔｃＡｃＡｔｇＧＣ（配列番号１３４）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
図１は、ＨＰＲＴ１と比べたプログラニュリンのエクソン１－エクソン２ ｍＲＮＡスプライス形態およびＨＰＲＴ１と比べたイントロン１－エクソン２ ｍＲＮＡスプライス形態の発現レベルを示す。配列番号１～４９が図１ａに示されている。配列番号５０～１０９が図１ｂに示されている。配列番号１１０～１６９が図１ｃに示されている。配列番号１７０～２２９が図１ｄに示されている。配列番号２３０～２７５が図１ｅに示されている。 図２は、５日間のオリゴヌクレオチドでの処理後のプログラニュリン発現レベルを示す。 図３は、国際公開第２０２０／１９１２１２号からのオリゴヌクレオチドＳ７およびＳ１０と比較した５日間のオリゴヌクレオチドでの処理後のプログラニュリン発現レベルを示す。 図４は、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４の配列局在性を示す。 図５は、４日間のオリゴヌクレオチドでの処理後のプログラニュリン発現レベルを示す。 図６は、国際公開第２０２０／１９１２１２号からのオリゴヌクレオチドＳ７、Ｓ１０およびＳ３７と比較した４日間のオリゴヌクレオチドでの処理後のプログラニュリン発現レベルを示す。 図７は、Ｍｏｃｋトランスフェクト細胞と比べたＨ４細胞におけるトランスフェクションの４８ｈ後のＧＲＮ ｍＲＮＡにおける５ ＵＴＲスプライスバリアントの存在量を定量化したｄｄＰＣＲデータを示す。灰色バーはイントロン１の保持を伴うスプライスバリアント（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）、黒色バーはＥｘ１－Ｅｘ２のスプライシングを伴うスプライスバリアント（Ｅｘ１－Ｅｘ２）の存在量を定量化したものである。配列番号７３（図７ａ）、配列番号７４（図７ｂ）および配列番号７５（図７ｃ）は、イントロン１保持（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）の用量依存的なスキッピングおよびＥｘ１－Ｅｘ２スプライスバリアントにおける増加を示す。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物（図７ｄ）は、イントロン１保持のスキッピングに対して効果を示さないか、または限られた効果を示す。 図８は、Ｍｏｃｋトランスフェクト細胞と比べたＨ４細胞におけるトランスフェクションの４８ｈ後のＧＲＮ ｍＲＮＡにおける５ ＵＴＲスプライスバリアントの存在量を定量化したｄｄＰＣＲデータを示す。灰色バーはイントロン１の保持を伴うスプライスバリアント（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）、黒色バーはＥｘ１－Ｅｘ２のスプライシングを伴うスプライスバリアント（Ｅｘ１－Ｅｘ２）の存在量を定量化したものである。配列番号２８９（図８ａ）および配列番号２９０（図８ｂ）は、イントロン１保持（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）の用量依存的なスキッピングおよびＥｘ１－Ｅｘ２スプライスバリアントにおける増加を示す。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物は、イントロン１保持のスキッピングに対して効果を示さなかったか、または限られた効果を示した（図８ｃ）。 図９は、ＰＢＳトランスフェクト細胞と比べたミクログリア細胞における５日のジムノシス（ｇｙｍｎｏｓｉｓ）後のＧＲＮ ｍＲＮＡにおける５ ＵＴＲスプライスバリアントの存在量を定量化したｄｄＰＣＲデータを示す。灰色バーはイントロン１の保持を伴うスプライスバリアント（イントロン１保持）、黒色バーはエクソン１－エクソン２のスプライシングを伴うスプライスバリアント（エクソン１－エクソン２）の存在量を定量化したものである。配列番号２９０は、イントロン１保持の用量依存的なスキッピングおよびエクソン１－エクソン２スプライスバリアントにおける増加を示した。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物は、イントロン１保持のスキッピングに対して効果を示さなかったか、または限られた効果を示した。ギャップマー対照は、両方のスプライスバリアントの予想された用量依存的なノックダウンを示す。 図１０は、化合物ＩＤ＃２９０で起こり、国際公開第２０２０／１９１９１２号による化合物Ｓ１０で起こらなかったスプライススイッチに対応するＳａｓｈｉｍｉプロットを示す。
定義
オリゴヌクレオチド
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、２つ以上の共有結合したヌクレオシドを含む分子として当業者によって一般的に理解されるように定義される。そのような共有結合ヌクレオシドは、核酸分子又はオリゴマーとも称され得る。
オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、その後の精製及び単離によって研究室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合には、共有結合したヌクレオチド又はヌクレオシドの核酸塩基部分の配列又は順序、若しくはその修飾が言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のものであり、化学的に合成され、通常は精製又は単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ以上の修飾ヌクレオシドを含んでもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、１以上のホスホロチオエートのヌクレオシド間結合のような、１以上の修飾ヌクレオシド間結合を含むことができる。
アンチセンスオリゴヌクレオチド
本明細書で用いられる「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、標的核酸、特に標的核酸上の連続配列にハイブリダイズすることによって標的遺伝子の発現を調節することができるオリゴヌクレオチドとして定義される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的に二本鎖ではなく、したがってｓｉＲＮＡでもｓｈＲＮＡでもない。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは一本鎖であってもよい。本発明の単鎖オリゴヌクレオチドは、自己内又は自己間の相補性の程度がオリゴヌクレオチドの全長にわたって約５０％未満である限り、ヘアピン又は分子間二重構造（同じオリゴヌクレオチドの２つの分子間の二重鎖）を形成することができるものと理解される。
特定の文脈において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドと称され得る。
いくつかの実施形態では、本発明の一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオシドを含まなくてもよい。
有利には、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ以上の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含む。さらに、本発明のいくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、修飾されていないヌクレオシドがＤＮＡヌクレオシドであることが有利であり得る。
連続ヌクレオチド配列
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、オリゴヌクレオチドモチーフ配列であり得る、またはそれを含み得る標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書では「連続核酸塩基配列」という用語と互換的に使用される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが連続ヌクレオチド配列を構成する。連続ヌクレオチド配列は、標的核酸もしくは標的配列、または標的部位配列に相補的であり、場合によっては完全に相補的である本発明のオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの配列である。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２７６である。
配列番号２７６は、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のエクソン１、イントロン１およびエクソン２の配列である。
いくつかの実施形態において、標的配列は、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６８であるか、または配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６８を含む。
いくつかの実施形態において、標的配列は、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６２であるか、または配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６２を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２７７であるか、または配列番号２７７を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２７８であるか、または配列番号２７８を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２７９であるか、または配列番号２７９を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２８０であるか、または配列番号２８０を含む。
いくつかの実施形態において、標的配列は、配列番号２７６のヌクレオチド２６８～２８３であるか、または配列番号２７６のヌクレオチド２６８～２８３を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２８１であるか、または配列番号２８１を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２９１であるか、または配列番号２９１を含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号２９２であるか、または配列番号２９２を含む。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列を含み、更なるヌクレオチド、例えば、官能基（例えばコンジュゲート基）を連続ヌクレオチド配列に結合するのに使用され得るヌクレオチドリンカー領域を必要に応じて含んでいてもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に対して相補的であっても相補的でなくてもよい。オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、それ自体としてオリゴヌクレオチドより長くなることはできないことと、オリゴヌクレオチドは連続ヌクレオチド配列より短くなることはできないことと、が理解される。
ヌクレオチド及びヌクレオシド
ヌクレオチド及びヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドの構成単位であり、本発明の目的のために、天然に存在するヌクレオチド及びヌクレオシドと、天然に存在しないヌクレオチド及びヌクレオシドとの両方を含む。本来、ＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分及び１つ以上のリン酸基（ヌクレオシドに存在しない）を含む。ヌクレオシド及びヌクレオチドはまた、「単位」又は「モノマー」と互換的に称されてもよい。
修飾ヌクレオチド
好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含み得る。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオシド」又は「ヌクレオシド修飾」という用語は、糖部分又は（核酸）塩基部分の１つ以上の修飾の導入によって、同等のＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの修飾ヌクレオシドの１つ以上は、修飾された糖部分を含み得る。修飾ヌクレオシドという用語はまた、「ヌクレオシド類縁体」又は修飾「ユニット」又は修飾「モノマー」という用語と互換的に使用されてもよい。非修飾ＤＮＡ又はＲＮＡ糖部分を有するヌクレオシドは、本明細書ではＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドの塩基領域に修飾を有するヌクレオシドは、それらがワトソン・クリック塩基対合可能な場合には、依然として一般的にＤＮＡ又はＲＮＡと称される。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに使用され得る例示的な修飾ヌクレオシドとしては、ＬＮＡ、２’－Ｏ－ＭＯＥおよびモルホリノヌクレオシド類似体が挙げられる。
修飾ヌクレオシド間結合
好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。
「修飾ヌクレオシド間結合」という用語は、２つのヌクレオシドを共に共有結合する、ホスホジエステル（ＰＯ）結合以外の結合として当業者に一般的に理解されるように定義される。したがって、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１以上のホスホロチオエートのヌクレオシド間結合のような、１以上の修飾ヌクレオシド間結合を含むことができる。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％又はそれよりも多くのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートである。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合の全てが、ホスホロチオエートである。
好都合には、アンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり得るか、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり得る。
核酸塩基
核酸塩基という用語は、ヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えばウラシル、チミン及びシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの際に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、及びヒポキサンチン等の天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しないバリアントとの両方を指す。このようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５ ａｎｄ Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。
いくつかの実施形態では、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを修飾プリン又はピリミジン、例えば置換プリン又は置換ピリミジン、例えばイソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変えることにより修飾される。
核酸塩基部分は、各々の対応する核酸塩基の文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、又はＵで示すことができ、各文字は、任意に、同等の機能の修飾核酸塩基を含み得る。例えば、例示したオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチルシトシンから選択される。任意に、ＬＮＡギャップマーについて、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。
修飾オリゴヌクレオチド
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチドであり得る。
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド及び／又は修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを表す。「キメラオリゴヌクレオチド」という用語は、糖修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを記述するために文献で使用されている用語である。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドがキメラオリゴヌクレオチドであることが有利であり得る。
相補性
用語「相補性」は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのＷａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋの塩基対合の能力を記述する。Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）及びアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。
オリゴヌクレオチドは修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでいてもよく、例えば５－メチルシトシンは、しばしばシトシンの代わりに用いられ、したがって、相補性という用語は、非修飾核酸塩基と修飾核酸塩基との間のワトソン・クリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏら（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ第４５巻第２０５５頁およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。
用語「％相補的」とは、本明細書で使用される場合、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、標的配列または配列モチーフ）に対して相補的である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセント）を指す。したがって、相補性のパーセンテージは、２つの配列間（標的配列５’－３’と３’－５’からのオリゴヌクレオチド配列とを整列させた場合）で相補的である（ワトソン・クリック塩基対から）整列した核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。このような比較において、整列（塩基対を形成）しない核酸塩基／ヌクレオチドは、ミスマッチと称される。挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。相補性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がワトソン・クリック塩基対合を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されるであろう（例えば、５’－メチルシトシンは、％同一性の計算の目的のために、シトシンと同一であるとみなされる）。
本発明内で、「相補的」という用語は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物に対して少なくとも約８０％相補的であるか、または少なくとも約９０％相補的であることを必要とする。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％相補的であり得る。言い換えれば、いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ、２つ、３つまたはそれを超えるミスマッチを含んでいてもよく、ミスマッチは、その標的と塩基対を形成しない本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド内のヌクレオチドである。
「完全に相補的な」という用語は、１００％の相補性を指す。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡに相補的である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、有利には、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のイントロン１配列に相補的である。ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のエクソン１、イントロン１およびエクソン２の配列は、本明細書において配列番号２７６として例示される。配列番号２７６は参照配列として本明細書に提供され、標的プログラニュリン核酸は、配列番号２７６の対立遺伝子バリアント、例えばヒトプログラニュリン核酸配列中に１つ以上の多型を含む対立遺伝子バリアントであり得ることが理解されよう。
同一性
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。
したがって、同一性のパーセンテージは、２つの配列（本発明の化合物の連続ヌクレオチド配列および参照配列における）の間で同一の（一致する）整列された核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。したがって、同一性の百分率＝（一致数×１００）／整列領域（例えば、連続ヌクレオチド配列）の長さ。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の同一性の百分率の計算において許容されない。同一性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がＷａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されよう（例えば、５－メチルシトシンは、同一性％の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。
ハイブリダイゼーション
本明細書で使用される「ハイブリダイズ」または「ハイブリダイズする」という用語は、２つの核酸鎖（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび標的核酸）が対向する鎖上の塩基対間に水素結合を形成することにより二重鎖を形成することと理解されるべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性は、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される、融解温度（Ｔｍ）によって説明されることが多い。生理学的条件では、Ｔｍは親和性に厳密には比例しない（ＭｅｒｇｎｙおよびＬａｃｒｏｉｘ、２００３、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ１３：５１５～５３７）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、ここで、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の反応の非常に低いΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水性濃度が１Ｍ、ｐＨが７、温度が３７℃の反応に関連したエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発反応であり、自発反応の場合、ΔＧ°はゼロ未満である。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６－３８及びＨｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されているように、等温滴定型熱量測定（ＩＴＣ）により、実験的に測定することができる。当業者は、ΔＧ°測定のために市販の装置が入手可能であることを知るであろう。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０－１４６５に記載されているように、Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６及びＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５に記載されている適切に誘導した熱力学パラメータを使用して、最近接モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いることにより数値的に推定することもできる。
いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌ未満の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。
いくつかの実施形態において、ハイブリダイゼーションの程度または強度は、標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°により測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌの範囲未満、例えば－１５ｋｃａｌ未満、例えば－２０ｋｃａｌ未満、及び例えば－２５ｋｃａｌ未満の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズし得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、－１０～－６０ｋｃａｌ、例えば－１２～－４０、例えば－１５～－３０ｋｃａｌ、または－１６～－２７ｋｃａｌ、例えば－１８～－２５ｋｃａｌの推定ΔＧ°値で、標的核酸にハイブリダイズする。
高親和性修飾ヌクレオシド
高親和性修飾ヌクレオシドは、修飾されたヌクレオチドであり、これは、オリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、例えば融解温度（Ｔｍ）によって測定されるように、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２℃、より好ましくは＋１．５～＋１０℃、最も好ましくは＋３～＋８℃の融解温度の上昇をもたらす。数多くの高親和性修飾ヌクレオシドが当該技術分野において知られており、例えば、多くの２’置換ヌクレオシド及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照）。
糖修飾
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖部分、すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合の糖部分の修飾を有する１つ以上のヌクレオシドを含み得る。
リボース糖部分の修飾を有する数多くのヌクレオシドは、親和性及び／又はヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドのある特定の性質を改善することを主な目的として作製されてきた。
このような修飾には、例えばヘキソース環（ＨＮＡ）又は二環式環（典型的には、リボース環（ＬＮＡ）のＣ２とＣ４炭素の間にバイラジカル架橋を有する）、又は典型的にはＣ２とＣ３炭素の間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）で置き換えることにより、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えばビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号）又は三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号）が含まれる。修飾ヌクレオシドには、例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）の場合には、糖部分が非糖部分で置き換えられているヌクレオシド、又はモルホリノ核酸も含まれる。
糖修飾には、リボース環上の置換基を水素以外の基、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオシドに天然に存在する２’－ＯＨ基に変更することによる修飾も含まれる。置換基は、例えば２’、３’、４’又は５’位で導入され得る。
２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ若しくは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）、又はリボース環の２’炭素と第２の炭素との間に架橋を形成できる２’結合バイラジカルを含むヌクレオシド、例えばＬＮＡ（２’－４’バイラジカル架橋）ヌクレオシドである。
実際、２’糖置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、数多くの２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれた際に有益な特性を有することが見出されている。例えば、２’修飾ヌクレオシドは、結合親和性の向上、及び／又はヌクレアーゼ耐性の増大をオリゴヌクレオチドに提供することができる。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ及び２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。更なる例については、例えばＦｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドの例示である。
本発明に関して、２’置換糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡのような２’架橋ヌクレオシドを含まない。
ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡヌクレオシド）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’を結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドであり、これはリボース環の立体配座を制限又は固定する。これらのヌクレオシドはまた、文献において、架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースのコンホメーションの固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補二重鎖の融解温度を測定することによって、日常的に決定され得る。
非限定的な、例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第００／０４７５９９号、国際公開第２００７／１３４１８１号、国際公開第２０１０／０７７５７８号、国際公開第２０１０／０３６６９８号、国際公開第２００７／０９００７１号、国際公開第２００９／００６４７８号、国際公開第２０１１／１５６２０２号、国際公開第２００８／１５４４０１号、国際公開第２００９／０６７６４７号、国際公開第２００８／１５０７２９号、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６，Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８、及びＷａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１６，５９，９６４５－９６６７に開示されている。
更なる非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドを、スキーム１に開示する。
スキーム１：
特定のＬＮＡヌクレオシドは、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、６’－メチル－β－Ｄ－オキシＬＮＡ、例えば（Ｓ）－６’－メチル－β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（ＳｃＥＴ）及びＥＮＡである。
特定の有利なＬＮＡは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡである。
モルホリノオリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、モルホリノヌクレオシドを含むか、またはモルホリノヌクレオシドからなる（すなわち、モルホリノオリゴマーであり、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）として）。スプライス調節モルホリノオリゴヌクレオチドは、臨床使用が承認されており、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置に使用される、ＤＭＤのフレームシフト変異を標的とする３０ｎｔモルホリノオリゴヌクレオチドである、エテプリルセンを参照のこと。モルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、以下の４つの連続するモルホリノヌクレオチドの説明に示されるように、ホスホロジアミデート基を介して連結されたメチレンモルホリン環など、リボースではなく６員のモルホリン環に結合した核酸塩基を有する。
いくつかの実施形態において、本発明のモルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、２０～４０モルホリノヌクレオチド長、例えば、２５～３５モルホリノヌクレオチド長であり得る。
ＲＮａｓｅ Ｈの活性及び動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にあるときにＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供し、これはＲＮａｓｅＨを動員する能力の決定に使用され得る。典型的には、オリゴヌクレオチドが、相補的標的核酸配列が提供された場合に、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド中のすべてのモノマー間にホスホロチオエート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、国際公開第０１／２３６１３号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用したときに決定された初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％または２０％超のｐｍｏｌ／ｌ／分で測定された初期速度を有する場合に、このオリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅ Ｈを動員することができるとみなされる。ＲＨａｓｅ Ｈ活性の決定に使用するために、組換えＲＮａｓｅ Ｈ１が、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、２’糖修飾ヌクレオシド、典型的には高親和性２’糖修飾ヌクレオシド、例えば２－Ｏ－ＭＯＥおよび／またはＬＮＡを含む領域が５’および３’に隣接するＤＮＡヌクレオシド（典型的には少なくとも５または６個の連続するＤＮＡヌクレオシド）の領域を含むギャップマーオリゴヌクレオチドと同様に、ＲＮａｓｅＨを効果的に動員することが公知である。スプライシングの効果的な調節のために、プレｍＲＮＡの分解は望ましくなく、したがって、標的のＲＮａｓｅＨ分解を回避することが好ましい。したがって、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨ動員ギャップマーオリゴヌクレオチドではない。
ＲＮａｓｅＨリクルートは、オリゴヌクレオチド中の連続ＤＮＡヌクレオチドの数を制限することによって回避され得るので、模倣物およびトータルマー設計が使用され得る。好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列は、３個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。さらに好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列は、４個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。さらに好都合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列は、２個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。
ミックスマーおよびトータルマー
スプライス調節のために、ＲＮＡａｓｅＨを動員しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することがしばしば有利である。ＲＮａｓｅＨ活性はＤＮＡヌクレオチドの連続配列を必要とするので、アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、３個を超えるか、または４個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドの領域を含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計することによって達成され得る。これは、２’糖修飾ヌクレオシドなどの糖修飾ヌクレオシドと、１、２もしくは３個のＤＮＡヌクレオシドなどのＤＮＡヌクレオシドの短い領域とを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオシド領域をミックスマー設計で使用することによって達成され得る。ミックスマーは、本明細書において、ヌクレオシドが１ＬＮＡヌクレオシドと１ＤＮＡヌクレオシドとの間、例えば５’および３’末端ＬＮＡヌクレオシドを有するＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＬとの間で交互になる各第２の設計、ならびに各第３のヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドであるＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬなどの各第３の設計によって例示される。
トータルマーは、ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドを含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列であり、例えば、治療的使用のための効果的なスプライス調節因子であると報告されている完全ＭＯＥホスホロチオエート、例えばＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭ（Ｍ＝２’－Ｏ－ＭＯＥ）などの２’－Ｏ－ＭＯＥヌクレオシドのみを含んでもよい。
あるいは、ミックスマーは、ＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬなどの修飾ヌクレオシドの混合物を含んでいてもよく、式中、Ｌ＝ＬＮＡおよびＭ＝２’－Ｏ－ＭＯＥヌクレオシドである。
有利には、ミックスマーおよびトータルマー中のヌクレオシド間ヌクレオシドはホスホロチオエートであってもよく、またはミックスマー中のヌクレオシド結合の大部分はホスホロチオエートであってもよい。ミックスマーおよびトータルマーは、例として、ホスホジエステルまたはホスホロジチオエートなどの他のヌクレオシド間結合を含み得る。
オリゴヌクレオチドにおける領域Ｄ’又はＤ’’
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態において、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばミックスマーまたはトータルマー領域、ならびにさらに５’および／または３’ヌクレオシドを含むか、またはそれからなり得る。さらなる５’および／または３’ヌクレオシドは、標的核酸に相補的、例えば完全に相補的であってもよく、または相補的、例えば完全に相補的でなくてもよい。このような更なる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、本明細書では領域Ｄ’及びＤ’’と称され得る。
領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、連続ヌクレオチド配列、例えばミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）又はトータルマー（ｔｏｔｏａｌｍｅｒ）をコンジュゲート部分又は別の官能基に連結する目的のために使用され得る。連続ヌクレオチド配列をコンジュゲート部分と連結するために使用される場合、それは生体切断可能なリンカーとして働くことができる。あるいは、それはエキソヌクレアーゼ保護を提供するために、または合成もしくは製造を容易にするために使用されてもよい。
領域Ｄ’又はＤ’’は、独立して、１、２、３、４、又は５の追加のヌクレオチドを含むか、又はそれからなり、これは、標的核酸に相補的であっても、相補的でなくてもよい。Ｆ又はＦ’領域に隣接するヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの糖修飾ヌクレオチドではなく、若しくはこれらの塩基修飾バージョンでもない。Ｄ’またはＤ’’領域は、ヌクレアーゼ感受性の生体切断可能なリンカーとしての役割を果たし得る（リンカーの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態において、追加の５’及び／又は３’末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で結合されており、ＤＮＡ又はＲＮＡである。領域Ｄ’又はＤ’’としての使用に好適なヌクレオチドベースの生体切断可能なリンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号に開示されており、これには例としてホスホジエステル結合ＤＮＡジヌクレオチドが含まれる。ポリオリゴヌクレオチド構築物における生体切断可能なリンカーの使用は国際公開第ＷＯ２０１５／１１３９２２号に開示されており、それらは複数のアンチセンス構築物を単一のオリゴヌクレオチド内で結合するのに使用されている。
一実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミックスマーまたはトータルマーを構成する連続ヌクレオチド配列に加えて、領域Ｄ’および／またはＤ’’を含む。
いくつかの実施形態において、領域Ｄ’またはＤ’’とミックスマーまたはトータルマー領域との間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。
コンジュゲート
本発明は、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合したアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、これは本発明のコンジュゲートと称され得る。
本明細書で使用される「コンジュゲート」という用語は、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分または領域Ｃまたは第３の領域）に共有結合したアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。コンジュゲート部分は、任意に領域Ｄ’またはＤ’’などのリンカー基を介して、アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合していてもよい。
オリゴヌクレオチドコンジュゲート及びそれらの合成は、Ｍａｎｏｈａｒａｎ、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ編、第１６章、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．（２００１年）及びＭａｎｏｈａｒａｎ、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」（２００２年）第１２巻第１０３頁による包括的レビューにおいても報告されている。
いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分）は、炭水化物（例えば、ＧａｌＮＡｃ）、細胞表面受容体リガンド、原薬、ホルモン、親油性物質、ポリマー、タンパク質、ペプチド、毒素（例えば、細菌毒素）、ビタミン、ウイルスタンパク質（例えば、カプシド）、またはそれらの組合せからなる群から選択される。
リンカー
結合又はリンカーは、１つ以上の共有結合を介して目的の１つの化学基又はセグメントを目的の別の化学基又はセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート部分は、直接または連結部分（例えば、リンカーまたはテザー）を介してアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合され得る。リンカーは、第３の領域、例えばコンジュゲート部分（領域Ｃ）を、第１の領域、例えば、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列（領域Ａ）に共有結合する役割を果たす。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明のコンジュゲートまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、任意に、標的核酸に対して相補的なオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列（領域Ａまたは第１の領域）と、コンジュゲート部分（領域Ｃまたは第３の領域）との間に位置するリンカー領域（第２の領域または領域Ｂおよび／または領域Ｙ）を含み得る。
領域Ｂは、哺乳動物の体内で通常遭遇する又は遭遇するものに類似した条件下で切断可能である生理学的に不安定な結合を含むか、又はそれからなる生体切断可能なリンカーを指す。生理学的に不安定なリンカーが化学的変換（例えば、切断）を受ける条件には、ｐＨ、温度、酸化若しくは還元条件又は薬剤などの化学条件、及び哺乳動物細胞で見られる又は遭遇するものに類似した塩濃度が含まれる。哺乳動物の細胞内条件には、タンパク質分解酵素又は加水分解酵素又はヌクレアーゼ等の哺乳動物細胞に通常存在する酵素活性の存在も含まれる。一実施形態において、生体切断可能なリンカーは、Ｓ１ヌクレアーゼ切断の影響を受けやすい。いくつかの実施形態において、ヌクレアーゼ感受性リンカーは、少なくとも２つの連続ホスホジエステル結合を含むＤＮＡヌクレオシドなどの１～５個のヌクレオシドを含む。ホスホジエステルを含有する生体切断可能なリンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号により詳細に記載されている。
領域Ｙは、必ずしも生体切断可能ではないが、主にコンジュゲート部分（領域Ｃ又は第３の領域）をオリゴヌクレオチド（領域Ａ又は第１の領域）に共有結合する役割を果たすリンカーを指す。領域Ｙリンカーは、エチレングリコール、アミノ酸単位又はアミノアルキル基などの反復単位の鎖構造又はオリゴマーを含み得る。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、以下の局所要素Ａ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｙ－Ｃ、Ａ－Ｙ－Ｂ－Ｃ又はＡ－Ｙ－Ｃから構築することができる。いくつかの実施形態では、リンカー（領域Ｙ）は、例えばＣ６～Ｃ１２アミノアルキル基を含むＣ２～Ｃ３６アミノアルキル基などのアミノアルキルである。いくつかの実施形態において、リンカー（領域Ｙ）は、Ｃ６アミノアルキル基である。
処置
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、既存の疾患（例えば、本明細書で言及される疾患又は障害）の処置、又は疾患の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、すなわち予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）の両方を指す。したがって、本明細書で言及される処置は、いくつかの実施形態において、予防的であり得ることが認識されよう。
ＴＤＰ－４３病理
ＴＤＰ－４３病態は、ＴＤＰ－４３の発現の減少または異常に関連する疾患であり、しばしば細胞質ＴＤＰ－４３、特に過剰リン酸化およびユビキチン化ＴＤＰ－４３の増加に関連する。
ＴＤＰ－４３病態に関連する疾患としては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、自閉症、海馬硬化性認知症、ダウン症候群、ハンチントン病、ポリグルタミン病、例えば脊髄小脳失調症３、ミオパチーおよび慢性外傷性脳症が挙げられる。
発明の詳細な説明
アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物を標的とすることは、プログラニュリンエクソン１－エクソン２スプライスｍＲＮＡの発現を増加させること、プログラニュリンイントロン１－エクソン２スプライスｍＲＮＡ（イントロン１の２７１ヌクレオチド５’断片を保持する）の発現を減少させること、および／またはエクソン１－エクソン２ ｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２ ｍＲＮＡとの比を変更することができることを本発明者らは同定した。これは、高親和性糖修飾ヌクレオシド、例えば高親和性２’糖修飾ヌクレオシド、例えばＬＮＡヌクレオシドまたは２’－Ｏ－メトキシエチル（ＭＯＥ）ヌクレオシドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドが使用される場合に特に該当する。
本明細書に記載されるのは、アンチセンスオリゴヌクレオチドにより標的とされ得るヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ上に存在する標的部位である。記載されるのはまた、これらの標的部位に相補的、例えば完全に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
理論により縛られることを望まないが、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、これらの領域に結合し、エクソン１－エクソン２スプライスバリアントの産生に影響する、例えばそれを増加させることにより、プログラニュリンエクソン１－エクソン２スプライスｍＲＮＡの発現を増加させること、プログラニュリンイントロン１－エクソン１スプライスｍＲＮＡの発現を減少させること、および／またはエクソン１－エクソン２ ｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２ ｍＲＮＡとの比を変更することができると考えられる。
オリゴヌクレオチド、例えば、ＲＮａｓｅＨリクルート一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡを阻害するために当技術分野で広く使用されており、すなわち、それらの相補的核酸標的のアンタゴニストとして使用されている。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、モジュレーターとして記載され得る、すなわち、それらはそれらの相補的標的、プログラニュリンプレｍＲＮＡの特定のスプライスバリアントの発現を変更し、それにより活性プログラニュリンタンパク質の産生を増加させる。
プログラニュリンイントロン１－エクソン２スプライスバリアントの低減された発現は望ましく、その理由は、成熟ｍＲＮＡ配列内のイントロン、例えばイントロン１の包含はナンセンス媒介性ｍＲＮＡ分解（ＮＭＤ）をもたらすからである。
イントロン１の５’部分を保持するスプライスバリアントよりもプログラニュリンエクソン１－エクソン２の増強された発現は望ましく、その理由は、エクソン１－エクソン２スプライスバリアントは、エクソン２におけるカノニカルな下流ＡＵＧ（オープンリーディングフレーム）の上流の２つのＡＵＧ部位を有するイントロン１の２７１ヌクレオチド断片を含まないからである。これらの２つの上流ＡＵＧ部位からの翻訳はプログラニュリンタンパク質をコードせず、未熟な終止コドンに起因して転写物はナンセンス媒介性ｍＲＮＡ分解（ＮＭＤ）を起こし得る。エクソン１－エクソン２スプライスバリアントへのスプライシングの変化は、代わりに活性バージョンのプログラニュリンタンパク質の翻訳をもたらす。プログラニュリンは神経保護タンパク質であり、その産生の増加は、広範囲の神経障害、例えばＴＤＰ－４３病理を処置するために使用され得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの産生を増強し得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生と比べて少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生と比べて少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％またはより大きく増強し得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、イントロン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生を低減させ得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、イントロン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのイントロン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生と比べて少なくとも約１０％低減させ得る。他の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、イントロン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのイントロン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントｍＲＮＡの産生と比べて少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％またはより大きく低減させ得る。
プログラニュリンエクソン１－エクソン２スプライスバリアントの増強された発現は、活性バージョンのプログラニュリンタンパク質の翻訳をもたらすはずである。ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、プログラニュリンタンパク質の産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのプログラニュリンタンパク質の産生と比べて少なくとも約１０％増加させ得る。他の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、プログラニュリンタンパク質の産生を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのプログラニュリンタンパク質の産生と比べて少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％またはより大きく増加させ得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比を変更し得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのエクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比と比べて少なくとも約１０％変更し得る。他の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの非存在下でのエクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比と比べて少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％またはより大きく変更し得る。
ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比を少なくとも約１．２に変更し得る。ある特定の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとイントロン１－エクソン２プログラニュリンｍＲＮＡとの比を少なくとも約１．３、少なくとも約１．４、少なくとも約１．５、少なくとも約１．６、少なくとも約１．７、少なくとも約１．８、少なくとも約１．９、少なくとも約２．０またはより大きい値に変更し得る。
いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０個の連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの全ヌクレオチド配列は、連続ヌクレオチド配列である。
１つの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４からなる群から選択される配列であり得る。本発明はまた、その少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４または少なくとも１５個の連続ヌクレオチドの断片を含む、これらの連続ヌクレオチド配列の断片を企図する。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列は、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４からなる群から選択される配列を含むか、またはそれからなる。配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４に示される配列は、塩基対形成において示される核酸塩基として機能する修飾核酸塩基を含んでいてもよく、例えば、メチルシトシンの代わりに５－メチルシトシンが使用され得ることが理解されるであろう。イノシンは、ユニバーサル塩基として使用され得る。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列は、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一性、好ましくは１００％同一性である８～３０または８～４０ヌクレオチド長を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長であり得る。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列は、配列番号２８９および配列番号２９０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一性、好ましくは１００％同一性である８～３０または８～４０ヌクレオチド長を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長であり得る。
連続核酸塩基配列（モチーフ配列）は、例えばヌクレアーゼ耐性及び／又は標的核酸に対する結合親和性を増大させるために修飾され得ることが理解される。
修飾ヌクレオシド（高親和性修飾ヌクレオシドなど）がオリゴヌクレオチド配列に組み込まれるパターンは、一般にオリゴヌクレオチド設計と称される。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを用いて設計される。高親和性修飾ヌクレオシドを用いることが有利である。
一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド、例えば少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、または少なくとも１６個の修飾ヌクレオシドを含む。
一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１～１０個の修飾ヌクレオシド、例えば２～９個の修飾ヌクレオシド、例えば３～８個の修飾ヌクレオシド、例えば４～７個の修飾ヌクレオシド、例えば６又は７個の修飾ヌクレオシドを含む。好適な修飾は、「修飾ヌクレオシド」、「高親和性修飾ヌクレオシド」、「糖修飾」、「２’糖修飾」、及びロックド核酸（ＬＮＡ）の「定義」セクションに記載されている。
一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを含む。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される１つ以上の２’糖修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシド（複数可）の１つ又は複数がロックド核酸（ＬＮＡ）である場合、有利である。
更なる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。好適なヌクレオシド間修飾は、「修飾ヌクレオシド間結合」の「定義」セクションに記載されている。連続ヌクレオチド配列内の少なくとも７５％、例えばすべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート又はボラノホスフェート結合であれば有利である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの連続する配列中の全てのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
本発明の番号付けされた実施形態
１．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のスプライス調節部位に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
２．ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物が、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列（配列番号２７６）を含む、実施形態１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３．前記連続ヌクレオチド配列が、少なくとも１２ヌクレオチド長の長さである、実施形態１または実施形態２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
４．連続ヌクレオチド配列が、１２～１６ヌクレオチド長である、実施形態３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
５．連続ヌクレオチド配列が、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド長である、実施形態３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
６．連続ヌクレオチド配列が、アンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ長さである、実施形態１～５のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
７．連続ヌクレオチド配列が、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物に完全に相補的である、実施形態１～６のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
８．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６８内に含まれるヌクレオチド配列に相補的である、実施形態１～７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
９．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７６のヌクレオチド４４１～４６２内に含まれるヌクレオチド配列に相補的である、実施形態８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１０．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９または配列番号２８０に相補的である、実施形態９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１１．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９または配列番号２８０に完全に相補的である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１２．連続ヌクレオチド配列が、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５またはそれらの少なくとも８もしくは少なくとも１０個の連続ヌクレオチドから選択される、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１３．連続ヌクレオチド配列が、配列番号７１である、実施形態１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１４．連続ヌクレオチド配列が、配列番号７３である、実施形態１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１５．連続ヌクレオチド配列が、配列番号７４である、実施形態１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１６．連続ヌクレオチド配列が、配列番号７５である、実施形態１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１７．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７６のヌクレオチド２６８～２８３内に含まれるヌクレオチド配列に相補的である、実施形態１～７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１８．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２８１に相補的である、実施形態１７に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
１９．連続ヌクレオチド配列が、配列番号２８１に完全に相補的である、実施形態１７または実施形態１８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２０．連続ヌクレオチド配列が、配列番号１３４またはその少なくとも８もしくは少なくとも１０個の連続ヌクレオチドである、実施形態１７～１９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２１．連続ヌクレオチド配列が、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２からなる群から選択される、実施形態１～７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２２．アンチセンスオリゴヌクレオチドが、単離、精製または製造される、実施形態１～２１のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２３．アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の修飾ヌクレオチドまたは１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２４．アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の修飾ヌクレオシド、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、二環式ヌクレオシド類似体（ＬＮＡ）、またはそれらの任意の組合せからなる群から独立して選択される１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態１～２３のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２５．１つ以上の修飾ヌクレオシドが、糖修飾ヌクレオシドである、実施形態２３または実施形態２４に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２６．１つ以上の修飾ヌクレオシドが、二環式糖を含む、実施形態２３～２５のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２７．１つ以上の修飾ヌクレオシドが、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシドである、実施形態２３～２６のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２８．１つ以上の修飾ヌクレオシドが、ＬＮＡヌクレオシド、例えば１つ以上のベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドである、実施形態２３～２７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
２９．アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の５’－メチル－シトシン核酸塩基を含む、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３０．アンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列内の１つ以上のヌクレオシド間結合が修飾されている、実施形態１～２９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３１．少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％のヌクレオシド間結合が修飾されている、実施形態３０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３２．１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合を含む、実施形態３０または実施形態３１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３３．アンチセンスオリゴヌクレオチドが、モルホリノ修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドである、実施形態１～３２のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３４．アンチセンスオリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドミックスマーもしくはトータルマーであるか、またはそれを含む、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３５．アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１０～２０ヌクレオチド長である、実施形態１～３４のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３６．アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１６ヌクレオチド長である、実施形態３５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
３７．構造：

を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
３８．構造：

を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
３９．構造：

を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４０．構造：

を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４１．構造：

を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４２．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧａＧｃｔＧｇｇＴｃＡａｇＡＡＴ（配列番号７１）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４３．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧｇｔＣａａＧａＡｔｇＧｔｇＴＧ（配列番号７３）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４４．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＣａＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴＣ（配列番号７４）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４５．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴｃｃＣ（配列番号７５）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４６．アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチド化合物ＣｔｃＡａｇＣｔｃＡｃＡｔｇＧＣ（配列番号１３４）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
４７．少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合した、実施形態１～４６のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
４８．薬学的に許容され得る塩の形態である、実施形態１～４７のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
４９．塩が、ナトリウム塩、カリウム塩またはアンモニウム塩である、実施形態４８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
５０．実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩および／またはアジュバントとを含む、医薬組成物。
５１．リン酸緩衝生理食塩水などの水性希釈剤または溶媒を含む、実施形態５０に記載の医薬組成物。
５２．プログラニュリンを発現している細胞においてエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの発現を増強するためのインビボまたはインビトロ方法であって、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む、方法。
５３．前記細胞が、ヒト細胞または哺乳動物細胞のいずれかである、実施形態５２に記載の方法。
５４．神経疾患を処置または予防する方法であって、治療または予防有効量の実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物を、神経疾患に苦しむまたは罹り易い対象に投与することを含む、方法。
５５．プログラニュリンハプロ不全または関連障害を処置または予防する方法であって、治療または予防有効量の実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物を、プログラニュリンハプロ不全または関連障害に苦しむまたは罹り易い対象に投与することを含む、方法。
５６．医薬として使用するための、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物。
５７．神経疾患の処置に使用するための、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物。
５８．神経疾患がＴＤＰ－４３病理である、実施形態５６に記載の神経疾患の処置に使用するための、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物。
５９．プログラニュリンハプロ不全または関連障害の処置に使用するための、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物。
６０．神経疾患の処置または予防用の医薬の調製のための、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物の使用。
６１．神経疾患がＴＤＰ－４３病理である、実施形態６０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または医薬組成物の使用。
６２．プログラニュリンハプロ不全または関連障害の処置または予防用の医薬の調製のための、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または実施形態５０もしくは実施形態５１に記載の医薬組成物の使用。
実施例１：イントロン１スキッピングに対する効果についてスクリーニングされた２７５個のオリゴヌクレオチド
培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％のＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５μ／ｍｌのゲンタマイシン）中でのトランスフェクションの前日にＨ４神経膠腫細胞を９６ウェルプレート中に１５０００個／ウェルで播種した。
ミクログリアは高レベルのプログラニュリンを産生するため、これらの細胞を分析のために選択した。ミクログリア細胞中のプログラニュリンの低減は、炎症、リソソーム機能障害、および細胞自律的な方式での過剰増殖を再現するために単独で十分である。したがって、プログラニュリン不全により引き起こされるミクログリア機能障害の標的化は、前頭側頭型認知症における神経変性を管理するための潜在的な治療戦略となる。細胞系におけるプログラニュリンに対する効果を研究するために、癌患者に由来する市販のグリア細胞株であるＨ４細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１４８）を使用して、プログラニュリン産生を増加させることができるオリゴヌクレオチドを特定した。
食作用およびサイトカイン介在性炎症応答を含むヒトミクログリアと同様の機能的特徴を示し、関連するミクログリアマーカーを発現するミクログリアをさらに使用するために、ＦｕｊｉＦｉｌｍ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｉｎｃ．（カタログ番号Ｒ１１３１）のｈｉＰＳＣ由来ミクログリアｉＣｅｌｌ（登録商標）Ｍｉｃｒｏｇｌｉａを使用して、プログラニュリン産生に対する選択されたオリゴヌクレオチドの効果を調査した。
トランスフェクションは、以下の手順を使用してＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。
培地を細胞から除去し、６．２５μ／ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する８０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｅｒｕｍ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）を加え、化合物（１２５ｎＭ）を含む２０μＬのＯｐｔｉｍｅｍを各々のウェルに加えた（最終２５ｎＭ）。対照としてＰＢＳを化合物の代わりに使用した。５時間後に、トランスフェクション溶液をウェルから除去し、全増殖培地を加えた。トランスフェクションの翌日に、１２５μＬのＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を加え、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙ ９７ ｋｉｔおよびプロトコールを使用することによりＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ合成は、４μＬのインプットＲＮＡを使用して行い、ＩＳｃｒｉｐｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ｑＰＣＲ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して行い、製造者のプロトコールにしたがってｄｄＰＣＲ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ ｐｒｏｂｅｓ（ｎｏ ｄＵＴＰ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデジタルドロップレットＰＣＲ用のインプットとして２μＬを使用した。以下のプライマーおよびプローブ（ＩＤＴ）を使用した：
ＧＲＮエクソン１－エクソン２（ＦＡＭ）：
プライマー１：ＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡ（配列番号２８２）
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡ（配列番号２８３）
プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＧＧＡＣＧＣＡＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／（配列番号２８４）
ＧＲＮイントロン１－エクソン２（ＨＥＸ）：
プライマー１：ＣＣＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴ（配列番号２８５）
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡ（配列番号２８６）
プローブ：／５ＨＥＸ／ＣＣＣＡＧＣＴＣＣ／ＺＥＮ／ＡＣＣＣＣＴＧＴＣＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／（配列番号２８７）
ＨＰＲＴ１：ＨＰＲＴ１（ＦＡＭ，ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２，ＩＤＴ）およびＨＰＲＴ１（ＨＥＸ，Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２）ＩＤＴ。
エクソン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡおよびイントロン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡ濃度は、ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用してハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴ１と比べて定量化した。
ＨＰＲＴ１と比べたエクソン１－エクソン２ ｍＲＮＡスプライス形態およびＨＰＲＴ１と比べたイントロン１－エクソン２ ｍＲＮＡスプライス形態の発現にしたがって化合物をプロファイルおよび順位付けし、結果を図１に示している。
図１に示されるように、ＰＢＳトランスフェクト細胞と比べて以下の化合物は、エクソン１－エクソン２スプライスｍＲＮＡの発現の増加、イントロン１－エクソン１スプライスｍＲＮＡの発現の低減およびエクソン１－エクソン２とイントロン１－エクソン２との比における２５％より高いシフトを示す：化合物ＩＤ＃５１、ＩＤ＃５２、ＩＤ＃５３、ＩＤ＃５４、ＩＤ＃５５、ＩＤ＃６２、ＩＤ＃６３、ＩＤ＃６７、ＩＤ＃７１、ＩＤ＃７３、ＩＤ＃７４、ＩＤ＃７５、ＩＤ＃１００、ＩＤ＃１３４、ＩＤ＃１３５、ＩＤ＃１９６、ＩＤ＃２２０、ＩＤ＃２２８およびＩＤ＃２５２。
表１：全てのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート骨格を有する１６ｍｅｒ ＤＮＡ－ＬＮＡミクスマー、ホスホロチオエート骨格、まさに５’および３’位のＬＮＡ、ならびに例えば２番目または３番目のヌクレオチドごとのＬＮＡを有するＤＮＡ－ＬＮＡミクスマー、として設計される（化合物表参照）。
Figure 2023553710000014
Figure 2023553710000015

Figure 2023553710000016

Figure 2023553710000017

Figure 2023553710000018

Figure 2023553710000019

Figure 2023553710000020

Figure 2023553710000021

Figure 2023553710000022

Figure 2023553710000023

Figure 2023553710000024

Figure 2023553710000025
実施例２：プログラニュリン発現に対する効果について試験されたオリゴヌクレオチド
Ｈ４神経膠腫細胞を９６ウェルプレートに５０００個／ウェルで播種し、最終濃度３μＭまたは１０μＭのオリゴで２００μＬ培地中で５日間処理した。プログラニュリン発現レベルを、Ａｂｃａｍ製のＥＬＩＳＡによって１：８希釈後の培地で評価した（ａｂ２５２３６４）。図２に示すように、オリゴ＃７１、＃７３、＃７４、＃７５および＃１３４は、ＰＢＳと比較して１．５倍を超えるプログラニュリン分泌を誘導した。比較のために特許（国際公開第２０２０／１９１２１２号）からのオリゴヌクレオチドＳ７およびＳ１０の効果を図３に示している。
実施例３：オリゴの配列局在性
配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４の配列局在性を図４に示している。
実施例４：ｈｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるプログラニュリン発現に対する効果について試験されたオリゴヌクレオチド
ｈｉＰＳＣ由来ミクログリア（ｉＣｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ Ｋｉｔ、０１２７９、カタログ番号Ｒ１１３１）をポリ－Ｄ－リジン被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ カタログ＃ ６５５９４６）に２００μＬ中２００００細胞／ウェルで播種し（ｎ＝３）、指し示される濃度の配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号１３４で４日間処理した。プログラニュリンタンパク質発現レベルを、Ａｂｃａｍ製のＥＬＩＳＡを使用して１：８希釈後の培地で評価した（ａｂ２５２３６４）。図５に示すように、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５ および配列番号１３４は、ＰＢＳと比較して１．５倍を超えるプログラニュリン分泌を誘導した。比較のために国際公開第２０２０／１９１２１２号からのオリゴヌクレオチドＳ７、Ｓ１０およびＳ３７の効果を図６に示している。
実施例５：Ｈ４神経膠腫細胞におけるプログラニュリン発現に対する効果について試験されたオリゴヌクレオチド
培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％のＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン）中でのトランスフェクションの前日にＨ４神経膠腫細胞を９６ウェルプレート中に１５０００個／ウェルで播種した。トランスフェクションは、以下の手順を使用してＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。培地を細胞から除去し、６．２５μｇ／ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する８０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｅｒｕｍ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）を加え、化合物（１２５ｎＭ）を含む２０μＬのＯｐｔｉｍｅｍを各々のウェルに加えた（最終２５ｎＭ）。対照としてＰＢＳを化合物の代わりに使用した。５時間後に、トランスフェクション溶液をウェルから除去し、全増殖培地を加えた。トランスフェクションの翌日に、１２５μＬのＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を加え、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙ ９７ ｋｉｔおよびプロトコールを使用することによりＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ合成は、４μＬのインプットＲＮＡを使用して行い、ＩＳｃｒｉｐｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ｑＰＣＲ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して行い、製造者のプロトコールにしたがってｄｄＰＣＲ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ ｐｒｏｂｅｓ（ｎｏ ｄＵＴＰ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデジタルドロップレットＰＣＲ用のインプットとして２μＬを使用した。
以下のプライマーおよびプローブ（ＩＤＴ）を使用した。
ＧＲＮエクソン１－エクソン２（ＦＡＭ）：
プライマー１：ＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＧＧＡＣＧＣＡＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＧＲＮイントロン１－エクソン２（ＨＥＸ）：
プライマー１：ＣＣＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５ＨＥＸ／ＣＣＣＡＧＣＴＣＣ／ＺＥＮ／ＡＣＣＣＣＴＧＴＣＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＨＰＲＴ１：ＨＰＲＴ１（ＦＡＭ，ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２，ＩＤＴ）およびＨＰＲＴ１（ＨＥＸ，Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２）ＩＤＴ。
エクソン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡおよびイントロン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡ濃度は、ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用してハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴ１と比べて定量化した。
配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５についての結果を図７に示している。配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５は、イントロン１保持（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）の用量依存的なスキッピングおよびＥｘ１－Ｅｘ２スプライスバリアントにおける増加を示す。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物は、イントロン１保持のスキッピングに対して効果を示さなかったか、または限られた効果を示した。
実施例６－Ｈ４神経膠腫細胞におけるプログラニュリン発現に対する効果について試験されたオリゴヌクレオチド
培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％のＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン）中でのトランスフェクションの前日にＨ４神経膠腫細胞を９６ウェルプレート中に１５０００個／ウェルで播種した。トランスフェクションは、以下の手順を使用してＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。培地を細胞から除去し、６．２５μｇ／ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する８０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｅｒｕｍ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）を加え、化合物（１２５ｎＭ）を含む２０μＬのＯｐｔｉｍｅｍを各々のウェルに加えた（最終２５ｎＭ）。対照としてＰＢＳを化合物の代わりに使用した。５時間後に、トランスフェクション溶液をウェルから除去し、全増殖培地を加えた。トランスフェクションの翌日に、１２５μＬのＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を加え、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙ ９７ ｋｉｔおよびプロトコールを使用することによりＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ合成は、４μＬのインプットＲＮＡを使用して行い、ＩＳｃｒｉｐｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ｑＰＣＲ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して行い、製造者のプロトコールにしたがってｄｄＰＣＲ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ ｐｒｏｂｅｓ（ｎｏ ｄＵＴＰ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデジタルドロップレットＰＣＲ用のインプットとして２μＬを使用した。以下のプライマーおよびプローブ（ＩＤＴ）を使用した。
ＧＲＮエクソン１－エクソン２（ＦＡＭ）：
プライマー１：ＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＧＧＡＣＧＣＡＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＧＲＮイントロン１－エクソン２（ＨＥＸ）：プライマー１：ＣＣＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５ＨＥＸ／ＣＣＣＡＧＣＴＣＣ／ＺＥＮ／ＡＣＣＣＣＴＧＴＣＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＨＰＲＴ１：ＨＰＲＴ１（ＦＡＭ，ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２，ＩＤＴ）およびＨＰＲＴ１（ＨＥＸ，Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．４５６２１５７２）ＩＤＴ。
エクソン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡおよびイントロン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡ濃度は、ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用してハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴ１と比べて定量化した。
配列番号２８９および配列番号２９０についての結果を図８に示している。配列番号２８９および２９０は、イントロン１保持（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）の用量依存的なスキッピングおよびＥｘ１－Ｅｘ２スプライスバリアントにおける増加を示す。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物は、イントロン１保持のスキッピングに対して効果を示さなかったか、または限られた効果を示した。
実施例７－ｈｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるプログラニュリン発現に対する効果について試験されたオリゴヌクレオチド
ｈｉＰＳＣ由来ミクログリア（ｉＣｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ Ｋｉｔ、０１２７９、カタログ番号Ｒ１１３１）をポリ－Ｄ－リジン被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ カタログ＃ ６５５９４６）に２００μＬ中２００００細胞／ウェルで播種し（ｎ＝３）、指し示される濃度の化合物Ｓ１０および配列番号２９０で５日間処理した。
１２５μＬのＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を加え、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙ ９７ ｋｉｔおよびプロトコールを使用することによりＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡ合成は、４μＬのインプットＲＮＡを使用して行い、ＩＳｃｒｉｐｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ｑＰＣＲ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して行い、製造者のプロトコールにしたがってｄｄＰＣＲ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ ｐｒｏｂｅｓ（ｎｏ ｄＵＴＰ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するデジタルドロップレットＰＣＲ用のインプットとして２μＬを使用した。以下のプライマーおよびプローブ（ＩＤＴ）を使用した。
ＧＲＮエクソン１－エクソン２（ＦＡＭ）：
プライマー１：ＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＧＡ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＧＧＡＣＧＣＡＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＡＣＣＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＧＲＮイントロン１－エクソン２（ＨＥＸ）：
プライマー１：ＣＣＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴ、
プライマー２：ＧＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡおよび
プローブ：／５ＨＥＸ／ＣＣＣＡＧＣＴＣＣ／ＺＥＮ／ＡＣＣＣＣＴＧＴＣＧＧＣＡＧＡＣＣＡＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／
ＧＡＰＤＨ：ＧＡＰＤＨ（ＦＡＭ，Ｈｓ．ＰＴ．３９ａ．２２２１４８３６，ＩＤＴ）およびＧＡＰＤＨ（ＨＥＸ，Ｈｓ．ＰＴ．３９ａ．２２２１４８３６，ＩＤＴ）。
エクソン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡおよびイントロン１－エクソン２ ＧＲＮ ｍＲＮＡ濃度は、ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用してハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比べて定量化した。
配列番号２９０についての結果を図９に示している。配列番号２９０は、イントロン１保持（Ｉｎｔ１－Ｅｘ２）の用量依存的なスキッピングおよびＥｘ１－Ｅｘ２スプライスバリアントにおける増加を示した。国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物は、イントロン１保持のスキッピングに対する効果を示さなかったか、または限られた効果を示し、ギャップマーを対照として含めたところ、両方のスプライスバリアントの予想される用量依存的なノックダウンを示した。
実施例８－配列番号２９０を使用したスプライススイッチ分析
培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％のＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン）中でのトランスフェクションの前日にＨ４神経膠腫細胞を９６ウェルプレート中に１５０００個／ウェルで播種した。トランスフェクションは、以下の手順を使用してＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。培地を細胞から除去し、６．２５μｇ／ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する８０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｅｒｕｍ ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ）を加え、化合物（１２５ｎＭ）を含む２０μＬのＯｐｔｉｍｅｍを各々のウェルに加えた（最終２５ｎＭ）。対照としてＰＢＳを化合物の代わりに使用した。５時間後に、トランスフェクション溶液をウェルから除去し、全増殖培地を加えた。トランスフェクションの２日後に、３５０μＬのＭａｇｎａｐｕｒｅ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を加え、ＲｏｃｈｅのＭａｇｎａｐｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍおよびプロトコール（ＤＮａｓｅ処理を含む）を使用することによりＲＮＡを抽出した。トータルＲＮＡを５０μＬの溶出緩衝液中に溶出させた。ＫＡＰＡ ｍＲＮＡ ＨｙｐｅｒＰｒｅｐ Ｋｉｔｓ（Ｒｏｃｈｅ）を使用し、インプットとして１００ｎｇのトータルＲＮＡを使用して次世代シークエンシング（ＮＧＳ）ライブラリーを生成した。シークエンシングをＩｌｌｕｍｉｎａ ＮｅｘｔＳｅｑ ５５０ ｓｙｓｔｅｍ上で行って、試料当たり３０００万より多くのペアードエンドリード（２×１５１ｂｐ）を得た。リードを３’末端における１ヌクレオチドの除去によりトリミングし、ＣＬＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用するＲＮＡ－Ｓｅｑ分析に先立って３０００万リード／試料にサブサンプリングした。Ｓａｓｈｉｍｉプロット（エクソンジャンクションにわたるリードの数を示す）を生成するために、ＢａｍファイルをＣＬＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ（Ｑｉａｇｅｎ）からエクスポートし、Ｂｒｏａｄ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＴｈｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｖｉｅｗｅｒ（ＩＧＶ）（バージョンＩＧＶ＿２．８．２）にインポートした。Ｓａｓｈｉｍｉプロットは、ＩＤ＃２９０を用いてエクソン１からエクソン２への正しいスプライシングを得るためのスプライススイッチングを示したが、国際公開第２０２０／１９１２１２号からのＳ１０化合物ではそうでなかった。これを図１０に示す。
Figure 2023553710000026
Figure 2023553710000027

Figure 2023553710000028

Figure 2023553710000029

Figure 2023553710000030

Figure 2023553710000031

Figure 2023553710000032

Figure 2023553710000033

Figure 2023553710000034

Figure 2023553710000035

Figure 2023553710000036

Figure 2023553710000037

Figure 2023553710000038

Figure 2023553710000039

Figure 2023553710000040

Figure 2023553710000041

Figure 2023553710000042

Figure 2023553710000043

Figure 2023553710000044

Figure 2023553710000045

Figure 2023553710000046

Figure 2023553710000047

Figure 2023553710000048

Figure 2023553710000049

Figure 2023553710000050

Figure 2023553710000051

Figure 2023553710000052

Figure 2023553710000053

Figure 2023553710000054

Figure 2023553710000055

Figure 2023553710000056

Figure 2023553710000057

Figure 2023553710000058

Figure 2023553710000059

Figure 2023553710000060

Figure 2023553710000061

Figure 2023553710000062

Figure 2023553710000063

Figure 2023553710000064

Figure 2023553710000065

Figure 2023553710000066

Figure 2023553710000067

Figure 2023553710000068

Figure 2023553710000069

Figure 2023553710000070

Figure 2023553710000071

Figure 2023553710000072

Figure 2023553710000073

Claims (15)

  1. ８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のスプライス調節部位に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
  2. 前記ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物が、前記ヒトプログラニュリンプレｍＲＮＡ転写物のエクソン１、イントロン１およびエクソン２配列（配列番号２７６）を含む、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  3. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９または配列番号２８０に相補的である、請求項１または請求項２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  4. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５、またはそれらの少なくとも８もしくは少なくとも１０個の連続ヌクレオチドから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  5. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号２８１に相補的である、請求項１または請求項２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  6. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号１３４またはその少なくとも８もしくは少なくとも１０個の連続ヌクレオチドである、請求項５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  7. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１００、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１９６、配列番号２２０、配列番号２２８および配列番号２５２からなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  8. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列が、１つ以上の修飾ヌクレオチドまたは１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  9. アンチセンスオリゴヌクレオチドミックスマーもしくはトータルマーであるか、またはそれを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  10. 構造：

    、

    、

    、

    又は

    を有する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
  11. オリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチド化合物ＧａＧｃｔＧｇｇＴｃＡａｇＡＡＴ（配列番号７１）、ＧｇｔＣａａＧａＡｔｇＧｔｇＴＧ（配列番号７３）、ＣａＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴＣ（配列番号７４）、ＧａＡｔＧｇｔＧｔＧｇＴｃｃＣ（配列番号７５）またはＣｔｃＡａｇＣｔｃＡｃＡｔｇＧＣ（配列番号１３４）であり、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、全てのＬＮＡ Ｃは５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
  12. 請求項１～１１のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩および／またはアジュバントとを含む、医薬組成物。
  13. プログラニュリンを発現している細胞においてエクソン１－エクソン２プログラニュリンスプライスバリアントの発現を増強するためのインビボまたはインビトロ方法であって、請求項１～１１のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、または請求項１２に記載の医薬組成物を、有効量で前記細胞に投与することを含む、方法。
  14. 神経疾患の処置に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. プログラニュリンハプロ不全または関連障害の処置に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項１３に記載の医薬組成物。
JP2023536915A 2020-12-18 2021-12-16 プログラニュリンを標的とするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド Pending JP2023553710A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20215791.3 2020-12-18
EP20215791 2020-12-18
PCT/EP2021/086167 WO2022129320A1 (en) 2020-12-18 2021-12-16 Antisense oligonucleotides for targeting progranulin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023553710A true JP2023553710A (ja) 2023-12-25

Family

ID=74125006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023536915A Pending JP2023553710A (ja) 2020-12-18 2021-12-16 プログラニュリンを標的とするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20220204973A1 (ja)
EP (1) EP4263831A1 (ja)
JP (1) JP2023553710A (ja)
CN (1) CN116583603A (ja)
AR (1) AR124378A1 (ja)
TW (1) TW202229553A (ja)
WO (1) WO2022129320A1 (ja)

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
EP2341057A3 (en) 1997-09-12 2011-11-23 Exiqon A/S Oligonucleotide Analogues
AU758956B2 (en) 1999-02-12 2003-04-03 Daiichi Sankyo Company, Limited Novel nucleosides and oligonucleotide analogues
EP1178999B1 (en) 1999-05-04 2007-03-14 Santaris Pharma A/S L-ribo-lna analogues
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
AU2003281969B2 (en) 2002-11-18 2011-01-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Amino-LNA, thio-LNA and alpha-L-oxy-LN
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
ES2389737T3 (es) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5'
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
US8278283B2 (en) 2007-07-05 2012-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted or unsaturated bicyclic nucleic acid analogs
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
AU2010207975B2 (en) * 2009-02-02 2016-04-28 Cepheid Methods of detecting sepsis
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011156202A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted 2 '-amino and 2 '-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US9221864B2 (en) 2012-04-09 2015-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic nucleic acid analogs
EP2920304B1 (en) 2012-11-15 2019-03-06 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide conjugates
KR102287532B1 (ko) 2014-01-30 2021-08-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 생분해성 컨쥬게이트를 갖는 폴리 올리고머 화합물
US11096956B2 (en) * 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
WO2020191212A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 President And Fellows Of Harvard College Antisense oligonucleotide-based progranulin augmentation therapy in neurodegenerative diseases
CN110045452A (zh) 2019-03-28 2019-07-23 武汉华星光电技术有限公司 导光板、背光模组及显示装置
US20210388357A1 (en) * 2020-05-13 2021-12-16 Hoffmann-La Roche Inc. Oligonucleotide agonists targeting progranulin

Also Published As

Publication number Publication date
US20220204973A1 (en) 2022-06-30
AR124378A1 (es) 2023-03-22
TW202229553A (zh) 2022-08-01
CN116583603A (zh) 2023-08-11
WO2022129320A1 (en) 2022-06-23
EP4263831A1 (en) 2023-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2014290395B2 (en) Compositions for modulating Tau expression
JP2021527437A (ja) Ｓｃｎ９ａ発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
JP7379387B2 (ja) Ａｔｘｎ２発現を制御するためのオリゴヌクレオチド
JP2023534557A (ja) Ｒｎａ結合タンパク質部位を標的とするオリゴヌクレオチド
CN113785060A (zh) 用于调节atxn2表达的寡核苷酸
WO2023104693A1 (en) Antisense oligonucleotides targeting actl6b
WO2023118087A1 (en) Antisense oligonucleotides targeting unc13a
JP2023553710A (ja) プログラニュリンを標的とするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド
JP2022514648A (ja) Ｃａｒｄ９を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド
WO2022258555A1 (en) Oligonucleotide progranulin agonists
WO2020038968A1 (en) Microrna-134 biomarker
WO2023242324A1 (en) Antisense oligonucleotides for targeting progranulin
EP3568477A1 (en) Antisense oligonucleotides for modulating rela expression
JP2022512877A (ja) Ｔｉａ１を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド
WO2023222858A1 (en) Improved oligonucleotides targeting rna binding protein sites
EP4077672A1 (en) Enhanced oligonucleotides for inhibiting scn9a expression
TW202409276A (zh) 改良之靶向ｒｎａ結合蛋白位點的寡核苷酸
TW202329983A (zh) Ｒｎａ編輯
JP2024056820A (ja) Ｓｃｎ９ａ発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
JP2023527693A (ja) 神経疾患を治療するための補体成分ｃ１ｒ阻害剤、並びに関連する組成物、システム、及びそれを使用する方法
CN115551519A (zh) 用于治疗神经系统疾病的补体组分c1s抑制剂以及相关的组合物、系统和使用它们的方法