JP2022512877A - Ｔｉａ１を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド - Google Patents

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Abstract

本発明は、哺乳動物Ｔ細胞制限細胞内抗原－１（ＴＩＡ１）をコードする核酸に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（オリゴマー）、特にＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列を標的として、ＴＩＡ１の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。ＴＩＡ１発現の阻害は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または前頭側頭型認知症などの神経変性疾患を含むさまざまな医学的障害に有益である。

Description

本発明は、哺乳動物Ｔ細胞制限細胞内抗原－１（ＴＩＡ１）をコードする核酸に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（オリゴマー）、特にＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列を標的として、ＴＩＡ１の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。ＴＩＡ１発現の阻害は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症、およびタウオパチーなどの神経変性疾患を含むさまざまな医学的障害に有益である。
多くの神経変性疾患の特徴の１つは、脳および中枢神経系におけるタンパク質封入体の蓄積である。これらの封入体は、タンパク質やその他の細胞成分の不溶性凝集体であり、細胞に損傷を与え、機能障害を引き起こす。タウ、α－シヌクレイン、ハンチンチン、およびＰ－アミロイドなどのタンパク質は全て脳内に封入体を形成することがわかっており、アルツハイマー病、およびハンチントン病などの多くの神経変性疾患の発症に関連している。神経変性疾患は、ＲＮＡおよび凝集ＲＮＡ結合タンパク質を含有するストレス顆粒にも関連している。
Ｔ細胞制限細胞内抗原－１（ＴＩＡ－１）は、ＲＮＡ結合タンパク質であり、コア核形成ストレス顆粒タンパク質である。ストレス顆粒の形成では、核形成に続いて二次ＲＮＡ結合タンパク質が動員され、ストレス誘発性の翻訳抑制の重要な要素である成熟したストレス顆粒が形成される。ＴＩＡ１は、神経変性障害のある対象の脳組織の神経病理学と共局在する（例えば、Ｍａｚｉｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２０１８ ６：７１を参照されたい）。Ａｐｐｉｃｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１８ Ｊａｎ；２１（１）：７２－８０は、ＲＮＡ結合タンパク質ＴＩＡ１の減少により、ｉｎ ｖｉｖｏでのタウ媒介神経変性から保護されることを報告している。
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は複雑な神経変性疾患であり、まれな遺伝的変異の不均衡に大きな寄与を遺伝的特徴としている。大規模並列シーケンスの進歩に後押しされ、大規模な患者－コントロールコホートに適用されることで、ＡＬＳの遺伝的構造を構成するこれらのまれな変異体の体系的な同定が実行可能になった（Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｊｕｎｅ ２０１８，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．６）。
Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ ９５，８０８－８１６，Ａｕｇｕｓｔ １６，２０１７は、ＴＩＡ１の低複雑性ドメインに影響を与える変異が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）ＡＬＳおよびＡＬＳ－ＦＴＤを引き起こすこと、ＡＬＳ関連ＴＩＡ１変異が、神経病理学的ＴＤＰ－４３シグネチャーを共有すること、ＴＩＡ１変異が相分離を促進し、ストレス顆粒のダイナミクスを損なうこと、また、ダイナミクスの低いストレス顆粒に動員されたＴＤＰ－４３は、不動で不溶性になり、疾患に起因することを報告している。Ｈｉｒｓｃｈ－Ｒｅｉｎｓｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１７）５：９６は、Ｔｉａ１変異を伴うＡＬＳ／ＦＴＤの臨床的および広範なＴＤＰ－４３神経病理学的特徴を開示している。
国際公開第２０１７／０６６６５７号パンフレットは、ＴＩＡ１の核酸ベースの阻害剤について言及している
発明の目的
本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでのアンチセンス阻害のための、ＴＩＡ１転写産物の特に効果的な領域（ＴＩＡ１）を同定し、ＴＩＡ１ ｐｒｅｍＲＮＡまたは成熟ｍＲＮＡの、これらの領域を標的とする、ＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドを含む、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明は、神経障害、特にストレス顆粒形成に関連する神経障害を含む一連の医学的障害の処置に有用な、ヒトＴＩＡ１を阻害するオリゴヌクレオチドを同定する。
本発明は、ヒトＴＩＡ１標的核酸を標的とする、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明は、ヒトＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ内の一連の新規標的部位を提供し、さらに、そのような新規標的部位に相補的である少なくとも１０以上の連続ヌクレオチドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは有利に、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができる。
本発明は、ヒトＴＩＡ１標的核酸を標的とする１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、ヒトＴＩＡ１標的核酸を標的とする１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号４～５３からなる群から選択される配列に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、ヒトＴＩＡ１標的核酸を標的とする１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、リストＡ：８－２３；３３－５２；５４－９６；１０３－１３９；１４８－１６２；１６４－１９５；２１２－３５８；３６０－３９３；４０３－４２３；４５６－４７８；４９１－５０７；５０９－５３８；５７１－６０６；６０４－６２７；６３７－６５８；６６０－６８５；６８７－７１２；７１４－７２９；７４４－７６５；７９２－８４３；８４５－８７３；８７５－９１６；９３１－９５０；９５５－９７１；９７３－９９１；１００３－１０２９；１０４５－１０８１；１０８３－１１０１；１１０５－１１５０；１１５３－１２８８；１２９７－１３１８；１３３１－１３６８；１３７０－１３８９；１３９１－１４６５；１４８２－１５２１；１５２３－１５５７；１５５７－１５７９；１５９１－１６０５；１６１３－１６６９；１６７８－１６９８；１７４３－１７８７；１７８９－１８１６；１８２２－１８５５；１８６０－１８９２；１９０１－１９１８；１９０８－１９２９；１９１９－１９６１；１９６４－１９８７；１９７８－２００２；２００４－２０１８；２０２０－２０４９；２０３８－２０５２；２０４８－２０６８；２０７０－２０８６；２０８８－２１１５；２１１７－２１３４；２１３６－２１６６；２１６７－２２０７；２２０９－２２２４；２２２８－２２６０；２２６８－２３３７；２３４１－２３６２；２３７２－２３８７；２３８９－２４０３；２４１３－２４６８；２４６３－２４８０；２５０３－２５３７；２５３２－２５４７；２５４１－２５５８；２５５０－２５７３；２５７９－２６２４；２６１４－２６３４；２６２６－２６４４；２６４５－２６７１；２６６９－２６９５；２７００－２７１８；２７１２－２７４７；２７５５－２７８０；２８２５－２８７６；２８７８－２９０４；２９０６－２９３５；２９４０－２９６１；２９６３－３００６；３００８－３０３５；３０４２－３０５６；３０６７－３０８６；３０９０－３１０６；３１１７－３１３５；３１３７－３２１３；３２２０－３２７２；３２８０－３３０５；３３４２－３４４０；３４３０－３４４８；３４４２－３４６１；３４６８－３５１４；３５１６－３５４４；３５８３－３６３５；３６５１－３６７８；３７０９－３７３０；３７３２－３７５６；３７５５－３７８３；３７９１－３８０５；３８００－３８３３；３８４０－３８５９；３８７１－３８８９；３８７８－３８９８；３９０３－３９３２；３９３４－３９５２；３９４９－３９６３；３９５８－３９８７；４００２－４０４４；４０４６－４０６０；４０５２－４０８８；４１０４－４１３０；４１３４－４２４８；４２５１－４２７０；４３０２－４３２４；４３４８－４３８３；４３８５－４４５５；４４５７－４５２９；４５３１－４５５１；４５５３－４６２５；４６５６－４６９４；４７００－４７１７；４７３８－４７７１；４７７５－４７９０；４７９２－４８３７；４８３９－４９０１；４９０８－４９５９；４９６１－５００４；５０４０－５０８５；５０８７－５１４７；５１４９－５１７０；５１７２－５２０３；５２１１－５２２５；５２１５－５２３０；５２２７－５２５６；５２７０－５２８４；５２８５－５３１１；５３２０－５３３５；５３２５－５３４１；５３４０－５３５６；５３６４－５３８８；５３８４－５４３７；５４３９－５４８４；５４８２－５５１５；５５３７－５５６０；５５６２－５６１０；５６２２－５６７０；５６７２－５６９２；５７１４－５７７９；５７９３－５８１２；５８１４－５８８８；５８９５－５９３１；５９３３－５９５９；５９６１－５９７５；６００２－６０１６；６０２６－６０６４；６１３５－６１７１；６１７７－６１９５；６２０８－６２３２；６２７２－６２９９；６３１５－６３４１；６３５５－６４０１；６４０８－６４２８；６４３０－６４５２；６４６１－６４８３；６５０３－６５７１；６５７３－６６３５；６６３９－６６５９；６６６１－６６８５；６６９０－６７０８；６７２９－６７４７；６７３９－６７５７；６７９２－６８９２；６８９４－６９１３；６９１５－６９６０；６９５０－６９６７；６９７６－６９９４；７００２－７０３１；７０３３－７０４７；７０５６－７０９５；７１１５－７１５１；７１５３－７１７４；７２０３－７２２０；７２３０－７２４４；７２６４－７２９３；７２８４－７３１８；７３１９－７３４８；７３５９－７４０２；７４０５－７４４２；７４５２－７４７４；７４６６－７４８７；７５０８－７５２４；７５２９－７５４４；７５６１－７６１１；７６３５－７６５５；７６５７－７６８１；７６７５－７７０１；７７１３－７７３２；７７４８－７７７４；７７６６－７７８３；７７８７－７８２９；７８４１－７８６３；７８６６－７８９０；７８９９－７９２０；７９２２－７９３６；７９５４－８０１６；８０２２－８０５８；８０７３－８０８８；８０９７－８１１９；８１４０－８１５５；８１４５－８１８９；８１９１－８２０８；８２２０－８２４１；８２４３－８２９０；８２９２－８３０８；８３３１－８４０１；８４０３－８４２３；８４２５－８４４１；８４５４－８４９４；８４９６－８５２５；８５２７－８５４９；８５５２－８５７４；８５７６－８６０４；８６６３－８７２０；８７２８－８７７１；８７７４－８８２５；８８５６－８９２２；８９２４－８９４２；８９４５－８９８２；９００７－９０４１；９０５８－９０７７；９０９９－９１４９；９１５６－９１７１；９１７３－９１８７；９１８９－９２０７；９２２４－９２４３；９２４１－９２７７；９２７０－９２８９；９２７９－９２９９；９３０２－９３２３；９３２８－９３６６；９３５７－９４０１；９３９６－９４１２；９４０３－９４１９；９４１３－９４２７；９４２１－９４４３；９４３２－９４７３；９４７７－９５２９；９５８６－９６０１；９６０３－９６１８；９６２１－９６３５；９６２５－９６４８；９６３８－９６５３；９６４４－９６５８；９６５０－９６９３；９６９９－９７４１；９７５７－９７８６；９７９１－９８２０；９８４６－９８７０；９８６２－９８８１；９８９７－９９２４；９９６４－９９８３；９９８５－１００５２；１００５４－１００９０；１００９２－１０１７１；１０１７２－１０１９０；１０１８２－１０１９９；１０１８９－１０２０７；１０２０１－１０２４１；１０２３１－１０２５３；１０２６５－１０３０３；１０２９３－１０３１４；１０３３１－１０３５１；１０３７２－１０４０３；１０４３２－１０４５９；１０４８６－１０５００；１０４９９－１０５１３；１０５０６－１０５２０；１０５１０－１０５２６；１０５２８－１０５５０；１０５４７－１０５６４；１０５８８－１０６１４；１０６１６－１０６３９；１０６３３－１０６５５；１０６８３－１０７２８；１０７２６－１０７７７；１０７８２－１０７９６；１０８１４－１０８４４；１０８５４－１０８６９；１０８６０－１０８８７；１０８８３－１０８９８；１０９０６－１０９２５；１０９３０－１０９５１；１０９４２－１０９７８；１０９８１－１０９９６；１１０２７－１１０６８；１１０７０－１１１３５；１１１４０－１１１６３；１１１９３－１１２０８；１１２１０－１１２４５；１１２６４－１１３０５；１１２９７－１１３１１；１１３２４－１１３７７；１１３８６－１１４１５；１１４０４－１１４４０；１１４３２－１１４４７；１１４４９－１１４６３；１１４７７－１１４９２；１１４９３－１１５３０；１１５９０－１１６１３；１１６１５－１１６３２；１１６３４－１１６７４；１１６９４－１１７１０；１１７４３－１１７５７；１１７４６－１１７８９；１１７９３－１１８１０；１１８００－１１８４０；１１８５８－１１９１４；１１９０８－１１９２５；１１９２１－１１９３６；１１９３８－１１９５２；１１９８７－１２００２；１２０２４－１２０４７；１２０９２－１２１４３；１２１４５－１２１６４；１２１６７－１２１９１；１２１９３－１２２１４；１２２２３－１２２７２；１２２６６－１２２９４；１２３１２－１２３５３；１２３５５－１２３７５；１２３８６－１２４００；１２４１６－１２４３１；１２４３９－１２４６１；１２４７２－１２６２４；１２６４２－１２６６２；１２６７３－１２６９２；１２６８５－１２７０１；１２６９４－１２７２９；１２７４８－１２７７２；１２７８８－１２８０３；１２８２３－１２８３９；１２８４１－１２８５６；１２８６４－１２８９７；１２８９９－１２９１５；１２９２６－１２９５４；１２９５６－１２９８３；１２９８５－１３０２３；１３０２５－１３０５４；１３１３０－１３１４７；１３１５８－１３１８１；１３１９０－１３２１５；１３２３７－１３２７９；１３３０４－１３３２０；１３３１１－１３３３１；１３３２２－１３３４１；１３３４３－１３３７７；１３３８４－１３４０４；１３４０６－１３４２４；１３４１８－１３４４４；１３４５６－１３４９３；１３４９３－１３５０７；１３５２４－１３５４９；１３５５１－１３５８６；１３５８８－１３６０２；１３６２０－１３６５１；１３６５９－１３７１０；１３７２３－１３７６０；１３７６４－１３７７８；１３７８１－１３８０８；１３８０６－１３８２１；１３８１０－１３８６４；１３８６５－１３８７９；１３８８６－１３９０１；１３８９４－１３９１０；１３９０３－１３９２７；１３９５５－１３９８２；１３９９８－１４０１３；１４０１６－１４０３７；１４０４０－１４０６０；１４８７８－１４９００；１４８９８－１４９４５；１４９４１－１４９５８；１４９６０－１４９８０；１４９８２－１５００２；１４９９７－１５０１４；１５００３－１５０２６；１５０２８－１５０４３；１５０５８－１５０７６；１５０６８－１５０８９；１５０９０－１５１０６；１５１２８－１５１６４；１５４０８－１５４２３；１５４２２－１５４３７；１５４３９－１５４５８；１５４６８－１５４８３；１５４７４－１５４９１；１５４９５－１５５１６；１５５２６－１５５６０；１５５６２－１５６１６；１５６１８－１５６３２；１５６３４－１５６５５；１５６７５－１５６９２；１５７０４－１５７３０；１５７３２－１５７７７；１５７８３－１５８００；１５８１４－１５８３７；１５８２９－１５８５６；１５８４５－１５８６０；１５８６２－１５８７６；１５８８１－１５９０５；１５９２１－１５９３９；１５９４１－１５９８８；１５９９０－１６００４；１５９９５－１６０２２；１６０１１－１６０２７；１６０１９－１６０３５；１６０４５－１６０６０；１６０７８－１６０９２；１６０８６－１６１２７；１６１２７－１６１６５；１６１９７－１６３０１；１６２９３－１６３０９；１６３０１－１６３３１；１６３２４－１６３４４；１６３４７－１６３９０；１６４０４－１６４１８；１６４１１－１６４５９；１６４７４－１６４９７；１６４９９－１６５１４；１６５３０－１６５５７；１６５４８－１６５９７；１６５９９－１６６４５；１６６６１－１６６７６；１６６７８－１６６９２；１６７０２－１６７２９；１６７４１－１６７５９；１６７７４－１６７９８；１６８１０－１６８６５；１６８６７－１６９３７；１６９４４－１６９６６；１６９８８－１７０２１；１７０２３－１７０４１；１７０４３－１７０６７；１７０８８－１７１２４；１７１２６－１７１６８；１７１７１－１７２１２；１７２０１－１７２１９；１７２０８－１７２２３；１７２２５－１７３１５；１７３０７－１７３２５；１７３５５－１７３７１；１７３６５－１７３８０；１７３８１－１７４０４；１７４１６－１７４３３；１７４２９－１７４４４；１７４３５－１７４７２；１７５０６－１７５２５；１７５２８－１７５４４；１７５５９－１７５８５；１７５８８－１７６３３；１７６２４－１７６３８；１７６４１－１７６６３；１７６７８－１７７４２；１７７３２－１７８６２；１７８
６４－１７９４２；１７９８０－１７９９６；１７９９２－１８０１２；１８００４－１８０１８；１８０１９－１８０４７；１８０３８－１８０５３；１８０５７－１８０８３；１８０７４－１８１２５；１８１１８－１８１３５；１８１４０－１８１６３；１８１６５－１８１７９；１８１８０－１８１９７；１８１９４－１８２２１；１８２１４－１８２４１；１８２７２－１８３２９；１８３３１－１８３５０；１８３５３－１８３６９；１８３７９－１８４０３；１８３９６－１８４２２；１８４３２－１８４５７；１８４６４－１８４９０；１８５０２－１８５３７；１８５２６－１８５６０；１８５６４－１８５８８；１８５９２－１８６０６；１８６０３－１８６２２；１８６４８－１８６７３；１８６７５－１８６９６；１８７１２－１８７２７；１８７１７－１８７３１；１８７４１－１８７９６；１８７９８－１８８１８；１８８４５－１８８６１；１８８６０－１８８９２；１８８８１－１８８９６；１８８８６－１８９０４；１８９０９－１８９５２；１８９４９－１８９６３；１８９６６－１８９８０；１８９９９－１９０１３；１９００３－１９０２１；１９０２３－１９０３８；１９０４０－１９０５６；１９０５８－１９０９３；１９１２３－１９１３９；１９１５３－１９１７９；１９１８９－１９２０６；１９２０８－１９２６９；１９２８４－１９２９８；１９３００－１９３３７；１９３３２－１９３７１；１９３７３－１９４２１；１９４３８－１９６６４；１９６６６－１９６９６；１９６９８－１９７２６；１９７５２－１９７６７；１９７７６－１９８０５；１９８１７－１９８６２；１９８６０－１９８８０；１９８８７－１９９４９；１９９５３－１９９８９；１９９９１－２０１１８；２０１２０－２０４３９；２０４４１－２０５４８；２０５５０－２０５７５；２０５７９－２０６４２；２０６４４－２０６８７；２０６８９－２０７３８；２０７４０－２０８６９；２０８７１－２０９９８；２１０２９－２１０８０；２１０８２－２１１７０；２１１９６－２１２１８；２１２３４－２１２５２；２１２７４－２１３２２；２１３２４－２１３５１；２１３７９－２１４４３；２１４６４－２１４９７；２１４９９－２１５７４；２１６００－２１６１７；２１６３８－２１６６５；２１６６９－２１６９１；２１６９３－２１７５１；２１８１１－２１８４７；２１８４９－２１８７０；２１８７２－２１８９３；２１８９５－２１９３０；２１９３５－２１９７４；２１９７６－２１９９５；２１９９７－２２０１７；２２０１９－２２０３６；２２０４４－２２１０２；２２１０７－２２１４３；２２１５４－２２１８０；２２１７９－２２１９９；２２２０２－２２２２２；２２２２４－２２２３８；２２２４０－２２２８６；２２２８８－２２３０４；２２３１３－２２３４０；２２３４２－２２３６７；２２３８２－２２４０９；２２４２１－２２４４５；２２４６１－２２４９７；２２５００－２２５２９；２２５３１－２２５８３；２２５９７－２２６４８；２２６５３－２２６７５；２２６８１－２２７１６；２２７１８－２２７６８；２２７７０－２２７８７；２２７９０－２２８２１；２２８３５－２２８５６；２２８５８－２２８７８；２２８８０－２２９２３；２２９３４－２２９４８；２２９５０－２３４１７；２３４１９－２３４４６；２３４６０－２３５４７；２３５６２－２３６２２；２３６２４－２３７８３；２３７８５－２３８２１；２３８２３－２３９４０；２３９４２－２３９５７；２３９５９－２３９７３；２３９７５－２３９９１；２３９９３－２４１１６；２４１３４－２４１５８；２４２２３－２４２３８；２４２３９－２４２５４；２４２５４－２４２７８；２４２７８－２４２９５；２４２９８－２４３１６；２４３１８－２４４１２；２４４１８－２４４４７；２４４５１－２４４７６；２４４７５－２４４９６；２４４９２－２４５２７；２４５５８－２４５８５；２４５８１－２４５９７；２４５９３－２４６１８；２４６０７－２４６２２；２４６３３－２４６５８；２４６６０－２４６８１；２４６７５－２４７００；２４７０２－２４７３１；２４７３４－２４７４８；２４７４３－２４７５７；２４７５９－２４７７９；２４７９４－２４８３７；２４８６８－２４８９９；２４８９４－２４９０９；２４９３４－２４９６７；２４９５７－２４９９１；２５０１２－２５０９０；２５０９２－２５１１６；２５１１８－２５１４３；２５１５４－２５１７０；２５１８１－２５２０４；２５２１３－２５２３３；２５２５３－２５２７６；２５２７８－２５３１８；２５３０９－２５３２４；２５３２６－２５３４５；２５３４４－２５３６３；２５３９４－２５４１５；２５４３９－２５４９６；２５４９８－２５５１４；２５５７１－２５５９１；２５６０８－２５６４０；２５６６０－２５６７８；２５６８０－２５７０３；２５７０５－２５７３８；２５７３８－２５７５９；２５７５９－２５７８１；２５７９４－２５８１６；２５８１８－２５８４２；２５８３３－２５８７５；２５８８９－２５９２１；２５９１１－２５９２６；２５９３０－２５９５８；２５９５３－２５９７０；２５９６４－２５９７９；２５９９０－２６０２３；２６０２７－２６０６６；２６０７０－２６０８７；２６０８９－２６１０３；２６１２２－２６１４４；２６１４６－２６１６１；２６１８７－２６２４１；２６２４３－２６２６２；２６２７６－２６３００；２６３０２－２６３３２；２６３３２－２６３５６；２６３５８－２６３９１；２６３８８－２６４５１；２６４５３－２６４８０；２６５１６－２６５３６；２６５３８－２６５８３；２６５８６－２６６０１；２６５９０－２６６２８；２６６１７－２６６５２；２６６５９－２６６７３；２６６７４－２６７００；２６７０９－２６７２４；２６７２６－２６７５２；２６７７８－２６８１２；２６８１４－２６８４１；２６８３９－２６８６２；２６８５２－２６８７２；２６８７７－２６８９８；２６９００－２６９２３；２６９２５－２６９９６；２６９９６－２７０２０；２７０５３－２７０９６；２７０９５－２７１１０；２７１２３－２７１６２；２７１６７－２７１８１；２７１７５－２７１９０；２７２００－２７２５３；２７２４４－２７２５８；２７２５５－２７２６９；２７２６０－２７２７４；２７２７６－２７２９７；２７３１２－２７３３５；２７３３７－２７３５６；２７３５７－２７３７８；２７３８０－２７３９９；２７４２５－２７４４２；２７４３５－２７４５６；２７４４９－２７４６５；２７４５５－２７４８１；２７４８１－２７５０５；２７５２３－２７５６０；２７５５３－２７５６８；２７５７１－２７５９１；２７５９２－２７６２２；２７６２４－２７６４１；２７６４５－２７６６０；２７６９４－２７７２０；２７７２５－２７７７２；２７７８５－２７８１１；２７８１３－２７８２８；２７８４８－２７８８１；２７８８５－２７９０５；２７９０７－２７９２２；２７９３３－２８００１；２８００３－２８０４３；２８０５９－２８０８２；２８０９８－２８１４５；２８１４８－２８２１６；２８２１９－２８２３５；２８２６７－２８２８８；２８２８４－２８３１８；２８３２１－２８３４３；２８３５１－２８３７８；２８３８７－２８４０７；２８４０２－２８４３１；２８４３３－２８４５４；２８４４３－２８４７０；２８４７１－２８４８５；２８４８１－２８４９５；２８４９４－２８５０９；２８５１１－２８５２７；２８５６４－２８５８９；２８５９１－２８６１３；２８６１５－２８６４２；２８６４４－２８６６２；２８６７９－２８７０６；２８７１９－２８７３５；２８７５４－２８７７３；２８７７５－２８８０１；２８８０３－２８８４１；２８８３８－２８８５２；２８８６７－２８８８４；２８８８９－２８９０５；２８９００－２８９２５；２８９５３－２８９８４；２９０３９－２９０７２；２９０７４－２９１１４；２９１２６－２９１５３；２９１５５－２９１７２；２９１９０－２９２３４；２９２３６－２９２６５；２９２７０－２９３０２；２９３３０－２９３７２；２９３９４－２９４７８；２９４８９－２９５２３；２９５２５－２９５４３；２９５５８－２９６２３；２９６２５－２９６５４；２９６７０－２９７２４；２９７２４－２９７４４；２９７５０－２９７７３；２９８１１－２９８６１；２９８９３－２９９１１；２９９３８－２９９５８；２９９４９－２９９７６；２９９７８－３０００５；３００２０－３００３６；３００３０－３００５２；３００５２－３００７５；３００７０－３００９７；３０１３８－３０１６０；３０１４９－３０１６４；３０１６８－３０１８９；３０２２３－３０２９２；３０３０６－３０３３５；３０３３７－３０３５７；３０３６３－３０３８３；３０３９５－３０４０９；３０４１２－３０４４２；３０４５４－３０４７１；３０４８８－３０５２３；３０５２４－３０５５６；３０５６５－３０６０９；３０６１１－３０６４５；３０６５０－３０７３２；３０７３０－３０７４６；３０７４８－３０７９２；３０８０４－３０８２２；３０８３４－３０８５４；３０８６４－３０８８５；３０８８７－３０９３３；３０９４４－３０９６４；３０９５７－３０９７２；３０９６９－３０９９４；３０９８５－３１００５；３１０１７－３１０６１；３１０７３－３１０９７；３１１０４－３１１２１；３１１２３－３１１４３；３１１３７－３１１７７；３１１７４－３１２０６；３１２１０－３１２３９；３１２４０－３１２５５；３１２４７－３１２６９；３１２６２－３１２７７；３１２７０－３１２９２；３１２８８－３１３４０；３１３４２－３１３６０；３１３５８－３１３９８；３１３８８－３１４０３；３１４０１－３１４１７；３１４４６－３１４６５；３１４７８－３１４９２；３１５５５－３１５７８；３１５８０－３１６０６；３１６０８－３１６５４；３１６５９－３１８２５；３１８２７－３１８６２；３１８６４－３１８９８；３１９００－３１９３９；３１９４１－３１９７１；３１９７３－３２０１９；３２０２１－３２０４１；３２０４３－３２０９６；３２１１６－３２２７５；３２２７７－３２３４２；３２３５４－３２３７５；３２３７７－３２４４４；３２４４６－３２４７６；３２４７９－３２５２９；３２５６６－３２５９５；３２６１９－３２６３６；３２６３０－３２７０５；３２７０７－３２７３９；３２７６４－３２７８７；３２７７９－３２８５０；３２８４５－３２８８７；３２８８９－３２９２６；３２９３２－３２９５５；３２９５７－３２９８７；３３００９－３３０５１；３３０７１－３３１０３；３３１０８－３３３４５；３３３４７－３３４８３；３３５００－３３５４２；３３５４４－３３５７９；３３５８１－３３６４４；３３６４６－３３６８６；３３６７９－３３７０７；３３７０９－３３７９０；３３７９２－３３８１８；３３８２０－３３８５６；３３８５８－３３８８９；３３８９１－３３９１０；３３９１２－３３９５４；３３９５６－３３９８０；３４００２－３４０３０；３４０３３－３４０８６；３４０８８－３４１０７；３４１０９－３４１２６；３４１３１－３４１８６；３４１８８－３４２０７；３４２０９－３４３２４；３４３２９－３４３６０；３４３６４－３４３９７；３４３９９－３４４１３；３４４１６－３４４３５；３４４４８－３４４９０；３４４９２－３４５１７；３４５１９－３４５３６；３４５３８－３４５７６；３４５７８－３４５９２；３４６０７－３４６３０；３４６４０－３４６７０；３４６７２－３４６８６；３４６８８－３４７０３；３４７２９－３４７４５；３４７４０－３４７７３；３４７７３－３４７９０；３４７９２－３４８０９；３４８０４－３４８２１；３４８２４－３４８６１；３４８７２－３４８９１；３４８８２－３４９０２；３４８９３－３４９４５；３４９５０－３４９７１；３４９７３－３４９９１；３４９８５－３５００３；３５００６－３５０２１；３５０３８－３５０６１；３５０６２－３５０７６；３５０７７－３５１２３；３５１４１－３５１６６；３５１６７－３５１８５；
３５２０５－３５２３０；３５２３３－３５２５７；３５２５９－３５２８２；３５２９６－３５３１８；３５３２７－３５３６０；３５３６９－３５４０８；３５４２３－３５４５２；３５４５４－３５４７９；３５５４３－３５５９７；３５６１４－３５６４９；３５６４３－３５６５７；３５６９９－３５７３５；３５７４３－３５８９８；３５９００－３５９４３；３５９４５－３６２６９；３６２７１－３６２８５；３６２８７－３６３４４；３６３４７－３６３７０；３６３７４－３６４１７；３６４１１－３６４５８；３６４６０－３６４８６；３６４８９－３６６５６；３６６５８－３６６７８；３６６９３－３６８９５；３６９１８－３７０４６；３７０６１－３７０９６；３７０９８－３７１３３；３７１３５－３７１９９；３７２０１－３７２３３；３７２４２－３７２７２；３７２７９－３７３０９；３７３１１－３７３３７；３７３３９－３７３５３；３７３５５－３７４１５；３７４１９－３７４３８；３７４４０－３７４５８；３７４７７－３７４９７；３７５０４－３７５２３；３７５４１－３７５５９；３７５６１－３７５９６；３７５９８－３７６２７；３７６３２－３７６７６；３７７１２－３７７４６；３７７４９－３７７６９；３７７７０－３７８４９；３７８５１－３７９０３；３７９０５－３７９５６；３７９５８－３７９７２；３７９７４－３８００２；３８００４－３８０８２；３８０９９－３８１４８；３８１５０－３８１７４；３８１７７－３８２２１；３８２２１－３８２５５；３８２５７－３８３００；３８３０８－３８３８０；３８３９６－３８４５７；３８４９５－３８５０９；および３８５４０－３８５５４からなる群から選択される配列番号１の領域（標的配列領域－配列番号１内のそれらのヌクレオチド位置範囲によって特定される）に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、ヒトＴＩＡ１標的核酸を標的とする１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、リストＢ：２６－４４；４９－６３；１８３－２０２；２２２－２６６；２７５－２９７；３３２－３５３；３７６－３９０；２０１９－２０３５；２７２１－２７４６；３８０２－３８２７；４０６９－４０８５；６１３９－６１６７；６３７２－６３８８；６７３９－６７５５；９４０３－９４１８；９８５４－９８７２；１０３７４－１０４００；１０６３３－１０６４８；１０７４３－１０７５９；１１０４０－１１０５６；１１３９２－１１４０６；１１５０２－１１５１８；１２４８３－１２５０３；１２５０６－１２５２４；１２５３５－１２５９５；１２６０７－１２６２４；１２６１３－１２６２７；１２６８７－１２７０１；１２７５３－１２７６８；１２８８１－１２８９５；１３０８８－１３１２０；１３６０４－１３６２９；１４８８１－１４８９７；１５１３６－１５１５２；１５４２９－１５４４３；１５７８２－１５７９６；１６０８６－１６１２１；１６３６４－１６３８０；１６４１８－１６４３２；１６４２５－１６４３９；１６４３３－１６４５３；１６７０２－１６７１８；１７３４１－１７３６０；１７４９０－１７５０４；１７６０５－１７６２１；１７８５２－１７８６８；１７８８８－１７９１５；１７９９２－１８００９；１８４０２－１８４２０；１８７０３－１８７１７；１９１５５－１９１７１；１９３３３－１９３４７；１９３４９－１９３８６；１９４６７－１９４９０；１９４９２－１９５０７；１９５１０－１９６２８；１９６３５－１９６６２；１９８１１－１９８３４；１９８８７－１９９１０；２０１２６－２０１４２；２０１５５－２０１８２；２０１８４－２０２０１；２０２０３－２０３４６；２０３６６－２０３８６；２０４００－２０４１４；２０７４７－２０７６７；２０８０１－２０８１６；２０８３５－２０８５１；２０９０４－２０９２３；２１０４８－２１０６４；２２９９２－２３００８；２３０１４－２３０３０；２３０５６－２３０７２；２３０９３－２３１０８；２３１２３－２３１３８；２３１８８－２３２１５；２３２１７－２３３６８；２３５０２－２３５２５；２３６６６－２３６９１；２３７４５－２３７６７；２３８４０－２３８６５；２３８９６－２３９１１；２４０２６－２４０４０；２４０４２－２４０５８；２４０６６－２４１１３；２４７１３－２４７２７；２４９０１－２４９１５；２５９８９－２６００５；２６５０８－２６５２５；２６５１４－２６５３６；２６５２７－２６５４１；２６８４２－２６８５６；２８２４３－２８２６０；２８４８７－２８５０７；２８９０１－２８９２５；３１２４７－３１２６６；３１６８８－３１７５２；３１７５４－３１７８２；３１８５２－３１８８５；３１９０４－３１９２４；３１９５１－３１９６６；３２１７９－３２１９５；３２３６１－３２３９３；３２３９５－３２４２６；３３１４４－３３１５９；３３１７３－３３１９６；３３１９８－３３２２９；３３２６１－３３２７７；３３２８２－３３３００；３３８４０－３３８５４；３３９９３－３４００７；３４００２－３４０２９；３４１３５－３４１５０；３４１７０－３４１８６；３４１９４－３４２３１；３５１６７－３５１８１；３５２９８－３５３１９；３５８８０－３５８９６；３５９０８－３５９２３；３５９２５－３５９４３；３５９６２－３５９７６；３６０１１－３６０３４；３６０４３－３６０７７；３６０７３－３６０９３；３６０９５－３６１１６；３６１３６－３６１５６；３６１５８－３６１９３；３６１９５－３６２０９；３６２２９－３６２５１；３６２８７－３６３０４；３６３０６－３６３２５；３６４７２－３６４８６；３６５０８－３６５２５；３６５６３－３６５７７；３６５７９－３６６０５；３６６０８－３６６２７；３６６３７－３６６５２；３６６５８－３６６８０；３６８６１－３６８８９；３６９５６－３６９７８；３７０１０－３７０５０；３７０９９－３７１２７；３７１７３－３７１８７；３７４１７－３７４３４；３７７１５－３７７４６；３７７５１－３７７７９；３７７９８－３７８１３；３７８１５－３７８３６；３７８５３－３７８６９；３７８８０－３７８９４；３８２７９－３８２９６；３８３５２－３８３７３；３８４２２－３８４３６；３８４６７－３８５００；および３８７２０－３８７３５からなる群から選択される配列番号１の領域（配列番号１内のそれらのヌクレオチド位置範囲によって特定される）に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号４～５３からなる群から選択される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号４～５３からなる群から選択される配列番号に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のＬＮＡギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号４～５３からなる群から選択される配列番号に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるＬＮＡギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１１で示される配列、または配列番号１２で示される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１１で示される配列、または配列番号１２で示される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１１で示される配列、または配列番号１２で示される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のＬＮＡギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１１で示される配列、または配列番号１２で示される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるＬＮＡギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１１に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１転写産物を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１転写産物の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１２に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１転写産物を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１転写産物の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
本明細書において言及される、または特許請求される本発明のオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容され得る塩の形態であり得る。
本発明は、本発明に従ったオリゴヌクレオチドを含むコンジュゲート、および、前記オリゴヌクレオチドに共有結合した少なくとも１つのコンジュゲート部分を提供する。
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドまたはコンジュゲートと、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩、および／またはアジュバントとを含む医薬組成物を提供する。
本発明は、ＴＩＡ１を発現する標的細胞内でＴＩＡ１の発現を調節するためのｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドまたはコンジュゲートまたは医薬組成物を、有効量で上記細胞に投与することを含む方法を提供する。
本発明は、治療的または予防的有効量の、本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲートまたは医薬組成物を、疾患を患う、またはそれに罹り易い対象に投与することを含む、疾患を処置または予防するための方法を提供する。
いくつかの実施形態において、疾患は、神経変性疾患などの神経変性疾患である。
いくつかの実施形態において、疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、原発性タウオパチーなどのタウオパチー、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、ハンチントン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、および脊髄筋萎縮症、運動ニューロン疾患、タウオパチー、アルツハイマー病、およびウェランダー遠位型ミオパチーからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、疾患は、筋萎縮性側索硬化症である。
いくつかの実施形態において、疾患は、原発性タウオパチーなどのタウオパチーである、
いくつかの実施形態において、疾患は前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である。本発明は、医薬品に使用するための、本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲートまたは医薬組成物を提供する。
本発明は、神経変性疾患の処置または予防に使用するための、本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲートまたは医薬組成物を提供する。
本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬の調製のための、本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲートまたは医薬組成物の使用を提供する。
定義
オリゴヌクレオチド
本明細書で使用される用語「オリゴヌクレオチド」は、当業者に一般的に理解されているように、２つ以上の共有結合したヌクレオシドを含む分子として定義される。このような共有結合ヌクレオシドは、核酸分子またはオリゴマーとも称され得る。オリゴヌクレオチドは、通常研究室内で、固相化学合成と、その後の精製によって作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合したヌクレオチドまたはヌクレオシドの、核酸塩基部分の配列もしくは順序、またはその修飾に対して言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工であり、化学的に合成され、典型的には精製または単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾されたヌクレオシドまたはヌクレオチドを含んでよい。
アンチセンスオリゴヌクレオチド
本明細書で使用される用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸、特に標的核酸上の連続配列にハイブリダイズすることによって標的遺伝子の発現を調節することができるオリゴヌクレオチドとして定義される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは本質的に二本鎖ではなく、したがってｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡではない。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは一本鎖である。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの全長にわたって内部（ｉｎｔｒａ）または相互（ｉｎｔｅｒ）の自己相補性の程度が５０％未満である限り、ヘアピンまたは分子間二重鎖構造（同じオリゴヌクレオチドの２分子間の二重鎖）を形成できることが理解されよう。
連続ヌクレオチド配列
用語「連続ヌクレオチド配列」は、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書で用語「連続核酸塩基配列」および用語「オリゴヌクレオチドモチーフ配列」と互換的に使用される。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列を構成する。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列、例えばＦ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域を含み、場合によりさらなるヌクレオチド、例えば、官能基を連続ヌクレオチド配列に結合するのに使用され得るヌクレオチドリンカー領域を含んでもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であっても相補的でなくてもよい。有利には、連続ヌクレオチド配列は、標的核酸に１００％相補的である。
ヌクレオチド
ヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドの構成要素であり、本発明の目的のために、天然に存在するヌクレオチドおよび非天然のヌクレオチドの両方を含む。天然では、ＤＮＡヌクレオチドおよびＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分、および１つ以上のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシドおよびヌクレオチドはまた、「単位」または「モノマー」と互換的に称されてもよい。
修飾ヌクレオシド
本明細書で使用される用語「修飾ヌクレオシド」または「ヌクレオシド修飾」は、等価のＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシドと比較して、糖部分または（核酸）塩基部分の１つ以上の修飾の導入によって修飾されたヌクレオシドを指す。好ましい実施形態において、修飾ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。用語修飾ヌクレオシドはまた、用語「ヌクレオシド類似体」または修飾「単位」または修飾「モノマー」と互換的に使用されてもよい。非修飾ＤＮＡまたはＲＮＡ糖部分を有するヌクレオシドは、本明細書でＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシドの塩基領域に修飾を有するヌクレオシドは、Ｗａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対形成が可能であれば、依然として一般にＤＮＡまたはＲＮＡと称される。
修飾ヌクレオシド間結合
用語「修飾ヌクレオシド間結合」は、２つのヌクレオシドを互いに共有結合する、ホスホジエステル（ＰＯ）結合以外の結合として当業者に一般的に理解されるように定義される。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を含み得る。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を増大させる。天然に存在するオリゴヌクレオチドの場合、ヌクレオシド間結合は、隣接するヌクレオシド間でホスホジエステル結合を形成するリン酸基を含む。修飾ヌクレオシド間結合は、ｉｎ ｖｉｖｏ使用のためのオリゴヌクレオチドの安定化に特に有用であり、本発明のオリゴヌクレオチドのＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドの領域、例えばギャップマーオリゴヌクレオチドのギャップ領域内、ならびに領域ＦおよびＦ’などの修飾ヌクレオシドの領域におけるヌクレアーゼ切断から保護する役割を果たし得る。
一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、天然のホスホジエステル由来の修飾された１つ以上のヌクレオシド間結合、例えばヌクレアーゼ攻撃に対してより耐性となるような１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。ヌクレアーゼ耐性は、オリゴヌクレオチドを血清中でインキュベートすることにより、またはヌクレアーゼ耐性アッセイ（例えばヘビ毒ホスホジエステラーゼ（ＳＶＰＤ））を用いることにより決定することができ、これらは両方とも当技術分野で周知である。オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を増強することができるヌクレオシド間結合は、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合と呼ばれる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合が修飾され、例えばオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列の少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０、または例えば少なくとも９０％のヌクレオシド間結合が、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合は全て、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合である。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドを非ヌクレオチド官能基に結合する、例えばコンジュゲートに結合するヌクレオシドは、ホスホジエステルであり得ることが認識されるであろう。
好ましい修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートである。
ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ヌクレアーゼ耐性、有益な薬物動態および製造の容易さのために特に有用である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり、例えばオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列の少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％、または例えば少なくとも９０％のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合は全て、ホスホロチオエートである。
ホスホロチオエート結合などのヌクレアーゼ耐性結合は、標的核酸と二重鎖を形成するときにヌクレアーゼを動員することができるオリゴヌクレオチド領域、例えばギャップマーの領域Ｇにおいて特に有用である。しかしながら、ホスホロチオエート結合は、非ヌクレアーゼ動員領域および／または親和性増強領域、例えばギャップマーの領域ＦおよびＦ’においても有用であり得る。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態において、領域ＦもしくはＦ’、または領域ＦおよびＦ’の両方に１つ以上のホスホジエステル結合を含んでもよく、領域Ｇのヌクレオシド間結合は、完全にホスホロチオエートであってもよい。
有利には、オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列の全ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
欧州特許第２７４２１３５号明細書に開示されているように、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、他のヌクレオシド間結合（ホスホジエステルおよびホスホロチオエート以外）、例えば、欧州特許第２７４２１３５号明細書によれば別のＤＮＡホスホロチオエートのギャップ領域内で耐性であり得る、アルキルホスホネート／メチルホスホネートヌクレオシド間結合などを含んでもよいことが認識されよう。
核酸塩基
核酸塩基という用語は、ヌクレオシドおよびヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニンおよびグアニン）およびピリミジン（例えばウラシル、チミンおよびシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの際に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」は、天然に存在する核酸塩基、例えばアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチンおよびヒポキサンチンと、非天然の変異体との両方を指す。このような変異体は、例えばＨｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。
いくつかの実施形態において、核酸塩基部分は、プリンまたはピリミジンを、修飾されたプリンまたはピリミジン、例えば置換プリンまたは置換ピリミジン、例えばイソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チアゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、および２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変えることにより修飾される。
核酸塩基部分は、各々の対応する核酸塩基の文字コード、例えばＡ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵにより示すことができ、各文字は、等価の機能の修飾核酸塩基を場合により含むことができる。例えば、例示的オリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃおよび５－メチルシトシンから選択される。場合により、ＬＮＡギャップマーについて、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。
修飾オリゴヌクレオチド
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシドおよび／または修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを表す。キメラオリゴヌクレオチドという用語は、修飾ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを表すために文献で使用されている用語である。
相補性
用語「相補性」は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのＷａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対形成の能力を表す。Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）およびアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。オリゴヌクレオチドは修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでもよく、例えば５－メチルシトシンは度々シトシンの代わりに使用され、したがって相補性という用語は、非修飾核酸塩基と修飾核酸塩基との間のＷａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対形成を包含することが理解されよう（例えばＨｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。
本明細書で使用される用語「相補性％」は、個別の核酸分子（例えば、標的核酸または標的配列）の所与の位置のヌクレオチドの連続配列に所与の位置において相補的な（すなわち、Ｗａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する）、核酸分子内の連続ヌクレオチド配列（例えばオリゴヌクレオチド）のヌクレオチドの数を％で表したものを指す。百分率は、２つの配列間で対を形成する（標的配列５’－３’とオリゴヌクレオチド配列３’－５’を整列させたとき）、整列した塩基の数を計数し、その数をオリゴヌクレオチドのヌクレオチドの総数で除し、１００を乗じることにより計算される。このような比較において、整列（塩基対を形成）しない核酸塩基／ヌクレオチドは、ミスマッチと称される。好ましくは、挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の相補性％の計算において許容されない。
「完全に相補的な」という用語は、１００％の相補性を指す。
同一性
本明細書で使用される用語「同一性」は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。したがって、同一性の百分率は、２つの配列（例えば、本発明の化合物の連続ヌクレオチド配列および参照配列）の間で同一の（一致する）整列された塩基の数を計数し、その数を整列された領域内のヌクレオチドの総数で除し、１００を乗ずることにより計算される。したがって、同一性の百分率＝（一致数×１００）／整列領域（例えば、連続ヌクレオチド配列）の長さ。挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の同一性の百分率の計算において許容されない。同一性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がＷａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されよう（例えば、５－メチルシトシンは、同一性％の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。
ハイブリダイゼーション
本明細書で使用される用語「ハイブリダイズしている」または「ハイブリダイズする」は、２つの核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチドおよび標的核酸）が対向する鎖上の塩基対との間で水素結合を形成することにより二重鎖を形成することとして理解するべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性は、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、多くの場合、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される融解温度（Ｔｍ）によって表される。生理学的条件では、Ｔｍは親和性に厳密に比例しない（Ｍｅｒｇｎｙ ａｎｄ Ｌａｃｒｏｉｘ，２００３，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５－５３７）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、ここでＲは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸との反応のΔＧ°が非常に低ければ、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間のハイブリダイゼーションが強いことを示している。ΔＧ°は、水中濃度が１Ｍ、ｐＨが７、および温度が３７℃の反応に関連したエネルギーである。標的核酸に対するオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的反応であり、自発的反応の場合、ΔＧ°はゼロ未満である。ΔＧ°は、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍ．３６－３８およびＨｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されているように、例えば等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法により、実験的に測定することができる。ΔＧ°測定のために、市販の装置が入手可能であることは当業者には公知であると思われる。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．に記載の最近接モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いて、９５：１４６０－１４６５Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６およびＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５に記載の適切に誘導された熱力学パラメータを使用することにより数値的に概算することもできる。その意図した核酸標的をハイブリダイゼーションによって調節する可能性を得るために、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドについて－１０ｋｃａｌ未満の概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態において、ハイブリダイゼーションの程度または強度は、標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°により測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドについて－１０ｋｃａｌの範囲未満、例えば－１５ｋｃａｌ未満、例えば－２０ｋｃａｌ未満、および例えば－２５ｋｃａｌ未満の概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズすることができる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、－１０～－６０ｋｃａｌ、例えば－１２～－４０、例えば－１５～－３０ｋｃａｌ、または－１６～－２７ｋｃａｌ、例えば－１８～－２５ｋｃａｌの概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。
標的核酸
本発明によれば、標的核酸は、哺乳動物ＴＩＡ１をコードする核酸であり、例えば遺伝子、ＴＩＡ１ ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ、成熟ｍＲＮＡ、またはｃＤＮＡ配列であり得る。したがって、標的は、ＴＩＡ１標的核酸と称することができる。
適切には、標的核酸は、ＴＩＡ１タンパク質、特に、本明細書で配列番号１として提供されるｐｒｅ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ配列をコードするヒトＴＩＡ１遺伝子などの哺乳動物ＴＩＡ１をコードする。
いくつかの実施形態において、標的は、本明細書に配列番号２として示されるカニクイザルＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ、または本明細書に配列番号３として示されるマウスＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡであり得る。本発明者らによって同定された標的部位は、配列番号１、ならびに配列番号２または配列番号３の両方に存在し得ることが認識されよう。
４～５３。
いくつかの実施形態において、標的核酸は、配列番号１、２もしくは３、またはその天然に存在する変異体（例えば、哺乳動物ＴＩＡ１タンパク質をコードするＴＩＡ１配列）からなる群から選択される。
本発明のオリゴヌクレオチドを研究または診断に使用する場合、標的核酸は、ｃＤＮＡ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡに由来する合成核酸であり得る。
ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ用途に関して、本発明のオリゴヌクレオチドは、典型的には、ＴＩＡ１標的核酸を発現する細胞内で、ＴＩＡ１標的核酸の発現を阻害することが可能である。
いくつかの実施形態において、標的細胞、またはヒトＴＩＡ１を発現する細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞株または細胞培養物である－適切な細胞株のリストについては、実施例を参照されたい。いくつかの実施形態において、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞は、Ｕ２ＯＳ細胞またはｉＰＳＣ由来の運動ニューロン細胞である。
いくつかの実施形態において、標的細胞は、上位または下位運動ニューロンなどの運動ニューロンである（例えば、ＡＬＳの処置のための化合物の標的細胞であり得る）。いくつかの実施形態において、標的細胞は皮質ニューロンである（例えば、ＦＴＤまたは原発性タウオパチーなどのタウオパチーの処置のための化合物の標的細胞であり得る）。
本発明のオリゴヌクレオチドの核酸塩基の連続配列は、典型的には、オリゴヌクレオチドの長さにわたって測定して、場合により１つまたは２つのミスマッチを除いて、また場合により、オリゴヌクレオチドをコンジュゲートなどの任意選択の官能基に結合し得るヌクレオチドベースのリンカー領域、または他の非相補的末端ヌクレオチド（例えば、領域Ｄ’またはＤ’’）を除いて、ＴＩＡ１標的核酸に相補的である。標的核酸は、メッセンジャーＲＮＡ、例えば、ヒトＴＩＡ１などの哺乳動物ＴＩＡ１タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡもしくはｐｒｅ－ｍＲＮＡ、例えば、配列番号１の配列として開示したものなどのヒトＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列であり、標的ＲＮＡ配列はチミジン塩基（Ｔ）の代わりにウラシル（Ｕ）塩基を有することは理解されるものと思われる。
Figure 2022512877000001
Figure 2022512877000002
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは配列番号１を標的とする：いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、配列番号１に相補的であり、ヒトＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡを発現する細胞内で、ヒトＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの発現を阻害することができる。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは配列番号２を標的とする。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、配列番号２に相補的であり、カニクイザルＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡを発現する細胞内で、カニクイザルＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの発現を阻害することができる。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは配列番号３を標的とする。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、配列番号３に相補的であり、マウスＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡを発現する細胞内で、マウスＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの発現を阻害することができる。
標的配列
本明細書で使用される用語「標的配列」は、標的核酸に存在する、本発明のオリゴヌクレオチドに相補的な核酸塩基配列を含むヌクレオチドの配列を指す。いくつかの実施形態において、標的配列は、標的核酸上の、本発明のオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列に相補的な領域からなる。
本発明のオリゴヌクレオチドにより標的とされ得る、ヒトＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ（参照として配列番号１を使用する）の領域により定義される、様々な標的配列が、本明細書にて提供される。
いくつかの実施形態において、標的配列は、単一オリゴヌクレオチドの相補的配列よりも長く、例えば本発明のいくつかのオリゴヌクレオチドにより標的とされ得る標的核酸の好ましい領域を表し得る。
本発明のオリゴヌクレオチドは、本明細書で記載される標的配列などの、標的核酸のサブ配列といった、標的核酸に相補的な、または標的核酸とハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含む。
オリゴヌクレオチドは、標的核酸分子に存在する標的配列に相補的な連続ヌクレオチド配列を含む。連続ヌクレオチド配列（したがって、標的配列）は、少なくとも１０連続ヌクレオチド、例えば、９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９、または３０連続ヌクレオチド、例えば１２～２５、例えば１４～１８連続ヌクレオチドを含む。
標的配列領域
本発明者らは、本発明のオリゴヌクレオチドによって標的とされ得るＴＩＡ１標的核酸の特に有効な配列を同定した－これらは、標的部位または標的配列領域と称される。したがって、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０連続ヌクレオチド、例えば少なくとも１２連続ヌクレオチドを含み、標的部位領域に相補的な、例えば完全に相補的な連続ヌクレオチド配列を含み得る。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号５である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号６である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号７である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号８である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号９である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１０である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１１である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１２である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１３である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１４である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１５である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１６である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１７である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１８である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号１９である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２０である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２１である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２２である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２３である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２４である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２５である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２６である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２７である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２８である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号２９である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３０である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３１である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３２である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３３である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３４である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３５である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３６である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３７である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３８である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号３９である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４０である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４１である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４２である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４３である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４４である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４５である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４６である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４７である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４８である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号４９である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号５０である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号５１である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号５２である。
いくつかの実施形態において、標的部位領域は、配列番号５３である。
一態様において、本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１のエクソン領域に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、８１－２５６；１２４８６－１２５８２；１７８０７－１７９０５；１９３４３－１９３９７；１９５７０－１９６０２；２０８３９－２０９２６；２４０３２－２４１０７；３１６６７－３１７７５；３２１６２－３２２５７；３２３６９－３２４５３；３３１６７－３３２９０；３４１７０－３４３１２；３５８１６－３８４５７からなる群から選択される配列番号１の領域に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
さらなる態様において、本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、配列番号１のイントロン領域に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供し：本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列が、２５６－１２４８６；１２５８２－１７８０７；１７９０５－１９３４３；１９３９７－１９５７０；１９６０２－２０８３９；２０９２６－２４０３２；２４１０７－３１６６７；３１７７５－３２１６２；３２２５７－３２３６９；３２４５３－３３１６７；３３２９０－３４１７０；ａｎｄ ３４３１２－３５８１６からなる群から選択される配列番号１の領域に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。
標的細胞
本明細書で使用される用語「標的細胞」は、標的核酸を発現する細胞を指す。いくつかの実施形態において、標的細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏであり得る。いくつかの実施形態において、標的細胞は、哺乳動物細胞、例えばげっ歯類細胞、例えばマウス細胞もしくはラット細胞、または霊長類細胞、例えばサル細胞もしくはヒト細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、脳細胞などの神経細胞である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、上位運動ニューロンまたは下位運動ニューロンなどの運動ニューロンである。いくつかの実施形態において、標的細胞は、皮質ニューロンである。ＴＩＡ１の発現を阻害する能力についてのｉｎ ｖｉｔｒｏ評価のために、標的細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ初代細胞またはｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物であり得ることが理解されよう。治療などのｉｎ ｖｉｖｏ使用の場合、標的細胞は適切にｉｎ ｖｉｖｏである。
好ましい実施形態において、標的細胞は、ＴＩＡ１ ｐｒｅ－ｍＲＮＡなどのＴＩＡ１ ｍＲＮＡ、例えば配列番号１、または（エクソン標的化合物のための）ＴＩＡ１成熟ｍＲＮＡを発現する。ＴＩＡ１ ｍＲＮＡのポリＡテールは、典型的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド標的化では無視される。
天然に存在する変異体
用語「天然に存在する変異体」は、標的核酸と同じ遺伝子座に由来するが、例えば、同じアミノ酸をコードする多数のコドンを生じる遺伝コードの縮重によって、またはｐｒｅ－ｍＲＮＡの選択的スプライシング、もしくは単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）などの多型の存在のために異なり得る、ＴＩＡ１遺伝子または転写産物の変異体、および対立遺伝子変異体を指す。オリゴヌクレオチドに対する十分な相補的配列の存在に基づいて、本発明のオリゴヌクレオチドは、したがって、標的核酸およびその天然に存在する変異体を標的とし得る。
ホモサピエンスＴＩＡ１遺伝子は、第２染色体：７０，２０９，４４４～７０，２４８，６６０リバース鎖（ＧＲＣｈ３８：ＣＭ０００６６４．２）に位置する。
いくつかの実施形態において、天然に存在する変異体は、哺乳動物ＴＩＡ１標的核酸、例えば配列番号１からなる群から選択される標的核酸に対して少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を有する。いくつかの実施形態において、天然に存在する変異体は、配列番号１のヒトＴＩＡ１標的核酸に対して少なくとも９９％の相同性を有する。
発現の調節
本明細書で使用される用語「発現の調節」とは、オリゴヌクレオチドの投与前のＴＩＡ１またはＴＩＡ１ ｍＲＮＡの量と比較したときに、ＴＩＡ１タンパク質またはＴＩＡ１ ｍＲＮＡの量を変化させる、オリゴヌクレオチドの能力に関する全体的な用語と理解されるべきである。または、発現の調節は、対照実験を参照することによって決定され得る。対照は、例えば、生理食塩水組成物（オリゴヌクレオチド非含有）で処理された個体もしくは標的細胞、または非標的化オリゴヌクレオチド（モック）で処理された個体もしくは標的細胞であると一般的に理解されている。
調節の１つの好ましいタイプは、例えばＴＩＡ１ ｍＲＮＡの分解により、ＴＩＡ１の発現を阻害、ダウンレギュレート、低減、抑制、除去、停止、遮断、防止、減少、低下、回避または終了するオリゴヌクレオチドの能力である。
高親和性修飾ヌクレオシド
高親和性修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドに組み込まれると、例えば融解温度（Ｔｍ）によって測定して、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を向上させる修飾ヌクレオチドである。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２℃、より好ましくは＋１．５～＋１０℃、最も好ましくは＋３～＋８℃の融解温度の上昇をもたらす。多数の高親和性修飾ヌクレオシドが当技術分野において公知であり、例えば、多くの２’置換ヌクレオシドおよびロックド核酸（ＬＮＡ）が含まれる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３およびＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照されたい）。
糖修飾
本発明のオリゴマーは、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合に糖部分の修飾を有する１つ以上のヌクレオシドを含み得る。
リボース糖部分の修飾を有する多数のヌクレオシドが、親和性および／またはヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドの特定の特性を改善することを主な目的として作製されている。
そのような修飾には、例えばヘキソース環（ＨＮＡ）または二環式環（典型的には、リボース環（ＬＮＡ）のＣ２とＣ４炭素の間にバイラジカル架橋を有する）、または典型的にはＣ２とＣ３炭素の間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）で置き換えることにより、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えばビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号パンフレット）または三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号パンフレット）が含まれる。修飾ヌクレオシドには、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、またはモルホリノ核酸の場合には、糖部分が非糖部分と置き換えられたヌクレオシドも含まれる。
糖修飾には、リボース環上の置換基を水素以外の基、またはＤＮＡヌクレオシドおよびＲＮＡヌクレオシド内に天然に存在する２’－ＯＨ基に変化させることを介して行われる修飾も含まれる。置換基は、例えば２’、３’、４’または５’位で導入され得る。
２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨもしくは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）、またはリボース環の２’炭素と第２の炭素との間に架橋を形成できる２’結合バイラジカルを含むヌクレオシド、例えばＬＮＡ（２’－４’バイラジカル架橋）ヌクレオシドである。
実際、２’置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、多くの２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれた際に有益な特性を有することが見出されている。例えば、２’修飾ヌクレオシドは、結合親和性の向上、および／またはヌクレアーゼ耐性の増大をオリゴヌクレオチドに提供することができる。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡおよび２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。さらなる例については、例えばＦｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３およびＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、およびＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下に、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドを例示する。
Figure 2022512877000003
本発明に関連して、２’置換は、ＬＮＡのような２’架橋分子を含まない。
ロックド核酸（ＬＮＡ）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドであり、これはリボース環のコンホメーションを制限または固定する。これらのヌクレオシドは、文献にて架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースのコンホメーションの固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡまたはＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖安定化）に関連している。これは通常、オリゴヌクレオチド／相補的二本鎖の融解温度を測定することにより決定され得る。
非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ ９９／０１４２２６，ＷＯ ００／６６６０４，ＷＯ ９８／０３９３５２，ＷＯ ２００４／０４６１６０，ＷＯ ００／０４７５９９，ＷＯ ２００７／１３４１８１，ＷＯ ２０１０／０７７５７８，ＷＯ ２０１０／０３６６９８，ＷＯ ２００７／０９００７１，ＷＯ ２００９／００６４７８，ＷＯ ２０１１／１５６２０２，ＷＯ ２００８／１５４４０１，ＷＯ ２００９／０６７６４７，国際公開第ＷＯ２００８／１５０７２９号パンフレット、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６，Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、およびＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８、およびＷａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１６，５９，９６４５－９６６７に開示されている。
さらなる非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドを、スキーム１に開示する。
スキーム１：
Figure 2022512877000004
特定のＬＮＡヌクレオシドは、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、６’－メチル－β－Ｄ－オキシＬＮＡ、例えば（Ｓ）－６’－メチル－β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（ＳｃＥＴ）およびＥＮＡである。
特定の有利なＬＮＡは、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡである。
ＲＮａｓｅ Ｈの活性および動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性は、相補的ＲＮＡ分子と二重鎖を形成するときにＲＮａｓｅ Ｈを動員する、その能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号パンフレットは、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を決定するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供しており、これはＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力の決定に使用することができる。典型的には、オリゴヌクレオチドが、相補的標的核酸配列が提供された場合に、被験修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチドの全モノマー間にホスホロチオエート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含むオリゴヌクレオチドを使用し、国際公開第０１／２３６１３号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用して決定された初期速度（ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定）の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％または２０％超の初期速度を有する場合に、このオリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅ Ｈを動員することができると見なされる。ＲＨａｓｅ Ｈ活性の測定に使用するために、組換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１が、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ，Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
ギャップマー
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列は、ギャップマーであってもよい。アンチセンスギャップマーは、通常、ＲＮａｓｅ Ｈ媒介性分解を介して標的核酸を阻害するために使用される。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つの別個の構造領域、５’－フランク、ギャップおよび３’－フランク、Ｆ－Ｇ－Ｆ’を５’→３’方向で含む。「ギャップ」領域（Ｇ）は、オリゴヌクレオチドがＲＮａｓｅ Ｈを動員することを可能にする連続ＤＮＡヌクレオチドのストレッチを含む。ギャップ領域には、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む５’隣接領域（Ｆ）と、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む３’隣接領域（Ｆ’）が隣接する。領域ＦおよびＦ’の１つ以上の糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するオリゴヌクレオチドの親和性を向上させる（すなわち、これは親和性向上糖修飾ヌクレオシドである）。いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の１つ以上の糖修飾ヌクレオシドは、例えばＬＮＡおよび２’－ＭＯＥから独立して選択される、高親和性２’糖修飾などの２’糖修飾ヌクレオシドである。
ギャップマー設計において、ギャップ領域の最も５’および３’のヌクレオシドはＤＮＡヌクレオシドであり、各々、５’（Ｆ）または３’（Ｆ’）領域の糖修飾ヌクレオシドに隣接して配置されている。フランクはさらに、ギャップ領域から最も遠い端、すなわち５’フランクの５’末端および３’フランクの３’末端に少なくとも１つの糖修飾ヌクレオシドを有することによって定義されてもよい。
領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’は、連続ヌクレオチド配列を形成する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列は、式Ｆ－Ｇ－Ｆ’のギャップマー領域を含み得る。
ギャップマー設計Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、例えば１２～３２ヌクレオシド、例えば１３～２４、例えば１４～２２ヌクレオシド、例えば１４～１７、例えば１６～１８ヌクレオシドであり得る。
例として、本発明のギャップマーオリゴヌクレオチドは、以下の式により表すことができる：
Ｆ１－８－Ｇ５－１６－Ｆ’１－８、例えば
Ｆ１－８－Ｇ７－１６－Ｆ’２－８
但し、ギャップマー領域の全長は、少なくとも１２、例えば少なくとも１４ヌクレオチド長であることを条件とする。
領域Ｆ、ＧおよびＦ’は、さらに以下に定義され、Ｆ－Ｇ－Ｆ’式に組み込むことができる。
ギャップマー－領域Ｇ
ギャップマーの領域Ｇ（ギャップ領域）は、オリゴヌクレオチドがＲＮａｓｅＨ、例えばヒトＲＮａｓｅ Ｈ１を動員することを可能にするヌクレオシド、典型的にはＤＮＡヌクレオシドの領域である。ＲＮａｓｅＨは、ＤＮＡとＲＮＡの間の二重鎖を認識し、ＲＮＡ分子を酵素的に切断する細胞酵素である。好適には、ギャップマーは、少なくとも５または６連続ＤＮＡヌクレオシド、例えば５～１６連続ＤＮＡヌクレオシド、例えば６～１５連続ＤＮＡヌクレオシド、例えば７～１４連続ＤＮＡヌクレオシド、例えば８～１２連続ＤＮＡヌクレオチド、例えば８～１２連続ＤＮＡヌクレオチド長のギャップ領域（Ｇ）を有し得る。ギャップ領域Ｇは、いくつかの実施形態において、６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５または１６の連続ＤＮＡヌクレオシドから成り得る。ギャップ領域内の１つ以上のシトシン（Ｃ）ＤＮＡは、いくつかの場合、メチル化（例えば、ＤＮＡ ｃにＤＮＡ ｇが続く場合）されてもよく、そのような残基は、５－メチル－シトシン（ｍｅＣ）と注釈が付けられる。いくつかの実施形態において、ギャップ領域Ｇは、６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５または１６の連続ホスホロチオエート結合ＤＮＡヌクレオシドからなり得る。いくつかの実施形態において、ギャップ内の全ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である。
従来のギャップマーはＤＮＡギャップ領域を有するが、ギャップ領域内で使用される場合にＲＮａｓｅＨ動員を可能にする修飾ヌクレオシドの例が多数存在する。ギャップ領域内に含まれる場合にＲＮａｓｅＨの動員が可能であるとして報告されている修飾ヌクレオシドには、例えば、α－Ｌ－ＬＮＡ、Ｃ４’－アルキル化ＤＮＡ（ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５０３４９およびＶｅｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１８（２００８）２２９６－２３００に記載のもの、両方とも参照により本明細書に組み込まれる）、ＡＮＡおよび２’Ｆ－ＡＮＡのようなアラビノース由来ヌクレオシド（Ｍａｎｇｏｓ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．１２５，６５４－６６１）、ＵＮＡ（アンロックド核酸）（参照により本明細書に組み込まれるＦｌｕｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｓｙｓｔ．，２００９，１０，１０３９に記載のもの）が含まれる。ＵＮＡは、典型的には、リボースのＣ２とＣ３の間の結合が除去され、アンロックド「糖」残基を形成するアンロックド核酸である。このようなギャップマーに使用されている修飾ヌクレオシドは、ギャップ領域内に導入された場合に２’エンド（ｅｎｄｏ）（ＤＮＡ様）構造を採択する（すなわち、ＲＮａｓｅＨ動員を可能にする修飾）ヌクレオシドであり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＤＮＡギャップ領域（Ｇ）は、場合により、ギャップ領域内に導入された際に２’エンド（ｅｎｄｏ）（ＤＮＡ様）構造を採択する１～３個の糖修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
領域Ｇ－「ギャップブレーカー」
または、いくつかのＲＮａｓｅＨ活性を保持しながら、ギャップマーのギャップ領域に３’エンドコンホメーションを付与する修飾ヌクレオシドの挿入についての多くの報告が存在する。１つ以上の３’エンド修飾ヌクレオシドを含むギャップ領域を有するこのようなギャップマーは、「ギャップブレーカー」または「ギャップ破壊」ギャップマーと称される。例えば、国際公開第２０１３／０２２９８４号パンフレットを参照されたい。ギャップブレーカーオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨ動員を可能にするために、ギャップ領域内にＤＮＡヌクレオシドの十分な領域を保持する。ＲＮａｓｅＨを動員するためのギャップブレーカーオリゴヌクレオチド設計の能力は、典型的には、配列特異的、または化合物特異的でさえある（Ｒｕｋｏｖ ｅｔ ａｌ．２０１５ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．４３ ｐｐ．８４７６－８４８７を参照されたい）。当該文献は、いくつかの場合、標的ＲＮＡのより特異的な切断を提供するＲＮａｓｅＨを動員する「ギャップブレーカー」オリゴヌクレオチドを開示している。ギャップブレーカーオリゴヌクレオチドのギャップ領域内で使用される修飾ヌクレオシドは、例えば、３’エンドコンホメーションを付与する修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチル（ＯＭｅ）もしくは２’－Ｏ－ＭＯＥ（ＭＯＥ）ヌクレオシド、またはβ－Ｄ ＬＮＡヌクレオシド（ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’との間の架橋が、βコンホメーションである）、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡまたはＳｃＥＴヌクレオシドであり得る。
上述した領域Ｇを含むギャップマーと同様に、ギャップブレーカーまたはギャップ破壊ギャップマーのギャップ領域は、ギャップの５’末端に（領域Ｆの３’ヌクレオシドに隣接して）ＤＮＡヌクレオシドを有し、ギャップの３’末端に（領域Ｆ’の５’ヌクレオシドに隣接して）ＤＮＡヌクレオシドを有する。破壊ギャップを含むギャップマーは、典型的には、ギャップ領域の５’末端または３’末端のいずれかに少なくとも３または４連続ＤＮＡヌクレオシドの領域を保持する。
ギャップブレーカーオリゴヌクレオチドの例示的な設計は、
Ｆ１－８－［Ｄ３－４－Ｅ１－Ｄ３－４］－Ｆ’１－８
Ｆ１－８－［Ｄ１－４－Ｅ１－Ｄ３－４］－Ｆ’１－８
Ｆ１－８－［Ｄ３－４－Ｅ１－Ｄ１－４］－Ｆ’１－８
を含み、領域Ｇは、［Ｄｎ－Ｅｒ－Ｄｍ］内であり、Ｄは、ＤＮＡヌクレオシドの連続配列であり、Ｅは、修飾ヌクレオシド（ギャップブレーカーまたはギャップ破壊ヌクレオシド）であり、ＦおよびＦ’は、本明細書に定義した隣接領域であるが、ただし、ギャップマー領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、少なくとも１２、例えば１４ヌクレオチド長であることを条件とする。
いくつかの実施形態において、ギャップ破壊ギャップマーの領域Ｇは、少なくとも６個のＤＮＡヌクレオシド、例えば６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５または１６個のＤＮＡヌクレオシドを含む。上述したように、ＤＮＡヌクレオシドは連続であってもよく、場合により１つ以上の修飾ヌクレオシドが散在してもよいが、ただし、ギャップ領域Ｇは、ＲＮａｓｅＨ動員を媒介できることを条件とする。
ギャップマー－隣接領域、ＦおよびＦ’
領域Ｆは、領域Ｇの５’ＤＮＡヌクレオシドのすぐ隣に配置されている。領域Ｆの最も３’のヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシド、例えば高親和性糖修飾ヌクレオシド、例えば２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシド、またはＬＮＡヌクレオシドである。
領域Ｆ’は、領域Ｇの３’ＤＮＡヌクレオシドのすぐ隣に配置されている。領域Ｆの最も５’のヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシド、例えば高親和性糖修飾ヌクレオシド、例えば２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシド、またはＬＮＡヌクレオシドである。
領域Ｆは、１～８連続ヌクレオチド長、例えば２～６、例えば３～４連続ヌクレオチド長である。有利な方法では、領域Ｆの最も５’のヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆの２つの最も５’のヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆの最も５’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆの２つの最も５’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆの２つの最も５’のヌクレオシドは、２’置換ヌクレオシドヌクレオシド、例えば２つの３’ＭＯＥヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆの最も５’のヌクレオシドは、２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシドである。
領域Ｆ’は、２～８連続ヌクレオチド長、例えば３～６、例えば４～５連続ヌクレオチド長である。有利な方法では、領域Ｆ’の最も３’の実施形態は、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’の２つの最も３’のヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’の２つの最も３’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’の最も３’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’の２つの最も３’のヌクレオシドは、２’置換ヌクレオシドヌクレオシド、例えば２つの３’ＭＯＥヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’の最も３’のヌクレオシドは、２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシドである。
領域Ｆまたは領域Ｆ’の長さが１である場合、それは有利な方法ではＬＮＡヌクレオシドであることに留意するべきである。
いくつかの実施形態において、領域Ｆおよび領域Ｆ’は、独立して、糖修飾ヌクレオシドの連続配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、領域Ｆの糖修飾ヌクレオシドは、独立して、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位および２’－フルオロ－ＡＮＡ単位から選択されてもよい。
いくつかの実施形態において、領域Ｆおよび領域Ｆ’は、独立して、ＬＮＡおよび２’置換修飾ヌクレオシドの両方を含む（混合ウイング設計）。
いくつかの実施形態において、領域Ｆおよび領域Ｆ’は、１タイプのみの糖修飾ヌクレオシド、例えばＭＯＥのみ、またはβ－Ｄ－オキシＬＮＡのみ、またはＳｃＥＴのみからなる。このような設計は、均一フランクまたは均一ギャップマー設計とも称される。
いくつかの実施形態において、領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’の全ヌクレオシドは、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡ、ＥＮＡまたはＳｃＥＴヌクレオシドから独立して選択される、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆは、１～５、例えば２～４、例えば３～４、例えば１、２、３、４または５連続ＬＮＡヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の全ヌクレオシドは、β－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドである。
いくつかの実施形態において、領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’の全ヌクレシドは、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅまたはＭＯＥヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、領域Ｆは、１、２、３、４、５、６、７または８連続ＯＭｅまたはＭＯＥヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態において、隣接領域の１つのみが、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅまたはＭＯＥからなり得る。いくつかの実施形態において、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅまたはＭＯＥヌクレオシドからなるのは５’（Ｆ）隣接領域であり、一方、３’（Ｆ’）隣接領域は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドまたはｃＥＴヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅまたはＭＯＥヌクレオシドからなるのは３’（Ｆ’）隣接領域であり、一方、５’（Ｆ）隣接領域は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドまたはｃＥＴヌクレオシドを含む。
いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の全修飾ヌクレオシドが、ＬＮＡヌクレオシド、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡ、ＥＮＡまたはＳｃＥＴヌクレオシドから独立して選択されるＬＮＡヌクレオシドであり、領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’は、場合によりＤＮＡヌクレオシドを含んでもよい（交互フランク、より詳細にはこれらの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の全修飾ヌクレオシドはβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドであり、領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’は、場合によりＤＮＡヌクレオシドを含んでもよい（交互フランク、より詳細にはこれらの定義を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の最も５’および最も３’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシド、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドまたはＳｃＥＴヌクレオシドである。
いくつかの実施形態において、領域Ｆと領域Ｇとの間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’と領域Ｇとの間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。いくつかの実施形態において、領域ＦまたはＦ’、ＦおよびＦ’のヌクレオシドの間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ＬＮＡギャップマー
ＬＮＡギャップマーは、領域ＦおよびＦ’のいずれか一方または両方が、ＬＮＡヌクレオシドを含むか、またはそれからなるギャップマーである。β－Ｄ－オキシギャップマーは、領域ＦおよびＦ’のいずれか一方または両方が、β－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを含むか、またはそれからなるギャップマーである。
いくつかの実施形態において、ＬＮＡギャップマーは、式：［ＬＮＡ］１－５－［領域Ｇ］－［ＬＮＡ］１－５のものであり、ここで、領域Ｇはギャップマー領域Ｇの定義に規定した通りである。
ＭＯＥギャップマー
ＭＯＥギャップマーは、領域ＦおよびＦ’がＭＯＥヌクレオシドからなるギャップマーである。いくつかの実施形態において、ＭＯＥギャップマーは、設計［ＭＯＥ］１－８－［領域Ｇ］－［ＭＯＥ］１－８、例えば［ＭＯＥ］２－７－［領域Ｇ］５－１６－［ＭＯＥ］２－７、例えば［ＭＯＥ］３－６－［領域Ｇ］－［ＭＯＥ］３－６のものであり、領域Ｇはギャップマーの定義に規定した通りである。５－１０－５設計（ＭＯＥ－ＤＮＡ－ＭＯＥ）を有するＭＯＥギャップマーは、当技術分野で広く使用されている。
混合ウイングギャップマー
混合ウイングギャップマーは、領域ＦおよびＦ’の一方または両方が、２’置換ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位および２’－フルオロ－ＡＮＡ単位からなる群から独立して選択される２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシドを含むＬＮＡギャップマーである。領域ＦおよびＦ’の少なくとも一方、または領域ＦおよびＦ’の両方が少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の残りのヌクレオシドは、ＭＯＥおよびＬＮＡからなる群から独立して選択される。領域ＦおよびＦ’の少なくとも一方、または領域ＦおよびＦ’の両方が少なくとも２つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の残りのヌクレオシドは、ＭＯＥおよびＬＮＡからなる群から独立して選択される。いくつかの混合ウイング実施形態において、領域ＦおよびＦ’の一方または両方が、１つ以上のＤＮＡヌクレオシドをさらに含んでもよい。
混合ウイングギャップマー設計は、国際公開第２００８／０４９０８５号パンフレットおよび国際公開第２０１２／１０９３９５号パンフレット（これらの両方は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
交互フランクギャップマー
交互フランクを有するオリゴヌクレオチドは、フランクの少なくとも一方（ＦまたはＦ’）が、ＬＮＡヌクレオシドに加えてＤＮＡを含むＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、領域ＦもしくはＦ’の少なくとも一方、または領域ＦおよびＦ’の両方は、ＬＮＡヌクレオシドおよびＤＮＡヌクレオシドの両方を含む。このような実施形態において、隣接領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’の両方は、少なくとも３つのヌクレオシドを含み、Ｆおよび／またはＦ’領域の最も５’および３’のヌクレオシドが、ＬＮＡヌクレオシドである。
いくつかの実施形態において、領域ＦもしくはＦ’の少なくとも一方、または領域ＦおよびＦ’の両方は、ＬＮＡヌクレオシドおよびＤＮＡヌクレオシドの両方を含む。そのような実施形態において、隣接領域ＦもしくはＦ’、またはＦおよびＦ’の両方は、少なくとも３つのヌクレオシドを含み、ＦまたはＦ’領域の最も５’および３’のヌクレオシドはＬＮＡヌクレオシドであり、領域ＦまたはＦ’（または領域ＦまたはＦ’の両方）の最も５’および３’のＬＮＡヌクレオシド間に位置する少なくとも１つのＤＮＡヌクレオシドが存在する。
オリゴヌクレオチド内の領域Ｄ’またはＤ’’
本発明のオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態において、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマーＦ－Ｇ－Ｆ’、ならびにさらに５’および／または３’ヌクレオシドを含むか、またはそれからなり得る。さらなる５’および／または３’ヌクレオシドは、標的核酸に完全に相補的であってもよく、または完全に相補的でなくてもよい。このようなさらなる５’および／または３’ヌクレオシドは、本明細書において領域Ｄ’およびＤ’’と称され得る。
領域Ｄ’またはＤ’’の付加は、連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマーをコンジュゲート部分または別の官能基に連結することを目的として用いられ得る。連続ヌクレオチド配列をコンジュゲート部分に連結するのに使用される場合、生体切断性リンカーとしての役割を果たし得る。または、それはエキソヌクレオアーゼ（ｅｘｏｎｕｃｌｅｏａｓｅ）保護を提供するために、または合成もしくは製造を容易にするために使用され得る。
領域Ｄ’およびＤ’’は、各々、領域Ｆの５’末端または領域Ｆ’の３’末端に結合して、以下の式Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’、Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’または
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’の設計を生成することができる。この場合、Ｆ－Ｇ－Ｆ’はオリゴヌクレオチドのギャップマー部分であり、領域Ｄ’またはＤ’’は、オリゴヌクレオチドの別個の部分を構成する。
領域Ｄ’またはＤ’’は、独立して、１、２、３、４または５個の追加のヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、標的核酸に相補的であっても、または相補的でなくてもよい。ＦまたはＦ’領域に隣接するヌクレオチドは、糖修飾ヌクレオチドではなく、例えばＤＮＡまたはＲＮＡまたはこれらの塩基修飾バージョンである。Ｄ’およびＤ’’領域は、ヌクレアーゼ感受性の生体切断性リンカーとしての役割を果たし得る（リンカーの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態において、追加の５’および／または３’末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されており、ＤＮＡまたはＲＮＡである。領域Ｄ’またはＤ’’としての使用に好適なヌクレオチドベースの生体切断性リンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号パンフレットに開示されており、これには例としてホスホジエステル結合ＤＮＡジヌクレオチドが含まれる。ポリオリゴヌクレオチド構築物における生体切断性リンカーの使用は、国際公開第２０１５／１１３９２２号パンフレットに開示されており、それらは複数のアンチセンス構築物（例えば、ギャップマー領域）を単一のオリゴヌクレオチド内で結合するのに使用されている。
一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、ギャップマーを構成する連続ヌクレオチド配列に加えて、領域Ｄ’および／またはＤ’’を含む。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、以下の式により表すことができる：
Ｆ－Ｇ－Ｆ’；特にＦ１－８－Ｇ５－１６－Ｆ’２－８
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’、特にＤ’１－３－Ｆ１－８－Ｇ５－１６－Ｆ’２－８
Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’、特にＦ１－８－Ｇ５－１６－Ｆ’２－８－Ｄ’’１－３
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’、特にＤ’１－３－Ｆ１－８－Ｇ５－１６－Ｆ’２－８－Ｄ’’１－３
いくつかの実施形態において、領域Ｄ’と領域Ｆとの間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。いくつかの実施形態において、領域Ｆ’と領域Ｄ’’との間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。
コンジュゲート
本明細書で使用されるコンジュゲートという用語は、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分または領域Ｃまたは第３の領域）に共有結合したオリゴヌクレオチドを指す。
１つ以上の非ヌクレオチド部分に対する本発明のオリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、例えば、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、細胞取り込み、または安定性に影響を及ぼすことにより、オリゴヌクレオチドの薬理学的性質を改善することができる。いくつかの実施形態において、コンジュゲート部分は、オリゴヌクレオチドの細胞分布、バイオアベイラビリティ、代謝、排泄、浸透性、および／または細胞取り込みを改善することにより、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を調節または向上させる。特に、コンジュゲートは、オリゴヌクレオチドを特定の器官、組織または細胞型に標的化し、それにより、その器官、組織または細胞型におけるオリゴヌクレオチドの有効性を向上させることができる。同時に、コンジュゲートは、非標的細胞型、組織または器官におけるオリゴヌクレオチドの活性（例えば、オフターゲット活性または非標的細胞型、組織もしくは器官における活性）を低下させる役割を果たし得る。
一実施形態において、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分）は、炭水化物、細胞表面受容体リガンド、原薬、ホルモン、親油性物質、ポリマー、タンパク質、ペプチド、毒素（例えば、細菌毒素）、ビタミン、ウイルスタンパク質（例えば、キャプシド）またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。
リンカー
結合またはリンカーは、１つ以上の共有結合を介して、ある目的の化学基またはセグメントを別の目的の化学基またはセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート部分は、直接、または結合部分（例えば、リンカーまたはテザー）を介してオリゴヌクレオチドに結合させることができる。リンカーは、第３の領域、例えばコンジュゲート部分（領域Ｃ）を、第１の領域、例えばオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列またはギャップマー領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’（領域Ａ）に共有結合する役割を果たす。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明のコンジュゲートまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、場合により、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドまたは連続ヌクレオチド配列（領域Ａまたは第１の領域）と、コンジュゲート部分（領域Ｃまたは第３の領域）との間に位置するリンカー領域（第２の領域または領域Ｂおよび／または領域Ｙ）を含み得る。
領域Ｂは、哺乳動物の体内で通常遭遇する条件下、または遭遇するものに類似した条件下で切断可能である生理学的に不安定な結合を含むか、またはそれからなる生体切断性リンカーを指す。生理学的に不安定なリンカーが化学的変換（例えば、切断）を受ける条件には、ｐＨ、温度、酸化もしくは還元条件または薬剤などの化学条件、および哺乳動物細胞で見られる塩濃度、または遭遇する塩濃度に類似した塩濃度が含まれる。哺乳動物の細胞内条件には、タンパク質分解酵素または加水分解酵素またはヌクレアーゼなどの哺乳動物細胞に通常存在する酵素活性の存在も含まれる。一実施形態において、生体切断性リンカーは、Ｓ１ヌクレアーゼ切断の影響を受けやすい。ＤＮＡホスホジエステルを含む生体切断性リンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）にさらに詳細に記載されている。本明細書の領域Ｄ’またはＤ’’も参照されたい。
領域Ｙは、必ずしも生体切断性ではないが、主にコンジュゲート部分（領域Ｃまたは第３の領域）をオリゴヌクレオチド（領域Ａまたは第１の領域）に共有結合する役割を果たすリンカーを指す。領域Ｙリンカーは、エチレングリコール、アミノ酸単位またはアミノアルキル基などの反復単位の鎖構造またはオリゴマーを含み得る。本発明のオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、以下の領域構成要素Ａ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｙ－Ｃ、Ａ－Ｙ－Ｂ－ＣまたはＡ－Ｙ－Ｃから構築することができる。いくつかの実施形態において、リンカー（領域Ｙ）は、例えば、Ｃ６からＣ１２のアミノアルキル基を含む、Ｃ２－Ｃ３６アミノアルキル基などのアミノアルキルである。好ましい実施形態において、リンカー（領域Ｙ）は、Ｃ６アミノアルキル基である。
処置
本明細書で使用される用語「処置」は、既存の疾患（例えば、本明細書で言及される疾患または障害）の処置、または疾患の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、すなわち予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）の両方を指す。したがって、本明細書で言及される処置は、いくつかの実施形態において、予防的であり得ることが認識されよう。
本発明は、ＴＩＡ１発現を標的とする、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドに関する。
ＴＩＡ１を標的とする本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＩＡ１標的核酸を発現する細胞内でＴＩＡ１標的核酸にハイブリダイズし、その発現を阻害することができる。
ＴＩＡ１標的核酸は、哺乳動物のＴＩＡ１ ｍＲＮＡもしくはｐｒｅｍＲＮＡ、例えばヒトＴＩＡ１ ｍＲＮＡもしくはｐｒｅｍＲＮＡ、例えば、ホモサピエンスＴ細胞制限細胞内抗原－１（ＴＩＡ１）に由来するｐｒｅｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ、第２染色体のＲｅｆＳｅｑＧｅｎｅ：７０，２０９，４４４～７０，２４８，６６０リバース鎖（ＧＲＣｈ３８：ＣＭ０００６６４．２）であり得る－Ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＧ０００００１１６００１（配列番号１）も参照されたい。
本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＩＡ１ ｍＲＮＡなどの標的核酸を発現する細胞内でＴＩＡ１ ｍＲＮＡなどのＴＩＡ１標的核酸の発現を阻害することができる。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、標的核酸を発現する細胞内でＴＩＡ１標的核酸の発現を阻害し、細胞におけるＴＩＡ１標的核酸（例えばｍＲＮＡ）の発現レベルと比較して、ＴＩＡ１標的核酸（例えばｍＲＮＡ）のレベルを、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の阻害で低減することができる。実施例１は、本発明のオリゴヌクレオチドの、標的核酸の発現を阻害する能力を評価するための好適なアッセイを提供する。好適には、化合物の、標的核酸の発現を阻害する能力の評価は、例えば、実施例１に記載のように、ジムノティック（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイなど、ｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。
本発明の一態様は、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、配列番号１、および／または配列番号４～５３からなる群から選択される配列に少なくとも９０％相補的、例えば、完全に相補的であるＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドギャップマーに関する。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチドの連続配列を含み、標的核酸または標的配列の領域と少なくとも９０％相補的、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、または１００％相補的である。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、１２～２４、例えば、１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，または２３連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、該連続ヌクレオチド配列は、配列番号１に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列は、ＬＮＡギャップマー、混合ウイングギャップマー、または交互フランクギャップマーなどのギャップマーである。
いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０連続ヌクレオチド、例えば、少なくとも１２連続ヌクレオチド、例えば、少なくとも１３連続ヌクレオチド、例えば、少なくとも１４連続ヌクレオチド、例えば、少なくとも１５連続ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含み、配列番号１に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、２０ヌクレオチド長未満である。いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～１６ヌクレオチド長である。
有利には、いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のヌクレオシドの間のヌクレオシド間結合は全て、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４～５３からなる群から選択される配列に完全に相補的である。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ－３’の連続ヌクレオチド配列を含むギャップマーオリゴヌクレオチドであり、領域ＦおよびＦ’は独立して、１～８個の糖修飾ヌクレオシドを含み、Ｇは、ＲＮａｓｅＨを動員することができる５～１６個のヌクレオシドの領域である。
いくつかの実施形態において、領域ＦおよびＦ’の糖修飾ヌクレオシドは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、およびＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態において、領域Ｇは５～１６連続ＤＮＡヌクレオシドを含む。
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドなどのギャップマーオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、ＬＮＡヌクレオシドはβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドである。
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列間のヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
Figure 2022512877000005
Figure 2022512877000006
本発明は、１２～２４ヌクレオシド長、例えば１４～１８長のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、配列番号５４～１０３からなる群から選択される配列内に存在する、少なくとも１２、例えば少なくとも１４、例えば少なくとも１５の連続ヌクレオチドを含む連続ヌクレオチド配列を含むアンチセンスヌクレオチドを提供する。
本発明は、配列番号５４～１０３から選択される連続ヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる本発明に従ったＬＮＡギャップマーを提供する。
本発明は、以下からなる群から選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する：
ＣＣｔｔｃｔｃａｔａｔａａａａＣＡＣＡ；ＣＴＴｔａｃｔａｃａｃｔｃｃＣＴ；ＣＣＡＣｔａａｔｔｃｔｔａａａａｔｔＴＣ；ＣＣａａｃａａｔｔａｃｔｔｃＴＣＡＡ；ＣＴＧａｔｔｔａｃａａｃｃｔｃＡＴＣ；ＴＡＴｔｔｔｔｃｔｃｃａａａａｔｔＣＣ；ＣＴＣＡｔｔｃａｔｃｃａａｃａａａｔＡＡ；ＣＡＣｔａａａａｃａｔｃｃｔａａａａＣＣ；ＴＴＣＣａｔｔｃｔｔｔａｃｔｃｔｔｔＡＡ；ＡＣＡｃｔａｔａｔｔｃｔａｃｃｔａＡＴＣ；ＣＣｔｔｔｃｃｃａｔｔａａａａａＡＴＴＴ；ＡＣＣＴｔｃｃａｔｔｔａａｃａｔｔＡＣ；ＡＴＣｔａｃｃａｔｔｃａａｃａａａＣＡＣ；ＴＧＴａａｃｔｔａａｔｃｔｔＣＣＴ；ＣＡｔｃｃｔａａｃｃｔｔａｔｔａｔＴＡＴ；ＣＣｃｔａａｃａｔｔｃｃｔａｔＴＴＡ；ＣＣｔｔｃａａｔｃｔａａｔｃＴＴＴＡ；ＡＣｃｔｔｇａａｔａｃｔｃｃＴＣＡ；ＴＴＣＡｃｔａｃｃｔｃｃｃａａＡＴ；ＡＴＣｔｃａｃａｃａｃａａｔａａｔＣＡＣ；ＣＴＣＡｃａｃａｃａａｔａａｔｃａＣＴ；ＡＴＡｔａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａＣＡＡ；ＴＡＴＡｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣ；ＡＴａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣＴ；ＴＡＴＴｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａｃＴＴ；ＡＴｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａＣＴＴＴ；ＧＣＣａａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣ；ＣＣＡａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣＴ；ＣＴａａａａｃｔｃｃａｔａｃｃＴＣＡ；ＣＣｃａｇａｃａｔｔａｃａｃＣＡ；ＣＣａｇａｃａｔｔａｃａｃｃａＴＴＣ；ＡＧＡｃａｔｔａｃａｃｃａｔＴＣＡ；ＡＡａｃａｇｔａａｔｃｃｃＴＴＣＡ；ＡＣＡｇｔａａｔｃｃｃｔｔｃａＣＴ；ＣＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃＴＴ；ＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔＴＡ；ＴＡａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔａＴＡＴ；ＴＡＴＴａａｃａｃａａａｃａｃａｔｔＣＡ；ＡＣＡｃａａａｃａｃａｔｔｃａａｔＣＡＴ；ＣＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡ；ＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴ；ＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴＣ；ＴＧＡｃａａａｔｃｃｔａａＴＣＴ；ＴＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａＴＣ；ＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａｔｃＴＴ；ＴＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃＡＴＡ；ＡＡＡｔａｃｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡ；ＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡＴ；ＣＣＴｔａｃａｔｃｃａｔａａｔｃＡＴ；およびＣＴＴＡｃａｔｃｃａｔａａｔｃａｔＴＴ；ここで、大文字はＬＮＡヌクレオシドであり、小文字はＤＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態において、連続ヌクレオシド配列内のヌクレオシド間結合は全て、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。任意選択で、ＬＮＡシトシンは５－メチルシトシンであってよい。任意選択で、ＤＮＡシトシンは５－メチルシトシンであってよい。
本発明は、ＣＣｔｔｃｔｃａｔａｔａａａａＣＡＣＡ；ＣＴＴｔａｃｔａｃａｃｔｃｃＣＴ；ＣＣＡＣｔａａｔｔｃｔｔａａａａｔｔＴＣ；ＣＣａａｃａａｔｔａｃｔｔｃＴＣＡＡ；ＣＴＧａｔｔｔａｃａａｃｃｔｃＡＴＣ；ＴＡＴｔｔｔｔｃｔｃｃａａａａｔｔＣＣ；ＣＴＣＡｔｔｃａｔｃｃａａｃａａａｔＡＡ；ＣＡＣｔａａａａｃａｔｃｃｔａａａａＣＣ；ＴＴＣＣａｔｔｃｔｔｔａｃｔｃｔｔｔＡＡ；ＡＣＡｃｔａｔａｔｔｃｔａｃｃｔａＡＴＣ；ＣＣｔｔｔｃｃｃａｔｔａａａａａＡＴＴＴ；ＡＣＣＴｔｃｃａｔｔｔａａｃａｔｔＡＣ；ＡＴＣｔａｃｃａｔｔｃａａｃａａａＣＡＣ；ＴＧＴａａｃｔｔａａｔｃｔｔＣＣＴ；ＣＡｔｃｃｔａａｃｃｔｔａｔｔａｔＴＡＴ；ＣＣｃｔａａｃａｔｔｃｃｔａｔＴＴＡ；ＣＣｔｔｃａａｔｃｔａａｔｃＴＴＴＡ；ＡＣｃｔｔｇａａｔａｃｔｃｃＴＣＡ；ＴＴＣＡｃｔａｃｃｔｃｃｃａａＡＴ；ＡＴＣｔｃａｃａｃａｃａａｔａａｔＣＡＣ；ＣＴＣＡｃａｃａｃａａｔａａｔｃａＣＴ；ＡＴＡｔａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａＣＡＡ；ＴＡＴＡｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣ；ＡＴａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣＴ；ＴＡＴＴｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａｃＴＴ；ＡＴｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａＣＴＴＴ；ＧＣＣａａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣ；ＣＣＡａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣＴ；ＣＴａａａａｃｔｃｃａｔａｃｃＴＣＡ；ＣＣｃａｇａｃａｔｔａｃａｃＣＡ；ＣＣａｇａｃａｔｔａｃａｃｃａＴＴＣ；ＡＧＡｃａｔｔａｃａｃｃａｔＴＣＡ；ＡＡａｃａｇｔａａｔｃｃｃＴＴＣＡ；ＡＣＡｇｔａａｔｃｃｃｔｔｃａＣＴ；ＣＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃＴＴ；ＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔＴＡ；ＴＡａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔａＴＡＴ；ＴＡＴＴａａｃａｃａａａｃａｃａｔｔＣＡ；ＡＣＡｃａａａｃａｃａｔｔｃａａｔＣＡＴ；ＣＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡ；ＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴ；ＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴＣ；ＴＧＡｃａａａｔｃｃｔａａＴＣＴ；ＴＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａＴＣ；ＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａｔｃＴＴ；ＴＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃＡＴＡ；ＡＡＡｔａｃｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡ；ＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡＴ；ＣＣＴｔａｃａｔｃｃａｔａａｔｃＡＴ；およびＣＴＴＡｃａｔｃｃａｔａａｔｃａｔＴＴからなる群から選択されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。ここで、大文字はβ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡヌクレオシドであり、小文字はＤＮＡヌクレオシドであり、オリゴヌクレオチド内の全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、全てのＬＮＡシトシンは５－メチルシトシンである。
さらに有利な標的部位領域
本発明は、１２～２４ヌクレオシド長、例えば１２～１８長のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、リストＡの標的配列領域からなる群から選択される標的部位領域に完全に相補的な、少なくとも１４、例えば少なくとも１５の連続ヌクレオチドを含む連続ヌクレオチド配列を含むアンチセンスヌクレオチドを提供する。
本発明は、１２～２４ヌクレオシド長、例えば１２～１８長のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの、本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、リストＢの標的配列領域からなる群から選択される標的部位領域に完全に相補的な、少なくとも１４、例えば少なくとも１５の連続ヌクレオチドを含む連続ヌクレオチド配列を含むアンチセンスヌクレオチドを提供する。
リストＡまたはリストＢの標的配列領域を標的とする本発明に従ったアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドなどのギャップマーオリゴヌクレオチドであり得る。
製造方法
さらなる態様において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを製造する方法であって、ヌクレオチド単位を反応させ、それによってオリゴヌクレオチド内に含まれる共有結合された連続ヌクレオチド単位を形成することを含む方法を提供する。好ましくは、この方法は、ホスホロアミダイト化学を使用する（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．１５４，ｐａｇｅｓ ２８７－３１３を参照されたい）。さらなる実施形態において、この方法は、連続ヌクレオチド配列をコンジュゲーティング部分（リガンド）と反応させて、コンジュゲート部分をオリゴヌクレオチドに共有結合させることをさらに含む。さらなる態様において、本発明の組成物を製造する方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドまたはコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドを、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩および／またはアジュバントと混合することを含む方法が提供される。
医薬組成物
さらなる態様において、本発明は、前述のオリゴヌクレオチドおよび／またはオリゴヌクレオチドコンジュゲートまたはその塩のいずれかと、薬学的に許容され得る希釈剤、担体、塩および／またはアジュバントとを含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容され得る希釈剤には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれ、薬学的に許容され得る塩には、限定するものではないが、ナトリウム塩およびカリウム塩が含まれる。いくつかの実施形態において、薬学的に許容され得る希釈剤は、無菌リン酸緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、薬学的に許容され得る希釈剤中５０～３００μＭ溶液の濃度で使用される。
本発明に従った化合物は、それらの薬学的に許容され得る塩の形態で存在してよい。「薬学的に許容され得る塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、適切な非毒性の有機もしくは無機酸または有機もしくは無機塩基から形成される従来の酸付加塩または塩基付加塩を指す。酸付加塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸などの無機酸に由来するもの、ならびにｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸などの有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、および第四級アンモニウム水酸化物、例えばテトラメチルアンモニウム水酸化物に由来するものが含まれる。医薬化合物の塩への化学修飾は、化合物の物理的および化学的安定性、吸湿性、流動性、および溶解性を向上させるための、薬理学者に周知の技術である。これは例えば、Ｂａｓｔｉｎ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０００，４，４２７－４３５、またはＡｎｓｅｌ，Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６ｔｈ ｅｄ．（１９９５），ｐｐ．１９６ ａｎｄ １４５６－１４５７に記載されている。例えば、本明細書で提供される化合物の薬学的に許容され得る塩は、ナトリウム塩であり得る。
本発明での使用に適した製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，１７ｔｈ ｅｄ．，１９８５に見られる。薬物送達の方法の簡単な総説については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３，１９９０）を参照されたい。国際公開第２００７／０３１０９１号パンフレットは、薬学的に許容され得る希釈剤、担体およびアジュバントの適切で好ましいさらなる例を提供している（参照により本明細書に組み込まれる）。適切な用量、製剤、投与経路、組成物、剤形、他の治療剤との組み合わせ、プロドラッグ製剤もまた、国際公開第２００７／０３１０９１号パンフレットに提供されている。
本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、医薬組成物または製剤の調製のために、薬学的に許容され得る活性または不活性物質と混合することができる。医薬組成物の調製のための組成物および方法は、限定するものではないが、投与経路、疾患の程度、または投与される用量を含む多くの基準に依存する。
これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されても、または滅菌フィルタにかけられてもよい。得られた水溶液は、そのまま使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性担体と組み合わされる。調製物のｐＨは、典型的には３～１１、より好ましくは５～９、または６～８、最も好ましくは７～８、例えば７～７．５であると思われる。得られた固体形態の組成物は、錠剤またはカプセルの密封パッケージなどのように、各々が上記の薬剤または薬剤群の固定量を含む複数の単回用量単位で包装することができる。固体形態の組成物はまた、局所適用可能なクリームまたは軟膏用に設計された絞り出し可能なチューブなどの柔軟な量の容器に包装することもできる。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートはプロドラッグである。特にオリゴヌクレオチドコンジュゲートに関して、プロドラッグが作用部位、例えば標的細胞に送達されると、コンジュゲート部分はオリゴヌクレオチドから切断される。
用途
本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば、診断、治療および予防のための研究試薬として利用することができる。
研究では、そのようなオリゴヌクレオチドを使用して、細胞（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物）および実験動物におけるＴＩＡ１タンパク質の合成を特異的に調節し、それによって標的の機能分析または治療的介入の標的としてのその有用性の評価を促進することができる。典型的には、標的調節は、タンパク質を生成するｍＲＮＡを分解または阻害し、それによりタンパク質形成を防止することによって、またはタンパク質を生成する遺伝子もしくはｍＲＮＡのモジュレーターを分解もしくは阻害することによって達成される。
本発明のオリゴヌクレオチドを研究または診断に使用する場合、標的核酸は、ｃＤＮＡ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡに由来する合成核酸であり得る。
本発明は、ＴＩＡ１を発現する標的細胞内でＴＩＡ１発現を調節するためのｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドを前記細胞に有効量で投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態において、標的細胞は、哺乳動物細胞、特にヒト細胞である。標的細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ 細胞培養物または哺乳動物の組織の一部を形成するｉｎ ｖｉｖｏ細胞であってよい。
診断では、オリゴヌクレオチドを使用して、ノーザンブロッティング、ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたは同様の技術により、細胞および組織におけるＴＩＡ１発現を検出および定量することができる。
治療に関しては、疾患または障害を有することが疑われる動物またはヒトを、ＴＩＡ１の発現を調節することにより処置することができる
本発明は、疾患を処置または予防するための方法であって、治療的または予防的有効量の本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲート、または医薬組成物を、疾患を患う、またはそれに罹り易い対象に投与することを含む方法を提供する。
本発明はまた、医薬として使用するための、本明細書で定義されるオリゴヌクレオチド、組成物またはコンジュゲートに関する。
本発明に従ったオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたは医薬組成物は、典型的には有効量で投与される。
本発明はまた、本明細書で言及される障害の処置のための医薬の製造のため、または本明細書で言及される障害の処置方法のための、上記本発明のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、神経変性疾患などの神経変性疾患である。
いくつかの実施形態において、疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、原発性タウオパチーなどのタウオパチー、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、ハンチントン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、および脊髄筋萎縮症、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、およびウェランダー遠位型ミオパチーからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、疾患は、筋萎縮性側索硬化症である。
いくつかの実施形態において、疾患は前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である。
本発明は、医薬品に使用するための、本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲートまたは医薬組成物を提供する。
本明細書で言及される疾患または障害は、ＴＩＡ１の発現に関連している。いくつかの実施形態において、疾患または障害は、ＴＩＡ１遺伝子内の変異と関連し得る。したがって、いくつかの実施形態において、標的核酸は、ＴＩＡ１配列の変異形態である。
本発明の方法は、好ましくは、ＴＩＡ１の異常なレベルおよび／または活性によって引き起こされる疾患の処置または予防のために使用される。
本発明はさらに、ＴＩＡ１の異常なレベルおよび／または活性を処置するための医薬を製造するための、本明細書で定義されるオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたは医薬組成物の使用に関する。
投与
本発明のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物は、局所または腸内または非経口（静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内、または髄腔内など）で投与され得る。
好ましい実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内または筋肉内注射もしくは注入、髄腔内または頭蓋内、例えば脳内または脳室内、硝子体内投与を含む非経口経路によって投与される。
別の実施形態において、活性オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、髄腔内投与される。別の実施形態において、活性オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、脳室内投与される。別の実施形態において、活性オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、脳内投与される。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたは医薬組成物は、０．１～１５ｍｇ／ｋｇ、例えば０．２～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．２５～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。投与は、週に１回、２週に１回、３週に１回、または月に１回であり得る。
併用療法
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたは医薬組成物は、別の治療剤との併用処置で使用される。治療剤は、例えば、上記の疾患または障害の標準的な治療であり得る。
化合物および配列－本発明の例示的な配列モチーフおよび化合物を列挙した表Ａを参照されたい。
細胞株
Figure 2022512877000007
化合物は、ｉＰＳＣ由来の運動ニューロンでも評価することができる。
実施例１：表Ａに記載されている化合物のＬＮＡオリゴヌクレオチドの、２５および５μＭでのＵ２ＯＳ細胞株におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性試験。
オリゴヌクレオチドのスクリーニングを、表Ｘに列挙されている５０のＬＮＡオリゴヌクレオチドを使用して、ヒト細胞株Ｕ２ＯＳにおいて行った。Ｕ２ＯＳ細胞株はＡＴＣＣ（カタログ番号：ＨＴＢ－９６）から購入し、サプライヤーの推奨に従って、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで維持した。スクリーニングアッセイのために、細胞を、供給元により推奨される培地内で９６マルチウェルプレートに播種した（ＭＣＣｏｙ ５Ａ 培地［カタログ番号Ｍ８４０３］、１０％ ＦＢＳ ［カタログ番号Ｆ７５２４］、１．５ｍＭ グルタミン［カタログ番号Ｇ８５４１］、２５μｇ／ｍｌ ゲンタマイシン［カタログ番号Ｇ１３９７］）。細胞／ウェルの数を、９６ウェルフォーマットで７０００細胞／ウェルに最適化した
細胞を２４時間インキュベートし、その後、５または２５μＭの濃度で（ＰＢＳに溶解させた）オリゴヌクレオチドを添加した。オリゴヌクレオチドを添加した３日後に、細胞を回収した。
ＲＮＡを、製造業者の指示に従い、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ９６キット（７４１８２）を使用して抽出した。ｃＤＮＡ合成およびｑＰＣＲを、ｑＳｃｒｉｐｔ ＸＬＴワンステップＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ Ｌｏｗ ＲＯＸ、９５１３４－１００（Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して実施した。標的転写産物のレベルを、ＶＩＣ標識したＧＡＰＤＨ対照と共に、複数の反応において、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＦＡＭ標識ＴａｑＭａｎアッセイを使用して定量化した。目的のＴＩＡ１（Ｈｓ００２３４９７７＿ｍ１（ＦＡＭ－ＭＧＢ））、およびハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨ（４３２６３１７Ｅ ＶＩＣ－ＭＧＢプローブ）の標的転写産物に対する、ＴａｑＭａｎプライマーアッセイ。技術的デュプレックスセットアップを使用した（ｎ＝２、生物学的独立反復実験）。
相対的なＴＩＡ１ ｍＲＮＡ発現レベルを表Ｘに、対照（ＰＢＳ処理細胞）の％として示す。即ち、値が小さいほど、阻害は大きい。
Figure 2022512877000008
Figure 2022512877000009
本発明の例示的な配列モチーフおよび化合物を表Ａに列挙する：
Figure 2022512877000010
Figure 2022512877000011
Figure 2022512877000012
化合物の列では、大文字はβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドであり、ＬＮＡ Ｃは全て５－メチルＣであり、小文字はＤＮＡヌクレオシドであり、場合により小文字ｃの前の上付き文字ｍは５－メチルシトシンＤＮＡヌクレオシドを表し、全ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

Claims (24)

  1. １０～３０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号１に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的であり、ヒトＴＩＡ１を発現する細胞内でヒトＴＩＡ１の発現を阻害することができるアンチセンスオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩。
  2. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号４～５３からなる群から選択される配列に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的である、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  3. 前記連続ヌクレオチド配列が、リストＡの領域からなる群から選択される、配列番号１の領域に完全に相補的である、請求項１～３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  4. 前記連続ヌクレオチド配列が、リストＢの領域からなる群から選択される、配列番号１の領域に完全に相補的である、請求項１～３のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  5. 式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’の連続ヌクレオチド配列を含むギャップマーオリゴヌクレオチドであり、領域ＦおよびＦ’が独立して、１～８個の糖修飾ヌクレオシドを含み、Ｇが、ＲＮａｓｅＨを動員することができる、５～１６個のヌクレオシドの領域である、請求項１～４のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  6. 領域ＦおよびＦ’の糖修飾ヌクレオシドが、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、およびＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される、請求項５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  7. 領域Ｇが、５～１６連続ＤＮＡヌクレオシドを含む、請求項５または６に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  8. ＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドである、請求項１～７のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  9. 前記ＬＮＡヌクレオシドがβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドである、請求項５～８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  10. 前記連続ヌクレオチド配列の間のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１～９のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  11. 配列番号５４～１０３からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
  12. 以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～１１のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド：ＣＣｔｔｃｔｃａｔａｔａａａａＣＡＣＡ（配列番号５４）；ＣＴＴｔａｃｔａｃａｃｔｃｃＣＴ（配列番号５５）；ＣＣＡＣｔａａｔｔｃｔｔａａａａｔｔＴＣ（配列番号５６）；ＣＣａａｃａａｔｔａｃｔｔｃＴＣＡＡ（配列番号５７）；ＣＴＧａｔｔｔａｃａａｃｃｔｃＡＴＣ（配列番号５８）；ＴＡＴｔｔｔｔｃｔｃｃａａａａｔｔＣＣ（配列番号５９）；ＣＴＣＡｔｔｃａｔｃｃａａｃａａａｔＡＡ（配列番号６０）；ＣＡＣｔａａａａｃａｔｃｃｔａａａａＣＣ（配列番号６１）；ＴＴＣＣａｔｔｃｔｔｔａｃｔｃｔｔｔＡＡ（配列番号６２）；ＡＣＡｃｔａｔａｔｔｃｔａｃｃｔａＡＴＣ（配列番号６３）；ＣＣｔｔｔｃｃｃａｔｔａａａａａＡＴＴＴ（配列番号６４）；ＡＣＣＴｔｃｃａｔｔｔａａｃａｔｔＡＣ（配列番号６５）；ＡＴＣｔａｃｃａｔｔｃａａｃａａａＣＡＣ（配列番号６６）；ＴＧＴａａｃｔｔａａｔｃｔｔＣＣＴ（配列番号６７）；ＣＡｔｃｃｔａａｃｃｔｔａｔｔａｔＴＡＴ（配列番号６８）；ＣＣｃｔａａｃａｔｔｃｃｔａｔＴＴＡ（配列番号６９）；ＣＣｔｔｃａａｔｃｔａａｔｃＴＴＴＡ（配列番号７０）；ＡＣｃｔｔｇａａｔａｃｔｃｃＴＣＡ（配列番号７１）；ＴＴＣＡｃｔａｃｃｔｃｃｃａａＡＴ（配列番号７２）；ＡＴＣｔｃａｃａｃａｃａａｔａａｔＣＡＣ（配列番号７３）；ＣＴＣＡｃａｃａｃａａｔａａｔｃａＣＴ（配列番号７４）；ＡＴＡｔａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａＣＡＡ（配列番号７５）；ＴＡＴＡｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣ（配列番号７６）；ＡＴａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣＴ（配列番号７７）；ＴＡＴＴｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａｃＴＴ（配列番号７８）；ＡＴｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａＣＴＴＴ（配列番号７９）；ＧＣＣａａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣ（配列番号８０）；ＣＣＡａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣＴ（配列番号８１）；ＣＴａａａａｃｔｃｃａｔａｃｃＴＣＡ（配列番号８２）；ＣＣｃａｇａｃａｔｔａｃａｃＣＡ（配列番号８３）；ＣＣａｇａｃａｔｔａｃａｃｃａＴＴＣ（配列番号８４）；ＡＧＡｃａｔｔａｃａｃｃａｔＴＣＡ（配列番号８５）；ＡＡａｃａｇｔａａｔｃｃｃＴＴＣＡ（配列番号８６）；ＡＣＡｇｔａａｔｃｃｃｔｔｃａＣＴ（配列番号８７）；ＣＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃＴＴ（配列番号８８）；ＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔＴＡ（配列番号８９）；ＴＡａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔａＴＡＴ（配列番号９０）；ＴＡＴＴａａｃａｃａａａｃａｃａｔｔＣＡ（配列番号９１）；ＡＣＡｃａａａｃａｃａｔｔｃａａｔＣＡＴ（配列番号９２）；ＣＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡ（配列番号９３）；ＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴ（配列番号９４）；ＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴＣ（配列番号９５）；ＴＧＡｃａａａｔｃｃｔａａＴＣＴ（配列番号９６）；ＴＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａＴＣ（配列番号９７）；ＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａｔｃＴＴ（配列番号９８）；ＴＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃＡＴＡ（配列番号９９）；ＡＡＡｔａｃｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡ（配列番号１００）；ＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡＴ（配列番号１０１）；ＣＣＴｔａｃａｔｃｃａｔａａｔｃＡＴ（配列番号１０２）；およびＣＴＴＡｃａｔｃｃａｔａａｔｃａｔＴＴ（配列番号１０３）、ここで、大文字はＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表す。
  13. 以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～１２のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド：ＣＣｔｔｃｔｃａｔａｔａａａａＣＡＣＡ（配列番号５４）；ＣＴＴｔａｃｔａｃａｃｔｃｃＣＴ（配列番号５５）；ＣＣＡＣｔａａｔｔｃｔｔａａａａｔｔＴＣ（配列番号５６）；ＣＣａａｃａａｔｔａｃｔｔｃＴＣＡＡ（配列番号５７）；ＣＴＧａｔｔｔａｃａａｃｃｔｃＡＴＣ（配列番号５８）；ＴＡＴｔｔｔｔｃｔｃｃａａａａｔｔＣＣ（配列番号５９）；ＣＴＣＡｔｔｃａｔｃｃａａｃａａａｔＡＡ（配列番号６０）；ＣＡＣｔａａａａｃａｔｃｃｔａａａａＣＣ（配列番号６１）；ＴＴＣＣａｔｔｃｔｔｔａｃｔｃｔｔｔＡＡ（配列番号６２）；ＡＣＡｃｔａｔａｔｔｃｔａｃｃｔａＡＴＣ（配列番号６３）；ＣＣｔｔｔｃｃｃａｔｔａａａａａＡＴＴＴ（配列番号６４）；ＡＣＣＴｔｃｃａｔｔｔａａｃａｔｔＡＣ（配列番号６５）；ＡＴＣｔａｃｃａｔｔｃａａｃａａａＣＡＣ（配列番号６６）；ＴＧＴａａｃｔｔａａｔｃｔｔＣＣＴ（配列番号６７）；ＣＡｔｃｃｔａａｃｃｔｔａｔｔａｔＴＡＴ（配列番号６８）；ＣＣｃｔａａｃａｔｔｃｃｔａｔＴＴＡ（配列番号６９）；ＣＣｔｔｃａａｔｃｔａａｔｃＴＴＴＡ（配列番号７０）；ＡＣｃｔｔｇａａｔａｃｔｃｃＴＣＡ（配列番号７１）；ＴＴＣＡｃｔａｃｃｔｃｃｃａａＡＴ（配列番号７２）；ＡＴＣｔｃａｃａｃａｃａａｔａａｔＣＡＣ（配列番号７３）；ＣＴＣＡｃａｃａｃａａｔａａｔｃａＣＴ（配列番号７４）；ＡＴＡｔａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａＣＡＡ（配列番号７５）；ＴＡＴＡｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣ（配列番号７６）；ＡＴａｔｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａＡＣＴ（配列番号７７）；ＴＡＴＴｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａｃＴＴ（配列番号７８）；ＡＴｔｃｃｔｔｔａｃａｔａｃａａＣＴＴＴ（配列番号７９）；ＧＣＣａａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣ（配列番号８０）；ＣＣＡａｃａｔｔｔａｔｃｃＡＣＴ（配列番号８１）；ＣＴａａａａｃｔｃｃａｔａｃｃＴＣＡ（配列番号８２）；ＣＣｃａｇａｃａｔｔａｃａｃＣＡ（配列番号８３）；ＣＣａｇａｃａｔｔａｃａｃｃａＴＴＣ（配列番号８４）；ＡＧＡｃａｔｔａｃａｃｃａｔＴＣＡ（配列番号８５）；ＡＡａｃａｇｔａａｔｃｃｃＴＴＣＡ（配列番号８６）；ＡＣＡｇｔａａｔｃｃｃｔｔｃａＣＴ（配列番号８７）；ＣＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃＴＴ（配列番号８８）；ＡＧｔａａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔＴＡ（配列番号８９）；ＴＡａｔｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔａＴＡＴ（配列番号９０）；ＴＡＴＴａａｃａｃａａａｃａｃａｔｔＣＡ（配列番号９１）；ＡＣＡｃａａａｃａｃａｔｔｃａａｔＣＡＴ（配列番号９２）；ＣＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡ（配列番号９３）；ＡＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴ（配列番号９４）；ＣＡａａｃａｃａｔｔｃａａｔｃａＴＡＴＣ（配列番号９５）；ＴＧＡｃａａａｔｃｃｔａａＴＣＴ（配列番号９６）；ＴＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａＴＣ（配列番号９７）；ＴＡｃｃｔｔａｃｃｃａｔｔａｔｃＴＴ（配列番号９８）；ＴＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃＡＴＡ（配列番号９９）；ＡＡＡｔａｃｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡ（配列番号１００）；ＡＣｃｃｔｔａｃａｔｃｃａＴＡＡＴ（配列番号１０１）；ＣＣＴｔａｃａｔｃｃａｔａａｔｃＡＴ（配列番号１０２）；およびＣＴＴＡｃａｔｃｃａｔａａｔｃａｔＴＴ（配列番号１０３）、ここで、大文字はβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表し、各ＬＮＡシトシンは５－メチルシトシンであり、ヌクレオシドの間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
  14. 請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと、前記オリゴヌクレオチドに共有結合した少なくとも１つのコンジュゲート部分とを含むコンジュゲート。
  15. 請求項１～１３に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項１４に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される希釈剤、溶媒、担体、塩、および／またはアジュバントとを含む医薬組成物。
  16. ＴＩＡ１を発現する標的細胞内でＴＩＡ１発現を調節するためのｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項１４に記載のコンジュゲート、または請求項１５に記載の医薬組成物を、前記細胞に有効量で投与することを含む方法。
  17. 疾患の治療または予防の方法であって、治療的または予防的有効量の、請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項１４に記載のコンジュゲート、または請求項１５に記載の医薬組成物を、前記疾患を患う、またはそれに罹りやすい対象に投与することを含む方法。
  18. 前記疾患が神経障害、例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、タウオパチー（原発性タウオパチーなど）、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、ハンチントン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、および脊髄筋萎縮症、運動ニューロン疾患、タウオパチー、アルツハイマー病、およびウェランダー遠位型ミオパチーからなる群から選択される神経障害である、請求項１７に記載の方法。
  19. 医薬品に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項１４に記載のコンジュゲート、または請求項１５に記載の医薬組成物。
  20. 神経障害、例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、タウオパチー（原発性タウオパチーなど）、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、ハンチントン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、および脊髄筋萎縮症、運動ニューロン疾患、タウオパチー、アルツハイマー病、およびウェランダー遠位型ミオパチーからなる群から選択される神経障害の治療または予防に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項１４に記載のコンジュゲート、または請求項１５に記載の医薬組成物。
  21. 神経障害、例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、タウオパチー（原発性タウオパチーなど）、ハンチントン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、および脊髄筋萎縮症、運動ニューロン疾患、タウオパチー、アルツハイマー病、およびウェランダー遠位型ミオパチーからなる群から選択される神経障害の治療または予防のための薬剤の調製のための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または請求項１４に記載のコンジュゲート、または請求項１５に記載の医薬組成物の使用。
  22. 前記神経障害が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の方法の使用。
  23. 前記神経障害が原発性タウオパチーなどのタウオパチーである、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の方法の使用。
  24. 前記神経障害が前頭側頭葉変性性認知症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）である、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の方法の使用。
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