JP2023551947A

JP2023551947A - 巣状分節性糸球体硬化症（ｆｓｇｓ）の治療における使用のためのクロピドグレル

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Publication number: JP2023551947A
Application number: JP2023533906A
Authority: JP
Inventors: ペルコ，ポール
Original assignee: デルタ４ゲーエムベーハー
Priority date: 2020-12-03
Filing date: 2021-12-03
Publication date: 2023-12-13
Also published as: CA3204074A1; IL303347A; CN116568332A; US20240016785A1; EP4255427A1; AU2021393786A1; EP4255427B1; KR20230116808A; AU2021393786A9; WO2022117862A1

Abstract

本発明は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）の治療における使用のための、クロピドグレルまたはその塩もしくは溶媒和物を含む医薬製剤に関する。

Description

巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）は、しばしば末期腎臓病を引き起こす重度の糸球体症である。ＦＳＧＳは、一部の糸球体（巣状）の一部の部分（分節性）における硬化の存在によって定義される組織病理学的病変を指すのに用いられる。この病変は、原発性のポドサイト傷害を特徴とする疾患、または高血圧、肥満もしくはウイルスを含む他の影響に続発する疾患の両方を指す。ＦＳＧＳは、特定し得る原因なしに見出される可能性がある（特発性）。

ＦＳＧＳの最もよくある徴候は、ネフローゼ以下のレベルからネフローゼレベル（重度タンパク尿、低アルブミン血症および高脂血症）に及ぶタンパク尿である。重度タンパク尿は、腎臓機能の進行性喪失および腎不全に関連する。それは、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の約１５％を占める。大量のタンパク尿（＞１０～１５ｇ／日）は、２～３年以内に腎機能の急速な悪化およびＥＳＲＤへの進行を引き起こす。

ＦＳＧＳに対する承認された薬物はない。ＦＳＧＳを有する患者のための現在の標準治療は、ステロイド、ＡＣＥ阻害剤またはＡＲＢ、免疫抑制薬、例えばグルココルチコイド、またはグルココルチコイドに対する不耐性もしくは不十分な応答について、必要とされる場合、カルシニューリン阻害剤によるもの；利尿薬、血漿交換法、食事の変更およびスタチンを含む。

ＷＯ２００６０２９３４９Ａ１は、糖尿病性の疾患もしくは障害、高脂血症性の疾患もしくは障害、代謝性の疾患もしくは障害、ならびに／または心血管性の疾患もしくは障害、または嗜癖性疾患の進行の遅延または治療のための、ＰＰＡＲアゴニスト単独のまたは血小板凝集の阻害剤と組み合わせた使用を記載する。

ＴｕＸ．ら、２００８は、腎炎症の阻害のための腎臓体積の５／６の外科的腎臓切除によって引き起こされる初期腎傷害におけるクロピドグレルの使用を報告する。
ＰｅｔｅｒｓＨ．ら（２００４）は、急性糸球体外傷の修復のラットモデルにおける実験的急性抗ｔｈｙ１糸球体腎炎の初期傷害およびその後の修復段階に対するクロピドグレルの効果の分析に言及する。

ＳｕＸ．ら（２０１９）は、慢性腎臓病を有する患者における心血管性および腎臓アウトカムに対する抗血小板療法の効果を概説し、抗血小板剤の適用が、全体的な正味の利益を提供し得ることを記載する。

ＫＲ２０１８０１２１７２２Ａは、プラバスタチンおよび抗血小板剤、例えばクロピドグレルを含む、腎疾患を予防または治療するための組成物を開示する。
しかし、不十分な奏功率しかない。レニン－アンジオテンシン－アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断薬はまた、ＦＳＧＳの重要な特徴であるタンパク尿を制御するために使用される。しかし、既存の治療は、限定的成功を達成したにすぎなかった。

米国では毎年約５４００人の患者がＦＳＧＳと診断されるが、症例数はネフローゼ症候群のどの他の原因よりも多く増加している。毎年約１，０００人のＦＳＧＳ患者が、腎臓移植を受ける。しかし、腎臓移植後、数時間から数週間以内に、ＦＳＧＳは、患者の約３０～４０％において再発する。しかし、患者のわずか２０％が、治療の５年後に完全な寛解を達成し、患者の４０％が、寛解を示さない（ＴｒｏｙａｎｏｖＳ．ら、２００５）。

最善のケアにもかかわらず、治療の失敗はよく起こり、ＦＳＧＳは、末期腎疾患の著しい割合において原因となっている。したがって、ＦＳＧＳに対する新規疾患修飾治療のための満たされていない必要性が存在する。

該目的は、本特許請求の範囲の対象、および本明細書にさらに記載される対象によって解決される。驚くべきことに、本発明の化合物が、動物研究において尿タンパク質／クレアチニン比（ＵＰＣＲ）および尿アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）を著しく低下させ、したがって、このことが、著しい機能的改善および低下したタンパク尿を実証したことが見出された。

本発明は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）の治療における使用のための、クロピドグレルまたはその塩もしくは溶媒和物を含む医薬製剤を提供する。
具体的には、本明細書に記載される医薬製剤は、原発性ＦＳＧＳの治療のために使用される。具体的には、ＦＳＧＳは、糖尿病に関連するものでも、糖尿病によって引き起こされるものでもない。

本発明のある実施形態によれば、医薬製剤は、クロピドグレル、および薬学的に許容される担体を含む、医薬品または薬物製品である。
具体的には、本明細書に記載される医薬製剤は、全身的に投与される。

ある実施形態によれば、本明細書に記載される製剤に使用されるクロピドグレルは、構造

を含む。
具体的には、本明細書に記載される製剤は、約１０～４００ｍｇのクロピドグレルを含む。

さらなる実施形態によれば、本明細書に記載される医薬製剤は、全身投与用、好ましくは静脈内、筋肉内、皮下、皮内、経皮、または経口投与用に製剤化されている。
さらなる実施形態によれば、本明細書に記載される医薬製剤は、スプレー剤、散剤、ゲル剤、軟膏剤、クリーム剤、フォーム剤、または溶液剤、ローション剤、うがい液、エアロゾル化された粉末、エアロゾル化された液体製剤、顆粒剤、カプセル剤、ドロップ剤、錠剤、シロップ剤、ロゼンジ剤、または注入もしくは注射用の製剤として対象に投与される。

本発明によれば、医薬製剤は、ＦＳＧＳに罹患しているかまたはＦＳＧＳを発症する危険性がある治療される対象において使用するためのものである。
さらなる実施形態では、本明細書に記載される医薬製剤は、ＦＳＧＳに罹患しているかまたはＦＳＧＳを発症する危険性がある対象に有効量で適用される。

具体的には、製剤は、単独の物質として投与されるか、または治療もしくは製剤は、１つもしくは複数の活性物質を有するさらなる治療もしくは製剤と組み合わされる。
より具体的には、製剤は、抗ウイルス薬、抗凝固薬、免疫調節剤、ヒト供給源に由来する抗体製剤、モノクローナル抗体、集中治療薬、抗高血圧剤、スタチン、血管拡張薬、ステロイド、細胞毒性薬、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、コレステロールまたはトリグリセリド低下剤からなる群から選択される活性薬剤と組み合わせて投与される。

ＦＳＧＳが、アドリアマイシン（ＡＤＲ）で誘導され、誘導後の示される時（日数における）にタンパク尿に関して評価された。ＵＰＣＲ＝尿タンパク質クレアチニン比－タンパク尿および腎臓損傷に対するマーカー；「ｃｔｒｌ」と表示される箱＝ＦＳＧＳを有する対照マウス；「クロピドグレル」と表示される箱＝クロピドグレルで処置された、ＦＳＧＳを有するマウス；箱ひげ図は、個々のデータ点（点在）に加えて、中央値（中線）、四分位範囲（箱）および９５％信頼区間（ひげ）を示す。ｔ検定のＰ値は、各時点についてデータの上に示される。独立した実験において、ＦＳＧＳが、アドリアマイシン（ＡＤＲ）で誘導され、誘導後の示される時（日数における）にタンパク尿に関して評価された。ＵＰＣＲ＝尿タンパク質クレアチニン比－タンパク尿および腎臓損傷に対するマーカー；「ｃｔｒｌ」と表示される箱＝ＦＳＧＳを有する対照マウス；「クロピドグレル」と表示される箱＝クロピドグレルで処置された、ＦＳＧＳを有するマウス；箱ひげ図は、個々のデータ点（点在）に加えて、中央値（中線）、四分位範囲（箱）および９５％信頼区間（ひげ）を示す。ｔ検定のＰ値は、各時点についてデータの上に示される。クロピドグレル処置によるＵＰＣＲ（パネルＡ）およびＵＡＣＲ（パネルＢ）の平均低下が、経時的に示される。上の数字は、それぞれ１回目および２回目の実験において使用された時点を示す。実験１。尾静脈注射後の対照およびクロピドグレル処置動物のすべての個々の尿のＵＰＣＲ（左パネル）およびＵＡＣＲ（右パネル）値を。ｐ値は、スチューデントのｔ検定によって計算された。実験２。尾静脈注射後の対照およびクロピドグレル処置動物のすべての個々の尿のＵＰＣＲ（左パネル）およびＵＡＣＲ（右パネル）値。ｐ値は、スチューデントのｔ検定によって計算された。マウスの重量変化が毎週測定され、開始重量の倍率変化として表される。（Ａ）実験１。（Ｂ）実験２。高倍率（６３×、４０×）を用いた組織学的評価。アドリアマイシン腎症対照動物（上パネル）およびクロピドグレル処置動物（下パネル）の代表的なＰＡＳ染色が示される。黒色の矢印は、選択された硬化領域を示す。黒色の星印は、尿細管拡張を表すタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織病理学的効果。（Ａ）すべての個々の値を表す箱ひげ図として与えられた、２つの独立した実験における硬化性糸球体のパーセンテージの平均値。（Ｂ＆Ｃ）硬化性糸球体の相対量（Ｂ）または尿細管拡張の重症度（Ｃ）に応じた、示される群の存在量を表す１００％積み上げ縦棒グラフ。積み上げ棒グラフ中の数字は、観察数（ｎ）を表す。分節性硬化スコア：０：ｎ．ｄ．、１：１～４％、２：５～９％、３：１０～１９％、４：≧２０％。尿細管拡張スコア：０：なし、１：軽度、２：中程度、３：強度、４：非常に強度。クロピドグレル療法の組織学的評価。野生型のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。アドリアマイシン腎症対照動物のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。アドリアマイシン腎症対照動物のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。アドリアマイシン腎症対照動物のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。クロピドグレルで処置されたアドリアマイシン腎症のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。クロピドグレルで処置されたアドリアマイシン腎症のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。クロピドグレル療法の組織学的評価。クロピドグレルで処置されたアドリアマイシン腎症のＰＡＳ染色全体像が示される。黒色の矢印は、選択された硬化性糸球体を示す。黒色の星印は、尿細管拡張、およびろ過プロセスにおける不全に起因する選択されたタンパク質円柱を示す。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含有する」、「有する」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」は、本明細書で使用される場合、同義的に使用可能であり、さらなるメンバーまたは部分または要素を許容する、オープンな定義と理解されるものとする。「からなる」は、構成される定義の特徴のさらなる要素を伴わない、最もクローズな定義と考えられる。したがって、「含む」は、より広く、「からなる」の定義を含有する。

用語「約」は、本明細書で使用される場合、同じ値、または所与の値の＋／－１０％または＋／－５％異なる値を指す。
クロピドグレルは、本明細書に記載される場合、「生理学的に許容される塩」として使用され得る。塩の選択は、化学物質がどれほど酸性または塩基性であるか（ｐＨ）、イオン化形態の安全性、薬物の意図される用途、どのように薬物が与えられるか（例えば、口、注射によって、または皮膚上で）、および剤形のタイプ（例えば錠剤、カプセル剤、または液剤）によって主に決定される。

生理学的に許容される例示的な塩は、ナトリウム塩である。しかし、ナトリウム塩の代わりに、他の生理学的に許容される塩、例えば、他のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩および置換アンモニウム塩を用いることも可能である。具体的な例は、カリウム、リチウム、カルシウム、アルミニウムおよび鉄塩である。好ましい置換アンモニウム塩は、例えば、低級モノ、ジ、またはトリアルキルアミン、またはモノ、ジおよびトリアルカノールアミンに由来するものである。遊離アミノ酸自体も使用され得る。具体的な例は、エチルアミン、エチレンジアミン、ジエチルアミン、またはトリエチルアミン塩である。

用語「対象」または「患者」は、本明細書で使用される場合、ＦＳＧＳに罹患しているかまたはＦＳＧＳを発症する危険性がある、ヒト、または非ヒト哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ウマ、ラクダ、ウシまたはブタを指す。具体的には、それは、ヒトである。

ＦＳＧＳを発症する「危険性がある」対象は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していてもまたは有していなくてもよく、本明細書に記載される治療方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示していてもまたは示していなくてもよい。「危険性がある」とは、対象が１つまたは複数の危険因子を有することを意味し、危険因子は、本明細書に記載され、かつ当技術分野で公知のように、ＦＳＧＳの発症と相関する測定可能なパラメータである。これらの危険因子の１つまたは複数を有する対象は、これらの危険因子の１つまたは複数のない対象よりも高い、ＦＳＧＳを発症する確率を有する。

「対象」は、「患者」であり得る。「患者」は、治療する医師のケアの下にある「対象」を指す。別の実施形態では、患者は、ＦＳＧＳと診断されていない対象である。さらに他の実施形態では、患者は、ＦＳＧＳと診断されているが、ＦＳＧＳに対処するための治療を受けていない対象である。

用語「非糖尿病性対象」は、真性糖尿病に罹患していない対象を指す。
「薬理学的に許容される」とも称される用語「薬学的に許容される」とは、動物、特に、ヒトの治療と適合性のあることを意味する。薬理学的に許容される塩という用語はまた、薬理学的に許容される酸付加塩および薬理学的に許容される塩基付加塩の両方を含む。

用語「薬理学的に許容される酸付加塩」は、本明細書で使用される場合、本開示の任意の塩基化合物の任意の非毒性有機もしくは無機塩、または任意のその中間体を意味する。酸付加塩を形成し得る本開示の塩基性化合物としては、例えば、塩基性窒素原子を含有する化合物が挙げられる。適切な塩を形成する例示的な無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびに金属塩、例えばオルトリン酸一水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムが挙げられる。適切な塩を形成する例示的な有機酸としては、モノ、ジ、およびトリカルボン酸、例えばグリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸およびサリチル酸、ならびにスルホン酸、例えばｐ－トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸が挙げられる。一、二、または三酸塩のいずれも形成可能であり、このような塩は、水和形態、溶媒和形態または実質的に無水の形態のいずれで存在してもよい。一般的に、本開示の化合物の酸付加塩は、水および様々な親水性有機溶媒中でより可溶性であり、一般的に、それらの遊離塩基形態と比較して、より高い融点を示す。適切な塩の選択は、当業者に公知である。例えば、本開示の化合物の単離において、実験室使用のため、またはその後の薬理学的に許容される酸付加塩への変換のため、他の薬理学的に許容されない酸付加塩、例えばオキサレートが使用され得る。具体的には、クロピドグレルは、クロピドグレル硫酸水素塩（クロピドグレル重硫酸塩）、スルホン酸塩、またはベシル酸塩として存在してもよい。クロピドグレルはまた、シクロデキストリン、例えばβ－シクロデキストリン、またはその誘導体との包接錯体として存在してもよい。

クロピドグレル、（（Ｓ）－メチル－（２－クロルフェニル）－２－（６，７－ジヒドロ－４Ｈ－チエノ［３，２－ｃ］ピリジン－５－イル）アセテート、（＋）－メチル－（２－クロルフェニル）－２－（６，７－ジヒドロ－４Ｈ－チエノ［３，２－ｃ］ピリジン－５－イル）アセテート）は、本明細書で使用される場合、構造

を有し、心筋梗塞および卒中の危険性を低下させるために使用される血小板阻害剤のプロドラッグである。クロピドグレルは、カルボキシルエステラーゼ－１によってその活性型に代謝される。活性型は、血小板上のＰ２Ｙ１２ＡＤＰ受容体に不可逆的に結合する血小板阻害剤である。この結合は、Ｐ２Ｙ１２受容体へのＡＤＰの結合、糖タンパク質ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の活性化、および血小板凝集を妨げる。

その血小板凝集阻害剤機能に加えて、クロピドグレルはまた、本明細書に記載されるようにＵＰＣＲおよびＵＡＣＲの低下という驚くべき効果に加えて、ＦＳＧＳ疾患の発症および／または進行に対する有益な影響を有し得る抗炎症効果を発揮し得る。クロピドグレルは、ＡＭＰＫ／Ｎｒｆ２軸を活性化することによってＴＮＦに干渉し得る（ＹａｎｇＨ．ら、２０１６）。ＦＳＧＳおよびポドサイト傷害に対するＴＮＦ－ａの影響も記載され（ＣｈｅｎＡ．ら、２０２０、ＣｈｕｎｇＣＦ．ら、２０１９、ＰｅｄｉｇｏＣ．Ｅ．ら、２０１６）、ポドサイト機能のためのＮｒｆ２およびＡＭＰＫの重要性も記載される（ＹａｎｇＳＭ．ら、２０１３、ＴｓａｉＰＹ．ら、２０１１、ＲｏｇａｃｋａＤ．ら、２０２０）。クロピドグレルは、ＴＮＦ（ＳｏｌｈｅｉｍＳ．ら、２００６）およびさらにＳＥＲＰＩＮＥ１（ＳａｋａｔａＴ．ら、２０１１）のレベルを低下させることが示され、２つのタンパク質は、ＦＳＧＳの進行に関連している。クロピドグレルはまた、ＦＳＧＳ疾患進行の緩和に寄与し得る腎臓保護性潜在力を有する因子であるＮＦＥ２Ｌ２（ＮＲＦ２）を誘導することが報告された（ＹａｎｇＨ．ら、２０１６）。他方で、高いＩＬ１０レベルは、低いクロピドグレル応答性に関連することが示された（ＯｓｍａｎｃｉｋＰ．ら、２０１２）。ＶＡＳＰリン酸化アッセイは、クロピドグレル応答を測定するために使用される（Ｓｉｌｌｅｒ－ＭａｔｕｌａＪ．Ｍ．ら、２０１０；ＣａｙｌａＧ．ら、２００８）。血管拡張因子刺激リン酸化タンパク質（ＶＡＳＰ）は、１０人の連続して試験された患者に由来する再発血漿に応答してリン酸化され、対にされた寛解血漿または非ＦＳＧＳ対照に応答してリン酸化されないことが示された。リン酸化シグナルは、病理学的ポドシン変異を保有するヒトポドサイトでは存在しない（ＨａｒｒｉｓＪ．Ｊ．ら、２０１３）。

クロピドグレルは、商品名クロピレット、プラビックスおよびジルト（Ｚｙｌｌｔ）で販売される。
クロピドグレルは、用量あたり約１０～４００ｍｇのクロピドグレルを含む。具体的には、それは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００ｍｇのクロピドグレルを含み得る。それは、同じ用量で連続的に、または高用量で、例えば約３００ｍｇ、およびさらに約７０ｍｇの維持低用量として、ボーラス投与（ｂｏｌａｒａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）として、投与されてもよい。

特に、本発明の医薬製剤において、クロピドグレルまたはその薬学的に許容される塩の１日の投薬量は、成人に基づき、１０～４００ｍｇ、具体的には５０～３００ｍｇである。しかし、本発明の範囲は、該投薬量に限定されない。

ＦＳＧＳは、腎臓糸球体における巣状かつ分節性の硬化、およびポドサイト足突起消失を特徴とする特異な臨床病理学的な医学的状態である（Ｄ’ＡｇａｔｉＶ．、２００３；ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＡ．Ｚ．およびＫｏｐｐＪ．Ｂ．、２０１７、ＢｏｓｅＢ．およびＣａｔｔｒａｎＤ．、２０１４）。ＦＳＧＳの病態生理学は、糸球体内で生じ得るか（「原発性ＦＳＧＳ」）または他の理由に続発し得る（例えば高血圧；Ｄ’ＡｇａｔｉＶ．、２００３、ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＡ．Ｚ．およびＫｏｐｐＪ．Ｂ．、２０１７、ＢｏｓｅＢ．およびＣａｔｔｒａｎＤ．、２０１４）。ＦＳＧＳは、しばしば、タンパク尿、低アルブミン尿、高脂血症および浮腫を特徴とするネフローゼ症候群を引き起こす（Ｄ’ＡｇａｔｉＶ．、２００３；ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＡ．Ｚ．およびＫｏｐｐＪ．Ｂ．、２０１７、ＢｏｓｅＢ．およびＣａｔｔｒａｎＤ．、２０１４）。多数の症例について、ＦＳＧＳの正確な原因は、まだ理解し難い（特発性；Ｄ’ＡｇａｔｉＶ．、２００３；ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＡ．Ｚ．およびＫｏｐｐＪ．Ｂ．、２０１７、ＢｏｓｅＢ．およびＣａｔｔｒａｎＤ．、２０１４）。ＦＳＧＳの公知の病因は、雑多であり、遺伝子変異、薬物、ウイルス、高血圧、および循環因子を含む－しかし、糖尿病を含まない（Ｄ’ＡｇａｔｉＶ．、２００３；ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＡ．Ｚ．およびＫｏｐｐＪ．Ｂ．、２０１７、ＢｏｓｅＢ．およびＣａｔｔｒａｎＤ．、２０１４）。糖尿病性腎症－糖尿病性糸球体硬化症を含む－は、真性糖尿病の病態生理学の結果としての、腎臓機能の慢性喪失を表す（Ｑｉら、２０１７）。

ポドサイトは、糸球体の毛細血管を包む、腎臓中のボーマン嚢における非定型性上皮細胞である。
本明細書で使用される場合、ＦＳＧＳは、具体的にはポドサイトをその標的として認識する内因性因子によって誘発されるか（ポドサイトパチー、特発性ＦＳＧＳ）、またはポドサイトを直接的または間接的に傷つける特定し得る原因、例えば遺伝的障害、高血圧、炎症、増殖の脱調節、または機械的負荷によって引き起こされる（原発性または続発性ＦＳＧＳ）、糸球体の瘢痕化（硬化）およびポドサイトへの損傷である。

原発性ＦＳＧＳの特有の形態学的像は、びまん性ポドサイトパチー（＋少なくとも１つのＦＳＧＳ病変）であり、臨床的にはネフローゼ症候群がより多数を占める。びまん性ポドサイト毒性は、ほとんどすべてのポドサイトを巻き込み、電子顕微鏡検査で５０％を超える足突起消失を有する。尿中のアルブミンの大量の喪失だけでなく、低アルブミン血症も、よく観察されるが、たとえネフローゼ域のタンパク尿が存在したとしても、続発性形態においては珍しい。微絨毛変化、細胞質脱落、消失した足突起におけるアクチン細胞骨格の密度の増加、リソソームおよびオートファゴサイト体（ａｕｔｏ－ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃｂｏｄｙ）の数の増加は、よくある特徴である。構造の再編成に起因して、糸球体基底膜（ＧＢＭ）からのポドサイトの脱離の危険性が増加し、むき出しのＧＢＭの幅広い領域を残す。これらの「粘着性」領域は、付着を生じさせる可能性があり、その後、影響を受けた区域が塞がれ、硬化するまで、硝子様物質の沈着およびメサンギウム基質の拡大が、毛細血管腔を徐々に狭める。近位尿細管への可逆的な糸球体脱出は、時々観察され、係蹄の急な拡大の表れであり、「尖端病変」の前兆となる（ＡｎｇｉｏｉＡ．、およびＰａｎｉ，Ａ．、２０１６）。

ＦＳＧＳの最も悪性の形態は、虚脱性糸球体症であり、これは、組織学的に、足突起消失、過形成性ポドサイトの冠によって包囲された、毛細血管叢の分節性から全体的な崩壊によって示される（ＡｎｇｉｏｉＡ．、およびＰａｎｉ，Ａ．、２０１６）。

ＦＳＧＳの症状はまた、糸球体硬化症、糸球体腎炎（例えば膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、ＩｇＡ糸球体腎炎）、ネフローゼ症候群（低アルブミン尿、高脂血症、浮腫）、進行性腎不全、組織病理学における、具体的にはＨａａｓＭ．ら、２０１３に従って分類される糸球体病変、ならびにポドサイト融合および傷害を伴うＦＳＧＳの任意選択の生検確認を伴う、重度タンパク尿である。

ＦＳＧＳは、当技術分野で周知の方法、例えば以下に限定されないが、尿タンパク質／クレアチニン比（ＵＰＣＲ）、尿アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）の決定、腎臓生検の光学顕微鏡検査、例えば糸球体サイズ、ＦＳＧＳの組織学的バリアント、小嚢胞性尿細管変化、および尿細管肥大；例えば他の原発性糸球体症を除外するための、免疫蛍光；および電子顕微鏡検査、例えばポドサイト足突起消失の程度、ポドサイト微絨毛変化、および管状細網封入体によって診断され得る。

具体的には、ＦＳＧＳは、本明細書で使用される場合、非糖尿病性腎疾患を指す。具体的には、真性糖尿病によって引き起こされる糖尿病性腎症は、ＦＳＧＳの治療のためのクロピドグレルの使用から除外される。非糖尿病性腎疾患および糖尿病性腎疾患は、生検などの当技術分野で公知の方法によって確認され、識別され得る。

糖尿病患者において、結節性病変およびびまん性病変が、しばしば観察される。糖尿病性腎症についての分類法は、当業者に周知であり、ＱｉＣ．ら、２０１７、ＴｅｒｖａｅｒｔＴ．Ｗ．Ｃ．ら、２０１０、およびＦｉｏｒｅｔｔｏＰ．ら、１９９６によって記載される。Ｆｉｏｒｅｔｔｏの分類は、尿細管、間質および血管の病変を含み、光学顕微鏡下での病理学的変化に従って糖尿病性腎症を３つのカテゴリーに分けた：Ｃ１、正常／ほぼ正常；Ｃ２、大部分は糸球体変化を伴う、典型的な糖尿病性腎症；およびＣ３、不釣り合いに、損傷、例えば尿細管間質性または細動脈硝子化に関連し、かつ糖尿病性糸球体変化がない、または軽度の糖尿病性糸球体変化のみを伴う、傷害の非定型パターン。Ｔｅｒｖａｅｒｔの病理学的分類は、尿細管、間質および血管の病変についての別個のスコア化システムとともに、糸球体病変に従って、糖尿病性腎症を４つの分類に分ける。

具体的には、糖尿病に罹患している患者、具体的には２年を超えて糖尿病に罹患している患者は、本明細書に記載されるようにクロピドグレルによって治療されることから除外される。

糖尿病関連の腎症は、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、および糖尿病関連の糸球体硬化症を含む。用語「ＦＳＧＳ」の使用は、自然ＦＳＧＳ、原発性ＦＳＧＳだけでなく再発性ＦＳＧＳにも及ぶが、具体的には糖尿病性ＦＳＧＳを除外する。

糸球体腎炎は、血液から老廃物および余分な液体を分離する、フィルターとして機能する腎臓における膜組織の炎症の表れである。
ＭＰＧＮは、異常な免疫応答によって引き起こされる糸球体腎炎の一形態である。抗体の沈着物が、糸球体基底膜と呼ばれる腎臓の一部に積み重なる。

糸球体硬化症は、腎臓内の小さな血管の瘢痕化および硬化の表れである。糸球体腎炎および糸球体硬化症は、異なる原因を有するが、それらは両方とも腎不全を引き起こし得る。

ネフローゼ症候群は、体に、尿中に過度のタンパク質を通過させる腎臓障害である。ネフローゼ症候群は、通常、腎臓における小さな血管のクラスターに対する損傷によって引き起こされる。

本明細書で使用される場合、再発性ＦＳＧＳ（ｒＦＳＧＳ）、またはＦＳＧＳの再発は、急性拒絶、糸球体炎または同種移植糸球体症の証拠のない、糸球体硬化ならびにポドサイト融合および傷害を伴うＦＳＧＳの任意選択の生検確認を伴う、重度タンパク尿によって定義される。本明細書で使用される場合、再発性ＦＳＧＳ（ｒＦＳＧＳ）の対象または患者は、腎臓移植前にＦＳＧＳを有しており、かつその後、腎臓移植後にＦＳＧＳの再発（ｒＦＳＧＳ）を発症したものと定義される。

本明細書で使用される場合、非再発性ＦＳＧＳ（ｎｒＦＳＧＳ）の対象または患者は、腎臓移植前にＦＳＧＳを有しているが、腎臓移植後にＦＳＧＳを発症しないものと定義される。

本明細書で使用される場合、自然ＦＳＧＳ（ｎＦＳＧＳ）の対象または患者は、移植前に自身の腎臓においてＦＳＧＳ（糸球体硬化ならびにポドサイト融合および傷害を伴うＦＳＧＳの任意選択の生検確認を伴う、重度タンパク尿）を有するものと定義される。

医薬製剤は、クロピドグレル、および薬学的に許容される担体を含む、医薬品または薬物製品であり得る。本明細書に記載される製剤はまた、栄養補助食品として使用され得る。

医薬製剤が有効量でクロピドグレルを含む、ＦＳＧＳの治療方法も本明細書に提供される。
具体的には、クロピドグレルまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、ＦＳＧＳにおけるポドサイト傷害およびポドサイトパチーを著しく低下させる。

用語「有効量」または「薬学的有効量」は、化合物が投与される目的の所望の効果（例えば、ＦＳＧＳの症状の改善、ＦＳＧＳまたはＦＳＧＳの症状の重症度の低下、および／またはＦＳＧＳまたはＦＳＧＳの症状の進行の低減）を生じる化合物の量を指す。有効な用量の正確な量は、治療の目的に依存し、公知技術を使用して当業者によって確認可能である（例えば、ＬｌｏｙｄＶ．Ａ．、２０１６を参照）。

本明細書で使用される場合、用語「治療」およびその同根語は、疾患進行を遅らせるかまたは停止させることを指す。「治療」およびその同根語は、本明細書で使用される場合、限定されないが以下を含む：完全なまたは部分的な寛解、腎不全（例えばＥＳＲＤ）、および疾患関連の合併症（例えば浮腫、感染症へのかかりやすさ、または血栓塞栓性事象）のより低い危険性。これらの症状のいずれかの改善またはその重症度の低下は、当技術分野で公知のまたは後に開発される方法および技術に従って容易に評価され得る。治療の所望の効果は、ＦＳＧＳ、具体的には非糖尿病性ＦＳＧＳ、またはその状態もしくは症状の発生または再発を予防すること、ＦＳＧＳの状態または症状を緩和すること、ＦＳＧＳの任意の直接的または間接的病理学的結果を小さくすること、ＦＳＧＳ進行の速度または重症度を減らすこと、および／またはＦＳＧＳを改善するかまたは和らげることを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、ＦＳＧＳを発症する危険性があると特定された患者亜集団に対して使用される。いくつかの場合には、本発明の方法および組成物は、ＦＳＧＳの発症を遅延させようとする試みにおいて有用である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬製剤の化合物（すなわちクロピドグレル）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、任意の他の治療化合物とともに投与されない。いくつかの実施形態では、化合物は、同時にまたは逐次的に、任意の他の治療化合物とともに投与されない。いくつかの実施形態では、化合物は、単独で投与される。

いくつかの実施形態では、方法は、１つまたは複数の追加の治療化合物を患者に投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の追加の治療化合物は、抗ウイルス薬、抗凝固薬、免疫調節剤、ヒト供給源に由来する抗体製剤、モノクローナル抗体、集中治療薬、抗高血圧剤、スタチン、血管拡張薬、ステロイド、細胞毒性薬、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、コレステロールもしくはトリグリセリド低下剤、ＰＰＡＲアゴニストまたは植物薬理学的物質、例えばミリスチン酸のうちの１つまたは複数から選択される。

少なくとも１つの薬学的に許容される担体は、本明細書で使用される場合、所望の特定の剤形に適した、あらゆる溶媒、希釈剤、他の液体ビヒクル、分散助剤、懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤、乳化剤、保存剤、固体結合剤、および滑沢剤を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ，２０１３，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ、およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓは、医薬組成物を製剤化するのに使用される様々な担体およびその調製のための公知技術を開示する。任意の従来の担体が、例えば何らかの望ましくない生物学的効果を生じること、またはそうでなければ医薬製剤の他のいずれかの成分と有害な様式で相互作用することによって、本開示の化合物と適合しない場合を除き、その使用は、本開示の範囲内にあることが企図される。好適な薬学的に許容される担体の非限定的な例としては、以下に限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えばヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えばホスフェート、グリシン、ソルビン酸、およびソルビン酸カリウム）、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、および電解質（例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、および亜鉛塩）、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、羊毛脂、糖（例えばラクトース、グルコースおよびスクロース）、デンプン（例えばコーンスターチおよびバレイショデンプン）、セルロースおよびその誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース、微結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ラクトース、デキストリン、マンニトール、白糖、トウモロコシデンプン、アルファ化デンプン、沈降炭酸カルシウムおよびリン酸水素カルシウム、トラガント末、モルト、ゼラチン、タルク、賦形剤（例えばカカオバターおよび坐剤ワックス）、油（例えばピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）、グリコール（例えばプロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）、エステル（例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）、寒天、緩衝剤（例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張生理食塩水、リンゲル溶液、エチルアルコール、リン酸塩緩衝溶液、非毒性適合性滑沢剤（例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、保存剤、および抗酸化剤またはそれらの任意の混合物および組み合わせが挙げられる。

クロピドグレルまたはその塩の溶解性は、当技術分野で公知の方法、例えば以下に限定されないが、ポリオールまたはグリセロールなどの非水性剤、またはプロピレングリコールなどの極性溶媒と組み合わせることによって、増加され得る。

前述の記載は、以下の実施例を参照してより完全に理解される。しかし、該実施例は、本発明の１つまたは複数の実施形態を実施する方法を代表するものにすぎず、発明の範囲を限定するものとして読まれるべきではない。

実施例１
インビボ試験
クロピドグレルの生物学的試験のために、ＦＳＧＳの受け入れられているマウスモデル、すなわちアドリアマイシン誘導性腎症を選択した。アドリアマイシン腎症は、ヒト原発性巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）のげっ歯類の最新式モデルであり、ポドサイト傷害とそれに続く糸球体硬化症、尿細管間質性炎症および線維症を特徴とし（ＤａＳａｃｃｏＳ．ら、２０１４、ＬｅｅＶ．Ｗ．およびＨａｒｒｉｓＤ．Ｃ．、２０１１））、したがって、ＦＳＧＳにおけるクロピドグレルの治療効果を実証するために使用した。

すべての動物実験および取り扱いは、動物の保護に関するオーストリアの法律に従い、オーストリア科学研究省の動物倫理委員会によって承認された。
アドリアマイシン依存性腎症（活性化合物：ドキソルビシン）は、１０週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてマウス１ｋｇあたり約９ｍｇの用量を受ける、尾静脈注射によって誘導した。対照マウスには、０．９％生理食塩水を注射した。１群あたり少なくとも６匹のマウスを分析した。マウスを、痛み、変わった動き、または低下した食物摂取の徴候について毎日モニターし、頸椎脱臼によって犠牲にした。文献調査に基づく薬物用量で事前に混合された飼料を介して、試験される薬物を、経口投与により投与した。

さらなるモデルとして、またはウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）遺伝子の抑制に起因してＦＳＧＳに罹患するｍｉＲ－１９３ａ過剰発現マウスが使用され得る（Ｇｅｂｅｓｈｕｂｅｒら、２０１３）。

結果
尿アルブミンレベルを、ＥＬＩＳＡによって評価し、尿総タンパク質および尿クレアチニンレベルを、日常的な実験室キットを使用して、ＲｏｃｈｅＣｏｂａｓシステムで測定した。尿タンパク質／クレアチニン（ＵＰＣＲ）比および尿アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）を、様々な時点で評価した。重量および身体フィットネススコアを、毎日モニターした。実験の終了時に、組織切片、血漿および尿サンプルを収集し、さらなる分析まで保管した。成功した薬物候補について、著しく低下したＵＰＣＲおよびＵＡＣＲ値が見出され、このことは、機能的改善および低下したタンパク尿を実証した。

時点にわたる反復測定ＡＮＯＶＡを、Ｒ統計ソフトウェアフレームワークを使用して計算した。薬物投与（クロピドグレル）および時点（日数における）についての効果は、それぞれ０．００９（薬物）および０．０２３（時点）のｐ値を伴って、有意であった。相互作用（薬物：時点）についてのｐ値は０．７８８であった（図２を参照）。

図１では、ＦＳＧＳが、アドリアマイシン（ＡＤＲ）で誘導され、誘導後の示される時（日数における）にタンパク尿に関して評価されたことが示される。ＵＰＣＲ＝尿タンパク質クレアチニン比；ＵＡＣＲ＝尿アルブミンクレアチニン比－タンパク尿および腎臓損傷に対する両マーカー；灰色の箱（ｃｔｒｌ）＝ＦＳＧＳを有する対照マウス；「クロピドグレル」と表示される箱＝クロピドグレルで処置された、ＦＳＧＳを有するマウス；箱ひげ図は、個々のデータ点（点在）に加えて、中央値（中線）、四分位範囲（箱）および９５％信頼区間（ひげ）を示す。ｔ検定のＰ値は、各時点についてデータの上に示される。開始から３７日後におけるＣｔｒｌおよびクロピドグレル処置マウスの両方におけるＵＰＣＲは、マウスがこの実験においてアドリアマイシン誘導性ＦＳＧＳから回復することができたため、同様のレベルに低下する。

図２では、以下が示される：独立した実験において、ＦＳＧＳが、アドリアマイシン（ＡＤＲ）で誘導され、誘導後の示される時（日数における）にタンパク尿に関して評価された。ＵＰＣＲ＝尿タンパク質クレアチニン比－タンパク尿および腎臓損傷に対するマーカー；灰色の箱（ｃｔｒｌ）＝ＦＳＧＳを有する対照マウス；「クロピドグレル」と表示される箱＝クロピドグレルで処置された、ＦＳＧＳを有するマウス；箱ひげ図は、個々のデータ点（点在）に加えて、中央値（中線）、四分位範囲（箱）および９５％信頼区間（ひげ）を示す。ｔ検定のＰ値は、各時点についてデータの上に示される。時点にわたるクロピドグレルを試験するための反復測定ＡＮＯＶＡについての結果は、上に示される。

実施例２
インビボ試験
クロピドグレルの生物学的試験のために、ＦＳＧＳの受け入れられているマウスモデル、すなわちアドリアマイシン誘導性腎症を選択した。アドリアマイシン腎症は、ヒト原発性巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）のげっ歯類の最新式モデルであり、ポドサイト傷害とそれに続く糸球体硬化症、尿細管間質性炎症および線維症を特徴とし（ＤａＳａｃｃｏＳ．ら、２０１４、ＬｅｅＶ．Ｗ．およびＨａｒｒｉｓＤ．Ｃ．、２０１１）、したがって、ＦＳＧＳにおけるクロピドグレルの治療効果を実証するために使用した。

すべての動物実験および取り扱いは、動物の保護に関するオーストリアの法律に従い、オーストリア科学研究省の動物倫理委員会によって承認された。
材料および方法
アドリアマイシン（ドキソルビシン、Ｓｉｇｍａ、Ｄ１５１５－１０ｍｇ）をｄｄＨ_２Ｏに希釈した。ＦＳＧＳを誘導するために、マウス１ｋｇあたり１０．５ｍｇの用量、すなわち、マウス２５ｇあたり２００μｌ体積の総体積を、２７Ｇ注射針を使用して尾静脈に静脈内注射した。

尾静脈注射のために、ケタネスト（Ｐｆｉｚｅｒ、２５ｍｇ／ｍｌバイアル）およびロンプン（Ｂａｙｅｒ、２０ｍｇ／ｍｌ注射溶液）を使用してマウスに麻酔をした。０．９％ＮａＣｌ溶液中の１２．５ｍｇ／ｍｌケタネストおよび０．２５％ロンプンの最終混合物を調製し、マウス２５ｇあたり２００μｌを注射した。クロピドグレル重硫酸塩（Ｓｉｇｍａ、ＰＨＲ１４３１－１Ｇ）を療法実験のために使用した。

動物／動物管理
マウスおよびＦＳＧＳモデル
雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを、医科大学（ＡｂｔｅｉｌｕｎｇｆｕｒＬａｂｏｒｔｉｅｒｋｕｎｄｅ、Ｈｉｍｂｅｒｇ、Ａｕｓｔｒｉａ）の動物飼育施設から入手した。重量＞２０ｇを有する１２～１６週齢の動物を、実験のために使用し、重量および週齢について調整した。動物を、少なくとも７日間、順化させた。動物を、特定を可能にするために、耳またはつま先のクリップコードによって印付けした。Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるアドリアマイシン腎症は、前臨床ＦＳＧＳ研究のために最もよく使用される動物モデルであり、ヒトＦＳＧＳと中心的特徴を共有する。

食餌
ｓｓｎｉｆｆ（ｓｓｎｉｆｆＳｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎＧｍｂＨ、Ｓｏｅｓｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）からの標準的な市販の飼料は、粗タンパク質（１９％）、粗脂肪（３．３％）、粗繊維（４．９％）、粗灰分（６．４％）、デンプン（３６．５％）、糖（４．７％）を含有した。対照群の動物に、標準的飼料を与え、試験群の動物に、ｓｓｎｉｆｆによって生産された標準的飼料＋クロピドグレル（２００ｍｇ／ｋｇ）を与えた。すべての動物に、自由に食べることを許容し、約４グラム／マウスの１日平均摂取（ＪｏｈｎｓＨｏｐｋｉｎｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、ＵＳＡの動物ケアガイドラインによる；ｈｔｔｐ：／／ｗｅｂ．ｊｈｕ．ｅｄｕ／ａｎｉｍａｌｃａｒｅ／ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ／ｍｏｕｓｅ．ｈｔｍｌ）、すなわち１日あたりマウス１ｋｇあたり約２５～３０ｍｇのクロピドグレル（Ｈａｌｉｍら、２０１９）を想定した。

住居
動物を、マクロロンケージ３７５ｍｍ×２１５ｍｍ×１５０ｍｍ中で標準的条件（２３±１℃、５５±１０％湿度、１２時間の昼夜サイクル）にて維持し、毎日確認した。飼料および水は、自由に提供された。

尿の収集および測定
スポット尿を毎週収集し、クレアチニンおよびタンパク質レベルを測定した。
尿アルブミンを、ＥＬＩＳＡによって測定した。９６ウェルプレートを、コーティング緩衝液（３．７ｇＮａＨＣＯ_３、０．６４ｇＮａ_２ＣＯ_３、１Ｌ蒸留水）中の１００μｌの抗体溶液抗マウス血清アルブミン抗体（Ａｂｃａｍａｂ３４８０７、ロットＧＲ３２４２１０２－４、１：２，０００希釈）を用いて、４℃で一晩コーティングした。残りの手順は、室温で行った。ウェルを、ＨＢＳＳ（ＳｉｇｍａＨ８２６４－５００ＭＬ）＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、＃１７０６５３１）を用いて３回洗浄し、ＥＬＩＳＡ／ＥＬＩＳＰＯＴ希釈剤（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、００－４２０２－５６）中でブロッキングし、再度３回洗浄した。サンプルおよび標準曲線を、両方とも、ＥＬＩＳＡ／ＥＬＩＳＰＯＴ希釈剤中で希釈し、２時間インキュベートし、その後、ＨＢＳＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を用いた３回の洗浄ステップが続き、ＨＲＰ抗体である抗マウス血清アルブミン抗体（Ａｂｃａｍａｂ１９１９５、ロットＧＲ３２４２１０２－４、１：１００，０００希釈）とともに１時間インキュベートし、その後、５回の洗浄ステップが続いた。反応を、ＴＭＢＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７４３１）を用いて顕色し、２ＮＨ_２ＳＯ_４を用いて停止した。標準曲線を、マウスアルブミン（Ｍｅｒｃｋ／Ｓｉｇｍａ、１２６６７４－２５ＭＧ）を用いて生成した。４５０ｎｍ吸光度を、Ｇｅｎ５１．１０ソフトウェアを使用して、Ｅｐｏｃｈマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）で測定した。

組織学
実験の終了時に、腎臓を取り出し、パラフィン中に包埋し、ＰＡＳ（過ヨウ素酸－シッフ）染色を行った。組織学を徹底的に評価し、硬化性糸球体およびタンパク質円柱の量を定量化した。

統計学
Ｒバージョン４．０．２を、統計分析のために使用した。それぞれ個々の時点についての処置および対照マウスからのサンプル間のＵＰＣＲおよびＵＡＣＲ値を比較するために、かつ組織学的パラメータにおける差を評価するために、スチューデントのｔ検定を使用した。ｒｓｔａｔｉｘパッケージ（Ｖ０．６．０）におけるそれぞれの機能を使用して、経時的なＵＰＣＲおよびＵＡＣＲに対する薬物の影響を分析するために、反復測定ＡＮＯＶＡを行った。グラフによる可視化を生じるために、ｇｇｐｌｏｔ２（Ｖ３．３．２）およびｇｇｐｕｂｒ（Ｖ０．４．０）パッケージを使用した。

実験セットアップ
２つの独立した実験（実験１および２）において、３４匹の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに、１０．５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを尾静脈に注射した（表２を参照）。注射から４８時間後、活性群は、標準的飼料＋２００ｍｇ／ｋｇのクロピドグレルを受け、一方、対照マウスは、標準的飼料のままであった。スポット尿を毎週収集し、腎臓を犠牲時に回収した。１０．５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを、尾静脈に注射した。２日後、クロピドグレル飼料療法を開始した。毎週、尿を収集し、重量を測定した。実験は約５週続いた。

以下の表１では、実験に使用されたマウスの概要が示される（^＊腎臓を、各群から７匹のマウスにおいて回収した；^＊＊各群において１匹の動物は、死んでいることが分かった）。

結果
クロピドグレルは、アルブミン尿およびタンパク尿を有意に低下させる
尿のクレアチニンに対するアルブミンの比（ＵＡＣＲ）および尿のクレアチニンに対するタンパク質の比（ＵＰＣＲ）の決定は、クロピドグレル療法による目立った改善を明らかにした。図３は、２つの独立した実験のＵＡＣＲおよびＵＰＣＲのパーセント低下を表す。図４は、実験１のすべての個々の収集された尿の箱ひげ図およびｐ値を表す。

反復測定ＡＮＯＶＡは、ＵＰＣＲおよびＵＡＣＲレベルに基づいて決定されたアウトカムに対する経時的なクロピドグレル処置の有意な有益な影響を明らかにした（ＵＰＣＲについてｐ＝０．０００４７５およびＵＡＣＲについてｐ＝０．００４）。
ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＰＣＲ

ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＡＣＲ

反復測定ＡＮＯＶＡはまた、２回目の独立した実験においてＵＰＣＲおよびＵＡＣＲレベルに基づいて決定されたアウトカムに対する経時的なクロピドグレル処置の有益な影響を示した（図５）（ＵＰＣＲについてｐ＝０．０２９およびＵＡＣＲについてｐ＝０．００９）。
ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＰＣＲ

ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＡＣＲ

したがって、クロピドグレルの有益な影響は、２つの独立した実験において確認された。
両方の実験をまとめると、クロピドグレルは、すべての時点にわたって平均で４９％ＵＰＣＲを低下させ（反復測定ＡＮＯＶＡｐ＝７．８４ｅ－０５）、すべての時点にわたって平均で６１％ＵＡＣＲを低下させた（反復測定ＡＮＯＶＡｐ＝０．０００１６２）。
ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＰＣＲ

ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－ＵＡＣＲ

したがって、ＵＰＣＲおよびＵＡＣＲの決定は、クロピドグレル療法による、目立った、かつ有意な腎機能の保護を明らかにした。
全体的健康状態－重量変化：
重量減少は、腎臓病のよくある症状であり、アドリアマイシンの毒性の結果でもある。重量変化を、実験の過程で毎週評価した。本発明者らは、クロピドグレル処置マウスが、対照マウスと比較して、少ない重量減少を受けたことを観察した。
ＡＮＯＶＡ表（タイプＩＩＩ試験）－重量

全体的に見て、クロピドグレルは、ＡＤＲ関連の重量減少を４８％低下させた（反復測定ＡＮＯＶＡｐ＝０．００７）。
組織病理学的評価
組織病理学的評価は、アドリアマイシン誘導性腎症を有する動物が、特有の糸球体病変および際立った尿細管変化も示すことを確認した（図７および図９を参照）。糸球体は、しばしば、糸球体毛細血管の、大部分は分節性（糸球体係蹄の部分のみに影響を及ぼす）であるが、時にはまた全体的な硬化性荒廃の影響を受ける。これらの病変は、動物モデルおよびヒトの両方において、ポドサイト傷害に起因する可能性があり、進行性疾患の診断に役立つ特徴である。尿細管傷害は、非処置動物に存在する。近位尿細管は、高度に拡張され、扁平化した上皮細胞によって裏打ちされ、均質なタンパク質円柱を含有する。これらの尿細管変化は、尿細管の機能障害を示し、非特異的であり、原発性尿細管間質性疾患（慢性間質性腎炎）において観察され得るが、さらに、重度の糸球体傷害とともに生じ得る。発症機構は、尿細管拡張の下流原因としての尿流の閉塞であり得るが、特に、本明細書で観察された変化を引き起こしている可能性がある高度タンパク尿に関連する場合に、糸球体傷害でもあり得る。

ＦＳＧＳは、糸球体損傷によって開始されるが、ＥＳＲＤの究極的原因は、尿細管の再吸収プロセスの不全である。図７および図９は、上記変化がないか、または少なくともはるかに目立たず、非常に少数の糸球体のみが分節性硬化の影響を受け（矢印によって印付けされる）、さらに、非常に小さく、際立って低下した尿細管傷害（密集して見えるタンパク質円柱上に星印によって印付けされる）を有することを実証する。

図８は、両方の群における組織病理学的損傷の定量化を表す。糸球体硬化の重症度スコアおよび尿細管拡張の重症度スコアの合計として定義される損傷スコアは、約６７％の、クロピドグレル療法後の疾患の著しい改善を表す。留意すべきことに、アドリアマイシン腎症は、糸球体硬化における強い不均質性を特徴とし（Ｚｈｏｕら２０１９、Ｘｉｏｎｇら２０２０）、これはまた、ヒトの状態を反映する。重要なことに、クロピドグレルは、重度の疾患を完全に予防し－主要な治療ゴール－いずれのサンプルにおいても、すべての糸球体の４％を超える糸球体硬化指数に達しなかったが、一方、非処置対照群において、硬化指数は３５％まで上がった（図８Ａ、Ｂ）。ＰＡＳ染色におけるタンパク質柱によって決定される尿細管拡張は、腎臓ろ過プロセスにおける不全を特定するための代替尺度であり、これもクロピドグレルによって強く改善された（図８Ｃ）。

分析された切片の形態学的詳細および視野画像のフルフィールドについて、各群からの３つの最も強く影響を受けた事例を表す図９を参照。
全体的に見て、クロピドグレルは、２．６７～０．８６の平均スコアから、６７．９％（９５％信頼区間－１１．７％～－９８．１％）組織病理学的損傷を低下させた（ｐ＝０．０３８）。

したがって、硬化性糸球体および拡張性尿細管の決定は、クロピドグレル療法による、目立った、かつ有意な組織病理学的損傷の改善を明らかにした。
まとめると、クロピドグレル処置は、ＦＳＧＳについての中心的読み出しパラメータ、すなわちＵＡＣＲ、ＵＰＣＲ、および組織病理学的変化の重症度を強く改善した。

実施例３
電子顕微鏡検査は、アドリアマイシン誘導性腎症を有する動物においてＦＳＧＳ病変を分類し、ポドサイトが、高パーセンテージの足突起消失、ポドサイト微絨毛変化および管状細網封入体を示すびまん性ポドサイト毒性の影響を受けることをこれらの動物が示し、一方で、上記のようにクロピドグレルで処置された動物が、著しく低下したポドサイト傷害（ポドサイトパチー）を有することを確認するために行われる。

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Claims

巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）に罹患している非糖尿病性対象の治療における使用のための、クロピドグレルまたはその塩もしくは溶媒和物を含む医薬製剤。
クロピドグレルが、単一の活性薬剤として存在する、請求項１に記載の使用のための医薬製剤。
ＦＳＧＳが、原発性ＦＳＧＳである、請求項１または２に記載の使用のための医薬製剤。
クロピドグレル、および薬学的に許容される担体を含む、医薬品または薬物製品である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
全身的に投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
クロピドグレルが、以下に示す構造
を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
約１０～４００ｍｇのクロピドグレルを含む、請求項６に記載の使用のための医薬製剤。
全身投与用、好ましくは静脈内、筋肉内、皮下、皮内、経皮、または経口投与用に製剤化されている、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
スプレー剤、散剤、ゲル剤、軟膏剤、クリーム剤、フォーム剤、または溶液剤、ローション剤、うがい液、エアロゾル化された粉末、エアロゾル化された液体製剤、顆粒剤、カプセル剤、ドロップ剤、錠剤、シロップ剤、ロゼンジ剤、または注入もしくは注射用の製剤として対象に投与される、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
ＦＳＧＳに罹患しているかまたはＦＳＧＳを発症する危険性がある対象に有効量で適用される、請求項１から９のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
単独の物質として投与されるか、または１つもしくは複数の活性物質を含むさらなる製剤と組み合わされる、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。
抗ウイルス薬、抗凝固薬、免疫調節剤、ヒト供給源に由来する抗体製剤、モノクローナル抗体、集中治療薬、抗高血圧剤、スタチン、血管拡張薬、ステロイド、細胞毒性薬、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、コレステロールもしくはトリグリセリド低下剤、ならびにＰＰＡＲアゴニストからなる群から選択される活性薬剤と組み合わせて投与される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用のための医薬製剤。