JP2023550545A

JP2023550545A - インターロイキン－１８バリアントおよび使用の方法

Info

Publication number: JP2023550545A
Application number: JP2023551948A
Authority: JP
Inventors: リン，アーロン; ブーン，トム
Original assignee: シムハ・アイエル－１８・インコーポレイテッド; エールユニバーシティー
Priority date: 2020-11-02
Filing date: 2021-11-02
Publication date: 2023-12-01
Also published as: CA3197145A1; MX2023005068A; GB2617483A; US20240066100A1; US20240075104A1; WO2022094473A1; KR20230117120A; TW202233657A; AU2021371040A1; IL302517A; US11850276B2; EP4236990A1; AR123978A1; US20230277625A1; GB202308183D0; CN116723851A

Abstract

本開示は、治療および非治療適用での使用のための安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドを含む組成物および方法を提供する。一部の場合では、安定化されたＩＬ－１８タンパク質は、阻害分子、例えばＩＬ－１８ＢＰの存在下でさえもＩＬ－１８シグナル伝達活性を提供する。また、投与の方法および活性なポリペプチドを作製する方法も提供される。【選択図】図９Ｂ

Description

相互参照
[0001]本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０２０年１１月２日に出願された米国仮出願第６３／１０８７９４号の利益を主張する。

[0002]インターロイキン１８（ＩＬ－１８）は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄性細胞を刺激することができる、炎症促進性サイトカインである。ＩＬ－１８は、抗腫瘍免疫細胞を刺激するその能力により、がんの処置のための免疫治療剤として提案された。しかしながら、ＩＬ－１８の臨床有効性は限定されている。

[0003]したがって、がんならびに他の疾患および障害を処置および防止するのに有効なＩＬ－１８シグナル伝達活性を提供する組成物および方法の必要性がある。本開示は、これらの必要性に対処する。
参照による組込み
[0004]本明細書中で言及した全ての刊行物、特許、または特許出願は、各個々の刊行物、特許、または特許出願が特異的および個々に参照により組み込まれることが意図されるように、同程度まで参照によって本明細書に組み込まれる。
配列リストの参照による組込み
[0005]配列リストは、２０２０年１１月２日に作成された、サイズが２７７ＫＢのテキストファイル、「ＳＭＣＨ－００３ＰＲＶ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」として本明細書において提供される。テキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

[0006]バリアント（例えば、安定化された）ＩＬ－１８ポリペプチドを含む組成物が提供される。安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較して２つのシステイン残基（Ｃ３８およびＣ６８）の突然変異である、「安定化突然変異」を含むＩＬ－１８ポリペプチドである。驚くべきことに、これら２つのアミノ酸の突然変異は、例えば以下の実施例を参照して、全ての他の可能なシステイン突然変異の組合せよりもＩＬ－１８を安定化することが見出された。一部の場合では、突然変異は、ＣからＳヘの置換であり、したがって、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、一部の場合では、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較して、突然変異Ｃ３８ＳおよびＣ６８Ｓ（本明細書中、「突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ」とも呼ばれる）を含み得る。しかしながら、Ｃ６８の突然変異は、一部の場合では、免疫原性エピトープを生じ得る。したがって、一部の実施形態では、Ｃ６８の突然変異は、非免疫原性置換である。一部のそのような場合では、突然変異は、Ｃ６８からＧ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｅ、またはＮへの突然変異（一部の場合では、Ｃ６８からＧ、Ａ、Ｄ、またはＮ）である。したがって、一部のそのような場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。

[0007]一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓを含む。

[0008]一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド、すなわち、安定化する突然変異（すなわち、ヒト野生型ＩＬ－１８と比較してＣ３８位およびＣ６８位の突然変異）を含むＩＬ－１８バリアントポリペプチドである。一部のそのような場合では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、安定化された「デコイ耐性」（ＤＲ）ＩＬ－１８バリアントであり、他のそのような場合では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、安定化された「デコイ・トゥー・デコイ（ｄｅｃｏｙ－ｔｏ－ｔｈｅ－ｄｅｃｏｙ）」（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアントである。一部の実施形態では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、０．６ｎＭより低い、ＩＬ－１８ＢＰへの結合親和性を有する。

[0009]一部の実施形態では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、異なる配列を有するＩＬ－１８ポリペプチドと比較して優れた安定性を示し、前記優れた安定性は、安定性アッセイへの曝露後に、少ない二量体、多量体、凝集体、および／または分解産物形成を生じる。一部の実施形態では、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８ポリペプチドよりも優れた安定性を有する。一部の実施形態では、優れた安定性は、保存期間安定性によって測定される。一部の実施形態では、優れた安定性は、改変されたＩＬ－１８ポリペプチドまたは改変されたＩＬ－１８ポリペプチドを含有する本明細書に開示される製剤を、凍結融解サイクルに供することによって決定される。一部の実施形態では、優れた安定性は、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドを撹拌に供することによって測定される。

[0010]ＤＲＩＬ－１８バリアントは、ＩＬ－１８受容体（ＩＬ－１８Ｒ）に結合し、それによりＩＬ－１８シグナル伝達活性を誘導／増強／刺激するが、阻害ＩＬ－１８結合タンパク質（ＩＬ－１８ＢＰ）への結合の減少［ＷＴＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへの結合と比較して］（一部の場合ではわずかな結合から結合なし）を示す、ＩＬ－１８のバリアント／変異体である。ＤＲＩＬ－１８バリアントは、したがって、ＩＬ－１８ＢＰによる阻害に耐性であるＩＬ－１８Ｒアゴニストである。ヒトＤＲＩＬ－１８バリアントの例は、限定はされないが、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３に記載のものを含む。マウスＤＲＩＬ－１８バリアントの例は、限定はされないが、配列番号６０～７２に記載のものを含む。

[0011]Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアントは、ＩＬ－１８ＢＰに結合するが、ＩＬ－１８Ｒヘの結合の減少［ＷＴＩＬ－１８のＩＬ－１８Ｒへの結合と比較して］（一部の場合ではわずかな結合から結合なし）を示す、ＩＬ－１８のバリアント／変異体である。したがって、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアントはＩＬ－１８ＢＰに結合し、それによりＩＬ－１８へのＩＬ－１８ＢＰの効果をアンタゴナイズする。したがって、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアントを使用して、それらが阻害剤を阻害することによって作用するため、ＩＬ－１８Ｒによるシグナル伝達を増加させることができる。ヒトＤ２ＤＩＬ－１８バリアントの例は、限定はされないが、配列番号９２～１２５に記載のものを含む。マウスＤ２ＤＩＬ－１８バリアントの例は、限定はされないが、配列番号１２６～１９０に記載のものを含む。

[0012]一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、［ヒト野生型ＩＬ－１８－配列番号３０に対して］Ｃ３８位（例えば、Ｃ３８Ｓ）およびＣ６８位（例えば、Ｃ６８Ｓ、Ｃ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｖ、Ｃ６８Ｄ、Ｃ６８Ｅ、またはＣ６８Ｎ）［例えば、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ］の安定化する突然変異に加えて、アミノ酸位置Ｍ５１の突然変異（例えば、Ｍ５１Ｅ、Ｍ５１Ｒ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｄ、またはＭ５１Ｎ）、Ｋ５３の突然変異（例えば、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、Ｋ５３Ｔ、またはＫ５３Ｒ）、Ｑ５６の突然変異（例えば、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｌ、Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｖ、またはＱ５６Ｋ）、Ｄ１１０の突然変異（例えば、Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｇ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｑ、またはＤ１１０Ｅ）およびＮ１１１の突然変異（例えば、Ｎ１１１Ｇ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｈ、またはＮ１１１Ｙ）を含む。一部のそのような場合では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、アミノ酸位置Ｓ１０５の突然変異（例えば、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、またはＳ１０５Ｋ）をさらに含み；一部の場合では、アミノ酸位置Ｐ５７の突然変異（例えば、Ｐ５７Ａ、Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、またはＰ５７Ｋ）およびＭ６０の突然変異（例えば、Ｍ６０Ｌ、Ｍ６０Ｒ、Ｍ６０Ｋ、またはＭ６０Ｑ）をさらに含む。

[0013]一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、［ヒト野生型ＩＬ－１８－配列番号３０に対して］Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、およびＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎから選択される安定化する突然変異対に加えて、アミノ酸位置Ｍ５１の突然変異（例えば、Ｍ５１Ｅ、Ｍ５１Ｒ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｄ、またはＭ５１Ｎ）、Ｋ５３の突然変異（例えば、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、Ｋ５３Ｔ、またはＫ５３Ｒ）、Ｑ５６の突然変異（例えば、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｌ、Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｖ、またはＱ５６Ｋ）、Ｄ１１０の突然変異（例えば、Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｇ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｑ、またはＤ１１０Ｅ）およびＮ１１１の突然変異（例えば、Ｎ１１１Ｇ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｈ、またはＮ１１１Ｙ）を含む。一部のそのような場合では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、アミノ酸位置Ｓ１０５の突然変異（例えば、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、またはＳ１０５Ｋ）をさらに含み；一部の場合では、アミノ酸位置Ｐ５７の突然変異（例えば、Ｐ５７Ａ、Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、またはＰ５７Ｋ）およびＭ６０の突然変異（例えば、Ｍ６０Ｌ、Ｍ６０Ｒ、Ｍ６０Ｋ、またはＭ６０Ｑ）をさらに含む。

[0014]一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、［ヒト野生型ＩＬ－１８－配列番号３０に対して］Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、およびＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎから選択される安定化する突然変異対に加えて、アミノ酸位置Ｍ５１の突然変異（例えば、Ｍ５１Ｅ、Ｍ５１Ｒ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｄ、またはＭ５１Ｎ）、Ｋ５３の突然変異（例えば、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、Ｋ５３Ｔ、またはＫ５３Ｒ）、Ｑ５６の突然変異（例えば、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｌ、Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｖ、またはＱ５６Ｋ）、Ｄ１１０の突然変異（例えば、Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｇ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｑ、またはＤ１１０Ｅ）およびＮ１１１の突然変異（例えば、Ｎ１１１Ｇ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｈ、またはＮ１１１Ｙ）を含む。一部のそのような場合では、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、アミノ酸位置Ｓ１０５の突然変異（例えば、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、またはＳ１０５Ｋ）をさらに含み；一部の場合では、アミノ酸位置Ｐ５７の突然変異（例えば、Ｐ５７Ａ、Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、またはＰ５７Ｋ）およびＭ６０の突然変異（例えば、Ｍ６０Ｌ、Ｍ６０Ｒ、Ｍ６０Ｋ、またはＭ６０Ｑ）をさらに含む。

[0015]一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号６および１６～２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号６および１６～２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

[0016]一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号６、１６、１７、１９、および２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の場合では、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号６、１６、１７、１９、および２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

[0017]一部の実施形態では、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）は、疾患または障害の処置のために使用される。様々な実施形態では、疾患または障害は、がん、またはＩＬ－１８ＢＰオルソログをコードするポックスウイルスなどの感染症、代謝疾患または障害（肥満および糖尿病を含む）、または黄斑変性（例えば、滲出型黄斑変性、例えば、滲出型加齢関連黄斑変性、例えば、ＩＬ－１８タンパク質は抗血管新生剤として使用することができ、例示的な例としては、一部の場合では、安定化されたＩＬ－１８タンパク質は脈絡膜新生血管を弱めることができる）である。したがって、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）を投与して、疾患または障害、例えば、限定はされないが、がん、または感染症、代謝疾患もしくは障害、または黄斑変性（例えば、滲出型黄斑変性、例えば滲出型加齢関連黄斑変性）を処置するステップを含む方法が提供される。

[0018]一部の実施形態では、方法は、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）を含む組成物、およびさらなる薬剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。一部のそのような実施形態では、さらなる薬剤は、免疫治療剤、例えば変更された免疫細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）、武装化したＣＡＲ－Ｔ細胞などのＴ細胞；ＣＡＲ－ＮＫなどのＮＫ細胞；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ－Ｔ細胞等）、ウイルス、抗原、ワクチン、抗体、免疫チェックポイント阻害剤、小分子、化学療法剤、幹細胞等を含む。一部の実施形態では、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）は、細菌、ウイルス、または他の病原体による感染前、感染中、または感染後に免疫系の活性を増加させる方法において使用される。一部の実施形態では、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント）は、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏでの免疫細胞の数および／または活性、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、および／または骨髄性細胞の数および／または活性を増加させる方法において使用される。

[0019]対象のポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤および／または腫瘍オプソニン化抗体と組み合わせて、またはそれとの融合物として投与され得る。対象のポリペプチドは、細胞療法、例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ＴＣＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、および腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）療法と組み合わせて投与され得る。対象のポリペプチドは、細胞療法の一部としても投与され得、例えば、細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、ＴＩＬ細胞等のバージョンである、ＴＲＵＣＫ細胞（「Ｔｃｅｌｌｓｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄｆｏｒａｎｔｉｇｅｎ－ｕｎｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｉｔｉａｔｅｄｋｉｌｌｉｎｇ」）によって分泌されるタンパク質であり得る。

[0020]ＩＬ－１８ポリペプチドを個体に投与する方法も提供され、方法は、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８またはバリアント、例えば、安定化されたＤＲ、Ｄ２Ｄ、安定化されたＤＲ、または安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント）を個体に投与するステップを含み、投与の頻度は週に１回以下である。

[0021]ＩＬ－１８ポリペプチドを産生するための方法および組成物も提供される。そのような方法は、細菌細胞内で、外因的に提供した融合タンパク質を外因的に提供したＳＵＭＯ（低分子ユビキチン様修飾因子）プロテアーゼと接触させるステップを含み、融合タンパク質は、ＳＵＭＯタグにＮ末端で融合した目的のポリペプチドを含み、細菌細胞内で、ＳＵＭＯプロテアーゼが融合タンパク質を切断し、したがって、目的のポリペプチドからＳＵＭＯタグを除去する。一部の場合では、目的のポリペプチドは、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ－１８タンパク質またはＩＬ－１８バリアント、例えば安定化された、ＤＲ、Ｄ２Ｄ、安定化されたＤＲ、または安定化されたＤ２Ｄバリアント－例えば、安定化された、上記で論じられたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドを参照）である。

[0022]ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ－１８タンパク質またはＩＬ－１８バリアント、例えば安定化された、ＤＲ、Ｄ２Ｄ、安定化されたＤＲ、または安定化されたＤ２Ｄバリアント－例えば、安定化された、上記で論じられたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドを参照）を含む製剤も提供する。一部の場合では、ＩＬ－１８タンパク質に加えて、製剤は、ｐＨを維持する緩衝化剤（例えば、６．２と６．８の間、例えばＨｉｓ／Ｈｉｓ－ＨＣｌ）、糖（例えば、スクロース、例えば６～１０％）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、例えば０．０５～１．５ｍＭ）、酸化を防止する薬剤（例えば、Ｌ－メチオニン、例えば４～６ｍＭ）、およびタンパク質吸収を防ぐ薬剤（例えば、ＰＳ８０、例えば０．０１～０．０３％ｗ／ｖ）を含む。

[0023]本発明の実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と共に読んだ場合により良く理解されるであろう。本発明は、図面に示される実施形態の正確な配置および手段に限定されないことが理解されるべきである。

[0024]図１Ａおよび図１Ｂは、ＩＬ－１８経路が腫瘍免疫療法のための標的であることを示す、例示的な実験の結果を描写する。図１Ａは、ＩＬ－１８経路（ＩＬ－１８およびその受容体サブユニットを含む）が、ＣＤ８＋ＴＩＬ中のサイトカインおよび受容体に関するＲＮＡｓｅｑ発現分析において見られるように、活性化された、および機能不全の腫瘍Ｔ細胞プログラムの両方において上方調節されることを示す図を提供する。遺伝子は、図中に見られるように、ナイーブなＴ細胞と比較した「活性化」および「機能不全」スコアを割り当てられる。菱形および黒字で印を付けられたデータポイントは、ＩＬ－１８サイトカイン、ＩＬ－１８Ｒ１（Ｒα）、およびＩＬ－１８ＲＡＰ（Ｒβ）を示す。データは、Ｓｉｎｇｅｒら（Ｓｉｎｇｅｒ，Ｍ．ら、２０１６、Ｃｅｌｌ、１６６：１５００～１５１１、ｅ１５０９）から適合される。図１Ｂは、ＬＣＭＶ（左；ＣＤ４）またはＶＳＶ－ＯＶＡ（右；ＣＤ８）による感染の結果を提供する。ＩＬ－１８受容体サブユニットＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８Ｒβは、ＬＣＭＶ（左；ＣＤ４）またはＶＳＶ－ＯＶＡ（右；ＣＤ８）による感染後に見られるように、慢性的抗原曝露と関連する遺伝子発現プログラムの一部である。データは、ＩｍｍＧｅｎデータベースに由来する。図１Ａおよび図１Ｂは、ＩＬ－１８経路が腫瘍免疫療法のための標的であることを示す、例示的な実験の結果を描写する。図１Ａは、ＩＬ－１８経路（ＩＬ－１８およびその受容体サブユニットを含む）が、ＣＤ８＋ＴＩＬ中のサイトカインおよび受容体に関するＲＮＡｓｅｑ発現分析において見られるように、活性化された、および機能不全の腫瘍Ｔ細胞プログラムの両方において上方調節されることを示す図を提供する。遺伝子は、図中に見られるように、ナイーブなＴ細胞と比較した「活性化」および「機能不全」スコアを割り当てられる。菱形および黒字で印を付けられたデータポイントは、ＩＬ－１８サイトカイン、ＩＬ－１８Ｒ１（Ｒα）、およびＩＬ－１８ＲＡＰ（Ｒβ）を示す。データは、Ｓｉｎｇｅｒら（Ｓｉｎｇｅｒ，Ｍ．ら、２０１６、Ｃｅｌｌ、１６６：１５００～１５１１、ｅ１５０９）から適合される。図１Ｂは、ＬＣＭＶ（左；ＣＤ４）またはＶＳＶ－ＯＶＡ（右；ＣＤ８）による感染の結果を提供する。ＩＬ－１８受容体サブユニットＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８Ｒβは、ＬＣＭＶ（左；ＣＤ４）またはＶＳＶ－ＯＶＡ（右；ＣＤ８）による感染後に見られるように、慢性的抗原曝露と関連する遺伝子発現プログラムの一部である。データは、ＩｍｍＧｅｎデータベースに由来する。 [0025]図２Ａ～図２Ｃは、ＩＬ－１８ＢＰが「可溶性免疫チェックポイント」の特徴を有することを示す、例示的な実験の結果を描写する。図２Ａは、ＩＬ－１８ＢＰが、免疫チェックポイントＰＤ－Ｌ１と類似する、ＩＬ－１８のインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）誘導性の負のフィードバックをどのように媒介するかを示す。ＩＬ－１８／ＩＦＮ－γ／ＩＬ－１８ＢＰフィードバックループの概略図が描写される。黒色の矢印は刺激を示し、灰色の回路は阻害を示す。図２Ｂは、ＴＣＧＡおよびＯｎｃｏｍｉｎｅのデータベースからのデータを使用して、ＩＬ－１８ＢＰが胃がんおよび乳がんにおいて上方調節されることを示す。図２Ｃは、ＰＤ－１およびＩＬ－１８ＢＰ発現が、大量の乳がんおよび胃がん試料（ＴＣＧＡデータベースに由来する）において強く相関することを示す。それぞれ、Ｒ＝０．７８および０．６５である。 [0026]図３Ａ～図３Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するヒトＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図３Ａは、ＩＬ－１８：ＩＬ－１８ＢＰ境界面上の残基を無作為化するために設計され、酵母ディスプレイシステム中に導入された、構造誘導性ライブラリーを提供する。ＩＬ－１８Ｒαへの結合について磁気および蛍光細胞選別を使用して、酵母クローンを選択し、ＩＬ－１８ＢＰに対して対抗選択した。図３Ｂは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性ＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｈＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｈＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ＳＡのみ、ｈＩＬ－１８ＢＰ、およびｎＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図３Ｃは、酵母ディスプレイされたＷＴＩＬ－１８（左）または指向性進化後のバリアント（右）のフローサイトメトリー分析を提供する。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。５ラウンドの指向性進化後、残存するクローンは、ＩＬ－１８ＢＰよりもＩＬ－１８Ｒαを大きく選択した。図３Ａ～図３Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するヒトＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図３Ａは、ＩＬ－１８：ＩＬ－１８ＢＰ境界面上の残基を無作為化するために設計され、酵母ディスプレイシステム中に導入された、構造誘導性ライブラリーを提供する。ＩＬ－１８Ｒαへの結合について磁気および蛍光細胞選別を使用して、酵母クローンを選択し、ＩＬ－１８ＢＰに対して対抗選択した。図３Ｂは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性ＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｈＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｈＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ＳＡのみ、ｈＩＬ－１８ＢＰ、およびｎＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図３Ｃは、酵母ディスプレイされたＷＴＩＬ－１８（左）または指向性進化後のバリアント（右）のフローサイトメトリー分析を提供する。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。５ラウンドの指向性進化後、残存するクローンは、ＩＬ－１８ＢＰよりもＩＬ－１８Ｒαを大きく選択した。図３Ａ～図３Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するヒトＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図３Ａは、ＩＬ－１８：ＩＬ－１８ＢＰ境界面上の残基を無作為化するために設計され、酵母ディスプレイシステム中に導入された、構造誘導性ライブラリーを提供する。ＩＬ－１８Ｒαへの結合について磁気および蛍光細胞選別を使用して、酵母クローンを選択し、ＩＬ－１８ＢＰに対して対抗選択した。図３Ｂは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性ＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｈＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｈＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ＳＡのみ、ｈＩＬ－１８ＢＰ、およびｎＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図３Ｃは、酵母ディスプレイされたＷＴＩＬ－１８（左）または指向性進化後のバリアント（右）のフローサイトメトリー分析を提供する。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。５ラウンドの指向性進化後、残存するクローンは、ＩＬ－１８ＢＰよりもＩＬ－１８Ｒαを大きく選択した。 [0027]図４は、デコイ耐性ヒトＩＬ－１８（「ＤＲ－ＩＬ－１８」、「ＤＲ－１８」とも呼ばれる）バリアントの配列の概要を示す、例示的な実験の結果を描写する。成熟形態の野生型ヒトＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。配列番号３８～配列番号５８は、指向性進化を用いた選択後に得られた配列を表す。配列番号３４～配列番号３７は、選択された配列に由来するコンセンサス配列である。影付きの残基は、観察された５つの最も保存された突然変異を表す。上の行の配列（「ＷＴｈＩＬ－１８」）は、配列番号３０として記載される。 [0028]図５Ａおよび図５Ｂは、ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生物物理学的特性評価を示す、例示的な実験の結果を描写する。図５Ａは、酵母ディスプレイされたＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントに関する結合等温線を提供する。示されるように、酵母ディスプレイされたＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号３４～３７および配列番号３９は、ＷＴヒトＩＬ－１８（左）と同等の結合等温線でｈＩＬ－１８Ｒαに結合することができる。対照的に、同じバリアントおよびｈＩＬ－１８ＢＰに関しては非常にわずかな結合が観察される（右）。図５Ｂは、固定化されたビオチン化ｈＩＬ－１８ＢＰとＤＲ－ＩＬ－１８バリアントとの間の代表的な表面プラズモン共鳴センサーグラムを示す。組換えｈＩＬ－１８（左）は、非常に高い親和性、ＫＤ＝２．０ｐＭでＩＬ－１８ＢＰに結合するが、配列番号３４（右）は大きく減弱した結合を示し、はるかに速い解離速度およびＫＤ＝１５．２ｎＭを示す。このデータは、表６および表７にまとめられる。 [0029]図６Ａおよび図６Ｂは、ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントがＩＬ－１８ＢＰによって阻害されないことを示す、例示的な実験の結果を描写する。図６Ａは、組換えＩＬ－１８ＢＰが、ビオチン化ＩＬ－１８Ｒαが酵母ディスプレイされたＷＴＩＬ－１８に結合するのを阻害するが、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号３４～３７および配列番号３９に影響しないことを示す図を提供する（左図に示される）。対照的に、ＩＬ－１８ＢＰは、以前に記載されたＩＬ－１８Ｅ４２Ａ、Ｋ８９ＡおよびＥ４２Ａ／Ｋ８９Ａを有効に中和する（Ｋｉｍら、２００１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９８（６）：３３０４～３３０９）（右図に示される）［ＫｉｍらのＥ４２およびＫ８９は、それぞれ、配列番号３０のＥ６およびＫ５３である］。ビオチン化ＩＬ－１８Ｒαは、全ての試料について１００ｎＭの固定濃度で保持された。図６Ｂは、ＷＴＩＬ－１８ならびに配列番号３４、配列番号３６、および配列番号３７が、同等の効力および有効性でＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅリポーター細胞を刺激することを示す、ＨＥＫＢｌｕｅＩＬ－１８シグナル伝達アッセイの結果を提供する（左）。野生型ＩＬ－１８は、このアッセイにおいて組換えＩＬ－１８ＢＰの適用に対して非常に感受性であるが（ＩＣ５０＝３ｎＭ）、配列番号３４および配列番号３６は、１μＭのＩＬ－１８ＢＰ濃度でも、組換えＩＬ－１８ＢＰによって阻害されない（右）。ｈＩＬ－１８は、５ｎＭの固定濃度で保持され、配列番号３４および配列番号３６は２．５μＭで保持された。 [0030]図７Ａ～図７Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰ（バージョン２のバリアント）に対する独立性に関するさらなるヒトＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図７Ａは、バージョン２．０のライブラリーにおいて無作為化されたヒトＩＬ－１８中の位置の概要を提供する。縮重コドンおよびコードされたアミノ酸のセットが、それぞれの位置について与えられる。図７Ｂは、バージョン２．０のＩＬ－１８ＢＰ耐性ＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｈＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｈＩＬ１８Ｒαであり、対抗選択条件は、ＳＡのみ、ｈＩＬ－１８ＢＰ、およびｈＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図７Ｃは、バージョン２．０のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの作出における進展のフローサイトメトリー分析を提供する。ラウンド１、４、および６の後に得られた酵母を、２５０ｎＭのＩＬ－１８ＢＰストレプトアビジン－ＰＥ四量体またはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７で直接標識された１００ｎＭのＩＬ－１８Ｒαで同時に染色した。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。６ラウンドの指向性進化後、残存するクローンは、ＩＬ－１８ＢＰよりもＩＬ－１８Ｒαを大きく選択した。 [0031]図８は、バージョン２．０のデコイ耐性ヒトＩＬ－１８（ＤＲ－ＩＬ－１８）バリアントの配列の概要を示す、例示的な実験の結果を描写する。成熟形態の野生型ヒトＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。影付きの行は、ラウンド５およびラウンド６の両方において得られる反復配列バリアントを示す。上の行の配列（「ＷＴｈＩＬ－１８」）は、配列番号３０として記載される。 [0032]図９は、バージョン２．０のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生物物理学的特性評価を示す、例示的な実験の結果を描写する。図９Ａは、酵母ディスプレイされたバージョン２．０のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントが、ＷＴヒトＩＬ－１８と同等の結合等温線でｈＩＬ－１８Ｒαに結合することができることを示す。図９Ｂは、対照的に、同じバリアントおよびｈＩＬ－１８ＢＰに関して極めて少ない結合が観察されることを示す。図９Ｃは、ある範囲の温度にわたって１５分間、酵母ディスプレイされたバリアントを加熱した後、ｈＩＬ－１８Ｒαで染色することによって評価された、バージョン２．０のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの熱安定性を提供する。バージョン２．０のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、ＷＴＩＬ－１８（Ｔｍ＝４７．６℃）および第１世代のコンセンサス配列（それぞれ、配列番号２４および配列番号３５について、Ｔｍ＝５０．９および４０．２）よりも熱安定性であった。図９Ｄは、第２世代のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの受容体結合特性および熱安定性の概要を提供する。ＮＢＤ＝結合は検出されず。Ｎ．Ｄ．＝値は決定されず。 [0033]図１０Ａ～図１０Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するマウスＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１０Ａは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性マウスＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｍＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｍＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ｍＩＬ－１８ＢＰおよびｍＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図１０Ｂは、５ラウンドの指向性進化後の酵母ディスプレイされたマウスＩＬ－１８バリアントのフローサイトメトリー分析の結果を示す。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。図１０Ｃは、デコイ耐性マウスＩＬ－１８（ＤＲ－ＩＬ－１８）バリアントの配列の概要を提供する。上の行の配列（「ｍＩＬ－１８」）は、配列番号３１として記載される。成熟形態の野生型マウスＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。配列番号６２～配列番号７２は、指向性進化を用いた選択後に得られる配列を表す。配列番号６０～配列番号６１は、選択された配列に由来するコンセンサス配列である。影付きの残基は、観察された５つの最も保存された突然変異を表す。図１０Ａ～図１０Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するマウスＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１０Ａは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性マウスＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｍＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｍＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ｍＩＬ－１８ＢＰおよびｍＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図１０Ｂは、５ラウンドの指向性進化後の酵母ディスプレイされたマウスＩＬ－１８バリアントのフローサイトメトリー分析の結果を示す。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。図１０Ｃは、デコイ耐性マウスＩＬ－１８（ＤＲ－ＩＬ－１８）バリアントの配列の概要を提供する。上の行の配列（「ｍＩＬ－１８」）は、配列番号３１として記載される。成熟形態の野生型マウスＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。配列番号６２～配列番号７２は、指向性進化を用いた選択後に得られる配列を表す。配列番号６０～配列番号６１は、選択された配列に由来するコンセンサス配列である。影付きの残基は、観察された５つの最も保存された突然変異を表す。図１０Ａ～図１０Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰに対する独立性に関するマウスＩＬ－１８バリアントの操作を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１０Ａは、ＩＬ－１８ＢＰ耐性マウスＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｍＩＬ１８Ｒα ＳＡ－ビーズおよびｍＩＬ１８Ｒαである。対抗選択条件は、ｍＩＬ－１８ＢＰおよびｍＩＬ－１８ＢＰ四量体である。図１０Ｂは、５ラウンドの指向性進化後の酵母ディスプレイされたマウスＩＬ－１８バリアントのフローサイトメトリー分析の結果を示す。Ｙ軸はＩＬ－１８ＢＰ結合を示し、ｘ軸はＩＬ－１８Ｒα結合を示す。図１０Ｃは、デコイ耐性マウスＩＬ－１８（ＤＲ－ＩＬ－１８）バリアントの配列の概要を提供する。上の行の配列（「ｍＩＬ－１８」）は、配列番号３１として記載される。成熟形態の野生型マウスＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。配列番号６２～配列番号７２は、指向性進化を用いた選択後に得られる配列を表す。配列番号６０～配列番号６１は、選択された配列に由来するコンセンサス配列である。影付きの残基は、観察された５つの最も保存された突然変異を表す。 [0034]図１１Ａおよび図１１Ｂは、マウスＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生物物理学的特性評価を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１１Ａは、酵母ディスプレイされたＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号７０、配列番号６７、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６０、および配列番号６１が、ＷＴマウスＩＬ－１８と同等の結合等温線でｍＩＬ－１８Ｒαに結合することができることを示す（左）。対照的に、同じバリアントおよびｍＩＬ－１８ＢＰに関しては極めて少ない結合が観察される（右）。図１１Ｂは、固定化されたビオチン化ｍＩＬ－１８ＢＰとマウスＤＲ－ＩＬ－１８バリアントとの間の代表的な表面プラズモン共鳴センサーグラムを使用したＩＬ－１８ＢＰ結合の測定を提供する。組換えｍＩＬ－１８（左）は、高い親和性、ＫＤ＝０．８ｐＭでｍＩＬ－１８ＢＰに結合するが、配列番号６１（右）は、１０μＭよりも高いＫＤで大きく低下した結合を示す。このデータは、表８および表９にまとめられる。 [0035]図１２Ａ～図１２Ｄは、マウスに投与されたＤＲ－ＩＬ－１８の薬力学を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１２Ａは、研究設計の概略図である。マウスに、７つの総用量について（注射筒として描写される）１日１回、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＩＬ－１８（１ｍｇ／ｋｇ）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。血液試料を、実験の２日前、ならびに０、３、および６日目に、注射の５時間後に採取した。図１２Ｂは、０日目、３日目、および６日目でのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞、および単球の末梢血細胞計数を示す。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、３日目までに類似する程度でＮＫ細胞および単球を拡大させた。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｃは、末梢ＣＤ４、ＣＤ８、およびＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現を示す。ＩＬ－１８ではなく、配列番号６１は、ＣＤ４およびＣＤ８細胞上でＣＤ６９発現を刺激した。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、ＮＫ細胞上でＣＤ６９を増加させたが、配列番号６１処置は、ＩＬ－１８と比較して、６日目で明らかな持続的なＣＤ６９発現を引き起こし、ベースラインＣＤ６９レベルに戻った。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｄは、インターフェロン－ｇ（ＩＦＮ－ｇ）、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦに関する血清サイトカインレベルを提供する。配列番号６１処置は、ｍＩＬ－１８処理よりも高いレベルのＩＦＮ－ｇ、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦをもたらした。図１２Ａ～図１２Ｄは、マウスに投与されたＤＲ－ＩＬ－１８の薬力学を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１２Ａは、研究設計の概略図である。マウスに、７つの総用量について（注射筒として描写される）１日１回、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＩＬ－１８（１ｍｇ／ｋｇ）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。血液試料を、実験の２日前、ならびに０、３、および６日目に、注射の５時間後に採取した。図１２Ｂは、０日目、３日目、および６日目でのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞、および単球の末梢血細胞計数を示す。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、３日目までに類似する程度でＮＫ細胞および単球を拡大させた。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｃは、末梢ＣＤ４、ＣＤ８、およびＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現を示す。ＩＬ－１８ではなく、配列番号６１は、ＣＤ４およびＣＤ８細胞上でＣＤ６９発現を刺激した。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、ＮＫ細胞上でＣＤ６９を増加させたが、配列番号６１処置は、ＩＬ－１８と比較して、６日目で明らかな持続的なＣＤ６９発現を引き起こし、ベースラインＣＤ６９レベルに戻った。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｄは、インターフェロン－ｇ（ＩＦＮ－ｇ）、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦに関する血清サイトカインレベルを提供する。配列番号６１処置は、ｍＩＬ－１８処理よりも高いレベルのＩＦＮ－ｇ、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦをもたらした。図１２Ａ～図１２Ｄは、マウスに投与されたＤＲ－ＩＬ－１８の薬力学を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１２Ａは、研究設計の概略図である。マウスに、７つの総用量について（注射筒として描写される）１日１回、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＩＬ－１８（１ｍｇ／ｋｇ）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。血液試料を、実験の２日前、ならびに０、３、および６日目に、注射の５時間後に採取した。図１２Ｂは、０日目、３日目、および６日目でのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞、および単球の末梢血細胞計数を示す。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、３日目までに類似する程度でＮＫ細胞および単球を拡大させた。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｃは、末梢ＣＤ４、ＣＤ８、およびＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現を示す。ＩＬ－１８ではなく、配列番号６１は、ＣＤ４およびＣＤ８細胞上でＣＤ６９発現を刺激した。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、ＮＫ細胞上でＣＤ６９を増加させたが、配列番号６１処置は、ＩＬ－１８と比較して、６日目で明らかな持続的なＣＤ６９発現を引き起こし、ベースラインＣＤ６９レベルに戻った。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｄは、インターフェロン－ｇ（ＩＦＮ－ｇ）、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦに関する血清サイトカインレベルを提供する。配列番号６１処置は、ｍＩＬ－１８処理よりも高いレベルのＩＦＮ－ｇ、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦをもたらした。図１２Ａ～図１２Ｄは、マウスに投与されたＤＲ－ＩＬ－１８の薬力学を示す、例示的な実験の結果を描写する。図１２Ａは、研究設計の概略図である。マウスに、７つの総用量について（注射筒として描写される）１日１回、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＩＬ－１８（１ｍｇ／ｋｇ）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ）を投与した。血液試料を、実験の２日前、ならびに０、３、および６日目に、注射の５時間後に採取した。図１２Ｂは、０日目、３日目、および６日目でのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞、および単球の末梢血細胞計数を示す。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、３日目までに類似する程度でＮＫ細胞および単球を拡大させた。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｃは、末梢ＣＤ４、ＣＤ８、およびＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現を示す。ＩＬ－１８ではなく、配列番号６１は、ＣＤ４およびＣＤ８細胞上でＣＤ６９発現を刺激した。ＩＬ－１８および配列番号６１は両方とも、ＮＫ細胞上でＣＤ６９を増加させたが、配列番号６１処置は、ＩＬ－１８と比較して、６日目で明らかな持続的なＣＤ６９発現を引き起こし、ベースラインＣＤ６９レベルに戻った。それぞれの時点（日）について、左側のバーはＰＢＳであり、中央のバーはＩＬ－１８であり、右側のバーは配列番号６１である。図１２Ｄは、インターフェロン－ｇ（ＩＦＮ－ｇ）、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦに関する血清サイトカインレベルを提供する。配列番号６１処置は、ｍＩＬ－１８処理よりも高いレベルのＩＦＮ－ｇ、ＭＩＰ－１ｂ、およびＧ－ＣＳＦをもたらした。 [0036]図１３は、ＤＲ－ＩＬ－１８処置がマウスにおいて体脂肪組成を減少させることを示す、例示的な実験の結果を描写する。体脂肪量および除脂肪量の組成を、３日毎に、０．０１、０．１、もしくは１ｍｇ／ｋｇのＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１または１ｍｇ／ｋｇのＷＴｍＩＬ－１８で処置したマウスにおいて測定した。配列番号６１処置は、体重の総パーセンテージとしての体脂肪の有意な減少をもたらした（上パネル）。これは、脂肪量の減少または安定化によって明らかであり（左パネル）、除脂肪量の増加と一致していた（右パネル）。ビヒクル処置およびｍＩＬ－１８処置マウスは、同じ処置期間にわたって、体脂肪量の増加および安定な除脂肪量を示した。 [0037]図１４Ａ～図１４Ｂは、ＤＲ－ＩＬ－１８が黒色腫モデルにおいて有効な免疫治療剤であることを示す、例示的な実験の結果を描写する。図１４Ａは、食塩水（対照）、ＷＴＩＬ－１８（０．３２ｍｇ／ｋｇ）、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（０．３２ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ１（８ｍｇ／ｋｇ）、ＩＬ－１８＋抗ＰＤ１、または配列番号６１＋抗ＰＤ－１で、週２回処置した、Ｙｕｍｍｅｒ１．７黒色腫腫瘍を担持するマウスに関する腫瘍成長スパイダープロットを提供する。図１４Ｂは、図１４Ａ中と同じ群からの生存曲線を提供する。図１４Ｂに示されるように、配列番号６１は、単剤療法として有効であり、このモデルでは抗ＰＤ１と共に相乗作用した。図１４Ａ～図１４Ｂは、ＤＲ－ＩＬ－１８が黒色腫モデルにおいて有効な免疫治療剤であることを示す、例示的な実験の結果を描写する。図１４Ａは、食塩水（対照）、ＷＴＩＬ－１８（０．３２ｍｇ／ｋｇ）、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（０．３２ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ１（８ｍｇ／ｋｇ）、ＩＬ－１８＋抗ＰＤ１、または配列番号６１＋抗ＰＤ－１で、週２回処置した、Ｙｕｍｍｅｒ１．７黒色腫腫瘍を担持するマウスに関する腫瘍成長スパイダープロットを提供する。図１４Ｂは、図１４Ａ中と同じ群からの生存曲線を提供する。図１４Ｂに示されるように、配列番号６１は、単剤療法として有効であり、このモデルでは抗ＰＤ１と共に相乗作用した。 [0038]図１５Ａおよび図１５Ｂは、図１４の黒色腫モデルにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の有効性が、ＣＤ４およびＣＤ８リンパ球ならびにインターフェロンガンマに依存することを示す例示的な実験の結果を描写する。図１５Ａは、食塩水（対照）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（０．３２ｍｇ／ｋｇ）のみ、またはＣＤ８、ＣＤ４、インターフェロンガンマ、またはＮＫ１．１に対する抗体の枯渇と組み合わせたＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（０．３２ｍｇ／ｋｇ）で処置したＹｕｍｍｅｒ１．７黒色腫腫瘍を担持するマウスに関する腫瘍成長スパイダープロットを提供する。図１５Ｂは、図１５Ａ中と同じ群からの生存曲線を提供する。 [0039]図１６は、ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の用量依存的有効性を示す、例示的な実験の結果を描写する。ＰＢＳ（対照）、１．０ｍｇ／ｋｇのＷＴＩＬ－１８、１．０ｍｇ／ｋｇの配列番号６１、０．１ｍｇ／ｋｇの配列番号６１、または０．０１ｍｇ／ｋｇの配列番号６１で３日毎に処置したＭＣ３８結腸がん腫瘍を担持するマウスに由来する腫瘍成長スパイダープロットである。ＷＴＩＬ－１８は１ｍｇ／ｋｇでは有効ではなかったが、配列番号６１は０．１ｍｇ／ｋｇで部分的有効性を示し、１．０ｍｇ／ｋｇで最大の有効性を示した。 [0040]図１７は、ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて、単独で、または免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ１と組み合わせた、ＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を示す例示的な実験の結果を描写する。ＰＢＳ（対照）、０．３２ｍｇ／ｋｇのＷＴＩＬ－１８、０．３２ｍｇ／ｋｇのＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１、抗ＰＤとＷＴＩＬ－１８との組合せ、または抗ＰＤ１と配列番号６１との組合せで処置したＭＣ３８結腸がん腫瘍を担持するマウスに由来する腫瘍成長スパイダープロットが示される。全ての薬剤は、最大で６の総用量について週２回、腹腔内投与された。 [0041]図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＭＣ３８腫瘍を担持するマウスにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の抗腫瘍メカニズムを調査する例示的な実験の結果を描写する。図１８Ａは、食塩水、ＷＴＩＬ－１８、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１で４用量にわたって週２回処置したマウスからの腫瘍免疫表現型決定実験の結果を提供する。ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、腫瘍１ｍｇあたりのＣＤ８およびＮＫ細胞の数の増加（左上の２つのパネル）ならびにＣＤ８およびＮＫ細胞上での活性化マーカーであるグランザイムＢおよびＫＬＲＧ１の発現の増加（右上の２つのパネル）をもたらした。ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、食塩水処置と比較してＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を改善しなかったが、ＷＴＩＬ－１８はその比をあまり好ましくないものにした。しかしながら、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ならびに単球および顆粒球骨髄由来抑制細胞（ｍＭＤＳＣおよびｇＭＤＳＣ）を含む阻害的骨髄集団に対するＣＤ８細胞の比を増大させた。図１８Ｂは、第４の処置用量の２４時間後に取った、図１８Ａと同じマウスに由来するＳｅｒｕｍＬｕｍｉｎｅｘサイトカイン測定を提供する。ＤＲ－ＩＬ－１８は、ＷＴＩＬ－１８による処置からの劇的に変化した二次サイトカイン放出プロファイルを示し、インターフェロン－ガンマ、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５レベルを１００倍を超えて顕著に増加させる。図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＭＣ３８腫瘍を担持するマウスにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の抗腫瘍メカニズムを調査する例示的な実験の結果を描写する。図１８Ａは、食塩水、ＷＴＩＬ－１８、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１で４用量にわたって週２回処置したマウスからの腫瘍免疫表現型決定実験の結果を提供する。ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、腫瘍１ｍｇあたりのＣＤ８およびＮＫ細胞の数の増加（左上の２つのパネル）ならびにＣＤ８およびＮＫ細胞上での活性化マーカーであるグランザイムＢおよびＫＬＲＧ１の発現の増加（右上の２つのパネル）をもたらした。ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、食塩水処置と比較してＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を改善しなかったが、ＷＴＩＬ－１８はその比をあまり好ましくないものにした。しかしながら、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ならびに単球および顆粒球骨髄由来抑制細胞（ｍＭＤＳＣおよびｇＭＤＳＣ）を含む阻害的骨髄集団に対するＣＤ８細胞の比を増大させた。図１８Ｂは、第４の処置用量の２４時間後に取った、図１８Ａと同じマウスに由来するＳｅｒｕｍＬｕｍｉｎｅｘサイトカイン測定を提供する。ＤＲ－ＩＬ－１８は、ＷＴＩＬ－１８による処置からの劇的に変化した二次サイトカイン放出プロファイルを示し、インターフェロン－ガンマ、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５レベルを１００倍を超えて顕著に増加させる。 [0042]図１９Ａ～図１９Ｃは、表面ＭＨＣクラスＩ発現の喪失によって免疫チェックポイント阻害剤に不応性である腫瘍を有効に処置するＤＲ－ＩＬ－１８の能力を示す例示的な実験の結果を描写する。図１９Ａは、食塩水、抗ＰＤ１＋抗ＣＴＬＡ４、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１で処置したＢ２ｍ欠損性Ｙｕｍｍｅｒ１．７腫瘍を担持するマウスからの腫瘍成長スパイダープロットを示す。図１９Ｂは、生存率対生着後の日数を示す図を含有する。ＤＲ－ＩＬ－１８は、抗ＣＴＬＡ４＋抗ＰＤ１による併用処置にさえ完全に耐性であるこのモデルにおいて処置したマウスの６０％を治癒させる、腫瘍成長および生存に関する強力な有効性を示した。抗ＮＫ１．１（ＮＫ細胞を枯渇させる）と一緒のＤＲ－ＩＬ－１８の投与は、配列番号６１の処置効果を無効化するため、この有効性はＮＫ細胞依存的である。図１９Ｃは、腫瘍中のインターフェロン－ガンマ産生およびＫｉ６７レベルを比較するプロットを提供する。Ｂ２ｍ欠損性Ｙｕｍｍｅｒ１．７から単離されたＮＫ細胞は機能不全であり、増殖（Ｋｉ６７染色）および機能（インターフェロン－ガンマ分泌）の減少を示す。しかしながら、ＤＲ－ＩＬ－１８による処置は、この表現型を、ロバストな増殖およびサイトカイン分泌を可能にするように逆転させる。 [0043]図２０Ａ～図２０Ｃは、酵母ディスプレイを使用したＩＬ－１８ＢＰアンタゴニストとしてのヒトＩＬ－１８バリアント（または「デコイ・トゥー・デコイ」、Ｄ２Ｄ）の操作を示す例示的な実験を描写する。これらのバリアントは、ＩＬ－１８ＢＰには結合するが、シグナルには結合せず、それにより、内因性ＩＬ－１８に対するＩＬ－１８ＢＰの効果を無効化する。図２０Ａは、Ｄ２Ｄライブラリー中で無作為化されたヒトＩＬ－１８中の位置の概要である。縮重コドンおよびコードされたアミノ酸のセットが、それぞれの位置について与えられる。図２０Ｂは、ＩＬ－１８ＢＰに結合し、これを中和するが、ＩＬ－１８Ｒを介してシグナル伝達しないＤ２ＤＩＬ－１８バリアントを生成するための指向性進化の概要を提供する。陽性選択条件は、ｍＩＬ１８ＢＰである。対抗選択条件は、ｎＩＬ１８Ｒα、ｈＩＬ１８Ｒｂ、およびｍＩＬ１８Ｒαである。（図２０Ｃ）Ｄ２ＤｈＩＬ－１８バリアントの作出における進展のフローサイトメトリー分析。ラウンド１～４の後に得られた酵母を、１ｎＭのマウスＩＬ－１８ＢＰ（左パネル）、１ｎＭのヒトＩＬ－１８ＢＰ（中央パネル）、または１μＭのＩＬ－１８Ｒα＋１μＭのＩＬ１８Ｒβで染色した。選択されたバリアントは、ＩＬ１８ＲαまたはＩＬ１８Ｒβ結合を増加させることなく、選択ラウンドにわたってＩＬ－１８ＢＰ結合の増強を示す。 [0044]図２１は、Ｄ２ＤヒトＩＬ－１８バリアントの配列の概要を示す例示的な実験の結果を描写する。成熟形態の野生型ヒトＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。上の行の配列（「ＷＴｈＩＬ－１８」）は、配列番号３０として記載される。 [0045]図２２Ａ～図２２Ｃは、ヒトデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－２８バリアントの生物物理学的特性評価を示す例示的な実験の結果を描写する。図２２Ａは、酵母ディスプレイされたＤ２ＤＩＬ－８バリアントである配列番号１２０、配列番号１０１、配列番号９４、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１２３、配列番号１２４、および配列番号１２５が、ＷＴヒトＩＬ－１８と同等の結合等温線でｈＩＬ－１８ＲＢＰに結合することができることを示す。図２２Ｂは、対照的に、同じバリアントおよびｈＩＬ－１８Ｒαに関して極めて少ない結合が観察されることを示す。図２２Ｃは、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアントの受容体結合特性の概要を提供する。ＮＢＤ＝結合は検出されず。 [0046]図２３は、Ｄ２ＤマウスＩＬ－１８バリアントの配列の概要を示す例示的な実験の結果を描写する。成熟形態の野生型マウスＩＬ－１８中のそれぞれの突然変異位置および対応する残基の位置を表の上部に示す。上の行の配列（「ＷＴｍＩＬ－１８」）は、配列番号３１として記載される。 [0047]図２４は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用したＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰへの結合に関する第２世代のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生物物理学的親和性測定（センサーグラム）の結果を描写する。上の行：ｈＩＬ－１８Ｒα（固定化リガンド）に関する示されたＩＬ－１８バリアント（可溶性分析物）の代表的なセンサーグラム。下の行：ヒトの示されたＩＬ－１８バリアント（ｈＩＬ－１８ＢＰ）の代表的なセンサーグラム。ｘ軸は時間（秒）であり、ｙ軸は応答単位（ＲＵ）である。曲線は、１：１のラングミュア結合モデルを仮定する最良適合の曲線と重ね合わせた、異なる濃度（１ｎＭで出発して２倍希釈）に関する時間にわたる観察データである。 [0048]図２５Ａおよび図２５Ｂは、ＣＴ２６結腸直腸腫瘍モデルに対するＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を示すデータを描写する。２５０，０００個のＣＴ２６細胞を皮下的に埋め込み、腫瘍が平均で約６０ｍｍ^３に達したら、７日目に処置を開始した。ＷＴＩＬ－１８および配列番号６１を、合計５用量にわたって週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで投与した。抗ＰＤ１を、同じスケジュールで１０ｍｇ／ｋｇで与えた。図２５Ａは、食塩水（ＰＢＳ）で処置した動物を黒色の線で（丸）、ＷＴＩＬ－１８を濃い灰色で（四角）、ＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）を灰色で（三角）示した腫瘍成長を示すスパイダープロットのオーバーレイである。ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８による処置のみが、動物のサブセットにおいて腫瘍成長阻害および腫瘍消失をもたらした。図２５Ｂは、抗ＰＤ－１、ＷＴＩＬ－１８、およびＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）で処置したマウスに関する生存曲線を含む。完全奏功の数を、括弧内に示す。ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８は、４０％のマウスにおいて生存の延長および腫瘍消失をもたらし、チェックポイント阻害剤抗ＰＤ－１を超える改善をもたらした。 [0049]図２６Ａおよび図２６Ｂは、４Ｔ１乳がんモデルおよびＢ１６－Ｆ１０黒色腫モデルにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を示すデータを描写する。図２６Ａは、食塩水（ＰＢＳ；黒色）、ＷＴＩＬ－１８（濃い灰色）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（灰色）による処置後のＢＡＬＢ／Ｃマウスに移植した４Ｔ１腫瘍の腫瘍成長曲線を示す。図２６Ｂは、食塩水（ＰＢＳ；黒色）、ＷＴＩＬ－１８／ＴＡ９９（濃い灰色）、またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号６１（灰色）による処置後のＣ５７ＢＬ／６マウスに移植したＢ１６－Ｆ１０腫瘍の腫瘍成長曲線を示す。両方のモデルにおいて、ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８のみが、腫瘍成長阻害をもたらした。「ｔ」で印を付けた囲みで示される様に、腫瘍が５０ｍｍ^３の平均体積を超えた後に、処置を施した。 [0050]図２７Ａおよび図２７Ｂは、図１９Ａ～図１９Ｃのデータを拡張するデータを描写する。免疫チェックポイント阻害剤に対して耐性であるさらなるＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍モデルの処置におけるＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を示すデータが描写される。図２７Ａは、Ｂ２ｍ欠損ＹＵＭＭＥＲ細胞について記載されたようにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を使用して調製された、Ｂ２ｍ欠損ＭＣ３８細胞を埋め込んだマウスに関する腫瘍体積対埋め込み後の日数の図を提供する。Ｂ２ｍ－／－ＭＣ３８細胞を皮下的に埋め込み、腫瘍が平均で約６５ｍｍ^３に達したら、７日目に処置を開始した。配列番号６１を、５用量にわたって週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで投与した。抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４を、同じスケジュールにて８ｍｇ／ｋｇで与えた。図２７Ｂは、ＲＭＡ／Ｓ細胞を埋め込んだマウスに関する腫瘍体積対埋め込み後の日数の図を示す。ＲＭＡ／Ｓは、タパシン中に自然突然変異を含有するＲＭＡリンパ腫系のバリアントである。結果は、抗原量の欠陥、したがって、ＭＨＣクラスＩ表面発現の減少である。それはＣ５７ＢＬ／６とコンジェニックであり、免疫チェックポイント阻害剤に対して不応性である。マウスに、１，０００，０００個のＲＭＡ／Ｓ細胞を皮下的に埋め込み、処置を７日目に開始した。配列番号６１を、週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで投与した。抗ＰＤ１を、同じスケジュールにて８ｍｇ／ｋｇで与えた。両方の研究において、ＤＲ－１８バリアントである配列番号６１による処置のみが、腫瘍成長阻害（Ｂ２ｍ^－／－ＭＣ３８）または腫瘍消失（ＲＭＡ／Ｓ）の形態で抗腫瘍有効性を示した。 [0051]図２８は、抗腫瘍抗体依存的細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を増強するＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を示すデータを描写する。ｅｘｖｉｖｏでの細胞傷害性研究は、ＣＦＳＥ標識化Ｒａｊｉ（Ｂ細胞リンパ腫）細胞および単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用した。ＰＢＭＣおよび標識化Ｒａｊｉ細胞を、１：１０のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比１：１０で２５時間、一緒にインキュベートした。ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントであるｈＣＳ－１（１μＭ）、リツキシマブ（１０μｇ／ｍＬ）、または両方の薬剤の組合せを、示されたように試料に適用した。細胞傷害性をフローサイトメトリーによって測定し、ＤＡＰＩ陽性になったＣＦＳＥ細胞の画分として算出した。ＤＲ－１８は単剤として有意な腫瘍細胞死滅を刺激し、治療抗体リツキシマブによる死滅を有意に増強させた。^＊多重比較のためのＴｕｋｅｙの補正を用いる二元配置分散分析によるｐ＜０．０５。 [0052]図２９Ａおよび図２９Ｂは、ウイルス感染の処置のための（例えば、この場合、全身性ワクシニアウイルス感染の処置における）ＤＲ－１８バリアントである配列番号６１の抗ウイルス有効性を示すデータを描写する。図２９Ａは、実験設計スキームを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０^６ＰＦＵのワクシニアウイルス（ＶＡＣＶ）を腹腔内（ＩＰ）的に感染させ、１ｍｇ／ｋｇのＷＴｍＩＬ－１８または配列番号６１をＩＰ投与した。マウスを犠牲にし、ウイルス力価を、感染後３日目にＲＴ－ＰＣＲによって血液および卵巣中で測定した。図２９Ｂは、感染後３日目の処置マウスの卵巣および血液中のＶＡＣＶウイルスコピーの定量化を示す。配列番号６１による処置はウイルス力価の有意な低下を示したが、ＷＴＩＬ－１８は有効ではなかった。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。図２９Ａおよび図２９Ｂは、ウイルス感染の処置のための（例えば、この場合、全身性ワクシニアウイルス感染の処置における）ＤＲ－１８バリアントである配列番号６１の抗ウイルス有効性を示すデータを描写する。図２９Ａは、実験設計スキームを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０^６ＰＦＵのワクシニアウイルス（ＶＡＣＶ）を腹腔内（ＩＰ）的に感染させ、１ｍｇ／ｋｇのＷＴｍＩＬ－１８または配列番号６１をＩＰ投与した。マウスを犠牲にし、ウイルス力価を、感染後３日目にＲＴ－ＰＣＲによって血液および卵巣中で測定した。図２９Ｂは、感染後３日目の処置マウスの卵巣および血液中のＶＡＣＶウイルスコピーの定量化を示す。配列番号６１による処置はウイルス力価の有意な低下を示したが、ＷＴＩＬ－１８は有効ではなかった。^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。 [0053]図３０は、第２世代のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントが活性であることを示すデータを描写する。（図３０）ＷＴＩＬ－１８ならびにヒト配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、および配列番号８７は、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅリポーター細胞を刺激する。ヒトの配列番号８９、配列番号９０、および配列番号９１はＷＴｈＩＬ－１８と比較して増強された効力を示すが、配列番号８７はＷＴｈＩＬ－１８と同等の効力を有する。したがって、データは、全ての試験した第２世代のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントがＩＬ－１８Ｒを介して能動的にシグナル伝達することを示す。 [0054]図３１は、調製され、次いで、ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル上で泳動された種々のシステイン位置に突然変異を有するＩＬ－１８バリアントを描写する（Ｓｐｙｒｏ－Ｒｕｂｙ染色を使用して可視化される）。Ｒ＝還元試料；Ｎ＝非還元試料；ＭＷ＝分子量。下部の数字は配列番号を指す（表１３を参照されたい）。 [0055]図３２は、Ｃ６８Ｓ上の潜在的なＴ細胞エピトープを除去する様々なＣ３８Ｓ／Ｃ６８突然変異体のＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル分析を描写する。Ｒ＝還元試料。ＮＲ＝非還元試料。 [0056]図３３は、Ｃ６８Ｓ上の潜在的なＴ細胞エピトープを除去する様々なＣ３８Ｓ／Ｃ６８突然変異体に関する保存安定性研究からのサイズ排除クロマトグラフィーデータを描写する。 [0057]図３４は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅリポーター細胞系を使用した用量応答データを描写する。全てのバリアントが、ＷＴＩＬ－１８と比較した効力の増大および親バリアントである配列番号８９と同様の効力を示した。 [0058]図３５は、凍結解凍研究からの配列番号１９と配列番号８９とを比較するサイズ排除クロマトグラフィーデータを描写する。 [0059]図３６は、撹拌研究から配列番号１９と配列番号８９とを比較するサイズ排除クロマトグラフィーデータを描写する。 [0060]図３７Ａおよび図３７Ｂは、ヒトおよびカニクイザルＩＬ－１８Ｒα（図３７Ａ）およびＩＬ－１８ＢＰ（図３７Ｂ）に対する配列番号１９および野生型ヒトＩＬ－１８の親和性を試験するための表面プラズモン共鳴実験の結果を描写する。 [0061]図３８は、ＩＬ－１８ＢＰ耐性アッセイの結果を描写する。ＷＴｈＩＬ－１８はＩＬ－１８ＢＰの添加によって強力に阻害されたが、配列番号１９はＩＬ－１８ＢＰの全ての濃度で強力なシグナル伝達能力を保持していた。 [0062]図３９は、投薬実験（マウスＤＲＩＬ－１８バリアントである配列番号６１を使用する）に由来するマウスにおける腫瘍成長データを描写する。 [0063]図４０は、追加の投薬実験（マウスＤＲＩＬ－１８バリアントである配列番号６１を使用する）に由来するマウスにおける腫瘍成長データを描写する。 [0064]図４１Ａおよび図４１Ｂは、ＤＲＩＬ－１８バリアント（この場合、配列番号８９）を使用する霊長類（カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓｍａｃｑｕｅｓ））における耐量実験を描写する。 [0065]図４２Ａおよび図４２Ｂは、ＩＬ－１８タンパク質のＮ末端ＳＵＭＯタグを切断除去する無細胞ＳＵＭＯプロテアーゼを使用したＩＬ－１８ポリペプチド（この場合、ＤＲＩＬ－１８である配列番号８９）の産生および精製を描写する。 [0066]図４３Ａおよび図４３Ｂは、ＲＰ－ＨＰＬＣによるＳＵＭＯプロテアーゼ切断のモニタリングに由来する結果を描写する。図４３Ａおよび図４３Ｂは、ＲＰ－ＨＰＬＣによるＳＵＭＯプロテアーゼ切断のモニタリングに由来する結果を描写する。 [0067]図４４は、細菌細胞（この場合、大腸菌）の内部でＩＬ－１８タンパク質のＮ末端ＳＵＭＯタグを切断除去する外因的に提供されたＳＵＭＯプロテアーゼを使用したＩＬ－１８ポリペプチド（この場合、ＤＲＩＬ－１８である配列番号１９）の産生および精製を描写する。 [0068]図４５は、細菌細胞の内部のＳＵＭＯプロテアーゼ切断反応のモニタリングに由来するＲＰ－ＨＰＬＣデータを描写する。 [0069]図４６は、ＩＬ－１８バリアントを産生する酵母（例えば、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ））分泌系の概略図を描写する。 [0070]図４７は、ＤＲ－１８（ＩＬ－１８バリアント－この場合、配列番号８９および配列番号８７）の発現を示す代表的な還元的ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを描写する。 [0071]図４８は、酵母分泌発現系（この場合、ピチア・パストリス）からのＩＬ－１８のタグを用いない精製を容易にした２クロマトグラフィーステップのプロセス（および関連データ）を描写する。

[0072]バリアント（例えば、安定化された）ＩＬ－１８ポリペプチドおよびその使用方法（例えば、疾患または障害を処置するための）が提供される。対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較して２個のシステイン残基（Ｃ３８およびＣ６８）の突然変異を含む。一部の場合、突然変異は、ＣからＳへの置換であり、したがって、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、一部の場合、突然変異Ｃ３８ＳおよびＣ６８Ｓを含んでもよい。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ（例えば、一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；および一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）を含む。

[0073]一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化された「デコイ耐性」（ＤＲ）ＩＬ－１８バリアントまたは安定化された「デコイ・トゥー・デコイ」（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアント）、すなわち、ヒト野生型ＩＬ－１８と比較してＣ３８およびＣ６８位に突然変異をさらに含むＩＬ－１８バリアントである。

[0074]ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８または安定化された、ＤＲ、Ｄ２Ｄ、安定化されたＤＲ、もしくは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアントなどのバリアント）を、個体に投与する（例えば、皮下的に）方法であって、投与頻度が週１回を超えない、方法が提供される。また、ポリペプチドを生産する／作製する方法も提供される。一部のそのような方法は、細胞（例えば、細菌細胞）の内部の外因的に提供される融合タンパク質を、ＳＵＭＯプロテアーゼと接触させるステップを含み、融合タンパク質は、ＳＵＭＯタグにＮ末端で融合した目的のタンパク質を含み、それによって、ＳＵＭＯプロテアーゼは融合タンパク質を切断して、目的のタンパク質からＳＵＭＯタグを除去する。

[0075]本発明をより詳細に説明する前に、本発明が記載される特定の実施形態に限定されず、そのため、勿論、変化してもよいことが理解されるべきである。また、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるであろうため、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであり、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。

[0076]値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限の間の、本文が別途明確に示さない限り、下限の単位の少数第２位で四捨五入したものまでの、それぞれの介在する値、およびその記述された範囲中の任意の他の記述された値または介在する値が、本発明に包含されることが理解される。小さい方の範囲に独立に含まれていてもよいこれらの小さい方の範囲の上限および下限も、本発明に包含され、記述される範囲中の任意の具体的に排除される限界の影響下にある。記述される範囲が一方または両方の限界を含む場合、これらの含まれる限界のいずれかまたは両方を除く範囲も、本発明に含まれる。

[0077]本明細書では、ある特定の範囲は、用語「約」が先行する数値と共に提示される。用語「約」は、本明細書では、それが先行する正確な数、ならびにこの用語が先行する数に近いか、またはおよその数である数に関する逐語的な支持を提供するために使用される。数が具体的に記載される数に近いか、またはおよその数であるかどうかを決定する際に、近いか、またはおよその記載されていない数は、それが提示される文脈において、具体的に記載される数の実質的な等価物を提供する数であってもよい。

[0078]別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似するか、または等価である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することもできるが、代表的な例示的方法および材料をここで説明する。

[0079]本明細書において引用される全ての刊行物および特許は、あたかもそれぞれ個々の刊行物または特許が具体的かつ個別的に参照により組み込まれると示されたかのように参照により本明細書に組み込まれ、引用される刊行物と関連して方法および／または材料を開示および説明するために参照により本明細書に組み込まれる。刊行物の引用は、出願日以前のその開示に関するものではなく、本発明が以前の発明という理由でそのような刊行物に先行する資格がないことの承諾と解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は、独立に確認する必要があり得る、実際の刊行日とは異なっていてもよい。

[0080]本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に記述しない限り、複数の指示対象を含むことが知られている。さらに、特許請求の範囲はいかなる任意選択の要素も排除するように起草することができることが知られている。そのため、この記述は、特許請求の要素の記載、または「負の」限定の使用と関連する、「単に」、「のみ」などのような排他的な用語の使用のための優先的な基礎として役立つことが意図される。

[0081]本開示を読む当業者には明らかであるように、本明細書に記載および例示されるそれぞれ個々の実施形態は、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離するか、またはそれと組み合わせることができる個別の構成要素および特徴を有する。記載される方法はいずれも、記載される事象の順に、または論理的に可能である任意の他の順序で実行することができる。

[0082]装置および方法は、機能的説明と共に文法的流動性の目的で説明されたか、または説明されるであろうが、特許請求の範囲は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２の下で明示的に公式化されない限り、「手段」または「ステップ」の制限の構築によっていかなる意味でも必ずしも限定と解釈されるべきではないが、等価物の法制定の基礎となる原則の下で特許請求の範囲によって提供される定義の意味および等価物の完全な範囲と一致し、また、特許請求の範囲が３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２の下で明示的に公式化される場合、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２の下で完全な法定の等価物と一致するべきであることが明示的に理解されるべきである。
定義
[0083]別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明を説明し、特許請求する際に、以下の用語が使用されるであろう。

[0084]また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためのものであり、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。

[0085]冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法上の対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも一つ）を指すために使用される。例えば、「要素（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または１つより多い要素を意味する。

[0086]量、時間的持続期間などの測定可能な値を言う場合に本明細書で使用される「約」は、そのような変化が適切であるような、特定される値からの±４０％または±２０％または±１０％、±５％、±１％、または±０．１％の非限定的な変動を包含することを意味する。

[0087]生物、組織、細胞またはその成分の文脈で使用される場合の用語「異常」とは、これらの生物、組織、細胞またはその成分が、「正常」な（予想される）それぞれの特徴を示す生物、組織、細胞またはその成分と、少なくとも１つの観察可能な、または検出可能な特徴（例えば、年齢、処置、時刻など）において異なることを指す。ある細胞または組織型について正常であるか、または予想される特徴は、異なる細胞または組織型について異常である場合がある。

[0088]本明細書で使用される場合の用語「抗体」とは、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然の供給源または組換え供給源に由来するインタクトな免疫グロブリンであってよく、インタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分であってもよい。本発明における抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、細胞内抗体（「イントラボディ」）、Ｆｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ）２、ならびに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、重鎖抗体、例えば、ラクダ抗体、合成抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体などを含む、様々な形態で存在してもよい（Ｈａｒｌｏｗら、１９９９、ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗら、１９８９、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９～５８８３；Ｂｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３～４２６）。

[0089]本明細書で使用される場合、「抗体重鎖」とは、その天然に存在するコンフォメーションで全ての抗体分子に存在する２つの型のポリペプチド鎖の大きい方を指す。

[0090]本明細書で使用される場合、「抗体軽鎖」とは、その天然に存在するコンフォメーションで全ての抗体分子に存在する２つの型のポリペプチド鎖の小さい方を指す。κおよびλ軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

[0091]本明細書で使用される場合、用語「合成抗体」とは、例えば、本明細書に記載されるようなバクテリオファージによって発現される抗体などの、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を意味する。この用語はまた、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成され、ＤＮＡ分子が抗体タンパク質、または抗体を特定するアミノ酸配列を発現し、ＤＮＡまたはアミノ酸配列が、当業界で利用可能であり、周知である合成ＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得られた、抗体を意味すると解釈されるべきである。

[0092]本明細書で使用される場合、「イムノアッセイ」とは、標的分子を検出および定量するために標的分子に特異的に結合することができる抗体を使用する任意の結合アッセイを指す。

[0093]例えば、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドに関して、本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」は、ＩＬ－１８ＲまたはＩＬ－１８ＢＰなどの特定の分子を認識し、これに結合するＩＬ－１８バリアントポリペプチドを意味する。例として、野生型ＩＬ－１８は、ＩＬ－１８ＲとＩＬ－１８ＢＰとの両方に特異的に結合すると言うことができる。一部の例では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、ＩＬ－１８ＢＰへの結合を実質的に減少させた。例えば、ある種に由来する受容体に特異的に結合するＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、１つまたは複数の種に由来するその受容体にも結合し得る。しかし、そのような交差種反応性はそれ自体、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドを特異的なものとして分類を変更するものではない。別の例では、受容体に特異的に結合するＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、異なる対立遺伝子形態の受容体にも結合することができる。しかしながら、そのような交差反応性はそれ自体、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドを特異的なものとして分類を変更するものではない。一部の例では、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体、タンパク質、またはペプチドの、化学種との相互作用を参照して使用することができ、その相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基またはエピトープ）の存在に依存すること；例えば、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドが、タンパク質全体よりもむしろ、特定のタンパク質構造を認識し、これに結合することを意味する。同様に、例えば、特定の抗原を「標的とする」抗体の文脈における、用語「標的」は、所与の分子の特異的結合パートナーを指すために使用される。例えば、特定のタンパク質／抗原を「標的とする」薬剤（例えば、抗体）は、それが他のタンパク質／抗原よりもその特定のタンパク質／抗原に優先的に結合するという意味で、そのタンパク質／抗原に特異的に結合する。

[0094]本明細書で使用される場合、用語「アプリケーター」とは、本発明の組成物を対象に投与するための、限定されるものではないが、皮下注射器、ピペット、イオントフォレシスデバイス、パッチなどを含む任意のデバイスを意味する。

[0095]本明細書で使用される場合、用語「コード配列」とは、転写および／または翻訳されて、ｍＲＮＡおよび／またはポリペプチドもしくはその断片を産生し得る、核酸もしくはその相補体の配列、またはその一部を意味する。コード配列は、細胞の生化学的機構によって一緒に連結されて、成熟ｍＲＮＡを提供する、ゲノムＤＮＡ中のエクソンまたは未熟な一次ＲＮＡ転写物を含む。アンチセンス鎖は、そのような核酸の相補体であり、コード配列はそれから推定することができる。対照的に、本明細書で使用される場合、用語「非コード配列」とは、ｉｎｖｉｖｏでアミノ酸に翻訳されないか、またはｔＲＮＡが、アミノ酸を置く、もしくは置くことを試みるように相互作用しない、核酸もしくはその相補体の配列、またはその一部を意味する。非コード配列は、ゲノムＤＮＡまたは未熟な一次ＲＮＡ転写物中のイントロン配列と、プロモーター、エンハンサー、サイレンサーなどの遺伝子関連配列との両方を含む。

[0096]本明細書で使用される場合、用語「相補的」または「相補性」は、塩基対形成規則によって関連付けられるポリヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を参照して使用される。例えば、配列「Ａ－Ｇ－Ｔ」は、配列「Ｔ－Ｃ－Ａ」と相補的である。核酸の塩基の一部のみが塩基対形成規則に従って一致する場合、相補性は「部分的」であり得る。または、核酸間に「完全な」または「全体的な」相補性が存在してもよい。核酸鎖間の相補性の程度は、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率および強度に対する有意な効果を有する。これは、核酸間の結合に依存する、増幅反応、ならびに検出方法において特に重要である。

[0097]「疾患」は、動物が恒常性を維持できず、疾患が改善されない場合、動物の健康が悪化し続ける、動物の健康状態である。対照的に、動物における「障害」は、動物が恒常性を維持することができるが、動物の健康状態が、それが障害の非存在下であったであろうものよりも好ましくない、健康状態である。未処置のままであっても、障害は、動物の健康状態のさらなる低下を必ずしも引き起こすわけではない。

[0098]本明細書で使用される場合、「有効量」とは、治療的、予防的、または他の望ましい利益を提供する量を意味する。

[0099]「コードすること」は、ヌクレオチドの規定の配列（すなわち、ガイドＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）またはアミノ酸の規定の配列およびそれから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび高分子の合成のための鋳型として役立つ、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡのようなポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。したがって、ある遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物システムにおいてタンパク質をもたらす場合、タンパク質をコードする。ｍＲＮＡ配列と同一であり、通常は、配列表に提供されるヌクレオチド配列であるコード鎖と、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖との両方を、タンパク質またはその遺伝子もしくはｃＤＮＡの他の生成物をコードすると称することができる。

[0100]本明細書で使用される場合、核酸に適用される用語「断片」とは、より大きい核酸のサブ配列を指す。核酸の「断片」は、少なくとも約１５ヌクレオチド長；例えば、少なくとも約５０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチド；少なくとも約１００～約５００ヌクレオチド、少なくとも約５００～約１０００ヌクレオチド；少なくとも約１０００ヌクレオチド～約１５００ヌクレオチド；約１５００ヌクレオチド～約２５００ヌクレオチド；または約２５００ヌクレオチド（およびその間の任意の整数値）であってもよい。本明細書で使用される場合、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに適用される用語「断片」は、より大きいタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのサブ配列を指す。タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの「断片」は、少なくとも約５アミノ酸長；例えば、少なくとも約１０アミノ酸長；少なくとも約２０アミノ酸長；少なくとも約５０アミノ酸長；少なくとも約１００アミノ酸長；少なくとも約２００アミノ酸長；または少なくとも約３００アミノ酸長（およびその間の任意の整数値）であってもよい。

[0101]用語「遺伝子」とは、ポリペプチド、前駆体、またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の産生にとって必要なコード配列を含む核酸（例えば、ＤＮＡ）配列を指す。ポリペプチドは、完全長コード配列によって、または完全長もしくは断片の所望の活性もしくは機能的特性（例えば、酵素活性、受容体結合、シグナル伝達、免疫原性など）が保持される限り、コード配列の任意の部分によってコードされていてもよい。この用語はまた、構造遺伝子のコード領域および遺伝子が遺伝子の転写特性に影響する完全長ｍＲＮＡおよび５’調節配列の長さに一致するような、いずれかの末端上の約２ｋｂ以上の距離について５’と３’末端の両方でコード領域の近くに位置する配列も包含する。コード領域の５’側に位置し、ｍＲＮＡ上に存在する配列は、５’非翻訳配列と称される。５’非翻訳配列は通常、調節配列を含有する。コード領域の３’側または下流に位置し、ｍＲＮＡ上に存在する配列は、３’非翻訳配列と称される。用語「遺伝子」は、ｃＤＮＡと、遺伝子のゲノム形態との両方を包含する。遺伝子のゲノム形態またはクローンは、「イントロン」または「介在領域」または「介在配列」と呼ばれる非コード配列で中断されたコード領域を含有する。イントロンは、核ＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）に転写される遺伝子のセグメントである；イントロンは、エンハンサーなどの調節エレメントを含有してもよい。イントロンは、核または一次転写物から除去されるか、または「スプライシングによって除去」される；したがって、イントロンは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物中には存在しない。ｍＲＮＡは、翻訳中に、新生ポリペプチド中のアミノ酸の配列または順序を特定するように機能する。

[0102]２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において本明細書で使用される場合、「相同な」、「同一の」、または「同一性」とは、配列が特定の領域にわたって同じである特定のパーセンテージの残基を有することを意味する。２つの配列を最適に整列させること、特定の領域にわたって２つの配列を比較すること、同一の残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得ること、一致した位置の数を、特定の領域中の位置の総数で除すること、およびその結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって、パーセンテージを算出することができる。２つの配列が異なる長さであるか、またはアラインメントが１つもしくは複数の互い違いの末端をもたらし、比較の特定の領域が単一の配列のみを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分子ではなく、分母に含まれる。ＤＮＡおよびＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）を同等に考えることができる。同一性は、手動で、またはＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ２．０などのコンピューター配列アルゴリズムを使用することによって実施することができる。

[0103]本明細書で使用される場合、用語「使用説明書材料」は、本明細書に記載される種々の疾患または障害を同定する、または軽減する、または処置するための、キット中の本発明の核酸、ペプチド、ポリペプチド、および／または化合物の有用性を伝えるために使用することができる、刊行物、記録、ダイアグラム、または他の任意の表現媒体を含む。必要に応じて、またはあるいは、使用説明書材料は、対象の細胞または組織における疾患または障害を同定する、または軽減する１つまたは複数の方法を記載してもよい。キットの使用説明書材料は、例えば、本発明の核酸、ポリペプチド、および／もしくは化合物を含有する容器に添付するか、または核酸、ポリペプチド、および／もしくは化合物を含有する容器と一緒に発送することができる。あるいは、使用説明書材料を、レシピエントが使用説明書材料および化合物を共同で使用する意図で容器とは別々に発送してもよい。

[0104]「単離された」とは、天然の状態から変更されたか、または取り出されたことを意味する。例えば、生きている動物中に天然に存在する核酸またはポリペプチドは「単離」されていないが、その天然状態の同時に存在する材料から部分的または完全に分離された同じ核酸またはポリペプチドは「単離」されている。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在してもよいか、または例えば、宿主細胞などの非天然環境中に存在してもよい。

[0105]本明細書で使用される場合、タンパク質の文脈における用語「精製する」および「精製された」とは、例えば、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｅｘｖｉｖｏ、またはｉｎｖｉｖｏでのタンパク質の有効な使用を可能にする純度のレベルを指す。所与の適用にとって有用であるタンパク質について、それは、そのような適用におけるそのタンパク質の使用を妨げ得る、または目的のタンパク質と一緒の含有にとって少なくとも望ましくないであろう、夾雑物、他のタンパク質、および／または化学物質を実質的に含むべきではない。そのような適用は、治療組成物の調製、治療組成物中のタンパク質の投与、および本明細書に開示される他の方法を含む。好ましくは、本明細書で参照される場合、「精製された」タンパク質は、任意の方法によって（すなわち、天然の供給源からの直接精製により、組換え的に、または合成的に）生産することができ、タンパク質が、所与の組成物中の総タンパク質の少なくとも約７５重量％、所与の組成物中の総タンパク質の８０重量％、より好ましくは、所与の組成物中の総タンパク質の少なくとも約８５重量％、より好ましくは少なくとも約９０重量％、より好ましくは少なくとも約９１重量％、より好ましくは少なくとも約９２重量％、より好ましくは少なくとも約９３重量％、より好ましくは少なくとも約９４重量％、より好ましくは少なくとも約９５重量％、より好ましくは少なくとも約９６重量％、より好ましくは少なくとも約９７重量％、より好ましくは少なくとも約９８重量％、より好ましくは少なくとも約９９重量％を占めるように、他のタンパク質成分から精製されているタンパク質である。例として、精製されたポリペプチドは、それが通常はその天然に存在する状態（例えば、タンパク質が天然に存在するタンパク質である場合）で会合し得る他の成分から、およびそれが細胞の内部にある間または細胞外環境にある間に会合し得る成分から分離されているポリペプチドである。例えば、一部の場合、タンパク質を、細胞溶解物から（例えば、タンパク質が外因的に発現された細菌細胞の溶解物から）精製することができる。別の例として、タンパク質を、細胞外培地から、例えば、細胞（例えば、酵母細胞）がタンパク質を分泌した培養培地から精製することができる。

[0106]「単離された核酸」とは、天然に存在する状態でそれに隣接する配列から分離されている核酸セグメントまたは断片、例えば、通常は断片に隣接する配列、例えば、それが天然に存在するゲノム中の断片に隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す。この用語はまた、核酸、例えば、ＲＮＡもしくはＤＮＡに天然に付随する他の成分、または細胞中でそれに天然に付随するタンパク質から実質的に精製されている核酸にも適用される。したがって、この用語は、例えば、ベクター中に、自律的に複製するプラスミドもしくはウイルス中に、または原核もしくは真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれる、または他の配列とは無関係に別の分子として（例えば、ｃＤＮＡもしくはゲノムもしくはＰＣＲもしくは制限酵素消化によって産生されたｃＤＮＡ断片として）存在する、組換えＤＮＡを含む。それはまた、さらなるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡも含む。

[0107]本明細書で使用される場合、用語「標識」とは、「標識された」プローブを生成するために、プローブに直接または間接にコンジュゲートされる検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体、検出可能であってよいか（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）、または酵素標識の場合、検出可能である基質化合物もしくは組成物の化学的変更（例えば、アビジン－ビオチン）を触媒してもよい。一部の例では、プライマーを標識して、ＰＣＲ産物を検出することができる。

[0108]本明細書で使用される場合、用語「モジュレートすること」とは、処置もしくは化合物の非存在下での対象におけるｍＲＮＡ、ポリペプチドもしくは応答の活性および／もしくはレベルと比較した、ならびに／またはそうでなければ同一であるが、未処置の対象におけるｍＲＮＡ、ポリペプチド、もしくは応答の活性および／もしくはレベルと比較した、対象におけるｍＲＮＡ、ポリペプチド、または応答の活性および／またはレベルの検出可能な増加または減少を媒介することを意味する。この用語は、天然のシグナルまたは応答を活性化する、阻害する、および／またはそうでなければ影響することによって、対象、例えば、ヒトにおける有益な治療応答、予防応答、または他の望ましい応答を媒介することを包含する。本明細書で使用される場合、「突然変異」、「突然変異体」または「バリアント」とは、参照配列（天然に存在する通常の／「野生型」の配列であってもよい）に対する核酸またはアミノ酸配列中の変化を指し、転座、欠失、挿入、および置換／点突然変異を含む。本明細書で使用される場合、「突然変異体」または「バリアント」とは、突然変異を含む核酸またはタンパク質のいずれかを指す。

[0109]「核酸」とは、ポリヌクレオチドを指し、ポリリボヌクレオチドおよびポリデオキシリボヌクレオチドを含む。本発明による核酸は、ピリミジンおよびプリン塩基、好ましくは、それぞれ、シトシン、チミン、およびウラシル、ならびにアデニンおよびグアニンの任意のポリマーまたはオリゴマーを含んでもよい（その全体があらゆる目的で本明細書に組み込まれる、ＡｌｂｅｒｔＬ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７９３～８００（ＷｏｒｔｈＰｕｂ．１９８２）を参照されたい）。実際、本発明は、任意のデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはペプチド核酸成分、およびその任意の化学的バリアント、例えば、メチル化、ヒドロキシメチル化またはグルコシル化形態のこれらの塩基などを企図する。ポリマーまたはオリゴマーは、組成において異種または同種であってもよく、天然に存在する供給源から単離するか、または人工的に、もしくは合成的に生産することができる。さらに、核酸は、ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはその混合物であってもよく、ホモ二本鎖、ヘテロ二本鎖、およびハイブリッド状態を含む、一本鎖または二本鎖形態で永続的に、または一過的に存在してもよい。

[0110]「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、少なくとも２、好ましくは少なくとも８、１５または２５ヌクレオチド長の範囲の核酸であるが、最大で５０、１００、１０００、もしくは５０００ヌクレオチドの長さであるか、またはポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする化合物であってもよい。ポリヌクレオチドは、天然の供給源から単離する、組換え的に生産する、または人工的に合成することができる、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）もしくはリボ核酸（ＲＮＡ）またはその模倣物質の配列を含む。本発明のポリヌクレオチドのさらなる例は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であってもよい（その全体が参照により組み込まれる、米国特許第６，１５６，５０１号を参照されたい）。本発明はまた、ある特定のｔＲＮＡ分子において同定され、三重らせんで存在することを前提とされたフーグスティーン型塩基対合などの非伝統的な塩基対合が存在する状況も包含する。「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は、本開示においては互換的に使用される。本明細書において、ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、およびＣ）によって表される場合、これは「Ｕ」が「Ｔ」を置き換える対応するＲＮＡ配列（例えば、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）も含むことが理解されるであろう。

[0111]用語「個体」、「対象」、「宿主」および「患者」は、本明細書では互換的に使用され、診断、処置、または療法が望まれる任意の哺乳動物対象、特に、ヒトを指す。

[0112]本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有的に連結されたアミノ酸残基を含む化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質またはペプチドの配列を含んでもよいアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに連結された２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、当業界で一般的に、例えば、ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短い鎖と、当業界で一般的に、多くの型が存在するタンパク質と称されるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」は、例えば、特に、生物活性断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、改変ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、突然変異体ポリペプチド、バリアントポリペプチド、またはその組合せを含む。

[0113]本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」は、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ゲノムＤＮＡ、合成形態、および混合型ポリマー、センス鎖とアンチセンス鎖との両方を含み、非天然の、もしくは誘導体化された、合成の、または半合成のヌクレオチド塩基を示すように化学的または生化学的に改変されていてもよい。また、限定されるものではないが、１つもしくは複数のヌクレオチドの欠失、挿入、置換、または他のポリヌクレオチド配列との融合などの、野生型または合成遺伝子の変更も企図される。

[0114]本明細書で使用される場合、「試料」または「生体試料」は、対象から単離された生体材料を意味する。生体試料は、対象における生理学的または病理学的プロセスのｍＲＮＡ、ポリペプチドまたは他のマーカーを検出するのに好適な任意の生体材料を含有してもよく、個体から得られた流体、組織、細胞性および／または非細胞性材料を含んでもよい。

[0115]本明細書で使用される場合、用語「療法」または「治療レジメン」とは、疾患または障害を防止する、処置する、または変更するために行われる活動、例えば、薬理学的、外科的、食事的および／または他の技術を使用して疾患または障害の少なくとも１つの兆候または症状を低減させる、または除去することを意図された処置の経過を指す。治療レジメンは、１つもしくは複数の化合物の処方された投与量または外科手術を含んでもよい。療法は、ほとんどの場合、有益であり、障害または疾患状態の少なくとも１つの兆候または症状を低減させる、または除去するであろうが、一部の例では、療法の効果は望ましくないか、または副作用を有するであろう。療法の効果は、対象の生理学的状態、例えば、年齢、性別、遺伝学、体重、他の疾患状態などによっても影響されるであろう。

[0116]用語「治療有効量」とは、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって求められる、細胞、組織、臓器、システム、または対象の意図された生物学的、生理学的、臨床的または医学的応答を惹起する対象となる化合物または組成物の量を指す。用語「治療有効量」は、投与された場合、処置される障害または疾患の１つまたは複数の兆候または症状を処置するのに十分な化合物または組成物の量を含む。治療有効量は、化合物または組成物、疾患およびその重症度ならびに処置しようとする対象の年齢、体重などに応じて変化するであろう。

[0117]本明細書で使用される場合、疾患または障害を「処置する」という用語は、対象によって経験される疾患または障害の少なくとも１つの兆候または症状の頻度または重症度を低減させることを意味する。本明細書で使用される用語「処置」、「処置すること」、「処置する」などは、一般的には、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全に、もしくは部分的に防止する観点から予防的であってよく、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害効果に関する部分的もしくは完全な安定化もしくは治癒の観点から治療的であってもよい。用語「処置」は、哺乳動物、特に、ヒトにおける疾患の任意の処置を包含し、（ａ）疾患もしくは症状の素因を有し得るが、それを有するとまだ診断されていない対象において疾患および／もしくは症状が生じるのを防止すること；（ｂ）疾患および／もしくは症状を阻害すること、例えば、その発達を減速させること、もしくは停止させること（例えば、腫瘍の成長を停止させること、腫瘍成長の速度を減速させること、がん細胞増殖の速度を停止させることなど）；または（ｃ）疾患症状を緩和すること、すなわち、疾患および／もしくは症状の退縮を引き起こすこと（例えば、腫瘍サイズの減少を引き起こすこと、存在するがん細胞の数を減少させることなど）を含む。処置を必要とする者としては、既に苦しんでいる者（例えば、がんを有する者、感染を有する者、代謝障害を有する者、黄斑変性を有する者など）ならびに防止が望ましい者（例えば、がんに対する感受性が高い者、感染の可能性が高い者、がんを有すると疑われる者、感染を担持すると疑われる者、代謝疾患に対する感受性が高い者、黄斑変性に対する感受性が高い者など）が挙げられる。

[0118]本明細書で使用される場合、用語「野生型」とは、天然に存在する供給源から単離された、または天然に存在する配列を有する遺伝子または遺伝子産物（例えば、天然に存在するアミノ酸配列を有する野生型タンパク質は、天然源から、または合成源から単離することができるが、依然として野生型タンパク質であると考えられるであろう）を指す。対照的に、用語「改変された」、「バリアント」または「突然変異体」とは、野生型遺伝子または遺伝子産物と比較した場合、配列および／または機能特性において改変（すなわち、変更された特徴）を有する遺伝子または遺伝子産物を指す。

[0119]範囲：本開示を通して、種々の態様を範囲形式で提示することができる。範囲形式での記載は、単に便宜および簡潔性のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定と解釈されるべきではないことが理解されるべきである。したがって、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能なサブ範囲ならびにその範囲内の個々の数値を有すると考えるべきである。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～２、１～３、１～４、１～５、２～３、２～４、２～５、２～６などの具体的に開示されるサブ範囲、ならびにその範囲内の個々の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６を有すると考えるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
組成物および方法
[0120]上でまとめられたように、一部の実施形態では、本開示の組成物および方法は、野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較してアミノ酸Ｃ３８およびＣ６８位に突然変異を有するＩＬ－１８ポリペプチドを含む。そのようなバリアントは、本明細書では「安定化された」ＩＬ－１８バリアントと称される。

[0121]一部の実施形態では、本開示の組成物および方法は、野生型ＩＬ－１８と比較して突然変異したＩＬ－１８バリアントポリペプチドを含み、それはＩＬ－１８の天然の結合パートナーの一方には結合するが、他方には結合することができない（または他方への結合が減少している）。例えば、野生型ＩＬ－１８は、ＩＬ－１８Ｒ（受容体を介してシグナル伝達する）と、ＩＬ－１８ＢＰ（ＩＬ－１８がＩＬ－１８Ｒに結合するのを防止することによってそれを阻害する）との両方に結合する。一部の場合、本明細書で論じられるＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、「デコイ耐性ＩＬ－１８」（「ＤＲＩＬ－１８」）バリアントである；そのようなバリアントは、ＩＬ－１８Ｒには結合するが、ＩＬ－１８ＢＰへの結合は減少している（一部の場合、それに結合しない）。他の場合、本明細書で論じられるＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、「デコイ・トゥー・デコイＩＬ－１８」（「Ｄ２ＤＩＬ－１８」）バリアントである；そのようなバリアントは、ＩＬ－１８ＢＰには結合するが、ＩＬ－１８Ｒへの結合は減少している（一部の場合、それに結合しない）。本開示に示されるように、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８と同等のＩＬ－１８Ｒαに対する結合親和性を示し得るが、野生型ＩＬ－１８と比較して低いＩＬ－１８ＢＰに対する結合親和性も示す。

[0122]一部の場合、種々のバリアントを説明するための用語の間には重複がある。例えば、ＤＲＩＬ－１８バリアントまたはＤ２ＤＩＬ－１８バリアントは、Ｃ３８およびＣ６８に突然変異を含んでもよく、そのような場合、ＩＬ－１８バリアントは「安定化された」バリアントであろう。そのため、用語「安定化された」は、安定化された野生型ＩＬ－１８（Ｃ３８およびＣ６８突然変異を有するＷＴＩＬ－１８）ならびにＣ３８およびＣ６８突然変異を有するＤＲＩＬ－１８およびＤ２ＤＩＬ－１８バリアントなどの安定化されたバリアントタンパク質を包含する。同様に、用語「ＤＲＩＬ－１８」バリアントは、Ｃ３８／Ｃ６８突然変異を有する、および有しないそのようなバリアントを包含し、用語「Ｄ２ＤＩＬ－１８」バリアントは、Ｃ３８／Ｃ６８突然変異を有する、および有しないそのようなバリアントを包含する。そのため、用語「安定化されたＤＲＩＬ－１８」バリアントは、Ｃ３８／Ｃ６８突然変異を有するＤＲＩＬ－１８バリアントを論じる場合に使用することができ、用語「安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８」バリアントは、Ｃ３８／Ｃ６８突然変異を有するＤ２ＤＩＬ－１８バリアントを論じる場合に使用することができる。

[0123]そのため、以下は、「安定化された」ＩＬ－１８タンパク質（種々のＣ３８／Ｃ６８突然変異体）の種々の実施形態を論じる。この記載は、任意の型のＩＬ－１８タンパク質（例えば、野生型、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアントなど）に同等に適用される。Ｃ３８／Ｃ６８中の突然変異を最初に論じ、その後ＤＲＩＬ－１８バリアントおよびＤ２ＤＩＬ－１８バリアントを論じる。論じられるバリアントは全て、本明細書に記載される方法のいずれかにおいて使用することができる。

[0124]安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較して２個のシステイン残基（Ｃ３８およびＣ６８）の突然変異である「安定化突然変異」を含むＩＬ－１８ポリペプチドである。驚くべきことに、これらの２個のアミノ酸の突然変異は、システイン突然変異の他の全てのあり得る組合せよりも良好にＩＬ－１８を安定化することがわかった。例えば、以下の実施例を参照されたい。一部の場合、突然変異は、ＣからＳへの置換であり、したがって、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、一部の場合、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較した突然変異Ｃ３８ＳおよびＣ６８Ｓ（本明細書では、「突然変異対Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ」とも称される）を含んでもよい。一部の場合、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対してアミノ酸位置Ｃ３８およびＣ６８に突然変異を含む。一部の場合、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対してアミノ酸位置Ｃ３８およびＣ６８に突然変異を含む。そのようなバリアントタンパク質の例としては、配列番号６および配列番号１６～２１として記載されるものが挙げられるが、これらの配列は、それらをＤＲＩＬ－１８バリアント（以下を参照されたい）にする追加の突然変異も含み、そのような配列番号６および配列番号１６～２１は、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントの例である。

[0125]一部の場合、突然変異は、ＣからＳへの置換であり、したがって、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、一部の場合、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）と比較した突然変異Ｃ３８ＳおよびＣ６８Ｓ（本明細書では「Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ」とも称される）を含んでもよい。Ｃ６８の突然変異は、一部の場合、免疫原性エピトープをもたらすことができる。したがって、一部の実施形態では、Ｃ６８での突然変異は、非免疫原性置換である。一部のそのような場合、突然変異は、Ｃ６８のＧ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｅ、またはＮへの突然変異（一部の場合、Ｃ６８のＧ、Ａ、Ｄ、またはＮへの突然変異）である。したがって、一部のそのような場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。

[0126]したがって、一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。

[0127]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。
安定化されたＤＲＩＬ－１８またはＤ２ＤＩＬ－１８バリアント
[0128]一部の場合、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチドは、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド、すなわち、安定化突然変異（すなわち、ヒト野生型ＩＬ－１８と比較してＣ３８およびＣ６８位の突然変異）を含むＩＬ－１８バリアントポリペプチドである。一部のそのような場合、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、安定化された「デコイ耐性」（ＤＲ）ＩＬ－１８バリアントであり、他のそのような場合、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、安定化された「デコイ・トゥー・デコイ」（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアントである。ヒトＤＲＩＬ－１８バリアントの例としては、限定されるものではないが、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３に記載されるものが挙げられるが、ヒトＤ２ＤＩＬ－１８バリアントの例としては、限定されるものではないが、配列番号９２～１２５に記載されるものが挙げられる；以下の実施例も参照されたい。ＤＲ－ＩＬ１８バリアントは、以下に詳細に記載され、そのようなバリアントはいずれも、安定化されたＤＲ－ＩＬ１８であるために、本明細書に記載されるようなＣ３８／Ｃ６８突然変異を含んでもよい。

[0129]一部の場合、対象の安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントは、Ｃ３８およびＣ６８が突然変異されることを除いて（例えば、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ－一部の場合、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含む。安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントの例としては、配列番号６および配列番号１６～２１として記載されるものが挙げられる（これらのものは、配列番号８９として記載されるＤＲ－１８バリアントのＣ３８／Ｃ６８突然変異バージョンである）。当業者であれば、等価な安定化されたバリアントを、任意の望ましいＩＬ－１８バリアントのために容易に生産することができる（例えば、以下の実施例を参照されたい）（例えば、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３として記載されるヒトＤＲ－ＩＬバリアントのいずれか、例えば、配列番号８７～９１、または配列番号９２～１２５として記載されるヒトＤ２ＤＩＬ－１８バリアントのいずれか）。

[0130]したがって、一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。

[0131]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。

[0132]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。

[0133]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含む。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチドは、ヒト野生型ＩＬ－１８（配列番号３０）［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つもしくは配列番号８７～９１のいずれか１つもしくは配列番号８９］との９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、または９８．５％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３０に対して突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含む。

[0134]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、ＤＲＩＬ－１８バリアントである（すなわち、それはＩＬ－１８Ｒに結合し、ＩＬ－１８ＢＰへの低い結合を示す）。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰに対する結合親和性の９５％以下（例えば、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下、２％以下、１％以下、０．０５％以下、または０．００１％以下）である結合親和性でＩＬ－１８ＢＰに結合する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰに対する結合親和性の１０％以下（例えば、５％以下、２％以下、１％以下、０．０５％以下、または０．００１％以下）である結合親和性でＩＬ－１８ＢＰに結合する。

[0135]一部の実施形態では、対象のＤＲＩＬ－１８バリアントは、１０ｎＭ以上であるＩＬ－１８ＢＰに対するＫ_Ｄを有する（より高いＫ_Ｄはより低い結合親和性を意味する）。一部の実施形態では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、２０ｎＭ以上（例えば、５０ｎＭ以上、１００ｎＭ以上、５００ｎＭ以上、または１μＭ以上）であるＩＬ－１８ＢＰに対するＫ_Ｄを有する。

[0136]ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ヒト野生型ＩＬ－１８と比較してＣ３８およびＣ６８位に突然変異を含むＤＲＩＬ－１８ポリペプチド）は、異なる配列を有するＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８配列、またはＣ３８およびＣ６８突然変異を欠くが、そうでなければ対象のＩＬ－１８ポリペプチドと同じ配列を含有するＩＬ－１８配列）と比較して増強された安定性を示し得る。

[0137]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）の安定性を、ポリペプチドまたはポリペプチドを含有する本明細書に開示される製剤を凍結解凍サイクル、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０回の凍結解凍サイクルにかけることによって、評価することができる。凍結解凍サイクルは、ポリペプチドまたはポリペプチドを含む製剤を凍結すること（例えば、約－２０℃または－８０℃に）およびポリペプチドまたは製剤を解凍すること（例えば、約２０℃、２３℃、２５℃、または３７℃に）を含んでもよい。

[0138]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）の安定性を、ポリペプチドまたはポリペプチドを含有する本明細書に開示される製剤を撹拌にかけることによって評価することができる。撹拌は、例えば、約１００ｒｐｍ、約１５０ｒｐｍ、約２００ｒｐｍ、または約２５０ｒｐｍで撹拌しながら、ポリペプチドまたは製剤をインキュベートすること（例えば、約２０℃、約２３℃、約２５℃、約３０℃、約３７℃、または約４０℃で）を含んでもよい。試料を、その温度および撹拌速度でのインキュベーションの、例えば、約１日後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約１週間後、または約２週間後に試験することができる。

[0139]本明細書に開示される安定性アッセイの前後（例えば、凍結解凍サイクルおよび／または撹拌の前後）にサイズ排除クロマトグラフィーによって測定されるＩＬ－１８の主ピークのサイズを比較することによって、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）の安定性を評価することができる。一部の実施形態では、安定性アッセイ条件への曝露後、主ピークは、アッセイ条件への曝露前の主ピークのサイズの少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５．５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９６．５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９７．５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９８．５％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．１％、少なくとも約９９．３％、少なくとも約９９．４％、少なくとも約９９．５％、少なくとも約９９．６％、少なくとも約９９．７％、少なくとも約９９．８％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９５％、少なくとも約９９．９９％、または約１００％のままである。

[0140]一部の実施形態では、安定性アッセイ条件への曝露後、主ピークの保持は、異なる配列を有するＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８配列、またはＣ３８およびＣ６８突然変異を欠くが、そうでなければ対象のＩＬ－１８ポリペプチドと同じ配列を含有するＩＬ－１８配列）よりも少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約１０％、少なくとも約１１％、少なくとも約１２％、少なくとも約１３％、少なくとも約１４％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％高い。

[0141]ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）の安定性を、本明細書に開示される安定性アッセイの前後（例えば、凍結解凍サイクルおよび／または撹拌の前後）に、二量体、多量体、凝集体、または分解産物の形成を示すサイズ排除クロマトグラフィーによって測定される１つまたは複数のピークの存在およびサイズを決定することによって評価することができる。一部の実施形態では、安定性アッセイ条件へのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、本明細書に開示される製剤中のＤＲＩＬ－１８）の曝露後、二量体の形成を示すピークは検出されないか、または実質的に検出されない。一部の実施形態では、安定性アッセイ条件へのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、本明細書に開示される製剤中のＤＲＩＬ－１８）の曝露後、多量体の形成を示すピークは検出されないか、または実質的に検出されない。一部の実施形態では、安定性アッセイ条件へのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、本明細書に開示される製剤中のＤＲＩＬ－１８）の曝露後、凝集体の形成を示すピークは検出されないか、または実質的に検出されない。一部の実施形態では、安定性アッセイ条件へのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、本明細書に開示される製剤中のＤＲＩＬ－１８）の曝露後、分解産物の形成を示すピークは検出されないか、または実質的に検出されない。

[0142]一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、本明細書に開示される製剤中のＤＲＩＬ－１８）の安定性アッセイ条件への曝露後、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定された場合、異なる配列を有するＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８配列、またはＣ３８およびＣ６８にある突然変異を欠損するが、それ以外は対象のＩＬ－１８ポリペプチドと同じ配列を含有するＩＬ－１８配列）と比較して、ＩＬ－１８ポリペプチドは、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約１０％、少なくとも約１１％、少なくとも約１２％、少なくとも約１３％、少なくとも約１４％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％少ない二量体、多量体、凝集体、および／または分解産物形成を示す。

[0143]一部の実施形態では、開示したＤＲＩＬ－１８バリアントは、少なくとも約１００μＭ、少なくとも約１０μＭ、少なくとも約１μＭ、少なくとも約９００ｎＭ、少なくとも約８００ｎＭ、少なくとも約７００ｎＭ、少なくとも約６００ｎＭ、少なくとも約５００ｎＭ、少なくとも約４００ｎＭ、少なくとも約３００ｎＭ、少なくとも約２００ｎＭ、少なくとも約１５０ｎＭ、少なくとも約１００ｎＭ、少なくとも約９０ｎＭ、少なくとも約８０ｎＭ、少なくとも約７０ｎＭ、少なくとも約６０ｎＭ、少なくとも約５０ｎＭ、少なくとも約４０ｎＭ、少なくとも約３０ｎＭ、少なくとも約２０ｎＭ、または少なくとも約１０ｎＭである、ＩＬ－１８ＢＰへのＫ_Ｄを有する。一部の実施形態では、開示されるＤＲＩＬ－１８バリアントは、ＩＬ－１８ＢＰに結合しないか、実質的にＩＬ－１８ＢＰに結合しないか、または本明細書に開示されるアッセイでは検出限界未満でＩＬ－１８ＢＰに結合する。

[0144]本明細書に開示されるＤＲＩＬ－１８バリアントは、ヒトＩＬ－１８Ｒへの結合を示すことができ、例えば、野生型ヒトＩＬ－１８への匹敵する親和性でヒトＩＬ－１８Ｒに結合することができるか、または野生型ヒトＩＬ－１８よりも高い親和性でヒトＩＬ－１８Ｒに結合することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＤＲＩＬ－１８バリアントは、ヒトＩＬ－１８Ｒに対して示す野生型ヒトＩＬ－１８と少なくとも匹敵する親和性でヒトＩＬ－１８Ｒに結合する。

[0145]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＤＲＩＬ－１８バリアントは、例えば、約１００μＭより低い、約１０μＭより低い、約１μＭより低い、約９００ｎＭより低い、約８００ｎＭより低い、約７００ｎＭより低い、約６００ｎＭより低い、約５００ｎＭより低い、約４００ｎＭより低い、約３００ｎＭより低い、約２００ｎＭより低い、約１５０ｎＭより低い、約１００ｎＭより低い、約９０ｎＭより低い、約８０ｎＭより低い、約７０ｎＭより低い、約６０ｎＭより低い、約５０ｎＭより低い、約４０ｎＭより低い、約３０ｎＭより低い、約２０ｎＭより低い、約１０ｎＭより低い、約５ｎＭより低い、約４ｎＭより低い、約３ｎＭより低い、約２ｎＭより低い、または約１ｎＭより低いＫ_Ｄで、ヒトＩＬ－１８ＲαまたはヒトＩＬ－１８Ｒに結合する。

[0146]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＤＲＩＬ－１８バリアントは、例えば、約１ｐＭ～約１μＭ、約１ｐＭ～約５００ｎＭ、約１ｐＭ～約４００ｎＭ、約１ｐＭ～約３００ｎＭ、約１ｐＭ～約２００ｎＭ、約１ｐＭ～約１００ｎＭ、約１ｐＭ～約５０ｎＭ、約１００ｐＭ～約１μＭ、約１００ｐＭ～約５００ｎＭ、約１００ｐＭ～約４００ｎＭ、約１００ｐＭ～約３００ｎＭ、約１００ｐＭ～約２００ｎＭ、約１００ｐＭ～約１００ｎＭ、約１００ｐＭ～約５０ｎＭ、約１ｎＭ～約１μＭ、約１ｎＭ～約５００ｎＭ、約１ｎＭ～約４００ｎＭ、約１ｎＭ～約３００ｎＭ、約１ｎＭ～約２００ｎＭ、約１ｎＭ～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約７５ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、約１ｎＭ～約４０ｎＭ、約１ｎＭ～約３０ｎＭ、または約１ｎＭ～約１０ｎＭのＫ_ＤでヒトＩＬ－１８ＲαまたはヒトＩＬ－１８Ｒに結合する。

[0147]一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する（解離定数比の増加は、ＩＬ－１８Ｒ結合と比較してＩＬ－１８ＢＰ結合の相対的な減少を意味することに注意されたい）。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２０倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２０００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２０００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約２０００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。

[0148]一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３０倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３０００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３０００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約３０００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。

[0149]一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１０倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１０００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１０００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１０００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比よりも少なくとも約１００００００００倍高いＩＬ－１８ＢＰ／ＩＬ－１８Ｒ解離定数比を有する。

[0150]一部の実施形態では、対象のＤＲＩＬ－１８バリアントは、３ｎＭより高い（例えば、５ｎＭ以上、１０ｎＭ以上、５０ｎＭ以上、１００ｎＭ以上、５００ｎＭ以上、７５０ｎＭ以上、または１μＭ以上）ＩＬ－１８ＢＰへの阻害定数（Ｋｉ）を有する。一部の実施形態では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、５００ｎＭ以上であるＩＬ－１８ＢＰへのＫｉを有する。一部の実施形態では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、１μＭ以上である、ＩＬ－１８ＢＰへのＫｉを有する。

[0151]一部の実施形態では、ＩＬ－１５１８Ｒに結合し、ＩＬ－１８ＢＰへの結合の減少を示す対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（ＤＲ－ＩＬ－１８）は、２００ｎＭより高い（例えば、５００ｎＭ以上、７５０ｎＭ以上、または１μＭ以上）ＩＬ－１８ＢＰへのＫｉを有する。一部の実施形態では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、１μＭ以上であるＩＬ－１８ＢＰへのＫｉを有する。

[0152]一部の実施形態では、ＩＬ－１８Ｒに結合し、ＩＬ－１８ＢＰへの実質的な結合の減少を示す対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（ＤＲ－ＩＬ－１８）は、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＫｉよりも少なくとも２倍高い、ＩＬ－１８ＢＰへの阻害定数（Ｋｉ）を有する（すなわち、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドのＩＬ－１８ＢＰへのＫｉは、ＷＴＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＫｉと比較して少なくとも２倍である）。例えば、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＫｉよりも少なくとも５倍高い（例えば、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い）、ＩＬ－１８ＢＰへのＫｉを有する。

[0153]一部の実施形態では、ＩＬ－１８Ｒに結合し、ＩＬ－１８ＢＰへの実質的な結合の減少を示す対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（ＤＲ－ＩＬ－１８）は、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０よりも少なくとも２倍高い、ＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０を有する（すなわち、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドのＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０は、ＷＴＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０と比較して少なくとも２倍である）。例えば、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８のＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０よりも少なくとも５倍高い（例えば、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い）、ＩＬ－１８ＢＰへのＥＣ５０を有する。

[0154]任意の上記の場合では、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、上記に提示した任意の組合せのＣ３８／Ｃ６８突然変異を含み得る（例えば、一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ）。

[0155]同様に、以下のいずれかについて、ＤＲＩＬ－１８バリアントは、上記に提示した任意の組合せのＣ３８／Ｃ６８突然変異を含み得る（例えば、一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ；一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ；一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ）。

[0156]一部の実施形態では、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、Ｙ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む。様々な実施形態では、ヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、Ｙ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも４つの突然変異を含む。様々な実施形態では、ヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、Ｙ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも６つの突然変異を含む。様々な実施形態では、ヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、Ｙ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む。一部の実施形態では、ヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、Ｙ１Ｈ、Ｙ１Ｒ、Ｌ５Ｈ、Ｌ５Ｉ、Ｌ５Ｙ、Ｋ８Ｑ、Ｋ８Ｒ、Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｄ、Ｍ５１Ｎ、Ｍ５１Ｅ、Ｍ５１Ｒ、Ｋ５３Ｒ、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、Ｋ５３Ｔ、Ｓ５５Ｋ、Ｓ５５Ｒ、Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｖ、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｋ、Ｑ５６Ｌ、Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、Ｐ５７Ａ、Ｐ５７Ｋ、Ｇ５９Ｔ、Ｇ５９Ａ、Ｍ６０Ｋ、Ｍ６０Ｑ、Ｍ６０Ｒ、Ｍ６０Ｌ、Ｅ７７Ｄ、Ｑ１０３Ｅ、Ｑ１０３Ｋ、Ｑ１０３Ｐ、Ｑ１０３Ａ、Ｑ１０３Ｒ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｋ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ａ、Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｑ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｇ、Ｎ１１１Ｈ、Ｎ１１１Ｙ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、Ｎ１１１Ｇ、Ｍ１１３Ｖ、Ｍ１１３Ｒ、Ｍ１１３Ｔ、Ｍ１１３Ｋ、Ｖ１５３Ｉ、Ｖ１５３Ｔ、Ｖ１５３Ａ、Ｎ１５５Ｋ、およびＮ１５５Ｈからなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む。

[0157]一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性（例えば、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％）を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％）を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％）を有するアミノ酸配列を含む。

[0158]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＴまたはＫであり；Ｍ６０はＫまたはＬであり；Ｓ１０５はＤ、Ｎ、またはＡであり；Ｄ１１０はＫ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｙ、Ｇ、またはＲである。

[0159]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含む。例えば、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含み、Ｍ５１はＴまたはＫであり；Ｍ６０はＫまたはＬであり；Ｓ１０５はＤ、Ｎ、またはＡであり；Ｄ１１０はＫ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｙ、Ｇ、またはＲである。言い換えると、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、突然変異｛Ｍ５１ＴまたはＭ５１Ｋ｝；｛Ｍ６０ＫまたはＭ６０Ｌ｝；｛Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ａ｝；｛Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｓ、またはＤ１１０Ｇ｝；および｛Ｎ１１１Ｈ、Ｎ１１１Ｙ、Ｎ１１１Ｒ、またはＮ１１１Ｇ｝を含む。

[0160]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｓ１０５、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｓ１０５、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｓ１０５、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｓ１０５はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｓ１０５、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｓ１０５はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｓ１０５、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｓ１０５はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。

[0161]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含む。例えば、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、Ｇ、またはＫであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、アミノ酸位置Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。言い換えると、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、突然変異｛Ｍ５１Ｋ｝；｛Ｋ５３ＧまたはＫ５３Ｓ｝；｛Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｒ、またはＱ５６Ｌ｝；｛Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｎ、またはＤ１１０Ｇ｝；および｛Ｎ１１１Ｒ、またはＮ１１１Ｇ｝を含む。

[0162]一部の場合では、先の段落の突然変異に加えて、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位にも、および一部の場合ではＳ１０５にも同様に突然変異を含む。例えば、一部の場合では、Ｐ５７はＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０はＬまたはＲであり－一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである。一部の場合では、Ｐ５７はＡであり（すなわち、Ｐ５７Ａ）、Ｍ６０はＬであり（ずなわち、Ｍ６０Ｌ）、一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである（一部の場合では、Ｓ１０５Ｄ）。

[0163]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。したがって、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８は、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）野生型ＩＬ－１８（例えば、ヒトＩＬ－１８）と比較して少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）（例えば、上記の全ての突然変異の組合せを参照）を含む、アミノ酸配列を含む。

[0164]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。したがって、一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）野生型ＩＬ－１８（例えば、ヒトＩＬ－１８）と比較して少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む、アミノ酸配列を含む。

[0165]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＹ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＹ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも４つの突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＹ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも６つの突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＹ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つの突然変異）を含む、アミノ酸配列を含む。

[0166]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧであるアミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも３つの突然変異を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧであるアミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％もしくはそれ以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｍ６０、Ｓ１０５、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＴまたはＫであり；Ｍ６０はＫまたはＬであり；Ｓ１０５はＤ、Ｎ、またはＡであり；Ｄ１１０はＫ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｙ、Ｇ、またはＲであるアミノ酸配列を含む。

[0167]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｍ６０位、Ｓ１０５位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｍ６０位、Ｓ１０５位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＴ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、またはＮであり；Ｍ６０はＫ、Ｑ、Ｌ、またはＲであり；Ｓ１０５はＲ、Ｄ、Ｋ、Ａ、またはＮであり；Ｄ１１０はＨ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｄ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、またはＧであるアミノ酸配列を含む。

[0168]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｍ６０位、Ｓ１０５位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＴまたはＫであり；Ｍ６０はＫまたはＬであり；Ｓ１０５はＤ、Ｎ、またはＡであり；Ｄ１１０はＫ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり；Ｎ１１１はＨ、Ｙ、Ｇ、またはＲであるアミノ酸配列を含む。

[0169]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択される位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択される位置に少なくとも３つの突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択される位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｄ１１０はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択される位置に少なくとも３つの突然変異を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、ＳまたはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｄ１１０はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、ＧまたはＤである、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１からなる群から選択される位置に少なくとも１つの突然変異（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの突然変異）を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである、アミノ酸配列を含む。

[0170]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｄ１１０はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；および（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである、アミノ酸配列を含む。

[0171]一部の場合では、先の段落の突然変異に加えて、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位にも、および一部の場合ではＳ１０５も同様に突然変異を含む。例えば、一部の場合では、Ｐ５７はＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０はＬまたはＲであり－一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである。一部の場合では、Ｐ５７はＡであり（すなわち、Ｐ５７Ａ）、Ｍ６０はＬであり（ずなわち、Ｍ６０Ｌ）、一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである（一部の場合では、Ｓ１０５Ｄ）。

[0172]マウスＩＬ－１８バリアントポリペプチドの例（この場合、ＤＲＩＬ－１８バリアント）は、限定はされないが、ｍＣＳ１（配列番号６０）、ｍＣＳ２（配列番号６１）、ｍＣ１（配列番号６２）、ｍＡ１２（配列番号６３）、ｍＥ８（配列番号６４）、ｍＣ１０（配列番号６５）、ｍＢ７（配列番号６６）、ｍＢ１（配列番号６７）、ｍＤ１（配列番号６８）、ｍＨ７（配列番号６９）、ｍＡ７（配列番号７０）、ｍＥ１（配列番号７１）およびｍＨ３（配列番号７２）を含む。

[0173]上記のように、本明細書の任意のＩＬ－１８バリアントは、配列番号３０に対して、Ｃ３８およびＣ６８をさらに突然変異することによって「安定化」され得る。例示的な実施例のように、一部の場合では、対象の安定化されたＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；（ｉｉ）配列番号３０［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つ、または配列番号８７～９１もしくは配列番号８９のいずれか１つ］と比較してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む；および（ｉｉｉ）Ｃ３８位およびＣ６８位に突然変異を含む（例えば、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ－一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つ、または配列番号８７～９１もしくは配列番号８９のいずれか１つ］に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＥ、Ｒ、またはＫであり、；Ｋ５３はＧ、Ｓ、またはＴであり；Ｑ５６はＥ、Ａ、Ｒ、Ｖ、Ｇ、Ｋ、またはＬであり；Ｄ１１０はＮ、Ｓ、Ｋ、またはＧであり；Ｎ１１１はＲ、Ｓ、Ｇ、またはＤである；および（ｉｉｉ）Ｃ３８位およびＣ６８位に突然変異を含む（例えば、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ－一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ－一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）、アミノ酸配列を含む。一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）配列番号３０［または配列番号６および１６～２１のいずれか１つもしくは配列番号３４～５９、７３～９１、および１９１～１９３のいずれか１つ、または配列番号８７～９１もしくは配列番号８９のいずれか１つ］に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と８５％以上の配列同一性（例えば、９０％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有する；（ｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり、；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである；および（ｉｉｉ）Ｃ３８位およびＣ６８位に突然変異を含む（例えば、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ－一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ－一部の場合では、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ－一部の場合ではＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）、アミノ酸配列を含む。

[0174]一部の場合では、先の段落の突然変異に加えて、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位にも、および一部の場合ではＳ１０５位にも同様に突然変異を含む。例えば、一部の場合では、Ｐ５７はＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０はＬまたはＲであり－一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである。一部の場合では、Ｐ５７はＡであり（すなわち、Ｐ５７Ａ）、Ｍ６０はＬであり（ずなわち、Ｍ６０Ｌ）、一部のそのような場合では、Ｓ１０５はＡ、Ｎ、またはＤである（一部の場合では、Ｓ１０５Ｄ）。

[0175]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位、Ｍ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0176]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり、；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0177]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、２０Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0178]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり、；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0179]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0180]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0181]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0182]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ、Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ、またはＣ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0183]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0184]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0185]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0186]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0187]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0188]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0189]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７位およびＭ６０位に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0190]一部の場合では、対象のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、（ｉ）（配列番号３０に対して）突然変異Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎを含み；（ｉｉ）配列番号３０に記載の野生型ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列と９０％以上の配列同一性（例えば、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上の配列同一性）を有し；（ｉｉｉ）配列番号３０に対してＭ５１位、Ｋ５３位、Ｑ５６位、Ｄ１１０位、およびＮ１１１位に突然変異を含み、Ｍ５１はＫであり；Ｋ５３はＧまたはＳであり；Ｑ５６はＧ、Ｒ、またはＬであり；Ｄ１１０はＳ、Ｎ、またはＧであり；Ｎ１１１はＧまたはＲである。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｐ５７がＡ、Ｋ、ＧまたはＬであり；Ｍ６０がＬまたはＲである位置に突然変異をさらに含む。一部のそのような場合では、バリアントは、Ｓ１０５がＡ、Ｎ、またはＤである、Ｓ１０５位に突然変異をさらに含む。

[0191]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基７８にシステインを含有しない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基Ｎ７８に突然変異を含有しない。

[0192]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基１２１にシステインを含有しない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基Ｅ１２１に突然変異を含有しない。

[0193]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基１４４にシステインを含有しない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基Ｌ１４４に突然変異を含有しない。

[0194]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基１５７にシステインを含有しない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基Ｄ１５７に突然変異を含有しない。

[0195]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基７８、残基１２１、残基１４４、または残基１５７にシステインを含有しない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（例えば、配列番号３０、８９、および／または１９と比較して）残基Ｎ７８、残基Ｅ１２１、残基Ｌ１４４、または残基Ｄ１５７に突然変異を含有しない。

[0196]本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、本明細書に開示されるようにＣ３８およびＣ６８への突然変異を含むことができ、ポリペプチド配列へと非天然のシステイン残基を導入するいずれの突然変異も欠如することができる。例えば、一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（配列番号３０、８９、または１９と比較して）７６位および／または１２７位においてのみシステインを含有する。一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、（配列番号３０、８９、または１９と比較して）７６位および／または１２７位を除きいずれのシステインも含有しない。非天然のシステイン残基の欠如は、例えば、システイン残基が、例えば、分子内または分子間ジスルフィド結合、二量体、凝集等の形成を可能にすることにより、ＩＬ－１８の安定性および／または生物活性に負に影響することができるため、本開示のＩＬ－１８ポリペプチドの有利な特性に寄与することができる。

[0197]本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、表面曝露されるかまたは溶媒曝露されるシステイン残基を欠如するかまたは実質的に欠如し得る。表面曝露されるかまたは溶媒曝露されるシステイン残基の欠如は、例えば、表面曝露されるかまたは溶媒曝露されるシステイン残基が、例えば、分子内または分子間ジスルフィド結合、二量体、凝集等の形成を可能にすることにより、ＩＬ－１８の安定性および／または生物活性に負に影響することができるため、本開示のＩＬ－１８ポリペプチドの有利な特性に寄与することができる。本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、例えば、構造モデリングまたは遊離のチオールを検出するアッセイ（例えばＥｌｌｍａｎ滴定）によって決定される場合、表面曝露されるかまたは溶媒曝露されるシステイン残基を欠如するかまたは実質的に欠如し得る。本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、遊離のまたは表面曝露されるチオールを欠如するかまたは実質的に欠如し得る。

[0198]本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、その分子量によって特徴付けされ得る。例えば、ＩＬ－１８ポリペプチドは、約１８ｋＤａの分子量を有し得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ、約１８ｋＤａ、約１９ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、または約２３ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、少なくとも約１０ｋＤａ、少なくとも約１１ｋＤａ、少なくとも約１２ｋＤａ、少なくとも約１３ｋＤａ、少なくとも約１４ｋＤａ、少なくとも約１５ｋＤａ、少なくとも約１６ｋＤａ、少なくとも約１７ｋＤａ、少なくとも約１８ｋＤａ、少なくとも約１９ｋＤａ、または少なくとも約２０ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、最大約１７ｋＤａ、最大約１８ｋＤａ、最大約１９ｋＤａ、最大約２０ｋＤａ、最大約２１ｋＤａ、最大約２２ｋＤａ、最大約２３ｋＤａ、最大約２４ｋＤａ、最大約２５ｋＤａ、最大約３０ｋＤａ、最大約４０ｋＤａ、最大約５０ｋＤａ、または最大約１００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、約１８．１５１５３ｋＤａ、約１８．１５１５ｋＤａ、約１８．１５２ｋＤａ、約１８．１５ｋＤａ、約１８．２ｋＤａ、または約１８ｋＤａの分子量を有する。

[0199]本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、例えば、約１３０個、約１３５個、約１４０個、約１４５個、約１５０個、約１５１個、約１５２個、約１５３個、約１５４個、約１５５個、約１５６個、約１５７個、約１５８個、約１５９個、約１６０個、約１６１個、約１６２個、約１６３個、約１６４５個、約１６５個、約１７０個、約１７５個、約１８０個、約１８５個、または約１９０個のアミノ酸を含み得る。

[0200]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、少なくとも約１３０個、少なくとも約１３５個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１４５個、少なくとも約１５０個、少なくとも約１５１個、少なくとも約１５２個、少なくとも約１５３個、少なくとも約１５４個、少なくとも約１５５個、少なくとも約１５６個、少なくとも約１５７個、少なくとも約１５８個、少なくとも約１５９個、少なくとも約１６０個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、最大約１５５個、最大約１５６個、最大約１５７個、最大約１５８個、最大約１５９個、最大約１６０個、最大約１６１個、最大約１６２個、最大約１６３個、最大約１６４５個、最大約１６５個、最大約１７０個、最大約１７５個、最大約１８０個、最大約１８５個、または最大約１９０個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８）は、約１５０～１７０個、約１５２～約１６２個、約１５５～約１５９個、約１５６～約１５８個、または１５７個のアミノ酸を含む。

[0201]本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）は、生物活性のためのアッセイによって測定され得る生物活性または効力のレベルを有し得る。本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドの効力または生物活性のレベルを測定するために使用され得るアッセイの非限定的な例は、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ効力アッセイである。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８細胞は、ＮＦκβおよびＡＰ－１経路の活性化をモニタリングすることにより生理活性のＩＬ－１８を検出するように設計される。これらのレポーター細胞は、ＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８Ｒβをコードする遺伝子によるＨＥＫ２９３由来細胞の安定なトランスフェクションにより生成された。ヒトＴＮＦ－αおよびＩＬ－１βへの応答もブロックされ、細胞はＩＬ－１８に特異的に応答する。これらの細胞は、５つのＮＦκβおよび５つのＡＰ－１結合部位に融合したＩＦＮ－βミニマルプロモーターの調節下の分泌型胎盤アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８細胞の表面上のヘテロ二量体ＩＬ－１８受容体への生理活性ＩＬ－１８の結合は、比色分析アッセイによって定量され得る、ＳＥＡＰの産生をもたらすシグナル伝達カスケードを駆動する。

[0202]本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）の生物活性または効力は、参照、例えば野生型ＩＬ－１８、または先に産生および特徴付けられた同じＩＬ－１８ポリペプチドの参照標準と比較され得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）は、参照値の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である、生物活性または効力（例えば、ＥＣ５０）を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）は、参照値の最大１０５％、最大１１０％、最大１１５％、最大１２０％、最大１２５％、最大１３０％、最大１３５％、最大１４０％、最大１４５％、最大１５０％、最大１５５％、最大１６０％、最大１６５％、最大１７０％、最大１７５％、最大１８０％、最大１８５％、最大１９０％、最大１９５％、最大２００％、最大２５０％、または最大３００％である、生物活性または効力（例えばＥＣ５０）を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）は、参照値の約３０％～約５００％、約３０％～約２５０％、約３０％～約２００％、約３０％～約１７５％、約３０％～約１５０％、約３０％～約１４０％、約３０％～約１３０％、約３０％～約１２０％、約３０％～約１１０％、約３０％～約１０５％、約５０％～約５００％、約５０％～約２５０％、約５０％～約２００％、約５０％～約１７５％、約５０％～約１５０％、約５０％～約１４０％、約５０％～約１３０％、約５０％～約１２０％、約５０％～約１１０％、約５０％～約１０５％、約６０％～約５００％、約６０％～約２６０％、約６０％～約２００％、約６０％～約１７５％、約６０％～約１６０％、約６０％～約１４０％、約６０％～約１３０％、約６０％～約１２０％、約６０％～約１１０％、約６０％～約１０５％、約７０％～約５００％、約７０％～約２５０％、約７０％～約２００％、約７０％～約１７５％、約７０％～約１５０％、約７０％～約１４０％、約７０％～約１３０％、約７０％～約１２０％、約７０％～約１１０％、約７０％～約１０５％、約９０％～約５００％、約９０％～約２５０％、約９０％～約２００％、約９０％～約１７５％、約９０％～約１５０％、約９０％～約１４０％、約９０％～約１３０％、約９０％～約１２０％、約９０％～約１１０％、または約９０％～約１０５％である、生物活性または効力（例えばＥＣ５０）を有する。一部の実施形態では、生物活性または効力（例えば、ＥＣ５０）は、参照値の少なくとも６０％および最大１４０％である。

[0203]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲＩＬ－１８、例えば本開示の製剤中のＤＲＩＬ－１８など）は、例えば、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ効力アッセイによって決定された場合、ヒト野生型ＩＬ－１８の生物活性よりも、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、少なくとも１００％、少なくとも１０２．５％、少なくとも１０５％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍効力がある、生物活性または効力（例えば、ＥＣ５０）を有する。

[0204]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、例えば、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ効力アッセイによって決定された場合、約１００μＭより低い、約１０μＭより低い、約１μＭより低い、約９００ｎＭより低い、約８００ｎＭより低い、約７００ｎＭより低い、約６００ｎＭより低い、約５００ｎＭより低い、約４００ｎＭより低い、約３００ｎＭより低い、約２００ｎＭより低い、約１００ｎＭより低い、約５０ｎＭより低い、約３０ｎＭより低い、約１０ｎＭより低い、約５ｎＭより低い、約４ｎＭより低い、約３ｎＭより低い、約２ｎＭより低い、約１ｎＭより低い、約９００ｐＭより低い、約８００ｐＭより低い、約７００ｐＭより低い、約６００ｐＭより低い、約５００ｐＭより低い、約４００ｐＭより低い、約３００ｐＭより低い、約２００ｐＭより低い、約１００ｐＭより低い、約５０ｐＭより低い、約１０ｐＭより低い、または約１ｐＭより低い、ＥＣ５０を示す。

[0205]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、例えば、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ効力アッセイによって決定された場合、約１ｐＭ～約１μＭ、約１ｐＭ～約５００ｎＭ、約１ｐＭ～約４００ｎＭ、約１ｐＭ～約３００ｎＭ、約１ｐＭ～約２００ｎＭ、約１ｐＭ～約１００ｎＭ、約１ｐＭ～約５０ｎＭ、約１ｐＭ～約１０ｐＭ、約１０ｐＭ～約１μＭ、約１０ｐＭ～約５００ｎＭ、約１０ｐＭ～約４００ｎＭ、約１０ｐＭ～約３００ｎＭ、約１０ｐＭ～約２００ｎＭ、約１０ｐＭ～約１００ｎＭ、約１０ｐＭ～約５０ｎＭ、約５０ｐＭ～約１μＭ、約５０ｐＭ～約５００ｎＭ、約５０ｐＭ～約４００ｎＭ、約５０ｐＭ～約３００ｎＭ、約５０ｐＭ～約２００ｎＭ、約５０ｐＭ～約１００ｎＭ、約１００ｐＭ～約１μＭ、約１００ｐＭ～約５００ｎＭ、約１００ｐＭ～約４００ｎＭ、約１００ｐＭ～約３００ｎＭ、または約１００ｐＭ～約２００ｎＭのＥＣ５０を示す。

核酸
[0206]本明細書では、本明細書に記載の任意のタンパク質（たとえば、Ｃ３８およびＣ６８にある突然変異を有するＩＬ－１８タンパク質）をコードする核酸も提供される。そのような核酸は、任意の便利な形態（例えば、ＰＣＲ産物、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ミニサークル等のベクター）をとり得る。一部の場合では、対象のＩＬ－１８タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、プロモーター（の調節下）に作動可能に連結される（例えば、原核細胞において機能性であるか、または一部の場合では、真核細胞、例えば酵母もしくは免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＴＩＬ等において機能性である）。

[0207]本明細書では、そのような核酸を含む、および／または対象のＩＬ－１８タンパク質（例えば、安定化されたタンパク質）を含む細胞も提供される。一部の場合では、細胞は、原核細胞、例えば細菌細胞（例えば、核酸を増殖するためかまたは対象のタンパク質を産生するため）であり、一部の場合では、細胞は真核細胞、例えば酵母細胞（例えば、対象のタンパク質を産生するため）であり、一部の場合では、細胞は、免疫細胞、例えばＴ細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞、例えばＴＲＵＣＫ細胞）、ＴＩＬ、ＴＣＲ－Ｔ細胞（操作されたＴＣＲを有する、例えば、天然のＴＣＲと比較して増加した親和性で標的抗原に結合するように操作されたＴ細胞）、またはＮＫ細胞（例えば、ＣＡＲ－ＮＫ細胞）であり、例えばそのような細胞は対象のＩＬ－１８タンパク質（例えば配列番号１９など、安定化されたタンパク質）を発現（例えば分泌）するように操作され得る。

サイトカイン阻害剤
[0208]一部の実施形態では、本開示の組成物は、１つまたは複数のサイトカインの阻害剤を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のサイトカインの阻害剤は、１つまたは複数のサイトカインの発現、活性、または両方を阻害する化学化合物、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、抗体、リボザイム、小分子化学化合物、またはアンチセンス核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等）を含む。一部の実施形態では、阻害剤は、ＩＬ－１７、ＩＬ－５、またはＩＬ－３の発現、活性、または両方を阻害する。一部の実施形態では、サイトカイン阻害剤は毒性を減少させる。一部の実施形態では、サイトカイン阻害剤は、投与されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、および安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント）の有効性を増加させる。

処置
[0209]様々な実施形態では、本開示は、例えば、少なくとも１つのＩＬ－１８Ｒを通るシグナル伝達活性を、それを必要とする細胞、組織、器官、システム、または対象において刺激する方法での使用のためのＩＬ－１８活性の活性化因子を含む組成物（例えば、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、および安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント）を含む。様々な実施形態では、ＩＬ－１８活性組成物の活性化因子、および本発明の処置の方法は、ＩＬ－１８Ｒシグナル伝達の量、免疫細胞活性の量、または両方を増加させる。様々な実施形態では、ＩＬ－１８Ｒシグナル伝達の増加が治療転帰を改善し得る疾患または障害は、限定はされないが、がん、感染症、黄斑変性、および代謝性疾患または障害を含む。

[0210]様々なＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、Ｃ３８／Ｃ６８突然変異を有するＩＬ－１８ポリペプチド）が上記で論じられ、上記で論じられたタンパク質のいずれも本明細書で論じられた方法で使用され得るため、ここでは繰り返さない。例えば、一部の場合では、安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントおよび安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント）が、例えば、がんまたは感染などの疾患または障害（例えば、免疫チェックポイント阻害剤に耐性であるがん、ＭＨＣクラスＩの発現が減少したかまたは発現しない腫瘍と関連するがん、高レベルのＩＬ－１８ＢＰ（例えば、循環するかまたは腫瘍によって発現される）と関連するがん、ＩＬ－１８Ｒが浸潤Ｔ細胞またはＮＫ細胞上に発現される腫瘍と関連するがん、代謝疾患または障害、感染症、ＨＩＶなどのウイルス感染等）を処置するために使用される。

[0211]一部の場合では、投与されたポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ－１８タンパク質）である。一部の場合では、投与されたポリペプチドは、対象の安定化されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、配列番号３０に対してＣ３８位およびＣ６８位にあるアミノ酸突然変異を含むもの）である。一部の場合では、投与されたポリペプチドは、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド、例えば、ＤＲＩＬ－１８バリアントまたはＤ２ＤＩＬ－１８バリアントである。一部の場合では、投与されたポリペプチドは、安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント－例えば、上記で論じられた安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチドを参照）である。

融合／コンジュゲーション
[0212]一部の実施形態では、本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、別の分子にコンジュゲートされ（例えば別のタンパク質に融合される）、すなわちＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、第２のポリペプチド（融合パートナー）とインフレームで融合され得る。一部の実施形態では、第２のポリペプチド（融合パートナー）は、融合タンパク質の全体的なサイズを増加させることができ、例えば、融合タンパク質は循環から急速に排除されないであろう。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、第２のポリペプチドに融合されない。

[0213]一部の実施形態では、第２のポリペプチド（ＩＬ－１８バリアントポリペプチドまたはその断片の融合パートナー）は、免疫グロブリンＦｃ領域（すなわち、抗体Ｆｃ配列）の一部または全体である。他の実施形態では、第２のポリペプチドは、例えば、サイズの増加、多量体化ドメイン、および／またはＩｇ分子とのさらなる結合または相互作用を提供する、Ｆｃに実質的に類似している任意の好適なポリペプチドである。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の一部または全部である。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、抗体、抗体断片、ラクダ抗体または「ナノボディ」またはＨＳＡと結合もしくは相互作用する他の親和性試薬の一部または全部である。これらの融合タンパク質は、精製、多量体化を促進することができ、ｉｎｖｉｖｏでの半減期の増加を示す。ジスルフィド結合した多量体構造を有する融合タンパク質は、一部の場合では、他の分子の結合および中和にもより有効であり得る。

[0214]異種ポリペプチドに融合する場合、ＩＬ－１８ポリペプチドに相当する部分（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドの「ＩＬ－１８バリアントポリペプチド部分」と呼ばれ得る。

[0215]一部の場合では、第２のポリペプチドは、マーカー配列（例えば、親和性タグ）、例えば融合したポリペプチドの精製を促進するペプチドである。例えば、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサ－ヒスチジンペプチド、例えば、その多くが市販されている、中でもｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ＥｔｏｎＡｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ．，９１３１１）中で提供されるタグであり得る。Ｇｅｎｔｚｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８２１～８２４頁、１９８９年に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の便利な精製を提供する。精製に有用な別のペプチドタグ、「ＨＡ」タグは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質由来のエピトープに相当する。Ｗｉｌｓｏｎｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ３７：７６７頁，１９８４年。ポリペプチドの操作を容易にするペプチド部分の付加は、当技術分野でよく知られている、通常の技術である。対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、改変され得、例えば様々な目的のための広範な他のオリゴペプチド、タンパク質、および／または非タンパク質部分に接合／コンジュゲートされ得る。例えば、プレニル化、アセチル化、アミド化、カルボキシル化、グリコシル化、ＰＥＧ化（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖の共有結合）等により翻訳後に改変される。そのような改変は、グリコシル化の改変、例えば、哺乳動物のグリコシル化または脱グリコシル化酵素など、グリコシル化に影響する酵素へのポリペプチドの曝露により、例えば、その合成およびプロセシング中に、またはさらなるプロセシングステップでポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって作成されるものも含み得る。一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、１つまたは複数のリン酸化アミノ酸残基、例えばホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホスレオニンを有する。

[0216]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、グリコシル化される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドはグリコシル化されない。

[0217]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、水溶性ポリマーにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、ペグ化される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレングリコール－コ－プロピレングリコール）、ポリ（Ｎ－２－（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ（シアル酸）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリノ）、またはデキストランにコンジュゲートされる。

[0218]一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、水溶性ポリマーにコンジュゲートされない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、ペグ化されない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ－１８ポリペプチドは、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレングリコール－コ－プロピレングリコール）、ポリ（Ｎ－２－（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ（シアル酸）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリノ）、またはデキストランにコンジュゲートされない。

[0219]一部の他の実施形態では、本開示のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、タンパク質分解に対するそれらの耐性を改善するか、または溶解性質を最適化するか、またはそれらを治療剤としてより好適にするようにさらに改変された試薬を含む。例えば、本開示のバリアントは、自然発生のＬ－アミノ酸、例えば、Ｄ－アミノ酸または非自然発生の合成アミノ酸以外の残基を含有するアナログをさらに含む。Ｄ－アミノ酸は、一部または全てのアミノ酸残基と置換され得る。

共投与および多特異的ＩＬ－１８バリアントポリペプチド
[0220]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、さらなる薬剤と投与される。用語「共投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、「共投与する（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、および「と組み合わせて（ｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈ）」は、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）または特定の時間制限なく順に（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ）のいずれかでの、２つ以上の治療剤（例えば、対象の安定化されたＩＬ－１８）の投与を含む。一部の実施形態では、薬剤は、同時に細胞内または対象の体内に存在するか、または同時に生物学的または治療効果を発揮する。一部の実施形態では、治療剤は、同じ組成物または単位剤形内である。他の実施形態では、治療剤は、別々の組成物または単位剤形中である。ある特定の実施形態では、第１の薬剤は、第２の治療剤の投与前（例えば、分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）に、第２の治療剤の投与と同時に、または第２の治療剤の投与に続いて（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２時間後）投与され得る。

[0221]一部の場合では、（例えば、医薬組成物として製剤化された）対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、がん治療薬、感染を処置するための治療薬、またはがんに対する抗体と共投与される。そのような投与は、本開示の１つまたは複数の薬剤の投与に関して、薬物／抗体の同時（すなわち同じ時間での）、前、または続く投与を含み得る。当業者は、本開示の特定の薬物および組成物の投与の適切なタイミング、配列および投与量を決定することは困難ではないだろう。

[0222]一部の実施形態では、処置は、別の薬剤（例えば、免疫刺激因子、慢性感染症を処置する薬剤、細胞傷害剤、抗がん剤等）と対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の組合せを投与するステップ（共投与）により達成される。使用され得る細胞傷害剤の一例のクラスは、化学療法剤である。例示的な化学療法剤としては、限定はされないが、アルデスロイキン、アルトレタミン、アミホスチン、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クラドリビン、シサプリド、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ドセタキセル、ドクソルビシン、ドロナビノール、デュオカルマイシン、エトポシド、フィルグラスチム、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、グラニセトロン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンアルファ、イリノテカン、ランソプラゾール、レバミソール、ロイコボリン、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトクロプラミド、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、オメプラゾール、オンダンセトロン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ピロカルピン、プロクロロペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｐｅｒａｚｉｎｅ）、リツキシマブ、サプロイン（ｓａｐｒｏｉｎ）、タモキシフェン、タキソール、塩酸トポテカン、トラスツズマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよび酒石酸ビノレルビンを含む。

[0223]対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、活性を増強するか、またはそうでなければ治療効果を増加させる１つまたは複数の薬剤と製剤化される必要がないが、場合によりそれらと製剤化される。一部の実施形態では、処置は、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）と、標的細胞をオプソニン化する薬剤の組合せを投与すること（共投与）により、達成される。したがって、本明細書では、（ａ）対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）；および（ｂ）標的細胞をオプソニン化する薬剤を含む組成物（および組成物を使用する方法）も想起される。一部の場合では、標的細胞をオプソニン化する薬剤は、リツキシマブである。一部の場合では、標的細胞をオプソニン化する薬剤は、セツキシマブである。

[0224]「標的細胞をオプソニン化する薬剤」（「オプソニン化剤」）は、標的細胞（例えば、がん細胞、細胞内病原体を持つ細胞等）に結合し得る、および標的細胞をオプソニン化し得る（例えば、ファゴサイトーシスおよび／または抗体依存細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の標的細胞をマークする）任意の薬剤である。例えば、抗体がＦＣ領域を有する、標的細胞（例えば、腫瘍細胞などのがん細胞）に結合することができる任意の抗体は、標的細胞をオプソニン化する薬剤であると考えられる。一部の場合では、標的細胞をオプソニン化する薬剤は、標的細胞に結合する抗体である（例えば、抗腫瘍抗体、抗がん抗体、抗感染抗体等）。

[0225]例えば、腫瘍細胞マーカーに選択的な抗体、放射線、外科手術、および／またはホルモン枯渇は、Ｋｗｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵ．Ｓ．Ａ．，９６：１５０７４～９頁，１９９９年を参照されたい。

[0226]血管新生阻害剤も、本発明の方法と組み合わされ得る。多くの抗体が現在、がんの処置のために臨床で使用され、その他は臨床開発の様々なステージにある。例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍の処置のための多くの抗原および対応するモノクローナル抗体がある。１つの標的抗原は、ＣＤ２０である。リツキシマブは、ＣＤ２０抗原に対するキメラ非コンジュゲートモノクローナル抗体である。ＣＤ２０は、Ｂ細胞活性化、増殖、および分化に重要な機能的役割を有する。ＣＤ５２抗原は、慢性リンパ性白血病の処置に適応される、モノクローナル抗体アレムツズマブによって標的化される。ＣＤ２２は、多くの抗体によって標的化され、化学療法耐性の有毛細胞白血病において、毒素と組み合わせた効果が近年実証された。ＣＤ２０を標的化する２つの新しいモノクローナル抗体、トシツモマブおよびイブリツモマブが、食品医薬品局（ＦＤＡ）に提出された。これらの抗体は、放射性同位体とコンジュゲートされる。アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）は、慢性リンパ球性白血病の処置に使用され；ゲムツズマブ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）は、急性骨髄性白血病の処置での使用が見出され；イブリツモマブ（Ｚａｖａｌｉｎ）は非ホジキンリンパ腫の処置での使用が見出され；パニツモマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）は結腸がんの処置での使用が見出される。

[0227]固形腫瘍で使用される、本開示の方法で有用なモノクローナル抗体は、限定はされないが、エドレコロマブおよびトラスツズマブ（ハーセプチン）を含む。エドレコロマブは、結腸および直腸がんで見られる１７－１Ａ抗原を標的化し、これらの適応のために欧州で使用が認可されている。トラスズマブは、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ抗原を標的化する。セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）はまた、本開示の方法での使用のために着目される。抗体はＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）に結合し、結腸がんおよび頭頸部の扁平細胞癌（ＳＣＣＨＮ）を含む、固形腫瘍の処置で使用される。

[0228]対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）は、任意の上記の薬剤（例えば、標的細胞をオプソニン化する抗体などの薬剤）と組み合わされ得る。したがって、一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）は、がん細胞、例えば腫瘍細胞に選択的な１つまたは複数のオプソニン化剤との併用療法で使用される（共投与される）。一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）は、セツキシマブ（ＥＧＦＲに結合する）、パニツムマブ（ＥＧＦＲに結合する）、リツキシマブ（ＣＤ２０に結合する）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、アレムツズマブ（ＣＤ５２に結合する）、ブレンツキシマブ（ＣＤ３０に結合する）、トシツモマブ、イブリツモマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、およびエドレコロマブ（１７－１Ａに結合する）、またはこれらの組合せの１つまたは複数との併用療法で使用される（共投与される）。

[0229]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、がん細胞オプソニン化剤（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２００、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２２１、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ３１９、ＳＩＲＰａ、ＥＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、１７－１Ａ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＡ、ＡＸＬ、ＴＷＥＡＫＲ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、ＧＤ２ガングリオシド、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、メソテリン、エンドグリン、ルイス－Ｙ抗原、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＰＳＭＡ、ＢＡＦＦ、ＦＧＦＲ２、ＴＡＧ－７２、ゼラチナーゼＢ、グリピカン３、ネクチン－４、ＢＣＭＡ、ＣＳＦ１Ｒ、ＳＬＡＭＦ７、インテグリンαｖβ３、ＴＹＲＰ１、ＧＰＮＭＢ、ＣＬＤＮ１８．２、ＦＯＬＲ１、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ＭＩＣＡ、Ｃ２４２抗原、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＥＧＦＬ７、ビメンチン、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、ＴＲＯＰ－２、ＬＲＲＣ１５、ＦＡＰ、ＳＬＩＴＲＫ６、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、テネイシン－３、ＳＴＥＡＰ１、またはＮＲＰ１、またはこれらの任意の組合せを標的化する抗原結合領域を含むもの）と共投与される。

[0230]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、１７－１Ａ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）から選択される１つまたは複数の抗原を標的化する薬剤と共投与される。

[0231]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、従来の免疫調節剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫アゴニスト）と併用療法で使用される（共投与される）。上記したように、免疫チェックポイント阻害剤の標的の例としては、限定はされないが：ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、およびＬＩＬＲＢ２を含む。したがって、免疫チェックポイント阻害剤の例は、タンパク質、例えば：ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、およびＬＩＬＲＢ２を阻害する薬剤（例えば、抗体）を含む。一部の場合では、対象の安定化されたバリアントＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント、Ｄ２Ｄ－ＩＬ－１８バリアント）（例えば、配列番号１９）は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ２、またはこれらの任意の組合せを阻害する免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗体）と共投与される。

[0232]一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント、Ｄ２Ｄ－ＩＬ－１８バリアント）（例えば、配列番号１９）は、免疫アゴニストと共投与される。免疫アゴニストの例は、タンパク質、例えば腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤（例えば、アゴナイズする抗体）を含む。免疫アゴニストの例はまた、限定はされないが、インフラマソーム活性化因子（アゴニスト）；Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＣＤ３および／またはＣＤ２８を腫瘍抗原と架橋する多特異性薬剤、例えばＢｉＴＥ）；およびサイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）を含む。

[0233]したがって、一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント、Ｄ２Ｄ－ＩＬ－１８バリアント）（例えば、配列番号１９）は、免疫アゴニスト、例えば、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）をアゴナイズする薬剤（例えば、抗体）；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）をアゴナイズする薬剤（例えば、抗体）；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）をアゴナイズする薬剤；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤；インフラマソーム活性化因子；Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＣＤ３および／またはＣＤ２８を腫瘍抗原と架橋する多特異性薬剤、例えばＢｉＴＥ）；サイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）；またはこれらの任意の組合せと共投与される。

[0234]一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント、Ｄ２Ｄ－ＩＬ－１８バリアント）（例えば、配列番号１９）は、ＴＧＦベータアンタゴニスト、例えば抗ＴＧＦベータ抗体；インターフェロン、例えばインターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、またはインターフェロンガンマ；ＴＮＦ；ＴＲＡＩＬ；リンフォトキシン；ＬＩＧＨＴ／ＴＮＳＦ１４等と共投与される。

[0235]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、ＢＴＬＡおよび／またはＣＤ１６０の阻害剤と併用療法で使用される（共投与される）。一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰＡ剤（例えば、抗ＣＤ４７、抗ＳＩＲＰＡ、高親和性ＣＤ４７結合剤、高親和性ＳＩＲＰＡ結合剤等）と併用療法で使用される（共投与される）。一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、ＴＩＭ３および／またはＣＥＡＣＡＭ１の阻害剤と併用療法で使用される（共投与される）。

[0236]一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、別のタンパク質（すなわち、「融合パートナー」、「第２のポリペプチド」）と融合される。一部の実施形態では、第２のポリペプチド（対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドの融合パートナー）は、融合タンパク質のＩＬ－１８バリアントポリペプチド部分によって結合される標的分子以外（例えば、ＩＬ－１８Ｒに結合するバリアントのＩＬ－１８Ｒ以外；またはＩＬ－１８ＢＰに結合するバリアントのＩＬ－１８ＢＰ以外）の標的分子に特異的に結合する。

[0237]したがって、一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、多特異性（例えば、二重特異性）である。用語「多特異性」または「二重特異性」は、第１の標的に特異的である少なくとも１つの領域（例えば、リガンドまたは第１の抗体のＦａｂ）、および第２の標的に特異的である少なくとも第２の領域（例えば、リガンドまたは第２の抗体のＦａｂ）を持つことにより、２つ以上の異なる抗原を認識する薬剤（例えば、リガンドまたは抗体）を指す場合に、一般に使用される。二重特異性剤は、２つの標的に特異的に結合し、したがって多特異性剤の１つの型である。

[0238]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、多特異性（例えば、二重特異性）であり、ポリペプチドの第１の領域は対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド配列を含み（すなわち、第１の領域はＩＬ－１８バリアントポリペプチドを含む）、第２の領域は別の標的分子（例えば、抗原）に特異的に結合する。例えば、一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドによって結合される標的分子以外の標的分子に特異的に結合する第２のポリペプチドに融合される。

[0239]共投与の文脈で上記で論じられた薬剤のいずれか１つは、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）にコンジュゲートされ得る。用語「共投与」は、本明細書で使用される場合、そのようなコンジュゲートされた化合物を包含することを意味する。例えば、薬剤１が薬剤２と共投与される場合、用語は、薬剤１と薬剤２が互いにコンジュゲートされない実施形態を包含することを意味し、薬剤１と薬剤２が互いにコンジュゲートされる実施形態を包含することも意味する（例えば、薬剤１と薬剤２が両方ともタンパク質であり、薬剤１が薬剤２に融合される）。

[0240]一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域は、チェックポイント阻害剤を含む。一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８バリアントポリペプチドの第２の領域は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、およびＬＩＬＲＢ２から選択される１つまたは複数のタンパク質を阻害する。

[0241]一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域は、免疫アゴニストを含む。一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８バリアントポリペプチドの第２の領域は、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、およびＣＤ４０から選択される１つまたは複数のタンパク質をアゴナイズする。多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域として使用され得る（またはその一部として使用され得る）免疫アゴニストのさらなる例としては、限定はされないが、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）をアゴナイズする薬剤（例えば、抗体またはその抗原結合領域）；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）をアゴナイズする薬剤（例えば、抗体またはその抗原結合領域）；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）をアゴナイズする薬剤；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤；インフラマソーム活性化因子；Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ＣＤ３および／またはＣＤ２８を腫瘍抗原と架橋する多特異性薬剤、例えばＢｉＴＥ）；サイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）；等を含む。

[0242]一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域は、がん細胞オプソニン化剤である。一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８バリアントポリペプチドの第２の領域は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、１７－１Ａ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）から選択される１つまたは複数のタンパク質を標的化する。一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、１７－１Ａ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）から選択される１つまたは複数のタンパク質を標的化するオプソニン化剤である。

[0243]例えば、一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の第２の領域は、エクトドメイン、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７（例えば、高親和性ＣＤ４７バリアント／ポリペプチド）、またはＳＩＲＰＡ（例えば、高親和性ＳＩＲＰＡバリアント／ポリペプチド）からのエクトドメインを含む。一部の場合では、多特異性ＩＬ－１８バリアントポリペプチドの第２の領域は、ＣＴＬＡ－４、Ｌａｇ－３、ＢＴＬＡ、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２４４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＰＤ－１、およびＰＤ－Ｌ１から選択される抗原に特異的に結合する。

[0244]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８と比較して増加した生物活性を有する。一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントは、野生型ＩＬ－１８に天然に生じるものと比較してシステイン残基を含まない。一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、ペグ化されたアミノ酸を持たないアミノ酸配列を含む。

[0245]一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）は、リンカー（例えば、リンカーポリペプチド）を含む。例えば、一部の実施形態では、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチドおよび融合パートナーは、リンカー（例えば、リンカーポリペプチド）によって分けられる。リンカーポリペプチドは、任意の様々なアミノ酸配列を有し得る。タンパク質は、リンカーポリペプチドによって接合され、可動性であり得る（例えば、可動性リンカーポリペプチド）が、他の化学結合は除外されない。好適なリンカーは、約６アミノ酸長と約４０アミノ酸長の間、または約６アミノ酸長と約２５アミノ酸長の間のポリペプチドを含む。これらのリンカーは、タンパク質を結合する、合成の、リンカーをコードするオリゴヌクレオチドを使用することによって産生され得る。ある程度の可動性を有するペプチドリンカーが使用され得る。連結するペプチドは、一部の場合では、リンカーが通常可動性のペプチドを生じる配列を有するであろうことを念頭に置き、事実上任意のアミノ酸配列を有し得る。小さいアミノ酸、例えばグリシンおよびアラニンの使用は、可動性ペプチドの作成における使用である。そのような配列の作成は、当業者には日常的である。様々な異なるリンカーが市販されており、使用のために好適であると考えられる。

[0246]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）は、免疫細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＣＡＲ－Ｔ、ＴＣＲ－Ｔ細胞（操作されたＴＣＲ、例えば天然のＴＣＲと比較して親和性が増加して標的抗原に結合するように操作されたＴＣＲを有するＴ細胞）、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または操作されたＴ細胞受容体によって形質導入されたＴもしくはＮＫ細胞と共投与される。他の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルスと共投与される。

[0247]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）をコードする核酸は、操作された（「変更された」）免疫細胞、例えばＣＡＲ－Ｔ、ＴＣＲ－Ｔ細胞、またはＣＡＲ－ＮＫ細胞、または操作されたＴ細胞受容体によって形質導入されたＴもしくはＮＫ細胞または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に含まれる。この例では、操作された細胞（例えば、変更されたＴ細胞、変更されたＮＫ細胞、変更されたＴＩＬ）が、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドを分泌するであろう。ＩＬ－１８バリアントペプチドを分泌する能力は、文脈上の方法で（例えば腫瘍微小環境内で活性化する）、例えば合成ＮＯＴＣＨ受容体により、制御され得る。

[0248]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）をコードする核酸は、腫瘍溶解性ウイルス内に含まれる。この例では、腫瘍溶解性ウイルスによって感染された細胞は、ＩＬ－１８バリアントポリペプチドを分泌するであろう。

[0249]一部の実施形態では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）は、細胞、組織、器官、システム、または対象に投与され、疾患もしくは障害を処置する。一部の実施形態では、ヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチドは、細胞、組織、器官、システム、または対象に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのヒトＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ等）は、細胞、組織、器官、システム、または対象に投与される。

[0250]一部の実施形態では、本発明の組成物は、マウス細胞、組織、器官、システムまたは対象に投与され、疾患もしくは障害を処置または防止する。一部の実施形態では、マウスＩＬ－１８バリアントポリペプチド、またはその断片は、細胞、組織、器官、システム、または対象（例えば、ヒト細胞、組織、器官、システム、または対象）に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのマウスＩＬ－１８バリアントポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ等）は、細胞、組織、器官、システム、または対象に投与される。本明細書に他に記載したように、マウスＩＬ－１８バリアントポリペプチド（この場合では、ＤＲＩＬ－１８バリアント）の例としては、限定はされないが、配列番号６０～７２を含む。また、本明細書に他に記載したように、マウスＩＬ－１８バリアント（この場合では、ＩＬ－１８ＢＰに結合するが、ＩＬ－１８Ｒヘの結合が減少したＤ２ＤＩＬ－１８バリアント）の例としては、限定はされないが、配列番号１２６～１９０を含む。

[0251]一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の１つまたは複数のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）をコードする単離された核酸分子を、対象、細胞、または組織に投与するステップを含む。ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）を使用することによるものを含む、ＩＬ－１８シグナル伝達のレベルの増加は、本明細書に開示されるものを含む広範な方法、ならびに当技術分野で公知の方法、または将来開発される方法を使用して評価され得る。すなわち、当業者は、本明細書で提供する開示に基づき、ＩＬ－１８シグナル伝達のレベルまたは活性の増加が、対象から得られた生体試料における、ＩＬ－１８またはＩＬ－１８バリアントポリペプチドもしくはその断片をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）のレベル、ＩＬ－１８またはＩＬ－１８バリアントポリペプチドもしくはポリペプチド断片のレベル、および／またはＩＬ－１８またはＩＬ－１８バリアントポリペプチドもしくは断片活性のレベルを評価する方法を使用して容易に評価され得ることを認識するであろう。

[0252]当業者は、本明細書で提供する開示に基づき、本開示の組成物（ＩＬ－１８バリアントポリペプチド、例えば安定化されたＩＬ－１８）は、全体（例えば、全身）または一部（例えば、局所、細胞、組織、器官）で、ＩＬ－１８シグナル伝達活性の増加が有益であろう疾患もしくは障害を処置されるか、処置されるであろう対象において有用であることを理解するであろう。当業者は、本明細書で提供する教示に基づき、本明細書に記載の組成物および方法によって処置可能な疾患および障害は、ＩＬ－１８シグナル伝達の増加が、生物学的、生理学的、臨床または治療の前向きな転帰を促進するであろう任意の疾患または障害を包含することを認識するであろう。

[0253]一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与するステップ、およびさらなる薬剤を含む組成物を対象に投与するステップを含む。そのような一実施形態では、さらなる薬剤は、限定はされないが、変更されたＴ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）、武装化したＣＡＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ）、ＴＣＲ－Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ウイルス、抗原、ワクチン、抗体、免疫チェックポイント阻害剤、小分子、化学療法剤、および幹細胞を含む群から選択される少なくとも１つを含む免疫治療剤を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を含む組成物は、細菌、ウイルス、または他の病原体による感染前、感染中、または感染後に免疫系の活性を増加させる方法において使用される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１８バリアントポリペプチドを含む組成物は、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏでの免疫細胞の数および／または活性、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、および／または骨髄性細胞の数および／または活性を増加させる方法において使用される。

[0254]一部の実施形態では、さらなる治療剤は、１つまたは複数のサイトカインの阻害剤を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のサイトカインの阻害剤は、１つまたは複数のサイトカインの発現、活性、または両方を阻害する化学化合物、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、抗体、リボザイム、小分子化学化合物、またはアンチセンス核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等）を含む。一部の実施形態では、阻害剤は、ＩＬ－１７、ＩＬ－５、またはＩＬ－３の発現、活性、または両方を阻害する。一部の実施形態では、サイトカイン阻害剤の投与は毒性を減少させる。一部の実施形態では、サイトカイン阻害剤の投与は、投与されたＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたはＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の有効性を増加させる。

[0255]本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、適切なＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）と組み合わされ、組合せ後、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を対象に投与するために使用され得る化学組成物を意味する。

ＩＬ－１８バリアントの産生
ＳＵＭＯプロテアーゼ
[0256]目的のポリペプチドのＳＵＭＯタグを切断するＳＵＭＯ（低分子ユビキチン様修飾因子）プロテアーゼを使用することによる、目的のポリペプチド（例えば、不活性タンパク質）を作成するための組成物および方法が提供される。ＳＵＭＯタグは、目的のタンパク質のＮ末端に置かれてもよく、ＳＵＭＯプロテアーゼ（例えば、ＵＬＰ１）は、切断反応を介してＳＵＭＯタグの傷跡を残さない除去を提供し得る。一部の場合では、切断は、細胞内で生じ（例えば、細菌細胞内、酵母細胞内）、他の場合では、切断はｉｎｖｉｔｒｏで、無細胞で生じるであろう。

[0257]例えば、一部の場合では、（ＳＵＭＯタグに、そのＮ末端で融合される目的のタンパク質を含む）融合タンパク質が、細菌細胞に導入され（例えば、融合タンパク質をコードする核酸を介して）、ＳＵＭＯプロテアーゼも同じ細胞に導入され（そのような場合には、両方のタンパク質が外因的に導入されたと言われる）、したがって切断反応は、細胞の中で生じるであろう。一部の場合では、プロテアーゼは、細胞のゲノムにインテグレートされる核酸によってコードされ、一部の場合では、核酸はインテグレートされないであろう（例えば、プラスミドであり得る）。ＳＵＭＯプロテアーゼは、構成的プロモーターから発現されてもよく、または誘導プロモーター、例えばラムノース誘導プロモーター（の調節下）に作動可能に連結されてもよい。任意の便利な誘導プロモーターが使用され得る。そのように、一部のそのような場合では、細胞（例えば、細菌細胞）内で融合タンパク質をＳＵＭＯプロテアーゼと接触させるステップは、ＳＵＭＯプロテアーゼの発現を誘導するステップを含み得る。

[0258]一部の場合では、融合タンパク質およびＳＵＭＯプロテアーゼは同じ核酸（例えば、プラスミド）によってコードされる。一部のそのような場合では、両方のタンパク質が同じプロモーターに作動可能に連結され（例えば、それらはバイシストロニックなｍＲＮＡから翻訳され得る）、他の場合では、２つのタンパク質は別々のプロモーターに作動可能に連結される。

[0259]一部の場合では、融合タンパク質は、ｉｎｖｉｔｒｏ環境で、無細胞で、ＳＵＭＯプロテアーゼと接触される。例えば、融合タンパク質は精製／単離され、次いで精製されたＳＵＭＯプロテアーゼ（容易に入手可能）と接触され得る。

[0260]目的のポリペプチドが、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）である場合、そのようなタンパク質は、Ｎ末端のアミノ酸がメチオニンである場合に完全に活性ではない（例えば、ヒト野生型ＩＬ－１８タンパク質は通常、カスパーゼ１によって切断されてＮ末端のチロシンを露呈させ、活性な成熟形態を得る）。したがって、本開示の方法は、活性なＩＬ－１８ポリペプチドを産生するために使用され得る。そのような場合では、ＳＵＭＯ（低分子ユビキチン様修飾因子）タグは、大量の融合タンパク質（ＩＬ－１８＋ＳＵＭＯタグ）の産生を促進し、その後ＳＵＭＯタグを除去して、Ｎ末端で活性化されたＩＬ－１８タンパク質（例えば、メチオニンではない、例えばチロシンを有するもの）を露呈することができる。ＳＵＭＯタグは、融合タンパク質を、タグを切断して天然のＮ末端アミノ酸（ヒトＩＬ－１８の場合、Ｔｙｒ）を露呈させるＳＵＭＯプロテアーゼ（例えば、酵母ＵＬＰ１）と接触させることによって除去され得る。一部の場合では、接触させるステップは、細胞、例えば細菌細胞の中で実施される。一部のそのような場合では、次いで産生された活性タンパク質が、例えば細胞ライセートから精製され得る（さらなる詳細は以下を参照）。

[0261]任意の便利なＳＵＭＯタグが使用され得、その１つの例は配列番号２６として記載される。一部の場合では、例えば、続く精製のため（以下を参照）、ＳＵＭＯタグ上にさらなるタグ（例えば、６ＸＨｉｓタグ）を含むことが望ましい。配列番号２７は、そのようなタグ付けされたＳＵＭＯタグの１つの非限定的な例を提供する。

精製ステップ
[0262]一部の実施形態では、対象の「作成する方法」／「産生する」は、ＳＵＭＯタグが除去された後に、目的のポリペプチドを精製するステップをさらに含む（例えば、ＩＬ－１８ポリペプチド、例えば安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）。一部のそのような場合では、切断（ＳＵＭＯタグ除去）は、ｉｎｖｉｔｒｏで、無細胞で生じ、精製は、ＳＵＭＯタグおよびＳＵＭＯプロテアーゼの除去を含み得る。例えば、一部の場合では、ＳＵＭＯプロテアーゼおよび／またはＳＵＭＯタグはタグ付け（例えばＨｉｓタグ付け）されてもよく、それは、一部の場合では、切断後に、例えば目的のポリペプチドの精製のため、例えばニッケルカラムなど固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）を使用して、これらの成分の除去を促進することができる。

[0263]一部の場合では、切断（ＳＵＭＯタグ除去）は細胞（例えば、上記で論じられた細菌細胞）で生じ、目的のポリペプチドは細胞ライセートから精製される。一部の場合では、目的のポリペプチドは、培地へと分泌され（例えば、一部の場合では、酵母細胞を使用する場合）、次いで培地から精製される。任意の便利なステップまたは一連のステップを使用して、例えば細菌ライセートまたはタンパク質が分泌された培地からタンパク質を精製することができる。一部の場合（例えば、目的のポリペプチドがＩＬ－１８ポリペプチド、例えば、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等（例えば、配列番号１９）である一部の場合）では、精製は、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＣａｐｔｏＱ）、ＩＭＡＣ（例えば、残りのｈｉｓタグ付けされたＳＵＭＯ、未切断のタンパク質、および／またはプロテアーゼを除去する）、マルチモーダルクロマトグラフィー（例えば、ＣａｐｔｏＭＭＣクロマトグラフィー－ＣａｐｔｏＭＭＣは、充填層クロマトグラフィーにより大量の供給からタンパク質の捕捉および精製の仲介のためのマルチモーダル耐塩性樹脂である）、および疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）（例えば、一部の場合ではフェニルセファロースＨＩＣ）を含む。一部の場合では、高速Ｑクロマトグラフィーも実施される。一部のそのような場合では、限外濾過（ＵＦ）および透析濾過（ＤＦ）ステップが、各クロマトグラフィーステップの前に実施される。１つの可能な精製プロセスの例としては、図４８を参照。

[0264]本明細書に詳述した方法を含み、本開示により武装化された場合、本発明が一度確立された疾患または障害の処置に限定されないことは、当業者によって理解されるであろう。特に、疾患または障害の症状は、対象への損害の点で明らかにされている必要はなく、実際、疾患または障害は、処置が投与される前に対象において検出される必要はない。すなわち、疾患または障害からの顕著な病理は、本発明が利益を提供し得る前に、生じている必要はない。したがって、本発明は、本明細書においてより完全に記載される場合、対象において疾患および障害を防止する方法を含み、本明細書の他で論じられるように、ＩＬ－１８活性の活性化因子は、疾患または障害の発症前に対象に投与されてもよく、それにより疾患または障害の発症を防止することができる。

本開示の医薬組成物
[0265]本明細書の他に記載した、ポリペプチド、ポリペプチド断片、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を含む組成物は、ここで記載するように、製剤化され、対象に投与され得る。非限定的な例により、疾患または障害の処置および／または防止のためのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、例えばここで記載するように、任意の便利な方法で、製剤化され、対象に投与され得る。

[0266]本開示は、活性成分（ＩＬ－１８ポリペプチド、例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）として、本明細書に開示される、疾患または障害の処置または防止に有用な組成物を含む医薬組成物の調製および使用を包含する。そのような医薬組成物は、対象への投与に好適な形態の、活性成分のみからなってもよく、または医薬組成物は、活性成分および１つまたは複数の薬学的に許容される担体、１つまたは複数のさらなる成分、またはこれらのいくつかの組合せを含んでもよい。活性成分は、生理学的に許容されるエステルまたは塩の形態で、例えば、当技術分野で周知のように、生理学的に許容されるカチオンまたはアニオンと組み合わせて医薬組成物に存在してもよい。

[0267]本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、適切なＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）と組み合わされてもよく、組合せ後に対象への投与に使用され得る化学組成物を意味する。

[0268]一部の実施形態では、医薬組成物は、大きく、ゆっくり代謝される巨大分子、例えばタンパク質、キトサンなどの多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（例えば、ラテックス官能化セファロース（商標）、アガロース、セルロース等）、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、ならびに脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）を含み得る。

[0269]対象の方法（例えば、ＩＬ－１８ポリペプチド、例えば野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）を実施するために有用な医薬組成物は、ｋｇ当たり約０．１ｎｇと１００ｍｇの間（例えば、ｋｇ当たり１ｎｇ～１００ｍｇ、１００ｎｇ～１００ｍｇ、１μｇ～１００ｍｇ、１００μｇ～１００ｍｇ、１ｍｇ～１００ｍｇ、２５ｍｇ～１００ｍｇ、５０ｍｇ～１００ｍｇ、１ｎｇ～８０ｍｇ、１００ｎｇ～８０ｍｇ、１μｇ～８０、１００μｇ～８０ｍｇ、１ｍｇ～８０ｍｇ、２５ｍｇ～８０ｍｇ、５０ｍｇ～８０ｍｇ、１ｎｇ～５０ｍｇ、１００ｎｇ～５０ｍｇ、１μｇ～５０ｍｇ、１００μｇ～５０ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、２５ｍｇ～５０ｍｇ、５０ｍｇ～５０ｍｇ、１ｎｇ～５０ｍｇ、１００ｎｇ～５０ｍｇ、１μｇ～５０ｍｇ、１００μｇ～５０ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、または２５ｍｇ～５０ｍｇ）の用量を送達するために投与され得る。

[0270]様々な実施形態では、本発明の方法で有用な医薬組成物は、例として、例えば、固体またはエアロゾルを含む経口製剤、吸入製剤で、全身的、非経口的、皮下、腹腔内、または局所的に、および局所または他の類似の製剤により、または眼内に投与され得る。適切な治療組成物に加えて、そのような医薬組成物は、薬学的に許容される担体および薬物投与を増強および促進することが公知の他の成分を含有し得る。他の可能な製剤、例えばナノ粒子、リポソーム、活性成分を含有する他の調製物、および免疫学に基づくシステムもまた、本発明の方法に従ってそれらの適切なモジュレーターの投与に使用され得る。

[0271]担体は、直接またはリンカー基を介する共有結合、および非共有結合的な会合を含む、様々な方法で対象の薬剤（例えばＩＬ－１８バリアントポリペプチド）を持ち得る。好適な共有結合担体は、タンパク質、例えば、アルブミン、ペプチド、およびアミノデキストランなどの多糖類を含み、その各々が部分の接着の複数の部位を有する。担体はまた、非共有結合的な会合、例えば非共有結合によるかまたはカプセル化により、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）も持ち得る。担体の性質は、本発明の目的のために可溶性または不溶性のいずれかであり得る。

[0272]許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基より小さい）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシン；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート化剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。ｉｎｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過により容易に達成される。

[0273]活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、またはマイクロエマルジョン中に封入してもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０年）に開示されている。

[0274]組成物は、注射剤として、水溶液または水性懸濁液のいずれかとして調製されてもよく；注射前の液体ビヒクルへの溶解または懸濁に好適な固体形態も調製され得る。調製物は、上記で論じられたように、アジュバント効果増強のために乳化されるかまたはリポソームもしくは微粒子、例えばポリラクチド、ポリグリコリドもしくはコポリマーにカプセル化されてもよい。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７，１９９０年およびＨａｎｅｓ，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ２８：９７～１１９頁、１９９７年。本発明の薬剤は、活性成分の持続または拍動放出を可能にするような方法で製剤化され得るデポー注射またはインプラント調製物の形態で投与され得る。医薬組成物は、通常、滅菌、実質的に等張であり、米国食品医薬品局の全ての優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）を完全に満たして製剤化される。

[0275]本明細書で使用される場合、用語「生理学的に許容される」エステルまたは塩は、組成物が投与される対象に有害ではない医薬組成物の任意の他の成分と互換性がある活性成分のエステルまたは塩形態を意味する。

[0276]本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、担体または１つもしくは複数の他のアクセサリー成分との会合に活性成分を運び、次いで、必要または望ましい場合、産物を所望の単回もしくは複数回投与単位へと成形またはパッケージングするステップを含む。

[0277]本明細書で提供される医薬組成物の説明は、主にヒトへの処方投与に好適である医薬組成物に向けられるが、そのような組成物が通常あらゆる種類の動物への投与に好適であることは当業者によって理解されるであろう。組成物を様々な動物への投与に好適にするためのヒトへの投与に好適な医薬組成物の改変は良く理解されており、当獣医学の薬理学者は、そのような改変を、もしあれば単に通常の実験によって設計および実施することができる。

[0278]本発明の方法に有用である医薬組成物は、経口、直腸内、膣内、非経口、局所、肺内、鼻腔内、口腔内、静脈内、経皮、病巣内、皮下、筋肉内、点眼、脊髄内および投与の他の公知の経路に好適な製剤中で調製、パッケージ、または販売され得る。他の検討された製剤は、ナノ粒子、リポソーム調製物、活性成分を含有する他の調製物、および免疫学に基づく製剤を含む。

[0279]本発明の医薬組成物は、単回単位用量として、または複数の単回単位用量としてバルクで調製、パッケージ、または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、既定量の活性成分を含む医薬組成物の個々の量である。活性成分の量は、通常、対象に投与される活性成分の投与量またはそのような投与量の便利な画分、例えばそのような投与量の２分の１または３分の１と等しい。

[0280]本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される担体、および任意のさらなる成分の相対量は多様であり、処置される対象の同一性、サイズ、および状態により、さらに組成物が投与される経路による。例として、組成物は、０．１％と１００％（ｗ／ｗ）の間の活性成分を含み得る。

[0281]活性成分に加えて、本発明の医薬組成物は、１つまたは複数のさらなる薬学的に活性な薬剤をさらに含み得る。

[0282]本発明の医薬組成物の制御放出または持続放出製剤は、従来の技術を使用して作成され得る。

[0283]経口投与に好適な本発明の医薬組成物の製剤としては、限定はされないが、錠剤、硬または軟カプセル剤、カシェ剤、トローチ錠、または腔内錠を含み、それぞれ既定量の活性成分を含有する、別々の固体用量単位の形態で調製、パッケージ、または販売され得る。経口投与に好適な他の製剤としては、限定はされないが、粉末もしくは顆粒製剤、水性もしくは油性懸濁液、水性もしくは油性溶液、またはエマルジョンを含む。

[0284]医薬組成物の製造で使用される薬学的に許容される賦形剤としては、限定はされないが、不活性希釈剤、造粒剤および崩壊剤、結合剤、および平滑剤を含む。公知の分散剤としては、限定はされないが、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムを含む。公知の界面活性剤としては、限定はされないが、ラウリル硫酸ナトリウムを含む。公知の希釈剤としては、限定はされないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、微結晶セルロース、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、およびリン酸ナトリウムを含む。公知の造粒剤および崩壊剤としては、限定はされないが、トウモロコシデンプンおよびアルギン酸を含む。公知の結合剤としては、限定はされないが、ゼラチン、アカシア、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。公知の平滑剤としては、限定はされないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリカ、およびタルクを含む。

[0285]本発明の医薬組成物の液体製剤は、液体形態または使用前に水または別の好適なビヒクルによる再構成を意図した乾燥産物の形態のいずれかで、調製、パッケージ、および販売され得る。

[0286]液体懸濁液は、従来の方法を使用して調製され、水性または油性ビヒクル中で活性成分の懸濁を達成し得る。水性ビヒクルとしては、例えば、水および等張生理食塩水を含む。油性ビヒクルとしては、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、植物油、例えば落花生、オリーブ、ゴマ、またはココナツ油、分画された植物油、および鉱物油、例えば液体パラフィンを含む。液体懸濁液は、限定はされないが、懸濁剤、分散剤または湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、保存剤、緩衝剤、塩、香味剤、着色剤、および甘味剤を含む１つまたは複数のさらなる成分をさらに含み得る。油性懸濁液は、増粘剤をさらに含み得る。

[0287]公知の懸濁剤としては、限定はされないが、ソルビトールシロップ、硬化食用油脂、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アカシアガム、およびセルロース誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、および１５ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。公知の分散剤または湿潤剤としては、限定はされないが、天然に存在するホスファチド、例えばレシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸との、長鎖脂肪族アルコールとの、脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステルとの、または脂肪酸および無水ヘキシトール由来の部分エステルとの縮合産物（例えば、それぞれステアリン酸ポリオキシエチレン、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）を含む。公知の乳化剤としては、限定はされないが、レシチンおよびアカシアを含む。公知の保存剤としては、限定はされないが、メチル、エチル、またはｎ－プロピル－パラ－ヒドロキシベンゾエート、アスコルビン酸、およびソルビン酸を含む。公知の甘味剤としては、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、スクロース、およびサッカリンを含む。油性懸濁液の公知の増粘剤としては、例えば、蜜蝋、固形パラフィン、およびセチルアルコールを含む。

[0288]水性または油性溶媒中の活性成分の液体溶液は、液体懸濁液と実質的に同じ方法で調製されてもよく、主な違いは、活性成分が溶媒中に懸濁されるよりも溶解されることである。本発明の医薬組成物の液体溶液は、液体懸濁液に関して記載された各成分を含んでも良く、懸濁剤は溶媒中の活性成分の溶解を必ずしも助けない。水性溶媒としては、例えば、水および等張生理食塩水を含む。油性溶媒としては、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、植物油、例えば落花生、オリーブ、ゴマ、またはココナツ油、分画された植物油、および鉱物油、例えば液体パラフィンを含む。

[0289]本発明の医薬調製物の粉末および顆粒製剤は、公知の方法を使用して調製され得る。そのような製剤は、対象に直接投与されてもよく、例えば、それへの水性または油性ビヒクルの添加により、錠剤を形成するため、カプセルを充填するため、または水性もしくは油性懸濁液もしくは溶液を調製するために使用され得る。これらの製剤のそれぞれは、１つまたは複数の分散剤または湿潤剤、懸濁剤、および保存剤をさらに含み得る。さらなる賦形剤、例えば充填剤および甘味剤、香味剤または着色剤もまたこれらの製剤中に含まれ得る。

[0290]本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンの形態で調製、パッケージ、または販売され得る。油相は、植物油、例えばオリーブまたは落花生油、鉱物油、例えば液体パラフィン、またはこれらの組合せであり得る。そのような組成物は、１つまたは複数の乳化剤、例えば天然に存在するガム、例えばアカシアガムまたはトラガカントガム、天然に存在するホスファチド、例えばダイズまたはレシチンホスファチド、脂肪酸と無水ヘキシトール、例えばソルビタンモノオレエートの組合せに由来するエステルまたは部分エステル、ならびにそのような部分エステルのエチレンオキシドとの縮合産物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレートをさらに含み得る。これらのエマルジョンは、例えば、甘味剤または香味剤を含むさらなる成分も含有し得る。

[0291]化学組成物により物質を浸透またはコートさせる方法は、当技術分野で公知であり、限定はされないが、化学組成物を表面に堆積させるかまたは結合させる方法、物質の合成の間に物質の構造へと化学組成物を組み込む方法（すなわち、例えば生理的に分解性の物質により）、および続く乾燥ステップありまたはなしで、吸収性の物質へと水溶液または油性溶液または懸濁液を吸収させる方法を含む。

[0292]本明細書で使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」は、対象の組織の身体的な傷によって特徴付けられる投与、および組織の傷を通す医薬組成物の投与の任意の経路を含む。したがって、非経口投与は、限定はされないが、組成物の注射による、外科的切開を通す組成物の適用による、組織に浸透する非外科的な傷を通す組成物の適用による等の、医薬組成物の投与を含む。特に、非経口投与は、限定はされないが、皮膚、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、槽内注射、および腎臓透析注入技術を含むと考えられる。一部の場合では、対象のＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）が皮下に投与される。

[0293]非経口投与に好適な医薬組成物の製剤は、薬学的に許容される担体、例えば滅菌水または滅菌等張生理食塩水と組み合わせた活性成分を含む。そのような製剤は、ボーラス投与または継続投与に好適な形態で調製、パッケージ、または販売され得る。注射用製剤は、単位投与剤形、例えばアンプル中または保存剤を含有する複数用量の容器中で、調製、パッケージ、または販売され得る。非経口投与のための製剤としては、限定はされないが、懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中のエマルジョン、ペースト、および植え込み型の持続放出または生分解性の製剤を含む。そのような製剤は、限定はされないが、懸濁剤、安定剤、または分散剤を含む１つまたは複数のさらなる成分をさらに含み得る。非経口投与のための製剤の一部の実施形態では、活性成分は、再構成された組成物の非経口投与の前に、好適なビヒクル（例えば、滅菌パイロゲンフリー水）による再構成のための乾燥（すなわち、粉末または顆粒）形態で提供される。

[0294]医薬組成物は、滅菌の注射用水性または油性懸濁液もしくは溶液の形態で調製、パッケージ、または販売され得る。この懸濁液または溶液は、公知の技術に従って製剤化されてもよく、活性成分に加えて、さらなる成分、例えば、本明細書に記載の分散剤、湿潤剤、または懸濁剤を含み得る。そのような滅菌の注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば、水または１，３－ブタンジオールを使用して調製され得る。他の許容される希釈剤および溶媒としては、限定はされないが、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ溶液、等張な塩化ナトリウム溶液、および不揮発性油、例えば合成モノ－またはジ－グリセリドを含む。他の有用な非経口的に投与可能な製剤は、微結晶形態中に、リポソーム調製物中に、または生分解性ポリマー系の成分として、活性成分を含むものを含む。持続放出または組込みのための組成物は、薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性物質、例えばエマルジョン、イオン交換樹脂、わずかに可溶性なポリマー、またはわずかに可溶性な塩を含み得る。

[0295]局所投与に好適な製剤としては、限定はされないが、液体または半液体調製物、例えば塗布薬、ローション、水中油型または油中水型エマルジョン、例えば、クリーム、軟膏またはペースト、および溶液または懸濁液を含む。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％～約１０％（ｗ／ｗ）活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の可溶性限界ほど高くてもよい。局所投与のための製剤は、本明細書に記載の１つまたは複数のさらなる成分をさらに含み得る。

[0296]本発明の医薬組成物は、頬側口腔を介する肺内投与に好適な製剤中で調製、パッケージ、または販売され得る。そのような製剤は、活性成分を含み、約０．５～約７ナノメートル、好ましくは約１～約６ナノメートルの範囲の直径を有する乾燥粒子を含み得る。そのような組成物は、便利には、推進剤のストリームが向けられ、粉末を分散することができる乾燥粉末リザーバーを含むデバイスを使用する、または自己噴射する溶媒／粉末分配容器、例えば密閉容器中の低沸点の推進剤に溶解または懸濁された活性成分を含むデバイスを使用する投与のための乾燥粉末の形態である。好ましくは、そのような粉末は、重量では粒子の少なくとも９８％が０．５ナノメートルより大きい直径を有し、数では粒子の少なくとも９５％が７ナノメートルよりも小さい直径を有する粒子を含む。より好ましくは、重量では粒子の少なくとも９５％が１ナノメートルより大きい直径を有し、数では粒子の少なくとも９０％が６ナノメートルよりも小さい直径を有する。乾燥粉末組成物は、好ましくは、糖などの固形微細粉末希釈剤を含み、便利に単位容量形態で提供される。

[0297]低沸点の推進剤は通常、大気圧で、１８．３℃より低い沸点を有する液体推進剤を含む。通常、推進剤は、組成物の５０～９９．９％（ｗ／ｗ）を構成してもよく、活性成分は、組成物の０．１～２０％（ｗ／ｗ）を構成してもよい。推進剤は、さらなる成分、例えば液体非イオン性もしくは固体アニオン性界面活性剤または固体希釈剤（好ましくは、活性成分を含む粒子と同じオーダーの粒子サイズを有する）を含む。

[0298]肺内送達のために製剤化された本発明の医薬組成物はまた、溶液または懸濁液の液滴の形態でも活性成分を提供し得る。そのような製剤は、場合により滅菌であり、活性成分を含み、任意の吸入または噴霧デバイスを使用して便利に投与され得る、水性または希釈アルコール溶液または懸濁液として、調製、パッケージ、または販売され得る。そのような製剤は、限定はされないが、香味剤、例えばサッカリンナトリウム、揮発油、緩衝化剤、界面活性剤、または保存剤、例えばオキシ安息香酸メチルを含む１つまたは複数のさらなる成分をさらに含み得る。投与のこの経路によって提供される液滴は、好ましくは、約０．１～約２００ナノメートルの範囲の平均直径を有する。肺内送達に有用である本明細書に記載の製剤は、本発明の医薬組成物の鼻腔内投与にも有用である。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み、約０．２～５００マイクロメートルの平均粒子を有する粗い粉末である。

[0299]そのような製剤は、すなわち、鼻孔近くに保持された粉末の容器から鼻腔を通る急速吸入により、嗅ぎ薬が取り込まれる方法で投与される。鼻腔投与に好適な製剤は、例えば、活性成分の最少約０．１％（ｗ／ｗ）から最大１００％（ｗ／ｗ）を含み、本明細書に記載のさらなる成分の１つまたは複数をさらに含み得る。

[0300]本発明の医薬組成物は、口腔内投与に好適な製剤中で調製、パッケージ、または販売され得る。そのような製剤は、例えば、従来の方法を使用して作成された錠剤または腔内錠の形態であってもよく、例えば、０．１～２０％（ｗ／ｗ）活性成分、経口溶解性または分解性組成物、ならびに、場合により本明細書に記載のさらなる成分の１つまたは複数を含むバランスを含有してもよい。あるいは、口腔内投与に好適な製剤は、活性成分を含む粉末化もしくはエアロゾル化もしくは微粒化溶液または懸濁液を含み得る。そのような粉末化、エアロゾル化、またはエアロゾル化製剤は、分散される場合、好ましくは、約０．１～約２００ナノメートルの範囲の平均粒子サイズまたは液滴サイズを有し、本明細書に記載のさらなる成分の１つまたは複数をさらに含み得る。

[0301]本発明の医薬組成物は、点眼に好適な製剤中で調製、パッケージ、または販売され得る。そのような製剤は、例えば、水性または油性液体担体中に活性成分の０．１～１．０％（ｗ／ｗ）溶液または懸濁液を含む、例えば、点眼薬の形態であってもよい。そのような液滴は、緩衝化剤、塩、または本明細書に記載のその他のさらなる成分の１つもしくは複数をさらに含み得る。有用である他の点眼製剤は、微結晶形態中またはリポソーム調製物中に活性成分を含むものを含む。

[0302]本明細書で使用される場合、「さらなる成分」は、限定はされないが、以下：賦形剤；界面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤；結合剤；平滑剤；甘味剤；香味剤；着色剤；保存剤；生理的に分解性の組成物、例えば、ゼラチン；水性ビヒクルおよび溶媒；油性ビヒクルおよび溶媒；懸濁剤；分散剤または湿潤剤；乳化剤、鎮痛剤；緩衝剤；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；抗酸化剤；抗体；抗菌剤；安定剤；および薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性物質の１つまたは複数を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得る他の「さらなる成分」は、当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＧｅｎａｒｏ，ｅｄ．，１９８５，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに記載される。

例示的な製剤
[0303]一部の実施形態では、製剤は、ＩＬ－１８ポリペプチドを含む活性成分、ｐＨを調節する１つまたは複数の緩衝化剤、１つまたは複数の安定剤、１つまたは複数の溶媒、界面活性剤、酸化を防止する試薬、および安定剤を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチドの製剤は、Ｌ－ヒスチジン（Ｈｉｓ）、Ｌ－ヒスチジン塩化水素（Ｈｉｓ－ＨＣｌ）、スクロース、ポリソルベート８０、Ｌ－メチオニンおよびＥＤＴＡの２ナトリウム塩の１つまたは複数を含む。

[0304]実験により到達したＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の適切な製剤の一例は、（１）ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）；（２）ｐＨを６．２と６．８の間（例えば、一部の場合では６．５）に維持する緩衝化剤（例えば、８～１２ｍＭ、例えば１０ｍＭのＨｉｓ／Ｈｉｓ－ＨＣｌ）；（３）糖（例えば、６～１０％；一部の場合では８％のスクロース）；（４）キレート化剤（例えば、０．０５～１．５ｍＭ、例えば一部の場合では０．１ｍＭのＥＤＴＡ）；（５）酸化を防止する薬剤（例えば、４～６ｍＭ、例えば一部の場合では５ｍＭのＬ－メチオニン）；および（６）タンパク質吸着を防ぐ薬剤（例えば、０．０１～０．０３％ｗ／ｖ、例えば０．０２％のＰＳ８０）を含む。

[0305]したがって、一部の場合では、製剤は：（１）ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）；（２）１０ｍＭのＨｉｓ／Ｈｉｓ－ＨＣｌ；（３）約８％のスクロース；（４）約０．１ｍＭのＥＤＴＡ；（５）約５ｍＭのＬメチオニン；および（６）約０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ８０を含む。

[0306]上記の一部の実施形態（例えば、製剤が皮下に投与される場合）では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）は、１０～１００ｍｇ／ｍｌ（例えば、１０～９０、１０～７５、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、２５～１００、２５～９０、２５～７５、２５～６０、２５～５０、２５～４０、２５～３０、３０～１００、３０～９０、３０～７５、３０～６０、３０～５０、３０～４０、４０～１００、４０～９０、４０～７５、４０～６０、４０～５０、５０～１００、５０～９０、５０～７５、または５０～６０ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度で存在するであろう。上記の一部の実施形態（例えば、製剤が皮下に投与される場合）では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）は、５０～６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在するであろう。上記の一部の実施形態（例えば、製剤が皮下に投与される場合）では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８、ＤＲＩＬ－１８、Ｄ２ＤＩＬ－１８、安定化されたＤＲＩＬ－１８、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８等）（例えば、配列番号１９）は、２０～３０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在するであろう。

[0307]一部の実施形態では、医薬品はバッチで製剤化される。一部の実施形態では、バッチは、１．５Ｌである。他の実施形態では、バッチは、１０．５Ｌである。バッチは、例えば、配列番号１９のＩＬ－１８ポリペプチド、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－ヒスチジン塩化水素、スクロース、ポリソルベート８０、Ｌ－メチオニン、ＥＤＴＡの２ナトリウム塩、および注射用水を含み得る。一部の実施形態では、バッチは、４０ｇと５０ｇの間の配列番号１９、１．００ｇと２．００ｇの間のＬ－ヒスチジン；０．２５ｇと１．００ｇの間のＬ－ヒスチジン塩化水素、１００．００ｇと１５０．００ｇの間のスクロース；０．０１ｇと０．６０ｇの間のポリソルベート８０；１ｇと１．５ｇの間のＬ－メチオニン；０．００５ｇと０．１ｇの間のＥＤＴＡの２ナトリウム塩；および約１．５Ｌに十分な量の水を含む。一部の実施形態では、バッチは、約４５ｇの配列番号１９、約１．９１ｇのＬ－ヒスチジン；約０．５７ｇのＬ－ヒスチジン塩化水素、約１２０．０ｇのスクロース；約０．３０ｇのポリソルベート８０；約１．３１ｇのＬ－メチオニン；約０．０６ｇのＥＤＴＡの２ナトリウム塩；および約１．５Ｌに十分な量の水を含む。一部の実施形態では、１０．５Ｌのバッチは、３００ｇと３５０ｇの間の配列番号１９、１０．００ｇと１５．００ｇの間のＬ－ヒスチジン；３．５０ｇと４．５０ｇの間のＬ－ヒスチジン塩化水素、８００．００ｇと９００．００ｇの間のスクロース；１．５ｇと２．５ｇの間のポリソルベート８０；７．００ｇと８．００ｇの間のＬ－メチオニン；０．１ｇと０．６ｇの間のＥＤＴＡの２ナトリウム塩；および約１０．５Ｌに十分な量の水を含む。一部の実施形態では、１０．５Ｌのバッチは、約３１５ｇの配列番号１９、約１３．３４ｇのＬ－ヒスチジン；約３．９９ｇのＬ－ヒスチジン塩化水素、約８４０．０ｇのスクロース；約２．１ｇのポリソルベート８０；約７．８８ｇのＬ－メチオニン；約０．４２ｇのＥＤＴＡの２ナトリウム塩；および約１．５Ｌに十分な量の水を含む。

[0308]本開示の製剤は、例えば、本明細書に開示される化合物またはポリペプチドの活性を安定化または維持するのを助けるｐＨに維持され得る。本開示の製剤のｐＨは、例えば、約３～約１２の範囲であり得る。組成物のｐＨは、例えば、約３～約４、約４～約５、約５～約６、約６～約７、約７～約８、約８～約９、約９～約１０、約１０～約１１、または約１１～約１２のｐＨ単位の範囲であり得る。組成物のｐＨは、例えば、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２のｐＨ単位であり得る。組成物のｐＨは、例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、または少なくとも９のｐＨ単位であり得る。組成物のｐＨは、例えば、最大５、最大６、最大７、最大８、最大９、最大１０、最大１１、または最大１２ｐＨ単位であり得る。

[0309]本明細書に開示される製剤は、約５．５～約８のｐＨを有し得る。例えば、本開示の製剤は、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、または約８．０のｐＨを有し得る。一部の実施形態では、ｐＨは、６．５±０．６、６．５±０．５、６．５±０．４、６．５±０．３、６．５±０．２、６．５±０．１、約６．５、または６．５である。一部の実施形態では、ｐＨは、６．２±０．６、６．２±０．５、６．２±０．４、６．２±０．３、６．２±０．２、６．２±０．１、約６．２、または６．２である。一部の実施形態では、ｐＨは、６．８±０．６、６．８±０．５、６．８±０．４、６．８±０．３、６．８±０．２、６．８±０．１、約６．８、または６．８である。一部の実施形態では、ｐＨは、７．４±０．６、７．４±０．５、７．４±０．４、７．４±０．３、７．４±０．２、７．４±０．１、約７．４、または７．４である。一部の実施形態では、ｐＨは約６．２～約６．８である。ｐＨが調合によって所望の範囲外である場合、ｐＨは、十分な薬学的に許容される酸および塩基を使用することによって調整され得る。

[0310]一部の実施形態では、本明細書に開示される製剤は、緩衝化剤を含み得る。一部の実施形態では、緩衝化剤は安定なｐＨの維持および本明細書に開示される化合物またはポリペプチドの安定化を助けるのに寄与する。一部の実施形態では、緩衝系は、ｐＨ５．５～７．４の範囲の全てまたは一部をオーバーラップする緩衝範囲を有する少なくとも１つの緩衝化剤を含む。一部の実施形態では、緩衝剤は、約６．５±０．５、または６．２±０．５のｐＫａを有する。

投与
[0311]動物、好ましくはヒトに投与され得る、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の典型的な投与量は、動物のキログラム体重当たり０．００１ｍｇ～約１０ｍｇ（ｍｐｋ）の範囲の量である。一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、０．０１～４ｍｐｋ（例えば、０．０１～３．５、０．０１～３．３、０．０１～３、０．０１～１．５、０．０１～２、０．０１～１．５、０．０１～１、０．０１～０．５、０．０１～０．３５、０．０２５～４、０．０２５～３．５、０．０２５～３．３、０．０２５～３、０．０２５～１．５、０．０２５～２、０．０２５～１．５、０．０２５～１、０．０２５～０．５、０．０２５～０．３５、０．０５～４、０．０５～３．５、０．０５～３．３、０．０５～３、０．０５～１．５、０．０５～２、０．０５～１．５、０．０５～１、０．０５～０．５、０．０５～０．３５、０．１～４、０．１～３．５、０．１～３．３、０．１～３、０．１～１．５、０．１～２、０．１～１．５、０．１～１、０．１～０．５、０．１～０．３５、０．２５～４、０．２５～３．５、０．２５～３．３、０．２５～３、０．２５～１．５、０．２５～２、０．２５～１．５、０．２５～１、０．２５～０．５、０．２５～０．３５、０．５～４、０．５～３．５、０．５～３．３、０．５～３、０．５～１．５、０．５～２、０．５～１．５、または０．５～１ｍｐｋ）の範囲の用量で個体に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、０．０５～３．５ｍｐｋ（例えば、０．０５～３．３、０．０５～３、０．０５～１．５、０．０５～２、０．０５～１．５、０．０５～１、０．０５～０．５、０．０５～０．３５、０．１～３．５、０．１～３．３、０．１～３、０．１～１．５、０．１～２、０．１～１．５、０．１～１、０．１～０．５、０．１～０．３５、０．２５～３．５、０．２５～３．３、０．２５～３、０．２５～１．５、０．２５～２、０．２５～１．５、０．２５～１、０．２５～０．５、０．２５～０．３５、０．５～３．５、０．５～３．３、０．５～３、０．５～１．５、０．５～２、０．５～１．５、または０．５～１ｍｐｋ）の範囲の用量で個体に投与される。一部の場合では、化合物は１日数回の頻度で動物に投与され得るか、または低頻度、例えば１日１回、週に１回、２週間ごとに１回、月に１回、またはより少ない頻度、例えば数ヶ月ごとに１回または年に１回以下で投与され得る。

[0312]しかしながら、上記したように、一部の場合ではそれは週に１回送達されるかまたはそれ以下である。

投与の方法
投与の頻度
[0313]当業者は、本明細書で論じられるＩＬ－１８タンパク質が、急性的に（例えば、短期間にわたり）または慢性的に（例えば、数ヶ月または１年以上など、長期間にわたり）投与され得ることを理解するであろう。当業者は、それらが単独で、または他の薬剤との任意の組合せで投与され得ることを理解するであろう。さらに、本明細書に記載のＩＬ－１８タンパク質は、時間的な意味で単独でまたは任意の組合せで投与されてもよく、それらは互いに同時に、および／または前に、および／または後に投与されてもよい。当業者は、本明細書で提供する開示に基づき、ＩＬ－１８タンパク質組成物を使用して、それを必要とする対象において疾患または障害を処置することができ、そのようなタンパク質は単独でかまたは治療結果に影響する別の薬剤との任意の組合せで使用され得ることを理解するであろう。

[0314]驚くべきことに、以下の実施例で実証されたように、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）の投与は、一部の場合では、頻繁に投与され過ぎる、例えば週当たり１回より多い場合、有害でありうる（例えば、毒性～貧血を起こし得る）。例えば、以下の実施例は、霊長類（サル）での週あたり２回のＤＲ－１８の投与は、生理食塩水で処置したサルと比較して、用量依存的にヘモグロビンが減少した。反対に、週に１回の投与は、生理食塩水処置と比較してヘモグロビンレベルの減少をもたらさなかった。

[0315]したがって、一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、週当たり１回（週当たり１用量）以下（例えば２週間当たり１回以下、月当たり１回以下）の頻度で個体に投与される。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）は、週当たり１回から６ヶ月当たり１回（例えば、週当たり１回から４ヶ月当たり１回、週当たり１回から２ヶ月当たり１回、または週当たり１回から月当たり１回）の範囲の頻度で個体に投与される。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、週当たり１回から月当たり１回の範囲の頻度で個体に投与される。

[0316]一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、約１週間当たり約１回個体に投与される。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、約２週間ごとに約１回個体に投与される。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、約月当たり約１回個体に投与される。一部の場合では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ－１８、安定化されたＩＬ－１８バリアント、ＤＲＩＬ－１８バリアント、Ｄ２ＤＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアント、安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）は、週当たり１回よりも多い頻度で個体に投与されない。

疾患
[0317]一部の実施形態では、本開示の方法は、ＭＨＣクラスＩの表面発現を欠損する腫瘍またはがん腫瘍；例えば、ＭＨＣ遺伝子座のＢ２ｍを欠損するか、または抗原提示の他のメンバーおよび／または抗原担持複合体、例えばタパシンに突然変異を有する腫瘍の処置または防止に有用である。

[0318]代謝疾患および障害は、様々な代謝および内分泌関連疾患および障害を含む。以下は、本発明の方法および組成物によって処置または防止され得る代謝および内分泌関連疾患および障害の非限定的な例である：肥満、糖尿病、糖尿病の予備軍、ＩＩ型糖尿病、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、高血糖、メタボリックシンドローム、脂質異常症、高トリグリセリド血症、および高コレステロール血症。

[0319]本発明の組成物および方法を使用して処置または防止され得る他の疾患および障害の非限定的な例は、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、および低免疫活性を含む。一部の実施形態では、ウイルス感染は、ポックスウイルス、天然痘ウイルス、伝染性軟属腫、ＨＰＶ感染、およびウイルスによって引き起こされるイボの少なくとも１つである。一部の実施形態では、感染は全身感染である。一部の実施形態では、ウイルス感染は、ワクシニアウイルス感染である。一部の実施形態では、ウイルス感染は、全身ワクシニアウイルス感染である。一部の実施形態では、細菌感染は敗血症である。一部の実施形態では、低免疫活性は、例えば、化学療法によって引き起こされ得る好中球減少症である。

[0320]本発明の組成物および方法を使用して処置または防止され得る他の疾患および障害の非限定的な例は、黄斑変性を含む。例えば、一部の場合では、疾患または障害は、滲出型黄斑変性であり、一部の場合では、疾患または障害は、滲出型加齢関連黄斑変性である。一部のそのような場合では、ＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）は、抗血管新生剤として使用され得る。例えば、対象のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）は、一部の場合では、脈絡膜新生血管を弱めることができる。

[0321]一部の実施形態では、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）は、疾患または障害の処置または防止に有用である。様々な実施形態では、疾患または障害は、がんまたは肥満および糖尿病を含む代謝疾患もしくは障害である（例えば、対象の方法は体脂肪の減少をもたらし得る）。したがって、一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１つのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を含む。他の実施形態では、少なくとも１つのＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８、例えば安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントまたは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアント等）（例えば、配列番号１９）を投与する方法が実施され、疾患または障害、例えば、限定はされないが、がんまたは代謝疾患もしくは障害を処置する。

[0322]以下は、本開示の方法および組成物によって処置または防止され得るがんの非限定的な例である：急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、虫垂がん、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳および脊髄腫瘍、脳幹膠腫、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系非定型奇形腫瘍／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、子宮頸がん、小児視経路腫瘍、脊索腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、上衣芽腫、上衣腫、食道がん、ユーイング腫瘍、頭蓋外がん、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、肝外がん、眼がん、菌状息肉腫、胆嚢がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））がん、消化管がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ｇｉｓｔ）、胚細胞腫瘍、妊娠性がん、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠芽腫、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視床下部および視経路膠腫、視床下部腫瘍、眼内（眼）がん、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓（腎臓細胞）がん、ランゲルハンス細胞がん、ランゲルハンス細胞組織球症、咽頭がん、白血病、口唇および口腔がん、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、マクログロブリン血症、骨および骨肉腫の悪性線維性組織球腫（ｈｉｓｔｉｏｃｖｔｏｍａ）、髄芽腫、髄上皮腫、黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、潜在性原発巣の転移性扁平上皮頸部がん、口腔がん（ｍｏｕｔｈｃａｎｃｅｒ）、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、真菌症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄性白血病（ｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、上咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん（ｏｒａｌｃａｎｃｅｒ）、口腔がん（ｏｒａｌｃａｖｉｔｙｃａｎｃｅｒ）、中咽頭がん、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、骨の骨肉腫および悪性線維性組織球腫、卵巣、卵巣がん、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、乳頭腫症、傍神経節腫、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、中間型松果体実質腫瘍、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系がん、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎臓細胞（腎臓）がん、腎盂および尿管がん、第１５染色体のｎｕｔ遺伝子を含む気道がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、セザリー症候群、皮膚がん（黒色腫）、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟組織がん、軟組織肉腫、扁平上皮細胞がん、扁平上皮頸部がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、咽頭がん、胸腺腫および胸腺がん、胸腺がん、移行上皮がん、腎盂および尿管の移行上皮がん、絨毛性腫瘍、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、視経路および視床下部膠腫、外陰がん、ワンデンストレーム高ガンマグロブリン血症、およびウィルムス腫瘍。

[0323]一部の非限定的な例では、がんは、起源の組織学的組織よってではなく、その分子特徴によって既定される。例えば、高い腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）を有する腫瘍、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を有する腫瘍、ＭＨＣクラスＩの表面発現が欠損するかまたは減少した腫瘍（例えば、ベータ２マイクログロブリンまたはタパシンの欠失による）、または高レベルのＩＬ－１８ＢＰを発現する腫瘍。一部の場合では、これらの分子特徴は、次世代シークエンシング（例えば、ＴＭＢ／ＭＳＩ）によって決定される。一部の場合では、これらの分子特徴は、免疫組織化学、免疫蛍光法、またはフローサイトメトリーによって決定される。したがって、本開示の方法および組成物によって処置または防止され得るがんの非限定的な例は、固形腫瘍がん、液体がん、血液がん、奇形腫、肉腫、およびがんを含む。

[0324]一部の実施形態では、本開示の組成物および方法は、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に耐性である腫瘍またはがんを処置するために有用である。免疫チェックポイント阻害剤の例としては、限定はされないが、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ）などの抗ＰＤ１剤、抗ＰＤ－Ｌ１抗体などの抗ＰＤ－Ｌ１剤、抗ＣＴＬＡ４（例えば、イピリムマブ）、抗ＴＩＭ３、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＬＡＧ３、抗Ｂ７Ｈ３、抗Ｂ７Ｈ４、抗ＶＩＳＴＡ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ４７、抗ＳＩＲＰアルファ、抗ＣＤ４８、抗ＣＤ１５５、抗ＣＤ１６０、抗ＴＲＥＭ２、抗ＩＤＯ１、抗アデノシン２Ａ受容体、抗アリール炭化水素受容体、抗ＫＩＲ、抗ＬＩＬＲＢ２を含む。免疫チェックポイント阻害剤の標的の例としては、限定はされないが、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、およびＬＩＬＲＢ２を含む。

[0325]したがって、免疫チェックポイント阻害剤の例としては、タンパク質、例えば：ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、およびＬＩＬＲＢ２を阻害する薬剤を含む。一部の場合では、対象の安定化されたＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント、Ｄ２Ｄ－ＩＬ－１８バリアント）（例えば、配列番号１９）は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ２、またはこれらの任意の組合せを阻害する薬剤）と共投与される。

[0326]一部の実施形態では、本開示の組成物および方法は、高レベルのＩＬ－１８ＢＰ（例えば、循環している、もしくは腫瘍によって発現される）と関連するがん、またはＩＬ－１８Ｒが浸潤性Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞上で発現される腫瘍と関連するがんを処置するのに有用である。

[0327]したがって、本発明は、疾患もしくは障害、またはその関連する兆候、症状もしくは病状の処置のための、それを必要とする細胞、組織、臓器、または対象への、治療有効量のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）、組換えＩＬ－１８バリアントポリペプチド、活性ＩＬ－１８バリアントポリペプチド断片（例えば、ＩＬ－１８バリアントペプチドなど）の投与による、疾患または障害の防止および処置に関する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される疾患または障害を有する、有することが疑われる、または有するリスクがある対象に、治療有効量のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）、組換えＩＬ－１８バリアントポリペプチド、活性ＩＬ－１８バリアントポリペプチド断片（例えば、ＩＬ－１８バリアントペプチドなど）を投与する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される疾患または障害を有する、有することが疑われる、または有するリスクがある対象の細胞、組織または臓器に、治療有効量のＩＬ－１８バリアントポリペプチド（例えば、安定化されたＩＬ－１８）、組換えＩＬ－１８バリアントポリペプチド、活性ＩＬ－１８バリアントポリペプチド断片（例えば、ＩＬ－１８バリアントペプチドなど）を投与する方法を提供する。

キット
[0328]本発明はまた、本発明の方法において有用なキットにも関する。そのようなキットは、例えば、ＩＬ－１８ポリペプチド（例えば、安定化されたＤＲＩＬ－１８バリアントもしくは安定化されたＤ２ＤＩＬ－１８バリアントなどの安定化されたＩＬ－１８）（例えば、配列番号１９）および／またはＩＬ－１８バリアントポリペプチドもしくはＩＬ－１８バリアント核酸を定量的に分析するための材料、および／またはＩＬ－１８バリアントポリペプチドもしくはＩＬ－１８バリアント核酸の活性を評価するための材料、および／または使用説明書材料を含む、本明細書の他の箇所に記載される方法のいずれかにおいて有用な成分の種々の組合せを含む。例えば、一部の実施形態では、キットは、生体試料中のＩＬ－１８バリアント核酸の定量化にとって有用な成分を含む。別の実施形態では、キットは、生体試料中のＩＬ－１８バリアントポリペプチドの定量化にとって有用な成分を含む。さらなる実施形態では、キットは、生体試料中のＩＬ－１８バリアントポリペプチドの活性（例えば、酵素活性、リガンド結合活性など）の評価にとって有用な成分を含む。

[0329]さらなる実施形態では、キットは、使用説明書材料を含有する、処置を必要とする対象に投与される処置の有効性をモニタリングするためのアッセイの成分および対象から得られた生体試料におけるＩＬ－１８シグナル伝達のレベルが処置の投与の間または後にモジュレートされるかどうかを決定するための成分を含む。種々の実施形態では、ＩＬ－１８シグナル伝達のレベルが対象から得られた生体試料においてモジュレートされるかどうかを決定するために、ＩＬ－１８シグナル伝達のレベルを、陽性対照、陰性対照、歴史的対照、歴史的基準、または生体試料中の別の参照分子のレベルなどの、キットに含まれる少なくとも１つの比較対照のレベルと比較する。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１８シグナル伝達および参照分子の比を決定して、処置のモニタリングを助ける。

[0330]本発明は、以下の実験例を参照して詳細にさらに説明される。これらの実施例は、例示目的でのみ提供され、別途特定しない限り、限定を意図するものではない。したがって、本発明は、以下の実施例に限定されると解釈されるべきでは全くないが、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになる任意かつ全ての変化を包含すると解釈されるべきである。

[0331]さらに説明はないが、当業者であれば、前記説明および以下の実証例を使用して、本発明を作製し、利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。以下の実施例はしたがって、本開示の残りの部分を限定と解釈されるべきものでは全くない。

実施例１
ＩＬ－１８バリアントポリペプチド
[0332]ＩＬ－１８は、Ｔ、ＮＫ、および骨髄性細胞を刺激することができる炎症性サイトカインである。抗腫瘍免疫細胞を刺激するその能力を考慮して、それはがんのための免疫治療剤として提唱されている。本明細書に示されるように、組換えＩＬ－１８処置の治療有効性は、その天然の内因性可溶性阻害剤ＩＬ－１８ＢＰの上方調節によって大きく制限され得る。本開示は、ＩＬ－１８ＢＰへの最小限の結合を示すヒトとマウスの両方のＩＬ－１８のバリアントの開発に一部基づく。サイトカインバリアントは、数十万から１００万倍を超えて受容体（ＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰ）に対する変更された相対的優先性を示す。これらのバリアントは、単剤療法として、および抗ＰＤ－１などの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、の両方で前臨床腫瘍モデルにおける強力な抗腫瘍活性を有する。さらなる適用として、ＩＬ－１８はまた、よく確立された抗肥満役割も有し、バリアントの投与はＷＴＩＬ－１８処置と比較して体脂肪組成を大きく低減させることが本明細書で示される。したがって、新しいバリアントは、腫瘍免疫療法に加えて、内分泌学／代謝／肥満における適応を有する。

[0333]また、ＩＬ－１８ＢＰのみに結合し、ＩＬ－１８Ｒαへの結合が存在しないか、または大きく減少することによってＩＬ－１８ＢＰアンタゴニストとして作用するＩＬ－１８バリアントのさらなるセットも本明細書に記載される。これらのタンパク質を使用して、ＩＬ－１８ＢＰを中和することによって内因性ＩＬ－１８の活性を増強することができることが想定される。

[0334]これらの実験において用いられる材料および方法を、ここで記載する。

タンパク質の発現および精製
[0335]ヒトＩＬ－１８、マウスＩＬ－１８（アミノ酸１～１５７）およびそのバリアントを、ｇＢｌｏｃｋｓ（ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＤＮＡＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＩＤＴ）としてアセンブルし、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｒｏｓｅｔｔａ株中でのＮ末端ＳＵＭＯタグ付およびＣ末端ヘキサヒスチジンタグ付タンパク質の発現のためにｐＥＴ２８ａ－ｓｍｔベクター中にクローニングした。タンパク質発現を、１６℃で２０時間、０．５ｍＭＩＰＴＧを用いて誘導した。Ｎｉキレート樹脂を使用して融合タンパク質を最初に精製した後、ＳＵＭＯプロテアーゼを用いてＳＵＭＯタグを切断した。次いで、凝集体を２０％硫酸アンモニウムで沈降させ、標的タンパク質を７０％硫酸アンモニウムで沈降させる、連続硫酸アンモニウム切断によって、凝集体からタンパク質を分離した。タンパク質ペレットを再懸濁し、Ｎｉキレート樹脂に再度適用して、ＳＵＭＯタグを除去し、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４を用いる内毒素除去洗浄にかけた。最後に、溶出したタンパク質を、ＰＤ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってＰＢＳに緩衝液交換した。タンパク質試料を、ＦＰＬＣ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）およびＳＥＣ６５０カラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーによって単分散性について試験した。

[0336]ヒトＩＬ－１８Ｒα細胞外ドメイン（アミノ酸１９～３２９）、ＩＬ－１８Ｒβ細胞外ドメイン（アミノ酸１５～３５６）、およびＩＬ－１８ＢＰ（アミノ酸３１～１９４）を分泌させ、バキュロウイルス発現系によって精製した。簡単に述べると、全ての構築物配列を、Ｎ末端ｇｐ６７シグナルペプチドならびにＣ末端ＡｖｉＴａｇ（商標）およびヘキサヒスチジンタグと共にｐＡｃＢＮ－ＢＨ３ベクター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中にクローニングした。ＳＦ９００ＩＩＳＦＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、２７℃で培養したツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（Ｓｆ９）昆虫細胞に、プラスミド構築物をトランスフェクトして、高力価組換えウイルスを確立した後、増幅した。ＩｎｓｅｃｔＸｐｒｅｓｓ培地（Ｌｏｎｚａ）中、２７℃で増殖させたイラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｕｌｓｉａｎｉ）（Ｈｉｇｈ－Ｆｉｖｅ）昆虫細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にウイルスを感染させて、組換えタンパク質を発現させた。感染の３日後、Ｎｉ－ＮＴＡ（ＱＩＡＧＥＮ）親和性クロマトグラフィーによってタンパク質を抽出し、濃縮し、１０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）および１５０ｍＭＮａＣｌ中で平衡化させたＳＥＣ６５０サイジングカラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて９８％を超える均一度まで精製した。

[0337]マウスＩＬ－１８Ｒα細胞外ドメイン（アミノ酸１９～３２９）およびＩＬ－１８ＢＰ（アミノ酸３１～１９４）を、Ｅｘｐｉ２９３発現系（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して分泌タンパク質として産生させた。簡単に述べると、全ての構築物配列を、Ｎ末端Ｈ７シグナルペプチドならびにＣ末端ＡｖｉＴａｇ（商標）およびヘキサヒスチジンタグと共にＢａｃＭａｍ発現ベクターｐＥＺＴ＿Ｄ＿Ｌｕｘ中にクローニングした。Ｅｘｐｉ２９３発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中、３７℃で培養したＥｘｐｉ２９３細胞に、製造業者の使用説明書に従ってＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ２９３ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＫｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してプラスミドをトランスフェクトした。トランスフェクションの３～５日後、細胞を収獲した。タンパク質精製手順は、ヒトタンパク質と同じであった。

[0338]タンパク質のビオチン化のために、Ｃ末端ビオチンアクセプターペプチド（ＡｖｉＴａｇ）－ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥを、全てのＩＬ－１８受容体構築物に融合させた。タンパク質のビオチン化を、０．１ｍＭビシン（ｐＨ８．３）、１０ｍＭＡＴＰ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および０．５ｍＭビオチン（Ｓｉｇｍａ）中の可溶性ＢｉｒＡリガーゼ酵素を用いて実行した。タンパク質を、上記のように、ＳＥＣ６５０カラム上でのサイズ排除によって精製した。

ＩＬ－１８の酵母ディスプレイ
[0339]ヒトおよびマウスＩＬ－１８遺伝子ブロック（ＩＤＴ）を合成し、ベクターｐＹＡＬ中にクローニングし、サッカロミセス・セレビジア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）株ＥＢＹ１００上にディスプレイさせた。ＩＬ－１８酵母の個々のコロニーを、ＳＤＣＡＡ液体培地中、３０℃で一晩増殖させ、２０℃で１日間、ＳＧＣＡＡ液体培地中で誘導した。酵母上でのＩＬ－１８ディスプレイレベルを、抗ｃＭｙｃタグ抗体（抗ｍｙｃ－ＰＥ；ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用するフローサイトメトリーによって検証した。ビオチン化ＩＬ－１８Ｒα（ＩＬ－１８Ｒβを含む、もしくは含まない）またはビオチン化ＩＬ－１８ＢＰを用いた受容体染色を、０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭＥＤＴＡ（ＰＢＥ）を添加したＰＢＳ中、氷上で実施した。全ての分析を、ＳｏｎｙＳＡ３８００フローサイトメーター上で実施した。

ヒトＩＬ－１８ライブラリーの構築および選択
[0340]第１のヒトデコイ耐性ＩＬ－１８ライブラリーについて、ｈＩＬ－１８／ｈＩＬ－１８Ｒα／ｈＩＬ－１８Ｒβ複合体（タンパク質データバンク（ＰＤＢＩＤ）コード３ＯＷ４）の構造を、ＩＬ－１８／ＩＬ－１８ＢＰ（ＰＤＢＩＤ３Ｆ６２）の構造と整列させることによって、ｈＩＬ－１８中の１４のｈＩＬ－１８ＲαおよびｈＩＬ－１８ＢＰ接触残基（表１）を、相同位置から同定した。これらの残基を無作為化するライブラリーを、表２に列挙される縮重プライマーを用いるアセンブリーＰＣＲを使用して構築した。ライブラリーは、約１．９６×１０^１１のユニークなタンパク質配列の理論的多様性を有していた。ｐＹＡＬベクターに対する相同性を有するプライマーを用いてＰＣＲ産物をさらに増幅し、線状化されたｐＹＡＬと一緒にＥＢＹ１００酵母中に同時電気穿孔した。得られるライブラリーは、２．５×１０^８個の形質転換体を含有していた。第２のＶ２．０ヒトデコイ耐性ＩＬ－１８ライブラリーについて、ｈＩＬ－１８中の１１のｈＩＬ－１８ＲαおよびｈＩＬ－１８ＢＰ接触残基を選択して無作為化したところ、３．４４×１０^９のバリアントの理論的多様性を示した（図７Ａに記載される）。これらの残基を無作為化するライブラリーを、縮重プライマーを用いるアセンブリーＰＣＲを使用して構築し、ｐＹＡＬと共にＥＢＹ１００酵母中に同時電気穿孔した。得られるライブラリーは、６×１０^８個の形質転換体の多様性を有していた。

[0341]

[0342]

[0343]両ライブラリーについて、形質転換された酵母を回収し、３０℃で液体合成デキストロースカザミノ酸（ＳＤＣＡＡ）培地中で拡大し、液体合成ガラクトースカザミノ酸（ＳＧＣＡＡ）培地中で１：１０に希釈することによって誘導し、２０℃で２４時間培養した。適切な数の誘導酵母を各ラウンドにおいて使用して、各ステップでライブラリーの予想される多様性の少なくとも１０倍のカバー率、および少なくとも１０^８個の細胞を確保した。全ての選択ステップを、ＰＢＥ緩衝液（０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳ）を使用して４℃で実行した。第１世代のライブラリーについては、各ラウンドの選択試薬は、表３に列挙される。ラウンド１について、酵母を抗Ｃｙ５／ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）およびＬＳＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて対抗選択して、非特異的ビーズ結合剤を除去した。１μＭビオチン化ｈＩＬ－１８Ｒαを用いて４℃で１時間、酵母を標識した後、ＳＡ／ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７マイクロビーズおよびＬＳＭＡＣＳカラムを用いて磁気選択することによって、陽性選択を実施した。ラウンド２について、ラウンド１と同一の陽性選択を用いて、１μＭのビオチン化ＩＬ－１８ＢＰを用いて対抗選択を実施した。ラウンド３～５について、１００ｎＭ（ラウンド３～４）または１０ｎＭ（ラウンド５）のビオチン化ＩＬ－１８Ｒαおよび２５０ｎＭの予め形成されたビオチンキャップ付ｈＩＬ－１８ＢＰ／ＳＡ－ＰＥ四量体と共に酵母をインキュベートすることによって、選択を実施した。結合の完了後、酵母を洗浄し、ＳＡＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７で標識して、ＩＬ－１８Ｒαを検出した。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート化抗ｃＭｙｃ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色することによってディスプレイレベルを決定し、上から１％のディスプレイ正規化されたＩＬ－１８Ｒα結合剤（ＩＬ－１８ＢＰ非結合剤のうちの）を、ＳｏｎｙＳＡ３８００細胞選別装置を用いるＦＡＣＳを使用して単離した。各ラウンドの選択後、回収された酵母を、３０℃で一晩、ＳＤＣＡＡ培地中で拡大した後、２０℃で２４時間、ＳＧＣＡＡ培地中で１：１０希釈によって誘導した。

[0344]Ｖ２．０ヒトＤＲ－ＩＬ－１８ライブラリーを同様の様式で選択したが、特異的選択ステップは図７Ｂに詳述されている。

マウスＩＬ－１８ライブラリーの構築および選択
[0345]構築および選択手順は、ヒトＩＬ－１８と同様であり、以下の変化を含む。ライブラリー構築は、ｉｎｓｉｌｉｃｏでモデル化されたマウスＩＬ－１８／受容体複合体構造によって情報提供された（Ｐｈｙｅｒ２．０によって予測された）。表４に記載されるプライマーを使用して、無作為化のための１３個の位置が選択された（表３）。ｐＹＡＬとの同時電気穿孔により、４×１０^８個の形質転換体のライブラリーが得られた。各ラウンドのために使用された選択試薬を、表５に列挙する。

[0346]

[0347]

[0348]

表面プラズモン共鳴
[0349]ＢｉａｃｏｒｅＴ１００を使用して実験を行い、２５℃で実行した。ビオチン化ＩＬ－１８ＲαまたはＩＬ－１８ＢＰをＢｉａｃｏｒｅビオチン捕捉チップ（ＳｅｒｉｅｓＳＣＡＰセンサーチップ、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に固定化して、約５０ＲＵ（ＩＬ－１８Ｒα）または約１０ＲＵ（ＩＬ－１８ＢＰ）のＲｍａｘを得た。ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水－Ｐ＋緩衝液（１０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．００５％サーファクタントＰ２０）中でのＩＬ－１８バリアントの連続希釈液を用いて測定を行った。再生緩衝液（３／４（ｖ／ｖ）の８Ｍ塩酸グアニジンおよび１／４（ｖ／ｖ）の１Ｍ水酸化ナトリウム）の３回の６０ｓｅｃの注入によって、表面を再生させた。観察の増加のために複数のチャネルにおいて同時に実験を実施した。全てのデータを、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを用いるＢｉａｃｏｒｅＴ１００評価ソフトウェアバージョン２．０を用いて分析した。

細胞系
[0350]ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８センサー細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を、１００μｇ／ｍＬのノルモシン、３０μｇ／ｍＬのブラスチシジン、１８０μｇ／ｍＬのゼオシン、および２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンを添加した完全培地（１０％熱不活化ＦＢＳ、２ｍＭＬ－グルタミン、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、および５０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ）中で維持した。ＹＵＭＭＥＲ１．７黒色腫細胞を、以前に記載されたように培養および調製した（Ｗａｎｇら、２０１７、ＰｉｇｍｅｎｔＣｅｌｌＭｅｌａｎｏｍａＲｅｓ．、３０（４）：４２８～４３５）。

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅサイトカイン活性アッセイ
[0351]サイトカイン活性の測定のために、平底９６ウェルプレートのウェルあたり５０，０００個のＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８センサー細胞を、２００μＬの総体積の完全培地中、連続して減少する濃度の組換えヒトＩＬ－１８と共にインキュベートした。３７℃および５％ＣＯ_２でのインキュベーションの２０～２４時間後、３０μＬの細胞培養上清を、１７０μＬのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ検出媒体（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と混合し、ピンク色から青色への色の変化が検出可能となるまで（０．５～４時間）、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートした。アルカリホスファターゼのレベルを、６５５ｎｍの波長で分光光度計を使用して定量した。アッセイにおける各サイトカインの相対吸光度値（６５５ｎｍで測定した最大吸光度値のパーセンテージ）を算出することによって、サイトカイン活性を決定した。

[0352]ＩＬ－１８ＢＰ遮断実験のために、固定濃度の組換えヒトＩＬ－１８を、４℃で１時間、連続して減少する濃度の組換えヒトＩＬ－１８ＢＰと共に予備インキュベートした。続いて、タンパク質混合物をＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８センサー細胞に添加し、アッセイを記載のように実施した。

マウス
[0353]ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙからのＣ５７ＢＬ／６野生型マウス（６～９週齢）を、ｉｎｖｉｖｏでのマウス実験のために使用した。実験群を、体重、性別、および年齢によって一致させた。全ての動物実験を、ＹａｌｅＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅからの認可に従って行った。

ｉｎｖｉｖｏでの薬力学および薬物動態研究
[0354]マウス（１群あたりｎ＝９）は、１ｍｇ／ｋｇの組換えＩＬ－１８（ＷＴもしくはバリアントである配列番号６１）、またはビヒクル対照としてのＰＢＳの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を毎日受けた。実験の１日目、４日目、および７日目に、１群あたり３匹のマウスを、心穿刺による採血のために注射の５時間後に犠牲にした後、血漿または白血球の分析（マウスＩＬ－１８ＢＰＥＬＩＳＡ、マウスサイトカイン分析のためのＬｕｍｉｎｅｘに基づく多重イムノアッセイ、ならびにフローサイトメトリーによる免疫表現型決定を参照されたい）を実施した。７日間の実験を通して、Ｒｏｄｅｎｔ温度計ＢＩＯ－ＴＫ８８５１（Ｂｉｏｓｅｂ）およびマウス用のＲＥＴ３直腸プローブ（ＢｒａｉｎｔｒｅｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｃ．）を使用して体温を毎日モニタリングした。体重を毎日モニタリングした。

全血からの血漿調製
[0355]全血からの血漿調製を、製造業者の使用説明書に従ってＥＤＴＡ被覆ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒＰｌａｓｍａＳｅｐａｒａｔｏｒＴｕｂｅｓ（ＢＤ）を使用して実施した。血漿試料を－２０℃で１回凍結した後、分析アッセイのために使用した。
ＩＦＮ－γおよびＩＬ－１８ＢＰのＥＬＩＳＡ
[0356]細胞培養上清中のヒトＩＦＮ－γのレベルを測定するために、製造業者の使用説明書に従って、４ｐｇ／ｍＬの感度および７．８～５００ｐｇ／ｍＬの検出範囲でヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡＭＡＸＤｅｌｕｘｅＳｅｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用した。細胞培養上清中のヒトＩＬ－１８ＢＰの定量化のために７．５２ｐｇ／ｍＬの感度および２６．６～１，７００ｐｇ／ｍＬの検出範囲でＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＨｕｍａｎＩＬ－１８ＢＰイムノアッセイ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）を使用した。血漿中のマウスＩＬ－１８ＢＰレベルを、０．１５６ｎｇ／ｍＬの感度および０．１５６～１０ｎｇ／ｍＬの検出範囲でマウスＩＬ－１８ＢＰＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して定量した。試料調製を含む全てのアッセイを、製造業者の使用説明書に従って実施した。

マウスサイトカイン分析のためのＬｕｍｉｎｅｘベースの多重イムノアッセイ
[0357]ＩＦＮ－γおよびＩＬ－１２を含む血漿中の種々のマウスサイトカインレベルを定量するために、Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ２００Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、ＬｕｍｉｎｅｘベースのＢｉｏ－ＰｌｅｘＰｒｏ多重イムノアッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を実施した。製造業者の使用説明書に従って、ＤＭＥＭ中で再構成させたＢｉｏ－ＰｌｅｘＰｒｏＭｏｕｓｅＣｙｔｏｋｉｎｅＳｔａｎｄａｒｄ２３－Ｐｌｅｘ（グループＩ）を使用して、目的のサイトカインを分析した。

フローサイトメトリーによる免疫表現型決定
[0358]白血球分析のために、１００μＬの全血を、５０μＬのヘパリン溶液をさらに含有するＥＤＴＡ被覆ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒＰｌａｓｍａＳｅｐａｒａｔｏｒＴｕｂｅ（ＢＤ）中に収集し、数回、反転させることによって混合した。ＡＣＫＬｙｓｉｎｇＢｕｆｆｅｒ（ＶＷＲ）を添加し、室温で３～５分間インキュベートすることによって、赤血球溶解を実施した。ＭＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の、２ｍＭＥＤＴＡ、２％ＦＢＳ）を添加した後、上清の遠心分離（５分、４００×ｇ、４℃）および吸引によって白血球を収集した。冷ＭＡＣＳ緩衝液で１回、白血球を洗浄し、記載のように再収集した。細胞ペレットを、１０％（ｖ／ｖ）ラット血清（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．）および特異的蛍光標識抗体を含有する２００μＬのＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁して、その後のフローサイトメトリー分析のために染色した。以下の抗体を使用して４℃で３０分間、染色を実施した：αＣＤ４－ＡＦ７００（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、αＣＤ８－ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、Ｂ２２０－ＡＰＣ－Ｃｙ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１１ｂ－ＰＢ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＮＫ１．１－ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＮＫｐ４６－ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、およびＣＤ６９－ＦＩＴＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）。その後、上に記載されたようにＭＡＣＳ緩衝液で２回、白血球を洗浄した。最後に、細胞を１００μＬのＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フローサイトメーター（ＳｏｎｙＳＡ３８００）を使用して試料を獲得した。１０μＬのアリコートを取って、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｕｎｔｅｓｓＩＩＡｕｔｏｍａｔｅｄＣｅｌｌＣｏｕｎｔｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して細胞計数を実施した。データ分析のためにＦｌｏｗＪｏｖ１０．３ソフトウェアを使用し、前方および側方散乱を使用して白血球および単一事象について細胞にゲートをかけた。

腫瘍処置実験
[0359]０．５×１０^６個のＹＵＭＭＥＲ１．７細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス中に皮下移植した。移植の７日後、腫瘍が約５０ｍｇになった時、処置を開始した。マウスを、１）ビヒクル（食塩水）、２）抗ＰＤ１（ラットクローンＲＭＰ１－１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＷｅｓｔＬｅｂａｎｏｎ、ＮｅｗＨａｍｐｓｈｉｒｅ、ＵＳ）、３）野生型ＩＬ－１８、４）配列番号６１、５）野生型ＩＬ－１８＋抗ＰＤ－１、および６）配列番号６１ＩＬ－１８＋抗ＰＤ１を含む処置コホートに分割した。抗ＰＤ－１、野生型ＩＬ－１８、および配列番号６１ＩＬ－１８を、それぞれ、８ｍｇ／ｋｇ、０．３２ｍｇ／ｋｇ、および０．３２ｍｇ／ｋｇで週２回、腹腔内注射により投与した。マウスを臨床毒性の兆候についてモニタリングし、ノギス測定を使用して週２回、腫瘍成長を追跡した。腫瘍の直径が最も大きい寸法において１．５ｃｍに達したか、またはそれを超えた時、マウスを安楽死させた；これを生存分析のためのエンドポイントと考えた。

[0360]Ｂ２ｍ欠損ＹＵＭＭＥＲ１．７研究を、少し変化させて、同様の様式で行った。腫瘍は親株よりも遅く成長したので、１．０×１０^６個の細胞が生着した。処置は、食塩水、抗ＰＤ１＋抗ＣＴＬＡ４、および配列番号６１からなり、上記研究と同じスケジュールおよび用量で与えた。

[0361]実験の結果を、ここで記載する。

がん免疫療法のための標的としてのＩＬ－１８軸
[0362]免疫治療介入のための潜在的なシグナル伝達ノードを同定するために、腫瘍浸潤リンパ球からの単一細胞ＲＮＡｓｅｑデータを、サイトカイン経路成分の発現について分析した（Ｓｉｎｇｅｒら、２０１６、Ｃｅｌｌ、１６６：１５００～１５１１、ｅ１５０９）。ＩＬ－１８の受容体サブユニット－ＩＬ－１８Ｒα（すなわち、ＩＬ－１８Ｒ１）およびＩＬ－１８Ｒβ（すなわち、ＩＬ－１８ＲＡＰ）－ならびにＩＬ－１８自体は、活性化および機能不全リンパ球プログラムの両方において上方調節された（図１Ａ）。免疫ゲノム（ＩｍｍＧｅｎ）データベースのさらなる分析により、両方のＩＬ－１８受容体サブユニットの発現が、図１Ｂに示されるように慢性的抗原曝露後にＰＤ－１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、およびＴＩＧＩＴを含むＣＤ４およびＣＤ８細胞中のＴ細胞「疲弊」マーカーの発現と相関することが示された。これらの発現特性により、ＩＬ－１８経路を使用して、免疫治療パラダイムとして腫瘍内の活性化および機能不全／疲弊Ｔ細胞を選択的に刺激することができることが示唆された。ＩＬ－１８は、ＴおよびＮＫ細胞によるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）の放出をロバストに刺激するその能力について「インターフェロン－ガンマ誘導因子」（ＩＧＩＦ）と最初に呼ばれたＴｈ１サイトカインである。ＩＬ－１８のフィードバック阻害は、ＩＬ－１８がその受容体に結合し、これを活性化する能力を立体的に阻害するＩＬ－１８の高親和性分泌型デコイ受容体であるＩＬ－１８ＢＰのＩＦＮ－γ駆動性誘導によって達成される（図２Ａ）。いかなる特定の理論にも束縛されることを望むものではないが、このメカニズムは、ＩＦＮ－γによるＰＤ－Ｌ１の誘導によく似ており、これは、ＩＬ－１８ＢＰが「可溶性免疫チェックポイント」として作用し得ることを示唆している。この仮説と一致して、ＩＬ－１８ＢＰは、ＴＣＧＡおよびＯｎｃｏｍｉｎｅデータベース中でいくつかの型のがん、最も顕著には、乳がん、胃がん、および脳腫瘍において上方調節されることが見出された（図２Ｂ）。さらに、ＩＬ－１８ＢＰ発現は、腫瘍における重要な免疫チェックポイントＰＤ－１の発現と強く相関する（それぞれ、胃がんおよび乳がんにおいてｒ＝０．６５および０．７８、図２Ｃ）が、これは、ＩＬ－１８ＢＰが腫瘍免疫回避およびリンパ球疲弊にも寄与し得ることを示唆している。

[0363]組換えＩＬ－１８を、複数の臨床試験においてがん患者に投与した。それは２ｍｇ／ｋｇの高用量でも良好に許容されることが見出され、活性化ＣＤ６９＋ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の拡大および血清ＩＦＮ－γレベルの劇的な増加を含むロバストな薬力学的アウトプットを示した。しかしながら、黒色腫患者の第ＩＩ相試験は、有効性の欠如のため中止された。これらの臨床試験からの報告された薬力学的結果の検査は、ｒＩＬ－１８の有効性が、反復投与と共に減弱し、末梢ＮＫ細胞活性化／拡大およびサイトカイン放出（ＩＦＮ－γおよびＧＭ－ＣＳＦを含む）に関して速成耐性が見られることを示す。ｒＩＬ－１８の減弱する有効性は、処置前のレベルより２桁高く、しばしば、１００ｎｇ／ｍＬを超える、ＩＬ－１８ＢＰの血清レベル中の大規模な増加と一致する。いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、ＩＬ－１８ＢＰがｒＩＬ－１８療法の有効性を制限する、およびＩＬ－１８ＢＰ阻害に影響されないＩＬ－１８バリアントが有効な腫瘍免疫療法であり得ると仮定された。さらに、ＩＬ－１８ＢＰの阻害剤は、腫瘍免疫療法にとって有効である可能性が高い。

ＩＬ－１８ＢＰ阻害に対して耐性であるＩＬ－１８バリアントの操作（ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアント）
[0364]ＩＬ－１８Ｒα／ＩＬ－１８Ｒｆ３を介してシグナル伝達することができるが、ＩＬ－１８ＢＰによる阻害の影響は受けないＩＬ－１８のバリアントを得るために、酵母表面ディスプレイを用いる指向性進化を使用した。ヒトＩＬ－１８：ＩＬ－１８Ｒα：ＩＬ－１８Ｒｆ３（ＰＤＢ＝３ＯＷ４）の三元シグナル伝達複合体の構造を最初に分析し、シグナル伝達複合体およびＩＬ－１８ＢＰとの共有の境界面を有するＩＬ－１８の残基を同定した（図３Ａ）。ｈＩＬ－１８：ｈＩＬ－１８ＢＰの構造は決定されていないため、ＩＬ－１８と、ＩＬ－１８ＢＰのウイルス（エクトロメリアウイルス）オーソログとの関連複合体を使用した（ＰＤＢ＝３Ｆ６２）。このセットの残基を、規定のセットの代替物に無作為化するコンビナトリアルライブラリー（表１を参照されたい）を、縮重オリゴヌクレオチドプライマーおよびアセンブリーＰＣＲを使用して作出した。このライブラリーを、Ｎ末端酵母ディスプレイベクターｐＹＡＬと一緒に酵母に電気穿孔して、２．５×１０^８個の形質転換体を含むライブラリーを得た。このライブラリーを使用して、図３Ｂにまとめられるように、組換えｈＩＬ－１８Ｒαを用いる磁気および蛍光細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用する連続選択ラウンドならびにｈＩＬ－１８ＢＰを用いる対抗選択によって、指向性進化を実施した。５ラウンドの選択後、ライブラリークローンの明らかな大部分が、ＷＴｈＩＬ－１８と比較してその相対的優先性をｈＩＬ－１８ＢＰおよびｈＩＬ－１８Ｒαに完全に交換した（図３Ｃ）。これらのクローンは、「ＤＲ」が「デコイ耐性」を表す、「ＤＲ－ｈＩＬ－１８」バリアントと命名された。

[0365]ラウンド５後のプールに由来する９６のクローンの配列決定により、２１のユニークな配列が示され、これを分析して、４つの「コンセンサス配列」、配列番号３４～３７を作出した（図４）。ｈＩＬ－１８ＲαおよびｈＩＬ－１８ＢＰに対するこれらのバリアントの結合親和性を見積もるために、結合等温線を、酵母ディスプレイされたサイトカインバリアントおよびフローサイトメトリーを使用してｈＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰ結合について確立した。図５Ａに見られるように、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントは、ＷＴＩＬ－１８と同等の親和性でｈＩＬ－１８Ｒαに結合したが、ｈＩＬ－１８ＢＰに対しては大幅に減弱された結合を示し、見かけの結合ＥＣ５０値は、１μＭよりも有意に高かった。ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの受容体結合活性をさらに特徴付けるために、サイトカインを組換え的に発現させ、ＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰに関する表面プラズモン共鳴を実施した（代表的なトレースについては図５Ｂを参照されたい）。これらの結果は、表６および表７にまとめられ、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントは、ＩＬ－１８Ｒαと比較して、桁違いの、ＩＬ－１８ＢＰに対する劇的に低下した優先性を有することを示す。

[0366]

[0367]

ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの機能的特性評価
[0368]Ｋｉｍら（Ｋｉｍら、２００１、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９８（６）：３３０４～９）の以前の報告は、活性が増強され、ＩＬ－１８ＢＰによる阻害が意図的に減少した３種のｈＩＬ－１８バリアント：Ｅ４２Ａ、Ｋ８９Ａ、およびＥ４２Ａ／Ｋ８９Ａを記載した。これらのサイトカインバリアントを、酵母上にディスプレイし、ＩＬ－１８Ｒα結合のＩＬ－１８ＢＰ阻害を、フローサイトメトリーによって評価した。図６Ａに示されるように、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントはｈＩＬ－１８ＢＰによるｈＩＬ－１８Ｒα結合の阻害に影響されなかったが、Ｋｉｍらのバリアントは、ＷＴｈＩＬ－１８と比較して大まかに同等のｈＩＬ－１８ＢＰ中和を示した。これらの結果は、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントがＩＬ－１８ＢＰとは無関係であるが、ＫｉｍらのバリアントはＷＴｈＩＬ－１８と同様、ＩＬ－１８ＢＰ阻害に対して非常に感受性であることを示す。

[0369]ＤＲ－ｈＩＬ－１８が細胞状況においてＩＬ－１８受容体を介する生産的なシグナル伝達をもたらし得ることを確認するために、ＨＥＫ－ｂｌｕｅＩＬ－１８受容体細胞系を使用して、濃度－応答実験を実施した。このシステムでは、ＩＬ－１８Ｒシグナル伝達は、ＮＦκｂ／ＡＰ１プロモーターの下流の分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の発現によって読み出される。ＩＬ－１８ＢＰの非存在下では、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントは、ＷＴｈＩＬ－１８と等しいシグナル伝達ＥＣ５０値をもたらした。しかしながら、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントは、ｈＩＬ－１８ＢＰによる阻害を実質的に示さず、１μＭのＩＬ－１８ＢＰで検出可能な阻害を示さなかった（図６Ｂ）。総合すると、これらの研究は、ＤＲ－ｈＩＬ－１８バリアントは、細胞シグナル伝達状況で生物学的に活性であり、ＩＬ－１８ＢＰ中和に影響されないことを確立する。

ＩＬ－１８ＢＰ阻害に対して耐性である第２世代のヒトＩＬ－１８バリアント（ヒトｖ２．０ＤＲ－ＩＬ－１８バリアント）の操作および特性評価
[0370]さらなる、潜在的に増強されたヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントを得るために、１１個の位置で無作為化されたヒトＩＬ－１８の第２のライブラリー（図７Ａ）を設計し、上記のように酵母を形質転換した。６×１０^８個の形質転換体の得られるライブラリーを、図７Ｂに概略されるように選択し、連続選択ステップを用いてＩＬ－１８ＢＰと比較してＩＬ－１８Ｒαに対するロバストな優先性を得た（図７Ｃ）。５～６ラウンドの選択後、１７個のユニークな配列が回収された（図８）。図９Ａに示されるように、ＷＴＩＬ－１８と比較した場合、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、および配列番号８７のクローンは、ビオチン化ＩＬ－１８Ｒαを用いる酵母結合等温線によって測定した場合、ＩＬ１８Ｒαに対する同等の、またはいくらかより強い結合を有していた。しかしながら、図９Ｂに示されるように、これらのクローンは、ＩＬ－１８ＢＰに対するいかなる感知できるほどの結合も示さなかった。図９Ｃは、酵母ディスプレイされたクローンに一定の温度範囲を適用することによる熱安定性の測定が、ＷＴＩＬ－１８よりも７～１３℃の差で熱安定的であったことを示す図である。これらの結果を、図９Ｄにまとめる。
ＩＬ－１８ＢＰ阻害に対して耐性であるＩＬ－１８バリアントの操作（マウスＤＲ－ＩＬ－１８バリアント）
[0371]ＩＬ－１８Ｒαに対するＩＬ－１８のヒトおよびマウス種間交差反応性は弱いため、マウスにおける研究のために使用することができるＤＲ－ＩＬ－１８バリアントのマウス等価物を作出した。上記のｈＩＬ－１８について採用した手法と同様、ｍＩＬ－１８Ｒα／ｍＩＬ－１８ＢＰ接触残基の同様のセットを無作為化するｍＩＬ－１８バリアントのコンビナトリアルライブラリー（表３）を作出し、４×１０^８個の形質転換体のライブラリーを得た。ヒトＩＬ－１８ライブラリーに関して実施した方法と同様の指向性進化をこのライブラリーに対して実施した；選択戦略は図１０Ａにまとめられている。６ラウンドの選択の完了後、残りのクローンは、ｍＩＬ－１８ＢＰよりもｍＩＬ－１８Ｒαに対するほぼ完全な優先性を有していた（図１０Ｂ）。９６個のクローンの分析により、２つのコンセンサス配列、配列番号６０および配列番号６１に由来する、１１個のユニークな配列が示された（図１０Ｃ）。酵母結合等温線および表面プラズモン共鳴実験により、これらのＤＲ－ＩＬ－１８クローンが、本明細書に記載されるヒトＩＬ－１８バリアントよりもＩＬ－１８ＢＰに対するさらにより高い独立性を有し、ｍＩＬ－１８ＢＰ結合のＫＤは１μＭを優に上回り、ｍＩＬ－１８Ｒα結合はＷＴ－ｍＩＬ－１８とほぼ同等のままであることが確認された（図１１Ａ、図１１Ｂ、表８および表９）。

[0372]

[0373]
[0374]

[0375] ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントのｉｎｖｉｖｏでの薬力学的研究
[0376]ｉｎｖｉｖｏでのＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの投与の生物学的効果を評価するために、ＷＴｍＩＬ－１８を配列番号６１と比較する、薬力学的研究をマウスにおいて実施した。第１の研究では、マウスを、合計７回の注射にわたって、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＩＬ－１８（１ｍｇ／ｋｇ／日）、または配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ／日）で処置した（図１２Ａ）。フローサイトメトリーによる末梢血表現型の分析により、ＷＴｍＩＬ－１８と配列番号６１との両方が、ビヒクル処置と比較して、１０倍を超えて末梢ＮＫ細胞数を増加させ、５倍を超えて末梢単球計数を増加させたことが分かった；総ＣＤ４およびＣＤ８細胞計数は有意に影響されなかった（図１２Ｂ）。ＣＤ６９誘導による細胞活性化状態の検査により、配列番号６１処置が、ｍＩＬ－１８またはビヒクル処置と比較して、ＣＤ４およびＣＤ８細胞上のＣＤ６９レベルを劇的に増加させ、ＣＤ４およびＣＤ８サブセットについて、それぞれ、３０％および５０％を超えて陽性に達することが示された（図１２Ｃ）。ｍＩＬ－１８と配列番号６１とは両方とも、３日目までに末梢ＮＫ細胞上でのＣＤ６９発現を、２０％を超える陽性にまで刺激したが、ＣＤ６９レベルは６日目までにｍＩＬ－１８について有意ではないレベルまで低下したが、配列番号６１処置に関しては有意に上昇したままであった（図１２Ｃ）。多重化Ｌｕｍｉｎｅｘパネルを用いて、末梢サイトカインレベルも測定した。図１２Ｄに見られるように、ｍＩＬ－１８と配列番号６１とは両方とも、ビヒクル処置と比較して血清ＩＦＮ－ｇ、ＭＩＰ１ｂ、およびＧ－ＣＳＦを増加させたが、ｍＩＬ－１８は、その後の投与に関して誘導サイトカインレベルがプラトーに達するか、または低下する速成耐性を示したため、配列番号６１は、これらのサイトカインのそれぞれについて、６日目までにｍＩＬ－１８よりもはるかに高いレベルを達成した。

体脂肪組成に対する配列番号６１の効果
[0377]体脂肪組成に対するＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの効果を評価するために、本発明者らは、３日毎のＣ５７ＢＬ／６マウスへの腹腔内注射によって１ｍｇ／ｋｇのＷＴＩＬ－１８または０．０１、０．１、もしくは１ｍｇ／ｋｇの配列番号６１を投与した。体脂肪および除脂肪組成を、エコーＭＲＩによってモニタリングした。試験した全ての用量の配列番号６１（１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、および０．０１ｍｇ／ｋｇ）が、１２日目までに体脂肪の全パーセンテージの驚くべき低下をもたらしたが、ビヒクルおよびｍＩＬ－１８処置マウスは総体脂肪組成の有意な変化を有しなかった（図１３、上）。具体的には、配列番号６１処置マウスは、実験中に減少した、または安定なレベルの総脂肪量を有していたが（図１３、左下）、その総除脂肪量を実質的に増加させた（図１３、右下）。これらの結果は、配列番号６１、および本明細書に開示される他のバリアントを使用して、体脂肪組成を治療的に低下させることができることを示している（例えば、肥満、糖尿病、および／または代謝症候群の処置のため）。

ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの抗腫瘍有効性
[0378]ＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）の抗腫瘍有効性を、移植可能な、同系ＹＵＭＭＥＲ１．７悪性黒色腫腫瘍モデルを使用して評価した。抗ＰＤ１抗体（８ｍｇ／ｋｇ／ｑ３ｄ）を共投与して、または共投与せずに、ＷＴｍＩＬ－１８および配列番号６１を、０．３２ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、ＹＵＭＭＥＲ１．７腫瘍を担持するマウスに腹腔内投与した。マウスおよびヒトにおけるその使用に関する以前の報告と一致して、ＷＴＩＬ－１８は、ビヒクル（食塩水）と比較して腫瘍成長または生存に影響せず、抗ＰＤ１と併用投与した場合、有効性をごくわずかに改善させた。しかしながら、配列番号６１は、単剤療法として処置マウスの２７％を治癒させ、別の２７％においては部分奏功をもたらしたが、その効果は抗ＰＤ１処置と同等である。配列番号６１と抗ＰＤ１との組合せは、処置マウスの８０％を治癒させた（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。

[0379]ＹＵＭＭＥＲ１．７腫瘍に対するＤＲ－ＩＬ－１８の作用機構を確立するために、ＣＤ８、ＣＤ４、ＮＫ１．１、およびインターフェロン－ガンマに対する抗体を使用して細胞枯渇研究を実施した。図１５Ａおよび図１５Ｂに見られるように、ＣＤ８細胞の枯渇およびインターフェロン－ガンマの中和は、ＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を完全に無効化した。ＣＤ４細胞の枯渇は、腫瘍成長に関するＤＲ－ＩＬ－１８の初期活性には影響しなかったが、ＣＤ４処置マウスにおいては、治療応答は持続せず、抗腫瘍免疫の支援および持続におけるＣＤ４細胞の役割を示唆している。ＮＫ細胞の枯渇は、ＹＵＭＭＥＲ１．７細胞中での腫瘍成長または生存に影響しなかった。

[0380]ＤＲ－ＩＬ－１８の活性を、免疫原性ＭＣ３８結腸直腸腫瘍モデルにおいてさらに評価した。食塩水、ＷＴＩＬ－１８（週２回、１ｍｇ／ｋｇ）、または週２回、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくは１ｍｇ／ｋｇからのＤＲ－ＩＬ－１８用量の範囲を投与する、用量設定研究を最初に実施した。図１６に見られるように、ＷＴＩＬ－１８は腫瘍成長に対する効果を有しなかったが、ＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）は、用量依存的有効性を示し、０．１ｍｇ／ｋｇで腫瘍成長を減速させ、１ｍｇ／ｋｇで腫瘍退縮をもたらした。次いで、コホートを拡大し、免疫チェックポイント阻害との潜在的な相乗作用を評価した。再度、ＷＴＩＬ－１８は、単剤療法としての効果を有せず、抗ＰＤ１有効性の増強を示さなかった。対照的に、ＤＲ－ＩＬ－１８は、抗ＰＤ１と同等の、またはそれより優れたロバストな単剤療法活性を示し、２つの療法は一緒になって、例外的な相乗作用を示し、図１７に見られるように、全ての処置マウスにおいて完全な退縮をもたらした。

[0381]ＤＲ－ＩＬ－１８のメカニズムをさらに特徴付けるために、食塩水、ＷＴＩＬ－１８、またはＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）で処置したマウスに由来するＭＣ３８腫瘍の免疫浸潤に関してフローサイトメトリー研究を実施した。食塩水またはＷＴＩＬ－１８と比較して、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、腫瘍１ｍｇあたりのＣＤ８およびＮＫ細胞浸潤を増加させ、さらに、グランザイムＢおよびＫＬＲＧ１などのエフェクター細胞の活性化マーカーの上方調節をもたらした（図１８Ａ、上の行）。ＩＬ－２またはＩＬ－１５などの他のサイトカイン療法と違って、ＤＲ－ＩＬ－１８は、食塩水処置と比較して、腫瘍内のＣＤ８：Ｔｒｅｇ比を増加させない。しかしながら、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、ＣＤ８細胞の、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ならびに単球性および顆粒球性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）に対する比を増加させることによって、より好ましい腫瘍免疫微小環境をもたらす。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを使用して、同じマウスの血清から、第２のサイトカイン放出プロファイルも測定した。図１８Ｂに見られるように、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、インターフェロン－ガンマ、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５の全身レベルを、ＷＴＩＬ－１８処置と比較して１００倍を超えて増加させた。全体として取ると、これらの結果は、ＤＲ－ＩＬ－１８が、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、またはＷＴＩＬ－１８処置とは異なる独特の作用機構によって抗腫瘍有効性をもたらすことを示している。

[0382]ＤＲ－ＩＬ－１８療法によって誘導される一部の第２のサイトカインは、毒性に潜在的に寄与する、および／または有効性を低下させると予測される。例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８によって１００倍を超えて上方調節されるＩＬ－１７は、大腸炎および乾癬に寄与し、さらに、免疫抑制性骨髄由来抑制細胞になり得る顆粒細胞を刺激する。ＩＬ－５およびＩＬ－１３は、ＤＲ－ＩＬ－１８によっても上方調節される２型サイトカインであり、アレルギー、喘息の増悪、またはアナフィラキシーに寄与し得る。Ｔｈ２Ｔ細胞は免疫治療応答に寄与せず、免疫抑制性Ｔｒｅｇの発生を促進し得る。そのため、ある特定の例では、ＤＲ－ＩＬ－１８の有効性および安全性は、例えば、中和抗体による、ＩＬ－１７、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３などの望ましくない第２のサイトカインの選択的阻害によって増強され得る。

[0383]多くの腫瘍は、初期の提示（一次耐性）時に、または処置に対する初期応答後（二次耐性）に、免疫チェックポイント阻害に対して耐性である。チェックポイント阻害剤の耐性の最も一般的な原因は、ＭＨＣクラスＩによる抗原提示の喪失である。表面ＭＨＣクラスＩの喪失は、ＮＫ細胞媒介性細胞溶解と古典的に関連するが、ＮＫ細胞はＭＨＣＩ欠損腫瘍内では疲弊状態になり得る。ＮＫ細胞はＩＬ－１８Ｒを発現し、ＭＣ３８における本発明者らの以前の結果は、ＮＫ細胞がＤＲ－ＩＬ－１８によって拡大および活性化されることを示したため、本発明者らはしたがって、ＤＲ－ＩＬ－１８がＭＨＣＩ欠損腫瘍に対するＮＫ細胞の攻撃を刺激し得るかどうかを試験した。本発明者らは、Ｙｕｍｍｅｒ１．７細胞系においてＢ２ｍをノックアウトするためにＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９を使用し、埋め込まれたＢ２ｍ欠損ＹＵＭＭＥＲ１．７腫瘍が、親Ｙｕｍｍｅｒ１．７腫瘍のほぼ１００％を常に治癒させる組合せである、抗ＣＴＬＡ４と抗ＰＤ１との両方を用いた併用処置（図１９Ａおよび図１９Ｂ）にさえ不応性であることを見出した。しかしながら、ＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）を用いた単剤処置は、抗ＮＫ１．１による枯渇が効果を無効化したため、ＮＫ細胞依存的様式でＢ２ｍ欠損Ｙｕｍｍｅｒ１．７腫瘍の６０％を治癒させた（図１９Ａおよび図１９Ｂ）。ＤＲ－ＩＬ－１８がＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍の設定において腫瘍内ＮＫ細胞に対して有する効果を理解するための実験を行った。食塩水またはＤＲ－ＩＬ－１８で処置したマウスに由来するＢ２ｍ欠損Ｙｕｍｍｅｒ．１７腫瘍上でフローサイトメトリーを用いて免疫表現型決定研究を実施した。処置の３回目の用量の２４時間後、マウスを犠牲にし、腫瘍を解離し、細胞懸濁液をＰＭＡ／イオノマイシンで４時間処理した。次いで、ＮＫ細胞の増殖指数および機能的能力を、Ｋｉ６７およびインターフェロン－ガンマを用いる細胞内フローサイトメトリーによって分析した。図１９Ｃに見られるように、食塩水で処置したＢ２ｍ欠損Ｙｕｍｍｅｒ１．７腫瘍に由来するＮＫ細胞は、不十分なインターフェロン－ガンマ産生およびＫｉ６７レベルを有していたが、これは表現型の疲弊を示している。対照的に、ＤＲ－ＩＬ－１８で処置した腫瘍に由来するＮＫ細胞は、ロバストなインターフェロン－ガンマ産生およびＫｉ６７レベルを有し、ＮＫ細胞の大部分が両方のマーカーについて陽性であった。したがって、これらの結果は、ＤＲ－ＩＬ－１８が、ＮＫ細胞依存的様式で免疫チェックポイント遮断に対して不応性であるＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍の処置において有効であることを確立する。

[0384]配列番号６１のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの大きく改善された活性を考慮すると、これらの結果は、ＤＲ－ＩＬ－１８を非常に有望な腫瘍免疫治療剤として確立し、ＩＬ－１８ＢＰがＩＬ－１８療法の有効性を大きく制限することの強力な証拠を提供する。これらの結果から、ＩＬ－１８ＢＰを抗体、小さいタンパク質、および／または低分子で遮断することなどの他の戦略がＩＬ－１８療法および他の免疫治療レジメンを増強させることが予測される。

[0385]ＩＬ－１８ＢＰに特異的に結合するが、ＩＬ－１８Ｒαには結合せず、したがって、シグナル伝達しない、「デコイ・トゥー・デコイ」（Ｄ２Ｄ）、またはＩＬ－１８バリアントを作出することによって、ＩＬ－１８ＢＰアンタゴニストを操作するための努力がなされた。そのような薬剤の潜在的な利点は、それがＩＬ－１８ＢＰを中和するのに役立ち、ＩＬ－１８Ｒシグナル伝達を全身的に駆動するのとは反対に、内因性ＩＬ－１８の活性を増強するということである。したがって、ＩＬ－１８を、ＩＬ－１８Ｒαのための接触位置で無作為化し（図２０Ａ）、酵母ディスプレイされたライブラリーを、ヒトおよびマウスＤＲ－ＩＬ－１８について以前に記載されたように調製した。３．９×１０^８個の形質転換体の得られるライブラリーを、図２０Ｂに示されるように３ラウンドにわたって選択し、ＩＬ－１８Ｒαに対して対抗選択しながら、保持されたＩＬ－１８ＢＰ結合を選択した。図２０Ｃに見られるように、各ラウンドの選択により、ＩＬ－１８ＢＰ（ヒトおよびマウス）への結合に関する富化をもたらしたが、ＩＬ－１８Ｒα結合の獲得はもたらさなかった。９６個のクローンを配列決定したところ、３１個のユニークな配列が得られ、その中から３個のコンセンサス配列、配列番号１２３、配列番号１２４、および配列番号１２５が誘導された（図２１）。得られるクローンの生物物理学的特性評価により、それらがＷＴＩＬ－１８と同様のＩＬ－１８ＢＰに対する結合等温線を示すが（図２２Ａ）、ＩＬ－１８Ｒαへの結合が大きく減少した／存在しなかった（図２２Ｂ）。これらのデータは、図２２Ｃにまとめられる。マウスＩＬ－１８について同一の選択プロセスを実施し、２．０×１０^８個の形質転換体のライブラリーを作出し、本発明者らは、図２３にまとめられる５１個のユニークな配列を得るために選択した。

実施例２
第２世代のバリアントの結合親和性測定
[0386]表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、第２世代のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生物物理学的親和性測定を実施した（ＩＬ－１８Ｒ対ＩＬ－１８ＢＰへの結合）。ＢｉａｃｏｒｅＴ１００機器を使用して実験を行い、２５℃で実行した。ビオチン化ＩＬ－１８ＲαまたはＩＬ－１８ＢＰをＢｉａｃｏｒｅビオチン捕捉チップ（ＳｅｒｉｅｓＳＣＡＰセンサーチップ、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に固定化して、約５０ＲＵ（ＩＬ－１８Ｒα）または約１０ＲＵ（ＩＬ－１８ＢＰ）のＲｍａｘを得た。ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水－Ｐ＋緩衝液（１０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．００５％サーファクタントＰ２０）中でのＩＬ－１８バリアントの連続希釈液を用いて測定を行った。再生緩衝液（３／４（ｖ／ｖ）の８Ｍ塩酸グアニジンおよび１／４（ｖ／ｖ）の１Ｍ水酸化ナトリウム）の３回の６０ｓｅｃの注入によって、表面を再生させた。観察の増加のために複数のチャネルにおいて同時に実験を実施した。全てのデータを、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを用いるＢｉａｃｏｒｅＴ１００評価ソフトウェアバージョン２．０を用いて分析した。

[0387]その結果、本開示のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントがＩＬ－１８ＢＰに対する大きく低下した親和性を示し、ＷＴＩＬ－１８と少なくとも同等の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合することが確認された（生成されたセンサーグラムについては図２４を、測定された反応速度の概要については表１０を、親和性測定の概要については表１１を、第２世代のＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの解離定数比の結果を含む、全般的な概要については表１２を参照されたい）。

[0388]

[0389]

[0390]

実施例３
がん処置の有効性
[0391]ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの有効性を、免疫チェックポイント阻害剤に対して耐性である結腸直腸腫瘍、乳がん、黒色腫、およびＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍のモデルを含む、複数の異なるがんモデルを使用して試験した。結果は、ＩＬ－１８Ｒに結合し、ＩＬ－１８ＢＰに結合しない偏りを示すＤＲ－ＩＬ－１８バリアントを使用して、広範囲のがん（試験したものだけに限らない）を処置することができることを示す。

[0392]結腸直腸がんのモデルにおけるＤＲ－ＩＬ－１８の有効性について、２５０，０００個のＣＴ２６細胞を皮下的に埋め込み、腫瘍が平均で約６０ｍｍ^３に達したら、７日目に処置を開始した。ＷＴＩＬ－１８および配列番号６１を、合計５用量にわたって週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。抗ＰＤ１を、同じスケジュールで１０ｍｇ／ｋｇで与えた。ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８で処置した場合にのみ、動物のサブセットにおいて腫瘍成長阻害および腫瘍消失が得られた（図２５Ａ、食塩水（ＰＢＳ、丸）、ＷＴＩＬ－１８（四角）、およびＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１、三角）で処置した動物の腫瘍成長を示すスパイダープロットのオーバーレイを提供する）。ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８は、生存の延長をもたらした（図２５Ｂ、抗ＰＤ－１、ＷＴＩＬ－１８、またはＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）で処置したマウスの生存曲線を示す；完全奏功の数が括弧内に示される）。ＤＲ－ＩＬ－１８で処置したマウスの４０％が、腫瘍消失を示し、これはチェックポイント阻害剤である抗ＰＤ－１を超える改善であった。抗ＰＤ－１、ＷＴＩＬ－１８、およびＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）で処置したマウスに関する生存曲線を提供する。完全奏功の数は括弧内に示され、４０％のマウスにおいて腫瘍消失、チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ－１を超える改善が見られた。

[0393]４Ｔ１乳がんモデルとＢ１６－Ｆ１０黒色腫モデルとの両方において、ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８のみが、腫瘍成長阻害をもたらした。「ｔ」で印を付けた囲みで示される様に、腫瘍が５０ｍｍ^３の平均体積を超えた後に、処置を施した。

[0394]４Ｔ１乳がんモデルおよびＢ１６－Ｆ１０黒色腫モデルを使用して、さらなるがん型に対するＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を評価した。５００，０００個の４Ｔ１細胞をＢＡＬＢ／Ｃマウスに皮下的に埋め込み、５００，０００個のＢ１６－Ｆ１０細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに皮下的に埋め込んだ。腫瘍が５０ｍｍ^３の平均体積を超えた後に、処置を施した。図２６Ａ（４Ｔ１腫瘍）および図２６Ｂ（Ｂ１６－Ｆ１０）に示されるように、両方のモデルにおいて、ＷＴＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８のみが、腫瘍成長阻害をもたらした。「ｔ」で印を付けた囲みで示される様に、腫瘍が５０ｍｍ^３の平均体積を超えた後に、処置を施した。ＤＲ－ＩＬ－１８の有効性を、ＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍モデルにおいても評価した。Ｂ２ｍ欠損（したがって、ＭＨＣクラスＩ欠損）ＭＣ３８細胞を、Ｂ２ｍ欠損ＹＵＭＭＥＲ細胞について記載されたようにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を使用して調製した。Ｂ２ｍ－／－ＭＣ３８細胞を皮下的に埋め込み、腫瘍が平均で約６５ｍｍ^３に達したら、７日目に処置を開始した。配列番号６１を、５用量にわたって週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで投与した。抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４を、同じスケジュールにて８ｍｇ／ｋｇで与えた。ＭＨＣクラスＩ欠損腫瘍は、抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４を用いる免疫チェックポイント阻害に対して耐性であったが、ＤＲ－ＩＬ－１８処置は腫瘍成長阻害をもたらした（図２７Ａ）。

[0395]ＲＭＡ／Ｓは、タパシン中に自然突然変異を含有するＲＭＡリンパ腫系のバリアントであり、抗原量の欠陥およびしたがって、ＭＨＣクラスＩ表面発現の減少をもたらす。コンジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに、１，０００，０００個のＲＭＡ／Ｓ細胞を皮下的に埋め込み、処置を７日目に開始した。配列番号６１を、週２回、０．３２ｍｇ／ｋｇで投与した。抗ＰＤ１を、同じスケジュールにて８ｍｇ／ｋｇで与えた。ＲＭＡ／Ｓ腫瘍は抗ＰＤ－１を用いる免疫チェックポイント阻害に対して耐性であったが、ＤＲ－ＩＬ－１８を用いる処置は、腫瘍成長阻害をもたらした（図２７Ｂ）。

実施例４
ＤＲ－ＩＬ－１８のみ、または治療抗体と組み合わせたＤＲ－ＩＬ－１８によるがん細胞死滅の促進
[0396]ｅｘｖｉｖｏでの細胞傷害性研究を行って、がん細胞の死滅を促進するＤＲ－ＩＬ－１８の能力を評価した。ＣＦＳＥ標識されたＲａｊｉ（Ｂ細胞リンパ腫）細胞を、標的細胞として使用した。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、ＣＦＳＥ標識されたＲａｊｉ細胞と共に、１：１０のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で２５時間インキュベートした。ヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントｈＣＳ－１（１μＭ）、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（１０μｇ／ｍＬ）、または両薬剤の組合せ。細胞傷害性をフローサイトメトリーによって測定し、ＤＡＰＩ陽性になったＣＦＳＥ細胞の画分として算出した。ＤＲ－ＩＬ－１８処置は、標的細胞の死滅をもたらし、ＤＲ－ＩＬ－１８とリツキシマブとの組合せは、いずれかの薬剤のみよりも高いレベルのがん細胞死滅をもたらしたが、これは、ＤＲ－ＩＬ－１８が抗腫瘍抗体依存的細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ；図２８；^＊多重比較のためのＴｕｋｅｙの補正を用いる二元配置分散分析によるｐ＜０．０５）を増強することができることを示唆している。これらのデータは、ＤＲ－ＩＬ－１８を、腫瘍標的化抗体などのオプソニン化剤と組み合わせて、がん細胞の死滅を増強することができることを示唆する。

実施例５
ウイルス感染に対するＤＲ－ＩＬ１８の有効性
[0397]本実施例は、ＤＲ－ＩＬ－１８を使用して、ウイルス感染などの感染症を処置することができることを示す。図２９Ａにまとめられるように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０^６ＰＦＵのワクシニアウイルス（ＶＡＣＶ）を腹腔内（ＩＰ）的に感染させ、１ｍｇ／ｋｇのＷＴｍＩＬ－１８またはＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号６１）をＩＰ投与した。マウスを犠牲にし、ウイルス力価を、感染後３日目にＲＴ－ＰＣＲによって血液および卵巣中で測定した。野生型ｍＩＬ－１８ではなく、ＤＲ－ＩＬ－１８による処置は、血液および卵巣中のウイルス量の有意な減少をもたらした（図２９Ｂ、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１）。全身性ウイルス感染のこのモデルにおいて示されたＤＲ－ＩＬ－１８の有効性は、ＤＲ－ＩＬ－１８を使用して、感染症を制御することができることを示唆する。

実施例６
第２世代のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントはＩＬ－１８Ｒシグナル伝達を誘導する
[0398]第２世代のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、および配列番号８７がＩＬ－１８受容体によりシグナル伝達を誘導する能力を、ＩＬ－１８ＨＥＫ－Ｂｌｕｅリポーター細胞を使用して評価した。これらのＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの生成は実施例１に記載され、ＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰに対するその親和性は実施例２に記載される。

[0399]ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８センサー細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を、１００μｇ／ｍＬのノルモシン、３０μｇ／ｍＬのブラスチシジン、１８０μｇ／ｍＬのゼオシン、および２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンを添加した完全培地（１０％熱不活化ＦＢＳ、２ｍＭＬ－グルタミン、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、および５０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ）中で維持した。サイトカイン活性の測定のために、平底９６ウェルプレートのウェルあたり５０，０００個のＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８センサー細胞を、２００μＬの総体積の完全培地中、連続して減少する濃度の組換えヒトＩＬ－１８またはＤＲ－ＩＬ－１８バリアントと共にインキュベートした。３７℃および５％ＣＯ_２でのインキュベーションの２４時間後、３０μＬの細胞培養上清を、１７０μＬのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ検出媒体（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と混合し、ピンク色から青色への色の変化が検出可能となるまで（０．５～４時間）、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートした。アルカリホスファターゼのレベルを、６５５ｎｍの波長で分光光度計を使用して定量した。

[0400]ヒトの配列番号８９、配列番号９０、および配列番号９１はＷＴｈＩＬ－１８と比較して増強された効力を示したが、配列番号８７はＷＴｈＩＬ－１８とほぼ同等の効力を示した（図３０）。したがって、データは、全ての試験した第２世代のヒトＤＲ－ＩＬ－１８バリアントがＩＬ－１８Ｒを介して能動的にシグナル伝達することを示す。

実施例７
ＩＬ－１８バリアントの安定性を増強するシステイン突然変異
[0401]配列番号８９は、ＷＴＩＬ－１８よりも安定であるが、それはジスルフィド結合した二量体、ならびに分子内ジスルフィド結合を形成することができる。したがって、単一、二重、三重、および四重のシステインからセリンへの突然変異の全ての組合せを生成して、これらの位置における突然変異がＩＬ－１８分子を安定化することができるかどうかを試験し、どの組合せの突然変異が最良の安定性を提供するかを決定した。

[0402]配列番号８９における４つ全部のシステイン残基のセリンへの体系的突然変異を、表１３に示されるように実施した。

[0403]

[0404]配列番号１～１５（配列番号８９のバリアントである）のクローンをＴｗｉｓｔにより合成し、分泌的発現のためのｎ末端ａｇａ２リーダー配列を含有するピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）発現ベクター中にクローニングした。プラスミドをピチア中に形質転換し、３０℃で６０時間、メタノール誘導によって発現させた。誘導後、上清をＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル上で泳動し、Ｓｐｙｒｏ－Ｒｕｂｙ染色を使用して可視化した。

[0405]配列番号５および配列番号６のクローンは最良の発現を与えたが、分子間または分子内ジスルフィド結合形成の証拠はない（図３１；例えば、それぞれ、非還元試料中の約３５ｋＤａの二量体のバンドおよび１８ｋＤより低い下側の二重のバンド）。これらの２つのクローンは、Ｃ３８ＳとＣ６８Ｓ突然変異の組合せを含有していた。Ｃ１２７突然変異を有するクローンはいずれも、より低い発現収率を示した。図３１において、Ｒ＝還元試料；Ｎ＝非還元試料；ＭＷ＝分子量である。下部の番号は、配列番号を指す。

[0406]結論：Ｃ３８およびＣ６８位での突然変異（例えば、配列番号６を参照されたい）は、最も高い程度の安定化をもたらした（例えば、この場合、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号８９）。配列番号６（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ）は特に、わずかに低い（しかし、それにも拘わらず、許容し得る）効力にも拘わらず、増強された発現および大きく増大した安定性を示した。

実施例８
予測されるＴ細胞エピトープの除去
[0407]実施例７で生成されたＣ６８Ｓ突然変異により、予測されたネオエピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）が得られた。したがって、Ｃ６８位での６個の追加の非免疫原性置換（配列番号１６～２１）を構築した後、その安定性／効力を試験した。

[0408]Ｃ６８に代替的な置換（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｄ、Ｅ、またはＮ）を含有する配列番号１６～２１のクローンをＴｗｉｓｔにより合成し、Ｎ末端６ｘＨｉｓ－ＳＵＭＯタグを有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞質発現ベクター中にクローニングした。大腸菌を、振とうフラスコ中、１００ｍＬのＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ中で増殖させ、２０℃で１６時間、ＩＰＴＧで誘導した。誘導後、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）カラムによってタンパク質を精製した；ＳＵＭＯタグ除去を、ｈｉｓタグ付Ｕｌｐ１プロテアーゼの添加によって達成した。次いで、遊離のｈｉｓタグ付ＳＵＭＯおよびｈｉｓタグ付Ｕｌｐ１を、第２のＩＭＡＣカラムによって除去した。収率および純度を、ＳＤＳ／ＰＡＧＥによって評価した。

[0409]バリアントは高力価で発現し（表１４）、非還元的ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル分析によってはジスルフィド結合形成の証拠を示さなかった（図３２；Ｒ＝還元試料；ＮＲ＝非還元試料）。

[0410]

[0411]図３３に示されるように、加速「保存安定性」研究を実施して、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの安定性をさらに評価した。タンパク質調製物を１ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ中で製剤化し、５１℃で４８時間保持した。試料をいくつかの時点で採取し、０．４５μｍフィルターを通して濾過し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析した。ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントは、これらの条件下で一定範囲の安定性を示し、配列番号１６、配列番号１９、および配列番号１７が、ｔ＝０と比較して主ピークの％における最大の保持を示した（図３３）。ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントに対するＷＴＩＬ－１８の活性を、ＩＬ－１８受容体シグナル伝達が分泌型アルカリホスファターゼの発現をもたらすＩＬ－１８リポーターアッセイ（ＩｎＶｉｖｏＧｅｎからのＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８）を使用して測定した。実施例６に記載されたように、リポーター細胞を培養し、刺激し、分泌型アルカリホスファターゼレベルを測定した。全てのバリアントが、ＷＴＩＬ－１８と比較してＩＬ－１８Ｒシグナル伝達誘導の増大した効力、および親バリアントである配列番号８９と同様の効力を示した（表１５および図３４）。

[0412]

[0413]

実施例９
本開示のＤＲ－ＩＬ－１８の安定性、親和性、および効力の特性評価
[0414]配列番号１９を、効力、安定性、および免疫原性のその好ましいプロファイルに基づいて、さらなる特性評価のために選択した（実施例７＆８を参照されたい）。さらなるアッセイを実施して、配列番号１９（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ）の安定性、親和性、および効力を、配列番号８９（親Ｃ３８／Ｃ６８分子）、および野生型ヒトＩＬ－１８と比較した。

[0415]配列番号１９および配列番号８９に対する凍結解凍サイクルの効果を試験した。タンパク質を、２０ｍＭアセテートｐＨ５．０、８％スクロース、０．１ｍＭＥＤＴＡ、および０．０２％ポリソルベート（ＰＳ）８０中で製剤化した。次いで、製剤を、５回、－８０℃で凍結し、２５℃で解凍した。次いで、タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーによって分析した。配列番号８９の主ピークの低下が観察され、二量体ピーク（矢印で示される）の出現も観察された（図３５、上パネル）。対照的に、配列番号１９については、変化は検出されなかったか、または最小限の変化が検出されたが（図３５、下パネル）、これは、凍結解凍サイクルへの曝露後の、このＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの優れた安定性を示している。

[0416]撹拌研究を使用した安定性の比較を、３７℃での撹拌への曝露後に実施した。配列番号１９および配列番号８９のタンパク質を、２０ｍＭアセテート、ｐＨ５．０、８％スクロース、０．１ｍＭＥＤＴＡ、および０．０２％ＰＳ８０中で製剤化した。試料を、３７℃で７２時間、振とうしながら撹拌した。試料をｔ＝０、２４（ｄ１）、および７２（ｄ３）時間で採取し、サイズ排除クロマトグラフィーによって分析した。配列番号８９の主ピークの低下が観察され、矢印で示される二量体／ＨＭＷ（高分子量）種の相対的増加も観察された（図３６、上パネル）。対照的に、配列番号１９については、変化は検出されなかったか、または最小限の変化が検出された。図３６は、撹拌研究から配列番号１９と配列番号８９とを比較するサイズ排除クロマトグラフィーデータを描写する。

[0417]ＩＬ－１８受容体の親和性。表面プラズモン共鳴を使用して、ヒトＩＬ－１８および配列番号１９の親和性を、ヒトとカニクイザルとの両方のＩＬ－１８ＲαおよびＩＬ－１８ＢＰについて決定した。ビオチン化受容体タンパク質をストレプトアビジン捕捉チップ上に固定化し、ＩＬ－１８または配列番号１９を遊離分析物として適用した。単一細胞反応速度を使用して結合を決定した。ＷＴｈＩＬ－１８および配列番号１９は、このアッセイにおいてはＩＬ－１８Ｒαに対して類似する結合親和性を有していた（図３７Ａ）。しかしながら、ＷＴＩＬ－１８は、極めて高い親和性（＜１ｎＭ）でＩＬ－１８ＢＰに結合したが、配列番号１９はＩＬ－１８ＢＰに対する検出可能な結合を示さなかった（図３７Ｂ）。

[0418]ＩＬ－１８ＢＰの存在下でのＷＴＩＬ－１８および配列番号１９の活性を、ＩＬ－１８受容体シグナル伝達が分泌型アルカリホスファターゼの発現をもたらすＩＬ－１８リポーターアッセイ（ＩｎＶｉｖｏＧｅｎからのＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－１８）を使用して評価した。ＷＴＩＬ－１８または配列番号１９を、１０^－６～１０^－９Ｍの範囲の濃度のＩＬ－１８ＢＰの存在下で、それぞれ、１．０または０．１ｎｇ／ｍＬの固定濃度でＨＥＫ－ＢＬＵＥＩＬ－１８リポーター細胞に適用した以外は、実施例６に記載されたように、リポーター細胞を培養し、分泌型アルカリホスファターゼレベルを測定した。下流の分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を、製造業者の使用説明書に従って測定した。ＷＴｈＩＬ－１８はＩＬ－１８ＢＰの添加によって強力に阻害されたが、配列番号１９は、ＩＬ－１８ＢＰの全ての濃度でＩＬ－１８Ｒシグナル伝達の強力な誘導を保持していた（図３８）。

実施例１０
ＩＬ－１８ポリペプチドの投薬
[0419]がんモデルにおいて、第１の投薬研究を実施して、１日１回、１日置き、週２回、および週１回のＤＲ－ＩＬ－１８の投薬の有効性および忍容性を比較した。この研究をマウスにおいて実行し、したがって、マウスＤＲＩＬ－１８バリアントポリペプチド（すなわち、マウスＩＬ－１８Ｒに結合し、これを活性化するが、マウスＩＬ－１８ＢＰによって阻害されないマウスＩＬ－１８）である配列番号６１を使用した。ヒトＩＬ－１８タンパク質はマウスＩＬ－１８Ｒと交差反応しない（すなわち、それはマウスＩＬ－１８Ｒに結合せず、これを活性化しない）ため、ヒトバリアントは使用しなかった。

[0420]２５０，０００個のＭＣ３８細胞を、皮下的に埋め込み、腫瘍が８０ｍｍ^３になったら、処置を開始した。投薬は、２週間にわたって皮下的に与えられる、ｑＤ（１日１回）、ｑｏＤ（１日置きに１回）、ＢｉＷ（週２回）、またはｑＷ（週１回）であった。全ての用量およびスケジュールが有効性を示した（図３９）。多くのレジメンが良好に忍容された。しかしながら、毎日の投薬は、０．１ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）およびそれ以上で毒性を示した。腫瘍の増殖は一般的に、処置を中止した後に起こった。腫瘍成長曲線を、エンドポイントに達したら繰り越して最後のポイントと共に描写する。５０％以上の動物がエンドポイントに達したら、曲線を終結させた。結果：０．１ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）およびそれ以上での毎日の投薬は、毒性的であると考えられ、体重減少と関連していた。ＤＲ－ＩＬ－１８は、他の全ての投薬スケジュールで有効であった。有効性は、抗ＰＤ－１療法よりも優れており、これは試験した全ての用量で、また、週１回の投薬でも明らかであった。

[0421]がんモデルにおいて、第２の投薬実験を実施して、週１回の投薬と週２回の投薬とを比較した。上記のように、これらの研究をマウスにおいて実行したため、配列番号６１を使用した。２５０，０００個のＭＣ３８細胞を皮下的に埋め込み、腫瘍が１００ｍｍ^３に達したら（７日目）、処置を開始した。皮下注射により、週１回（ｑＷ）の頻度で４用量または２週毎に１回（ｑ２Ｗ）の頻度で２用量を動物に投与した。１００倍範囲の用量（０．０１から１．０ｍｇ／ｋｇまで）を試験した。全ての用量およびスケジュールが、０．０１ｍｇ／ｋｇでも有効性を示した。最大有効用量（ＭａｘＥＤ）は、ｑＷとｑ２Ｗとの両方の投薬において約０．３２ｍｇ／ｋｇであった（図４０）。低頻度のパルス投薬を用いた場合でも、強力なＤＲＩＬ－１８有効性が観察された。２週毎に１回の投薬であっても、週２回の抗ＰＤ－１処置よりも有効であった。半減期延長または頻繁な投薬（例えば、ＩＬ－２のＴＩＤ投薬）を必要とする他のインターロイキン（例えば、ＩＬ－２／ＩＬ－１５、ＩＬ－１０）の投薬要件を考慮すると、これは非常に驚くべきことであった。

[0422]サル忍容性アッセイを実施して、種々の用量で、および週１回（ｑＷ）または週２回（ＢｉＷ）の投薬スケジュールを使用して、ＤＲ－ＩＬ－１８がどれぐらい良好に忍容されるかを決定した。カニクイザルを、毎週（ｑＷ）または週２回（ＢｉＷ）、０．００１ｍｇ／ｋｇ～３．２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のＤＲ－ＩＬ－１８（配列番号８９または配列番号１９）で皮下的に処置した。血液を定期的に採取し、血液中のヘモグロビンレベルを測定した。例示的な投薬および試料採取レジメンを、図４１Ａに提供する。その結果、週１回を超える投薬頻度が、研究においてヘモグロビン濃度の望ましくない低下を惹起することが示された。週２回、配列番号８９で皮下的に処置されたカニクイザルは、食塩水で処置したサルと比較して、ヘモグロビンの用量依存的減少を示した（図４１Ｂ、上パネル）。対照的に、ＤＲ－１８（配列番号８９または配列番号１９）を用いた週１回の処置は、最大で３．２ｍｇ／ｋｇであっても、対照食塩水処置と比較してヘモグロビンレベルの低下をもたらさなかった（図４１Ｂ、上パネルおよび下パネル）。

実施例１１
細菌（大腸菌）中でのＤＲ－ＩＬ－１８バリアントの産生
プロセス１：ＳＵＭＯ－プロテアーゼによる無細胞ｉｎｖｉｔｒｏ切断
[0423]本実施例では、ＤＲ－ＩＬ－１８（この場合、配列番号８９）を、Ｈｉｓタグ付ＳＵＭＯタグでタグ付けし、大腸菌中で発現させ、Ｈｉｓタグ付ＳＵＭＯプロテアーゼを使用して、ＳＵＭＯタグを切断し、活性ＩＬ－１８タンパク質を産生させた。

[0424]ＤＲ－ＩＬ－１８を、Ｎ末端６ｘＨｉｓ－ＳＵＭＯタグを有する大腸菌細胞質発現ベクター中にクローニングした。大腸菌を、振とうフラスコ中、１００ｍＬのＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ中で増殖させ、２０℃で１６時間、ＩＰＴＧで誘導した。細菌溶解物からの融合タンパク質（ＤＲ－ＩＬ－１８に融合させたＨｉｓタグ付ＳＵＭＯタグ）の初期捕捉を、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）を使用して実施した。これは効率的であり、９０％を超える純度で高いステップ収率を示した。ＳＵＭＯタグを除去するためのＨｉｓタグ付Ｕｌｐ１ＳＵＭＯプロテアーゼを用いた切断反応後、除去されたＨｉｓタグ付ＳＵＭＯタグおよびＨｉｓタグ付ＳＵＭＯプロテアーゼを、枯渇モードでＩＭＡＣを使用して効率的に除去した。収率および純度を、ＳＤＳ／ＰＡＧＥによって評価した。得られるタンパク質は、このステップの後、９０％を超えて純粋であった（９５％を超えることが多い）（図４２Ａ）。切断は効率的であり、１：５００以上の比で行うことができる。注記：より低い温度（２１℃）での発現は、可溶性収率を大きく増加させる（この特定の研究は２６℃で実施した）。図４２Ｂは、プロセシングおよび精製ステップをまとめたものである。

[0425]図４３Ａおよび図４３Ｂは、ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイによってモニタリングされた、切断反応の結果を提供する。ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイを使用して、ステップ収率および力価を同様に算出することができる。

プロセス２：同時発現されるＳＵＭＯ－プロテアーゼを用いた細菌細胞の内部での切断
[0426]本実施例は、ＳＵＭＯタグ付ＩＬ－１８（この場合、安定化されたＤＲＩＬ－１８である配列番号１９）およびＳＵＭＯ－プロテアーゼを、細菌（この場合、大腸菌）中で同時発現させ、細菌細胞の内部での切断によってＳＵＭＯタグの除去を得ることができることを示す。ＳＵＭＯプロテアーゼを、ラムノース誘導性プロモーターの制御下で発現させた。プロテアーゼのラムノース誘導により、ＩＬ－１８（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８）と比較して、プロテアーゼの別々のタイミングで調節可能な誘導が可能となった。ＳＵＭＯ－タグ付ＤＲ－ＩＬ－１８を発現する大腸菌を、０．１～２ｍＭのＬ－ラムノースで処理したところ、ＳＵＭＯプロテアーゼ発現の誘導、および非タグ付の配列番号１９を遊離させるＳＵＭＯタグの切断が得られた（図４４）。注記：非還元的ゲル上で、ＳＵＭＯタグはＤＲ－１８より上に泳動する；プロモーターの「漏れやすさ」のため、ラムノース処理なしでも一部の切断を観察することができる。

[0427]切断産物の総発現は、ＳＵＭＯ－融合物と同等であった（ＳＵＭＯ質量を構成した後）。ｉｎｖｉｖｏ（細菌細胞中）での切断を、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした（図４５、ラムノース処理した培養物についてＳＵＭＯタグの切断を示す）。０．２～０．５ｍＭのＬ－ラムノースは、これらの特定の実験において良好な結果をもたらすと考えられた。

[0428]２シストロン形式でＩＬ－１８（例えば、ＤＲ－ＩＬ－１８）の下流にＳＵＭＯ－プロテアーゼを置くことによって、ならびに別々のプロモーターから（例えば、別々のプラスミドから）、例えば、本実施例におけるように、ラムノース誘導性プロモーターなどの誘導性プロモーターの下で、ＳＵＭＯプロテアーゼを発現させることによって、好結果が得られた。

[0429]下流のプロセスを使用して、切断産物（すなわち、活性ＤＲ－ＩＬ－１８タンパク質）を捕捉および精製することができる（例えば、実施例１２を参照されたい）。

[0430]ｉｎｖｉｖｏ（細菌細胞中）での切断を、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。図４５は、ｉｎｖｉｖｏ（細菌細胞中）での切断に関するクロマトグラフを提供する。注記：ラムノースプロモーターの「漏れやすさ」は、融合タンパク質の多くを切断する十分なＳＵＭＯプロテアーゼを作出した。０．２～０．５ｍＭのＬ－ラムノースは、これらの特定の実験において最適な濃度範囲であると考えられた。

実施例１２
酵母（ピチア・パストリス）を使用したＩＬ－１８バリアントの産生
[0431]ＤＲ－ＩＬ－１８の発現および分泌のための系を、ピチア・パストリス（酵母）を使用して開発した。シグナルペプチドをＤＲ－ＩＬ－１８に付加し、発現ベクター中にクローニングした（図４６、上）。この系は、シグナルペプチダーゼ／Ｋｅｘ２によるＤＲ－ＩＬ－１８の分泌およびシグナルペプチドの切断をもたらし、タグを除去するためのプロテアーゼの必要性を回避する。

[0432]この実例では、ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントである配列番号８９および配列番号８７を試験した。ＤＲ－ＩＬ－１８バリアントをＴｗｉｓｔＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって合成し、分泌的発現のためのｎ末端ａｇａ２リーダー配列を含有するピチア・パストリス発現ベクター中にクローニングした。プラスミドをピチア中に形質転換し、３０℃で６０時間、メタノール誘導によって発現させたところ、一部の場合、１ｇ／Ｌを超える高力価でＤＲ－ＩＬ－１８が産生された。活性な天然Ｎ末端（ヒトＩＬ－１８の場合、チロシン）を有するＤＲ－ＩＬ－１８が、培地中に直接分泌された（図４７）。

[0433]９７％を超える純度、９６％の単分散性、２ＥＵ／ｍｇ未満へのＩＬ－１８（この場合、ＤＲＩＬ－１８、配列番号８９）のタグを用いない精製のために、２クロマトグラフィーステップのプロセスを使用した（図４６および図４８；ＵＦＤＦ＝限外濾過（ＵＦ）および透析濾過（ＤＦ））。「ＣａｐｔｏＭＭＣ」は、充填層クロマトグラフィーによる大きい供給体積からのタンパク質の捕捉および中間体精製のためのマルチモーダル耐塩性樹脂である。ＨＩＣ＝疎水性相互作用クロマトグラフィー（例えば、フェニルセファロースＨＩＣがこの図面に描写される）。

[0434]ＤＲ－１８精製を実施した。図４８は、ＤＲ－１８の精製（例えば、ピチア・パストリスまたは細菌からの）を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。２クロマトグラフィーステップのプロセスは、９７％を超える純度、９６％の単分散性、２ＥＵ／ｍｇ未満へのＩＬ－１８（この場合、ＤＲＩＬ－１８、配列番号８９）のタグを用いない精製を容易にした。ＵＦＤＦ＝限外濾過（ＵＦ）および透析濾過（ＤＦ）。「ＣａｐｔｏＭＭＣ」は、充填層クロマトグラフィーによる大きい供給体積からのタンパク質の捕捉および中間体精製のためのマルチモーダル耐塩性樹脂である。ＨＩＣ＝疎水性相互作用クロマトグラフィー（例えば、フェニルセファロースＨＩＣがこの図面に描写される）。

実施例１３
ＤＲＩＬ－１８バリアントの産生のための細胞バンクの生成
[0435]本実施例は、Ｃ３８およびＣ６８位に突然変異を有する本開示のＤＲＩＬ－１８バリアントである配列番号１９の産生のためのプラスミド系および細胞バンクの生成を示す。

[0436]大腸菌における配列番号１９の発現のために、デュアルプラスミド系を生成した。完全な活性のために、ＩＬ－１８（例えば、配列番号１９などのＤＲＩＬ－１８）は、Ｎ末端メチオニンよりもむしろ、その天然のＮ末端を必要とし得る。したがって、ＳＵＭＯリーダーをＳＵＭＯプロテアーゼ、ＵＬＰ１によって切断除去することができるように、Ｎ末端でサッカロミセス・セレビジアに由来するＳＵＭＯリーダー配列を用いる小さいユビキチン関連修飾因子（ＳＵＭＯ）発現系を使用して、プラスミドを設計した。

[0437]ＳＵＭＯリーダーペプチドを用いたＤＲＩＬ－１８の発現は、発現を最大化するために高コピープラスミド中のＴ７プロモーターによって駆動された。ｐＤ４５１－ＳＲプラスミド骨格を使用した。このプラスミドは、カナマイシン耐性遺伝子、ｐＵＣ複製起点を含有し、イソプロピルβ－ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）誘導後に配列番号１９のタンパク質を発現させるために存在するＴ７プロモーターを有する。

[0438]培養物に添加されるラムノースの量を変化させることによって発現を調節することができるように、比較的弱いラムノースプロモーターによって駆動されるＳＵＭＯプロテアーゼの発現のために第２の低コピー数プラスミドを使用した。ＳＵＭＯプロテアーゼ遺伝子を、プラスミドｐＤ８８３－ＳＲ中にクローニングした。このプラスミドは、クロラムフェニコール耐性遺伝子、ｐ１５ａ複製起点を含有し、ラムノース誘導後にＳＵＭＯプロテアーゼの制御された発現を可能にするためのｒｈａＢＡＤ調節配列の一部としてラムノースプロモーターを有する。

[0439]両プラスミドを、大腸菌株Ｔ７Ｅｘｐｒｅｓｓ中に同時に形質転換し、カナマイシンとクロラムフェニコールとの両方を含有する寒天プレートを使用して、プラスミドを有するクローンを選択した。Ｔ７Ｅｘｐｒｅｓｓは、ＩＰＴＧ誘導後にＴ７プロモーターを使用する遺伝子の非常に高い発現を可能にする株である。それは、ラクトースオペロン中にＴ７ポリメラーゼを含有し、ラムダプロファージを含有しない。異なる複製起点および異なる抗生物質耐性遺伝子を有する２つのプラスミドの系により、両方のプラスミドを安定な様式で維持し、独立に試験することができる。ＳＵＭＯプロテアーゼおよびＳＵＭＯリーダーペプチドは両方とも、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有し、それによって、固定化金属親和性クロマトグラフィーによるその除去を可能にする。この発現系は、例えば、２～３ｇ／Ｌで、ＳＵＭＯプロテアーゼによって適切に切断された、正確にプロセシングされた配列番号１９の非常に高い発現を可能にするように設計された。

[0440]大腸菌株Ｔ７Ｅｘｐｒｅｓｓコンピテント細胞を、各々１μＬの２つのプラスミドで形質転換した。形質転換された細胞を、５０μｇ／ｍＬのカナマイシン（ＫＡＭ）および５０μｇ／ｍＬのクロラムフェニコール（ＣＡＭ）を添加したＬＢ寒天プレート上、３７℃で一晩増殖させた。単一の、よく増殖したコロニーを、１０ｍＬの培地中に接種し、３０℃で一晩増殖させた。等量の一晩培養物と、３０％（ｖ／ｖ）の滅菌グリセロール溶液とを混合した後、混合溶液を好適なバイアル中に（２００μＬで）アリコートし、－２０℃で保存することによって、細胞バンクを調製した。

[0441]１つのバイアルを解凍し、５０μｇ／ｍＬのＫＡＭおよび５０μｇ／ｍＬのＣＡＭを含有するＴＢＡ（ＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈＡｇａｒ）プレート上で二次培養し、３０℃で２０～２４時間インキュベートした。単一のコロニーを、５０ｍＬの培地中に接種し、３０℃、２２０ｒｐｍで一晩、シェーカーインキュベーター中でインキュベートした。この培養物を、ＯＤ６００ｎｍで０．２～０．３ＯＵにて接種し、３０℃、２２０ｒｐｍでシェーカーインキュベーター中でインキュベートした。最終培養物のＯＤ６００ｎｍは、１．９であった（グリセロール前）。５６ｍＬの細胞培養物と、８ｍＬの８０％滅菌グリセロール（１０％最終濃度）とを混合すること、および５０個の低温バイアル中にアリコートすること（それぞれ１ｍＬ）によって、新しい細胞バンクを調製した。バイアルを標識し、－８０℃冷凍庫中で直接保存した。この細胞バンクを凍結の前後に試験したところ、プラスミドの安定性および高濃度の生細胞の保持が示された（表１７）。

[0442]

[0443]１個のバイアルを、３０分以下をかけて２℃～８℃で穏やかに解凍した。解凍後、１ｍＬの細胞懸濁液を、塩および抗生物質（カナマイシンおよびクロラムフェニコール）を添加した調製されたＴＢ培地を含む０．５Ｌの振とうフラスコ中に移した。この培養物を、５．０ＯＵ以上の標的光密度に達するまで、３００ｒｐｍの撹拌速度で、３７℃で１５～１８ｈにわたってインキュベートした。その後、１回目の増殖に由来する必要量の細胞懸濁液を、１．５０ＯＵ～３．５０ＯＵの必要な光密度に達するまで少なくとも３～４時間にわたるさらなる培養のために１Ｌの振とうフラスコに移した。１６０ｍＬの２回目の増殖細胞培養物を合わせ、１６０ｍＬの５０％グリセロール溶液と混合し、１．０ｍＬの細胞懸濁液を滅菌低温バイアル中にアリコートし、適切に標識した。この第２の細胞バンクからのバイアルを、－８０±１０℃で凍結した。細胞バンク調製物のプロセス内対照は、凍結後の培養物純度、凍結後の総生細胞計数、および凍結後のプラスミド安定性であった。試験により、バクテリオファージ夾雑物は存在せず、プラスミドのコピー数は２８８．１５であることが示された。ＩＬ－１８をコードするプラスミドは、元々設計された配列に対する１００％の配列同一性を保持し、制限酵素消化により、プラスミド構造または挿入配列に変化がないことを示す予想されたプラスミド断片のサイズが得られた。

実施例１４
遊離チオールのＥｌｌｍａｎ滴定
[0444]本実施例は、Ｃ３８およびＣ６８位に突然変異を有する本開示のＤＲＩＬ－１８バリアントである天然の配列番号１９が、非常に少ない遊離システインを含有することを示す。

[0445]Ｅｌｌｍａｎ試薬（５，５’－ジチオ－ビス－［２－ニトロ安息香酸］／ＤＴＮＢ）を使用して、スルフヒドリル含有化合物の標準曲線と比較することによって、試料中のスルフヒドリル基を見積もった。ＤＴＮＢは、タンパク質の遊離チオールとの反応の際に、４１２ｎｍで吸収する着色生成物、２－ニトロ－５－チオ安息香酸（ＴＮＢ）を生成する。ＤＴＮＢと反応するチオール１モルにつき、１モルのＴＮＢが産生され、ＴＮＢの量を定量することによって、タンパク質１モルあたりに存在する遊離システインの数を見積もることができる。アッセイの結果は、実施例７および８における、Ｃ３８およびＣ６８の他の残基への突然変異、配列番号１９中の２つの残存するシステインの溶媒露出の欠如、ならびにそのような突然変異を有するポリペプチドについて観察された分子内および分子間ジスルフィド結合の形成の減少と一致して、非常に少ないシステインが天然の配列番号１９中に存在することを示す（表１８）。

[0446]

実施例１５
製剤開発
[0447]製剤開発を実施して、毒性および臨床研究のための製剤原料および医薬品製剤を選択した。配列番号１９の製剤原料の製剤開発プロセスは、最適ｐＨ、タンパク質濃度、および賦形剤スクリーニングの評価を含んでいた。製剤は、以下の製品特質を支持することが意図された：液体形態、無菌性、皮下注射の好適性、および２℃～８℃または－２０℃の温度で少なくとも２４ヶ月の保存可能期間。製剤を、安定性研究によって評価した。安定性研究の詳細は、以下に記載される。

[0448]１．選択されたｐＨ値でのタンパク質完全性の可能な変更のため、ストレスを加えた試料を、初期試料と比較した。ストレス条件は、最大３週間にわたる４０±２℃／２５％ＲＨであった。

[0449]２．凍結－解凍サイクルを実施して、凍結および解凍の反復に対するタンパク質の感度を評価した。最大５回の凍結－解凍サイクルを、以下の条件で実施した：－８０℃で最大１６時間、次いで、室温で８時間。

[0450]３．振とうしながらの撹拌を実施して、タンパク質の分解経路および速度を評価した（１５０ｒｐｍで最大２週間にわたって２５℃／６０％ＲＨ）。配列番号１９の製剤原料の製剤開発研究を、表１９にまとめる。

[0451]

[0452]
[0453]研究１の間に、異なる濃度およびｐＨを有する６つの製剤を、熱ストレス条件で比較した。より低いｐＨを有する製剤は、４０±２℃／２５％ＲＨで３週間後にあまり安定ではなかった。したがって、ｐＨ６．５および７．０を、研究２のために選択した。また、研究１の間のタンパク質純度は、タンパク質濃度への依存性を示さなかった。したがって、２０ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を、研究２において使用した。研究２の間に、追加の賦形剤、エチレンジアミン四酢酸およびＬ－メチオニンを製剤に添加して、最適なタンパク質安定性を維持し、その酸化を防止した。製剤間の差異は、全ての試験した条件で観察されなかった。製剤開発の結果に従って、最終的な選択された組成物は、ｐＨ６．５の１０ｍＭＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン－ＨＣｌ、８％スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０中、３０ｍｇ／ｍＬの配列番号１９のタンパク質であった。

実施例１６
処置用量を決定するためのヒトへの投与
[0454]この研究の主目的は、再発性または不応性の固形腫瘍を有する患者における配列番号１９のＭＴＤおよびＲＰ２Ｄを決定することである。副次的目的は、配列番号１９の全体の安全性および忍容性を評価すること、ならびに単剤としての配列番号１９の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを特徴付けることである。治験責任医師は、ＤＬＴおよび有害事象（ＡＥ）の発生、臨床検査パラメーター、バイタルサイン、ＥＣＧ検査およびパラメーター、身体検査値の変化、ならびに抗配列番号１９抗体の発生を見ることによって、研究の安全性をモニタリングする。配列番号１９は免疫アゴニストであるため、治験責任医師はさらに、患者がサイトカインストームを生じる可能性をモニタリングする。

[0455]再発性または不応性の固形腫瘍を有する患者を、用量漸増研究に登録して、配列番号１９の最大耐量（ＭＴＤ）および推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定する。適格患者は、１８歳以上であり、標準治療によって疾患進行を有する固形腫瘍を有すると診断されるか、または生存期間を延長する標準治療が利用可能ではないか、または好適ではない者である。患者は、２８日間（１サイクル）にわたって週１回、皮下（ＳＣ）用量の配列番号１９を受ける。用量は、患者の１ｋｇあたり３０μｇの配列番号１９（μｇ／ｋｇ）から１２００μｇ／ｋｇの範囲にあってよい。さらなる用量漸増は、１２００μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇの範囲を含んでもよい。初期試験用量は、３０μｇ／ｋｇである。これらの２つの範囲内の任意の用量は、ＭＴＤおよびＲＰ２Ｄを決定するための研究内で試験可能である。用量漸増は、最初に、第１の用量後、２８日の一次用量制限毒性（ＤＬＴ）モニタリング期間を用いた２人の患者のコホートを含むｍＴＰＩモデルに従う。新しい患者が新しい用量の量を受ける前に、新しい用量の第１の用量後、７日間にわたって患者をモニタリングする。

[0456]ｍＴＰＩモデルは、決定規則が、過少投与、適切投与、および過剰投与に対応する３つの投薬間隔の単位確率質量（ＵＰＭ）の算出に基づく、単純なベータ２項階層モデルを使用する。ｍＴＰＩ法は、３つの投薬間隔に関するＵＰＭを算出し、最大のＵＰＭを有するものは、対応する用量設定の決定を意味し、その決定は、将来の患者のために使用されるべき用量レベルを提供する。標的毒性確率は２５％であり、許容し得るＤＬＴ間隔は２０～３０％である。第１サイクルにおける初期の２人の患者がＤＬＴを経験しない場合、次のコホートの登録は、次のサイクルにおける次の用量レベルで開始する。２人の初期患者のうちの１人がＤＬＴを経験する場合、用量を次の最低用量まで低下させる。コホートが６人の患者に拡大する時に、より低い用量レベルでさらなるＤＬＴが観察されない場合、用量漸増を再開する。最初のＤＬＴが観察されたら、３３％以下の用量増分のみを、残りの全てのコホートに適用する。

[0457]研究の終わりのＭＴＤの評価は、等張回帰に由来する。具体的には、ＭＴＤの評価は、ＤＬＴ率の等張評価が２５％未満または２５％に等しい用量レベルであり、それは、ＤＬＴ率の等張評価が標的ＤＬＴ率に最も近い用量レベルである。４２人の患者の最大サンプルサイズが達成されたか、６～１２人の患者がＭＴＤであると予測される用量レベルで登録されたか、または探索した全ての用量が過剰に毒性であると考えられ、ＭＴＤを決定することができない場合、用量漸増を停止する。

[0458]ＰＫ分析のための血液試料を全ての患者から収集し、治験責任医師はこれらの試料を使用して、ＰＫパラメーターを算出する。血液試料を、サイクル１の１、２、３、８、１５、および２２日目、サイクル２の１および１５日目、ならびにサイクル３から始まって研究完了までの交互サイクルの１日目に収集する。患者はまた、配列番号１９の最後の用量の３０日後、および患者が新しい療法を開始する前に、血液試料を提供する。ＰＫパラメーターであるＣ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０－１、ＡＵＣτ、ＡＵＣ_０－∞、およびｔ_１／２を、可能な場合、ノンコンパートメント分析を使用して、血漿濃度－時間データから見積もる。適切な場合、さらなるＰＫパラメーターを考慮することができる。治験責任医師はまた、血液試料を使用した抗薬物抗体の開発のために患者をモニタリングする。

実施例１７
固形腫瘍を有する患者における有効性の試験
[0459]この研究の主目的は、再発性固形腫瘍コホートにおいてＲＰ２Ｄでの配列番号１９の抗腫瘍活性を評価することである。この研究に関する主要有効性評価項目は、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって完全奏功（ＣＲ）または部分奏功（ＰＲ）を有する患者を見る確認された客観的奏功である。副次的有効性評価項目は、最良の客観的奏功、疾患制御率（ＤＣＲ）（ＣＲ、ＰＲ、または１２週以上にわたる安定疾患（ＳＤ））、奏功期間（ＤＯＲ）、奏功までの期間（ＴｏＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、および全生存期間（ＯＳ）を含むであろう。

[0460]異なる固形腫瘍型を有する患者を研究に登録して、これらの腫瘍型における配列番号１９処置の有効性を評価する。適格な患者は、１８歳以上であり、以下の固形腫瘍型：黒色腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、または高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈｉ）腫瘍のうちの１つを有する。第１の用量の２８日以内に、患者は必須の腫瘍生検を受ける。ＲＣＣ、ＴＮＢＣ、ＮＳＣＬＣ、およびＭＳＩ－Ｈｉについて、最大で２５人の患者をそれぞれの腫瘍型について登録することができる；転移性黒色腫およびＳＣＣＨＮがん型は、がん型あたり最大２８人の患者を登録することができる。治験責任医師ががん型コホートにおいていかなる客観的奏功も観察しない場合、追加の患者をそのコホートに登録しない。

[0461]患者は、２８日間（１サイクル）にわたって、週１回、１回皮下用量の配列番号１９を受ける。用量は、ヒト用量漸増研究からのＲＰ２Ｄである。患者は、研究の間に８または１２週毎に疾患評価を受け、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャン、および／またはポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを含んでもよい。治験責任医師は、固形腫瘍における奏功評価基準（ＲＥＣＩＳＴ１．１）を使用してスキャンから全ての標的および非標的病変を評価する。サイクル２の開始前に、患者は、２回目の必須の腫瘍生検を受ける。研究の間に疾患進行が起こる場合、患者は疾患進行の時点で任意による生検を要求してもよい。

[0462]ＰＫ分析のための血液試料を全ての患者から収集し、治験責任医師はこれらの試料を使用して、ＰＫパラメーターを算出する。血液試料を、サイクル１の１および１５日目、サイクル２の１および１５日目、ならびにサイクル３から始まって研究完了までの交互サイクルの１日目に収集する。患者はまた、配列番号１９の最後の用量の３０日後、および患者が新しい療法を開始する前に、血液試料を提供する。ＰＫパラメーターであるＣ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０－１、ＡＵＣτ、ＡＵＣ_０－∞、およびｔ_１／２を、可能な場合、ノンコンパートメント分析を使用して、血漿濃度－時間データから見積もる。適切な場合、さらなるＰＫパラメーターを考慮することができる。治験責任医師はまた、血液試料を使用した抗薬物抗体の開発のために患者をモニタリングする。
アミノ酸配列
野生型ＩＬ－１８アミノ酸配列
ヒトインターロイキン－１８（成熟形態）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ（配列番号３０）
マウスインターロイキン－１８（成熟形態）
ＮＦＧＲＬＨＣＴＴＡＶＩＲＮＩＮＤＱＶＬＦＶＤＫＲＱＰＶＦＥＤＭＴＤＩＤＱＳＡＳＥＰＱＴＲＬＩＩＹＭＹＫＤＳＥＶＲＧＬＡＶＴＬＳＶＫＤＳＫＭＳＴＬＳＣＫＮＫＩＩＳＦＥＥＭＤＰＰＥＮＩＤＤＩＱＳＤＬＩＦＦＱＫＲＶＰＧＨＮＫＭＥＦＥＳＳＬＹＥＧＨＦＬＡＣＱＫＥＤＤＡＦＫＬＩＬＫＫＫＤＥＮＧＤＫＳＶＭＦＴＬＴＮＬＨＱＳ（配列番号３１）
Ｑ１４１１６ＩＬ１８＿ヒトインターロイキン－１８（非切断前駆体）
ＭＡＡＥＰＶＥＤＮＣＩＮＦＶＡＭＫＦＩＤＮＴＬＹＦＩＡＥＤＤＥＮＬＥＳＤＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ（配列番号３２）
Ｐ７０３８０ＩＬ１８＿マウスインターロイキン－１８（非切断前駆体）
ＭＡＡＭＳＥＤＳＣＶＮＦＫＥＭＭＦＩＤＮＴＬＹＦＩＰＥＥＮＧＤＬＥＳＤＮＦＧＲＬＨＣＴＴＡＶＩＲＮＩＮＤＱＶＬＦＶＤＫＲＱＰＶＦＥＤＭＴＤＩＤＱＳＡＳＥＰＱＴＲＬＩＩＹＭＹＫＤＳＥＶＲＧＬＡＶＴＬＳＶＫＤＳＫＭＳＴＬＳＣＫＮＫＩＩＳＦＥＥＭＤＰＰＥＮＩＤＤＩＱＳＤＬＩＦＦＱＫＲＶＰＧＨＮＫＭＥＦＥＳＳＬＹＥＧＨＦＬＡＣＱＫＥＤＤＡＦＫＬＩＬＫＫＫＤＥＮＧＤＫＳＶＭＦＴＬＴＮＬＨＱＳ（配列番号３３）
第１世代のヒトインターロイキン－１８デコイ耐性バリアントのアミノ酸配列

第２世代のヒトインターロイキン－１８デコイ耐性バリアントのアミノ酸配列

マウスインターロイキン－１８デコイ耐性バリアントのアミノ酸配列

ヒトデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）バリアントのアミノ酸配列

マウスデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）バリアントのアミノ酸配列

配列番号８９（本明細書では「６－１２」とも称される）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号８９）
配列番号６
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｓ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号６）
配列番号１６
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｇ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＧＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１６）
配列番号１７
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ａ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＡＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１７）
配列番号１８
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｖ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＶＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１８）
配列番号１９
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｄ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＤＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１９）
配列番号２０
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｅ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＥＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号２０）
配列番号２１
配列番号８９のバリアント（Ｃ３８Ｓ／Ｃ６８Ｎ）
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＮＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号２１）
配列番号１
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１）
配列番号２
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号２）
配列番号３
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号３）
配列番号４
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号４）
配列番号５
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号５）
配列番号７
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号７）
配列番号８
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号８）
配列番号９
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号９）
配列番号１０
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１０）
配列番号１１
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１１）
配列番号１２
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＳＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１２）
配列番号１３
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＳＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１３）
配列番号１４
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＳＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１４）
配列番号１５
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＫＹＳＤＳＬＡＲＧＬＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＤＶＰＧＨＳＲＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＳＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ
（配列番号１５）
ＳＵＭＯタグの例
ＤＳＥＶＮＱＥＡＫＰＥＶＫＰＥＶＫＰＥＴＨＩＮＬＫＶＳＤＧＳＳＥＩＦＦＫＩＫＫＴＴＰＬＲＲＬＭＥＡＦＡＫＲＱＧＫＥＭＤＳＬＲＦＬＹＤＧＩＲＩＱＡＤＱＡＰＥＤＬＤＭＥＤＮＤＩＩＥＡＨＲＥＱＩＧＧ
（配列番号２６）
Ｈｉｓタグ付ＳＵＭＯタグの例
ＭＧＨＨＨＨＨＨＧＳＬＱＤＳＥＶＮＱＥＡＫＰＥＶＫＰＥＶＫＰＥＴＨＩＮＬＫＶＳＤＧＳＳＥＩＦＦＫＩＫＫＴＴＰＬＲＲＬＭＥＡＦＡＫＲＱＧＫＥＭＤＳＬＲＦＬＹＤＧＩＲＩＱＡＤＱＡＰＥＤＬＤＭＥＤＮＤＩＩＥＡＨＲＥＱＩＧＧ（配列番号２７）
ＳＵＭＯプロテアーゼの例
ＬＶＰＥＬＮＥＫＤＤＤＱＶＱＫＡＬＡＳＲＥＮＴＱＬＭＮＲＤＮＩＥＩＴＶＲＤＦＫＴＬＡＰＲＲＷＬＮＤＴＩＩＥＦＦＭＫＹＩＥＫＳＴＰＮＴＶＡＦＮＳＦＦＹＴＮＬＳＥＲＧＹＱＧＶＲＲＷＭＫＲＫＫＴＱＩＤＫＬＤＫＩＦＴＰＩＮＬＮＱＳＨＷＡＬＧＩＩＤＬＫＫＫＴＩＧＹＶＤＳＬＳＮＧＰＮＡＭＳＦＡＩＬＴＤＬＱＫＹＶＭＥＥＳＫＨＴＩＧＥＤＦＤＬＩＨＬＤＣＰＱＱＰＮＧＹＤＣＧＩＹＶＣＭＮＴＬＹＧＳＡＤＡＰＬＤＦＤＹＫＤＡＩＲＭＲＲＦＩＡＨＬＩＬＴＤＡＬＫ
（配列番号２８）
Ｈｉｓタグ付ＳＵＭＯプロテアーゼの例
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＳＬＶＰＥＬＮＥＫＤＤＤＱＶＱＫＡＬＡＳＲＥＮＴＱＬＭＮＲＤＮＩＥＩＴＶＲＤＦＫＴＬＡＰＲＲＷＬＮＤＴＩＩＥＦＦＭＫＹＩＥＫＳＴＰＮＴＶＡＦＮＳＦＦＹＴＮＬＳＥＲＧＹＱＧＶＲＲＷＭＫＲＫＫＴＱＩＤＫＬＤＫＩＦＴＰＩＮＬＮＱＳＨＷＡＬＧＩＩＤＬＫＫＫＴＩＧＹＶＤＳＬＳＮＧＰＮＡＭＳＦＡＩＬＴＤＬＱＫＹＶＭＥＥＳＫＨＴＩＧＥＤＦＤＬＩＨＬＤＣＰＱＱＰＮＧＹＤＣＧＩＹＶＣＭＮＴＬＹＧＳＡＤＡＰＬＤＦＤＹＫＤＡＩＲＭＲＲＦＩＡＨＬＩＬＴＤＡＬＫ
（配列番号２９）
本開示の例示的な非限定的態様
[0463]上記の本発明の主題の、実施形態を含む態様は、単独で、または１つもしくは複数の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて有益であり得る。前記説明を限定するものではないが、本開示のある特定の非限定的な態様を、セットＡおよびセットＢにおいて以下に提供する。本開示を読めば当業者には明らかであるように、個別に番号付けられた態様をそれぞれ使用するか、または先行する、もしくは以下の個別に番号付けられる態様のいずれかと組み合わせることができる。これは、全てのそのような態様の組合せに対する支持を提供することを意図するものであり、以下に明示的に提供される態様の組合せに限定されない。本発明の精神または範囲から逸脱することなく、種々の変更および改変を加えることができることが当業者には明らかであろう。

Claims

ＩＬ－１８結合タンパク質（ＩＬ－１８ＢＰ）よりも優先的にＩＬ－１８受容体（ＩＬ－１８Ｒ）に結合する改変されたインターロイキン－１８（ＩＬ－１８）ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号３０に記載の野生型（ＷＴ）ＩＬ－１８と、または配列番号６、８７～９１、および１６～２１のいずれか１つに記載のＩＬ－１８バリアントアミノ酸配列と８５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号３０に対してアミノ酸位置Ｃ３８およびＣ６８にアミノ酸突然変異を含み、ＩＬ－１８ＢＰよりもＩＬ－１８Ｒに優先的に結合する、改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｓ、Ｃ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｖ、Ｃ６８Ｄ、Ｃ６８Ｅ、またはＣ６８Ｎである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｓ、Ｃ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｄ、またはＣ６８Ｎである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｖ、Ｃ６８Ｄ、Ｃ６８Ｅ、またはＣ６８Ｎである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｄ、またはＣ６８Ｎである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｓである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｇである、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、デコイ耐性（ＤＲ）ＩＬ－１８またはデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアントである、請求項１～７のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、ＤＲＩＬ－１８であり、ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の位置：Ｙ１、Ｌ５、Ｋ８、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｓ５５、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｇ５９、Ｍ６０、Ｅ７７、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、Ｍ１１３、Ｖ１５３、およびＮ１５５の少なくとも２つに突然変異を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の位置：Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｍ６０、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、およびＭ１１３の少なくとも２つに突然変異を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の位置：Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｐ５７、Ｍ６０、Ｑ１０３、Ｓ１０５、Ｄ１１０、Ｎ１１１、およびＭ１１３の少なくとも５つに突然変異を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、Ｍ５１、Ｋ５３、Ｑ５６、Ｄ１１０、およびＮ１１１位に突然変異を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、Ｐ５７およびＭ６０位に突然変異をさらに含む、請求項１２に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、Ｓ１０位に突然変異をさらに含む、請求項１３に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の１８個の突然変異：（１）Ｙ１Ｈ、またはＹ１Ｒ、（２）Ｌ５Ｈ、Ｌ５Ｉ、またはＬ５Ｙ、（３）Ｋ８Ｑ、またはＫ８Ｒ、（４）Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｄ、Ｍ５１Ｎ、Ｍ５１Ｅ、またはＭ５１Ｒ、（５）Ｋ５３Ｒ、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、またはＫ５３Ｔ、（６）Ｓ５５Ｋ、またはＳ５５Ｒ、（７）Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｖ、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｋ、またはＱ５６Ｌ、（８）Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、Ｐ５７Ａ、またはＰ５７Ｋ、（９）Ｇ５９Ｔ、またはＧ５９Ａ、（１０）Ｍ６０Ｋ、Ｍ６０Ｑ、Ｍ６０Ｒ、またはＭ６０Ｌ、（１１）Ｅ７７Ｄ、（１２）Ｑ１０３Ｅ、Ｑ１０３Ｋ、Ｑ１０３Ｐ、Ｑ１０３Ａ、またはＱ１０３Ｒ、（１３）Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｋ、Ｓ１０５Ｎ、またはＳ１０５Ａ、（１４）Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｑ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１１０Ｓ、またはＤ１１０Ｇ、（１５）Ｎ１１１Ｈ、Ｎ１１１Ｙ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、またはＮ１１１Ｇ、（１６）Ｍ１１３Ｖ、Ｍ１１３Ｒ、Ｍ１１３Ｔ、またはＭ１１３Ｋ、（１７）Ｖ１５３Ｉ、Ｖ１５３Ｔ、またはＶ１５３Ａ、および（１８）Ｎ１５５Ｋ、またはＮ１５５Ｈの少なくとも５個を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の１０個の突然変異：（１）Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｄ、Ｍ５１Ｎ、Ｍ５１Ｅ、またはＭ５１Ｒ、（２）Ｋ５３Ｒ、Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、またはＫ５３Ｔ、（３）Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｖ、Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｋ、またはＱ５６Ｌ、（４）Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、Ｐ５７Ａ、またはＰ５７Ｋ、（５）Ｍ６０Ｋ、Ｍ６０Ｑ、Ｍ６０Ｒ、またはＭ６０Ｌ、（６）Ｑ１０３Ｅ、Ｑ１０３Ｋ、Ｑ１０３Ｐ、Ｑ１０３Ａ、またはＱ１０３Ｒ、（７）Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｋ、Ｓ１０５Ｎ、またはＳ１０５Ａ、（８）Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｑ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１１０Ｓ、またはＤ１１０Ｇ、（９）Ｎ１１１Ｈ、Ｎ１１１Ｙ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、またはＮ１１１Ｇ、および（１０）Ｍ１１３Ｖ、Ｍ１１３Ｒ、Ｍ１１３Ｔ、またはＭ１１３Ｋの少なくとも５個を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、以下の７個の突然変異：
（１）Ｍ５１Ｅ、Ｍ５１Ｒ、Ｍ５１Ｋ、Ｍ５１Ｔ、Ｍ５１Ｄ、またはＭ５１Ｎ；
（２）Ｋ５３Ｇ、Ｋ５３Ｓ、Ｋ５３Ｔ、またはＫ５３Ｒ；
（３）Ｑ５６Ｇ、Ｑ５６Ｒ、Ｑ５６Ｌ、Ｑ５６Ｅ、Ｑ５６Ａ、Ｑ５６Ｖ、またはＱ５６Ｋ；
（４）Ｄ１１０Ｓ、Ｄ１１０Ｎ、Ｄ１１０Ｇ、Ｄ１１０Ｋ、Ｄ１１０Ｈ、Ｄ１１０Ｑ、またはＤ１１０Ｅ；
（５）Ｎ１１１Ｇ、Ｎ１１１Ｒ、Ｎ１１１Ｓ、Ｎ１１１Ｄ、Ｎ１１１Ｈ、またはＮ１１１Ｙ；
（６）Ｐ５７Ａ、Ｐ５７Ｌ、Ｐ５７Ｇ、またはＰ５７Ｋ；および
（７）Ｍ６０Ｌ、Ｍ６０Ｒ、Ｍ６０Ｋ、またはＭ６０Ｑ
の少なくとも５個を含む、請求項９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、突然変異Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｄ、またはＳ１０５Ｋをさらに含む、請求項１７に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、ＩＬ－１８受容体（ＩＬ－１８Ｒ）に特異的に結合するＤＲＩＬ－１８バリアントであるが、前記ＷＴＩＬ－１８と比較して、ＩＬ－１８結合タンパク質（ＩＬ－１８ＢＰ）への結合の減少を示し、ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号３０に対して、突然変異Ｍ５１Ｋ、Ｋ５３Ｓ、Ｑ５６Ｌ、Ｄ１１０Ｓ、およびＮ１１１Ｒを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、突然変異Ｐ５７Ａ、Ｍ６０Ｌ、およびＳ１０５Ｄをさらに含む、請求項１９に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異が、Ｃ６８Ｇ、Ｃ６８Ａ、Ｃ６８Ｄ、またはＣ６８Ｎである、請求項２０に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
Ｃ３８位の突然変異がＣ３８Ｓであり、Ｃ６８位の突然変異がＣ６８Ｇである、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号１～２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号６および１６～２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号６、１６、１７、１９、および２１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列と８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＤＲＩＬ－１８バリアントが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
改変されたＩＬ－１８ポリペプチドが、ＩＬ－１８ポリペプチドに天然ではないシステイン残基を含まない、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、０．６ｎＭより低い、ＩＬ－１８ＢＰへの結合親和性を有する、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
改変されたＩＬ－１８ポリペプチドが、異なる配列を有するＩＬ－１８ポリペプチドと比較して優れた安定性を示す、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
改変されたＩＬ－１８ポリペプチドが、安定性アッセイ、凍結融解サイクル、または撹拌への暴露後に、少ない二量体、多量体、凝集体、および／または分解産物形成を示す、請求項３０に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＷＴＩＬ－１８と８５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列が、ペグ化されたアミノ酸を含まない、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＷＴＩＬ－１８と８５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列が、非天然のシステイン残基を含まない、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
ＷＴＩＬ－１８と８５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列が、ペグ化されたシステイン残基を含まない、請求項１に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド。
請求項１～３４のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチド、および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ２、またはこれらの任意の組合せを阻害する、免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）をアゴナイズする薬剤；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）をアゴナイズする薬剤；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）をアゴナイズする薬剤；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤；インフラマソーム活性化因子；Ｔ細胞エンゲージャー；サイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）；またはこれらの任意の組合せから選択される免疫アゴニストをさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２００、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２２１、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ３１９、ＥＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、１７－１Ａ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＡ、ＡＸＬ、ＴＷＥＡＫＲ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、ＧＤ２ガングリオシド、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、メソテリン、エンドグリン、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＰＳＭＡ、ＢＡＦＦ、ＦＧＦＲ２、ＴＡＧ－７２、ゼラチナーゼＢ、グリピカン３、ネクチン－４、ＢＣＭＡ、ＣＳＦ１Ｒ、ＳＬＡＭＦ７、インテグリンα_ｖβ_３、ＴＹＲＰ１、ＧＰＮＭＢ、ＣＬＤＮ１８．２、ＦＯＬＲ１、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ＭＩＣＡ、Ｃ２４２抗原、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＥＧＦＬ７、ビメンチン、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、ＴＲＯＰ－２、ＬＲＲＣ１５、ＦＡＰ、ＳＬＩＴＲＫ６、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、テネイシン－３、ＳＴＥＡＰ１、およびＮＲＰ１から選択される１つまたは複数の抗原を標的化する、がん細胞オプソニン化剤をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）ポリペプチドが、免疫チェックポイント阻害剤、免疫アゴニスト、またはがん細胞オプソニン化剤にコンジュゲートされる、請求項３５に記載の組成物。
操作されたＴまたはＮＫ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、操作されたＴＣＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をさらに含む、請求項３５～３９のいずれか一項に記載の組成物。
請求項１～４０のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチドを含む、医薬製剤。
１５～１００ｍｇ／ｍＬの濃度のＩＬ－１８ポリペプチドをさらに含む、請求項４１に記載の医薬製剤。
皮下注射用に製剤化される、請求項４１または請求項４２に記載の医薬製剤。
ｐＨを６．２と６．８の間に維持する緩衝化剤、
糖、
キレート化剤、
酸化を防止する薬剤、および
タンパク質吸収を防止する薬剤
を含む、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
請求項１～３４のいずれか一項に記載のＩＬ－１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
核酸が、プラスミドまたはウイルスベクターである、請求項４５に記載の核酸。
ＩＬ－１８ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）プロテアーゼによって切断可能なＳＵＭＯタグをコードするヌクレオチド配列の３’側すぐに、それとインフレームで融合される、請求項４５または請求項４６に記載の核酸。
ＳＵＭＯプロテアーゼがＵＬＰ１である、請求項４７に記載の核酸。
ＳＵＭＯタグが、配列番号２６または２７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の核酸。
請求項４５～４９のいずれか一項に記載の核酸を含む細胞。
ＳＵＭＯプロテアーゼをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む、請求項５０に記載の細胞。
細菌細胞である、請求項５０または請求項５１に記載の細胞。
酵母細胞である、請求項５０に記載の細胞。
コードされたインターロイキン－１８（ＩＬ－１８）ポリペプチドを発現する、操作されたＴまたはＮＫ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、操作されたＴＣＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項５０に記載の細胞。
請求項１～３４のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチドを、それを必要とする個体に投与し、それにより個体における疾患または障害を処置するステップを含む、処置の方法。
疾患または障害が、がん、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に耐性であるがん、ＭＨＣクラスＩの表面発現が減少したかまたはない腫瘍と関連するがん、高レベルのＩＬ－１８ＢＰと関連するがん、高い腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）を有するがん、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を有する腫瘍を有するがん、ＩＬ－１８Ｒが浸潤Ｔ細胞またはＮＫ細胞上に発現される腫瘍と関連するがん、代謝疾患または障害、および感染症からなる群から選択される、請求項５５に記載の方法。
免疫チェックポイント阻害剤、および免疫アゴニスト、またはがん細胞オプソニン化剤を個体に投与するステップを含む、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ２、またはこれらの任意の組合せを阻害する、免疫チェックポイント阻害剤を個体に投与するステップを含む、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）をアゴナイズする薬剤；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）をアゴナイズする薬剤；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）をアゴナイズする薬剤；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤；インフラマソーム活性化因子；Ｔ細胞エンゲージャー；サイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）；またはこれらの任意の組合せから選択される免疫アゴニストを個体に投与するステップを含む、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２００、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２２１、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ３１９、ＥＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、１７－１Ａ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＡ、ＡＸＬ、ＴＷＥＡＫＲ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、ＧＤ２ガングリオシド、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、メソテリン、エンドグリン、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＰＳＭＡ、ＢＡＦＦ、ＦＧＦＲ２、ＴＡＧ－７２、ゼラチナーゼＢ、グリピカン３、ネクチン－４、ＢＣＭＡ、ＣＳＦ１Ｒ、ＳＬＡＭＦ７、インテグリンα_ｖβ_３、ＴＹＲＰ１、ＧＰＮＭＢ、ＣＬＤＮ１８．２、ＦＯＬＲ１、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ＭＩＣＡ、Ｃ２４２抗原、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＥＧＦＬ７、ビメンチン、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、ＴＲＯＰ－２、ＬＲＲＣ１５、ＦＡＰ、ＳＬＩＴＲＫ６、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、テネイシン－３、ＳＴＥＡＰ１、およびＮＲＰ１から選択される１つまたは複数の抗原を標的化する、がん細胞オプソニン化剤を個体に投与するステップを含む、請求項５５～５９に記載の方法。
操作されたＴまたはＮＫ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、操作されたＴＣＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を個体に投与するステップを含む、請求項５５～６０のいずれか一項に記載の方法。
腫瘍溶解性ウイルスを個体に投与するステップを含む、請求項５５～６１のいずれか一項に記載の方法。
活性なポリペプチドを作製する方法であって、
細菌細胞内で、外因的に提供した融合タンパク質を、外因的に提供したＳＵＭＯ（低分子ユビキチン様修飾因子）プロテアーゼと接触させるステップであって、融合タンパク質がＳＵＭＯタグにＮ末端で融合した目的のポリペプチドを含むステップを含み、
細菌細胞内で、ＳＵＭＯプロテアーゼが融合タンパク質を切断し、したがって、目的のポリペプチドからＳＵＭＯタグを除去し、目的のポリペプチドが、ＳＵＭＯタグの除去によって活性化される請求項１～３４のいずれか一項に記載のＩＬ－１８ポリペプチドである、方法。
ＳＵＭＯプロテアーゼによる切断後のＩＬ－１８ポリペプチドのＮ末端アミノ酸がチロシンである、請求項６３に記載の方法。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、デコイ耐性（ＤＲ）ＩＬ－１８バリアントまたはデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアントである、請求項６４に記載の方法。
ＳＵＭＯプロテアーゼがＵＬＰ１である、請求項６３～６５のいずれか一項に記載の方法。
ＳＵＭＯタグが、配列番号２６または２７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６３～６６のいずれか一項に記載の方法。
前記接触させるステップが、融合タンパク質をコードする核酸を細菌細胞に導入するステップを含む、請求項６３～６７のいずれか一項に記載の方法。
前記接触させるステップが、ＳＵＭＯプロテアーゼをコードする核酸を細菌細胞に導入するステップを含む、請求項６３～６８のいずれか一項に記載の方法。
前記接触させるステップが、細菌細胞において、誘導プロモーターからＳＵＭＯプロテアーゼの発現を誘導するステップを含む、請求項６３～６９のいずれか一項に記載の方法。
誘導プロモーターが、ラムノース誘導プロモーターである、請求項７０に記載の方法。
ＳＵＭＯタグの除去後に目的のポリペプチドを精製するステップをさらに含む、請求項６３～７１のいずれか一項に記載の方法。
ＳＵＭＯタグの除去後にＩＬ－１８ポリペプチドを精製するステップをさらに含み、前記精製するステップが、イオン交換クロマトグラフィー、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、マルチモーダルクロマトグラフィー（ＭＭＣ）および疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を含む、請求項６４～６５のいずれか一項に記載の方法。
前記接触するステップが、細胞内で起こる、請求項６３～７３のいずれか一項に記載の方法。
前記接触するステップが、ｉｎｖｉｔｒｏで、無細胞で起こる、請求項６３～７３のいずれか一項に記載の方法。
請求項１～３４のいずれか一項に記載の改変されたＩＬ－１８ポリペプチドを、それを必要とする個体に投与し、それにより個体における疾患または障害を処置するステップを含み、前記投与するステップの頻度が週に１回以下である、処置の方法。
前記投与するステップの頻度が、２週間に１回以下である、請求項７６に記載の方法。
前記投与するステップの頻度が、週に１回から月に１回の範囲である、請求項７６に記載の方法。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、請求項１～３４のいずれか一項に記載のＩＬ－１８ポリペプチドである、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１８ポリペプチドが、デコイ耐性（ＤＲ）ＩＬ－１８バリアントまたはデコイ・トゥー・デコイ（Ｄ２Ｄ）ＩＬ－１８バリアントである、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
前記投与するステップが、皮下投与を含む、請求項７６～８０のいずれか一項に記載の方法。
前記投与するステップが、０．０２５～３．５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量でのＩＬ－１８ポリペプチドの投与を含む、請求項７６～８０のいずれか一項に記載の方法。
疾患または障害が、がん、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に耐性であるがん、ＭＨＣクラスＩの表面発現が減少したかまたはない腫瘍と関連するがん、高レベルのＩＬ－１８ＢＰと関連するがん、ＩＬ－１８Ｒが浸潤Ｔ細胞またはＮＫ細胞上に発現される腫瘍と関連するがん、代謝疾患または障害、および感染症からなる群から選択される、請求項７６～８２のいずれか一項に記載の方法。
免疫チェックポイント阻害剤またはがん細胞オプソニン化剤を個体に投与するステップを含む、請求項７４～８１のいずれか一項に記載の方法。
ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＣＤ４７、ＳＩＲＰアルファ、ＣＤ４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１６０、ＴＲＥＭ２、ＩＤＯ１、アデノシン２Ａ受容体、アリール炭化水素受容体、ＫＩＲ、ＬＩＬＲＢ２、またはこれらの任意の組合せを阻害する、免疫チェックポイント阻害剤を個体に投与するステップを含む、請求項７４～８１のいずれか一項に記載の方法。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質（例えば、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＨＶＥＭ）をアゴナイズする薬剤；免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２２６、ＮＫＧ２Ｄ）をアゴナイズする薬剤；ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）をアゴナイズする薬剤；核酸センサー（例えば、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＲＩＧ－Ｉ（ＤＤＸ５８））をアゴナイズする薬剤；インフラマソーム活性化因子；Ｔ細胞エンゲージャー；サイトカインまたはサイトカインバリアント（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３３、ＴＮＦ、ＴＬ１Ａ、ＩＦＮＡ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ）；またはこれらの任意の組合せから選択される免疫アゴニストを個体に投与するステップを含む、請求項７４～８１のいずれか一項に記載の方法。
ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２００、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２２１、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ３１９、ＥＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、１７－１Ａ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＡ、ＡＸＬ、ＴＷＥＡＫＲ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、ＧＤ２ガングリオシド、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、メソテリン、エンドグリン、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＰＳＭＡ、ＢＡＦＦ、ＦＧＦＲ２、ＴＡＧ－７２、ゼラチナーゼＢ、グリピカン３、ネクチン－４、ＢＣＭＡ、ＣＳＦ１Ｒ、ＳＬＡＭＦ７、インテグリンα_ｖβ_３、ＴＹＲＰ１、ＧＰＮＭＢ、ＣＬＤＮ１８．２、ＦＯＬＲ１、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ＭＩＣＡ、Ｃ２４２抗原、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＥＧＦＬ７、ビメンチン、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、ＴＲＯＰ－２、ＬＲＲＣ１５、ＦＡＰ、ＳＬＩＴＲＫ６、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、テネイシン－３、ＳＴＥＡＰ１、およびＮＲＰ１から選択される１つまたは複数の抗原を標的化する、がん細胞オプソニン化剤を個体に投与するステップを含む、請求項７４～８１のいずれか一項に記載の方法。
操作されたＴまたはＮＫ細胞、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、操作されたＴＣＲ－Ｔ細胞、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を個体に投与するステップを含む、請求項７４～８５のいずれか一項に記載の方法。
腫瘍溶解性ウイルスを個体に投与するステップを含む、請求項７４～８６のいずれか一項に記載の方法。
請求項１～３４のいずれか一項に記載のＩＬ－１８ポリペプチド、
緩衝化剤、
糖、
キレート化剤、
酸化を防止する薬剤、および
タンパク質吸収を防止する薬剤
を含む、医薬製剤。
緩衝化剤が、Ｈｉｓ／Ｈｉｓ－ＨＣｌを含む、請求項９０に記載の医薬製剤。
緩衝化剤が、ｐＨを６．２と６．８の間に維持する、請求項９１に記載の医薬製剤。
糖がスクロースを含む、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
キレート化剤が、ＥＤＴＡまたはその塩を含む、請求項９０～９３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
酸化を防止する薬剤が、Ｌ－メチオニンである、請求項９０～９４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
タンパク質吸収を防止する薬剤が、ポリソルベート８０である、請求項９０～９５のいずれか一項に記載の医薬製剤。