JP2023550490A - 免疫細胞を培養するための方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオンを含む培地でＴＩＬを培養する方法を提供する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法により、ＣＤ４＋ＴＩＬと比較して、ＣＤ８＋ＴＩＬの増殖が増強される。いくつかの態様では、本方法により、さらに、細胞集団中の低分化細胞、例えば、低分化ＴＩＬ、の数が増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法により、クローン多様性が保存されるように、腫瘍反応性、例えば、腫瘍特異的ＴＩＬが富化される。いくつかの態様では、細胞、例えば、ＴＩＬは、それを必要とする対象に投与される。

Description

関連出願との相互参照
本出願は、２０２０年１１月２３日に出願された米国仮出願第６３／１９８，９３３号；２０２１年２月５日に出願された第６３／１４６，４７７号；２０２１年２月２５日に出願された第６３／１５３，９２２号；２０２１年３月２３日に出願された第６３／１６５，０２３号；２０２１年３月２９日に出願された第６３／１６７，５９２号；２０２１年４月２８日に出願された第６３／１８１，２１８号；及び２０２１年１０月２８日に出願された第６３／２７３，１３８号の優先権及び利益を主張し、これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
電子的に提出された配列表への言及
本出願と共に出願され、電子的に提出された、ＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：４３８５＿０４３ＰＣ０７＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：１，９９９バイト、作成日：２０２１年１１月２３日）の配列表の内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む組成物及び細胞を培養する方法に関する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法は、オリゴクローナルまたはポリクローナル腫瘍反応性（例えば、腫瘍特異的）幹様Ｔ細胞、例えば、分化が低いことを特徴とするＴＩＬ、の富化を優先的に促進する。本明細書で開示の方法を使用して培養された細胞は、限定されないが、自家Ｔ細胞療法などの養子細胞療法を含む様々な細胞療法に使用することができる。
免疫療法方策の使用により、特定の種類の進行がんの処置において、かなりの臨床的有効性が実証されている。しかし、顕著な成功にもかかわらず、進行がん患者の大多数は、依然として、免疫療法処置から恩恵を受けておらず、最終的には病気で死亡するであろう。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び改変ＴＣＲ Ｔ細胞を含む養子細胞療法などの細胞療法手法の主要な制限は、好適な腫瘍標的の欠如であり、これが、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞で処置されている固形がん患者で観察される広範囲にわたる臨床応答の欠如の原因となり得る。
進行がん患者の臨床応答を媒介する若干の成功を収めている別のアプローチは、自家腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の単離、増殖、及び注入である。ＴＩＬは、不均一であり、腫瘍反応性で無関係な、または抑制性のＴ細胞の組成が可変である。腫瘍反応性集団は、抗原に多くさらされていることが多く、その結果、機能が制限された機能不全前の状態にある細胞生成物がもたらされる。
従来のＴＩＬの培養及び増殖方法は、ＴＩＬの最終分化が引き起こされ、それにより、患者への移入時のＴＩＬの持続性が低下することが判明している。例えば、以下を参照のこと：Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７（１３）：４５５０－５５７（２０１１）。さらに、腫瘍断片から不均一なＴＩＬ集団を増殖する現在の方法は、ポリクローナリティが低減し、多くの腫瘍優性Ｔ細胞クローンが失われたＴＩＬ集団を生成する（例えば、以下を参照のこと：Ｐｏｓｃｈｋｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０２０）（全体が参照により本明細書に組み込まれる））。結果として、そのようなＴＩＬ由来の注入製品が生成すると、多くの場合、増殖中で腫瘍特異的Ｔ細胞がなくなり、様々な分化状態の免疫細胞の混合が不明確になり、これは、固形腫瘍の根絶には効果がない。治癒するために、自己再生ステム／エフェクター特性が強化されたＴＩＬが必要である。さらに、がん細胞をさらに分裂させ、標的とし、殺傷する能力を保持する高レベルのクローン多様性を有する低分化型ＴＩＬの増殖集団を取得するための方法は、まだ記載されていない。
現在まで、これら及び他の重大な制限により、効果的な療法としてのＴＩＬの使用が抑制されている。これにより、Ｔ細胞療法に使用される十分な数の腫瘍反応性ＴＩＬを入手することが困難になる。そのようなものであるから、ＴＩＬ組成物を調製する方法及びそれを使用する療法の改善のための当該技術分野におけるニーズは依然としてある。
本開示のいくつかの態様は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養する方法に関し、方法は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）に不均一なＴＩＬ集団を配置することを含む。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、ＭＲＭに配置された後に、ＣＤ８＋ＴＩＬが富化されている。
本開示のいくつかの態様は、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ８＋ＴＩＬの数または割合を増加させる方法に関し、方法は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭで不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。
本開示のいくつかの態様は、ＣＤ８＋富化ＴＩＬ集団を調製する方法に関し、方法は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭでｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。
いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、ＣＤ４＋ＴＩＬ及びＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、対象から得られた１つ以上の腫瘍試料から得られる。いくつかの態様では、腫瘍試料を、初期ＴＩＬ培養にかける。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、ＭＲＭで腫瘍試料を培養することを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約１４～１９日間続く。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約１１日間続く。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約１４日間続く。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、初期ＴＩＬ培養前のＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの割合と比較して、初期ＴＩＬ培養後に増加する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養後に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＩＬをＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニストと共に培養することにより刺激される。
いくつかの態様では、腫瘍試料は、腫瘍生検を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料を、培養前に断片化する。いくつかの態様では、腫瘍試料を、培養前に解離させる。
いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後に、集団中のＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後に、ＴＩＬ集団の少なくとも約５０％が、ＣＤ８＋のＴＩＬである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、細胞増殖剤を含む。いくつかの態様では、細胞増殖剤は、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約９０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、または約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、グルコースを含む。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭを超える。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、カルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭを超える。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭのナトリウムイオン；（ｉｉ）約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコース；（ｉｉｉ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウムイオン；または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせ、を含む。
本開示のいくつかの態様は、ヒト対象から得られたＴＩＬを増殖させる方法に関し；方法は、初期ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること；二次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること；三次（または最終）ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養することを含み、初期ＴＩＬ培養培地、二次ＴＩＬ増殖培地、及び／または三次ＴＩＬ増殖培地は、ＭＲＭである。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地及び二次ＴＩＬ増殖培地は、高カリウム性であり、三次ＴＩＬ増殖培地は、高カリウム性ではない。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地は、さらに、ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地は、さらに、ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地は、さらに、Ｔ細胞サプリメント、血清代替物、グルタミン、グルタミン代替物（例えば、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌ－アラニン－Ｌ－グルタミン））、非必須アミノ酸、抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、もしくはその両方）、抗真菌剤（例、ＦＵＮＧＩＮ（商標））、及び／またはピルビン酸ナトリウムを含む。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養培地で少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、または少なくとも約３週間培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期培養における細胞収量が少なくとも約１×１０５、少なくとも約２×１０５、少なくとも約３×１０５、少なくとも約４×１０５、少なくとも約５×１０５、少なくとも約６×１０５、少なくとも約７×１０５、少なくとも約８×１０５、少なくとも約９×１０５、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、少なくとも約１０×１０６、少なくとも約１５×１０６、少なくとも約２０×１０６、少なくとも約２５×１０６、少なくとも約３０×１０６、少なくとも約３５×１０６、少なくとも約４０×１０６、少なくとも約４５×１０６、または少なくとも約５０×１０６の細胞／断片に達するまで、初期ＴＩＬ培養培地で培養される。
いくつかの態様では、（ｂ）において、ＴＩＬは、二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、ＣＤ３アゴニスト、ＣＤ２８アゴニスト、またはその両方で刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、ＣＤ２７アゴニストで刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、４－１ＢＢアゴニストで刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、刺激後に、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、または少なくとも約２６日間培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、細胞収量が少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次培養培地で培養される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、三次ＴＩＬ培養培地でＣＤ３アゴニスト、ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、及び／または４－１ＢＢアゴニストで刺激される。いくつかの態様では、三次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性ではない。いくつかの態様では、ＴＩＬは、三次ＴＩＬ培養培地で、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、または少なくとも約２１日間培養される。
本開示のいくつかの態様は、腫瘍反応性、例えば、腫瘍特異的ＴＩＬを増加させる方法に関し、方法は、高カリウム性であり且つＩＬ－２及び任意にＩＬ－２１を含む初期ＴＩＬ培養培地で１つ以上の腫瘍断片を最大約１１～１９日間培養し、それにより、腫瘍断片からＴＩＬを得ること；（ｉ）ＣＤ３アゴニスト及び（ｉｉ）ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを添加した後に、高カリウム性である二次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを約７日間～少なくとも約１４日間培養すること；（ｉ）ＣＤ３アゴニスト及び（ｉｉ）ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを添加した後に、高カリウム性でない三次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを約１４日間～少なくとも約２１日培養すること、を含む。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、高カリウム性ではない対照培地での培養後のＴＩＬ集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、ＭＲＭでの培養後にＴＣＦ７発現の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、高カリウム性ではない対照培地中での培養後のＣＤ８＋ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬの割合と比較して、ＭＲＭ中での培養後のＣＤ８＋ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、高カリウム性ではない対照培地での培養後のＣＤ８＋ＰＤ１＋ＴＩＬの割合と比較して、ＭＲＭでの培養後のＣＤ８＋ＰＤ１＋ＴＩＬの割合が増加している。
いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、対照培地に配置された不均一なＴＩＬ集団のクローン多様性と比較して、ＭＲＭに配置された後にクローン多様性が増加した。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、約０．３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、約０．２５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、約０．２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、ＭＲＭに配置された後の不均一なＴＩＬ集団は、約０．１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示の任意の方法に従って培養された１つ以上のＣＤ８＋ＴＩＬを含む、免疫細胞の組成物に関する。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞集団を含む組成物に関し、免疫細胞の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、細胞の少なくとも約５０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
いくつかの態様では、細胞は、高カリウム性ではない対照培地での培養後の免疫細胞集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、ＭＲＭでの培養後にＴＣＦ７発現の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養の最後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養の最後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ３９＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２８＋である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養の最後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋ＣＤ３９＋である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養の最後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋ＣＤ２７＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ６２Ｌ＋である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養の最後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＣＤ１０３＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋である。
いくつかの態様では、免疫細胞集団は、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７の細胞を含む。いくつかの態様では、免疫細胞集団は、少なくとも約１×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７のＣＤ８＋細胞を含む。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、クローン多様性スコアが、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、クローン多様性スコアが約０．３未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、クローン多様性スコアが約０．２５未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、クローン多様性スコアが約０．２未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬは、クローン多様性スコアが約０．１未満（シンプソンのクローン性で測定）である。
本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象のがんを処置する方法に関し、方法は、ＴＩＬ集団を対象に投与することを含み、ＴＩＬ集団は、本明細書に開示の任意の方法に従って培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、ＣＤ８＋ＴＩＬが富化されている。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団中のＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団中のＴＩＬの少なくとも約５０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象のがんを処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの態様では、がんは、黒色腫、結腸癌、肺癌、子宮頸癌、消化管癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、骨癌、膵臓癌、頭頸部の小細胞癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、精巣胚細胞腫瘍、胃腺癌、皮膚の皮膚黒色腫、中皮腫、腎臓の明細胞腎細胞癌、子宮頸部扁平上皮癌及び子宮頸管内腺癌、食道癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤乳癌、腎臓の乳頭状腎細胞癌、結腸腺癌、またはそれらの任意の組み合わせに由来する固形腫瘍を含む。
いくつかの態様では、方法は、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、または少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１０×１０１０、または少なくとも約１５×１０１０、または少なくとも約２０×１０１０、または少なくとも約２５×１０１０、または少なくとも約３０×１０１０の細胞を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、少なくとも約１×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、または少なくとも約１×１０９のＣＤ８＋細胞を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約１×１０９～約４×１０９、約５×１０９～約７×１０９、約１０×１０９～約３０×１０９、約４０×１０９～約６０×１０９、約７０×１０９～約９０×１０９の細胞を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、９０×１０９超の細胞を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、方法は、さらに、チェックポイント阻害剤を投与することを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、細胞集団を投与した後に、対象に投与される。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、方法は、さらに、チェックポイント活性化剤を投与することを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＬ集団を投与した後に、対象に投与される。いくつかの態様では、チェックポイント活性化剤は、ＯＸ４０アゴニスト、ＬＡＧ－３アゴニスト、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＴＩＭ３アゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、チェックポイント活性化剤は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＴＩＭ３抗体、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、方法は、さらに、サイトカインを投与することを含む。いくつかの態様では、サイトカインは、ＴＩＬ集団を投与した後に、対象に投与される。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２である。
いくつかの態様では、方法は、細胞集団を投与する前に、さらに、対象にリンパ球除去療法を投与することを含む。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、シクロホスファミド、フルダラビン、またはシクロホスファミド及びフルダラビンの両方を含む。
本開示のいくつかの態様は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する増殖ＴＩＬ集団に関する。
本開示のいくつかの態様は、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満（シンプソンのクローン性で測定）のクローン多様性スコアを有する増殖ＴＩＬ集団に関する。いくつかの態様では、クローン多様性スコアは、約０．３未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、クローン多様性スコアは、約０．２５未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、クローン多様性スコアは、約０．２未満（シンプソンのクローン性で測定）である。いくつかの態様では、クローン多様性スコアは、約０．１未満（シンプソンのクローン性で測定）である。
いくつかの態様では、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７の細胞。いくつかの態様では、少なくとも約１×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７のＣＤ８＋細胞。
いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約５０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
いくつかの態様では、増殖ＴＩＬは、高カリウム性ではない対照培地での培養後の免疫細胞集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、ＭＲＭでの培養後にＴＣＦ７発現の増加を示す。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ３９＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２８＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋ＣＤ３９＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋ＣＤ２７＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ６２Ｌ＋である。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＣＤ１０３＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋である。
いくつかの態様では、本明細書に開示の組成物または本明細書に開示の増殖ＴＩＬ集団は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する少なくとも１つの免疫細胞を含む。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、及びＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、組成物または集団中の増殖ＴＩＬの少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する少なくとも１つの免疫細胞を含む。
本開示のいくつかの態様は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬに関する。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、幹細胞マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、及びＴＣＦ７＋を含む。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示のＴＩＬ、例えば、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを含むＴＩＬ、を含む増殖ＴＩＬ集団に関する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを含むＴＩＬを含む。
本開示のいくつかの態様は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを含むＴＩＬ、ならびに、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
本開示の特定の態様は、処置を必要とする対象の疾患または状態を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示のＴＩＬ、本明細書に開示の増殖ＴＩＬ集団、または本明細書に開示の医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、疾患または状態は、がんである。
いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、対照培地での培養後のＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬの割合と比較して、ＭＲＭでの培養後のＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬの割合が増加している。
いくつかの態様では、ＴＩＬ集団中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％が、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－である、請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。初期増殖及び二次増殖を含む例示的なプロセスを示し、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ａ～１Ｂ）及び初期ＴＩＬ培養中（図１Ｂ）に、（例えば、本明細書で開示の方法に従って、例えば、細胞を、４－１ＢＢＬ、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、抗ＣＤ３抗体、抗原提示細胞、またはそれらの任意の組み合わせと接触させることにより）任意に刺激される。 腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。初期増殖及び二次増殖を含む例示的なプロセスを示し、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ａ～１Ｂ）及び初期ＴＩＬ培養中（図１Ｂ）に、（例えば、本明細書で開示の方法に従って、例えば、細胞を、４－１ＢＢＬ、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、抗ＣＤ３抗体、抗原提示細胞、またはそれらの任意の組み合わせと接触させることにより）任意に刺激される。 腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。初期増殖、二次増殖、及び最終増殖を含む例示的なプロセスを示し、ＴＩＬは、（ｉ）初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｃ～１Ｄ）；（ｉｉ）二次ＴＩＬ増殖から最終ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｃ～１Ｄ）；及び、（ｉｉｉ）初期ＴＩＬ培養中（図１Ｄ）に任意に刺激される。 腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。初期増殖、二次増殖、及び最終増殖を含む例示的なプロセスを示し、ＴＩＬは、（ｉ）初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｃ～１Ｄ）；（ｉｉ）二次ＴＩＬ増殖から最終ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｃ～１Ｄ）；及び、（ｉｉｉ）初期ＴＩＬ培養中（図１Ｄ）に任意に刺激される。 腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。若いＴＩＬを生成するための例示的なプロセスを示し、初期増殖及び二次増殖の期間が短く、例えば、各増殖に対し１１日（以下）であり、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｅ～１Ｆ）及び初期ＴＩＬ培養中（図１Ｆ）に任意に刺激される。 腫瘍断片からＴＩＬを培養及び増殖させる例示的なプロセスを示す概略図である。若いＴＩＬを生成するための例示的なプロセスを示し、初期増殖及び二次増殖の期間が短く、例えば、各増殖に対し１１日（以下）であり、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養から二次ＴＩＬ増殖への移行時（図１Ｅ～１Ｆ）及び初期ＴＩＬ培養中（図１Ｆ）に任意に刺激される。 Ｔ細胞馴化培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（商標）；本明細書では「対照培地」とも呼ばれる；図２Ａ）または代謝再プログラミング培地（本明細書では「ＭＲＭ」とも呼ばれる；図２Ｂ）での初期培養後（１４日目）のＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示である。ＭＲＭでの培養が、対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現が増強された（２０％を超える）ＴＩＬを生成したことを示す。 Ｔ細胞馴化培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（商標）；本明細書では「対照培地」とも呼ばれる；図２Ａ）または代謝再プログラミング培地（本明細書では「ＭＲＭ」とも呼ばれる；図２Ｂ）での初期培養後（１４日目）のＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示である。ＭＲＭでの培養が、対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現が増強された（２０％を超える）ＴＩＬを生成したことを示す。 対照またはＭＲＭのいずれかにおいて、様々な腫瘍型からのＴＩＬを培養することにより得られたＣＤ８＋細胞の割合における個体差を示す散布図である。連結された点のそれぞれは、同じ試料から得られたＴＩＬを表し、その結果、図は、１３人の患者のデータをまとめたものである。アスタリスクは、対照培地での培養後のＣＤ８＋ＴＩＬの平均百分率が、ＭＲＭでの培養後のＣＤ８＋ＴＩＬの平均百分率と有意に異なることを示す。これらのデータは、対照培地でのＴＩＬの培養と比較して、ＭＲＭでのＴＩＬの培養により、ＣＤ８＋Ｔ細胞が富化されることを示す。 Ａ～Ｅは、対照培地（図３Ａ及び３Ｃ）またはＭＲＭ（図３Ｂ及び３Ｄ）での１４日間の培養後の培養ＣＤ４＋（図３Ａ～３Ｂ）及びＣＤ８＋（図３Ｃ～３Ｄ）ＴＩＬのＰＤ１及びＣＤ２７の発現に基づくＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示である。Ｃは、対照またはＭＲＭのいずれかにおいて、様々な腫瘍型からのＴＩＬを培養することにより得られたＣＤ２７＋ＰＤ１＋細胞の割合における個体差を示す散布図である。連結された点のそれぞれは、同じ試料から得られたＴＩＬを表し、その結果、図３Ｃは、９人の患者のデータをまとめたものである。アスタリスクは、対照培地での培養後のＣＤ２７＋ＰＤ１＋ＴＩＬの平均百分率が、ＭＲＭでの培養後のＣＤ２７＋ＰＤ１＋ＴＩＬの平均百分率と有意に異なることを示す。これらのデータは、対照培地でのＴＩＬの培養と比較して、ＭＲＭでのＴＩＬの培養により、ＣＤ２７＋ＰＤ１＋Ｔ細胞が富化されることを示す。 初期培養（１４日目）後、対照培地またはＭＲＭのいずれかにおいて、様々な腫瘍型からのＴＩＬを培養することにより得られたＣＤ２７＋ＣＤ２８＋細胞の割合における統計的に有意な差を示すグラフ表示である。連結された点のそれぞれは、同じ試料から得られたＴＩＬを表し、その結果、図４は、９人の患者のデータをまとめたものである。これらのデータは、対照培地でのＴＩＬの培養と比較して、ＭＲＭでのＴＩＬの培養により、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞が富化されることを示す。 Ａ～Ｂは、対照培地（図５Ａ）またはＭＲＭ（図５Ｂ）で培養された（１４日目）ＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示であり、これは、最初にＣＤ８またはＣＤ４の発現、それに続くＣＤ２８及びＣＤ２７の発現、それに続くＣＤ１０３及びＣＤ２７の発現、それに続くＰＤ１及びＣＤ１０３の発現、最後にＴＣＦ７及びＣＤ２７の発現によりゲーティングされる。 Ｃは、対照培地（１）またはＭＲＭ（２）での初期培養（約１４日目）後の、ＴＣＦ７＋ＴＩＬの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示すグラフ表示である。 Ａ～Ｈは、二次増殖（約２１～２６日目）後の対照培地（図６Ａ～６Ｄ）またはＭＲＭ（図６Ｅ～６Ｈ）で増殖されたＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示であり、これは、最初にＣＤ８またはＣＤ４発現（図６Ａ及び６Ｅ）、ＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＣＤ２８及びＣＤ２７発現（図６Ｂ及び６Ｆ）、ＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＰＤ１及びＣＤ２７発現（図６Ｃ及び６Ｇ）、最後にＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＴＣＦ７及びＣＤ３９発現（図６Ｄ及び６Ｈ）によりゲーティングされる。 Ａ～Ｈは、二次増殖後（約２１日目）に、対照培地（図７Ａ～７Ｄ）またはＭＲＭ（図７Ｅ～７Ｈ）で変異型ＫＲＡＳパルス樹状細胞との共培養により増殖させたＣＤ８＋ＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示であり、これは、最初にＣＤ８またはＣＤ４発現（図７Ａ及び７Ｅ）、それに続いてＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＣＤ２８及びＣＤ２７発現（図７Ｂ及び７Ｆ）、それに続いてＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＰＤ１及びＣＤ２７発現（図７Ｃ及び７Ｇ）、最後に、ＰＤ１＋のみ及びＣＤ２７＋、ＰＤ１＋細胞でゲーティングされたＴＣＦ７及びＣＤ８発現（図７Ｄ及び７Ｈ）によりゲーティングされる。Ｂ～Ｄ及びＦ～Ｈは、ＣＤ８＋細胞である。 Ａ～Ｈは、二次増殖後（約２１日目）に、対照培地（図８Ａ～８Ｄ）またはＭＲＭ（図８Ｅ～８Ｈ）での野生型ＫＲＡＳパルス樹状細胞との共培養により増殖させたＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示であり、これは、最初にＣＤ８またはＣＤ４発現（図８Ａ及び８Ｅ）、それに続いてＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＣＤ２８及びＣＤ２７発現（図８Ｂ及び８Ｆ）、それに続いてＣＤ８＋細胞でゲーティングされたＰＤ１及びＣＤ２７発現（図８Ｃ及び８Ｇ）、最初にＰＤ１＋のみ及びＣＤ２７＋、ＰＤ１＋細胞でゲーティングされたＴＣＦ７及びＣＤ８発現（図８Ｄ及び８Ｈ）によりゲーティングされる。Ｂ～Ｄ及びＦ～Ｈは、ＣＤ８＋細胞である。 対照培地（図９Ａ）における二次増殖後（約２１～２６日目）の培養ＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示である。 ＭＲＭ（図９Ｂ）における二次増殖後（約２１～２６日目）の培養ＴＩＬのＦＡＣＳ細胞表現型のグラフ表示である。
二次増殖後（約２１日目）に、対照培地またはＭＲＭで培養されたＴＩＬにおけるＩＬ－２、Ｂ２Ｍ、ＧＺＭＢ、ＩＦＮγ、及びＴＣＦ７の遺伝子発現の倍率変化（ＦＣ）を示す棒グラフである。各遺伝子の発現は、対照培地で培養されたＴＩＬにおける発現に対して正規化されている。 Ａ～Ｌは、二次増殖（約２１～２６日目）後に、対照培地（図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｅ、及び１１Ｆ）またはＭＲＭ（図１１Ｃ、１１Ｄ、及び１１Ｇ～１１Ｌ）で培養されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋ＴＩＬのＦＡＣＳ細胞選別のグラフ表示であり、これは、ＰＤ１発現（図１１Ａ～１１Ｄ）またはＣＤ１０３発現（図１１Ｅ～１１Ｈ）及びＣＤ３９発現（図１１Ａ～１１Ｈ）によりゲーティングされる。Ｉ～Ｌは、ＣＤ４＋ＴＩＬ（図１１Ｉ及び１１Ｋ）ならびにＣＤ８＋ＴＩＬ（図１１Ｊ及び１１Ｌ）のゲーティングを示す。これは、ＰＤ１及びＣＤ３９発現（図１１Ｉ～１１Ｊ）、それに続いてＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ１０３発現（図１１Ｋ～１１Ｌ）によりゲーティングされる。 腫瘍断片（「腫瘍」）における免疫細胞、対照培地を使用して増殖させたＴＩＬ（「対照」）、及び代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）を使用して増殖させたＴＩＬについてのシンプソンのクローン性値を示す棒グラフである。 対照培地の増殖ＴＩＬ（図１３Ａ）についての、図１２に提示されるデータを使用して生成された差分存在量（ＤＡ）プロットである。 ＭＲＭの増殖ＴＩＬ（図１３Ｂ）についての、図１２に提示されるデータを使用して生成された差分存在量（ＤＡ）プロットである。 対照培地（図１３Ｃ）で培養されたＴＩＬ集団における上位５０の優性腫瘍ＴＣＲの腫瘍抗原認識のグラフ表示である。 ＭＲＭ（図１３Ｄ）で培養されたＴＩＬ集団における上位５０の優性腫瘍ＴＣＲの腫瘍抗原認識のグラフ表示である。 ＭＲＭで培養されたＴＩＬのＫＲＡＳ変異活性を示す図である。１配列番号６；２配列番号１；３配列番号７；４配列番号８；５配列番号９；６配列番号１０；７配列番号１１。 分泌型ＩＦＮ－ガンマ（図１５Ａ及び１５Ｄ）、分泌型ＩＬ－２（図１５Ａ）、分泌型ＴＮＦα（図１５Ｂ）、腫瘍細胞殺傷率（％）（図１５Ｃ）で明らかなように、対照培地またはＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬの腫瘍認識及び腫瘍殺傷活性を示す棒グラフである。Ａ＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及びＢ＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｄ）；「対照ＴＩＬ」＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及び「ＭＲＭ ＴＩＬ」＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ｃ）；及び「ＴＣ株」＝腫瘍細胞株（図１５Ｄ）。 分泌型ＩＦＮ－ガンマ（図１５Ａ及び１５Ｄ）、分泌型ＩＬ－２（図１５Ａ）、分泌型ＴＮＦα（図１５Ｂ）、腫瘍細胞殺傷率（％）（図１５Ｃ）で明らかなように、対照培地またはＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬの腫瘍認識及び腫瘍殺傷活性を示す棒グラフである。Ａ＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及びＢ＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｄ）；「対照ＴＩＬ」＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及び「ＭＲＭ ＴＩＬ」＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ｃ）；及び「ＴＣ株」＝腫瘍細胞株（図１５Ｄ）。 分泌型ＩＦＮ－ガンマ（図１５Ａ及び１５Ｄ）、分泌型ＩＬ－２（図１５Ａ）、分泌型ＴＮＦα（図１５Ｂ）、腫瘍細胞殺傷率（％）（図１５Ｃ）で明らかなように、対照培地またはＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬの腫瘍認識及び腫瘍殺傷活性を示す棒グラフである。Ａ＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及びＢ＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｄ）；「対照ＴＩＬ」＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及び「ＭＲＭ ＴＩＬ」＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ｃ）；及び「ＴＣ株」＝腫瘍細胞株（図１５Ｄ）。 分泌型ＩＦＮ－ガンマ（図１５Ａ及び１５Ｄ）、分泌型ＩＬ－２（図１５Ａ）、分泌型ＴＮＦα（図１５Ｂ）、腫瘍細胞殺傷率（％）（図１５Ｃ）で明らかなように、対照培地またはＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬの腫瘍認識及び腫瘍殺傷活性を示す棒グラフである。Ａ＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及びＢ＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｄ）；「対照ＴＩＬ」＝対照培地を使用して生成されたＴＩＬ、及び「ＭＲＭ ＴＩＬ」＝ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬ（図１５Ｃ）；及び「ＴＣ株」＝腫瘍細胞株（図１５Ｄ）。 ＴＩＬとの接触及び共培養（矢印で示される時点）後の、ｅｘ ｖｉｖｏで培養された自家黒色腫腫瘍細胞の細胞溶解のパーセントを経時的に示すグラフ表示である。ＴＩＬを対照培地またはＭＲＭのいずれかで培養し、示されるように、１：１のエフェクターＴ細胞（Ｅ）対腫瘍細胞（Ｔ）比、２：１のＥ：Ｔ、及び４：１のＥ：Ｔの培養された腫瘍細胞に添加した。 Ａ～Ｈは、制御プロセス（図１７Ａ～１７Ｄ）またはＭＲＭ（１７Ｅ～１７Ｈ）を使用して増殖されたＮＳＣＬＣ ＴＩＬにおけるマーカー遺伝子の発現を示すグラフ表示である。ＭＲＭで増殖させたＴＩＬは、ＣＤ８＋Ｔ細胞分画、ＣＤ３９／ＣＤ６９の低発現（図１７Ｂ及び１７Ｄ）、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６Ｌ＋；図１７Ｃ及び１７Ｇ）、ならびにＣＤ２７の高発現（図１７Ｄ及び１７Ｈ）で測定されるように、優れた表現型特性を示した。破線で強調表示されたボックスは、好ましくない表現型を示し、実線で強調表示されたボックスは、好ましい表現型を示す。 Ａ～Ｃは、黒色腫（図８Ａ）、ＮＳＣＬＣ（図１８Ｂ）、または結腸直腸癌（図１８Ｃ）から得られたＴＩＬにおけるＴ細胞区画内のＣＤ３９及びＣＤ６９の両方のＣＤ８＋Ｔ細胞による陰性発現を示すグラフ表示である。新たに供給されたヒト腫瘍試料から培養を開始し、細胞を対照またはＭＲＭ条件下で増殖させた。最終急速増殖プロセス（ＲＥＰ）の後に、Ｔ細胞区画内のＣＤ３９及びＣＤ６９の両方のＣＤ８＋Ｔ細胞による陰性発現について、ＴＩＬを分析した。各分析に対し、黒色腫（ｎ＝６の独立した腫瘍）、ＮＳＣＬＣ（ｎ＝５の独立した腫瘍）、及び結腸直腸癌（ｎ＝１１の独立した腫瘍）から増殖させたＴＩＬを評価した。統計的有意性を、対応のあるｔ検定で測定した。＊＊＊ｐ＜．００１、＊ｐ＜．０５。 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（図１９Ａ）及び黒色腫（図１９Ｂ）の腫瘍断片（「腫瘍」）における免疫細胞、対照培地を使用して増殖させたＴＩＬ（「対照」）、及び代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）を使用して増殖させたＴＩＬについてのシンプソンのクローン性値を示す棒グラフである。 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（図１９Ａ）及び黒色腫（図１９Ｂ）の腫瘍断片（「腫瘍」）における免疫細胞、対照培地を使用して増殖させたＴＩＬ（「対照」）、及び代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）を使用して増殖させたＴＩＬについてのシンプソンのクローン性値を示す棒グラフである。
本開示は、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）を培養する方法、方法で調製された細胞（例えば、オリゴクローナルまたはポリクローナル腫瘍反応性の、例えば、腫瘍特異的な、幹様Ｔ細胞及び／もしくはＣＤ８＋ＴＩＬの富化を含む組成物）、ならびに／または本明細書に記載の免疫細胞を使用して対象を処置する方法に関する。本開示の細胞培養方法は、ＣＤ８＋ＴＩＬの増殖を増強し、及び／または培養ＴＩＬの多分化能及び／または分化多能性を増加させることが可能である。いくつかの態様では、培養方法は、免疫細胞が培養され、及び／または免疫細胞がｉｎ ｖｉｖｏで治療に使用される場合、免疫細胞枯渇、例えば、ＴＩＬ枯渇、を低減及び／または予防することが可能である。いくつかの態様では、本開示の培養方法は、がん患者由来のＴＩＬのクローン多様性を保存することが可能である。
いくつかの態様では、本開示は、代謝再プログラミング培地、例えば、４０ｍＭより高い濃度でカリウムイオンを含む高カリウム性培地で、不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＬを培養する方法に関し、高カリウム性培地は高張ではない。いくつかの態様では、本開示は、代謝再プログラミング培地、例えば、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で、不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ８＋ＴＩＬの数または割合を増加させる方法に関する。他の態様では、本開示は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のＣＤ８＋富化集団を調製する方法に関し、方法は、不均一なＴＩＬ集団を、代謝再プログラミング培地、例えば、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のＣＤ８＋富化集団を調製する方法に関し、方法は、代謝再プログラミング培地、例えば、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ～３０ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地で、不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、高カリウム性培地は、高張ではない。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、低張である。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、等張である。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、さらに、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、さらに、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本開示をより詳細に記載される前に、本開示は、記載された特定の組成物またはプロセスステップに限定されず、これは、当然、変化することを理解すべきである。本開示を読めば当業者らには明らかなように、本明細書に記載及び図示される個々の態様のそれぞれは、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、いくつかの他の態様のいずれかの特徴から容易に分離するか、または、それと組み合わせることができる別々の構成要素及び特徴を有する。列挙された任意の方法は、列挙されたイベントの順序または論理的に可能な他の順序で実施することができる。
本明細書に提供される見出しは、本開示の様々な態様を限定するものではなく、これは、本明細書全体を参照することにより定義することができる。また、本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明することのみを目的としており、限定することを意図しないと理解されるべきである。
Ｉ．用語
本開示をより容易に理解することができるようにするために、最初に、特定の用語が定義がされる。本出願で使用される場合、別途本明細書で明示的に提示されている場合を除き、以下の各用語は、以下に示す意味を有するものである。追加の定義は、出願全体にわたって記載されている。
本開示を通じて、「ａ」または「ａｎ」という用語とエンティティは、そのエンティティの１つ以上を指し；例えば、「キメラポリペプチド」は、１つ以上のキメラポリペプチドを表すと理解される。そのようなものであるから、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
さらに、本明細書で使用される「及び／または」は、他方の有無にかかわらず、２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示として解釈されるべきである。従って、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」などの表現で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの表現で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様のそれぞれを包含することが意図される；Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。加えて、「または」は、リスト内の構成要素の公開リストを意味するために使用される。例えば、「Ｘが、ＡまたはＢを含む」は、ＸがＡを含む、ＸがＢを含む、ＸがＡ及びＢを含む、または、ＸがＡまたはＢ及び任意の他の構成要素を含む、を意味する。
態様が「を含むこと」という文言を用いて本明細書に記載される場合、別途「からなる」及び／または「から本質的になる」に関して記載される類似の態様も提供されることが理解される。
別途記載のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者に、一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を提供する。
単位、接頭語、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）が承認した形式で表示される。数値範囲は、範囲を定義する数値が含まれる。
本明細書で使用される略語は、本開示全体にわたって定義される。本開示の様々な態様は、さらに、以下のサブセクションで詳細に説明される。
「約」または「から本質的になる」という用語は、当業者が決定する特定の値または組成の許容誤差範囲内にある値または組成を指し、これは、値または組成が測定または決定される方法、すなわち、測定システムの制限、に部分的に依存する。例えば、「約」または「から本質的になる」は、当該技術分野の慣例に従って、１以内の、または１を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」または「から本質的になる」は、最大１０％の範囲を意味し得る。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、用語は、値の最大１桁または最大５倍を意味し得る。特定の値または組成が、出願及び特許請求の範囲で提供される場合、別途記載のない限り、「約」または「から本質的になる」の意味は、その特定の値または組成について許容可能な誤差範囲内にあるとみなされるべきである。
本明細書で使用される場合、「およそ」という用語は、目的の１つ以上の値に適用される場合、記載された基準値に類似する値を指す。いくつかの態様では、「約」という用語は、別途明記のない限り、または別途文脈から明らかでない限り、記載の基準値のいずれかの（より大きい、または、より小さい）方向に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内に入る値の範囲（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）を指す。
本明細書に記載される場合、任意の濃度範囲、割合範囲、比率範囲、または整数範囲は、別途指示のない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、及び、適切な場合、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。
本明細書で使用される「対照培地」という用語は、本明細書で開示の代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）と比較した任意の培地を指す。対照培地は、特定のイオン濃度、例えば、カリウムイオン、を除いて、代謝再プログラミング培地と同じ構成成分を含み得る。いくつかの態様では、本明細書に記載の代謝再プログラミング培地は、本明細書に記載されるように、１つ以上のイオン濃度、例えば、カリウムイオン濃度、を調整することにより、対照培地から調製される。いくつかの態様では、対照培地は、基礎培地、例えば、ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（商標）、を含む。いくつかの態様では、対照培地は、ＡＩＭ Ｖ、ＲＰＭＩ、またはＡＩＭ Ｖ及びＲＰＭＩを含む混合物を含む。いくつかの態様では、対照培地は、（ｉ）５０％のＡＩＭ Ｖ、（ｉｉ）５０％のＲＰＭＩ １６４０、（ｉｉｉ）５％または１０％のヒト血清、及び（ｉｖ）ＩＬ－２、を含む。従って、いくつかの態様では、対照培地は、代謝再プログラミング培地にも添加されている、限定されないが、アミノ酸、グルコース、グルタミン、Ｔ細胞刺激因子、抗体、置換基などを含む、追加の１つ以上の構成成分を含むが、対照培地は、代謝再プログラミング培地とは異なる特定のイオン濃度を有する。別途指示のない限り、「培地（ｍｅｄｉａ）」及び「培地（ｍｅｄｉｕｍ）」という用語は、互換的に使用することができる。
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は、免疫系の細胞を指す。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔリンパ球（「Ｔ細胞」）、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞、または好中球）から選択される。いくつかの態様では、免疫細胞は、腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）である。本明細書で使用される場合、「ＴＩＬ」は、少なくとも一度腫瘍に進入するか、または、腫瘍に、例えば、腫瘍実質内に、進入することが可能であるＴ細胞を指す。いくつかの態様では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は、液体腫瘍、例えば、造血癌である。本方法で調製されたＴＩＬは、天然に存在するＴＩＬと同じ１つ以上の特性を有し得る。いくつかの態様では、本方法で調製されたＴＩＬは、天然に存在するＴＩＬには存在しない１つ以上の特性を有する。ＴＩＬは、任意の方法で取得することができる。いくつかの態様では、ＴＩＬは、対象由来の腫瘍試料から得られる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその一部は、腫瘍組織からのＴＩＬの回避、ＴＩＬの増殖、及び／またはＴＩＬの増殖を促進する条件下で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬの回避、増殖、及び／または増殖を促進するために使用される培地は、本明細書で開示の任意の代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地である。
本明細書で使用される場合、細胞の「集団」は、複数の細胞の集合、例えば、複数の細胞、を指す。いくつかの態様では、細胞集団は、複数のＴＩＬ、例えば、複数のＴＩＬ、を含む。いくつかの態様では、細胞集団は、複数のタイプの細胞を含む、細胞の不均一混合物、例えば、ＴＩＬ及びＴＩＬ以外の細胞の不均一混合物、を含む。
ＴＩＬには、ＣＤ８＋Ｔ細胞（すなわち、細胞傷害性Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー細胞が含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬには、一次ＴＩＬ（例えば、患者の組織試料から得られた）と二次ＴＩＬ（例えば、一次ＴＩＬから培養、増殖、または増殖されているＴＩＬ細胞集団）の両方が含まれる。いくつかの態様では、ＴＩＬは、遺伝子改変されている。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。ＣＤ８＋ＴＩＬは、一般に、がん細胞の破壊に関与するＴＩＬの亜集団であると考えられている。逆に、ＣＤ４＋ＴＩＬは、一般に、免疫応答のサプレッサーとして作用すると考えられており、腫瘍に対する免疫応答を制限し得る。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義することができる。ＴＩＬは、一般に、以下のバイオマーカーのうちの１つ以上を発現させることにより、分類することができる：ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ９５、ＰＤ－１、及びＣＤ２５。いくつかの態様では、ＴＩＬは、腫瘍に浸潤し、がん細胞を選択的に殺傷する能力により機能的に定義することができる。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は、互換性があり、胸腺により生成または処理される任意のリンパ球を指す。Ｔ細胞の非限定的なクラスには、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）及びＴｈ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）が含まれる。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔｈ１細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔｈ２細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔｃ１７細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔｈ１７細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。
本明細書で使用される場合、「メモリー」Ｔ細胞という用語は、（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、もしくはｅｘ ｖｉｖｏで）その同族抗原に以前に遭遇及び応答しているか、または、（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ ｖｉｖｏで）例えば、抗ＣＤ３抗原で刺激されているＴ細胞を指す。「メモリー様」表現型を有する免疫細胞、例えば、ＴＩＬは、抗原または刺激への二次曝露時に、再生または増殖して、一次曝露中よりも速く強力な免疫応答を開始する。いくつかの態様では、メモリーＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、組織常駐メモリーＴ細胞（ＴＲＭ細胞）、幹細胞様メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ細胞）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本明細書で使用される「幹様」または「幹細胞様」という用語は、細胞が自己複製する特性または能力を指し、メモリー及びエフェクターＴ細胞サブセットの全スペクトルを生成及び再構成する多能性能力を有する。いくつかの態様では、幹様細胞は、細胞に発現される特定のマーカーで測定することができる。いくつかの態様では、それらの幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、及びＴＣＦ７＋のうちの１つ以上であり得る。いくつかの態様では、幹様細胞は、例えば、本明細書で開示の幹細胞性遺伝子シグネチャーを使用する、トランスクリプトーム分析で同定することができる。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、Ｋｒｉｓｈｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７０：１３２８－３４（Ｄｅｃ．１１，２０２０）；及び／またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１８）に開示のマーカーを含み、これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「幹細胞様メモリーＴ細胞」、「Ｔメモリー幹細胞」、または「ＴＳＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現し、自己複製する幹細胞様能力、ならびに、メモリー及びエフェクターＴ細胞サブセットのスペクトル全体を再構成する多能性能力が与えられるメモリーＴ細胞を指す。
本明細書で使用される場合、「セントラルメモリーＴ細胞」または「ＴＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指す。セントラルメモリーＴ細胞は、一般に、リンパ節内及び末梢血液循環に見出される。
本明細書で使用される場合、「エフェクター様」または「エフェクター細胞様」という用語は、腫瘍細胞殺傷能力及びサイトカイン多機能性、例えば、炎症性サイトカイン及び／または細胞傷害性分子を生成する細胞の能力を指す。いくつかの態様では、エフェクター様細胞は、細胞により発現される特定のマーカーで測定することができる。いくつかの態様では、それらのエフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋のうちの１つ以上であり得る。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるＳＴＡＴ標的を含む。いくつかの態様では、エフェクター様細胞は、トランスクリプトーム分析で同定することができる。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、Ｋａｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１１：８３７－５１（２００２）；Ｔｒｉｐａｔｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８５：２１１６－２４（２０１０）；及び／またはＪｏｈｎｎｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：ｅａｂｅ３７０２（Ｊａｎ．１５，２０２１）で開示されるマーカーを含み、これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、エフェクター様細胞は、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－９７（２０１１）に記載のエフェクター関連遺伝子セットを使用して特性評価される。いくつかの態様では、エフェクター様細胞の遺伝子シグネチャーは、ＭＴＣＨ２、ＲＡＢ６Ｃ、ＫＩＡＡ０１９５、ＳＥＴＤ２、Ｃ２ｏｒｆ２４、ＮＲＤ１、ＧＮＡ１３、ＣＯＰＡ、ＳＥＬＴ、ＴＮＩＰ１、ＣＢＦＡ２Ｔ２、ＬＲＰ１０、ＰＲＫＣＩ、ＢＲＥ、ＡＮＫＳ１Ａ、ＰＮＰＬＡ６、ＡＲＬ６ＩＰ１、ＷＤＦＹ１、ＭＡＰＫ１、ＧＰＲ１５３、ＳＨＫＢＰ１、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＨＣＮ３、ＧＴＰＢＰ１、ＴＬＮ１、Ｃ４ｏｒｆ３４、ＫＩＦ３Ｂ、ＴＣＩＲＧ１、ＰＰＰ３ＣＡ、ＡＴＧ４Ｄ、ＴＹＭＰ、ＴＲＡＦ６、Ｃ１７ｏｒｆ７６、ＷＩＰＦ１、ＦＡＭ１０８Ａ１、ＭＹＬ６、ＮＲＭ、ＳＰＣＳ２、ＧＧＴ３Ｐ、ＧＡＬＫ１、ＣＬＩＰ４、ＡＲＬ４Ｃ、ＹＷＨＡＱ、ＬＰＣＡＴ４、ＡＴＧ２Ａ、ＩＤＳ、ＴＢＣ１Ｄ５、ＤＭＰＫ、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ６、ＲＥＥＰ５、ＡＢＨＤ６、ＫＩＡＡ０２４７、ＥＭＢ、ＴＳＥＮ５４、ＳＰＩＲＥ２、ＰＩＷＩＬ４、ＺＳＣＡＮ２２、ＩＣＡＭ１、ＣＨＤ９、ＬＰＩＮ２、ＳＥＴＤ８、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＵＬＢＰ３、ＩＬ１５ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＣＰ１、ＣＨＰ、ＲＵＮＸ３、ＴＭＥＭ４３、ＲＥＥＰ４、ＭＥＦ２Ｄ、ＡＢＬ１、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＰＣＢＰ４、ＰＬＣＤ１、ＣＨＳＴ１２、ＲＡＳＧＲＰ１、Ｃ１ｏｒｆ５８、Ｃ１１ｏｒｆ６３、Ｃ６ｏｒｆ１２９、ＦＨＯＤ１、ＤＫＦＺｐ４３４Ｆ１４２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＩＴＰＲ３、ＢＴＧ３、Ｃ４ｏｒｆ５０、ＣＮＮＭ３、ＩＦＩ１６、ＡＫ１、ＣＤＫ２ＡＰ１、ＲＥＬ、ＢＣＬ２Ｌ１、ＭＶＤ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＦＫＢＰ１１、ＥＭＬ４、ＦＡＮＣＡ、ＣＤＣＡ４、ＦＵＣＡ２、ＭＦＳＤ１０、ＴＢＣＤ、ＣＡＰＮ２、ＩＱＧＡＰ１、ＣＨＳＴ１１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＭＹＯ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＤＬＧ３、ＭＸＤ４、ＲＡＬＧＤＳ、Ｓ１ＰＲ５、ＷＳＢ２、ＣＣＲ３、ＴＩＰＡＲＰ、ＳＰ１４０、ＣＤ１５１、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＮＦ１、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＣＡＣＮＢ１、ＴＭＸ４、ＳＬＣ６Ａ６、ＬＢＡ１、ＳＶ２Ａ、ＬＬＧＬ２、ＩＲＦ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＣＤ９９、ＲＡＰＧＥＦ１、ＰＰＰ４Ｒ１、ＯＳＢＰＬ７、ＦＯＸＰ４、ＳＬＡ２、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＳＴ７、ＪＡＺＦ１、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＬＰＧＡＴ１、ＳＴＸ１１、ＺＡＫ、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＲＯＲＡ、Ｃ８ｏｒｆ８０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｆ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＧＰＲ１１４、ＬＲＰ８、ＣＤ６９、ＣＭＩ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＦＬＪ０００４９、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＩＬ１２ＲＢ１、ＮＴＮＧ２、ＲＤＸ、ＭＬＬＴ４、ＧＰＲＩＮ３、ＡＤＣＹ９、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＡＢＩ３、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＳＹＴＬ３、ＢＭＰＲ１Ａ、ＴＢＫ１、ＰＭＡＩＰ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＳＴＯＭ、ＣＡＬＨＭ２、ＡＢＣＡ２、ＰＰＰ１Ｒ１６Ｂ、ＳＹＮＥ２、ＰＡＭ、Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＡＰＯＢＥＣ３Ｃ、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＨＩＰ１、ＬＡＧ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＤＣＢＬＤ１、ＫＬＦ６、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＤＬＧ５、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＡＴＸＮ１、ＡＲＡＰ２、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＰＬＸＮＣ１、ＧＲＬＦ１、ＳＲＧＮ、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＰＴＰＲＪ、ＳＬＦＮ１１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＮＥＯ１、ＣＬＩＣ１、ＥＩＦ２Ｃ４、ＭＡＰ３Ｋ５、ＩＬ２ＲＢ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＭＹＯ６、ＧＴＤＣ１、ＥＤＡＲＡＤＤ、ＧＡＬＭ、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＳＣ、ＨＮＲＰＬＬ、ＳＹＴ１１、ＡＴＰ２Ｂ４、ＮＨＳＬ２、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＭＢＯＡＴ１、ＧＹＧ１、ＫＡＴＮＡＬ１、ＦＡＭ４６Ｃ、ＺＣ３ＨＡＶ１Ｌ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、Ｃ３ＡＲ１、ＣＲＩＭ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＬＣ１Ａ４、ＦＡＳＬＧ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＡＬＮＴ３、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＴＬＲ３、ＰＬＥＫＨＡ５、ＤＵＳＰ１０、ＧＮＡＯ１、ＰＴＧＤＲ、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＡＮＸＡ２、ＥＯＭＥＳ、ＣＡＤＭ１、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＥＬＯ、ＳＬＣ４Ａ４、ＫＬＲＦ１、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＰＲＦ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＧＡＢ３、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＭＩＣＡＬ２、ＣＹＴＨ３、ＴＯＸ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＹＮＥ１、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＰＬＤ１、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＦＡＳ、ＮＥＴＯ２、ＣＸＣＲ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ２、ＤＵＳＰ４、ＡＵＴＳ２、Ｃ１ｏｒｆ２１、ＫＬＲＧ１、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＦＬＪ１６６８６、ＧＮＬＹ、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＣＣＬ５、ＫＬＲＤ１、ＫＬＲＢ１、及びそれらの組み合わせから選択する１つ以上の遺伝子を含む（例えば、以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－９７（２０１１））。
本明細書で使用する場合、「エフェクターメモリーＴ細胞」または「ＴＥＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯを発現するが、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌの発現を欠くメモリーＴ細胞を指す。エフェクターメモリーＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体（例えば、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌ）を欠いているため、これらの細胞は、通常、末梢循環及び非リンパ組織に見出される。
本明細書で使用される場合、「組織常駐メモリーＴ細胞」または「ＴＲＭ細胞」という用語は、循環せず且つ皮膚、肺、及び胃腸管などの末梢組織に常在するメモリーＴ細胞を指す。いくつかの態様では、組織常在性メモリーＴ細胞は、また、エフェクターメモリーＴ細胞である。
本明細書で使用される場合、「ナイーブＴ細胞」、「ＴＮ細胞」、または「ナイーブ」ＴＩＬという用語は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するが、ＣＤ９５は発現しないＴ細胞及び／またはＴＩＬを指す。これらの細胞は、Ｔ細胞系統の中で最も未分化な細胞を表す。ナイーブＴ細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）間の相互作用は、ナイーブＴ細胞の活性化ＴＥＦＦ細胞への分化及び免疫応答を誘導する。
本明細書で使用する場合、「断片化すること」、「断片化」、及び「断片化された」という用語は、機械的断片化方法、例えば、腫瘍組織の破砕、スライス、分割、及び破砕、ならびに、腫瘍組織の物理的構造を破壊する他の任意の方法を含む、腫瘍をためのプロセスについて記載する。
本明細書で使用される「培養」という用語は、ｅｘ ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞の制御された成長を指す。本明細書で使用される場合、「培養」には、細胞増殖中の、細胞、例えば、ＴＩＬ、の成長が含まれる。いくつかの態様では、培養細胞は、対象、例えば、ヒト対象から得られる。いくつかの態様では、培養細胞は、ヒト対象から得られたＴＩＬを含む。いくつかの態様では、培養は、腫瘍試料または腫瘍断片を本明細書で開示の培地に配置することを含み、培地は、腫瘍試料からのＴＩＬ回避及びＴＩＬ増殖を促進する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、培養前に単離または精製される。いくつかの態様では、細胞培養は、培養細胞数を増殖させること、例えば、細胞の増殖を増加させることが意図される。
ＴＩＬに関して本明細書で使用される「増殖する」または「増殖」は、細胞を刺激または活性化し、細胞を培養するプロセスを指す。増殖プロセスは、細胞が刺激または活性化及び培養された後に、培養細胞集団における、所望の細胞の割合または総数の増加、例えば、ＴＩＬの割合または総数の増加、をもたらし得る。増殖は、培養細胞集団内の全ての細胞型の数が増加する必要はない。むしろ、いくつかの態様では、培養細胞の集団中の細胞のサブセットのみが、増殖中に数が増加するが、他の細胞型の数は、変化しないか、または減少し得る。
本明細書で使用される場合、「収量」という用語は、培養方法またはその一部後の細胞の総数を指す。いくつかの態様では、「収量」という用語は、特定の細胞集団、例えば、ＴＩＬ集団中の幹様ＴＩＬを指す。収量は、限定されないが、代表的な試料に基づいて収量を推定することを含む任意の方法を使用して決定することができる。
本明細書で使用される場合、「幹細胞様」、「幹細胞様」、または「低分化」という用語は、よりナイーブな表現型と一致するマーカーを発現する細胞、例えば、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）を指す。例えば、あまり分化していないＴＩＬは、ＴＮまたはＴＳＣＭ細胞に特徴的な１つ以上のマーカーを発現し得る。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現し、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗである。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現し、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」Ｔ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法は、低分化表現型を有する細胞、例えば、ＴＩＬの成長及び／または増殖を促進する。いかなる特定の機構にも束縛されることなく、いくつかの態様では、本明細書で開示の方法は、低分化細胞、例えば、ＴＩＬの分化を遮断、阻害、または制限し、その結果、培養中の幹様細胞数が増加する。例えば、腫瘍を効果的に制御するには、幹細胞様メモリー表現型またはセントラルメモリー表現型を有する低分化ＴＩＬの養子移入が好ましいと一般に考えられている。例えば、以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６１６－１６２６（２００５）；Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｍｅｄ １５（７）：８０８－８１４（２００９）；Ｌｙｎｎ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５７６（７７８６）：２９３－３００（２０１９）；Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６１６－１６２６（２００５）；Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｍｅｄ １５（７）：８０８－８１４（２００９）；及びＧａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）。
幹細胞性は、自己再生能力、多分化能、及び増殖能の持続性を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞性は、特定の遺伝子シグネチャー、例えば、多数の遺伝子にわたる発現の組み合わせパターン、を特徴とする。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャーは、ＡＣＴＮ１、ＤＳＣ１、ＴＳＨＺ２、ＭＹＢ、ＬＥＦ１、ＴＩＭＤ４、ＭＡＬ、ＫＲＴ７３、ＳＥＳＮ３、ＣＤＣＡ７Ｌ、ＬＯＣ２８３１７４、ＴＣＦ７、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＬＡＳＳ６、ＵＢＥ２Ｅ２、ＩＬ７Ｒ、ＧＣＮＴ４、ＴＡＦ４Ｂ、ＳＵＬＴ１Ｂ１、ＳＥＬＰ、ＫＲＴ７２、ＳＴＸＢＰ１、ＴＣＥＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＣＸＣＲ５、ＧＰＡ３３、ＮＥＬＬ２、ＡＰＢＡ２、ＳＥＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＧＪＢ６、ＯＣＭ２、ＧＣＥＴ２、ＬＲＲＮ１、ＩＬ６ＳＴ、ＬＲＲＣ１６Ａ、ＩＧＳＦ９Ｂ、ＥＦＨＡ２、ＬＯＣ１２９２９３、ＡＰＰ、ＰＫＩＡ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＣＨＭＰ７、ＫＩＡＡ０７４８、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＦＬＪ１３１９７、ＮＲＣＡＭ、Ｃ５ｏｒｆ１３、ＧＩＰＣ３、ＷＮＴ７Ａ、ＦＡＭ１１７Ｂ、ＢＥＮＤ５、ＬＧＭＮ、ＦＡＭ６３Ａ、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＡＲＨＧＥＦ１１、ＲＢＭ１１、ＲＩＣ３、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＥＬＩ１、ＰＴＫ２、ＫＣＴＤ１２、ＬＭＯ７、ＣＥＰ６８、ＳＤＫ２、ＭＣＯＬＮ３、ＺＮＦ２３８、ＥＤＡＲ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＦＡＡＨ２、ＢＣＬ９、Ｃ１７ｏｒｆ４８、ＭＡＰ１Ｄ、ＺＳＷＩＭ１、ＳＯＲＢＳ３、ＩＬ４Ｒ、ＳＥＲＰＩＮＦ１、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＳＰＴＢＮ１、ＫＣＮＱ１、ＬＤＨＢ、ＢＺＷ２、ＮＢＥＡ、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＣＲＴＣ３、ＭＡＰ３Ｋ１、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＲＡＢ４３、ＳＧＴＢ、ＣＮＮ３、ＣＷＨ４３、ＫＬＨＬ３、ＰＩＭ２、ＲＧＭＢ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＡＥＢＰ１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＧＲＡＰ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ（２０１１））。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャーは、ＮＯＧ、ＴＩＭＤ４、ＭＹＢ、ＵＢＥ２Ｅ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＨＡＶＣＲ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＴＰＳＴ１、ＡＣＴＮ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＫＲＴ７２、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＧＪＢ６、ＬＲＲＮ１、ＰＲＡＧＭＩＮ、ＧＩＰＣ３、ＦＬＮＢ、ＡＲＲＢ１、ＳＬＣ７Ａ８、ＮＵＣＢ２、ＬＲＲＣ７、ＭＹＯ１５Ｂ、ＭＡＬ、ＡＥＢＰ１、ＳＤＫ２、ＢＺＷ２、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＰＩＴＰＮＭ２、ＺＮＦ４９６、ＦＡＭ１１７Ｂ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＴＤＲＤ６、ＴＳＰＡＮ３２、Ｃ１８ｏｒｆ２２、Ｃ３ｏｒｆ４４、ＬＯＣ１２９２９３、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＭＬＸＩＰ、Ｃ７ｏｒｆ１０、ＳＴＸＢＰ１、ＫＣＮＱ１、ＦＬＪ１３１９７、ＬＤＬＲＡＰ１、ＲＡＢ４３、ＲＩＮ３、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＡＧＢＬ３、ＴＣＥＡ３、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＶＩＰＲ１、ＭＭＰ１９、ＨＢＳ１Ｌ、ＥＥＦ２Ｋ、ＳＮＯＲＡ５Ｃ、ＵＢＡＳＨ３Ａ、ＦＬＪ４３３９０、ＲＰ６－２１３Ｈ１９．１、ＩＮＰＰ５Ａ、ＰＩＭ２、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＳＮＲＫ、ＬＯＣ１００１２８２８８、ＰＩＧＶ、ＬＯＣ１００１２９８５８、ＳＰＴＢＮ１、ＰＲＯＳ１、ＭＭＰ２８、ＨＥＳ１、ＣＡＣＨＤ１、ＮＳＵＮ５Ｃ、ＬＥＦ１、ＴＴＴＹ１４、ＳＮＯＲＡ５４、ＨＳＦ２、Ｃ１６ｏｒｆ６７、ＮＳＵＮ５Ｂ、ＫＩＡＡ１２５７、ＮＲＧ２、ＣＡＤ、ＴＡＲＢＰ１、ＳＴＲＡＤＢ、ＭＴ１Ｆ、ＴＭＥＭ４１Ｂ、ＰＤＨＸ、ＫＤＭ６Ｂ、ＬＯＣ１００２８８３２２、ＵＸＳ１、ＬＧＭＮ、ＮＡＮＯＳ２、ＰＹＧＢ、ＲＡＳＧＲＰ２、Ｃ１４ｏｒｆ８０、ＸＰＯ６、ＳＬＣ２４Ａ６、ＦＡＭ１１３Ａ、ＭＲＭ１、ＦＢＸＷ８、ＮＤＵＦＳ２、ＫＣＴＤ１２、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，１５５２－１５６２（２０２０））。
多くのがんなどの長期にわたる抗原曝露の存在下では、より分化した免疫細胞、例えば、エフェクター及びエフェクターメモリーＴ細胞は、多くの場合、枯渇し、抗腫瘍機能を失う。バイオマーカー、例えば、Ｔ細胞マーカーは、任意の方法を使用して測定することができる。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、抗体染色とその後のゲートフローサイトメトリーを使用して同定される。
本明細書で使用する「クロノタイプ」という用語は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβの再構成から生じる独特のＤＮＡ配列を有するＴ細胞の集団を指す。固有の可変α鎖（ＶＡ）配列は、複数の可変β鎖（ＶＢ）配列とペアになり得る。逆に、固有のＶＢ配列は、複数のＶＡ配列とペアになり得る。
本明細書で使用する場合、「張度」という用語は、細胞膜を横切る有効浸透圧勾配の尺度を指す。張度は、溶液中のカリウムイオン及び塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）のレベルに基づいて測定または計算することができる。本明細書では、張度は、カリウムイオン（Ｋ＋）の濃度及び塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の濃度の合計に２を乗じたものとして計算される。張度は、溶液、例えば、培地、の浸透圧に関して表すことができる。本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、培地中の溶質の濃度が細胞内の溶質の濃度と等しい場合、「等張」であるとみなされる。本明細書で使用される場合、等張培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＝２８０）。
本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、溶液中の溶質の濃度が細胞中の溶質の濃度よりも低い場合、「低張」であるとみなされる。本明細書で使用される場合、低張溶液は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＜２８０）。いくつかの態様では、本明細書に記載の低張培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌまたは約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。いくつかの態様では、低張培地は、張度が、少なくとも約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、低張培地は、張度が、少なくとも約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、低張培地は、張度が、少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、本明細書に記載の低張培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＝２５０）。
本明細書で使用される場合、溶液、例えば、培地は、溶液中の溶質の濃度が細胞中の溶質の濃度よりも高い場合、「高張」であるとみなされる。本明細書で使用される場合、高張溶液は、３００ｍＯｓｍ／Ｌより大きい浸透圧を有する（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＞２８０）。いくつかの態様では、本明細書に記載の高張培地は、約３２０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。特定の態様では、溶液、例えば、培地の張性は、カリウムイオン、ナトリウムイオン、グルコース、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の溶質の濃度を増加または減少させることにより調整される。いくつかの態様では、溶液、例えば、培地の張性は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を増加または減少させることにより調整される。いくつかの態様では、培地の張度は、１つの溶質の増加を第２の溶質の減少で相殺することにより維持することができる。例えば、ナトリウムイオンの濃度を変化させずに、培地中のカリウムイオンの濃度を増加させると、培地の張性が増加することができる。しかし、カリウムイオンの濃度を増加させ且つナトリウムイオンの濃度を減少させる場合、元の培地の張性を維持することができる。本明細書で使用される場合、培地の張性は、カリウム濃度及びＮａＣｌ濃度の合計に２を乗じることにより定義される。例えば、表２を参照のこと。
本明細書で使用される場合、「カリウム」、「カリウムイオン」、「カリウムカチオン」、及び「Ｋ＋」という用語は、カリウム元素を指すために互換的に使用される。カリウム元素は、溶液中に陽イオンで存在する。しかし、カリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段には、カリウム含有塩（例えば、ＫＣｌ）を溶液中に希釈することが含まれることは、当業者には容易に明らかであろう。そのようなものであるから、モル（Ｍ）濃度のカリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカリウムを含む塩を含むものとして記載することができる。
本明細書で使用される場合、「ナトリウムイオン」及び「ナトリウムカチオン」という用語は、ナトリウム元素を指すために互換的に使用される。ナトリウム元素は、溶液中に一価の陽イオンで存在する。しかし、ナトリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段には、ナトリウム含有塩（例えば、ＮａＣｌ）を溶液中に希釈することが含まれることは、当業者には容易に明らかであろう。そのようなものであるから、モル（Ｍ）濃度のナトリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のナトリウムを含む塩を含むものとして記載することができる。
本明細書で使用される場合、「カルシウムイオン」及び「カルシウムカチオン」という用語は、カルシウム元素を指すために互換的に使用される。カルシウム元素は、溶液中に二価の陽イオンで存在する。しかし、カルシウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段には、カルシウム含有塩（例えば、ＣａＣｌ２）を溶液中に希釈することが含まれることは、当業者には容易に明らかであろう。そのようなものであるから、モル（Ｍ）濃度のカルシウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカルシウムを含む塩を含むものとして記載することができる。
本明細書で使用される場合、「高カリウム性」、例えば、「高カリウム性培地」という用語は、カリウム濃度が増加した培地を指す。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、５ｍＭを超える濃度のカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭのカリウムイオン濃度を有する。本明細書で使用される「代謝再プログラミング培地」、「代謝再プログラミング培地」、または「ＭＲＭ」という用語は、本開示の高カリウム性培地を指す。特定の態様では、代謝再プログラミング培地は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのＮａＣｌ、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのＫＣｌ、約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウム、及び約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地は、さらに、約２５０～約３４０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を含む。
本明細書で使用される場合、「基礎」培地という用語は、本明細書に開示する追加要素、例えば、カリウム、ナトリウム、カルシウム、グルコース、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上が補充されている任意の出発培地を指す。基礎培地は、免疫細胞、例えば、ＴＩＬを培養するための任意の培地であり得る。いくつかの態様では、基礎培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、クリック培地、最小必須培地（ＭＥＭ）、基礎培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ １６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコブ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基礎培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖培地、ＴＩＬ急速増殖プロトコール培地、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、基礎培地は、血清不含である。いくつかの態様では、基礎培地は、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基礎培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基礎培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（ＬＯＮＺＡ）を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、クリック培地を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖培地を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、ＴＩＬ急速増殖培地を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、さらに、免疫細胞血清代替品（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基礎培地は、ＩＣＳＲが補充されたＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲが補充されたＡＩＭＶ、ＩＣＳＲが補充されたＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲが補充されたＲＰＭＩ、ＩＣＳＲが補充されたＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、好適な基礎培地としては、クリック培地、ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＣＴＳ（登録商標））培地、Ｓｔｅｍｌｉｎｅ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（登録商標）培地（ＣＴＳ（登録商標））、ＴｅｘＭＡＣＳ（登録商標）培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ－細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｉｓｃｏｖｅｓ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。いくつかの態様では、基礎培地は、ＮａＣｌ不含ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、好適な基礎培地としては、クリック培地、ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＣＴＳ（登録商標））培地、Ｓｔｅｍｌｉｎｅ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（登録商標）培地（ＣＴＳ（登録商標））、ＴｅｘＭＡＣＳ（登録商標）培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ－細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｉｓｃｏｖｅｓ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。いくつかの態様では、基礎培地は、ＮａＣｌ不含ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、張性を制御するために添加されるＮａＣｌに加えて、１つ以上のナトリウム塩、例えば、カリウムイオンと組み合わせて添加されるＮａＣｌを含む。
本明細書で使用される場合、「サイトカイン」という用語は、細胞間の相互作用及び伝達に特異的な影響を与える細胞により放出される小さな分泌タンパク質を指す。サイトカインの非限定例としては、インターロイキン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、及びＩＬ－２９）、インターフェロン（ＩＦＮ；例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、ならびにトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）ファミリーメンバーが挙げられる。本開示のいくつかの態様は、サイトカインを含む培地で細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、を培養する方法に関する。本開示のいくつかの態様は、サイトカインを含む培地でＴＩＬを培養する方法に関する。本開示のいくつかの態様は、サイトカインを含む培地でＴＩＬを増殖させる方法に関する。いくつかの態様では、サイトカインは、インターロイキンである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせから選択される。ＩＬ－２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６０５６８）は、抗原性または分裂促進性の刺激に応答してＴ細胞により産生される。ＩＬ－２は、Ｔ細胞の増殖及び免疫応答の制御に重要な他の活性を刺激することが知られている。ＩＬ－７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１３２３２）は、リンパ前駆細胞の増殖を刺激可能な造血成長因子である。ＩＬ－７は、Ｂ細胞成熟の特定の段階での増殖に役割を果たすことが考えられる。ＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０９３３）は、ＩＬ－２と同様に、Ｔリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。ＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＨＢＥ４）は、免疫調節活性を有するサイトカインである。ＩＬ－２１は、自然免疫及び適応免疫間の移行を促進し、Ｂ細胞におけるＩｇＧ１及びＩｇＧ３の産生を誘導すると考えられる。ＩＬ－２１は、ＩＬ－１５と相乗してナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び成熟にも役割を果たし得、ＩＬ－２１は、活性化刺激に応答して成熟Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を調節し得る。ＩＬ－１５及びＩＬ－１８との相乗効果で、ＩＬ－１５は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるインターフェロンガンマの生成も刺激し、ＩＬ－２１は、Ｔ細胞媒介免疫応答中の樹状細胞の活性化及び成熟も阻害し得る。
本明細書で使用される場合、「より高い」という用語は、より大きいが等しくないことを意味する。例えば、「５ｍＭより高い」は、５ｍＭを超える任意の量を意味するが、５ｍＭを含まない。
本明細書で使用される「優先的に」という用語は、主要な結果を指す。例えば、本明細書で開示の方法がＣＤ８＋ＴＩＬの増殖を優先的に促進する場合、増殖の主な生成物がＣＤ８＋ＴＩＬであることが理解されるべきである。「優先的に」という用語は、例えば、得られるＴＩＬの１００％がＣＤ８＋であることを必ずしも意味せず、むしろ、用語は、ＣＤ８＋ＴＩＬがＣＤ８－ＴＩＬよりも大幅に増殖されることを示唆する。
本明細書で使用される場合、「投与すること」は、様々な方法及び送達システムのいずれかを使用して、治療薬または治療薬を含む組成物を対象に物理的に導入することを指す。本明細書に記載の治療薬（例えば、本明細書に記載されるように培養されたＴＩＬ）の異なる投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入によるものが含まれる。
本明細書で使用される「非経口投与」という表現は、経腸以外の投与様式及び通常は注射による局所投与を意味し、これには、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、気管内、経肺、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脳室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、ならびにｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションが含まれるが、これらに限定されない。
あるいは、本明細書に記載の治療薬（例えば、本明細書に記載のように培養されたＴＩＬ）は、非経口経路、例えば、局所、表皮、または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸内、舌下、または局所を介して投与することができる。投与は、例えば、１回、複数回、及び／または１回以上の長期間にわたって実行することもできる。
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、任意の天然または合成の免疫原性物質、例えば、タンパク質、ペプチド、またはハプテンを指す。本明細書で使用される場合、「同族抗原」という用語は、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）が認識し、それにより、免疫細胞の活性化（例えば、サイトカイン生成などの及び／または細胞の増殖のためのエフェクター機能を誘導する細胞内シグナルの誘発）を誘導する抗原を指す。
「がん」は、体内の異常細胞の制御不能な成長を特徴とする様々な疾患の広範なグループを指す。細胞分裂及び成長が制御されていないと、付近の組織に侵入する悪性腫瘍の形成がもたらされ、また、リンパ系または血流を介して体の遠くの部分に転移し得る。本明細書で使用される「がん」は、原発性癌、転移性癌、及び再発性癌を指す。
「血液悪性腫瘍」または「血液癌」という用語は、哺乳動物のがん、ならびに、造血及びリンパ組織の腫瘍を指す。血液悪性腫瘍の非限定例としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫を含む、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織に影響を及ぼすものが挙げられる。血液悪性腫瘍は、「液性腫瘍」とも呼ばれる。液性腫瘍癌には、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫、及び他の血液悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。液状腫瘍から得られたＴＩＬは、本明細書では、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）とも呼ばれ得る。
本明細書で使用される「固形腫瘍」は、異常な組織塊を指す。固形腫瘍は、良性であっても、悪性であってもよい。固形腫瘍の非限定例としては、肉腫、癌腫、及びリンパ腫、例えば、肺、乳房、前立腺、結腸、直腸、及び膀胱のがんが挙げられる。固形腫瘍の組織構造には、実質（がん細胞）及びがん細胞が分散している支持間質細胞を含む相互依存した組織区画が含まれており、これは、支持微小環境を提供し得る。
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、外来作用物質に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの作用物質及びそれらによって引き起こされる疾患から生体を保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球（例えば、ＴＩＬ）、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞、または好中球）、ならびに、侵入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性もしくは他の異常な細胞、または、自己免疫もしくは病的炎症の場合、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／または脊椎動物の体からの排除をもたらす、これらの細胞または肝臓のいずれかにより産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用で媒介される。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞またはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋ＴＩＬの活性化または阻害、または、Ｔｒｅｇ細胞の阻害が含まれる。本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は、交換可能であり、胸腺により生成または処理された任意のリンパ球を指す。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４＋ＴＩＬである。
本明細書で使用される場合、「抗腫瘍免疫応答」という用語は、腫瘍抗原に対する免疫応答を指す。
「対象」には、任意のヒトまたは非ヒト動物が含まれる。「非ヒト動物」という用語には、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、及び、齧歯動物、例えば、マウス、ラット、及びモルモットが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現には、対照腫瘍成長を本明細書に記載されるように培養された、例えば、免疫細胞、例えば、ＴＩＬの投与から、利益を受ける、対象、例えば、哺乳類対象が含まれる。
「治療的有効量」または「治療的に有効な投薬量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／または予防的結果をもたらす薬剤（例えば、本明細書に記載されるように培養されたＴＩＬ）の量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、もしくは原因のうちの１つ以上の低減、改善、緩和、低下、遅延、及び／もしくは軽減、または、生体系の他の任意の所望の変化であり得る。固形腫瘍に関して、有効量は、腫瘍を縮小させる、及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（例えば、腫瘍成長を抑制する）、または他の望ましくない細胞増殖を防止または遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の進展を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の再発を予防または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。
有効量の組成物（例えば、本明細書に記載のように培養された細胞）は、例えば、（ｉ）がん細胞数を低減させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させ得る；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を、ある程度減速阻害、遅延、させ得、停止させ得る；（ｉｖ）阻害し得る（すなわち、ある程度減速させ得、腫瘍の転移を停止し得る）；（ｖ）腫瘍の増殖を阻害し得る；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／もしくは再発を予防もしくは遅延させ得る；ならびに／または、（ｖｉｉ）がんと関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。
いくつかの態様では、「治療有効量」は、進行性固形腫瘍などのがんの有意な減少またはがんの進行（退縮）の遅延に影響を与えることが臨床的に証明されている、本明細書で開示の組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養されたＴ細胞）の量である。本開示の治療薬（例えば、本明細書に記載されるように培養されたＴ細胞）の疾患退縮を促進する能力は、例えば、臨床試験中のヒト対象において、ヒトの有効性を予測する動物モデル系において、またはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで薬剤の活性をアッセイすることにより、熟練開業医に既知の様々な方法を使用して評価することができる。
処置に関する「有効」及び「有効性」という用語には、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方が含まれる。薬理学的有効性は、本明細書で開示の組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養された細胞）が患者のがんの退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性は、本明細書で開示の組成物（例えば、本明細書に記載されるように培養された細胞）の投与から生じる細胞、器官、及び／または生物レベルでの毒性、または他の生理学的有害作用（有害作用）のレベルを指す。
本明細書で使用される場合、「腫瘍反応性」という用語は、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ、が腫瘍細胞を標的にして殺傷する能力を指す。本明細書で使用される場合、「腫瘍特異的」という用語は、腫瘍細胞を特異的に標的とする、腫瘍反応性免疫細胞、例えば、ＴＩＬ、を指す。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、２つの異なる膜貫通ポリペプチド鎖：α鎖及びβ鎖から構成されるヘテロ二量体を指し、それぞれは、Ｔ細胞表面膜内部の鎖を固定する定常領域、及びＭＨＣで提示される抗原を認識して結合する可変領域からなる。ＴＣＲ複合体は、２つのヘテロ二量体、ＣＤ３γε及びＣＤ３δεと、１つのホモ二量体ＣＤ３ζを形成する６つのポリペプチドと会合しており、これらは、共にＣＤ３複合体を形成する。Ｔ細胞受容体改変Ｔ細胞療法は、これらの複合体を保持するＴ細胞の改変を利用して、特定の腫瘍細胞に発現される抗原を特異的に標的とする。本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ」という用語には、天然に存在するＴＣＲ及び改変ＴＣＲが含まれる。
本明細書で使用される場合、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ、「μｇ」及び「μＭ」と互換的に使用される。
本明細書に記載の様々な態様は、以下のサブセクションでさらに詳細に記載される。
ＩＩ．開示の方法
本開示は、免疫細胞、例えば、ＴＩＬをｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養する方法に関する。いくつかの態様では、本開示の方法は、免疫細胞、例えば、ＴＩＬを培養条件下で培養または配置することを含み、培養（例えば、特定のイオン濃度、培地の張性、サイトカイン、及びまたはそれらの任意の組み合わせ）は、ＣＤ８＋ＴＩＬの増殖を増強することが可能である。いくつかの態様では、培養（例えば、特定のイオン濃度、培地の張性、サイトカイン、及び／またはそれらの任意の組み合わせ）は、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／またはＣＤ４＋ＴＩＬ）の分化を低減、制限、または予防し、それにより、細胞療法での使用に影響を及ぼすか、または改善することが可能である。いくつかの態様では、本開示は、カリウム濃度が高い代謝再プログラミング培地でＴＩＬを培養することを含む。驚くべきことに、カリウムの増加は、より低いカリウムレベル、例えば、約４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、５ｍＭのカリウムイオンを使用する従来の方法と比較して、腫瘍反応性（例えば、腫瘍特異性）を維持しながら、幹様マーカーの発現の増加及びクローン多様性の増加を有するＣＤ８＋ＴＩＬの増殖の増加と相関することが判明した。さらに、非常に高濃度のカリウム（例えば、＞８０ｍＭ、＞９０ｍＭ、または＞１００ｍＭ）は、ＴＩＬの増殖を低減させたが、本明細書に記載の方法は、従来の方法と合致する培養条件、例えば、期間後に、治療上有効数のＴＩＬを生じた。
免疫療法方策の使用により、特定の種類の進行がんの処置において、かなりの臨床的有効性が実証されている。免疫チェックポイント阻害（ＩＣＢ）は、転移性黒色腫患者に客観的で、場合により、持続的な応答をもたらし得る。結腸癌、肺癌患者の特定のコホート、及び少ない割合のさらに悪性腫瘍を患う患者もＩＣＢの恩恵を受け得る。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、ＣＤ１９またはＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）ＣＡＲで標的化することができる血液細胞悪性腫瘍、最も注目すべきは、Ｂ細胞系統腫瘍を患う患者における劇的な臨床応答を媒介している。ＮＹ－ＥＳＯ－１などの共通の非変異腫瘍抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を導入したＴ細胞による処置は、ＴＣＲと一致するヒト白血球抗原（ＨＬＡ）を発現する患者の臨床応答を媒介することもできる。しかし、これらの顕著な成功にもかかわらず、進行がん患者の大多数は、依然として、免疫療法処置の恩恵を受けておらず、最終的には病気で死亡する。
ＴＩＬ療法は、進行がん患者の臨床応答を媒介する可能性も示している。新たな証拠は、ＴＩＬが腫瘍反応性細胞及び非特異的バイスタンダー細胞の両方から構成される不均一な集団であることを実証している。この不均一なＴＩＬ集団は、不均一な集団における非特異的なバイスタンダー細胞が好ましくないので、ＴＩＬ療法における困難及び望ましくない影響、及び／またはＴＩＬ療法の有効性の希薄化を引き起こす。バイスタンダー細胞は、反応性ＴＩＬの多様性を希薄化し得る非特異的Ｔ細胞である。バイスタンダー細胞には、腫瘍と関連しないエピトープを認識するＴＩＬが含まれる。さらに、ＴＩＬ療法の有効性は、黒色腫、進行性子宮頸癌、肺癌、乳癌、及び／または消化管癌の患者において多様な応答を示している。
いくつかの態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｖｏ療法のためにｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＬ集団の不均一性を低減する方法を提供する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法は、特定のタイプのＴＩＬ集団、例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬを富化する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法は、幹様Ｔ細胞集団、例えば、幹様腫瘍反応性ＴＩＬ及び／または幹様腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬを富化する。
いかなる理論にも束縛されるものではないが、本開示は、高カリウム性培地を使用して、特定の細胞型、すなわち、腫瘍反応性ＴＩＬ、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様腫瘍反応性ＴＩＬ、幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ、及び／または幹様腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬを含むＴＩＬ集団を富化する方法について記載する。それ故、本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭを超える濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地中に不均一なＴＩＬ集団を配置することを含む、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＩＬを培養する方法に関する。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、高カリウム性培地に配置した後に、ＣＤ８＋ＴＩＬが富化される。
本開示のいくつかの態様は、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性、例えば、腫瘍特異的、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数または割合をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで増加させる方法に関し、方法は、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。本開示の他の態様は、ＣＤ８＋富化（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋富化）ＴＩＬ集団を調製する方法に関し、方法は、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む。
本開示のいくつかの態様は、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで腫瘍反応性ＴＩＬの数または割合を増加させる方法に関し、方法は、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。本開示の他の態様は、腫瘍反応性富化ＴＩＬ集団を調製する方法に関し、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む。
本開示のいくつかの態様は、幹様ＴＩＬ（例えば、幹様腫瘍反応性ＴＩＬ、幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ、または幹様腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数または割合をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで増加させる方法に関し、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。本開示の他の態様は、幹様ＴＩＬ（例えば、幹様腫瘍反応性ＴＩＬ、幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ、または幹様腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ）が富化されたＴＩＬ集団を調製する方法に関し、少なくとも５ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地で不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法及び／または組成物は、対照条件下（例えば、約５ｍＭ未満の濃度のカリウムイオンを含む培地中）で培養されたＴＩＬと比較して、培養中のＴＩＬのクローン多様性を増加させる。
クローンの多様性は、任意の方法を使用して評価することができる。いくつかの態様では、クローン多様性は、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのサブセットを使用して評価される。ＴＩＬ集団のクローン多様性を評価する方法の非限定例は、例えば、Ｖｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｍｔｄ．３２１：１８２－９５（２００７）に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、クローン多様性は、ＩＭＭＵＮＯＳＥＱ（登録商標）（ＡＤＡＰＴＩＶＥ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ（登録商標））を使用して評価される。いくつかの態様では、クローン多様性は、ＴＣＲディープシーケンシングを使用して評価される。特定の態様では、クローン多様性は、ＴＩＬ集団から単離された全ＲＮＡ（例えば、全ＲＮＡから調製されたｃＤＮＡ）中のＴＣＲβ ＣＤＲ３配列をシーケンシングすることにより評価される。いくつかの態様では、クローン多様性は、シンプソンのクローン性を使用して評価される。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性と同じクローン多様性を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９５％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約８５％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約８０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約７５％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約７０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約６０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約５０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する。
いくつかの態様では、クローン多様性は、シンプソンのクローン性（√Σｐｉ２（式中、ｐｉは、所与の試料中のクローンｉの比例存在量である））を使用して評価される。シンプソンのクローン性は、試料内の生産的再配列を評価するために一般的に使用され、それにより、クローン頻度分布の大きさを測定する（例えば、以下を参照のこと：Ｖｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３２１：１８２－９５（２００７）（全体が参照により本明細書に組み込まれる））。シンプソンのクローン性の値の範囲は、０～１であり、値が１に近づくほど、クローンの多様性が低く、従って、モノクローナルＴＩＬ集団が多いことを表す。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２７５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１９未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１８未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１７未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１６未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．０９未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．０８未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．０７未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．０６未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬのクローン多様性は、約０．０５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、本開示には、ヒト対象から得られたＴＩＬを増殖させる方法が含まれ、方法は、以下を含み：
ａ．初期ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること（「初期ＴＩＬ培養」）、
ｂ．二次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養する、こと（「二次ＴＩＬ培養」）、及び
ｃ．三次（または最終）ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること（「最終ＴＩＬ培養」）、
初期ＴＩＬ培養培地、二次ＴＩＬ培養培地、及び／または三次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性である。いくつかの態様では、最終ＴＩＬ培養は、さらに、Ｔ細胞の刺激または活性化を含む。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ培養は、さらに、Ｔ細胞の刺激または活性化を含む。
いくつかの態様では、本開示には、ヒト対象から得られたＴＩＬを増殖させる方法が含まれ、方法は、以下を含み：
ａ．初期ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること（「初期ＴＩＬ培養」）、及び
ｂ．二次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを増殖させること（「二次ＴＩＬ増殖」）、
初期ＴＩＬ培養培地及び／または二次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性である。
いくつかの態様では、本開示には、ヒト対象から得られたＴＩＬを増殖させる方法が含まれ、方法は、以下を含み：
ａ．初期ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを培養すること（「初期ＴＩＬ培養」）、
ｂ．二次ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを増殖させること（「二次ＴＩＬ増殖」）、及び
ｃ．三次（または最終）ＴＩＬ培養培地でＴＩＬを増殖させること（「最終ＴＩＬ増殖」）、
初期ＴＩＬ培養培地、二次ＴＩＬ培養培地、及び／または三次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性である。
いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地のみが、高カリウム性である。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ培養培地のみが、高カリウム性である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地及び二次ＴＩＬ培養培地は、双方ともに、高カリウム性である。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地及び二次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性であり、三次ＴＩＬ培養培地は、高カリウム性ではない。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地は、さらに、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、またはその両方を含む。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養、二次ＴＩＬ培養、及び三次または最終ＴＩＬ培養は、ＩＬ－２１の有無にかかわらずＩＬ－２を含む。
いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養培地、二次ＴＩＬ培養、及び／または三次もしくは最終ＴＩＬ培養は、さらに、Ｔ細胞サプリメント、血清代替物、グルタミン、グルタミン代替物（例えば、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌ－アラニン－Ｌ－グルタミン））、非必須アミノ酸、抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、もしくはその両方）、抗真菌剤（例、ＦＵＮＧＩＮ（商標））、及び／またはピルビン酸ナトリウムを含む。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養培地で、最大約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、または約１９日間培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養培地で約１４日間～約１９日間培養される。
いくつかの態様では、二次ＴＩＬ培養におけるＴＩＬは、（ｂ）の二次ＴＩＬ培養培地でＣＤ３アゴニスト、ＣＤ２８アゴニスト、またはその両方で刺激される。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ培養におけるＴＩＬは、さらに、二次ＴＩＬ培養培地中のＣＤ２７リガンドで刺激される。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ培養におけるＴＩＬは、さらに、二次ＴＩＬ培養培地中の４－１ＢＢリガンドで刺激される。
いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖におけるＴＩＬは、刺激または活性化後の、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間培養される。
いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖におけるＴＩＬは、刺激または活性化後の、約６日間～約１２日間、約７日間～約１１日間、約７日間～約１０日間、約８日間～約１２日間培養される。
いくつかの態様では、三次または最終ＴＩＬ増殖におけるＴＩＬは、二次刺激または活性化後の、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日後、少なくとも約１５日間培養される。
いくつかの態様では、三次または最終ＴＩＬ増殖におけるＴＩＬは、二次刺激または活性化後の約７日間～約１４日間、約７日間～約１２日間、約７日間～約１１日間、約８日間～約１４日間、約８日間～約１３日間、約８日間～約１２日間培養される。
本開示は、本明細書で開示の代謝再プログラミング培地、本明細書で開示の細胞培養、または初期ＴＩＬ培養としての本明細書で開示の細胞バッグもしくはバイオリアクター中でのＴＩＬの培養も提供する。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間維持されている。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、１４日間～約１９日間維持されている。
本方法は、さらに、二次ＴＩＬ増殖に進展させることができる。二次ＴＩＬ増殖を開始するために、ＴＩＬは、ＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニスト、例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）で刺激または活性化される。いくつかの態様では、培地中のＴＩＬは、さらに、ＣＤ２７リガンドで刺激される。いくつかの態様では、培地中のＴＩＬは、さらに、４－１ＢＢリガンドで刺激される。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖は、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間維持される。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖培養は、約７日間（約１週間）維持される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７～少なくとも約５０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約４０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約３０×１０７、少なくとも約４×１０７～少なくとも約２５×１０７、少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約１×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約２０×１０７、または少なくとも約４×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約６×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約７×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約８×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約９×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。
二次ＴＩＬ増殖後に、さらに、ＴＩＬは、最終増殖段階で増殖させることができる。最終ＴＩＬ増殖を開始するために、二次ＴＩＬ増殖培養のＴＩＬは、対照培地（すなわち、非高カリウム性培地）に移される。最終ＴＩＬ増殖培養の開始時に、さらに、ＴＩＬは、ＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニスト、例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）で刺激される。いくつかの態様では、培地中のＴＩＬは、さらに、ＣＤ２７リガンドで刺激される。いくつかの態様では、培地中のＴＩＬは、さらに、４－１ＢＢリガンドで刺激される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７～少なくとも約５０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約４０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約３０×１０７、少なくとも約４×１０７～少なくとも約２５×１０７、少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約１×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約２０×１０７、または少なくとも約４×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約６×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約７×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約８×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約９×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培養培地で培養される。
いくつかの態様では、ＴＩＬを、最終増殖にかける。いくつかの態様では、最終的な増殖は、刺激を含む。いくつかの態様では、刺激は、二次増殖中に使用される刺激と同じである。いくつかの態様では、ＴＩＬは、４－１ＢＢＬ及び／またはＣＤ２７Ｌを含むまたは含まないＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む培地で細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ならびに４－１ＢＢＬ及び／またはＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。
いくつかの態様では、最終増殖ステップは、静置ＧＲＥＸ中で実施される。いくつかの態様では、最終増殖は、撹拌タンク内で実施される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約９０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約８０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約７０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約６０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約５０×１０９、少なくとも約１０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約２０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約３０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約３０×１０９～少なくとも約５０×１０９、または少なくとも約３５×１０９～少なくとも約４５×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９～少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９、少なくとも約４５×１０９、少なくとも約５０×１０９、少なくとも約５５×１０９、少なくとも約６０×１０９、少なくとも約６５×１０９、少なくとも約７０×１０９、少なくとも約７５×１０９、少なくとも約８０×１０９、少なくとも約８５×１０９、少なくとも約９０×１０９、少なくとも約９５×１０９、または少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約５０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約６０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約７０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約８０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約９０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量が少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。
いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約７日間～少なくとも約２１日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約７日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約８日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約９日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１０日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１１日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１２日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１３日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１４日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１５日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１６日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１７日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１８日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約１９日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約２０日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培養培地中の細胞収量まで、少なくとも約２１日間継続される。
いくつかの態様では、高カリウム性培地は、低張ではない。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、等張ではない。いくつかの態様では、高カリウム性培地は、高張ではない。
いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、ＣＤ４＋ＴＩＬ及びＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団は、対象から得られた１つ以上の腫瘍試料から得られる。対象から得られた任意の腫瘍試料を、本明細書で開示の方法で使用することができる。いくつかの態様では、腫瘍試料は、腫瘍生検を含む。いくつかの態様では、腫瘍生検は、パンチ生検を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料は、腫瘍切除手術中に得られた腫瘍組織を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料は、コア針生検を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料は、炎症を起こした腫瘍、例えば、多数のＴＩＬを含む腫瘍から収集される。
いくつかの態様では、腫瘍試料を、プレーティングし、初期ＴＩＬ培養にかける。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地で腫瘍試料を培養することを含む。腫瘍試料のＴＩＬ増殖のための任意の方法を、本明細書で開示の方法に使用することができる。いくつかの態様では、腫瘍試料は、プレーティング及び初期ＴＩＬ培養前に分画される。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、または少なくとも約２８日間持続する。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約１４日～約１９日間持続する。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、少なくとも約１４日間持続する。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比は、初期ＴＩＬ培養前のＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比と比較して、初期ＴＩＬ培養後に増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比は、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、または少なくとも約１００倍増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比は、少なくとも約５０倍増加する。
いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後に、集団中のＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後の集団中のＴＩＬの少なくとも約５０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後の集団中のＴＩＬの少なくとも約２５％は、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、不均一なＴＩＬ集団の培養後の集団中のＴＩＬの少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ及び／または幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ）である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養後に、刺激または活性化される。ＴＩＬの増殖及び／または刺激のための任意の方法を、ＴＩＬの刺激中に使用することができる。いくつかの態様では、ＴＩＬは、初期ＴＩＬ培養後に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＩＬをＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖、ＴＩＬ急速増殖プロトコール、またはそれらの組み合わせにかけることにより刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、本明細書で開示の高カリウム性培地で刺激される。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法を使用して培養された免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、例えば、約４０ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地で、従来の方法を使用して培養された細胞集団と比較して、幹様ＴＩＬ数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））は、出発細胞集団と比較して、幹様細胞に特徴的なマーカーの発現の増加を示す。いくつかの態様では、出発細胞集団は、ヒト対象から得られた細胞を含む。いくつかの態様では、出発細胞集団は、ヒト対象から得られたＴＩＬを含む。
細胞多分化能の増加は、任意の方法を使用して測定することができる。いくつかの態様では、幹細胞性は、抗体染色とそれに続くゲートフローサイトメトリーで測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、オートファジーフラックスで測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、グルコース摂取で測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、脂肪酸摂取で測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、ミトコンドリアバイオマスで測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、ＲＮＡ定量化／発現分析（例えば、マイクロアレイ、ｑＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ）、ＲＮＡ－Ｓｅｑ．、単一細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ．、またはそれらの任意の組み合わせ）で測定される。いくつかの態様では、細胞幹細胞性は、代謝アッセイ（例えば、タツノオトシゴ代謝アッセイ、細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の分析；酸素消費速度（ＯＣＲ）の分析；酸素消費速度（ＯＣＲ）の分析；予備の呼吸能力の分析；及び／またはミトコンドリア膜電位の分析）（例えば、それに関連する記録）で測定される。いくつかの態様では、幹細胞性は、１つ以上のｉｎ ｖｉｖｏ機能アッセイ（例えば、細胞持続性、抗腫瘍能力、抗腫瘍クリアランス、ウイルスクリアランス、多分化能、サイトカイン放出、細胞殺傷、またはそれらの任意の組み合わせをアッセイするもの）を使用して測定される。
いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の分化状態は、低分化細胞に典型的なマーカーを発現する細胞数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加は、ＴＮ及び／またはＴＳＣＭ細胞に典型的なマーカーを発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加は、ＴＳＣＭ細胞に典型的なマーカーを発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ４５ＲＡを発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＣＲ７を発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、ＣＤ６２Ｌを発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬ集団は、ＣＤ２８を発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ９５を発現する、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））は、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗである。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））は、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ６２Ｌ＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、及びＣＤ６２Ｌ＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＴＣＦ７を発現する細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、及びＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、及びＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））は、ＣＤ３を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ３＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））は、ＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ３＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＣＤ８＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ３＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＴＣＦ７＋である、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＴＳＣＭ細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＴＮ細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の集団は、ＴＳＣＭ及びＴＮ細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団は、幹様ＴＩＬ数の増加を示す。
いくつかの態様では、培養中の幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数は、培養前の幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数を比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％増加する。いくつかの態様では、培養中の幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数は、培養前の幹様免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の数を比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、または少なくとも約２０倍増加する。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従った、免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ））の培養後に、幹様ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、幹様腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、培養中のＣＤ８＋ＴＩＬの総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％を構成する。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、幹様ＴＩＬは、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、幹様ＴＩＬは、培養中のＣＤ８＋ＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、幹様ＴＩＬは、培養中のＣＤ４＋ＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬである。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬである。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％は、ＣＤ３９－／ＴＣＦ７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＴＣＦ７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養された免疫細胞、例えば、ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ（例えば、腫瘍反応性ＣＤ８＋ＴＩＬ）））の養子移入の際、移入された細胞は、従来の培養条件を使用して培養された細胞と比較して、細胞枯渇の減少を示す。いくつかの態様では、培養ＴＩＬの養子移入の際、移入されたＣＤ８＋富化ＴＩＬは、従来の培養条件を使用して培養されたＴＩＬと比較して、ｉｎ ｖｉｖｏでより長期間存続する。そのような持続性の増加は、腫瘍微小環境に浸潤して機能するＴＩＬの能力、枯渇に抵抗する能力、及び応答の継続的な増殖及び持続性を確保する幹細胞性の持続性を指す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴ細胞は、幹様細胞である。そのような細胞は、自己再生、増殖、及び分化が可能である。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴ細胞は、エフェクター様マーカーも発現する幹様細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴ細胞は、腫瘍細胞を標的として殺傷する能力も維持する幹様細胞である。
いくつかの態様では、移入されたＣＤ８＋富化ＴＩＬは、従来の培養条件を使用して培養されたＴＩＬと比較して、より大きなｉｎ ｖｉｖｏ有効性、例えば、腫瘍殺傷活性を有する。いくつかの態様では、従来の培養条件を使用して培養された細胞と比較して、対象において応答、例えば、腫瘍体積の減少を誘発するために、本明細書で開示の方法に従って培養された、より低用量のＣＤ８＋富化ＴＩＬが必要とされる。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ｅｘ ｖｉｖｏ培養全体で、例えば、腫瘍試料が最初にプレーティングされた時から、増殖プロセス全体を通して、投与まで、代謝再プログラミング培地中、例えば、本明細書で開示の高カリウム性培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、増殖の間、本明細書で開示の培地で培養される。
いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、ミトコンドリア燃料を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、Ｏ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、または少なくとも約１０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、少なくとも約１．０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。
いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、解糖媒介代謝の阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、例えば、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、例えば、イデラリシブ（例えば、ＣＡＬ－１０１；Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、または少なくとも約１０ｍＭのイデラリシブを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、少なくとも約１．０ｍＭのイデラリシブを含む。
いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培養培地は、さらに、（ｉ）１つ以上の細胞増殖剤、（ｉｉ）ナトリウムイオン、（ｉｉｉ）１つ以上の糖類、（ｉｖ）カルシウムイオン、及び（ｖ）１つ以上のサイトカイン、のうちの１つ以上を含む。
ＩＩ．Ａ．カリウム
本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬをｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養する方法に関し、方法は、不均一なＴＩＬ集団を、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地に配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、ＣＤ８＋ＴＩＬの数または割合をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで増加させる方法に関し、方法は、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地で、不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む。本開示の他の態様は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のＣＤ８＋富化集団を調製する方法に関し、方法は、不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム培地で培養することを含む。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１０５ｍＭ、少なくとも約１１０ｍＭ、少なくとも約１１５ｍＭ、少なくとも約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９５ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５５ｍＭ～約９５ｍＭ、約５５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５５ｍＭ～約８５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、または約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９５ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１００ｍＭ、約６５ｍＭ～約９５ｍＭ、約６５ｍＭ～約９０ｍＭ、約６５ｍＭ～約８５ｍＭ、約６５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６５ｍＭ～約７５ｍＭ、または約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９５ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約９５ｍＭ、約７５ｍＭ～約９０ｍＭ、約７５ｍＭ～約８５ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９５ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、または約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約１００ｍＭ、約８５ｍＭ～約９５ｍＭ、または約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、高張である。いくつかの態様では、培地は、等張である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭより高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約９０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約８０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約７０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約７０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約６０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約９０ｍＭ未満～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約８５ｍＭ未満～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約８０ｍＭ未満～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約７５ｍＭ未満～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約７０ｍＭ未満～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約６５ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約６０ｍＭ未満～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約５５ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約９５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約５０ｍＭ未満～約４５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約４５ｍＭ未満～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭ～約１０５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約４０ｍＭ未満～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約３５未満～約３０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約３０ｍＭ未満～約２５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は、約２５ｍＭ未満～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１００ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１１９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２１ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２１ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２２ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２２ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２３ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２３ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２４ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２４ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２５ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２５ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２６ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２６ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２７ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２７ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２８ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２８ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２９ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１２９ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１３０ｍＭより高く、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１３０ｍＭであり、培地中のカリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、高濃度のカリウムイオンを含む高カリウム性培地は、培地中に十分な量のカリウム塩を添加することにより調製することができる。いくつかの態様では、カリウム塩の非限定例としては、以下が挙げられる：アミントリクロロ白金酸カリウム、アクアペンタクロロルテン酸カリウム、ビス（オキサラト）白金（ＩＩ）酸カリウム二水和物、硫酸水素カリウム、水素化ホウ素カリウム、臭化カリウム、炭酸カリウム、塩化カリウム、クロム酸カリウム、重クロム酸カリウム、ジシアノアルゼン酸カリウム、ジシアノ金酸カリウム、フッ化カリウム、フルオロ硫酸カリウム、ヘキサクロロイリジウム酸カリウム、ヘキサクロロオスミウム酸カリウム、ヘキサクロロパラジウム酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロレニウム酸カリウム、ヘキサシアノクロム酸カリウム、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、ヘキサシアノルテニウム（ＩＩ）酸カリウム水和物、ヘキサフルオロアンチモン酸カリウム、ヘキサフルオロニッケル酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヘキサフルオロチタン酸カリウム、ヘキサフルオロジルコニウム酸カリウム、ヘキサヒドロキソアンチモン酸カリウム、ヘキサヨード白金酸カリウム、ヘキサヨードレニウム酸カリウム、水酸化カリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、マンガン酸カリウム、メタバナジン酸カリウム、モリブデン酸カリウム、硝酸カリウム、ニトロソジスルホン酸カリウム、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物、ペンタクロロニトロシルルテニウム酸カリウム、過塩素酸カリウム、過レニウム酸カリウム、過ルテニウム酸カリウム、ペルオキソ二硫酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、ピロリン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、スズ酸カリウム三水和物、硫酸カリウム、テルル酸カリウム水和物、亜テルル酸カリウム、テトラホウ酸カリウム四水和物、テトラブロモ金酸カリウム、テトラブロモパラジウム酸カリウム、テトラクロロパラジウム酸カリウム、テトラクロロ白金酸カリウム、テトラシアノパラジウム酸カリウム、テトラシアノ白金酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、テトラニトロ白金酸カリウム、テトラチオン酸カリウム、ｐ－トルエンチオスルホン酸カリウム、及び三塩基性ヒドロキシクエン酸カリウム一水和物。いくつかの態様では、カリウム塩は、塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む。いくつかの態様では、カリウム塩は、グルコン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩は、クエン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩は、ヒドロキシクエン酸カリウムを含む。いくつかの態様では、カリウム塩は、本明細書で開示のカリウム塩のいずれかの組み合わせを含む。
ＩＩ．Ｂ．細胞増殖剤
いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地は、さらに、細胞増殖剤を含む。本明細書で使用される場合、「細胞増殖剤」は、培養免疫細胞、例えば、ＴＩＬ、のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｅｘ ｖｉｖｏでの成長及び増殖を促進する薬剤、例えば、小分子、ポリペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを指す。いくつかの態様では、細胞増殖剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの態様では、培地は、さらに、ＡＫＴ阻害剤を含む。いくつかの態様では、培地は、さらに、ＰＩ３Ｋ阻害剤及びＡＫＴ阻害剤を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＬＹ２９４００２を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＣ８７１１４を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブを含む（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２（３）：２１０－２３（２０１８））。いくつかの態様では、培地は、さらに、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤を含む。いくつかの態様では、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤は、ＴＷＳ１１９を含む。いくつかの態様では、培地は、さらに、ＡＣＬＹ阻害剤を含む。いくつかの態様では、ＡＣＬＹ阻害剤は、三塩基性ヒドロキシクエン酸カリウム一水和物を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クエン酸ヒドロキシルを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ピクチリシブを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＣＡＬ－１０１を含む。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、またはＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ（ＣＡＳ ６１２８４７－０９－３）を含む。
ＩＩ．Ｃ．ナトリウム
いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地、例えば、高カリウム性培地は、さらに、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地は、約１１５ｍＭ未満の濃度のナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地は、４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度のナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。
いくつかの態様では、高濃度のナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む基礎培地から開始し、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度に達するために溶液を希釈することにより、ナトリウムの目標濃度に達する。いくつかの態様では、１つ以上のナトリウム塩（例えば、より多くのＮａＣｌ）を添加することでナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度を上げることにより、ナトリウムの目標濃度に達する。ナトリウム塩の非限定例としては、以下が挙げられる：（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム、酒石酸ナトリウムアルセニル水和物、アジ化ナトリウム、ベンジル酸化ナトリウム、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クロム酸ナトリウム、シクロヘキサン酪酸ナトリウム、エタンチオールナトリウム、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ヘキサクロロイリジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム水和物、ヘキサクロロイリジウム（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロロジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム、ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロヒ（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロ鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロリン酸ナトリウム、ヘキサフルオロケイ酸ナトリウム、ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、二フッ化水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、水素シアンアミドナトリウム、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム四水和物、メタケイ酸ナトリウム九水和物、メタバナジン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過炭酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過マンガン酸ナトリウム、過レニウム酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜テルル酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、テトラクロロアルミン酸ナトリウム、テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロ白金（ＩＩ）酸ナトリウム、三塩基性チオリン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、オキシフッ化イットリウムナトリウム、トリメタリン酸三ナトリウム、及びそれらの任意の組み合わせ。いくつかの態様では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩は、グルコン酸ナトリウムを含む。特定の態様では、ナトリウム塩は、重炭酸ナトリウムを含む。特定の態様では、ナトリウム塩は、ヒドロキシクエン酸ナトリウムを含む。特定の態様では、ナトリウム塩は、リン酸ナトリウムを含む。
いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、基礎培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度が低減する。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。特定の態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。
いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０ｍＭである。
いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４０ｍＭ～約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。
いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６６ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６７ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６８ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６９ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７１ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７２ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７３ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７４ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。
いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１０９ｍＭのＮａＣｌを含み、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は、（１３５－カリウムイオン濃度）以下である。いくつかの態様では、培地は、約４０ｍＭのカリウムイオン及び約９５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９５ｍＭ、約９４ｍＭ、約９３ｍＭ、約９２ｍＭ、約９１ｍＭ、約９０ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約４５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９０ｍＭ、約８９ｍＭ、約８８ｍＭ、約８７ｍＭ、約８６ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８５ｍＭ、約８４ｍＭ、約８３ｍＭ、約８２ｍＭ、約８１ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８０ｍＭ、約７９ｍＭ、約７８ｍＭ、約７７ｍＭ、約７６ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７５ｍＭ、約７４ｍＭ、約７３ｍＭ、約７２ｍＭ、約７１ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７０ｍＭ、約６９ｍＭ、約６８ｍＭ、約６７ｍＭ、約６６ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６５ｍＭ、約６４ｍＭ、約６３ｍＭ、約６２ｍＭ、約６１ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６０ｍＭ、約５９ｍＭ、約５８ｍＭ、約５７ｍＭ、約５６ｍＭ、約５５ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約４０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５５ｍＭ、約５４ｍＭ、約５３ｍＭ、約５２ｍＭ、約５１ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、または約３５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約８５ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５０ｍＭ、約４９ｍＭ、約４８ｍＭ、約４７ｍＭ、約４６ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、または約３０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約４５ｍＭ、約４４ｍＭ、約４３ｍＭ、約４２ｍＭ、約４１ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約２５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６１ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６２ｍＭのＮａＣｌを含む。
いくつかの態様では、培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、低張である。いくつかの態様では、培地は、等張である。
本開示のいくつかの態様は、細胞、例えば、多能性細胞、多能性細胞、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／もしくはＴＩＬ）を培養する方法に関し、方法は、（ｉ）４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）約１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌ、を含む培地中に細胞を配置することを含む。本開示の特定の態様は、Ｔ細胞を培養する方法に関し、方法は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）約９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌ、を含む培地中にＴ細胞を配置すること、を含む。
ＩＩ．Ｄ．糖類
いくつかの態様では、代謝再プログラム培地（ＭＲＭ）、例えば、高カリウム性培地は、糖を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、低張である。いくつかの態様では、ＭＲＭは、等張である。いくつかの態様では、より高濃度の糖類を含む基礎培地から開始し、糖類の目標濃度に達するように、溶液を希釈することにより、糖類の目標濃度に達する。いくつかの態様では、所望の濃度に達するまで、糖類を添加することで糖類の濃度を上げることにより、糖類の目標濃度に達する。
いくつかの態様では、糖類は、単糖類、二糖類、または多糖類である。いくつかの態様では、糖類は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、糖は、グルコースである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、低張である。いくつかの態様では、ＭＲＭは、等張である。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）５０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）５０ｍＭより高い濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）グルコース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン、及び、（ｉｉ）マンノース、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約２４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭを超える。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭ～約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭ～約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．５ｍＭ～約１６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６ｍＭ～約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．５ｍＭ～約１７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７ｍＭ～約１７．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．５ｍＭ～約１８ｍＭである。
いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、ｉｓ約１０．５ｍＭ、約１１ｍＭ、約１１．５ｍＭ、約１２ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１３ｍＭ、約１３．５ｍＭ、約１４ｍＭ、約１４．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１６．５ｍＭ、約１７ｍＭ、約１７．５ｍＭ、約１８ｍＭ、約１８．５ｍＭ、約１９ｍＭ、約１９．５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２０．５ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。
いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約９ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１１ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１１．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１２ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１２．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１３．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．９ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．３ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．２ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．７ｍＭである。
ＩＩ．Ｅ．カルシウム
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、高カリウム性培地は、カルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、高濃度のカルシウムイオンを含む基礎培地から開始し、カルシウムイオンの目標濃度に達するように、溶液を希釈することにより、カルシウムの目標濃度に達する。いくつかの態様では、１つ以上のカルシウム塩を添加することで、カルシウムイオンの濃度を上昇させることにより、カルシウムの目標濃度に達成される。カルシウム塩の非限定例としては、臭化カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、カルシウムシアナミド、フッ化カルシウム、水素化カルシウム、水酸化カルシウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、過塩素酸カルシウム四水和物、一塩基性リン酸カルシウム、三塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、チオシアン酸カルシウム四水和物、ヒドロキシアパタイト、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、カルシウム塩は、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）を含む。いくつかの態様では、カルシウム塩は、グルコン酸カルシウムを含む。
いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基礎培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基礎培地の濃度よりも高い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭを超える。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約２．０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．９ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ未満である。
いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．７ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約０．８～約０．９ｍＭ、約０．８～約１．０ｍＭ、約０．８～約１．１ｍＭ、約０．８～約１．２ｍＭ、約０．８～約１．３ｍＭ、約０．８～約１．４ｍＭ、約０．８～約１．５ｍＭ、約０．８～約１．６ｍＭ、約０．８～約１．７ｍＭ、約０．８～約１．８ｍＭ、約０．９～約１．０ｍＭ、約０．９～約１．１ｍＭ、約０．９～約１．２ｍＭ、約０．９～約１．３ｍＭ、約０．９～約１．４ｍＭ、約０．９～約１．５ｍＭ、約０．９～約１．６ｍＭ、約０．９～約１．７ｍＭ、約０．９～約１．８ｍＭ、約１．０～約１．１ｍＭ、約１．０～約１．２ｍＭ、約１．０～約１．３ｍＭ、約１．０～約１．４ｍＭ、約１．０～約１．５ｍＭ、約１．０～約１．６ｍＭ、約１．０～約１．７ｍＭ、約１．０～約１．８ｍＭ、約１．１～約１．２ｍＭ、約１．１～約１．３ｍＭ、約１．１～約１．４ｍＭ、約１．１～約１．５ｍＭ、約１．１～約１．６ｍＭ、約１．１～約１．７ｍＭ、約１．１～約１．８ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。
いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭ～約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭ～約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ～約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭ～約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭ～約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭ～約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭ～約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭ～約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭ～約１．８ｍＭである。
いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウムイオンを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
ＩＩ．Ｆ．サイトカイン
いくつかの態様では、ＭＲＭは、サイトカインを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、低張である。いくつかの態様では、ＭＲＭは、等張である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＭＲＭは、ＩＬ－２を含まない。いくつかの態様では、ＭＲＭは、ＩＬ２及びＩＬ２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、ＩＬ２、ＩＬ２１、及びＩＬ１５を含む。
サイトカインは、いかなる点でもＭＲＭに追加することができる。いくつかの態様では、サイトカインは、ＴＩＬ（例えば、腫瘍試料）が培地に添加される前に、ＭＲＭに添加される。いくつかの態様では、ＴＩＬ（例えば、腫瘍試料）は、（ｉ）本明細書で開示の濃度のカリウム、及び、（ｉｉ）増殖を含むＴＩＬ培養全体を通じたサイトカイン、を含むＭＲＭで培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬ（例えば、腫瘍試料）は、（ｉ）本明細書で開示の濃度のカリウム、及び、（ｉｉ）ＴＩＬ増殖を通じたサイトカイン、を含むＭＲＭで培養される。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－７、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－７、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－７、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－１５、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－１５、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－１５、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２１、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２１、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、及び、（ｉｉ）ＩＬ－２１、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－１５を含まない。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－７、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－７、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－７、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－１５、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－１５、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－１５、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２１、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２１、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）ＮａＣｌ、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２１、を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－１５を含まず；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５０ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、または約２７５ｎｇ／ｍＬ～約３２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５９０ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７３．６ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１５００ＩＵ／ｍＬ～約１２，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約１６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約１７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約１８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約１９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２０００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約２９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３０００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約３９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４０００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約４９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５０００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約５９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６０００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約６９００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、少なくとも約７１００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７２００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７３００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７４００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７５００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７６００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７７００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７８００ＩＵ／ｍＬ、少なくとも約７９００ＩＵ／ｍＬ、または少なくとも約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬは、二次培養（例えば、ＲＥＰ培養）中にＭＲＭで培養され、ＭＲＭは、約３０００ＩＵ／ｍＬを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬは、初期培養中にＭＲＭで培養され、ＭＲＭは、約６０００ＩＵ／ｍＬを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３５ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．３ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．３ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５００ＩＵ／ｍＬ、約５５０ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約６５０ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約７５０ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約８５０ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約９５０ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，０５０ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，１５０ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，２５０ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，３５０ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，４５０ＩＵ／ｍＬ、または約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．３ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．６ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．７ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．８ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．９ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、及び（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＭのＩＬ－２、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、（ｖｉ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉ）約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び（ｖｉ）約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、及び約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、及び（ｖ）約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、ならびに約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、（ｖｉ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、及び（ｖｉ）約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約２９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、及び（ｖｉ）約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、４０ｍＭを超えるカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、ＮａＣｌ、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含み；カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、（ｉｉ）約６０ｍＭのナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウム、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコース、（ｖ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、及び（ｖｉ）約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、を含む。
ＩＩ．Ｇ．Ｔ細胞培養培地（例、代謝再プログラミング培地）
いくつかの態様では、ＭＲＭは、カリウムイオンを基礎培地に添加することにより調製される。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養するために使用される任意の基礎培地を使用することができる。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、Ｌ－アルギニン、Ｌ－シスチン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－ロイシン、Ｌ－リジン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、及びＬ－グルタミン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、Ｌ－グルタミンを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、または少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭの１つ以上の必須アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、Ｌ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、または少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．６８ｍＭのＬ－グルタミンを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１４ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．７６ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．８３ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．８４ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．９７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約２．０５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約２．１１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約２．１８ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５．４１ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５．４７ｍＭのＬ－グルタミンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１０ｍＭ未満のＬ－グルタミンを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、Ｌ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、または約１ｍＭ～約２ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．０１ｍＭ、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、または少なくとも約１５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．２ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．４ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．６ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．８ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．２ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．４ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．６ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．８ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、または約７．０ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１７ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１８ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．８５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．８６ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．９５ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．０６ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．０９ｍＭのＬ－グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１０ｍＭ未満のＬ－グルタミン酸を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、ジペプチドを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、グルタミン－グルタミン（Ｇｌｎ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、アラニル－グルタミン（Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１ｍＭ～約５０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１ｍＭ～約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約２０ｍＭ、約３ｍＭ～約２０ｍＭ、約４ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約６ｍＭ～約２０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約２０ｍＭ、約９ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約１０ｍＭ、約３ｍＭ～約１０ｍＭ、約４ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約６ｍＭ～約１０ｍＭ、約７ｍＭ～約１０ｍＭ、約８ｍＭ～約１０ｍＭ、または約９ｍＭ～約１０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約２ｍＭ、少なくとも約３ｍＭ、少なくとも約４ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約１６ｍＭ、少なくとも約１７ｍＭ、少なくとも約１８ｍＭ、少なくとも約１９ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、または少なくとも約５０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、基礎培地は、約１．７ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．６８ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約６ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．２ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．４ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．６ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．８ｍＭ、約６．９ｍＭ、約７．０ｍＭ、約７．１ｍＭ、または約７．２ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約６．８ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約６．８１ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約６．９ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約６．９６ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約７．０ｍＭのジペプチド（例えば、Ａｌａ－Ｇｌｎ）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５ｍＭ未満のアンモニア（ＮＨ３）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４ｍＭ未満、約３．５ｍＭ未満、約３ｍＭ未満、約２．５ｍＭ未満、約２ｍＭ未満、約１．５ｍＭ未満、約１ｍＭ未満、約０．５ｍＭ未満、約０．４ｍＭ未満、約０．３ｍＭ未満、約０．２ｍＭ未満、または約０．１ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．０１ｍＭのアンモニア～約２ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．９ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．８ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．７ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．６ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．５ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．４ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．３ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．２ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１．１ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約１ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．９ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．８ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．７ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．６ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．５ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．４ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．３ｍＭ未満のアンモニア、約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．２ｍＭ未満のアンモニア、または約０．０１ｍＭのアンモニア～約０．１ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．２ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．２５ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．２５９ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．２８ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約１．３ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３４ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３５ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３６ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３７ｍＭのアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．３ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．２９ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．２８ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．２７８ｍＭ未満のアンモニアを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、アンモニアを含まない。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、乳酸塩を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、乳酸塩を含まない。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、さらに、ＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニストを含む。ＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニストは、培地で培養されているＴＩＬを刺激し得る。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは、ＣＤ３複合体に結合してＣＤ３を活性化することが可能な任意の分子であり得る。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは、小分子である。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは、タンパク質である。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは、抗ＣＤ３抗体である。本明細書で使用される「抗ＣＤ３抗体」という用語は、抗体またはそのバリアント、例えば、モノクローナル抗体を指し、これらは、Ｔ細胞中のＣＤ３複合体に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む。いくつかの態様では、抗ＣＤ３抗体は、ムロモナブとしても既知のＯＫＴ－３、及びＵＣＨＴ－１を含む。他の抗ＣＤ３抗体には、例えば、ビシリズマブ、オテリキシズマブ、及びテプリズマブが含まれる。
「ＯＫＴ－３」または「ＯＫＴ３」という用語は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体中のＣＤ３受容体に対する、ヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、モノクローナル抗体またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを指し、これには、ＯＫＴ－３（３０ｎｇ／ｍＬ、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ ｐｕｒｅ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）及びそのムロモナブもしくはバリアント、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、またはバイオシミラーなどの市販の形態が含まれる。ＯＫＴ－３を生成可能なハイブリドーマは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に寄託されており、カタログ番号８６０２２７０６が割り当てられている。ＯＫＴ－３を生成可能なハイブリドーマも、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８００１が割り当てられている。
いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは、ＣＤ２８またはその下流経路を活性化することが可能な任意の分子であり得る。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは、小分子である。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは、タンパク質である。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは、抗ＣＤ２８抗体である。本明細書で使用される「抗ＣＤ２８抗体」という用語は、抗体またはそのバリアント、例えば、モノクローナル抗体を指し、これは、ＣＤ２８に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含み、Ｔ細胞を活性化する。いくつかの態様では、抗ＣＤ２８抗体は、カタログ番号１００１８２－１（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｃｅｎｃｅ）、カタログ番号１００１８６－１（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を含む。
いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニスト及びＣＤ２８アゴニストは、共にＭＲＭに添加される。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニスト及びＣＤ２８アゴニストは、１つの組成物中の、ＭＲＭに同時に添加される。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニスト及びＣＤ２８アゴニストは、順次添加される。いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、ＣＤ３アゴニスト及びＣＤ２８アゴニスト、例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、の両方を含む置換基を含み、及び／または、それが補充される。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：１５０のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：２００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：２５０のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：３００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：３５０のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：４００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：４５０のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：５００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）代替物を含み、及び／または、それが補充される。遺伝子改変ヒトＫ５６２ ａＡＰＣなどの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）は、ＴＩＬの迅速な増殖に使用することができる。いくつかの態様では、ａＡＰＣは、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４１ＢＢリガンド、及びＯＸ４０リガンドをコードする遺伝子を含むポリシストロン性レンチウイルスベクターをＫ５６２細胞に形質導入することにより生成される。Ｋ５６２細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、またはＨＬＡ－ＤＲ分子を発現せず、これは、上記の共刺激リガンドを形質導入された場合、Ｔ細胞増殖のための強力なツールとなる（例えば、以下を参照：Ｓｕｈｏｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ，２００７）。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖及び／または三次ＴＩＬ増殖は、ＴＩＬをａＡＰＣ＋ＯＫＴ３と共培養することを含む。いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖及び／または三次ＴＩＬ増殖は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の代わりにＯＫＴ３（例えば、少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３）の存在下で、ＴＩＬを照射ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣ）と共培養することを含む。いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）対フィーダー細胞（例えば、ａＡＰＣ）の比は、少なくとも約１：５０、少なくとも約１：１００、少なくとも約１：１５０、少なくとも約１：２００、少なくとも約１：２５０、少なくとも約１：３００、少なくとも約１：３５０、少なくとも約１：４００、少なくとも約１：４５０、または少なくとも約１：５００である。いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）対フィーダー細胞（例えば、ａＡＰＣ）の比は、少なくとも約１：１００である。いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、ＴＩＬ）対フィーダー細胞（例えば、ａＡＰＣ）の比は、少なくとも約１：２００である。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（もしくは最終）ＴＩＬ増殖培地は、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）を含み、及び／または、それが補充される。ＣＤ２７リガンド（ＣＤ７０）は、その受容体に結合することが可能であり、次に、結合時に、受容体は、Ｔ細胞免疫を生じ、長期にわたって維持することが可能である。ＣＤ２７は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。１２０ｋＤａの膜貫通型ホモ二量体リン糖タンパク質であるＣＤ２７も、共刺激の役割を果たしているようである。ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ７０は、抗原刺激に応答してＴ細胞及びＢ細胞上で発現される膜貫通型糖タンパク質であり、それにより、活性化の初期段階のマーカーと考えられている。ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、Ｔ細胞上のＣＤ２７及びＢ細胞上のＣＤ７０の相互作用により、増殖に関してＴ細胞の活性化が増強されるが、比較的少量のＩＬ－２しか分泌されない。ＣＤ２７がナイーブＴ細胞の活性化にはあまり関与しないが、Ｔ細胞メモリーの生成に重要であることを、ノックアウトマウスの研究は示している。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（もしくは最終）ＴＩＬ増殖培地は、約０．１μｇ／ｍｌ～約５０μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１μｇ／ｍｌ～約４０μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約３０μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約２０μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約８μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌ、または約４μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含み、及び／または、それが補充される。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、少なくとも約０．１μｇ／ｍｌ、少なくとも約１μｇ／ｍｌ、少なくとも約２μｇ／ｍｌ、少なくとも約３μｇ／ｍｌ、少なくとも約４μｇ／ｍｌ、少なくとも約５μｇ／ｍｌ、少なくとも約６μｇ／ｍｌ、少なくとも約７μｇ／ｍｌ、少なくとも約８μｇ／ｍｌ、少なくとも約９μｇ／ｍｌ、少なくとも約１０μｇ／ｍｌ、少なくとも約１１μｇ／ｍｌ、少なくとも約１２μｇ／ｍｌ、少なくとも約１３μｇ／ｍｌ、少なくとも約１４μｇ／ｍｌ、少なくとも約１５μｇ／ｍｌ、少なくとも約１６μｇ／ｍｌ、少なくとも約１７μｇ／ｍｌ、少なくとも約１８μｇ／ｍｌ、少なくとも約１９μｇ／ｍｌ、少なくとも約２０μｇ／ｍｌ、少なくとも約２５μｇ／ｍｌ、少なくとも約３０μｇ／ｍｌ、または少なくとも約５０μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含み、及び／または、それが補充される。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含み、及び／または、それが補充される。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（もしくは最終）ＴＩＬ増殖培地は、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）を含み、及び／または、それが補充される。４－１ＢＢＬ（４－１ＢＢリガンド、ＣＤ１３７Ｌ）は、ＡＰＣ（抗原提示細胞）上に見出され、ＴＮＦスーパーファミリーに属する２型膜貫通型糖タンパク質受容体である４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても既知）に結合する。これは、活性化されたＴリンパ球上に発現する。４－１ＢＢリガンドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞を活性化するために使用することができる。いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（もしくは最終）ＴＩＬ増殖培地は、約０．１μｇ／ｍｌ～約５０μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約０．１μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約９μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約８μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約４μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約３μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約２μｇ／ｍｌ、約０．１μｇ／ｍｌ～約１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ～約１０μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約４μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ～約３μｇ／ｍｌ、または約１μｇ／ｍｌ～約２μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬを含み、及び／または、それが補充される。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、二次ＴＩＬ増殖培地及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、少なくとも約０．１μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．２μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．３μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．４μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．６μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．７μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．８μｇ／ｍｌ、少なくとも約０．９μｇ／ｍｌ、少なくとも約１μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．１μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．２μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．３μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．４μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．５μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．６μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．７μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．８μｇ／ｍｌ、少なくとも約１．９μｇ／ｍｌ、少なくとも約μｇ／ｍｌ、少なくとも約２μｇ／ｍｌ、少なくとも約３μｇ／ｍｌ、少なくとも約４μｇ／ｍｌ、少なくとも約５μｇ／ｍｌ、または少なくとも約１０μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬを含み、及び／または、それが補充される。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬを含み、及び／または、それが補充される。
いくつかの態様では、４－１ＢＢＬは、ＣＤ２７Ｌと共にＭＲＭに添加される。いくつかの態様では、４－１ＢＢＬは、ＣＤ２７Ｌと同時にＭＲＭに追加される。いくつかの態様では、４－１ＢＢＬは、ＣＤ２７Ｌと共にＭＲＭに順次追加される。いくつかの態様では、増殖プロセス（例えば、二次増殖及び／または最終増殖）中に使用されるＭＲＭは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、４－１ＢＢＬ、及びＣＤ２７Ｌを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む。いくつかの態様では、増殖プロセス（例えば、二次増殖及び／または最終増殖）中に使用されるＭＲＭは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭ、例えば、初期ＴＩＬ培養培地、二次ＴＩＬ増殖培地、及び／または三次（または最終）ＴＩＬ増殖培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、クリック培地、最小必須培地（ＭＥＭ）、基礎培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ １６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコブ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基礎培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、及びそれらの任意の組み合わせから選択される基礎培地から改変される。いくつかの態様では、基礎培地は、血清不含である。いくつかの態様では、基礎培地は、さらに、免疫細胞血清代替品（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基礎培地は、ＩＣＳＲが補充されたＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲが補充されたＡＩＭＶ、ＩＣＳＲが補充されたＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲが補充されたＲＰＭＩ、ＩＣＳＲが補充されたＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。特定の態様では、基礎培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全を含む。いくつかの態様では、好適な基礎培地としては、クリック培地、ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（登録商標）（ＣＴＳ（登録商標））培地、Ｓｔｅｍｌｉｎｅ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（登録商標）培地（ＣＴＳ（登録商標））、ＴｅｘＭＡＣＳ（登録商標）培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ－細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｉｓｃｏｖｅｓ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。
本開示は、基礎培地、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、カルシウム、及びグルコースを含むＭＲＭを含み、ＮａＣｌの濃度は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＫＣｌの濃度は、４０～９０ｍＭであり、カルシウムの濃度は、約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭであり、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２４ｍＭである。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、免疫細胞を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、ＴＩＬを含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約２００ｎｇ／ｍｌ～約４００ｎｇ／ｍｌ（例えば、約２００ｎｇ／ｍｌ、約３００ｎｇ／ｍｌ、または約４００ｎｇ／ｍｌ）である。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約２０ｎｇ／ｍｌ～約４０ｎｇ／ｍｌ（例えば、約２０ｎｇ／ｍｌ、約３０ｎｇ／ｍｌ、または約４０ｎｇ／ｍｌ）である。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、約２．５％の血清サプリメント（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン、２ｍＭのＬ－グルタマックス、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ、２０μｇ／ｍｌのＦＵＮＧＩＮ（商標）、ピルビン酸ナトリウム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、Ｏ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、キナーゼ阻害剤を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ＣＤ３アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは、抗ＣＤ３抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ３抗体は、ＯＫＴ－３を含む。
いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ＣＤ２８アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは、抗ＣＤ２８抗体である。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、さらに、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）を含む。
いくつかの態様では、本開示には、本明細書で開示のＭＲＭを含む細胞培養、本明細書で開示のＭＲＭを含む細胞バッグ、または本明細書で開示のＭＲＭを含むバイオリアクターを含む。
ＩＩ．Ｈ．細胞
本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されるように、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、５ｍＭを超える濃度のカリウムイオンを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されるように、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、４０ｍＭより高い濃度のカリウムイオンを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されるように、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されるように、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。
本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、本明細書で開示されるように、４０ｍＭを超える濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、本明細書で開示されるように、少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び９０ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬを培養する方法に関し、方法は、本明細書で開示されるように、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び１００ｍＭ未満～５０ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む培地中にＴＩＬを配置することを含む。
ＭＲＭに配置されているＴＩＬは、治療を必要とする対象から収集及び／または単離されているＴＩＬであり得る。いくつかの態様では、培地に配置されているＴＩＬは、本明細書で開示のＭＲＭに配置されている前に増殖されている。培地中に配置されているＴＩＬは、開始（初期、すなわち、患者試料、アフェレーシス試料、バフィーコート）ＴＩＬと呼ぶことができる。本明細書で開示の培地で、それらを培養することにより生じるＴＩＬは、得られる（培養された）ＴＩＬと呼ぶことができる。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、対象から得られた腫瘍試料中に存在する。従って、いくつかの態様では、方法は、腫瘍試料を本明細書で開示のＭＲＭに配置することを含む。標準的なＴＩＬ培養中に、腫瘍試料、例えば、腫瘍生検またはその断片を、初期ＴＩＬ培養培地に配置し、少なくとも約１４～１９日間培養する。いくつかの態様では、腫瘍試料、例えば、腫瘍生検は、初期ＴＩＬ培養のＭＲＭで、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間培養される。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、約１４日間継続する。いくつかの態様では、初期ＴＩＬ培養は、約２×１０６～約１０×１０６の細胞の細胞収量が生成されるまで十分な日数継続する。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ対ＣＤ４＋ＴＩＬの比）は、初期ＴＩＬ培養前のＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比と比較して、初期ＴＩＬ培養後に増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ対ＣＤ４＋ＴＩＬの比）は、基礎培地または増加した濃度のカリウムイオンを含まない培地（対照培地）での初期ＴＩＬ培養後のＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比と比較して、初期ＴＩＬ培養後に増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約４０倍増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約５０倍増加する。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、または少なくとも約５００％増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約２０％増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約４０％増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約６０％増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約８０％増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、少なくとも約１００％増加する。
いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約２０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約３０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約４０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約５０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約６０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約７０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約７５％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約８０％まで増加する。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの割合は、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約９０％まで増加する。
いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、約２倍～約５００倍、約２倍～約２５０倍、約２倍～約２００倍、約２倍～約１５０倍、約２倍～約１００倍、約２倍～約９０倍、約２倍～約８０倍、約２倍～約７０倍、約２倍～約６０倍、約２倍～約５０倍、約２倍～約４０倍、約２倍～約３０倍、約２倍～約２０倍、約２倍～約１０倍、約５倍～約２００倍、約５倍～約１５０倍、約５倍～約１００倍、約５倍～約９０倍、約５倍～約８０倍、約５倍～約７０倍、約５倍～約６０倍、約５倍～約５０倍、約５倍～約４０倍、約５倍～約３０倍、約５倍～約２０倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約１５０倍、約１０倍～約１００倍、約１０倍～約９０倍、約１０倍～約８０倍、約１０倍～約７０倍、約１０倍～約６０倍、約１０倍～約５０倍、約１０倍～約４０倍、約１０倍～約３０倍、または約１０倍～約２０倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約２倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約１２５倍、少なくとも約１５０倍、少なくとも約１７５倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約３５０倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約４５０倍、または少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法後に少なくとも約２倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法後に少なくとも約３倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法後に少なくとも約４倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法後に少なくとも約５倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、初期ＴＩＬ培養前の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法後に少なくとも約１０倍増加する。
いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地で）対照法を使用した増殖の後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、約２倍～約５００倍、約２倍～約２５０倍、約２倍～約２００倍、約２倍～約１５０倍、約２倍～約１００倍、約２倍～約９０倍、約２倍～約８０倍、約２倍～約７０倍、約２倍～約６０倍、約２倍～約５０倍、約２倍～約４０倍、約２倍～約３０倍、約２倍～約２０倍、約２倍～約１０倍、約５倍～約２００倍、約５倍～約１５０倍、約５倍～約１００倍、約５倍～約９０倍、約５倍～約８０倍、約５倍～約７０倍、約５倍～約６０倍、約５倍～約５０倍、約５倍～約４０倍、約５倍～約３０倍、約５倍～約２０倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約１５０倍、約１０倍～約１００倍、約１０倍～約９０倍、約１０倍～約８０倍、約１０倍～約７０倍、約１０倍～約６０倍、約１０倍～約５０倍、約１０倍～約４０倍、約１０倍～約３０倍、または約１０倍～約２０倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地で）対照法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約２倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約１２５倍、少なくとも約１５０倍、少なくとも約１７５倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約３５０倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約４５０倍、または少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地における）対照方法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約２倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地における）対照方法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約３倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地における）対照方法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約４倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地における）対照方法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約５倍増加する。いくつかの態様では、培養中の腫瘍反応性細胞数は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地における）対照方法を使用した増殖後の腫瘍反応性細胞数と比較して、本明細書で開示の培養方法の後に、少なくとも約１０倍増加する。
いくつかの態様では、腫瘍試料は、ヒト対象から単離される。いくつかの態様では、ヒト対象から単離された開始腫瘍試料、及びその中のＴＩＬは、同種異系細胞療法のために増殖される。いくつかの態様では、腫瘍試料は、ヒト対象から単離され、その中のＴＩＬは、自家細胞療法のために増殖される。
ＩＩ．Ｉ．ＴＩＬの単離、増殖、及び採取
ＴＩＬの単離、培養、及び／または増殖の任意の方法は、本明細書で開示の方法に従って、例えば、本明細書に記載の培養培地でＴＩＬを培養及び／または増殖させることにより、改変することができる。
ＩＩ．Ｉ．１．初期増殖
一般に、ＴＩＬは、ヒト対象から得られた腫瘍試料から得られる。腫瘍試料が、腫瘍及びＴＩＬの混合物を含む限り、対象から腫瘍生検を得る任意の方法を、本明細書で開示の方法に使用することができる。いくつかの態様では、腫瘍試料は、腫瘍切除で単離される。いくつかの態様では、腫瘍試料は、針生検で単離される（例えば、以下を参照のこと：米国特許出願公開第２０２０／０２７７５７３号（全体が参照により本明細書に組み込まれる））。いくつかの態様では、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む固形腫瘍を含む。他の態様では、腫瘍試料は、血液悪性腫瘍から得られた腫瘍などの液体腫瘍を含む。腫瘍は、限定されないが、乳房、膵臓、前立腺、結腸直腸、子宮頸部、肺、脳、腎臓、胃、肝臓（限定されないが、肝細胞癌を含む）ならびに皮膚（限定されないが、扁平上皮癌、基底細胞癌、及び黒色腫を含む）を含む、任意のがんタイプのものであってよい。いくつかの態様では、腫瘍は、黒色腫を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、結腸直腸癌を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、膵臓癌を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、頭頸部癌を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、子宮頸癌を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、卵巣癌を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料は、ＴＩＬの単離／増殖前に凍結保存される。いくつかの態様では、腫瘍試料は、新鮮なものであり、例えば、凍結保存されていない。いくつかの態様では、腫瘍試料は、ＭＲＭ培地に直接配置される。
いくつかの態様では、ドナー患者（例えば、腫瘍が得られる対象）は、処置未経験である（すなわち、患者は、腫瘍の処置のために以前の処置を受けていない）。いくつかの態様では、ドナー患者は、腫瘍の処置のために１つ以上の以前の処置を受けている。いくつかの態様では、対象は、少なくとも１つの以前の治療、少なくとも２つの以前の治療、少なくとも３つの以前の治療、または少なくとも４つの以前の治療を受けている。いくつかの態様では、対象は、１つ以上の以前の治療に対して再発性または難治性である。
いくつかの態様では、対象は、１つ以上の以前の抗がん療法を受けている。いくつかの態様では、以前の抗がん療法は、標準治療を含む。いくつかの態様では、以前の抗がん療法は、免疫療法を含む。いくつかの態様では、以前の治療法は、チェックポイント阻害剤を含む免疫療法を含む。いくつかの態様では、以前の治療法は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、またはそれらの任意の組み合わせを含む免疫療法を含む。
いくつかの態様では、対象は、腫瘍試料の切除前に、ＴＩＬの単離及び／または増殖を増強する１つ以上の治療法を投与される。いくつかの態様では、対象は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を投与される。キナーゼ阻害剤及び／またはＩＴＫ阻害剤の例は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１９２１７７５３号に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、キナーゼ阻害剤及び／またはＩＴＫ阻害剤は、初期増殖中及び／または二次増殖中に培養培地に添加される。いくつかの態様では、ＩＴＫ阻害剤は、アミノチアゾール系ＩＴＫ阻害剤、ベンゾイミダゾール系ＩＴＫ阻害剤、アミノピリミジン系ＩＴＫ阻害剤、３－アミノピリド－２－オン系ＩＴＫ阻害剤、インドリルンダゾール系ＩＴＫ阻害剤、ピラゾリルインドールベースの阻害剤、チエノピラゾール阻害剤、及びＡＴＰポケットのシステイン４４２を標的とするＩＴＫ阻害剤からなる群より選択される。いくつかの態様では、ＩＴＫ阻害剤は、イブルチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、ニロチニブ、エルロチニブ、ＢＭＳ５０９７４４、ＣＴＡ０５６、ＧＳＫ２２５０６６５Ａ、ＰＦ０６４６５４６９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、腫瘍試料は、より小さな断片に切断される。いくつかの態様では、より小さい断片の１つ以上は、少なくとも約１ｍｍ２、少なくとも約１．５ｍｍ２、少なくとも約２ｍｍ２、少なくとも約２．５ｍｍ２、少なくとも約３ｍｍ２、少なくとも約３．５ｍｍ２、少なくとも約４ｍｍ２、少なくとも約４．５ｍｍ２、少なくとも約５ｍｍ２、少なくとも約５．５ｍｍ２、少なくとも約６ｍｍ２、または少なくとも約６．５ｍｍ２である。いくつかの態様では、より小さい断片の１つ以上は、少なくとも約１ｍｍ３、少なくとも約１．５ｍｍ３、少なくとも約２ｍｍ３、少なくとも約２．５ｍｍ３、少なくとも約３ｍｍ３、少なくとも約３．５ｍｍ３、少なくとも約４ｍｍ３、少なくとも約４．５ｍｍ３、少なくとも約５ｍｍ３、少なくとも約５．５ｍｍ３、少なくとも約６ｍｍ３、少なくとも約６．５ｍｍ３、少なくとも約７ｍｍ３、少なくとも約７．５ｍｍ３、少なくとも約８ｍｍ３、少なくとも約８．５ｍｍ３、少なくとも約９ｍｍ３、少なくとも約９．５ｍｍ３、または少なくとも約１０ｍｍ３である。いくつかの態様では、腫瘍試料は、酵素培地（例えば、グルタマート（例えば、約２ｍＭ）、ゲンタマイシン（例えば、約１０ｍｃｇ／ｍＬ）、ＤＮａｓｅ（例えば、約３０単位／ｍＬ）、及びコラゲナーゼ（例えば、約１．０ｍｇ／ｍＬ）が補充されたＲＰＭＩ １６４０緩衝液またはＭＲＭ）で腫瘍試料を培養することより、酵素消化を受ける。いくつかの態様では、腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に配置すること、及び／または腫瘍を機械的に（例えば、約１分間）解離（すなわち、分解）させ、続いて、５％のＣＯ２中、３７℃で（例えば、３０分間）インキュベートし、続いて、小さな組織片だけが存在するようになるまで、上述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返す。このプロセスの最後に、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含有する場合、これらの細胞を除去するために、ＦＩＣＯＬＬ分岐親水性多糖を使用した密度勾配分離を実施することができる。機械的及び／または酵素的解離は、任意の培地で実施することができる。いくつかの態様では、機械的及び／または酵素的解離は、本明細書で開示のＭＲＭ培地で実施される。
いくつかの態様では、機械的解離は、切除された腫瘍に物理的圧力を印加することを含む。いくつかの態様では、機械的解離は、反復の物理的圧力を含む。いくつかの態様では、反復の物理的圧力は、毎分少なくとも約５０回、少なくとも約６０回、少なくとも約７０回、少なくとも約８０回、少なくとも約９０回、少なくとも約１００回、少なくとも約１１０回、少なくとも約１２０回、少なくとも約１３０回、少なくとも約１４０回、少なくとも約１５０回、少なくとも約１６０回、少なくとも約１７０回、少なくとも約１８０回、少なくとも約１９０回、少なくとも約２００回、少なくとも約２１０回、少なくとも約２２０回、少なくとも約２３０回、少なくとも約２４０回、少なくとも約２５０回、少なくとも約２６０回、少なくとも約２７０回、少なくとも約２８０回、少なくとも約２９０回、少なくとも約３００回、少なくとも約３１０回、少なくとも約３２０回、少なくとも約３３０回、少なくとも約３４０回、少なくとも約３５０回、または少なくとも約３６０回印加される。いくつかの態様では、反復の物理的圧力は、毎分少なくとも約１２０～２６０回印加される。いくつかの態様では、反復の物理的圧力は、最大約６Ｎ／ｃｍ２、最大約５．５Ｎ／ｃｍ２、最大約５．０Ｎ／ｃｍ２、最大約４．５Ｎ／ｃｍ２、最大約４．０Ｎ／ｃｍ２、最大約３．５Ｎ／ｃｍ２、最大約３．０Ｎ／ｃｍ２が印加される。いくつかの態様では、機械的解離は、約９０分間以下、約８５分間以下、約８０分間以下、約７５分間以下、約７０分間以下、約６５分間以下、約６０分間以下、約５５分間以下、または約５０分間以下、進行する。いくつかの態様では、機械的解離は、室温で適用される。いくつかの態様では、機械的解離は、室温未満で適用される。いくつかの態様では、機械的解離は、国際公開第２０２１／１２３８３２号に開示される方法に従って及び／またはそれに開示される装置を使用して適用され、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、腫瘍試料（すなわち、切除された腫瘍組織試料もしくは解離された腫瘍試料）またはその断片は、培養培地、例えば、本明細書で開示の培養培地、に配置され、培養培地は、さらに、ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約４０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、少なくとも約４５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、少なくとも約５５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、少なくとも約６０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２、または少なくとも約６５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約６００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。
他の態様では、腫瘍試料またはその断片は、培養培地、例えば、本明細書に開示の培養培地に配置され、培養培地は、さらに、ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。
個々の腫瘍断片は、単一の培養チャンバー、例えば、ウェル内で、一緒に培養することができ、または個々の腫瘍断片は、別々の培養チャンバー、例えば、ウェル内で培養することができる。培養腫瘍試料からのＴＩＬ回避を促進するための標準培養培地は、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ／Ｔｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．）、１×Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．）、５０μｍの２－メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．）、２０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．）、及び１ｍＭのピルバート（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．）が補充されたＲＰＭＩ １６４０を含む。いくつかの態様では、標準培養培地は、本開示に従って改変される。いくつかの態様では、標準培養培地は、血清サプリメントが補充されたＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｌ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、Ｌ－グルタマックス（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ）、ｆｕｎｇｉｎ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、Ｏ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、標準培養培地は、約２．５％の血清サプリメントが補充されたＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、約２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、約２ｍＭのＬ－グルタマックス（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ）、約２０μｇ／ｍｌのｆｕｎｇｉｎ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、約ＩＬ－２（３００ｎｇ／ｍＬ）、約ＩＬ－２１（３０ｎｇ／ｍｌ）、及び約１ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ）を含む。
いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、または少なくとも約３週間培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、少なくとも約２週間培養される。本明細書で使用される場合、「腫瘍試料」は、腫瘍組織及び／または分解腫瘍組織（すなわち、腫瘍組織の機械的及び／または化学的分解から生じる細胞懸濁液）を指す。いくつかの態様では、腫瘍試料または断片は、初期培養で約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、または約１４日間培養される。
いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料または断片を腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）アゴニストと接触させることを含む。いくつかの態様では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＨＶＥＭアゴニスト、ＣＤ９５アゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、米国特許出願公開第２０２０／０１２１７１９Ａ１号に開示された任意のＴＮＦＲＳＦアゴニストであり、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、約１０～５００ｎｇ／ｍｌの４－１ＢＢリガンドと接触させることを含む。いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、約５０ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ、約７０ｎｇ／ｍｌ、約７５ｎｇ／ｍｌ、約８０ｎｇ／ｍｌ、約９０ｎｇ／ｍｌ、約１００ｎｇ／ｍｌ、約１２５ｎｇ／ｍｌ、約１５０ｎｇ／ｍｌ、約１７５ｎｇ／ｍｌ、約２００ｎｇ／ｍｌ、約２５０ｎｇ／ｍｌ、約３００ｎｇ／ｍｌ、約３５０ｎｇ／ｍｌ、約４００ｎｇ／ｍｌ、約４５０ｎｇ／ｍｌ、約５００ｎｇ／ｍｌ、約５５０ｎｇ／ｍｌ、約６００ｎｇ／ｍｌ、約６５０ｎｇ／ｍｌ、約７００ｎｇ／ｍｌ、約７５０ｎｇ／ｍｌ、約８００ｎｇ／ｍｌ、約８５０ｎｇ／ｍｌ、約９００ｎｇ／ｍｌ、約９５０ｎｇ／ｍｌ、約１０００ｎｇ／ｍｌ、または約１１００ｎｇ／ｍｌの４－１ＢＢリガンドを接触させることを含む。いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、約１００ｎｇ／ｍｌの４－１ＢＢリガンドと接触させることを含む。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約３日目、初期培養の約４日目、初期培養の約５日目、初期培養の約６日目、または初期培養の約７日目に、４－１ＢＢリガンドと接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約５日目に、４－１ＢＢリガンドと接触させる。
いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）と接触させることを含む。いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）と接触させること（例えば、約１：５０、約１：１００、約１：１５０、約１：２００、約１：２５０、約１：３００、約１：３５０、または約１：４００）を含む。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約４日目、初期培養の約５日目、初期培養の約６日目、または初期培養の約７日目に、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約５日目に、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）と接触させる。いくつかの態様では、初期培養は、さらに、腫瘍試料またはその断片を、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させることを含む。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約３日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約４日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約５日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約６日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約７日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片を、初期培養の約８日目に、４－１ＢＢリガンド及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の両方と接触させる。
いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約１×１０５～少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０５～少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０６～少なくとも約１×１０８、少なくとも約２×１０６～少なくとも約１×１０８、少なくとも約３×１０６～少なくとも約１×１０８、少なくとも約４×１０６～少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０６～少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０５～少なくとも約５×１０７、少なくとも約５×１０５～少なくとも約１０×１０６、少なくとも約１×１０６～少なくとも約１０×１０６、少なくとも約２×１０６～少なくとも約１０×１０６、少なくとも約３×１０６～少なくとも約１０×１０６、少なくとも約４×１０６～少なくとも約１０×１０６、または少なくとも約５×１０６～少なくとも約１０×１０６の細胞／培養断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約２×１０６～１０×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。
いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約１×１０５、少なくとも約２×１０５、少なくとも約３×１０５、少なくとも約４×１０５、少なくとも約５×１０５、少なくとも約６×１０５、少なくとも約７×１０５、少なくとも約８×１０５、少なくとも約９×１０５、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１０×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約２×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約３×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約４×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約５×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約６×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約７×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約８×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約９×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、腫瘍試料またはその断片は、初期培養における細胞収量が少なくとも約１０×１０６の細胞／断片に達するまで、初期培養で培養される。いくつかの態様では、初期培養後に、細胞（例えば、ＴＩＬ）を濾過器に通す。いくつかの態様では、初期培養後に、細胞（例えば、ＴＩＬ）を、少なくとも約１０μｍ、少なくとも約１５μｍ、少なくとも約２０μｍ、少なくとも約２５μｍ、少なくとも約３０μｍ、少なくとも約３５μｍ、少なくとも約４０μｍ、少なくとも約４５μｍ、少なくとも約５０μｍの濾過器に通す。いくつかの態様では、初期培養後に、細胞（例えば、ＴＩＬ）を、約４０μｍの濾過器に通す。
いくつかの態様では、初期増殖ステップは、１つ以上のガス透過性フラスコ（例えば、ＧＲＥＸフラスコ）内で実施される。いくつかの態様では、初期増殖ステップは、静置ＧＲＥＸで実施される。いくつかの態様では、初期増殖は、撹拌タンク内で実施される。いくつかの態様では、初期増殖ステップは、バイオリアクター内で実施される。いくつかの態様では、初期増殖は、（例えば、ＧＲＥＸ閉鎖系を使用して）閉鎖系内で実施される。
ＩＩ．Ｉ．２．二次増殖
いくつかの態様では、ＴＩＬを、二次増殖にかける。いくつかの態様では、二次増殖ステップは、１つ以上のガス透過性フラスコ（例えば、ＧＲＥＸフラスコ）内で実施される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、閉鎖系を開放することなく二次増殖に移行する。いくつかの態様では、第１の増殖からのＴＩＬは、ＴＩＬを二次増殖に進める前に、腫瘍特異的細胞溶解活性についてスクリーニングされる。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖に進む前に、１つ以上のバイオマーカーの発現についてスクリーニングされる。いくつかの態様では、バイオマーカーは、より多くのナイーブＴＩＬにより通常発現される１つ以上の遺伝子、例えば、ＣＤ８＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ３＋、ＣＤ９５＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせの発現を含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖に進む前に、ＰＤ－１の発現についてスクリーニングされる。いくつかの態様では、第１の増殖からのＴＩＬは、ＴＩＬを二次増殖に進める前にスクリーニングされない。いくつかの態様では、初期増殖で得られた全てのＴＩＬを、二次増殖にかける。いくつかの態様では、一次増殖からのＴＩＬは、二次増殖に進む前にプールされる。
いくつかの態様では、急速増殖プロトコール（ＲＥＰ）を使用して、ＴＩＬを二次増殖にかける。例えば、以下を参照のこと：Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９８：８５０－５４（２００２）；Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：２３４６－５７（２００５）；Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６：５２３３－３９（２００８）；Ｒｉｄｄｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：２３８－４１（１９９２）；及びＤｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２６：３３２－４２（２００３）（それぞれ、全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＩＬは、フィーダーリンパ球及びインターロイキン－２（ＩＬ－２）、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせの存在下で、非特異的Ｔ細胞受容体刺激を使用して急速に増殖する。特定の態様では、ＴＩＬは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の存在下で、急速に増殖する。いくつかの態様では、急速増殖中の培地中のＩＬ－２の濃度は、初期培養中の培地中のＩＬ－２の濃度よりも低い。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、３００ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌ、約５５ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ、約６５ｎｇ／ｍｌ、約７０ｎｇ／ｍｌ、約７３．６ｎｇ／ｍｌ、約７５ｎｇ／ｍｌ、約８０ｎｇ／ｍｌ、約８５ｎｇ／ｍｌ、約９０ｎｇ／ｍｌ、約９５ｎｇ／ｍｌ、約１００ｎｇ／ｍｌ、約１０５ｎｇ／ｍｌ、約１１０ｎｇ／ｍｌ、約１１５ｎｇ／ｍｌ、約１２０ｎｇ／ｍｌ、約１２５ｎｇ／ｍｌ、約１３０ｎｇ／ｍｌ、約１３５ｎｇ／ｍｌ、約１４０ｎｇ／ｍｌ、約１４５ｎｇ／ｍｌ、約１５０ｎｇ／ｍｌ、約１７５ｎｇ／ｍｌ、約２００ｎｇ／ｍｌ、約２２５ｎｇ／ｍｌ、約２５０ｎｇ／ｍｌ、または約２７５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約６０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約６５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７３．６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約８０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約８５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約９０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約９５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２の濃度は、約１００ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの態様では、急速増殖中の培地中のＩＬ－２１の濃度は、初期培養中の培地中のＩＬ－２１の濃度よりも低い。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、３０ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ、約２ｎｇ／ｍｌ、約３ｎｇ／ｍｌ、約４ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ、約６ｎｇ／ｍｌ、約７ｎｇ／ｍｌ、約８ｎｇ／ｍｌ、約９ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ、約１１ｎｇ／ｍｌ、約１２ｎｇ／ｍｌ、約１３ｎｇ／ｍｌ、約１４ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ、約１６ｎｇ／ｍｌ、約１７ｎｇ／ｍｌ、約１８ｎｇ／ｍｌ、約１９ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ、約２１ｎｇ／ｍｌ、約２２ｎｇ／ｍｌ、約２３ｎｇ／ｍｌ、約２４ｎｇ／ｍｌ、約２５ｎｇ／ｍｌ、約２６ｎｇ／ｍｌ、約２７ｎｇ／ｍｌ、約２８ｎｇ／ｍｌ、または約２９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約７ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約８ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１１ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１２ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１３ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１４ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１５ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの態様では、急速増殖中の培地中のＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍｌ、約０．２ｎｇ／ｍｌ、約０．３ｎｇ／ｍｌ、約０．４ｎｇ／ｍｌ、約０．５ｎｇ／ｍｌ、約０．６ｎｇ／ｍｌ、約０．７ｎｇ／ｍｌ、約０．８ｎｇ／ｍｌ、約０．９ｎｇ／ｍｌ、約１．０ｎｇ／ｍｌ、約１．１ｎｇ／ｍｌ、約１．２ｎｇ／ｍｌ、約１．３ｎｇ／ｍｌ、約１．４ｎｇ／ｍｌ、約１．５ｎｇ／ｍｌ、約１．６ｎｇ／ｍｌ、約１．７ｎｇ／ｍｌ、約１．８ｎｇ／ｍｌ、約１．９ｎｇ／ｍｌ、約２．０ｎｇ／ｍｌ、約２．２５ｎｇ／ｍｌ、約２．５ｎｇ／ｍｌ、約２．７５ｎｇ／ｍｌ、約３．０ｎｇ／ｍｌ、約３．５ｎｇ／ｍｌ、約４．０ｎｇ／ｍｌ、約４．５ｎｇ／ｍｌ、または約５．０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．２ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．３ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．４ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．７ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．８ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、急速増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍｌである。
非特異的Ｔ細胞受容体刺激には、例えば、ＯＫＴ３（例えば、約３０ｎｇ／ｍｌ）、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標）、Ｒａｒｉｔａｎ， Ｎ．Ｊ．またはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能）が含まれ得る。いくつかの態様では、ＴＩＬは、Ｔ細胞成長因子、例えば、約２００～４００ＩＵ／ｍｌのＴ細胞成長因子、例えば、３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５の存在下で、１つ以上の抗原（ベクター、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチド、例えば、およそ０．３μＭのＭＡＲＴ－１：２６－３５（２７Ｌ）、またはｇｐ１００：２０９－２１７（２１０Ｍ）から任意に発現され得る、エピトープ（複数可）などのその抗原部分、またはがんの細胞を含む）でｉｎ ｖｉｔｒｏで末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を刺激することにより、急速に増殖する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を使用する刺激により増殖する。いくつかの態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導ＴＩＬは、ＨＬＡ－Ａ２発現抗原提示細胞上にパルスされたがんの同じ抗原（複数可）を用いる刺激により、急速に増殖する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、照射された自己リンパ球、または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２で刺激することができる。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ならびに任意に４－１ＢＢＬ及び／またはＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、４－１ＢＢＬ、及びＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。
いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、ＴＩＬ増殖前、増殖中、または増殖後に遺伝子改変される。ＴＩＬの遺伝子改変は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して達成することができる。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼ（ＣＲＩＳＰＲ；例えば、以下を参照のこと：ＵＳ２０１７０６７０２１Ａ１（全体が参照により本明細書に組み込まれる））、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ、部位特異的変異導入、またはそれらの任意の組み合わせを使用して改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、ヒトサイトカイン誘導性ＳＨ２含有タンパク質（ＣＩＳＨ；例えば、以下を参照のこと：ＵＳ１０４０６１７７Ｂ２（全体が参照により本明細書に組み込まれる））の発現を破壊または除去するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、ＡＡＶを使用して改変され、例えば、ＴＩＬの１つ以上は、ＡＡＶを含む。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、レンチウイルスまたはレトロウイルスを使用して改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、外因性改変または改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、ＣＤ８６を発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、ＯＸ４０Ｌを発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、４－１ＢＢＬを発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、１つ以上のＴＩＬは、抗ＰＤ１抗体を発現するように遺伝子改変される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）アゴニストを含む培養培地で増殖する。任意のＴＮＦＲＳＦアゴニストを、本明細書で開示の方法に使用することができる。ＴＮＦＲＳＦアゴニストの非限定例は、例えば、ＵＳ２０２００１２１７１９Ａ１に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、初期培養後に添加される。いくつかの態様では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、二次及び／または最終増殖中に添加される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、４－１ＢＢアゴニストを含む培養培地で増殖する。任意の４－１ＢＢアゴニストを、本明細書で開示の方法に使用することができる。いくつかの態様では、４－１ＢＢアゴニストは、４－１ＢＢ抗体を含む。４－１ＢＢアゴニストの非限定例は、例えば、ＵＳ２０２０００３２２０９Ａ１に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、４－１ＢＢアゴニストは、初期培養後に添加される。いくつかの態様では、４－１ＢＢアゴニストは、二次または最終増殖中に添加される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ならびに任意に４－１ＢＢＬ及び／またはＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、４－１ＢＢＬ、及びＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含む培地で細胞を培養することにより、二次増殖中に刺激される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストを含む培養培地で増殖する。任意のアデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストを、本明細書で開示の方法に使用することができる。アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストの非限定例は、例えば、ＵＳ２０２１０１３７９３０Ａ１に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストは、ビパデナント、ＣＰＩ－４４４（シフォラデナント）、ＳＣＨ５８２６１、ＺＭ２４１３８５、ＳＣＨ４２０８１４、ＳＹＮ１１５、８－ＣＳＣ、ＫＷ－６００２、Ａ２Ａ受容体アンタゴニスト１、ＡＤＺ４６３５、ＳＴ４２０６、ＫＦ２１２１３、ＳＣＨ４１２３４８、及び７ＭＭＧ－４９、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグ、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様では、アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストは、初期培養中に添加される。いくつかの態様では、アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストは、二次及び／または最終増殖中に添加される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、さらに、ＡＫＴ経路阻害剤（ＡＫＴｉ）を含む培養培地で増殖される。任意のＡＫＴｉを、本明細書で開示の方法で使用することができる。本開示で使用することができるＡＫＴｉの非限定例は、例えば、ＷＯ２０２００９６９２７に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、ＡＫＴｉは、アフレセルチブ、ウプロセルチブ、イパタセルチブ、ＡＴ７８６７、ＡＴ１３１４８、及びそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、またはプロドラッグからなる群より選択される。いくつかの態様では、ＡＫＴｉは、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ＡＺＤ８０５５、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグである。いくつかの態様では、ＡＫＴｉは、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、ＬＹ２９４００２、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグである。いくつかの態様では、ＡＫＴｉは、初期培養中に添加される。いくつかの態様では、ＡＫＴｉは、二次及び／または最終増殖中に添加される。
いくつかの態様では、増殖細胞は、増殖ＴＩＬを１つ以上の抗原提示細胞と接触させることにより再活性化または刺激される。任意の抗原提示細胞を、本明細書で開示の方法で使用することができる。いくつかの態様では、抗原提示細胞は、遺伝子改変細胞である。いくつかの態様では、抗原提示細胞は、細胞表面に腫瘍抗原またはその断片を含む。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬを、細胞表面上に複数の腫瘍抗原またはその断片を含む抗原提示細胞と接触させる。
いくつかの態様では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、遺伝子改変される。いくつかの態様では、ＡＰＣは、１つ以上の導入遺伝子、例えば、抗原または刺激シグナルの調節可能な発現のために遺伝子改変される。いくつかの態様では、ＡＰＣは、ＷＯ２０２０／０８６７４２に開示された方法に従って遺伝子操作され、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、ＡＰＣは、１つ以上の刺激分子を発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、ＡＰＣは、ＣＤ８６、ＯＣ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、またはそれらの任意の組み合わせを発現するように遺伝子改変される。いくつかの態様では、ＡＰＣは、米国特許第ＵＳ１０，４１５，０１５号に開示のＡＰＣであり、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７～少なくとも約５０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約４０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約３０×１０７、少なくとも約４×１０７～少なくとも約２５×１０７、少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約１×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約２×１０７～少なくとも約２０×１０７、少なくとも約３×１０７～少なくとも約２０×１０７、または少なくとも約４×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７～少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約６×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約７×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約８×１０７の細胞に達するまで、二次増殖で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約９×１０７の細胞に達するまで、二次増殖で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約１５×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、二次増殖における細胞収量が少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、二次ＴＩＬ培地で培養される。
いくつかの態様では、ＴＩＬを、最終増殖にかける。いくつかの態様では、ＴＩＬは、閉鎖系（例えば、ＧＲＥＸ閉鎖系）を開くことなく、二次増殖から最終増殖に移行する。いくつかの態様では、最終増殖ステップは、１つ以上のガス透過性フラスコ（例えば、ＧＲＥＸフラスコ）内で実施される。いくつかの態様では、二次増殖は、ＲＥＰプロトコールの第１段階（すなわち、細胞が分裂されるまでのＲＥＰプロトコール）に対応し、最終増殖は、ＲＥＰプロトコールの第２段階（すなわち、細胞が分裂された後のＲＥＰプロトコール）に対応する。そのようなものであるから、いくつかの態様では、二次増殖は、約３～７日（例えば、約５日、約６日、または約７）の期間を有し、最終増殖は、約３～７日（例えば、約５日、約６日、または約７）の期間を有する。
いくつかの態様では、最終増殖中の培地は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせを含む。特定の態様では、最終増殖中の培地は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、最終増殖中の培地中のＩＬ－２の濃度は、初期培養中の培地中のＩＬ－２の濃度よりも低い。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、３００ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌ、約５５ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ、約６５ｎｇ／ｍｌ、約７０ｎｇ／ｍｌ、約７３．６ｎｇ／ｍｌ、約７５ｎｇ／ｍｌ、約８０ｎｇ／ｍｌ、約８５ｎｇ／ｍｌ、約９０ｎｇ／ｍｌ、約９５ｎｇ／ｍｌ、約１００ｎｇ／ｍｌ、約１０５ｎｇ／ｍｌ、約１１０ｎｇ／ｍｌ、約１１５ｎｇ／ｍｌ、約１２０ｎｇ／ｍｌ、約１２５ｎｇ／ｍｌ、約１３０ｎｇ／ｍｌ、約１３５ｎｇ／ｍｌ、約１４０ｎｇ／ｍｌ、約１４５ｎｇ／ｍｌ、約１５０ｎｇ／ｍｌ、約１７５ｎｇ／ｍｌ、約２００ｎｇ／ｍｌ、約２２５ｎｇ／ｍｌ、約２５０ｎｇ／ｍｌ、または約２７５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約５５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約６０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約６５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７３．６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約７５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約８０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約８５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約９０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約９５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２の濃度は、約１００ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの態様では、最終増殖中の培地中のＩＬ－２１の濃度は、初期培養中の培地中のＩＬ－２１の濃度よりも低い。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、３０ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ、約２ｎｇ／ｍｌ、約３ｎｇ／ｍｌ、約４ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ、約６ｎｇ／ｍｌ、約７ｎｇ／ｍｌ、約８ｎｇ／ｍｌ、約９ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ、約１１ｎｇ／ｍｌ、約１２ｎｇ／ｍｌ、約１３ｎｇ／ｍｌ、約１４ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ、約１６ｎｇ／ｍｌ、約１７ｎｇ／ｍｌ、約１８ｎｇ／ｍｌ、約１９ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ、約２１ｎｇ／ｍｌ、約２２ｎｇ／ｍｌ、約２３ｎｇ／ｍｌ、約２４ｎｇ／ｍｌ、約２５ｎｇ／ｍｌ、約２６ｎｇ／ｍｌ、約２７ｎｇ／ｍｌ、約２８ｎｇ／ｍｌ、または約２９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約７ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約８ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１１ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１２ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１３ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１４ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－２１の濃度は、約１５ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの態様では、最終増殖中の培地中のＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍｌ、約０．２ｎｇ／ｍｌ、約０．３ｎｇ／ｍｌ、約０．４ｎｇ／ｍｌ、約０．５ｎｇ／ｍｌ、約０．６ｎｇ／ｍｌ、約０．７ｎｇ／ｍｌ、約０．８ｎｇ／ｍｌ、約０．９ｎｇ／ｍｌ、約１．０ｎｇ／ｍｌ、約１．１ｎｇ／ｍｌ、約１．２ｎｇ／ｍｌ、約１．３ｎｇ／ｍｌ、約１．４ｎｇ／ｍｌ、約１．５ｎｇ／ｍｌ、約１．６ｎｇ／ｍｌ、約１．７ｎｇ／ｍｌ、約１．８ｎｇ／ｍｌ、約１．９ｎｇ／ｍｌ、約２．０ｎｇ／ｍｌ、約２．２５ｎｇ／ｍｌ、約２．５ｎｇ／ｍｌ、約２．７５ｎｇ／ｍｌ、約３．０ｎｇ／ｍｌ、約３．５ｎｇ／ｍｌ、約４．０ｎｇ／ｍｌ、約４．５ｎｇ／ｍｌ、または約５．０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．１ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．２ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．３ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．４ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．５ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．６ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．７ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．８ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約０．９ｎｇ／ｍｌである。いくつかの態様では、最終増殖中のＩＬ－１５の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの態様では、最終的な増殖は、刺激を含む。いくつかの態様では、刺激は、二次増殖中に使用される刺激と同じである。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７Ｌ、またはそれらの任意の組み合わせを含むＭＲＭで細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ならびに任意に４－１ＢＢＬ及び／またはＣＤ２７Ｌを含むＭＲＭで細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、少なくとも約１μｇ／ｍｌの４－１ＢＢＬ、及び少なくとも約５μｇ／ｍｌのＣＤ２７Ｌを含むＭＲＭで細胞を培養することにより、最終増殖中に刺激される。
いくつかの態様では、最終増殖ステップは、静置ＧＲＥＸ中で実施される。いくつかの態様では、最終増殖は、撹拌タンク内で実施される。いくつかの態様では、最終増殖ステップは、バイオリアクター内で実施される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約９０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約８０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約７０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約６０×１０９、少なくとも約４０×１０９～少なくとも約５０×１０９、少なくとも約１０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約２０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約３０×１０９～少なくとも約１００×１０９、少なくとも約３０×１０９～少なくとも約５０×１０９、または少なくとも約３５×１０９～少なくとも約４５×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９～少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９、少なくとも約４５×１０９、少なくとも約５０×１０９、少なくとも約５５×１０９、少なくとも約６０×１０９、少なくとも約６５×１０９、少なくとも約７０×１０９、少なくとも約７５×１０９、少なくとも約８０×１０９、少なくとも約８５×１０９、少なくとも約９０×１０９、少なくとも約９５×１０９、または少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約４０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約５０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約６０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約７０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約８０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約９０×１０９の細胞に達するまで、継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞収量が少なくとも約１００×１０９の細胞に達するまで、継続される。
いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地中の細胞が生じるまで、少なくとも約７日～少なくとも約２１日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約７日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約８日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約９日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１０日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１１日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１２日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１３日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１４日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１５日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１６日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１７日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１８日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約１９日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約２０日間継続される。いくつかの態様では、最終増殖は、最終ＴＩＬ培地で細胞が生じるまで、少なくとも約２１日間継続される。
いくつかの態様では、二次増殖及び最終増殖は、単一の二次増殖にマージされる。いくつかの態様では、単一の二次増殖は、二次増殖及び最終増殖の全ての態様を含む。いくつかの態様では、単一の二次増殖は、閉鎖系（例えば、ＧＲＥＸ閉鎖系）内で行われ、閉鎖系は、単一の二次増殖の期間に開放されない。いくつかの態様では、細胞は、細胞が高コンフルエントに達すると、単一の二次増殖中に分裂される。
いくつかの態様では、増殖プロセス（例えば、（ｉ）初期増殖プロセス、二次増殖プロセス、及び最終増殖プロセス、または、（ｉｉ）初期増殖プロセス及び単一の二次増殖プロセス）の全期間は、２２日以下である。より短い増殖プロセスを使用して若いＴＩＬを生成すると、得られるＴＩＬ組成物に様々な利点が与えられる。そのようなものであるから、本明細書で開示の培養条件及び方法は、若いＴＩＬについて既に同定されたものに、さらなる利益、例えば、幹様特性の増加、クローン多様性の増殖、細胞溶解活性の改善、及び／またはＣＤ８＋細胞増殖の増加を与える。
ＩＩ．Ｉ．３．採取及び冷凍保存
いくつかの態様では、増殖ＴＩＬは、採取される。ＴＩＬは、遠心分離などの任意の方法を使用して採取することができる。いくつかの態様では、ＴＩＬは、自動システムを使用して採取される。セルハーベスター及び／または細胞処理システムは、様々な供給元から市販されており、任意の細胞ベースのハーベスターを、本明細書で開示の方法で使用することができる。いくつかの態様では、セルハーベスター及び／または細胞処理システムは、膜ベースのセルハーベスターである。いくつかの態様では、細胞採取は、細胞処理システム、例えば、ＬＯＶＯシステム（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ）を使用して実施される。いくつかの態様では、セルハーベスター及び／または細胞処理システムは、密閉無菌系で、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び／または他の細胞処理ステップを実施し得る。
いくつかの態様では、採取は、閉鎖系バイオリアクターから実施される。いくつかの態様では、ＴＩＬ増殖のために、閉鎖系が用いられる。いくつかの態様では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの態様では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。開放系及び閉鎖系においてｅｘ ｖｉｖｏでＴＩＬを増殖する方法の例は、例えば、米国特許第１０，１６６，２５７号に見出すことができ、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、増殖ＴＩＬは、凍結保存される。ＴＩＬは、任意の方法を使用して凍結保存することができる。ＴＩＬを含む哺乳類細胞を凍結保存する様々な方法は、例えば、（ｉ）哺乳類細胞の凍結保存のための一般プロトコール、ＵＮＣ（２００７年）（ｕｎｃｌｉｎｅｂｅｒｇｅｒ．ｏｒｇ／ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ／ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ／ｇｅｎｅｒａｌ－ｐｒｏｔｏｃｏｌ－ｆｏｒ－ｔｈｅ－ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ－ｏｆ－ｍａｍｍａｌｉａｎ－ｃｅｌｌｓ／で入手可能）；及び、（ｉｉ）Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｏｓｔ－ｔｈａｗ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ－ｌｉｋｅ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ ２００９－６－６（ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇ／ｐａｐｅｒｓ／１９４９９４０２で入手可能）に記載されており、これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、以下に従って培養される：
（１）腫瘍試料を、対象から単離し、腫瘍を、断片に切断し、及び／または機械的もしくは化学的に分解させる。
（２）次に、得られる腫瘍試料またはその断片を、さらに３００ｎｇ／ｍＬまたは６０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２１が補充された本明細書で開示の代謝再プログラミング培地を含む初期培養で培養する。
（３）任意に、初期培養開始後５日目に、ＴＩＬを、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（１：２００）及び１００ｎｇ／ｍＬの４－１ＢＢリガンドと接触させ、次に、さらに５～９日間、または約１０×１０６～約２００×１０６の細胞に達するまで、ＴＩＬを培養する。次に、ＴＩＬをプールする。
（４）次に、ステップ３からの少なくとも０．５×１０６のＴＩＬを、１００～２００倍過剰の照射ＰＢＭＣフィーダー細胞と混合し、３０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ３）、７５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１、及び０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５が補充された培地（例えば、本明細書で開示の代謝再プログラミング培地）中で培養する。本明細書に記載されるように、治療有効量のＴＩＬが得られるまで、この二次（ＲＥＰ）培養を継続する。
ＩＩＩ．開示内容の組成物
本開示のいくつかの態様は、ＣＤ８＋ＴＩＬが豊富であるＴＩＬ集団を含む組成物に関する。いくつかの態様では、組成物は、本明細書で開示の任意の方法に従って培養されたＴＩＬ集団を含む。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約２０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約３０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約４０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約６０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約７０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約８０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９０％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９５％は、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
本開示のいくつかの態様は、増殖ＴＩＬ集団を含む組成物に関し、増殖ＴＩＬ集団は、（例えば、約５ｍＭ未満の濃度のカリウムイオンを含む培地で培養された）対照方法を使用して増殖させたＴＩＬ集団のクローン多様性と比較して、クローン多様性が増加している。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性と同じクローン多様性を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９５％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約９０％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約８５％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約８０％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約７５％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約７０％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約６０％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約５０％であるクローン多様性を有する。特定の態様では、増殖ＴＩＬ集団は、腫瘍試料中のＴＩＬのクローン多様性の少なくとも約４０％であるクローン多様性を有する。
いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、少ない約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２７５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１９未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１８未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１７未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１６未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１４未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１３未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１２未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．１未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．０９未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．０８未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．０７未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．０６未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団は、約０．０５未満のクローン多様性スコア（シンプソンのクローン性で測定）を有する。
いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、（例えば、４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、４ｍＭのカリウムイオンを含む培地で）対照方法を使用して増殖または培養させた腫瘍反応性ＴＩＬクローンの選択的増殖と比較して、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に、約２倍～約５００倍、約２倍～約２５０倍、約２倍～約２００倍、約２倍～約１５０倍、約２倍～約１００倍、約２倍～約９０倍、約２倍～約８０倍、約２倍～約７０倍、約２倍～約６０倍、約２倍～約５０倍、約２倍～約４０倍、約２倍～約３０倍、約２倍～約２０倍、約２倍～約１０倍、約５倍～約２００倍、約５倍～約１５０倍、約５倍～約１００倍、約５倍～約９０倍、約５倍～約８０倍、約５倍～約７０倍、約５倍～約６０倍、約５倍～約５０倍、約５倍～約４０倍、約５倍～約３０倍、約５倍～約２０倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約１５０倍、約１０倍～約１００倍、約１０倍～約９０倍、約１０倍～約８０倍、約１０倍～約７０倍、約１０倍～約６０倍、約１０倍～約５０倍、約１０倍～約４０倍、約１０倍～約３０倍、または約１０倍～約２０倍増加させる。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約２倍増加させる。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約５倍増加させる。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約１０倍増加させる。
いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に増加させ、クローンの多様性が維持される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約２倍～約５０倍増加させ、クローン多様性が約７０％～約１００％維持される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約２倍増加させ、クローン多様性が約７０％～約１００％維持される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約５倍増加させ、クローン多様性が約７０％～約１００％維持される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍反応性ＴＩＬクローンの増殖を選択的に約１０倍増加させ、クローン多様性が約７０％～約１００％維持される。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、低分化表現型を示す１つ以上のバイオマーカーの発現の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＣＦ７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＴＣＦ７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＴＣＦ７の発現において少なくとも約４０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＴＣＦ７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＴＣＦ７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＯの発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＯの発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＯの発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ４５ＲＯ＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ６２Ｌの発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ６２Ｌの発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ６２Ｌの発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ６２Ｌ＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ２７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ２７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋／ＣＤ２７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ２７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２８の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２８の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２８の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ２８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２８＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２７及びＣＤ２８の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７及びＣＤ２８の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７及びＣＤ２８の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＣＤ１０３の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＣＤ１０３の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＣＤ１０３の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＣＤ１０３＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＣＤ１０３＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＴＣＦ７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＴＣＦ７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＴＣＦ７の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、ＣＤ１０３、及びＴＣＦ７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、ＣＤ１０３、及びＴＣＦ７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、ＣＤ１０３、及びＴＣＦ７の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＣＤ１０３＋ＴＣＦ７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＰＤ１＋ＣＤ１０３＋ＴＣＦ７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ３９の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ３９の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ３９の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ３９＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ３９＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＣＤ３９＋ＰＤ１＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ３９＋ＰＤ１＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＰＤ１の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＰＤ１の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＰＤ１の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＰＤ１＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＰＤ１及びＣＤ２７の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＰＤ１及びＣＤ２７の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＰＤ１及びＣＤ２７の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋ＰＤ１＋ＣＤ２７＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＰＤ１＋ＣＤ２７＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ１０３の発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ１０３の発現において、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ１０３の発現において少なくとも約１０倍の増加を示す。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％は、ＣＤ８＋／ＣＤ１０３＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％は、ＣＤ１０３＋である。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、従来の方法に従って培養された同等の免疫細胞と比較して、低分化細胞数が増加している。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、幹様表現型に特有の１つ以上のマーカーの発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または代謝再プログラミング培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ＋を含有する培地で、従来の方法に従って培養された同等の細胞と比較して、エフェクター様細胞数が増加している。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または代謝再プログラミング培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ＋を含有する培地で、従来の方法に従って培養された同等の細胞と比較して、幹様細胞及びエフェクター様細胞の両方の数が増加している。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、従来の方法に従って培養された細胞と比較して、より大きな増殖能を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、対象の移植時にｉｎ ｖｉｖｏ生存率の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、細胞効力の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、細胞枯渇の減少を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、対象における移植時のｉｎ ｖｉｖｏ持続性の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、対象における移植時のｉｎ ｖｉｖｏ活性の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、対象における移植時のより持続的なｉｎ ｖｉｖｏ応答の増加を示す。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。
いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約１０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約１５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約２０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約２５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約３０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約３５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約４０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約４５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約５０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約５５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約６０％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約６５％は、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の少なくとも約７０％は、幹様表現型を有する。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の培養後に、幹様ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、培養中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の培養後に、幹様ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、培養中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の培養後に、幹様ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、培養中のＣＤ８＋ＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。
いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約２．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約２．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約３．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約３．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約４．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約４．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約５．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約５．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約６．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約６．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中の細胞の数と比較して、少なくとも約７．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中の細胞の数と比較して、少なくとも約７．５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約８．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約９．０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約１５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の組成物中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数と比較して、少なくとも約２０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬ数と比較して、少なくとも約３０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中の細胞数と比較して、少なくとも約４０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬの数と比較して、少なくとも約５０倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬの数と比較して、少なくとも約７５倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬの数と比較して、少なくとも約１００倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬの数と比較して、少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、組成物中の幹様表現型を有するＴＩＬの数は、培養前の組成物中のＴＩＬの数と比較して、少なくとも約１０００倍増加する。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の培養後に、培養中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％は、ＣＤ３９－／ＴＣＦ７＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の培養後に、培養中のＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＴＣＦ７＋ＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）である。
いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５Ｒ０を発現しないＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＣＲ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ６２Ｌを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＴＣＦ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ３を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ２７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５及びＣＤ４５ＲＡを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＣＲ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現するＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し且つＣＤ４５ＲＯｌｏｗであるＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し且つＣＤ４５ＲＯｌｏｗであるＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し且つＣＤ４５ＲＯを発現しないＴＩＬの割合が増加している。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し且つＣＤ４５ＲＯを発現しないＴＩＬの割合が増加している。
いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しないＴＩＬのパーセントの増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ８を発現し且つＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しないＴＩＬのパーセントの増加を含む。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬである。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法によるＴＩＬの培養後に、培養中のＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬである。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、少なくとも２つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、少なくとも３つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、少なくとも４つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、１つ以上の幹様マーカー及び少なくとも２つのエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％％、少なくとも約９９％、または約１００％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約４０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約５０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約６０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約７０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約７５％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約８０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約８５％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９０％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９５％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９６％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９７％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９８％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬの少なくとも約９９％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。
いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、及びＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗを発現する。いくつかの態様では、幹様マーカーは、遺伝子シグネチャーの一部として本明細書に列挙される１つ以上の遺伝子を含む（上掲を参照；例えば以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，１５５２－１５６２（２０２０））。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるＳＴＡＴ標的を含む。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って及び／または培地で培養されたＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗ、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカー、ならびに、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカーを含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカー、ならびに、１つ以上のエフェクター様マーカーを含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、１つ以上の幹様マーカーならびにｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカーを含む。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるＳＴＡＴ標的を含む。
いくつかの態様では、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬは、Ｔ幹／エフェクター（ＴＳＥ）細胞である。いくつかの態様では、ＴＳＥ細胞は、あまり分化していない状態を保持し（例えば、１つ以上の幹様マーカーを発現するか、増殖可能であるか、分化可能であるか、またはそれらの任意の組み合わせ）、細胞は、エフェクター機能を有する（例えば、１つ以上のエフェクター様マーカーを発現し、腫瘍細胞を標的及び／もしくは殺傷することが可能であるか、多機能性を示すか、またはそれらの組み合わせである）。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗである。
本開示のいくつかの態様は、１つ以上のＴＳＥ細胞を含む増殖ＴＩＬ集団に関する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約４０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約５０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約６０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約７０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約７５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約８０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約８５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約９０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約９５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約９８％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬ集団の少なくとも約９９％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、集団中の増殖ＴＩＬ集団の約１００％は、ＴＳＥ細胞である。
本開示のいくつかの態様は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬに関する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも２つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも３つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも４つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、１つ以上の幹様マーカー及び少なくとも２つのエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、幹様マーカーは、遺伝子シグネチャーの一部として本明細書に列挙される１つ以上の遺伝子を含む（上掲を参照；例えば以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，１５５２－１５６２（２０２０））。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ６２Ｌ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗ、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。
本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬ集団を含む細胞組成物に関し、ＴＩＬ集団は、（ｉ）１つ以上の幹様マーカーを発現するの第１のＴＩＬ（例えば、幹様ＴＩＬ）部分集団、及び、（ｉｉ）１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する第２のＴＩＬ（例えば、エフェクター様ＴＩＬ）部分集団、を含み、ＴＩＬ集団は、対照培地で培養されたＴＩＬ集団と比較して、より高い割合（すなわち、幹様ＴＩＬ数／ＴＩＬの総数）の１つ以上の幹様マーカーを発現する第１のＴＩＬ部分集団を含む。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、これらの細胞組成物をもたらす。いくつかの態様では、本明細書で開示の方法に従って培養されたＴＩＬは、発現が増加し、例えば、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７を発現するＴＩＬの割合が高く、発現が減少しており、例えば、ＩＬ－３２を発現するＴＩＬの割合が低い。ＮＫＧ７が最も高い細胞は、より優れたキラーであることが示されているが（Ｍａｌａｒｋａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．）、ＩＬ－３２がより高い細胞は、活性化誘導細胞死を有することが示されている（Ｇｏｄａ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ）。いくつかの態様では、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７のより高い発現を有するＴＩＬは、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－３２の発現が低いＴＩＬは、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋ＴＩＬである。
本開示のいくつかの態様は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬを含む細胞組成物に関する。本開示のいくつかの態様は、ＴＩＬ、例えば、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬ、を含む細胞集団に関する。いくつかの態様では、細胞組成物の少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％は、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬを含む。
いくつかの態様では、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現するＴＩＬは、Ｔ幹／エフェクター（ＴＳＥ）細胞である。いくつかの態様では、ＴＳＥ細胞は、あまり分化していない状態を保持し（例えば、１つ以上の幹様マーカーを発現するか、増殖可能であるか、分化可能であるか、またはそれらの任意の組み合わせ）、細胞は、エフェクター機能を有する（例えば、１つ以上のエフェクター様マーカーを発現し、腫瘍細胞を標的及び／もしくは殺傷することが可能であるか、またはそれらの組み合わせである）。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。いくつかの態様では、本明細書で開示のＴＳＥ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＣＤ４５ＲＯｌｏｗ、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋を発現する。本開示のいくつかの態様は、１つ以上のＴＳＥ細胞を含む増殖ＴＩＬ集団に関する。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約４０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約５０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約６０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約７０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約７５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約８０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約８５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約９０％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約９５％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約９８％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの少なくとも約９９％は、ＴＳＥ細胞である。いくつかの態様では、増殖ＴＩＬの約１００％は、ＴＳＥ細胞である。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、改変ＴＩＬである。本明細書で使用される場合、「改変」ＴＩＬは、天然に存在するＴＩＬに特徴的ではない１つ以上の物理的及び／または機能的特性をＴＩＬに与える方法で、例えば、本明細書で開示の方法に従って操作されているＴＩＬを指す。例えば、いくつかの態様では、改変ＴＩＬは、改変ＴＩＬが天然に存在しないように、細胞に対して異種の１つ以上のタンパク質（例えば、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体）を発現するようにＴＩＬを改変することにより生成され得る。いくつかの態様では、改変ＴＩＬは、特定の方法でＴＩＬを培養することにより、例えば、高カリウム性培地で培養することにより、生成することができ、得られる改変ＴＩＬは、天然に存在する細胞では示されない１つ以上の物理的及び／または機能的特性を有する。
いくつかの態様では、初期培養後の細胞組成物は、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１０×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の細胞組成物は、約２×１０６～約１０×１０６、例えば、約２×１０６、約３×１０６、約４×１０６、約５×１０６、約６×１０６、約７×１０６、約８×１０６、約９×１０６、または約１０×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約２×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約３×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約３×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約４×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約４×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約５×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約５×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約６×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約６×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約７×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約７×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約８×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約８×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約９×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、初期培養後の組成物は、約９×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）～約１０×１０６の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。
いくつかの態様では、二次ＴＩＬ増殖後の細胞組成物は、少なくとも約５×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の細胞組成物は、約５×１０７～約２０×１０７、例えば、約５×１０７、約６×１０７、約７×１０７、約８×１０７、約９×１０７、約１０×１０７、約１１×１０７、約１２×１０７、約１３×１０７、約１４×１０７、約１５×１０７、約１６×１０７、約１７×１０７、約１８×１０７、約１９×１０７、または約２０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約５×１０７～約６×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約６×１０７～約７×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約７×１０７～約８×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約８×１０７～約９×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約９×１０７～約１０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１０×１０７～約１１×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１１×１０７～約１２×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１２×１０７～約１３×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１３×１０７～約１４×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１４×１０７～約１５×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１５×１０７～約１６×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１６×１０７～約１７×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１７×１０７～約１８×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約１８×１０７～約１９×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）、または約１９×１０７～約２０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬｓ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約５×１０７～約６×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約６×１０７～約７×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約７×１０７～約８×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約８×１０７～約９×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約９×１０７～約１０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１０×１０７～約１１×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１１×１０７～約１２×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１２×１０７～約１３×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１３×１０７～約１４×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１４×１０７～約１５×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１５×１０７～約１６×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１６×１０７～約１７×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１７×１０７～約１８×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１８×１０７～約１９×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、二次増殖後の組成物は、約１９×１０７～約２０×１０７の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。
いくつかの態様では、最終ＴＩＬ増殖後の細胞組成物は、少なくとも約４０×１０９、少なくとも約５０×１０９、少なくとも約６０×１０９、少なくとも約７０×１０９、少なくとも約８０×１０９、少なくとも約９０×１０９、または少なくとも約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の細胞組成物は、約４０×１０９～約１００×１０９、例えば、約４０×１０９、約５０×１０９、約６０×１０９、約７０×１０９、約８０×１０９、約９０×１０９、または約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約４０×１０９～約５０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約５０×１０９～約６０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約６０×１０９～約７０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約７０×１０９～約８０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約８０×１０９～約９０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、または約９０×１０９～約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約４０×１０９～約５０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約５０×１０９～約６０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約６０×１０９～約７０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約７０×１０９～約８０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約８０×１０９～約９０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。いくつかの態様では、最終増殖後の組成物は、約９０×１０９～約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を含む。
いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、または少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１０×１０１０、または少なくとも約１５×１０１０、または少なくとも約２０×１０１０、または少なくとも約２５×１０１０、または少なくとも約３０×１０１０のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約２×１０９のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約５×１０９のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約９×１０９のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約１×１０１０のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約１０×１０１０のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約２０×１０１０のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。いくつかの態様では、対象への投与に適した細胞組成物は、少なくとも約３０×１０１０のＣＤ８＋ＴＩＬを含む。
いくつかの態様では、本明細書で開示の方法により、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が生存可能であるＴＩＬを含む組成物が生成される。
ＩＶ．処置方法
本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示の方法のいずれかに従って培養されたＴＩＬ集団に関する。いくつかの態様では、ＴＩＬは、腫瘍浸潤性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、腫瘍反応性（例えば、腫瘍特異的）ＴＩＬが豊富である。いくつかの態様では、ＴＩＬは、幹様ＴＩＬが富化されている。
いくつかの態様では、ＴＩＬ集団を含む組成物は、それを必要とする対象に投与される。いくつかの態様では、本明細書に開示の方法を使用して調製されたＴＩＬは、がん、例えば、腫瘍、を処置するために対象に投与される。いくつかの態様では、処置方法は、有効量の本開示のＴＩＬ組成物、例えば、本明細書に開示の方法に従って調製されたＴＩＬ集団、例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化されたＴＩＬ集団、を含む組成物を対象に投与することを含む。
本開示は、対象の標的細胞集団または組織へのＴ細胞媒介免疫応答を促す方法も提供し、方法は、有効量の本開示のＴＩＬ組成物、例えば、本明細書で開示の方法に従って調製されたＴＩＬ集団、例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬが富化されたＴＩＬ集団、を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物中で投与されるＴＩＬ集団は、自己ＴＩＬを含む。
いくつかの態様では、方法は、少なくとも約１×１０４、少なくとも約５×１０４、少なくとも約１×１０５、少なくとも約５×１０５、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８のＴＩＬを対象に投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、少なくとも約１×１０４、少なくとも約５×１０４、少なくとも約１×１０５、少なくとも約５×１０５、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１０×１０１０、少なくとも約１５×１０１０、少なくとも約２０×１０１０、少なくとも約２５×１０１０、または少なくとも約３０×１０１０の細胞を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、細胞は、ＴＩＬである。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
いくつかの態様では、方法は、少なくとも約１０×１０９、少なくとも約２０×１０９、少なくとも約３０×１０９、少なくとも約４０×１０９、少なくとも約５０×１０９、少なくとも約６０×１０９、少なくとも約７０×１０９、少なくとも約８０×１０９、少なくとも約９０×１０９、または少なくとも約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約１０×１０９～約１００×１０９、例えば、約１０×１０９、約２０×１０９、約３０×１０９、約４０×１０９、約５０×１０９、約６０×１０９、約７０×１０９、約８０×１０９、約９０×１０９、または約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約１０×１０９～約２０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約２０×１０９～約３０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約３０×１０９～約４０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約４０×１０９～約５０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約５０×１０９～約６０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約６０×１０９～約７０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約７０×１０９～約８０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、約８０×１０９～約９０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）、または約９０×１０９～約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約１０×１０９～約２０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約２０×１０９～約３０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約３０×１０９～約４０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約４０×１０９～約５０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約５０×１０９～約６０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約６０×１０９～約７０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約７０×１０９～約８０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約８０×１０９～約９０×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、方法は、約９０×１０９～約１００×１０９の細胞（例えば、ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの態様では、ＴＩＬは、ＣＤ８＋ＴＩＬである。
いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約２：１、少なくとも約２．５：１、少なくとも約３：１、少なくとも約３．５：１、または少なくとも約４：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約２：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約２．５：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約３：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約３．５：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。いくつかの態様では、ＴＩＬは、少なくとも約４：１のＴＩＬ対腫瘍細胞の比で投与される。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を投与すると、標準腫瘍体積と比較して、対象の腫瘍体積が低減した。いくつかの態様では、基準腫瘍体積は、改変細胞の投与前の対象における腫瘍体積である。さらなる態様では、基準腫瘍体積は、投与を受けなかった対応する対象における腫瘍体積である。いくつかの態様では、対象における腫瘍体積は、基準腫瘍体積と比較して、投与後に、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減する。
いくつかの態様では、腫瘍の処置は、対象における腫瘍重量を低減させることを含む。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を投与すると、対象に投与された場合、対象の腫瘍重量が低減し得る。いくつかの態様では、腫瘍重量は、標準腫瘍重量と比較して、投与後に、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減する。いくつかの態様では、基準腫瘍重量は、本開示の細胞組成物の投与前の対象における腫瘍重量である。さらなる態様では、基準腫瘍重量は、投与を受けなかった対応する対象における腫瘍重量である。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を対象（例えば、腫瘍に罹患している）に投与すると、対象の腫瘍及び／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数及び／または割合が増加し得る。いくつかの態様では、腫瘍及び／またはＴＭＥにおけるＴＩＬ（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ）の数及び／または割合は、参照（例えば、本開示の細胞組成物を投与されなかった対象または本開示の細胞組成物の投与前の同じ対象における対応する値）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％、または少なくとも約３００％以上増加する。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を、例えば、腫瘍に罹患している、対象に投与すると、従来の方法に従って調製された（例えば、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭ、例えば、少なくとも５０ｍＭ、の濃度のカリウムイオンを含まない培地で培養された）細胞を含む同様の細胞療法が投与された対象の免疫応答の持続期間と比較して、対象の免疫応答の持続期間が増加し得る。いくつかの態様では、免疫応答の持続期間は、参照（例えば、従来の方法に従って調製された（例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地で培養された）細胞を含む、同様の細胞療法が投与された対象）と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、または少なくとも約１０００％以上増加する。いくつかの態様では、免疫応答の持続期間は、参照（例えば、従来の方法に従って調製された、例えば、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭ、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地で培養された、細胞を含む同様の細胞療法を投与された対象）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍以上増加する。
上記に加えて、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／または幹様ＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を投与すると、腫瘍の処置に資する他の効果があり得る。
本明細書に記載されるように、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む））は、様々ながんタイプ、例えば、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳癌、皮膚癌、腎臓癌、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（胃）癌、消化管癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組み合わせを含むがんに由来する腫瘍、を処置するために使用することができる。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの態様では、がんは、黒色腫、結腸癌、肺癌、子宮頸癌、消化管癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、骨癌、膵臓癌、頭頸部の小細胞癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、精巣胚細胞腫瘍、胃腺癌、皮膚の皮膚黒色腫、中皮腫、腎臓の明細胞腎細胞癌、子宮頸部扁平上皮癌及び子宮頸管内腺癌、食道癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤乳癌、腎臓の乳頭状腎細胞癌、結腸腺癌、またはそれらの任意の組み合わせに由来する固形腫瘍を含む。いくつかの態様では、がんは、黒色腫を含む。いくつかの態様では、がんは、結腸直腸癌を含む。いくつかの態様では、がんは、結腸癌を含む。いくつかの態様では、がんは、膵臓癌を含む。いくつかの態様では、がんは、頭頸部癌を含む。いくつかの態様では、がんは、子宮頸癌を含む。いくつかの態様では、がんは、卵巣癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、消化管癌を含む。いくつかの態様では、がんは、乳癌を含む。いくつかの態様では、がんは、前立腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肝臓癌を含む。いくつかの態様では、がんは、骨癌を含む。いくつかの態様では、がんは、頭頸部の小細胞癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肺扁平上皮癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肺腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、膵腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、頭頸部扁平上皮癌を含む。いくつかの態様では、がんは、精巣胚細胞腫瘍を含む。いくつかの態様では、がんは、胃腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、皮膚黒色腫を含む。いくつかの態様では、がんは、中皮腫を含む。いくつかの態様では、がんは、腎臓の明細胞腎細胞癌を含む。いくつかの態様では、がんは、子宮頸部扁平上皮癌を含む。いくつかの態様では、がんは、子宮頸管内腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、食道癌を含む。いくつかの態様では、がんは、膀胱尿路上皮癌を含む。いくつかの態様では、がんは、乳房浸潤癌を含む。いくつかの態様では、がんは、腎臓の乳頭状腎細胞癌を含む。いくつかの態様では、がんは、結腸腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、子宮癌を含む。いくつかの態様では、がんは、脳を含む。いくつかの態様では、がんは、甲状腺癌を含む。いくつかの態様では、がんは、食道癌を含む。いくつかの態様では、がんは、眼癌を含む。いくつかの態様では、がんは、胃（胃）癌を含む。いくつかの態様では、がんは、消化管癌を含む。いくつかの態様では、がんは、肉腫を含む。いくつかの態様では、がんは、白血病を含む。いくつかの態様では、がんは、リンパ腫を含む。いくつかの態様では、がんは、骨髄腫を含む。
そのようなものであるから、本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の黒色腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の結腸直腸癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の結腸癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の膵臓癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の頭頸部癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の子宮頸癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の卵巣癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の肺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の消化管癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の乳癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の前立腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の肝臓癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の骨癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の頭頸部の小細胞癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の肺扁平上皮癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の肺腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の膵臓腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の頭頸部扁平上皮癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の精巣胚細胞腫瘍を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の胃腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の皮膚黒色腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の中皮腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の腎臓の明細胞腎細胞癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の子宮頸部扁平上皮癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の子宮頸管内腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の食道癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の膀胱尿路上皮癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の乳房浸潤癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の腎臓の乳頭状腎細胞癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の結腸腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の子宮癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の脳腫瘍を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の食道癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の甲状腺癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の眼癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の胃（胃）癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の消化管癌を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の肉腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の白血病を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象のリンパ腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。本開示のいくつかの態様は、処置を必要とする対象の骨髄腫を処置する方法に関し、方法は、本明細書に開示の細胞組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、他の治療薬（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用することができる。従って、いくつかの態様では、本明細書で開示の腫瘍を処置する方法は、本開示の細胞組成物を１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、免疫経路の複数の要素を標的とすることができるように、１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介したシグナル伝達を遮断する）。
本方法で使用することができる免疫チェックポイント阻害剤の非限定例としては、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１アンタゴニストである。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体である。併用処置の包括的且つ非限定的なリストは、本出願の他の箇所で詳細に開示される。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、追加の治療薬の投与前または投与後に対象に投与される。他の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、追加の治療薬と同時に対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）ならびに追加の治療薬は、薬学的に許容される担体中の単一組成物として同時に投与することができる。他の態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）ならびに追加の治療薬は、別々の組成物として同時に投与される。
いくつかの態様では、対象は、ラットまたはマウスなどの非ヒト動物である。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。
いくつかの態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、他の治療薬（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用することができる。従って、いくつかの態様では、本明細書で開示の腫瘍を処置する方法は、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）を対象に投与することを含む。そのような薬剤には、例えば、化学療法薬、標的抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害薬、免疫療法、サイトカイン、外科手術、放射線療法、共刺激分子の活性化剤、免疫チェックポイント阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはその任意の組み合わせが含まれ得る。
いくつかの態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、標準治療の処置（例えば、手術、放射線、及び化学療法）と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載の方法は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を予防することが意図される療法、としても使用することができる。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、免疫経路の複数の要素を標的とすることができるように、１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用することができる。このような組み合わせの非限定例としては、以下が挙げられる：腫瘍抗原提示を増強する治療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害すること、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞）を枯渇または遮断することにより、負の免疫調節を阻害する治療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＣＤ４０またはＧＩＴＲ経路を刺激する、及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストで、正の免疫調節を刺激する治療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる治療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用するか、またはｅｘ ｖｉｖｏでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇により、Ｔｒｅｇ、例えば、腫瘍内のＴｒｅｇ、を枯渇または阻害する治療法；腫瘍内のサプレッサー骨髄細胞の機能に影響を与える治療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子改変細胞、例えば、キメラ抗原受容体を発現するように改変された細胞、を含む追加の養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞の移入（ＣＡＲ－Ｔ療法）；代謝酵素、例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンセターゼ、を阻害する治療法；Ｔ細胞のエネルギー欠如または枯渇を逆転／予防する治療法；腫瘍部位で自然免疫の活性化及び／または炎症を引き起こす治療法；免疫刺激性サイトカインの投与；免疫抑制性サイトカインの遮断；またはそれらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介したシグナル伝達を遮断する）。本方法で使用することができる免疫チェックポイント阻害剤の非限定例としては、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。そのような免疫チェックポイント阻害剤の非限定例としては、以下が挙げられる：抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）；ＭＫ－３４７５）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、ＪＳ００１、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＩ ７５４０９１、ＳＨＲ－１２１０、及びそれらの組み合わせ）；抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＲＧ７４４６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＯ５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標））、ＬＹ３３０００５４、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、及びそれらの組み合わせ）；ならびに抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、トレメリムマブ（チシリムマブ；ＣＰ－６７５，２０６）、ＡＧＥＮ－１８８４、ＡＴＯＲ－１０１５、及びそれらの組み合わせ）。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、ＰＤ１アンタゴニストと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、抗ＰＤ１抗体と組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、ニボルマブと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、ペムブロリズマブと組み合わせて対象に投与される。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、アテゾリズマブと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、デュルバルマブと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、アベルマブと組み合わせて対象に投与される。
いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、イピリムマブと組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、本開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、トレメリムマブと組み合わせて対象に投与される。
いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント活性化剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介してシグナル伝達を促進する）。いくつかの態様では、免疫チェックポイント活性化剤は、ＯＸ４０アゴニスト（例えば、抗ＯＸ４０抗体）、ＬＡＧ－３アゴニスト（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（例えば、抗ＣＤ１３７抗体）、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、ＴＩＭ３アゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、追加の治療薬は、サイトカインを含む。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、追加の治療薬の投与前または投与後に対象に投与される。他の態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、追加の治療薬と同時に対象に投与される。いくつかの態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）ならびに追加の治療薬は、薬学的に許容される担体中の単一組成物として同時に投与することができる。他の態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）ならびに追加の治療薬は、別々の組成物として同時に投与される。いくつかの態様では、本明細書で開示の追加の治療薬及び細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）が逐次的に投与される。
いくつかの態様では、本明細書で開示の細胞組成物（例えば、本明細書で開示の方法に従って調製された（例えば、ＣＤ８＋ＴＩＬ、幹様ＴＩＬ、腫瘍特異的ＴＩＬ、及び／またはナイーブＴＩＬが富化された）ＴＩＬ集団を含む）は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、細胞組成物は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）の前に投与される。いくつかの態様では、細胞組成物は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）の後に投与される。
いくつかの態様では、対象は、細胞組成物を投与される前に、リンパ球除去療法を投与される。任意のリンパ球除去療法は、本明細書で開示の方法に使用することができる。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、化学療法を含む。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、シクロホスファミドを含む。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、フルダラビンを含む。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、シクロホスファミド及びフルダラビンを含む。いくつかの態様では、リンパ球除去療法は、細胞組成物の少なくとも約３日後、少なくとも約４日後、少なくとも約５日後、少なくとも約７日後、少なくとも約８日後、少なくとも約９日後、少なくとも約１０日後、少なくとも約１１日後、少なくとも約１２日後、少なくとも約１３日後、または少なくとも約１４日前に投与される。
実施例１．方法
培地の調製：Ｔ細胞馴化培地（ＴＣＭ）に、免疫細胞血清置換（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ＩＬ－２、２００ＩＵ／ｍＬ；ＩＬ－７、１２０ＩＵ／ｍｌ；ＩＬ－１５、２０ＩＵ／ｍｌを補充した。
低張馴化培地の場合、ＮａＣｌ、グルコース、及びカルシウム不含ＲＰＭＩを添加することにより、様々な濃度のナトリウム、カリウム、グルコース、及びカルシウムを含むＴＣＭ培地を調整した。規定のＮａＣｌ不含ＲＰＭＩをＴＣＭに添加した後、最終濃度を、ＮａＣｌ（４０～８０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～８０ｍＭ）、カルシウム（０．５～２．８ｍＭ）、グルコース（１０～２４ｍＭ）、及び浸透圧（約２５０～２６０ｍＯｓｍｏｌ）の範囲であった。表１を参照のこと。
Figure 2023550490000001
また、本発明者らは、カリウム濃度を変えて、一定の張度条件（２５０ｍＯｓｍｏｌ－低張、２８０ｍＯｓｍｏｌ－等張、３２０ｍＯｓｍｏｌ－高張）を維持することにより、Ｔ細胞に対する張度の影響を試験した。低張条件における最終濃度、ＮａＣｌ（３５～７５ｍＭ）、ＫＣｌ（５０～９０ｍＭ）、等張条件における最終濃度、ＮａＣｌ（５０～９０ｍＭ）、ＫＣｌ（５０～９０ｍＭ）、高張条件における最終濃度、ＮａＣｌ（７０－１１０ｍＭ）、ＫＣｌ（５０－９０ｍＭ）。表２を参照のこと。
Figure 2023550490000002
細胞培養及び形質導入：Ｔ細胞馴化培地ＴＣＭ、基礎培地、または低張馴化培地で、ＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて、健常ドナーの凍結保存ヒトＣＤ４及びＣＤ８細胞を活性化した。ＴＣＭ、基礎培地、または低張馴化培地での２４時間の活性化後、Ｔ細胞にレンチウイルス粒子を形質導入し、Ｇｒｅｘプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）にキメラ抗原受容体（抗ＣＤ１９ＣＡＲ）を導入した。形質導入の翌日、Ｔ細胞に新鮮な培地を補充して、ＴｒａｎｓＡｃｔを希釈し、Ｔ細胞の活性化を終了させた。細胞成長及び密度に応じて、Ｇｒｅｘプレート内の培地の半分を吸引することにより、Ｔ細胞に、温かい２Ｘサイトカイン培地を与えた。７日目に、細胞を採取、計数、及びフローサイトメトリーにより幹細胞性マーカーの発現を分析した。
細胞内サイトカインアッセイ：７日目に、Ｔ細胞を洗浄して対照培地に配置し、ブレフェルジンＡの存在下でホルボールミリステートアセタート（ＰＭＡ）及びイオノマイシンによる５時間の再刺激にかけて、細胞内サイトカイン、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαを測定した。固定可能な生／死の溶液を含有するＦＡＣＳ緩衝液中で、表面抗体染色を用いて、Ｔ細胞を染色した。固定及び透過化処理後に、細胞内サイトカインに対するそれぞれの抗体で、細胞を染色した。フローサイトメトリーを使用して、細胞内サイトカイン発現の定量化を評価した。
フローサイトメトリーによる幹細胞性表現型ＣＡＲ発現の測定：７日目に、それぞれの処置からの生Ｔ細胞を、フローサイトメトリーにより評価した。最初に、細胞を細胞染色緩衝液で洗浄し、抗ＣＣＲ７を用いて３７℃で１５分間染色した。この後に、他のいくつかの抗原に対する抗体の２×マスターミックス（以下に詳述）を細胞に添加し、４℃で２０分間インキュベートした。細胞を細胞染色緩衝液で洗浄し、製造者のプロトコールに従って、ｆｏｘｐ３染色キット（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で透過処理した。固定後に、細胞をＴＣＦ７について４℃で２０分間染色し、その後、細胞をオーロラ（ｃｙｔｅｋ）上のフローサイトメトリーにより分析した。以下は、幹細胞性マーカーの評価に使用される抗体のリストである：ＣＤ８（ＢＤ－＃５６３７９５）、ＣＤ４（ＢＤ－＃６１２９３６）、ＣＤ２７（ＢＤ－＃６１２８２９）、ＣＤ３（Ｔｈｅｒｍｏ－＃６１２８９３）、ＣＤ２８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ－＃３０２９３６）、ＣＤ６２Ｌ、ＣＡＲ－ＥＧＦＲ（Ｔｈｅｒｍｏ－＃３５２９１１）、ＣＤ４５ＲＯ（ＢＤ＃５６４２９０）、ＣＤ３９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ－＃３２８２３６）、ＴＣＦ７（細胞シグナル伝達－＃１４４５６）、ＣＣＲ７（ＢＤ－＃５６２３８１）、ＣＤ１２７（Ｂｉｏ ｌｅｇｅｎｄ－＃３５１３２４）、ＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ－＃５６０６７３）。
実施例２．培地を調製し、ＴＩＬを培養する方法
対照培地：市販のＴ細胞培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｉｍｉｚｅｒ（商標）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）、またはＴＥＸＭＡＣＳ（商標））。
代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）：ＮａＣｌ不含Ｔ細胞培地を使用して、Ｔ細胞培地の無機塩イオン濃度を調整した。ＭＲＭの最終濃度は、以下であった：ＮａＣｌ（４０～８０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～９０ｍＭ）、カルシウム（０．５～２．８ｍＭ）、グルコース（１０～２４ｍＭ）、及び浸透圧（約２５０～３４０ｍＯｓｍｏｌ）。
初期培養ならびに二次及び最終ＴＩＬ増殖に使用したＴＩＬ培地の調製：対照培地またはＭＲＭのいずれかに、２．５％の血清サプリメント（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＬ－グルタマックス（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ）、２０μｇ／ｍｌのｆｕｎｇｉｎ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、及び１ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ）を補充した。
初期ＴＩＬ培養：図１は、本明細書に記載のＴＩＬを培養する方法の特定の態様を、一般的に、示す概略図である。本明細書に記載されるように、様々な腫瘍型（結腸、肺、肝細胞癌、腎臓、膵臓、乳房、黒色腫、及び前立腺）から外科的に切除された平均サイズ１～１０ｍｍ３の複数の腫瘍を、２４ウェルプレート中の対照培地またはＭＲＭ（双方ともに、ＩＬ－２（３００ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－２１（３０ｎｇ／ｍｌ）が補充される）のいずれか２ｍｌに播種した。コロニー形成が見えるまで、腫瘍断片を、５％のＣＯ２を含む３７℃のインキュベーターで、ヒートジャケット付きインキュベーター内で培養した。ＩＬ－２（３００ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－２１（３０ｎｇ／ｍｌ）が補充された新しい培地（対照またはＭＲＭ）を、細胞の成長に応じて３日ごとに補充した。本方法により、初期培養の終了時点で、約２×１０６～１０×１０６の細胞／断片の収量が得られた。分析用の細胞のサブセットを、４０μｍの濾過器に通し、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３９、ＴＩＭ３、ＣＤ１２７、ＰＤ１、ＣＤ１０３、ＣＤ４５ＲＡ、及びＴＣＦ７を含む様々なバイオマーカーを使用して、マルチカラーフローサイトメトリーで表現型を特定した。
二次ＴＩＬ増殖：初期培養からの細胞収量が培養断片当たり約２×１０６～１０×１０６の細胞に達した（通常、約１４日目～１９日目）場合、対照培地またはＭＲＭ（双方ともに、ＩＬ－２（７３．６ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、及びＩＬ－１５（０．４ｎｇ／ｍｌ）が補充される）のいずれかで、ＴＩＬを培養し、１：１００のＴ細胞ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、５μｇ／ｍｌの組み換えヒトＣＤ２７リガンド（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、及び１μｇ／ｍｌ組み換えヒト４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加することにより刺激した。約５×１０７～２０×１０７個の細胞が得られるまで（刺激の約７～１１日後）、細胞を培養下に維持した。二次増殖期間の終了時に、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３９、ＴＩＭ３、ＣＤ１２７、ＰＤ１、ＣＤ１０３、ＣＤ４５ＲＡ、及びＴＣＦ７を含む様々なバイオマーカーを使用して、マルチカラーフローサイトメトリーでＴＩＬを分析した。生細胞及びＣＤ３＋細胞のみを分析した。
最終的なＴＩＬ増殖：培養が約５×１０７～２０×１０７の細胞の収量に達した時、対照培地またはＭＲＭのいずれかで培養されたＴＩＬを、ＩＬ－２（７３．６ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－２１（１０ｎｇ／ｍｌ）、及びＩＬ－１５（０．４ｎｇ／ｍｌ）が補充された新しい対照培地に移した。ＴＩＬを、１：１００のＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、５μｇ／ｍｌの組み換えヒトＣＤ２７リガンド（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、及び１μｇ／ｍｌの組み換えヒト４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で２回刺激した。約１０×１０９～１００×１０９の細胞／断片の収量が達成されるまで、細胞を静的ＧＲＥＸまたは撹拌タンク内で（約１４日間）培養し、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３９、ＴＩＭ３、ＣＤ１２７、ＰＤ１、ＣＤ１０３、ＣＤ４５ＲＡ、及びＴＣＦ７を含む様々なバイオマーカーについて、マルチカラーフローサイトメトリーで分析した。細胞の多機能性をチェックするために、得られたＴＩＬをＰＭＡ／イオノマイシン（１：５００）で４時間刺激し、以下のマーカーを使用して、細胞内染色を実行した：ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＩＬ２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＴＣＦ７。生細胞及びＣＤ３＋細胞のみを分析した。
実施例３．ＭＲＭにより、ＣＤ８＋、腫瘍反応性、低分化ＴＩＬの増殖がもたらされる
実施例１に記載されているように、ＴＩＬを成長させた（図１）。初期ＴＩＬ培養後（すなわち、１４日）、マルチパラメータフローサイトメトリーを実施して、細胞培養に存在するＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＩＬの割合を定量した。ＭＲＭで培養された細胞は、対照培地で培養した細胞と比較して、ＣＤ８＋ＴＩＬが約２０～８０％有意に富化されていた（図２Ａ～２Ｃ、データは示されない）。ＣＤ４＋ＴＩＬが、固形腫瘍を根絶することが可能であるが、腫瘍に対する優れた細胞溶解活性は、主に、ＣＤ８＋ＴＩＬで媒介される。腫瘍細胞は、主に、ＭＨＣクラスＩ関連腫瘍抗原を発現し、これは、ＣＤ８＋ＴＩＬにより認識される。従って、ＴＩＬ療法注入製品中により多くの割合のＣＤ８＋ＴＩＬを含むことは、治療上有益である。ＴＩＬを培養するためのＭＲＭを使用すると、対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、予想外にＣＤ８＋ＴＩＬが富化される（図２Ｃ）。
ＭＲＭでの初期培養の終了時（約１４日目）に得られたＴＩＬは、腫瘍反応性ＴＩＬのいくつかの細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３９、ＣＤ１０３、ＣＤ２２６、及び／またはＰＤ１）の一貫した発現も示した。ＭＲＭでの初期培養により、対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、ＣＤ３９及びＰＤ１の発現が増強された（２０％を超える）ＴＩＬが生成された（図２Ａ～２Ｂ）。以前に使用された方法は、ＰＤ１発現が、初期ＴＩＬ培養中に、ＰＤ１サブセットで完全に失われていることを示す。これは、腫瘍反応性ＴＩＬの望ましくない喪失を示す（例えば、以下を参照のこと：Ｐｏｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（１２）：ｅ１２４０８５９（２０１６）；及びＧｒｏｓ ｅｔ ａｌ，ＪＣＩ １２４（５）：２２４６－５９（２０１４））。本発明者らは、Ｔ細胞刺激後のＰＤ１発現の維持がドナーに依存していたことを観察した（データは示されない）。同様の結果が、ＣＤ３９及びＣＤ１０３を含む腫瘍反応性の他のマーカーの発現について得られた（以下を参照：図２Ａ～２Ｂ及び５Ａ～５Ｂ、データは示されない）。しかし、１４日目に観察されたクローンレパートリーは、ＴＩＬプロセス全体を通じて維持される（データは示されない）。
本発明者らは、また、ＭＲＭで培養されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＩＬの両方において、ＰＤ１（腫瘍反応性代謝状態を示す）及びＣＤ２７の共発現を観察した（図３Ａ～３Ｅ）。ナイーブＴ細胞及びメモリーに関与したＴ細胞上に構成的に発現されるＣＤ２７の発現は、Ｔ細胞における幹様表現型を示す。以前の報告は、Ｔ細胞刺激後の、細胞増殖中のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ２７の発現が低減することを示す（例えば、以下を参照のこと：Ｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３１（８）：７４２－５１（２００８）；及びＲｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７（１３）：４５５０－５５７（２０１１）、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７６（１２）：７７２６－３５（２００６））。対照的に、本明細書で開示のＭＲＭで培養されたＴＩＬは、培養プロセス全体を通してＣＤ２７発現を保存しており、幹様腫瘍反応性クローンの選択的増殖が可能になる。予想通り、１４日目の全てのＣＤ２７＋細胞が、ＰＤ１を共発現しているわけではなく、全ての幹様細胞が腫瘍反応性代謝状態を示しているわけではないことが示される。
ＴＩＬの抗腫瘍機能及び生存は、ＴＣＲ、サイトカイン、及び共刺激受容体が受け取った統合シグナルに依存する。これらのシグナルのいずれかが不適切に曝露されると、ＴＩＬのエネルギー欠如及び萎縮がもたらされるであろう。以前に使用されたＴＩＬの培養及び増殖の方法は、ＴＩＬにおけるＣＤ２７発現がなくなる。しかし、注入製品中で、例えば、最小限に増殖したＴＩＬ中で、ＣＤ２７発現を維持するＴＩＬは、養子Ｔ細胞療法後の腫瘍退縮と関連することが示されている（例えば、以下を参照のこと：Ｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３１（８）：７４２－５１（２００８）；及びＲｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７（１３）：４５５０－５５７（２０１１））。加えて、共刺激受容体、例えば、ＣＤ２７及びＣＤ２８、の発現の上昇は、ｉｎ ｖｉｖｏでの治療効果と関連する（Ｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ３１（８）：７４２－５１（２００８），Ｇｅｌｔｉｎｋｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ１７１、３８５－３９７（２０１７））。これらの共刺激受容体の発現は、若いＴＩＬ培養と相関している幹細胞性及びより長いテロメア長とも関連している。以前に使用された方法、例えば、対照培地とは対照的に、本明細書に記載のＭＲＭを使用すると、いくつかの腫瘍型にわたって、ＴＩＬの総数の約２０％～約８０％のＣＤ２７及びＣＤ２８発現を有するＴＩＬが富化された（図４及びデータは示されない）。ＣＤ２７及びＣＤ２８の富化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットに特有ではないが、ＣＤ４＋サブセットでも観察された（データは示されない）。
ＣＤ２７及びＣＤ６２Ｌの発現は、あまり分化していないＴ細胞と相関しており、腫瘍組織及びリンパ節へのＴ細胞の効率的な輸送と関連する。ＣＤ２７、ＣＤ２８、及びＣＤ６２Ｌの発現は、また、より長いテロメア長とも関連しており、これは、ＴＩＬの年齢及びｉｎ ｖｉｖｏでの治療効果と間接的に関連する（例えば、Ｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３１（８）：７４２－５１（２００８）；及びＲｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７（１３）：４５５０－５５７（２０１１））。しかし、本明細書で開示されるように、ＭＲＭで培養されたＴＩＬは、最小限に培養されたＴＩＬと同様に、プロセス全体を通してＣＤ２７及びＣＤ６２Ｌの両方の発現を維持した。本発明者らは、対照培地で培養されたものと比較した、ＭＲＭで培養されたＴＩＬにおけるＣＤ２７及びＣＤ６２Ｌの発現の約５０％の増加を観察した（データは示されない）。
免疫チェックポイント遮断後の腫瘍退縮を媒介する腫瘍反応性クローンは、ＰＤ１及び転写因子ＴＣＦ－７を発現したＣＤ８＋Ｔ細胞に由来すると考えられる（Ｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３７：４１７－２１（２０１６）；及びＦｅｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １７５（４）：９９８－１０１３（２０１８））。本明細書で開示のＭＲＭで培養されたＴＩＬは、腫瘍反応性ＴＩＬバイオマーカー（ＰＤ１及びＣＤ１０３）の富化を示し、同時に４倍～５０倍高いレベルのＴＣＦ７発現を示した（図５Ａ～５Ｃ、６Ｄ、６Ｈ、１０）。ＴＣＦ７の発現は、より幹様細胞を示す。ＰＤ１の発現にも関わらず、これらの細胞は、増殖能力を保持し、さらなる刺激時に、未分化細胞を維持した（図６Ａ～６Ｈ）。
実施例４：ＭＲＭは、ＴＩＬの腫瘍反応性を維持する
腫瘍は、本質的に不均一であり、多くの場合、ＫＲＡＳ、Ｐ５３、及びＢＲＡＦ（周知のネオアンチゲン）などの遺伝子に共通の変異を含有する。本明細書で開示のＭＲＭを使用する方法は、そのようなネオアンチゲンを認識するＴＩＬが富化された。
腫瘍切除は、主に、ＫＲＡＳＧ１２Ｖ、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、及びＫＲＡＳＧ１２Ｄ変異を有する腫瘍細胞を有するがんである膵臓腺癌の患者から得られた。ＨＰＬＣ精製した上記のＫＲＡＳホットスポット変異の９ｍｅｒ、１０ｍｅｒ、及び２５ｍｅｒペプチドを精製及び使用して、患者と一致する末梢血単球から生成された未熟樹状細胞（ＤＣ）をパルスした。これらのペプチドプールパルスＤＣを、同じ膵臓腺癌患者から得られたＴＩＬと共培養し、上記の実施例に記載の方法に従って培養した。ＭＲＭでのＴＩＬの培養により、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＴＣＦ－７の顕著な同時発現を伴う、約３０％多いＣＤ８＋Ｔ細胞がもたらされた（図７Ａ～７Ｈ）。本明細書で開示のＭＲＭが、周知の抗原を認識する腫瘍反応性ＴＣＲクローンを保存することを、これらの結果は示す。
予想通り、野生型ＫＲＡＳペプチドでパルスされたＴＩＬは、ＫＲＡＳ特異的ＴＩＬの特異的な増殖をもたらさなかった。しかし、本発明者らは、ＭＲＭで培養されたＴＩＬによるＣＤ２７、ＣＤ２８、ＰＤ１、及びＴＣＦ７発現の増加を一貫して観察した。これらの結果は、ＭＲＭで細胞を培養すると、周知で希少なネオアンチゲンを認識するＴＩＬの成長及び増殖が保存されることを示す（図８Ａ～８Ｈ）。
ＣＤ８＋ＴＩＬ及び腫瘍反応性と関連するマーカー（ＣＤ３９及びＰＤ１）の優先的な富化を、この増殖プロセス中に維持した（図９Ａ～９Ｂ）。これらの結果は、ＭＲＭが初期培養後であっても、腫瘍反応性ＴＩＬにおけるＰＤ１発現をさらに増強することを示す。加えて、本明細書で開示の方法に従ってＭＲＭで培養されたＴＩＬは、ＴＣＦ７発現の５０倍を超える増加（ｑＰＣＲで測定）を示した（図１０）。これらのデータは、再刺激後のＴＩＬの自己再生及び増殖バーストに必要なマスター転写調節因子であるＴＣＦ７の役割と一致する。
ＴＩＬにおけるＣＤ１０３の発現は、高い変異抗原負荷を伴う腫瘍におけるＴＩＬ浸潤と相関していることが報告される。ＣＤ３９及びＰＤ１の発現に加えて、本発明者らのデータにより、ＭＲＭにおけるＴＩＬの増殖が、幹細胞性関連遺伝子の発現も増加させながら、ＰＤ１＋ＣＤ３９＋ＣＤ１０３＋細胞数を増加させる（図１１Ａ～１１Ｌ）ことが実証された。それ故、ＭＲＭでのＴＩＬの培養は、腫瘍反応性及び得られる増殖細胞生成物中の幹様細胞の高い割合の両方を備えた細胞数を増加させるのに十分であり得る。
ＭＲＭにおけるＴＩＬの増殖により、幹細胞性が増加するだけでなく、腫瘍反応性と関連するいくつかの細胞表面マーカーの発現も増加する細胞集団が生成されることを、本明細書に提示されるデータは実証する。ＭＲＭを使用する本明細書に記載の方法は、改善された治療用製品の特徴及び性質を有するＴＩＬを生成する。
実施例５．処置の方法
注入に使用されるＴＩＬは、原発性もしくは転移性腫瘍またはリンパ節から切除された患者の腫瘍に由来する。実施例１で上述されるように、ＭＲＭを含有する２４ウェルプレートに、小さな腫瘍断片（約１～１０ｍｍ３）をプレーティングすることにより、ＴＩＬ培養を開始する。約２×１０６～約１０×１０６の細胞／腫瘍断片が得られるまで（通常、約２～３週間）、これらの断片を成長させる。例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ならびに任意にＣＤ２７アゴニスト、４１ＢＢアゴニスト、及び／またはＯＸ－４０アゴニストを添加することにより、全ての断片から得られた細胞をプールし、Ｔ細胞刺激のために２×１０６／ウェルの密度でプレーティングする。約５×１０７～約２０×１０７の細胞が得られるまで、細胞を培養下に維持される。注入製品のために、細胞数（約１～１５０×１０９ＴＩＬ）が約１０００～２０００倍増加するように、例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）及び任意にＣＤ２７アゴニスト、４１ＢＢアゴニスト、及び／またはＯＸ－４０アゴニストを使用して、これらの細胞を、さらに刺激する。
ＴＩＬ注入製品の投与前に、患者に、例えば、シクロホスファミド及びフルダラビンを含むリンパ除去処置を施す。ＴＩＬ注入に加えて、患者は、また、本明細書で開示されるように培養されたＴＩＬの注入後に、抗ＰＤ１チェックポイント阻害剤（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）を投与されてもよい。
実施例６．クローン多様性の分析
ＭＲＭで培養されたＴＩＬのクローン多様性を評価するために、上記に開示された方法に従って、腫瘍断片及び腫瘍断片から得られたＴＩＬを、対照培地または代謝再プログラミング培地（ＭＲＭ）のいずれかで培養した。ＤＮｅａｓｙ血液組織キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、全ゲノムＤＮＡを、腫瘍及びＴＩＬ試料から単離し、ＴＣＲβ及びＣＤＲ３領域についてＩｍｍｕｎｏ－ｓｅｑ（Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を使用してシーケンシングした。
試料の多様性メトリクスをシンプソンのクローン性√Σｐｉ２（式中、ｐｉは、所定の試料におけるクローンｉの比例的な存在量である）で評価した。腫瘍断片（「腫瘍」）、対照培地で培養されたＴＩＬ（「対照」）、及びＭＲＭで培養されたＴＩＬ（「ＭＲＭ」）中で、シンプソンのクローン性及び生産的再構成を試験した（図１２）。ＭＲＭで培養されたＴＩＬ（増殖後）は、約０．０４のシンプソンのクローン性を示し、これは、腫瘍断片で見られるものと同様に、高いクローン多様性を示す（図１２）。ＴＣＲβの多様性の維持は、腫瘍に浸潤するＴＩＬクロノタイプの保存を表し、腫瘍反応性である。対照的に、対照培地で培養されたＴＩＬは、クローン多様性を著しく失い、約０．４のシンプソンのクローン性（すなわち、多様性が著しく低いクローン性であり、これは、多くの腫瘍反応性クローンが対照培地を使用する培養プロセスで喪失することを示す）を示した（図１２）。
図１２に提示されるデータを使用して、差分存在量（ＤＡ）プロットを生成した（ＩｍｍｕｎｏＳｅｑ、Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｇｉｅｓ）。そのようなＤＡ分析は、試料の任意のペアについて、ＴＣＲオーバーラップ（例えば、以下を参照のこと：Ｅｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐａｔｈ．（２０１３）（全体が参照により本明細書に組み込まれる）、Ｍｏｒｉｓｉｔａインデックス、及びＪａｃｃａｒｄインデックスを計算した。これらのプロットは、クローンの差分存在量が、ＭＲＭで増殖させた腫瘍対ＴＩＬ（図１３Ｂ）と比較して、対照培地で増殖させた腫瘍対ＴＩＬ（図１３Ａ）で、有意に異なることを示す。
対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、ＭＲＭプロセスで培養されたＴＩＬでは、腫瘍断片に存在するＴＩＬレパートリーを約４倍多く表す。増殖された場合、ＴＩＬは、通常、優先的な増殖能を有する頻度の低いクロノタイプにより増殖する（これらのクローンは、図１３Ａ～１３Ｂにおいてｙ軸に沿って増殖したことが示される）。対照的に、ＭＲＭで培養されたＴＩＬは、腫瘍内に存在するクロノタイプのより広いレパートリーの有意に優れた保存及び増殖を示した。ＴＩＬ集団のクローン多様性の保存及び増殖は、効果的な治療を最適化するために重要である。
さらに、ＴＩＬクローンの多様性を分析するために、初期腫瘍消化物中のよく見られる最も優勢なＴＣＲの上位５０を、対照培地対ＭＲＭで増殖させたＴＩＬと比較した。ＭＲＭでの培養により、優性（すなわち、よく見られる）及び希少なＴＩＬクロノタイプの両方が保存される。ＭＲＭで増殖させたＴ細胞クローンの大部分が腫瘍抗原を認識するが、対照培地で培養されたＴ細胞クローン（図１３Ｃ）では認識しないことを、図１３Ｄの線の密度は示す。図１３Ｄの点線より上の連結で示される、対照培地で培養されたＴ細胞クローン（図１３Ｃ）と比較して、ＭＲＭで増殖させたＴ細胞クローンで、優勢な腫瘍クローンの大部分が認識される（図１３Ｄの点線より上の連結で示される）。上位５０の優性腫瘍ＴＣＲのうち、ＭＲＭで培養されたＴＩＬでの５７％（図１３Ｄ）と比較して、対照培地で培養されたＴＩＬでは、２％（図１３Ｃ）が保存される。ＭＲＭで増殖させたＴＩＬが、対照培地で増殖させたＴＩＬよりも、初期の腫瘍ＴＣＲクロノタイプをより忠実な表現を保持することを、これらのデータは示す。
実施例７．ＭＲＭは、ＴＩＬの腫瘍反応性を維持する
本明細書に記載の方法を使用して生成されたＴＩＬがＫＲＡＳ変異体の反応性を保存する能力を評価した。対照培地またはＭＲＭで増殖させたＴＩＬを、変異型ＫＲＡＳペプチドでパルスしている自己樹状細胞（ＤＣ）と混合した。１０日後に、ＤＮｅａｓｙ血液組織キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、全ゲノムＤＮＡをＴＩＬから単離し、ＴＣＲ－Ｖｂ ＣＤＲ３モチーフをシーケンシングし、ＴＣＲβ及びＣＤＲ３領域のＩｍｍｕｎｏ－ｓｅｑ（Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を使用して分析した。図１４は、ＭＲＭで培養されたＴＩＬは、ＫＲＡＳ変異体反応性を保存するが、対照培地で培養されたＴＩＬは、そうすることが可能でないことを示す。具体的には、ＭＲＭで培養されたＴＩＬは、腫瘍断片からのＴＩＬに見られるのと同様のＣＤＲ３アミノ酸モチーフを共有していた。これらは、対照培地で培養されたＴＩＬでは検出されなかった。従って、データは、ＭＲＭでの培養により、元の腫瘍断片に示されるＴＩＬクロノタイプが保存されることを示す。
実施例８．ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬは、腫瘍認識及び腫瘍殺傷の増加を示す
黒色腫腫瘍から得られたＴＩＬを取得し、上記のように、対照培地またはＭＲＭのいずれかで増殖させた。自家腫瘍細胞株は、ＴＩＬと同じ黒色腫試料に由来している。要約すると、黒色腫の断片を酵素的に消化し（コラゲナーゼ及びＤＮＡｓｅを使用）、得られた単一細胞懸濁液をプレーティングし、続いて、増殖細胞を連続継代することにより、黒色腫細胞株を生成した。黒色腫由来細胞株に応答して、黒色腫腫瘍由来のＴＩＬが炎症性サイトカインを生成する能力を評価した。対照培地またはＭＲＭのいずれかを使用して生成されたＴＩＬを、自家黒色腫細胞株と２４時間共培養した。自家黒色腫細胞株からの１００，０００の腫瘍細胞を、４８ウェルプレート内の３００ｕｌの完全ＲＰＭＩ培地（ｗ／１０％のＦＢＳ）にプレーティングし、一晩インキュベートした。翌日、上清を除去し、ＴＩＬを添加した（いくつかのＴＩＬを、対照として腫瘍細胞の非存在下でプレーティングした）。２４時間後、培地上清をウェルから収集し、ＭＳＤを使用して、分泌されたインターフェロンガンマ及びＴＮＦ－アルファを測定した。加えて、ＭＲＭを用いて生成されたＴＩＬを、対照培地で一晩インキュベートし、ＭＳＤでＩＬ－２分泌を評価した。これらのデータは、ＭＲＭを使用して増殖させたＴＩＬが、炎症性サイトカイン生成に関して自家腫瘍細胞に応答する能力の顕著な増加を示すことを示す（図１５Ａ～１５Ｂ）。さらに、ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬは、刺激のない定常状態で著しく多くのＩＬ－２を分泌し、これらの細胞がより適合していることを示す。
黒色腫腫瘍由来のＴＩＬが黒色腫由来の細胞株を殺傷する能力も評価した。トリプシンで腫瘍細胞を剥離し、フローサイトメトリーで生細胞を計数することにより、共培養後に残った生腫瘍細胞の数を評価した。この生存腫瘍細胞数に基づいて、ＴＩＬによる腫瘍殺傷率（％）（ＴＩＬ共培養を経験しなかった腫瘍細胞のウェルに対して正規化）を計算した。ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬは、著しく優れた腫瘍細胞を殺傷する能力を示す（図１５Ｃ）。
上記の実験を上記のように繰り返したが、いくつかのウェルを、Ｗ６／３２抗体で処理して、ＨＬＡクラスＩ相互作用を遮断した。図１５Ｄは、クラスＩを遮断すると、インターフェロンガンマ生成の増加がなくなるので、ＭＲＭを使用して生成されたＴＩＬによる自家腫瘍細胞の認識が、ＨＬＡクラスＩ相互作用に依存することを実証する。
実施例９．ｅｘ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞のＴＩＬクリアランス
患者の自家黒色腫腫瘍細胞を、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅインピーダンスアッセイウェルプレートに１０，０００細胞／ウェルで播種した。翌日、対照培地またはＭＲＭで増殖させた適合するＴＩＬを、１：１、２：１、及び４：１を含む、様々なエフェクターＴ細胞（Ｅ）対腫瘍細胞（Ｔ）の比でプレートに添加した。腫瘍細胞のＴＩＬクリアランスを、経時的に監視した。図１６は、ＭＲＭで培養されたＴＩＬが、幅広い相対用量にわたって、対照培地で培養されたＴＩＬと比較して、ｅｘ ｖｉｖｏアッセイにおいて優れた腫瘍細胞溶解を示し、完全な腫瘍根絶をもたらすＭＲＭで培養されたエフェクターＴ細胞対腫瘍細胞の比が４：１であることを示す。
実施例１０．ｅｘ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞のＴＩＬクリアランス
本明細書で開示の方法に従って、標準的なＴＩＬ増殖法の後に生成された非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ＴＩＬを、ＭＲＭで生成されたＴＩＬと比較した。対照プロセスは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が高度に富化されたＴＩＬを生成したが、これらの細胞は、幹様ＣＤ８＋ＣＤ３９－ＣＤ６９－Ｔ細胞集団が富化されず、低レベルのセントラルメモリーマーカー及び共刺激受容体ＣＤ２７を発現した（図１７Ａ～１７Ｄ）。対照増殖プロセスにより、幹様ＣＤ８＋ＣＤ３９－ＣＤ６９－Ｔ細胞が富化され且つ共刺激受容体ＣＤ２７の発現が高いＴ細胞生成物が生成されたが、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖は低減した。ＭＲＭで培養されたＴＩＬにより、高度に富化されたＣＤ８＋Ｔ細胞集団が生成され、ＣＤ８＋ＣＤ３９－ＣＤ６９－幹様Ｔ細胞、セントラルメモリーマーカー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ６２Ｌ＋）、及び著しく高度に発現した共刺激受容体ＣＤ２７の存在量が増加していた（図１７Ｅ～１７Ｈ）。一括して、これらのマーカーは臨床応答と相関している幹様細胞の属性を示す。
主要な共刺激受容体ＣＤ２７の保持、伸長したテロメア、メモリー細胞の表現型、及びＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＣＤ８＋Ｔ細胞が富化された細胞集団の存在を含む、幹様特性が増強されたＴＩＬ生成物は、臨床応答の改善と関連する。多機能性サイトカインを分泌する能力及び共刺激受容体ＣＤ２８の発現を含む、Ｔ細胞のさらなる分化状態と関連する特徴も、抗腫瘍効力と相関している。ＭＲＭで増殖させたＴＩＬは、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、及び結腸直腸癌における対照ＴＩＬ増殖プロセスと比較された場合、ＣＤ８＋ＣＤ３９－ＣＤ６９－Ｔ細胞の存在量の増加を含む、好ましい表現型属性を示す（図１８Ａ～１８Ｃ）。
実施例１１．ＭＲＭにおけるＴＩＬ培養
本明細書に提示されるデータは、増加したカリウムを含む培養培地でＴＩＬを培養することは、より低いレベルのカリウム（例えば、約４０ｍＭ未満のカリウムイオン、例えば、５ｍＭのカリウムイオン）を有する培地で培養されたＴＩＬと比較して、ＣＤ８＋ＴＩＬの増殖が増加し、幹細胞性が増加したＴＩＬ集団を生成する。さらに、データは、培養培地中の非常に高レベルのカリウム（例えば、約８０ｍＭを超える、約９０ｍＭを超える、または約１００ｍＭを超えるカリウムイオン）は、ＴＩＬ成長及び増殖の減少に起因する可能性が高いＴＩＬ収量の減少につながり得ることを示唆する。データは示されない。さらに、ＴＩＬ培養へのＭＲＭの影響を特性評価するために、（１）ＴＩＬは、初期増殖段階において、対照培地（５５ｍＭのカリウムイオンを含む等張ＲＰＭＩ配合物）で培養され、続いて、最終増殖段階において、５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のカリウムイオン及び５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のＮａＣｌを含むＭＲＭ培地で培養されるであろう；（２）ＴＩＬは、初期増殖段階において、５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のカリウムイオン及び５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のＮａＣｌを含むＭＲＭ培地で培養され、続いて、最終増殖段階において、対照培地で培養されるであろう；（３）ＴＩＬは、初期増殖段階において、５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のカリウムイオン及び５０～７０ｍＭのＮａＣｌを含むＭＲＭ培地で培養され、続いて、最終増殖段階において、５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ）のカリウムイオン及び５０～７０ｍＭ（例えば、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、または７０ｍＭ））のＮａＣｌを含むＭＲＭ培地で培養されるであろう。全ての実験において、初期培養条件は、さらに、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含み、最終培養条件は、さらに、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。本方法に従って培養されたＴＩＬは、幹細胞性及びエフェクターマーカーの発現、細胞傷害性、及び収量について特性評価されるであろう。
実施例１２ クローン多様性の分析
ＭＲＭで培養されたＴＩＬのクローン多様性を評価するために、上記に開示された方法に従って、腫瘍断片及び腫瘍断片から得られたＴＩＬを、対照培地または代謝再プログラミング培地（ＭＲＭ）のいずれかで培養した。ＤＮｅａｓｙ血液組織キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、全ゲノムＤＮＡを、腫瘍及びＴＩＬ試料から単離し、ＴＣＲβ及びＣＤＲ３領域についてＩｍｍｕｎｏ－ｓｅｑ（Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を使用してシーケンシングした。
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び黒色腫試料の多様性メトリクスを、シンプソンのクローン性√Σｐｉ２（式中、ｐｉは、所定の試料におけるクローンｉの比例的な存在量である）で評価した。腫瘍断片（「腫瘍」）、対照培地で培養されたＴＩＬ（「対照」）、及びＭＲＭで培養されたＴＩＬ（「ＭＲＭ」）において、シンプソンのクローン性及び生産的再構成をＮＳＣＬＣ及び黒色腫について試験した（図１９Ａ及び図１９Ｂ、それぞれ）。（増殖後に）ＭＲＭで培養されたＴＩＬは、ＮＳＣＬＣについては約０．２８、黒色腫については約０．３８のシンプソンのクローン性を示し、これは高いクローン多様性を示す（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。ＴＣＲβの多様性の維持は、腫瘍に浸潤するＴＩＬクロノタイプの保存を表し、腫瘍反応性である。対照的に、対照培地で培養されたＴＩＬは、クローン多様性を著しく失い、ＮＳＣＬＣについては約０．６５、黒色腫については約０．８のシンプソンのクローン性を示した（すなわち、多様性が著しく低いクローン性、これは、多くの腫瘍反応性クローンが対照培地を使用した培養プロセスで失われることを示す）（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。
発明の概要セクション及び要約セクションではなく、発明を実施するための形態セクションが、特許請求の範囲を解釈するために使用されること意図されることを理解すべきである。発明の概要セクション及び要約セクションは、発明者（複数可）が企図する、全てではなく１つ以上の本開示の例示的実施形態について記載し得るが、それにより、決して、本開示及び添付の特許請求の範囲を限定することが意図されるものではない。
本開示は、特定の機能及びそれらの関係の実装を示す機能構成単位を用いて上で説明されている。これらの機能構成単位の境界は、便宜上説明のために、本明細書では適宜定義されている。指定された機能及びその関係が適切に実行される限り、代替境界を定義することができる。
特定の実施形態の上述の説明は、本開示の一般的な性質を完全に明らかにするものであり、他の者は、当業者の技能範囲内の知見を適用することにより、本開示の一般的な概念を逸脱することなく、過度の実験を行うことなく、容易に修正し、及び／または様々な用途にそのような特定の実施形態を適用させ得る。それ故、そのような適応及び修正は、本明細書に提示された教示及び指針に基づいて、開示の実施形態の均等物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書の語法または用語は、説明のためのものであり、限定のためのものではなく、その結果、本明細書の用語または語法は、教示及び指針に照らして当業者により解釈されるべきであることを理解すべきである。
本開示の幅及び範囲は、上述の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきでないが、特許請求の範囲及びその等価物に従ってのみ定義されるべきである。
本出願を通じて引用される全ての参考文献（参考文献、米国または外国の特許または特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容は、引用された参考文献と同様に、あらゆる目的のために、全体が本明細書に記載されているかのように、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。いかなる矛盾が生じた場合も、文字通り本明細書に開示の内容が優先される。

Claims (155)

  1. 腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養する方法であって、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含む代謝再プログラミング培地（「ＭＲＭ」）中に不均一なＴＩＬ集団を配置することを含む、前記方法。
  2. 前記ＭＲＭに配置された後に、前記不均一なＴＩＬ集団のＣＤ８＋ＴＩＬが富化されている、請求項１に記載の方法。
  3. ＣＤ８＋ＴＩＬの数または割合をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで増加させる方法であって、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭで不均一なＴＩＬ集団を培養することを含む、前記方法。
  4. ＣＤ８＋富化ＴＩＬ集団を調製する方法であって、約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭで不均一なＴＩＬ集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む、前記方法。
  5. 前記不均一なＴＩＬ集団が、ＣＤ４＋ＴＩＬ及びＣＤ８＋ＴＩＬを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記不均一なＴＩＬ集団が、対象から得られた１つ以上の腫瘍試料から得られる、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記腫瘍試料を、初期ＴＩＬ培養にかける、請求項６に記載の方法。
  8. 前記初期ＴＩＬ培養が、前記ＭＲＭで前記腫瘍試料を培養することを含む、請求項７に記載の方法。
  9. 前記ＭＲＭが、さらに、前記初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－２を含む、請求項８に記載の方法。
  10. 前記ＭＲＭが、さらに、前記初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記ＭＲＭが、前記初期ＴＩＬ培養中にＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む、請求項８～１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記初期ＴＩＬ培養が、少なくとも約１４～１９日間継続する、請求項７～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記初期ＴＩＬ培養が、少なくとも約１４日間継続する、請求項７～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比が、前記初期ＴＩＬ培養前の前記ＣＤ８＋ＴＩＬ対非ＣＤ８＋ＴＩＬの比と比較して、初期ＴＩＬ培養後に増加する、請求項７～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記ＴＩＬが、前記初期ＴＩＬ培養後に刺激される、請求項７～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記ＴＩＬが、ＣＤ３アゴニスト及び／またはＣＤ２８アゴニストと共に前記ＴＩＬを培養することにより刺激される、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記腫瘍試料が、腫瘍生検を含む、請求項６～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記腫瘍試料が、培養前に断片化される、請求項６～１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記不均一なＴＩＬ集団の培養後に、前記集団中の前記ＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記不均一なＴＩＬ集団の培養後に、前記集団中の前記ＴＩＬの少なくとも約５０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記ＭＲＭが、さらに、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記ＭＲＭが、さらに、細胞増殖剤を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記細胞増殖剤が、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記ＡＫＴ阻害剤が、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４に記載の方法。
  26. カリウムイオンの前記濃度が、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭである、請求項３～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. カリウムイオンの前記濃度が、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約９０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである、請求項３～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. カリウムイオンの前記濃度が、約４０ｍＭ～約９０ｍＭである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. カリウムイオンの前記濃度が、約５０ｍＭ～約９０ｍＭである、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. カリウムイオンの前記濃度が、約５０ｍＭ～約８０ｍＭである、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記ＭＲＭが、さらに、ナトリウムイオンを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記ナトリウムイオン濃度が、約２５ｍＭ～約１００ｍＭである、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ナトリウムイオン濃度が、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである、請求項３１または３２に記載の方法。
  34. 前記ナトリウムイオン濃度が、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、または約８０ｍＭである、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記ナトリウムイオン濃度が、約５５ｍＭである、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記ナトリウムイオン濃度が、約６０ｍＭである、請求項３１～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記ナトリウムイオン濃度が、約６５ｍＭである、請求項３１～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記ＭＲＭが、さらに、グルコースを含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記グルコース濃度が、約１０ｍＭを超える、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記グルコース濃度が、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである、請求項３８または３９に記載の方法。
  41. 前記グルコース濃度が、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである、請求項３８～４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記ＭＲＭが、さらに、カルシウムイオンを含む、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記カルシウムイオン濃度が、約０．４ｍＭを超える、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記カルシウムイオン濃度が、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである、請求項４２または４３に記載の方法。
  45. 前記カルシウムイオン濃度が、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記ＭＲＭが、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン、及び
    （ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭのナトリウムイオン、
    （ｉｉ）約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコース、
    （ｉｉｉ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウムイオン、または
    （ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせ
    を含む、請求項１～４５のいずれか１項に記載の方法。
  47. ヒト対象から得られたＴＩＬを増殖させる方法であって、
    ａ．初期ＴＩＬ培養培地で前記ＴＩＬを培養すること、
    ｂ．二次ＴＩＬ培養培地で前記ＴＩＬを培養すること、
    ｃ．三次（または最終）ＴＩＬ培養培地で前記ＴＩＬを培養すること、を含む、
    前記初期ＴＩＬ培養培地、前記二次ＴＩＬ増殖培地、及び／または前記三次ＴＩＬ増殖培地が、ＭＲＭである、前記方法。
  48. 前記初期ＴＩＬ培養培地及び前記二次ＴＩＬ増殖培地が、高カリウム性であり、前記三次ＴＩＬ増殖培地が、高カリウム性ではない、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記初期ＴＩＬ培養培地が、さらに、ＩＬ－２を含む、請求項４７または４８に記載の方法。
  50. 前記初期ＴＩＬ培養培地が、さらに、ＩＬ－２１を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記初期ＴＩＬ培養培地が、さらに、Ｔ細胞サプリメント、血清代替物、グルタミン、グルタミン代替物（例えば、Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌ－アラニン－Ｌ－グルタミン））、必須アミノ酸、抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、もしくはその両方）、抗真菌剤（例えば、Ｆｕｎｇｉｎ（商標））、及び／またはピルビン酸ナトリウムを含む、請求項４７～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記ＴＩＬが、前記初期ＴＩＬ培養培地で少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、または少なくとも約３週間培養される、請求項４７～５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記初期培養における細胞収量が、少なくとも約１×１０５、少なくとも約２×１０５、少なくとも約３×１０５、少なくとも約４×１０５、少なくとも約５×１０５、少なくとも約６×１０５、少なくとも約７×１０５、少なくとも約８×１０５、少なくとも約９×１０５、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１０×１０６の細胞／断片に達するまで、前記ＴＩＬが、前記初期ＴＩＬ培養培地で培養される、請求項４７～５２のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記ＴＩＬが、（ｂ）の前記二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、ＣＤ３アゴニスト、ＣＤ２８アゴニスト、またはその両方で刺激される、請求項４７～５３のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記ＴＩＬが、さらに、前記二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、ＣＤ２７アゴニストで刺激される、請求項４７～５４のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記ＴＩＬが、さらに、前記二次ＴＩＬ培養培地で、またはその前に、４－１ＢＢアゴニストで刺激される、請求項４７～５５のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記ＴＩＬが、前記刺激後の少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、または少なくとも約２６日間培養される、請求項５３～５６のいずれか１項に記載の方法。
  58. 細胞収量が少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約３×１０７、少なくとも約４×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約６×１０７、少なくとも約７×１０７、少なくとも約８×１０７、少なくとも約９×１０７、少なくとも約１０×１０７、少なくとも約１１×１０７、少なくとも約１２×１０７、少なくとも約１３×１０７、少なくとも約１４×１０７、少なくとも約１５×１０７、少なくとも約１６×１０７、少なくとも約１７×１０７、少なくとも約１８×１０７、少なくとも約１９×１０７、または少なくとも約２０×１０７の細胞に達するまで、前記ＴＩＬが、前記二次培養培地で培養される、請求項４７～５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記ＴＩＬが、前記三次ＴＩＬ培養培地で、ＣＤ３アゴニスト、ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、及び／または４－１ＢＢアゴニストで刺激される、請求項４７～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記三次ＴＩＬ培養培地が、高カリウム性ではない、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記ＴＩＬが、前記三次ＴＩＬ培養培地で、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、または少なくとも約２１日間培養される、請求項５９または６０に記載の方法。
  62. 腫瘍反応性ＴＩＬを増加させる方法であって、
    ａ．高カリウム性であり、ＩＬ－２及び任意にＩＬ－２１を含む初期ＴＩＬ培養培地で、１つ以上の腫瘍断片を最大約１４～１９日間培養し、それにより、前記腫瘍断片からＴＩＬを取得すること、
    ｂ．（ｉ）ＣＤ３アゴニスト、及び、（ｉｉ）ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを添加した後に、高カリウム性である二次ＴＩＬ培養培地で前記ＴＩＬを約７～少なくとも約１４日間培養すること、
    ｃ．（ｉ）ＣＤ３アゴニスト、及び、（ｉｉ）ＣＤ２８アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを添加した後に、高カリウム性ではない三次ＴＩＬ培養培地で前記ＴＩＬを約１４日間～少なくとも約２１日間培養すること、
    を含む、前記方法。
  63. 前記ＴＩＬが、高カリウム性ではない対照培地での培養後のＴＩＬ集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、前記ＭＲＭでの培養後にＴＣＦ７発現の増加を示す、請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記ＴＩＬ集団が、高カリウム性ではない対照培地での培養後のＣＤ８＋ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬの割合と比較して、前記ＭＲＭでの培養後のＣＤ８＋ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬの割合が増加している、請求項１～６３のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記ＴＩＬ集団が、高カリウム性ではない対照培地での培養後のＣＤ８＋ＰＤ１＋ＴＩＬの割合と比較して、前記ＭＲＭでの培養後のＣＤ８＋ＰＤ１＋ＴＩＬの割合が増加している、請求項１～６４のいずれか１項に記載の方法。
  66. 請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法に従って培養された１つ以上のＣＤ８＋ＴＩＬを含む、免疫細胞の組成物。
  67. 前記免疫細胞の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項６６に記載の組成物。
  68. 免疫細胞集団を含む組成物であって、前記免疫細胞の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、前記組成物。
  69. 前記細胞の少なくとも約５０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項６６～６８のいずれか１項に記載の組成物。
  70. 前記細胞が、高カリウム性ではない対照培地での培養後の免疫細胞集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、前記ＭＲＭでの培養後にＴＣＦ７発現の増加を示す、請求項６６～６９のいずれか１項に記載の組成物。
  71. 前記免疫細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％が、ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬである、請求項６６～７０のいずれか１項に記載の組成物。
  72. 前記初期ＴＩＬ培養の最後に得られた前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋である、請求項６６～７１のいずれか１項に記載の組成物。
  73. 前記初期ＴＩＬ培養の最後に得られた前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ３９＋である、請求項６６～７２のいずれか１項に記載の組成物。
  74. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋である、請求項６６～７３のいずれか１項に記載の組成物。
  75. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２８＋である、請求項６６～７４のいずれか１項に記載の組成物。
  76. 前記初期ＴＩＬ培養の最後に得られた前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋ＣＤ３９＋である、請求項６６～７５のいずれか１項に記載の組成物。
  77. 前記初期ＴＩＬ培養の最後に得られた前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋ＣＤ２７＋である、請求項６６～７６のいずれか１項に記載の組成物。
  78. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋ＣＤ６２Ｌ＋である、請求項６６～７７のいずれか１項に記載の組成物。
  79. 前記初期ＴＩＬ培養の最後に得られた前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＣＤ１０３＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋である、請求項６６～７８のいずれか１項に記載の組成物。
  80. 少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７の細胞を含む、請求項６６～７９のいずれか１項に記載の組成物。
  81. 少なくとも約１×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７のＣＤ８＋細胞を含む、請求項６６～８０のいずれか１項に記載の組成物。
  82. 処置を必要とする対象のがんを処置する方法であって、ＴＩＬ集団を前記対象に投与することを含み、前記ＴＩＬ集団が、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法に従って培養される、前記方法。
  83. 前記ＴＩＬ集団が、ＣＤ８＋ＴＩＬについて富化されている、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記ＴＩＬ集団中の前記ＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項８２または８３に記載の方法。
  85. 前記ＴＩＬ集団中の前記ＴＩＬの少なくとも約５０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  86. 処置を必要とする対象のがんを処置する方法であって、請求項６６～７１のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
  87. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項８２～８６のいずれか１項に記載の方法。
  88. 前記がんが、黒色腫、結腸癌、肺癌、子宮頸癌、胃腸癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、骨癌、膵臓癌、頭頸部の小細胞癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、精巣胚細胞腫瘍、胃腺癌、皮膚の皮膚黒色腫、中皮腫、腎臓の腎明細胞癌、子宮頸部扁平上皮癌及び子宮頸管内腺癌、食道癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤乳癌、腎臓の乳頭状腎細胞癌、結腸腺癌、またはそれらの任意の組み合わせに由来する固形腫瘍を含む、請求項８２～８７のいずれか１項に記載の方法。
  89. 少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、または少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１０×１０１０、または少なくとも約１５×１０１０、または少なくとも約２０×１０１０、または少なくとも約２５×１０１０、または少なくとも約３０×１０１０の細胞を前記対象に投与することを含む、請求項８２～８８のいずれか１項に記載の方法。
  90. 少なくとも約１×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、または少なくとも約１×１０９のＣＤ８＋細胞を前記対象に投与することを含む、請求項８２～８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. さらに、チェックポイント阻害剤を投与することを含む、請求項８２～９０のいずれか１項に記載の方法。
  92. 前記チェックポイント阻害剤が、前記細胞集団を投与した後に、前記対象に投与される、請求項９１に記載の方法。
  93. 前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９１または９２に記載の方法。
  94. 前記チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９１～９３のいずれか１項に記載の方法。
  95. さらに、チェックポイント活性化剤を投与することを含む、請求項９２～９４のいずれか１項に記載の方法。
  96. 前記チェックポイント阻害剤が、前記ＴＩＬ集団を投与した後に、前記対象に投与される、請求項９０～９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 前記チェックポイント活性化剤が、ＯＸ４０アゴニスト、ＬＡＧ－３アゴニスト、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＴＩＭ３アゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９５または９６に記載の方法。
  98. 前記チェックポイント活性化剤が、抗ＯＸ４０抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＴＩＭ３抗体、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９５または９６に記載の方法。
  99. さらに、サイトカインを投与することを含む、請求項９２～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記サイトカインが、前記ＴＩＬ集団を投与した後に、前記対象に投与される、請求項９９に記載の方法。
  101. 前記サイトカインが、ＩＬ－２である、請求項９９または１００に記載の方法。
  102. 前記細胞集団を投与する前に、さらに、前記対象にリンパ球除去療法を投与することを含む、請求項９９～１０１のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記リンパ球除去療法が、シクロホスファミド、フルダラビン、またはシクロホスファミド及びフルダラビンの両方を含む、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記不均一なＴＩＬ集団が、対照培地に配置された不均一なＴＩＬ集団のクローン多様性と比較して、前記ＭＲＭに配置された後にクローン多様性の増加を有する、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法。
  105. 前記ＭＲＭに配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、腫瘍試料中のＴＩＬの前記クローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する、請求項１～６５及び１０４のいずれか１項に記載の方法。
  106. 前記ＭＲＭに配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項１～６５、１０４、及び１０５のいずれか１項に記載の方法。
  107. 前記ＭＲＭ内に配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、約０．３未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項１～６５及び１０４～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記ＭＲＭ内に配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、約０．２５未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項１～６５及び１０４～１０７のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記ＭＲＭ内に配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、約０．２未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項１～６５及び１０４～１０８のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記ＭＲＭ内に配置された後の前記不均一なＴＩＬ集団が、約０．１未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項１～６５及び１０４～１０９のいずれか１項に記載の方法。
  111. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、腫瘍試料中のＴＩＬの前記クローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する、請求項６６～８１のいずれか１項に記載の組成物。
  112. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項６６～８１及び１１１のいずれか１項に記載の組成物。
  113. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、約０．３未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項６６～８１、１１１、及び１１２のいずれか１項に記載の組成物。
  114. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、約０．２５未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項６６～８１及び１１１～１１３のいずれか１項に記載の組成物。
  115. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、約０．２未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項６６～８１及び１１１～１１４のいずれか１項に記載の組成物。
  116. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬが、約０．１未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、請求項６６～８１及び１１１～１１５のいずれか１項に記載の組成物。
  117. 腫瘍試料中のＴＩＬの前記クローン多様性の少なくとも約９９％～約１００％、少なくとも約９８％～約１００％、少なくとも約９７％～約１００％、少なくとも約９６％～約１００％、少なくとも約９５％～約１００％、少なくとも約９４％～約１００％、少なくとも約９３％～約１００％、少なくとも約９２％～約１００％、少なくとも約９１％～約１００％、少なくとも約９０％～約１００％、少なくとも約８５％～約１００％、少なくとも約８０％～約１００％、少なくとも約７５％～約１００％、少なくとも約７０％～約１００％、少なくとも約６５％～約１００％、少なくとも約６０％～約１００％、少なくとも約５５％～約１００％、少なくとも約５０％～約１００％、少なくとも約４５％～約１００％、または少なくとも約４０％～約１００％であるクローン多様性を有する、増殖ＴＩＬ集団。
  118. 増殖ＴＩＬ集団であって、約０．５未満、約０．４５未満、約０．４未満、約０．３５未満、約０．３未満、約０．２７５未満、約０．２５未満、約０．２２５未満、約０．２未満、約０．１７５未満、約０．１５未満、約０．１２５未満、約０．１未満、約０．０７５未満、約０．０７未満、約０．０６未満、または約０．０５未満の、シンプソンのクローン性で測定されたクローン多様性スコアを有する、前記増殖ＴＩＬ集団。
  119. シンプソンのクローン性で測定された前記クローン多様性スコアが、約０．３未満である、請求項１１７または１１８に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  120. シンプソンのクローン性で測定された前記クローン多様性スコアが、約０．２５未満である、請求項１１７～１１９のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  121. シンプソンのクローン性で測定された前記クローン多様性スコアが、約０．２未満である、請求項１１７～１２０のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  122. シンプソンのクローン性で測定された前記クローン多様性スコアが、約０．１未満である、請求項１１７～１２１のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  123. 少なくとも約２×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７の細胞を含む、請求項１１７～１２２のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  124. 少なくとも約１×１０６、少なくとも約３×１０６、少なくとも約４×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約６×１０６、少なくとも約７×１０６、少なくとも約８×１０６、少なくとも約９×１０６、または少なくとも約１×１０７のＣＤ８＋細胞を含む、請求項１１７～１２３のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  125. 前記増殖ＴＩＬの少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項１１７～１２４のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  126. 前記増殖ＴＩＬの少なくとも約５０％が、ＣＤ８＋ＴＩＬである、請求項１１７～１２５のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  127. 前記増殖ＴＩＬが、高カリウム性ではない対照培地で培養された後の免疫細胞の集団におけるＴＣＦ７発現と比較して、前記ＭＲＭで培養された後にＴＣＦ７の発現の増加を示す、請求項１１７～１２６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  128. 前記増殖ＴＩＬの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％が、ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋ＴＩＬである、請求項１１７～１２７のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  129. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋である、請求項１２４～１２８のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  130. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ３９＋である、請求項１２４～１２９のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  131. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋である、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  132. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２８＋である、請求項１２４～１３１のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  133. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋ＣＤ３９＋である、請求項１２４～１３２のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  134. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＰＤ１＋ＣＤ２７＋である、請求項１２４～１３３のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  135. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋ＣＤ６２Ｌ＋である、請求項１２４～１３４のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  136. 前記ＣＤ８＋ＴＩＬの少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％が、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋ＣＤ１０３＋ＰＤ１＋ＴＣＦ７＋である、請求項１２４～１３５のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  137. 処置を必要とする対象のがんを処置する方法であって、請求項１１１～１１６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団を投与することを含む、前記方法。
  138. １つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する少なくとも１つの免疫細胞を含む、請求項６６～８１及び１１１～１１６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  139. 前記幹様マーカーが、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６６～８１、１１１～１１６、及び１３８のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６及び１３８のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  140. 前記エフェクター様マーカーが、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６６～８１、１１１～１１６、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  141. 組成物または集団中の増殖ＴＩＬの少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％が、１つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する少なくとも１つの免疫細胞を含む、請求項６６～８１、１１１～１１６、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  142. １つ以上の幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを含む、ＴＩＬ。
  143. 前記幹様マーカーが、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１４２に記載のＴＩＬ。
  144. 前記エフェクター様マーカーが、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１４２または１４３に記載のＴＩＬ。
  145. 請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載のＴＩＬを含む、増殖ＴＩＬ集団。
  146. 前記増殖ＴＩＬ細胞の少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％が、請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載のＴＩＬを含む、請求項１４５に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  147. 請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載のＴＩＬ、または請求項１４５もしくは１４６に記載の増殖ＴＩＬ集団、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  148. 処置を必要とする対象の疾患または症状を処置する方法であって、請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載のＴＩＬ、請求項１４５もしくは１４６に記載の増殖ＴＩＬ集団、または請求項１４７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  149. 前記疾患または状態が、がんである、請求項１４８に記載の方法。
  150. 前記がんが、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌、子宮頸癌、卵巣癌、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１４９に記載の方法。
  151. 好適な条件下の培養培地で前記免疫細胞を培養することを含む、請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載のＴＩＬを調製する方法。
  152. 前記ＭＲＭが、ＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの合計濃度が、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである、請求項１～６５、８２～１１０、及び１３７のいずれか１項に記載の方法、請求項６６～８１、１１１～１１６、及び１３８～１４１のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  153. 前記ＴＩＬ集団が、対照培地での培養後のＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬの割合と比較して、前記ＭＲＭでの培養後のＣＤ３９－／ＣＤ６９－ＴＩＬの割合が増加している、請求項１～６５、８２～１１０、及び１３７のいずれか１項に記載の方法、請求項６６～８１、１１１～１１６、及び１３８～１４１のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  154. 前記ＴＩＬ集団におけるＴＩＬの総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％が、ＣＤ３９－／ＣＤ６９－である、請求項１～６５、８２～１１０、及び１３７のいずれか１項に記載の方法、請求項６６～８１、１１１～１１６、及び１３８～１４１のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１１７～１３６のいずれか１項に記載の増殖ＴＩＬ集団。
  155. 前記初期培養が、少なくとも約１１日間継続する、請求項７～６５、８２～１１０、及び１３７のいずれか１項に記載の方法。
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