JP2023549265A - 脂質ナノ粒子ｍＲＮＡワクチンの安定化のための組成物および方法 - Google Patents

脂質ナノ粒子ｍＲＮＡワクチンの安定化のための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、脂質ナノ粒子ｍＲＮＡ組成物(例えば、ワクチン)の安定化に関連するテクノロジーを提供する。

Description

背景
メッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)は面白い治療モダリティであることが判明しており、特にワクチンスペースにおいて相当に最近注目が集まっている。
要約
本発明は、ＲＮＡ(例えば、ｍＲＮＡ)治療の製剤および特にＲＮＡ(例えば、ｍＲＮＡ)ペイロードを含む脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)製剤に関するテクノロジーを提供する。とりわけ、本発明は、約－８０℃より高いまたは約－７０℃、約－６０℃、約－５０℃、約－４０℃、約－３０℃もしくは約－２０℃より高い温度での貯蔵および／または取り扱いに適している(例えば、安定な)治療ＲＮＡ製剤(すなわち、ＬＮＰ製剤)を提供する。ある実施態様において、提供される製剤は、凍結より高い(例えば、約０℃より高い)温度、標準的冷蔵温度(例えば、約１℃～約８℃または約２℃～約８℃または約２℃～約６℃または約２℃～約４℃の範囲内)および／または室温(例えば、約１５℃～約２５℃または約２０℃～約２３℃の範囲内)での貯蔵および／または取り扱いに適している可能性がある。
ある実施態様において、本発明は、乾燥に適するおよび／または乾燥物である(例えば、凍結乾燥製剤である)製剤を提供する。
本発明は、特にワクチンとして(および／またはその製造に)有用である、ある製剤を提供する。
ある実施態様において、本発明は、ウイルス抗原(例えば、Ｓ－タンパク質またはそのエピトープなどのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗原)をコードするＲＮＡの製剤(および特にＬＮＰ製剤)を提供する。特に例示される製剤は、ＢＮＴ１６２構築物であるＲＮＡ構築物を含む(例えば、Walsh, E. et al. RNA-Based COVID-19 Vaccine BNT162b2 Selected for a Pivotal Efficacy Study. medRxiv (2020))、例えば、ＢＮＴ１６２ｂ２；および２０２０年１１月１２日に出願され、“Coronavirus Vaccine”なる表題のＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０８１９８１参照(これら各々の内容は、引用により、ここに記載する目的で、内容を本明細書に包含させる))。
ある態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；(ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および(ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；(ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および(ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；(ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および(ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む乾燥製剤である。
ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである、工程
を含む、方法である。
ある実施態様において、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤は、
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される。
ある態様において、ここに提供されるのは、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、(ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；(ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含む、ＬＮＰ；(ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；および(ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；(ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；およびｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；(ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；および(ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が：
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである、工程
を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤は投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
(ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；
ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程
を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、(ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法は、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである、工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；
ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；
ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；
ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤は、
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液を含む。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；および
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液を含む、凍結製剤である。
ある実施態様において、ここに提供する製剤は、ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液を含む、乾燥製剤である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法は
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤の投薬形態を投与する工程を含む、方法であって、ここで、製剤が
ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
を含むＬＮＰ；
ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
ｃ)約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液
を含み；
ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法である。
ある実施態様において、ここに記載するこのような製剤を提供する方法もここに記載される。ある実施態様において、ここに提供されるのは、製剤を調製する方法であって、
ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが
ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
を含むものである工程；および
ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液；および
ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
を含み、第一緩衝液系が約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースを含むものである工程を含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、対象における細胞に核酸を送達する方法であって、上に記載する何れかの製剤を投与することを含む、方法である。
ある実施態様において、ここに提供されるのは、対象における免疫応答を誘導する方法であって、上に記載する何れかの製剤を投与することを含む、方法である。
定義
本明細書において、文脈から明らかではない限り、(ｉ)単数表現は、「少なくとも１つ」を意味すると理解し得て；(ii)用語「または」は「および／または」を意味すると理解し得て；(iii)用語「含む」および「包含する」は、個条書きした成分または工程を、それだけでまたは１以上のさらなる成分または工程と共に存在するかに関係なく、包含すると理解され得て；そして(iv)用語「約」および「おおよそ」は当業者により理解される標準偏差を許容すると理解され得て；そして(ｖ)範囲が示されるとき、終端が包含される。
投与：ここで使用する用語「投与」は、対象への粗製物の投与をいう。例示的投与経路は、気管支(気管支注入を含む)、バッカル、経腸、皮間、動脈内、皮内、胃内、脊髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、粘膜、経鼻、経口、直腸、皮下、舌下、局所、気管(気管内注入を含む)、経皮、膣および硝子体を含み得る。多くの実施態様において、提供されるテクノロジーは、筋肉内注射により投与される、ＬＮＰ組成物(例えば、ＢＮＴ１６２構築物を含む)に関する。ある実施態様において、ＬＮＰ組成物は、第一投与、続いて１以上の投与(例えば、１以上のブースター投与)で投与される。ある実施態様において、ＬＮＰ組成物の各投与、例えば、第一投与と第二投与の間は、一定期間、例えば、約１週間、２週間、３週間、４週間またはそれ以上を含み、約２４時間、４８時間、７２時間、９６時間またはそれ以上離れる。ある実施態様において、一定期間離された投与は約３週間(例えば、約２１日)である。
抗体剤：ここで使用する用語「抗体剤」は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤をいう。ある実施態様において、本用語は、特異的結合をさせるのに十分な免疫グロブリン構造要素を含む、あらゆるポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的抗体剤は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗体剤は、マウス、ウサギ、霊長類またはヒト抗体に特徴的な１以上の定常領域配列を含み得る。ある実施態様において、抗体剤は、当分野で知られるとおり、ヒト化、霊長類化、キメラなどの１以上の配列要素を含み得る。多くの実施態様において、用語「抗体剤」は、別の提示で抗体構造的および機能的性質を利用するための、当分野で知られるまたは開発された構築物または形式の１以上をいうために使用される。例えば、実施態様において、本発明で使用される抗体剤は、インタクトＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体；二または多特異的抗体(例えば、Ｚｙｂｏｄｙ(登録商標)など)；Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメントおよび単離ＣＤＲまたはそれらのセットなどの抗体フラグメント；一本鎖Ｆｖｓ；ポリペプチド－Ｆｃ融合体；単一ドメイン抗体(例えば、ＩｇＮＡＲなどのサメ単一ドメイン抗体またはそのフラグメント)；ラクダ科抗体；マスクされた抗体(例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ(登録商標))；小モジュール免疫薬(Small Modular ImmunoPharmaceuticals)(「ＳＭＩＰＴＭ」)；一本鎖またはタンデム二重特異性抗体(ＴａｎｄＡｂ(登録商標))；ＶＨＨ；アンチカリン(登録商標)；Ｎａｎｏｂｏｄｙ(登録商標)ミニボディ；ＢｉＴＥ(登録商標)；アンキリン反復タンパク質またはＤＡＲＰＩＮ(登録商標)；アビマー(登録商標)；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；アドネクチン(登録商標)；アフィリン(登録商標)；トランスｂｏｄｙ(登録商標)；Ａｆｆｉｂｏｄｙ(登録商標)；ＴｒｉｍｅｒＸ(登録商標)；微小タンパク質；フィノマー(登録商標)、センチリン(登録商標)；およびＫＡＬＢＩＴＯＲ(登録商標)を含むが、これらに限定されないものから選択される、形式である。ある実施態様において、抗体は、天然に生じたならば、有している共有結合性修飾(例えば、グリカンの結合)を欠き得る。ある実施態様において、抗体は共有結合性修飾(例えば、グリカンの結合、ペイロード[例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など]または他のペンダント基[例えば、ポリ－エチレングリコールなど])を有し得る。多くの実施態様において、抗体剤は、アミノ酸配列が当業者により相補性決定領域(ＣＤＲ)として認識される１以上の構造要素を含む、ポリペプチドであるかまたはそれを含む；ある実施態様において、抗体剤は、アミノ酸配列が、参照抗体に見られるのと実質的に同一である少なくとも１個のＣＤＲ(例えば、少なくとも１個の重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１個の軽鎖ＣＤＲ)を含む、ポリペプチドであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して配列が同一であるかまたは１～５アミノ酸置換を含む点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を示す点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を示す点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、包含されるＣＤＲ内の少なくとも１個のアミノ酸が、参照ＣＤＲと比較して欠失、付加または置換されているが、包含されるＣＤＲが他の点では参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有する点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、包含されるＣＤＲ内の１～５アミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加または置換されるが、包含されるＣＤＲが他の点では参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有する点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、包含されるＣＤＲ内の少なくとも１個のアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して置換されるが、包含されるＣＤＲが他の点では参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有する点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、含まれるＣＤＲは、包含されるＣＤＲ内の１～５アミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加または置換されるが、包含されるＣＤＲが他の点では参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有する点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。ある実施態様において、抗体剤は、アミノ酸配列が当業者により免疫グロブリン可変ドメインとして認識される構造要素を含む、ポリペプチドであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、抗体剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同または大部分は相同である結合ドメインを有する、ポリペプチドタンパク質である。
抗原：ここで使用する用語「抗原」は、免疫応答を誘導する；および／または抗体またはＴ細胞受容体(例えば、ＭＨＣ分子に提示されたとき)に特異的に結合する、薬剤または部分をいう。ある実施態様において、抗原は、液性応答を誘導する(例えば、抗原特異的抗体の産生が関与するまたはそれを含むことがある)；ある実施態様において、抗原は細胞応答を誘発する(例えば、受容体が抗原と特異的に相互作用するＴ細胞が関与するまたはそれを含むことがある)。ある実施態様において、抗原は抗体に結合し、生物で特定の生理学的応答を誘導するかまたはしないことがある。一般に、抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ポリマーなどの、あらゆる化学物質であり得るかまたはそれを含み得る(ある実施態様において、生体ポリマー以外[例えば、核酸またはアミノ酸ポリマー以外)など]。ある実施態様において、抗原はポリペプチドまたはそのエピトープであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、抗原は組み換え抗原である。
関連：２個の事象または物体は、一方の存在、レベル、程度、タイプおよび／または形態が、他方と関連するならば、ここで使用される限り、互いに「関連」する。例えば、特定の物体(例えば、ポリペプチド、遺伝子特性、代謝物、微生物など)は、存在、レベルおよび／または形態が疾患、障害または状態(例えば、関連集団にわたり)の発生頻度および／または罹病性と関連するならば、特定の疾患、障害または状態と関連すると考えられる。ある実施態様において、２以上の物体は、互いに、直接的または間接的に、互いに物理的近位にあるおよび／またはそのままであるように相互作用するならば、物理的に「関連」する。ある実施態様において、互いに物理的に関連する２以上の物体は互いに共有結合で連結される；ある実施態様において、互いに物理的に関連する２以上の物体は互いに共有結合で連結されないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁力およびそれらの組み合わせの手段により、非共有結合で関連する。
組み合わせ療法：ここで使用する用語「組み合わせ療法」または「組み合わせて」投与される薬剤についての言及は、対象が２以上の治療レジメン(例えば、２以上の治療剤またはモダリティ)に同時に曝される状況をいう。ある実施態様において、２以上のレジメンは同時に投与され得る；ある実施態様において、このようなレジメンは逐次的に投与され得る(例えば、第一レジメンの全「用量」は、第二レジメンの何れかの用量の前に投与される)；ある実施態様において、このような薬剤は、重複投与計画で投与される。ある実施態様において、組み合わせ療法の「投与」は、１以上の薬剤またはモダリティの、他の薬剤またはモダリティを組み合わせて受ける対象への投与を含み得る。明確にするために、組み合わせ療法は、個々の薬剤を一緒に単一組成物で投与する必要はない(または当時に投与する必要性すらない)が、ある実施態様において、２以上の薬剤またはその活性部分を、一緒に組み合わせ組成物または組み合わせ化合物(例えば、単一化学複合体または共有結合性物の一部として)として投与し得る。
発現：ここで使用する核酸配列の「発現」は、次の事象の１以上をいう：(１)相補性核酸のテンプレート化された合成(例えば、ＤＮＡ配列からの、例えば、転写による、ＲＮＡテンプレートの産生)；(２)例えば、ｍＲＮＡを産生するためのＲＮＡ転写物のプロセシング(例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成および／または３’末端形成による)；(３)ＲＮＡ(例えば、ｍＲＮＡ)のポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；および／または(４)ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。ある状況で、「発現」は、テンプレート化された合成の複数工程を含み得ることを、当業者は認識する(例えば、ＤＮＡ鎖を産生するためのＲＮＡの逆転写、続いてそのようなＤＮＡ鎖の転写および／または所望により、例えば、二本鎖ＤＮＡを産生するための、相補性ＤＮＡ鎖の合成)。
製剤：「製剤」は、ここに記載するとおり、調製および／または提供される、組成物である。多くの実施態様において、用語「製剤」は、ＬＮＰ組成物－ すなわち、ここに記載するＲＮＡ(特にｍＲＮＡなどの治療ＲＮＡ)および脂質を含む － をいう。
フラグメント：ここに記載する物質または物体の「フラグメント」は、全体の個別の一部を含むが、全体に見られる１以上の部分を欠く、構造をいう。ある実施態様において、フラグメントはこのような個別の一部からなる。ある実施態様において、フラグメントは、全体に見られる特徴的構造的要素または部分からなるかまたはそれを含む。ある実施態様において、ポリマーフラグメントは、ポリマー全体(例えば、連続的関連で)に見られる、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の単量体単位(例えば、残基)を含むかまたはそれからなる。ある実施態様において、ポリマーフラグメントは、ポリマー全体に見られる単量体単位(例えば、残基)の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上を含むかまたはそれからなる。物質または物体全体は、ある実施態様において、フラグメントの「親」と称し得る。
機能的：ここで使用する用語「機能的」は、特定の性質および／または活性を示す物体の形態またはフラグメントをいう。ある実施態様において、このような「機能的」フラグメントの性質および／または活性は、その全体と同程度である。
同一性：ここで使用する用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子(例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子)間および／またはポリペプチド分子間の全体的関連性をいう。ある実施態様において、ポリマー分子は、配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一であるならば、互いに「実質的に同一」と考えられ得る。当業者には理解されるとおり、相同性の程度を決定するために、配列の比較を可能とする多様なアルゴリズムが利用可能であり、どの残基が異なる配列で互いに「対応する」かを考察するとき、一方の配列に他方に対して指定された長さのギャップを許容するものを含む。２個の核酸配列間のパーセント同一性の計算は、例えば、最適比較目的で２個の配列を整列させることにより、実施し得る(例えば、最適アラインメントのためにギャップを第一および第二核酸配列の一方または両方に導入でき、対応しない配列を比較目的で無視し得る)。ある実施態様において、比較目的で整列した配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または実質的に１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第一配列におけるある位置が、第二配列における対応する位置と同じヌクレオチドで占拠されているならば、これら分子は、その位置で同一である。２個の配列間のパーセント同一性は、２個の配列の最適アラインメントのために導入することが必要であったギャップ数および各ギャップ長を考慮に入れた、配列により共有される同一位置の関数である。２個のヌクレオチド配列間のパーセント同一性の決定に有用な代表的アルゴリズムおよびコンピュータプログラムは、例えば、ＡＬＩＧＮプログラム(version 2.0)に組み込まれている、Meyers and Miller (CABIOS, 1989, 4: 11-17)のアルゴリズムであり、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用する。２個のヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、あるいは、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ.ＣＭＰマトリクスを使用して決定し得る。
核酸：ここで使用する用語「核酸」は、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれ得るあらゆる化合物および／または物質をいう。ある実施態様において、核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるまたは組み込まれ得る化合物および／または物質である。文脈から明らかなとおり、ある実施態様において、「核酸」は、個々の核酸残基(例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド)をいう；ある実施態様において、「核酸」は、個々の核酸残基を含む、オリゴヌクレオチド鎖をいう。ある実施態様において、「核酸」は、ＲＮＡであるかまたはそれを含む；ある実施態様において、「核酸」は、ＤＮＡであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、核酸は、１以上の天然核酸残基であるか、それを含むかまたはそれからなる。ある実施態様において、核酸は、１以上の核酸アナログであるか、それを含むかまたはそれからなる。ある実施態様において、核酸アナログは、ホスホジエステル主鎖を利用しない点で、核酸と異なる。例えば、ある実施態様において、核酸は、当分野で知られ、主鎖にホスホジエステル結合ではなく、ペプチド結合を含み、本発明の範囲内であると考えられる、１以上の「ペプチド核酸」であるか、それを含むかまたはそれからなる。それとは別にまたはそれに加えて、ある実施態様において、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１以上のホスホロチオエートおよび／または５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合を有する。ある実施態様において、核酸は、１以上の天然ヌクレオシド(例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン)であるか、それを含むかまたはそれからなる。ある実施態様において、核酸は、１以上のヌクレオシドアナログ(例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ(６)－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、介在塩基およびそれらの組み合わせ)であるか、それを含むかまたはそれからなる。ある実施態様において、核酸は、天然核酸のものと比較して、１以上の修飾糖(例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース)を含む。ある実施態様において、核酸は、ＲＮＡまたはポリペプチドなどの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する；ある実施態様において、このようなヌクレオチド配列は、特定の宿主(例えば、レシピエント対象)での発現のために、コドン最適化され得る。ある実施態様において、コード配列を含む核酸は、１以上のイントロンも含む。ある実施態様において、コード配列を含む核酸は、イントロンを含まない。ある実施態様において、核酸は、天然源からの単離、相補性テンプレートに基づく重合による酵素合成(ある実施態様において、インビボ；ある実施態様において、インビトロ)、組み換え細胞または系での複製および化学合成の１以上により調製される。ある実施態様において、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００またはそれ以上の残基長である。
特異的：用語「特異的」は、活性を有する薬剤を参照してここで使用するとき、薬剤が潜在的標的物体または状態を区別することを意味すると当業者により理解される。例えば、ある実施態様において、薬剤は、１以上の競合する別の標的の存在下、標的に優先的に結合するならば、その標的に「特異的に」結合すると言い得る。多くの実施態様において、特異的相互作用は、標的物体の特定の構造的特性の存在に依存する(例えば、エピトープ、間隙、結合部位)。特異的は絶対的である必要がないことは理解される。ある実施態様において、特異的は、１以上の他の潜在的標的物体(例えば、競合剤)の結合剤との比較で評価し得る。ある実施態様において、特異的は、参照特異的結合剤との比較で評価し得る。ある実施態様において、特異的は参照非特異的結合剤との比較で評価し得る。ある実施態様において、薬剤または物体は、標的物体と結合する条件下で、競合する別の標的に検出可能に結合しない。ある実施態様において、結合剤は、競合する別の標的と比較して、標的物体に高オンレート、低オフレート、増加した親和性、減少した解離および／または増加した安定性で結合する。
安定な：用語「安定」は、ここでの組成物に適用されるとき、組成物が指定された一連の条件下で、一定期間にわたり物理的構造および／または活性の１以上の態様を維持することを意味する。ある実施態様において、期間は、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む少なくとも約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上である；ある実施態様において、指定された一連の条件は、低温閾値より高い温度であるかまたはそれを含む。ある実施態様において、低温閾値は約－８０℃、－７０℃、－５０℃、－３０℃、－２０℃、０℃、２℃、４℃、８℃、１５°、２０℃、３０℃、４０℃またはそれ以上である。ある実施態様において、組成物は、脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を含むコロイド状内容物の維持に基づき、安定であると考えられる。ある実施態様において、組成物は、１以上のＬＮＰ特徴(例えば、そのＺ平均および／または多分散指数(ＰＤＩ)を含むが、これらに限定されない)の維持に基づき、安定であると考えられる。ある実施態様において、組成物は、核酸完全性、核酸封入の程度(例えば、パーセント)および／または核酸発現度(例えば、例えば関連参照レベルのパーセントとして表され得るコード化ポリペプチドの発現レベル)の維持に基づき、安定であると考えられる。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、関連参照レベルと比較して、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約２０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、１９nm、１８nm、１７nm、１６nm、１５nm、１４nm、１３nm、１２nm、１１nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、関連参照レベルと比較して、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約１０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、９nm、８nm、７nm、６nm、５nm、４nm、３nm、２nm、１nm、０.５nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、関連参照レベルと比較して、核酸封入の少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)が、そのような組成物で維持されるならば、安定と考えられる。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、関連参照レベルと比較して、コード化ポリペプチドの発現レベルが少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)維持されるならば、安定と考えられる。
対象：ここで使用する用語「対象」または「患者」は、提供される組成物が、例えば、実験、診断、予防、美容および／または治療目的で投与されるまたは投与され得る、あらゆる生物をいう。典型的対象は、動物(例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類および／またはヒトなどの哺乳動物)である。ある実施態様において、対象はヒトである。ある実施態様において、対象１以上の障害または状態に罹患しているまたは易罹患性である。ある実施態様において、対象は障害または状態の１以上の症状を示す。ある実施態様において、患者は、１以上の障害または状態を有すると診断されている。ある実施態様において、対象は、ウイルス感染またはウイルス感染と関連する疾患もしくは障害のリスクがある。
実質的：ここで使用する用語「実質的」は、目的の特徴または性質の完全なまたはほぼ完全な範囲または程度を示す定性的状態をいう。生物学分野の当業者は、生物学的および化学的現象が、完了まで進むおよび／または完全性に向かうまたは絶対的結果を達成もしくは回避するのは、皆無ではないにせよ、稀であることを理解する。用語「実質的」は、それ故に、ここでは、多くの生物学的および化学的現象に内在的な完全性の欠失の可能性を捕捉するために使用する。
治療有効量：ここで使用する用語「治療有効量」は、治療投与計画に従い、疾患、障害および／または状態に罹患しているまたは易罹患性の集団に投与したとき、疾患、障害および／または状態を処置するのに十分である量を意味する。ある実施態様において、治療有効量は、疾患、障害および／または状態の１以上の症状の発生頻度および／または重症度の低減および／または発症の遅延をする量である。当業者は、用語「治療有効量」が特定の個体で処置の成功の達成が実際に必要ではないことを認識する。むしろ、治療有効量は、そのような処置を必要とする患者に投与したとき、相当数の対象に特定の所望の薬理学的応答を提供する量であり得る。特定の対象は、実際、「治療有効量」に「難治性」であり得ることは理解される。一例を挙げると、難治性対象は、臨床的有効性が得られないような低バイオアベイラビリティを有し得る。ある実施態様において、治療有効量の言及は、１以上の特異的組織(例えば、疾患、障害または状態により影響を受ける組織)または流体(例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など)で測定される量を言及し得る。当業者は、ある実施態様において、治療有効量は、単一用量で製剤化および／または投与され得ることを認識する。ある実施態様において、治療有効量は、例えば、投与計画の一部として、複数の用量で製剤化および／または投与され得る。
バリアント：分子、例えば、核酸、タンパク質または小分子の文脈でここで使用する用語「バリアント」は、参照分子と相当な構造的同一性を示すが、参照物体と比較して、例えば、１以上の化学部分の存在または不在またはレベルにおいて、参照分子と構造的に異なる分子をいう。ある実施態様において、バリアントはまた参照分子と機能的にも異なる。一般に、特定の分子が適切に参照分子の「バリアント」として考えられるか否かは、参照分子との構造的同一性の程度に基づく。当業者により認識されるとおり、あらゆる生物学的または化学的参照分子は、ある特徴的構造要素を有する。ある実施態様において、バリアントは、１以上のそのような特徴的構造要素を共有するが、参照分子と少なくとも１個の態様が異なる別の分子である。
いくつかの例を挙げると、ポリペプチドは、互いに対して直鎖状または三次元空間で指定された位置を有するおよび／または特定の構造的モチーフおよび／または生物学的機能に貢献する複数のアミノ酸からなる特徴的配列要素を有し得る；核酸は、互いに対して直鎖状または三次元空間で指定された位置を有する複数のヌクレオチド残基からなる特徴的配列要素を有し得る。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、アミノ酸またはヌクレオチド配列の１以上の差異および／またはポリペプチドまたは核酸の共有結合成分である(例えば、ポリペプチドまたは核酸主鎖に結合している)化学部分(例えば、炭水化物、脂質、リン酸基)の１以上の差異の結果として、参照ポリペプチドまたは核酸と異なり得る。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％または９９％である、参照ポリペプチドまたは核酸との全体的配列同一性を示す。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照ポリペプチドまたは核酸と少なくとも１個の特徴的配列要素を共有しない。ある実施態様において、参照ポリペプチドまたは核酸は、１以上の生物学的活性を有する。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照ポリペプチドまたは核酸の生物学的活性の１以上を共有する。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照ポリペプチドまたは核酸の生物学的活性の１以上を欠く。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照ポリペプチドまたは核酸と比較して、１以上の生物学的活性のレベルの低減を示す。ある実施態様において、目的のポリペプチドまたは核酸は、特定の位置の小数の配列改変以外、参照と同一であるアミノ酸またはヌクレオチド配列を有するならば、参照ポリペプチドまたは核酸の「バリアント」と考えられる。
ある実施態様において、典型的に、バリアントにおける約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％または約２％より少ない残基が、参照と比較して置換、挿入または欠失されている。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照と比較して、約１０個、約９個、約８個、約７個、約６個、約５個、約４個、約３個、約２個または約１個の置換された残基を含む。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照に比して、ごく少数(例えば、約５個、約４個、約３個、約２個または約１個より少ない)の置換、挿入または欠失、機能的残基(すなわち、特定の生物学的活性に参加する残基)を含む。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照と比較して、約５個、約４個、約３個、約２個または約１個を超えない付加または欠失を含み、ある実施態様において、付加または欠失を含まない。ある実施態様において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、参照と比較して、約２５個、約２０個、約１９個、約１８個、約１７個、約１６個、約１５個、約１４個、約１３個、約１０個、約９個、約８個、約７個、約６個より少ない、一般的に約５個、約４個、約３個または約２個より少ない付加または欠失を含む。ある実施態様において、参照ポリペプチドまたは核酸は、天然で見られるものである。ある実施態様において、参照ポリペプチドまたは核酸は、ヒトポリペプチドまたは核酸である。
ある実施態様において、アミノ酸配列(ペプチド、タンパク質またはポリペプチド)の「バリアント」は、アミノ酸挿入バリアント、アミノ酸付加(すなわち、末端付加)バリアント、アミノ酸欠失バリアントおよび／またはアミノ酸置換バリアントであるかまたはそれを含んでよい。
ある実施態様において、「バリアント」は、変異体、スプライスバリアント、翻訳後修飾バリアント、配座、アイソフォーム、アレルバリアント、種バリアントおよび種ホモログ、特に天然に生ずるものであるかまたはそれを含んでよい。ある実施態様において、用語「バリアント」は、特に、アミノ酸配列のフラグメントを含む。
ある実施態様において、アミノ酸挿入バリアントは、単一または２以上の、アミノ酸の挿入により、関連参照ポリペプチドと異なる。
ある実施態様において、アミノ酸付加バリアントは、１、２、３、５、１０、２０、３０、５０またそれ以上のアミノ酸など、１以上のアミノ酸のアミノおよび／またはカルボキシ末端融合(すなわち、伸長)を含み得る。
ある実施態様において、アミノ酸欠失バリアントは、１、２、３、５、１０、２０、３０、５０またはそれ以上のアミノ酸の除去など、配列かの１以上のアミノ酸の除去により特徴づけられる。ある実施態様において、欠失は、１以上のＮ末端アミノ酸、１以上のＣ末端アミノ酸、１以上の内部アミノ酸またはそれらの組み合わせであり得る。
ある実施態様において、アミノ酸置換バリアントは、配列における少なくとも１個の残基が除去され、その場所に他の残基が挿入されることにより特徴づけられる。ある実施態様において、置換は、例えば、１以上の共通モチーフ(例えば、特徴的配列要素)および／または機能を共有する、関連ポリペプチド間で高度に保存されているものではない、残基のものである。ある実施態様において、置換は、元の残基およびその置換体が、１以上の構造的または機能的属性または性質(例えば、荷電の同一性および／またはタイプまたはその不在；側鎖の疎水性または親水性、側鎖の三次元的かさ高さ、側鎖の直鎖または分枝鎖特徴、側鎖におけるヘテロ原子の存在および／またはタイプなど)を共有する点で、「保存的」置換である。例えば、ある実施態様において、置換は、酸性(アスパラギン酸、グルタミン酸)、塩基性(リシン、アルギニン、ヒスチジン)、非極性(アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン)、非荷電極性(グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン)、芳香族アミノ(フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン)などのファミリー内の残基の交換が関与するならば、保存的である。ある実施態様において、次の群内の保存的アミノ酸置換は、保存的置換と考えられる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。
ある実施態様において、バリアントは、小数の成分が改変されている、例えば、ある成分が存在するかまたは不在であるまたはある成分の濃度が違う以外同一である、組成物(例えば、緩衝液)をいい得る。
野生型：ここで使用する用語「野生型」または「ＷＴ」または「天然」は、「正常」(変異された、罹患した、改変されたなどと対照的に)状態または状況で、天然に見られる構造および／または活性を有する物体をいう、当分野で理解される意味を有する。野生型遺伝子およびポリペプチドは、しばしば複数の異なる形態(例えば、アレル)で存在することを、当業者は認識する。多くの実施態様において、ここで使用する「野生型」は、アレルバリエーションを含む、天然に見られるアミノ酸配列を言い得る。野生型アミノ酸配列、ペプチドまたはタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列を有する。
図１Ａ～１Ｆは、本発明のある製剤の産生のための例示的ワークフローをいう。例示的第一緩衝液系において、有機溶媒(例えば、エタノール)に懸濁された粒子形成脂質および水性緩衝液(例えば、クエン酸緩衝液)に懸濁された核酸(例えば、ｍＲＮＡ)を、一定期間(Ａ)核酸含有脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)が形成されるまで、撹拌する(Ｂ)。ある実施態様において、このような核酸含有脂質粒子を濃縮および／または保護剤(例えば、スクロース、トレハロースなど)を含む第二緩衝液系に移動し得る(Ｃ)。ある実施態様において、次いで、脂質粒を貯蔵するかまたは使用のために希釈もしくは乾燥するか(例えば、凍結乾燥または他の乾燥方法により)(Ｄ)または凍結するか(Ｅ)または乾燥後凍結(Ｆ)し得る。ある実施態様において、乾燥および／または凍結後、脂質粒子を貯蔵および／または使用のために解凍および／または希釈し得る。
図２Ａ～２Ｂは、本発明のある例示的製剤(Ａ)および本発明の製剤のために設計されたある例示的サイクル(Ｂ)を示す。
図３Ａ～３Ｂは、例示的スクロースおよびトレハロース製剤の種々の時点および温度での例示的コロイド安定性データを示す。
図４Ａ～４Ｂは、例示的スクロースおよびトレハロース製剤の種々の時点および温度での例示的％封入データを示す。
図５は、例示的スクロースおよびトレハロース製剤の水含量の例示的グラフを示す。
図６Ａ～６Ｃは、例示的スクロースおよびトレハロース製剤の種々の時点および温度の例示的％発現データを示す。
図７Ａ～７Ｄは、例示的本発明の製剤を特徴づける例示的データを示す。
図８Ａ～８Ｂは、例示的スクロースおよびトレハロース製剤の種々の時点および温度での例示的コロイド安定性データを示す。
ある実施態様の詳細な記載
本発明は、とりわけ、核酸／脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)組成物および特に治療ＲＮＡ／ＬＮＰ組成物などのＲＮＡ／ＬＮＰ組成物に関するテクノロジーを提供する。
当業者は、核酸／ＬＮＰ製剤および特にＲＮＡ／ＬＮＰ製剤についてしばしば遭遇する一つの障害が、長期安定性を維持するために低温貯蔵が必要であることを認識する。種々の報告は、－９０℃もの低温の必要性を記載し；その他は、－８０℃、－７０℃または－６０℃より低い温度の必要性を記載した。－２０℃程度の高い温度は、しばしば短期間(例えば、１日、２日、３日、４日～数日)しか耐えられない。凍結より高い温度(例えば、約０℃を超える)および／または冷蔵により達成される温度(例えば、約１℃～約８℃または約２℃～約８℃または約２℃～約６℃または約２℃～約４℃の範囲)は、しばしば数時間乃至１～２日しか耐えられない。室温貯蔵および特に長期室温貯蔵(例えば、少なくとも１～２日および望ましくは１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間またはそれ以上)は目標のままである。
ある実施態様において、本発明は、特定の成分(例えば、保護剤および／または緩衝液成分)を含むおよび／または特定の方法に従い調製された、参照製剤と異なり、参照製剤に比して１以上の性質が修飾(例えば、改善)された、核酸／ＬＮＰ製剤および特にＲＮＡ／ＬＮＰ製剤を提供する。例えば、ある実施態様において、提供される製剤は、同じ脂質および核酸を含むが、保護剤および／または緩衝液および／またはある製造または処理工程が異なる参照製剤に比して、改善されている。
ある実施態様において、提供されるテクノロジーは、乾燥製剤または乾燥に適している(例えば、安定な)組成物の調製を達成する。
ある実施態様において、提供される組成物は、同じ程度に乾燥した参照製剤、例えば、ＮａＣｌを、例えば、約５～１０mg／mlの範囲内の濃度(例えば、約６mg／ml)で含む緩衝液を使用して産生された以外同一の製剤で必要であるより短い凍結乾燥サイクルを使用して、効率的に乾燥され得る。
ある実施態様において、提供されるテクノロジーは、凍結製剤または凍結に適している(例えば、安定な)組成物の調製を達成する。
ある実施態様において、提供されるテクノロジーは、低温閾値を超える温度で少なくとも特定の期間貯蔵に安定である、組成物の調製を達成する。ある実施態様において、特定の期間は、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む少なくとも約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上であり得る。ある実施態様において、低温閾値は、約－８０℃、－７０℃、－５０℃、－３０℃、－２０℃、０℃、２℃、４℃、８℃、１５°、２０℃、３０℃、４０℃またはそれ以上であり得る。
ある実施態様において、提供されるテクノロジーは、例えば、ここに記載する脂質に封入されたペイロードを含むＬＮＰの投与により、対象に核酸ペイロードを送達するのに適する；ある実施態様において、脂質は、カチオン性脂質、中性脂質、ポリマーコンジュゲート脂質およびステロイドを含む。ある実施態様において、本発明で使用するためのＬＮＰは((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)、２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)、ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)およびコレステロールから形成され、それぞれ約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲内の相対的質量比で組み合わされる。
ある実施態様において、核酸ペイロードはＲＮＡおよび／またはＤＮＡであるかまたはそれを含む；ある実施態様において、核酸ペイロードポリペプチド産物(例えば、対象で必要であるまたは所望の活性を、例えば、補うまたは置き換える、機能的ポリペプチドまたは対象における所望の免疫応答または活性を、例えば、誘導または増強し得る、免疫調節性ポリペプチド)をコードし得る。
ある実施態様において、提供される組成物は、ＬＮＰ(すなわち、核酸／ＬＮＰ)、保護剤および緩衝液を含む。ある実施態様において、緩衝液はナトリウムイオンを含まない。ある実施態様において、緩衝液は塩を含まない。ある実施態様において、緩衝液は、ここに記載するＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液またはＨｉｓ緩衝液である。ある実施態様において、緩衝液は、ＮａＣｌを使用せずに製造したリン酸緩衝化食塩水バリアントである。ある実施態様において、緩衝液は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＫＨ２ＰＯ４を含む参照ＰＢＳと比較してナトリウムイオンレベルが低いＰＢＳバリアントである；ある実施態様において、このような参照ＰＢＳは、１３７mM ＮａＣｌ(すなわち、８ｇ／Ｌ ＮａＣｌ)、２.７mM ＫＣｌ(すなわち、０.２ｇ／Ｌ ＫＣｌ)、１０mM Ｎａ２ＨＰＯ４(すなわち、１.４４ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４)および１.８mm ＫＨ２ＰＯ４(すなわち、０.２４ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４)を含む(またはからなる)「標準的」ＰＢＳである。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、このような参照標準的ＰＢＳで見られるより低いレベルのナトリウムイオンを有する、ＰＢＳバリアントである。
ある実施態様において、本発明で利用する保護剤は二糖を含む。ある実施態様において、本発明で利用する保護剤は、スクロースおよび／またはトレハロースであるかまたはそれを含む。
ある実施態様において、保護剤は、マンニトールであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、保護剤はマンニトールを実質的に含まない。
ある実施態様において、本発明は、ＬＮＰ製剤(すなわち、核酸／ＬＮＰ製剤および特にＲＮＡ／ＬＮＰ製剤)が製造、次いで貯蔵、凍結および／または乾燥されるテクノロジーを提供する。ある実施態様において、凍結組成物が貯蔵される。ある実施態様において、乾燥組成物が貯蔵される。
ある実施態様において、乾燥組成物は再懸濁され、次いで対象に投与される。ある実施態様において、凍結組成物は解凍され、次いで対象に投与される。ある実施態様において、組成物を、１回以上の凍結および解凍、１回以上の乾燥および再懸濁および／または１回以上の凍結および解凍およびまた１回以上の乾燥および再懸濁に付し得る。
ある実施態様において、組成物は投与前に希釈される。
核酸ペイロード
本発明は、とりわけ、核酸ペイロードを含むＬＮＰ組成物(すなわち、核酸－ＬＮＰ組成物)を提供する。
ある実施態様において、核酸ペイロードは、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド(例えば、ＲＮＡｓｅＨ分解および／またはエクソンスキッピングを促進し得るものなど)、リボザイム、ｇＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどの、機能的核酸を含むかまたはコード化し得る。
ある実施態様において、核酸ペイロードは１以上のポリペプチドをコードし得る(例えば、さらに下に記載するとおり)。
ある実施態様において、本発明で利用する核酸ペイロードは、１以上の天然核酸残基または全体に天然核酸残基であるかまたはそれを含む。ある実施態様において、核酸は１以上の非天然核酸残基(すなわち、１以上の核酸アナログ)であるか、それを含むかまたはそれからなるかまたは全体に非天然核酸残基である。
ある実施態様において、本発明で利用する核酸ペイロードは、１以上のホスホジエステル結合ではないヌクレオチド間結合を含む。例えば、ある実施態様において、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１以上のホスホロチオエートおよび／または５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合を有する。ある実施態様において、核酸は、いくつかのホスホジエステル結合およびいくつかの非ホスホジエステル結合を含む。
ある実施態様において、核酸は、１以上の天然ヌクレオシド(例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン)であるかまたはそれを含む。ある実施態様において、核酸は、１以上のヌクレオシドアナログ(例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ(６)－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、介在塩基およびそれらの組み合わせ)であるか、それを含むかまたはそれからなる。
ある実施態様において、核酸は、天然核酸と比較して、１以上の修飾糖(例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース)を含む。
ある実施態様において、核酸は１以上のペプチド核酸であるかまたはそれを含む。
本発明のある実施態様において、核酸は、１以上の望ましい特徴、例えば、増強された安定性、効力などをもたらす、ここに記載する修飾で修飾される。
ＲＮＡペイロード
ある実施態様において、本発明で使用するための核酸ペイロードは、ＲＮＡ(例えば、ｍＲＮＡ)である。ある実施態様において、ＲＮＡはテンプレート化された合成により産生される。ある実施態様において、ＲＮＡは、酵素合成により、例えば、インビトロ転写により(例えば、ＤＮ鋳型から)、産生される。ある実施態様において、ＲＮＡは化学合成により産生される。
ある実施態様において、ＲＮＡは「レプリコンＲＮＡ」または単に「レプリコン」、特に「自己複製ＲＮＡ」または「自己増幅ＲＮＡ」である。ある実施態様において、レプリコンまたは自己複製ＲＮＡは、ｓｓＲＮＡウイルス、特にアルファウイルスなどのプラス鎖ｓｓＲＮＡウイルスに由来するか、それ由来の要素を含む。アルファウイルスはプラス鎖ＲＮＡウイルスの典型的代表例である。アルファウイルスは、感染細胞の細胞質で複製する(アルファウイルスライフサイクルのレビューのために、Jose et al., Future Microbiol., 2009, vol. 4, pp. 837-856参照)。多くのアルファウイルスの総ゲノム長は典型的に１１,０００～１２,０００ヌクレオチドの範囲であり、ゲノムＲＮＡは、典型的に５’キャップおよび３’ポリ(Ａ)テイルを有する。アルファウイルスのゲノムは、非構造的タンパク質(ウイルスＲＮＡの転写、修飾および複製ならびにタンパク質修飾に関与)および構造的タンパク質(ウイルス粒子形成)をコードする。ゲノムには典型的に２個のオープンリーディングフレーム(ＯＲＦ)がある。４個の非構造的タンパク質(ｎｓＰ１－ｎｓＰ４)は、典型的に一体となってゲノムの５’末端付近から始まる第一ＯＲＦによりコードされ、一方アルファウイルス構造的タンパク質は、一体となって、第一ＯＲＦの下流に見られ、ゲノムの３’末端近辺に伸びる第二ＯＲＦによりコードされる。典型的に、第一ＯＲＦは第二ＯＲＦより大きく、比はおおよそ２：１である。アルファウイルスにより感染された細胞において、非構造的タンパク質をコードする核酸配列のみがゲノムＲＮＡから翻訳され、一方構造的タンパク質をコードする遺伝情報は、真核生物メッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)を模倣するＲＮＡ分子であるサブゲノム転写物から翻訳可能である(Gould et al., 2010, Antiviral Res., vol. 87 pp. 111-124)。感染後、すなわちウイルスライフサイクルの初期段階に、(＋)鎖ゲノムＲＮＡは、非構造的ポリ－タンパク質(ｎｓＰ１２３４)をコードするオープンリーディングフレームの翻訳のために、メッセンジャーＲＮＡのように直接作用する。アルファウイルス由来ベクターは、標的細胞または標的生物への外来遺伝情報の送達について提案されている。単純なアプローチで、アルファウイルス構造的タンパク質をコードするオープンリーディングフレームは、目的のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームに置換される。アルファウイルスベースのトランス複製系は、一方はウイルスレプリカーゼをコードし、他方の核酸分子は、該レプリカーゼによりトランスで複製され得る、２個の別々の核酸分子上のアルファウイルスヌクレオチド配列要素に依存する(故に命名トランス複製系)。トランス複製は、ある宿主細胞におけるこれら核酸分子の両者の存在を必要とする。レプリカーゼによりトランスで複製され得る核酸分子は、アルファウイルスレプリカーゼによる認識およびＲＮＡ合成を可能とするあるアルファウイルス配列要素を含まなければならない。
ある実施態様において、本発明で使用するためのＲＮＡは、１以上の修飾ヌクレオシドを含み得る。ある実施態様において、本発明は、少なくとも１個のウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含むＲＮＡを提供する。ある実施態様において、修飾ヌクレオシドは、ＲＮＡにおける全ウリジンの代わりである。ある実施態様において、少なくとも１個のウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン(ψ)、Ｎ１－メチル－シュードウリジン(ｍ１ψ)および５－メチル－ウリジン(ｍ５Ｕ)またはそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、ＲＮＡの少なくとも１個、例えば、全ウリジンを置き換える修飾ヌクレオシドは、次の１以上のいずれでもよい：３－メチル－ウリジン(ｍ３Ｕ)、５－メトキシ－ウリジン(ｍｏ５Ｕ)、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン(ｓ２Ｕ)、４－チオ－ウリジン(ｓ４Ｕ)、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン(ｈｏ５Ｕ)、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン(例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン)、ウリジン５－オキシ酢酸(ｃｍｏ５Ｕ)、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル(ｍｃｍｏ５Ｕ)、５－カルボキシメチル－ウリジン(ｃｍ５Ｕ)、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン(ｃｈｍ５Ｕ)、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル(ｍｃｈｍ５Ｕ)、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン(ｍｃｍ５Ｕ)、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン(ｍｃｍ５ｓ２Ｕ)、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン(ｎｍ５ｓ２Ｕ)、５－メチルアミノメチル－ウリジン(ｍｎｍ５Ｕ)、１－エチル－シュードウリジン、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン(ｍｎｍ５ｓ２Ｕ)、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン(ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ)、５－カルバモイルメチル－ウリジン(ｎｃｍ５Ｕ)、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン(ｃｍｎｍ５Ｕ)、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン(ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ)、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン(τｍ５Ｕ)、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン(τｍ５ｓ２Ｕ)、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン)、５－メチル－２－チオ－ウリジン(ｍ５ｓ２Ｕ)、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン(ｍ１ｓ４ψ)、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン(ｍ３ψ)、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－ｄｅアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－ｄｅアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン(Ｄ)、ジヒドロシュードウリジン、５,６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン(ｍ５Ｄ)、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－(３－アミノ－３－カルボキシプロピル)ウリジン(ａｃｐ３Ｕ)、１－メチル－３－(３－アミノ－３－カルボキシプロピル)シュードウリジン(ａｃｐ３ ψ)、５－(イソペンテニルアミノメチル)ウリジン(ｉｎｍ５Ｕ)、５－(イソペンテニルアミノメチル)－２－チオ－ウリジン(ｉｎｍ５ｓ２Ｕ)、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン(Ｕｍ)、５,２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン(ｍ５Ｕｍ)、２’－Ｏ－メチル－シュードウリジン(ψｍ)、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン(ｓ２Ｕｍ)、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン(ｍｃｍ５Ｕｍ)、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン(ｎｃｍ５Ｕｍ)、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン(ｃｍｎｍ５Ｕｍ)、３,２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン(ｍ３Ｕｍ)、５－(イソペンテニルアミノメチル)－２’－Ｏ－メチル－ウリジン(ｉｎｍ５Ｕｍ)、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－ａｒａ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－ａｒａ－ウリジン、５－(２－ｃａｒｂｏメトキシビニル)ウリジン、５－[３－(１－Ｅ－プロペニルアミノ)ウリジンまたは当分野で知られるあらゆるその他修飾ウリジン。
ある実施態様において、本発明で使用するためのＲＮＡは、５’キャップを含む。ある実施態様において、本発明のＲＮＡは、キャップのない５’－三リン酸を有しない。ある実施態様において、ＲＮＡ５’キャップアナログにより修飾され得る。用語「５’キャップ」は、ｍＲＮＡ分子の５’末端に見られる構造をいい、一般に５’－→５’－三リン酸結合を介してｍＲＮＡに結合したグアノシンヌクレオチドからなる。ある実施態様において、このようなグアノシンは７位でメチル化される。ＲＮＡに５’キャップまたは５’キャップアナログを付することは５’キャップまたは５’キャップアナログがＲＮＡ鎖で共転写的に発現されるインビトロ転写により達成できまたはキャッピング酵素を使用して、転写後ＲＮＡに結合できる。ある実施態様において、ＲＮＡの５’キャップは、ｍ２ ７,３’－ＯＧｐｐｐ(ｍ１ ２’－Ｏ)ＡｐＧ(ｍ２ ７,３｀ＯＧ(５’)ｐｐｐ(５’)ｍ２’－ＯＡｐＧと称することもある)である。ある実施態様において、本発明のＲＮＡの５’キャップは、アナログアンチリバースキャップ(ＡＲＣＡキャップ(ｍ２ ７,３｀ＯＧ(５’)ｐｐｐ(５’)Ｇ))である。ある実施態様において、５’キャップはベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ(ｍ２ ７,２｀ＯＧ(５’)ｐｐＳｐ(５’)Ｇ)である。ある実施態様において、５’キャップはベータ－Ｓ－ＡＲＣＡ(Ｄ１)(ｍ２ ７,２’－ＯＧｐｐＳｐＧ)またはｍ２ ７,３’－ＯＧｐｐｐ(ｍ１ ２’－Ｏ)ＡｐＧである。
ある実施態様において、本発明で使用するためのＲＮＡは５’－ＵＴＲおよび／または３’－ＵＴＲを含む。用語「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」は、転写されるが、アミノ酸配列に翻訳されないＤＮＡ分子における領域またはｍＲＮＡ分子などのＲＮＡ分子における対応する領域に関し得る。ＵＴＲは、オープンリーディングフレームの５’(上流)(５’－ＵＴＲ)および／またはオープンリーディングフレームの３’(下流)(３’－ＵＴＲ)に存在し得る。５’－ＵＴＲは、存在するならば、５’末端、タンパク質コード化領域の開始コドンの上流に位置する。５’－ＵＴＲは、５’キャップ(存在するならば)の下流であり、例えば５’キャップに直接隣接する。３’－ＵＴＲは、存在するならば、３’末端、タンパク質コード化領域の停止コドンの下流に位置するが、用語「３’－ＵＴＲ」は、好ましくはポリ(Ａ)配列を含まない。故に、３’－ＵＴＲは、ポリ(Ａ)配列(存在するならば)の上流、例えばポリ(Ａ)配列に直接隣接する。
ここで使用する用語「ポリ(Ａ)配列」または「ポリ－Ａテイル」は、典型的にＲＮＡ分子の３’末端に位置する、アデニル酸残基の中断されていないまたは中断された配列をいう。ポリ(Ａ)配列は当業者に知られ、ここに記載するＲＮＡの３’－ＵＴＲに続き得る。中断されていないポリ(Ａ)配列は、連続的アデニル酸残基により特徴づけられる。本来、中断されていないポリ(Ａ)配列が典型的である。ここに開示するＲＮＡは、転写後鋳型非依存的ＲＮＡポリメラーゼによりＲＮＡの遊離３’末端に結合されたポリ(Ａ)配列またはＤＮＡによりコードされ、鋳型依存性ＲＮＡポリメラーゼにより転写されるポリ(Ａ)配列を有し得る。約１２０ Ａヌクレオチドのポリ(Ａ)配列がトランスフェクト真核生物細胞のＲＮＡのレベルおよびポリ(Ａ)配列の上流(５’)に存在するオープンリーディングフレームから翻訳されるタンパク質のレベルに有益な影響を有することが示されている(Holtkamp et al., 2006, Blood, vol. 108, pp. 4009-4017)。
異なる実施態様において、ポリ(Ａ)配列は長さが異なってよい。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０または少なくとも１００ Ａヌクレオチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は、最大５００、最大４００、最大３００、最大２００または最大１５０ Ａヌクレオチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は、約１２０ Ａヌクレオチドを含む。この文脈で、「本質的にからなる」は、ポリ(Ａ)配列の大部分のヌクレオチド、典型的にポリ(Ａ)配列のヌクレオチド数の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％がＡヌクレオチドであるが、残りのヌクレオチドがＵヌクレオチド(ウリジル酸)、Ｇヌクレオチド(グアニル酸)またはＣヌクレオチド(シチジル酸)などのＡヌクレオチド以外のヌクレオチドであることを許容する。この文脈で、「からなる」は、ポリ(Ａ)配列における全ヌクレオチド、すなわち、ポリ(Ａ)配列のヌクレオチド数の１００％がＡヌクレオチドであることを意味する。用語「Ａヌクレオチド」または「Ａ」はアデニル酸をいう。
ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は、コード鎖に相補性の鎖における反復ｄＴヌクレオチド(デオキシチミジル酸)を含むＤＮＡテンプレートに基づき、ＲＮＡ転写中、例えば、インビトロ転写ＲＮＡの調製中に結合される。ポリ(Ａ)配列をコードするＤＮＡ配列(コード鎖)はポリ(Ａ)カセットと称する。ある実施態様において、ＤＮＡのコード鎖に存在するポリ(Ａ)カセットは、本質的にｄＡヌクレオチドからなるが、４ヌクレオチド(ｄＡ、ｄＣ、ｄＧおよびｄＴ)のランダム配列により中断される。このようなランダム配列は、５～５０、１０～３０または１０～２０ヌクレオチド長であり得る。このようなカセットは、本明細書に引用により包含させるＷＯ２０１６／００５３２４Ａ１に開示される。ＷＯ２０１６／００５３２４Ａ１に開示されるあらゆるポリ(Ａ)カセットを本発明で使用し得る。本質的にｄＡヌクレオチドからなるが、４ヌクレオチド(ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ)が等しく分布するランダム配列により中断され、例えば、５～５０ヌクレオチド長を有するポリ(Ａ)カセットは、ＤＮＡレベルで、大腸菌におけるプラスミドＤＮＡの一定増殖を示し、なお、ＲＮＡレベルで、ＲＮＡ安定性の支持および翻訳効率が包含される点に関して、有益な性質と関連する。結果として、ある実施態様において、ここに記載するＲＮＡ分子に含まれるポリ(Ａ)配列は、本質的にＡヌクレオチドからなるが、４ヌクレオチド(Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕ)のランダム配列で中断される。このようなランダム配列は、５～５０、１０～３０または１０～２０ヌクレオチド長であり得る。
ある実施態様において、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチドが３’末端でポリ(Ａ)配列と隣接せず、すなわち、ポリ(Ａ)配列はマスクさせずまたはその３’末端でＡ以外のヌクレオチドが続かない。
ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０または少なくとも１００および最大５００、最大４００、最大３００、最大２００または最大１５０ヌクレオチドを含み得る。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は本質的に少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０または少なくとも１００および最大５００、最大４００、最大３００、最大２００または最大１５０ヌクレオチドからなり得る。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも８０または少なくとも１００および最大５００、最大４００、最大３００、最大２００または最大１５０ヌクレオチドからなり得る。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は少なくとも１００ヌクレオチドを含む。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は約１５０ヌクレオチドを含む。ある実施態様において、ポリ(Ａ)配列は約１２０ヌクレオチドを含む。
ある実施態様において、本発明で使用するための核酸がコドン最適化されているおよび／またはグアノシン／シトシン(Ｇ／Ｃ)含量が野生型コード配列と比較して増加する。コード配列の１以上の配列領域がコドン最適化されているおよび／または野生型コード配列の対応する配列領域と比較してＧ／Ｃ含量が増加した実施態様も含む。ある実施態様において、コドン最適化および／またはＧ／Ｃ含量の増加は、コードされるアミノ酸配列の配列を変化させない。
Ｇ／Ｃ含量
本発明のある実施態様において、ここに記載するコード領域(例えば、ＲＮＡ)のＧ／Ｃ含量は、対応するＷＴコード配列のＧ／Ｃ含量と比較して増加し、ここで、コードされるアミノ酸配列は、そのような対応するＷＴ配列と比較して修飾されない。ある実施態様において、Ｇ／Ｃ含量の増加は、そのようにＧ／Ｃ含量が増加したＲＮＡの翻訳効率を増加させ得る。Ｇ／Ｃ含量が増加した配列は、アデノシン／ウラシル(Ａ／Ｕ)含量が増加した配列より安定であると報告されていることを当業者は認識する。
数コドンが全く同一のアミノ酸をコードするとの事実に関して(いわゆる遺伝コードの縮絨)、安定性のために最も好都合なコドンが決定され得る(いわゆる代替コドン使用頻度)。ＲＮＡによりコードされるべき所望のアミノ酸に依存して、野生型配列と比較して、該ＲＮＡ配列の修飾に種々の可能性がある。特に、Ａおよび／またはＵヌクレオチドを含むコドンを、同じアミノ酸をコードするが、Ａおよび／またはＵを含まないまたはＡおよび／またはＵヌクレオチド含量が低い他のコドンにこれらのコドンを置換することにより、修飾し得る。
種々の実施態様において、本発明により利用するＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量は、野生型ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％またはそれ以上増加される。
コードされるポリペプチド
ここに記載するとおり、ある実施態様において、核酸ペイロード(例えば、ＲＮＡ)はポリペプチドをコードする。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、抗体剤またはポリペプチド鎖または機能的そのフラグメントであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、抗体剤は、ｓｃＦＣ、ラクダ類抗体などなどの一本鎖抗体剤であるかまたはそれを含む。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、サイトカイン、増殖因子、アポトーシス因子、分化誘導因子、細胞－表面受容体、リガンド、ホルモンなどであるか、またはそれを含む。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは酵素である。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、転写因子、シャペロンなどの制御ポリペプチドである。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、その発言が対象で低減または欠失している活性に置き換わるまたは活性化するポリペプチドであるかまたはそれを含む。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、対象における免疫応答を誘導および／または増強するポリペプチドであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、少なくとも１個のエピトープｔｈａｔ ｉｓ 特異的に結合ｂｙ ａｎ 免疫グロブリンａｇｅｎｔ(例えば、抗体および／またはＴ細胞受容体など)であるかまたはそれを含む。
ある実施態様において、コードされるポリペプチドは、抗原(またはそのエピトープ)であるかまたはそれを含む。ある実施態様において、抗原は、特定の疾患、障害または状態に特徴的であり得る。例えば、抗原は、腫瘍抗原(例えば、ネオ抗原)および／または感染因子(例えば、ウイルスまたは細菌または真菌などの微生物)と関連する抗原であるかまたはそれを含むことができる。ある実施態様において、感染因子と関連する抗原は、そのような感染因子の表面に示されるおよび／またはそのような因子による感染に介在し得る(例えば、レシピエント細胞の受容体との相互作用に参加することにより)抗原であり得る。
ある実施態様において、抗原は、ウイルス抗原、例えば、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、コロナウイルス、呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザウイルスおよびムンプスウイルスからなる群から選択されるウイルスと関連する抗原であるかまたはそれを含むことができる。ある実施態様において、抗原は、ボルティモア分類システムに基づき、第Ｉ群、第II群、第III群、第IV群、第Ｖ群、第VI群または第VII群ウイルスから選択されるウイルスと関連するウイルス抗原であるかまたはそれを含んでよい。ある実施態様において、抗原は、ウイルスファミリーアデノウイルス科、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、アネロウイルス科、プレオリポウイルス科、レオウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、トガウイルス科、アレナウイルス科、フラビウイルス科、オルトミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、コロナウイルス科、アストロウイルス科、ボルナウイルス科、アルテリウイルス科およびヘペウイルス科から選択されるウイルスと関連するウイルス抗原であるかまたはそれを含むことができる。ある特定の実施態様において、ウイルス抗原はコロナウイルス抗原であり得る。
ある特定の実施態様において、ウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質配列由来の抗原であり得る(例えば、そのような配列、そのフラグメントまたはいずれかのバリアントであるかまたはそれを含んでよい)。ある実施態様において、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質配列由来の抗原配列を有するポリペプチドを提供する。ある実施態様において、ポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質配列の受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)由来の抗原配列であるかまたはそれを含む。
ある実施態様において、ここに記載するペイロードは、ＬＮＰの脂質部分と関連するまたは封入される。ある実施態様において、ここに記載するペイロードはＬＮＰの脂質部分と関連する。ある実施態様において、ここに記載するペイロードはＬＮＰの脂質部分に封入される。ある実施態様において、そのような脂質部分との関連(例えば、封入)は、例えば、一定期間にわたりおよび／または特定の条件下、ペイロード分解(例えば、酵素分解)の感受性を低減する。
ある実施態様によると、シグナルペプチドは、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカーを介して融合される。ある実施態様において、本発明で使用するためのシグナルペプチドは、典型的に約１５～約３０アミノ酸長を示し、抗原ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に位置する配列であるが、これらに限定されない。ある実施態様において、ここに定義するシグナルペプチドは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質を、規定した細胞区画、例えば、細胞表面、小胞体(ＥＲ)またはエンドソーム－リソソーム区画に輸送することを可能とする。
本発明のある実施態様により利用され得るシグナルペプチド配列は、例えば、免疫グロブリンのシグナルペプチド配列、例えば、免疫グロブリン重鎖可変領域のシグナルペプチド配列であるかまたはそれを含んでよく、ここで、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンであり得る。
本発明で使用するためのシグナルペプチドは、コードされた抗原ペプチドまたはタンパク質の分泌を促進するために使用される。ある実施態様において、ここに定義するシグナルペプチドは、ここに定義するコードされた抗原ペプチドまたはタンパク質に融合する。ある実施態様において、ここに記載するＲＮＡは、抗原ペプチドまたはタンパク質およびシグナルペプチドをコードする少なくとも１個のコード領域を含み、ここで、該シグナルペプチドは、抗原ペプチドまたはタンパク質、例えば、ここに記載する抗原ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に融合する。
ある実施態様において、三量化ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、融合される。ある実施態様において、三量化ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、融合され、それはまたここに記載するシグナルペプチドにも融合する。
ある実施態様において、このような三量化ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に位置するが、それに限定されない。ここに定義する三量化ドメインは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質の三量化を可能にする。ここに定義する三量化ドメインの例は、Ｔ４フィブリチンの天然三量化ドメインであるフォルドンを含むが、それらに限定されない。Ｔ４フィブリチン(フォルドン)のＣ末端ドメインはフィブリチン三量体構造およびの形成に必須であり、人工三量化ドメインとして使用され得る。
ある実施態様において、膜貫通ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、融合される。従って、ある実施態様において、膜貫通ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、融合され、それはまたここに定義するシグナルペプチドおよび／または三量化ドメインに融合される。
多くの実施態様において、本発明で利用する膜貫通ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に位置するが、これに限定されない。ある実施態様において、このような膜貫通ドメインは、存在するならば、三量化ドメインのＣ末端に位置するが、これに限定されない。ある実施態様において、三量化ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、そのバリアントまたはそのフラグメント、すなわち、抗原ペプチドまたはタンパク質と膜貫通ドメインの間に存在する。
ある実施態様において、本発明で利用する膜貫通ドメインは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質の細胞膜への固定を可能とし得る
コロナウイルス
コロナウイルスは、エンベロープ、ポジティブセンス、一本鎖ＲＮＡ((＋) ｓｓＲＮＡ)ウイルスである。既知ＲＮＡウイルスの中で最大ゲノム(２６～３２kb)を有し、系統発生的に４属(α、β、γおよびδ)に分けられ、ベータコロナウイルスがさらに４分化系列(Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ)に細分化される。コロナウイルスは、ヒトを含む広範なトリおよび哺乳動物種に関連する。一部ヒトコロナウイルスは、一般に軽度呼吸器疾患を引き起こすが、乳幼児、高齢者および免疫低下者では重症度が大きくなり得る。それぞれベータコロナウイルス分化系列ＣおよびＢに属する中東呼吸器症候群コロナウイルス(ＭＥＲＳ－ＣｏＶ)および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス(ＳＡＲＳ－ＣｏＶ)は、高度病原性である。両ウイルスとも、最近１５年以内に病原体保有動物からヒト集団に出現し、高い症例致死率の大流行を引き起こした。非定型肺炎(コロナウイルス疾患２０１９；ＣＯＶＩＤ－１９)を引き起こす重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－２(ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２)の大流行が、２０１９年１２月半ばから中国で始まり、国際的に懸念される公衆衛生緊急事態に発展している。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２(ＭＮ９０８９４７.３)はベータコロナウイルス系統Ｂに属する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶと少なくとも７０％配列類似性を有する。
一般に、コロナウイルスは、４個の構造的タンパク質、すなわち、エンベロープ(Ｅ)、膜(Ｍ)、ヌクレオカプシド(Ｎ)およびスパイク(Ｓ)を有する。ＥおよびＭタンパク質はウイルス集合に重要な機能を有し、Ｎタンパク質はウイルスＲＮＡ合成に必要である。重要な糖タンパク質Ｓはウイルス結合および標的細胞への侵入を担う。Ｓタンパク質は、一本鎖不活性前駆体として合成され、産生細胞でフーリン様宿主プロテアーゼにより２個の非共有結合で会合されたサブユニット、Ｓ１およびＳ２に開裂される。Ｓ１サブユニットは、宿主－細胞受容体を認識する受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)を含む。Ｓ２サブユニットは、融合ペプチド、２個の７アミノ酸反復および膜貫通ドメインを含み、その全て大型立体構造再構成を受けることによりウイルスおよび宿主－細胞膜の融合の介在に必要である。Ｓ１およびＳ２サブユニットは三量化して大型融合前スパイクを形成する。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ前駆体タンパク質は、Ｓ１(６８５ ａａ)およびＳ２(５８８ ａａ)サブユニットにタンパク質分解により開裂される。Ｓ１サブユニットは受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)からなり、それは、宿主アンギオテンシン－変換酵素２(ＡＣＥ２)受容体を介する感受性細胞へのウイルス侵入に介在する。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルス完全長スパイク(Ｓ)タンパク質は１２７３アミノ酸からなる(配列番号１参照)。
ある実施態様において、本発明は、対象におけるコロナウイルスＳタンパク質、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質に対する免疫応答を誘導するために、少なくともエピトープＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質を含むペプチドまたはタンパク質をコードするＲＮＡを利用する。ある実施態様において、本発明のＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質の免疫原性フラグメントまたはその免疫原性バリアントを含むアミノ酸配列をコードする。
ある実施態様において、配列番号１の完全長スパイク(Ｓ)タンパク質は、プロトタイプ融合前立体構造が安定化されるように修飾される。融合前立体構造の安定化は、完全長スパイクタンパク質におけるＡＳ残基９８６および９８７への２個の連続的プロリン置換の導入により得られ得る。特異的に、スパイク(Ｓ)タンパク質安定化タンパク質バリアントは、９８６位のアミノ酸残基がプロリンに交換され、９８７位のアミノ酸残基もプロリンに交換されるような方法で得られる。ある実施態様において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質バリアントは、配列番号７に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、ここに記載するワクチン抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質(Ｓ)、そのバリアントまたはそのフラグメントを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。
ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～３８１９のヌクレオチド配列、配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～３８１９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するヌクレオチド配列または配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～３８１９のヌクレオチド配列もしくは配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～３８１９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するヌクレオチド配列のフラグメントを含む；および／または(ii)配列番号１または７のアミノ酸１７～１２７３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配列番号１または７のアミノ酸１７～１２７３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列または配列番号１または７のアミノ酸１７～１２７３のアミノ酸配列またはもしくは配列番号１または７のアミノ酸１７～１２７３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列の免疫原性フラグメントをコードする。ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～３８１９のヌクレオチド配列を含む；および／または(ii)配列番号１または７のアミノ酸１７～１２７３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。
ある実施態様において、ワクチン抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＳ１フラグメント(Ｓ１)(ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質(Ｓ)のＳ１サブユニット)、そのバリアントまたはそのフラグメントを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。
ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０４９のヌクレオチド配列、配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０４９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するヌクレオチド配列または配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０４９のヌクレオチド配列もしくは配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０４９のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一を有するヌクレオチド配列のフラグメントを含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸１７～６８３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸１７～６８３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸１７～６８３のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸１７～６８３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列の免疫原性フラグメントをコードする。ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０４９のヌクレオチド配列を含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸１７～６８３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。
ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０５５のヌクレオチド配列、配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０５５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するヌクレオチド配列または配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０５５のヌクレオチド配列もしくは配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０５５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一を有するヌクレオチド配列のフラグメントを含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸１７～６８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸１７～６８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸１７～６８５のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸１７～６８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列の免疫原性フラグメントをコードする。ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド４９～２０５５のヌクレオチド配列を含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸１７～６８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。
ある実施態様において、ワクチン抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質(Ｓ)のＳ１サブユニットの受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)、そのバリアントまたはそのフラグメントを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。配列番号３２７のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列、そのバリアントまたはそのフラグメントは、ここでは「ＲＢＤ」または「ＲＢＤドメイン」とも称する。
ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド９７９～１５８４のヌクレオチド配列、配列番号２、８または９のヌクレオチド９７９～１５８４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するヌクレオチド配列または配列番号２、８または９のヌクレオチド９７９～１５８４のヌクレオチド配列もしくは配列番号２、８または９のヌクレオチド９７９～１５８４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一を有するヌクレオチド配列のフラグメントを含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％または８０％同一性を有するアミノ酸配列の免疫原性フラグメントをコードする。ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、(ｉ)配列番号２、８または９のヌクレオチド９７９～１５８４のヌクレオチド配列を含む；および／または(ii)配列番号１のアミノ酸３２７～５２８のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。
ある実施態様によると、シグナルペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、そのバリアントまたはそのフラグメント、すなわち、抗原ペプチドまたはタンパク質に、直接またはリンカーを介して融合される。従って、ある実施態様において、シグナルペプチドは、ここに記載するワクチン抗原に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質または免疫原性そのフラグメント(抗原ペプチドまたはタンパク質)由来の上記アミノ酸配列に融合される。
ある実施態様において、本発明で使用するためのシグナルペプチドは、典型的に約１５～約３０アミノ酸長であり、抗原ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に位置する配列であるが、それに限定されない。ある実施態様において、ここに定義するシグナルペプチドは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質の規定した細胞区画、例えば、細胞表面、小胞体(ＥＲ)またはエンドソーム－リソソーム区画への輸送を可能とする。ある実施態様において、ここに定義するシグナルペプチド配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のシグナルペプチド配列、特に配列番号１のアミノ酸１～１６または１～１９のアミノ酸配列を含む配列または機能的そのバリアントを含むが、それらに限定されない。
本発明のある実施態様により利用され得るシグナルペプチド配列は、例えば、免疫グロブリンのシグナルペプチド配列、例えば、免疫グロブリン重鎖可変領域のシグナルペプチド配列であるかまたはそれを含んでよく、ここで、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンであり得る。
本発明で使用するためのシグナルペプチドは、コードされた抗原ペプチドまたはタンパク質の分泌を促進するために使用される。ある実施態様において、ここに定義するシグナルペプチドは、ここに定義するコードされた抗原ペプチドまたはタンパク質に融合する。ある実施態様において、ここに記載するＲＮＡは、抗原ペプチドまたはタンパク質およびシグナルペプチドをコードする少なくとも１個のコード領域を含み、ここで、該シグナルペプチドは、抗原ペプチドまたはタンパク質、例えば、ここに記載する抗原ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に融合される。
ある実施態様において、三量化ドメインは、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、そのバリアントまたはそのフラグメント、すなわち、抗原ペプチドまたはタンパク質に融合される。従って、ある実施態様において、三量化ドメインは、上記ワクチン抗原に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質または免疫原性そのフラグメント(抗原ペプチドまたはタンパク質)由来の上記アミノ酸配列(これは所望によりここに記載するシグナルペプチドに融合され得る)に融合される。
ある実施態様において、このような三量化ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質に位置するが、それに限定されない。ここに定義する三量化ドメインは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質の三量化を可能にする。ここに定義する三量化ドメインの例は、Ｔ４フィブリチンの天然三量化ドメインであるフォルドンを含むが、それらに限定されない。Ｔ４フィブリチン(フォルドン)のＣ末端ドメインはフィブリチン三量体構造およびの形成に必須であり、人工三量化ドメインとして使用され得る。
ある実施態様において、膜貫通ドメインは、直接またはリンカー、例えば、グリシン／セリンリンカーを介して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、そのバリアントまたはそのフラグメント、すなわち、抗原ペプチドまたはタンパク質に融合される。従って、ある実施態様において、膜貫通ドメインは、上記ワクチン抗原に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質または免疫原性そのフラグメント(抗原ペプチドまたはタンパク質)由来の上記アミノ酸配列(これは所望によりここに記載するシグナルペプチドおよび／または三量化ドメイン融合され得る)に融合される。
多くの実施態様において、本発明で利用する膜貫通ドメインは、抗原ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に位置するが、これに限定されない。ある実施態様において、このような膜貫通ドメインは、存在するならば、三量化ドメインのＣ末端に位置するが、これに限定されない。ある実施態様において、三量化ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質、そのバリアントまたはそのフラグメント、すなわち、抗原ペプチドまたはタンパク質と膜貫通ドメインの間に存在する。
ある実施態様において、本発明で利用する膜貫通ドメインは、ＲＮＡによりコードされる抗原ペプチドまたはタンパク質の細胞膜への固定を可能とし得る
ある実施態様において、ここに定義する膜貫通ドメイン配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質の膜貫通ドメイン配列、特に配列番号１のアミノ酸１２０７～１２５４のアミノ酸配列を含む配列または機能的そのバリアントを含むが、それらに限定されない。
ここに提供される三量化ドメインは、コードされた抗原ペプチドまたはタンパク質の三量化を促進するために使用される。ある実施態様において、ここに定義する三量化ドメインは、ここに定義する抗原ペプチドまたはタンパク質に融合される。ある実施態様において、ここに記載するＲＮＡはここに定義する抗原ペプチドまたはタンパク質および三量化ドメインをコードする少なくとも１個のコード領域を含み、該三量化ドメイン抗原ペプチドまたはタンパク質、例えば、抗原ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に融合される。
ある実施態様において、ここに記載するワクチン抗原は、ここに記載するワクチン抗原に含まれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質または免疫原性そのフラグメント(抗原ペプチドまたはタンパク質)由来の上記アミノ酸配列からなるかまたは本質的にそれからなるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルススパイク(Ｓ)タンパク質の連続配列を含む。ある実施態様において、ここに記載するワクチン抗原は、２２０アミノ酸、２１５アミノ酸、２１０アミノ酸または２０５アミノ酸を超えないＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルススパイク(Ｓ)タンパク質の連続配列を含む。
ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、ＢＮＴ１６２ｂ２(ＲＢＰ０２０.１またはＲＢＰ０２０.２)としてここに記載するヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ(ｍｏｄＲＮＡ)である。ある実施態様において、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、ＲＢＰ０２０.２としてここに記載するヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ(ｍｏｄＲＮＡ)である。
ここに記載する、ヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ(ｍｏｄＲＮＡ)の種々の実施態様は次のとおりである：
ＢＮＴ１６２ｂ２；ＲＢＰ０２０.１(配列番号１９；配列番号７)
構造：ｍ２７,３’－ＯＧｐｐｐ(ｍ１２’－Ｏ)ＡｐＧ)－ｈＡｇ－コザック－Ｓ１Ｓ２－ＰＰ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０
コードする抗原：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルススパイクタンパク質(Ｓ１Ｓ２タンパク質)(Ｓ１Ｓ２完全長タンパク質、配列バリアント)
ＢＮＴ１６２ｂ２；ＲＢＰ０２０.２(配列番号２０；配列番号７)
構造：ｍ２７,３’－ＯＧｐｐｐ(ｍ１２’－Ｏ)ＡｐＧ)－ｈＡｇ－コザック－Ｓ１Ｓ２－ＰＰ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０
コードする抗原：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルススパイクタンパク質(Ｓ１Ｓ２タンパク質)(Ｓ１Ｓ２完全長タンパク質、配列バリアント)
ＲＢＰ０２０.１のヌクレオチド配列
ヌクレオチド配列は、太字で示す個々の配列要素と共に示す。さらに、翻訳タンパク質の配列は、コードヌクレオチド配列の下に斜体で示す(＊＝停止コドン)。
ＲＢＰ０２０.２のヌクレオチド配列
ヌクレオチド配列は、太字で示す個々の配列要素と共に示す。さらに、翻訳タンパク質の配列は、コードヌクレオチド配列の下に斜体で示す(＊＝停止コドン)。
脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)
ある実施態様において、ここに記載する１以上の核酸(例えば、ＲＮＡ)は、ＬＮＰの形態で製剤化および／または投与される。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、当分野で知られるおよび／またはここで脂質粒子を産生することが確立されている１以上の脂質を含む。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、カチオン性脂質、中性脂質、ポリマーコンジュゲート脂質およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の脂質を含む。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、コレステロールまたはその誘導体などのステロイドを含む。
ここで使用する「中性脂質」は、選択ｐＨで非荷電または中性双性イオン形態で存在する脂質種をいう。ある実施態様において、付加的脂質は、次の中性脂質要素の一つを含む：(１)リン脂質、(２)コレステロールまたはその誘導体；または(３)リン脂質とコレステロールまたはその誘導体の混合物。ある実施態様において、リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリンまたはスフィンゴミエリンを含み得るが、これらに限定されない。このようなリン脂質ｉｎｃｌｕｄｅ 特にジアシルホスファチジルコリン、このようなａｓジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)、ジオレオイルホスファチジルコリン(ＤＯＰＣ)、ジミリストイルホスファチジルコリン(ＤＭＰＣ)、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン(ＤＰＰＣ)、ジアラキドイルホスファチジルコリン(ＤＡＰＣ)、ジベヘノイルホスファチジルコリン(ＤＢＰＣ)、ジトリコサノイルホスファチジルコリン(ＤＴＰＣ)、ジリグノセレオイルファチジルコリン(ＤＬＰＣ)、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルコリン(ＰＯＰＣ)、１,２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン(１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ)、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン(ＯＣｈｅｍｓＰＣ)、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン(Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ)およびホスファチジルエタノールアミン、特にジアシルホスファチジルエタノールアミン、例えばジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(ＤＯＰＥ)、ジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン(ＤＳＰＥ)、ジパルミトイル－ホスファチジルエタノールアミン(ＤＰＰＥ)、ジミリストイル－ホスファチジルエタノールアミン(ＤＭＰＥ)、ジラウロイル－ホスファチジルエタノールアミン(ＤＬＰＥ)、ジフィタノイル－ホスファチジルエタノールアミン(ＤＰｙＰＥ)および種々の疎水性鎖を有するさらなるホスファチジルエタノールアミン脂質を含む。
コレステロール誘導体の例は、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル－２’－ヒドロキシエチルエーテル、コレステリル－４’－ヒドロキシブチルエーテル、トコフェロールおよびその誘導体およびこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
用語「カチオン性脂質」は、生理学的ｐＨ(例えば、約７.０のｐＨ)などの選択ｐＨで正味の正荷電を有する、多数の脂質種の何れかをいう。カチオン性脂質の例は、１,２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン(ＤＯＴＡＰ)；Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ジオレイルオキシプロピルアミン(ＤＯＤＭＡ)、１,２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン(ＤＯＴＭＡ)、３－(Ｎ－(Ｎ’,Ｎ’－ジメチルアミノエタン)－カルバモイル)コレステロール(ＤＣ－Ｃｈｏｌ)、ジメチルジオクタデシルアンモニウム(ＤＤＡＢ)；１,２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン(ＤＯＤＡＰ)；１,２－ジアシルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；１,２－ジアルキルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；ジオクタデシルジメチル塩化アンモニウム(ＤＯＤＡＣ)、１,２－ジステアリルオキシ－Ｎ,Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン(ＤＳＤＭＡ)、２,３－ジ(テトラデコキシ)プロピル－(２－ヒドロキシエチル)－ジメチルアザニウム(ＤＭＲＩＥ)、１,２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン(ＤＭＥＰＣ)、ｌ,２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン(ＤＭＴＡＰ)、１,２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド(ＤＯＲＩＥ)および２,３－ジオレオイルオキシ－Ｎ－[２(スペルミンカルボキサミド)エチル]－Ｎ,Ｎ－ジメチル－ｌ－プロパナミウムトリフルオロアセテート(ＤＯＳＰＡ)、１,２－ジリノレイルオキシ－Ｎ,Ｎ－ジメチルアミノプロパン(ＤＬｉｎＤＭＡ)、１,２－ジリノレニルオキシ－Ｎ,Ｎ－ジメチルアミノプロパン(ＤＬｅｎＤＭＡ)、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン(ＤＯＧＳ)、３－ジメチルアミノ－２－(コレスト－５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ)－１－(ｃｉｓ,ｃｉｓ－９,１２－オクタデカジエンオキシ)プロパン(ＣＬｉｎＤＭＡ)、２－[５’－(コレスト－５－エン－３－ベータ－オキシ)－３’－オキサペントキシ)－３－ジメチル－１－(ｃｉｓ,ｃｉｓ－９’,１２’－オクタデカジエンオキシ)プロパン(ＣｐＬｉｎＤＭＡ)、Ｎ,Ｎ－ジメチル－３,４－ジオレイルオキシベンジルアミン(ＤＭＯＢＡ)、１,２－Ｎ,Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン(ＤＯｃａｒｂＤＡＰ)、２,３－ジリノレオイルオキシ－Ｎ,Ｎ－ジメチルプロピルアミン(ＤＬｉｎＤＡＰ)、１,２－Ｎ,Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン(ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ)、１,２－ジリノレオイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン(ＤＬｉｎＣＤＡＰ)、２,２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－[１,３]－ジオキソラン(ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ)、２,２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－[１,３]－ジオキソラン(ＤＬｉｎ－Ｋ－ＸＴＣ２－ＤＭＡ)、２,２－ジリノレイル－４－(２－ジメチルアミノエチル)－[１,３]－ジオキソラン(ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ)、ヘプタトリアコンタ－６,９,２８,３１－テトラエン－１９－イル－４－(ジメチルアミノ)ブタノアート(ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ)、Ｎ－(２－ヒドロキシエチル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(テトラデシルオキシ)－１－プロパンアミニウムブロマイド(ＤＭＲＩＥ)、(±)－Ｎ－(３－アミノプロピル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(ｃｉｓ－９－テトラデセニルオキシ)－１－プロパンアミニウムブロマイド(ＧＡＰ－ＤＭＯＲＩＥ)、(±)－Ｎ－(３－アミノプロピル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(ドデシルオキシ)－１－プロパンアミニウムブロマイド(ＧＡＰ－ＤＬＲＩＥ)、(±)－Ｎ－(３－アミノプロピル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(テトラデシルオキシ)－１－プロパンアミニウムブロマイド(ＧＡＰ－ＤＭＲＩＥ)、Ｎ－(２－アミノエチル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(テトラデシルオキシ)－１－プロパンアミニウムブロマイド(βＡＥ－ＤＭＲＩＥ)、Ｎ－(４－カルボキシベンジル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(オレオイルオキシ)プロパン－１－アミニウム(ＤＯＢＡＱ)、２－({８－[(３β)－コレスト－５－エン－３－イルオキシ]オクチル}オキシ)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－３－[(９Ｚ,１２Ｚ)－オクタデカ－９,１２－ジエン－１－イルオキシ]プロパン－１－アミン(オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ)、１,２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン(ＤＭＤＡＰ)、１,２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン(ＤＰＤＡＰ)、Ｎ１－[２－((１Ｓ)－１－[(３－アミノプロピル)アミノ]－４－[ジ(３－アミノ－プロピル)アミノ]ブチルカルボキサミド)エチル]－３,４－ジ[オレイルオキシ]－ベンズアミド(ＭＶＬ５)、１,２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン(ＤＯＥＰＣ)、２,３－ビス(ドデシルオキシ)－Ｎ－(２－ヒドロキシエチル)－Ｎ,Ｎ－ジメチルプロパン－１－アモニウムブロマイド(ＤＬＲＩＥ)、Ｎ－(２－アミノエチル)－Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(テトラデシルオキシ)プロパン－１－アミニウムブロマイド(ＤＭＯＲＩＥ)、ジ((Ｚ)－ノン－２－エン－１－イル) ８,８’－((((２(ジメチルアミノ)エチル)チオ)カルボニル)アザンジイル)ジオクタノエート(ＡＴＸ)、Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(ドデシルオキシ)プロパン－１－アミン(ＤＬＤＭＡ)、Ｎ,Ｎ－ジメチル－２,３－ビス(テトラデシルオキシ)プロパン－１－アミン(ＤＭＤＭＡ)、ジ((Ｚ)－ノン－２－エン－１－イル)－９－((４－(ジメチルアミノブタノイル)オキシ)ヘプタデカンジオエート(Ｌ３１９)、Ｎ－ドデシル－３－((２－ドデシルカルバモイル－エチル)－{２－[(２－ドデシルカルバモイル－エチル)－２－{(２－ドデシルカルバモイル－エチル)－[２－(２－ドデシルカルバモイル－エチルアミノ)－エチル]－アミノ}－エチルアミノ)プロピオンアミド(リピドイド９８Ｎ１２－５)、１－[２－[ビス(２－ヒドロキシドデシル)アミノ]エチル－[２－[４－[２－[ビス(２ヒドロキシドデシル)アミノ]エチル]ピペラジン－１－イル]エチル]アミノ]ドデカン－２－オール(リピドイドＣ１２－２００)を含むが、これらに限定されない。
ある実施態様において、カチオン性脂質は、ＷＯ２０１７／０７５５３１に開示する化学構造を有し、そのいくつかを下表Ａに示す：
さらなるカチオン性脂質の例を下表Ｂに示す。
ある実施態様において、カチオン性脂質は、イオン化可能脂質様物質(リピドイド)である。例示的リピドイドは、次の構造を有するＣ１２－２００である。
ある実施態様において、ここに記載する粒子は、ペグ化脂質などのポリマーコンジュゲート脂質を含む。用語「ペグ化脂質」は、脂質部分およびポリエチレングリコール部分両方を含む分子をいう。ペグ化脂質は当分野で知られる。
ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)を含む。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)を含む。ある実施態様において、本発明は、ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)を含むＬＮＰを提供する。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、コレステロールを含む。ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、ＡＬＣ－０３１５、ＡＬＣ－０１５９、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含む脂質を含む。
ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、約４０～約５５モルパーセント、約４０～約５０モルパーセント、約４１～約４９モルパーセント、約４１～約４８モルパーセント、約４２～約４８モルパーセント、約４３～約４８モルパーセント、約４４～約４８モルパーセント、約４５～約４８モルパーセント、約４６～約４８モルパーセント、約４７～約４８モルパーセントまたは約４７.２～約４７.８モルパーセントのＡＬＣ－０３１５を含む。ある実施態様において、ＬＮＰは、約４７.０、約４７.１、約４７.２、約４７.３、約４７.４、約４７.５、約４７.６、約４７.７、約４７.８、約４７.９または約４８.０モルパーセントのＡＬＣ－０３１５を含む。
ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、約６mg／ml～約９mg／ml、約６mg／ml～約８mg／ml、約６mg／ml～約７mg／ml、約７mg／ml～約９mg／ml、約８mg／ml～約９mg／mlまたは約７mg／ml～約８mg／mlのＡＬＣ－０３１５を含む。ある実施態様において、ＬＮＰは、約７mg／ml～約８mg／mlのＡＬＣ－０３１５を含む。ある実施態様において、ＡＬＣ－０３１５は、約７.１７mg／mlの濃度で存在する。
ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、約５～約１５モルパーセント、約７～約１３モルパーセントまたは約９～約１１モルパーセントＤＳＰＣを含む。ある実施態様において、ＤＳＰＣは、約９.５、約１０または約１０.５モルパーセントの濃度で存在する。
ある実施態様において、本発明のＬＮＰは、約１mg／ml～約２.５mg／ml、約１mg／ml～約２mg／mlまたは約１mg／ml～約１.５mg／mlのＤＳＰＣを含む。ある実施態様において、ＬＮＰは、約１.５mg／ml～約２mg／mlのＤＳＰＣを含む。ある実施態様において、ＡＬＣ－０３１５は、約１.５６mg／mlの濃度で存在する。
ある実施態様において、コレステロールは、約３０～約５０モルパーセント、約３５～約４５モルパーセントまたは約３８～約４３モルパーセントの範囲の濃度で存在する。ある実施態様において、コレステロールは、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５または約４６モルパーセントの濃度で存在する。
ある実施態様において、コレステロールは、約２mg／ml～約４mg／ml、約２mg／ml～約３.５mg／ml、約２mg／ml～約３mg／ml、約２mg／ml～約２.５mg／ml、約２.５mg／ml～約４mg／ml、約３mg／ml～約４mg／mlまたは約３.５mg／ml～約４mg／mlの濃度で存在する。ある実施態様において、コレステロールは、約３mg／ml～約３.５mg／mlの濃度で存在する。ある実施態様において、コレステロールは、約３.１mg／mlの濃度で存在する。
ある実施態様において、ＡＬＣ－０１５９は、約１～約１０モルパーセント、約２～約８モルパーセント、約４～約８モルパーセント、約４～約６モルパーセント、約１～約５モルパーセントまたは約１～約３モルパーセントの範囲の濃度で存在する。
ある実施態様において、ＡＬＣ－０１５９は、約０.５mg／ml～約２.５mg／ml、約１mg／ml～約２.５mg／ml、約１.５mg／ml～約２.５mg／ml、約２mg／ml～約２.５mg／ml、約０.５mg／ml～約２mg／ml、約０.５mg／ml～約１.５mg／mlまたは約０.５mg／ml～約１mg／mlの範囲の濃度で存在する。ある実施態様において、ＡＬＣ－０１５９は、約０.５mg／ml～約１mg／mlの濃度で存在する。ある実施態様において、ＡＬＣ－０１５９は、約０.８９mg／mlの濃度で存在する。
ある実施態様において、モルパーセントここに記載するＬＮＰに存在する脂質の総モルに基づき決定される。
ある実施態様において、本発明は、約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の質量比で存在するＡＬＣ－０３１５、ＡＬＣ－０１５９、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含む脂質を含むＬＮＰを提供する。
ある実施態様において、本発明の脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)は、少なくとも３０nm、少なくとも４０nm、少なくとも５０nm、少なくとも６０nm、少なくとも７０nm、少なくとも８０nm、少なくとも９０nm、少なくとも１００nm、少なくとも２００nm、少なくとも３００nm、少なくとも４００nm、少なくとも５００nmまたは少なくとも１０００nmの平均直径を有し得る。ある実施態様において、本発明の脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)は、最大３０nm、最大４０nm、最大５０nm、最大６０nm、最大７０nm、最大８０nm、最大９０nm、最大１００nm、最大２００nm、最大３００nm、最大４００nm、最大５００nm、最大１０００nmまたは最大１２００nmの平均直径を有し得る。ある実施態様において、本発明の脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)は、約３０nm～約１０００nm、約５０nm～約１０００nm、約７０nm～約１０００nm、約３０nm～約５００nm、約３０nm～約１００nmまたは約３０nm～約８０nmの範囲の平均直径を有し得る。
ここに記載する核酸は、少なくとも１個のカチオン性またはカチオン的にイオン化可能な脂質または脂質様物質および／または少なくとも１個のカチオン性ポリマーからコロイドを得て、コロイドと核酸を混合して脂質粒子(例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ)を得ることを含み得る、広範な方法、例えば、フィルム水和方法、逆相蒸発、エタノール注射技術)を使用して、脂質(例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ)に包装され得る。
ある実施態様において、ＲＮＡは、脂質を含むエタノール溶液を針を介して水溶液に急速に注入する、エタノール注射技術を使用して、脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)に包装される。従って、ある実施態様において、核酸含有脂質粒子(例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ)は、次のとおり製造する：カチオン性脂質および付加的脂質(例えば、ここに記載する脂質組成物)などの脂質を含むエタノール溶液を、核酸(例えば、ＲＮＡ)を含む水溶液に、組み合わせた溶液の撹拌または振盪下に注入する。この方法により製造した、調製された脂質粒子中の核酸を、さらに処理、例えば、濃縮、１以上の異なる緩衝液系に移すなどできる。
ある実施態様において、ここに記載するＲＮＡは、ここに記載するＬＮＰ形成方法により、該ＲＮＡと粒子形成脂質(例えば、ここに記載するもの)の混合により、脂質粒子(例えば、ＬＮＰ)に包装される。ある実施態様において、ＲＮＡ含有ＬＮＰ(ＲＮＡ／ＬＮＰ)は、第一緩衝液系で調製され、その後、貯蔵および／または使用のために第二緩衝液系に交換される。
ある実施態様において、第一緩衝液系は、水性緩衝液、例えば、ＰＢＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｈｉｓ緩衝液などを含む。ある実施態様において、第一緩衝液系は、ＰＢＳ緩衝液を含む。本発明のある実施態様において、第一緩衝液系は、約５mg／ml～約７mg／ml、約６mg／ml～約７mg／mlまたは約５mg／ml～約６mg／ml 塩化ナトリウムを含む。ある実施態様において、第一緩衝液系約６mg／ml 塩化ナトリウムを含む。ある実施態様において、第一緩衝液系は塩化ナトリウムを実質的に含まない。この文脈での実質的に含まないとは、塩化ナトリウムが添加されないことを意味し、ナトリウムおよび／または塩化物イオンがこのような製剤中の他の要素によりなお存在してよいことを当業者は理解する。従って、ある実施態様において、本発明のＰＢＳ緩衝液は、塩化ナトリウムが実質的に存在せず、０.１５ｇ／Ｌ ＫＣｌ、１.０８ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４および０.１５ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４を含む、ＰＢＳ緩衝液である。ある実施態様において、本発明のＰＢＳは、６ｇ／Ｌ ＮａＣｌ、０.１５ｇ／Ｌ ＫＣｌ、１.０８ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４および０.１５ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４を含む。
ある実施態様において、第一緩衝液系は、保護剤、例えば、スクロース、トレハロースまたはそれらの組み合わせを含む。ある実施態様において、第一緩衝液系の保護剤はスクロースおよび／またはトレハロースである。ある実施態様において、スクロースは約１０％ｗ／ｖの濃度である。ある実施態様において、スクロースは約５％の濃度である。ある実施態様において、トレハロースは約１０％ｗ／ｖの濃度である。ある実施態様において、トレハロースは約５％の濃度である。
ある実施態様において、本発明の第二緩衝液系は、水性緩衝液、例えば、ＰＢＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｈｉｓ緩衝液などを含む。ある実施態様において、第二緩衝液系はＰＢＳを含む。ある実施態様において、本発明のＰＢＳは、６ｇ／Ｌ ＮａＣｌ、０.１５ｇ／Ｌ ＫＣｌ、１.０８ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４および０.１５ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４を含む。ある実施態様において、本発明のＰＢＳは、塩化ナトリウムを実質的に含まず(ここに定義するとおり)、０.１５ｇ／Ｌ ＫＣｌ、１.０８ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４および０.１５ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４を含むＰＢＳ緩衝液である。ある実施態様において、第二緩衝液系はＴｒｉｓ緩衝液を含む。ある実施態様において、第二緩衝液系は、約１０mMの濃度でＴｒｉｓ緩衝液を含む。ある実施態様において、Ｔｒｉｓ緩衝液は塩化ナトリウムを実質的に含まない。ある実施態様において、Ｔｒｉｓ緩衝液は、約６mg／ml 塩化ナトリウムを含む。ある実施態様において、第二緩衝液系はＨｉｓ緩衝液を含む。ある実施態様において、第二緩衝液系は、約１０mMの濃度でＨｉｓ緩衝液を含む。ある実施態様において、Ｈｉｓ緩衝液は塩化ナトリウムを実質的に含まない。ある実施態様において、Ｈｉｓ緩衝液は、約６mg／ml 塩化ナトリウムを含む。ある実施態様において、第二緩衝液系はＨＥＰＥＳ緩衝液を含む。ある実施態様において、第二緩衝液系は、約１０mMの濃度でＨＥＰＥＳ緩衝液を含む。ある実施態様において、ＨＥＰＥＳ緩衝液は塩化ナトリウムを実質的に含まない。ある実施態様において、ＨＥＰＥＳ緩衝液は、約６mg／ml 塩化ナトリウムを含む。
ある実施態様において、ＲＮＡ－ＬＮＰは、約０.４mg／ml～約０.６mg／ml、約０.４mg／ml～約０.５mg／mlまたは約０.５mg／ml～約０.６mg／ml ｍＲＮＡを含む。ある実施態様において、ＲＮＡ－ＬＮＰは、約０.５mg／ml ｍＲＮＡを含む。
製剤
本発明は、とりわけ、ＲＮＡ治療の製剤および特に、核酸(例えば、ｍＲＮＡ)ペイロードを含む、ＬＮＰ製剤に関するテクノロジーを提供する。このようなＲＮＡ／ＬＮＰ製剤は、参照製剤と異なり、参照製剤に対して１以上の性質を修飾(例えば、改善する、特定の成分(例えば、保護剤および／または緩衝液成分)を含むおよび／または特定の方法により製造される。例えば、ある実施態様において、提供される製剤は、同じ脂質および核酸を含むが、保護剤および／または緩衝液および／またはある製造または処理工程が異なる参照製剤に対して改善を示す。
ある実施態様において、本発明は、乾燥に適するおよび／または乾燥されている組成物を提供する。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、凍結乾燥により乾燥される。
ある実施態様において、ここに記載する組成物は、水を実質的に含まないまたは水を実質的に含まなくなるまで乾燥される。ある実施態様において、組成物は、０.８％未満、０.７％未満、０.６％未満、０.５％未満、０.４％未満または０.３％ｗ／ｗ未満の水を含む。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、一定期間、例えば、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間またはそれ以上およびある低温閾値より高い、例えば、約－８０℃、－７０℃、－５０℃、－３０℃、－２０℃、０℃、２℃、４℃、８℃、１５°、２０℃、３０℃、４０℃またはそれ以上で、０.８％未満、０.７％未満、０.６％未満、０.５％未満、０.４％未満または０.３％ｗ／ｗ未満の水を維持する。
本発明のある実施態様において、組成物は、乾燥(例えば、凍結乾燥)中、アニールされる。ある実施態様において、組成物は、乾燥中、アニールされない。
ある実施態様において、低温閾値を超える温度で、少なくとも特定の期間貯蔵に安定である、組成物が提供される。ある実施態様において、ここに提供する組成物は、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む少なくとも約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上の一定期間、貯蔵に安定である。ある実施態様において、ここに提供する組成物は、少なくとも約１２週間貯蔵に安定である。ある実施態様において、組成物約－８０℃、－７０℃、－５０℃、－３０℃、－２０℃、０℃、２℃、４℃、８℃、１５°、２０℃、３０℃、４０℃またはそれ以上であり得る低温閾値より高い温度で、貯蔵に安定である。ある実施態様において、組成物は、約０℃、２℃、５℃、８℃、２５℃、４０℃またはそれ以上の温度で、貯蔵に安定である。ある実施態様において、ここに提供する組成物は、約２℃～約４０℃、２℃～約３０℃、約２℃～約２０℃、約２℃～約１０℃、約８℃～約４０℃、約２０℃～約４０℃または約３０℃～約４０℃の温度範囲で、少なくとも約１２週間の一定期間、貯蔵に安定である。
ある実施態様において、ここに記載する組成物は、脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を含むコロイド状内容物の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、ＬＮＰ特徴(例えば、そのＺ平均および／または多分散指数(ＰＤＩ)を含むが、これらに限定されない)の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、核酸完全性、核酸封入の程度(例えば、パーセント)および／または核酸発現度(例えば、例えば関連参照レベルのパーセントとして表され得るコード化ポリペプチドの発現レベル)の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約２０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、１９nm、１８nm、１７nm、１６nm、１５nm、１４nm、１３nm、１２nm、１１nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約１０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、９nm、８nm、７nm、６nm、５nm、４nm、３nm、２nm、１nm、０.５nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子が多分散指数(ＰＤＩ)の０.１未満の変化(例えば、ＰＤＩの０.０９、０.０８、０.０７、０.０６、０.０５、０.０４、０.０３またはそれより少ない変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物に少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)の核酸封入が維持されるならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、コード化ポリペプチドの発現レベルの少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)が維持されるならば、安定と考えられる。
ある実施態様において、ここに記載する組成物(例えば、ＬＮＰ組成物)は、第一緩衝液系に調製され、次いでここに記載する第二緩衝液系に交換される。
ある実施態様において、ＬＮＰここに記載する組成物は、１以上の粒子形成脂質を含む。ある実施態様において、粒子形成脂質は、((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)、２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)、ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)およびコレステロールを含む。
ある実施態様において、ＬＮＰ組成物は、それぞれ、約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で存在する、ＡＬＣ－０３１５、ＡＬＣ－０１５９、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含む。
ある実施態様において、ＬＮＰここに記載する組成物は、それぞれ、７.１７mg／ml、０.８９mg／ml、１.５６mg／mlおよび３.１mg／ml濃度で、ＡＬＣ－０３１５、ＡＬＣ－０１５９、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含む。
本発明のある実施態様は、１以上の保護剤を利用する。ある実施態様において、保護剤は、スクロース、トレハロースまたはそれらの組み合わせであるかまたはそれを含む。ある実施態様において、スクロースは本発明の組成物または方法において約１０％ｗ／ｖ濃度である。ある実施態様において、トレハロースは本発明の組成物または方法において約１０％ｗ／ｖ濃度である。ある実施態様において、本発明の組成物または方法において、スクロースは約５％ｗ／ｖ濃度であり、トレハロースは約５％ｗ／ｖ濃度である。
ある実施態様において、凍結保護剤が、凍結工程または乾燥工程前に、組成物に添加され、所望の濃度(例えば、ここに記載するもの)にされる。
ある実施態様において、保護剤は、例えば、ここに記載するとおり、ＬＮＰが調製される、第一緩衝液系に添加される。ある実施態様において、保護剤は第一緩衝液系および第二緩衝液系両方に添加される。保護剤が第一緩衝液系および第二緩衝液系両方に添加される実施態様において、各緩衝液系に異なる保護剤を使用しても、同じ保護剤を使用してもよい。保護剤が第一緩衝液系および第二緩衝液系両方に添加される実施態様において、保護剤の異なる濃度を使用しても、同じ濃度を使用してもよい。
本発明のある実施態様は、１以上の緩衝液系を利用する。ある実施態様において、第一および第二緩衝液系が利用される。
ある実施態様において、提供される組成物の調製および／または使用は、例えば、ある実施態様において、えば、希釈されたＬＮＰ組成物に含まれる緩衝液系などの先に使用した緩衝液系と同じであり得て、他の実施態様において、異なり得る、緩衝液系の添加による、希釈の工程を含み得る。
ある実施態様において、利用する緩衝液(例えば、ここに記載する緩衝液系で利用する緩衝液)は塩化ナトリウムを実質的に含まない。この文脈での実質的に含まないとは、ある実施態様において、ナトリウムおよび／または塩化物イオンがこのような製剤中の他の要素によりなお存在し得るとしても、塩化ナトリウムが添加されないことを意味することを、当業者は理解する。
ある実施態様において、提供される組成物は、ＬＮＰ(すなわち、核酸／ＬＮＰ)、保護剤および緩衝液を含む。ある実施態様において、緩衝液はナトリウムイオンを含まない。ある実施態様において、緩衝液は塩を含まない。ある実施態様において、緩衝液は、ここに記載するＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液またはＨｉｓ緩衝液である。ある実施態様において、緩衝液は、ＮａＣｌを使用せずに製造したリン酸緩衝化食塩水バリアントである。ある実施態様において、緩衝液は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＫＨ２ＰＯ４を含む参照ＰＢＳと比較してナトリウムイオンレベルが低いＰＢＳバリアントである；ある実施態様において、このような参照ＰＢＳは、１３７mM ＮａＣｌ(すなわち、８ｇ／Ｌ ＮａＣｌ)、２.７mM ＫＣｌ(すなわち、０.２ｇ／Ｌ ＫＣｌ)、１０mM Ｎａ２ＨＰＯ４(すなわち、１.４４ｇ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４)および１.８mm ＫＨ２ＰＯ４(すなわち、０.２４ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４)を含む(またはそれからなる)「標準的」ＰＢＳである。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、このような参照標準的ＰＢＳで見られるより低いレベルのナトリウムイオンを有する、ＰＢＳバリアントである。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、約１０mMのＴｒｉｓ緩衝液である。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、約１０mMのＨｉｓ緩衝液である。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、約１０mMのＨＥＰＥＳ緩衝液である。ある実施態様において、本発明で利用する緩衝液は、６mg／ml 塩化ナトリウムが補われる。
ある実施態様において、本発明の組成物は、緩衝液での希釈により投薬形態に調製される。
使用
ここに記載する本発明により提供されるテクノロジー１以上の核酸／ＬＮＰ(例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ)組成物の製剤および／または投与に関連するおよび／またはそれに有用である。
ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月またはそれ以上を含む少なくとも約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上の一定期間、貯蔵に安定であるＬＮＰ組成物(例えば、ＬＮＰ／ＲＮＡ組成物)を提供する。ある実施態様において、本発明のテクノロジーは、少なくとも約１２週間貯蔵に安定であるＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、提供される組成物約－８０℃、－７０℃、－５０℃、－３０℃、－２０℃、０℃、２℃、４℃、８℃、１５°、２０℃、３０℃、４０℃またはそれ以上であり得る低温閾値より高い温度で、貯蔵に安定である。ある実施態様において、提供される組成物は、約０℃、２℃、５℃、８℃、２５℃、４０℃またはそれ以上の温度で、貯蔵に安定である。ある実施態様において、ＬＮＰここに提供する組成物は、約２℃～約４０℃、２℃～約３０℃、約２℃～約２０℃、約２℃～約１０℃、約８℃～約４０℃、約２０℃～約４０℃または約３０℃～約４０℃の温度範囲で、少なくとも約１２週間の一定期間、貯蔵に安定である。
ここに記載する提供される組成物は、脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を含むコロイド状内容物の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、ＬＮＰ特徴(例えば、そのＺ平均および／または多分散指数(ＰＤＩ)を含むが、これらに限定されない)の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、核酸完全性、核酸封入の程度(例えば、パーセント)および／または核酸発現度(例えば、例えば関連参照レベルのパーセントとして表され得るコード化ポリペプチドの発現レベル)の維持に基づき、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約２０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、１９nm、１８nm、１７nm、１６nm、１５nm、１４nm、１３nm、１２nm、１１nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子がＺ平均の約１０nm未満の変化(Ｚ平均の、例えば、９nm、８nm、７nm、６nm、５nm、４nm、３nm、２nm、１nm、０.５nm未満またはそれ以下の変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物内の脂質ナノ粒子が多分散指数(ＰＤＩ)の０.１未満の変化(例えば、ＰＤＩの０.０９、０.０８、０.０７、０.０６、０.０５、０.０４、０.０３またはそれより少ない変化を含む)を示すならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、そのような組成物に少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)の核酸封入が維持されるならば、安定と考えられる。ある実施態様において、提供されるここに記載する組成物は、関連参照レベルと比較して、指定された一連の条件下で、一定期間にわたり、コード化ポリペプチドの発現レベルの少なくとも５０％(例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む)が維持されるならば、安定と考えられる。
ある実施態様において、ここに提供されるテクノロジーは、ウイルス抗原、例えば、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、コロナウイルス、呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザウイルスおよびムンプスウイルスからなる群から選択されるウイルスと関連する抗原であるかまたはそれを含むことができる抗原を利用する。ある実施態様において、抗原は、ボルティモア分類システムに基づき、第Ｉ群、第II群、第III群、第IV群、第Ｖ群、第VI群または第VII群ウイルスから選択されるウイルスと関連するウイルス抗原であるかまたはそれを含んでよい。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、対象にウイルスファミリーアデノウイルス科、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、アネロウイルス科、プレオリポウイルス科、レオウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、トガウイルス科、アレナウイルス科、フラビウイルス科、オルトミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、コロナウイルス科、アストロウイルス科、ボルナウイルス科、アルテリウイルス科またはヘペウイルス科から選択されるウイルスからの免疫を提供するウイルス。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、対象にウイルス感染に対する免疫を提供する。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、対象にコロナウイルス、コロナウイルス感染またはコロナウイルスと関連する疾患または障害に対する免疫を提供する。故に、本発明は、コロナウイルスと関連する感染、疾患または障害の処置または予防のための組成物および方法を提供する。
ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、コロナウイルスと関連する感染、疾患または障害を有する対象に投与されるＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、コロナウイルスと関連する感染、疾患または障害を発症するリスクのある対象に投与するためのＬＮＰ組成物を提供する。例えば、ここに記載するテクノロジーは、コロナウイルスと接触するリスクのある対象に投与し得る、ＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、コロナウイルスが蔓延している地理的領域に住んでいる、旅行するまたは旅行が予測される対象に投与するＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、地理的領域に住んでいる、旅行するまたは旅行が予測される他人と接触するまたは摂食が予測される対象に投与するＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、職業またはその他の接触を介してコロナウイルスにさらされていることが知られる対象に投与するＬＮＰ組成物を提供する。ある実施態様において、コロナウイルスはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
ある実施態様において、ここに記載するテクノロジーは、疾患または障害にり患しているまたは発症するリスクのある(または易罹患性である)対象に、予防的(すなわち、疾患または障害の予防のため)または治療的(すなわち、疾患または障害の処置のため)に投与され得る組成物を提供する。このような対象は、標準的臨床的方法を使用して同定され得る。本発明の状況において、予防的投与は、疾患または障害が予防される(例えば、疾患死亡率または罹病率の負担を減少する)またはそれとは別にその進行を遅延するように、疾患の明白な臨床的症状の顕在化前に行う。
投与
ここに提供されるのは、ペイロード(例えば、ｍＲＮＡ)を、そのようなペイロードを必要とする対象の細胞に送達するための組成物(例えば、医薬組成物)および方法である。ある実施態様において、提供される組成物は、ウイルス感染に対する予防目的および／またはウイルス感染を処置する治療目的で投与される。ある実施態様において、本発明のテクノロジーは、コロナウイルス、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の処置のための治療剤または予防剤として使用できる組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、例えば、特定の疾患、障害または状態の診断がされていないおよび／または１以上の特定の症状または特徴を示していない対象に、予防目的で投与され得る。ある実施態様において、ここに提供する医薬組成物は、免疫予防有効量の量で、対象の細胞または組織に投与される。ここに提供する医薬組成物は、他の治療または予防化合物と共に投与し得る。
ある実施態様において、医薬組成物は、例えば、特定の疾患、障害または状態の診断がされているおよび／または１以上の特定の症状または特徴を示している対象に、治療的に投与される。ある実施態様において、ここに提供する医薬組成物は、対象の細胞または組織に、治療有効量の量で投与される。このようなここに提供する医薬組成物は、他の治療または予防化合物と共に投与し得る。
予防および／または治療目的に必要な提供される医薬組成物(例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ組成物)の正確な量は、数ある考慮事項の中で、対象の種、年齢および一般的状態、疾患の重症度、投与方法および活性のモードに依存して、対象毎に異なる。しかしながら、提供される組成物の使用は、合理的な医学的判断の範囲内で、処置医により決定され得ることは理解される。従って、特定の患者に対する特定の治療および／または予防有効用量は、処置する障害および障害の重症度、用いる特定の組成物の活性または効力、患者の年齢、体重、一般的健康、性別および食習慣、投与時間、投与経路および用いる特定の化合物の排泄速度、処置期間；用いる具体的化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物および医学分野で周知の類似因子を含む、多様な因子に依存する。
ある実施態様において、提供される医薬組成物は、他の治療を受けている、受けるまたは将来受ける対象に投与される。ある実施態様において、他の治療は、提供される治療で処置される疾患、障害または状態の１以上の症状または性質に対処する、他の治療と、例えば、同時にまたは交互レジメンで、投与される。それとは別にまたはそれに加えて、ある実施態様において、他の治療は、異なる疾患の１以上の症状または性質に対処する。一例を挙げると、種々の実施態様において、複数の予防治療(例えば、予防ワクチン)を、実質的に同時に投与するのが望ましいことがあり得る。
ここに記載する医薬組成物は、１以上のアジュバントを含んでよくまたは１以上のアジュバントと組み合わせで投与し得る(すなわち、それを受けている、受けるまたは受ける予定である対象に投与し得る)。本発明で利用するアジュバントは、免疫応答を延長、増強または加速するあらゆる化合物に関し得る。アジュバントは、油エマルジョン(例えば、フロイントアジュバント)、鉱物化合物(例えば、ミョウバン)、細菌産物(例えば、百日咳毒素)または免疫刺激複合体などの化合物の異種群を含む。アジュバントの例は、ＬＰＳ、ＧＰ９６、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、増殖因子およびサイトカイン、例えばモノカイン、リンホカイン、インターロイキン、ケモカインを含むが、これらに限定されない。本発明で利用されるサイトカインは、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＬＴ－ａまたはそれらの組み合わせであり得る。本発明で使用され得るさらに知られるアジュバントは、水酸化アルミニウム、フロイントアジュバントまたは油、例えば、Montanide(登録商標)ISA51である。本発明で使用するための他の適当なアジュバントは、Ｐａｍ３Ｃｙｓなどのリポペプチドを含む。
ここに記載する医薬組成物は、例えば、約０.５０mg／mLの濃度で、注射用溶液のための凍結濃縮物として提供され得る。ある実施態様において、注射用溶液の製剤のために、製剤を、例えば、一工程希釈法で、等張塩化ナトリウム溶液(例えば、０.９％ＮａＣｌ、食塩水)で、解凍および希釈および／または再水和および希釈する。最終注射用溶液の濃度は、投与される各用量レベルに依存して変わる。
ある実施態様において、０.１μg～３００μg、０.５μg～２００μgまたは１μg～１００μg、例えば約１μg、約３μg、約１０μg、約３０μg、約５０μgまたは約１００μgのここに記載するＲＮＡの量を、用量あたり投与し得る。ある実施態様において、ここに記載される開示される組成物は単一用量で投与される。ある実施態様において、ここに記載する組成物は、プライミング用量、続いて１以上のブースター用量で投与される。ある実施態様において、ブースター用量または第一ブースター用量を、プライミング用量の投与後、７～２８日または１４～２４日に投与し得る。
ある実施態様において、６０μg以下、５０μg以下、４０μg以下、３０μg以下、２０μg以下、１０μg以下、５μg以下、２.５μg以下または１μg以下のここに記載するＲＮＡの量を、用量あたり投与し得る。
ある実施態様において、少なくとも０.２５μg、少なくとも０.５μg、少なくとも１μg、少なくとも２μg、少なくとも３μg、少なくとも４μg、少なくとも５μg、少なくとも１０μg、少なくとも２０μg、少なくとも３０μgまたは少なくとも４０μgのここに記載するＲＮＡの量を、用量あたり投与し得る。
ある実施態様において、０.２５μg～６０μg、０.５μg～５５μg、１μg～５０μg、５μg～４０μgまたは１０μg～３０μgのここに記載するＲＮＡの量を、用量あたり投与し得る。
ある実施態様において、約３０μgのここに記載するＲＮＡの量を、用量あたり投与する。ある実施態様において、このような用量を少なくとも２回投与する。例えば、２回目の投与は、最初の投与後約２１日に投与し得る。
ある実施態様において、上記のとおり投与されるＲＮＡは、ＢＮＴ１６２ｂ２(ＲＢＰ０２０.１またはＲＢＰ０２０.２)としてここに記載するヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ(ｍｏｄＲＮＡ)である。ある実施態様において、上記のとおり投与されるＲＮＡは、ＲＢＰ０２０.２としてここに記載するヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ(ｍｏｄＲＮＡ)である。
ある実施態様において、本発明の免疫原性組成物またはワクチンの投与は、単一投与で実施しても、複数投与によりブーストしてもよい。
配列表
配列番号１
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Pro Leu Val Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
配列番号２
auguuugugu uucuugugcu gcugccucuu gugucuucuc agugugugaa uuugacaaca 60
agaacacagc ugccaccagc uuauacaaau ucuuuuacca gaggagugua uuauccugau 120
aaaguguuua gaucuucugu gcugcacagc acacaggacc uguuucugcc auuuuuuagc 180
aaugugacau gguuucaugc aauucaugug ucuggaacaa auggaacaaa aagauuugau 240
aauccugugc ugccuuuuaa ugauggagug uauuuugcuu caacagaaaa gucaaauauu 300
auuagaggau ggauuuuugg aacaacacug gauucuaaaa cacagucucu gcugauugug 360
aauaaugcaa caaauguggu gauuaaagug ugugaauuuc aguuuuguaa ugauccuuuu 420
cugggagugu auuaucacaa aaauaauaaa ucuuggaugg aaucugaauu uagaguguau 480
uccucugcaa auaauuguac auuugaauau gugucucagc cuuuucugau ggaucuggaa 540
ggaaaacagg gcaauuuuaa aaaucugaga gaauuugugu uuaaaaauau ugauggauau 600
uuuaaaauuu auucuaaaca cacaccaauu aauuuaguga gagaucugcc ucagggauuu 660
ucugcucugg aaccucuggu ggaucugcca auuggcauua auauuacaag auuucagaca 720
cugcuggcuc ugcacagauc uuaucugaca ccuggagauu cuucuucugg auggacagcc 780
ggagcugcag cuuauuaugu gggcuaucug cagccaagaa cauuucugcu gaaauauaau 840
gaaaauggaa caauuacaga ugcuguggau ugugcucugg auccucuguc ugaaacaaaa 900
uguacauuaa aaucuuuuac aguggaaaaa ggcauuuauc agacaucuaa uuuuagagug 960
cagccaacag aaucuauugu gagauuucca aauauuacaa aucugugucc auuuggagaa 1020
guguuuaaug caacaagauu ugcaucugug uaugcaugga auagaaaaag aauuucuaau 1080
uguguggcug auuauucugu gcuguauaau agugcuucuu uuuccacauu uaaauguuau 1140
ggagugucuc caacaaaauu aaaugauuua uguuuuacaa auguguaugc ugauucuuuu 1200
gugaucagag gugaugaagu gagacagauu gcccccggac agacaggaaa aauugcugau 1260
uacaauuaca aacugccuga ugauuuuaca ggauguguga uugcuuggaa uucuaauaau 1320
uuagauucua aagugggagg aaauuacaau uaucuguaca gacuguuuag aaaaucaaau 1380
cugaaaccuu uugaaagaga uauuucaaca gaaauuuauc aggcuggauc aacaccuugu 1440
aauggagugg aaggauuuaa uuguuauuuu ccauuacaga gcuauggauu ucagccaacc 1500
aauggugugg gauaucagcc auauagagug guggugcugu cuuuugaacu gcugcaugca 1560
ccugcaacag uguguggacc uaaaaaaucu acaaauuuag ugaaaaauaa augugugaau 1620
uuuaauuuua auggauuaac aggaacagga gugcugacag aaucuaauaa aaaauuucug 1680
ccuuuucagc aguuuggcag agauauugca gauaccacag augcagugag agauccucag 1740
acauuagaaa uucuggauau uacaccuugu ucuuuugggg gugugucugu gauuacaccu 1800
ggaacaaaua caucuaauca gguggcugug cuguaucagg augugaauug uacagaagug 1860
ccaguggcaa uucaugcaga ucagcugaca ccaacaugga gaguguauuc uacaggaucu 1920
aauguguuuc agacaagagc aggaugucug auuggagcag aacaugugaa uaauucuuau 1980
gaaugugaua uuccaauugg agcaggcauu ugugcaucuu aucagacaca gacaaauucc 2040
ccaaggagag caagaucugu ggcaucucag ucuauuauug cauacaccau gucucuggga 2100
gcagaaaauu cuguggcaua uucuaauaau ucuauugcua uuccaacaaa uuuuaccauu 2160
ucugugacaa cagaaauuuu accugugucu augacaaaaa caucugugga uuguaccaug 2220
uacauuugug gagauucuac agaauguucu aaucugcugc ugcaguaugg aucuuuuugu 2280
acacagcuga auagagcuuu aacaggaauu gcuguggaac aggauaaaaa uacacaggaa 2340
guguuugcuc aggugaaaca gauuuacaaa acaccaccaa uuaaagauuu uggaggauuu 2400
aauuuuagcc agauucugcc ugauccuucu aaaccuucua aaagaucuuu uauugaagau 2460
cugcuguuua auaaagugac acuggcagau gcaggauuua uuaaacagua uggagauugc 2520
cugggugaua uugcugcaag agaucugauu ugugcucaga aauuuaaugg acugacagug 2580
cugccuccuc ugcugacaga ugaaaugauu gcucaguaca caucugcuuu acuggcugga 2640
acaauuacaa gcggauggac auuuggagcu ggagcugcuc ugcagauucc uuuugcaaug 2700
cagauggcuu acagauuuaa uggaauugga gugacacaga auguguuaua ugaaaaucag 2760
aaacugauug caaaucaguu uaauucugca auuggcaaaa uucaggauuc ucugucuucu 2820
acagcuucug cucugggaaa acugcaggau guggugaauc agaaugcaca ggcacugaau 2880
acucugguga aacagcuguc uagcaauuuu ggggcaauuu cuucugugcu gaaugauauu 2940
cugucuagac uggauaaagu ggaagcugaa gugcagauug auagacugau cacaggaaga 3000
cugcagucuc ugcagacuua ugugacacag cagcugauua gagcugcuga aauuagagcu 3060
ucugcuaauc uggcugcuac aaaaaugucu gaaugugugc ugggacaguc aaaaagagug 3120
gauuuuugug gaaaaggaua ucaucugaug ucuuuuccac agucugcucc acauggagug 3180
guguuuuuac augugacaua ugugccagca caggaaaaga auuuuaccac agcaccagca 3240
auuugucaug auggaaaagc acauuuucca agagaaggag uguuuguguc uaauggaaca 3300
cauugguuug ugacacagag aaauuuuuau gaaccucaga uuauuacaac agauaauaca 3360
uuugugucag gaaauuguga uguggugauu ggaauuguga auaauacagu guaugaucca 3420
cugcagccag aacuggauuc uuuuaaagaa gaacuggaua aauauuuuaa aaaucacaca 3480
ucuccugaug uggauuuagg agauauuucu ggaaucaaug caucuguggu gaauauucag 3540
aaagaaauug auagacugaa ugaaguggcc aaaaaucuga augaaucucu gauugaucug 3600
caggaacuug gaaaauauga acaguacauu aaauggccuu gguacauuug gcuuggauuu 3660
auugcaggau uaauugcaau ugugauggug acaauuaugu uauguuguau gacaucaugu 3720
uguucuuguu uaaaaggaug uuguucuugu ggaagcuguu guaaauuuga ugaagaugau 3780
ucugaaccug uguuaaaagg agugaaauug cauuacaca 3819
配列番号７
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
配列番号８
auguuugugu uucuugugcu gcugccucuu gugucuucuc agugugugaa uuugacaaca 60
agaacacagc ugccaccagc uuauacaaau ucuuuuacca gaggagugua uuauccugau 120
aaaguguuua gaucuucugu gcugcacagc acacaggacc uguuucugcc auuuuuuagc 180
aaugugacau gguuucaugc aauucaugug ucuggaacaa auggaacaaa aagauuugau 240
aauccugugc ugccuuuuaa ugauggagug uauuuugcuu caacagaaaa gucaaauauu 300
auuagaggau ggauuuuugg aacaacacug gauucuaaaa cacagucucu gcugauugug 360
aauaaugcaa caaauguggu gauuaaagug ugugaauuuc aguuuuguaa ugauccuuuu 420
cugggagugu auuaucacaa aaauaauaaa ucuuggaugg aaucugaauu uagaguguau 480
uccucugcaa auaauuguac auuugaauau gugucucagc cuuuucugau ggaucuggaa 540
ggaaaacagg gcaauuuuaa aaaucugaga gaauuugugu uuaaaaauau ugauggauau 600
uuuaaaauuu auucuaaaca cacaccaauu aauuuaguga gagaucugcc ucagggauuu 660
ucugcucugg aaccucuggu ggaucugcca auuggcauua auauuacaag auuucagaca 720
cugcuggcuc ugcacagauc uuaucugaca ccuggagauu cuucuucugg auggacagcc 780
ggagcugcag cuuauuaugu gggcuaucug cagccaagaa cauuucugcu gaaauauaau 840
gaaaauggaa caauuacaga ugcuguggau ugugcucugg auccucuguc ugaaacaaaa 900
uguacauuaa aaucuuuuac aguggaaaaa ggcauuuauc agacaucuaa uuuuagagug 960
cagccaacag aaucuauugu gagauuucca aauauuacaa aucugugucc auuuggagaa 1020
guguuuaaug caacaagauu ugcaucugug uaugcaugga auagaaaaag aauuucuaau 1080
uguguggcug auuauucugu gcuguauaau agugcuucuu uuuccacauu uaaauguuau 1140
ggagugucuc caacaaaauu aaaugauuua uguuuuacaa auguguaugc ugauucuuuu 1200
gugaucagag gugaugaagu gagacagauu gcccccggac agacaggaaa aauugcugau 1260
uacaauuaca aacugccuga ugauuuuaca ggauguguga uugcuuggaa uucuaauaau 1320
uuagauucua aagugggagg aaauuacaau uaucuguaca gacuguuuag aaaaucaaau 1380
cugaaaccuu uugaaagaga uauuucaaca gaaauuuauc aggcuggauc aacaccuugu 1440
aauggagugg aaggauuuaa uuguuauuuu ccauuacaga gcuauggauu ucagccaacc 1500
aauggugugg gauaucagcc auauagagug guggugcugu cuuuugaacu gcugcaugca 1560
ccugcaacag uguguggacc uaaaaaaucu acaaauuuag ugaaaaauaa augugugaau 1620
uuuaauuuua auggauuaac aggaacagga gugcugacag aaucuaauaa aaaauuucug 1680
ccuuuucagc aguuuggcag agauauugca gauaccacag augcagugag agauccucag 1740
acauuagaaa uucuggauau uacaccuugu ucuuuugggg gugugucugu gauuacaccu 1800
ggaacaaaua caucuaauca gguggcugug cuguaucagg augugaauug uacagaagug 1860
ccaguggcaa uucaugcaga ucagcugaca ccaacaugga gaguguauuc uacaggaucu 1920
aauguguuuc agacaagagc aggaugucug auuggagcag aacaugugaa uaauucuuau 1980
gaaugugaua uuccaauugg agcaggcauu ugugcaucuu aucagacaca gacaaauucc 2040
ccaaggagag caagaucugu ggcaucucag ucuauuauug cauacaccau gucucuggga 2100
gcagaaaauu cuguggcaua uucuaauaau ucuauugcua uuccaacaaa uuuuaccauu 2160
ucugugacaa cagaaauuuu accugugucu augacaaaaa caucugugga uuguaccaug 2220
uacauuugug gagauucuac agaauguucu aaucugcugc ugcaguaugg aucuuuuugu 2280
acacagcuga auagagcuuu aacaggaauu gcuguggaac aggauaaaaa uacacaggaa 2340
guguuugcuc aggugaaaca gauuuacaaa acaccaccaa uuaaagauuu uggaggauuu 2400
aauuuuagcc agauucugcc ugauccuucu aaaccuucua aaagaucuuu uauugaagau 2460
cugcuguuua auaaagugac acuggcagau gcaggauuua uuaaacagua uggagauugc 2520
cugggugaua uugcugcaag agaucugauu ugugcucaga aauuuaaugg acugacagug 2580
cugccuccuc ugcugacaga ugaaaugauu gcucaguaca caucugcuuu acuggcugga 2640
acaauuacaa gcggauggac auuuggagcu ggagcugcuc ugcagauucc uuuugcaaug 2700
cagauggcuu acagauuuaa uggaauugga gugacacaga auguguuaua ugaaaaucag 2760
aaacugauug caaaucaguu uaauucugca auuggcaaaa uucaggauuc ucugucuucu 2820
acagcuucug cucugggaaa acugcaggau guggugaauc agaaugcaca ggcacugaau 2880
acucugguga aacagcuguc uagcaauuuu ggggcaauuu cuucugugcu gaaugauauu 2940
cugucuagac uggauccucc ugaagcugaa gugcagauug auagacugau cacaggaaga 3000
cugcagucuc ugcagacuua ugugacacag cagcugauua gagcugcuga aauuagagcu 3060
ucugcuaauc uggcugcuac aaaaaugucu gaaugugugc ugggacaguc aaaaagagug 3120
gauuuuugug gaaaaggaua ucaucugaug ucuuuuccac agucugcucc acauggagug 3180
guguuuuuac augugacaua ugugccagca caggaaaaga auuuuaccac agcaccagca 3240
auuugucaug auggaaaagc acauuuucca agagaaggag uguuuguguc uaauggaaca 3300
cauugguuug ugacacagag aaauuuuuau gaaccucaga uuauuacaac agauaauaca 3360
uuugugucag gaaauuguga uguggugauu ggaauuguga auaauacagu guaugaucca 3420
cugcagccag aacuggauuc uuuuaaagaa gaacuggaua aauauuuuaa aaaucacaca 3480
ucuccugaug uggauuuagg agauauuucu ggaaucaaug caucuguggu gaauauucag 3540
aaagaaauug auagacugaa ugaaguggcc aaaaaucuga augaaucucu gauugaucug 3600
caggaacuug gaaaauauga acaguacauu aaauggccuu gguacauuug gcuuggauuu 3660
auugcaggau uaauugcaau ugugauggug acaauuaugu uauguuguau gacaucaugu 3720
uguucuuguu uaaaaggaug uuguucuugu ggaagcuguu guaaauuuga ugaagaugau 3780
ucugaaccug uguuaaaagg agugaaauug cauuacaca 3819
配列番号９
auguucgugu uccuggugcu gcugccucug guguccagcc agugugugaa ccugaccacc 60
agaacacagc ugccuccagc cuacaccaac agcuuuacca gaggcgugua cuaccccgac 120
aagguguuca gauccagcgu gcugcacucu acccaggacc uguuccugcc uuucuucagc 180
aacgugaccu gguuccacgc cauccacgug uccggcacca auggcaccaa gagauucgac 240
aaccccgugc ugcccuucaa cgacggggug uacuuugcca gcaccgagaa guccaacauc 300
aucagaggcu ggaucuucgg caccacacug gacagcaaga cccagagccu gcugaucgug 360
aacaacgcca ccaacguggu caucaaagug ugcgaguucc aguucugcaa cgaccccuuc 420
cugggcgucu acuaccacaa gaacaacaag agcuggaugg aaagcgaguu ccggguguac 480
agcagcgcca acaacugcac cuucgaguac gugucccagc cuuuccugau ggaccuggaa 540
ggcaagcagg gcaacuucaa gaaccugcgc gaguucgugu uuaagaacau cgacggcuac 600
uucaagaucu acagcaagca caccccuauc aaccucgugc gggaucugcc ucagggcuuc 660
ucugcucugg aaccccuggu ggaucugccc aucggcauca acaucacccg guuucagaca 720
cugcuggccc ugcacagaag cuaccugaca ccuggcgaua gcagcagcgg auggacagcu 780
ggugccgccg cuuacuaugu gggcuaccug cagccuagaa ccuuccugcu gaaguacaac 840
gagaacggca ccaucaccga cgccguggau ugugcucugg auccucugag cgagacaaag 900
ugcacccuga aguccuucac cguggaaaag ggcaucuacc agaccagcaa cuuccgggug 960
cagcccaccg aauccaucgu gcgguucccc aauaucacca aucugugccc cuucggcgag 1020
guguucaaug ccaccagauu cgccucugug uacgccugga accggaagcg gaucagcaau 1080
ugcguggccg acuacuccgu gcuguacaac uccgccagcu ucagcaccuu caagugcuac 1140
ggcguguccc cuaccaagcu gaacgaccug ugcuucacaa acguguacgc cgacagcuuc 1200
gugauccggg gagaugaagu gcggcagauu gccccuggac agacaggcaa gaucgccgac 1260
uacaacuaca agcugcccga cgacuucacc ggcuguguga uugccuggaa cagcaacaac 1320
cuggacucca aagucggcgg caacuacaau uaccuguacc ggcuguuccg gaaguccaau 1380
cugaagcccu ucgagcggga caucuccacc gagaucuauc aggccggcag caccccuugu 1440
aacggcgugg aaggcuucaa cugcuacuuc ccacugcagu ccuacggcuu ucagcccaca 1500
aauggcgugg gcuaucagcc cuacagagug guggugcuga gcuucgaacu gcugcaugcc 1560
ccugccacag ugugcggccc uaagaaaagc accaaucucg ugaagaacaa augcgugaac 1620
uucaacuuca acggccugac cggcaccggc gugcugacag agagcaacaa gaaguuccug 1680
ccauuccagc aguuuggccg ggauaucgcc gauaccacag acgccguuag agauccccag 1740
acacuggaaa uccuggacau caccccuugc agcuucggcg gagugucugu gaucaccccu 1800
ggcaccaaca ccagcaauca gguggcagug cuguaccagg acgugaacug uaccgaagug 1860
cccguggcca uucacgccga ucagcugaca ccuacauggc ggguguacuc caccggcagc 1920
aauguguuuc agaccagagc cggcugucug aucggagccg agcacgugaa caauagcuac 1980
gagugcgaca uccccaucgg cgcuggaauc ugcgccagcu accagacaca gacaaacagc 2040
ccucggagag ccagaagcgu ggccagccag agcaucauug ccuacacaau gucucugggc 2100
gccgagaaca gcguggccua cuccaacaac ucuaucgcua uccccaccaa cuucaccauc 2160
agcgugacca cagagauccu gccugugucc augaccaaga ccagcgugga cugcaccaug 2220
uacaucugcg gcgauuccac cgagugcucc aaccugcugc ugcaguacgg cagcuucugc 2280
acccagcuga auagagcccu gacagggauc gccguggaac aggacaagaa cacccaagag 2340
guguucgccc aagugaagca gaucuacaag accccuccua ucaaggacuu cggcggcuuc 2400
aauuucagcc agauucugcc cgauccuagc aagcccagca agcggagcuu caucgaggac 2460
cugcuguuca acaaagugac acuggccgac gccggcuuca ucaagcagua uggcgauugu 2520
cugggcgaca uugccgccag ggaucugauu ugcgcccaga aguuuaacgg acugacagug 2580
cugccuccuc ugcugaccga ugagaugauc gcccaguaca caucugcccu gcuggccggc 2640
acaaucacaa gcggcuggac auuuggagca ggcgccgcuc ugcagauccc cuuugcuaug 2700
cagauggccu accgguucaa cggcaucgga gugacccaga augugcugua cgagaaccag 2760
aagcugaucg ccaaccaguu caacagcgcc aucggcaaga uccaggacag ccugagcagc 2820
acagcaagcg cccugggaaa gcugcaggac guggucaacc agaaugccca ggcacugaac 2880
acccugguca agcagcuguc cuccaacuuc ggcgccauca gcucugugcu gaacgauauc 2940
cugagcagac uggacccucc ugaggccgag gugcagaucg acagacugau cacaggcaga 3000
cugcagagcc uccagacaua cgugacccag cagcugauca gagccgccga gauuagagcc 3060
ucugccaauc uggccgccac caagaugucu gagugugugc ugggccagag caagagagug 3120
gacuuuugcg gcaagggcua ccaccugaug agcuucccuc agucugcccc ucacggcgug 3180
guguuucugc acgugacaua ugugcccgcu caagagaaga auuucaccac cgcuccagcc 3240
aucugccacg acggcaaagc ccacuuuccu agagaaggcg uguucguguc caacggcacc 3300
cauugguucg ugacacagcg gaacuucuac gagccccaga ucaucaccac cgacaacacc 3360
uucgugucug gcaacugcga cgucgugauc ggcauuguga acaauaccgu guacgacccu 3420
cugcagcccg agcuggacag cuucaaagag gaacuggaca aguacuuuaa gaaccacaca 3480
agccccgacg uggaccuggg cgauaucagc ggaaucaaug ccagcgucgu gaacauccag 3540
aaagagaucg accggcugaa cgagguggcc aagaaucuga acgagagccu gaucgaccug 3600
caagaacugg ggaaguacga gcaguacauc aaguggcccu gguacaucug gcugggcuuu 3660
aucgccggac ugauugccau cgugaugguc acaaucaugc uguguugcau gaccagcugc 3720
uguagcugcc ugaagggcug uuguagcugu ggcagcugcu gcaaguucga cgaggacgau 3780
ucugagcccg ugcugaaggg cgugaaacug cacuacaca 3819
配列番号19
agaauaaacu aguauucuuc ugguccccac agacucagag agaacccgcc accauguuug 60
uguuucuugu gcugcugccu cuugugucuu cucagugugu gaauuugaca acaagaacac 120
agcugccacc agcuuauaca aauucuuuua ccagaggagu guauuauccu gauaaagugu 180
uuagaucuuc ugugcugcac agcacacagg accuguuucu gccauuuuuu agcaauguga 240
caugguuuca ugcaauucau gugucuggaa caaauggaac aaaaagauuu gauaauccug 300
ugcugccuuu uaaugaugga guguauuuug cuucaacaga aaagucaaau auuauuagag 360
gauggauuuu uggaacaaca cuggauucua aaacacaguc ucugcugauu gugaauaaug 420
caacaaaugu ggugauuaaa gugugugaau uucaguuuug uaaugauccu uuucugggag 480
uguauuauca caaaaauaau aaaucuugga uggaaucuga auuuagagug uauuccucug 540
caaauaauug uacauuugaa uaugugucuc agccuuuucu gauggaucug gaaggaaaac 600
agggcaauuu uaaaaaucug agagaauuug uguuuaaaaa uauugaugga uauuuuaaaa 660
uuuauucuaa acacacacca auuaauuuag ugagagaucu gccucaggga uuuucugcuc 720
uggaaccucu gguggaucug ccaauuggca uuaauauuac aagauuucag acacugcugg 780
cucugcacag aucuuaucug acaccuggag auucuucuuc uggauggaca gccggagcug 840
cagcuuauua ugugggcuau cugcagccaa gaacauuucu gcugaaauau aaugaaaaug 900
gaacaauuac agaugcugug gauugugcuc uggauccucu gucugaaaca aaauguacau 960
uaaaaucuuu uacaguggaa aaaggcauuu aucagacauc uaauuuuaga gugcagccaa 1020
cagaaucuau ugugagauuu ccaaauauua caaaucugug uccauuugga gaaguguuua 1080
augcaacaag auuugcaucu guguaugcau ggaauagaaa aagaauuucu aauugugugg 1140
cugauuauuc ugugcuguau aauagugcuu cuuuuuccac auuuaaaugu uauggagugu 1200
cuccaacaaa auuaaaugau uuauguuuua caaaugugua ugcugauucu uuugugauca 1260
gaggugauga agugagacag auugcccccg gacagacagg aaaaauugcu gauuacaauu 1320
acaaacugcc ugaugauuuu acaggaugug ugauugcuug gaauucuaau aauuuagauu 1380
cuaaaguggg aggaaauuac aauuaucugu acagacuguu uagaaaauca aaucugaaac 1440
cuuuugaaag agauauuuca acagaaauuu aucaggcugg aucaacaccu uguaauggag 1500
uggaaggauu uaauuguuau uuuccauuac agagcuaugg auuucagcca accaauggug 1560
ugggauauca gccauauaga gugguggugc ugucuuuuga acugcugcau gcaccugcaa 1620
cagugugugg accuaaaaaa ucuacaaauu uagugaaaaa uaaaugugug aauuuuaauu 1680
uuaauggauu aacaggaaca ggagugcuga cagaaucuaa uaaaaaauuu cugccuuuuc 1740
agcaguuugg cagagauauu gcagauacca cagaugcagu gagagauccu cagacauuag 1800
aaauucugga uauuacaccu uguucuuuug gggguguguc ugugauuaca ccuggaacaa 1860
auacaucuaa ucagguggcu gugcuguauc aggaugugaa uuguacagaa gugccagugg 1920
caauucaugc agaucagcug acaccaacau ggagagugua uucuacagga ucuaaugugu 1980
uucagacaag agcaggaugu cugauuggag cagaacaugu gaauaauucu uaugaaugug 2040
auauuccaau uggagcaggc auuugugcau cuuaucagac acagacaaau uccccaagga 2100
gagcaagauc uguggcaucu cagucuauua uugcauacac caugucucug ggagcagaaa 2160
auucuguggc auauucuaau aauucuauug cuauuccaac aaauuuuacc auuucuguga 2220
caacagaaau uuuaccugug ucuaugacaa aaacaucugu ggauuguacc auguacauuu 2280
guggagauuc uacagaaugu ucuaaucugc ugcugcagua uggaucuuuu uguacacagc 2340
ugaauagagc uuuaacagga auugcugugg aacaggauaa aaauacacag gaaguguuug 2400
cucaggugaa acagauuuac aaaacaccac caauuaaaga uuuuggagga uuuaauuuua 2460
gccagauucu gccugauccu ucuaaaccuu cuaaaagauc uuuuauugaa gaucugcugu 2520
uuaauaaagu gacacuggca gaugcaggau uuauuaaaca guauggagau ugccugggug 2580
auauugcugc aagagaucug auuugugcuc agaaauuuaa uggacugaca gugcugccuc 2640
cucugcugac agaugaaaug auugcucagu acacaucugc uuuacuggcu ggaacaauua 2700
caagcggaug gacauuugga gcuggagcug cucugcagau uccuuuugca augcagaugg 2760
cuuacagauu uaauggaauu ggagugacac agaauguguu auaugaaaau cagaaacuga 2820
uugcaaauca guuuaauucu gcaauuggca aaauucagga uucucugucu ucuacagcuu 2880
cugcucuggg aaaacugcag gaugugguga aucagaaugc acaggcacug aauacucugg 2940
ugaaacagcu gucuagcaau uuuggggcaa uuucuucugu gcugaaugau auucugucua 3000
gacuggaucc uccugaagcu gaagugcaga uugauagacu gaucacagga agacugcagu 3060
cucugcagac uuaugugaca cagcagcuga uuagagcugc ugaaauuaga gcuucugcua 3120
aucuggcugc uacaaaaaug ucugaaugug ugcugggaca gucaaaaaga guggauuuuu 3180
guggaaaagg auaucaucug augucuuuuc cacagucugc uccacaugga gugguguuuu 3240
uacaugugac auaugugcca gcacaggaaa agaauuuuac cacagcacca gcaauuuguc 3300
augauggaaa agcacauuuu ccaagagaag gaguguuugu gucuaaugga acacauuggu 3360
uugugacaca gagaaauuuu uaugaaccuc agauuauuac aacagauaau acauuugugu 3420
caggaaauug ugauguggug auuggaauug ugaauaauac aguguaugau ccacugcagc 3480
cagaacugga uucuuuuaaa gaagaacugg auaaauauuu uaaaaaucac acaucuccug 3540
auguggauuu aggagauauu ucuggaauca augcaucugu ggugaauauu cagaaagaaa 3600
uugauagacu gaaugaagug gccaaaaauc ugaaugaauc ucugauugau cugcaggaac 3660
uuggaaaaua ugaacaguac auuaaauggc cuugguacau uuggcuugga uuuauugcag 3720
gauuaauugc aauugugaug gugacaauua uguuauguug uaugacauca uguuguucuu 3780
guuuaaaagg auguuguucu uguggaagcu guuguaaauu ugaugaagau gauucugaac 3840
cuguguuaaa aggagugaaa uugcauuaca caugaugacu cgagcuggua cugcaugcac 3900
gcaaugcuag cugccccuuu cccguccugg guaccccgag ucucccccga ccucgggucc 3960
cagguaugcu cccaccucca ccugccccac ucaccaccuc ugcuaguucc agacaccucc 4020
caagcacgca gcaaugcagc ucaaaacgcu uagccuagcc acacccccac gggaaacagc 4080
agugauuaac cuuuagcaau aaacgaaagu uuaacuaagc uauacuaacc ccaggguugg 4140
ucaauuucgu gccagccaca cccuggagcu agcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200
aaagcauaug acuaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 4283
配列番号２０
agaauaaacu aguauucuuc ugguccccac agacucagag agaacccgcc accauguucg 60
uguuccuggu gcugcugccu cuggugucca gccagugugu gaaccugacc accagaacac 120
agcugccucc agccuacacc aacagcuuua ccagaggcgu guacuacccc gacaaggugu 180
ucagauccag cgugcugcac ucuacccagg accuguuccu gccuuucuuc agcaacguga 240
ccugguucca cgccauccac guguccggca ccaauggcac caagagauuc gacaaccccg 300
ugcugcccuu caacgacggg guguacuuug ccagcaccga gaaguccaac aucaucagag 360
gcuggaucuu cggcaccaca cuggacagca agacccagag ccugcugauc gugaacaacg 420
ccaccaacgu ggucaucaaa gugugcgagu uccaguucug caacgacccc uuccugggcg 480
ucuacuacca caagaacaac aagagcugga uggaaagcga guuccgggug uacagcagcg 540
ccaacaacug caccuucgag uacguguccc agccuuuccu gauggaccug gaaggcaagc 600
agggcaacuu caagaaccug cgcgaguucg uguuuaagaa caucgacggc uacuucaaga 660
ucuacagcaa gcacaccccu aucaaccucg ugcgggaucu gccucagggc uucucugcuc 720
uggaaccccu gguggaucug cccaucggca ucaacaucac ccgguuucag acacugcugg 780
cccugcacag aagcuaccug acaccuggcg auagcagcag cggauggaca gcuggugccg 840
ccgcuuacua ugugggcuac cugcagccua gaaccuuccu gcugaaguac aacgagaacg 900
gcaccaucac cgacgccgug gauugugcuc uggauccucu gagcgagaca aagugcaccc 960
ugaaguccuu caccguggaa aagggcaucu accagaccag caacuuccgg gugcagccca 1020
ccgaauccau cgugcgguuc cccaauauca ccaaucugug ccccuucggc gagguguuca 1080
augccaccag auucgccucu guguacgccu ggaaccggaa gcggaucagc aauugcgugg 1140
ccgacuacuc cgugcuguac aacuccgcca gcuucagcac cuucaagugc uacggcgugu 1200
ccccuaccaa gcugaacgac cugugcuuca caaacgugua cgccgacagc uucgugaucc 1260
ggggagauga agugcggcag auugccccug gacagacagg caagaucgcc gacuacaacu 1320
acaagcugcc cgacgacuuc accggcugug ugauugccug gaacagcaac aaccuggacu 1380
ccaaagucgg cggcaacuac aauuaccugu accggcuguu ccggaagucc aaucugaagc 1440
ccuucgagcg ggacaucucc accgagaucu aucaggccgg cagcaccccu uguaacggcg 1500
uggaaggcuu caacugcuac uucccacugc aguccuacgg cuuucagccc acaaauggcg 1560
ugggcuauca gcccuacaga gugguggugc ugagcuucga acugcugcau gccccugcca 1620
cagugugcgg cccuaagaaa agcaccaauc ucgugaagaa caaaugcgug aacuucaacu 1680
ucaacggccu gaccggcacc ggcgugcuga cagagagcaa caagaaguuc cugccauucc 1740
agcaguuugg ccgggauauc gccgauacca cagacgccgu uagagauccc cagacacugg 1800
aaauccugga caucaccccu ugcagcuucg gcggaguguc ugugaucacc ccuggcacca 1860
acaccagcaa ucagguggca gugcuguacc aggacgugaa cuguaccgaa gugcccgugg 1920
ccauucacgc cgaucagcug acaccuacau ggcgggugua cuccaccggc agcaaugugu 1980
uucagaccag agccggcugu cugaucggag ccgagcacgu gaacaauagc uacgagugcg 2040
acauccccau cggcgcugga aucugcgcca gcuaccagac acagacaaac agcccucgga 2100
gagccagaag cguggccagc cagagcauca uugccuacac aaugucucug ggcgccgaga 2160
acagcguggc cuacuccaac aacucuaucg cuauccccac caacuucacc aucagcguga 2220
ccacagagau ccugccugug uccaugacca agaccagcgu ggacugcacc auguacaucu 2280
gcggcgauuc caccgagugc uccaaccugc ugcugcagua cggcagcuuc ugcacccagc 2340
ugaauagagc ccugacaggg aucgccgugg aacaggacaa gaacacccaa gagguguucg 2400
cccaagugaa gcagaucuac aagaccccuc cuaucaagga cuucggcggc uucaauuuca 2460
gccagauucu gcccgauccu agcaagccca gcaagcggag cuucaucgag gaccugcugu 2520
ucaacaaagu gacacuggcc gacgccggcu ucaucaagca guauggcgau ugucugggcg 2580
acauugccgc cagggaucug auuugcgccc agaaguuuaa cggacugaca gugcugccuc 2640
cucugcugac cgaugagaug aucgcccagu acacaucugc ccugcuggcc ggcacaauca 2700
caagcggcug gacauuugga gcaggcgccg cucugcagau ccccuuugcu augcagaugg 2760
ccuaccgguu caacggcauc ggagugaccc agaaugugcu guacgagaac cagaagcuga 2820
ucgccaacca guucaacagc gccaucggca agauccagga cagccugagc agcacagcaa 2880
gcgcccuggg aaagcugcag gacgugguca accagaaugc ccaggcacug aacacccugg 2940
ucaagcagcu guccuccaac uucggcgcca ucagcucugu gcugaacgau auccugagca 3000
gacuggaccc uccugaggcc gaggugcaga ucgacagacu gaucacaggc agacugcaga 3060
gccuccagac auacgugacc cagcagcuga ucagagccgc cgagauuaga gccucugcca 3120
aucuggccgc caccaagaug ucugagugug ugcugggcca gagcaagaga guggacuuuu 3180
gcggcaaggg cuaccaccug augagcuucc cucagucugc cccucacggc gugguguuuc 3240
ugcacgugac auaugugccc gcucaagaga agaauuucac caccgcucca gccaucugcc 3300
acgacggcaa agcccacuuu ccuagagaag gcguguucgu guccaacggc acccauuggu 3360
ucgugacaca gcggaacuuc uacgagcccc agaucaucac caccgacaac accuucgugu 3420
cuggcaacug cgacgucgug aucggcauug ugaacaauac cguguacgac ccucugcagc 3480
ccgagcugga cagcuucaaa gaggaacugg acaaguacuu uaagaaccac acaagccccg 3540
acguggaccu gggcgauauc agcggaauca augccagcgu cgugaacauc cagaaagaga 3600
ucgaccggcu gaacgaggug gccaagaauc ugaacgagag ccugaucgac cugcaagaac 3660
uggggaagua cgagcaguac aucaaguggc ccugguacau cuggcugggc uuuaucgccg 3720
gacugauugc caucgugaug gucacaauca ugcuguguug caugaccagc ugcuguagcu 3780
gccugaaggg cuguuguagc uguggcagcu gcugcaaguu cgacgaggac gauucugagc 3840
ccgugcugaa gggcgugaaa cugcacuaca caugaugacu cgagcuggua cugcaugcac 3900
gcaaugcuag cugccccuuu cccguccugg guaccccgag ucucccccga ccucgggucc 3960
cagguaugcu cccaccucca ccugccccac ucaccaccuc ugcuaguucc agacaccucc 4020
caagcacgca gcaaugcagc ucaaaacgcu uagccuagcc acacccccac gggaaacagc 4080
agugauuaac cuuuagcaau aaacgaaagu uuaacuaagc uauacuaacc ccaggguugg 4140
ucaauuucgu gccagccaca cccuggagcu agcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200
aaagcauaug acuaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 4283
次の実施例は説明のために提供され、いかなる方法でも本発明の範囲を限定しない。当分野で一般的な実務に従い、ここに記載するある設計および選択基準が変化し得ることを、当業者は認識する。
実施例１：例示的組成物および特徴づけ
本実施例は、本発明によるあるＲＮＡ／ＬＮＰ組成物の開発および／または特徴づけを記載する。
本実施例で利用するＲＮＡペイロードは、４２８３ヌクレオチド残基を含む点で、修飾ＲＮＡペイロードであった。本実施例で利用するＲＮＡペイロードは、ウイルス抗原、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質をコードした。具体的に、本実施例で利用するＲＮＡペイロードは、ここに記載するＲＢＰ０２０.２(ｖ９)により表されるＢＮＴ１６２ｂ２構築物であった。
本実施例は、ある保護剤(特に二糖保護剤スクロースおよびトレハロース)および特定の緩衝液(例えば、Ｔｒｉｓおよびヒスチジン緩衝液などの非リン酸緩衝液および／またはＮａＣｌを含まない緩衝液)を保護した。
何らかの特定の理論に拘束されることを願わないが、等張性が望ましいはずであると考えられた；ある評価した組成物は、ほぼ等張溶液を生じるため、１０％ｗ／ｖ濃度で保護剤を含んだ。
緩衝液濃度は、組成物のｐＨの維持に十分であるよう選択した。
評価した組成物はマンニトールを含まなかった。
この実施例で、組成物は、乾燥前に凍結させなかった(例えば、約２℃～約８℃の範囲内の温度に維持した)。この実施例で、乾燥を、フリーズドライ(具体的に、凍結乾燥)により実施した。
組成物の電気伝導率を測定し、低温ＤＳＣ実験をフリーズドライの開始前に実施した。ＬＮＰサイズおよび多分散性を、動的光散乱法を使用して、２℃～８℃温度維持後かつ凍結乾燥前に決定した。
下表１は、ある評価した組成物を示す；見られるとおり、(ｉ)保護剤のタイプおよび濃度を変えた；別の製造手順を、製造中評価した(特にスクロース含有製剤について、ＲＮＡ原液を、クエン酸のみ緩衝液ではなく、スクロース－クエン酸緩衝液に希釈した)；(ii)ＮａＣｌを欠く緩衝液を評価した；そして(iii)非リン酸緩衝液(例えば、Ｔｒｉｓ、Ｈｉｓ、ＨＥＰＥＳ)を評価した。


＊各１５mLの２個のアリコートを、凍結中にアニールを伴うおよび伴わない凍結乾燥サイクルのために、別々に調製し、貯蔵しなければならない。
利用した凍結乾燥手順は、０.５℃／分で実施した、凍結工程中の冷却および加温勾配を含んだ。製剤を、関連製剤のＴｇを下回る温度で凍結した。何らかの特定の理論に拘束されることを願わないが、－１０℃のアニール温度を選択し、製剤の融点未満の温度に製品を維持しながら、等温保持中のオストヴァルト熟成を最大化し(そしてそれにより氷結晶のサイズを増大し)、ケーキ抵抗を減少した。二次乾燥への傾斜率は０.２℃／分であった。

Claims (178)

  1. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  2. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  3. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；およびｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  4. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースを含むものである、工程
    を含む、方法。
  5. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項４の方法。
  6. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項４の方法。
  7. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  8. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項７の方法。
  9. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項８の方法。
  10. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  11. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  12. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  13. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  14. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  15. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１４の方法。
  16. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１４の方法。
  17. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項１２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項１３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  18. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項１７の方法。
  19. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項１８の方法。
  20. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  21. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  22. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  23. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  24. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；
    ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
    iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  25. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項２４の方法。
  26. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項２４の方法。
  27. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項２１の製剤を希釈する工程
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)請求項２２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項２３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  28. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項２７の方法。
  29. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項２８の方法。
  30. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  31. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  32. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  33. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  34. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースを含むものである、工程
    を含む、方法。
  35. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項３４の方法。
  36. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項３４の方法。
  37. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項３１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項３２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項３３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  38. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項３７の方法。
  39. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項３８の方法。
  40. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  41. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  42. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  43. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  44. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  45. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項４４の方法。
  46. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項４４の方法。
  47. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項４１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項４２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項４３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  48. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項４７の方法。
  49. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項４８の方法。
  50. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  51. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  52. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  53. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  54. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液；
    ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
    iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  55. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項５４の方法。
  56. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項５４の方法。
  57. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項５１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項５２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項５３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  58. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項５７の方法。
  59. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項５８の方法。
  60. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含み、約１０mMの濃度であるＴｒｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  61. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  62. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  63. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  64. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  65. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項６４の方法。
  66. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項６４の方法。
  67. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項６１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項６２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項６３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  68. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項６７の方法。
  69. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項６８の方法。
  70. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  71. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  72. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  73. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  74. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  75. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項７４の方法。
  76. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項７４の方法。
  77. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項７１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項７２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項７３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  78. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項７７の方法。
  79. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項７８の方法。
  80. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  81. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、製剤。
  82. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  83. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  84. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液；
    ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
    iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  85. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項８４の方法。
  86. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項８４の方法。
  87. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項８１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項８２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項８３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  88. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項８７の方法。
  89. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項８８の方法。
  90. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨｉｓ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  91. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、製剤。
  92. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  93. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  94. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  95. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項９４の方法。
  96. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項９４の方法。
  97. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項９１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項９２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項９３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  98. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項９７の方法。
  99. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項９８の方法。
  100. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  101. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、製剤。
  102. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  103. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  104. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  105. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１０４の方法。
  106. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１０４の方法。
  107. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１０１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項１０２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項１０３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  108. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項１０７の方法。
  109. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項１０８の方法。
  110. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  111. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、製剤。
  112. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  113. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、乾燥前製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  114. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液；
    ii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；および
    iii)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  115. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１１４の方法。
  116. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１１４の方法。
  117. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１１１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項１１２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項１１３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  118. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項１１７の方法。
  119. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項１１８の方法。
  120. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約５％ｗ／ｖの濃度のトレハロース；
    ｄ)塩化ナトリウムを実質的に含まず、製剤中約１０mMの濃度であるＨＥＰＥＳ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  121. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液
    を含む、製剤。
  122. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  123. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  124. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  125. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１２４の方法。
  126. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１２４の方法。
  127. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１２１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項１２２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項１２３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  128. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項１２７の方法。
  129. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項１２８の方法。
  130. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)塩化ナトリウムを実質的に含まないＰＢＳ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  131. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液
    を含む、製剤。
  132. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液
    を含む、凍結製剤。
  133. ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むＬＮＰ；および
    ｂ)乾燥前製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)乾燥前製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液
    を含む、乾燥製剤。
  134. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
    を含むものである、工程
    を含む、方法。
  135. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１３４の方法。
  136. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１３４の方法。
  137. 投薬形態を調製する方法であって、
    ａ)請求項１３１の製剤を希釈する工程；
    ｂ)請求項１３２の製剤を解凍および希釈する工程；および／または
    ｃ)請求項１３３の製剤を再懸濁および希釈する工程
    を含む、方法。
  138. それを必要とする対象に投薬形態を投与することをさらに含む、請求項１３７の方法。
  139. 対象がｍＲＮＡの発現産物を必要とする、請求項１３８の方法。
  140. 投薬形態の製剤を投与する工程を含む、方法であって、該製剤が
    ａ)脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)であって、
    ｉ)約０.５mg／mlの濃度のｍＲＮＡ；
    ii)約７.１７mg／mlの濃度の((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；
    iii)約０.８９mg／mlの濃度の２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；
    iv)約１.５６mg／mlの濃度のジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；
    ｖ)約３.１mg／mlの濃度のコレステロール
    を含むＬＮＰ；
    ｂ)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース；
    ｃ)約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液
    を含み；
    ここで、製剤が投与前に投薬形態に希釈される、方法。
  141. 製剤を調製する方法であって、
    ａ)第一緩衝液系に脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を調製する工程であって、ここで、ＬＮＰが、
    ｉ)１以上のｍＲＮＡであるまたはそれを含むペイロード；
    ii)約８：１：１.５：３～約９：１：２：３.５の範囲の相対的質量比で((４－ヒドロキシブチル)アザンジイル)ビス(ヘキサン－６,１－ジイル)ビス(２－ヘキシルデカノエート)(ＡＬＣ－０３１５)；２－[(ポリエチレングリコール)－２０００]－Ｎ,Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド(ＡＬＣ－０１５９)；ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)；およびコレステロールを含む脂質
    を含むものである工程；および
    ｂ)第一緩衝液系を第二緩衝液系に交換する工程であって、ここで、第二緩衝液系が
    ｉ)製剤中約６mg／ml 塩化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液；および
    ii)製剤中約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロース
    を含み、第一緩衝液系が約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースを含むものである工程
    を含む方法。
  142. さらに
    ｃ)製剤を凍結する工程
    を含む、請求項１４１の方法。
  143. さらに
    ｃ)製剤を乾燥する工程
    を含む、請求項１４１の方法。
  144. 対象における細胞に核酸を送達する方法であって、請求項１～１４３の何れかの製剤を投与する工程を含む、方法。
  145. 対象における免疫応答を誘導する方法であって、請求項１～１４４の何れかの製剤を対象に投与する工程を含む、方法。。
  146. 免疫応答がｍＲＮＡによりコードされるウイルス抗原またはそのエピトープに対するものである、請求項１４５の方法。
  147. ウイルス抗原がコロナウイルス抗原である、請求項１４６の方法。
  148. コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルスである、請求項１４７の方法。
  149. 抗原がＳタンパク質であるかまたはそれを含む、請求項１４７または請求項１４８の方法。
  150. 製剤が水を実質的に含まなくなるまで乾燥される、請求項３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３または１３３の何れかの製剤または請求項６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６または１４３の何れかの方法。
  151. 製剤が凍結乾燥により乾燥される、請求項３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３または１５０の何れかの製剤または請求項６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４３または１５０の何れかの方法。
  152. 製剤が０.８％未満、０.７％未満、０.６％未満、０.５％未満、０.４％未満または０.３％ｗ／ｗ未満の水を含むまで乾燥される、請求項３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１５０または１５１の何れかの製剤または請求項６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４３、１５０または１５１の何れかの方法。
  153. 製剤が乾燥中アニールされる、請求項３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１５０、１５１または１５２の何れかの製剤または請求項６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４３、１５０、１５１または１５２の何れかの方法。
  154. 製剤が乾燥中アニールされない、請求項３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１５０、１５１または１５２の何れかの製剤または請求項６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４３、１５０、１５１または１５２の何れかの方法。
  155. 製剤が約２℃～約２５℃の範囲の温度で少なくとも１２週間０.８％未満、０.７％未満、０.６％未満、０.５％未満、０.４％未満または０.３％ｗ／ｗ未満の水を維持する、請求項１５０～１５４の何れかの製剤または請求項１５０～１５４の何れかの方法。
  156. １以上のｍＲＮＡが１以上のポリペプチドをコードする、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  157. １以上のポリペプチドが対象における抗原に対する免疫応答を誘導するエピトープであるかまたはそれを含む、請求項１５６の製剤。
  158. １以上のｍＲＮＡが対象における抗原に対する免疫応答を誘導するエピトープであるかまたはそれを含む、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤。
  159. １以上のＲＮＡが自己増幅ＲＮＡ分子であるかまたはそれを含む、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３、１３１～１３３または１５８の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  160. １以上のＲＮＡが修飾ＲＮＡ分子または非修飾ＲＮＡ分子であるかまたはそれを含む、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３、１３１～１３３、１５８または１５９の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９、１４１～１４９または１５９の何れかの方法。
  161. １以上のＲＮＡが非修飾ウリジンＲＮＡ分子であるかまたはそれを含む、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３、１３１～１３３または１５８～１６０の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９、１４１～１４９、１５９または１６０の何れかの方法。
  162. １以上のＲＮＡがヌクレオシド修飾ＲＮＡ分子であるかまたはそれを含む、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３、１３１～１３３または１５８～１６１の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９、１４１～１４９または１５９～１６１の何れかの方法。
  163. １以上のポリペプチドの少なくとも１個が配列番号１または７のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質由来である、請求項１５６の製剤または請求項１５６の方法。
  164. １以上のポリペプチドの少なくとも１個が配列番号１または７のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質と少なくとも８５％配列同一性を含む、請求項１５６の製剤または請求項１５６の方法。
  165. １以上のポリペプチドの少なくとも１個が配列番号１または７の完全長ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質であるかまたはそれを含む、請求項１５６の製剤または請求項１５６の方法。
  166. １以上のポリペプチドの少なくとも１個が配列番号１または７のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)と少なくとも８５％配列同一性を含む、請求項１５６の製剤または請求項１５６の方法。
  167. １以上のポリペプチドの少なくとも１個が配列番号１または７のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン(ＲＢＤ)であるかまたはそれを含む、請求項１５６の製剤または請求項１５６の方法。
  168. １以上のｍＲＮＡがＬＮＰと関連するまたは封入されている、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  169. 製剤が、少なくとも１２週間の期間にわたり、２５℃を超える温度で貯蔵されている、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  170. 製剤が少なくとも１２週間期間にわたり、約２～４０℃の温度で貯蔵されている、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  171. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２～８℃の温度で貯蔵したとき、Ｚ平均の２０nm未満の変化を示すことにより特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  172. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２５℃の温度で貯蔵したとき、Ｚ平均の２０nm未満の変化を示すことにより特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  173. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２～８℃の温度で貯蔵したとき、多分散指数(ＰＤＩ)の０.１未満の変化を示すことにより特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  174. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２５℃の温度で貯蔵したとき、多分散指数(ＰＤＩ)の０.１未満の変化を示すことにより特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  175. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２～８℃の温度で貯蔵したとき、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の％ｍＲＮＡ封入により特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  176. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２５℃の温度で貯蔵したとき、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の％ｍＲＮＡ封入により特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  177. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２～８℃の温度で貯蔵したとき、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の％ｍＲＮＡ発現により特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
  178. 製剤が、脂質ナノ粒子が、対照製剤と比較して、少なくとも１２週間の期間にわたり、約２５℃の温度で貯蔵したとき、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の％ｍＲＮＡ発現により特徴づけられる、請求項１～３、１１～１３、２１～２３、３１～３３、４１～４３、５１～５３、６１～６３、７１～７３、８１～８３、９１～９３、１０１～１０３、１１１～１１３、１２１～１２３または１３１～１３３の何れかの製剤または請求項４～９、１４～１９、２４～２９、３４～３９、４４～４９、５４～５９、６４～６９、７４～７９、８４～８９、９４～９９、１０４～１０９、１１４～１１９、１２４～１２９、１３４～１３９または１４１～１４９の何れかの方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3364983A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUS
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
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US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US11911453B2 (en) 2018-01-29 2024-02-27 Modernatx, Inc. RSV RNA vaccines
GB2594364A (en) 2020-04-22 2021-10-27 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Coronavirus vaccine
WO2022232585A1 (en) * 2021-04-29 2022-11-03 Modernatx, Inc. Lyophilization methods for preparing lipid formulated therapeutics
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024081639A1 (en) * 2022-10-11 2024-04-18 Seawolf Therapeutics, Inc. Novel lipid nanoparticle compositions for the delivery of nucleic acids
WO2024089634A1 (en) * 2022-10-27 2024-05-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against influenza and rsv
TW202424187A (zh) * 2022-10-27 2024-06-16 美商輝瑞大藥廠 Rna分子
WO2024127181A1 (en) * 2022-12-11 2024-06-20 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against influenza and rsv
CN116139108B (zh) * 2023-04-23 2023-08-01 威瑞生物科技(昆明)有限责任公司 一种脂质递送系统及其所构成的类病毒结构疫苗

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016005004A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stabilization of poly(a) sequence encoding dna sequences
HUE061564T2 (hu) 2015-10-28 2023-07-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske készítmények nukleinsavak bevitelére
CA3027201A1 (en) * 2016-06-14 2017-12-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US20200163878A1 (en) * 2016-10-26 2020-05-28 Curevac Ag Lipid nanoparticle mrna vaccines
TW202028170A (zh) * 2018-10-02 2020-08-01 美商英特利亞醫療公司 可離子化胺脂質

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