JP2023548586A - タンパク質ペイロード放出 - Google Patents

Abstract

本明細書中には、キメラタンパク質、具体的には、膜切断可能なキメラシステムが記載される。核酸、細胞、及びそれらに関する方法もまた、本明細書中に記載される。TIFF2023548586000047.tif78170

Description

関連出願の相互参照
本出願によって、２０２１年５月２５日に出願された米国仮出願第６３／１９３，００４号及び２０２０年１１月４日に出願された第６３／１０９，８１２号の利益が主張され、それらの各々が、それらの全体において、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体において、参照により本明細書により組み入れられる。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０ＸＸ年ＸＸＸＸに作成され、ＸＸＸ－ＸＸＸ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは＃＃＃，＃＃＃バイトである。

背景
細胞ベースの治療プラットフォームによって、様々な疾患を治療するための有望な手段が提供される。一つのそのような有望なプラットフォームは、癌の治療におけるＣＡＲ－Ｔベースの治療である。それらの見込みを仮定すると、細胞ベースの治療における改善が必要である。探索の活発な分野は、細胞ベースの治療を増強する、アーマリング（ａｒｍｏｒｉｎｇ）として言及されるプロセスである、エフェクター分子、例えばサイトカインなどを産生及び／又は分泌するための細胞ベースの治療を操作することである。例えば、非アーマリングＣＡＲ－Ｔ治療は、固形腫瘍において不十分な有効性を有し、アーマリングは癌免疫サイクル全体に影響を及ぼし、ＣＡＲ－Ｔの活性を強化することができる。しかし、制御又は未制御のアーマリング戦略は、治療に対してマイナスの影響、例えば対象におけるオフターゲット効果及び毒性などを有し得る。このように、細胞ベースの治療のアーマリングを制御及び調節する追加の方法、例えばペイロードエフェクター分子の産生及び／又は分泌を調節するなどが必要である。

概要
本明細書中で提供されるのは、一部の実施形態では、細胞ベースの治療の調節されたアーマリング、例えばペイロードエフェクター分子の調節された分泌などを含む、細胞ベースの治療プラットフォームである。また、本明細書中で提供されるのは、一部の実施形態では、癌、例えば卵巣癌、乳癌、結腸癌、肺癌、及び膵臓癌などの標的治療のための調節されたアーマリングを含む、組み合わせ細胞ベースの免疫療法である。

本明細書中で提供される治療によって、しかし、アーマリングの全身毒性が限定され得る。例えば、本明細書中で提供される免疫療法は、腫瘍特異的で有効であり得る一方で、アーマリングに起因する全身毒性及び／又は他のオフターゲット効果を限定する。これらの治療は、目的のタンパク質、例えば免疫調節エフェクター分子などを、調節された様式で送達し、分泌動態、細胞状態の特異性、及び細胞又は組織の特異性の調節を含む。送達媒体の設計は、細胞ベースの治療、例えば癌治療などにおける全体的な機能を改善させるために最適化されており、限定されないが、膜切断部位、プロモーター、リンカー、シグナルペプチド、送達方法、免疫調節エフェクター分子の組み合わせ、調節、及び順序の最適化を含む。

本開示により包含されるエフェクター分子の非限定的な例は、サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及び腫瘍溶解性ウイルスを含む。例えば、細胞は、以下のエフェクター分子の少なくとも一つ、二つ、三つ又はそれ以上を、調節された様式において発現及び分泌するように操作され得る：ＩＬ－１２、ＩＬ－１６、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＩＬ－２１、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０Ｌ、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＴＧＦβ抗体、抗ＴＮＦＲ２、ＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、ＣＣＬ２１、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、及び抗腫瘍ペプチド（例、抗腫瘍活性を有する抗菌ペプチド。例えば、Ｇａｓｐａｒ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３； ４： ２９４； Ｃｈｕ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１５； １０（５）： ｅ０１２６３９０、及びウェブサイト：ａｐｓ．ｕｎｍｃ．ｅｄｕ／ＡＰ／ｍａｉｎ．ｐｈｐを参照のこと）。

本明細書中で提供されるのは、Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む、操作された核酸であって、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている。

また、本明細書中で提供されるのは、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている。

また、本明細書中で提供されるのは、操作された核酸を含む単離細胞であって、それにおいて、操作された核酸は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている。

また、本明細書中で提供されるのは、膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞であって、それにおいて、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質は、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、ならびに、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている。

また、本明細書中で提供されるのは、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法であって、以下を含む：ａ）細胞を提供することであって、それにおいて、細胞は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、それにおいて、Ｓは、分泌性エフェクター分子を含み、Ｃは、膜結合プロテアーゼの同族プロテアーゼ切断部位を含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一のポリペプチドとして発現するように構成され；及びｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現に適した条件下で細胞を培養すること、それにおいて、発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留され、それにおいて、発現時に、膜結合プロテアーゼは、膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより、分泌性エフェクター分子を細胞膜から放出する。

一部の態様では、プロモーターは、構成的プロモーターである。一部の態様では、構成的プロモーターは、以下からなる群から選択される：ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂ。一部の態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。一部の態様では、誘導性プロモーターは、最小プロモーター及び以下からなる群から選択される応答エレメントを含む：ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答プロモーター、及びそれらのタンデムリピート。

一部の態様では、プロモーターは、合成プロモーターである。一部の態様では、合成プロモーターは、活性化－条件付き対照ポリペプチド－（ＡＣＰ－）結合ドメイン配列及びプロモーター配列を含む。一部の態様では、プロモーター配列は、以下からなる群から選択されるプロモーターに由来する：ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答性エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピート。一部の態様では、ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含む。一部の態様では、合成プロモーターは、合成プロモーターのＡＣＰ結合ドメインに結合する活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）により調節可能である。

一部の態様では、ＡＣＰは、転写モジュレーターである。一部の態様では、ＡＣＰは、転写リプレッサーである。一部の態様では、ＡＣＰは、転写アクチベーターである。一部の態様では、ＡＣＰは、抑制性プロテアーゼ及び抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位をさらに含む。一部の態様では、ＡＣＰは、エストロゲン受容体のホルモン結合ドメイン（ＥＲＴ２ドメイン）をさらに含む。

一部の態様では、ＡＣＰは、転写因子である。一部の態様では、転写因子は、ジンクフィンガー含有転写因子である。一部の態様では、ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）及び転写エフェクタードメインを含む。一部の態様では、ＺＦタンパク質ドメインは、モジュラー設計であり、ジンクフィンガーアレイ（ＺＦＡ）で構成される。一部の態様では、ＺＦタンパク質ドメインは、１～１０のＺＦＡを含む。

一部の態様では、エフェクタードメインは、以下からなる群から選択される：単純ヘルペスウイルスタンパク質 １６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーを含む活性化ドメイン、ＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン－バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメイン（ＶＰＲ活性化ドメイン）を含むトリパータイトアクチベーター；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ ＨＡＴコア活性化ドメイン）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷモチーフ、このモチーフはＷＲＰＷ抑制ドメインとして公知である；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン。

一部の態様では、抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位は、ＺＦタンパク質ドメインとエフェクタードメインの間に局在化している。一部の態様では、抑制性プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、同族切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビル。

一部の態様では、ＡＣＰは、タモキシフェン又はその代謝物へのＥＲＴ２ドメインの結合時に核局在化を受けることが可能である。一部の態様では、タモキシフェン代謝物は、以下からなる群から選択される：４－ヒドロキシタモキシフェン、Ｎ－デスメチルタモキシフェン、タモキシフェン－Ｎ－オキシド、及びエンドキシフェン。

一部の態様では、ＡＣＰは、デグロンドメインをさらに含み、それにおいて、デグロンドメインは、ＡＣＰに動作可能に連結されている。一部の態様では、デグロンドメインは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（インフルエンザＡウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（インフルエンザＡウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチン脱炭酸酵素の残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａの点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃ デグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎデグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳリン酸依存性デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、及びＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。一部の態様では、デグロンドメインは、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）に応答してＣＲＢＮに結合することが可能なセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを含み、それにより、ＡＣＰのユビキチン経路媒介性分解を促進する。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭＶＨＫＲＳＨＴＧＥＲＰＬＱＣＥＩＣＧＦＴＣＲＱＫＧＮＬＬＲＨＩＫＬＨＴＧＥＫＰＦＫＣＨＬＣＮＹＡＣＱＲＲＤＡＬのアミノ酸配列（配列番号１７５）を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイド。一部の態様では、デグロンドメインは、抑制性プロテアーゼのＮ末端、抑制性プロテアーゼのＣ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＮ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＣ末端、エフェクタードメインのＮ末端、又はエフェクタードメインのＣ末端である。

一部の態様では、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。

一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む。一部の態様では、非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、以下からなる群から選択される：ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦ。

一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素。一部の態様では、サイトカインは、以下からなる群から選択される：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファ。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５，ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、配列番号１９９のアミノ酸配列を有するＩＬ－１５を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインを含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を有するＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインからなる。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を有するＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１２からなる。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質からなる。一部の態様では、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５である。一部の態様では、ケモカインは、以下からなる群から選択される：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１。一部の態様では、ホーミング分子は、以下からなる群から選択される：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２。一部の態様では、成長因子は、以下からなる群から選択される：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦ。一部の態様では、共活性化分子は、以下からなる群から選択される：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌ。一部の態様では、腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群から選択される：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２。一部の態様では、ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせ。一部の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、 抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。

一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位。一部の態様では、 プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７ プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼ。

一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の態様では、第一の領域は、第二の領域のＮ末端に位置する。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む。

一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む。

一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である。一部の態様では、翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群から選択される：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグ。

一部の態様では、細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現する場合、分泌性エフェクター分子は、細胞膜から放出される。一部の態様では、細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して内因性である。一部の態様では、プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、プロテアーゼは、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼである。

一部の態様では、細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して異種である。一部の態様では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤によって抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビル。一部の態様では、プロテアーゼの発現及び／又は局在化は、調節が可能である。一部の態様では、発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される。

一部の態様では、操作された核酸は、以下からなる群から選択される一本鎖又は二本鎖核酸である：ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミド。

一部の態様では、単離された細胞は、以下からなる群から選択される：Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラル キラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞。一部の態様では、単離された細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。

一部の態様では、単離された細胞は、自家である。一部の態様では、単離された細胞は、同種である。一部の態様では、単離された細胞は、以下からなる群から選択される腫瘍細胞である：膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞。

一部の態様では、単離された細胞を、腫瘍溶解性ウイルスを用いた形質導入を介して操作した。

一部の態様では、単離された細胞は、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含む。一部の態様では、プロテアーゼは、内因性プロテアーゼを含む。一部の態様では、内因性プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、内因性プロテアーゼは、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼである。一部の態様では、プロテアーゼは、異種プロテアーゼである。一部の態様では、異種プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼは、単離された細胞の細胞膜上で発現する。一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位の切断によって、単離された細胞の細胞膜から分泌性エフェクター分子が放出される。

一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の態様では、第一の領域は、第二の領域のＮ末端に位置する。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む。

一部の態様では、単離された細胞は、抗原認識受容体をさらに含む。一部の態様では、抗原認識受容体は、以下からなる群から選択される抗原を認識する：５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１。一部の態様では、抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離される。一部の態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである。一部の態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。

一部の態様では、抗原認識受容体は、ＣＡＲである。一部の態様では、ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載されている、単離された細胞のいずれか、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物である。

また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載されている、治療有効用量の単離された細胞又は本明細書中に記載されている組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、単離された細胞は、対象に由来する。一部の態様では、単離された細胞は、対象に関して同種である。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含む脂質ベースの構造である。一部の態様では、脂質ベースの構造は、細胞外小胞、脂質ナノ粒子、ミセル、又はリポソームを含む。一部の態様では、細胞外小胞は、以下からなる群から選択される：ナノ小胞及びエキソソーム。一部の態様では、脂質ベースの構造は、脂質ナノ粒子又はミセルを含む。一部の態様では、脂質ベースの構造は、リポソームを含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される脂質ベースの構造のいずれか、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物である。

また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される、治療有効用量の脂質ベースの構造のいずれか又は本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、脂質ベースの構造は、対象において細胞を操作することが可能である。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含むナノ粒子である。一部の態様では、ナノ粒子は無機材料を含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載されるナノ粒子のいずれかを含む組成物である。

また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される、治療有効用量のナノ粒子のいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、このナノ粒子は、対象において細胞を改変することが可能である。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれかを含むように操作されたウイルスである。一部の態様では、ウイルスは、以下からなる群から選択される：レンチウイルス、レトロウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）。

また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれか、及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物である。

また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される操作されたウイルスのいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかの治療有効用量を投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、操作されたウイルスは、対象において細胞に感染して、発現カセットを発現する。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。

図１Ａは、本明細書中に記載される膜切断可能なシステムの概略図を例証し、それにおいて、所望のペイロードが、プロテアーゼ切断部位がペイロードと膜係留ドメインの間に挿入されるキメラタンパク質として発現する。左パネルは、膜貫通構造を使用した膜切断可能なシステムの概略図を例証する（例、キメラタンパク質は膜貫通ドメインを含む）。右パネルは、膜会合構造を使用した膜切断可能なシステムの概略図を例証する（例、キメラタンパク質は、細胞膜との会合を可能にする翻訳後修飾タグを含む）。 図１Ｂは、ＩＬ－１５の調節された分泌のための代表的な膜切断可能なシステムを例証し、それにおいて、ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５ペイロードと膜係留ドメインの間に挿入されたＴＡＣＥによる切断が可能な切断部位を有するキメラタンパク質として発現する。左パネルは、Ｉ型膜貫通ドメイン、例えばＰＤＧＦＲ－ベータ及びＣＤ８などの使用を通じたＩ型膜貫通構造（例、Ｓ－Ｃ－ＭＴ）を例証する。右パネルは、ＩＩ型膜貫通ドメイン、例えばＮＫＧ２Ｄ及びＴＮＦＲ２などの使用を通したＩＩ型膜貫通構造（例、ＭＴ－Ｃ－Ｓ）である。 図２は、各膜切断可能なＩＬ－１５構築物について、フローサイトメトリー（幾何学的平均蛍光強度、「ｇＭＦＩ」、ｙ軸として算出）によりアッセイされた膜結合発現及びＥＬＩＳＡ（ｐｇ／ｍｌ、ｘ軸として測定）により決定された及びＩＬ－１５分泌のプロットを提供する。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＬ－１２膜切断可能なシステムの膜結合性発現及び分泌を提供する。図３Ａは、フローサイトメトリーにより測定される、ＮＫ細胞における各膜切断可能なＩＬ－１２システムの膜結合発現を示す。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＬ－１２膜切断可能なシステムの膜結合性発現及び分泌を提供する。図３Ｂは、フローサイトメトリーにより測定される、Ｔ細胞における各膜切断可能なＩＬ－１２システムの膜結合発現を示す。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＬ－１２膜切断可能なシステムの膜結合性発現及び分泌を提供する。図３Ｃは、ＮＫ細胞及びＴ細胞において発現した各膜切断可能なＩＬ－１２システムについてのＩＬ－１２分泌を示す。 図４Ａ～４Ｂは、膜結合ＮＫ細胞の発現及び様々なＩＬ－１５膜切断可能なシステムの分泌を提供する。図４Ａは、フローサイトメトリーにより測定される、ＮＫ細胞における各膜切断可能なＩＬ－１５システムの膜結合発現を示す。 図４Ａ～４Ｂは、膜結合ＮＫ細胞の発現及び様々なＩＬ－１５膜切断可能なシステムの分泌を提供する。図４Ｂは、ＮＫ細胞において発現した各膜切断可能なＩＬ－１５システムについてのＩＬ－１５分泌を示す。

詳細な説明
キメラタンパク質（又はキメラタンパク質をコードする操作された核酸）が、本明細書中で提供され、Ｎ末端からＣ末端へと配向され、単一のポリペプチドとして発現する式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する。Ｓは分泌性エフェクター分子を指す。Ｃはプロテアーゼ切断部位を指す。ＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。膜切断可能なキメラタンパク質が操作され、エフェクター分子の分泌が、プロテアーゼ依存性の様式において調節されることができるようにする。具体的には、膜切断可能なキメラタンパク質を操作して、エフェクター分子の分泌が、「膜切断可能な」システムの一部として調節され得るようにし、ここで、プロテアーゼ切断部位（「Ｃ」）及び細胞膜係留ドメイン（「ＭＴ」）の組み入れによって、プロテアーゼ依存性の様式においてエフェクター分子の調節された分泌が可能になる。理論により拘束されることを望まないが、膜切断可能なキメラタンパク質中に存在する膜切断可能なシステムの構成要素によって、一般的に、以下の細胞過程を通して分泌が調節される：
-ＭＴ：細胞膜係留ドメインは、細胞膜中に挿入されるように、又は細胞膜と会合される（「係留される」）ように、キメラタンパク質の細胞輸送を方向付ける膜貫通ドメイン（又は膜貫通－細胞内ドメイン）を含む。
-Ｃ：細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられ、エフェクター分子が細胞外空間中に放出される（「分泌される」）ようにする。一般的に、プロテアーゼ切断部位はプロテアーゼ特異的であり、プロテアーゼ特異的であるように操作された部位を含む。プロテアーゼ切断部位は、最適なタンパク質発現、細胞型特異的切断、細胞状態特異的切断、及び／又は所望の動態でのペイロードの切断及び放出（例、膜結合キメラタンパク質と分泌キメラタンパク質レベルの比率）を達成するように選択又は操作され得る。

一部の態様では、膜切断可能なキメラタンパク質（又は膜切断可能なキメラタンパク質をコードする操作された核酸）が本明細書中で提供され、目的のタンパク質（例、本明細書中に記載されるエフェクター分子のいずれか）、プロテアーゼ切断部位、及び細胞膜係留ドメインを有する。

「エフェクター分子」は、別の分子と結合し、それが結合するその分子の生物学的活性を調節する分子（例、核酸、例えばＤＮＡもしくはＲＮＡなど、又はタンパク質（ポリペプチド）もしくはペプチド）を指す。例えば、エフェクター分子は、酵素活性、遺伝子発現、又は細胞シグナル伝達を増加又は減少させるためのリガンドとして作用し得る。このように、一部の実施形態では、エフェクター分子は、異なる免疫調節機構を調節（活性化又は阻害）する。分子と直接的に結合して調節することにより、エフェクター分子はまた、第二の、下流分子を間接的に調節し得る。

本明細書中に記載される特定の実施形態では（例、一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について）、エフェクター分子は、分泌性エフェクター分子（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質について、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中で「Ｓ」として言及される）である。エフェクター分子の非限定的な例は、サイトカイン、ケモカイン、代謝物レベルを調節する酵素、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、ペプチド、酵素、抗体、サイトカイン、ホーミング分子、及び／又はインテグリンを調節する抗体又はデコイ分子を含む。

用語「調節する」は、生物学的活性の維持、生物学的活性の阻害（部分的又は完全）、及び生物学的活性の刺激／活性化（部分的又は完全）を包含する。この用語はまた、生物学的活性を減少又は増加させる（例、増強させる）ことを包含する。二つの異なるエフェクター分子は、一つのエフェクター分子が、他のエフェクター分子（例、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激する）により調節される腫瘍媒介性の免疫抑制機構とは異なる腫瘍媒介性の免疫抑制機構（例、Ｔ細胞シグナル伝達を刺激する）を調節する場合、「異なる腫瘍媒介性の免疫抑制機構を調節する」と考えられる。

エフェクター分子による調節は、直接的又は間接的であり得る。直接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合して、その分子の活性を調節する場合に生じる。間接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合して、その分子の活性を調節し、その調節の結果として、さらに別の分子（エフェクター分子が結合されていない）の活性を調節する場合に生じる。

一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）における少なくとも１０％（例、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、又は２００％）だけの増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけの増加をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答における１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％の増加をもたらす。免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答における「増加」は、例えば、全身的に又は腫瘍微小環境において、エフェクター分子の非存在において、そうでなければ生じるであろう免疫刺激性及び／又は抗腫瘍性免疫応答と関連することを理解すべきである。

一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）だけの増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍だけの増加をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍だけの増加をもたらす。

免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫機構の非限定的な例は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性及び／又は動員、抗原提示及び／又はプロセシング、ナチュラルキラー細胞媒介性の細胞傷害性シグナル伝達、活性及び／又は動員、樹状細胞の分化及び／又は成熟、免疫細胞動員、炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性及び／又は動員、間質分解、免疫刺激性代謝物の産生、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達（それは、ＩＦＮ及びＴｈ１分極の分泌を増加させ、抗腫瘍免疫応答を促進する）、及び／又はＩ型インターフェロンシグナル伝達を含む。エフェクター分子は、前述の免疫刺激機構の少なくとも一つ（一つ又は複数）を刺激し得るが、このように、免疫刺激性応答における増加をもたらし得る。前述の免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫機構における変化は、例えば、Ｔ細胞増殖又は細胞傷害性についてのインビトロアッセイ、インビトロ抗原提示アッセイ、発現アッセイ（例、特定のマーカーの）、及び／又は細胞分泌アッセイ（例、サイトカインの）を使用して評価され得る。

一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも１０％（例、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、又は２００％）だけの減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけの減少をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％の減少をもたらす。免疫抑制応答における「減少」は、例えば、全身的又は腫瘍微小環境において、エフェクター分子の非存在において、そうでなければ生じるであろう免疫抑制応答に関連していることを理解すべきである。

一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）だけの減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍だけの減少をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍だけの減少をもたらす。

免疫抑制機構の非限定的な例は、負の共刺激シグナル伝達、細胞傷害性細胞（例、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞）のアポトーシス促進性シグナル伝達、Ｔ調節性（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、腫瘍チェックポイント分子の産生／維持、骨髄由来サプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員、免疫抑制因子／代謝物産生、及び／又は血管内皮成長因子のシグナル伝達を含む。エフェクター分子は、前述の免疫抑制機構の少なくとも一つ（一つ又は複数）を阻害し、このように、免疫抑制応答における減少をもたらし得る。前述の免疫抑制機構における変化は、例えば、Ｔ細胞増殖における増加及び／又はＩＦＮγ産生における増加（負の共刺激シグナル伝達、Ｔ_ｒｅｇ細胞シグナル伝達、及び／又はＭＤＳＣ）；アネキシンＶ／ＰＩフロー染色（アポトーシス促進シグナル伝達）；発現についてのフロー染色、例えば、ＰＤＬ１発現（腫瘍チェックポイント分子の産生／維持）；ＥＬＩＳＡ、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）、ｑＰＣＲを介したＲＮＡ、酵素アッセイ、例えば、ＩＤＯトリプトファン異化作用（免疫抑制因子／代謝物産生）；及びＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｐ３８のリン酸化（ＶＥＧＦシグナル伝達）についてアッセイすることにより評価され得る。

一部の実施形態では、エフェクター分子は、相加的に機能する：二つのエフェクター分子の効果が、例えば、別々に機能する二つのエフェクター分子の効果の合計に等しくなり得る。他の実施形態では、エフェクター分子は相乗的に機能する：二つのエフェクター分子の効果が、例えば、二つのエフェクター分子の組み合わされた機能よりも大きくなり得る。

腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節し、及び／又は腫瘍微小環境を修飾するエフェクター分子は、例えば、分泌因子（例、免疫系において含まれる細胞外機構を調節するサイトカイン、ケモカイン、抗体、及び／又はデコイ受容体）、阻害剤（例、抗体、抗体断片、リガンドＴＲＡＰ、及び／又は小遮断ペプチド）、細胞状態を制御する細胞内因子（例、炎症誘発性を増強するために細胞の状態を調節するマイクロＲＮＡ及び／又は転写因子）、エキソソーム中にパッケージングされた因子（例、マイクロＲＮＡ、サイトゾル因子、及び／又は細胞外因子）、表面に呈示される因子（例、チェックポイント阻害剤、ＴＲＡＩＬ）、ならびに、及び／又は代謝遺伝子（例、代謝物もしくはアミノ酸を産生／調節又は分解する酵素）であり得る。

一部の実施形態では、エフェクター分子の少なくとも一つは、腫瘍微小環境において免疫刺激機構を刺激し、及び／又は腫瘍微小環境における免疫抑制機構を阻害する。

一部の実施形態では、エフェクター分子の少なくとも一つは、（ａ）Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、（ｂ）抗原提示及び／又はプロセシングを刺激し、（ｃ）ナチュラルキラー細胞媒介性の細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、（ｄ）樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激し、（ｅ）免疫細胞動員を刺激し、（ｆ）炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激する、あるいは抗炎症性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｇ）間質分解を刺激し、（ｈ）免疫刺激性代謝物産生を刺激し、（ｉ）Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激し、（ｊ）負の共刺激シグナル伝達を阻害し、（ｋ）抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、（ｌ）調節性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｍ）腫瘍チェックポイント分子を阻害し、（ｎ）インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を刺激し、（ｏ）骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｐ）免疫抑制因子／代謝物を分解し、（ｑ）血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、ならびに／あるいは（ｒ）腫瘍細胞を直接的に殺傷する。

一部の実施形態では、エフェクター分子は、以下の非限定的なクラスの分子から選択され得る：サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、及び酵素。前述のクラスのエフェクター分子の非限定的な例を表１中に列挙し、例示的なエフェクター分子をコードする特定の配列を表２中に列挙する。エフェクター分子は、ヒト、表１もしくは表２中に列挙されるものなど、又は表１もしくは表２中に列挙されるマウスエフェクター分子のヒト等価物であり得る。エフェクター分子はヒト由来であり得るが、例えば内因性ヒトエフェクター分子又は機能について修飾及び／又は最適化されたエフェクター分子、例えば、発現を改善するために最適化された、安定性を改善するために修飾された、又はそのシグナル配列で修飾されたコドンなどである（以下を参照のこと）。機能を最適化するための様々なプログラム及びアルゴリズムが、当業者に公知であり、所望される改善、例えば、特定の種（例、ヒト、マウス、細菌など）についてのコドン最適化などに基づいて選択することができる。

一部の実施形態では、エフェクター分子は、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、例えば、当技術分野において一般的にＩＬ－１２ｐ７０として言及される二量体としてのｐ３５及びｐ４０を含む。一部の実施形態では、第一のエフェクター分子は、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含む。一部の実施形態では、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。一部の実施形態では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号２０３において示される配列を含む。

一部の実施形態では、エフェクター分子は、インターレキン１５（ＩＬ－１５）を含む。一部の実施形態では、エフェクター分子は、ＩＬ－１５（例、配列番号１９９を参照のこと）からなる。一部の実施形態では、エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）の細胞外部分、例えば配列番号２０１中に示すようなｓｕｓｈｉドメインなどを含む融合タンパク質を含み。例示的なＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合体が、配列番号２０２として提供される。

（表１）例示的なエフェクター分子

（表２）例示的なエフェクター分子配列

分泌シグナル及びシグナルアンカー
本明細書中で提供されるキメラタンパク質の一つ又は複数のエフェクター分子は、分泌又は膜局在化（また、膜挿入として言及される）が運命づけられた、新たに合成されたタンパク質を、適したタンパク質プロセシング経路に方向付ける、キメラタンパク質のＮ末端（例、Ｓ－Ｃ－ＭＴについてのエフェクター分子のＮ末端）に分泌シグナルペプチド（また、シグナルペプチド又はシグナル配列として言及される）を有する分泌性エフェクター分子であり得る。式ＭＴ－Ｃ－Ｓを有するキメラタンパク質については、膜係留ドメインは、一般的に、膜局在化が運命づけられた、新たに合成されたタンパク質を、適したタンパク質プロセシング経路に方向付けるシグナルアンカー配列（例、ＩＩ型膜貫通タンパク質のシグナルアンカー配列）を有する。式Ｓ－Ｃ－ＭＴを有するキメラタンパク質については、逆シグナルアンカー配列（例、特定のＩＩＩ型膜貫通タンパク質のシグナルアンカー配列）を有する膜係留ドメインを使用することができ、一般的には、別々の分泌シグナルペプチドを伴うことなく、それによって、膜局在化が運命づけられた、新たに合成されたタンパク質を、適したタンパク質プロセシング経路に方向付ける。

一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、一つ又は複数のエフェクター分子は、分泌性エフェクター分子（式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中で「Ｓ」として言及される）である。二つ以上のキメラタンパク質を伴う実施形態では、各キメラタンパク質は分泌シグナルを含み得る。二つ以上のキメラタンパク質を伴う実施形態では、各キメラタンパク質は分泌シグナルを含み得るが、各エフェクター分子が、プロテアーゼ切断部位の切断後に、操作された細胞からの分泌が可能になるようにする。

エフェクター分子と動作可能に関連付けられた分泌シグナルペプチドは、天然分泌シグナルペプチド（例、一般的に、所与のエフェクター分子と内因性に関連付けられた分泌シグナルペプチド）であり得る。エフェクター分子と動作可能に関連付けられた分泌シグナルペプチドは、非天然分泌シグナルペプチド、天然分泌シグナルペプチドであり得る。非天然分泌シグナルペプチドは、特定の環境、例えば腫瘍微小環境などにおいて、改善された発現及び機能、例えば、維持された分泌などを促進することができる。非天然分泌シグナルペプチドの非限定的な例を表３中に示す。

（表３）例示的なシグナル分泌ペプチド

プロテアーゼ切断部位
特定の実施形態では、本明細書中で提供されるキメラタンパク質（例、一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について）は、プロテアーゼ切断部位（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質について、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓにおいて「Ｃ」として言及される）を含む。一般的に、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼにより切断されることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであることができる。プロテアーゼ切断部位の例は、 限定されないが、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３ プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、又はＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。

プロテアーゼ切断部位の一つの例は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造的タンパク質３（ＮＳ３）プロテアーゼ切断部位であり、限定されないが、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ切断部位を含む。ＨＣＶの様々な株についてのＮＳ３プロテアーゼ及びその切断部位の代表的な配列の説明については、例えば、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ Ｖｉｒｕｓｅｓ： Ｇｅｎｏｍｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｌ．Ｔａｎ ｅｄ．，Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，２００６），Ｃｈａｐｔｅｒ ６，ｐｐ．１６３－２０６を参照のこと；その全体において、参照により本明細書中に組み入れられる。例えば、ＨＣＶ ＮＳ４Ａ／４Ｂプロテアーゼ切断部位；ＨＣＶ ＮＳ５Ａ／５Ｂプロテアーゼ切断部位；ＮＳ４Ａ／４Ｂプロテアーゼ切断部位を伴うＣ末端デグロン；ＨＣＶ ＮＳ５Ａ／５Ｂプロテアーゼ切断部位を伴うＮ末端デグロンの配列が提供される。代表的なＮＳ３配列は、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ））データベース中に列挙されている。例えば、ＮＣＢＩエントリー：受託番号：ＹＰ＿００１４９１５５３、ＹＰ＿００１４６９６３１、ＹＰ＿００１４６９６３２、ＮＰ＿８０３１４４、ＮＰ＿６７１４９１、ＹＰ＿００１４６９６３４、ＹＰ＿００１４６９６３０、ＹＰ＿００１４６９６３３、ＡＤＡ６８３１１、ＡＤＡ６８３０７、ＡＦＰ９９０００、ＡＦＰ９８９８７、ＡＤＡ６８３２２、ＡＦＰ９９０３３、ＡＤＡ６８３３０、ＡＦＰ９９０５６、ＡＦＰ９９０４１、ＣＢＦ６０９８２、ＣＢＦ６０８１７、ＡＨＨ２９５７５、ＡＩＺ００７４７、ＡＩＺ００７４４、ＡＢＩ３６９６９、ＡＢＮ０５２２６、ＫＦ５１６０７５、ＫＦ５１６０７４、ＫＦ５１６０５６、ＡＢ８２６６８４、ＡＢ８２６６８３、ＪＸ１７１００９、ＪＸ１７１００８、ＪＸ１７１０００、ＥＵ８４７４５５、ＥＦ１５４７１４、ＧＵ０８５４８７、ＪＸ１７１０６５、ＪＸ１７１０６３を参照のこと；それらの配列の全て（本出願の出願日までに入力されるとおり）が、参照により本明細書中に組み入れられる。

プロテアーゼ切断部位の別の例は、ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ（また、腫瘍壊死因子α変換酵素［ＴＡＣＥ］として言及される）切断部位である。ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７により天然に切断された基質の内因性配列であり得る。ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７により切断されることが可能な、操作された配列であり得る。操作されたＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位は、限定されないが、キメラタンパク質の最適な発現、ＡＤＡＭ１７についての特異性、ＡＤＡＭ１７による切断速度、分泌及び膜結合キメラタンパク質レベルの比率、ならびに異なる細胞状態における切断を含む、特定の所望される特性について操作され得る。プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７による特定の切断のために選択することができる。例えば、ＡＤＡＭ１７により切断されることが可能な特定のプロテアーゼ切断部位はまた、追加のＡＤＡＭファミリープロテアーゼ、例えばＡＤＡＭ１０などによる切断が可能である。したがって、ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位は、他のプロテアーゼ、例えばＡＤＡＭ１０などによる切断が低下又は除去されるように、選択及び／又は操作することができる。プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７による切断速度について選択することができる。例えば、ＡＤＡＭ１７による特定の切断速度、例えば、ＡＤＡＭ１７により天然に切断される基質の内因性配列に関して低下した切断動態などを示すプロテアーゼ切断部位を選択することが望ましいことがある。そのような場合では、一般的に、特定の切断速度を選択して、キメラタンパク質のプロセシング速度を調節することができ、それは次に、ペイロードエフェクター分子の放出／分泌速度を調節する。したがって、ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位は、配列が、ＡＤＡＭ１７による所望の切断速度を示すように選択及び／又は操作することができる。プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７による特異的切断及びＡＤＡＭ１７による切断速度の両方について選択することができる。例示的なＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位を、特定の特異性及び切断速度動態を示すものを含めて、切断部位（Ｐ５－Ｐ１：Ｎ末端；Ｐ１’－Ｐ５’：Ｃ末端）を参照して以下の表４Ａ中に示す。ＡＤＡＭ１７及びＡＤＡＭ１０のさらなる詳細を、発現及びプロテアーゼ切断部位を含めて、Ｓｈａｍｌａ，ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｏｃｔｏｂｅｒ １５，２０１７，１９９ （８）２８６５－２８７２）、Ｐｈａｍ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７ Ｏｃｔ；３７（１０）：５５０７－５５１３）、Ｃａｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２００９ Ｏｃｔ ２３； ４２４（１）： ７９－８８）、及びＴｕｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ．２０１４，１３，４，２２０５－２２１４）において記載されており、各々が、目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

（表４Ａ）様々なＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位配列

一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の実施形態では、第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ_１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ_２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ_１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ_２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。

一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧ（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む。配列番号１８７、１８９、及び１９１のプロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７により切断可能である。

一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含み、それは、ＣＤ１６にとって天然であり、ＡＤＡＭ１７により切断可能である切断部位である。

プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＣ末端であり得る。プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＮ末端であり得る。一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、プロテアーゼ切断部位は、以下のいずれかである：（１）分泌性エフェクター分子のＣ末端及び細胞膜係留ドメインのＮ末端（言い換えれば、プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子と細胞膜係留ドメインの間にある）；又は（２）分泌性エフェクター分子のＮ末端及び細胞膜係留ドメインのＣ末端（また、分泌性エフェクター分子と、ドメイン配向が反転した細胞膜係留ドメインの間にある）。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的にはエフェクター分子又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、分泌性エフェクター分子に接続されることができる。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的には細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞膜係留ドメインに接続されることができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加的な、例示的なポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。

膜切断可能なシステムでは、キメラタンパク質の発現及び細胞膜中への局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられて、エフェクター分子が、細胞の細胞外空間中に放出される（「分泌される」）ようにする。

一般的に、プロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、その特定のプロテアーゼ切断部位について特異的なプロテアーゼである。例えば、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（「ＡＤＡＭ」）ファミリープロテアーゼの場合では、特定のＡＤＡＭプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、一般的に、特定のＡＤＡＭプロテアーゼ切断部位モチーフを特異的に認識するＡＤＡＭプロテアーゼに限定される。プロテアーゼ切断部位を選択及び／又は操作することができ、望ましくないプロテアーゼによる切断が低下又は除去されるようにする。プロテアーゼは、膜結合又は膜会合し得る。プロテアーゼは、例えば、特定の細胞環境、例えば腫瘍微小環境（「ＴＭＥ」）などにおいて分泌され得る。

キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する同じ細胞において発現し得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞に対して内因性であり得る。言い換えれば、キメラタンパク質を発現するように操作された細胞は、キメラタンパク質中に存在するプロテアーゼ切断部位について特異的なプロテアーゼを内因性に発現することができる。プロテアーゼの内因性発現は、一般的に、恒常性条件下（例、一般的に健康であると考えられる細胞）での発現、及び、また、非恒常性条件下（例、腫瘍細胞における上方調節された発現）での差次的発現の両方を指す。プロテアーゼ切断部位は、所望の細胞集団により内因性に発現する公知のプロテアーゼに基づいて選択することができる。そのような場合では、一般的に、プロテアーゼ切断部位の切断（及び、このように、ペイロードの放出／分泌）は、同じ細胞中で発現するキメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位と接触する必要がある細胞制限プロテアーゼに起因して、目的の細胞のみに制限され得る。例えば、理論により拘束されることを望まないが、ＡＤＡＭ１７は、ＮＫ細胞及びＴ細胞へのその内因性発現が制限されると考えられる。このように、ＡＤＡＭ１７特異的プロテアーゼ切断部位の選択によって、キメラタンパク質を共発現するＮＫ細胞及びＴ細胞へのプロテアーゼ切断部位の切断が制限され得る。他の例では、プロテアーゼ切断部位は、目的の特定の腫瘍集団において（例、キメラタンパク質を発現するように操作された特定の腫瘍細胞において）発現することが公知である特定の腫瘍関連プロテアーゼについて選択され得る。プロテアーゼ及び／又は発現データベースを使用して、適したプロテアーゼ切断部位を選択し、例えば、Ｏｎｃｏｍｉｎｅ（ｗｗｗ．ｏｎｃｏｍｉｎｅ．ｏｒｇ）、欧州バイオインフォマティクス研究所（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ）、特に（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ），ＰＭＡＰ（ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ．ｏｒｇ）、ＥｘＰＡＳｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｕｔｔｅｒ（ｃａ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｕｔｔｅｒ）及びＰＭＡＰ．Ｃｕｔ ＤＢ（ｃｕｔｄｂ．ｂｕｒｎｈａｍ．ｏｒｇ）に相談することを通じて、腫瘍関連プロテアーゼにより切断されるプロテアーゼ切断部位を選択するなど、それらの各々が、全ての目的のために参照により組み入れられる。

キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞に対して異種であり得る。例えば、キメラタンパク質を発現するように操作された細胞は、キメラタンパク質中に存在するプロテアーゼ切断部位について特異的である細胞により一般的に発現しないプロテアーゼを発現するように操作され得る。キメラタンパク質及びプロテアーゼの両方を発現するように操作された細胞は、別々の操作された核酸から又はマルチシストロン系から各々を発現するように操作することができる（マルチシストロン系及びマルチプロモーター系は、「マルチシストロン及びマルチプロモーター系」と表題の付けられた、本明細書中のセクションにおいてより詳細に記載されている）。異種プロテアーゼ及びそれらの対応するプロテアーゼ切断部位は、内因性プロテアーゼを参照して、上に記載されるように選択することができる。

キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞よりも、別々の異なる細胞上で発現され得る。例えば、プロテアーゼは、一般的に、特定の細胞環境、例えば腫瘍微小環境などにおいて発現され得る。そのような場合では、一般的に、プロテアーゼ切断部位の切断は、プロテアーゼ切断部位と接触する必要がある環境制限プロテアーゼに起因して、目的の細胞環境（例、腫瘍微小環境）のみに制限され得る。膜切断可能なキメラタンパク質を有する実施形態では、一般的に、エフェクター分子の分泌は、プロテアーゼ切断部位と接触する必要がある環境限定プロテアーゼに起因して、目的の細胞環境（例、腫瘍微小環境）のみに制限され得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、別々の異なる細胞に対して内因性であり得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、別々の異なる細胞に対して異種であり得る。例えば、別々の異なる細胞は、別々の異なる細胞により一般的に発現されないプロテアーゼを発現するように操作することができる。

プロテアーゼは、限定されないが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼを含む。プロテアーゼは、ＮＳ３プロテアーゼであり得る。プロテアーゼは、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼであり得る。

プロテアーゼは、腫瘍関連プロテアーゼ、例えばカテプシン、システインプロテアーゼ、アスパルチルプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、又はメタロプロテアーゼなどであり得る。腫瘍関連プロテアーゼの具体的な例は、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、トロンビン、プラスミン、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、メタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ４、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２５、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２８、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭＴＳ、ＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）、又は前立腺特異抗原を含む。プロテアーゼはまた、以下の表４Ｂ中に列挙されるプロテアーゼを含むが、限定されない。特定のプロテアーゼについての例示的な同族プロテアーゼ切断部位がまた、表４Ｂ中に列挙されている。

（表４Ｂ）同族切断部位及び阻害剤を伴う例示的なプロテアーゼ

プロテアーゼは、以下のヒトプロテアーゼのいずれかであり得る（括弧中に提供されるＭＥＲＯＰＳペプチダーゼデータベース番号；Ｒａｗｌｉｎｇｓ Ｎ．Ｄ．，Ｍｏｒｔｏｎ Ｆ．Ｒ．，Ｋｏｋ，Ｃ．Ｙ．，Ｋｏｎｇ，Ｊ．＆ Ｂａｒｒｅｔｔ Ａ．Ｊ．（２００８）ＭＥＲＯＰＳ： ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３６ Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ，Ｄ３２０－３２５；全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる）：ペプシンＡ（ＭＥＲ０００８８５）、ガストリシン（ＭＥＲ０００８９４）、メマプシン－２（ＭＥＲ００５８７０）、レニン（ＭＥＲ０００９１７）、カテプシンＤ（ＭＥＲ０００９１１）、カテプシンＥ（ＭＥＲ０００９４４）、メマプシン－１（ＭＥＲ００５５３４）、ナプシン Ａ（ＭＥＲ００４９８１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３８）、ペプシンＡ４（ＭＥＲ０３７２９０）、ペプシンＡ５（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２９１）、ｈＣＧ１７３３５７２（ホモサピエンス）型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１０７３８６）、ナプシンＢ偽遺伝子（ＭＥＲ００４９８２）、ＣＹＭＰ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００２９２９）、サブファミリー Ａ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８１５５９）、マウス乳腺腫瘍ウイルスレトロペプシン（ＭＥＲ０４８０３０）、ウサギ内因性レトロウイルスエンドペプチダーゼ（ＭＥＲ０４３６５０）、Ｓ７１関連ヒト内因性レトロペプシン（ＭＥＲ００１８１２）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１１７）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１３３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２０６）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２５３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２６０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２９１）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４１８）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４４０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４７９）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５５９）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５８３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４４６）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシンホモログ１（ＭＥＲ０１５４７９）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシンホモログ２（ＭＥＲ０１５４８１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１（ホモサピエンス染色体１４）（ＭＥＲ０２９９７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２（ホモサピエンス染色体８）（ＭＥＲ０２９６６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ００２６６０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ０３０２８６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ０４７１４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子５（ホモサピエンス染色体１２）（ＭＥＲ０２９６６４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子６（ホモサピエンス染色体７）（ＭＥＲ００２０９４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子７（ホモサピエンス染色体６）（ＭＥＲ０２９７７６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子８（ホモサピエンス染色体Ｙ）（ＭＥＲ０３０２９１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子９（ホモサピエンス染色体１９）（ＭＥＲ０２９６８０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１０（ホモサピエンス染色体１２）（ＭＥＲ００２８４８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１１（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ００４３７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１２（ホモサピエンス染色体１１）（ＭＥＲ００３３４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１３（ホモサピエンス染色体２及び同様のもの）（ＭＥＲ０２９７７９）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１４（ホモサピエンス染色体２）（ＭＥＲ０２９７７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０４７１５８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０４７３３２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ００３１８２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７２００）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７３１５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７４０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０３０２９２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１７（ホモサピエンス染色体８）（ＭＥＲ００５３０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１８（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０３０２８８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１９（ホモサピエンス染色体１６）（ＭＥＲ００１７４０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７２２２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７４５４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７４７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００４４０３）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２２（ホモサピエンス染色体Ｘ）（ＭＥＲ０３０２８７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０４６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログＭＥＲ０４７１０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログＭＥＲ０４７１１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３４）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８００４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０３７）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６４）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２３１）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７３８６）、皮膚アスパラギン酸プロテアーゼ（ＭＥＲ０５７０９７）、プレセニリン １（ＭＥＲ００５２２１）、プレセニリン ２（ＭＥＲ００５２２３）、インパス１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０１）、インパス１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１８４７２２）、インパス４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１５）、インパス２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０８）、インパス５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１２）、インパス３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１１）、可能なファミリーＡ２２偽遺伝子（ホモサピエンス染色体１８）（ＭＥＲ０２９９７４）、可能なファミリーＡ２２偽遺伝子（ホモサピエンス染色体１１）（ＭＥＲ０２３１５９）、カテプシンＶ（ＭＥＲ００４４３７）、カテプシンＸ（ＭＥＲ００４５０８）、カテプシンＦ（ＭＥＲ００４９８０）、カテプシンＬ（ＭＥＲ０００６２２）、カテプシンＳ（ＭＥＲ０００６３３）、カテプシンＯ（ＭＥＲ００１６９０）、カテプシンＫ（ＭＥＲ０００６４４）、カテプシンＷ（ＭＥＲ００３７５６）、カテプシンＨ（ＭＥＲ０００６２９）、カテプシンＢ（ＭＥＲ０００６８６）、
ジペプチジルペプチダーゼ Ｉ（ＭＥＲ００１９３７）、ブレオマイシンヒドロラーゼ（動物）（ＭＥＲ００２４８１）、尿細管間質性腎炎抗原（ＭＥＲ０１６１３７）、尿細管間質性腎炎抗原関連タンパク質（ＭＥＲ０２１７９９）、カテプシンＬ様偽遺伝子１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００２７８９）、カテプシンＢ様偽遺伝子（染色体４、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９４６９）、カテプシンＢ様偽遺伝子（染色体１、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９４５７）、ＣＴＳＬＬ２ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５２１０）、ＣＴＳＬＬ３ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５２０９）、カルパイン－１（ＭＥＲ０００７７０）、カルパイン－２（ＭＥＲ０００９６４）、カルパイン－３（ＭＥＲ００１４４６）、カルパイン－９（ＭＥＲ００４０４２）、カルパイン－８（ＭＥＲ０２１４７４）、カルパイン－１５（ＭＥＲ００４７４５）、カルパイン－５（ＭＥＲ００２９３９）、カルパイン－１１（ＭＥＲ００５８４４）、カルパイン－１２（ＭＥＲ０２９８８９）、カルパイン－１０（ＭＥＲ０１３５１０）、カルパイン－１３（ＭＥＲ０２０１３９）、カルパイン－１４（ＭＥＲ０２９７４４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２５３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３７）、カルパモジュリン（ＭＥＲ０００７１８）、仮想タンパク質９４０２５１（ＭＥＲ００３２０１）、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ１（ＭＥＲ０００８３２）、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ３（ＭＥＲ０００８３６）、ユビキチニルヒドロラーゼ－ＢＡＰ１（ＭＥＲ００３９８９）、ユビキチニルヒドロラーゼ－ＵＣＨ３７（ＭＥＲ００５５３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００２０６６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ６（ＭＥＲ０００８６３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００１７９５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００１８８４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００２６２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００４８３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００２６９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ００２６６７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２８９６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｘ（ＭＥＲ００５８７７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００４４３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４９７８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００５４５４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１６（ＭＥＲ００５４９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００５４２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１７（ＭＥＲ００２９００）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１９（ＭＥＲ００５４２８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２０（ＭＥＲ００５４９４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３（ＭＥＲ００５５１３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｙ（ＭＥＲ００４３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１８（ＭＥＲ００５６４１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２１（ＭＥＲ００６２５８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ＭＥＲ０１２１３０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３３（ＭＥＲ０１４３３５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２９（ＭＥＲ０１２０９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２５（ＭＥＲ０１１１１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３６（ＭＥＲ０１４０３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３２（ＭＥＲ０１４２９０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２６（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０１４２９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２４（ＭＥＲ００５７０６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４２（ＭＥＲ０１１８５２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４６（ＭＥＲ０１４６２９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３７（ＭＥＲ０１４６３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２８（ＭＥＲ０１４６３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４７（ＭＥＲ０１４６３６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３８（ＭＥＲ０１４６３７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４４（ＭＥＲ０１４６３８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５０（ＭＥＲ０３０３１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３５（ＭＥＲ０１４６４６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＭＥＲ０１４６４９）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９１ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７４３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４５（ＭＥＲ０３０３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５１（ＭＥＲ０１４７６９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３４（ＭＥＲ０１４７８０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４８（ＭＥＲ０６４６２０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４０（ＭＥＲ０１５４８３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４１（ＭＥＲ０４５２６８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３１（ＭＥＲ０１５４９３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１２９ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６４８５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４９（ＭＥＲ０１６４８６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１８７ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５２５７９）、ＵＳＰ１７ 様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５４（ＭＥＲ０２８７１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５３（ＭＥＲ０２７３２９）、ユビキチン特異的エンドペプチダーゼ３９［ミスリード］（ＭＥＲ０６４６２１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９０非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４７３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４３［ミスリード］（ＭＥＲ０３０１４０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５２［ミスリード］（ＭＥＲ０３０３１７）、ＮＥＫ２偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７３６）、Ｃ１９偽遺伝子（ホモサピエンス： 第 ５ 染色体）（ＭＥＲ０２９９７２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０８８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７５０）、オートファジン－２（ＭＥＲ０１３５６４）、オートファジン－１（ＭＥＲ０１３５６１）、オートファジン－３（ＭＥＲ０１４３１６）、オートファジン－４（ＭＥＲ０６４６２２）、セザンヌ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４２）、セザンヌ－２ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４４）、腫瘍壊死因子アルファ誘導タンパク質３（ＭＥＲ０２９０５０）、ｔｒａｂｉｄ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０５２）、ＶＣＩＰ１３５ 脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ１５２３０４）、ｏｔｕｂａｉｎ－１（ＭＥＲ０２９０５６）、ｏｔｕｂａｉｎ－２（ＭＥＲ０２９０６１）、ＣｙｌＤ タンパク質（ＭＥＲ０３０１０４）、ＵｆＳＰ１ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４２７２４）、ＵｆＳＰ２ ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０３０６）、ＤＵＢＡ 脱ユビキチン化酵素（ＭＥＲ０８６０９８）、ＫＩＡＡ０４５９（ホモサピエンス）様タンパク質（ＭＥＲ１２２４６７）、Ｏｔｕｄ１タンパク質（ＭＥＲ１２５４５７）、グリコシルトランスフェラーゼ２８ドメイン含有 １、アイソフォーム ＣＲＡ＿ｃ（ホモサピエンス）様（ＭＥＲ１２３６０６）、ｈｉｎ１Ｌ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１３９８１６）、アタキシン－３（ＭＥＲ０９９９９８）、ＡＴＸＮ３Ｌ推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１５２６１）、ジョセフィンドメイン含有１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１２５３３４）、ジョセフィンドメイン含有 ２（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１２４０６８）、ＹＯＤ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１６５５９）、レグマイン（植物アルファ型）（ＭＥＲ０４４５９１）、レグマイン（ＭＥＲ００１８００）、グリコシルホスファチジルイノシトール：タンパク質トランスアミダーゼ（ＭＥＲ００２４７９）、レグマイン偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９７４１）、ファミリー Ｃ１３未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１７５８１３）、カスパーゼ－１（ＭＥＲ０００８５０）、カスパーゼ－３（ＭＥＲ０００８５３）、カスパーゼ－７（ＭＥＲ００２７０５）、カスパーゼ－６（ＭＥＲ００２７０８）、カスパーゼ－２（ＭＥＲ００１６４４）、カスパーゼ－４（ＭＥＲ００１９３８）、カスパーゼ－５（ＭＥＲ００２２４０）、カスパーゼ－８（ＭＥＲ００２８４９）、カスパーゼ－９（ＭＥＲ００２７０７）、カスパーゼ－１０（ＭＥＲ００２５７９）、カスパーゼ－１４（ＭＥＲ０１２０８３）、パラカスパーゼ（ＭＥＲ０１９３２５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１３０４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１８６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０５１６）、推定カスパーゼ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２１４６３）、ＦＬＩＰ タンパク質（ＭＥＲ００３０２６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４２タンパク質（ＭＥＲ０２１３１６）、カスパーゼ１２偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０１９６９８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９３ カスパーゼ偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７６６）、サブファミリー Ｃ１４Ａ 非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８５３２９）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７９９５６）、セパリン（ホモ サピエンス型）（ＭＥＲ０１１７７５）、セパラーゼ様偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７９７）、ＳＥＮＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１２）、ＳＥＮＰ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１９）、ＳＥＮＰ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１１０９）、ＳＥＮＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２１８３）、ＳＥＮＰ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３２）、ＳＥＮＰ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０９５）、ＳＥＮＰ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６１６１）、ＳＥＮＰ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５５７）、ピログルタミル－ペプチダーゼＩ（脊索動物）（ＭＥＲ０１１０３２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０７３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９７８）、ソニックヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３９）、インディアンヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３８）、デザートヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ０１２１７０）、ジペプチジル－ペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００４２５２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６４ タンパク質（ＭＥＲ０２０４１０）、ＬＯＣ１３８９７１ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２００７４）、Ａｔｐ２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０６４２）、プレニルペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４２４６）、アミノペプチダーゼＮ（ＭＥＲ０００９９７）、アミノペプチダーゼＡ（ＭＥＲ００１０１２）、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ（ＭＥＲ００１０１３）、ピログルタミル－ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１２２２１）、サイトゾルアラニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２７４６）、シスチニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６０）、アミノペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１４９４）、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ（ＭＥＲ００５３３１）、アルギニルアミノペプチダーゼ様 １（ＭＥＲ０１２２７１）、白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２９６８）、アミノペプチダーゼＱ（ＭＥＲ０５２５９５）、アミノペプチダーゼＯ（ＭＥＲ０１９７３０）、Ｔａｔａ結合タンパク質関連因子（ＭＥＲ０２６４９３）、アンギオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット １（ＭＥＲ００４９６７）、アンギオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット ２（ＭＥＲ００１０１９）、アンギオテンシン変換酵素－２（ＭＥＲ０１１０６１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５３タンパク質（ＭＥＲ０２０５１４）、チメットオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ００１７３７）、ニューロリシン（ＭＥＲ０１０９９１）、ミトコンドリア中間体ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６６５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１７）、レイシマノリシン－２（ＭＥＲ０１４４９２）、レイシマノリシン－３（ＭＥＲ１８００３１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１（ＭＥＲ００１０６３）、マトリックスメタロペプチダーゼ－８（ＭＥＲ００１０８４）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２（ＭＥＲ００１０８０）、マトリックスメタロペプチダーゼ－９（ＭＥＲ００１０８５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－３（ＭＥＲ００１０６８）、
マトリックスメタロペプチダーゼ－１０（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００１０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１１（ＭＥＲ００１０７５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－７（ＭＥＲ００１０９２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１２（ＭＥＲ００１０８９）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１３（ＭＥＲ００１４１１）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－１（ＭＥＲ００１０７７）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－２（ＭＥＲ００２３８３）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－３（ＭＥＲ００２３８４）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－４（ＭＥＲ００２５９５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２０（ＭＥＲ００３０２１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１９（ＭＥＲ００２０７６）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２３Ｂ（ＭＥＲ００４７６６）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－５（ＭＥＲ００５６３８）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－６（ＭＥＲ０１２０７１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２１（ＭＥＲ００６１０１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２２（ＭＥＲ０１４０９８）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２６（ＭＥＲ０１２０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２８（ＭＥＲ０１３５８７）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２３Ａ（ＭＥＲ０３７２１７）、マクロファージエラスターゼホモログ（第８染色体、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３００３５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５６タンパク質（ＭＥＲ０２１３０９）、マトリックスメタロペプチダーゼ様１（ＭＥＲ０４５２８０）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７５９１２）、サブファミリー Ｍ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９７）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９８）、サブファミリー Ｍ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８００００）、メプリン アルファ サブユニット（ＭＥＲ００１１１１）、メプリンベータサブユニット（ＭＥＲ００５２１３）、プロコラーゲンＣ－ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１１３）、哺乳類トロイド様１タンパク質（ＭＥＲ００５１２４）、哺乳類型トロイド様 ２タンパク質（ＭＥＲ００５８６６）、ＡＤＡＭＴＳ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２０９２）、ＡＤＡＭＴＳ１４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６７００）、ＡＤＡＭＴＳ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０２９）、ＡＤＡＭＴＳ１６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６８９）、ＡＤＡＭＴＳ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３０２）、ＡＤＡＭＴＳ１８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６０９０）、ＡＤＡＭＴＳ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６６３）、ＡＤＡＭ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９０２）、ＡＤＡＭ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１４０）、ＡＤＡＭ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８２）、ＡＤＡＭ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０７）、ＡＤＡＭ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２２４１）、ＡＤＡＭ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８６）、ＡＤＡＭ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３０９４）、ＡＤＡＭ２０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４７２５）、ＡＤＡＭＤＥＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００７４３）、ＡＤＡＭＴＳ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１００）、ＡＤＡＭＴＳ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０１）、ＡＤＡＭＴＳ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４６）、ＡＤＡＭ２８ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００５４９５）、ＡＤＡＭＴＳ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４８）、ＡＤＡＭＴＳ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４５）、ＡＤＡＭＴＳ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９３）、ＡＤＡＭＴＳ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９４）、ＡＤＡＭ３０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２６８）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００４７２６）、ＡＤＡＭＴＳ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３１）、ＡＤＡＭＴＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３７）、ＡＤＡＭＴＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４５０）、ＡＤＡＭ３３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５１４３）、オバスタシン（ＭＥＲ０２９９９６）、ＡＤＡＭＴＳ２０ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０２６９０６）、プロコラーゲン Ｉ Ｎ－ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４９８５）、ＡＤＡＭ２タンパク質（ＭＥＲ００３０９０）、ＡＤＡＭ６タンパク質（ＭＥＲ０４７０４４）、ＡＤＡＭ７タンパク質（ＭＥＲ００５１０９）、ＡＤＡＭ１８タンパク質（ＭＥＲ０１２２３０）、ＡＤＡＭ３２タンパク質（ＭＥＲ０２６９３８）、非ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０２９９７３）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス染色体１６）（ＭＥＲ０４７６５４）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス染色体１５）（ＭＥＲ０４７２５０）、ＡＤＡＭ３Ｂタンパク質（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００５１９９）、ＡＤＡＭ１１タンパク質（ＭＥＲ００１１４６）、ＡＤＡＭ２２タンパク質（ＭＥＲ００５１０２）、ＡＤＡＭ２３タンパク質（ＭＥＲ００５１０３）、ＡＤＡＭ２９タンパク質（ＭＥＲ００６２６７）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼプレプロタンパク質（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６９４４）に類似のタンパク質、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２２５ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７４７４）、推定ＡＤＡＭ偽遺伝子（染色体４、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９９７５）、ＡＤＡＭ３Ａ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５２００）、ＡＤＡＭ１ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００３９１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１０）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１１）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２２０）、ネプリライシン（ＭＥＲ００１０５０）、エンドセリン変換酵素１（ＭＥＲ００１０５７）、エンドセリン変換酵素２（ＭＥＲ００４７７６）、ＤＩＮＥペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１９７）、ネプリライシン－２（ＭＥＲ０１３４０６）、Ｋｅｌｌ血液型タンパク質（ＭＥＲ００１０５４）、ＰＨＥＸペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６２）、ｉ－ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２４６）、ｉ－ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００５７５５）、パラプレギン（ＭＥＲ００４４５４）、Ａｆｇ３ 様タンパク質２（ＭＥＲ００５４９６）、Ａｆｇ３ 様タンパク質１Ａ（ＭＥＲ０１４３０６）、パパリシン－１（ＭＥＲ００２２１７）、パパリシン－２（ＭＥＲ０１４５２１）、ファルネシル化タンパク質変換酵素１（ＭＥＲ００２６４６）、メタロプロテアーゼ関連タンパク質－１（ＭＥＲ０３０８７３）、アミノペプチダーゼＡＭＺ２（ＭＥＲ０１１９０７）、アミノペプチダーゼＡＭＺ１（ＭＥＲ０５８２４２）、カルボキシペプチダーゼＡ１（ＭＥＲ００１１９０）、カルボキシペプチダーゼＡ２（ＭＥＲ００１６０８）、カルボキシペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１１９４）、カルボキシペプチダーゼＮ（ＭＥＲ００１１９８）、カルボキシペプチダーゼＥ（ＭＥＲ００１１９９）、カルボキシペプチダーゼＭ（ＭＥＲ００１２０５）、カルボキシペプチダーゼＵ（ＭＥＲ００１１９３）、カルボキシペプチダーゼＡ３（ＭＥＲ００１１８７）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００３７８１）、メタロカルボキシペプチダーゼＺ（ＭＥＲ００３４２８）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００４９６３）、カルボキシペプチダーゼＡ４（ＭＥＲ０１３４２１）、カルボキシペプチダーゼＡ６（ＭＥＲ０１３４５６）、カルボキシペプチダーゼＡ５（ＭＥＲ０１７１２１）、メタロカルボキシペプチダーゼＯ（ＭＥＲ０１６０４４）、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ様タンパク質５（ＭＥＲ０３３１７４）、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ３（ＭＥＲ０３３１７６）、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ６（ＭＥＲ０３３１７８）、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ１（ＭＥＲ０３３１７９）、サイトゾル カルボキシペプチダーゼ２（ＭＥＲ０３７７１３）、メタロカルボキシペプチダーゼＤ非ペプチダーゼユニット（ＭＥＲ００４９６４）、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質１（ＭＥＲ００３８８９）、カルボキシペプチダーゼ様タンパク質Ｘ１（ＭＥＲ０１３４０４）、カルボキシペプチダーゼ様タンパク質Ｘ２（ＭＥＲ０７８７６４）、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６９５２）、ファミリーＭ１４非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９５３０）、インスリシン（ＭＥＲ００１２１４）、ミトコンドリア プロセッシングペプチダーゼベータサブユニット（ＭＥＲ００４４９７）、ナルディライジン（ＭＥＲ００３８８３）、ユーピトリリジン（ＭＥＲ００４８７７）、ミトコンドリア プロセッシングペプチダーゼ非ペプチダーゼアルファサブユニット（ＭＥＲ００１４１３）、ユビキノール－シトクロムｃレダクターゼコア タンパク質Ｉ（ＭＥＲ００３５４３）、ユビキノール － シトクロムｃレダクターゼコア タンパク質ＩＩ（ＭＥＲ００３５４４）、ユビキノール － シトクロムｃレダクターゼコアタンパク質ドメイン ２（ＭＥＲ０４３９９８）、インスリシンユニット２（ＭＥＲ０４６８２１）、ナルディライジンユニット２（ＭＥＲ０４６８７４）、インスリシンユニット３（ＭＥＲ０７８７５３）、ミトコンドリアプロセッシングペプチダーゼサブユニットアルファ ユニット２（ＭＥＲ１２４４８９）、ナルディライジンユニット３（ＭＥＲ１４２８５６）、ＬＯＣ１３３０８３ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２１８７６）、サブファミリーＭ１６Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８７５７）、ロイシルアミノペプチダーゼ（動物）（ＭＥＲ００３１００）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０４０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９１９）、ロイシルアミノペプチダーゼ－１（線虫型）（ＭＥＲ０１３４１６）、メチオニルアミノペプチダーゼ１（ＭＥＲ００１３４２）、メチオニルアミノペプチダーゼ２（ＭＥＲ００１７２８）、アミノペプチダーゼＰ２（ＭＥＲ００４４９８）、Ｘａａ－Ｐｒｏ ジペプチダーゼ（真核生物）（ＭＥＲ００１２４８）、アミノペプチダーゼＰ１（ＭＥＲ００４３２１）、ミトコンドリア中間体切断ペプチダーゼ５５ｋＤａ（ＭＥＲ０１３４６３）、ミトコンドリアメチオニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０２０ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１０９７２）、増殖関連タンパク質１（ＭＥＲ００５４９７）、クロマチン特異的転写伸長因子１４０ ｋＤａサブユニット（ＭＥＲ０２６４９５）、増殖関連タンパク質１様（ホモサピエンス染色体Ｘ）（ＭＥＲ０２９９８３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２２６ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０５６２６２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２２７ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７２９９）、サブファミリーＭ２４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７９８９３）、アスパルチル アミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３７３）、Ｇｌｙ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０３３１８２）、カルノシンジペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１４５５１）、カルノシンジペプチダーゼＩ（ＭＥＲ０１５１４２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６１タンパク質（ＭＥＲ０２１８７３）、アミノアシラーゼ（ＭＥＲ００１２７１）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００２１０４）、ＮＡＡＬＡＤＡＳＥ Ｌペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２３９）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００５２３８）、血漿グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２４４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５０９１）、Ｆｘｎａペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９６５）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＭＥＲ００２１０５）、トランスフェリン受容体 ２タンパク質（ＭＥＲ００５１５２）、
グルタミニルシクリス（ＭＥＲ０１５０９５）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ホモサピエンス）型非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０２６９７１）、ニカリン（ＭＥＲ０４４６２７）、膜ジペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２６０）、膜結合ジペプチダーゼ－２（ＭＥＲ０１３４９９）、膜結合ジペプチダーゼ－３（ＭＥＲ０１３４９６）、ジヒドロオロターゼ（ＭＥＲ００５７６７）、ジヒドロピリミジナーゼ（ＭＥＲ０３３２６６）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－１（ＭＥＲ０３０１４３）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－２（ＭＥＲ０３０１５５）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－３（ＭＥＲ０３０１５１）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－４（ＭＥＲ０３０１４９）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－５（ＭＥＲ０３０１３６）、５７３０４５７Ｆ１１ＲＩＫ（ＭＥＲ０３３１８４）のような仮想タンパク質、１３０００１９ｊ０８ｒｉｋタンパク質（ＭＥＲ０３３１８６））、グアニンアミノヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３７７１４）、Ｋａｅ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１５７７）、ＯＳＧＥＰＬ１様タンパク質（ＭＥＲ０１３４９８）、Ｓ２Ｐペプチダーゼ（ＭＥＲ００４４５８）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４５）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４６）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１３７３２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ ２０１５５７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１８）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１９）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７５９３２）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９６６５）、Ｐｏｈ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０３８２）、Ｊａｂ１／ＭＰＮドメイン金属酵素（ＭＥＲ０２２０５７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８６５）、Ｂｒｃｃ３６ イソペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８９０）、ヒストンＨ２Ａ デユビキチン化酵素ＭＹＳＭ１（ＭＥＲ０２１８８７）、ＡＭＳＨ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１４６）、推定ペプチダーゼ（ホモサピエンス染色体２）（ＭＥＲ０２９９７０）Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６８タンパク質（ＭＥＲ０２１８８６）、ＣＯＰ９シグナルソームサブユニット６（ＭＥＲ０３０１３７）、２６Ｓプロテアソーム非ＡＴＰａｓｅ調節サブユニット７（ＭＥＲ０３０１３４）、真核翻訳開始因子３サブユニット５（ＭＥＲ０３０１３３）、ＩＦＰ３８ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３０１３２）、サブファミリーＭ６７Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１１８１）、サブファミリーＭ６７Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１１４４）、グランザイムＢ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０００１６８）、テストシン（ＭＥＲ００５２１２）、トリプターゼベータ（ＭＥＲ０００１３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００５５４４）、コリン（ＭＥＲ００５８８１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００６０３８）、ＤＥＳＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２９８）、トリプターゼガンマ １（ＭＥＲ０１１０３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ０１１０３８）、ヒアルロン酸結合ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６１２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン４（ＭＥＲ０１１１０４）、腸セリンペプチダーゼ（げっ歯類）（ＭＥＲ０１６１３０）、副腎分泌セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００３７３４）、トリプターゼデルタ １（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５９４８）、マトリプターゼ－３（ＭＥＲ０２９９０２）、マラプシン（ＭＥＲ００６１１９）、トリプターゼ－６（ＭＥＲ００６１１８）、オボキマーゼ－１ドメイン１（ＭＥＲ０９９１８２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン３（ＭＥＲ００５９２６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００００６４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５４）、ＴＭＰＲＳＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４２２６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６２８４８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２０４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９８０）、カチオン性トリプシン（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００００２０）、エラスターゼ－２（ＭＥＲ０００１１８）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ－３（ＭＥＲ０３１９６８）、カテプシンＧ（ＭＥＲ００００８２）、ミエロブラスチン（ＭＥＲ０００１７０）、グランザイムＡ（ＭＥＲ００１３７９）、グランザイムＭ（ＭＥＲ００１５４１）、キマーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０００１２３）、トリプターゼアルファ（ＭＥＲ０００１３５）、グランザイムＫ（ＭＥＲ００１９３６）、グランザイムＨ（ＭＥＲ０００１６６）、キモトリプシンＢ（ＭＥＲ０００００１）、エラスターゼ－１（ＭＥＲ００３７３３）、膵臓エンドペプチダーゼＥ（ＭＥＲ０００１４９）、膵臓エラスターゼＩＩ（ＭＥＲ０００１４６）、エンテロペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６８）、キモトリプシンＣ（ＭＥＲ０００７６１）、プロスタシン（ＭＥＲ００２４６０）、カリクレイン１（ＭＥＲ００００９３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００００９４）、カリクレイン関連ペプチダーゼ３（ＭＥＲ０００１１５）、メソトリプシン（ＭＥＲ００００２２）、補体成分Ｃ１ｒ様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５２）、補体因子Ｄ（ＭＥＲ０００１３０）、補体成分活性化Ｃ１ｒ（ＭＥＲ０００２３８）、補体成分活性化Ｃ１ｓ（ＭＥＲ０００２３９）、補体成分Ｃ２ａ（ＭＥＲ０００２３１）、補体因子Ｂ（ＭＥＲ０００２２９）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ１（ＭＥＲ０００２４４）、補体因子Ｉ（ＭＥＲ０００２２８）、膵臓エンドペプチダーゼＥ フォーム Ｂ（ＭＥＲ０００１５０）、膵臓エラスターゼＩＩＢ（ＭＥＲ０００１４７）、凝固因子ＸＩＩａ（ＭＥＲ０００１８７）、血漿カリクレイン（ＭＥＲ０００２０３）凝固因子Ｘｉａ（ＭＥＲ０００２１０）、凝固因子ＩＸａ（ＭＥＲ０００２１６）、凝固因子Ｖｉｌａ（ＭＥＲ０００２１５）、凝固因子Ｘａ（ＭＥＲ０００２１２）、トロンビン（ＭＥＲ０００１８８）、プロテインＣ（活性化）（ＭＥＲ０００２２２）、アクロシン（ＭＥＲ００００７８）、ヘプシン（ＭＥＲ０００１５６）、肝細胞増殖因子活性化因子（ＭＥＲ０００１８６）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ２（ＭＥＲ００２７５８）、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子（ＭＥＲ０００１９５）、ｔ－プラスミノーゲン活性化因子（ＭＥＲ０００１９２）、プラスミン（ＭＥＲ０００１７５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ６（ＭＥＲ００２５８０）、ニューロトリプシン（ＭＥＲ００４１７１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００５４００）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００３６４５）、エピセリアシン（ＭＥＲ００３７３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００５２６６）、プロセミン（ＭＥＲ００４２１４）、キモパシン（ＭＥＲ００１５０３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００４８６１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ２１６１４２）、トリプシン－２Ａ型（ＭＥＲ００００２１）、ＨｔｒＡ１ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００２５７７）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ２０８４１３）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４０９３）、ＨｔｒＡ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７９５）、ＨｔｒＡ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５１）、Ｔｙｓｎｄ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５０４６１）、ＴＭＰＲＳＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０８５）、ＨＡＴ様推定ペプチダーゼ２（ＭＥＲ０２１８８４）、トリプシンＣ（ＭＥＲ０２１８９８）、カリクレイン関連ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２００１）、マトリプターゼ（ＭＥＲ００３７３５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００５２６９）、カリクレイン関連ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００５２７０）、マトリプターゼ－２（ＭＥＲ００５２７８）、臍帯静脈ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５４２１）、ＬＣＬＰペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９００）、スピネシン（ＭＥＲ０１４３８５）、マラプシン－２（ＭＥＲ０２１９２９）、補体因子Ｄ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５６１６４）、オボキマーゼ－２（ＭＥＲ０２２４１０）、ＨＡＴ様４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４４５８９）、オボキマーゼ１ドメイン１（ＭＥＲ０２２４１２）、表皮特異的ＳＰ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９００）、精巣セリンペプチダーゼ５（ＭＥＲ０２９９０１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２５８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００２８５）、ポリセラーゼ－ＩＡ ユニット１（ＭＥＲ０３０８７９）、ポリセラーゼ－ＩＡ ユニット２（ＭＥＲ０３０８８０）、精巣セリンペプチダーゼ２（ヒト型）（ＭＥＲ０３３１８７）、仮想アクロシン様ペプチダーゼ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３３２５３）、ＨＡＴ様５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２８２１５）、ポリセラーゼ３ ユニット１（ＭＥＲ０６１７６３）、ポリセラーゼ３ ユニット２（ＭＥＲ０６１７４８）、トリプトファン／セリンプロテアーゼ（ＭＥＲ０５６２６３）、ポリセラーゼ２ ユニット１（ＭＥＲ０６１７７７）に類似のペプチダーゼ、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１９３０）、ＨＡＴ様２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０９９１８４）、ｈＣＧ２０４１４５２様タンパク質（ＭＥＲ０９９１７２）、ｈＣＧ２２０６７（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０９９１６９）、脳レスキュー因子－１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０９８８７３）、ｈＣＧ２０４１１０８（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０９９１７３）、ポリセラーゼ－２ ユニット２（ＭＥＲ０６１７６０）、ポリセラーゼ－２ ユニット３（ＭＥＲ０６５６９４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２０１（ペプチダーゼホモログ）ＭＥＲ０９９１７５、分泌型トリプシン様セリンペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３００００）、ポリセラーゼ１Ａ ユニット３（ＭＥＲ０２９８８０）、アズロシジン（ＭＥＲ０００１１９）、ハプトグロビン－１（ＭＥＲ０００２３３）、ハプトグロビン関連タンパク質（ＭＥＲ０００２３５）、マクロファージ刺激タンパク質（ＭＥＲ００１５４６）、肝細胞増殖因子（ＭＥＲ０００１８５）、タンパク質Ｚ（ＭＥＲ０００２２７）、ＴＥＳＰ１タンパク質（ＭＥＲ０４７２１４）、ＬＯＣ１３６２４２タンパク質（ＭＥＲ０１６１３２）、血漿カリクレイン様タンパク質４（ＭＥＲ０１６３４６）、ＰＲＳＳ３５タンパク質（ＭＥＲ０１６３５０）、ＤＫＦＺｐ５８６Ｈ２１２３様タンパク質（ＭＥＲ０６６４７４）、アポリポタンパク質（ＭＥＲ０００１８３）、ｐｓｉ－ＫＬＫ１偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３３２８７）、トリプターゼ偽遺伝子Ｉ（ＭＥＲ０１５０７７）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩ（ＭＥＲ０１５０７８）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩＩ（ＭＥＲ０１５０７９）、サブファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６９８２）、サブファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６１４８）、アミドホスホリボシルトランスフェラーゼ前駆体（ＭＥＲ００３３１４）、グルタミン－フルクトース－６－リン酸トランスアミナーゼ１（ＭＥＲ００３３２２）、グルタミン：フルクトース－６－リン酸アミドトランスフェラーゼ（ＭＥＲ０１２１５８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１９）、アスパラギンシンセターゼ（ＭＥＲ０３３２５４）、ファミリーＣ４４非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１５９２８６）、
ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２５）ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２６）、セセルニン１（ＭＥＲ０４５３７６）、セセルニン２（ＭＥＲ０６４５７３）、セセルニン３（ＭＥＲ０６４５８２）、酸性セラミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１００７９４）、Ｎ－アシルエタノールアミン酸アミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１４１６６７）、プロテアソーム触媒サブユニット１（ＭＥＲ０００５５６）、プロテアソーム触媒サブユニット２（ＭＥＲ００２６２５）、プロテアソーム触媒サブユニット３（ＭＥＲ００２１４９）、プロテアソーム触媒サブユニット１ｉ（ＭＥＲ０００５５２）、プロテアソーム触媒サブユニット２ｉ（ＭＥＲ００１５１５）、プロテアソーム触媒サブユニット３ｉ（ＭＥＲ０００５５５）、プロテアソーム触媒サブユニット５ｔ（ＭＥＲ０２６２０３）、プロテインセリンキナーゼｃ１７（ＭＥＲ０２６４９７）、プロテアソームサブユニットアルファ６（ＭＥＲ０００５５７）、プロテアソームサブユニットアルファ２（ＭＥＲ０００５５０）、プロテアソームサブユニットアルファ４（ＭＥＲ０００５５４）、プロテアソームサブユニットアルファ７（ＭＥＲ０３３２５０）、プロテアソームサブユニットアルファ５（ＭＥＲ０００５５８）、プロテアソームサブユニットアルファ１（ＭＥＲ０００５４９）、プロテアソームサブユニットアルファ３（ＭＥＲ０００５５３）、プロテアソームサブユニットＸＡＰＣ７（ＭＥＲ００４３７２）、プロテアソームサブユニットベータ ３（ＭＥＲ００１７１０）、プロテアソームサブユニットベータ ２（ＭＥＲ００２６７６）、プロテアソームサブユニットベータ １（ＭＥＲ０００５５１）、プロテアソームサブユニットベータ ４（ＭＥＲ００１７１１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３０ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７３２９）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３１偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７１７２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３２偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７３１６）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ－１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ２（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１ 前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０４）に類似、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１ 前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）、ガンマ－グルタミル トランスペプチダーゼホモログ（第２染色体、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２４１）、ポリシスチン－１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）、多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）、ガンマ－グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）、グアニン５″一リン酸シンセターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）、カルバモイルリン酸シンターゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０７８６４０）、ジヒドロオロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０６０６４７）、ＤＪ－１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）、ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０４２８２７）、Ｆ１１３４２８３タンパク質（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４４５５３）、非ペプチダーゼホモログ２１番染色体オープンリーディングフレーム３３（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１６００９４）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）、ムチン様ホルモン受容体様２を含む ＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２３０）、ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）、ムチン様ホルモン受容体様３（ＭＥＲ０３７２８８）を含む ＥＧＦ様モジュール、ムチン様ホルモン受容体様１（ＭＥＲ０３７２７８）を含む ＥＧＦ様モジュール、ムチン様ホルモン受容体様４（ＭＥＲ０３７２９４）を含むＥＧＦ様モジュール、カドヘリンＥＧＦ ＬＡＧ セブンパス Ｇ 型受容体 ２ 前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（ハツカネズミ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）、ＧＰＲ５６（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン－１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンフラミンゴ ２（ＭＥＲ１２４２３９）、ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）、Ｇタンパク質共役受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）、７回膜貫通ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）、Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）、ＧＰＲ１２６ 血管誘導性 Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１４００１５）、ＧＰＲ１２５（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）、ＧＰＲ１１６（ホモサピエンス）型 Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）、ＧＰＲ１２８（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）、ＧＰＲ１３３（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）、ＧＰＲ１１０ Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤 ２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自動処理タンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ 自動処理タンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断型ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質コンバターゼ９（ＭＥＲ０２２４１６）、サイト １ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質コンバターゼ１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質コンバターゼ２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質コンバターゼ４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４ プロタンパク質コンバターゼ（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質コンバターゼ５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質コンバターゼ７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジル－ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジルペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジル－ペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシル－ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジル－ペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジル－ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮想エステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ｂａｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮想タンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮想タンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮想タンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ染色体２０ オープンリーディングフレーム １３５（ＭＥＲ０３７８４５）に類似のタンパク質、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、サイログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリジン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリジン４、Ｘ連鎖（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリジン４、Ｙ連鎖（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリジン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリジン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０２９９９７）、
サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、仮想タンパク質ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）、ＣＧＩ－５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ－Ｂｅｕｒｅｎ症候群の重要領域タンパク質２１エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１２）、仮想タンパク質９２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ－１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ２（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、 ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０４）に類似、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）。ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）。ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼホモログ（第２染色体、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２４１）。ポリシスチン－１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）。多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）。ガンマ－グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）。グアニン５″一リン酸シンテターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）。カルバモイルリン酸シンターゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０７８６４０）。ジヒドロオロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０６０６４７）。ＤＪ－１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）。ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０４２８２７）。Ｆ１１３４２８３タンパク質（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４４５５３）。非ペプチダーゼホモログ染色体２１オープンリーディングフレーム３３（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１６００９４）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）。ムチン様ホルモン受容体様２を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２３０）。ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）。ムチン様ホルモン受容体様３を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２８８）。ムチン様ホルモン受容体様１を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２７８）。ムチン様ホルモン受容体様４を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２９４）。カドヘリンＥＧＦ ＬＡＧの７回膜貫通Ｇ型受容体２前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（ハツカネズミ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）。ＧＰＲ５６（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン－１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンＦｌａｍｉｎｇｏ ２（ＭＥＲ１２４２３９）。ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）。Ｇタンパク質共役受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）。７回膜貫通ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）。Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）。ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１４００１５）。ＧＰＲ１２５（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）。ＧＰＲ１１６（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）。ＧＰＲ１２８（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）。ＧＰＲ１３３（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）ＧＰＲ１１０ Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自動プロセシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ自動プロセシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質コンバターゼ９（ＭＥＲ０２２４１６）、サイト１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質コンバターゼ１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質コンバターゼ２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質コンバターゼ４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質コンバターゼ（ＭＥＲ０００３８３）、プロプロテインコンバターゼ５（ＭＥＲ００２５７８）、プロプロテインコンバターゼ７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジルペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシルペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジルペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジルペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮想エステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、プロテインバット５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮説タンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮説タンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮説タンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログ ＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログ ＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、ハツカネズミ染色体２０オープンリーディングフレーム１３５に類似したタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、チログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリジン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリギン４、Ｘ連鎖（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリギン４、Ｙ連鎖（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリギン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリギン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成性カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０２９９９７）、サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、仮想タンパク質 ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）に類似、ＣＧＩ－５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ウィリアムズ・ビューレン症候群臨界領域タンパク質２１エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１２）、仮説タンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）。

プロテアーゼ酵素活性は調節することができる。例えば、特定のプロテアーゼは、特定の薬剤（例、プロテアーゼ、例えば特定の小分子阻害剤などに結合する）の存在又は非存在により不活化され得る。そのようなプロテアーゼは、「抑制性プロテアーゼ」として言及することができる。特定のプロテアーゼについての例示的な阻害剤を、表４Ｂ中に列挙する。例えば、ＮＳ３プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤、限定されないが、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルを含む、により抑制することができる。別の実施例では、プロテアーゼ活性は、プロテアーゼ自体の発現を調節することを通じて調節することができ、例えば、誘導性プロモーター系（例、Ｔｅｔ Ｏｎ／Ｏｆｆ系）又は細胞特異的プロモーター（異種プロテアーゼを発現するために使用することができるプロモーターは、本明細書中の項に「プロモーター」と題してより詳細に記載されている）を使用して、プロテアーゼを発現するように細胞を操作することなどである。プロテアーゼはまた、デグロン、例えば本明細書中に記載されるデグロンのいずれかなどを含むことができ、本明細書中に記載されるデグロン系のいずれかを使用して調節することができる。

プロテアーゼ酵素活性はまた、特定のプロテアーゼ切断部位の選択を通じて調節することができる。例えば、プロテアーゼ切断部位が選択及び／又は操作され得るが、配列が、所望のプロテアーゼによる所望の切断速度、例えば所望のプロテアーゼにより天然に切断された基質の内因性配列に対する低下した切断速度などを示すようにする。別の例として、プロテアーゼ切断部位を選択及び／又は操作して、配列が、細胞状態特異的な様式において所望の切断速度を示すようにする。例えば、様々な細胞状態（例、細胞シグナル伝達後、例えば免疫細胞活性化など）は、特定のプロテアーゼの発現及び／又は局在に影響し得る。例証的な例として、ＡＤＡＭ１７タンパク質レベル及び局在化は、シグナル伝達により、例えばプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）シグナル伝達経路（例、ＰＫＣアクチベーターホルボール－１２－ミリステート－１３－アセテート（Ｐｈｏｒｂｏｌ－１２－ｍｙｒｉｓｔａｔ－１３－ａｃｅｔａｔ）［ＰＭＡ］による活性化など）を通じて影響されることが公知である。したがって、プロテアーゼ切断部位が選択及び／又は操作され得るが、プロテアーゼ切断部位の切断及びその後のエフェクター分子の放出が、所望のように、特定の細胞状態のプロテアーゼ特性（例、発現及び／又は局在化）に依存して増加又は減少するようにする。別の例として、プロテアーゼ切断部位（特に、特定の膜係留ドメインとの組み合わせにおいて）は、キメラタンパク質の最適なタンパク質発現のために選択及び／又は操作することができる。

細胞膜係留ドメイン
本明細書中で提供される膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞膜係留ドメイン（式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中で「ＭＴ」として言及される）を含む。一般的に、細胞膜係留ドメインは、キメラタンパク質を発現する細胞の細胞膜に局在化される（例、その中に挿入される）、又はそうでなければ、それと会合するようにキメラタンパク質を方向付けることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであり得る。細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメインであり得る。細胞膜係留ドメインは、膜貫通ドメインであり得る。細胞膜係留ドメインは、内因性タンパク質ドメイン（例、膜貫通ドメイン）であり得る。細胞膜係留ドメインは、Ｉ型、ＩＩ型、又はＩＩＩ型膜貫通タンパク質に由来し得る。細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み得るが、ここで、翻訳後修飾タグによって、細胞膜との会合が可能になる。翻訳後修飾タグの例は、限定されないが、脂質アンカードメイン（例、ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、又はパルミトイル化タグ）を含む。細胞膜係留ドメインの例は、限定されないが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する膜貫通‐細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインを含む。細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体又はその細胞膜結合部分を含み得る。

一部の実施形態では、細胞膜係留ドメインは、Ｂ－７１ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＬＰＳＷＡＩＴＬＩＳＶＮＧＩＦＶＩＣＣＬＴＹＣＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰＶ（配列番号２０４）の配列を含む。

一部の実施形態では、細胞膜係留ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインを含む。任意の適切なＣＤ８ポリペプチドが使用され得る。例示的なＣＤ８ポリペプチドは、限定されないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５及びＡＡＡ９２５３３．１を含む。ＣＤ８膜貫通ドメインの例は、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号２０５）、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲ（配列番号２０６）、及びＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号２０７）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号２０５）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲ（配列番号２０６）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号２０７）を含む。一部の実施形態では、細胞膜係留ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジ及び膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８ヒンジは、配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＬＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号２０８）を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８ヒンジは、配列ＡＡＡＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号２０９）を含む。

一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、細胞膜係留ドメインは、以下のいずれかである：（１）存在する場合、プロテアーゼ切断部位のＣ末端及び任意の細胞内ドメインのＮ末端（言い換えれば、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位と、存在する場合、細胞内ドメインの間にある）、又は（２）存在する場合、プロテアーゼ切断部位のＮ末端と任意の細胞内ドメインのＣ末端（また、プロテアーゼ切断部位と、存在する場合、ドメイン配向が反転した細胞内ドメインの間）。キメラタンパク質と会合されたデグロンを特徴とする実施形態では、デグロンドメインは、具体的には、細胞膜係留に対して（言い換えれば、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位とデグロンの間にある）、末端細胞質指向ドメインである。細胞膜係留ドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、プロテアーゼ切断部位に接続することができる。細胞膜係留ドメインは、存在する場合、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又は細胞内ドメインの一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞内ドメインに接続することができる。細胞膜係留ドメインは、存在する場合、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はデグロンの一部とは考えられないポリペプチド配列により、デグロンに接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。

一般的に、細胞膜係留ドメインは、分泌されたエフェクター分子及びプロテアーゼ切断部位が、細胞膜中への挿入又はそれとの会合の後に細胞外に曝露されるように配向され、プロテアーゼ切断部位は、そのそれぞれのプロテアーゼにより切断され、エフェクター分子を細胞外空間中に放出すること（「分泌すること」）が可能であるようにする。

デグロン系及びドメイン
一部の実施形態では、本明細書中に記載されるタンパク質のいずれかは、限定されないが、プロテアーゼ、転写因子、プロモーター系（例、ＡＣＰ）のプロモーターもしくは構成要素、及び／又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含む、デグロンドメインを含み得る。一般的に、デグロンドメインは、調節された分解、例えばユビキチン媒介性経路を通じた調節された分解などを方向付けることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであり得る。免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）の存在において、デグロンドメインは、ユビキチン媒介性デグロン融合タンパク質の分解を方向付ける。

デグロンドメインは、限定されないが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫｌａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、ならびにＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能であるその断片を含む、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）に応答してＣＲＢＮを結合することが可能なセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインであり得る。ＣＲＢＮポリペプチド基体ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物、例えばＦＮＶＬＭＶＨＫＲＳＨＴＧＥＲＰＬＱＣＥＩＣＧＦＴＣＲＱＫＧＮＬＬＲＨＩＫＬＨＴＧＥＫＰＦＫＣＨＬＣＮＹＡＣＱＲＲＤＡＬ（配列番号１７５）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物などであり得る。Ｄｅｇｒｏｎドメイン、及び、特にＣＲＢＮデグロン系は、国際出願公開第 ＷＯ２０１９／０８９５９２Ａｌ号においてより詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。デグロンドメインの他の例は、限定されないが、ＨＣＶＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー；配列番号１６１）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２－４０８；配列番号１６２）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０－２９５；配列番号１６３）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２、例、配列番号１６４）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８－１７０２の四つのコピー；配列番号１６５）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２；配列番号１６６）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９－９３の三つのコピー；配列番号１６７）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６－１４２；配列番号１６８）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２－４６１、配列番号１６９）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２－４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳリン酸依存性デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、又はＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスを含む。

調節された分解は、薬物誘導性であり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、小分子化合物であり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、「免疫調節薬物」（ＩＭｉＤ）を含み得る。一般的に、本明細書中で使用されるように、ＩＭｉＤは、イミド基を含む小分子免疫調節薬物のクラスを指す。セレブロン（ＣＲＢＮ）は、ＩＭｉＤｓの公知の標的であり、ＣＲＢＮ又はＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインへのＩＭｉＤの結合によって、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の基質特異性が変化して、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインを有するタンパク質（例、本明細書中に記載される分泌性エフェクター分子又は目的の他のタンパク質）の分解に導く。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインを有するデグロンドメインについては、イミド含有ＩＭｉＤの例は、限定されないが、サリドマイド、レナリドミド、又はポマリドマイドを含む。ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物であり得る。

本明細書中に記載されるキメラタンパク質は、デグロンドメイン（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質については、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ又はＤ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ中で「Ｄ」として言及される）を含むことができる。ＩＭｉＤの非存在において、キメラタンパク質のデグロン／ユビキチン媒介性分解は生じない。細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられ、エフェクター分子が細胞外空間中に放出される（「分泌される」）ようにする。免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）の存在において、デグロンドメインは、キメラタンパク質のユビキチン媒介性分解を方向付け、エフェクター分子の分泌が低下又は排除されるようにする。一般的に、デグロンドメインに融合された膜切断可能なキメラタンパク質については、デグロンドメインは、具体的には、細胞膜係留ドメイン、例えば、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中の最もＣ末端のドメイン又は式Ｄ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ中の最もＮ末端のドメインに対して、末端細胞質指向ドメインである。デグロンドメインは、ポリペプチドリンカーにより細胞膜係留ドメイン、即ち、一般的には細胞膜係留ドメイン又はデグロンドメインの一部とはみなされないポリペプチド配列に接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。一般的に、デグロンは、細胞膜係留ドメインに関連して配向され、デグロンは、細胞膜への局在化後にサイトゾルに曝露され、デグロンドメインが分解（例、サイトゾル及びサイトゾルへの曝露）を媒介することが可能であり、ユビキチン媒介性分解を媒介することが可能であるようにする。

デグロン融合タンパク質については、デグロンドメインは、目的のタンパク質のＮ末端又はＣ末端、例えば、エフェクター分子であることができる。デグロンドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に目的のタンパク質又はデグロンドメインの一部とは考えられないポリペプチド配列により、目的のタンパク質に接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。ポリペプチドリンカーは、切断可能、例えば、本明細書中に記載されるプロテアーゼ切断部位のいずれかであり得る。

ホーミング分子
「腫瘍微小環境」は、腫瘍が存在する細胞環境であって、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症性細胞、リンパ球、シグナル伝達分子、及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を含む、（例、Ｐａｔｔａｂｉｒａｍａｎ，Ｄ．Ｒ．＆ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．Ａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １３，４９７－５１２ （２０１４）；Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２５，５５９１－５５９６，２０１２；及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １０１（４），８０５－１５，２００７を参照のこと）。

一部の実施形態では、操作された核酸は、少なくとも一つのホーミング分子を産生するように構成される。例えば、分泌エフェクター分子を含む、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質において、分泌エフェクター分子は、ホーミング分子であり得る。「ホーミング」は、標的部位（例、細胞、組織（例、腫瘍）、又は器官）への細胞の能動的ナビゲーション（遊走）を指す。「ホーミング分子」は、細胞を標的部位に向かわせる分子を指す。一部の実施形態では、ホーミング分子は、標的部位への、操作された細胞の相互作用を認識及び／又は開始するように機能する。ホーミング分子の非限定的な例は、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＦＰＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ６Ｒ、ＣＸＣＲ１、ＣＳＣＲ７、及びＰＤＧＦＲを含む。

一部の実施形態では、ホーミング分子は、ケモカイン受容体（ケモカインに結合する細胞表面分子）である。ケモカインは、細胞により分泌される小さなサイトカイン又はシグナル伝達タンパク質であり、それらは、細胞中で定向性の走化性を誘導することができる。ケモカインは、四つの主なサブファミリー中に分類することができる：ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３Ｃ、及びＸＣは、それらの全てが、標的細胞の表面上に位置するケモカイン受容体に選択的に結合することにより生物学的効果を発揮する。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＣＸＣＲ４、間質細胞由来因子１（また、ＳＤＦ１、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１２、及びＣＸＣＬ１２として公知である）発現細胞、組織、又は腫瘍に向かうケモカイン勾配に沿って、操作された細胞がホーミングすることを可能にするケモカイン受容体を産生するように構成される。本開示の操作された核酸によりコードされ得るケモカイン受容体の非限定的な例は、以下を含む：ＣＸＣケモカイン受容体（例、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、及びＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、及びＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例、ＣＸ３ＣＬ１に結合するＣＸ３ＣＲ１）、及びＸＣケモカイン受容体（例、ＸＣＲ１）。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｇタンパク質連結膜貫通受容体、又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（限定されないが、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂを含む）のメンバーである。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＣＸＣＬ８，ＣＸＣＬ９、及び／又はＣＸＣＬ１０（Ｔ細胞動員を促進する）、ＣＣＬ３及び／又はＣＸＣＬ５，ＣＣＬ２１（Ｔｈ１動員及び極性化）を産生するように構成される。

一部の実施形態では、操作された核酸は、Ｎ－ホルミル化含有オリゴペプチド（限定されないが、ＦＰＲ２及びＦＰＲＬ１を含む）を検出するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を産生するように構成されている。

一部の実施形態では、操作された核酸は、インターロイキン（限定されないが、ＩＬ６Ｒを含む）を検出する受容体を産生するように構成されている。

一部の実施形態では、操作された核酸は、他の細胞、組織、又は腫瘍から分泌された成長因子を検出する受容体（限定されないが、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲを含み、ならびにＶＥＧＦファミリーの受容体、限定されないが、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄを含む）を産生するように構成されている。

一部の実施形態では、ホーミング分子はインテグリンである。インテグリンは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）接着を促進する膜貫通型受容体である。インテグリンは、二つのサブユニット：α（アルファ）及びβ（ベータ）を有する必須のヘテロ二量体である。インテグリンのαサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡ６、ＩＧＴＡ７、ＩＴＧＡ８、ＩＴＧＡ９、ＩＧＴＡ１０、ＩＧＴＡ１１、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡＸ。インテグリンのβサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８。操作された核酸は、インテグリンα及びβサブユニットの任意の組み合わせを産生するように構成され得る。

一部の実施形態では、ホーミング分子は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）である。ＭＭＰは、内皮細胞壁の基礎となる基底膜の成分を切断する酵素である。ＭＭＰの非限定的な例は、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰを含む。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＭＭＰを阻害する分子（例、タンパク質）の阻害剤を産生するように構成される。例えば、操作された核酸は、膜１型ＭＭＰ（ＭＴ１－ＭＭＰ）の阻害剤（例、ＲＮＡｉ分子）又はＴＩＭＰメタロペプチダーゼ阻害剤１（ＴＩＭＰ－１）を発現するように構成され得る。

一部の実施形態では、ホーミング分子は、例えば、標的組織の内皮上のセレクチンに結合するリガンド（例、造血細胞 Ｅ－／Ｌ－セレクチンリガンド（ＨＣＥＬＬ）、Ｄｙｋｓｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１６ Ｏｃｔ；３４（１０）：２５０１－２５１１）である。

用語「ホーミング分子」はまた、細胞のホーミングを改善／増強する分子の産生を調節する転写因子を包含する。

一部の実施形態では、ホーミング分子は、抗体、例えば抗インテグリンアルファ４、ベータ７、又は抗ＭＡｄＣＡＭなどを含む。

操作された核酸
本明細書中で提供されるのは、本開示の少なくとも一つのキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする、操作された核酸である。本明細書中で提供されるのは、二つ以上のキメラタンパク質をコードする、操作された核酸である。

本明細書中に記載される特定の実施形態では、操作された核酸は、プロモーターとＮ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットをコードし、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する。Ｓは、分泌性エフェクター分子を指す。Ｃはプロテアーゼ切断部位を指す。ＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。このプロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するよう構成される。

本明細書中に記載される特定の実施形態では、操作された核酸は、プロモーター、及び目的のタンパク質（例、本明細書中に記載されるエフェクター分子のいずれか）を有する膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列を含む発現カセットをコードする。このプロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、膜切断可能なキメラタンパク質は、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている。

「操作された核酸」は、自然において生じない核酸である。しかし、操作された核酸は、全体として非天然である一方で、それは、天然において生じるヌクレオチド配列を含み得ることを理解すべきである。一部の実施形態では、操作された核酸は、異なる生物からの（例、異なる種からの）ヌクレオチド配列を含む。例えば、一部の実施形態では、操作された核酸は、マウスヌクレオチド配列、細菌ヌクレオチド配列、ヒトヌクレオチド配列、及び／又はウイルスヌクレオチド配列を含む。用語「操作された核酸」は、組換え核酸及び合成核酸を含む。「組換え核酸」は、核酸分子を連結することにより構築され、一部の実施形態では、生細胞中で複製することができる分子を指す。「合成核酸」は、増幅される、又は化学的に、もしくは他の手段により合成される分子を指す。合成核酸は、化学的に修飾された、又は他の方法で修飾されたものを含むが、しかし、天然核酸分子と塩基対合することができる。修飾は、限定されないが、一つ又は複数の修飾されたヌクレオチド間連結及び非天然核酸を含む。修飾は、米国特許第６，６７３，６１１号及び米国特許出願公開２００４／００１９００１においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、それらの全体において参照により組み入れられる。修飾されたヌクレオチド間連結は、ホスホロジチオエート又はホスホロチオエート連結であり得る。非天然核酸は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ又は「モルホリノ」）、及びトレオース核酸（ＴＮＡ）であり得る。非天然核酸は、国際出願ＷＯ １９９８／０３９３５２、米国出願公開 第２０１３／０１５６８４９号、及び米国特許第６，６７０，４６１号；第５，５３９，０８２号；第５，１８５，４４４号においてさらに詳細に記載されており、各々が、それらの全体において参照により本明細書中に組み入れられる。組換え核酸及び合成核酸はまた、前述のいずれかの複製から起因する分子を含む。本開示の操作された核酸は、単一の分子（例、同じプラスミド又は他のベクター中に含まれる）により、又は複数の異なる分子（例、複数の異なる独立して複製する分子）によりコードされ得る。操作された核酸は、単離された核酸であり得る。単離された核酸は、限定されないが、ｃＤＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡなど）、ｍＲＮＡポリヌクレオチド、環状プラスミド、直線状ＤＮＡ断片、ベクター、ミニサークル、ｓｓＤＮＡ、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、及び酵母人工染色体（ＹＡＣ）、及びオリゴヌクレオチドを含む。

本開示の操作された核酸は、標準的な分子生物学方法（例、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２０１２，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと）を使用して産生され得る。一部の実施形態では、操作された核酸構築物は、ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）クローニング（例、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，３４３－３４５，２００９；及びＧｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，９０１－９０３，２０１０を参照のこと。それらの各々が、参照により本明細書中に組み入れられる）を使用して産生される。ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）は、典型的には、単一チューブ反応において三つの酵素活性を使用する：５’エキソヌクレアーゼ、ＤＮＡポリメラーゼのγ伸長活性、及びＤＮＡリガーゼ活性。５’エキソヌクレアーゼ活性は、５’末端配列を噛み返し、アニーリングのために相補配列を露出させる。ポリメラーゼ活性は次に、アニーリングされた領域上のギャップを埋める。ＤＮＡリガーゼは次に、ニックを密閉し、ＤＮＡ断片を一緒に共有結合的に連結させる。隣接する断片の重複する配列は、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙにおいて使用されるものよりもずっと長く、従って、正しい組み立ての高いパーセンテージがもたらされる。一部の実施形態では、操作された核酸構築物は、ＩＮ－ＦＵＳＩＯＮ（登録商標）クローニング（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して産生される。

プロモーター
一般的に、本明細書中に記載される全ての実施形態では、一つ又は複数の膜切断可能なキメラタンパク質をコードする操作された核酸は、プロモーターを含む発現カセットをコードする。一部の実施形態では、操作された核酸（例、発現カセットを含む操作された核酸）は、少なくとも２つの異なるタンパク質をコードするヌクレオチド配列（例、外因性ポリヌクレオチド配列）に動作可能に連結されたプロモーターを含む。例えば、操作された核酸は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０の異なるタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターを含み得る。一部の実施形態では、操作された核酸は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、又はそれ以上の異なるタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターを含む。一部の実施形態では、操作された核酸（例、発現カセットを含む操作された核酸）は、少なくとも２つの膜切断可能なキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列（例、外因性ポリヌクレオチド配列）に動作可能に連結されたプロモーターを含む。例えば、操作された核酸は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０の膜切断可能なキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターを含み得る。一部の実施形態では、操作された核酸は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、又はそれ以上の膜切断可能なキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターを含む。

「プロモーター」は、核酸配列の残りの転写の開始及び速度が制御される核酸配列の制御領域を指す。プロモーターはまた、調節タンパク質及び分子、例えばＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子などが結合し得る小領域を含み得る。プロモーターは、構成的、誘導的、抑制的、組織特異的、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。プロモーターは、それが調節する核酸配列の発現を駆動する又は転写を駆動する。本明細書中では、プロモーターは、それが調節する核酸配列に関係して、正しい機能的位置及び配向にある場合、その配列の転写開始及び／又は発現を制御する（駆動する）ために、「動作可能に連結されている」と考えられる。

プロモーターは、所与の遺伝子又は配列のコードセグメントの上流に位置する５’非コード配列を単離することにより得られ得るように、遺伝子又は配列と天然に関連付けられるプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは「内因性」として言及され得る。一部の実施形態では、コード核酸配列は、組換え又は異種プロモーターの制御下に配置され得るが、それは、その天然の環境においてコード化された配列と通常は関連付けられないプロモーターを指す。そのようなプロモーターは、他の遺伝子のプロモーター；任意の他の細胞から単離されたプロモーター；ならびに「天然」ではない合成プロモーター又はエンハンサー、例えば、当技術分野において公知である遺伝子操作の方法を通じて発現を改変する異なる転写調節領域の異なるエレメント及び／又は変異を含むものなどを含み得る。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、配列は、組換えクローニング及び／又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含む核酸増幅技術を使用して産生され得る（例、米国特許第４，６８３，２０２号及び米国特許第５，９２８，９０６号を参照のこと）。

操作された核酸のプロモーターは、「誘導性プロモーター」であり得るが、それは、シグナルの存在において、シグナルにより影響される、又はシグナルにより接触される場合に、転写活性を調節する（例、開始又は活性化する）ことにより特徴付けられるプロモーターを指す。このシグナルは、誘導性プロモーターからの転写活性を調節する際に活性であるような方法において、誘導性プロモーターと接触する内因性又は通常は外因性の状態（例、光）、化合物（例、化学的又は非化学的化合物）、又はタンパク質（例、サイトカイン）であり得る。転写の活性化は、プロモーターに直接的に作用して転写を駆動すること、又はプロモーターが転写を駆動することを防止しているリプレッサーの不活化によりプロモーターに間接的に作用することを含み得る。逆に、転写の不活化は、転写を防止するためにプロモーターに直接的に作用すること、又は、次にプロモーターに作用するリプレッサーを活性化することによりプロモーターに間接的に作用することを含み得る。

プロモーターは、局所的な腫瘍状態（例、炎症又は低酸素）、あるいは、その状態又はシグナルの存在において、プロモーターからの転写が活性化、不活化、増加、又は減少する場合にはシグナルに「応答性」である又は「により調節」される。一部の実施形態では、プロモーターは応答エレメントを含む。「応答エレメント」は、プロモーター領域内のＤＮＡの短い配列であり、それは、プロモーターから遺伝子発現を調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）（調節する（ｒｅｇｕｌａｔｅ））特定の分子（例、転写因子）に結合する。本開示に従って使用され得る応答エレメントは、限定されないが、フロレチン調整可能制御要素（ＰＥＡＣＥ）、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、インターフェロンガンマ活性化配列（ＧＡＳ）（Ｄｅｃｋｅｒ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１９９７ Ｍａｒ；１７（３）：１２１－３４、参照により本明細書中に組み入れられる）、インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＲＥ）（Ｈａｎ，Ｋ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４ Ａｐｒ ９；２７９（１５）：１５６５２－６１、参照により本明細書中に組み入れられる）、ＮＦ－カッパＢ応答エレメント（Ｗａｎｇ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１２； ２（４）： ８２４－８３９、参照により本明細書中に組み入れられる）、及びＳＴＡＴ３応答エレメント（Ｚｈａｎｇ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｊ ｏｆ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９６； ２７１： ９５０３－９５０９、参照により本明細書中に組み入れられる）を含む。他の応答エレメントが本明細書中に包含される。応答エレメントはまた、その同族結合分子に対する応答エレメントの感受性を一般的に増加させるために、タンデムリピート（例、応答エレメントをコードする同じヌクレオチド配列の連続リピート）を含むことができる。タンデムリピートは、２×、３×、４×、５×などとラベル付けして、存在するリピートの数を表示することができる。

応答性プロモーター（また、「誘導性プロモーター」として言及される）の非限定的な例（例、ＴＧＦ－ベータ応答性プロモーター）を表５Ａ中に列挙し、それは、プロモーター及び転写因子の設計を示し、ならびに転写因子（ＴＦ）及び導入遺伝子転写（Ｔ）に向かうインデューサー分子の効果が示されている（Ｂ、結合；Ｄ、解離；ｎ．ｄ．、未決定）（Ａ、活性化；ＤＡ、非活性化；ＤＲ、抑制）（Ｈｏｒｎｅｒ，Ｍ．＆Ｗｅｂｅｒ，Ｗ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６（２０１２）２０７８４－２０９６ｍ、及びそれにおいて引用される参考文献を参照のこと）。誘導性プロモーターの成分の他の非限定的な例は、表５Ｂ中に提示されるものを含む。

（表５Ａ）応答性プロモーターの例

（表５Ｂ）誘導性プロモーターの例示的な構成要素

プロモーターの他の非限定的な例は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、伸長因子（ＥＦＳ）プロモーター、ＭＮＤプロモーター（骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサーを伴う修飾ＭｏＭｕＬＶ ＬＴＲのＵ３領域を含む合成プロモーター）、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、及びユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターを含む（表５Ｃを参照のこと）。

（表５Ｃ）例示的な構成的プロモーター

プロモーターは、組織特異的プロモーターであり得る。一般的に、組織特異的プロモーターは、核酸（例、キメラタンパク質、例えば式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする操作された核酸）の転写を方向付けて、発現が特定の細胞型、オルガネラ、又は組織に限定されるようにする。組織特異的プロモーターは、 限定されないが、 アルブミン（肝臓特異的、 Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８７））、 リンパ球特異的プロモーター（Ｃａｌａｍｅ ａｎｄ Ｅａｔｏｎ，１９８８）、Ｔ細胞受容体の特定のプロモーター（Ｗｉｎｏｔｏ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，（１９８９））、及びイムノグロブリン； Ｂａｎｅｒｊｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）； Ｑｕｅｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，１９８３）、ニューロン特異的プロモーター（例、神経フィラメントプロモーター；Ｂｙｒｎｅ ａｎｄ Ｒｕｄｄｌｅ，１９８９）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８５））、又は乳腺特異的プロモーター（乳白色プロモーター、 米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州出願公開第２６４，１６６号）、ならびに発生的に調節されるプロモーター、例えばマウスホックスプロモーター（Ｋｅｓｓｅｌ ａｎｄ Ｇｒｕｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４－３７９ （１９９０））、又はα－フェトプロテインプロモーター（Ｃａｍｐｅｓ ａｎｄ Ｔｉｌｇｈｍａｎ，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：５３７－５４６ （１９８９））などを含み、それら各々の内容が、参照により本明細書中に完全に組み入れられる。プロモーターは、それぞれの特定の細胞型、オルガネラ、又は組織において構成的であり得る。組織特異的プロモーター及び／又は調節エレメントはまた、結腸上皮細胞について特異的な肝臓脂肪酸結合（ＦＡＢ）タンパク質遺伝子；膵臓細胞について特異的なインスリン遺伝子；肝細胞についての特異的なトランスフィレチン、アルファ１－アンチトリプシン、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１型（ＰＡＩ－Ｉ）、アポリポタンパク質ＡＩ及びＬＤＬ受容体遺伝子；オリゴデンドロサイトについて特異的なミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）遺伝子；グリア細胞について特異的なグリア原線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）遺伝子；眼を標的化するために特異的なＯＰＳＩＮからのプロモーター；ならびに神経細胞について特異的である神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーターを含むことができる。組織特異的プロモーターの例は、限定されないが、クレアチンキナーゼについてのプロモーターを含み、それは、筋肉及び心臓組織における発現ならびにＢ細胞における発現についてのイムノグロブリン重鎖又は軽鎖プロモーターを方向付けるために使用されている。他の組織特異的プロモーターは、ヒト平滑筋アルファ－アクチンプロモーターを含む。肝臓についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ＨＭＧ－ＣＯＡレダクターゼプロモーター、ステロール調節エレメント１、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）プロモーター、ヒトグルコキナーゼプロモーター、コレステロールＬ ７－アルファヒドロイラーゼ（ＣＹＰ－７）プロモーター、ベータ－ガラクトシダーゼアルファ－２，６シアリルカンスフェラーゼプロモーター、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ－Ｉ）プロモーター、アルドラーゼＢプロモーター、ヒトトランスフェリンプロモーター、及びコラーゲンＩ型プロモーターを含む。前立腺についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）プロモーター、９４（ＳＰＳ ９４）プロモーターの前立腺分泌タンパク質、前立腺特異的抗原複合体プロモーター、及びヒト腺性カリクレイン遺伝子プロモーター（ｈｇｔ－１）を含む。胃組織についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ヒトＨ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅアルファサブユニットプロモーターを含む。膵臓についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、膵炎関連タンパク質プロモーター（ＰＡＰ）、エラスターゼ１転写エンハンサー、膵臓特異的アミラーゼ及びエラスターゼエンハンサープロモーター、ならびに膵臓コレステロールエステラーゼ遺伝子プロモーターを含む。子宮内膜についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、子宮グロビンプロモーターを含む。副腎細胞についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、コレステロール側鎖切断（ＳＣＣ）プロモーターを含む。一般的な神経系についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ガンマ－エノラーゼ（ニューロン特異的エノラーゼ、ＮＳＥ）プロモーターを含む。脳についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、神経フィラメント重鎖（ＮＦ－Ｈ）プロモーターを含む。リンパ球についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ヒトＣＧＬ－１／グランザイムＢプロモーター、末端デオキシトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）、ラムダ５、ＶｐｒｅＢ、及びｌｃｋ（リンパ球特異的チロシンタンパク質キナーゼｐ５６１ｃｋ）プロモーター、ヒトＣＤ２プロモーター及びその３’転写エンハンサー、ならびにヒトＮＫ及びＴ細胞特異的活性化（ＮＫＧ５）プロモーターを含む。結腸についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ｐｐ６０ｃ－ｓｒｃチロシンキナーゼプロモーター、器官特異的ネオ抗原（ＯＳＮ）プロモーター、及び結腸特異的抗原－Ｐプロモーターを含む。乳房細胞についての組織特異的発現エレメントは、例えば、限定されないが、ヒトアルファ－ラクトアルブミンプロモーターである。肺についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子プロモーターを含む。

一部の実施形態では、本開示のプロモーターは、腫瘍微小環境内のシグナルにより調節される。腫瘍微小環境は、腫瘍微小環境の存在において、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、プロモーターの活性が少なくとも１０％だけ増加又は減少する場合に、プロモーターを調節すると考えられる。一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけ増加又は減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％だけ増加又は減少する。

一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）増加又は減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍増加又は減少する。一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍増加又は減少する。

一部の実施形態では、本開示のプロモーターは、低酸素状態下で活性化される。「低酸素状態」は、身体又は身体の領域が、組織レベルで十分な酸素供給を欠乏する状態である。低酸素状態は、炎症を起こし得る（例、炎症性サイトカインのレベルは、低酸素状態下で増加する）。一部の実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、炎症性サイトカインの活性の発現を減少させるキメラタンパク質をコードするヌクレオチドと動作可能に連結され、このように、低酸素状態により起こされる炎症を低下させる。一部の実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）を含む。「低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）」は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）に応答する応答エレメントである。ＨＲＥは、一部の実施形態では、コンセンサスモチーフＮＣＧＴＧ（ここで、ＮはＡ又はＧのいずれかである）を含む。

活性化条件付き制御ポリペプチド（ＡＣＰ）プロモーター系
一部の実施形態では、合成プロモーターは、活性化－条件付き対照ポリペプチド－（ＡＣＰ－）結合ドメイン配列及びプロモーター配列を含むプロモーター系である。そのような系はまた、本明細書中では「ＡＣＰ応答プロモーター」として言及される。一般的に、ＡＣＰプロモーター系は、活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）をコードする第一の発現カセット及び外因性ポリヌクレオチド配列、例えば、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質又は任意の他の目的のタンパク質（例、プロテアーゼ）をコードする外因性ポリヌクレオチド配列などに動作可能に連結されたＡＣＰ応答性プロモーターをコードする第二の発現カセットを含む。一部の実施形態では、第一の発現カセット及び第二の発現カセットは、各々が、別々の操作された核酸によりコードされる。他の実施形態では、第一の発現カセット及び第二の発現カセットは、同じ操作された核酸によりコードされる。ＡＣＰ応答性プロモーターは、目的の単一タンパク質又は目的の複数のタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結され得る。

ＡＣＰプロモーター系のプロモーター、例えば、ＡＣＰの発現を駆動するプロモーター、又はＡＣＰ応答性プロモーターのプロモーター配列のいずれかは、本明細書中に記載されるプロモーター配列のいずれかを含み得る（上の「プロモーター」を参照のこと）。ＡＣＰ応答性プロモーターは、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答性エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートに由来し得る。一部の実施形態では、ＡＣＰ応答性プロモーターは、最小プロモーターを含む。

一部の実施形態では、ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含む。一部の実施形態では、ＡＣＰ応答性プロモーターは、最小プロモーターを含み、ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含む。ＡＣＰ結合ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のジンクフィンガー結合部位を含み得る。一部の実施形態では、転写因子は、ジンクフィンガー含有転写因子である。一部の実施形態では、ジンクフィンガー含有転写因子は、合成転写因子である。一部の実施形態では、ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含み、ＡＣＰはＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）を有する。一部の実施形態では、ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）及びエフェクタードメインを含む。一部の実施形態では、ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含み、ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）及びエフェクタードメインを有する。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、モジュラー設計であり、ジンクフィンガーアレイ（ＺＦＡ）で構成される。ジンクフィンガーアレイは、一緒に連結された複数のジンクフィンガータンパク質モチーフを含む。各ジンクフィンガーモチーフは、異なる核酸モチーフに結合する。これによって、任意の所望の核酸配列に対する特異性を伴うＺＦＡ、例えば、特定のジンクフィンガー結合部位組成及び／又は構成を有するＡＣＰ結合ドメインに対する所望の特異性を伴うＺＦＡがもたらされる。ＺＦモチーフは、互いに直接的に隣接し得る、又は可動性リンカー配列により分離され得る。一部の実施形態では、ＺＦＡは、タンデムに配置されたＺＦモチーフのアレイ、ストリング、又は鎖である。ＺＦＡは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５のジンクフィンガーモチーフを有し得る。ＺＦＡは、１～１０、１～１５、１～２、１～３、１～４、１～５、１～６、１～７、１～８、１～９、２～３、２～４、２～５、２～６、２～７、２～８、２～９、２～１０、３～４、３～５ ３～６、３～７、３～８、３～９、３～１０、４～５、４～６、４～７、４～８、４～９、４～１０、５～６、５～７、５～８、５～９、５～１０、又は５～１５のジンクフィンガーモチーフを有し得る。ＺＦタンパク質ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれ以上のＺＦＡを有し得る。ＺＦドメインは、１～１０、１～１５、１～２、１～３、１～４、１～５、１～６、１～７、１～８、１～９、２～３、２～４、２～５、２～６、２～７、２～８、２～９、２～１０、３～４、３～５ ３～６、３～７、３～８、３～９、３～１０、４～５、４～６、４～７、４～８、４～９、４～１０、５～６、５～７、５～８、５～９、５～１０、又は５～１５のＺＦＡを有し得る。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、１～１０のＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも一つのＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも二つのＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも三つのＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも四つのＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも五つのＺＦＡを含む。一部の実施形態では、ＺＦタンパク質ドメインは、少なくとも１０のＺＦＡを含む。

一部の実施形態では、ＡＣＰは、転写モジュレーターである。一部の実施形態では、ＡＣＰは、転写リプレッサーである。一部の実施形態では、ＡＣＰは、転写アクチベーターである。一部の実施形態では、ＡＣＰは、転写因子である。一部の実施形態では、ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ドメイン及び転写エフェクタードメインを含む。一部の実施形態では、ＤＮＡ結合ドメインは、テトラサイクリン（又はその誘導体）リプレッサー（ＴｅｔＲ）ドメインを含む。一部の実施形態では、ＡＣＰは、本開示の抗原認識受容体である。

ＡＣＰはまた、エフェクタードメイン、例えば転写エフェクタードメインなどをさらに含み得る。例えば、転写エフェクタードメインは、転写因子のエフェクタードメイン又はアクチベータードメインであり得る。転写因子活性化ドメインはまた、トランス活性化ドメインとして公知であり、遺伝子の転写を活性化又は抑制するように作用するタンパク質、例えば転写共調節因子などの骨格ドメインとして作用する。任意の適切な転写エフェクタードメインは、ＡＣＰにおいて使用され得るが、限定されないが、単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーからなる活性化ドメインであるＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン・バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメインを含むトリパータイトアクチベーター（トリパータイトアクチベーターは、ＶＰＲ活性化ドメインとして公知である）；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ＨＡＴコア活性化ドメインとして公知である）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷモチーフ（このモチーフはＷＲＰＷ抑制ドメインとして公知である）；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、エフェクタードメインは、以下から選択される転写エフェクタードメインである：単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーからなる活性化ドメインであるＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン・バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメインを含むトリパータイトアクチベーター（トリパータイトアクチベーターは、ＶＰＲ活性化ドメインとして公知である）；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ＨＡＴコア活性化ドメインとして公知である）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷモチーフ（このモチーフはＷＲＰＷ抑制ドメインとして公知である）；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメインである。

一部の実施形態では、ＡＣＰは、小分子（例、薬物）誘導性ポリペプチドである。例えば、一部の実施形態では、ＡＣＰは、テトラサイクリン（又はその誘導体）により誘導され得るが、ＴｅｔＲドメイン及びＶＰ１６エフェクタードメインを含む。一部の実施形態では、ＡＣＰは、エストロゲン受容体バリアント、例えばＥＲＴ２などを含み、タモキシフェン、又はその代謝物（例えば４－ヒドロキシ－タモキシフェン［４－ＯＨＴ］、Ｎ－デスメチルタモキシフェン、タモキシフェン－Ｎ－オキシド、又はエンドキシフェン）により、タモキシフェン制御核局在化を通じて調節され得る。

一部の実施形態では、ＡＣＰは、抑制性プロテアーゼ及び抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位を含む小分子（例、薬物）誘導性ポリペプチドである。一部の実施形態では、抑制性プロテアーゼは、特定の薬剤の非存在において活性であり（同族切断部位を切断する）、特定の薬剤の存在において不活性である（同族切断部位を切断しない）。一部の実施形態では、特定の薬剤は、プロテアーゼ阻害剤である。一部の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、本開示の所与の抑制性プロテアーゼを特異的に阻害する。抑制性プロテアーゼは、特定の薬剤の存在又は非存在により不活化が可能である、本明細書中に記載されるプロテアーゼのいずれかであり得る（例示的な抑制性プロテアーゼ、同族切断部位、及びプロテアーゼ阻害剤については、上の「プロテアーゼ切断部位」を参照のこと）。

一部の実施形態では、ＡＣＰは、デグロンドメインを有する（例示的なデグロン配列については、上の「デグロン系及びドメイン」を参照のこと）。デグロンドメインは、ＡＣＰの個々のドメインに対する任意の順番又は位置であり得る。例えば、デグロンドメインは、抑制性プロテアーゼのＮ末端、抑制性プロテアーゼのＣ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＮ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＣ末端、エフェクタードメインのＮ末端、又はエフェクタードメインのＣ末端であり得る。

マルチシストロン系及び複数のプロモーター系
一部の実施形態では、操作された核酸（例、発現カセットを含む、操作された核酸）は、複数のキメラタンパク質を産生するように構成される。例えば、核酸を、２～２０の異なるキメラタンパク質を産生するように構成してもよい。一部の実施形態では、核酸は、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～２０、５～１９、５～１８、５～１７、５～１６、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～２０、６～１９、６～１８、６～１７、６～１６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～２０、７～１９、７～１８、７～１７、７～１６、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～１１、７～１０、７～９、７～８、８～２０、８～１９、８～１８、８～１７、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～２０、９～１９、９～１８、９～１７、９～１６、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～２０、１１～１９、１１～１８、１１～１７、１１～１６、１１～１５、１１～１４、１１～１３、１１～１２、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～２０、１３～１９、１３～１８、１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４、１４～２０、１４～１９、１４～１８、１４～１７、１４～１６、１４～１５、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１５～１６、１６～２０、１６～１９、１６～１８、１６～１７、１７～２０、１７～１９、１７～１８、１８～２０、１８～１９、又は１９～２０のキメラタンパク質を産生するように構成される。一部の実施形態では、核酸は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のキメラタンパク質を産生するように構成される。

一部の実施形態では、操作された核酸は、マルチシストロンであり得、即ち、二つ以上の別々のポリペプチド（例、複数のキメラタンパク質）が単一のｍＲＮＡ転写物から産生され得る。操作された核酸は、様々なリンカーの使用を通じてマルチシストロンであることができ、例えば、第一のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を、第二のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に連結することができる（例えば、５’から３’方向に、第一の遺伝子：リンカー：第二の遺伝子など）。リンカーは、２Ａリボソームスキッピングエレメント、例えばＴ２Ａなどをコードすることができる。他の２Ａリボソームスキッピングエレメントは、限定されないが、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、及びＦ２Ａを含む。２Ａリボソームスキッピングエレメントによって、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドの産生が翻訳中に可能になる。リンカーは、切断可能なリンカーポリペプチド配列、例えばフリン切断部位又はＴＥＶ切断部位などをコードすることができ、それにおいて、発現に続いて、切断可能なリンカーポリペプチドは、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドが産生されるように切断される。切断可能リンカーは、切断をさらに促進する、ポリペプチド配列、例えば可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）などを含むことができる。

リンカーは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードすることができ、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドが、翻訳中に産生されるようにする。リンカーは、スプライスアクセプター、例えばウイルススプライスアクセプターなどをコードすることができる。

リンカーは、２Ａリボソームスキッピング、それに続く、２Ａ残基の完全な除去を可能にするフリン部位のさらなる切断を通じて別々のポリペプチドを産生することができるリンカー、例えばフリン－２Ａリンカーなどの組み合わせであり得る。一部の実施形態では、リンカーの組み合わせは、フューリン配列、可動性リンカー、及び２Ａリンカーを含むことができる。したがって、一部の実施形態では、リンカーは、フリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－２Ａ融合ポリペプチドである。一部の実施形態では、本開示のリンカーは、フリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｔ２Ａ融合ポリペプチドである。

一般的に、マルチシストロン系は、任意の数又は組み合わせのリンカーを使用して、任意の数の遺伝子又はその部分を発現することができる（例、操作された核酸は、第一、第二、及び第三のキメラタンパク質によりコードされる別々のポリペプチドが産生されるように、各々がリンカーにより分けられている、第一、第二、及び第三のキメラタンパク質をコードすることができる）。

操作された核酸は、複数のプロモーターを使用して、複数のＯＲＦからの遺伝子を発現することができ、即ち、二つ以上の別々のｍＲＮＡ転写物を、単一の操作された核酸から産生することができる。例えば、第一のプロモーターは、第一のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列と動作可能に連結することができ、第二のプロモーターは、第二のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列と動作可能に連結することができる。一般的に、任意の数のプロモーターを使用して、任意の数のキメラタンパク質を発現することができる。一部の実施形態では、複数のプロモーターから発現するＯＲＦの少なくとも一つは、マルチシストロンであり得る。

本明細書中で使用される「リンカー」は、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を連結するポリペプチド、上に記載されるマルチシストロンリンカー、又は上に記載される追加のＯＲＦと動作可能に連結される追加のプロモーターを指すことができる。

操作された細胞
本明細書中で提供されるのは、膜切断可能なキメラタンパク質を産生する、操作された細胞、及び操作された細胞を産生する方法である。一般的に、本開示の操作された細胞は、本明細書中で提供されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などを発現するように操作されてもよい。これらの細胞は、本明細書中では「操作された細胞」として言及される。これらの細胞は、典型的には、操作された核酸を含み、自然において生じない。一部の実施形態では、細胞は、キメラタンパク質、例えば、膜切断可能なキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターを含む核酸を含むように操作される。本開示の操作された細胞は、細胞のゲノム中に組み込まれた、操作された核酸を含み得る。操作された細胞は、例えば、一過性発現系、例えばプラスミド又はｍＲＮＡなどで改変された、細胞のゲノム中に組み込まれることなく発現が可能な、操作された核酸を含み得る。

本開示はまた、キメラタンパク質と、それらが産生される、操作された細胞の間の相加性及び相乗性を包含する。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも二つ（例、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上）のキメラタンパク質、例えば、少なくとも二つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作される。他の実施形態では、細胞は、細胞により天然に産生されないエフェクター分子を有する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。そのようなエフェクター分子は、例えば、細胞により天然に産生されるエフェクター分子の機能を補完し得る。

一部の実施形態では、細胞は、膜に係留される抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８アゴニストの細胞外ドメインを発現するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、複数のキメラタンパク質を産生するように操作される。例えば、細胞は、２～２０の異なるキメラタンパク質、例えば２～２０の異なる膜切断可能なキメラタンパク質などを産生するように操作されてもよい。一部の実施形態では、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～２０、５～１９、５～１８、５～１７、５～１６、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～２０、６～１９、６～１８、６～１７、６～１６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～２０、７～１９、７～１８、７～１７、７～１６、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～１１、７～１０、７～９、７～８、８～２０、８～１９、８～１８、８～１７、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～２０、９～１９、９～１８、９～１７、９～１６、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～２０、１１～１９、１１～１８、１１～１７、１１～１６、１１～１５、１１～１４、１１～１３、１１～１２、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～２０、１３～１９、１３～１８、１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４、１４～２０、１４～１９、１４～１８、１４～１７、１４～１６、１４～１５、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１５～１６、１６～２０、１６～１９、１６～１８、１６～１７、１７～２０、１７～１９、１７～１８、１８～２０、１８～１９、又は１９～２０のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞。一部の実施形態では、細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のキメラタンパク質を産生するように操作される。

一部の実施形態では、操作された細胞は、キメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする、一つ又は複数の操作された核酸を含む。一部の実施形態では、細胞は、複数の操作された核酸、例えば、少なくとも二つの操作された核酸を含むように操作され、各々が、少なくとも一つの（例、１、２、又は３）キメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする。例えば、細胞は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０の操作された核酸を含むように操作され得るが、各々が、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、又は３つ）のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターをコードする。一部の実施形態では、細胞は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれ以上の操作された核酸を含むように操作され、各々が、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、又は３つ）のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする。操作された細胞は、上に記載されるリンカーの少なくとも一つをコードする操作された核酸、例えば、第一のポリペプチド配列と第二のポリペプチド配列を連結するポリペプチド、上に記載される一つもしくは複数のマルチシストロンリンカー、追加のＯＲＦに動作可能に連結された一つもしくは複数の追加のプロモーター、又はそれらの組み合わせを含み得る。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、プロテアーゼを発現するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、細胞に異種のプロテアーゼを発現するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、キメラタンパク質を発現する細胞に対して異種のプロテアーゼ、例えば膜切断可能なキメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断する異種プロテアーゼなどを発現するように操作される。一部の実施形態では、操作された細胞は、プロテアーゼ、例えば異種プロテアーゼなどをコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする一つ又は複数の操作された核酸を含む。プロテアーゼ及びプロテアーゼ切断部位は、本明細書中の表題「プロテアーゼ切断部位」においてより詳細に記載されている。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、少なくとも一つのホーミング分子を産生するように操作される。「ホーミング」は、標的部位（例、細胞、組織（例、腫瘍）、又は器官）への細胞の能動的ナビゲーション（遊走）を指す。「ホーミング分子」は、細胞を標的部位に向かわせる分子を指す。一部の実施形態では、ホーミング分子は、標的部位への、操作された細胞の相互作用を認識及び／又は開始するように機能する。ホーミング分子の非限定的な例は、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＦＰＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ６Ｒ、ＣＸＣＲ１、ＣＳＣＲ７、及びＰＤＧＦＲを含む。

一部の実施形態では、ホーミング分子は、ケモカイン受容体（ケモカインに結合する細胞表面分子）である。本開示の操作された細胞により産生され得るケモカイン受容体の非限定的な例は、以下を含む：ＣＸＣケモカイン受容体（例、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、及びＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、及びＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例、ＣＸ３ＣＬ１に結合するＣＸ３ＣＲ１）、及びＸＣケモカイン受容体（例、ＸＣＲ１）。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｇタンパク質連結膜貫通受容体、又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（限定されないが、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂを含む）のメンバーである。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、及び／又はＣＸＣＬ１０（Ｔ細胞動員を促進する）、ＣＣＬ３及び／又はＣＸＣＬ５、ＣＣＬ２１（Ｔｈ１動員及び分極）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＲ４を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、Ｎ－ホルミル化含有オリゴペプチド（限定されないが、ＦＰＲ２及びＦＰＲＬ１を含む）を検出するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、インターロイキン（限定されないが、ＩＬ６Ｒを含む）を検出する受容体を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、他の細胞、組織、又は腫瘍から分泌される成長因子を検出する受容体（限定されないが、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲ、ならびにＶＥＧＦファミリーの受容体、限定されないが、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄを含む、を含む）を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、一つ又は複数のインテグリンを産生するように操作される。本開示の細胞は、インテグリンα及びβサブユニットの任意の組み合わせを産生するように操作され得る。インテグリンのαサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡ６、ＩＧＴＡ７、ＩＴＧＡ８、ＩＴＧＡ９、ＩＧＴＡ１０、ＩＧＴＡ１１、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡＸ。インテグリンのβサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、一つ又は複数のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を産生するように操作される。ＭＭＰの非限定的な例は、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰを含む。一部の実施形態では、細胞は、ＭＭＰを阻害する分子（例、タンパク質）の阻害剤を産生するように操作される。例えば、細胞は、膜１型ＭＭＰ（ＭＴ１－ＭＭＰ）の阻害剤（例、ＲＮＡｉ分子）又はＴＩＭＰメタロペプチダーゼ阻害剤１（ＴＩＭＰ－１）を発現するように操作され得る。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、例えば、標的組織の内皮上でセレクチン（例、造血細胞Ｅ－／Ｌ－セレクチンリガンド（ＨＣＥＬＬ）、Ｄｙｋｓｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１６ Ｏｃｔ；３４（１０）：２５０１－２５１１）に結合するリガンドを産生するように操作される。

用語「ホーミング分子」はまた、細胞のホーミングを改善／増強する分子の産生を調節する転写因子を包含する。

また、本明細書中で提供されるのは、複数のキメラタンパク質を産生するように操作され、その少なくとも二つが、異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する細胞である。一部の実施形態では、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫刺激機構を刺激する、又は腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害するエフェクター分子を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害するエフェクター分子を含み、少なくとも一つのキメラタンパク質（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害する。さらに他の実施形態では、少なくとも二つ（例、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫刺激機構を刺激するエフェクター分子を含む。さらに他の実施形態では、少なくとも二つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害するエフェクター分子を含む。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激するエフェクター分子を含む、少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激するエフェクター分子を含む、少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー細胞媒介性細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激するエフェクター分子を含む、少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激するエフェクター分子を含む、少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞動員を刺激するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激するエフェクター分子を含む、少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔｈ１分極を刺激するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、間質分解を刺激するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫刺激性代謝物産生を刺激するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、負の共刺激シグナル伝達を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達（例、ＴＲＡＩＬを介する）を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ調節性（Ｔ_ｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、腫瘍チェックポイント分子を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫抑制因子／代謝物を分解するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害するエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、腫瘍細胞を直接的に殺傷するエフェクター分子（例、グランザイム、パーフォリン、腫瘍溶解性ウイルス、細胞溶解性ペプチド、及び酵素、例えば、ＡＤＣＣを誘発する抗腫瘍抗体）を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。

一部の実施形態では、少なくとも一つのキメラタンパク質は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激し、ナチュラルキラー細胞媒介性細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激し、免疫細胞動員を刺激し、マクロファージシグナル伝達を刺激し、間質分解を刺激し、免疫刺激性代謝物産生を刺激し、又はＩ型インターフェロンシグナル伝達を刺激するエフェクター分子を含み；ならびに、少なくとも一つのキメラタンパク質は、負の共刺激シグナル伝達を阻害し、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、腫瘍チェックポイント分子を阻害し、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化し、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、免疫抑制因子／代謝物を分解し、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、又は腫瘍細胞を直接的に殺傷するエフェクター分子を含む。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２，ＩＬ－１５，ＩＬ－７，ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８，ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、及びＣＤ４０Ｌから選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。遮断又は阻害のために標的化することができる例示的な免疫チェックポイント分子は、限定されないが、ＣＴＬＡ－４、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、全てのＮＫ、γδ Τ、及びメモリー ＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上で発現する）、ＣＤ１６０（また、ＢＹ５５ として言及される）、及びＣＧＥＮ－１５０４９を含む。免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、及びＣＧＥＮ－１５０４９の一つ又は複数に結合して、その活性を遮断又は阻害する抗体、又はその抗原結合断片、又は他の結合タンパク質を含む。例示的なチェックポイント阻害剤は、限定されないが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体を含む。例証的な免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；ＭＫ－３４７５／Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）－ Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）－ ＢＭＳ）、ピディリズマブ（抗ＰＤ－１抗体；ＣＴ－０１１ － Ｔｅｖａ／ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、 ＡＭＰ２２４（抗ＰＤ－１；ＮＣＩ）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１； Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）－ Ｐｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；ＭＥＤＩ４７３６／Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）－ Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）－ Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤ－Ｌ１ － ＢＭＳ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）－ ＢＭＳ）、リリルマブ（抗ＫＩＲ；ＢＭＳ）、モナリズマブ（抗ＮＫＧ２Ａ；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）を含む。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、及びＣＤ４０Ｌから選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいは抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、及び抗ＩＬ－３５抗体から選択される少なくとも一つのチェックポイント阻害剤；ならびに／あるいはＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、及びＣＣＬ２１から選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドから選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいは微生物ペプチドから選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β、ならびにサイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及びインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）から選択されるエフェクター分子を含む少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのサイトカイン又は受容体／リガンド（例、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０－リガンド、及び／又はＣＤ４０Ｌ）を産生するように操作される。

一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子（例、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中の「Ｓ」）は、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、又は酵素である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はサイトカインである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はケモカインである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はホーミング分子である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は成長因子である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は共活性化分子である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は腫瘍微小環境修飾因子である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はリガンドである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は抗体である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はペプチドである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は酵素である。

一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子（例、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中の「Ｓ」）は、ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、又はＴＮＦ－アルファである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、又はＸＣＬ１である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、抗インテグリンアルファ４、ベータ７、抗ＭＡｄＣＡＭ、ＳＤＦ１、又はＭＭＰ－２である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、４－１ＢＢＬ又はＣＤ４０Ｌである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、又はＨＰＧＥ２である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、 抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、 抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、又は抗ＴＲＥＭ２抗体である。

一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子（例、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ中の「Ｓ」）は、ＩＬ－１５を含む。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインの融合体である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクターは、ＩＬ－１５からなる。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、一つ又は複数の追加のエフェクター分子を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、一つ又は複数の追加の分泌性エフェクター分子を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、又は酵素を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２，ＩＬ－７，ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８，ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、又はＣＤ４０Ｌを産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－１２を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＦＮ－γを産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－２を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－７を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－３６γを産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－１８を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＩＬ－１βを産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＯＸ４０リガンドを産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、ＣＤ４０Ｌを産生するようにさらに操作される。

一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、細胞は、一つ又は複数の追加の膜切断可能なキメラタンパク質を産生するようにさらに操作される。

一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子（例、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓの「Ｓ」）はＩＬ－１５であり、細胞は、一つ又は複数の追加の膜切断可能なキメラタンパク質を産生するようにさらに操作される。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子は、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、又は酵素を産生する。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、又はＣＤ４０Ｌである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－１２である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＦＮ－γである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－２である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－７である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－３６γである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－１８である。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＩＬ－１βである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＯＸ４０リガンドである。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも一つの膜切断可能なキメラタンパク質を産生するように操作され、ここで、分泌性エフェクター分子はＩＬ－１５であり、細胞は、追加の膜切断可能なキメラタンパク質についてさらに操作され、ここで、追加の分泌性エフェクター分子はＣＤ４０Ｌである。

細胞はまた、本明細書中に記載されるキメラタンパク質（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質）、目的のタンパク質、又はエフェクター分子に加えて、追加のタンパク質を発現するようにさらに操作することができる。細胞をさらに操作して、一つ又は複数の抗原認識受容体を発現させることができる。一つ又は複数の抗原認識受容体により標的かされ得る抗原の例は、限定されないが、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、ＢＣＭＡ、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、汎Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１を含む。

抗原認識受容体は、抗原結合ドメイン、例えば、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み得る。抗原認識受容体は、ｓｃＦｖを含み得る。ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み得るが、それらは、ペプチドリンカーにより分離され得る。例えば、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み得るが、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである。

抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり得る。ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメイン、それらの断片、それらの組み合わせ、又はそれらの断片の組み合わせなどを有し得る。ＣＡＲは、膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、ＢＴＬＡ膜貫通ドメイン、それらの断片、それらの組み合わせ、又はそれらの断片の組み合わせなどを有し得る。ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を有することができる。

抗原認識受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であり得る。

操作された細胞型
また、本明細書中で提供されるのは、操作された細胞である。細胞は、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれか）を含むように操作され得る。細胞は、本明細書中に記載される操作された細胞のいずれかの特色のいずれかを持つように操作され得る。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、一つ又は複数のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞であり、ここで、一つ又は複数のキメラタンパク質は、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、二つ以上のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された細胞であり、ここで、各キメラタンパク質は、異なる目的のタンパク質又はエフェクター分子である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを産生するように操作され、異なるエフェクター分子又は目的のタンパク質（例、ホーミング分子、抗原受容体など）を別々に産生するように操作された細胞である。

操作された細胞は、免疫細胞、限定されないが、Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球 、又は樹状細胞を含む、であり得る。操作された細胞は、Ｔ細胞であり得る。操作された細胞は、ＮＫ細胞あり得る。

操作された細胞は、幹細胞、限定されないが、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、又はｉＰＳＣ由来細胞を含む、であり得る。

操作された細胞は、腫瘍由来細胞であり得る。腫瘍細胞の例は、限定されないが、膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞を含む。

細胞を操作して、当業者に公知の方法を使用してキメラタンパク質を産生することができる。例えば、細胞を形質導入して腫瘍を操作することができる。一実施形態では、細胞は、ウイルスを使用して形質導入される。

特定の実施形態では、細胞は、腫瘍溶解性ウイルスを使用して形質導入される。腫瘍溶解性ウイルスの例は、限定されないが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。

ウイルスは、本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれかを含み、一つ又は複数のキメラタンパク質、例えば本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどをコードするもう一つの導入遺伝子をコードする組換えウイルスであり得る。ウイルスは、本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれかを含み、二つ以上のキメラタンパク質、例えば本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどの一つ又は複数をコードするもう一つの導入遺伝子をコードする組換えウイルスであり得る。

また、本明細書中で提供されるのは、操作された赤血球である。赤血球は、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれかを含むように操作され得る。赤血球は、本明細書中に記載される操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作され得る。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作された赤血球である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された赤血球である。

また、本明細書中で提供されるのは、操作された血小板細胞である。血小板細胞は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。血小板細胞は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作された血小板細胞である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された血小板細胞である。

また、本明細書中で提供されるのは、操作された細菌細胞である。細菌細胞は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。細菌細胞は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された細菌細胞である。細菌細胞は、一つ又は複数の哺乳動物由来のキメラタンパク質を産生するように操作することができる。細菌細胞は、二つ以上の哺乳動物由来のキメラタンパク質を産生するように操作することができる。細菌細胞の例は、限定されないが、クロストリジウム・ベイジェリンキー、クロストリジウム・スポロジェネス、クロストリジウム・ノヴィ、エシェリヒア・コリ、シュードモナス・エルジノーサ、リステリア・モノサイトゲネス、サルモネラ・チフィリウム、及びサルモネラ・コレラエスイスを含む。

操作された細胞は、ヒト細胞であり得る。操作された細胞は、ヒト初代細胞であり得る。操作された初代細胞は、腫瘍浸潤性初代細胞であり得る。操作された初代細胞は、初代Ｔ細胞であり得る。操作された初代細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）であり得る。操作された初代細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。操作された初代細胞は、任意の体細胞であり得る。操作された初代細胞は、ＭＳＣであり得る。ヒト細胞（例、免疫細胞）は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。ヒト細胞（例、免疫細胞）は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作されたヒト細胞（例、免疫細胞）である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作されたヒト細胞（例、免疫細胞）である。

操作された細胞は、対象（自己）、例えば、癌を有することが公知である、又は疑われる対象などから単離することができる。細胞単離方法は当業者に公知であり、限定されないが、細胞表面マーカー発現に基づくソーティング技術、例えば、ＦＡＣＳソーティング、ポジティブ単離技術、及びネガティブ単離、磁気単離、ならびにそれらの組み合わせを含む。操作された細胞は、治療が施されている対象に関して同種であり得る。同種改変細胞は、治療が施されている対象にＨＬＡ適合させることができる。操作された細胞は、培養細胞、例えばエクスビボ培養細胞などであり得る。操作された細胞は、エクスビボ培養細胞、例えば対象から単離された初代細胞などであり得る。培養細胞は、一つ又は複数のサイトカインと培養することができる。

また、本明細書中で提供されるのは、本開示の操作された細胞を培養することを含む方法である。本明細書中に記載される、操作された細胞を培養する方法は、公知である。当業者は、培養条件が、目的の特定の操作された細胞に依存することを認識するであろう。当業者は、培養条件が、操作された細胞の特定の下流の使用、例えば、対象への、操作された細胞のその後の投与のための特定の培養条件に依存することを認識するであろう。

細胞を操作する方法
また、本明細書中で提供されるのは、一つ又は複数の目的のタンパク質又はエフェクター分子（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質）を産生するために細胞を操作するための組成物及び方法である。

一般的に、細胞は、細胞のサイトゾル及び／又は核中への、一つ又は複数の目的のタンパク質又はエフェクター分子、例えば、目的のタンパク質又はエフェクター分子を含む、本明細書中に記載されているキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドの導入（即ち、送達）を通じて、目的のタンパク質又はエフェクター分子を産生するように操作される。例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれかであることができる。送達方法は、限定されないが、ウイルス媒介性送達、脂質媒介性トランスフェクション、ナノ粒子送達、エレクトロポレーション、超音波処理、及び物理的手段による細胞膜変形を含む。当業者は、送達方法の選択が、操作しようとする特定の細胞型に依存し得ることを理解するであろう。

ウイルス媒介性送達
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームを使用して、細胞を操作することができる。一般的に、ウイルスベクターベースの送達プラットフォームによって、宿主細胞中へ導入する（即ち、送達する）ことを通じて細胞が操作される。例えば、ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか（例、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする外因性ポリヌクレオチド配列のいずれか、ならびに／あるいは、Ｎ末端からＣ末端方向で、プロモーター及び、キメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列を含む、本明細書中に記載される発現カセットのいずれか）を導入することにより細胞を操作することができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは核酸であり得るが、そのようなものとして、操作された核酸はまた、操作されたウイルス由来の核酸を包含し得る。そのような操作されたウイルス由来の核酸はまた、組換えウイルス又は操作されたウイルスとして言及され得る。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、同じ核酸内に二つ以上の操作された核酸、遺伝子、又は導入遺伝子をコードし得る。例えば、操作されたウイルス由来の核酸、例えば、組換えウイルス又は操作されたウイルスは、一つ又は複数の導入遺伝子、限定されないが、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数をコードする、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含む、をコードし得る。一つ又は複数のキメラタンパク質をコードする一つ又は複数の導入遺伝子は、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は目的の他のタンパク質を発現するように構成され得る。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、一つ又は複数の導入遺伝子（例、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする導入遺伝子）に加えて、シス作用性エレメント又は遺伝子として言及される、一つ又は複数の遺伝子、例えば、ウイルス感染性及び／又はウイルス産生のために必要とされるウイルス遺伝子（例、キャプシドタンパク質、エンベロープタンパク質、ウイルスポリメラーゼ、ウイルス転写酵素など）をコードすることができる。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、二つ以上のウイルスベクター、例えば、本明細書中に記載され、トランス作用性エレメント又は遺伝子として言及される、操作された核酸、遺伝子、又は導入遺伝子をコードする別々のウイルスベクターなどを含むことができる。例えば、ヘルパー依存性ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードするベクターに加えて、一つ又は複数の追加の別々のベクター上にウイルス感染性及び／又はウイルス産生のために必要とされる追加の遺伝子を提供することができる。一つのウイルスベクターによって、二つ以上の操作された核酸を送達することができ、例えば、二つ以上のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質を産生するように構成された、操作された核酸を送達する一つのベクターなどである。二つ以上のウイルスベクターによって、二つ以上の操作された核酸を送達することができ、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質を産生するように構成された一つ又は複数の操作された核酸を送達する二つ以上のベクターなどである。使用されるウイルスベクターの数は、上で言及されるウイルスベクターベースのワクチンプラットフォームのパッケージング容量に依存し得るが、当業者は、適した数のウイルスベクターを選択することができる。

一般的に、ウイルスベクターベースの系のいずれかは、分子、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、エフェクター分子、及び／又は他の目的のタンパク質などのインビトロ生産のために使用することができる、あるいは、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする操作された核酸のインビボ送達のために、インビボ及びエクスビボ遺伝子治療手順において使用することができる。適したウイルスベクターベースの系の選択は、様々な要因、例えばカーゴ／ペイロードのサイズ、ウイルス系の免疫原性、目的の標的細胞、遺伝子発現の強度及びタイミング、及び当業者により認識される他の要因などに依存する。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ＲＮＡベースのウイルス又はＤＮＡベースのウイルスであり得る。例示的なウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、限定されないが、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、インフルエンザウイルス、インディアナベシクロウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、粘液腫ウイルス、レオウイルス、ムンプスウイルス、マラバウイルス、狂犬病ウイルス、ロタウイルス、肝炎ウイルス、風疹ウイルス、デングウイルス、チクングニアウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、モルビリウイルス、レンチウイルス、複製レトロウイルス、ラブドウイルス、セネカバレーウイルス、シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。他の例示的なウイルスベクターベースの送達プラットフォームが、当技術分野において記載されており、例えばワクシニア、鶏痘、自己複製アルファウイルス、マラバウイルス、アデノウイルス（例、Ｔａｔｓｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ （２００４）１０，６１６－６２９を参照のこと）又はレンチウイルスなどであり、限定されないが、特定の細胞型又は受容体を標的化するように設計された第２、第 ３又はハイブリッド第二／第三世代レンチウイルス及び任意の世代の組換えレンチウイルスを含む（例、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｂｙ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．（２０１１）２３９（１）： ４５－６１、Ｓａｋｕｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ： ｂａｓｉｃ ｔｏ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．（２０１２）４４３（３）：６０３－１８、Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｓｐｌｉｃｉｎｇ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｒｏｎ ｌｏｓｓ ｍａｘｉｍｉｚｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ Ｃ ｐｒｏｍｏｔｅｒ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１５）４３ （１）： ６８２－６９０、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ－Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒ ｆｏｒ Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９８）７２ （１２）： ９８７３－９８８０を参照のこと）。

この配列は、細胞内コンパートメントを標的化する一つ又は複数の配列で先行されてもよい。宿主細胞中への導入（即ち、送達）時に、感染細胞（即ち、操作された細胞）は、目的のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質を発現することができる。免疫化プロトコールにおいて有用なワクシニアベクター及び方法が、例えば、米国特許第４，７２２，８４８号において記載されている。別のベクターはＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。ＢＣＧベクターは、Ｓｔｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ３５１：４５６－４６０ （１９９１））において記載されている。操作された核酸の導入（即ち、送達）のために有用な多種多様な他のベクター、例えば、サルモネラ・チフィベクター、及び同様のものが、本明細書中の記載から当業者に明らかであろう。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、細胞を標的化するウイルスであり得るが、本明細書中では腫瘍溶解性ウイルスとして言及される。腫瘍溶解性ウイルスの例は、限定されないが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれも、目的の一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質をコードする一つ又は複数の導入遺伝子（例、操作された核酸）を含む組換え腫瘍溶解性ウイルスであり得る。目的の一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質をコードする導入遺伝子は、目的のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質を発現するように構成され得る。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、レトロウイルスベースであり得る。一般的に、レトロウイルスベクターは、６～１０ｋｂまでの外来配列についてのパッケージング能力を伴う、シス作用性の長い末端反復で構成されている。最小のシス作用性ＬＴＲは、ベクターの複製及びパッケージングのために十分であり、それは次に、一つ又は複数の操作された核酸（例、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする導入遺伝子）を標的細胞中に組み込んで、永続的な導入遺伝子の発現を提供するために使用される。レトロウイルスベースの送達系は、限定されないが、マウス白血病、ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、及びそれらの組み合わせに基づく送達系を含む（例、Ｂｕｃｈｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２７３１－２７３９ （１９９２）；Ｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：１６３５－１６４０ （１９９２）；Ｓｏｍｍｎｅｒｆｅｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．１７６：５８－５９ （１９９０）；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：２３７４－２３７８ （１９８９）；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ，Ｖｉｒｏｌ．６５：２２２０－２２２４ （１９９１）；ＰＣＴ／ＵＳ９４／０５７００を参照のこと）。他のレトロウイルス系は、Ｐｈｏｅｎｉｘレトロウイルス系を含む。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、レンチウイルスベースであり得る。一般的に、レンチウイルスベクターは、非分裂細胞を形質導入する又は感染させることができ、典型的には、高いウイルス力価を産生するレトロウイルスベクターである。レンチウイルスベースの送達プラットフォームは、ＨＩＶベース、例えばＶｉｒａＰｏｗｅｒ系（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）又はｐＬｅｎｔｉ系（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）などであり得る。レンチウイルスベースの送達プラットフォームは、ＳＩＶ又はＦＩＶベースであり得る。他の例示的なレンチウイルスベースの送達プラットフォームが、米国特許第７，３１１，９０７号；第７，２６２，０４９号；第７，２５０，２９９号；第７，２２６，７８０号；第７，２２０，５７８号；第７，２１１，２４７号；第７，１６０，７２１号；第７，０７８，０３１号；第７，０７０，９９３号；第７，０５６，６９９号；第６，９５５，９１９号においてさらに詳細に記載されており、各々が、参照により全ての目的のために本明細書中に組み入れられる。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、アデノウイルスベースであり得る。一般的に、アデノウイルスベースのベクターは、多くの細胞型において非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を要求せず、高い力価及び発現のレベルを達成し、比較的単純な系において大量に産生することができる。一般的に、アデノウイルスは、感染細胞内での導入遺伝子の一過性発現のために使用することができる。なぜなら、アデノウイルスは、典型的には、宿主のゲノム中に組み込まれないためである。アデノウイルスベースの送達プラットフォームが、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ３５：２５４３ ２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ６：５１５ ５２４，１９９９；Ｌｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ ９２：７７００ ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ５：１０８８ １０９７，１９９９；ＷＯ ９４／１２６４９、ＷＯ ９３／０３７６９；ＷＯ ９３／１９１９１；ＷＯ ９４／２８９３８；ＷＯ ９５／１１９８４及びＷＯ ９５／００６５５においてより詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。他の例示的なアデノウイルスベースの送達プラットフォームが、米国特許第５５８５３６２号；第６，０８３，７１６号、第７，３７１，５７０号；第７，３４８，１７８号；第７，３２３，１７７号；第７，３１９，０３３号；第７，３１８，９１９号；及び第７，３０６，７９３号ならびに国際特許出願ＷＯ９６／１３５９７においてより詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースであり得る。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを使用して、操作された核酸（例、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか）で細胞を形質導入してもよい。目的のタンパク質、例えば本明細書中に記載されるキメラタンパク質及び／又はエフェクター分子などのインビトロ産生のために使用することができ、あるいは、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする操作された核酸のインビボ送達のために、インビボ及びエクスビボ遺伝子治療手順において使用することができる（例、Ｗｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６０：３８－４７ （１９８７）；米国特許第４，７９７，３６８号；第５，４３６，１４６号；第６，６３２，６７０号；第６，６４２，０５１号；第７，０７８，３８７号；第７，３１４，９１２号；第６，４９８，２４４号；第７，９０６，１１１号；米国特許公開ＵＳ ２００３－０１３８７７２、ＵＳ ２００７／００３６７６０、及びＵＳ ２００９／０１９７３３８； Ｇａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，７８（１２）：６３８１－６３８８ （２００４年６月）；Ｇａｏ，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１００（１０）：６０８１－６０８６ （Ｍａｙ １３，２００３）；ならびに国際特許出願ＷＯ ２０１０／１３８２６３及びＷＯ ９３／２４６４１；Ｋｏｔｉｎ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：７９３－８０１ （１９９４）；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：１３５１ （１９９４）、各々が、全ての目的のために、参照により本明細書中に組み入れられる）。組換えＡＡＶベクターを構築するための例示的な方法が、米国特許第５，１７３，４１４号；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３２５１－３２６０ （１９８５）； Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ，ｅｔ ａｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．４：２０７２－２０８１ （１９８４）； Ｈｅｒｍｏｎａｔ ＆ａｍｐ；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ＰＮＡＳ ８１：６４６６６４７０ （１９８４）；及びＳａｍｕｉｓｋｉ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：０３８２２－３８２８ （１９８９）においてさらに詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。一般的に、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１及びそれらのバリアントのいずれか一つに対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。特定の例では、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ２に対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を有する。特定の例では、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８に対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を有する。

ＡＡＶベクターは、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列のいずれかを有するように操作され得る。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）プラットフォームであり得る。一般的に、ＶＬＰは、ウイルス構造タンパク質を産生し、結果として得られたウイルス粒子を精製することにより構築される。次に、精製後、カーゴ／ペイロード（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を、精製した粒子内にエクスビボでカプセル化する。したがって、ＶＬＰの産生によって、ウイルス構造タンパク質をコードする核酸及びカーゴ／ペイロードをコードする核酸の分離が維持される。ＶＬＰ産生において使用されるウイルス構造タンパク質は、哺乳動物、酵母、昆虫、細菌、又はインビボ翻訳発現の系を含む、様々な発現系において産生することができる。精製されたウイルス粒子を、当業者に公知の方法を使用して、所望のカーゴの存在において変性及び再形成して、ＶＬＰを産生することができる。ＶＬＰの産生は、Ｓｅｏｗ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ Ｍａｙ； １７（５）： ７６７－７７７）においてより詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ある範囲の細胞を標的化する（即ち、感染させる）、狭いサブセットの細胞を標的化する、又は特定の細胞を標的化するように改変することができる。一般的に、ウイルスベクターベースの送達プラットフォーム用に選ばれたエンベロープタンパク質によって、ウイルスの向性が決定される。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームにおいて使用されるウイルスは、目的の特定の細胞を標的化するようにシュードタイプ化することができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、向汎性であり、ある範囲の細胞に感染することができる。例えば、向汎性ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープを含むことができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、両種指向性であり、哺乳動物細胞に感染することができる。したがって、当業者は、所望の細胞型を標的化するための適した向性、シュードタイプ、及び／又はエンベロープタンパク質を選択することができる。

脂質構造体送達系
操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）は、脂質媒介性送達系を使用して細胞中に導入することができる。一般的に、脂質媒介性送達系は、内部コンパートメントを包む外部脂質膜で構成される構造を使用する。脂質ベースの構造体の例は、限定されないが、脂質ベースのナノ粒子、リポソーム、ミセル、エキソソーム、小胞、細胞外小胞、細胞、又は組織を含む。脂質構造体送達系は、インビトロ、インビボ、又はエクスビボで、カーゴ／ペイロード（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を送達することができる。

脂質ベースのナノ粒子は、限定されないが、単層リポソーム、多層リポソーム、及び脂質調製物を含むことができる。本明細書中で使用されるように、「リポソーム」は、所望のカーゴ、例えば、操作された核酸、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどを、脂質シェル又は脂質凝集体内に封入することにより形成される脂質媒体のインビトロ調製物を包含する一般名である。リポソームは、一般的にリン脂質を含む二分子膜を伴う小胞構造、及び一般的に水性組成物を含む内部媒質を有するとして特徴付けられ得る。リポソームは、限定されないが、エマルジョン、発泡体、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、層状層及び同様のものを含む。リポソームは単層リポソームであり得る。リポソームは多層リポソームであり得る。リポソームは多胞性リポソームであり得る。リポソームは、正に荷電し得る、負に荷電し得る、又は中性に荷電し得る。特定の実施形態では、リポソームは中性に荷電している。リポソームは、標準的な小胞形成脂質から形成することができ、それは、一般的に、中性及び負に荷電したリン脂質ならびにステロール、例えばコレステロールなどを含む。脂質の選択は、一般的に、所望の目的、例えば、インビボ送達についての基準、例えばリポソームのサイズ、酸の不安定性、及び血流中でのリポソームの安定性などの考慮により導かれる。多様な方法が、リポソームを調製するために利用可能であり、例えば、Ｓｚｏｋａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９； ４６７ （１９８０）、米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号、及び第５，０１９，３６９号において記載されているとおりであり、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

多重層リポソームが、一般的に、リン脂質を含む脂質を過剰の水溶液中に懸濁した場合に自発的に生成されて、複数の脂質層が水性媒質により分離されるようになる。水及び溶解された溶質は、脂質成分の自己再構成後に、脂質二重層の間の閉じた構造中に封入される。所望のカーゴ（例、ポリペプチド、核酸、小分子薬、操作された核酸、例えば、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれかなど、ウイルスベクター、ウイルスベースの送達系など）を、リポソームの水性内部中にカプセル化するか、リポソーム及びポリペプチド／核酸の両方に会合する連結分子を介してリポソームに付着させるか、リポソームの脂質二重層内に散在させるか、リポソーム中に封入するか、リポソームと複合体を形成させるか、又は、そうでなければ、リポソームと会合させることができ、それを標的実体に送達できるようにする。親油性分子又は親油性領域を伴う分子がまた、脂質二重層中に溶解し得る又はそれと会合し得る。

本実施形態に従って使用されるリポソームは、当業者に公知であり得るように、異なる方法により作製することができる。リポソームの調製は、ＷＯ ２０１６／２０１３２３、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８５／０１１６１及びＰＣＴ／ＵＳ８９／０５０４０、ならびに米国特許４，７２８，５７８、４，７２８，５７５、４，７３７，３２３、４，５３３，２５４、４，１６２，２８２、４，３１０，５０５、及び４，９２１，７０６においてさらに詳細に記載されており；各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

リポソームはカチオン性リポソームであり得る。カチオン性リポソームの例は、米国特許第５，９６２，０１６号；第５，０３０，４５３号；第６，６８０，０６８号、米国出願２００４／０２０８９２１、ならびに国際特許出願ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１、ＷＯ０４０２９２１３Ａ２、及びＷＯ０２／１００４３５Ａ１においてさらに詳細に記載されており、各々が、それらの全体において、参照により本明細書中に組み入れられる。

脂質媒介性遺伝子送達方法は、例えば、ＷＯ ９６／１８３７２；ＷＯ ９３／２４６４０；Ｍａｎｎｉｎｏ ＆ Ｇｏｕｌｄ－Ｆｏｇｅｒｉｔｅ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６（７）： ６８２－６９１ （１９８８）；米国特許第５，２７９，８３３号 Ｒｏｓｅ 米国特許第５，２７９，８３３号；ＷＯ９１／０６３０９；及びＦｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４： ７４１３－７４１４ （１９８７）において記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

エキソソームは、エンドサイトーシス起源の小さな膜小胞であり、それは、多小胞体と原形質膜との融合後に細胞外環境中に放出される。エキソソームのサイズは、直径３０～１００ｎｍの間の範囲である。それらの表面は、ドナー細胞の細胞膜からの脂質二重層からなり、それらは、エキソソームを産生した細胞からのサイトゾルを含み、表面上に親細胞からの膜タンパク質を示す。核酸の送達のために有用なエキソソームは、当業者に公知であり、例えば、米国特許第９，８８９，２１０号においてより詳細に記載されているエキソソームであり、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

本明細書中で使用されるように、用語「細胞外小胞」又は「ＥＶ」は、内部空間を封入する膜を含む細胞由来の小胞を指す。一般的に、細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さな直径を有する全ての膜結合小胞を含む。一般的に、細胞外小胞は、直径２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、細胞外小胞の外面上に呈される内部空間内で、及び／又は膜にわたるかのいずれかの、様々な高分子カーゴを含み得る。カーゴは、核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせを含み得る。例として、限定されないが、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接又は間接操作（例、連続的な押し出し又はアルカリ溶液での処理による）による細胞に由来する小胞、小胞化オルガネラ、及び生細胞により産生される小胞（例、直接的な原形質膜の出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合による）を含む。細胞外小胞は、生存生物又は死滅生物、外植された組織もしくは器官、及び／又は培養細胞に由来し得る。

本明細書中で使用されるように、用語「エキソソーム」は、内部空間を取り囲む膜を含み、直接的な原形質膜の出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合により細胞から生成される細胞由来の小さな（直径２０～３００ｎｍ、より好ましくは直径４０～２００ｎｍの）小胞を指す。エキソソームは、脂質又は脂肪酸及びポリペプチドを含み、場合により、ペイロード（例、治療薬剤）、レシーバ（例、標的化部分）、ポリヌクレオチド（例、核酸、ＲＮＡ、又はＤＮＡ、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）、糖（例、単糖、多糖、又はグリカン）、又は他の分子を含む。エキソソームは、産生細胞に由来し、そのサイズ、密度、生化学的パラメーター、又はそれらの組み合わせに基づいて産生細胞から単離することができる。エキソソームは、細胞外小胞の一種である。一般的に、エキソソーム産生／生合成は、産生細胞の破壊をもたらさない。エキソソーム及びエキソソームの調製は、ＷＯ ２０１６／２０１３２３においてさらに詳細に記載されており、それは、その全体において参照により本明細書により組み入れられる。

本明細書中で使用されるように、用語「ナノ小胞」（また、「マイクロ小胞」として言及される）は、内部空間を取り囲む膜を含み、直接又は間接操作により細胞から生成される、細胞由来の小さな（直径２０～２５０ｎｍ、より好ましくは直径３０～１５０ｎｍの間の）小胞を指し、当該ナノ小胞は、当該操作を伴うことなく、当該産生細胞により産生されないようにする。一般的に、ナノ小胞は、細胞外小胞の亜種である。産生細胞の適した操作は、限定されないが、連続押出し、アルカリ性溶液での処理、超音波処理、又はそれらの組み合わせを含む。ナノ小胞の産生は、一部の例では、当該産生細胞の破壊をもたらし得る。好ましくは、ナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合により産生細胞に由来する小胞を実質的に含まない。ナノ小胞は、脂質又は脂肪酸及びポリペプチドを含み、場合により、ペイロード（例、治療薬剤）、レシーバ（例、標的化部分）、ポリヌクレオチド（例、核酸、ＲＮＡ、又はＤＮＡ、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）、糖（例、単糖、多糖、又はグリカン）、又は他の分子を含む。ナノ小胞は、一度、それが当該操作に従って産生細胞から誘導されると、そのサイズ、密度、生化学的パラメーター、又はそれらの組み合わせに基づいて産生細胞から単離され得る。

脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、一般的に、脂質の両親媒性の性質に依存して膜及び小胞様の構造を形成する合成脂質構造である（Ｒｉｌｅｙ ２０１７）。一般的に、これらの小胞は、標的細胞の膜中に吸収され、カーゴをサイトゾル中に放出することにより、カーゴ／ペイロード、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸又はウイルス系のいずれかなどを送達する。ＬＮＰ形成において使用される脂質は、カチオン性、アニオン性、又は中性であり得る。脂質は、合成又は天然由来、一部の例では生分解性であり得る。脂質は、脂肪、コレステロール、リン脂質、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コンジュゲート（ＰＥＧ化脂質）を含む脂質コンジュゲート、ワックス、油、グリセリド、及び脂溶性ビタミンを含み得る。脂質組成物は、一般的に、材料の定義された混合物、例えばカチオン性、中性、アニオン性、及び両親媒性脂質などを含む。一部の例では、特定の脂質を含めて、ＬＮＰ凝集を防止する、脂質酸化を防止する、又は追加部分の付着を促進する機能的な化学基を提供する。脂質組成は、全体的なＬＮＰサイズ及び安定性に影響し得る。一例では、脂質組成物は、ジリノレイルメチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＭＣ３）又はＭＣ３様分子を含む。ＭＣ３及びＭＣ３様脂質組成物は、一つ又は複数の他の脂質、例えばＰＥＧ又はＰＥＧコンジュゲート脂質、ステロール、又は中性脂質などを含むように製剤化することができる。また、ＬＮＰをさらに操作又は機能化して、特定の細胞型の標的化を促進することができる。ＬＮＰ設計における別の考慮事項は、標的化効率と細胞傷害性のバランスである。

ミセルは、一般的に、単鎖脂質を使用して形成される球状の合成脂質構造であり、ここで、単鎖脂質の親水性の頭部が外層又は膜を形成し、単鎖脂質の疎水性の尾部がミセル中心を形成する。ミセルは、典型的には、脂質単層のみを含む脂質構造を指す。ミセルは、Ｑｕａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１７ Ｊｕｌ ５； ２５（７）： １５０１－１５１３）においてさらに詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

核酸ベクター、例えば、血清に直接曝露された発現ベクターなどは、血清ヌクレアーゼによる核酸の分解又は遊離核酸による免疫系のオフターゲット刺激を含む、いくつかの望ましくない結果を有し得る。同様に、血清に直接曝露されたウイルス送達系は、望ましくない免疫応答及び／又はウイルス送達系の中和を誘発し得る。従って、操作された核酸及び／又はウイルス送達系のカプセル化を使用して、分解を回避する一方で、また、潜在的なオフターゲットの影響を回避することができる。特定の例では、操作された核酸及び／又はウイルス送達系は、送達媒体内、例えばＬＮＰの水性内部内に完全にカプセル化される。ＬＮＰ内での操作された核酸及び／又はウイルス送達系のカプセル化は、当業者に周知の技術、例えば、マイクロ流体混合及びマイクロ流体液滴生成デバイス上で行われる液滴生成などにより行うことができる。そのようなデバイスは、限定されないが、標準的なＴジャンクションデバイス又はフローフォーカシングデバイスを含む。一例では、所望の脂質製剤、例えばＭＣ３又はＭＣ３様含有組成物が、操作された核酸又はウイルス送達系及び任意の他の所望の薬剤と並行して液滴生成デバイスに提供され、送達ベクター及び所望の薬剤を、ＭＣ３又はＭＣ３様ベースのＬＮＰの内部内に完全にカプセル化するようにする。一例では、液滴生成デバイスは、産生されるＬＮＰのサイズ範囲及びサイズ分布を制御することができる。例えば、ＬＮＰは、直径１～１０００ナノメートルの範囲のサイズ、例えば、１、１０、５０、１００、５００、又は１０００ナノメートルを有し得る。液滴生成に続いて、カーゴ／ペイロードをカプセル化する送達媒体（例、操作された核酸及び／又はウイルス送達系）をさらに処理又は操作して、投与用にそれらを調製することができる。

ナノ粒子送達
ナノ材料を使用して、操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を送達することができる。ナノ材料媒体は、重要なことに、非免疫原性材料で作ることができ、一般的に、その送達ベクター自体に対する免疫を誘発することを回避することができる。これらの材料は、限定されないが、脂質（以前に記載されたとおり）、無機ナノ材料、及び他の高分子材料を含む。ナノ材料粒子は、Ｒｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ－Ａ Ｒｅｖｉｅｗ．Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１７，７（５），９４）において詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

ゲノム編集系
ゲノム編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。一般的に、「ゲノム編集系」は、外来性遺伝子を宿主細胞のゲノム中に組み込むための任意の系を指す。ゲノム編集系は、限定されないが、トランスポゾン系、ヌクレアーゼゲノム編集系、及びウイルスベクターベースの送達プラットフォームを含む。

トランスポゾン系を使用して、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などを宿主ゲノム中に組み込むことができる。トランスポゾンは、一般的に、カーゴ／ペイロード核酸及びトランスポザーゼに隣接する末端逆位反復（ＴＩＲ）を含む。トランスポゾン系は、ＴＩＲ隣接カーゴを伴って、シスにおいて又はトランスにおいてトランスポゾンを提供することができる。トランスポゾン系は、レトロトランスポゾン系又はＤＮＡトランスポゾン系であり得る。一般的に、トランスポゾン系は、カーゴ／ペイロード（例、操作された核酸）をランダムに宿主ゲノム中に組み込む。トランスポゾン系の例は、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒトランスポゾンスーパーファミリーのトランスポゾン、例えばＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系などを使用した系を含み、Ｈｕｄｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１７ Ａｕｇ；５２（４）：３５５－３８０）、ならびに米国特許第６，４８９，４５８号、第６，６１３，７５２号、及び第７，９８５，７３９号においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。トランスポゾン系の別の例は、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン系を含み、米国特許第６，２１８，１８５号及び第６，９６２，８１０号においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

ヌクレアーゼゲノム編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。理論に拘泥することを望まないが、一般的に、外来性遺伝子を導入するために使用されるヌクレアーゼ媒介性遺伝子編集系は、細胞の天然ＤＮＡ修復機構、特に相同組換え（ＨＲ）修復経路を利用する。簡単には、ゲノムＤＮＡへの損傷（典型的には二本鎖切断）に続いて、細胞は、損傷を修復するためのＤＮＡ合成時に、その５’と３’の両方の末端に同一又は実質的に同一の配列を有する別のＤＮＡ供給源をテンプレートとして使用することにより、損傷を解消することができる。天然の状況では、ＨＤＲは、細胞中に存在する他の染色体をテンプレートとして使用することができる。遺伝子編集系では、外来性ポリヌクレオチドを細胞中に導入し、相同組換えテンプレート（ＨＲＴ又はＨＲテンプレート）として使用する。一般的に、ＨＲＴ（例、遺伝子又は遺伝子の一部）内の５’及び３’相補的末端の間に含まれる損傷を伴う、染色体に本来は見出されない任意の追加の外来性配列を、テンプレート化されたＨＤＲ中に所与のゲノム遺伝子座中に組み入れる（即ち、組み込む）ことができる。このように、所与のゲノム遺伝子座についての典型的なＨＲテンプレートは、内因性ゲノム標的遺伝子座の第一領域と同一のヌクレオチド配列、内因性ゲノム標的遺伝子座の第二領域と同一のヌクレオチド配列、及びカーゴ／ペイロード核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれか（例、本明細書に記載の式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか））をコードするヌクレオチド配列を有する。

一部の例では、ＨＲテンプレートは直線状であり得る。直線状ＨＲテンプレートの例は、限定されないが、直線化したプラスミドベクター、ｓｓＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及びＰＣＲ増幅ＤＮＡを含む。特定の例では、ＨＲテンプレートは環状であり得る、例えばプラスミドなど。環状テンプレートは、スーパーコイル状のテンプレートを含み得る。

ＨＲテンプレートの５’及び３’末端で見出される同一又は実質的に同一の配列は、導入される外来性配列に関して、一般的にアーム（ＨＲアーム）として言及される。ＨＲアームは、内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一（即ち、１００％同一）であり得る。ＨＲアームは、一部の例では、内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と実質的に同一であり得る。実質的に同一のＨＲアームを使用することができる一方で、ＨＲアームが同一であることが有利であり得るが、なぜなら、ＨＤＲ経路の効率は、１００％未満の同一性を有するＨＲアームにより影響され得るためである。

各ＨＲアーム、即ち５’及び３’ＨＲアームは、同じサイズ又は異なるサイズであり得る。各ＨＲアームの長さは、各々が、５０、１００、２００、３００、４００、もしくは５００塩基を上回る又はそれと等しくすることができる。ＨＲアームは、一般的に、任意の長さとすることができるが、実際的な考慮事項、例えば全体的な編集効率に対するＨＲアームの長さ及び全体的なテンプレートサイズの影響なども考慮に入れることができる。ＨＲアームは、切断部位に直に隣接する内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。各ＨＲアームは、切断部位に直に隣接する内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。各ＨＲアームは、切断部位からある特定の距離内、例えば、互いに１塩基対、１０塩基対未満もしくはそれと等しい、５０塩基対未満もしくはそれと等しい、又は１００塩基対未満もしくはそれと等しい、などにある内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。

ヌクレアーゼゲノム編集系は、様々なヌクレアーゼを使用して、標的ゲノム遺伝子座、限定されないが、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）ファミリーヌクレアーゼ又はその誘導体、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又はその誘導体、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又はその誘導体、及びホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）又はその誘導体を含む、を切断することができる。

ＣＲＩＳＰＲ媒介性遺伝子編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。ＣＲＩＳＰＲ系は、Ｍ．Ａｄｌｉ（“Ｔｈｅ ＣＲＩＳＰＲ ｔｏｏｌ ｋｉｔ ｆｏｒ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ” Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ； ｖｏｌｕｍｅ ９ （２０１８），Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ： １９１１）においてさらに詳細に記載されており、それが教示する全てについて、参照により本明細書中に組み入れられる。一般的に、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ヌクレアーゼ及び特定の標的配列に切断を方向付けるＲＮＡを含む。例示的なＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、Ｃａｓ９ヌクレアーゼならびにＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）ドメイン及びトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）ドメインを有するＲＮＡで構成されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系である。ｃｒＲＮＡは、典型的には、二つのＲＮＡドメイン：塩基対ハイブリダイゼーションを通じて標的配列（「定義されたヌクレオチド配列」）、例えば、ゲノム配列に特異性を方向付けるガイドＲＮＡ配列（ｇＲＮＡ）；及びｔｒａｃｒＲＮＡにハイブリダイズするＲＮＡドメインを有する。ｔｒａｃｒＲＮＡは、ヌクレアーゼ（例、Ｃａｓ９）と相互作用し、それにより、ゲノム遺伝子座への動員を促進することができる。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡポリヌクレオチドは、別々のポリヌクレオチドであり得る。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡポリヌクレオチドは、単一のポリヌクレオチドであり得るが、単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）としても言及される。Ｃａｓ９系が本明細書に例証されている一方で、他のＣＲＩＳＰＲ系を使用することができ、例えばＣｐｆ１／Ｃａｓ１２又はＣａｓ１３系などである。ヌクレアーゼは、その誘導体、例えばＣａｓ９機能性変異体など、例えば、Ｃａｓ９酵素により典型的に産生される完全な二本鎖切断とは対照的に、一般的に、定義されたヌクレオチド配列の一本鎖のみの切断を媒介するＣａｓ９「ニッカーゼ」変異体を含み得る。

一般的に、ＣＲＩＳＰＲ系の成分は、互いに相互作用してリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を形成し、配列特異的な切断を媒介する。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分を別々に産生し、使用して、ＲＮＰ複合体を形成することができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分をインビトロで別々に産生し、インビトロで互いに接触させて（即ち、「複合体化させて」）ＲＮＰ複合体を形成することができる。インビトロで産生されたＲＮＰを次に、細胞のサイトゾル及び／又は核、例えば、Ｔ細胞のサイトゾル及び／又は核中に導入（即ち、「送達」）することができる。インビトロで産生されたＲＮＰ複合体は、様々な手段、限定されないが、エレクトロポレーション、脂質媒介性トランスフェクション、物理的手段による細胞膜変形、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、及び超音波処理を含む、により細胞に送達することができる。特定の例では、インビトロで産生されたＲＮＰ複合体を、Ｎｕｃｌｅｏｆａｃｔｏｒ／Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（登録商標）エレクトロポレーションベースの送達系（Ｌｏｎｚａ（登録商標））を使用して細胞に送達することができる。他のエレクトロポレーション系は、限定されないが、ＭａｘＣｙｔｅエレクトロポレーション系、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳエレクトロポレーション系、Ｎｅｏｎエレクトロポレーション系、及びＢＴＸエレクトロポレーション系を含む。ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ、例えば、Ｃａｓ９は、当技術分野において公知の様々なタンパク質産生技術を使用して、インビトロで産生（即ち、合成及び精製）することができる。ＣＲＩＳＰＲ系ＲＮＡ、例えば、ｓｇＲＮＡは、当業者に公知の様々なＲＮＡ生成技術、例えばインビトロ転写又は化学合成などを使用して、インビトロで産生（即ち、合成及び精製）することができる。

インビトロで産生されたＲＮＰ複合体は、ヌクレアーゼとｇＲＮＡの異なる比率で複合体化することができる。インビトロで産生されたＲＮＰ複合体はまた、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の編集系において異なる量で使用することができる。例えば、編集されることが望まれる細胞の数に依存して、加えられるＲＮＰの総量を調整することができ、例えば、反応において多数の細胞を編集する場合に加えられるＲＮＰ複合体の量における低下などである。

一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分（例、Ｃａｓ９及びｓｇＲＮＡ）は、ポリヌクレオチドにより別々にコードされ、各ポリヌクレオチドは一緒に又は別々に細胞中に導入することができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分は、単一のポリヌクレオチド（即ち、マルチプロモーター又はマルチシストロンベクター、以下の例示的なマルチシストロン系の説明を参照のこと）によりコードされ、細胞中に導入することができる。細胞内での各ポリヌクレオチドにコードされたＣＲＩＳＰＲ成分の発現（例、ヌクレアーゼの翻訳及びＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡの転写）後、ＲＮＰ複合体を細胞内で形成させることができ、次に、部位特異的切断に方向付けることができる。

一部のＲＮＰは、核中へのＲＮＰの送達を促進する部分を有するように操作することができる。例えば、Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、核局在化シグナル（ＮＬＳ）ドメインを有し得るが、Ｃａｓ９ ＲＮＰ複合体が、細胞のサイトゾル中に送達される場合、又はＣａｓ９の翻訳及びその後のＲＮＰ形成後に、ＮＬＳは、核中へのＣａｓ９ ＲＮＰのさらなる輸送を促進することができる。

本明細書中に記載されている、操作された細胞は、非ウイルス方法を使用して操作することができ、例えば、本明細書中に記載されるヌクレアーゼ及び／又はＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、非ウイルス方法を使用して細胞に送達することができる。本明細書中に記載されている、操作された細胞は、ウイルス方法を使用して操作することができ、例えば、本明細書中に記載されるヌクレアーゼ及び／又はＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、ウイルス方法、例えばアデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、又は本明細書中に記載される他のウイルスベースの送達方法のいずれかを使用して細胞に送達することができる。

一部のＣＲＩＳＰＲ系では、二つ以上のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供することができ、各々が、同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座を、二つ以上の標的ヌクレオチド配列で別々に標的化するようにする。例えば、二つの別々のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供して、互いの特定の距離内の二つの異なる標的ヌクレオチド配列での切断に方向付けることができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、二つ以上のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供することができ、各々が、同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座の逆ストランドを別々に標的化するようにする。例えば、二つの別々のＣＲＩＳＰＲ「ニッカーゼ」組成物を提供して、逆ストランド上の同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座で切断に方向付けることができる。

一般的に、本明細書中に記載されるＣＲＩＳＰＲ媒介性の編集系の特色を、他のヌクレアーゼベースのゲノム編集系に適用することができる。ＴＡＬＥＮは、操作された部位特異的ヌクレアーゼであって、それは、ＴＡＬＥ（転写アクチベーター様エフェクター）のＤＮＡ結合ドメイン及び制限エンドヌクレアーゼＦｏｋｌの触媒ドメインで構成される。ＤＮＡ結合ドメインの単量体の高度に可変的な残基領域中に存在するアミノ酸を変化させることにより、異なる人工ＴＡＬＥＮを作製して様々なヌクレオチド配列を標的化することができる。ＤＮＡ結合ドメインによって、その後、ヌクレアーゼが標的配列に方向付けられ、二本鎖切断が作製される。ＴＡＬＥＮベースの系は、米国通し番号 第１２／９６５，５９０号；米国特許第８，４５０，４７１号；米国特許第８，４４０，４３１号；米国特許第８，４４０，４３２号；米国特許第１０，１７２，８８０号；及び米国通し番号 第１３／７３８，３８１号においてより詳細に記載されており、それらの全てが、それらの全体において参照により本明細書中に組み入れられる。ＴＡＬＥＮベースの編集系は、米国特許第６，４５３，２４２号；第６，５３４，２６１号；第６，５９９，６９２号；第６，５０３，７１７号；第６，６８９，５５８号；第７，０３０，２１５号；第６，７９４，１３６号；第７，０６７，３１７号；第７，２６２，０５４号；第７，０７０，９３４号；第７，３６１，６３５号；第７，２５３，２７３号；及び米国特許公開第２００５／００６４４７４号；第２００７／０２１８５２８号；第２００５／０２６７０６１号においてさらに詳細に記載されており、全てが、それらの全体において、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

他の改変送達系
操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を細胞又は他の標的レシピエント実体、例えば、本明細書中に記載される脂質構造のいずれかなどの中に導入するための様々な追加の手段。

エレクトロポレーションを使用して、ポリヌクレオチドをレシピエント実体に送達することができる。エレクトロポレーションは、電界を適用して、標的細胞又は実体の外膜又はシェルを一時的に透過させることを通じて、カーゴ／ペイロードを標的細胞又は実体の内部コンパートメント中に内在化させる方法である。一般的に、この方法は、目的のカーゴ（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を含む溶液中の二つの電極の間に細胞又は標的実体を配置することを含む。細胞の脂質膜を次に、一過性の設定電圧を適用することにより破壊、即ち、透過させ、それによって、カーゴが、実体の内部、例えば、細胞の細胞質に進入することが可能になる。細胞の例では、細胞の大部分ではないが、少なくとも一部は生存可能なままである。細胞及び他の実体を、インビトロ、インビボ、又はエクスビボでエレクトロポレーションすることができる。エレクトロポレーション条件（例、細胞の数、カーゴの濃度、回復条件、電圧、時間、容量、パルスタイプ、パルス長、容積、キュベット長、エレクトロポレーション溶液の組成など）は、いくつかの要因、限定されないが、細胞又は他のレシピエント実体の種類、送達されるカーゴ、所望の内在化の効率、及び所望の生存率を含む、に依存して変動する。そのような基準の最適化は、当業者の技術の範囲内である。様々なデバイス及びプロトコールをエレクトロポレーションのために使用することができる。例は、限定されないが、Ｎｅｏｎ（登録商標）トランスフェクション系、ＭａｘＣｙｔｅ（登録商標）Ｆｌｏｗ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ（商標）、Ｌｏｎｚａ（登録商標）Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）系、及びＢｉｏ－Ｒａｄ（登録商標）エレクトロポレーション系を含む。

操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を細胞又は他の標的レシピエント実体中に導入するための他の手段は、限定されないが、超音波処理、遺伝子銃、流体力学的注射、及び物理的手段による細胞膜変形を含む。

操作されたｍＲＮＡ、例えばネイキッドプラスミド又はｍＲＮＡなどをインビボで送達するための組成物及び方法が、Ｋｏｗａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１９ Ａｐｒ １０； ２７（４）： ７１０－７２８）及びＫａｃｚｍａｒｅｋ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ．２０１７； ９： ６０）において詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。

送達媒体
また、本明細書中で提供されるのは、カーゴ／ペイロード（「送達媒体」）を送達するための組成物である。

カーゴは、上に記載されるように、核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質を含むキメラタンパク質をコードする、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）を含み得る。カーゴは、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせを含み得る。カーゴは、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか（例、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）であることができる。カーゴは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上の組み合わせであることができる。カーゴは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質と、目的の別のカーゴ、例えば別のタンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせなどとの組み合わせであることができる。

送達媒体は、カーゴを送達するのに適した任意の組成物を含み得る。送達媒体は、タンパク質（例、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれか）を送達するのに適した任意の組成物を含み得る。送達媒体は、本明細書中に記載される脂質構造送達系のいずれかであることができる。例えば、送達媒体は、脂質ベースの構造体、限定されないが、脂質ベースのナノ粒子、リポソーム、ミセル、エキソソーム、小胞、細胞外小胞、細胞、又は組織を含む、であることができる。送達媒体は、本明細書中に記載されるナノ粒子、例えば脂質（以前に記載されたとおり）、無機ナノ材料、及び他の高分子材料を含むナノ粒子などのいずれかであることができる。

送達媒体は、カーゴを細胞に送達する、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを細胞に送達するなど、が可能であり得る。送達媒体は、カーゴを細胞に送達する、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを細胞に送達するなど、が可能であり得る。送達媒体は、特定の細胞を標的化するよう構成する、例えば、特定の細胞を標的化するための再配向抗体を用いて構成する、などができる。送達媒体は、カーゴを細胞にインビボで送達することが可能であり得る。

送達媒体は、組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）にカーゴを送達する、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを組織又は組織環境にインビボで送達する、などが可能であり得る。カーゴを送達することは、カーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを分泌することなどを含み得る。したがって、送達媒体は、カーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを分泌すること、などが可能であり得る。送達媒体は、組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）にカーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを組織又は組織環境中に分泌すること、などが可能であり得る。送達媒体は、特定の組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）を標的化するように構成され得る、例えば、特定の組織又は組織環境を標的化するように再配向抗体を用いて構成され得る。

治療の方法
さらに本明細書中で提供されるのは、操作された細胞により産生される、少なくとも一つの目的のタンパク質（例、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質など、あるいはキメラタンパク質のプロテアーゼ切断後に本明細書中で提供される分泌エフェクター分子）をインビボで産生するために、本明細書中で提供される操作された細胞を対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。本明細書中でさらに提供されるのは、操作された細胞により産生される、目的の少なくとも二つの対象タンパク質、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質の少なくとも二つ、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをインビボで産生するために、本明細書中で提供される、操作された細胞を対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。

本明細書中でさらに提供されるのは、本明細書中に記載される送達媒体のいずれか、例えば、本明細書中に記載される目的のタンパク質のいずれかを含む、本明細書中に記載される送達媒体のいずれかなど、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などを対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。本明細書中でさらに提供されるのは、本明細書中に記載される送達媒体のいずれか、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質の二つ以上のタンパク質、例えば、少なくとも二つを含む、本明細書中に記載される送達媒体のいずれかなど、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などを対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法。

一部の実施形態では、操作された細胞又は送達媒体は、静脈内、腹腔内、気管内、皮下、腫瘍内、経口、肛門、鼻腔内（例、送達粒子中に封入される）、又は動脈（例、内頸動脈）経路を介して投与される。このよに、操作された細胞又は送達媒体は、全身的又は局所的に（例、ＴＭＥに、又は腫瘍内投与を介して）投与され得る。操作された細胞は、対象、例えば、癌を有することが公知である又は疑われる対象などから単離することができる。操作された細胞は、治療が施されている対象に関して同種であり得る。同種改変細胞は、治療が施されている対象にＨＬＡ適合させることができる。送達媒体は、本明細書中に記載される脂質構造送達系のいずれかであることができる。送達媒体は、本明細書中に記載されるナノ粒子のいずれかであることができる。

操作された細胞又は送達媒体は、治療すべき状態に依存的に、単独で、又は他の治療との組み合わせにおいて、同時投与又は連続的のいずれかで投与することができる。例えば、操作された細胞又は送達媒体は、本明細書中に記載される一つ又は複数のＩＭｉＤとの組み合わせにおいて投与することができる。ＦＤＡ承認済みＩＭｉＤは、それらの承認された様式において投与することができる。別の実施例では、操作された細胞又は送達媒体は、チェックポイント阻害剤治療との組み合わせにおいて投与することができる。例示的なチェックポイント阻害剤は、限定されないが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体を含む。例証的な免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；ＭＫ－３４７５／Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）－ Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）－ ＢＭＳ）、ピディリズマブ（抗ＰＤ－１抗体；ＣＴ－０１１ － Ｔｅｖａ／ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、 ＡＭＰ２２４（抗ＰＤ－１；ＮＣＩ）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１； Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）－ Ｐｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；ＭＥＤＩ４７３６／Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）－ Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）－ Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤ－Ｌ１ － ＢＭＳ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）－ ＢＭＳ）、リリルマブ（抗ＫＩＲ；ＢＭＳ）、モナリズマブ（抗ＮＫＧ２Ａ；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）を含む。他の例では、操作された細胞又は送達媒体は、ＴＧＦベータ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、又はＨＰＧＥ２との組み合わせにおいて投与することができる。別の例では、操作された細胞又は送達媒体は、抗ＣＤ４０抗体との組み合わせにおいて投与することができる。

一部の方法は、腫瘍（又は癌）を有する対象（又は患者集団）を選択すること、及び、その対象を、腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する、操作された細胞又は送達媒体で治療することを含む。

本開示の操作された細胞又は送達媒体は、一部の例では、癌、例えば卵巣癌などを治療するために使用され得る。他の癌が本明細書中に記載されている。例えば、操作された細胞は、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、頸部腫瘍、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、メラノーマ、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び／又は子宮腫瘍を治療するために使用され得る。本開示の操作された細胞又は送達媒体は、対象の腹膜腔中に位置する腫瘍を伴う癌を治療するために使用することができる。

本明細書中で提供される方法はまた、操作された細胞又は送達媒体の調製物を送達することを含む。調製物は、一部の実施形態では、例えば、操作された細胞以外の細胞を５％未満（例、４％、３％、２％、又は１％未満）で含む、実質的に純粋な調製物である。調製物は、１×１０^５細胞／ｋｇから１×１０^７細胞／ｋｇの細胞を含み得る。操作された細胞又は送達媒体の調製は、一つ又は複数の薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物を含むことができる。例えば、操作された細胞又は送達媒体の調製物は、操作されたウイルス、例えば操作されたＡＡＶウイルスなどのいずれか、又は操作されたウイルスベクター、例えば本明細書中に記載されるＡＡＶベクターなどのいずれかを含むことができる。

インビボ発現
本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される、操作された細胞を産生することが可能である、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかをインビボで細胞に送達することが可能である組成物をインビボで送達することを含む。そのような組成物は、ウイルス媒介性送達プラットフォームのいずれか、脂質構造送達系のいずれか、ナノ粒子送達系のいずれか、ゲノム編集系のいずれか、又は細胞をインビボで操作することが可能である、本明細書中に記載される他の操作送達系のいずれかを含む。

本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される目的のタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有する膜切断可能なキメラタンパク質などのいずれかを産生することが可能な組成物をインビボで送達することを含む。本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される、目的のタンパク質の二つ以上を産生することが可能な組成物をインビボで送達することを含む。目的のタンパク質のインビボ産生が可能な組成物は、限定されないが、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含む。目的のタンパク質のインビボ産生が可能な組成物は、ネイキッドｍＲＮＡ又はネイキッドプラスミドであり得る。

追加の実施形態
１．Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと、膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む操作された核酸であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている、操作された核酸。
２．プロモーターは、構成的プロモーターである、実施形態１の操作された核酸。
３．構成的プロモーターは、以下からなる群：ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂから選択される、実施形態２の操作された核酸。
４．プロモーターは誘導性プロモーターである、実施形態１～３のいずれか一つの操作された核酸。
５．誘導性プロモーターは、以下からなる群：ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント １、ＳＲＦ応答エレメント ２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答エレメント、及びそのタンデムリピートから選択される応答エレメントを含む、実施形態４の操作された核酸。
６．プロモーターは合成プロモーターを含む、実施形態１～５のいずれか一つの操作された核酸。
７．合成プロモーターは、最小プロモーター及び、最小プロモーターに対して異種である少なくとも一つの調節エレメントを含む、実施形態６の操作された核酸。
８．少なくとも一つの調節エレメントは、活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）結合ドメイン配列及びプロモーター配列を含む、実施形態７の操作された核酸。
９．ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含む、実施形態８の操作された核酸。
１０．合成プロモーターは、合成プロモーターのＡＣＰ結合ドメインに結合する活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）により調節可能である、実施形態８又は９の操作された核酸。
１１．ＡＣＰは転写モジュレーターである、実施形態１０の操作された核酸。
１２．ＡＣＰは転写リプレッサーである、実施形態１０又は実施形態１１の操作された核酸。
１３．ＡＣＰは転写アクチベーターである、実施形態１０又は実施形態１１の操作された核酸。
１４．ＡＣＰは、抑制性プロテアーゼ、及び抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位をさらに含む、実施形態１０～１３のいずれか一つの操作された核酸。
１５．ＡＣＰは、エストロゲン受容体のホルモン結合ドメイン（ＥＲＴ２ドメイン）をさらに含む、実施形態１０～１４のいずれか一つの操作された核酸。
１６．ＡＣＰは転写因子である、実施形態１０～１４のいずれか一つの操作された核酸。
１７．転写因子はジンクフィンガー含有転写因子である、実施形態１６の操作された核酸。
１８．ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）及び転写エフェクタードメインを含む、実施形態１０～１７のいずれか一つの操作された核酸。
１９．ＺＦタンパク質ドメインは、モジュラー設計であり、ジンクフィンガーアレイ（ＺＦＡ）で構成される、実施形態１８の操作された核酸。
２０．ＺＦタンパク質ドメインは、１から１０のＺＦＡを含む、実施形態１９の操作された核酸。
２１．エフェクタードメインは、以下からなる群から選択される：単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーを含む活性化ドメイン、ＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン－バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメイン（ＶＰＲ活性化ドメイン）を含むトリパータイトアクチベーター；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ ＨＡＴコア活性化ドメイン）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連の塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷモチーフ、このモチーフはＷＲＰＷ抑制ドメインとして公知である；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン、実施形態１８～２０のいずれか一つの操作された核酸。
２２．抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位は、ＺＦタンパク質ドメインとエフェクタードメインの間に局在化している、実施形態１４～２１のいずれか一つの操作された核酸。
２３．抑制性プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１４～２２のいずれか一つの操作された核酸。
２４．同族切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態２３の操作された核酸。
２５．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態２４の操作された核酸。
２６．ＮＳ３プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態２３～２５のいずれか一つの操作された核酸。
２７．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態２６の操作された核酸。
２８．ＡＣＰは、タモキシフェン又はその代謝物へのＥＲＴ２ドメインの結合時に核局在化を受けることが可能である、実施形態１５～２７のいずれか一つの操作された核酸。
２９．タモキシフェン代謝物は、以下からなる群：４－ヒドロキシタモキシフェン、Ｎ－デスメチルタモキシフェン、タモキシフェン－Ｎ－オキシド、及びエンドキシフェンから選択される、実施形態２８の操作された核酸。
３０．ＡＣＰは、デグロンドメインをさらに含み、デグロンドメインは、ＡＣＰに動作可能に連結されている、実施形態１０～２９のいずれか一つの操作された核酸。
３１．デグロンドメインは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２－４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０－２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８－１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（インフルエンザＡウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（インフルエンザＡウイルスＮＳタンパク質の残基７９－９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチン脱炭酸酵素の残基１０６－１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２－４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａの点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２－４６１）、ＡＰＣ／Ｃ デグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎデグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン 、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳリン酸依存性デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、及びＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、実施形態３０の操作された核酸。
３２．デグロンドメインは、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）に応答してＣＲＢＮに結合することが可能なセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを含み、それにより、ＡＣＰのユビキチン経路媒介性分解を促進する、実施形態３０の操作された核酸。
３３．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片から選択される、実施形態３２の操作された核酸。
３４．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、実施形態３２の操作された核酸。
３５．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭＶＨＫＲＳＨＴＧＥＲＰＬＱＣＥＩＣＧＦＴＣＲＱＫＧＮＬＬＲＨＩＫＬＨＴＧＥＫＰＦＫＣＨＬＣＮＹＡＣＱＲＲＤＡＬのアミノ酸配列（配列番号１７５）を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、実施形態３２の操作された核酸。
３６．ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である、実施形態３２～３５のいずれか一つの操作された核酸。
３７．ＩＭｉＤは、以下からなる群：サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドから選択される、実施形態３２～３６のいずれか一つの操作された核酸。
３８．デグロンドメインは、抑制性プロテアーゼのＮ末端、抑制性プロテアーゼのＣ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＮ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＣ末端、エフェクタードメインのＮ末端、又はエフェクタードメインのＣ末端である、実施形態３０～３７のいずれか一つの操作された核酸。
３９．プロモーターは、組織特異的プロモーターである、実施形態１～３８のいずれか一つの操作された核酸。
４０．分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態１～３９のいずれか一つの操作された核酸。
４１．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態４０の操作された核酸。
４２．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態４０の操作された核酸。
４３．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態４２の操作された核酸。
４４．分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４５．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
４６．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５，ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４８．分泌性エフェクター分子が、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の操作された核酸。
４９．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
５０．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態４９の操作された核酸。
５１．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
５２．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態５１の操作された核酸。
５３．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５４．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５５．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５６．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５７．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５８．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態５７の操作された核酸。
５９．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態５７の操作された核酸。
６０．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態５７の操作された核酸。
６１．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態１～６０のいずれか一つの操作された核酸。
６２．プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：プロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７ プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択される、実施形態１～６１のいずれか一つの操作された核酸。
６３．プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態１～６２のいずれか一つの操作された核酸。
６４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１～６３のいずれか一つの操作された核酸。
６５．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態６４の操作された核酸。
６６．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態６５の操作された核酸。
６７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
６８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
６９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７７．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
７８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
７９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８０．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８１．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８２．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８３．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態１～８２のいずれか一つの操作された核酸。
８４．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態８３の操作された核酸。
８５．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態１～８４のいずれか一つの操作された核酸。
８６．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグから選択される、実施形態８５の操作された核酸であって、それにおいて、
８７．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態１～８４のいずれか一つの操作された核酸。
８８．細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される、実施形態１～８７のいずれか一つの操作された核酸。
８９．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は細胞膜から放出される、実施形態８８の操作された核酸。
９０．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態８９の操作された核酸。
９１．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態９０の操作された核酸。
９２．プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態９１の操作された核酸。
９３．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態８９の操作された核酸。
９４．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態９３の操作された核酸。
９５．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態９４の操作された核酸。
９６．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態９５の操作された核酸。
９７．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態８９～９６のいずれか一つの操作された核酸。
９８．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態９７の操作された核酸。
９９．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は調節が可能である、実施形態８９～９８のいずれか一つの操作された核酸。
１００．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態９９の操作された核酸。
１０１．操作された核酸は、以下からなる群：ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドから選択される一本鎖又は二本鎖核酸である、実施形態１～１００のいずれか一つの操作された核酸。
１０２．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸を含む発現ベクター。
１０３．発現ベクターはウイルスベクターである、実施形態１０２の発現ベクター。
１０４．ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである、実施形態１０３の発現ベクター。
１０５．Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、膜切断可能なキメラタンパク質。
１０６．分泌性エフェクター分子はシグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態１０５のキメラタンパク質。
１０７．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態１０６のキメラタンパク質。
１０８．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態１０６のキメラタンパク質。
１０９．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態１０８のキメラタンパク質。
１１０．分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態１０５～１０９のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１１．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１１２．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５，ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１０５～１１１のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１３．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態１１２のキメラタンパク質。
１１４．分泌性エフェクター分子は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、実施形態１１３のキメラタンパク質。
１１５．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態１１３のキメラタンパク質。
１１６．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態１１５のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１１２のキメラタンパク質。
１１８．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態１１７のキメラタンパク質。
１１９．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２０．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２１．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２２．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２３．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２４．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２５．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２６．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２７．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態１０５～１２６のいずれか一つのキメラタンパク質。
１２８．プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択されるプロテアーゼにより切断可能である、実施形態１０５～１２７のいずれか一つのキメラタンパク質。
１２９．プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態１０５～１２８のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１０５～１２９のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３１．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態１３０のキメラタンパク質。
１３２．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態１３１のキメラタンパク質。
１３３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４３．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４６．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４７．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４８．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４９．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態１０５～１４８のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５０．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態１４９のキメラタンパク質。
１５１．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態１０５～１５０のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５２．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群から選択される：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグ、実施形態１５１のキメラタンパク質。
１５３．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態１０５～１５２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５４．細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される、実施形態１０５～１５３のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５５．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は細胞膜から放出される、実施形態１５４のキメラタンパク質。
１５６．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態１５５のキメラタンパク質。
１５７．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態１５６のキメラタンパク質。
１５８．プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態１５６のキメラタンパク質。
１５９．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態１５５のキメラタンパク質。
１６０．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１５９のキメラタンパク質。
１６１．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態１６０のキメラタンパク質。
１６２．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態１６１のキメラタンパク質。
１６３．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態１５５～１６２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６４．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態１６３のキメラタンパク質。
１６５．プロテアーゼはデグロンをさらに含む、実施形態１５５～１６４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６６．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は、調節が可能である、実施形態１５５～１６５のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６７．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態１６６のキメラタンパク質。
１６８．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
１６９．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞。
１７０．操作された核酸を含む単離細胞であって、それにおいて、操作された核酸は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている、単離細胞。
１７１．操作された核酸は組換え発現される、実施形態１６９又は実施形態１７０の単離細胞。
１７２．操作された核酸は、ベクター又は細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態１６９～１７１のいずれか一つの単離細胞。
１７３．膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞であって、それにおいて、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質は、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
ならびに、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、単離細胞。
１７４．細胞は、以下からなる群：Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞から選択される、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７５．細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７６．細胞は自家である、実施形態１６９～１７５のいずれか一つの単離細胞。
１７７．細胞は同種である、実施形態１６９～１７５のいずれか一つの単離細胞。
１７８．細胞は、以下からなる群：膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞から選択される腫瘍細胞である、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７９．細胞は、腫瘍溶解性ウイルスでの形質導入を介して操作された、実施形態１７８の単離細胞。
１８０．細胞は、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含む、実施形態１６９～１７９のいずれか一つの単離細胞。
１８１．プロテアーゼは内因性プロテアーゼである、実施形態１８０の単離細胞。
１８２．内因性プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態１８１の単離された細胞。
１８３．内因性プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態１８１の単離細胞。
１８４．プロテアーゼは異種プロテアーゼである、実施形態１８０の単離細胞。
１８５．異種プロテアーゼはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１８４の単離細胞。
１８６．プロテアーゼは、細胞の細胞膜上で発現する、実施形態１８０～１８５のいずれか一つの単離細胞。
１８７．プロテアーゼは、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能である、実施形態１８６の単離細胞。
１８８．プロテアーゼ切断部位の切断によって、細胞の細胞膜から分泌性エフェクター分子が放出される、実施形態１８７の単離細胞。
１８９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１６９～１８８のいずれか一つの単離細胞。
１９０．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態１８９の単離細胞。
１９１．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態１９０の単離細胞。
１９２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
式中、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
１９３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
式中、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
１９４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２００．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２０１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２０２．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０５．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０６．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０７．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０８．細胞は抗原認識受容体をさらに含む、実施形態１６９～２０７のいずれか一つの単離細胞。
２０９．抗原認識受容体は抗原結合ドメインを含む、実施形態２０８の単離細胞。
２１０．抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態２０９の単離細胞。
２１１．抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態２０９の単離細胞。
２１２．ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態２１１の単離細胞。
２１３．ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離される、実施形態２１２の単離細胞。
２１４．ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである、実施形態２１３の単離細胞。
２１５．抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２０８～２１４のいずれか一つの単離細胞。
２１６．抗原認識受容体はＣＡＲである、実施形態２０８～２１４のいずれか一つの単離細胞。
２１７．ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群：ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインから選択される、実施形態２１６の単離細胞。
２１８．ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、以下からなる群：ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインから選択される、実施形態２１６又は実施形態２１７の単離細胞。
２１９．ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む、実施形態２１６～２１８のいずれか一つの単離細胞。
２２０．実施形態１６９～２１９のいずれか一つの単離細胞、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２２１．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態１６９～２１９のいずれか一つの単離細胞のいずれか又は実施形態２２０の組成物の治療有効量を投与すること。
２２２．単離細胞は、対象に由来する、実施形態２２１の方法。
２２３．単離細胞は、対象に関して同種である、実施形態 ２２１又は実施形態 ２２２の方法。
２２４．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む脂質ベースの構造体。
２２５．脂質ベースの構造体は、細胞外小胞、脂質ナノ粒子、ミセル、又はリポソームを含む、実施形態２２４の脂質ベースの構造体。
２２６．実施形態２２４又は実施形態２２５の脂質ベースの構造体、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２２７．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２２４もしくは実施形態２２５の脂質ベースの構造体のいずれか、又は実施形態２２６の組成物の治療有効用量を投与すること。
２２８．投与は、全身投与を含む、実施形態２２７の方法。
２２９．脂質ベースの構造体は、対象において細胞を操作することが可能である、実施形態２２７又は実施形態２２８の方法。
２３０．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２２７～２２９のいずれか一つの方法。
２３１．チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態２３０の方法。
２３２．方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、実施形態２２７～２３１のいずれか一つの方法。
２３３．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含むナノ粒子。
２３４．ナノ粒子は、無機材料を含む、実施形態２３３のナノ粒子。
２３５．実施形態２３３又は実施形態２３４のナノ粒子を含む組成物。
２３６．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２３３もしくは実施形態２３４のナノ粒子のいずれか、又は実施形態２３５の組成物の治療有効用量を投与すること。
２３７．投与は、全身投与を含む、実施形態２３６の方法。
２３８．ナノ粒子は、対象において細胞を操作することが可能である、実施形態２３６又は実施形態２３７の方法。
２３９．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２３６～２３８のいずれか一つの方法。
２４０．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクターを含むように操作されたウイルス。
２４１．ウイルスは、以下からなる群：レンチウイルス、レトロウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）から選択される、実施形態２４０の操作されたウイルス。
２４２．実施形態２４０又は実施形態２４１の操作されたウイルス、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２４３．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２４０もしくは実施形態２４１の操作されたウイルス、又は実施形態２４２の組成物の治療有効量を投与すること。
２４４．投与は全身投与を含む、実施形態２４３の方法。
２４５．操作されたウイルスは、対象において細胞に感染し、発現カセットを発現する、実施形態又は実施形態２４４の方法。
２４６．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２４３～２４５のいずれか一つの方法。
２４７．以下を含む、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法：
ａ）細胞を提供することであって、それにおいて、細胞は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃは、膜結合プロテアーゼの同族プロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一のポリペプチドとして発現するように構成される、こと；及び
ｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現に適した条件下で細胞を培養することであって、
発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留され、かつ
発現時に、膜結合プロテアーゼは、膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより、分泌性エフェクター分子を細胞膜から放出する、こと。
２４８．分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態２４７の方法。
２４９．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態２４８の方法。
２５０．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態２４８の方法。
２５１．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態２５０の方法。
２５２．分泌性エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態２４７～２５０のいずれか一つの方法。
２５３．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態２５２の方法。
２５４．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、又はＩＬ－１５を含む、実施形態２４７～２５３のいずれか一つの方法。
２５５．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態２５４の方法。
２５６．分泌性エフェクター分子は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、実施形態２５５の方法。
２５７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態２５５の方法。
２５８．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態２５７の方法。
２５９．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態２５４の方法。
２６０．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態２５９の方法。
２６１．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態２５２の方法。
２６２．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態２５２の方法。
２６３．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態２５２の方法。
２６４．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態２５２の方法。
２６５．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態２５２の方法。
２６６．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態２６５の方法。
２６７．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態２６５の方法。
２６８．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態２６５の方法。
２６９．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態２４３～２６８のいずれか一つの方法。
２７０．同族プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７ プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択されるプロテアーゼにより切断可能である、実施形態２４３～２６９のいずれか一つの方法。
２７１．同族プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態２４３～２７０のいずれか一つの方法。
２７２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態２４３～２７１のいずれか一つの方法。
２７３．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態２７２の方法。
２７４．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態２７３の方法。
２７５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２７６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２７７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２７８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態２４３～２７５。
２７９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態２４３～２７５。
２８２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８４．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８７．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８８．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８９．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２９０．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態２４３～２８９のいずれか一つの方法。
２９１．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態２９０の方法。
２９２．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態２４３～２９１のいずれか一つの方法。
２９３．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群から選択される：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグ、実施形態２９２の方法。
２９４．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態２４３～２９１のいずれか一つの方法。
２９５．プロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態２４３～２９４のいずれか一つの方法。
２９６．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態２９５の方法。
２９７．プロテアーゼは、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態２９６の方法。
２９８．プロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態２４３～２９４のいずれか一つの方法。
２９９．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態２９８の方法。
３００．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態２９９の方法。
３０１．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態３００の方法。
３０２．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態２４３～３０１のいずれか一つの方法。
３０３．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態３０２の方法。
３０４．プロテアーゼは、デグロンをさらに含む、実施形態２４３～３０３のいずれか一つの方法。
３０５．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は、調節が可能である、実施形態２４３～３０３のいずれか一つの方法。
３０６．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態３０５の方法。

以下は、本開示を行うための特定の実施形態の実施例である。実施例は、例証的な目的のみのために与えられており、任意の方法において本発明の範囲を限定することを意図しない。例えば、以下に記載及び実施される実験によって、ペイロード（例、エフェクター分子）を分泌するように細胞を操作すること、及びそれらの細胞を送達して腫瘍に対する免疫原性応答を誘導することの一般的な有用性が実証される。

使用される数（例、量、温度など）に関して正確さを確保するために努力がなされてきたが、しかし、一部の実験誤差及び偏差は、無論、許容されるべきである。

実施例１－膜切断可能なシステムを使用した、調節されたサイトカイン分泌
膜切断可能なシステムを、サイトカインの分泌を調節する能力について評価する。

方法
ＩＬ－１５分泌細胞の操作：
膜切断可能なＩＬ－１５構築物をコードするレンチウイルスベクターを生成する。

レンチウイルスを、以下を使用して産生する：Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔパッケージング細胞株（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３２１８０）；抗生物質を伴わない、ＬＸ２９３Ｔ完全増殖培地；ＤＭＥＭ、高グルコース；１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ＦＢＳ、熱不活化；Ｏｐｔｉ－Ｍｅｍ Ｉ低血清培地（Ｇｉｂｃｏ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ；カタログ番号３１９８５）；ＦｕＧｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２３１１）；エンベロープ、パッケージング、及びトランスファーベクタープラスミド；ＶＳＶ－Ｇ－シュードタイプエンベロープベクター（ｐＭＤ２．Ｇ）；第２世代及び第３世代のトランスファーベクターで使用することができるＧａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、及びＴａｔを含むパッケージングベクター（ｐｓＭＡＸ２）。９０％コンフルエントな１０ｃｍディッシュからの２９３Ｔ（ＦＴ）細胞を取り上げ、トランスフェクションの前日の午後遅くに希釈率１：３で分注し、細胞を通常の一晩、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする（細胞は翌日のトランスフェクション時に６０－８５％コンフルエントに達している必要がある）。

トランスフェクション反応を、以下のプロトコールに従って、各１０ｃｍディッシュについて準備する。
１．別々の１．７ｍＬチューブ中で各１０ｃｍディッシュについてトランスフェクション反応を調製する。
２．ＲＴで９００ｕＬのＯｐｔｉ－ＭｅｍＩを加える。
３．反応液毎に９ｕｇのベクター骨格（目的の遺伝子を含む）を加える。
４．反応液毎に８ｕｇのパッケージングベクターを加える。
５．反応毎に１ｕｇのエンベロープベクター（ｐＭＤ２．Ｇ）を加える。
６．３秒間にわたり速くボルテックスすることにより徹底的に混合する。
７．反応毎に５５ｕＬのＦｕｇｅｎｅ ＨＤを加える。
８．２０～３０回上下に速くピペッティングすることにより混合する。
９．ＲＴで１０分間にわたり放置する（ＤＮＡ複合体を形成させる）。
１０．混合物を、ディッシュの周りにゆっくりと滴下により加えて、次に５～１０秒間にわたり穏やかに前後上下に揺り動かすことにより混合する（回転させない）。
１１．ディッシュをウイルスインキュベーター中に置く。

ウイルス上清を、血清学的ピペットを使用して、２及び３日目に収集する。細胞破片を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ ０．４５ｕｍフィルターを使用して除去した。Ｌｅｎｔｉ－Ｘ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（カタログ番号６３１２３１ ＆ ６３１２３２）をプロトコールに従って使用する：１）１容積のＬｅｎｔｉ－Ｘコンセントレーターを３容積の清澄化した上清と合わせる。穏やかな反転により混合する；２）混合物を氷上又は４℃で３０分間から一晩インキュベートする；（３）サンプルを１，５００×ｇで４５分間にわたり４℃で遠心分離する；（４）上清を注意深く除去し、ペレットを乱さないように注意しながら廃棄する；（５）滅菌ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡを使用して、ペレットを元の容量の１／１０～１／１００中に穏やかに再懸濁する。

初代Ｔ細胞を、以下のプロトコールに従って、ウイルス上清を使用して形質導入する：
１．Ｇｉｂｃｏ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズを使用してＴ細胞を活性化させる。
ａ）Ｔ細胞をカウントする－２４ウェルプレート中のウェル当たり１ｅ６個の細胞。
ｂ）ＯｐＴｍｉｚｅｒ培地でｄｙｎａｂｅａｄｓを洗浄する。
ｃ）使用直前にＤｙｎａｂｅａｄｓを徹底的にボルテックスする。
ｄ）所望の容量のＤｙｎａｂｅａｄｓをチューブに移す。
ｅ）１０×容量のＰＢＳを加え、混合する（５秒間にわたりボルテックスする、又は少なくとも５分間にわたりローラー上に保つ）。
ｆ）チューブをマグネット上に１分間にわたり置き、吸引により上清を廃棄する。
ｇ）ビーズの繰り返し洗浄‐２回目の洗浄については、ＩＬ－２を伴わないＯｐＴｍｉｚｅｒ培地を使用する。
ｈ）チューブをマグネットから除去し、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を伴う、必要な容量のＯｐＴｍｉｚｅｒ培地中に、洗浄されたＤｙｎａｂｅａｄｓを再懸濁し、６ｅ６ビーズ／ｍＬに達する。
ｉ）Ｔ細胞懸濁液をビーズに加えて、１ｍＬが１ｅ６ Ｔ細胞及び３ｅ６ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ／ｍＬを含むようにする。
ｊ）１ｍＬの混合物を２４ウェルプレートの各ウェル中に播種する。
ｋ）２４ウェルプレートを３７℃のインキュベーター中に置く。
ｌ）２０時間後、Ｔ細胞は形質導入の準備ができている。
２）Ｔ細胞の形質導入：
ａ）上から注意深くピペッティングすることにより５００ｕｌの培地を除去し、沈殿したＴ細胞及びビーズを乱さないことを確実にする。
ｂ）レンチウイルス混合物を、対応する各ウェルへの滴加により細胞上に加える。
ｃ）穏やかに上下にピペッティングすることによりウイルス及び細胞を混合する。
ｄ）プレートを３７℃のインキュベーター中に置く。
ｅ）５００ｕｌの培地を翌日に戻して加える。
ｆ）形質導入の３日後、各ウェルからＣＤ３ ｄｙｎａｂｅａｄｓを除去する。
ｉ）上下にピペッティングすることにより細胞‐ｄｙｎａｂｅａｄｓ混合物を激しく混合する。
ｉｉ）細胞‐ｄｙｎａｂｅａｄｓ混合物をエッペンドルフチューブ（１．５ｍＬ）中に移す。
ｉｉｉ）エッペンドルフチューブをマグネットホルダーに置く。
ｉｖ）エッペンドルフチューブをマグネットホルダー中に保ち、細胞を含む培地をエッペンドルフチューブから別のエッペンドルフチューブに除去する。

初代ＮＫ細胞を、以下のプロトコールに従ってウイルス上清を使用して形質導入する：
１．非ＴＣ処理１２ウェルプレートのレトロネクチンコーティング（１日目）。１３ｍＬの総容量で１枚のプレートをコーティングする（ウェル当たりの最終レトロネクチン濃度は、８ｕｇ／ｃｍ２のプレート面積に対応する３２ｕｇ／ｍＬ容量である）：
ａ．レトロネクチンを解凍する。
ｂ．元のストックボトル（１ｕｇ／ｕｌ濃度）から０．４１６ｍＬを取る。
ｃ．１５ｍＬのファルコンチューブ中に加え、ＤＰＢＳ（１Ｘ）で１３ｍＬに容量を完了する。
ｄ．穏やかに混合する。溶液を激しく混合しないこと。ボルテックスしないこと。
ｅ．１ｍＬのレトロネクチン溶液を各ウェル中に移す。
ｆ．４℃で一晩インキュベートする（形質導入前１日）
２．１％ＢＳＡ溶液を用いてプレートをブロッキングする（２日目）。
ａ．各ウェルからレトロネクチン溶液を回収し、－２０℃で保存する。
ｂ．ＰＢＳ中の１％滅菌ＢＳＡ溶液（１ｍＬ／ウェル）で、室温で５～３０分間にわたりブロッキングする。
ｃ．ＢＳＡ溶液を吸引し、ＤＰＢＳで１回洗浄する
３．ＮＫ形質導入（２日目）
ａ．１ｍＬ（０．５ｅ６／ｍＬ）のＮＫ細胞を加え、所望の量のウイルス力価を１２ウェルプレート上の各々に加える。
ｂ．プレートを１２００ｇ、２０℃で９０分間にわたりスピンダウンする。
ｃ．サイトカインを伴う１ｍＬのＭＡＣＳ ＮＫ培地をウェル中に加える。
ｄ．次に、プレートを３７℃のインキュベーターに移す。

表面結合ＩＬ－１５の測定：
操作された細胞は、第一に、ポリクローナルウサギ抗ヒトＩＬ－１５一次抗体（ＬＳ－Ｃ４８７３３７）と室温で１．５時間にわたる、及び、第二に、抗ウサギ二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８で標識）と３０分間にわたる形質導入後の７日に染色される。表面結合ＩＬ－１５は、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒでフローサイトメトリーにより評価される。

分泌ＩＬ－１５の測定：
操作された細胞（１０＾６）は、形質導入後の７日に１ｍＬの新鮮な培地中に播種される。３７℃での４８時間のインキュベーション後、細胞培地中に分泌されたＩＬ－１５は、ＥＬＩＳＡ（ヒトＩＬ－１５ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔカタログ＃ Ｄ１５００）により定量化される。

タンパク質発現及び切断効率の決定
膜切断可能なシステムは、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ（Ｎ末端からＣ末端に配向）を有するキメラタンパク質を使用するように設計され、それにおいて、Ｓは分泌性ペイロード（例、エフェクター分子）を指し、Ｃはプロテアーゼ切断部位を指し、及びＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。図１Ａは、本明細書中に記載される膜切断可能なシステムの概略図を例証し、それにおいて、所望のペイロードが、プロテアーゼ切断部位がペイロードと膜係留ドメインの間に挿入されるキメラタンパク質として発現する。左パネルは、膜貫通構造を使用した膜切断可能なシステムの概略図を例証する（例、キメラタンパク質は膜貫通ドメインを含む）。右パネルは、膜会合構造を使用した膜切断可能なシステムの概略図を例証する（例、キメラタンパク質は、細胞膜との会合を可能にする翻訳後修飾タグを含む）。図１Ｂは、ＩＬ－１５の調節された分泌のための代表的な膜切断可能なシステムを例証し、それにおいて、ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５ペイロードと膜係留ドメインの間に挿入されたＴＡＣＥによる切断が可能な切断部位を有するキメラタンパク質として発現する。左パネルは、Ｉ型膜貫通ドメイン、例えばＰＤＧＦＲ－ベータ及びＣＤ８などの使用を通じたＩ型膜貫通構造（例、Ｓ－Ｃ－ＭＴ）を例証する。右パネルは、ＩＩ型膜貫通ドメイン、例えばＮＫＧ２Ｄ及びＴＮＦＲ２などの使用を通したＩＩ型膜貫通構造（例、ＭＴ－Ｃ－Ｓ）である。

推定ＡＤＡＭ１７モチーフに基づく様々なプロテアーゼ切断部位配列が、発現及び切断特性について評価される。具体的には、切断部位に対する－１及び＋１位置での置換（候補＃１－５）、又は配列全体にわたる置換（候補＃６－１０）を伴う、表Ａ中に提示される候補プロテアーゼ切断部位配列を調べる。様々な膜係留ドメイン配列がまた、Ｉ型膜貫通ドメイン、例えばＰＤＧＦＲ－ベータ及びＣＤ８膜貫通ドメイン配列などの使用を通じたＩ型膜貫通構造（例、Ｓ－Ｃ－ＭＴ）を含む、ならびにキメラタンパク質の方向を反転させる、例えばＩＩ型膜貫通ドメイン、例えばＮＫＧ２Ｄ及びＴＮＦＲ２などの使用を通じてＩＩ型膜貫通構造（例、ＭＴ－Ｃ－Ｓ）を構築するなどのシステムにおいて評価される。

（表Ａ）候補プロテアーゼ切断部位配列

プロテアーゼ切断部位及び膜係留ドメインの様々な組み合わせを特徴とする様々な膜切断可能なシステムについての分泌特性は、表面結合ペイロード（例、フローサイトメトリーによる表面結合ＩＬ－１５）及び分泌ペイロード（例、上清ＥＬＩＳＡによる分泌ＩＬ－１５）の分析を通して評価される。

評価される特性は、以下を含む：
－全タンパク質発現（分泌＋膜結合）
－目的の様々な細胞型、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、及びＨＥＫ２９３細胞などにおける切断効率（分泌型サイトカインｖｓ膜結合型サイトカインの比率、即ち膜放出効率）。

最適な全タンパク質発現及び所望の切断効率を示す膜切断可能なシステムが決定される。

細胞型及び細胞状態の分泌特性の決定
推定ＡＤＡＭ１７モチーフに基づく様々なプロテアーゼ切断部位配列が、異なる細胞型及び細胞状態におけるプロテアーゼ特異性及び分泌動態を含む分泌特性について評価される。具体的には、候補プロテアーゼ切断部位配列は、上に示されるように、表Ａ中に提示される配列を含む。様々な膜係留ドメイン配列がまた、Ｉ型膜貫通ドメイン、例えばＰＤＧＦＲ－ベータ及びＣＤ８膜貫通ドメイン配列などの使用を通じたＩ型膜貫通構造（例、Ｓ－Ｃ－ＭＴ）を含む、ならびにキメラタンパク質の方向を反転させる、例えばＩＩ型膜貫通ドメイン、例えばＮＫＧ２Ｄ及びＴＮＦＲ２などの使用を通じてＩＩ型膜貫通構造（例、ＭＴ－Ｃ－Ｓ）を構築するなどのシステムにおいて評価される。

プロテアーゼ切断部位及び膜係留ドメインの様々な組み合わせを特徴とする様々な膜切断可能なシステムについての分泌特性は、表面結合ペイロード（例、フローサイトメトリーによる表面結合ＩＬ－１５）及び分泌ペイロード（例、上清ＥＬＩＳＡによる分泌ＩＬ－１５）の分析を通して評価される。

評価される特性は、以下を含む：
－目的の細胞型、例えばＮＫ細胞及びＴ細胞などにおける分泌特性（例、特異性及び動態）。
－様々な細胞状態、特にプロテアーゼ発現及び／又は局在化を調節し得る細胞状態（例、＋／－ＰＭＡ又は他の活性化状態）における分泌特性（例、特異性及び動態）。

所望の調節された分泌特性を示す膜切断可能なシステムが決定される。具体的には、プロテアーゼ切断部位及び膜係留ドメインの組み合わせが決定され、目的の細胞型及び細胞状態における所望の速度でのペイロードの調節分泌（膜放出）についての分泌動態を示す。

実施例２－様々なリンカー／切断部位／膜貫通ドメインの組み合わせでの、調節されたＩＬ－１５分泌
膜切断可能なシステムのバリエーションが、表Ａ中に示されるプロテアーゼ切断部位の三つ（配列番号１８０、１８７、及び１９１）、様々なポリペプチドリンカー、様々なポリペプチドリンカー配向（即ち、切断部位に対してＮ末端のポリペプチドリンカーの及び／又は切断部位に対してＣ末端のポリペプチドリンカー）、及び二つの膜貫通ドメイン（ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＢ７－１膜貫通ドメイン）を含めて、分泌性ペイロードＩＬ－１５の分泌を調節する能力について評価された。本実施例の膜切断可能なシステムは、Ｎ末端からＣ末端方向において、Ｓ－Ｃ－ＭＴの配向を含み、それにおいて、Ｓは分泌性ペイロードを指し、Ｃはプロテアーゼ切断部位を指し、及びＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。

ＩＬ－１５分泌細胞の操作：
膜切断可能なＩＬ－１５構築物をコードするレンチウイルスベクターが、変動するリンカー、リンカー配向、及び膜貫通ドメインを伴って生成された。構築物の説明が、表Ｂ中に提供されている。

（表Ｂ）様々な膜切断可能なＩＬ－１５構築物の説明

レンチウイルスは、表Ｂ中に記載される構築物をコードする、実施例１において記載されるように産生された。初代ＮＫ細胞を、実施例１において記載される形質導入方法によりレンチウイルスで形質導入した。ＩＬ－１５膜結合発現及び分泌を、実施例１において記載されるようにアッセイした。各構築物についての膜結合発現及び分泌の関係のグラフが、図２中に提供されている。構築物ＳＢ０３５１４及びＳＢ０３５３６は、低発現レベルに起因して、グラフ中に示されていない。図２中に示されるように、各構築物についての分泌レベルは広く変動する。ＳＢ０３５１６、ＳＢ０３５１５、ＳＢ０３５３３、ＳＢ０３５１８、ＳＢ０３５１７、ＳＢ０３５３１、ＳＢ０３５３２、及びＳＢ０３５２０は、ウイルス対照（ＮＶ）なしと比較して、より高いＩＬ－１５分泌レベルを有する。これらの構築物のうち、ＳＢ０３５１５、ＳＢ０３５１７、ＳＢ０３５３２、ＳＢ０３５３１、及びＳＢ０３５１８は、最も高い分泌レベルを示した。図２中に見られるように、リンカーの種類及び配向は、分泌レベルと相関する。例えば、切断部位に対して単一のｇｌｙ－ｓｅｒリンカー（配列番号１９５）Ｃ末端（正方形のデータ点を参照のこと）を含む構築物、ならびに切断部位に対してｇｌｙ－ｓｅｒリンカー（配列番号１９５）Ｎ末端及び切断部位に対して第二のｇｌｙ－ｓｅｒリンカー（配列番号１９７）Ｃ末端を含む構築物（ひし形のデータ点を参照のこと）は、最も高い分泌レベルを有した。さらに、切断部位に対する単一のｇｌｙ－ｓｅｒリンカー（配列番号１９５）Ｎ末端（切断部位に対して第二のｇｌｙ－ｓｅｒリンカーＣ末端を伴わない）の使用は、中間分泌レベルと相関した。このように、表Ｂ中に示されるリンカーにおけるバリエーション及びリンカーの配向によって、分泌されたＩＬ－１５に結合された細胞についての所望の比率を選択する機会が提供される。

実施例３－調節されたＩＬ－１２分泌
表Ａ（配列番号１８０、１８７、及び１９１）中に示されるプロテアーゼ切断部位の三つを含む、膜切断可能なシステムのバリエーションを、ＮＫ細胞及びＴ細胞による分泌性ペイロードＩＬ－１２の分泌を調節する能力について評価した。本実施例の膜切断可能なシステムは、Ｎ末端からＣ末端方向においてＳ－Ｃ－ＭＴの配向を含んだが、それにおいて、Ｓは分泌性ペイロードを指し、Ｃはプロテアーゼ切断部位を指し、及びＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。

ＩＬ－１２分泌細胞の操作：
膜切断可能なＩＬ－１２構築物をコードするレンチウイルスベクターが生成された。構築物の説明が、表Ｃ中に提供されている。

（表Ｃ）様々な膜切断可能なＩＬ－１２構築物の説明

レンチウイルスは、実施例１において記載されるように産生され、表Ｃ中に記載される構築物をコードする。構築物ＳＢ０４１８３、ＳＢ０４１８３、及びＳＢ０４１８３は、実施例１に記載される切断部位を含む。構築物ＳＢ０４１８４は、ＣＤ１６にとって天然であるＡＤＡＭ１７切断部位を含む。初代ＮＫ細胞を増殖させ、次に、実施例１において記載される形質導入方法によりレンチウイルスで形質導入した。ＩＬ－１２膜結合発現及び分泌を、実施例１において記載されるようにアッセイした。図３Ａ中に示されるように、高レベルの膜結合ＩＬ－１２発現（細胞の少なくとも９０％が陽性）が、構築物ＳＢ０４８１２、ＳＢ０４１８４、及びＳＢ０４１８５を伴うＮＫ細胞において達成された。加えて、初代Ｔ細胞を、実施例１中に記載される形質導入方法によりレンチウイルスで形質導入した。図３Ｂ中に示されるように、低～中等度の膜結合ＩＬ－１２発現（約２０％から約１５％の陽性細胞）を、全ての構築物を用いてＴ細胞において達成した。図３Ｃ中に示されるように、高レベルのＩＬ－１２分泌（少なくとも５０，０００ｐｇ／ｍｌ）を、構築物ＳＢ０４１８２及びＳＢ０４１８４について、形質導入後３日及び形質導入後４日にＮＫ細胞において達成した。構築物ＳＢ０４１８５については、５０，０００ｐｇ／ｍＬを上回る、分泌されたＩＬ－１２を、形質導入後４日に測定した。加えて、測定可能な量のＩＬ－１２が、構築物ＳＢ０４１８２及びＳＢ０４１８４を用いてＴ細胞から分泌された。

実施例４－調節されたＩＬ－１５分泌
配列番号１９１のプロテアーゼ切断部位を含む、膜切断可能なシステムのバリエーションを、分泌性ＩＬ－１５ペイロードの分泌を調節する能力について評価した。本実施例の膜切断可能なシステムは、Ｎ末端からＣ末端方向においてＳ－Ｃ－ＭＴの配向を含んだが、それにおいて、Ｓは分泌性ペイロードを指し、Ｃはプロテアーゼ切断部位を指し、及びＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。

二重発現構築物が生成され、それは、膜切断可能なシステムに動作可能に連結された第一のプロモーター、及びキメラ抗原受容体に動作可能に連結された第二のプロモーターを含む。構築物の説明が、表Ｄ中提供されている。

（表Ｄ）様々な膜切断可能なＩＬ－１５構築物の説明

レンチウイルスは、実施例１において記載されるように産生され、表Ｄ中に記載される構築物をコードする。初代、ドナー由来ＮＫ細胞（ＩＬ－１５／ＩＬ－２１発現フィーダー細胞で増殖）を、各ウイルスで形質導入した（又は対照として形質導入しなかった）。次に、形質導入後の１８日に、ＮＫ細胞を、ＣＡＲの標的抗原を発現する標的細胞との共培養により活性化した（二つの異なる標的細胞株、「標的細胞１」及び「標的細胞２」を使用した）。活性化後の２４時間に、ＩＬ－１５膜結合発現及び分泌を、実施例１において記載されるようにアッセイした。図４Ａ中に示されるように、膜結合ＩＬ－１５発現は、活性化後２４時間に検出可能であった。次に、分泌レベルを、活性化後２４時間、４８時間、及び７２時間で、実施例１において記載されるようにアッセイした。図４Ｂ中に示されるように、全ての構築物によって、２４時間の時間点後に、分泌されたＩＬ－１５における増加が達成された。さらに、三つの構築物のうち、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒｓｕｈｉ構築物によって、最高レベルの分泌が達成された。

他の配列
ＨＩＶ－１プロテアーゼ（配列番号１４４）：PQVTLWQRPLVTIKIGGQLKEALLDTGADDTVLEEMSLPGRWKPKMIGGIGGFIKVRQYDQILIEICGHKAIGTVLVGPTPVNIIGRNLLTQIGCTLNF
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）（配列番号１５６）：
MGAASGRRGPGLLLPLPLLLLLPPQPALALDPGLQPGNFSADEAGAQLFAQSYNSSAEQVLFQSVAASWAHDTNITAENARRQEEAALLSQEFAEAWGQKAKELYEPIWQNFTDPQLRRIIGAVRTLGSANLPLAKRQQYNALLSNMSRIYSTAKVCLPNKTATCWSLDPDLTNILASSRSYAMLLFAWEGWHNAAGIPLKPLYEDFTALSNEAYKQDGFTDTGAYWRSWYNSPTFEDDLEHLYQQLEPLYLNLHAFVRRALHRRYGDRYINLRGPIPAHLLGDMWAQSWENIYDMVVPFPDKPNLDVTSTMLQQGWNATHMFRVAEEFFTSLELSPMPPEFWEGSMLEKPADGREVVCHASAWDFYNRKDFRIKQCTRVTMDQLSTVHHEMGHIQYYLQYKDLPVSLRRGANPGFHEAIGDVLALSVSTPEHLHKIGLLDRVTNDTESDINYLLKMALEKIAFLPFGYLVDQWRWGVFSGRTPPSRYNFDWWYLRTKYQGICPPVTRNETHFDAGAKFHVPNVTPYIRYFVSFVLQFQFHEALCKEAGYEGPLHQCDIYRSTKAGAKLRKVLQAGSSRPWQEVLKDMVGLDALDAQPLLKYFQPVTQWLQEQNQQNGEVLGWPEYQWHPPLPDNYPEGIDLVTDEAEASKFVEEYDRTSQVVWNEYAEANWNYNTNITTETSKILLQKNMQIANHTLKYGTQARKFDVNQLQNTTIKRIIKKVQDLERAALPAQELEEYNKILLDMETTYSVATVCHPNGSCLQLEPDLTNVMATSRKYEDLLWAWEGWRDKAGRAILQFYPKYVELINQAARLNGYVDAGDSWRSMYETPSLEQDLERLFQELQPLYLNLHAYVRRALHRHYGAQHINLEGPIPAHLLGNMWAQTWSNIYDLVVPFPSAPSMDTTEAMLKQGWTPRRMFKEADDFFTSLGLLPVPPEFWNKSMLEKPTDGREVVCHASAWDFYNGKDFRIKQCTTVNLEDLVVAHHEMGHIQYFMQYKDLPVALREGANPGFHEAIGDVLALSVSTPKHLHSLNLLSSEGGSDEHDINFLMKMALDKIAFIPFSYLVDQWRWRVFDGSITKENYNQEWWSLRLKYQGLCPPVPRTQGDFDPGAKFHIPSSVPYIRYFVSFIIQFQFHEALCQAAGHTGPLHKCDIYQSKEAGQRLATAMKLGFSRPWPEAMQLITGQPNMSASAMLSYFKPLLDWLRTENELHGEKLGWPQYNWTPNSARSEGPLPDSGRVSFLGLDLDAQQARVGQWLLLFLGIALLVATLGLSQRLFSIRHRSLHRHSHGPQFGSEVELRHS
DENV NS3pro(NS2B/NS3) >sp|P33478|1475-2093（配列番号１５７）：
SGVLWDTPSPPEVERAVLDDGIYRIMQRGLLGRSQVGVGVFQDGVFHTMWHVTRGAVLMYQGKRLEPSWASVKKDLISYGGGWRFQGSWNTGEEVQVIAVEPGKNPKNVQTAPGTFKTPEGEVGAIALDFKPGTSGSPIVNREGKIVGLYGNGVVTTSGTYVSAIAQAKASQEGPLPEIEDEVFRKRNLTIMDLHPGSGKTRRYLPAIVREAIRRNVRTLILAPTRVVASEMAEALKGMPIRYQTTAVKSEHTGKEIVDLMCHATFTMRLLSPVRVPNYNMIIMDEAHFTDPASIARRGYISTRVGMGEAAAIFMTATPPGSVEAFPQSNAVIQDEERDIPERSWNSGYEWITDFPGKTVWFVPSIKSGNDIANCLRKNGKRVIQLSRKTFDTEYQKTKNNDWDYVVTTDISEMGANFRADRVIDPRRCLKPVILKDGPERVILAGPMPVTVASAAQRRGRIGRNQNKEGDQYVYMGQPLNNDEDHAHWTEAKMLLDNINTPEGIIPALFEPEREKSAAIDGEYRLRGEARKTFVELMRRGDLPVWLSYKVASEGFQYSDRRWCFDGERNNQVLEENMDVEMWTKEGERKKLRPRWLDARTYSDPLALREFKEFAAGRR
DENV NS3pro(NS2B/NS3) >sp|P14340|1476-2093（配列番号１５８）：
AGVLWDVPSPPPVGKAELEDGAYRIKQKGILGYSQIGAGVYKEGTFHTMWHVTRGAVLMHKGKRIEPSWADVKKDLISYGGGWKLEGEWKEGEEVQVLALEPGKNPRAVQTKPGLFKTNAGTIGAVSLDFSPGTSGSPIIDKKGKVVGLYGNGVVTRSGAYVSAIAQTEKSIEDNPEIEDDIFRKRKLTIMDLHPGAGKTKRYLPAIVREAIKRGLRTLILAPTRVVAAEMEEALRGLPIRYQTPAIRAEHTGREIVDLMCHATFTMRLLSPVRVPNYNLIIMDEAHFTDPASIAARGYISTRVEMGEAAGIFMTATPPGSRDPFPQSNAPIMDEEREIPERSWSSGHEWVTDFKGKTVWFVPSIKAGNDIAACLRKNGKKVIQLSRKTFDSEYVKTRTNDWDFVVTTDISEMGANFKAERVIDPRRCMKPVILTDGEERVILAGPMPVTHSSAAQRRGRIGRNPKNENDQYIYMGEPLENDEDCAHWKEAKMLLDNINTPEGIIPSMFEPEREKVDAIDGEYRLRGEARKTFVDLMRRGDLPVWLAYRVAAEGINYADRRWCFDGIKNNQILEENVEVEIWTKEGERKKLKPRWLDAKIYSDPLALKEFKEFAAGRK
DENV NS3pro(NS2B/NS3) >sp|Q99D35|1474-2092（配列番号１５９）：
SGVLWDVPSPPETQKAELEEGVYRIKQQGIFGKTQVGVGVQKEGVFHTMWHVTRGAVLTHNGKRLEPNWASVKKDLISYGGGWRLSAQWQKGEEVQVIAVEPGKNPKNFQTMPGIFQTTTGEIGAIALDFKPGTSGSPIINREGKVVGLYGNGVVTKNGGYVSGIAQTNAEPDGPTPELEEEMFKKRNLTIMDLHPGSGKTRKYLPAIVREAIKRRLRTLILAPTRVVAAEMEEALKGLPIRYQTTATKSEHTGREIVDLMCHATFTMRLLSPVRVPNYNLIIMDEAHFTDPASIAARGYISTRVGMGEAAAIFMTATPPGTADAFPQSNAPIQDEERDIPERSWNSGNEWITDFVGKTVWFVPSIKAGNDIANCLRKNGKKVIQLSRKTFDTEYQKTKLNDWDFVVTTDISEMGANFKADRVIDPRRCLKPVILTDGPERVILAGPMPVTVASAAQRRGRVGRNPQKENDQYIFMGQPLNKDEDHAHWTEAKMLLDNINTPEGIIPALFEPEREKSAAIDGEYRLKGESRKTFVELMRRGDLPVWLAHKVASEGIKYTDRKWCFDGERNNQILEENMDVEIWTKEGEKKKLRPRWLDARTYSDPLALKEFKDFAAGRK
DENV NS3pro(NS2B/NS3) >sp|Q5UCB8|1475-2092（配列番号１６０）：
SGALWDVPSPAATQKAALSEGVYRIMQRGLFGKTQVGVGIHIEGVFHTMWHVTRGSVICHETGRLEPSWADVRNDMISYGGGWRLGDKWDKEEDVQVLAIEPGKNPKHVQTKPGLFKTLTGEIGAVTLDFKPGTSGSPIINRKGKVIGLYGNGVVTKSGDYVSAITQAERIGEPDYEVDEDIFRKKRLTIMDLHPGAGKTKRILPSIVREALKRRLRTLILAPTRVVAAEMEEALRGLPIRYQTPAVKSEHTGREIVDLMCHATFTTRLLSSTRVPNYNLIVMDEAHFTDPSSVAARGYISTRVEMGEAAAIFMTATPPGTTDPFPQSNSPIEDIEREIPERSWNTGFDWITDYQGKTVWFVPSIKAGNDIANCLRKSGKKVIQLSRKTFDTEYPKTKLTDWDFVVTTDISEMGANFRAGRVIDPRRCLKPVILPDGPERVILAGPIPVTPASAAQRRGRIGRNPAQEDDQYVFSGDPLKNDEDHAHWTEAKMLLDNIYTPEGIIPTLFGPEREKTQAIDGEFRLRGEQRKTFVELMRRGDLPVWLSYKVASAGISYKDREWCFTGERNNQILEENMEVEIWTREGEKKKLRPKWLDARVYADPMALKDFKEFASGRK
PEST（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー；配列番号１６１）
LQMLPESEDEESYDTESEFTEFTEDELPYDDGSLQMLPESEDEESYDTESEFTEFTEDELPYDD
GRR（ヒトｐ１０５の残基３５２－４０８；配列番号１６２）：
EIKDKEEVQRKRQKLMPNFSDSFGGGSGAGAGGGGMFGSGGGGGGTGSTGPGYSFPH
DRR（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０－２９５；配列番号１６３）：
IDDENGSVILQDDDYDDGNNHIPFEDDDVYNYNDNDDDDERIEFEDDDDDDDDSIDNDSVMDRKQPHKAEDESEDVEDVERVSKKD
SNS（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２；例、配列番号１６４）：
PESMREEYRKEGSKRIKCPDCEPFCNKRGSPESMREEYRKE
RPB（酵母ＲＰＢの残基１６８８－１７０２の四つのコピー；配列番号１６５）：
RSYSPTSPNYSPTSPSGSYSPTSPNYSPTSPSGGSRSYSPTSPNYSPTSPSGSYSPTSPNYSPTSPSG
SPmix（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（インフルエンザＡウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２；配列番号１６６）：
PESMREEYRKEGSSLLTEVETPGSPESMREEYRKEGSSLLTEVETPGSPESMREEYRKE
NS2（インフルエンザＡウイルスＮＳタンパク質の残基７９－９３の三つのコピー；配列番号１６７）：
LIEEVRHRLKTTENSGSLIEEVRHRLKTTENSGSLIEEVRHRLKTTENSGS
ODC（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６－１４２、配列番号１６８）：
FPPEVEEQDDGTLPMSCAQESGMDRHPAACASARINV
マウスＯＤＣ（残基４２２－４６１；配列番号１６９）：
SHGFPPEVEEQAAGTLPMSCAQESGMDRHPAACASARINV
SB03513（配列番号２１０）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSDEPHYSQRRLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03514（配列番号２１１）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSVTPEPIFSLILLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03515（配列番号２１２）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSDEPHYSQRRSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03516（配列番号２１３）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSVTPEPIFSLISGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03517（配列番号２１４）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGGSGGGGSGDEPHYSQRRGGGSGGGGSGGGSLQLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03518（配列番号２１５）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGGSGGGGSGVTPEPIFSLIGGGSGGGGSGGGSLQLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03519（配列番号２１６）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQDEPHYSQRRLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
SB03520（配列番号２１７）
AATMDWTWILFLVAAATRVHSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQVTPEPIFSLILLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRERRRNERLRRESVRPV
５Ｘ ＮＦＡＴ ｍｉｎＡＤＥＰプロモーター（配列番号２１８）
GGGACTTTCCACTGGGGACTTTCCACTGGGGACTTTCCACTGGGGACTTTCCACTGGGGACTTTCCACTCCTGCAGGagctGGCGCGCCAGACGCTAGCGGGGGGCTATAAAAGGGGGTGGGGGCGTTCGTCCTCACTCT

解釈
本明細書中に開示される全ての参考文献、特許、及び特許出願は、その各々が引用される主題に関して参照により組み入れられ、それらは、一部の場合では、文書の全体を包含し得る。

本明細書及び特許請求の範囲において本明細書中で使用される不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、反対に明確に示されない場合、「少なくとも一つ」を意味すると理解されるべきである。

反対に明確に示されない場合、二つ以上の工程又は行為を含む、本明細書中で請求される任意の方法において、方法の工程又は行為の順序が、方法の工程又は行為が、記載されている順序に必ずしも限定されないことも理解すべきである。

特許請求の範囲において、ならびに上の明細書において、全ての移行句、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「運ぶ（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「で構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」など、及び同様のものが、無制限である、即ち、含むが、限定されないことを意味すると理解すべきである。移行句「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ」（からなる）及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」（から本質的になる）のみが、米国特許庁特許審査手続マニュアルのセクション２１１１．０３において記載されているように、それぞれクローズド又はセミクローズドの移行句であるものとする。

一部の態様では、エフェクタードメインは、以下からなる群から選択される：単純ヘルペスウイルスタンパク質 １６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーを含む活性化ドメイン、ＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン－バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメイン（ＶＰＲ活性化ドメイン）を含むトリパータイトアクチベーター；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ ＨＡＴコア活性化ドメイン）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷ（配列番号２２４）モチーフ、このモチーフはＷＲＰＷ（配列番号２２４）抑制ドメインとして公知である；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン。

一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の態様では、第一の領域は、第二の領域のＮ末端に位置する。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む。

一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の態様では、第一の領域は、第二の領域のＮ末端に位置する。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ１Ｘ２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む。

また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される操作されたウイルスのいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかの治療有効用量を投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、操作されたウイルスは、対象において細胞に感染して、発現カセットを発現する。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイント阻害剤は、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。
[本発明１００１]
Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ
を有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
ここで、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、
膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００２]
前記分泌性エフェクター分子が、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含み、場合により、前記シグナルペプチドが、前記分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含み、又は前記シグナルペプチドが、非天然シグナルペプチドを含み、又は前記シグナルアンカー配列が、前記分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含み、場合により、前記非天然シグナルペプチド又は前記非天然シグナルアンカー配列が、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、本発明１００１の膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００３]
前記分泌性エフェクター分子が治療クラスから選択され、前記治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択され、場合により、前記サイトカインが、ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択され、場合により、前記ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択され、場合により、前記ホーミング分子が、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２からなる群から選択され、場合により、前記成長因子が、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択され、場合により、前記共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択され、場合により、前記腫瘍微小環境修飾因子が、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択され、場合により、前記ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、場合により、前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択され、又は、場合により、前記ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、もしくはそれらの組み合わせを含む、本発明１００１又は本発明１００２の膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００４]
前記分泌性エフェクター分子が、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、本発明１００１～１００３のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００５]
前記プロテアーゼ切断部位が、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼからなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である、本発明１００１～１００４のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００６]
前記プロテアーゼ切断部位が、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能であり、場合により、前記プロテアーゼ切断部位が、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域及び／又はＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含み、場合により、前記第一の領域が、前記第二の領域に対してＮ末端に位置する、本発明１００１～１００５のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００７]
前記プロテアーゼ切断部位が、ＰＲＡＥＸ _１ Ｘ _２ ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
Ｘ _１ は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
Ｘ _２ は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、
本発明１００１～１００６のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００８]
ａ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含み、又は
ｂ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含み、又は
ｃ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含み、又は
ｄ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含み、又は
ｅ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含み、又は
ｆ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含み、又は
ｇ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含み、又は
ｈ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含み、又は
ｉ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含み、又は
ｊ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含み、又は
ｋ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含み、又は
ｌ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含み、又は
ｍ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、
本発明１００１～１００７のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１００９]
前記細胞膜係留ドメインが、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含み、場合により、前記膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来し、場合により、前記細胞膜係留ドメインが、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、本発明１００１～１００８のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１０１０]
前記細胞膜係留ドメインが、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むように前記キメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、前記翻訳後修飾タグが、細胞膜との会合が可能であり、場合により、前記翻訳後修飾タグが脂質アンカードメインを含み、場合により、前記脂質アンカードメインが、ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグからなる群から選択される、本発明１００１～１００９のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１０１１]
ａ．細胞中で発現した場合、前記分泌性エフェクター分子は、前記細胞の細胞膜に係留され、かつ／又は
ｂ．前記プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、前記分泌性エフェクター分子が、前記細胞膜から放出され、かつ／又は
ｃ．前記細胞膜上で発現する前記プロテアーゼが、前記細胞に対して内因性であり、かつ／又は
ｄ．前記プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、
本発明１００１～１０１０のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質。
[本発明１０１２]
プロモーターと、本発明１００１～１０１１のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む、操作された核酸であって、場合により、前記プロモーターが、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織特異的プロモーター、及び合成プロモーターからなる群から選択される、操作された核酸。
[本発明１０１３]
本発明１０１２の操作された核酸を含む、発現ベクター。
[本発明１０１４]
本発明１００１～１０１１のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質、本発明１０１２の操作された核酸、又は本発明１０１３の発現ベクターを含む、単離細胞。
[本発明１０１５]
前記細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、本発明１０１４の単離細胞。
[本発明１０１６]
前記細胞が、前記プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含み、場合により、前記プロテアーゼが内因性プロテアーゼであり、かつ／又は、場合により、前記内因性プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、本発明１０１４又は本発明１０１５の単離細胞。
[本発明１０１７]
前記細胞が抗原認識受容体をさらに含み、場合により、前記抗原認識受容体がＣＡＲである、本発明１０１４～１０１６のいずれかの単離細胞。
[本発明１０１８]
本発明１００１～１０１１のいずれかの膜切断可能なキメラタンパク質、本発明１０１２の操作された核酸、本発明１０１３の発現ベクター、又は本発明１０１４～１０１７のいずれかの単離細胞、及び、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、又はそれらの組み合わせを含む、組成物。
[本発明１０１９]
以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：
本発明１０１４～１０１７のいずれかの単離細胞又は本発明１０１８の組成物のいずれかの治療有効用量を投与すること。
[本発明１０２０]
以下を含む、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法：
（ａ）本発明１０１４～１０１７のいずれかの細胞を提供すること、及び
（ｂ）前記膜結合プロテアーゼ及び前記膜切断可能なキメラタンパク質の発現に適した条件下で前記細胞を培養することであって、
発現時に、前記膜切断可能なキメラタンパク質は、前記細胞の細胞膜に係留され、かつ
発現時に、前記膜結合プロテアーゼは、前記膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより前記分泌性エフェクター分子を前記細胞膜から放出する、
こと。

一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む。一部の実施形態では、第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、それにおいて、Ｘ_１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ_２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、それにおいて、Ｘ_１はＡ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、それにおいて、Ｘ_２はＶ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む。

プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＣ末端であり得る。プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＮ末端であり得る。一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、プロテアーゼ切断部位は、以下のいずれかである：（１）分泌性エフェクター分子のＣ末端及び細胞膜係留ドメインのＮ末端（言い換えれば、プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子と細胞膜係留ドメインの間にある）；又は（２）分泌性エフェクター分子のＮ末端及び細胞膜係留ドメインのＣ末端（また、分泌性エフェクター分子と、ドメイン配向が反転した細胞膜係留ドメインの間にある）。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的にはエフェクター分子又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、分泌性エフェクター分子に接続されることができる。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的には細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞膜係留ドメインに接続されることができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号２２０］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号２２１）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２２２）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２３）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加的な、例示的なポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。

（表４Ｂ）同族切断部位及び阻害剤を伴う例示的なプロテアーゼ

一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、細胞膜係留ドメインは、以下のいずれかである：（１）存在する場合、プロテアーゼ切断部位のＣ末端及び任意の細胞内ドメインのＮ末端（言い換えれば、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位と、存在する場合、細胞内ドメインの間にある）、又は（２）存在する場合、プロテアーゼ切断部位のＮ末端と任意の細胞内ドメインのＣ末端（また、プロテアーゼ切断部位と、存在する場合、ドメイン配向が反転した細胞内ドメインの間）。キメラタンパク質と会合されたデグロンを特徴とする実施形態では、デグロンドメインは、具体的には、細胞膜係留に対して（言い換えれば、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位とデグロンの間にある）、末端細胞質指向ドメインである。細胞膜係留ドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、プロテアーゼ切断部位に接続することができる。細胞膜係留ドメインは、存在する場合、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又は細胞内ドメインの一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞内ドメインに接続することができる。細胞膜係留ドメインは、存在する場合、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はデグロンの一部とは考えられないポリペプチド配列により、デグロンに接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号２２０］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号２２１）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２２２）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２３）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。

本明細書中に記載されるキメラタンパク質は、デグロンドメイン（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質については、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ又はＤ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ中で「Ｄ」として言及される）を含むことができる。ＩＭｉＤの非存在において、キメラタンパク質のデグロン／ユビキチン媒介性分解は生じない。細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられ、エフェクター分子が細胞外空間中に放出される（「分泌される」）ようにする。免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）の存在において、デグロンドメインは、キメラタンパク質のユビキチン媒介性分解を方向付け、エフェクター分子の分泌が低下又は排除されるようにする。一般的に、デグロンドメインに融合された膜切断可能なキメラタンパク質については、デグロンドメインは、具体的には、細胞膜係留ドメイン、例えば、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中の最もＣ末端のドメイン又は式Ｄ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ中の最もＮ末端のドメインに対して、末端細胞質指向ドメインである。デグロンドメインは、ポリペプチドリンカーにより細胞膜係留ドメイン、即ち、一般的には細胞膜係留ドメイン又はデグロンドメインの一部とはみなされないポリペプチド配列に接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号２２０］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号２２１）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２２２）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２３）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。一般的に、デグロンは、細胞膜係留ドメインに関連して配向され、デグロンは、細胞膜への局在化後にサイトゾルに曝露され、デグロンドメインが分解（例、サイトゾル及びサイトゾルへの曝露）を媒介することが可能であり、ユビキチン媒介性分解を媒介することが可能であるようにする。

デグロン融合タンパク質については、デグロンドメインは、目的のタンパク質のＮ末端又はＣ末端、例えば、エフェクター分子であることができる。デグロンドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に目的のタンパク質又はデグロンドメインの一部とは考えられないポリペプチド配列により、目的のタンパク質に接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］_４ＧＧ ［配列番号２２０］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_３Ａ（配列番号２２１）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２２２）、ｅＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２３）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。追加のポリペプチドリンカーは、配列番号 １９４、配列番号 １９５、配列番号１９６、及び配列番号 １９７を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。ポリペプチドリンカーは、切断可能、例えば、本明細書中に記載されるプロテアーゼ切断部位のいずれかであり得る。

ＡＣＰはまた、エフェクタードメイン、例えば転写エフェクタードメインなどをさらに含み得る。例えば、転写エフェクタードメインは、転写因子のエフェクタードメイン又はアクチベータードメインであり得る。転写因子活性化ドメインはまた、トランス活性化ドメインとして公知であり、遺伝子の転写を活性化又は抑制するように作用するタンパク質、例えば転写共調節因子などの骨格ドメインとして作用する。任意の適切な転写エフェクタードメインは、ＡＣＰにおいて使用され得るが、限定されないが、単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーからなる活性化ドメインであるＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン・バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメインを含むトリパータイトアクチベーター（トリパータイトアクチベーターは、ＶＰＲ活性化ドメインとして公知である）；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ＨＡＴコア活性化ドメインとして公知である）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷ（配列番号２２４）モチーフ（このモチーフはＷＲＰＷ（配列番号２２４）抑制ドメインとして公知である）；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、エフェクタードメインは、以下から選択される転写エフェクタードメインである：単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーからなる活性化ドメインであるＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン・バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメインを含むトリパータイトアクチベーター（トリパータイトアクチベーターは、ＶＰＲ活性化ドメインとして公知である）；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ＨＡＴコア活性化ドメインとして公知である）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷ（配列番号２２４）モチーフ（このモチーフはＷＲＰＷ（配列番号２２４）抑制ドメインとして公知である）；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメインである。

追加の実施形態
１．Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと、膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む操作された核酸であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている、操作された核酸。
２．プロモーターは、構成的プロモーターである、実施形態１の操作された核酸。
３．構成的プロモーターは、以下からなる群：ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂから選択される、実施形態２の操作された核酸。
４．プロモーターは誘導性プロモーターである、実施形態１～３のいずれか一つの操作された核酸。
５．誘導性プロモーターは、以下からなる群：ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント １、ＳＲＦ応答エレメント ２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答エレメント、及びそのタンデムリピートから選択される応答エレメントを含む、実施形態４の操作された核酸。
６．プロモーターは合成プロモーターを含む、実施形態１～５のいずれか一つの操作された核酸。
７．合成プロモーターは、最小プロモーター及び、最小プロモーターに対して異種である少なくとも一つの調節エレメントを含む、実施形態６の操作された核酸。
８．少なくとも一つの調節エレメントは、活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）結合ドメイン配列及びプロモーター配列を含む、実施形態７の操作された核酸。
９．ＡＣＰ結合ドメインは、一つ又は複数のジンクフィンガー結合部位を含む、実施形態８の操作された核酸。
１０．合成プロモーターは、合成プロモーターのＡＣＰ結合ドメインに結合する活性化－条件付き対照ポリペプチド（ＡＣＰ）により調節可能である、実施形態８又は９の操作された核酸。
１１．ＡＣＰは転写モジュレーターである、実施形態１０の操作された核酸。
１２．ＡＣＰは転写リプレッサーである、実施形態１０又は実施形態１１の操作された核酸。
１３．ＡＣＰは転写アクチベーターである、実施形態１０又は実施形態１１の操作された核酸。
１４．ＡＣＰは、抑制性プロテアーゼ、及び抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位をさらに含む、実施形態１０～１３のいずれか一つの操作された核酸。
１５．ＡＣＰは、エストロゲン受容体のホルモン結合ドメイン（ＥＲＴ２ドメイン）をさらに含む、実施形態１０～１４のいずれか一つの操作された核酸。
１６．ＡＣＰは転写因子である、実施形態１０～１４のいずれか一つの操作された核酸。
１７．転写因子はジンクフィンガー含有転写因子である、実施形態１６の操作された核酸。
１８．ＡＣＰは、ＤＮＡ結合ジンクフィンガータンパク質ドメイン（ＺＦタンパク質ドメイン）及び転写エフェクタードメインを含む、実施形態１０～１７のいずれか一つの操作された核酸。
１９．ＺＦタンパク質ドメインは、モジュラー設計であり、ジンクフィンガーアレイ（ＺＦＡ）で構成される、実施形態１８の操作された核酸。
２０．ＺＦタンパク質ドメインは、１から１０のＺＦＡを含む、実施形態１９の操作された核酸。
２１．エフェクタードメインは、以下からなる群から選択される：単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化ドメイン；ＶＰ１６の四つのタンデムコピーを含む活性化ドメイン、ＶＰ６４活性化ドメイン；ＮＦκＢのｐ６５活性化ドメイン；エプスタイン－バーウイルスＲトランスアクチベーター（Ｒｔａ）活性化ドメイン；ＶＰ６４、ｐ６５、及びＲｔａ活性化ドメイン（ＶＰＲ活性化ドメイン）を含むトリパータイトアクチベーター；ヒトＥ１Ａ関連タンパク質ｐ３００のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）コアドメイン（ｐ３００ ＨＡＴコア活性化ドメイン）；クルッペル関連ボックス（ＫＲＡＢ）抑制ドメイン；リプレッサーエレメントサイレンシング転写因子（ＲＥＳＴ）抑制ドメイン；ヘアリー関連の塩基性ヘリックス－ループ－ヘリックスリプレッサータンパク質のＷＲＰＷ（配列番号２２４）モチーフ、このモチーフはＷＲＰＷ（配列番号２２４）抑制ドメインとして公知である；ＤＮＡ（シトシン－５）－メチルトランスフェラーゼ３Ｂ（ＤＮＭＴ３Ｂ）抑制ドメイン；及びＨＰ１アルファクロモシャドウ抑制ドメイン、実施形態１８～２０のいずれか一つの操作された核酸。
２２．抑制性プロテアーゼの一つ又は複数の同族切断部位は、ＺＦタンパク質ドメインとエフェクタードメインの間に局在化している、実施形態１４～２１のいずれか一つの操作された核酸。
２３．抑制性プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１４～２２のいずれか一つの操作された核酸。
２４．同族切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態２３の操作された核酸。
２５．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態２４の操作された核酸。
２６．ＮＳ３プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態２３～２５のいずれか一つの操作された核酸。
２７．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態２６の操作された核酸。
２８．ＡＣＰは、タモキシフェン又はその代謝物へのＥＲＴ２ドメインの結合時に核局在化を受けることが可能である、実施形態１５～２７のいずれか一つの操作された核酸。
２９．タモキシフェン代謝物は、以下からなる群：４－ヒドロキシタモキシフェン、Ｎ－デスメチルタモキシフェン、タモキシフェン－Ｎ－オキシド、及びエンドキシフェンから選択される、実施形態２８の操作された核酸。
３０．ＡＣＰは、デグロンドメインをさらに含み、デグロンドメインは、ＡＣＰに動作可能に連結されている、実施形態１０～２９のいずれか一つの操作された核酸。
３１．デグロンドメインは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２－４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０－２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８－１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（インフルエンザＡウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（インフルエンザＡウイルスＮＳタンパク質の残基７９－９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチン脱炭酸酵素の残基１０６－１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２－４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａの点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２－４６１）、ＡＰＣ／Ｃ デグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎデグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン 、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存性ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳリン酸依存性デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、及びＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、実施形態３０の操作された核酸。
３２．デグロンドメインは、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）に応答してＣＲＢＮに結合することが可能なセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを含み、それにより、ＡＣＰのユビキチン経路媒介性分解を促進する、実施形態３０の操作された核酸。
３３．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片から選択される、実施形態３２の操作された核酸。
３４．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、実施形態３２の操作された核酸。
３５．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭＶＨＫＲＳＨＴＧＥＲＰＬＱＣＥＩＣＧＦＴＣＲＱＫＧＮＬＬＲＨＩＫＬＨＴＧＥＫＰＦＫＣＨＬＣＮＹＡＣＱＲＲＤＡＬのアミノ酸配列（配列番号１７５）を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、実施形態３２の操作された核酸。
３６．ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である、実施形態３２～３５のいずれか一つの操作された核酸。
３７．ＩＭｉＤは、以下からなる群：サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドから選択される、実施形態３２～３６のいずれか一つの操作された核酸。
３８．デグロンドメインは、抑制性プロテアーゼのＮ末端、抑制性プロテアーゼのＣ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＮ末端、ＺＦタンパク質ドメインのＣ末端、エフェクタードメインのＮ末端、又はエフェクタードメインのＣ末端である、実施形態３０～３７のいずれか一つの操作された核酸。
３９．プロモーターは、組織特異的プロモーターである、実施形態１～３８のいずれか一つの操作された核酸。
４０．分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態１～３９のいずれか一つの操作された核酸。
４１．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態４０の操作された核酸。
４２．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態４０の操作された核酸。
４３．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態４２の操作された核酸。
４４．分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４５．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
４６．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５，ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
４８．分泌性エフェクター分子が、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の操作された核酸。
４９．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
５０．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態４９の操作された核酸。
５１．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１～４３のいずれか一つの操作された核酸。
５２．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態５１の操作された核酸。
５３．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５４．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５５．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５６．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５７．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態４４の操作された核酸。
５８．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態５７の操作された核酸。
５９．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態５７の操作された核酸。
６０．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態５７の操作された核酸。
６１．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態１～６０のいずれか一つの操作された核酸。
６２．プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：プロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７ プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択される、実施形態１～６１のいずれか一つの操作された核酸。
６３．プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態１～６２のいずれか一つの操作された核酸。
６４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１～６３のいずれか一つの操作された核酸。
６５．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態６４の操作された核酸。
６６．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態６５の操作された核酸。
６７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
６８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ、
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
６９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１～６８のいずれか一つの操作された核酸。
７７．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
７８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
７９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８０．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８１．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８２．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１～６６のいずれか一つの操作された核酸。
８３．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態１～８２のいずれか一つの操作された核酸。
８４．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態８３の操作された核酸。
８５．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態１～８４のいずれか一つの操作された核酸。
８６．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグから選択される、実施形態８５の操作された核酸であって、それにおいて、
８７．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態１～８４のいずれか一つの操作された核酸。
８８．細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される、実施形態１～８７のいずれか一つの操作された核酸。
８９．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は細胞膜から放出される、実施形態８８の操作された核酸。
９０．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態８９の操作された核酸。
９１．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態９０の操作された核酸。
９２．プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態９１の操作された核酸。
９３．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態８９の操作された核酸。
９４．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態９３の操作された核酸。
９５．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態９４の操作された核酸。
９６．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態９５の操作された核酸。
９７．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態８９～９６のいずれか一つの操作された核酸。
９８．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態９７の操作された核酸。
９９．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は調節が可能である、実施形態８９～９８のいずれか一つの操作された核酸。
１００．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態９９の操作された核酸。
１０１．操作された核酸は、以下からなる群：ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドから選択される一本鎖又は二本鎖核酸である、実施形態１～１００のいずれか一つの操作された核酸。
１０２．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸を含む発現ベクター。
１０３．発現ベクターはウイルスベクターである、実施形態１０２の発現ベクター。
１０４．ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである、実施形態１０３の発現ベクター。
１０５．Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、膜切断可能なキメラタンパク質。
１０６．分泌性エフェクター分子はシグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態１０５のキメラタンパク質。
１０７．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態１０６のキメラタンパク質。
１０８．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態１０６のキメラタンパク質。
１０９．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態１０８のキメラタンパク質。
１１０．分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態１０５～１０９のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１１．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１１２．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５，ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１０５～１１１のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１３．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態１１２のキメラタンパク質。
１１４．分泌性エフェクター分子は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、実施形態１１３のキメラタンパク質。
１１５．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態１１３のキメラタンパク質。
１１６．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態１１５のいずれか一つのキメラタンパク質。
１１７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態１１２のキメラタンパク質。
１１８．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態１１７のキメラタンパク質。
１１９．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２０．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２１．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２２．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２３．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態１１０のキメラタンパク質。
１２４．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２５．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２６．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１２３のキメラタンパク質。
１２７．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態１０５～１２６のいずれか一つのキメラタンパク質。
１２８．プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択されるプロテアーゼにより切断可能である、実施形態１０５～１２７のいずれか一つのキメラタンパク質。
１２９．プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態１０５～１２８のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１０５～１２９のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３１．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態１３０のキメラタンパク質。
１３２．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態１３１のキメラタンパク質。
１３３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１３９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１０５～１３４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４３．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４６．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４７．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４８．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１０５～１３２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１４９．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態１０５～１４８のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５０．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態１４９のキメラタンパク質。
１５１．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態１０５～１５０のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５２．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群から選択される：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグ、実施形態１５１のキメラタンパク質。
１５３．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態１０５～１５２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５４．細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される、実施形態１０５～１５３のいずれか一つのキメラタンパク質。
１５５．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、分泌性エフェクター分子は細胞膜から放出される、実施形態１５４のキメラタンパク質。
１５６．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態１５５のキメラタンパク質。
１５７．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態１５６のキメラタンパク質。
１５８．プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態１５６のキメラタンパク質。
１５９．細胞膜上で発現するプロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態１５５のキメラタンパク質。
１６０．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１５９のキメラタンパク質。
１６１．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態１６０のキメラタンパク質。
１６２．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態１６１のキメラタンパク質。
１６３．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態１５５～１６２のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６４．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態１６３のキメラタンパク質。
１６５．プロテアーゼはデグロンをさらに含む、実施形態１５５～１６４のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６６．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は、調節が可能である、実施形態１５５～１６５のいずれか一つのキメラタンパク質。
１６７．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態１６６のキメラタンパク質。
１６８．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
１６９．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞。
１７０．操作された核酸を含む単離細胞であって、それにおいて、操作された核酸は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成されている、単離細胞。
１７１．操作された核酸は組換え発現される、実施形態１６９又は実施形態１７０の単離細胞。
１７２．操作された核酸は、ベクター又は細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、実施形態１６９～１７１のいずれか一つの単離細胞。
１７３．膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞であって、それにおいて、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質は、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
ならびに、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、単離細胞。
１７４．細胞は、以下からなる群：Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞から選択される、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７５．細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７６．細胞は自家である、実施形態１６９～１７５のいずれか一つの単離細胞。
１７７．細胞は同種である、実施形態１６９～１７５のいずれか一つの単離細胞。
１７８．細胞は、以下からなる群：膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞から選択される腫瘍細胞である、実施形態１６９～１７３のいずれか一つの単離細胞。
１７９．細胞は、腫瘍溶解性ウイルスでの形質導入を介して操作された、実施形態１７８の単離細胞。
１８０．細胞は、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含む、実施形態１６９～１７９のいずれか一つの単離細胞。
１８１．プロテアーゼは内因性プロテアーゼである、実施形態１８０の単離細胞。
１８２．内因性プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態１８１の単離された細胞。
１８３．内因性プロテアーゼはＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態１８１の単離細胞。
１８４．プロテアーゼは異種プロテアーゼである、実施形態１８０の単離細胞。
１８５．異種プロテアーゼはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態１８４の単離細胞。
１８６．プロテアーゼは、細胞の細胞膜上で発現する、実施形態１８０～１８５のいずれか一つの単離細胞。
１８７．プロテアーゼは、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能である、実施形態１８６の単離細胞。
１８８．プロテアーゼ切断部位の切断によって、細胞の細胞膜から分泌性エフェクター分子が放出される、実施形態１８７の単離細胞。
１８９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態１６９～１８８のいずれか一つの単離細胞。
１９０．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態１８９の単離細胞。
１９１．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態１９０の単離細胞。
１９２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、
式中、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
それにおいて、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
１９３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
式中、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
１９４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
１９９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２００．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２０１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態１６９～１９３のいずれか一つの単離細胞。
２０２．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０４．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０５．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０６．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０７．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態１６９～１９１のいずれか一つの単離細胞。
２０８．細胞は抗原認識受容体をさらに含む、実施形態１６９～２０７のいずれか一つの単離細胞。
２０９．抗原認識受容体は抗原結合ドメインを含む、実施形態２０８の単離細胞。
２１０．抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、実施形態２０９の単離細胞。
２１１．抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態２０９の単離細胞。
２１２．ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態２１１の単離細胞。
２１３．ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離される、実施形態２１２の単離細胞。
２１４．ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである、実施形態２１３の単離細胞。
２１５．抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２０８～２１４のいずれか一つの単離細胞。
２１６．抗原認識受容体はＣＡＲである、実施形態２０８～２１４のいずれか一つの単離細胞。
２１７．ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群：ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインから選択される、実施形態２１６の単離細胞。
２１８．ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、以下からなる群：ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインから選択される、実施形態２１６又は実施形態２１７の単離細胞。
２１９．ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む、実施形態２１６～２１８のいずれか一つの単離細胞。
２２０．実施形態１６９～２１９のいずれか一つの単離細胞、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２２１．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態１６９～２１９のいずれか一つの単離細胞のいずれか又は実施形態２２０の組成物の治療有効量を投与すること。
２２２．単離細胞は、対象に由来する、実施形態２２１の方法。
２２３．単離細胞は、対象に関して同種である、実施形態 ２２１又は実施形態 ２２２の方法。
２２４．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクター、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む脂質ベースの構造体。
２２５．脂質ベースの構造体は、細胞外小胞、脂質ナノ粒子、ミセル、又はリポソームを含む、実施形態２２４の脂質ベースの構造体。
２２６．実施形態２２４又は実施形態２２５の脂質ベースの構造体、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２２７．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２２４もしくは実施形態２２５の脂質ベースの構造体のいずれか、又は実施形態２２６の組成物の治療有効用量を投与すること。
２２８．投与は、全身投与を含む、実施形態２２７の方法。
２２９．脂質ベースの構造体は、対象において細胞を操作することが可能である、実施形態２２７又は実施形態２２８の方法。
２３０．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２２７～２２９のいずれか一つの方法。
２３１．チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態２３０の方法。
２３２．方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、実施形態２２７～２３１のいずれか一つの方法。
２３３．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０５～１６７のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含むナノ粒子。
２３４．ナノ粒子は、無機材料を含む、実施形態２３３のナノ粒子。
２３５．実施形態２３３又は実施形態２３４のナノ粒子を含む組成物。
２３６．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２３３もしくは実施形態２３４のナノ粒子のいずれか、又は実施形態２３５の組成物の治療有効用量を投与すること。
２３７．投与は、全身投与を含む、実施形態２３６の方法。
２３８．ナノ粒子は、対象において細胞を操作することが可能である、実施形態２３６又は実施形態２３７の方法。
２３９．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２３６～２３８のいずれか一つの方法。
２４０．実施形態１～１０１のいずれか一つの操作された核酸、又は実施形態１０２～１０４のいずれか一つの発現ベクターを含むように操作されたウイルス。
２４１．ウイルスは、以下からなる群：レンチウイルス、レトロウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）から選択される、実施形態２４０の操作されたウイルス。
２４２．実施形態２４０又は実施形態２４１の操作されたウイルス、及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物。
２４３．以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：実施形態２４０もしくは実施形態２４１の操作されたウイルス、又は実施形態２４２の組成物の治療有効量を投与すること。
２４４．投与は全身投与を含む、実施形態２４３の方法。
２４５．操作されたウイルスは、対象において細胞に感染し、発現カセットを発現する、実施形態又は実施形態２４４の方法。
２４６．方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、実施形態２４３～２４５のいずれか一つの方法。
２４７．以下を含む、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法：
ａ）細胞を提供することであって、それにおいて、細胞は、Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃは、膜結合プロテアーゼの同族プロテアーゼ切断部位を含み、かつ
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一のポリペプチドとして発現するように構成される、こと；及び
ｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現に適した条件下で細胞を培養することであって、
発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留され、かつ
発現時に、膜結合プロテアーゼは、膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより、分泌性エフェクター分子を細胞膜から放出する、こと。
２４８．分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含む、実施形態２４７の方法。
２４９．シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含む、実施形態２４８の方法。
２５０．シグナルペプチドは、非天然シグナルペプチドを含み、又はシグナルアンカー配列は、分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含む、実施形態２４８の方法。
２５１．非天然シグナルペプチド又は非天然シグナルアンカー配列は、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、実施形態２５０の方法。
２５２．分泌性エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは以下からなる群：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素から選択される、実施形態２４７～２５０のいずれか一つの方法。
２５３．サイトカインは、以下からなる群：ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファから選択される、実施形態２５２の方法。
２５４．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、又はＩＬ－１５を含む、実施形態２４７～２５３のいずれか一つの方法。
２５５．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５を含む、実施形態２５４の方法。
２５６．分泌性エフェクター分子は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む、実施形態２５５の方法。
２５７．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン又はＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン融合タンパク質を含む、実施形態２５５の方法。
２５８．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む、実施形態２５７の方法。
２５９．分泌性エフェクター分子は、ＩＬ－１２又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、実施形態２５４の方法。
２６０．分泌性エフェクター分子は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、実施形態２５９の方法。
２６１．ケモカインは、以下からなる群：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１から選択される、実施形態２５２の方法。
２６２．ホーミング分子は、以下からなる群：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２から選択される、実施形態２５２の方法。
２６３．成長因子は、以下からなる群：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦから選択される、実施形態２５２の方法。
２６４．共活性化分子は、以下からなる群：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌから選択される、実施形態２５２の方法。
２６５．腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２から選択される、実施形態２５２の方法。
２６６．ＴＧＦベータ阻害剤は、以下からなる群：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせから選択される、実施形態２６５の方法。
２６７．免疫チェックポイント阻害剤は、以下からなる群：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体から選択される、実施形態２６５の方法。
２６８．ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態２６５の方法。
２６９．分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である、実施形態２４３～２６８のいずれか一つの方法。
２７０．同族プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７ プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼから選択されるプロテアーゼにより切断可能である、実施形態２４３～２６９のいずれか一つの方法。
２７１．同族プロテアーゼ切断部位は、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能である、実施形態２４３～２７０のいずれか一つの方法。
２７２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域を含む、実施形態２４３～２７１のいずれか一つの方法。
２７３．プロテアーゼ切断部位は、ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含む、実施形態２７２の方法。
２７４．第一の領域は、第二の領域に対してＮ末端に位置する、実施形態２７３の方法。
２７５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号２１９）を含み、
それにおいて、Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
式中、Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｔ、又はＡである、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２７６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＶＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７９）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２７７．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２７８．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含む、実施形態２４３～２７５。
２７９．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８０．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８１．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含む、実施形態２４３～２７５。
２８２．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８３．プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＡＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８６）を含む、実施形態２４３～２７５のいずれか一つの方法。
２８４．プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８５．プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８６．プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８７．プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８８．プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２８９．プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、実施形態２４３～２７４のいずれか一つの方法。
２９０．細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、実施形態２４３～２８９のいずれか一つの方法。
２９１．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来する、実施形態２９０の方法。
２９２．細胞膜係留ドメインは、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むようにキメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、ここで、翻訳後修飾タグは、細胞膜との会合が可能である、実施形態２４３～２９１のいずれか一つの方法。
２９３．翻訳後修飾タグは、脂質アンカードメインを含み、場合により、それにおいて、脂質アンカードメインは、以下からなる群から選択される：ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグ、実施形態２９２の方法。
２９４．細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、実施形態２４３～２９１のいずれか一つの方法。
２９５．プロテアーゼは、細胞に対して内因性である、実施形態２４３～２９４のいずれか一つの方法。
２９６．プロテアーゼは、以下からなる群：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼから選択される、実施形態２９５の方法。
２９７．プロテアーゼは、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼである、実施形態２９６の方法。
２９８．プロテアーゼは、細胞に対して異種である、実施形態２４３～２９４のいずれか一つの方法。
２９９．プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、実施形態２９８の方法。
３００．プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、実施形態２９９の方法。
３０１．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、実施形態３００の方法。
３０２．プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤により抑制され得る、実施形態２４３～３０１のいずれか一つの方法。
３０３．プロテアーゼ阻害剤は、以下からなる群：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシラプレビルから選択される、実施形態３０２の方法。
３０４．プロテアーゼは、デグロンをさらに含む、実施形態２４３～３０３のいずれか一つの方法。
３０５．プロテアーゼの発現及び／又は局在化は、調節が可能である、実施形態２４３～３０３のいずれか一つの方法。
３０６．発現及び／又は局在化は、細胞の細胞状態により調節される、実施形態３０５の方法。

Claims (20)

1. Ｎ末端からＣ末端へと配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
   Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓ
   を有し、
   式中、
   Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
   Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、かつ
   ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
   ここで、Ｓ－Ｃ－ＭＴ又はＭＴ－Ｃ－Ｓは、単一ポリペプチドとして発現するように構成される、
   膜切断可能なキメラタンパク質。
2. 前記分泌性エフェクター分子が、シグナルペプチド又はシグナルアンカー配列を含み、場合により、前記シグナルペプチドが、前記分泌性エフェクター分子にとって天然である天然シグナルペプチドを含み、又は前記シグナルペプチドが、非天然シグナルペプチドを含み、又は前記シグナルアンカー配列が、前記分泌性エフェクター分子にとって非天然である非天然シグナルアンカー配列を含み、場合により、前記非天然シグナルペプチド又は前記非天然シグナルアンカー配列が、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、最適化ＩＬ－２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミン前タンパク質、アズロシジン前タンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ－２１、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、請求項１に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
3. 前記分泌性エフェクター分子が治療クラスから選択され、前記治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択され、場合により、前記サイトカインが、ＩＬ－１－ベータ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択され、場合により、前記ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択され、場合により、前記ホーミング分子が、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦ１；及びＭＭＰ－２からなる群から選択され、場合により、前記成長因子が、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択され、場合により、前記共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択され、場合により、前記腫瘍微小環境修飾因子が、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択され、場合により、前記ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、場合により、前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択され、又は、場合により、前記ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、もしくはそれらの組み合わせを含む、請求項１又は請求項２に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
4. 前記分泌性エフェクター分子が、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、又はＩＬ－１２ｐ７０融合タンパク質を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
5. 前記プロテアーゼ切断部位が、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、ＭＭＰ９プロテアーゼ、及びＮＳ３プロテアーゼからなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である、請求項１～４のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
6. 前記プロテアーゼ切断部位が、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼにより切断可能であり、場合により、前記プロテアーゼ切断部位が、ＰＲＡＥのアミノ酸配列（配列番号１７６）を有する第一の領域及び／又はＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７７）を有する第二の領域を含み、場合により、前記第一の領域が、前記第二の領域に対してＮ末端に位置する、請求項１～５のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
7. 前記プロテアーゼ切断部位が、ＰＲＡＥＸ_１Ｘ_２ＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１７８）を含み、
   Ｘ_１は、Ａ、Ｙ、Ｐ、Ｓ、又はＦであり、かつ
   Ｘ_２は、Ｖ、Ｌ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、又はＴである、
   請求項１～６のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
8. ａ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含み、又は
   ｂ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＬＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８０）を含み、又は
   ｃ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＹＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８１）を含み、又は
   ｄ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＰＩＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８２）を含み、又は
   ｅ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＡＹＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８３）を含み、又は
   ｆ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＳＳＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８４）を含み、又は
   ｇ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＲＡＥＦＴＫＧＧのアミノ酸配列（配列番号１８５）を含み、又は
   ｈ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＤＥＰＨＹＳＱＲＲのアミノ酸配列（配列番号１８７）を含み、又は
   ｉ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＰＬＧＰＩＦＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号１８８）を含み、又は
   ｊ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＰＬＡＱＡＹＲＳＳのアミノ酸配列（配列番号１８９）を含み、又は
   ｋ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＴＰＩＤＳＳＦＮＰＤのアミノ酸配列（配列番号１９０）を含み、又は
   ｌ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＶＴＰＥＰＩＦＳＬＩのアミノ酸配列（配列番号１９１）を含み、又は
   ｍ．前記プロテアーゼ切断部位は、ＩＴＱＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦのアミノ酸配列（配列番号１９８）を含む、
   請求項１～７のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
9. 前記細胞膜係留ドメインが、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含み、場合により、前記膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＥｐｏＲ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７－１、又はＢＴＬＡに由来し、場合により、前記細胞膜係留ドメインが、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
10. 前記細胞膜係留ドメインが、翻訳後修飾タグ、又は、翻訳後修飾タグを含むように前記キメラタンパク質を修飾するための翻訳後修飾可能なモチーフを含み、前記翻訳後修飾タグが、細胞膜との会合が可能であり、場合により、前記翻訳後修飾タグが脂質アンカードメインを含み、場合により、前記脂質アンカードメインが、ＧＰＩ脂質アンカー、ミリストイル化タグ、及びパルミトイル化タグからなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
11. ａ．細胞中で発現した場合、前記分泌性エフェクター分子は、前記細胞の細胞膜に係留され、かつ／又は
    ｂ．前記プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現した場合、前記分泌性エフェクター分子が、前記細胞膜から放出され、かつ／又は
    ｃ．前記細胞膜上で発現する前記プロテアーゼが、前記細胞に対して内因性であり、かつ／又は
    ｄ．前記プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、
    請求項１～１０のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質。
12. プロモーターと、請求項１～１１のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む、操作された核酸であって、場合により、前記プロモーターが、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織特異的プロモーター、及び合成プロモーターからなる群から選択される、操作された核酸。
13. 請求項１２に記載の操作された核酸を含む、発現ベクター。
14. 請求項１～１１のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質、請求項１２に記載の操作された核酸、又は請求項１３に記載の発現ベクターを含む、単離細胞。
15. 前記細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、請求項１４に記載の単離細胞。
16. 前記細胞が、前記プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含み、場合により、前記プロテアーゼが内因性プロテアーゼであり、かつ／又は、場合により、前記内因性プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、請求項１４又は請求項１５に記載の単離細胞。
17. 前記細胞が抗原認識受容体をさらに含み、場合により、前記抗原認識受容体がＣＡＲである、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の単離細胞。
18. 請求項１～１１のいずれか一項に記載の膜切断可能なキメラタンパク質、請求項１２に記載の操作された核酸、請求項１３に記載の発現ベクター、又は請求項１４～１７のいずれか一項に記載の単離細胞、及び、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、又はそれらの組み合わせを含む、組成物。
19. 以下を含む、それを必要とする対象を治療する方法：
    請求項１４～１７のいずれか一項に記載の単離細胞又は請求項１８に記載の組成物のいずれかの治療有効用量を投与すること。
20. 以下を含む、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法：
    （ａ）請求項１４～１７のいずれか一項に記載の細胞を提供すること、及び
    （ｂ）前記膜結合プロテアーゼ及び前記膜切断可能なキメラタンパク質の発現に適した条件下で前記細胞を培養することであって、
    発現時に、前記膜切断可能なキメラタンパク質は、前記細胞の細胞膜に係留され、かつ
    発現時に、前記膜結合プロテアーゼは、前記膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより前記分泌性エフェクター分子を前記細胞膜から放出する、
    こと。

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